40 NOVINKY. Product News. Stanovení imunosupresivních lékù soupravami Elecsys. Elecsys Tacrolimus Elecsys Cyclosporine. Nový panel metod

40

NOVINKY Product News

Novinky, informace

Nový panel metod

Imunologie

Stanovení imunosupresivních lékù soupravami Elecsys® Ovìøené a konzistentní výsledky pro pacienty s transplantovanými orgány K pøedcházení akutní rejekce orgánù a zajištìní dlouhodobého pøežití pacienta i transplantátu je nezbytná optimální imunosupresivní léèba, urèovaná klinicky s využitím monitorování terapeutických hladin lékù (TDM). Používání imunosupresivních lékù (ISD), které jsou charakterizovány úzkým terapeutickým oknem, vyžaduje pøi dlouhodobém sledování pøesná a konzistentní mìøení jejich koncentrace v plné krvi.

Elecsys® Tacrolimus Elecsys® Cyclosporine Nové metody

Elektrochemiluminiscenèní imunoanalýza (ECLIA) pro kvantitativní stanovení takrolimu respektive cyklosporinu v lidské plné krvi in vitro u Elecsys® Tacrolimus u Elecsys® Tacrolimus CalSet

balení 100 testù kat. è. 05889057 balení 3 x 1 mL od každé hladiny 1 a 2 kat. è. 05889065 balení 100 testù kat. è. 05889014 u Elecsys® Cyclosporine u Elecsys® Cyclosporine CalSet balení 3 x 1 mL od každé hladiny 1 a 2 kat. è. 05889022 1

Novinky - Product News

Novinky, informace

è. 40

Imunologie

Pro kontrolu kvality u obou souprav použijte: u PreciControl ISDs 1 x 3 mL od každé hladiny PC ISD 1, 2 a 3 kat. è. 05889081 Pro pøípravu vzorkù u obou souprav použijte: u ISD Sample Pretreatment balení 1 x 30 mL

Indikace Stanovení Elecsys® Tacrolimus a Elecsys® Cyclosporine se používá jako pomùcka pøi léèbì pacientù s transplantovaným srdcem, játry èi ledvinami, jimž jsou podávány imunosupresivní léky (immunosuppressant drugs, ISD). Tyto léky (napø. takrolimus nebo cyklosporin) se pacientùm s transplantovanými orgány pøedepisují, aby jejich imunitní systém novì transplantovaný orgán neodmítl. Stanovení ISD se používají ke zjišování koncentrace lékù v pacientovì krvi, které jsou vodítkem k urèování efektivních a dobøe snášených dávek, protože požadovaného terapeutického úèinku je dosahováno jen

Obr. 1: Pracovní postup pøípravy vzorku a použité èinidlo jsou identické pro všechny metody nového panelu Elecsys ISD.

Obr. 2: Princip metody stanovení Elecsys® Tacrolimus, respektive Cyclosporine (schéma metody i princip jsou identické)

2

kat. è. 05889073

v úzkém terapeutickém rozsahu. Dávka léku musí být dost vysoká, aby zamezila rejekci orgánu, ale ne pøíliš vysoká, abychom se vyhnuli toxickým úèinkùm léku a oportunním infekcím. Manuální pøíprava vzorkù Imunometody Elecsys® Tacrolimus a Elecsys® Cyclosporine vyžadují pro analýzu vzorky plné krve. Protože jsou tyto léky velkou mìrou distribuovány v èervených krvinkách a váží se na proteiny, provádí se jednokroková manuální pøíprava vzorku pro uvolnìní analytu z proteinù (Obr. 1). Pro všechny analýzy Elecsys ISD se používá univerzální pøípravné èinidlo.

è. 40

Imunologie

Novinky - Product News

Novinky, informace

Princip testu: Kompetitivní imunoanalýza 1. inkubace (9 minut) 35 µL pøedem zpracovaného vzorku se inkubuje s biotinylovanou specifickou protilátkou proti takrolimu/cyklosporinu a derivátem téhož léku, oznaèeným rutheniovým komplexem. V závislosti na koncentraci analytu ve vzorku a na vytvoøení pøíslušného imunokomplexu dojde k obsazení vazebného místa oznaèených protilátek zèásti analytem ze vzorku a zèásti ruthenylovaným haptenem. 2. inkubace (9 minut) Po pøidání mikroèástic pokrytých streptavidinem se komplex díky interakci biotinu a streptavidinu naváže na pevnou fázi. Mìøení Reakèní smìs je nasáta do mìøicí cely, kde se mikroèástice magneticky zachytí na povrchu elektrody. Poté se odstraní nenavázané látky. Napìtí pøivedené na elektrodu pak indukuje chemiluminiscenèní emisi, která se mìøí fotonásobièem. Technologie Elecsys ECL (ElectroChemiLuminescence) je technologie Roche používaná pro imunoanalytickou detekci. Na základì této technologie ve spojení s dobøe navrženými, specifickými a citlivými imunoanalýzami zajišuje Elecsys spolehlivé výsledky. Vývoj imunoanalýz ECL je založen na využití rutheniového komplexu a tripropylaminu (TPA). Chemiluminiscenèní reakce pro detekci reakèního komplexu je spuštìna pøivedením napìtí do roztoku vzorku, po nìmž dojde k pøesnì øízené reakci. Technologii ECL lze využít u mnoha imunoanalytických principù, u nichž vykazuje vynikající funkèní vlastnosti.

3

Novinky - Product News

Novinky, informace

è. 40

Imunologie

Funkèní vlastnosti stanovení Elecsys® Tacrolimus

Funkèní vlastnosti stanovení Elecsys® Cyclosporine

Obr. 3: Stanovení Elecsys® Tacrolimus a Cyclosporine s nejlepší pøesností své tøídy. Zdroj: pøíbalové letáky, 2013.

y = 1,07 x - 0,269, r = 0,97 N = 1029 vzorkù vážená Demingova regrese

Obr. 4: Elecsys® Tacrolimus: vynikající korelace s dobøe hodnocenou LC-MS/MS. (Zdroj: Multicentrická hodnotící studie 2013)

Proè vyšetøovat imunosupresiva metodami elektrochemiluminiscence? Pøesnost l Pokroèilý design analýzy ECL a nízká vnitøní variabilita systému (Obr. 3) l Vysoká pøesnost pøi nízkých koncentracích lékù l Vysoká pøesnost v celém rozsahu mìøení … umožòuje pøesné dávkování lékù pro maximální léèebný efekt Konzistence výsledkù l Vynikající srovnatelnost a návaznost mezi šaržemi l Použití unifikovaných reagencií na všech platformách cobas® l Vysoká míra srovnatelnosti se zavedenými a validovanými metodami LC-MS/MS (Obr. 4) … pokaždé spolehlivé a dùvìryhodné výsledky

Konsolidace l Možnost konsolidace více než 230 parametrù na jedné platformì cobas®, vèetnì parametrù, které jsou velmi dùležité pro pacienty s transplantovanými orgány (napø. infekèní nemoci, diabetes, anémie, funkce ledvin a jater). l Nejlepší ve své tøídì plnì automatické stanovení MPA již dostupné na cobas c l Probíhá vývoj stanovení Elecsys® Everolimus a Sirolimus k doplnìní kompletní nabídky ISD (výhled 2014). l Variabilní velikost analytických platforem tak, že umožòuje splnìní potøeb každé jednotlivé laboratoøe. … pro optimalizaci a efektivní práci dnes i v budoucnosti Nová stanovení imunosupresivních lékù Elecsys® Tacrolimus a Cyclosporine jsou dùležitým doplnìním nabídky TDM cobas, která se tak stává jednou z nejucelenìjších nabízených øad výrobkù.

4

è. 40

Novinky - Product News

Imunologie

Novinky, informace

Elecsys® FT3 III Elecsys® FT4 II

Vylepšení metod

Elektrochemiluminiscenèní imunoanalýza (ECLIA) pro kvantitativní stanovení fT3 respektive fT4 v séru a plazmì in vitro u Elecsys® FT3 III u Elecsys® FT3 III CalSet u Elecsys® FT4 II u Elecsys® FT4 II CalSet

balení 200 testù nahrazuje pùvodní 2x (2 x 1 mL) nahrazuje pùvodní balení 200 testù nahrazuje pùvodní 2x (2 x 1 mL) nahrazuje pùvodní

Pro kontrolu kvality použijte: u Elecsys® PreciControl Universal

kat. è. 06437206 kat. è. 03051986 kat. è. 06437222 kat. è. 03051994 kat. è. 06437281 kat. è. 11731297 kat. è. 06437290 kat. è. 11731661

2 x 3 mL od každé z hladin PCU1 a PCU2 kat. è. 11731416

Elektrochemiluminiscenèní imunoanalýzu (ECLIA) je možné provozovat na následujících pøístrojích: cobas e 411, Elecsys® 2010, cobas e 601/ e 602, MODULAR® ANALYTICS<E170>.

Indikace Abnormality funkce štítné žlázy postihují velkou èást populace a podílejí se na zhruba 30 % všech endokrinních poruch. Spoleènì s klinickým posouzením jsou biochemické markery stìžejní v urèení etiologie dysfunkce štítné žlázy a rovnìž také pro sledování stavu štítné žlázy po terapii. Podobnì jako vìtšina periferních hormonù se trijódtyronin (T3) a tyroxin (T4) vážou hlavnì na transportní a zásobní proteiny. Jen velmi malý zlomek zùstává volný a aktivní. Protože jsou vazebné proteiny ovlivòovány individuálními predispozicemi a zmìnami, je celková koncentrace promìnlivá. Mnoho benigních stavù, onemocnìní a lékù mùže vést ke zvýšení nebo snížení periferní vazebné kapacity, což ve svém dùsledku ovlivòuje množství celkového tyreoidálního hormonu v obìhu.

Stanovení volného tyroxinu je dùležitou souèástí rutinní klinické diagnostiky. Stanovení fT4 spoleènì s TSH se provádí pøi podezøení na dysfunkci štítné žlázy, koncentrace fT4 se rovnìž monitoruje pøi terapii tyreosupresivy. Stanovení fT4 není ovlivnìno koncentracemi vazebných proteinù, takže doplòující stanovení vazebných parametrù, jako jsou T-uptake nebo tyroxin vázající globulin (TBG), není potøebné. FT3 se používá v diferenciální diagnostice eu-, hyper- a hypotyreózy. Pøevážná èást trijódtyroninu je vázána na transportní bílkoviny (TBG, albumin, prealbumin). Volný trijódtyronin (fT3) je fyziologicky aktivní formou trijódtyroninu (T3). Podobnì jako u stanovení fT4 není koncentrace ovlivnìna koncentrací vazebných proteinù. 5

Novinky - Product News

Novinky, informace

è. 40

Imunologie

Princip metody: jednokroková sendvièová analýza

Obr. 5: Princip metody stanovení fT3 respektive fT4 (schéma metody i princip jsou identické)

1. inkubace (9 minut) Inkubuje se 15 µL vzorku spolu s fT4 (respektive fT3) specifickými protilátkami, oznaèenými rutheniovým komplexem. 2. inkubace (9 minut) Po pøidání mikroèástic pokrytých streptavidinem a biotinylovaného T4 (respektive T3) se volná vazebná místa znaèených protilátek obsadí, vytvoøením komplexu protilátka-hapten. Celý komplex se poté

6

díky interakci biotinu a streptavidinu naváže na pevnou fázi. Mìøení Reakèní smìs je nasáta do mìøicí cely, kde se mikroèástice magneticky zachytí na povrchu elektrody. Poté se odstraní nenavázané látky promytím. Napìtí pøivedené na elektrodu pak indukuje redoxní dìje a následnou chemiluminiscenèní emisi, která se vyhodnocuje pomocí fotonásobièe.

è. 40

Novinky - Product News

Imunologie

V èem je nová generace metod lepší než pøedchozí? Nové metody stanovení byly vyvinuty s požadavkem øešení velice specifického a regionálního problému zákazníkù. U tìchto zákazníkù se ve zvýšené míøe vyskytovaly jinak velmi øídké interference rutheniového komplexu, tvoøící detekèní znaèku pøi elektrochemiluminiscenci (Obr. 6). Tyto interference jsou bìžnìjší v regionech, kde se ruthenium používá v procesu barvení textilií. Protože ruthenium nachází stále èastìjší uplatnìní i v jiných prùmyslových odvìtvích, dá se èekat vzrùstající èetnost tohoto problému. Roche se rozhodlo k vývoji nového konceptu s cílem vyšší kvality a spolehlivosti vydávaných výsledkù. V nové metodì je použita sulforutheniová znaèka, která stále mùže fungovat jako rutheniový komplex standardních metod Elecsys, ale není rozpoznávána interferujícími faktory, produkovanými organismem pøi environmentální zátìži (Obr. 7). Tento fakt byl potvrzen na souboru cca 50 tisíc rutinních stanovení. U všech z 10 vzorkù osob s potvrzenou interferencí byly stanoveny korektní výsledky.

Novinky, informace

Èeho se nemusíte obávat? Mezi pùvodními a novými metodami je vynikající porovnatelnost. Referenèní rozmezí, která jsou v souèasnosti stanovena pùvodní soupravou, zùstávají nezmìnìna a platí i pro nové metody FT3 III a FT4 II. Máte pocit, že se takové interference v Èeské republice nevyskytují? Nepotøebujete takové novinky?

Obr. 6: Interference rutheniové znaèky

Roche zlepšuje své produkty, i když se problém v kvalitì výsledkù mùže vyskytnout pouze u malé skupiny zákazníkù a/ nebo ve velice omezené míøe. S rozvojem využití ruthenia mùžeme èekat, že i v Èeské republice se najde èlovìk, který by mohl být nesprávnì diagnostikován. A pokud Vás ani tento argument nepøesvìdèil, pak Vás urèitì potìší, že stabilita po otevøení byla ze 3 týdnù na palubì, anebo 6 týdnù pøi kombinovaném skladování v lednici prodloužena na 4, respektive 8 týdnù. Roche soustavnì zlepšuje kvalitu svých produktù, což vede ke stále spolehlivìjším výsledkùm.

Obr. 7: Sulforutheniová znaèka nevytváøí vazbu s interferujícími faktory pøi zachování své funkce

7

Novinky - Product News

Novinky, informace

è. 40

Imunologie Zavedením Elecsys® tyreoidálního panelu získáte: Vysokou diagnostickou hodnotu stanovení Elecsys l Pøesné referenèní rozmezí dané velkými a dobøe klinicky definovanými populaèními soubory. l Elecsys® Anti-Tg a Anti-TPO: vysoká klinická specifiènost spoleènì s vysokou citlivostí umožòují dobré rozlišení mezi zdravými jedinci a pacienty. l Elecsys® Anti-TSHR: vysoká korelace s klinickým obrazem, dokládá velká klinická studie: U Gravesovy choroby byla klinická senzitivita 97 % a specifiènost 99 %. …napomáhá správnému a pøesnému posouzení stavu onemocnìní. Osvìdèená technologie Elecsys l Vynikající pøesnost stanovení napøíè celým mìøícím rozsahem vede ke spo-

8

lehlivé a efektivní diagnostice a monitoringu léèby. l Výborná porovnatelnost šarží v rámci delších èasových úsekù umožòuje dlouhodobé sledování pacientù. …pro vysokou kvalitu výsledkù - základ pøesné diagnostiky a monitoringu Úplné portfolio tyreoidálních markerù, vèetnì specialit l Plnì automatizované komplexní menu vèetnì Anti-Tg, Anti-TPO a AntiTSHR l Všechny testy požadované v kaskádì diferenciální diagnostiky onemocnìní štítné žlázy je možno provést bez èasových prostojù a dalších operací na jedné platformì. …pro zjednodušení a zefektivnìní provozu a a následné finanèní úspory

è. 40

Novinky - Product News

Klinická chemie

Novinky, informace

Tina-quant® Lipoprotein (a) Gen. 2

Vylepšení metody

In vitro test pro kvantitativní mìøení lipoproteinu (a) v lidském séru a plazmì na systémech Roche/Hitachi cobas c Pro analyzátory cobas c 311/501/502, COBAS INTEGRA: u Tina-quant® Lipoprotein (a) Gen. 2 (Latex) balení 150 testù kat. è. 05852625 nahrazuje LPA LX kat. è. 03001881 Pro analyzátory cobas c 701/702: u Tina-quant® Lipoprotein (a) (Latex) balení 200 testù nahrazuje LPA LX

kat. è. 05852633 kat. è. 05950872

Pro analyzátory MODULAR P: u Tina-quant® Lipoprotein (a) (Latex) MODULAR P small balení 100 testù kat. è. 05852528 nahrazuje pùvodní kat. è. 11660390 u Tina-quant® Lipoprotein (a) (Latex) MODULAR P large balení 1440 testù kat. è. 06335055 nahrazuje pùvodní kat. è. 06301681 Pro kalibraci použijte: u Preciset Lp(a) Gen. 2

(5 x 1 mL) kat. è. 05852641 nahrazuje CFAS LPA kat. è. 03001318

Pro kontrolu kvality použijte: u PreciControl Lp(a) Gen. 2 2x (2 x 1 mL) kat. è. 05852650 nahrazuje LPA control set kat. è. 11660993

Úvod Kardiovaskulární onemocnìní (CVD) pøedstavují významný zdravotní problém, který neustále narùstá. Celosvìtovì CVD zpùsobují více úmrtí než kterákoli jiná nemoc a pøedpovídá se, že obrovská zátìž, kterou klade na zdravotní systémy a spoleènost, se ještì zvìtší. K 30 % úmrtí spojených s kardiovaskulárním onemocnìním dochází u osob bez zvýšených bìžných rizikových faktorù. Proto je velkým klinickým požadavkem rozšíøení poètu dostupných diagnostických prostøedkù k vy-

hodnocení individuálního rizika vzniku CVD. Èetné rozsáhlé studie dokázaly, že jako vynikající a klinicky užiteèný rizikový faktor pro kardiovaskulární onemocnìní mùže sloužit koncentrace lipoproteinu (a) (Lp(a)). Pøijetí odbornou veøejností je však omezené kvùli tomu, že je složité porovnávat výsledky Lp(a) mezi rùznými klinickými studiemi. Použitá stanovení totiž vykazovala výrazné rozdíly a rùzné úrovnì standardizace. O užiteènosti stanovení Lp(a) není

Standardizace v nmol/L: Nejde jen o jednotky 9

Novinky - Product News

Novinky, informace

è. 40

Klinická chemie sporu. Z analytického pohledu ale spolehlivou laboratorní diagnostiku znesnadòuje velká biologická variabilita vlastního analytu. Polymorfismus je opravdu znaèný je známo asi 1 000 variant Lp(a) a jen molekulová hmotnost molekuly se intraindividuálnì mùže lišit až 3x! Tento analytický problém v koneèném dùsledku limitoval použití Lp(a) jako cenného prognostického faktoru. Soupravy, obsahující protilátky proti variabilní èásti molekuly Lp(a) budou podhodnocovat hodnoty pacientù s apo (a) menšími než kalibrátor a nadhodnocovat koncentrace vzorkù pacientù s èásticemi vìtšími než kalibrátor. Z klinického pohledu je ale dùležitý skuteèný poèet molekul (molární koncentrace, vyjádøená v nmol/L), nikoliv jejich celková hmotnost, vyjádøená hmotnostní koncentrací.

Obr. 8

Obr. 9

Obr. 10

Standardizace v porovnání s metodou nezávislou na velikosti apo (a) Hlavní problém hodnot Lp(a) souvisí s nepøesností metod jeho stanovení, která má pùvod v biologické variabilitì apo (a) a je dùsledkem špatné hodnotitelnosti individuálního rizika onemocnìní koronárních arterií. Lp(a) mezi jednotlivými osobami a etnickými skupinami se mohou výraznì lišit díky obrovskému polymorfismu molekuly, z pøevážné èásti díky genu pro apo (a). Evropská spoleènost pro ateroVlastnosti metody

10

sklerózu (EAS) proto doporuèuje ke klinickému posouzení takové výsledky stanovení, které jsou nezávislé na velikosti apo (a). Preferencí molární koncentrace (nmol/L) pro vyjádøení Lp(a) pøed hmotnostní (mg/L) lze pouze èásteènì vyhovìt požadavkùm. Kromì zmìny vyjádøení výsledkù (jednotek) byla proto provedena standardizace metod vùèi standardu WHO/IFCC International Reference Reagent (SRM2B). Hodnota v tomto materiálu byla pøiøazena použitím 2 rùzných stanovení ELISA, na základì monoklonálních protilátek, specifických pro 2 rùzné unikátní epitopy pøítomné v apo (a). Provedením všech uvedených opatøení dochází k významným zmìnám, které je potøeba komunikovat s ošetøujícím lékaøem. Výsledkem ale budou korektní, klinicky významné a akceptovatelné výsledky.

è. 40

Novinky - Product News

Klinická chemie

Význam testování Lp(a) Vysoké koncentrace Lp(a) v séru korelují s èasnými projevy aterosklerózy a mrtvice. Pokud koncentrace Lp(a) pøesahuje 75 nmol/L, koronární riziko se zdvojnásobuje. V kombinaci se zvýšenou koncentrací LDL-cholesterolu narùstá riziko pøibližnì 6krát. Zvýšená hladina Lp(a) je považována za velmi citlivý parametr pro vývoj onemocnìní koronárních cév, bez závislosti na ostatních plazmatických lipoproteinech. Lp(a) by mìl být mìøen spolu s celkovým cholesterolem, HDL-cholesterolem a LDL-cholesterolem, jakož i triglyceridy, aby mohlo být posouzeno celkové riziko aterosklerózy a mìlo by být podle spoleènosti European Atherosclerosis Society doporuèeno u vybraných pøípadù s vysokým rizikem a u subjektù s výskytem èasných kardiovaskulárních onemocnìní v rodinì.

Novinky, informace

cobas c 501: Mezilehlá preciznost

cobas c 501: Opakovatelnost

Oèekávané hodnoty Na základì vyhodnocení údajù z Framinghamské studie se hodnoty nad 75 nmol/L považují za rizikové. Hladiny Lp(a) jsou silnì ovlivnìny dìdiènými faktory a liší se mezi etnickými skupinami. Z tìchto dùvodù se doporuèuje, aby si každá laboratoø ustanovila vlastní oèekávané hodnoty pro vlastní populaci.

11

Novinky - Product News

Novinky, informace

è. 40

Imunologie

Porovnatelnost k referenèní metodì l Metoda Tina-quant® Lipoprotein (a) Gen. 2 vykazuje vynikající porovnatelnost (Obr. 11) s referenèní metodou ELISA (Prof. Marcovina, Northwest Lipid Metabolism and Diabetes Research Laboratories, Seattle) a získala i certifikát této organizace.

EAS a umožòuje laboratoøím mìøit správnou a porovnatelnou hodnotu. To vede k pøesnìjšímu hodnocení rizika kardiovaskulárního onemocnìní. …hodnoty Lp(a) uvádìné v nmol/L nejsou ovlivòovány velikostí izoforem a poskytují tedy správnìjší hodnocení rizika kardiovaskulárního onemocnìní. Tina-quant® Lipoprotein (a) Gen. 2 je první metoda na svìtì, která pøesnì a spolehlivì stanovuje Lp(a) a to na platformì, umožòující souèasné stanovení dalších více než 150 klinickochemických parametrù. …konsolidace zlepšuje efektivitu pracovištì a výraznì zkracuje dobu k vydání výsledku. l Vysoká stabilita na palubì, nízká citlivost k interferencím, nízká frekvence kalibrací umožòuje maximálnì úsporné využití reagencií. l Reagencie pøipravené k použití …ekonomické a èasové úspory, na pracnost nenároèné postupy pomáhají zvýšit efektivitu provozu. l

Obr. 11: Výsledky porovnání Tina-quant® Lipoprotein (a) Gen. 2 s referenèní metodou ELISA

Pozor: Hodnoty koncentrací pacientù budou rùzné! Pøi porovnání metod Tina-quant® Lp(a) Gen. 1 a Tina-quant® Lp(a) Gen. 2 je patrný posun hodnot u vzorkù pacientù o cca 20 % smìrem k nižším hodnotám (pokud budeme porovnávat ve stejných jednotkách), viz Obr. 12. Dùvodem je provedená nová standardizace, která již nebude ovlivnìna velikostí apo(a). Proè je Tina-quant® Lipoprotein (a) Gen. 2 lepší než jiné metody stanovení? l Standardizace vyjádøením v molární koncentraci (nmol/L) je doporuèovaná

Obr. 12: Porovnání Tina-quant® Lp(a) Gen. 1 a Tinaquant® Lp(a) Gen. 2

12