TEPUNG AMPAS TAHU SEBAGAI MEDIA PERTUMBUHAN BAKTERI Serratia marcescens

TEPUNG AMPAS TAHU SEBAGAI MEDIA PERTUMBUHAN BAKTERI Serratia marcescens

SKRIPSI Diajukan sebagai salah satu syarat menyelesaikan Pendidikan Diploma IV Kesehatan Program Studi Analis Kesehatan

Diajukan oleh: Umi Rosidah NIM. G1C215008

PROGRAM STUDI D IV ANALIS KESEHATAN FAKULTAS ILMU KEPERAWATAN DAN KESEHATAN UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH SEMARANG TAHUN 2016 http://lib.unimus.ac.id

http://lib.unimus.ac.id


TEPUNG AMPAS TAHU SEBAGAI MEDIA PERTUMBUHAN BAKTERI Serratia marcescens Umi Rosidah1, Ana Hidayati Mukaromah 2, Sri Sinto Dewi 3 1

Program Studi D IV Analis Kesehatan Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan Universitas Muhammadiyah Semarang, 2 Laboratorium Kimia Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan Universitas Muhammadiyah Semarang, 3 Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan Universitas Muhammadiyah Semarang,

ABSTRAK Media yang paling sering digunakan untuk pemeriksaan mikrobiologi salah satunya adalah Nutrient Agar karena sebagai media umum, namun harga media tersebut mahal. Ampas tahu adalah salah satu bahan alami yang mengandung protein cukup tinggi dan harganya murah, pemanfaatan ampas tahu saat ini hanya sebagai pakan ternak dan sebagian kecil diolah sebagai bahan pangan. Tujuan penelitian yaitu mengetahui pengaruh variasi konsentrasi tepung ampas tahu terhadap jumlah koloni bakteri Serratia marcescens. Metode Penelitian yang digunakan adalah eksperimen dengan variabel bebas tepung ampas tahu konsentrasi 6% b/v , 7% b/v, 8% b/v, 9% b/v, dan 10 % b/v dengan pengulangan tiga kali. Pada kondentrasi 6% b/v , 7% b/v dan 8% penambahan agar netral sebanyak 1,75 g, dan pada konsentrasi 9% b/v dan 10 % b/v dengan penambahan agar 1,5 g.Hasil penelitian menunjukan rerata jumlah koloni pada kelompok kontrol menggunakan media Nutrient Agar sebanyak 20 x 108 CFU/ml, pada kelompok perlakuan media tepung ampas tahu dengan konsentrasi 6% sebanyak 22 x 108 CFU/ml, konsentrasi 7% sebanyak 24 x 108 CFU/ml, konsentrasi 8% sebanyak 26 x 108 CFU/ml, konsentrasi 9 % sebanyak 27 x 108 CFU/ml dan pada konsentrasi 10 % sebanyak 29 x 108 CFU/ml. Hasil uji ANOVA dengan derajat kepercayaan 0,05 didapatkan p value = 0,150 (p > 0,05) sehingga diperoleh kesimpulan tidak ada pengaruh signifikan variasi konsentrasi tepung ampas tahu terhadap jumlah koloni bakteri Serratia marcescens.

Kata Kunci: Tepung Ampas Tahu, Jumlah Koloni, Serratia marcescens.

iv


FLOUR TOFU KNOW AS A BACTERIA GROWTH MEDIA Serratia marcescens

Umi Rosidah1, Ana Hidayati Mukaromah 2, Sri Sinto Dewi 3

1

Study Program of DIV Medical Laboratory Faculty of Nursing and Health sciences , University of Muhammadiyah Semarang. 2 Chemical Laboratory Faculty of Nursing and Health Sciences University of Muhammadiyah Semarang. 3 Microbiology Laboratory Faculty Faculty of Nursing and Health Sciences University of Muhammadiyah Semarang. Abstract The most commonly used media for microbiological examination is Nutrient Agar as a general media, but the media price is expensive. Tofu dregs is one of the natural ingredients that contain protein is high enough and the price is cheap, the use of tofu dregs current only as animal feed and processed as food. The purpose of research is to know the effect of variations in the concentration of flour from tofu dregs toward the number of colonies of bacteria Serratia Marcescens. The research method used is experiment of independent variables with flour from tofu dregs that has a concentration 6% b/v, 7% b/v, 8% b/v, 9%bv, and 10% b/v with repetition three times. At a concentration 6% b/v, 7% b/v and 8% addition of as much as 1,75 grams Agar Netral, and teh concentration of 9% and 10% with the addition of 1,5 grams Agar. Research shows the average number of colonies in the control group using media Nutrient Agar as much as 20x 108 CFU/ml, In the treatment group were using the media flour from tofu dregs with a concentration 6% as much as 22 x 108 CFU/ml, concentration 8% as much as 26 x 108 CFU/ml, concentration 9% as much as 27 x 108 CFU/ml and at a concentration 10% as much as 29 x 108 CFU/ml. ANOVA test results with a confidence degree of 0,05 has been obtained p value =0,150 (p > 0,05) so it can be concluded that there was no significant effect of varying concentrations of flour from tofu dregs to the number of Serratia Marcescens bacterial colonies. Keywords: flour of tofu dregs, number of colonies, Serratia Marcescens.

v



KATA PENGANTAR Puji syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT yang telah melimpahkan segala rahmat, hidayah dan inayah-Nya, sholawat dan salam kepada junjungan kita Baginda Rosulullah SAW beserta keluarga dan para Sahabat-nya sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas akhir yang berjudul “Tepung Ampas Tahu Sebagi Media Pertumbuhan Bakteri Seratia marcescens”. Penyusunan skripsi ini merupakan salah satu syarat untuk menyelesaikan Pendidikan Diploma IV Analis Kesehatan di Universitas Muhammadiyah Semarang 2016. Penulis menyadari bahwa terselesaikannya Tugas Akhir ini tidak lepas dari bimbingan, dukungan dan bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu pada kesempatan ini, penulis ingin menyampaikan ucapan terimakasih kepada : 1. Ibu Dra. Ana Hidayati Mukaromah, M.Si selaku Pembimbing I atas waktu dan tenaganya sehingga proposal ini dapat selesai. 2. Ibu Dra. Sri Sinto Dewi, M.Si.Med selaku Pembimbing II dan Ketua Program Studi DIV Analis Kesehatan dalam memberikan petunjuk dan pengarahan selama penyusunan proposal ini. 3. Bapak Sugiyanto, S.Pd, M.App, Sc, selaku Direktur Poltekkes Kemenkes Semarang yang telah memberikan ijin belajar bagi penulis. 4. Suami dan anak tercinta yang telah memberikan doa restu dan dukungan baik secara moril maupun materiil. 5. Ayah, Kakak dan Adekku yang selalu memberikan do’a dan dukungan. 6. Serta seluruh pihak yang telah membantu dalam pembuatan skripsi ini. Penulis menyadari masih banyak ketidak sempurnaan dan kekurangan dalam penulisan tugas akhir ini. Kritik dan saran yang membangun. Semoga tugas akhir ini dapat bermanfaat bagi para pembaca. Semarang, September 2016 Penulis

http://lib.unimus.ac.id vii

DAFTAR ISI

Halaman HALAMAN JUDUL ................................................................................. i HALAMAN PERSETUJUAN ................................................................. ii HALAMAN PENGESAHAN ................................................................... iii ABSTRAK ............................................................................................... iv ABSTRACT ............................................................................................... v HALAMAN PERNYATAAN ORIGINALITAS .................................... vi KATA PENGANTAR ............................................................................... vii DAFTAR ISI .............................................................................................. viii DAFTAR TABEL ..................................................................................... x DAFTAR GAMBAR ................................................................................. xi DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................. xii BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang ................................................................................ 1 1.2 Rumusan Masalah ........................................................................... 3 1.3 Tujuan Penelitian ............................................................................. 3 1.4 Manfaat Penelitian ........................................................................... 4 1.5 Orisinalitas Penelitian...................................................................... 4 BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1. Tinjauan Teoritis ............................................................................. 6 2.1.1 Media Pertumbuhan Bakteri .................................................. 6 2.1.2 Ampas Tahu ........................................................................... 10 2.1.3 Pertumbuhan Bakteri ............................................................. 15 2.1.4 Pengukuran Pertumbuhan Bakteri ......................................... 18 2.1.5 Serratia marcescens ........................................................... 22 2.2 Kerangka Teori ................................................................................ 24 2.3 Kerangka Konsep ............................................................................ 24 2.4 Hipotesis Penelitian ......................................................................... 24 BAB III METODOLOGI PENELITIAN 3.1 Jenis Penelitian ............................................................................... 25 3.2 Desain Penelitian ............................................................................ 25 3.3 Tempat dan waktu Penelitian ......................................................... 26 3.4 Variabel Penelitian ......................................................................... 26 3.5 Definisi Operasional ....................................................................... 27 3.6 Obyek Penelitian ............................................................................ 27 3.7 Alat dan Bahan ............................................................................... 27 3.8 Prosedur Penelitian........................................................................... 28 3.9 Alur Penelitian ................................................................................ 31 3.10 Teknik Pengumpulan dan Analisis Data ........................................ 32

http://lib.unimus.ac.id viii

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 1.1 Hasil penelitian ............................................................................... 1.2 Pembahasan .................................................................................... BAB V KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan ...................................................................................... 5.2 Saran ................................................................................................ DAFTAR PUSTAKA LAMPIRAN

http://lib.unimus.ac.id ix

33 33 37 37

DAFTAR TABEL

Halaman Tabel 1. Keaslian Penelitian ........................................................................ Tabel 2. Karakteristik Kimia Tepung Ampas Tahu .................................... Tabel 3. Kandungan Lisin dan Metionin Ampas Tahu ............................... Tabel 4. Kombinasi Perlakuan dan Ulangan Percobaan............................... Tabel 5. Definisi Operasional ..................................................................... Tabel 6. Jumlah Koloni Bakteri Serratia marcescens ................................ Tabel 7. Ukuran dan Warna Koloni Bakteri Serratia marcescens.............. Tabel 8. Data Mentah Hasil Penelitian ....................................................... Tabel 9. Hasil Uji Formalin ........................................................................ Tabel 10. Penentuan Jumlah Agar Sebagai Pemadat .................................. Tabel 11. Hasil Kuisioner Kecocokan Penambahan Agar ..........................

x


4 13 13 26 27 34 35 42 43 44 45

DAFTAR GAMBAR

Halaman Gambar 1. Diagram Alir Proses Pembuatan Tepung Ampas Tahu ............ Gambar 2. Kurva Pertumbuhan Bakteri ...................................................... Gambar 3. Serratia marcescens .................................................................. Gambar 4. Kerangka Teori .......................................................................... Gambar 5. Kerangka Konsep ...................................................................... Gambar 6. Prosedur Plate Count dengan seri pengenceran.......................... Gambar 7. Alur Penelitian............................................................................

xi


12 17 23 24 24 29 31

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman Lampiran 1. Data Mentah Hasil Penelitian ................................................. Lampiran 2. Uji Formalin Pada Ampas Tahu ............................................. Lampiran 3. Optimasi Variasi Agar Netral ................................................. Lampiran 4. Hasil Uji Statistik.................................................................... Lampiran 5. Dokumentasi Penelitian ..........................................................

xii


41 43 44 45 46

BAB I PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang Semua mahluk hidup terutama manusia maupun

jasad renik

(mikroorganisme) memerlukan nutrisi. Mikroorganisme merupakan mahluk yang mempunyai ukuran sel sangat kecil diantaranya adalah bakteri. Bakteri memerlukan tempat dan nutrisi yang cukup untuk tumbuh dan berkembang. Dalam lingkup laboratorium mikrobiologi, bakteri dapat ditumbuhkan pada sebuah media pertumbuhan (Ariesta, 2013). Bakteri yang sering dibiakkan untuk pemeriksaan mikrobiologi diantaranya Serratia marcescens. Bakteri ini bersifat gram negatif, berbentuk basil (bulat lonjong), bergerak dengan cepat (motil) karena mempunyai flagel peritrik, kadang – kadang berkapsul. Pada suhu kamar, bakteri patogen ini menghasilkan pigmen merah yang disebut prodiogisin, fakultatif anaerob atau tidak terlalu membutuhkan oksigen (Pelczar, 2008). Menurut penelitian Pratami (2012), Serratia marcessens merupakan salah satu bakteri penyebab infeksi nosokomial dan sering ditemukan dalam makanan terutama pada tepung. Bakteri ini dapat tumbuh hampir disemua media. Berdasarkan sifat dan fungsinya, media terbagi menjadi beberapa kelompok antara lain media transport, media diperkaya, media selektif (selective and differential media), media pengujian, media perhitungan jumlah dan media umum (universal media). Sedangkan berdasarkan bahan

http://lib.unimus.ac.id 1

penyusunnya media dibedakan dua macam yaitu media sintetis dan media alami. Media sintetis yaitu media yang terdiri dari bahan-bahan yang telah diketahui komposisinya seperti media Nutrient Agar. Media alami yaitu media yang terdiri dari bahan-bahan alami seperti

ekstrak kentang, sari

wortel dan umbi-umbian (Rizky, 2013) Media

yang

paling

sering

digunakan

untuk

pemeriksaan

mikrobiologi adalah Nutrient Agar karena sebagai media umum (universal media) yang memiliki komposi 0,8% protein, 1,2% agar dan sisanya adalah air (Merck). Seiring dengan meningkatnya permintaan pemeriksaan mikrobiologi di laboratorium maka jumlah penggunaan media Nutrient Agar juga mengalami peningkatan, dan sementara harga media Nutrient Agar cukup mahal. Ampas tahu adalah salah satu bahan alami yang mengandung protein cukup tinggi dan harganya murah yang berasal dari limbah padat suatu industri tahu. Limbah ini dihasilkan setiap hari dalam jumlah yang cukup melimpah dan

kandungan protein yang tertinggal relatif masih tinggi.

Pemanfaatan ampas tahu saat ini hanya sebagai pakan ternak sapi dan babi, dan sebagian kecil diolah sebagai bahan pangan. Karakteristik kimia tepung ampas tahu mengandung protein 10,80% dalam 100 gram tepung ampas tahu ( Yustina, 2012). Berdasarkan uraian tersebut, protein nabati dari tepung ampas tahu juga dapat digunakan sebagai pengganti pepton dan meat ekstrak yang merupakan sumber protein hewani pada media Nutrient Agar. Oleh karena itu


peneliti melakukan penelitian tentang tepung ampas tahu sebagai media pertumbuhan bakteri Serratia marcescens. 1.2. Rumusan Masalah Berdasarkan latar belakang diatas dapat dirumuskan masalah sebagai berikut “Bagaimana pertumbuhan bakteri Serratia marcescens pada media tepung ampas tahu?” 1.3. Tujuan Penelitian 1.3.1. Tujuan Umum Mengetahui pengaruh variasi konsentrasi tepung ampas tahu terhadap jumlah koloni bakteri Serratia marcescens. 1.3.2. Tujuan Khusus 1.3.2.a Menghitung jumlah bakteri Serratia marcescens pada media tepung ampas tahu dengan berbagai konsentrasi (6% b/v, 7% b/v, 8% b/v, 9% b/v dan 10% b/v). 1.3.2.b Menganalisis konsentrasi tepung ampas tahu yang paling baik untuk pertumbuhan bakteri Serratia marcescens. 1.3.2.c Menganalisis pengaruh variasi konsentrasi tepung ampas tahu terhadap jumlah koloni bakteri Serratia marcescens. 1.4. Manfaat Penelitian 1.4.1. Bagi Masyarakat Mengurangi dampak pencemaran limbah ampas tahu dan memberikan informasi bahwa ampas tahu dapat digunakan sebagai media pertumbuhan bakteri.


1.4.2. Bagi Pengembangan Program Menghemat pembelian media Nutrient Agar karena dapat diganti dengan media tepung ampas tahu. 1.5. Orisinalitas Penelitian Penelitian sebelumnya yang berkaitan dengan penelitian yang akan dilakukan yaitu: Tabel 1. Keaslian Penelitian No

Nama

Judul Penelitian

Perlakuan

Kesimpulan

Pengaruh Kandungan

Pemberian

tepung

Ada pengaruh tepung bulu

Protein Tepung Bulu

bulu ayam : 0,5 g, 1

ayam terhadap pertumbuhan

Ayam Sebagai Media

g, 2 g, 3 g, 4 g, 5 g

bakteri Escherichia coli.

Pertumbuhan Bakteri

dalam 100 ml

Pertumbuhan optimum bakteri

Escherichia coli

metode spread plate

Escherichia

(tabur)

konsentrasi 5% b/v.

Peneliti 1.

Rizky

DW

(2013)

2.

Anisah

dan

Media

alternatif

rahayu

untuk

Pertumbuhan

(2015)

Bakteri

gembili

Menggunakan

garut masing-masing

Sumber Karbohidrat

300 g dalam 1000 ml

yang Berbeda

metode

coli

pada

Ekstrak

umbi

Pertumbuhan optimum bakteri

ganyong,

umbi

Escherichia

umbi

Staphylococcus aureus pada

dan

:

coli

dan

media umbi ganyong.

Spread

Plate( Tabur) 3.

Bimbi (2012)

M

Tepung Sagu Sebagai

Konsentrasi

tepung

Sagu dapat memadatkan dan

Pemadat

Media

sagu 52g, 56g, 60g,

memberikan hasil positif pada

Kultur Untuk Bakteri

64g dan 68g masing-

konsentrasi 68g dalam 500

masing

ml.

dilarutkan

dalam 500 ml.

Media sagu dapat ditumbuhi

Metode Gores

bakteri.


Dari penelitian sebelumnya, peneliti mengacu pada penelitian Rizky DW (2013). Perbedaan penelitian tersebut dengan penelitian ini terletak pada jenis sumber protein yang digunakan, konsentrasi dan bakteri yang diujikan. Pada penelitian sebelumnya, sumber protein yang digunakan adalah tepung bulu ayam yang ditambahkan sebanyak 0,5 g, 1 g, 2 g, 3 g, 4 gr dan 5 g dan menggunakan bakteri Escherichia coli. Sedangkan pada penelitian ini menggunakan sumber protein yang berasal dari tepung ampas tahu dengan konsentrasi 6% b/v, 7% b/v, 8% b/v, 9% b/v dan 10% b/v menggunakan bakteri Serratia marcescens.


BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1.Tinjauan Teoritis 2.1.1. Media Pertumbuhan Bakteri Media merupakan nutrien yang dibutuhkan oleh mikroorganisme untuk pertumbuhan secara in vitro (Harti, 2014). Pemilihan media yang akan digunakan disesuaikan sifat penelitian atau pemeriksaan. Fungsi dari media yaitu

secara

kualitatif

digunakan

untuk

isolasi

dan

identifikasi

mikroorganisme, sedangkan secara kuantitatif digunakan untuk perbanyakan dan perhitungan jumlah mikroorganisme. Media digolongkan menjadi 3 golongan yaitu media berdasarkan konsistensinya, media berdasarkan bahan penyusunnya dan media berdasarkan sifat dan fungsinya. Menurut golongan media yang berdasarkan sifat dan fungsinya, media terbagi lagi menjadi beberapa kelompok antara lain media transport, media diperkaya, media selektif (selective and differential media), media pengujian, media perhitungan jumlah, (universal media) atau media umum (Harti, 2014). Menurut Rizky (2013), Media berdasarkan komposisinya ada 2 macam meliputi : a. Media alami yaitu media yang terdiri dari bahan-bahan alami contohnya ekstrak kentang, sari wortel. b. Media sintetis (chemically defined media) yaitu media yang terdiri dari bahan-bahan yang telah diketahui komposisinya.

6


Sedangkan media berdasarkan konsistensinya ada 3 macam yaitu : a. Media padat (solid media), media yang mengandung agar-agar 1,5-2 %, biasanya dalam bentuk plate agar (lempeng agar) atau lant agar atau agar miring (Brooks, Butel & Morse, 2008). Media padat sangat bermanfaat untuk isolasi kultur murni, perhitungan mikroba, dan seleksi galur yang diinginkan. Media padat berisi substansi yang memadat ketika didinginkan pada suhu kamar. Substansi pemadat yang sering digunakan adalah agar-agar ( Ariesta, 2013). b. Media semi padat (semi solid media), media yang mengandung agar-agar 0,6-0,75%, contohnya media SIM (Sulfide Indole Motility) untuk pengamatan motilitas bakteri (Brooks, Butel & Morse, 2008). c. Media cair (liquid media), media yang tidak mengandung bahan pemadat, contohnya Nutrient Broth (Brooks, Butel & Morse, 2008). Nutrisi dalam suatu media seharusnya mengandung unsur - unsur yang diperlukan untuk pertumbuhan mikroorganisme antara lain: 1. Air Air merupakan komponen utama di dalam sel mikroba dan medium. Fungsi air sebagai sumber energi berupa substrat yang dapat dioksidasi, sebagai sumber oksigen untuk bahan organik sel pada respirasi, selain itu air berfungsi sebagai pelarut dan alat pengangkut dalam metabolisme (Brooks, 2008)


2. Sumber Karbon Banyak bakteri yang membutuhkan karbon dioksida sebagai sumber karbonnya. Semua bakteri yang membutuhkan karbon dari senyawa anorganik disebut autotrof. Bila mereka memperoleh energi dari cahaya maka disebut fotoautotrof dan bila mereka memperoleh energinya dengan cara mengoksidasi senyawa kimiawi maka disebut kemoautotrof. Ada pula bakteri yang tidak menggunakan karbon dioksida sebagai sumber karbon satusatunya namun membutuhkan senyawa organik sebagai sumber karbonnya, bakteri semacam ini disebut heterotrof (Pelczar, 2010). 3. Sumber Nitrogen Nitrogen adalah salah satu unsur yang diperlukan oleh semua jasad hidup untuk sintesis protein asam nukleat dan senyawa–senyawa lain yang mengandung nitrogen. Nitrogen sangat dibutuhkan dalam pertumbuhan, karena nitrogen tersebut terkandung di dalam protein dan asam nukleat. Dalam hal memperoleh nitrogen setiap organisme berbeda-beda, ada yang dengan cara menggunakan gas nitrogen dari udara dan ada juga yang menggunakan sumber nitrogen anorganik, seperti garam-garam ammonium. Tapi ada juga yang menggunakan sumber nitrogen organik, seperti glutamik dan asparagin (Brooks, 2008). 4. Sumber Belerang Belerang adalah komponen dari banyak substansi organik sel. Belerang membentuk bagian struktur beberapa koenzim dan ditemukan dalam


rantai samping sistein dan metonin pada protein. Belerang dalam bentuk asalnya tidak dapat digunakan oleh tumbuhan atau hewan. (Jawetz, Melnick, Adelberg, 2005) 5. Sumber Phospor Fosfat (PO43-) dibutuhkan sebagai komponen ATP, asam nukleat dan sejumlah koenzim seperti NAD, NADP dan flavin. Selain itu, banyak metabolit, lipid (fosfolipid, lipid A), komponen dinding sel (teichoic acid), beberapa polisakarida kapsul dan beberapa protein adalah bergugus fosfat (Jawetz, Melnick, Adelberg, 2005) 6. Sumber Oksigen Sebagian besar mikroorganisme bersifat aerob obligat, secara khusus memerlukan oksigen sebagai penerima hidrogen, beberapa bersifat fakultatif yang sanggup hidup secara aerob atau anaerob, dan beberapa lagi bersifat anaerob obligat yang memerlukan zat bukan oksigen sebagai penerima hidrogen dan sangat peka terhadap hambatan oleh oksigen. Toksisitas O2 merupakan hasil reduksi oleh enzim dalam sel (misalnya flavoprotein) menjadi hidrogen peroksida (H2O2) atau reduksi ion fero menjadi radikal bebas yang lebih beracun lagi. Bakteri-bakteri aerob dan anaerob terbebas dari zat-zat ini karena adanya superoksida dismutase yaitu enzim yang mengkatalisis reaksi 2O2- + 2H+

O2 + H2O2

Dan adanya katalase, enzim yang mengkatalisis reaksi


2H2O2

2H2O + O2 (Jawetz, Melnick, Adelberg, 2005).

7. Sumber Mineral Bakteri membutuhkan mineral misalnya natrium, kalium, kalsium, magnesium, mangan, besi, seng, tembaga, dan kobalt untuk pertumbuhan yang normal, namun jumlah yang dibutuhkan hanya sedikit dan diukur dalam ppm (parts per million) (Pelczar & Chan, 2010). 8. Faktor Pertumbuhan Faktor pertumbuhan adalah suatu senyawa organik yang harus dimiliki sel agar dapat tumbuh, tetapi sel tersebut tidak mampu mensintesisnya. Senyawa penting yang dibutuhkan bakteri disintesis melalui serangkaian rekasi enzimatik, masing-masing enzim diproduksi dibawah kontrol gen spesifik. Bila bakteri mengalami mutasi gen yang menyebabkan kegagalan fungsi salah satu enzim maka rantai akan rusak dan produk akhir tidak lagi dihasilkan. Untuk itu bakteri tersebut memperoleh senyawa yang dibutuhkan tadi dari lingkungan. Senyawa tersebut telah menjadi faktor pertumbuhan bagi bakteri (Brooks, Butel & Morse, 2008).

2.1.2. Ampas Tahu Ampas tahu merupakan hasil samping dari proses pengolahan tahu. Kandungan protein ampas tahu relatif tinggi karena pada proses pembuatan tahu tidak semua bagian protein pada kacang kedelai bisa diekstrak, apalagi jika menggunakan proses penggilingan tradisional. Diketahui jumlah ampas tahu di Indonesia cukup tinggi, konsumsi kacang kedelai di Indonesia tercatat


pada tahun 2013 sebanyak 2.115.700 ton. Bila 50% kacang kedelai tersebut digunakan untuk membuat tahu dan konversi kacang kedelai menjadi ampas tahu sebesar 100-112%, maka jumlah ampas tahu tercatat 1.184.792 ton secara nasional (Fadlun, Firdauz & Ariyanti, 2015). Pada penelitian ini, peneliti memanfaatkan ampas tahu sebagai media pertumbuhan bakteri dengan menggunakan bahan dasar tepung ampas tahu. Pengolahan tepung ampas tahu pada intinya yaitu untuk mengurangi kadar air dalam ampas tahu dan menghaluskannya sehingga menjadi tepung. Tepung ampas tahu adalah tepung yang diperoleh dari hasil pengeringan dari bahan ampas tahu yang masih basah, dengan alat pengering atau sinar matahari. Menurut Yustina (2012), proses pembuatan tepung ampas tahu meliputi :1) Penirisan dan pengepresan dapat dilakukan dengan menggunakan pengepres hidrolik atau peras manual menggunakan kain saring, bertujuan untuk mengurangi kadar air ampas tahu. Kadar air yang rendah dapat memperlambat proses pembusukan pada ampas tahu dan mempercepat proses pengeringan. 2) Pengukusan berfungsi sebagai sterilisasi dengan suhu 1210C selama 15 menit dapat membunuh semua jasad renik yang ada dan dapat meningkatkan daya simpan ampas tahu. 3) Penyangraian untuk membantu mengurangi kadar air bahan sehingga pengeringan selanjutnya dapat lebih cepat serta dapat mencegah timbulnya jamur. 4) Pengeringan menggunakan sinar matahari ataupun oven sebaiknya bahan sering dibolak-balik agar cepat kering. 5) Penggilingan menggunakan disc mill menghasilkan ampas kering dalam bentuk butiran dengan tingkat kehalusan tertentu. 6) Pengayakan


menggunakan

ayakan

80-100

mesh.

Pengayakan

bertujuan

untuk

memisahkan butiran ampas tahu yang masih kasar.

Ampas tahu

Penirisan/ peras

Air

Sterilisasi/pengukusan 15 menit

Pengeringan

Penggilingan

Pengayakan (80-100 mesh)

Tepung ampas tahu kasar

Tepung ampas tahu halus

Gambar 1. Diagram Alir Proses Pembuatan Tepung Ampas Tahu (Yustina, 2012)

Menurut Sulistiani (2004), Karakteristik kimia tepung ampas tahu dalam 100 g yaitu mengandung 5,74% air, 10,8% Protein, 14,49% Lemak, 9,02% Abu dan 59,95% Karbohidrat.


Tabel 2. Karakteristik Kimia Tepung Ampas Tahu (Sulistiani, 2004) Karakteristik Kimia Air (%) Protein (%) Lemak (%) Abu (%) Karbohidrat (%)

Ampas Tahu basah 89,88 1,32 2,2 0,32 6,33

Tepung Ampas Tahu 5,74 10,80 14,49 9,02 59,95

Tepung ampas tahu mengandung rendah lemak, kaya protein dan serat. Protein tersusun atas asam amino yang penting bagi sintesis protein yaitu lisin dan metionin. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kandungan asam amino lisin dan metionin ampas tahu lebih tinggi dibanding ampas kelapa ( Kailaku, 2010 dalam Yustina 2012) Tabel 3. Kandungan Lisin dan Metionin Ampas Tahu Bahan Ampas Kelapa Ampas Tahu

Kecernaan Protein 67 91

Lisin 0,54 2,8

Metionin 0,33 0,7

Dari hasil penelitian tersebut, dapat diketahui bahwa kandungan dan fungsi masing – masing komponen tepung ampas tahu dalam 100 g untuk pertumbuhan bakteri yaitu : a. Air 5,74% Air dapat digunakan sebagai sumber energi, sumber oksigen, sebagai pelarut dan alat pengangkut dalam metabolisme mikroba ( Brooks, 2008). b. Protein 10,8% ( Lisin dan Metionin ) Protein merupakan nutrisi terpenting bagi pertumbuhan bakteri karena digunakan untuk mensintesis makanan dalam pembentukan sel dan pertumbuhan ( Brooks, 2008).


c. Lemak 14,49% Lemak dapat digunakan sebagai sumber energi. Energi lemak, sedikitnya dua kali lebih besar daripada karbohidrat, lemak juga berfungsi untuk melarutkan vitamin yang larut dalam lemak seperti vitamin A.D,E dan K. Untuk itu lemak juga diperlukan untuk pertumbuhan bakteri ( Elisabeth ,W,2013). d. Karbohidrat 59,95% Kandungan karbohidrat yang tinggi dapat digunakan sebagai sumber energi untuk membangun sel ( sintesis protoplasma) dan bagian – bagian sel lainnya ( Bimbi, 2012). e. Kadar Abu 9,02% Abu merupakan residu dari senyawa anorganik dari proses pembakaran atau oksidasi. Kadar abu menunjukkan total mineral yang terkandung dalam bahan. Sebagian besar bakteri membutuhkan karbon dari senyawa anorganik atau disebut autotrof. Bakteri membutuhkan mineral misalnya natrium, kalium, kalsium, magnesium, mangan, besi, seng, tembaga, dan kobalt untuk pertumbuhan yang normal (Pelczar, 2010). f. β-Karoten Dalam 100 g ampas tahu mengandung 245,54 µg, yang menunjukkan ampas mengandung serat dan vitamin yang akan disintesis oleh bakteri sebagai prekursor koenzim ( Brooks, 2008).


2.1.3. Pertumbuhan Bakteri Bila bakteri diinokulasikan ke dalam suatu medium yang sesuai dan pada keadaan yang optimum bagi pertumbuhannya, maka terjadi kenaikan jumlah yang tinggi dalam waktu yang relatif pendek. Pada beberapa spesies, populasi (panen sel terbanyak yang dapat diperoleh) tercapai dalam waktu 24 jam, populasinya dapat mencapai 10 sampai 15 milyar sel bakteri per mililiter. Perbanyakan seperti ini disebabkan oleh pembelahan sel secara aseksual (Pelczar, 2008). Komposisi tepung ampas tahu dengan 5,75% air, 10,8% Protein, 14,49% Lemak, 9,02% Abu dan 59,95% Karbohidrat dapat dimanfaatkan sebagai media pertumbuhan bakteri. Menurut Harti (2014), Pertumbuhan bakteri dibedakan menjadi dua yaitu : 1) Pertumbuhan secara individu, sebagai pertambahan bagian-bagian sel, dapat diamati dari pertambahan ukuran sel, dan adanya pembelahan sel. 2) Pertumbuhan secara populasi, sebagai akibat pertumbuhan individu, dapat diamati dari pertambahan jumlah (kuantitas) sel atau massa sel. Sedangkan menurut Rizky (2013), Terdapat 4 fase pertumbuhan bakteri ketika ditumbuhkan pada kultur curah (batch culture) yaitu: 1. Fase Adaptasi (Lag Phase) Sel dalam fase statis ketika dipindah ke media baru maka sel akan melakukan proses adaptasi. Proses adaptasi meliputi sintesis enzim baru yang sesuai dengan medianya dan pemulihan terhadap metabolit yang bersifat toksik (misalnya asam, alkohol, dan basa) pada waktu di media lama.


Pada fase ini tidak dijumpai pertambahan jumlah sel. Akan tetapi terjadi pertambahan volume sel, karena pada fase statis biasanya sel melakukan pengecilan ukuran. Akan tetapi fase adaptasi dapat dihindari (langsung ke fase perbanyakan), jika sel di media lama dalam kondisi fase perbanyakan dan dipindah ke media baru yang sama komposisinya dengan media lama (Pelczar & Chan 2008). 2. Fase Perbanyakan (Exponential Phase) Setelah sel memperoleh kondisi ideal dalam pertumbuhannya sel akan melakukan pembelahan. Pembelahan sel merupakan persamaan eksponensial, maka fase ini disebut juga fase eksponensial. Pada fase perbanyakan jumlah sel meningkat sampai batas tertentu atau sampai memasuki fase statis. Pada fase perbanyakan sel melakukan konsumsi nutrien dan proses fisiologis lainnya (Pelczar & Chan 2008). 3. Fase Statis (Stationer Phase) Pada fase statis bakteri tidak melakukan pembelahan sel. Alasan bakteri tidak melakukan pembelahan sel pada fase ini bermacam-macam antara lain: a. Nutrien habis b. Akumulasi metabolit toksik (misalnya alkohol, asam dan basa) c. Penurunan kadar oksigen d. Penurunan nilai aw (ketersediaan air)


Pada fase ini juga biasanya sel melakukan adaptasi terhadap kondisi yang kurang menguntungkan. Akibat dari adaptasi ini dapat menghasilkan senyawa antibiotika dan antioksidan yang diinginkan manusia (Pelczar & Chan 2008). 4. Fase Kematian (Death Phase) Penyebab utama kematian adalah autolisis sel dan penurunan energi seluler. Beberapa bakteri hanya mampu bertahan beberapa jam selama fase statis dan kemudian masuk ke fase kematian, sementara itu ada bakteri yang mampu bertahan harian sampai mingguan atau tahunan pada fase statis dan kemudian baru memasuki fase kematian. Untuk bakteri yang mampu bertahan tahunan pada fase statis biasanya bakteri tersebut membentuk spora (Pelczar & Chan 2008)

Gambar 2. Kurva Pertumbuhan Bakteri; (1) Fase Adaptasi, (2) Fase Perbanyakan, (3) Fase Statis, (4) Fase Kematian


2.1.4. Pengukuran pertumbuhan bakteri Pengukuran pertumbuhan media dapat dilakukan pada media padat dan media cair yaitu : 1. Pada Media Cair Pengukuran pertumbuhan bakteri pada media cair yaitu dengan menggunakan alat turbidimetri dan standart McFarland untuk mengukur kekeruhan atau masa sel pada media cair. Standart McFarland yang sering digunakan untuk pembuatan suspensi yaitu 0,1 McFarland jumlah bakteri sebanyak 3x108 CFU/ml dan 0,5 McFarland jumlah bakteri 1,5 x 108 CFU /ml (Rizky, 2013), Menurut Komarawidjaja (2009), pengukuran pertumbuhan bakteri pada media cair dapat dilakukan dengan alat spektrofotometer dengan mengukur nilai absorbansi pada panjang gelombang 600 nm dengan dikonversikan pada kurva linier. 2. Pada Media Padat Pengukuranan pertumbuhan bakteri pada media padat dapat dilakukan dengan beberapa metode salah satunya dengan metode hitung cawan. Prinsip dari metode hitung cawan adalah jika sel bakteri yang masih hidup ditumbuhkan pada medium agar, maka sel bakteri tersebut akan berkembang biak dan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan dihitung dengan mata tanpa menggunakan mikroskop. Metode ini dibedakan atas dua cara yaitu metode tuang dan metode permukaan (Brooks, 2008).


Metode hitung cawan merupakan cara yang paling sensitif untuk menentukan jumlah bakteri karena: 1.

Hanya sel yang masih hidup yang dihitung

2.

Beberapa jenis bakteri dapat dihitung sekaligus

3.

Dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi bakteri karena koloni yang terbentuk mungkin berasal dari suatu bakteri yang mempunyai penampakan pertumbuhan yang spesifik. Selain keuntungan yang telah disebutkan, metode hitung cawan

juga mempunyai kelemahan antara lain: 1. Hasil perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel yang sebenarnya, karena beberapa sel yang berdekatan mungkin membentuk satu koloni 2. Medium dan kondisi inkubasi yang berbeda mungkin menghasilkan nilai yang berbeda 3. Bakteri yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada medium padat dan membentuk koloni yang kompak dan jelas (tidak menyebar) 4. Memerlukan persiapan dan waktu inkubasi relatif lama sampai pertumbuhan koloni dapat dihitung. Dalam metode hitung cawan, sampel yang diperkirakan mengandung lebih dari 300 sel bakteri per ml atau per gram atau per cm memerlukan perlakuan pengenceran sebelum ditumbuhkan pada medium agar. Setelah inkubasai maka akan terbentuk koloni pada medium agar yang dapat dihitung. Jumlah bakteri yang paling baik dalam satu cawan petri antara 30 sampai 300 koloni. Pengenceran dapat dilakukan dengan perbandingan 1:10,


1:100, 1:1000 dan seterusnya. Larutan pengencer yang digunakan dapat berupa larutan bufer fosfat, NaCl 0,85% atau larutan Ringer (Pelczar, 2010). a. Metode Permukaan (Surface / Spread Plate) Pada pemupukan dengan metode permukaan, agar steril terlebih dahulu dituangkan ke dalam cawan petri steril dan dibiarkan membeku. Setelah membeku dengan sempurna, kemudian sebanyak 0,1 ml contoh yang telah diencerkan dipipet pada permukaan agar tersebut. Sebuah batang gelas melengkung dicelupkan ke dalam alkohol 95% dan dipijarkan sehingga alkohol habis terbakar. Setelah dingin, batang gelas tersebut digunakan untuk meratakan contoh di atas medium agar. Selanjutnya inkubasi dilakukan seperti pada metode tuang (Madigan et al, 2013). b. Rumus Perhitungan Jumlah koloni dalam sampel dapat dihitung dengan rumus:

Untuk melaporkan hasil analisa mikrobiologi dengan cara hitung cawan digunakan suatu standar yang disebut “Standard Plate Count” (SPC) sebagai berikut: 1. Cawan yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung jumlah koloni antara 30 dan 300 2. Beberapa koloni yang bergabung menjadi satu merupakan satu kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloninya diragukan dapat dihitung sebagai satu koloni


3. Satu deretan rantai koloni yang terlihat sebagai suatu garis tebal dihitung sebagai satu koloni (Fardiaz, 1989). c. Pelaporan dan Perhitungan Sedangkan pelaporan dan perhitungan koloni bakteri dalam SPC sebagai berikut: 1. Hasil yang dilaporkan hanya terdiri dari dua angka yaitu angka pertama (satuan) dan angka kedua (desimal). Jika angka yang ketiga sama dengan atau lebih besar dari 5, harus dibulatkan satu angka lebih tinggi pada angka kedua. 2. Jika pada semua pengenceran dihasilkan kurang dari 30 koloni pada cawan petri, berarti pengenceran yang dilakukan terlalu tinggi, oleh karena itu jumlah koloni pada pengenceran yang terendah yang dihitung. Hasilnya dilaporkan kurang dari 30 dikalikan dengan besarnya pengenceran, tetapi jumlah yang sebenarnya harus dicantumkan di dalam tanda kurung. 3. Jika pada semua pengenceran dihasilkan lebih dari 300 koloni pada cawan petri, berarti pengenceran yang dilakukan terlalu rendah, oleh karena itu jumlah koloni pada pengenceran yang tertinggi yang dihitung. Hasilnya dilaporkan sebagai lebih dari 300 dikalikan dengan faktor pengenceran, tetapi jumlah yang sebenarnya harus dicantumkan di dalam tanda kurung. 4. Jika pada cawan dari dua tingkat pengenceran dihasilkan koloni dengan jumlah antara 30 dan 300, dan perbandingan antara hasil


tertinggi dan terendah dari kedua pengenceran tersebut lebih kecil atau sama dengan dua, dilaporkan rata-rata dari kedua nilai tersebut dengan memperhitungkan faktor pengencernya. Jika perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah

lebih besar dari 2, yang

dilaporkan hanya hasil yang terkecil. 4. Jika digunakan dua cawan petri (duplo) per pengenceran, data yang diambil harus dari kedua cawan tersebut, tidak boleh diambil salah satu. Oleh karena itu harus dipilih tingkat pengenceran yang menghasilkan kedua cawan duplo dengan koloni di antara 30 dan 300 (Fardiaz, 1989).

2.1.5. Serratia marcescens Kingdom : Bakteri Phylum

: Proteobakteri

Class

: Gamma Proteobakteri

Marga

: Enterobacteriales

Famili

: Enterobacteriaceae

Genus

: Serratia

Spesies

: Serratia marcescens Mikroskopis : Serratia marcescens merupakan bakteri berbentuk

batang, bersifat gram negatif dari famili Enterobactericeae. Makroskopis : Serratia marcescens membentuk koloni cembung, lembut, dengan tepi yang berbeda, dapat menghasilkan pigmen merah atau prodigiosin ( Pelzcar, 2008).


Sifat Biokimia : Batang motil dengan flagelum peritrikus, membentuk kapsul. Sitrat dan acetat dapat digunakan sebagai sumber karbon satusatunya, pada suhu kamar menghasilkan pigmen merah muda, merah atau magenta. Glukosa difermentasi dengan atau tanpa produksi gas ( Pelzcar, 2008). Patogenitas : Serratia marcescens merupakan bakteri yang paling sering menyebabkan infeksi nosokomial, biasa ditemukan dalam makanan, terutama pada tepung. Penularan melalui kontak langsung, dan jika bakteri ini masuk ke dalam aliran darah dan sistem pernafasan, maka dapat menyebabkan abses paru, empiema, meningitis, ISK, endokarditis, septic arthritis, osteomyelitis, peritonisis, sinusitis dan seoticaemia ( Pratami, 2012)

Gambar 3. Serratia marcescens


2.2.Kerangka Teori

Media Pertumbuhan

Cair

Semi Solid

Bakteri Serratia Marcescens

Padat

Agar dan Tepung Ampas Tahu Konsentrasi 6%,7%,8%,9% dan 10%

Jumlah Koloni Bakteri

Serratia Marcescens

Gambar 4. Kerangka Teori 2.3.Kerangka Konsep

Variasi konsentrasi tepung ampas tahu

Jumlah koloni bakteri Serratia Marcescens

Gambar 5. Kerangka Konsep

2.4. Hipotesis Penelitian Ada pengaruh variasi konsentrasi tepung ampas tahu terhadap jumlah koloni bakteri Serratia Marcescens.


BAB III METODE PENELITIAN

3.1. Jenis Penelitian Jenis penelitian ini adalah eksperimen atau percobaan

(experimental

research) yaitu suatu metode penelitian dengan melakukan kegiatan percobaan (experiment), yang bertujuan untuk mengetahui gejala atau pengaruh yang timbul, sebagai akibat dari adanya perlakuan tertentu atau eksperimen tersebut (Notoatmodjo, 2010).

3.2. Desain Penelitian Variasi konsentrasi sampel terdiri dari lima perlakuan yaitu 6%,7%,8%,9% dan 10%. Pengulangan sampel menggunakan rumus Gomez and Gomez (Hanafiah, 1995). Rumus ulangan yaitu: (t – 1) (r – 1) ≥ V2 (5 – 1) (r – 1) ≥ 6

Keterangan:

(r – 1) ≥ 6

r

= replikasi

4r – 4

≥6

t

= treatmen sampel

4r

≥ 10/4

V2

= derajat bebas galat

r

≥ 2,5 = 3

N

= unit sampel

4

N

=rxt =3x5 = 15


Pengulangan yang digunakan pada tiap-tiap perlakuan sampel sebanyak 3 kali, sehingga sampel yang akan dibuat adalah 15 unit sampel yang dikerjakan.Kombinasi perlakuan dan ulangan dalam satu percobaan dapat dilihat pada Tabel 3. Tabel 4. Kombinasi Perlakuan dan Ulangan Dalam Satu Percobaan Pengulangan Sampel 1

6% A-1

2 3

A-2 A-3

Konsentrasi Tepung Ampas Tahu 7% 8% 9% B-1 C-1 D-1 B-2 B-3

C-2 C-3

D-2 D-3

10% E-1 E-2 E-3

Keterangan : A-1 sampai A-3: Konsentrasi tepung ampas tahu sebanyak 6% pengulangan ke-1 sampai 3. B-1 sampai B-3:Konsentrasi tepung ampas tahu sebanyak 7% pengulangan ke-1 sampai 3. C-1 sampai C-3:Konsentrasi tepung ampas tahu sebanyak 8% pengulangan ke-1 sampai 3. D-1 sampai D-3: Konsentrasi tepung ampas tahu sebanyak 9% pengulangan ke-1 sampai 3. E-1sampai E-3 : Konsentrasi tepung ampas tahu sebanyak 10% pengulangan ke-1 sampai 3.

3.3. Tempat dan Waktu Penelitian Tempat Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Analis Kesehatan

Fakultas

Ilmu

Keperawatan

dan

Kesehatan

Universitas

Muhammadiyah Semarang Jalan Kedungmundu Raya No.18 Semarang dan Laboratorium Mikrobiologi Poltekkes Kemenkes Semarang Jl.Woltermonginsidi No.115 Pedurungan Semarang dimulai dari bulan Agustus 2016.


3.4. Variabel Penelitian 3.4.1. Variabel Bebas Variabel bebas pada penelitian ini adalah variasi konsentrasi tepung ampas tahu. 3.4.2. Variabel Terikat Variable terikat pada penelitian ini adalah jumlah koloni bakteri Serratia marcescens. 3.5. Definisi Operasional Tabel 5. Definisi Operasional No.

Variabel Penelitian

Definisi Operasional

Skala

1.

Tepung Tahu

Ampas

Bahan dasar pembuatan media tepung ampas tahu. Tepung ampas tahu tersebut diayak dengan ayakan 100 mesh dengan kadar air 4,8034 % dan dibuat media dalam berbagai konsentrasi yaitu 6%,7%, 8%, 9% dan 10% dengan menambahkan agar sesuai dengan hasil optimasi agar netral.

Rasio

2.

Jumlah Bakteri Serratia marcescens

Jumlah koloni bakteri Serratia marcesens yang tumbuh pada media tepung ampas tahu dengan menggunakan metode hitung cawan spread plate.

Rasio

3.6. Obyek Penelitian Obyek penelitian ini adalah biakan bakteri Serratia marcescens dan ampas tahu yang dibeli di pabrik tahu di daerah Tandang Semarang. 3.7. Alat dan Bahan Alat yang digunakan yaitu oven, timbangan analitik, yellow tip dan blue tip steril, Cawan Petri, Autoklaf, Bunsen, Vortex, Triangle, Inkubator.


Bahan yang digunakan dalam penelitian yaitu NaCl fisiologis 0,85% steril, Aquadest, Biakan bakteri Serratia marcescens, Tepung ampas tahu, Agar putih, Nutrient Agar, media NA dan MC. 3.8. Prosedur Penelitian 3.8.1. Tahap Persiapan a. Pembuatan tepung ampas tahu Ampas tahu dibeli dari pabrik tahu, diperas menggunakan kain peras. Kemudian dikeringkan menggunakan oven suhu 1000C sampai kering, kemudian dihaluskan menggunakan blender tepung.Tepung ampas tahu diayak dengan ayakan tepung 100 mesh supaya butiran tepung lebih halus. b.Optimasi variasi agar netral untuk menentukan tekstur yang paling baik Ditimbang agar netral masing-masing sebanyak 1,5g, 1,75g dan 2g. Ditambahkan tepung ampas tahu sebanyak 6g, 7g, 8g, 9g dan 10g dilarutkan dengan 100 ml aquades dalam erlenmeyer. Kemudian dipanaskan dan diaduk sampai larut dan dituang kedalam cawan petri dan didiamkan sampai mengeras. Diamati tekstur yang paling baik digunakan untuk media tepung ampas tahu yaitu tidak terlalu padat dan tidak terlalu lunak ( Jawetz, Melnick, Adelberg, 2005)


c. Pembuatan suspensi dan Orientasi Pengenceran Serratia marcescens Koloni bakteri Serratia marcescens yang akan digunakan dikultur pada media penyubur BHI (Brain Heart Infusion)lalu diinkubasi 370C selama 24 jam kemudian dikultur pada media MC (Mac Conkey) dan diinkubasi 370C selama 24 jam lalu diuji biokimia, setelah diidentifikasi positif Serratia marcescens, lalu gores pada media HIA ( Heart Infusion Agar)dan diinkubasi 370C selama 24 jam sebagai stok strain. Dilakukan uji kekeruhan standar McFarland yaitu 0,5 McFarland diperkirakan jumlah bakteri sebanyak 1,5x108 sel/ml. Dilakukan pengenceran suspensi sebanyak 6 kali yaitu 10-1, 10-2, 10-3,10-4 , 10-5 10-6 dan 10-7 dengan NaCl fisiologis steril.

Gambar.6 Prosedur plate count atau hitung cawan dengan menggunakan seri pengenceran (Madigan et al,2013)


d. Pembuatan media tepung ampas tahu Ditimbang tepung ampas tahu sebanyak

6g, 7g, 8g, 9g dan10g

ditambahkan agar netral sesuai hasil optimasi dan dilarutkan dengan 100 ml aquades dalam erlenmeyer. Dipanaskan dan dihomogenkan. Diperiksa pH pada media dengan kertas indikator pH, syarat media pH harus netral. Larutan media tepung ampas tahu ditutup dengan menggunakan kapas. Disterilkan dengan autoklaf suhu 1210C tekanan 2 atm selama 15 menit. Media tepung ampas tahu dituang kedalam cawan petri, masing – masing konsentrasi dibuat sebanyak tiga media tepung ampas tahu dan dilebihkan untuk stok media. e. Pembuatan Media NA Ditimbang 2 gram NA dengan menggunakan neraca analitik dan dilarutakan dalam 100 ml aquades. dipanaskan sambil diaduk hingga larut sempurna. Dimasukkan kedalam erlemeyer kemudian ditutup dengan kapas. Sterilisasi dengan autoklaf selama 15 menit pada suhu 1210C. Setelah suhu turun ± 600C, tuang secara aseptis pada cawan petri steril sebanyak ± 20 mL.

3.8.2. Tahap penelitian Suspensi bakteri Serratia marcescens yang sudah diencerkan sampai 10-7 diinokulasi sebanyak 0,1 ml pada masing – masing media tepung ampas tahu dengan berbagai variasi yang siap digunakan. Diinkubasi pada inkubator suhu ruang selama 48 jam kemudian dilakukan perhitungan jumlah koloni. Dilakukan pada media Nutrient Agar sebagai media kontrol.


3.9. Alur Penelitian

Persiapan Alat dan Bahan

Tahap Persiapan

Tahap Penelitian

Pembuatan tepung ampas tahu

Hitung jumlah koloni pada media Tepung ampas tahu

Optimasi Agar Netral

Uji kenormalan dan homogenitas Data

Pembuatan media tepung ampas tahu dengan variasi konsentrasi 6% b/v, 7% b/v, 8% b/v, 9% b/v dan 10% b/v

Uji Statistik

Analisa Data Pembuatan suspensi dan Pengenceran bakteri Serratia Marcescens

Kesimpulan

Gambar. 7 Alur Penelitian


3.10.

Teknik Pengumpulan dan Analisis Data a. Pengumpulan Data Data pada penelitian ini adalah menggunakan data primer yaitu semua data yang diperoleh secara langsung dari penelitian yang dilakukan oleh peneliti. Pengumpulan data primer dilakukan dengan cara perlakuanterhadap

sampel

dan

kemudian

dilakukan

pemeriksaan

bakteriologis terhadap pertumbuhan bakteri Serratia marcescens berupa jumlah koloni dari masing-masing sampel. b. Analisis Data Data yang telah terkumpul diinput dalam program statistik. Uji kenormalan data dilakukan dengan uji Shapiro Wilk karena sampel yang digunakan kurang dari 50. Data yang diperoleh berdistribusi normal dengan p value>0,05, dan dilakukan uji homogenitas dengan hasil data homogen nilai pvalue>0,05. Analisis data dilanjutkan menggunakan uji Analysis of Variance (ANOVA) dengan p value >0,05 maka Ho diterima dan Ha ditolak. Kesimpulan yang diperoleh tidak ada pengaruh variasi konsentrasi tepung ampas tahu terhadap jumlah koloni bakteri Serratia marces


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Penelitian Gambaran umum sampel berdasarkan hitung jumlah koloni bakteri Serratia marcescens pada media tepung ampas tahu dengan berbagai konsentrasi tepung ampas tahu yaitu 6% b/v, 7% b/v, 8% b/v, 9% b/v dan 10% b/v. Metode yang digunakan adalah spread plate dengan waktu inkubasi 2x24 jam pada suhu ruang didapatkan hasil sebagai berikut : Tabel 6. Jumlah koloni bakteri Serratia marcescens pada media tepung ampas tahu Pengulangan Sampel 1 2 3 Rata-rata Jumlah Koloni

Jumlah Koloni CFU/ml pada Konsentrasi Tepung Ampas Tahu (108) 6% 7% 8% 9% 10% 26 13 26 25 35 24 35 24 26 24 15 25 27 29 27 22

24

26

27

29

Kontrol (108) NA 25 11 25

Uji Sterilitas Media

20

0

0 0 0

4.2 Pembahasan Tabel 5 menunjukkan bahwa jumlah koloni pada semua konsentrasi meningkat jika dibandingkan dengan media kontrol. Pengulangan sampel sebanyak tiga kali dapat dilihat perbedaan jumlah koloni yang sangat jauh, dapat dilihat pada konsentrasi 6% pengulangan sampel ketiga diperoleh 15 koloni dan konsentrasi 7% pada pengulangan kesatu diperoleh 13 koloni, hal ini dapat disebabkan pada saat homogenisasi suspensi kurang homogen sehingga diperoleh jumlah koloni lebih sedikit (Lampiran 5). Pada media

33


kontrol pengulangan kedua juga dapat dilihat jumlah koloni sebanyak 11, hal ini disebabkan karena koloni menumpuk sehingga dihitung 1 koloni meskipun terdapat 5 koloni yang menumpuk (dapat dilihat pada lampiran 5). Uji sterilitas media juga dilakukan dengan inkubasi pada suhu ruang selama 2x24 jam, dari semua variasi konsentrasi tidak dijumpai adanya pertumbuhan bakteri, hal ini menunjukkan media tepung ampas tahu steril. Ukuran dan warna koloni dapat dilihat pada tabel berikut : Tabel 7. Ukuran dan warna koloni bakteri Serratia marcescens Koloni bakteri

Konsentrasi tepung ampas tahu pada inkubasi suhu ruang 2x24 jam 6%

7%

8%

9%

10 %

Media Kontrol

Ukuran

2mm

2mm

2mm

2mm

2mm

3mm

Warna

merah

merah

merah

merah

merah

merah

Gambar

Tabel 6 menunjukkan koloni bakteri Serratia marcescens yang tumbuh pada media tepung ampas tahu pada semua konsentrasi berukuran lebih kecil dari koloni yang dihasilkan oleh media kontrol. Selain itu laju pertumbuhan bakteri lebih lambat jika dibandingkan dengan media kontrol. Inkubasi dilakukan pada suhu ruang dikarenakan bakteri Serratia marcescens bersifat fakultatif anaerob atau tidak terlalu membutuhkan oksigen. Pada inkubasi 1x24 jam, ukuran koloni sangat kecil dan berwarna merah muda atau pigmen merah belum terbentuk sehingga diperlukan penambahan waktu inkubasi yaitu 2x24 jam sehingga didapatkan hasil koloni ukuran 2 mm selain itu


pigmen merah atau prodigiosin yang dihasilkan pada media tepung ampas tahu lebih bagus dibanding pigmen merah yang dhasilkan pada media Nutrient Agar. Jumlah koloni dari semua konsentrasi menunjukkan bahwa pada konsentrasi 6% dapat digunakan sebagai pengganti Nutrient Agar karena dari jumlah koloninya paling mendekati dengan media kontrol. Menurut Yustina (2012), tepung ampas tahu mengandung protein sebesar 10,80%, kadar air 5,74%, lemak 14,49%, abu 9,02% dan karbohidrat 59,95%, sedangkan kandungan protein pada media Nutrient Agar sebanyak 98%. Kandungan nutrisi tersebut dapat menyebabkan bakteri Serratia marcescens tumbuh pada media tepung ampas tahu meskipun ukurannya lebih kecil dibanding dengan media Nutrient Agar, selain itu dari jenis protein tepung ampas tahu adalah protein nabati dan pada Nutrient Agar adalah protein hewani. Faktor-faktor yang dapat mempengaruhi pertumbuhan diantaranya adalah faktor nutrisi, suhu, pH dan tekanan osmotik (Pelczar & Chan, 2010). Nutrisi dapat digunakan sebagai sumber energi, karbon, sulfur, nitrogen, sulfur, fosfor, mineral dan vitamin. Ukuran koloni juga dapat disebabkan nutrisi pada tepung ampas lebih sedikit dibanding dengan Nutrient Agar untuk pertumbuhan bakteri Serratia marcescens. Suhu optimum untuk pertumbuhan bakteri Serratia marcescens berkisar antara 50C – 400C dengan dengan derajat keasaman berkisar antara 5 – 9 (Brooks, Butel, & Morse, 2008). Pada pembuatan media tepung ampas tahu didapatkan pH media tepung ampas tahu adalah 7 maka dapat diketahui


faktor yang paling berpengaruh terhadap pertumbuhan bakteri Serratia marcescens yaitu faktor nutrisi. Selain faktor nutrisi, bakteri tersebut sedang berada pada fase adaptasi yaitu ketika bakteri dipindahkan ke lingkungan baru maka ia akan mengalami proses adaptasi meliputi sintesis enzim baru yang berbeda dengan media tumbuh sebelumnya dan pemulihan terhadap metabolik yang bersifat toksik seperti asam, alkohol dan basa. Respon adaptasi dapat dikarenakan kekurangan nutrien pada media tepung ampas tahu ini ditunjukkan dengan ukuran bakteri yang kecil (Jawetz, Melnick, Adelberg, 2005). Penelitian diolah dan dianalisis dengan uji ANOVA, syarat uji anova adalah data berdistribusi normal dan homogen ditunjukkan dengan uji kenormalan data menunjukkan bahwa nilai p value > 0,05 (lampiran 4) yang berarti data yang dihasilkan berdistribusi normal dan uji homogenitas menunjukkan bahwa nilai p value > 0,05 (lampiran 4) yang berarti data yang dihasilkan bersifat homogen. Dilanjutkan dengan uji ANOVA diperoleh nilai signifikasi 0,150 (p > 0,05), hal ini menunjukkan bahwa tidak ada pengaruh signifikan tepung ampas tahu terhadap jumlah koloni bakteri Serratia marcescens.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan 1. Rerata jumlah koloni pada kelompok kontrol menggunakan media Nutrient Agar sebanyak 20 x 108 CFU/ml, pada kelompok perlakuan media tepung ampas tahu dengan konsentrasi 6 % sebanyak 22 x 108 CFU/ml, konsentrasi 7 % sebanyak 24 x 108 CFU/ml, konsentrasi 8 % sebanyak 26 x 108 CFU/ml, konsentrasi 9 % sebanyak 27 x 108 CFU/ml dan pada konsentrasi 10 % sebanyak 29 x 108 CFU/ml. 2. Konsentrasi tepung ampas tahu yang paling baik untuk pertumbuhan bakteri Serratia marcescens adalah pada konsentrasi 6 % b/v, dimana pada konsentrasi tersebut jumlah koloninya hampir sama dengan media kontrol yaitu Nutrient Agar. 3. Tidak ada pengaruh variasi konsentrasi tepung ampas tahu terhadap jumlah koloni bakteri Serratia marcescens.

B. Saran 1. Tepung ampas tahu dapat dimanfaatkan sebagai media alternatif pengganti media Nutrient Agar yaitu dengan penggunaan konsentrasi 6%. 2. Bagi peneliti selanjutnya, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan melakukan penelitian dengan metode dan jenis bakteri yang berbeda. Selain itu dapat lebih disempurnakan komposi tepung ampas tahu seperti penambahan enzim. 37 http://lib.unimus.ac.id

3. Peneliti selanjutnya dapat memanfaatkan filtrat atau perasan awal ampas tahu sebagai media cair yang dapat digunakan sebagai media uji misalnya uji indol atau MR (Methyl Red) dan VP(Voges Proskauer).


DAFTAR PUSTAKA

Anisah, Rahayu T. (2015). Media Alternatif untuk Pertumbuhan Bakteri Menggunakan Sumber Karbohidrat yang Berbeda.Seminar Nasional XII Pendidikan Biologi Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Muhammadiyah Surakarta.Indonesia.855-860 Ariesta, R. (2013). Jumlah Bakteri Pada Media Nutrient Agar Dengan Pemadat Swallow Globe Putih Dan Bacto –Agar Dengan Variasi Konsentrasi Pada Metode Tuang.Program Studi DIII Analis Kesehatan Universitas Muhammadiyah Semarang. Bimbi, M.(2012). Tepung Sagu Sebagai Pemadat Media Kultur Untuk Bakteri.Program Studi DIII Analis Kesehatan Universitas Muhammadiyah Semarang. Brooks, G.F., Butel, J.S. & Morse, S.A. (2008).Jawetz, Melnick & Adleberg’s. Mikrobiologi Kedokteran. (23th ed.). Jakarta: EGC Elizabeth, W & Susana ,IWR (2013). Manfaat Lemak Terproteksi Untuk Meningkatkan Produksi dan Reproduksi Ternak Ruminansia. Wartazoa23 (4):176-184. Fadlun A., Firdauz M & Ariyanti,V. “Pelor Pasta”(Pelet Organik Ampas Tahu) Peluang Usaha Hasil Pemanfaatan Limbah Ampas Tahu di Desa Tempel Sari, Wonosobo. PKM-Kewirausahaan, Universitas Negeri Semarang. http://www.uap.unnes.ac.id Diakses tanggal 17 Desember 2015 Fardiaz, S. (1989). Mikrobiologi Pangan.Bogor: Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi, Fakultas Tekonologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Hanafiah, K.A. (2003). Rancangan Percobaan Teori dan Aplikasi (3th ed). Jakarta: PT Raja Grafindo Persada Jakarta. Harti, A. S. (2014). Mikrobiologi Kesehatan. Yogyakarta: CV. Andi Offset. Jawetz, Melnick, & Adelberg’s. 2005. Mikrobiologi Kedokteran. Salemba Medika. Jakarta Komarawidjaja, W.(2009). Karakteristik dan Pertumbuhan Konsorsium Mikroba Lokal dalam Media Mengandung Minyak Bumi. Pusat Teknologi Lingkungan Badan Pengkajian dan Penerapan Teknologi.Jakarta.(ISSN 1441-318X:114-119). Madigan, MT., Martinko, JM., Stahl, D.A & Clark, D.P. 2013. Brock Biology of Microorganisms. Trirteenth Edition. Benjamin Cummings.New York. 42 Penelitian Kesehatan, PT Rangka Notoatmodjo, S.(2010). Metodologi Cipta.Jakarta. Pelczar, M.J. &Chan, E.C.S. (2010).Dasar-dasar Mikrobilogi I. (Hadioetomo RS, Imas T, Tjitrosomo SS, Angka SL). Jakarta: UI Press Pelczar, M.J. &Chan, E.C.S. (2008). Dasar-dasar Mikrobilogi lI. (Hadioetomo RS, Imas T, Tjitrosomo SS, Angka SL). Jakarta: UI Press


Pratami H.A, Apriliana E & Prambudi R. (2012).Identifikasi Mikroorganisme Pada Tangan Tenaga Medis dan Paramedis di Unit Perinatologi Rumah Sakit Abdoel Moeloek .Bandar Lampung.Fakultas Kedokteran Universitas Lampung. Rizky, W.D. (2013). Pengaruh Kandunngan Protein Tepung Bulu Ayam Sebagai Media Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli. Semarang: Jurusan Analis Kesehatan, Poltekkes Kemenkes Semarang. Sulistiani. (2004). Pemanfaatan Ampas Tahu dalam Pembuatan Tepung Tinggi Serat dan Protein Sebagai Alternatif Bahan Baku Pangan Fungsional.Departemen Gizi Masyarakat dan Sumber Daya Keluarga, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor.http://www.repository.ipb.ac.id. Diakses tanggal 2 januari 2016 Yustina, I. & Abadi, F.R. (2012). Potensi Tepung dari Ampas Industri Pengolahan Kedelai Sebagai Bahan Pangan.Seminar Nasional Kedaulatan Pangan dan Energi, Fakultas Pertanian, Universitas Trunojoyo Madura.


Lampiran 1. Data Mentah Hasil Penelitian Tabel 8. Data Mentah Hasil Penelitian Pengulangan Sampel 1 2 3 Rata-rata jumlah koloni bakteri

Konsentrasi Tepung Ampas Tahu 6% 7% 8% 9% 10% 26 24 15

13 35 25

26 24 27

25 26 29

35 24 27

25 11 25

Uji Sterilitas Media 0 0 0

22

24

26

27

29

20

0


Kontrol Media NA

Lampiran 2. Uji Formalin Uji formalin bertujuan untuk memastikan bahwa ampas tahu bebas dari formalin yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Uji formalin menggunakan kit tes formalin, ampas tahu dilarutkan dalam 2 ml aquadest. Diambil 1 ml presipitat ampas tahu, ditambahkan 3-5 tetes pereaksi I formalin dengan hati-hati tetes demi tetes. Ditambahkan pereaksi II formalin kurang lebih 1 mg kedalam tabung dan dikocok kemudian didiamkan selama 5 menit. Formalin positif jika terbentuk warna ungu kebiruan. Adapun hasil Uji formalin sebagai berikut: Tabel 9. Hasil Uji Formalin Gambar

Keterangan

Hasil

Ampas Tahu

Negatif

Kontrol Positif

Positif


Lampiran 3. Optimasi variasi agar netral Tabel 10. Penentuan Jumlah Agar-Agar Sebagai Pemadat Media Konsentrasi Tepung Ampas Tahu 6% 7% 8% 9% 10%

1,5 g

1,75 g

2 gr

lunak lunak lunak padat padat

padat padat padat keras keras

keras keras keras keras keras

Keterangan: Berdasarkan hasil optimasi agar netral dari tiga variasi jumlah agar dihasilkan satu tekstur yang mendekati atau sesuai denhgan tekstur media universal yaitu dengan jumlah agar pemadat 1,5 g/100 ml pada konsentrasi tepung ampas tahu 9% dan 10%, sedangkan jumlah agar pemadat 1,75 g/100 ml pada konsentrasi tepung ampas tahu 6%, 7% dan 8%. Data ini diperoleh dari hasil kuisioner : Tabel 11. Hasil Kuisioner Kecocokan Penambahan Agar NO

NAMA

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Devinda Bimo Rizky Ika Rahma Diana H Desi Astuti Dian Yulia Diego Tri A Okta Ni Putu Luluk Nur. A

Kecocokan penambahan jumlah agar pada konsentrasi tepung ampas tahu 6% 7% 8% 9% 10 % 1,75 g 1,75 1,75 1,5 1,5 1,75 g 1,75 1,75 1,5 1,5 1,75 g 1,75 1,75 1,5 1,5 2g 1,75 1,75 1,5 1,5 1,75 g 1,75 1,75 1,5 1,5 1,75 g 1,75 1,75 1,5 1,5 1,75 g 1,75 1,75 1,5 1,5 1,75 g 1,75 1,75 1,5 1,5 1,75 g 1,75 1,75 1,5 1,5 1,75 g 1,75 1,75 1,5 1,5


Lampiran 4. Hasil Uji Statistik Uji Kenormalan Data Tests of Normality a

Konsentrasi tepung ampas tahu jumlah_koloni_bakteri

Kolmogorov-Smirnov Statistic

df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

df

Sig.

6%

.321

3

.

.881

3

.328

7%

.191

3

.

.997

3

.900

8%

.253

3

.

.964

3

.637

9%

.292

3

.

.923

3

.463

10%

.282

3

.

.936

3

.510

Tabel diatas menunjukkan bahwa nilai p value > 0,05 yang berarti data yang dihasilkan berdistribusi normal. Uji homogenitas Test of Homogeneity of Variances jumlah_koloni_bakteri Levene Statistic 2.143

df1

df2 4

Sig. 10

.150

Dari tabel diatas menunjukkan bahwa nilai p value > 0,05 yang berarti data yang dihasilkan bersifat homogen. Syarat uji anova adalah data berdistribusi normal dan homogen


ANOVA Jumlah Sum of Squares

df

Mean Square

Between Groups

178.902

5

35.780

Within Groups

487.333

11

44.303

Total

666.235

16

F

Sig. .808

.568

Tabel diatas menunjukkan bahwa nilai p value > 0,05 yang berarti perbedaan dari berbagai variasi konsentrasi tepung ampas tahu dibandingkan dengan media Nutrient Agar tersebut tidak signifikan. Artinya bahwa tidak ada pengaruh tepung ampas tahu terhadap pertumbuhan bakteri Serratia marcescens.


Lampiran 5. Dokumentasi Penelitian

a Pengulangan 1

b Pengulangan 2

c Pengulangan 3

Gambar 1. hasil jumlah koloni pada tepung ampas tahu konsentrasi 6%

a Pengulangan 1

b Pengulangan 2

c Pengulangan 3


a Pengulangan 1

b Pengulangan 2

c Pengulangan 3



Lanjutan Lampiran 5.

a Pengulangan 1

b Pengulangan 2

c Pengulangan 3


a Pengulangan 1

b Pengulangan 2

c Pengulangan 3


a

b

c

Gambar 6. Hasil Jumlah Koloni pada Media Nutrient Agar 3 pengulangan



Pengenceran 10-1

Pengenceran 10-2

Pengenceran 10-3

Pengenceran 10-4

Pengenceran 10-5

Pengenceran 10-6

Pengenceran 10-6 inkubasi 48 jam

Pengenceran 10-7 inkubasi 48 jam

Gambar 7. Hasil Orientasi Pengenceran suspensi10-1 sampai dengan 10-7


Gambar 8. Perataan Suspensi

Gambar 9. inkubasi bakteri Serratia marcescens pada suhu ruang

Gambar 10. Hasil Uji Sterilitas Media



Gambar 11. Proses pengeringan ampas tahu dengan oven

a Gambar ampas tahu basah

b Gambar ampas tahu kering

c Gambar tepung ampas tahu

Gambar 11. Ampas tahu basah – kering - tepung ampas tahu

Gambar 12.Kit Tes Formalin

Gambar 13. Pengecatan Gram pada koloni berwarna putih



TEPUNG AMPAS TAHU SEBAGAI MEDIA PERTUMBUHAN BAKTERI Serratia marcescens

Recommend Documents