13
LAMPIRAN
14 Lampiran 1 Komposisi media pertumbuhan bakteri
No
Media
1
Media gelatin
2
Media Kosser sitrat
3
Kaldu laktosa (LB)
5
Kaldu nutrien (NB)
6
Media MR-VP
7
Media motilitas
8
Media tripton 1 %
9
Media pepton cair 1%
10
Larutan fisiologis 0.83%
11
Media marine agar (media agar laut)
Komposisi Sebanyak 150 g gelatin dilarutkan dengan akuades hingga 1000 mL, cek pH 6.7±7.0, lalu disterilisasi dengan autoklaf. Sebanyak 5 g NaCl; 0,28 g MgSO4.7 H2O; 1 g (NH4)2HPO4; 1 g KH2PO4; 2 g asam sitrat cek pH 6.7±7.0, dilarutkan dengan akuades hingga 1000 mL, dan disterilisasi dengan autoklaf. Sebanyak 3 g pepton daging; 3 g ektrak daging; 5 g laktosa cek pH 6.7±7.0, dilarutkan dengan akuades hingga 1000 mL dan disterilisasi dengan autoklaf. Sebanyak 2 g pepton daging; 3 g ekstrak daging, cek pH 6.7±7.0 dilarutkan dengan akuades hingga 1000 mL dan disterilisasi dengan autoklaf. Sebanyak 0,5 g D-glukosa; 0,5 g K2HPO4; 0,5 g pepton, cek pH 6.7±7.0 dilarutkan dalam akuades hingga 1000 mL dan disterilisasi dengan autoklaf. Sebanyak 80 g gelatin; 10 g pepton daging; 3 g ekstrak daging; 3 g NaCl; 30 g agar, cek pH 6.7±7.0 dilarutkan dengan akuades hingga 1000 mL dan disterilisasi dengan autoklaf Sebanyak 10 gram tripton dilarutkan akuades hingga 1000 mL dan disterilisasi dengan autoklaf Sebanyak 10 g pepton dilarutkan dalam akuades hingga 1000 mL dan disterilisasi dengan autoklaf Sebanyak 0,83 g NaCl, dilarutkan dengan akuades 100 mL dan di sterilisasi dalam autoklaf Sebanyak 0.5 g pepton, 1 g ekstrak khamir, 0.1 g besi sitrat, 19.45 g NaCl, 8.8 g MgCl, 3.24 g Nasulfat, 1.88 g CaCl2, 0.55 g KCl, 0.16 g Nabikarbonat, 34 mg SrCl2, 22 mg H3BO3, 4 mg Nasilikat, 2.4 mg Na-F, 1.6 mg NH4-nitrat, 8 mg Nafosfat, 15 g bacto agar, cek pH 6.7±7.0dan dilarutkan dengan akuades hingga 1000 ml dan diatur pH 7.4 ± 0.2.
15 Lampiran 2 Komposisi pereaksi kimia
No
Pereaksi
1
Alkohol 70%
2
Asam alkohol 1%
3
Aseton iodine 1:1
4
Asam sulfanilat 1%
5
Indikator merah fenol 1%
6
Indikator biru brom timol 1%
7
Indikator feriamonium sulfat 1%
8
Indikator merah metil 1%
9
Karbol fuchsin 1 %
10
KOH 40%
11
Kovacs
12
Kristal violet 1%
13
Lugol pekat
14 15
Lugol encer Malachite hijau 5%
16
Peroksida 3 %
17
Safranin 1%
18 19
Tembaga sulfat 20% α-naftol 1%
Cara pembuatan 74 mL etanol 96% dilarutkan dalam akuades hingga 100 mL 3 mL asam klorida pekat dilarutkan dalam alkohol 96% hingga 100 mL 10 g iodin, 4 g KI dilarutkan dengan 10 mL akuades lalu ditambah etanol 96% hingga 100 mL (larutan A). Sebanyak 4 mL diambil dan dilarutkan dengan aseton hingga 100 mL 1 g asam sulfanilat dilarutkan ke dalam alkohol 70% dan diencerkan hingga 100 mL 1 g merah fenol dilarutkan dalam etanol hingga 100 mL 1 g BTB dilarutkan dalam etanol hingga 100 mL 1 g feriamonium sulfat dilarutkan dalam akuades hingga 100 mL 1g merah metil dilarutkan dalam etanol 70% hingga 100 mL 1 g fuksin basa dilarutkan dalam 10 mL etanol (larutan A), 5 g fenol dilarutkan dalam 95 mL akuades (larutan B), lalu keduanya dicampur dan disaring. 40 g KOH dilarutkan dalam 100 mL akuades, diaduk hingga homogen 1 p-dimetilamino benzaldehida dilarutkan dalam 100 mL etanol 96%. 1 g kristal violet dilarutkan dalam air hingga 100 mL 5 g iodin ditambah 10 g KI dilarutkan dengan akuades hingga 100 mL Lugol pekat diencerkan hingga 5x 5 g malasit hijau dilarutkan dalam 100 mL akuades 30 mL H2O2 30% dilarutkan dalam 100 mL akuades 1 g safranin dilarutkan dalam 100 mL akuades, diaduk hingga homogeny 20 g terusi dilarutkan dalam 100 mL akuades 1 g α-naftol dilarutkan dalam 100 mL etanol
16 Lampiran 3 Diagram alir penelitian Persiapan Sampel Isolat bakteri Regenerasi kultur murni (37 oC, 24 jam)
Pengamatan dan identifikasi bakteri
Analisis morfologi: Bentuk, elevasi, warna, permukaan koloni
Analisis fisiologi: Bentuk sel Pewarnaan Gram Spora Kapsul
Aktivitas biokimia: Fermentasi karbohidrat Hidrolisis Analisis IMViC Oksidase-katalase Motilitas Analisis H2S Reduksi nitrat
Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology
Pencirian
Genus bakteri
17 Lampiran 4 Bagan alir identifikasi bakteri batang Gram positif
18 Lampiran 4 Bagan alir bakteri batang Gram negatif
19 Lampiran 5 Bagan alir identifikasi bakteri Bacillus spp
20 Lampiran 6 Bagan alir famili Enterobacteriaceae
21 Lampiran 7 Bagan alir identifikasi morfologi bakteri menurut Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology
