40
Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi
41
Lampiran 2. Hasil Determinasi Daun Ke rsen
42
Lampiran 2. Lanjutan
43
Lampiran 3. Surat Keterangan telah Melakukan Penelitian
44
Lampiran 4. Perhitungan Susut Pengeringan dan Rendemen Ekstrak a. Perhitungan Susut Penge ringan Susut Pengeringan =
Bobot kering serbuk daun kersen (gram) × 100% Bobot basah daun kersen gram
Susut Pengeringan =
1575 gram × 100% 3500 gram
Susut Pengeringan = 4,5% b. Perhitungan Rendemen Ekstrak 1. Metode Perkolasi Rendemen =
Bobot ekstrak yang diperoleh (gram) × 100% Bobot serbuk simplisia yang diekstraksi (gram)
Rendemen =
32,13 gram × 100% 100 gram
Rendemen = 32,13% ~ 32% 2. Metode Maserasi Rendemen =
Bobot ekstrak yang diperoleh (gram) × 100% Bobot serbuk simplisia yang diekstraksi (gram)
Rendemen =
20,11 gram × 100% 100 gram
Rendemen = 20,11% ~ 20% 3. Metode Sokletasi Rendemen =
Bobot ekstrak yang diperoleh (gram) × 100% Bobot serbuk simplisia yang diekstraksi (gram)
Rendemen =
24,13 gram × 100% 100 gram
Rendemen = 24,13% ~ 24% 4. Metode Refluks Rendemen =
Bobot ekstrak yang diperoleh (gram) × 100% Bobot serbuk simplisia yang diekstraksi (gram)
Rendemen =
22,43 gram × 100% 100 gram
Rendemen = 22.43% ~ 22%
45
Lampiran 5. Perhitungan Larutan Stok dan Pengenceran Ekstrak a. Pembuatan larutan stok ekstrak 200.000 ppm sebanyak 25 mL Larutan Stok Ekstrak 200.000 ppm
= 200.000 µg/1 mL = 200 mg/1 mL = 5000 mg/25 mL = 5 gram/25 mL
Ekstrak Daun Kersen sebanyak 5 gram dilarutkan dengan metanol p.a dalam Labu takar 25 mL. b. Penimbangan Ekstrak Keterangan
Berat kaca arloji kosong Berat kaca arloji + zat Berat kaca arloji + sisa Berat Ekstrak
Ekstrak Metode Perkolasi (mg) 29728,2
Ekstrak Metode Maserasi (mg) 27554,5
Ekstrak Metode Sokletasi (mg) 30655,1
Ekstrak Metode Refluks (mg) 31052,6
34735,4
32562,8
35675,6
36083
29735,2
27562,5
30675,1
31082,6
5000,2
5000,3
5000,5
5000,4
c. Pengenceran dari 200.000 ppm ke 5000 ppm V1 × C1 = V2 × C2 V1 × 200.000 ppm = 5 mL × 5000 ppm V1 =
5 mL × 5000 ppm 200.000 ppm
V1 = 0,125 mL ~ 125 µL Di ambil 0,125 mL larutan stok ekstrak 200.000 ppm kemudian dimasukkan dalam Labu Takar 5 mL ditambah metanol p.a sampai tanda batas.
46
Lampiran 6. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
47
Lampiran 7. Penentuan Operating time kompleks Kuersetin+AlCl3
48
Lampiran 8. Perhitungan Seri Konsentrasi Kue rsetin a. Pembuatan Larutan Stok Kuersetin 100 ppm Larutan stok kuersetin 100 ppm
= 100 µg/mL = 0,1 mg/mL = 10 mg/100 mL
Kuersetin sebanyak 10 mg dilarutkan dengan Etanol p.a dalam Labu takar 100 mL. b. Data Penimbangan Kuersetin Keterangan Berat kaca arloji kosong Berat kaca arloji + zat Berat kaca arloji + sisa Berat kuersetin
Replikasi 1 8230,1 8240,1 8230,1 10 mg
Replikasi 2 7827,1 7837,1 7827,1 10 mg
c. Pembuatan Seri Konsentrasi Kuersetin 1. Konsentrasi 2 µg/mL V1 x C1 = V1 x 100 µg/mL = V1 =
Replikasi 3 7816,3 7826,3 7816,3 10 mg
V2 x C2 5 mL x 2 µg/mL 0,1 mL ̴ 100 µL
2. Konsentrasi 4 µg/mL
V1 V1 V1
x C1 = x 100 µg/mL = =
V2 x C2 5 mL x 4 µg/mL 0,2 mL ̴ 200 µL
3. Konsentrasi 6 µg/mL
V1 V1 V1
x C1 = x 100 µg/mL = =
V2 x C2 5 mL x 6 µg/mL 0,3 mL ̴ 300 µL
4. Konsentrasi 8 µg/mL
V1 V1 V1
x C1 = x 100 µg/mL = =
V2 x C2 5 mL x 8 µg/mL 0,4 mL ̴ 400 µL
5. Konsentrasi 10 µg/mL
V1 V1 V1
x C1 = x 100 µg/mL = =
V2 x C2 5 mL x 10 µg/mL 0,5 mL ̴ 500 µL
6. Konsentrasi 12 µg/mL
V1 V1 V1
x C1 = x 100 µg/mL = =
V2 x C2 5 mL x 12 µg/mL 0,6 mL ̴ 600 µL
49
Lampiran 9. Penentuan Kurva Baku Kuersetin a.
Kurva Baku 1
50
Lampiran 9. Lanjutan b.
Kurva Baku 2
51
Lampiran 9. Lanjutan c.
Kurva Baku 3
52
Lampiran 10. Perhitungan Kadar Flavonoid Total Daun Kersen a.
Data Absorbansi Ekstrak Daun Kersen
Metode Ekstraksi Perkolasi
Maserasi
Sokletasi
Refluks
b.
Replikasi
Absorbansi
1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3
0,450 0,441 0,440 0,554 0,547 0,532 0,437 0,436 0,440 0,250 0,255 0,259
Pengenceran (f)
Volume Total Ekstrak
Bobot Penimbangan Ekstrak
25 mL
5 gram
2000 kali
1000 kali
1000 kali
1000 kali
Perhitungan Kadar Flavonoid Total Daun Kersen
Persamaan Kurva Baku Kuersetin adalah y = 0,05864x + 0,08371 Metode Perkolasi (pengenceran 2000 kali) R1
→
y 0,450 x
= 0,05864x + 0,08371 = 0,05864x + 0,08371 = 6,2464 µg/mL
𝑥 × Pengenceran × Volume Total Ekstrak Bobot Penimbangan Ekstrak 6,2464 µg/mL × 2000 × 25 Kadar Flavonoid = 5 gram Kadar Flavonoid = 62464 µg/gram Kadar Flavonoid = 62,46 mg/gram Kadar Flavonoid =
R2
→
y 0,441 x
= 0,05864x + 0,08371 = 0,05864x + 0,08371 = 6,0929 µg/mL
𝑥 × Pengenceran × Volume Total Ekstrak Bobot Penimbangan Ekstrak 6,0929 µg/mL × 2000 × 25mL Kadar Flavonoid = 5 gram Kadar Flavonoid = 60929 µg/gram Kadar Flavonoid = 60,93 mg/gram Kadar Flavonoid =
53
R3
→
y 0,440 x
= 0,05864x + 0,08371 = 0,05864x + 0,08371 = 6,0759 µg/mL
𝑥 × Pengenceran × Volume Total Ekstrak Bobot Penimbangan Ekstrak 6,0759 µg/mL × 2000 × 25mL Kadar Flavonoid = 5 gram Kadar Flavonoid = 60759 µg/gram Kadar Flavonoid = 60,76 mg/gram Kadar Flavonoid =
Kadar rata-rata metode Perkolasi mg
mg
mg
𝑅1 + 𝑅2 + 𝑅3 62,46 gram + 60,93 gram + 60,76 gram = = = 61,38 mg/gram 3 3
Metode Maserasi (pengenceran 1000 kali) R1
→
y 0,554 x
= 0,05864x + 0,08371 = 0,05864x + 0,08371 = 8,02 µg/mL
𝑥 × Pengenceran × Volume Total Ekstrak Bobot Penimbangan Ekstrak 8,02 µg/mL × 1000 × 25mL Kadar Flavonoid = 5 gram Kadar Flavonoid = 4010 µg/gram Kadar Flavonoid = 40,10 mg/gram Kadar Flavonoid =
R2
→
y 0,547 x
= 0,05864x + 0,08371 = 0,05864x + 0,08371 = 7,9005 µg/mL
𝑥 × Pengenceran × Volume Total Ekstrak Bobot Penimbangan Ekstrak 7,9005 µg/mL × 1000 × 25mL Kadar Flavonoid = 5 gram Kadar Flavonoid = 39502,5 µg/gram Kadar Flavonoid = 39,50 mg/gram Kadar Flavonoid =
R3
→
y 0,532 x
= 0,05864x + 0,08371 = 0,05864x + 0,08371 = 7,6447 µg/mL
54
𝑥 × Pengenceran × Volume Total Ekstrak Bobot Penimbangan Ekstrak 7,6447 µg/mL × 1000 × 25mL Kadar Flavonoid = 5 gram Kadar Flavonoid = 38223,5 µg/gram Kadar Flavonoid = 38,22 mg/gram Kadar Flavonoid =
Kadar rata-rata metode Maserasi : mg
mg
mg
𝑅1 + 𝑅2 + 𝑅3 40,10 gram + 39,50 gram + 38,22 gram = = = 39,27 mg/gram 3 3
Nilai absorbansi pada metode ekstraksi refluks dan sokletasi dihitung seperti pada perhitungan metode maserasi.
55
Lampiran 11. Analisis Data dengan SPSS a. Uji Normalitas KolmogorovSmirnova
Metode Ekstraksi Pelarut Metanol
Statisti c df
Kadar Perkolasi Flavonoid Maserasi Total (%) Sokletasi Refluks
Shapiro-Wilk Statisti c
Sig,
df
Sig,
0,353
3
,
0,824
3
0,174
0,260
3
,
0,958
3
0,607
0,299
3
,
0,915
3
0,433
0,198
3
,
0,995
3
0,871
b. Uji Homogenitas Test of Homogeneity of Variances Kadar Flavonoid Total (%) Levene Statistic 3,247
df1
df2 3
Sig, 8
0,082
c. Uji One-Way Anova ANOVA Kadar Flavonoid Total (%) Sum of Squares Between Groups Within Groups Total
df
Mean Square
3290,980
3
4,341
8
3295,321
11
F
1096,993 2,022E3 0,543
Sig, 0,000
56
Lampiran 11. Lanjutan d. Uji Bonferroni Multiple Comparisons Kadar Flavonoid Total (%) Bonferroni (I) Metode Ekstraksi Pelarut Metanol
(J) Metode Ekstraksi Mean Pelarut Difference (IMetanol J) Std, Error
95% Confidence Interval
Sig,
Lower Bound
Upper Bound
Perkolasi Maserasi
19,928333* 0,601456
0,000
17,83594
22,02073
Sokletasi
29,452000* 0,601456
0,000
27,35961
31,54439
Refluks
45,791333* 0,601456
0,000
43,69894
47,88373
*
-19,928333 0,601456
0,000
-22,02073
-17,83594
*
0,000
7,43127
11,61606
*
25,863000 0,601456
0,000
23,77061
27,95539
*
-29,452000 0,601456
0,000
-31,54439
-27,35961
*
-9,523667 0,601456
0,000
-11,61606
-7,43127
*
16,339333 0,601456
0,000
14,24694
18,43173
Perkolasi
*
-45,791333 0,601456
0,000
-47,88373
-43,69894
Maserasi
*
-25,863000 0,601456
0,000
-27,95539
-23,77061
Sokletasi
*
0,000
-18,43173
-14,24694
Maserasi Perkolasi Sokletasi Refluks Sokletasi Perkolasi Maserasi Refluks Refluks
9,523667 0,601456
-16,339333 0,601456
*, The mean difference is significant at the 0,05 level
57
Lampiran 12. Dokumentasi Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Kersen
Daun Kersen segar sebanyak 3500 gram
Pencucian Daun Kersen segar
Proses Pengeringan Daun Kersen di dalam Oven pada suhu ±40o C
Proses pembuatan serbuk daun kersen menggunakan blender
Proses Pengayakan serbuk daun kersen dengan mesh 40
Pengukuran susut pengeringan dengan moisture balance
Serbuk daun kersen yang sudah siap untuk diekstraksi
58
Proses ekstraksi daun kersen dengan metode Perkolasi
Proses ekstraksi daun kersen dengan metode Sokletasi
Proses ekstraksi daun kersen dengan metode Maserasi
Ekstrak Metanol Daun Kersen
Kuersetin yang telah direaksikan dengan Kalium Asetat dan AlCl3
Proses ekstraksi daun kersen dengan metode Refluks
Penimbangan Ekstrak Metanol Daun Kersen
Ekstrak Metanol Daun Kersen yang sudah direaksikan Pereaksi Kalium Asetat dan AlCl3 berubah warna menjadi kuning.
