III. HASIL DAN PEMBAHASAN 3.1 Hasil Parameter pada penelitian pembesaran ikan lele ini meliputi derajat kelangsungan hidup, laju pertumbuhan mutlak, laju pertumbuhan harian, perhitungan jumlah bakteri total dan pengamatan dominasi bakteri secara kualitatif, karakterisasi isolat bakteri terpilih, serta kualitas air. 3.1.1 Derajat Kelangsungan Hidup Pengamatan terhadap kelangsungan hidup pada ikan lele selama penelitian dilakukan sebanyak dua kali yaitu sebelum uji tantang dan sesudah uji tantang. Hasil pengamatan dapat dilihat pada Gambar 2 dan 3.
Keterangan : Huruf yang sama dalam grafik batang menyatakan tidak berbeda nyata (P>0,1)
Gambar 2. Kelangsungan hidup ikan lele sebelum uji tantang
Keterangan : Huruf yang berbeda dalam grafik batang menyatakan berbeda nyata (P<0,1)
Gambar 3. Kelangsungan hidup ikan lele setelah uji tantang 10
Berdasarkan Gambar 2 dan 3 dapat dilihat bahwa derajat kelangsungan hidup sebelum uji tantang memberikan hasil yang tidak berbeda nyata pada semua perlakuan. Derajat kelangsungan hidup setelah uji tantang pada perlakuan pengobatan memiliki nilai sebesar 95,38±4,24% dan memberikan hasil yang berbeda nyata (P<0,1) dengan perlakuan kontrol (+) dengan nilai sebesar 86,92±2,71% dan tidak berbeda nyata dengan perlakuan kontrol (–) dengan nilai sebesar 96,15±2,03%. Perlakuan pencegahan dengan nilai tingkat kelangsungan hidup sebesar 94,62±2,91% tidak berbeda nyata(P>0,1) dengan semua perlakuan. 3.1.2 Laju Pertumbuhan Mutlak Pertumbuhan mutlak ikan uji diamati selama 35 hari pemeliharaan. Parameter laju pertumbuhan mutlak ikan digunakan untuk menganalisis pengaruh dari pemberian pakan dengan campuran bawang putih dan meniran terhadap pertumbuhan ikan uji. Pada Gambar 4 tertera grafik laju pertumbuhan mutlak ikan lele selama pemeliharaan.
Gambar 4. Laju pertumbuhan mutlak ikan lele selama pemeliharaan Gambar 4 memperlihatkan bahwa ikan lele pada semua perlakuan mengalami pertumbuhan. Namun berdasarkan hasil analis statistik, nilai laju pertumbuhan mutlak tidak berbeda nyata (P>0,1) dari semua perlakuan.
11
3.1.3 Laju Pertumbuhan Harian Pertumbuhan harian ikan uji diamati selama 35 hari pemeliharaan. Parameter laju pertumbuhan digunakan untuk melihat pengaruh dari pemberian pakan dengan campuran bawang putih dan meniran terhadap pertumbuhan ikan uji. Berikut ini adalah grafik laju pertumbuhan harian (Gambar 5).
Keterangan : Huruf yang sama dalam grafik batang menyatakan tidak berbeda nyata (P>0,1)
Gambar 5. Laju pertumbuhan harian ikan lele selama pemeliharaan Berdasarkan Gambar 5 terlihat bahwa dari hasil analisis statistik, nilai laju pertumbuhan harian tidak berbeda nyata (P>0,1) antara semua perlakuan baik yang diberi pakan dengan campuran bawang putih dan meniran maupun perlakuan yang hanya diberi pakan komersial. 3.1.4 Perhitungan Jumlah Bakteri Total dan Pengamatan Koloni Bakteri yang Dominan Secara Kualitatif Jumlah bakteri yang tumbuh pada media ini merupakan total bakteri yang terdapat pada sampel air tersebut. Hasil plating bakteri dari air selokan tertera pada Gambar 6 dan air tandon pada Gambar 7.
12
Gambar 6. Koloni bakteri yang berasal dari air selokan pada media TSA yang berumur 1x24 jam pada suhu inkubasi 28-30oC
Gambar 7. Koloni bakteri yang berasal dari air tandon pada media TSA yang berumur 1x24 jam pada suhu inkubasi 28-30oC
Morfologi koloni pada sumber air selokan dan air pemeliharaan pada perlakuan kontrol (+), pencegahan dan pengobatan didapatkan bakteri yang beragam. Pada air tandon dan air pemeliharaan perlakuan kontrol (-) ditemukan bakteri dengan morfologi koloni yang homogen. Perhitungan jumlah total bakteri pada tiap sumber air dan air pemeliharaan dilakukan pada akhir pemeliharaan. Jumlah total bakteri yang terdapat pada sumber air dan air pemeliharaan terdapat pada Tabel 3. Tabel 3. Hasil perhitungan bakteri pada sumber air dan air pemeliharaan pada setiap perlakuan di akhir pemeliharaan Kepadatan Bakteri Sampel Morfologi Koloni (CFU/ml) Air Selokan 4,8×104 Beragam 4 Air Tandon 3,32×10 Homogen Kontrol (+) 1,24×106 Beragam 5 Kontrol (-) 4,82×10 Homogen Pencegahan 7,92×105 Beragam 5 Pengobatan 6,5×10 Beragam Berdasarkan Tabel 3 dapat dilihat bahwa jumlah kepadatan bakteri pada sampel air selokan sebesar 4,48×104 CFU/ml lebih banyak dibandingkan dengan sampel air tandon sebesar 3,32×104 CFU/ml. Pada sampel air di akhir pemeliharaan pada bak perlakuan didapatkan hasil dari jumlah kepadatan bakteri yang berbeda. Jumlah kepadatan bakteri terbanyak terdapat pada bak perlakuan kontrol (+) sebesar 1,24×106 CFU/ml, selanjutnya pada bak pencegahan sebesar
13
7,92×105 CFU/ml, bak pengobatan sebesar 6,5×105 CFU/ml dan bak perlakuan kontrol (–) sebesar 4,82×105 CFU/ml. 3.1.5 Karakterisasi Isolat Bakteri Terpilih Uji karakterisasi isolat bakteri terpilih dilakukan terhadap bakteri yang terdapat pada air tandon. Hasil karakterisasi isolat bakteri terpilih dapat dilihat pada Tabel 4. Tabel 4. Karakterisasi isolat bakteri terpilih Uji Pewarnaan Gram Oksidasi/Fermentasi Katalase Oksidase Motilitas
Hasil Gram negatif + +
Berdasarkan hasil uji dan indentifikasi dengan menggunakan tabel Cowan, maka didapatkan hasil bahwa isolat bakteri terpilih tersebut merupakan bakteri dalam genus Alcaligenes. 3.1.6 Kualitas Air Parameter kualitas air yang diukur dalam penelitian ini adalah oksigen terlarut, suhu, pH, amoniak dan jumlah bakteri. Parameter kualitas air diamati pada awal pemeliharaan, saat pertengahan pemeliharaan dan akhir uji tantang. Data kualitas air dapat dilihat pada Tabel 5. Tabel 5. Kualitas air selama pemeliharaan Parameter
K (+) Suhu (oC) 25-29 Ph 6,31-7,15 DO (mg/l) 3,5-5,5 Amoniak (NH3) 0,020 (mg/l) Keterangan : a) SNI 7550:2009 b ) Boyd (1982)
Perlakuan K (-) PC 25-29 25-29 6,96 -7,31 6,7-7,23 3,6-5,9 3,1-5,4 0,026 0,024
PG 25-29 6,71-7,41 4 -5,4 0,034
Standar (pustaka) 25-32 a 6,5-8,5 a >3 a 0,7-2,4 b
Tabel 5 menunjukkan nilai kualitas air selama pemeliharaan. Dari hasil analisis kualitas air, menunjukkan bahwa nilai kualitas air relatif tidak berbeda antar perlakuan dan masih dalam batas toleransi untuk pertumbuhan ikan lele. 14
3.2 Pembahasan Berbagai jenis bakteri banyak ditemukan di setiap perairan. Bakteri-bakteri yang sering dijumpai pada perairan tawar di antaranya adalah Pseudomonas, Flavobacterium dan Proteus (Irianto, 2005). Bakteri yang terdapat di alam tidak semuanya bersifat patogen. Bakteri yang bersifat patogen di antaranya seperti Aeromonas hydrophila, Vibrio harveyi, Streptococcus agalactiae dan Vibrio alginolyticus. Penyakit pada ikan yang disebabkan oleh bakteri patogen disebut sebagai penyakit bakterial. Penyakit bakterial dapat dikendalikan dengan penggunaan imunostimulan. Imunostimulan merupakan suatu bahan yang berasal dari mahluk hidup atau gabungan dari bahan-bahan sintetik yang dapat meningkatkan sistem pertahanan tubuh. Imunostimulan dapat memberikan efek pada sejumlah komponen yang ada pada sistem imun seperti dengan adanya peningkatan aktivitas fagositosis (Sakai, 1999 dalam Tacchi et al., 2011). Imunostimulan dapat diberikan melalui oral atau secara injeksi. Imunostimulan yang diberikan melalui pakan lebih efektif dibandingkan dengan metode injeksi dalam hal biaya ketika mempertimbangkan dari segi pemberian pakan (Tacchi et al., 2011). Beberapa bahan imunostimulan yang telah digunakan dalam pakan untuk kegiatan budidaya adalah seperti lipopolisakarida (LPS) (Guttvik et al., 2002, Nya dan Austin, 2010 dalam Tacchi et al., 2011), ekstrak dari tumbuhan seperti jahe, dan ekstrak teh hijau (Camellia sinensis) (Abdel et al., 2010 dalam Tacchi et al., 2011) dan penggunaan bawang putih (Sahu et al, 2007 dalam Suman dan Csaba, 2011). Penggunaan imunostimulan dapat dijadikan sebagai bahan alternatif untuk menggantikan penggunaan antibiotik dan bahan-bahan kimia lainnya yang sudah mulai dilarang penggunaanya karena dapat meninggalkan residu pada tubuh ikan dan membahayakan jika dikonsumsi oleh konsumen. Antibiotik juga dapat menyebabkan
meningkatnya
resistensi
bakteri terhadap
antibiotik
yang
digunakan. Potensi tanaman sebagai imunostimulan bagi ikan mulai banyak diterapkan dalam dunia perikanan. Salah satu bahan fitofarmaka yang cukup efektif dalam mengatasi beberapa penyakit adalah bawang putih dan meniran. Hal ini telah dibuktikan dalam penelitian yang telah dilakukan dalam skala laboratorium seperti penggunaan bawang putih dan meniran untuk mengatasi 15
penyakit akibat bakteri Aeromonas hydrophila pada ikan lele (Kurniawan, 2010), penyakit akibat bakteri Streptococcus agalactiae pada ikan nila (Fauziah, 2012) dan penyakit akibat bakteri Vibrio alginolyticus pada ikan kerapu macan (Miranti, 2012). Penelitian-penelitian tersebut dapat membuktikan bahwa ikan mampu memanfaatkan bahan-bahan aktif yang terdapat pada bawang putih dan meniran. Bahan aktif yang terdapat pada bawang putih adalah allicin. Menurut Durairaj et al. (2009), bawang putih bekerja sebagai antibakteri dan dapat menekan pertumbuhan bakteri serta dapat membunuh bakteri dari golongan Gram negatif dan Gram positif. Allicin pada bawang putih bersifat antibakteri dengan cara menghambat sintesis RNA dan lipid bakteri. RNA yang diproduksi oleh bakteri dalam jumlah sedikit ataupun tidak diproduksi berakibat pada sintesis protein karena tidak adanya messenger RNA, ribosomal RNA dan transfer RNA. Hal ini yang
mempengaruhi pertumbuhan
bakteri tersebut
karena
tidak
dapat
terbentuknya asam amino dan protein dalam tubuh bakteri. Selain menghambat RNA, allicin juga menghambat sintesis lipid yang berakibat pada sel lainnya terutama pada bagian phospholipid biolayer. Hal ini dapat menyebabkan pembentukan dinding sel yang kurang tepat pada tubuh bakteri baik pada bakteri Gram positif maupun Gram negatif. Meniran berfungsi sebagai imunostimulator, yaitu mengaktifkan sistem imun. Hal ini sesuai dengan pendapat Sabir dan Rocha (2008) yang menyatakan bahwa meniran bekerja dengan cara mengaktifkan sistem kekebalan tubuh ikan setelah meniran tersebut dimakan oleh ikan. Kandungan zat aktif yang terdapat pada meniran adalah lignan, tanin, terpen, flavonoid, alkaloid dan saponin (Dhar et al, 1968 dalam Bagalkotkar et al, 2006 ). Menurut Suprapto (2006), flavonoid merupakan antioksidan yang mampu merangsang kekebalan tubuh ikan. Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan oleh Jiao et al. (2001) dalam Maratani (2006) mengenai fungsi imunitas seluler yang dilakukan secara in vivo pada tikus menunjukkan bahwa senyawa flavonoid dapat memacu proloferasi limfosit dan meningkatkan jumlah sel T yang berperan dalam pembentukan sistem imun.
16
Berdasarkan hasil penelitian pada parameter kelangsungan hidup, perlakuan yang menunjukkan hasil yang paling baik adalah pada perlakuan pengobatan. Hal ini menunjukkan bahwa bahan aktif dalam bawang putih dan meniran bekerja pada saat setelah perlakuan uji tantang (pergantian sumber air) dilakukan. Menurut Muslim et al. (2009), bawang putih dapat meningkatkan daya tahan tubuh terhadap serangan bakteri. Bawang putih juga bekerja dalam menghambat pertumbuhan serta membunuh bakteri yang terdapat pada air selokan, diduga melalui pencucian (leaching) pakan yang mengandung bawang putih pada perlakuan pengobatan. Melalui pencucian pakan ke air diduga mampu membunuh bakteri pada air selokan yang diduga terdapat bakteri patogen di dalamnya. Sesuai dengan pendapat Durairaj et al. (2009) menyatakan bahwa allicin yang terdapat pada bawang putih mampu menghambat pertumbuhan dan membunuh bakteri yang ada. Pada saat perlakuan pencegahan bakteri yang terdapat pada air tandon pun ditekan pertumbuhannya karena adanya allicin dalam pakan perlakuan. Namun pada perlakuan pencegahan tidak didapatkan hasil yang berbeda nyata antara semua perlakuan. Hal ini diduga karena bakteri-bakteri yang terdapat pada air tandon merupakan bakteri non patogen sehingga bakteri tersebut tidak memberikan pengaruh terhadap kelangsungan hidup ikan. Berdasarkan hasil karakterisasi dan identifikasi dengan menggunakan tabel Cowan terhadap isolat bakteri terpilih (bakteri air tandon), didapatkan bahwa bakteri tersebut adalah bakteri dalam genus Alcaligenes. Bakteri Alcaligenes merupakan bakteri non patogen pada ikan (Austin dan Austin, 1999 dalam Irianto, 2005). Setelah uji tantang (pergantian sumber air) pada perlakuan pengobatan, allicin pada pakan pengobatan bekerja dengan baik dengan cara menghambat pertumbuhan dan membunuh bakteri yang terdapat pada air selokan. Dengan demikian, pada perlakuan kontrol (+) dan pencegahan didapatkan kelangsungan hidup yang lebih rendah dibanding perlakuan pengobatan. Hal ini, diduga karena terdapat bakteri patogen pada air selokan yang dapat mempengaruhi kelangsungan hidup selama pemeliharaan. Dari hasil TPC air selokan didapatkan bakteri dengan warna koloni yang berbeda-beda (beragam), sedangkan pada hasil TPC air tandon didapatkan warna dan bentuk yang lebih seragam (homogen). Allicin dan 17
flavonoid yang terdapat pada pakan berkerjasama dalam menghambat dan membunuh bakteri yang terdapat pada air selokan, sehingga ikan-ikan dalam perlakuan pengobatan memiliki tingkat kelangsungan hidup yang lebih baik dibandingkan dengan perlakuan kontrol (+) dan pencegahan. Uji tantang yang dilakukan dalam penelitian ini berbeda dengan uji tantang yang pada umumnya yang dilakukan dalam penelitian skala laboratorium. Dalam penelitian ini, uji tantang dilakukan dengan cara membuat ikan stres. Menurut Irianto (2005), stressor atau faktor stres pada ikan dapat diklasifikasikan menjadi empat macam diantaranya adalah stressor kimiawi, stressor fisik, stressor biologis dan stressor prosedural. Uji tantang dalam penelitian ini menggunakan stressor biologis dan stressor prosedural. Stressor biologis adalah stressor yang diakibatkan karena adanya masalah seperti densitas terlalu tinggi, multikultur (adanya spesises-spesies yang agresif dan persaingan tempat), dan mikroba (kehadiran mikroba patogenik maupun non patogenik). Stressor biologis yang terdapat dalam penelitian ini diakibatkan oleh mikroba. Dengan adanya pergantian air dari air tandon menjadi air selokan yang keduanya memiliki jumlah mikroba yang berbeda. Berdasarkan hasil TPC bakteri pada media TSA, diketahui bahwa pada air selokan memiliki jumlah yang lebih banyak dibandingkan dengan jumlah bakteri pada air tandon. Selain stressor biologis, dalam penelitian ini juga menggunakan stressor prosedural yaitu cara penanganan pada saat uji tantang. Ikan-ikan tersebut diangkat dari terpal dan selanjutnya dimasukkan ke dalam ember agar ikan menjadi lebih padat selama 30 menit. Hal ini dilakukan agar terjadi luka pada kulit ikan yang dapat menyebabkan ikan stres dan serangan dari bakteri yang ada pada air selokan. Dengan demikian, pengaruh dari pemberian pakan dengan campuran bawang putih dan meniran dapat dilihat pengaruhnya. Jumlah kepadatan bakteri pada suatu perairan merupakan salah satu penyebab timbulnya penyakit. Jumlah kepadatan bakteri akan menyebabkan penyakit atau menjadi patogen jika telah mencapai kepadatan tertentu. Pada bakteri Aeromonas hydrophila akan menjadi patogen pada suatu perairan jika telah mencapai kepadatan 104 CFU/ml (Irianto, 2003 dalam Bijanti et al., 2011). Kepadatan bakteri pada sumber air selokan yang digunakan untuk uji tantang sebesar 4,48×104 CFU/ml dan kepadatan bakteri pada sumber air tandon sebesar 18
3,32×104 CFU/ml. Dari hasil TPC yang telah dilakukan, dapat dilihat bahwa bakteri pada air tandon lebih sedikit jumlahnya dan koloni yang terbentuk lebih homogen dilihat dari warna koloni yang dihasilkan dibandingkan pada bakteri di air selokan dengan jumlah yang lebih banyak dan beragam dilihat dari warna koloni yang dihasilkan berbeda-beda. Dari hasil indentifikasi bakteri, pada sumber air tandon didapatkan bakteri dalam genus Alcaligenes yang bersifat non patogen bagi ikan (Austin dan Austin, 1999 dalam Irianto, 2005). Pertumbuhan baik pada laju pertumbuhan mutlak dan laju pertumbuhan harian pada penelitian menunjukkan hasil yang tidak berbeda nyata pada semua perlakuan. Namun demikian, dari grafik laju pertumbuhan mutlak dan laju pertumbuhan harian dapat dilihat bahwa ikan uji menunjukkan pertumbuhan selama perlakuan. Sartika (2011) dalam penelitiannya juga mendapatkan hasil bahwa pemberian pakan yang mengandung bawang putih dan meniran tidak memberikan hasil yang berbeda nyata (P>0,05) dengan kontrol pada parameter pertumbuhan. Kualitas air selama pemeliharaan menunjukkan nilai yang berada pada kisaran normal. Suhu berkisar 25-32oC, pH 6,5-8,5, DO> 3 mg/l (SNI 7550:2009) dan amoniak < 0,1 (Boyd, 1982).
19
