EFEKTIVITAS PEMBERIAN HORMON PERTUMBUHAN REKOMBINAN MELALUI PAKAN DENGAN BAHAN PENYALUT BERBEDA DAN PELLETING PADA IKAN NILA DULLAH IRWAN LATAR

EFEKTIVITAS PEMBERIAN HORMON PERTUMBUHAN REKOMBINAN MELALUI PAKAN DENGAN BAHAN PENYALUT BERBEDA DAN PELLETING PADA IKAN NILA

DULLAH IRWAN LATAR

SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2013

PERNYATAAN MENGENAI TESIS DAN SUMBER INFORMASI SERTA PELIMPAHAN HAK CIPTA Dengan ini saya menyatakan bahwa tesis berjudul “Efektivitas Pemberian Hormon Pertumbuhan Rekombinan Melalui Pakan dengan Bahan Penyalut Berbeda dan Pelleting pada Ikan Nila” adalah benar karya saya dengan arahan dari komisi pembimbing dan belum diajukan dalam bentuk apa pun kepada perguruan tinggi mana pun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir tesis ini. Dengan ini saya melimpahkan hak cipta dari karya tulis saya kepada Institut Pertanian Bogor. Bogor, Agustus 2013

Dullah Irwan Latar C151100261

RINGKASAN DULLAH IRWAN LATAR. Efektivitas Pemberian Hormon Pertumbuhan Rekombinan Melalui Pakan dengan Bahan Penyalut Berbeda dan Pelleting pada Ikan Nila. Dibimbing oleh ALIMUDDIN, dan M. AGUS SUPRAYUDI. Aplikasi pemberian hormon pertumbuhan rekombinan (recombinant growth hormone, rGH) untuk memacu pertumbuhan ikan dapat dilakukan melalui injeksi, perendaman, dan oral melalui pakan. Akan tetapi, metode penyuntikan dan perendaman relatif sulit diaplikasikan pada skala massal. Metode penyuntikan memerlukan waktu relatif lama dan tenaga banyak. Selanjutnya metode perendaman hanya efektif pada fase larva atau ikan berukuran kecil, pada dosis dan frekuensi perendaman tertentu. Selain itu, aplikasi metode perendaman skala massal dengan frekuensi lebih dari 1 kali perendaman, berpotensi tinggi menyebabkan ikan stres. Pemberian rGH melalui pakan adalah praktis dan hemat waktu. Akan tetapi, pada metode ini rGH perlu disalut (coating) untuk menghindari degradasi oleh enzim pencernaan, dan kerusakan akibat pH rendah di lambung. Hydroxypropyl methylcellulose phthalate (HP55) merupakan bahan yang sering digunakan untuk menyalut rGH, tetapi harganya relatif mahal sehingga tidak efisien jika diaplikasikan dalam jumlah yang besar. Selulosa lainnya seperti polymethyl carbamide (PMC) juga dapat digunakan sebagai bahan penyalut. Harga PMC relatif murah, dan telah dilaporkan memiliki kemampuan melindungi bahan yang disalut dalam waktu relatif lama; penyimpanan pada suhu 20oC bertahan sekitar 1 tahun, 25 sampai 30oC sekitar 6 bulan, dan 35 sampai 38oC sekitar 3 bulan. Kuning telur ayam juga telah banyak digunakan sebagai pengikat (binder) obat dan suplemen pada pakan ikan. Harganya relatif murah dan mudah diperoleh. Penelitian ini dilakukan untuk menguji efektivitas pemberian rGH ikan kerapu kertang (rElGH) pada ikan nila melalui pakan dengan menggunakan berbagai bahan penyalut yang berbeda dan pelleting terhadap produksi, konversi pakan, kadar glukosa darah, kadar glikogen, dan kandungan proksimat ikan. Produksi rElGH dilakukan menggunakan bakteri Escherichia coli BL21 yang mengandung vektor ekspresi protein pCold-ElGH. Bakteri dikultur pada media 2xYT pada suhu inkubasi 15°C selama 24 jam dan sintesis protein diinduksi dengan isopropyl-b-D-thiogalac-topyranoside dosis 0,5 mM. Dinding sel bakteri dilisis dengan menggunakan lisozim, kemudian protein total mengandung rElGH dalam bentuk badan badan inklusi diendapkan menggunakan sentrifugasi. Analisis SDS-PAGE digunakan untuk memastikan keberadaan rElGH dalam protein total bakteri. Penelitian ini terdiri atas 5 perlakuan termasuk kontrol dan masing-masing perlakuan diberi 3 ulangan. Ikan yang digunakan berukuran 5 sampai 6 cm, dipelihara pada hapa yang dipasang di dalam kolam beton (berukuran 3x2x1 m) dengan kepadatan tebar 125 ekor per hapa. Pemeliharaan dilakukan selama 2 bulan. Selama 2 minggu pertama ikan diberi pakan yang tidak mengandung rElGH (pakan adaptasi) dengan frekuensi 3 kali dalam sehari, selanjutnya pakan rGH diberikan sebanyak 3 kali dengan selang waktu 3 hari.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan rElGH dengan menggunakan bahan penyalut kuning telur ayam meningkatkan biomassa (P<0,05) dibandingkan dengan kontrol (1.262,2±96,4 g). Biomassa ikan antar perlakuan penyalutan adalah sama (P>0,05). Peningkatan biomassa total pada perlakuan penyalutan menggunakan kuning telur ayam sebesar 46,85%, dengan HP55 32,50%, dengan PMC 27,99% dan pada metode pelleting sebesar 26,64% dibandingkan dengan kontrol. Selain itu, laju pertumbuhan spesifik (LPS) ikan perlakuan rGH yang disalut dengan HP55, kuning telur dan PMC adalah lebih tinggi (P<0,05) daripada kontrol. LPS ikan perlakuan penyalutan rGH dengan kuning telur ayam adalah sebesar 34,3% lebih tinggi daripada kontrol. Selain itu, tingkat konversi pakan ikan perlakuan penyalutan dan kontrol adalah sama. Sementara itu, kelangsungan hidup (KH) ikan perlakuan rElGH adalah lebih tinggi daripada kontrol (P<0,05). Rerata KH ikan perlakuan rElGH sebesar 96,8097,33%, sedangkan kontrol adalah 93,07%. Retensi protein pada ikan perlakuan penyalutan rElGH tidak berbeda dengan kontrol (P>0,05), sedangkan retensi lemak pada perlakuan penyalutan menggunakan PMC berbeda nyata (P<0,05) dengan perlakuan lainnya dan kontrol. Kadar glukosa darah terendah terdapat pada ikan perlakuan peleting, sementara perlakuan lainnya dan kontrol adalah sama (P>0,05). Kadar glikogen hati pada perlakuan kuning telur lebih tinggi daripada perlakuan lainnya dan kontrol, sementara kadar glikogen otot adalah sama antar perlakuan dan kontrol (P>0,05). Sebagai kesimpulan, pemberian rElGH melalui pakan dapat meningkatkan pertumbuhan ikan nila secara signifikan. Bahan penyalut berupa PMC, dan kuning telur ayam dapat digunakan sebagai pengganti HP55. Retensi protein tidak dipengaruhi oleh penyalutan rElGH, sedangkan retensi lemak dipengaruhi oleh bahan penyalut yang digunakan. Kata kunci: hormon pertumbuhan, pakan, penyalutan, pertumbuhan, ikan nila

SUMMARY DULLAH IRWAN LATAR. Effectiveness administration of recombinant growth hormone through the feed with different coating materials and pelleting in Nile tilapia. Supervised by ALIMUDDIN and M. AGUS SUPRAYUDI. Application of recombinant growth hormone (rGH) to improve the growth of fish can be performed by injection, immersion and oral delivery method through feed. However, injection and immersion methods are relatively difficult to be applied to mass scale. Injection delivery method is time consuming and labor intensive. Furthermore, immersion method is only effective on the larval stage or small fish size, at a certain immersion dose and frequency. In addition, applications mass-scale immersion method with frequency of more than 1 time, high-potential causing fish stress. Oral delivery method is practical and time efficient. However, by this method rGH need to be coated to avoid degradation by digestive enzymes, and damage due to the low pH in the stomach. Hydroxypropyl methylcellulose phthalate (HP55) is a material often used for coating the rGH, but it is relatively expensive and inefficient when applied in large amounts. Another cellulose such as polymethyl carbamide (PMC) can also be used as a coating agent. PMC is a relatively cheap price, and has been reported to protect the coated material in a relatively long time; storage at a temperature of 20oC for about 1 year, 25 to 30oC about 6 months, and 35 to 38 °C about 3 months. Chicken egg yolk has also been widely used as a binder of medicines and feed supplements in fish. Its price is relatively cheap and easy to obtain. This study was performed to examine the effectiveness supplementation of recombinant giant grouper GH (rElGH) in tilapia feed using a variety of coating materials and pelleting on production, feed conversion, blood glucose, glycogen levels and proximate content of fish. Production of rElGH was performed using Escherichia coli BL21 containing pCold-ElGH protein expression vector. Bacteria were cultured in 2xYT media at incubation temperature of 15°C for 24 hours and protein synthesis was induced with isopropyl-bD-thiogalac-topyranoside in a dose of 0.5 mM. Lysis of bacterial cell walls was conducted using lysozyme, then total protein in inclusion body of rElGH were collected by centrifugation. SDS-PAGE analysis was used to ensure the presence of rElGH in the total bacterial protein. This study consisted of 5 treatments including the control, and each treatment was given 3 replications. The size fish used fish was 5 to 6 cm in body length. Fish were maintained at hapa installed in a concrete pond (measuring 3x2x1 m) with a stocking density of 125 fish in each hapa. Fish maintenance was carried out for 2 months. During the first 2 weeks fish were fed diet without rElGH (feed adaptation) with a frequency of 3 times a day, and then fed on rGHsupplemented diet in 3 times at intervals of 3 days. The results showed that chicken egg yolk coated rGH treatment generated significantly biomass (P<0.05) compared to the control (1262.2 ± 96.4 g). Fish biomass among treatments was similar (P>0.05). Increase in biomass in chicken egg yolk coating was 46.85%, 32.50% by HP55, 27.99% by PMC, and 26.64% by pelleting method compared with the control. In addition, specific growth rate

(SGR) of fish treated by HP55, chicken egg yolk, and PMC coated rGH were significantly higher (P<0.05) compated to control. SGR of chicken egg yolk coating treatment was about 34.3% higher compared to the control. In addition, fish feed conversion rate among treatments and control were similar. Meanwhile, survival of rElGH treatments were higher than control (P<0.05). Survival of rElGH treated fish was 96.80 to 97.33%, while the control was 93.07%. Protein retention in fish treated by rElGH with different coating materials was similat to that of control (P>0.05), while lipid retention in PMC coating treatment was significantly lower (P0<0.05) than that of other treatments and control. Lower blood glucose level was obatined in pelleting treatment, while other treatments and control was (P>0.05). Liver glycogen content in chicken egg yolk coating treatment was higher than other treatments and control, while muscle glycogen content was similar among coanting treatments and control (P>0.05). In conclusion, administration of rElGH through feed could significantly improve the growth of Nile tilapia. PMC and chicken egg yolk can be used as a substitute for HP55. Coating of rElGH did not affect protein retention, while lipid retention was affected by coating materials used. Keywords: growth hormone, oral administration, coating, growth, Nile tilapia

© Hak Cipta Milik IPB, Tahun 2013 Hak Cipta Dilindungi Undang-Undang Dilarang mengutip sebagian atau seluruh karya tulis ini tanpa mencantumkan atau menyebutkan sumbernya. Pengutipan hanya untuk kepentingan pendidikan, penelitian, penulisan karya ilmiah, penyusunan laporan, penulisan kritik, atau tinjauan suatu masalah; dan pengutipan tersebut tidak merugikan kepentingan IPB Dilarang mengumumkan dan memperbanyak sebagian atau seluruh karya tulis ini dalam bentuk apa pun tanpa izin IPB

EFEKTIVITAS PEMBERIAN HORMON PERTUMBUHAN REKOMBINAN MELALUI PAKAN DENGAN BAHAN PENYALUT BERBEDA DAN PELLETING PADA IKAN NILA

DULLAH IRWAN LATAR

Tesis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Magister Sains pada Program Studi Ilmu Akuakultur

SEKOLAH PASCASARJANA INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR 2013

Dosen Penguji Luar Komisi pada Ujian Tesis: Prof. Dr. Ir. Muhammad Zairin Junior, M.Sc.

Judul Tesis

: Efektivitas Pemberian Hormon Pertumbuhan Rekombinan Melalui Pakan dengan Bahan Penyalut Berbeda dan Pelleting pada Ikan Nama : Dullah Irwan Latar NIM : C151100261 Program Studi : Ilmu Akuakultur

Disetujui oleh Komisi Pembimbing

Dr. Alimuddin, S.Pi, M.Sc Ketua

Dr. Ir. M. Agus Suprayudi, M.Si Anggota

Diketahui oleh

Ketua Departemen Budidaya Perairan

Dekan Sekolah Pascasarjana

Dr. Ir. Sukenda, M.Sc

Dr. Ir. Dahrul Syah, M.Sc. Agr

Tanggal Ujian: 02 Mei 2013

Tanggal Lulus:

PRAKATA Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah subhanahu wa ta’ala atas segala karunia-Nya sehingga karya ilmiah ini berhasil diselesaikan. Penelitian yang dilaksanakan sejak bulan Juli 2012 sampai November 2012 dengan tema rekayasa pada budidaya ikan nila, dengan judul “Efektivitas Pemberian Hormon Pertumbuhan Rekombinan Melalui Pakan dengan Bahan Penyalut Berbeda dan Pelleting pada Ikan Nila”. Penelitian dilakukan di Laboratorium Reproduksi dan Genetika Organisme Akuatik, dan Kolam Percobaan Departemen Budidaya Perairan (BDP), Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan (FPIK), IPB. Analisis proksimat, kandungan glikogen hati dan otot, dan glukosa darah dilakukan di Lab. Nutrisi Ikan, BDP-FPIK, IPB. Keberhasilan penulis dalam menyelesaikan penelitian ini tidak semata didapatkan sendiri, melainkan dengan bantuan orang-orang sekitar. Untuk itu penulis mengucapkan terima kasih kepada: 1. Dr. Alimuddin, S.Pi, M.Sc. selaku Pembimbing I yang telah membimbing dan mengarahkan penulis selama melakukan penelitian sampai dengan penyusunan karya ilmiah ini dan atas dukungan materil dan spiritual selama perkuliahan dan penelitian. 2. Dr. Ir. M. Agus Suprayudi, M.Si. selaku Pembimbing II yang telah membimbing dan mengarahkan penulis selama melakukan penelitian sampai dengan penyusunan karya ilmiah ini. 3. Prof. Dr. Ir. Muhammad Zairin Junior, M.Sc. selaku penguji luar komisi atas saran dan pengarahannya dalam memperbaiki penulisan tesis. 4. Istriku Dewi Yuliantini, ST yang telah memberikan kasih sayang, perhatian, doa dan segala dukungan yang sangat berarti. Anak-anakku Ibnu Azzam Nawfal Latar (Alm) dan Hazrina Alyssa Azahra Latar yang menjadi penyemangat hidup dan penyimpan harapan penulis. 5. Ayahku Andi T. Latar, Ibunda Muharni Latar serta adikku Afandi Latar, SH, Rini Latar, S.Sos, Mimin B. Latar, dan Suryani Sufat Latar yang telah memberi nasehat, kasih sayang, doa restu, dukungan moril dan materil. 6. Ayah mertua Mamay Kamaludin (Alm), Ibu mertua Etty Mamay serta adik iparku Tri Yanuar dan Catur May Andrian yang juga telah memberikan dukungan dan doanya. 7. Bapak Wandan G. Latar dan Mama Hj. Maryam Latar yang telah banyak membantu selama proses study. 8. Abangku Amir Rumra, S.Pi (Anggota DPRD Kab. Maluku Tenggara) dan Istrinya Ukhti Shani Rumra, atas bantuan dan dukungan yang diberikan selama ini. 9. Abangku Abd. Malik Serang, S.Pi, M.Si (Wakil Direktur IV Politeknik Perikanan Negeri Tual) atas bantuan dan dukungan yang diberikan selama ini. 10. Bapak Dr. rer.nat. Ir. E. A. Renjaan, M.Sc (Direktur Politeknik Perikanan Negeri Tual) atas kesempatan ijin belajar yang diberikan. 11. Bapak/Ibu dosen serta staf pegawai pada Politeknik Perikanan Negeri Tual atas doa dan support yang diberikan Selma ini.

12. Sahabat-sahabatku yang tercinta (Anna Octavera, S.Pi, M.Si; Muhammad Safir, S.Pi, M.Si; Boyun Handoyo, S.Pi, M.Si; dan La Ode Muh. Arsal, S.Pi). 13. Teman-teman S1, S2 (Darmawan dan Fajar), dan S3 di Laboratorium Reproduksi dan Genetika Organisme Akuatik, dan teman-teman Ilmu Akuakultur 2010. 14. Teman-teman S2 Ilmu Akuakultur (Angkatan 2010) dan S2, S3 dari Politeknink Perikanan Negeri Tual yang sedang study pada SPs. Institut Pertanian Bogor. 15. Semua pihak yang telah memberikan dukungan baik secara langsung maupun tidak langsung. Penulis telah berusaha semaksimal mungkin dalam penyelesaian karya ilmiah ini. Dengan harapan, karya ilmiah ini dapat bermanfaat bagi penulis dan para pembaca pada umumnya.

Bogor, Agustus 2013 Dullah Irwan Latar

DAFTAR ISI Halaman DAFTAR TABEL

xiv

DAFTAR GAMBAR

xv

DAFTAR LAMPIRAN

xvi

PENDAHULUAN

1

Latar Belakang

1

Perumusan Masalah

2

Tujuan Penelitian

3

Manfaat Penelitian

3

TINJAUAN PUSTAKA

3

Ikan Nila (Oreochromis niloticus)

3

Hormon Pertumbuhan (Growth Hormone, GH))

4

Pakan

6

HP55 (hydroxypropyl methylcellulose phthalate)

7

PMC (polymethylol carbamide)

7

Kuning telur ayam

7

BAHAN DAN METODE

8

Rancangan Percobaan

8

Produksi Protein rGH

8

Lisis Dinding Sel Bakteri

8

Prosedur Penyalutan

9

Pembuatan Pakan Mengandung rElGH-HP55

9

Pembuatan Pakan Mengandung rElGH-PMC

9

Pembuatan Pakan Mengandung rElGH-Kuning Telur

9

Pembuatan Pakan Pelleting Mengandung rElGH

9

Analisis Proksimat Pakan dan Tubuh Ikan

10

Analisis Kadar Glikogen Hati dan Otot

11

Analisis Kadar Glukosa Darah

11

Pemeliharaan dan Pemberian Pakan

11

Parameter yang Diukur

11

Analisis Statistika HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil

12 12 12

Pemberian Protein rElGH melalui Pakan dengan Berbagai Metode Penyalutan dan Metode Pelleting

12

Konversi Pakan, Retensi Protein, Retensi Lemak, dan Komposisi Tubuh

14

Kadar Glukosa Darah

15

Kadar Glikogen Otot dan Hati

15

Pembahasan

16

Pertumbuhan dan Kelangsungan Hidup (KH)

16

Konversi Pakan, Retensi Protein, Retensi Lemak

17

Glukosa Darah

18

Kadar Glikogen Otot dan Hati

19

KESIMPULAN DAN SARAN

20

Kesimpulan

20

Saran

21

DAFTAR PUSTAKA

21

LAMPIRAN

28

RIWAYAT HIDUP

47

DAFTAR TABEL Halaman 1.

Proksimat pakan yang digunakan dalam penelitian (% bobot kering)

10

2

Biomassa panen, laju pertumbuhan spesifik (LPS), kelangsungan hidup (KH), ikan nila yang diberi perlakuan hormon pertumbuhan rekombinan ikan kerapu kertang (rElGH) yang dipelihara selama 2 bulan Tingkat konversi pakan (TKP), retensi protein dan retensi lemak, ikan nila yang diberi perlakuan hormon pertumbuhan rekombinan ikan kerapu kertang (rElGH) yang dipelihara selama 2 bulan Proksimat (% bobot basah) tubuh benih ikan nila pada awal dan akhir percobaan Kadar glukosa darah, ikan nila yang diberi perlakuan hormon pertumbuhan rekombinan ikan kerapu kertang (rElGH) yang dipelihara selama 2 bulan Kadar glikogen hati dan otot ikan nila yang diberi perlakuan hormon pertumbuhan rekombinan ikan kerapu kertang (rElGH) yang dipelihara selama 2 bulan

13

3.

4. 5.

6.

14

15 15

16

DAFTAR GAMBAR Halaman 1. 2. 3.

Perkembangan pendapat tentang mediasi hormon pertumbuhan (growth 4 hormone; GH) Mekanisme hormon pertumbuhan (growth hormone; GH) dalam 5 mempengaruhi pertumbuhan dan beberapa fungsi lain Pertumbuhan ikan nila (Oreochromis niloticus) yang diberi perlakuan pakan mengandung rElGH yang disalut menggunakan berbagai bahan 13 serta metode pelleting dengan dosis yang sama, dan frekuensi pemberian 3 kali dengan interval waktu 3 hari

DAFTAR LAMPIRAN Halaman 1. Hasil analisis statistik biomassa pada ikan perlakuan rGH dengan 28 metode penyalutan dan peleting pada ikan nila 2. Hasil analisis statistik laju pertumbuhan spesifik (LPS) pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila 30

3. Hasil analisis statistik kelangsungan hidup (KH) pada ikan perlakuan 32 rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila 4. Hasil analisis statistik tingkat konversi pakan (TKP) pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila 34 5. Hasil analisis statistik retensi protein pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila 6. Hasil analisis statistik retensi lemak pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila 7. Hasil analisis statistik glukosa darah pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila 8. Hasil analisis statistik glikogen hati pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila 9 Hasil analisis statistik glikogen otot pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila

36 38 40 42 44

1 I PENDAHULUAN Latar Belakang Hormon pertumbuhan (growth hormone; GH) merupakan salah satu hormon yang disekresikan oleh somatotrof dari kelenjar pituitari bagian anterior (Ryynanen & Primmer, 2006) dengan berat molekul berkisar 20 sampai 25 kDa. Hormon ini telah banyak diteliti dan digunakan sebagai model untuk ilmu fisiologi, pengaturan ekspresi gen, hubungan struktur, fungsi, dan evolusi gen (Perez-Sanches 2000; Pozios et al. 2001; Zairin. 2003; Yada et al. 2005; Ryynanen & Primmer 2006). GH berperan penting dalam pengaturan pertumbuhan dan perkembangan dengan cara mendukung proses pembelahan, diferensiasi, dan pembesaran ukuran sel (Copeland & Nasir 1994). Selanjutnya GH juga berperan dalam proses osmoregulasi (Sakamato et al. 1997) dan reproduksi (van Der Kraak et al. 1990; Le Gac et al. 1993). Sejak tahun 1980-an, peneliti telah berhasil mengisolasi gen GH dan memproduksi hormon pertumbuhan rekombinan (rGH) dari beberapa jenis ikan di antaranya adalah pada ikan salmon (Sekine et al. 1985), ikan flounder (Jeh et al. 1998), orange-spotted grouper (Li et al. 2005), dan ikan patin siam (Poen 2009). Selanjutnya, Cheng (1995) telah mengkaji rute atau teknik pemberian rGH serta efeknya terhadap pertumbuhan dan perkembangan ikan. Di Indonesia beberapa rGH ikan telah diproduksi dan diuji bioaktivitasnya dalam memacu laju pertumbuhan ikan, seperti rGH ikan mas (rCcGH), ikan gurame (rOgGH), dan ikan kerapu kertang (rElGH) (Alimuddin et al. 2010). Berdasarkan analisis SDSPAGE, level ekspresi rElGH lebih tinggi dibandingkan rCcGH dan rOgGH (Irmawati 2013), sehingga rElGH potensial digunakan untuk memacu pertumbuhan berbagai spesies budidaya. Aplikasi pemberian rGH untuk memacu pertumbuhan ikan dapat dilakukan melalui injeksi, perendaman, dan pakan. Pemberian rGH melalui penyuntikan telah berhasil dilakukan pada ikan mujair (Oreochromis mossambicus) (Tsai et al. 1994; Leedom et al. 2002), ikan rainbow trout (Onchorhynchus mykiss) (McLean et al. 1997), channel catfish (Ictalurus punctatus) (Silverstein et al. 2000), giant catfish (Pangasianodon hypophthalmus), ikan mas (Cyprinus carpio) (Promdonkoy et al. 2004; Utomo 2010), dan ikan salmon (Salmonella sp.) (Shimizu et al. 2007). Metode perendaman rGH juga telah dilakukan pada berbagai ikan dan memberikan hasil yang baik terhadap pertumbuhan (Moriyama & Kawauchi 1990; Acosta et al. 2007; Putra 2011; Syazili et al. 2011; Handoyo 2012; Irmawati et al. 2012). Akan tetapi, metode penyuntikan dan perendaman relatif sulit diaplikasikan untuk skala massal. Metode penyuntikan memerlukan waktu relatif lama dan tenaga banyak karena injeksi dilakukan per individu. Selanjutnya metode perendaman hanya efektif pada fase larva atau ikan berukuran kecil, dengan dosis dan frekuensi perendaman tertentu (Acosta et al. 2009). Aplikasi metode perendaman skala massal dengan frekuensi perendaman lebih dari 1 kali, berpotensi tinggi menyebabkan ikan stres. Pemberian rGH melalui pakan diduga lebih efektif dalam hal penggunaan waktu (Promdonkoy et al. 2004). Pemberian rGH melalui pakan ini telah berhasil dilakukan oleh Moriyama et al. (1993) pada ikan rainbow trout, Jeh et al. (1998)

2 pada juvenil ikan flounder, Ben-Atia et al. (1999) dan Hardiantho et al. (2011) pada ikan nila, Handoyo (2012) pada benih ikan sidat, dan Safir (2012) pada benih ikan gurame. Jeh et al. (1998) menambahkan bahwa pemberian rGH melalui pakan buatan merupakan metode yang praktis, karena tidak perlu menangani ikan satu per satu. Akan tetapi, pada metode ini rGH perlu disalut (coating) untuk menghindari degradasi akibat enzim pencernaan, dan pH rendah di lambung. Bahan yang sering digunakan untuk menyalut rGH selama ini adalah hydroxypropyl methylcellulose phthalate (HP55), yang telah terbukti memberikan efek yang maksimal terhadap perumbuhan ikan, tetapi harganya relatif mahal sehingga tidak efektif jika diaplikasikan dalam jumlah yang besar. Selain bahan penyalutan di atas, bahan selulosa lainnya seperti polymethyl carbamide (PMC) juga dapat digunakan sebagai penyalut. Fungsi utama polymethyl carbamide adalah mengikat air dan berguna untuk mendapatkan kekentalan yang tepat (Wong et al. 1988). Selain itu, PMC juga berperan dalam pemberian udara terhadap adonan selama proses pembekuan, meningkatkan kekuatan pada permukaan produk (Arbuckle dan Marshall 1996). Harga PMC relatif murah, dan memiliki daya pelindung yang lama terhadap bahan yang disalut; pada suhu 20oC dapat bertahan selama 1 tahun, 25 sampai 30oC sekitar 6 bulan, dan 35 sampai 38oC sekitar 3 bulan (Wong et al. 1988). Alternatif penyalut rGH yang relatif murah dan mudah diperoleh adalah kuning telur ayam. Kuning telur ayam telah banyak digunakan sebagai pengikat (binder) obat dan suplemen pada pakan ikan. Pencampuran rGH langsung ke bahan penyusun pakan sebelum dibuat pelet (pelleting) juga praktis, tetapi proses pemanasan dapat merusak rGH. Selanjutnya, penyalutan rGH dengan bahan berbeda dan pelleting tersebut dapat mempengaruhi konversi pakan dan metabolisme ikan nila. Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan untuk menguji efektivitas rGH ikan kerapu kertang (rElGH) pada ikan nila melalui pakan dengan menggunakan penyalut HP55, PMC dan kuning telur, serta pelleting terhadap pertumbuhan, kelangsungan hidup, produksi (biomassa), konversi pakan, kadar glukosa darah, kadar glikogen, dan kandungan proksimat ikan. Perumusan Masalah Pemberian rGH melalui injeksi dan imersi telah dilakukan untuk meningkatkan pertumbuhan, tetapi relatif kurang efisien dari segi waktu. Sementara itu, penelitian aplikasi rGH melalui pakan yang telah dilakukan oleh Acosta et al. (2007) menunjukkan pemberian rGH pada ikan nila mampu meningkatkan pertumbuhan sekitar 50%. Pemberian rGH melalui pakan umumnya disalut (coating) untuk menghindari degradasi akibat enzim pencernaan dan kerusakan akibat pH rendah pada lambung (Jeh et al. 1998), atau tercerna sebelum masuk ke dalam pembuluh darah. Permasalahan dalam penggunaan bahan alami seperti selulosa sebagai bahan penyalut ini adalah harganya yang relatif mahal sehingga tidak ekonomis untuk digunakan dalam skala yang lebih besar untuk ikan yang memiliki harga relatif murah. Seperti diketahui bahwa bahan penyalut rGH yang umumnya digunakan adalah HP55 yang juga merupakan turunan dari selulosa, tetapi harganya relatif mahal. Bahan alternatif yang dapat digunakan sebagai bahan penyalut adalah kuning telur dan PMC. Kedua bahan tersebut relatif murah,

3 sehingga secara ekonomis dapat terjangkau, dapat digunakan dengan relatif mudah dan bisa diterapkan dalam skala yang lebih besar. Selain dengan metode penyalutan, pengujian rElGH juga dapat dilakukan dengan cara dicampurkan langsung dengan bahan baku pakan, kemudian dilakukan proses pembuatan pelet, dan dalam proses tersebut digunakan PMC sebagai binder atau pengikat. Kedua bahan tersebut kemudian dibandingkan dengan HP55 untuk mengevaluasi efektivitasnya dalam melindungi atau menyelimuti rGH yang diberikan pada pakan ikan nila. Tujuan Penelitian Secara umum penelitian ini bertujuan untuk menguji efektivitas rGH ikan kerapu kertang (rElGH) pada ikan nila melalui pakan dengan menggunakan berbagai bahan penyalut berbeda dan pelleting terhadap pertumbuhan, kelangsungan hidup, produksi, konversi pakan, kadar glukosa darah dan glikogen, dan kandungan proksimat ikan. Manfaat Penelitian Hasil penelitian ini diharapkan dapat menjadi salah satu pedoman dalam aplikasi rGH yang dapat digunakan dalam budidaya untuk memacu pertumbuhan ikan dalam rangka menunjang upaya peningkatan produksi perikanan Indonesia. II TINJAUAN PUSTAKA Ikan Nila Ikan nila (Oreochromis niloticus) merupakan jenis ikan konsumsi air tawar yang diintroduksi dari Afrika Utara, tepatnya Sungai Nil, pada tahun 1969, dan kini merupakan salah satu komoditas unggulan budidaya ikan air tawar dan menjadi target peningkatan produksi perikanan budidaya oleh Kementerian Kelautan dan Perikanan (KKP) tahun 2009 sampai 2014. Produksi ikan nila ditargetkan meningkat hingga 864.600 ton (KKP 2010). Ikan nila merupakan salah satu jenis ikan air tawar terbaik yang dapat dibudidayakan karena ikan ini memiliki teloransi yang tinggi terhadap kondisi lingkungan yang ekstrim, mudah untuk diproduksi, memiliki kemampuan tumbuh yang cepat (El-Sayed 1999), menyebabkan ikan ini dapat dipelihara baik di daerah tropis maupun subtropis (Biswas et al. 2005; Fasaklin et al. 2005; El-Saidy & Gaber 2005; Pena-Mendoza et al. 2005; Borgeson 2006; Tsadik & Bart 2007, Tahoun 2007). Namun demikian, kendala yang sering terjadi dalam usaha pembesaran ikan nila adalah tingkat pertumbuhannya yang menurun ketika mencapai matang gonad dan terjadi pemijahan yang tidak terkontrol dalam wadah budidaya sebelum mencapai waktu panen. Ikan nila mengasuh telur dan anaknya hingga bisa berenang bebas, dan selama waktu tersebut ikan tidak makan. Hal ini memperlambat pertumbuhan ikan, dan ikan tidak sulit mencapai ukuran lebih dari 300 g/ekor.

4 Hormon Pertumbuhan (Growth Hormone, GH) Hormon pertumbuhan merupakan polipeptida yang disekresikan oleh bagian anterior dari kelenjar pituitari yang memiliki fungsi utama memacu pertumbuhan tubuh. Hormon ini merupakan peptida dengan berat berkisar 20-25 kDa dan relatif bersifat spesifik untuk masing-masing spesies. Sekresi hormon pertumbuhan dikendalikan oleh hipotalamus. Secara umum, GH berperan dalam memacu pertumbuhan tubuh, khususnya dengan merangsang pelepasan somatomedin, dan mempengaruhi metabolisme protein, karbohidrat, dan lipid. Pada ikan GH memiliki beberapa fungsi yang telah diketahui, di antaranya merangsang pertumbuhan tulang, otot dan gonad. Hormon ini juga berperan pada proses metamorfosis dan perkembangan ikan, pada proses osmoregulasi, merangsang hati mengeluarkan IGF-1, tingkah laku ikan ketika bermigrasi, pada proses gametogenesis pubertas dan perkembangan embrio, menjaga keseimbangan/homeostasi energi, merangsang nafsu makan, mempengaruhi komposisi daging, efisiensi pemberian pakan, gambaran darah, dan meningkatkan sistem imunitas tubuh (Sakai et al. 1997; Wong et al. 2006; Liu et al. 2007; Debnanth 2010). Mekanisme GH dalam mempengaruhi pertumbuhan ada beberapa pendapat yang terus berkembang (Gambar 1). Penelitian tentang bagaimana GH dimediasi dalam mempengaruhi pertumbuhan sudah dimulai sejak tahun 1950-an. Paradigma berkembang pada mamalia bahwa GH mempengaruhi pertumbuhan dimediasi oleh IGF-1 yang berada dalam hati. Pada tahun 1980-an berkembang paradigma bahwa ada mekanisme langsung pada GH dalam mempengaruhi pertumbuhan, dan kemudian diketahui bahwa dalam organ dapat memproduksi IGF-1 sendiri. Pada tahun 2000-an diketahui mediasi yang terjadi tidak hanya dalam hati, tetapi juga terjadi di luar hati dan ada peran IGF binding proteins (IGFBPs) dan acid-labile subunit (ALS) (Ohlsson et al. 2009).

Gambar 1 Perkembangan pendapat tentang mediasi hormon pertumbuhan (growth hormone; GH) dalam mempengaruhi pertumbuhan (Ohlsson et al. 2009). IGF-1 (insulin like growth factor 1), IGFBP3 (binding proteins 3), ALS (acid-labile subunit). Pada ikan teori mengenai mekanisme GH juga terdapat beberapa pendapat yang berbeda. Perkembangan terakhir diketahui adanya mekanisme secara langsung dan tidak langsung (Gambar 2). Mekanisme secara langsung adalah GH akan langsung mempengaruhi pertumbuhan organ tanpa perantara IGF-1 di dalam

5 hati. Mekanisme tidak langsung adalah mekanisme GH dalam mempengaruhi pertumbuhan yang dimediasi oleh IGF-1 dalam hati ikan. Ada beberapa faktor lain yang berperan dalam mekanisme ini, yaitu: reseptor GH (GHr), GH binding proteins (GHBPs), IGF binding proteins (IGFBPs), dan reseptor IGF. GHr berfungsi dalam menangkap sinyal GH yang disekresikan oleh pituitari, GHBPs berfungsi dalam melindungi dan pengangkutan GH dari pituitari di dalam darah. IGFBPs berfungsi dalam melindungi dan mengangkut IGF-1 di dalam darah menuju ke organ target. Reseptor IGF-1 berfungsi untuk menangkap sinyal IGF-1 dalam organ-organ yang menjadi target. Beberapa pengaruh GH terhadap fungsi lain seperti merangsang nafsu makan, sistem imunitas, pengaturan homeostasi energi juga masih terus diteliti dan dikaji bagaimana mekanismenya (Sanches 1999; Moriyama 2000; Wong et al. 2006; Debnanth 2010).

Gambar 2 Mekanisme hormon pertumbuhan (growth hormone; GH) dalam mempengaruhi pertumbuhan dan beberapa fungsi lain (dimodifikasi dari Sanches dan Pierre 1999; Moriyama dan Kawachi 2000; Wong et al. 2006; Debnanth 2010). Keterangan: Tanda (+) merupakan faktor yang mendukung mekanisme GH, tanda (-) adalah faktor yang menghambat mekanisme GH, tanda panah biru (pengaruh GH terhadap fungsi lain seperti merangsang nafsu makan, sistem imunitas, pengaturan homeostasi energi), tanda panah merah (adalah GH akan langsung mempengaruhi pertumbuhan organ tanpa perantara IGF-1 di dalam hati), dan tanda panah kuning (merupakan mekanisme tidak langsung, ini melalui perantara

6 IGF-1). GH-R (growth hormone receptors), IGF (insulin like growth factor), IGFR (insulin like growth factor receptors). Sekresi GH dirangsang oleh sinyal dari otak berupa neuropeptide, di antaranya growth hormone releasing hormone (GHRH), pituitary adenilate cyclase-activating polypeptide (PACAP), gonadothropin releasing hormone (GnRH), thyroid releasing hormone (TRH), neuropeptide-Y (NPY), bombensin, dan CCK. Sinyal dari otak yang berupa neurotransmitter yang telah diketahui adalah dopamin. Selain itu sekresi GH juga dirangsang oleh insulin like growth factor 1 (IGF-1) dan aktivin (sinyal dari pituitari), ghrelin, protein pakan, kandungan gula darah yang rendah, peningkatan sekresi androgen, arginin, T3/T4, dan CVP/CNP. Faktor yang dapat menghambat GH di antaranya somatostatin, SRIF, serotonin, glutamate, norepinephrine, konsentrasi hormon pertumbuhan dan insulin like growth factor 1 (IGF-1) yang bersirkulasi, kandungan gula darah yang tinggi, glukokortikoid, dan estradiol. Kandungan GH dalam tubuh ikan berkisar antara 0,2-111,2 ng/ml plasma darah (Björnsson et al. 2000; Arnesen et al. 2003; Drennon et al. 2003; Wong et al. 2006; Nordgarden et al. 2005). Pakan Protein merupakan komponen pakan yang sangat dibutuhkan sebagai pembentuk jaringan tubuh dalam proses pertumbuhan, tetapi jika kebutuhan energi dari sumber lemak dan karbohidrat tidak mencukupi, maka sebagian besar protein juga akan digunakan sebagai sumber energi. Sumber protein yang sering digunakan dalam pembuatan pakan ikan meliputi: tepung ikan, tepung udang, tepung kedelai, tepung kepala udang dan kedelai (Suprayudi 2010). Jumlah protein yang diperlukan dalam pakan secara langsung dipengaruhi oleh komposisi asam amino pakan. Ikan nila seperti hewan lain tidak memiliki kebutuhan protein yang mutlak, tetapi memerlukan suatu campuran yang seimbang antara asam amino esensial dan non esensial. Selanjutnya NRC (1983) mengemukakan pula bahwa kekurangan asam amino esensial mengakibatkan penurunan pertumbuhan. Sumber protein terbesar dalam pakan buatan adalah tepung ikan dan tepung kacang kedelai. Tepung kacang kedelai kekurangan asam amino metionin dan kekurangan ini dicukupi dari tepung ikan yang kaya akan asam amino lisin dan metionin. Dalam penyusunan pakan buatan pada ikan perlu diperhatikan keseimbangan antara kebutuhan protein, lemak, karbohidrat dan energi (Suprayudi et al. 1999; Suprayudi et al. 2000). Pakan dengan kandungan energi yang tinggi mengakibatkan konsumsi protein berkurang dan pertumbuhan terhambat. Sebaliknya, pakan dengan kandungan energi yang rendah mengakibatkan terjadinya perombakan protein untuk mencukupi kebutuhan energi dan menghasilkan efisiensi protein yang rendah serta terhambatnya pertumbuhan ikan, udang maupun hewan lainnya (Lovell 1988).

7 HP55 (hydroxypropyl methylcellulose phthalate) Penyalutan menggunakan HP55 merupakan suatu cara untuk melindungi bahan-bahan yang diberikan bersama dengan pakan dari degradasi yang disebabkan oleh asam lambung ketika berada dalam lambung dan akan terserap dengan baik ketika berada di dalam usus. Bahan yang dapat digunakan untuk penyalutan seperti kitosan, alginat, kuning/putih telur, dan HPMCP (hydroxypropyl methylcellulose phthalate). Bahan penyalut seperti HPMCP telah diperkenalkan di pasaran sejak tahun 1971. Sebagai turunan dari selulosa untuk penyalutan, bahan tersebut telah diuji dan efektif dalam beberapa penelitian, baik di bidang farmasi maupun perikanan. Berdasarkan kelarutannya, HPMCP terbagi dua, yaitu HP50 dan HP55. HP50 larut dalam kondisi pH ≥ 5,0, sedangkan HP55 larut dalam kondisi pH≥ 5,5 (Shin-Etsu 2002). Penggunaan HP55 sebagai bahan penyalut telah terbukti melindungi komponen aktif pada pakan ikan, sebagaimana dilaporkan oleh (Promdonkoy et al. (2004). Metode penggunaan HP55 sebagai penyalut juga telah dilakukan pada berbagai ikan dan memberikan hasil yang baik terhadap pertumbuhan (Handoyo 2012; Safir 2012). PMC (Polymethylol Carbamide) Polymethylol carbamide (PMC) digunakan sebagai binder pada pakan. PMC dapat mengikat setiap bahan gizi (aktif) secara bersama-sama. Penggunaan PMC sebagai binder dapat mengurangi kehilangan bahan gizi pakan yang larut dan bebas larut di dalam air. PMC sebagai pengikat pada pelet atau pakan telah digunakan secara luas untuk udang, ikan dan hewan lainnya. Konsentrasi PMC yang direkomendasikan sebagai pengikat pada pakan ikan adalah 2 sampai 4 kg per 1 ton pakan. Kuning telur ayam Persentase kuning telur sekitar 30% sampai 32% dari bobot telur. Kuning telur terdiri atas membran kuning telur (vitellin) dan kuning telur sendiri. Kuning telur merupakan makanan dan sumber lemak bagi perkembangan embrio. Komposisi kuning telur ayam adalah air 50%, lemak 32-36%, protein 16% dan glukosa 1-2% (Bell & William 2002). Asam lemak yang banyak terdapat pada kuning telur adalah linoleat, oleat dan stearat. Telur konsumsi diproduksi oleh ayam betina tanpa adanya ayam jantan (Bell & William 2002).Warna kuning telur dipengaruhi oleh pakan. Apabila pakan mengandung lebih banyak santofil, maka warna kuning telur semakin berwarna jingga kemerahan. Pemanfaatan kuning telur sebagai bahan penyalut pada rGH telah dilaporkan oleh Hardiantho et al. (2011) bahwa pakan rGH yang disalut dengan menggunakan kuning telur yang selanjutnya diberikan pada benih ikan nila mampu memberikan efek pertumbuhan yang baik dibandingkan dengan kontrol. Selain memberikan efek pertumbuhan yang baik, juga dapat meningkatkan kelangsungan hidup serta meningkatkan retensi protein dan lemak. Pemberian rEIGH melalui oral adalah salah satu upaya yang dilakukan agar dapat

8 menghindari atau dapat meminimalisir terjadinya tingkat stres yang berlebihan pada ikan perlakuan serta dapat mengefektifkan waktu. III BAHAN DAN METODE Rancangan Percobaan Rancangan percobaan yang digunakan adalah rancangan acak lengkap dengan 5 perlakuan (termasuk kontrol) dan 3 kali ulangan. Benih ikan nila diperoleh dari pembenihan di kolam percobaan BDP-FPIK IPB yang ukuran panjang tubuh sekitar 5 cm dengan kepadatan 125 ekor/m2, diberi pakan mengandung rGH sebanyak 3 kali dengan selang waktu 3 hari. Sebagai kontrol ikan diberi pakan tanpa rGH (pakan kontrol) secara 10%. Ikan dipelihara selama 2 bulan dalam hapa berukuran 3x2x1 meter. Perlakuan tersebut adalah perlakuan A: kontrol (pakan tanpa rGH); perlakuan B: penyalutan rGH dengan HP55; perlakuan C: penyalutan dengan PMC; perlakuan D: penyalutan dengan kuning telur (yolk); dan perlakuan E: penyalutan dengan PMC dan dicampur dengan bahan pakan sebelum dibuat menjadi pelet (pelleting). Bobot tubuh ikan pada semua perlakuan serta semua ulangan diukur biomassa totalnya setiap 2 minggu. Kelangsungan hidup ikan (KH) dihitung pada masa akhir pemeliharaan. Produksi Protein rElGH Produksi rElGH dilakukan menggunakan bakteri Escherichia coli BL21 yang mengandung konstruksi pCold-1/ElGH (Alimuddin et al. 2010). Klon bakteri E. coli dikultur dalam 4 mL media 2xYT cair yang mengandung ampisilin, dan diinkubasi menggunakan shaker pada suhu 37°C selama 16 sampai 18 jam. Setelah itu, dilakukan subkultur dengan mengambil sebanyak 1 mL dari kultur awal dan dimasukkan ke dalam 100 mL media 2xYT cair baru dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 2 jam. Kemudian kultur diberi kejutan suhu 15°C selama 30 menit, ditambahkan IPTG 1 mM sebanyak 1 mL, dan diinkubasi menggunakan shaker pada suhu 15°C selama 24 jam. Bakteri hasil kultur dikumpulkan dengan sentrifugasi pada 12.000 rpm selama 2 sampai 10 menit. Lisis Dinding Sel Bakteri Lisis dinding sel bakteri dilakukan secara kimiawi menggunakan lisozim. Pelet bakteri hasil sentrifugasi dicuci menggunakan 1 mL bufer tris-EDTA (TE) per 200 mg bakteri, diinkubasi pada suhu 37°C selama 20 menit, dan selanjutnya disentrifugasi pada 12.000 rpm selama 1 menit. Supernatan dalam tabung mikro dibuang, diganti dengan larutan lisozim (10 mg dalam 1 mL buffer TE) sebanyak 500 µL, diinkubasi pada suhu 37°C selama 20 menit, lalu disentrifugasi pada 12.000 rpm selama 1 menit. Supernatan dibuang, dan pelet yang terbentuk merupakan protein rGH dalam bentuk badan inklusi (inclusion body). Pelet rGH dicuci dengan bufer fosfat salin (PBS) sebanyak 1 kali, dan rGH disimpan pada suhu -80°C hingga digunakan.

9 Prosedur Penyalutan Prosedur penyalutan mengacu pada beberapa penelitian sebelumnya yang menggunakan bahan penyalut yang sama di antaranya adalah pakan uji dibuat dengan cara mencampurkan rEIGH yang sudah dilakukan penyalutan (coating) menggunakan HP55 (Shinetsu, Japan). Sementara coating menggunakan PMC mengikuti prosedur di Laboratorium Nutrisi Ikan, BDP-FPIK IPB dan kuning telur mengikuti metode yang sebelumnya sudah dilakukan sebagai berikut: Pembuatan pakan mengandung rElGH-HP55 Pakan yang digunakan adalah pakan komersial dengan kandungan protein sekitar 30%. Penyalutan pakan mengandung rElGH dilakukan berdasarkan metode Promdonkoy et al. (2004) menggunakan HP55 sehingga terbentuk matriks rElGH-HP55. Pelet rElGH dilarutkan dalam amonium asetat yang mengandung HP55 dalam etanol 72,8%. Setelah penyalutan, rElGH-HP55 dikering-beku menggunakan freeze drier. Selanjutnya matrik rElGH-HP55 diresuspensi dalam asam asetat yang mengandung 10 mM NaCl, dan 0,013% (w/v) deoxyholic acid hingga konsentrasi rElGH menjadi 0,5 mg/mL. Pencampuran rElGH-HP55 dengan pakan uji dilakukan dengan cara disemprotkan dan kemudian dikeringanginkan. Pembuatan pakan mengandung rElGH-PMC Penyalutan 3 mg rElGH dengan PMC dilakukan sesuai dengan prosedur di Laboratorium Nutrisi Ikan, BDP-FPIK IPB. rElGH dilarutkan dalam 200 mL akuades. Pencampuran rElGH-PMC dengan pakan uji dilakukan dengan cara disemprotkan, dan kemudian dikering-anginkan. Pakan disimpan di lemari pendingin -20oC hingga akan diberikan ke ikan. Pembuatan pakan mengandung rElGH-kuning telur Sebanyak 3 mg rElGH (bobot basah) dilarutkan dalam 15 mL PBS dan selanjutnya dicampur dengan 20 mg kuning telur ayam yang berfungsi sebagai bahan pengikat (binder). Setelah dihomogenasi menggunakan vorteks, campuran kuning telur dengan rElGH disemprotkan secara merata pada 1 kg pakan komersial (protein sekitar 30%). Selanjutnya pakan dikering-udarakan sebelum diberikan ke ikan nila. Penyalutan pakan mengandung rElGH-kuning telur dilakukan berdasarkan metode Hardiantho et al. (2011). Pembuatan pakan yang mengandung rElGH-kuning telur sebanyak 1 kg dilakukan sekaligus dalam sekali pencampuran, kemudian pakan tersebut disimpan dalam lemari pendingin -20oC sampai akan dilakukan pemberian pakan pada ikan model. Pembuatan pakan peleting mengandung rElGH Pembuatan pakan mengandung rElGH dilakukan dengan cara mencampurkan 3 mg rElGH ke dalam bahan baku pakan komersial (protein sekitar 30%). Pembuatan pakan yang mengandung rElGH-PMC, dilakukan

10 berdasarkan metode standar manual Laboratorium Nutrisi dan Kesehatan Ikan, BDP-FPIK IPB. Protein rElGH dilarutkan dalam 200 mL aquades yang dicampur dengan 20 mg kuning telur ayam yang berfungsi sebagai bahan pengikat (binder) pada pakan buatan. Pencampuran rElGH-PMC dengan pakan uji dilakukan dengan cara dicampurkan dengan 1 kg bahan baku pakan kemudian dilakukan proses peleting dan dikering-bekukan dengan menggunakan oven pada suhu 60oC. Perbedaan yang mendasar pada metode penyalutan menggunakan PMC dan metode pelleting dengan menggunakan PMC adalah pada penggunaan suhu, di mana suhu pada proses pelleting lebih tinggi yang memungkinkan rGH rusak, sementara dibandingkan dengan suhu pada proses penyalutan lebih rendah sehingga proses ini relatif aman. Kedua metode ini menggunakan bahan PMC, tetapi prosesnya berbeda, yaitu pada proses peleting; PMC dicampurkan langsung pada bahan baku pakan dan berfungsi sebagai pengikat (binder), sementara pada penyalutan PMC hanya dilakukan penyemprotan pada pakan. Setelah dilakukan pencampuran matrik rElGH dan rElGH ke dalam pakan, selanjutnya dilakukan analisis proksimat untuk mengklarifikasi kandungan nutrisi pakan setelah dicampurkan. Komposisi nutrisi pakan yang akan diberikan (Tabel 1). Tabel 1 Proksimat pakan yang digunakan dalam penelitian(% bobot kering) Parameter Uji Kadar Abu Protein Lemak Serat Kasar BETN DE (kkal/kg pakan) C/P (kkal/g protein)

Kontrol 17.96 28.49 7.05 7.52 38.98 2543.06 8.93

Pakan perlakuan (mg/kg pakan) Kuning HP55 PMC telur 20.18 18.58 19.37 31.10 32.48 31.69 7.11 7.89 7.48 9.86 8.04 9.12 31.75 33.01 32.34 2458.00 2601.19 2523.19 7.90 8.01 7.96

Peleting 17.82 31.11 7.65 8.15 39.14 2687.00 8.64

Keterangan: DE (digestible energy) dikalkulasi menggunakan kandungan energi dalam protein sebesar 1 g protein= 3,5 kkal; 1 g lemak= 8,1 kkal; 1 kg karbohidrat= 2,5 kkal. Analisis Proksimat Pakan dan Tubuh Ikan Analisis proksimat pakan dan tubuh ikan nila dilakukan pada awal dan akhir percobaan. Analisis tersebut meliputi kadar protein, lemak, serat, kadar abu, kadar air dan BETN. Analisis protein dilakukan menggunakan metode Kjeldhal, lemak menggunakan metode ekstraksi dengan alat Soxhlet, abu melalui pemanasan sampel dalam tanur pada suhu 400 sampai 600oC, serat menggunakan metode pelarutan sampel dengan asam dan basa kuat serta pemanasan, dan kadar air dengan metode pemanasan dalam oven pada suhu 105 sampai 110oC (Takeuchi 1988).

11 Analisis Kadar Glikogen Hati dan Otot Analisis kadar glikogen hati dan otot ikan nila mengacuh pada metode Wedemeyer dan Yasutake (1977). Jaringan otot atau hati sekitar 100 mg dididihkan dalam 3 mL 30% KOH sampai melarut selama 20 sampai 30 menit, kemudian ditambahkan 0,5 ml Na2SO4 jenuh dan 3,5 ml 95% etanol, selanjutnya dipanaskan sampai mendidih. Setelah dingin, larutan disentrifugasi dan supernatannya dibuang. Glikogen dilarutkan dalam 2 mL air dan diendapkan kembali dengan 2,5 mL etanol 95%. Supernatan dibuang dan glikogen yang mengendap dihidrolisis dengan 2 mL HCL 5M selama 30 menit dalam waterbath mendidih. Sampel didinginkan dan dinetralkan menggunakan 0,5 M NaOH (digunakan 1 tetes fenolred sebagai indikator). Sampel diencerkan sampai volume yang diketahui (50 sampai 100 mL), bergantung pada glikogen yang diharapkan dan analisis dilanjutkan dengan prosedur pengukuran glukosa. Analisis kadar Glukosa Darah Sampel darah sebanyak 0,05 mL, standar glukosa dan air (blanko) dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang telah berisi 3,5 mL reagent (asam asetat 94 mL : o-toluidine 6 mL). Tabung reaksi berisi sampel tersebut dipanaskan di dalam waterbath mendidih selam 10 menit, kemudian diangkat dan didinginkan sampai temperatur ruang (warna stabil dalam 1 jam). Absorbansi sampel, dan standar glukosa dibaca pada λ= 635 nm. Perhitungan : glukosa (mg/100 ml) = Ket :

Au As Cs

Au (Cs) As

: Absorbansi sampel : Absorbansi standar : Konsentrasi standar Pemeliharaan dan Pemberian pakan

Benih ikan nila diperoleh dari pembenihan di kolam percobaan BDP-FPIK IPB. Benih ikan berukuran 5 sampai 6 cm dipelihara dalam hapa berukuran 3x3x2 m3 dengan kepadatan 125 ekor per hapa. Pakan awal yang diberikan (diadaptasikan) merupakan pakan buatan tanpa mengandung rEGH. Pakan mengandung rElGH menggunakan dosis yang sama (3 mg/kg pakan). Setiap perlakuan diberi 3 kali ulangan. Pemberian pakan dilakukan 3 kali dalam sehari dengan interval waktu antar pemberian 3 hari sekali, dan tingkat pemberian pakan 10% dari bobot tubuh. Bobot total ikan diukur setiap 2 minggu. Kelangsungan hidup dan proksimat daging ikan dianalisis pada akhir penelitian. Penggunaan dosis rGH tersebut berdasarkan hasil penelitian Safir (2012) yang diuji pada benih ikan gurame. Hasil yang terbaik diperoleh menggunakan dosis 3 mg/kg pakan, dengan protokol pemberian dengan interval waktu 3 hari. Parameter yang di ukur Parameter yang di ukur pada penelitian ini yaitu:

12 1. Laju pertumbuhan spesifik (Busacker et al. 1990) LPS (%) = Wt Wo t LPS

: bobot rerata ikan pada akhir percobaan (g) : bobot rerata ikan pada awal percobaan (g) : lama waktu pemeliharaan (hari) : Laju pertumbuhan spesifik (%)

2. Tingkat kelangsungan hidup (Effendie 1987)

KH Nt No

: tingkat kelangsungan hidup ikan (%) : Jumlah ikan yang hidup pada akhir percobaan (ekor) : Jumlah ikan yang hidup pada awal percobaan (ekor) Analisis Statistika

Efektivitas perlakuan penyalutan rElGH dan pencampuran langsung ke dalam bahan pakan sebelum dibuat menjadi pelet ditentukan berdasarkan parameter pertumbuhan (bobot, panjang, dan biomassa), jumlah konsumsi dan konversi pakan (TKP), retensi protein dan lemak, kelangsungan hidup (KH); kandungan glikogen hati dan otot, serta glukosa darah. Semua parameter tersebut dianalisis menggunakan metode sidik ragam (ANOVA) dan uji lanjut Tukey dengan bantuan piranti lunak MINITAB 16, dengan faktor pembeda yaitu perlakuan metode penyalutan rElGH berbeda, dan metode pelleting. Kelangsungan hidup dianalisis secara deskriptif. IV HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Pertumbuhan dan kelangsungan hidup Pengaruh pemberian rGH pada pakan buatan dengan menggunakan berbagai bahan penyalut serta metode pelleting memberikan hasil yang berbeda. Efek signifikan (P<0,05) terhadap peningkatan bobot tubuh ikan nila adalah perlakuan dengan menggunakan kuning telur. Pada akhir pemeliharaan rataan bobot tubuh paling tinggi (P<0,05) yang dihasilkan pada perlakuan tersebut dengan dosis pemberian pakan mengandung rElGH 3 mg/kg pakan adalah 1723,1±173,0 g (Tabel 2). Rataan bobot tubuh ikan nila dengan perlakuan penyalutan berbeda dan metode pelleting berturut-turut sebesar (HP55: 1588,9± 49,1 g), (PMC: 1538,4 ± 155,0 g) dan (pelleting: 1543,4 ± 107,0 g). Rataan bobot tubuh paling rendah ditemukan pada ikan nila yang diberikan pakan tanpa perlakuan rGH (kontrol).

13 3000.00

Biomassa Total (g)

2500.00 2000.00

Kontrol HP55

1500.00

PMC

1000.00

Kuning Telur 500.00

Pelleting

0.00 0

Gambar 3

2

4 6 Minggu Ke

8

Pertumbuhan ikan nila (Oreochromis niloticus) yang diberi perlakuan pakan mengandung rElGH yang disalut menggunakan berbagai bahan serta metode pelleting dengan dosis yang sama, dan frekuensi pemberian 3 kali dengan interval waktu 3 hari.

Pada Tabel 2 terlihat bahwa laju pertumbuhan spesifik (LPS) yang diperoleh dari semua perlakuan yang menggunakan metode penyalutan memberikan perbedaan yang signifikan secara statistik (P<0,05) dibandingkan dengan kontrol. Perlakuan rElGH yang disalut menggunakan kuning telur memiliki nilai tertinggi sebesar (46,85%), dan kemudian berturut-turut perlakuan yang disalut dengan HP55 (32,50%), PMC (27,99%), dan pelleting (26,64%). Sementara itu LPS perlakuan yang menggunakan metode pelleting tidak berbeda nyata dengan kontrol (P>0,05). Selanjutnya untuk kelangsungan hidup (KH) pada semua perlakuan baik perlakuan yang menggunakan metode penyalutan maupun dengan menggunakan metode pelleting menunjukkan perbedaan yang signifikan dengan kontrol (P<0,05). Sementara itu TKP pada semua perlakuan secara statistik tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan dengan kontrol (P>0,05). Tabel 2 Biomassa panen, laju pertumbuhan spesifik (LPS), kelangsungan hidup (KH), ikan nila yang diberi perlakuan hormon pertumbuhan rekombinan ikan kerapu kertang (rElGH) yang dipelihara selama 2 bulan Perlakuan

KH (%)

Biomassa (g)

LPS

Kontrol

93,07 ± 0,71b

1262,2 ± 96,4b

1,43 ± 0,08b

HP55

97,33 ± 0,53a

1588,9 ± 49,1ab

1,77 ± 0,04a

PMC

96,27 ± 0,71a

1538,4 ± 155,0ab

1,77 ± 0,13a

Kuning Telur

97,07 ± 0,27a

1723,1± 173,0a

1,92 ± 0,08a

Pelleting

96,80 ± 0,46a

1543,4 ± 107,0ab

1,69 ± 0,15ab

Keterangan: nilai yang ditampilkan dalam bentuk rerata ± simpangan eror dari 3 ulangan. Huruf superskrip yang berbeda pada baris yang sama adalah berbeda nyata secara statistik (P<0,05).

14 Biomassa ikan perlakuan yang disalut menggunakan kuning telur menunjukkan perbedaan yang signifikan (P<0,05) dengan kontrol, tetapi biomassa ikan perlakuan yang disalut menggunakan kuning telur tidak berbeda dengan perlakuan penyalutan lainnya (P>0,05). Kelangsungan hidup (KH) ikan nila yang diberi perlakuan rElGH dengan penyalut berbeda dan pelleting lebih tinggi (P<0,05) daripada kontrol (Tabel 2). Konversi pakan, retensi protein, retensi lemak, dan komposisi tubuh Perlakuan rGH meningkatkan konversi pakan, retensi protein dan retensi lemak, hal ini tercermin pada hasil analisis statistik (Tabel 3), di mana semua perlakuan yang menggunakan metode penyalutan dan metode pelleting memberikan efek yang signifikan (P<0,05). Perlakuan rGH yang disalut menggunakan kuning telur memiliki nilai tertinggi (21,53±0,46). Sementara itu nilai retensi lemak menunjukkan hasil yang berbeda pula, pada perlakuan rGH yang disalut menggunakan PMC menurun dan berbeda nyata (P<0,05) dengan perlakuan yang lain (Tabel 3). Terlihat juga bahwa nilai retensi lemak metode penyalutan satu dengan yang lainnya tidak berbeda dengan kontrol (P>0,05). Tabel 3 Tingkat konversi pakan (TKP), retensi protein dan retensi lemak, ikan nila yang diberi perlakuan hormon pertumbuhan rekombinan ikan kerapu kertang (rElGH) yang dipelihara selama 2 bulan Parameter uji TKP Retensi Protein (%) Retensi Lemak (%)

Perlakuan Kontrol 3,01 ± 0,19a 18,62±1,06a 25,79±1,78a

HP55

PMC

Kuning Telur

Pelleting

2,70 ± 0,07a

2,86 ± 0,29a

2,46 ± 0,11a

2,59 ± 0,14a

19,71±2,38a

20,39±2,20a

21,53±0,46a

21,66±2,86a

26,55±1,84a

11,52±2,7b

22,58±1,34a

24,78±0,74a

Keterangan: TKP (tingkat konversi pakan). Nilai yang ditampilkan dalam bentuk rerata ± simpangan eror dari 3 ulangan. Huruf superskrip yang berbeda pada baris yang sama adalah berbeda nyata secara statistik (P<0,05). Komposisi kimiawi dari ikan sebelum dan sesudah perlakuan dapat dilihat pada Tabel 4. Kandungan protein semua ikan perlakuan rElGH lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol dan ikan awal (sebelum perlakuan). Sebaliknya, kandungan lemak ikan kontrol lebih tinggi dibandingkan ikan perlakuan serta ikan sebelum perlakuan kecuali pada perlakuan menggunakan metode pelleting yang relatif sama. Perubahan komposisi tubuh akibat pemberian rEIGH pada organisme tergantung pada jenis ikan, ukuran ikan, kandungan nutrisi pakan yang diberikan dan kondisi lingkungan yang mempengaruhi proses metabolisme ikan.

15 Tabel 4 Proksimat (% bobot basah) tubuh benih ikan nila pada awal dan akhir percobaan Karbohidrat Kadar Kode sampel Protein Lemak Serat Abu BETN Kasar Ikan awal 20,88 51,68 13,31 0,00 14,13 Kontrol 19,99 56,74 17,65 0,54 5,09 HP55 19,92 58,06 15,66 0,60 5,75 PMC 21,31 61,48 11,21 0,49 5,51 Kuning telur 20,81 58,13 14,33 0,47 6,26 Pelleting 19,78 57,86 17,03 0,51 4,82 Keterangan: Ikan awal; Ikan sebelum diberi pakan perlakuan, ikan perlakuan; ikan yang diberi pakan perlakuan dosis 3 mg/kg pakan (Pakan+rElGH+bahan penyalutan serta metode pelleting). Kadar glukosa darah Kadar glukosa darah pada ikan nila yang dipelihara selama 2 bulan dapat dilihat pada Tabel 5. Kadar glukosa ikan nila yang diberi perlakuan rGH yang disalut dengan menggunakan bahan berbeda (kuning telur ayam, HP55 dan PMC) serta metode pelleting adalah sama dengan kontrol (P>0,05). Tabel 5 Kadar glukosa darah, ikan nila yang diberi perlakuan hormon pertumbuhan rekombinan ikan kerapu kertang (rElGH) yang dipelihara selama 2 bulan Parameter uji Glukosa darah

Perlakuan Kontrol 17,63 ± 2,04

HP55 ab

20,81 ± 1,64

PMC a

18,21±1.23

Kuning Telur ab

17,34 ±2,45

ab

Pelleting 11,85 ± 2,05b

Keterangan: nilai yang ditampilkan dalam bentuk rerata ± simpangan eror dari 3 ulangan. Huruf superskrip yang sama pada baris yang sama adalah tidak berbeda nyata secara statistik (P>0,05). Kadar glikogen otot dan hati Kadar glikogen otot dan hati ikan nila yang dipelihara dengan pemberian rGH pada pakan dengan menggunakan bahan penyalut serta metode yang berbeda, yang kemudian dilakukan uji kadar glikogen otot dan hati disajikan pada Tabel 6. Kadar glikogen hati ikan nila yang mengkonsumsi pakan rGH yang disalut menggunakan kuning telur lebih tinggi (P<0,05) dibandingkan dengan kontrol dan perlakuan lain, sementara kadar glikogen otot ikan nila yang mengkonsumsi pakan rGH yang disalut menggunakan PMC menghasilkan kadar glikogen otot lebih tinggi (P<0,05) dibandingkan dengan perlakuan yang menggunakan metode HP55 dan pelleting. Selanjutnya, kadar glikogen otot ikan nila yang mengkonsumsi pakan rGH yang disalut dengan PMC, kuning telur dan kontrol adalah sama (P>0,05).

16 Tabel 6 Kadar glikogen hati dan otot, ikan nila yang diberi perlakuan hormon pertumbuhan rekombinan ikan kerapu kertang (rElGH) yang dipelihara selama 2 bulan Parameter uji Glikogen Hati Glikogen Otot

Perlakuan Kontrol

HP55

PMC

Kuning Telur

Pelleting

0,734± 0,692b

0,551± 0,196b

0,459±0,102b

3,566± 0,992a

0,470± 0,064b

1,570±0,631ab

1,121± 0,255b

2,629±0,353a

1,755±0,169ab

0,806± 0,270b

Keterangan: nilai yang ditampilkan dalam bentuk rerata ± simpangan eror dari 3 ulangan. Huruf superskrip yang berbeda pada baris yang sama adalah berbeda nyata secara statistik (P<0,05). Pembahasan Pertumbuhan dan kelangsungan hidup (KH) Kecepatan tumbuh ikan dipengaruhi oleh empat faktor utama yaitu, lingkungan, nutrisi, faktor endogen (fisiologis), dan faktor genetik. Faktor-faktor ini bekerja secara simultan dan saling berinteraksi dalam mengontrol kecepatan tumbuh (Sumpter, 1992). Faktor yang cukup besar pengaruhnya terhadap pertumbuhan adalah faktor fisiologis (regulasi hormon), hal ini terutama terkait dengan hormon pertumbuhan (GH). Hormon ini dapat meningkatkan enzim ornithine decarboxylase (ODC), yang berfungsi sebagai katalisator pada biosintesis polyamine yang penting untuk pembentukan makromolekul seperti DNA, RNA, dan protein (Sumpter, 1992). Peningkatan pertumbuhan ikan nila melalui pemberian rGH pada pakan juga sudah pernah dilaporkan sebelumnya oleh (Hardiantho et al. 2011; Handoyo 2012; Safir 2012). Pada penelitian ini, pemberian rGH melalui pakan dengan metode penyalutan secara signifikan dapat meningkatkan laju pertumbuhan sebesar 46,85% dibandingkan dengan kontrol. Selain itu, pemberian rElGH juga meningkatkan biomassa total dibandingkan dengan kontrol (Tabel 2). Penelitian mengenai peran GH dalam mempengaruhi pertumbuhan sudah banyak dilakukan. Hal ini kemudian memunculkan kontroversi bahwa peran GH dalam pertumbuhan diketahui adanya mekanisme secara langsung dan tidak langsung yang berimplikasi terhadap pertumbuhan ikan. Dengan menggunakan western blot, Habibi et al. (2003) melaporkan keberadaan hGH pada jaringan lambung serta dalam serum setelah 30 menit dari intubasi pada ikan rainbow trout tidak ada jejak dari hGH yang bisa terdeteksi setelah setelah 90 menit pemberian, ini menunjukkan penyerapan hGH yang cepat pada ikan rainbow trout. Selain itu tidak ada imunoreaksi hGH yang terdeteksi pada jaringan lain termasuk usus tengah, otot, dan hati setelah diuji. Dengan demikian, diduga rGH diserap di lambung karena lambung merupakan sentral atau pusat pencernaan. Pada penelitian ini adanya proses dinamisasi yang menarik yaitu ketika pada akhir penelitian kendati ikan perlakuan tidak lagi diberikan pakan yang menggandung rGH, akan tetapi ikan perlakuan masih memperlihatkan pertumbuhan yang lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol. Hal ini juga menunjukkan bahwa pemberian rGH harus dilakukan dalam proses penyalutan

17 dan metode yang tepat untuk mendapatkan efek pertumbuhan yang optimum. Merujuk pada hasil analisis statistik bahwa pemberian rGH melalui pakan pada penelitian ini memperlihatkan taraf signifikan (P<0,05) untuk kelangsungan hidup pada perlakuan penyalutan dibandingkan dengan kontrol (Tabel 2). Secara rerata, KH perlakuan rElGH yang disalut menggunakan HP55 (97,33%), kuning telur (97,07%), PMC (96,27%), dan pelleting (96,80%) dari hasil terlihat semua perlakuan lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol (93,07%). Peningkatan kelangsungan hidup pada ikan yang diberi perlakuan rGH membuktikan bahwa rGH mampu meningkatkan kekebalan tubuh/imunitas pada ikan dari stres akibat kondisi lingkungan yang tidak sesuai. Rerata KH yang relatif lebih tinggi pada ikan yang diberi perlakuan rGH juga telah dilaporkan oleh peneliti sebelumnya, seperti Hardianto et al. (2011) melaporkan terjadi peningkatkan KH pada benih ikan nila, Handoyo (2012) melaporkan terjadi peningkatan KH pada benih ikan sidat (Anguilla sp.), dan Safir (2012) melaporkan terjadi peningkatan KH pada ikan gurame yang diberi pakan mengandung rElGH. Dengan demikian, metode penyalutan dengan menggunakan berbagai bahan serta metode pelleting tidak berpengaruh negatif terhadap kelangsungan hidup ikan. Kelangsungan hidup yang tinggi pada ikan perlakuan rElGH ini merupakan hal yang baik bagi dunia akuakultur, karena hal tersebut akan berdampak pada peningkatan produktivitas. Pada penelitian ini biomassa tertinggi diperoleh pada perlakuan rElGH yang disalut dengan kuning telur ayam. Beberapa penelitian menunjukkan bahwa GH secara langsung mampu meningkatkan sel-sel yang berkompeten dalam sistem kekebalan tubuh/imunitas seperti limfosit, natural killer cell (NK cell), dan makrophages (Kelley 1989; Gala 1991). Meningkatkan resistensi terhadap infeksi bakteri Vibrio anguillarum melalui peningkatan aktivitas fagositosis (Sakai et al. 1997). GH juga mampu meningkatkan produksi superoxide anion dalam leukosit dan mitogenesis leukosit (Sakai et al. 1996). Pada ikan gilthead sea bream (Sparus aurata) dan silver sea bream (Sparus sarba) GH mampu menstimulasi lymphopoiesis dan fagositosis (Harris & Bird 2000). Pada ikan gilthead sea bream (Sparus aurata) juga terdeteksi adanya reseptor GH pada limfosit dan monosit yang menunjukkan bahwa GH secara langsung berhubungan dengan sistem imunitas (Calduch-Giner et al. 1995). Konversi pakan, retensi protein dan lemak Ikan perlakuan yang diberi pakan mengandung rElGH dengan menggunakan bahan penyalut berbeda memperlihatkan nilai tingkat konversi pakan cenderung menurun serta nilai retensi proein yang miningkat dibandingkan dengan kontrol (P>0,05) (Tabel 3). Hal ini menunjukkan bahwa pakan rGH diberikan yang disalut menggunakan berbagai bahan penyalut efektif melindungi rGH, sehingga rGH yang diberikan tidak rusak dan dapat dimanfaatkan oleh ikan nila untuk bekerja didalam sistem biologis ikan. Peran rGH dalam proses pencernaan telah ditunjukkan juga pada ikan transgenik, tetapi mekanisme belum diketahui dengan baik (Devlin et al. 2004). Pada penelitian sebelumnya, peningkatan konversi pakan terkait dengan peningkatan nafsu makan (apetite), akibat pemberian rGH. Stimulasi tersebut dipengaruhi oleh hormon ghrelin yang

18 meningkat akibat stimulasi hormon pertumbuhan (Volkaff et al. 2005; Debnanth 2010). Kadar protein dan energi setiap perlakuan pada pakan yang digunakan adalah sama. Tingkat retensi protein juga sama antar perlakuan dan kontrol. Kadar energi pakan perlakuan dan kontrol relatif sama. Pakan kontrol memiliki energi 2543.06 kkal DE/kg pakan, sedangkan pakan yang disalut atau pakan perlakuan berturut-turut: HP55 2458.00, PMC 2601.19, kuning telur 2523.19, dan pelleting 2687.00 kkal DE/kg pakan (Tabel 1). Dengan demikian perbedaan konversi pakan secara signifikan dan kecenderungan peningkatan retensi protein berperan besar dalam meningkatkan pertumbuhan ikan yang diberi rElGH dibandingkan dengan kontrol. Pengaruh pertumbuhan pada ikan yang diberikan rGH dapat diduga karena rGH mampu bekerja sebagaimana fungsinya yaitu berperan penting pada metabolisme protein, lipid, dan karbohidrat (Bowen 2006). hal yang serupa juga disampaikan oleh Guyton (1994) bahwa GH berperan dalam meningkatkan protein tubuh, menggunakan lemak dari tempat penyimpanannya dan menghemat karbohidrat. Naiknya kecepatan pertumbuhan itu mungkin terutama disebabkan oleh naiknya kecepatan sintesis protein. Selanjutnya Guyton (1994) menyatakan bahwa penyebab utama kenaikan penyimpanan protein yang disebabkan hormon pertumbuhan tidak diketahui, namun ada serangkaian efek yang berbeda telah diketahui, yang semuanya dapat menjadi penyebab naiknya jumlah protein. Efeknya adalah bertambahnya pangangkutan asam amino melewati membran sel, bertambahnya sintesis protein oleh ribosom, peningkatan transkripsi DNA untuk membentuk RNA, dan penurunan katabolisme protein dan asam amino. Hal yang serupa juga telah dilaporkan oleh peneliti sebelumnya bahwa pemberian rGH dari luar juga dapat mempengaruhi lipolisis dan glukoneogenesis (O'Connor et al. 1993). GH juga berpengaruh dalam sintesa protein dan omset lipid (Oommen & Johnson, 1998; Fauconneau et al. 1996). Akibatnya, ikan yang diberi perlakuan GH dari luar (eksogen) memiliki kemampuan lebih besar untuk mencerna makanan, menyerap nutrisi, dan mengkonversi lebih besar proporsi makanan untuk membentuk komposisi tubuh ikan, sehingga dapat berpengaruh terhadap peningkatan efisiensi pemberian pakan. Selain itu (Pell et al. 1990; Johnsson et al. 1987) juga melaporkan bahwa pemberian rGH dapat meningkatkan sintesis protein dan menurunkan sintesis lemak pada mamalia dan menstimulasi anabolisme dalam meningkatkan penggantian dan sintesis protein pada ikan, yang terjadi pada hati dan otot dengan menstimulasi efisiensi dari translasi ribosom melalui peningkatan konsentrasi mRNA dan ribosom (Foster et al. 1991; Herbert et al. 2001). Kandungan lemak yang kurang pada tubuh ikan perlakuan diduga berkaitan dengan aktivitas enzim lipase, sesuai yang dikemukakan oleh Irmawati et al. (2012) bahwa aktivitas enzim lipase ikan gurame yang diberi rGH lebih tinggi dibandingkan dengan ikan kontrol. Perubahan utilisasi dari karbohidrat menjadi lemak oleh GH menjadi energi dilakukan dengan merangsang pemecahan trigliserida dan proses oksidasi lemak dari jaringan. Oleh karena itu GH mencegah penimbunan lemak di jaringan sehingga turut mempengaruhi komposisi lemak tubuh dan pertumbuhannya pada otot (Gardner dan Shoback 2007; Møller dan Jørgensen 2009). Hormon pertumbuhan mempunyai efek yang spesifik dan menyebabkan pelepasan asam lemak dari jaringan lemak, sehingga dapat menaikkan konsentrasi asam lemak dalam cairan tubuh. Selain itu di dalam

19 jaringan, hormon pertumbuhan meningkatkan perubahan asam lemak menjadi asetil-KoA dan kemudian digunakan untuk energi. Guyton (1994) melaporkan bahwa pengaruh pemberian hormon pertumbuhan pada tikus, maka tikus perlakuan lebih disukai memakai lemak sebagai energi daripada karbohidrat dan protein. Ditambahkan oleh O’Connor et al. (1993) bahwa rGH dapat menstimulasi lipolisis pada beberapa jenis spesies ikan seperti ikan rainbow trout. Kandungan protein yang lebih rendah pada kontrol diduga meningkatnya proses anabolisme dalam tubuh untuk memperbaiki sel-sel yang rusak untuk kelangsungan hidup. Hal tersebut terlihat dari kelangsungan hidup dan pertumbuhan yang lebih rendah pada ikan kontrol. Hal tersebut juga menunjukkan bahwa efek langsung yang dihasilkan oleh hormon pertumbuhan rekombinan (rGH) adalah berfungsi pada organ sasarannya atau berkaitan langsung dengan reseptor di sel target, dan berpengaruh terhadap hampir seluruh dari jaringan tubuh (Guyton 1994). Glukosa darah Hormon pertumbuhan memiliki 3 pengaruh utama terhadap metabolisme glukosa di dalam sel yaitu mengurangi pemakaian glukosa untuk mendapatkan energi, meningkatkan pengendapan glikogen di dalam sel, dan mengurangi penyerapan glukosa oleh sel (Guyton 1994). sedangkan (Ganong 2002) menyatakan bahwa pemberian hormon pertumbuhan menurunkan responsivitas terhadap insulin. Kemampuan ikan dalam memanfaatkan karbohidrat dalam pakan sangat bergantung pada kompleksitas karbohidrat, sifat fisik, dan kadar karbohidrat dalam pakan. Kemampuan ini dapat dilihat dari sistem pencernaan dan sistem metaboliknya. Kemampuan sistem metabolik menggambarkan kemampuan ikan dalam memanfaatkan karbohidrat terabsorbsi (terutama dalam bentuk glukosa), hal ini diduga kuat kaitannya dengan rGH yang diberikan pada ikan. Untuk masuk ke dalam sel, glukosa perlu dibantu oleh insulin. Efek tidak langsungnya GH yaitu melalui perantara insulin like growth factor-1 (IGF-1), yang merupakan suatu hormon yang disekresi oleh hati dan jaringan lain yang berespon terhadap pemacuan pertumbuhan, sehingga keberhasilan GH sebenarnya tergantung pada aksi IGF-1 di sel target (Bowen 2006). Matthews et al. (2003) mengemukakan bahwa peningkatan kadar glukosa darah yang berlangsung cepat dapat memicu bioaktivitas insulin pada tingkat tertinggi, sehingga pemasukan glukosa darah ke dalam sel berlangsung dengan cepat dan kadar glukosa dalam darah segera menurun. Ketersediaan glukosa dalam sel, digunakan untuk memenuhi kebutuhan fisiologis tubuh dan kebutuhan energi, setelah terpenuhi pemasukan glukosa yang tinggi akan merangsang terjadinya proses glikogenesis dan lipogenesis (Stryer, 2000). Rendahnya kadar glukosa darah pada pakan ikan yang megandung rGH menunjukkan turnover rate glukosa lebih cepat. Pada ikan yang mengkonsumsi pakan tanpa pemberian rGH, metabolisme karbohidrat berlangsung dengan lambat sehingga menambah pool glukosa darah. Shimeno et al. (1993) juga melaporkan adanya adaptasi metabolik ikan nila terhadap karbohidrat pakan. Hal ini menegaskan bahwa penambahan rEIGH pada pakan ikan akan memperlambat proses glikolisis dan lipogenesis serta menekan degradasi asam amino dan glukoneogenesis pada hati. Pada ikan karnivora, proses

20 glukoneogenesis merupakan proses utama untuk memenuhi kebutuhan glukosa tubuh dan proses ini tetap aktif pada glukosa tinggi (Fu & Xie 2004). Glikogen hati dan otot Kadar glikogen hati tertinggi diperoleh pada perlakuan penyalutan dengan kuning telur. Glikogen berfungsi sebagai cadangan energi, dan hal ini diduga terkait kuat dengan tingginya laju pertumbuhan pada ikan nila yang diberi perlakuan rGH yang menggunakan bahan penyalut kuning telur. Menurut Turner dan Bagnara (1976) bahwa hal ini terjadi akibat dari pemberian GH pada pakan sehingga hewan mampu untuk meningkatkan mobilitas glikogen didalam tubuhnya. Glikogen merupakan salah satu bentuk simpanan energi di dalam tubuh yang dapat dihasilkan melalui konsumsi karbohidrat yang terdapat didalam pakan dan merupakan salah satu sumber energi utama yang digunakan oleh tubuh pada saat terjadinya fitnes. Glikogen merupakan bentuk simpanan karbohidrat di dalam hati dan otot. Hal ini menegaskan bahwa penambahan rEIGH pada pakan ikan akan memperlambat proses glikolisis dan lipogenesis serta menekan degradasi asam amino dan glukoneogenesis pada hati. Pada ikan karnivora, proses glukoneogenesis merupakan proses utama untuk memenuhi kebutuhan glukosa tubuh dan proses ini tetap aktif pada glukosa tinggi (Fu & Xie 2004). Glikogen yang terdapat di dalam otot hanya dapat digunakan untuk keperluan energi di dalam otot tersebut dan tidak dapat dikembalikan ke dalam aliran darah dalam bentuk glukosa apabila terdapat bagian tubuh lain yang membutuhkannya, hal ini mengindikasi bahwa kontribusi glikogen terhadap pengeluaran energi total sangat kecil, hanya terlibat langsung pada aktivitas otot sehingga mobilisasi glikogen hanya berhubungan dengan peningkatan otot (Navarro & Gutieerrez 1995). Berbeda dengan glikogen hati dapat dikeluarkan apabila terdapat bagian tubuh lain yang membutuhkan. Glikogen yang terdapat di dalam hati dapat dikonversi melalui proses glycogenolysis menjadi glukosa dan kemudian dapat dibawa oleh aliran darah menuju bagian tubuh yang membutuhkan seperti otak, sistem saraf, jantung, otot dan organ tubuh lainnya. V KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan Dari hasil percobaan ini dapat disimpulkan bahwa pemberian rElGH melalui pakan dengan menggunakan bahan penyalut berbeda dapat meningkatkan pertumbuhan ikan nila secara signifikan. Bahan penyalutan berupa PMC, kuning telur, serta metode pelleting dapat digunakan sebagai pengganti HP55. Pemberian rElGH mampu menghemat penggunaan pakan dengan menurunkan konversi pakan. Penyalutan rGH dengan bahan berbeda mempengaruhi metabolisme ikan nila, khususnya glukosa darah dan glikogen hati dan otot.

21 Saran Dalam proses penyalutan rGH pada pakan untuk ikan, kuning telur dan PMC dapat digunakan sebagai bahan alternatif pengganti HP55. Pada metode pelleting, PMC dapat digunakan sebagai binder tetapi pada proses pengeringan pakan rGH di dalam oven direkomendasikan menggunakan suhu 60oC. DAFTAR PUSTAKA Acosta JR, Morales R, Morales M, Alonso M, Estrada MP. 2007. Pichia pastoris expressing recombinant tilapia growth hormon accelerates the growth of tilapia. Biotechnol Lett. 29: 1671-1676. Acosta JR, Estrada MP, Carpio Y, Ruiz O, Morales R, Martinez E, Valdes J, Borroto C, Besada V, Sanchez A, Herrera F. 2009. Tilapia Somatotropin polypeptides: potent enhancers of fish growth and innate immunity. Biotecnología Aplicada. 26: 267-272. Alimuddin, Lesmana I, Sudrajat AO, Carman O, Faisal I. 2010. Production and bioactivity potential of three recombinant growth hormones of farmed fish. Indonesian Aquaculture Journal. 5: 11-16. Arbuckle WS, Marshall RT. 1996. Ice Cream. 5th Edit. Chapman and Hall Publishing, New York. Arnesen AM, Toften H, Agustsson T, Stefansson SO, Handeland SO, Björnsson BT. 2003. Osmoregulation, feed intake, growth and growth hormone levels in Atlantic salmon (Salmo salar L.) transferred to seawater at different stages of smolt development. Aquaculture. 222:167-187. Bell DD, William DW. 2002. Commerical chicken meat & egg production. CRC Press. 186 hal. Ben-Atia I, Fine M, Tandler A, Funkenstein B, Maurice S,Cavari E and Gertler A 1999. Preparation of recombinant gilthead seabream (Sparus aurata) growth hormone and its use for stimulation of larvae growth by oral administration. Gen Comp Endocrinol. 113: 155–164. Biswas AK, T. Morita, G. Yoshizaki, T. Takeuchi, 2005. Control of reproduction in Nile tilapia (Oreochronis nilocitus L.) by photoperiod manipulation. Aquaculture. 243: 229-239. Björnsson BT, Hemre GI, Bjørnevik M, Hansen T. 2000. Photoperiod regulation of plasma growth hormone levels during induced smoltification of under yearling Atlantic salmon. Gen Comp Endocrinol. 119:17–25. Borgeson TL. 2006. Effect of replacing fish meal with simple or complex mixtures of vegetable ingredients in diets fed to Nile tilapia (Oreochromis niloticus) [Thesis]. Department of Animal and Poultry Science University of Saskatchewan. Saskatoon, Saskatchewan. Bowen R. 2006. Growth Hormone (Somatotropin). http://www.vivo.colostate.edu/hbooks/pathphys/endocrine/hypopit/ gh.html.[15 Februari 2007] Busacker GP, Adelman IR, Goolish EM. 1990. Growth. In: Schreck CB, Moyle PB. (eds.). Methods for Fish Biology. American Fisheries Society. Calduch-Giner JA, Sitia-Bobadilla A, Alvarez-Pellitero P, Perez-Sanchez J, 1995. Evidence for a direct action of GH on haemopoietic cells of a marine fish,

22 the gilthead sea bream (Sparus aurata). Journal Endocrinology. 146:459– 467. Cheng CM. 1995. A Study on a Recombinant Teleostean Growth Hormone [Dissertation]. Maryland: University of Maryland, Baltimore County. Copeland KC. KS Nasir. 1994. Acute growth hormone effects on amino acid and lipid metabolism. Journal Clin Endocrinol Metabol. 78: 1,040-1,047. Debnanth S. 2010. A review on the physiology of insulin like growth factor-I (IGF-I) peptide in bony fishes and its phylogenetic correlation in 30 different taxa of 14 families of teleosts. Advances in Environmental Biology. 5:31-52. Devlin RH, Biagi CA, Yesaki TY, 2004. Growth, viability and genetic characteristics of GH transgenic coho salmon strains. Aquaculture. 236: 607–632. Drennon K, Moriyama K, Kawauchi H, Small B, Silverstein J, Parhar I, Shepherd B. 2003. Development of an enzyme-linked immuno sorbent assay for the measurement of plasma growth hormone (GH) levels in channel catfish (Ictalurus punctatus): assessment of environmental salinity and GH secretogogues on plasma GH levels. Gen Comp Endocrinol. 133:314-322. Effendie, M. 1. 1987. Biologi Perikanan. Bag. I. Study of natural history. Fakultas Perikanan, Institut Pertanian Bogor, Bogor, 150 hal. El-Saidy DMS, Gaber MMA. 2005. Effect of dietary protein levels and feeding rates on growth performance, production traits and body composition of Nile tilapia (Oreochromis niloticus L.) cultured in concrete tanks. Aquaculture. 36: 149-168. El-Sayed AFM. 1999. Alternative dietary protein sources for farmed tilapia (Oreochromis spp). Aquaculture. 179: 149-168. Fauconneau, B., Mady, M.P., Le Bail, P.Y., 1996. Effect of growth hormone on muscle protein synthesis in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) and Atlantic salmon (Salmo salar). Fish Physiology Biochemistry. 15:49–56. Fasaklin EA, Serwata RD, Davies SJ. 2005. Comparative utilization of rendered animal derived products with or without composite mixture of soybean meal in hybrid tilapia (Oreochromis niloticus × Oreochromis mossambicus) diets. Aquaculture. 249: 329-338. Foster AR, Houlhan DF, Gray C, Medalem F, Fauconneau B, Kaushik SJ, LeBail PY. 1991. The effect of ovine growth hormone on protein turnover in rainbow trout. Gen Comp Endocrinol. 82: 111-120. Fu SJ, Xie XJ. 2004. Nutritional homeostasis in carnivorous southern catfish (Silirus meridionalis): is there a mechanism for increased energy expenditure during carbohydrate overfeeding? Comp Biochemical Physiolgy Part A. 130: 359363. Gala RR. 1991. Prolactin and growth hormone in the regulation of the immune system. Proc Sot Exp Biol Med. 198:513-527. Ganong WF. 2002. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi 20. Brahm U. Pendit, Alih Bahasa. H. M. Djauhari Widjajakusumah, Editor. Jakarta: EGC Press Gardner DG, Shoback D. 2007. Greenspan’s Basic and Clinical Endocrinology. 8th ed. San Fransisco: The Mc Graw-Hill Company.

23 Guyton AC. 1994. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi 7 Bagian III. LMA. Ken Ariata Tengadi, Alih Bahasa. Harjanto Efendi, Melfiawati S, Editor. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Habibi HR, Ewing R, Bajwa, Walker RL. 2003. Gastric uptake of recombinant growth hormone in rainbow trout. Fish Physiology and Biochemistry. 28:463– 467. Handoyo B. 2012. Respons benih ikan sidat terhadap hormon pertumbuhan rekombinan ikan kerapu kertang melalui perendaman dan oral [Tesis]. ID: Bogor. Institut Pertanian Bogor. Hardiantho D, Alimuddin, Prasetyo AE, Yanti DH, Sumantadinata K. 2011. Aplikasi Rekombinan Growth Hormon (rGH) Ikan Mas Pada Ikan Nila Melalui Pakan Buatan. Makalah yang disampaikan dalam Pertemuan Broodstock Center Nila & Temu Koordinasi Perekayasa Kementerian Kelautan dan Perikanan pada tanggal 15-17 November 2011. Harris J, Bird DJ. 2000. Modulation of the fish immune system by hormones: mini review. Veterinary Immunology and Immunopathology. 77:163-176. Herbert NA, Armstrong JD, Björnsson BT. 2001. Evidence that growth hormoneinduced elevation in routine metabolism of juvenile Atlantic salmon is a result of increased spontaneous activity. J Fish Biol. 59: 754–757. Irmawati, Alimuddin, Zairin M, Suprayudi MA, Wahyudi AT. 2012. Peningkatan laju pertumbuhan benih ikan gurame (Osphronemus goramy Lac.) yang direndam dalam media yang mengandung hormon pertumbuhan ikan mas. Jurnal Iktiologi Indonesia. 12 (1):13-23. Irmawati, 2013. Respon fisiologi biokimia dan molekuler ikan gurame yang diberi hormon pertumbuhan rekombinan [Disertasi]. ID: Bogor. Institut Pertanian Bogor. Jeh HS, Kim CH, Lee HK, Han K. 1998. Recombinant flounder growth hormone from Escherichia coli: overexpression, efficient recovery, and growth-promoting effect on juvenile flounder by oral administration. Journal Biotechnology. 60:183193. Johnsson ID, Hathom DJ, Wilde RM, Teacher TT, Butler-Hogg BW. 1987. The effect of dose and method of administration of biosynthetic bovine somatotropin on live-weight gain, carcasss composition and wool growth in young lambs. Anim Prod. 44: 405-414. Kelley KW. 1989. Growth hormone, lymphocytes and macrophages. Biochemical Pharmacology. 38:705-713. KKP [Kementerian Kelautan dan Perikanan]. 2010. Rencana strategis Kementerian Perikanan dan Kelautan 2010-2014. Kementerian Kelautan dan Perikanan, Jakarta. Leedom TA, Uchida K, Yada T, Richman NH, Byatt JC, Collier RJ, Hirano T, Grau RG. 2002. Recombinant bovine growth hormone treatment of tilapia: growth response, metabolic clearance, receptor binding and immunoglobulin production. Aquaculture. 207: 359-380. Le Gac F, Blaise O, Fostier A, Le Bail P, Loir M, Mourot B, Weil C. 1993. Growth hormone (GH) and reproduction: a review. Fish Physiol Biochem. 11: 219-232.

24 Li WS, D Chen, AOL Wong and HR Lin. 2005. Molecular cloning, tissue distribution and ontogeny of mRNA expression of growth hormone in orangespotted grouper (Epinephelus coioides). Gen Comp Endocrinol. 144: 78-89. Liu S, Zang X, Liu B, Zhang X, Arunakumara K, Zhang X, Liang B. 2007. Effect of growth hormone transgenic Synechocystis on growth, feed efficiency, muscle composition, haematology and histology of turbot (Scophthalmus maximus L.). Aquaculture Research. 38:1283-1292. Lovell RT. 1988. Nutrition and feeding of fish. Van Nostrand Reinhold. New York. Matthews JO, AD Higbie, LL Southern, DF Coombs, TD Bidner & RL Odgaard. 2003. Effect of chromium propionate and metabolizable energy on growth, carcass trait and pork quality of growing-finishing pigs. Animal Science. 81:191– 196. McLean E, Devlin RH, Byatt JC, Clarke WC, Donaldson EM. 1997. Impact of a controlled release formulation of recombinant bovine growth hormone upon growth and seawater adaptation in coho and chinook salmon. Aquaculture. 156:113-128. Møller N, Jørgensen JOL. 2009. Effects of growth hormone on glucose, lipid, and protein metabolism in human subjects. Endocr Rev. 30:152–177. Moriyama S, Kawauchi H. 1990. Growth stimulation of juvenile salmonids by immersion in recombinant salmon growth hormon. Nippon Suisan Gakkaishi. 56: 31-34. Moriyama S, Hiroshi Y, Seiji S, Toshio A, Tetsuya H, Hiroshi K. 1993. Oral administration of recombinant salmon growth hormone to rainbow trout, (Oncorhynchus mykiss). Aquaculture. 112: 99-106. Moriyama S, Kawauchi H. 2000. Growth regulation by growth hormone and insulin-like growth factor-I in teleosts. Outsuchi Mar Sci. 26: 23-27. NRC [National Research Council]. 1983. Nutrient requirements of warm water fishes and shellfish; Revised Edition. Washington DC: National Academic Press. Navarro I, Gutierrez J, 1995. Fasting and starvation. In: Hochachka PW, Mommsen T, editors. Biochemistry and Molecular Biology of Fishes. Amsterdam: Elsevier Science B.V; pp 393-434. Nordgarden U, Hansen T, Hemre GI, Sundby A, Björnsson BT. 2005. Endocrine growth regulation of adult Atlantic salmon in seawater: the effects of light regime on plasma growth hormone, insulin-like growth factor-I, and insulin levels. Aquaculture. 250:862-871. Ohlsson C, Mohan S, Sjogren K, Tivesten A, Isgaard J, Isaksson O, Jansson JO, Svensson J. 2009. The role of liver-derived insulin-like growth factor-I: review. Endocrine Reviews. 30:494–535. O'Connor PK, Reich B, Sheridan MA. 1993. Growth hormone stimulates hepatic lipid mobilization in rainbow trout, Oncorhynchus mykiss. Journal Comp Physiol. 163: 427–431. Oommen OV, Johnson B. 1998. Metabolic effects of ovine growth hormone in a teleost, Anabas testudineus. Annuals of the New York Academy of Sciences. 839:380–381. Pell JM, Elock C, Harding RL, Morrell DJ, Simmonds AD, Wallis M. 1990. Growth, body composition, hormonal and metabolic status in lambs treated longterm with growth hormone. Br Journal Nutr. 63: 431-445.

25 Pena-Mendoza B, Gomez-Marquez JL, Solgado-Ugarate IH, Ramirez-Noguora D. 2005. Reproductive biology of Oreochromis nilocitus (Perciformes: Cichlidae) at Emiliano Zapata dam, Morelos, Mexico. Rev Biol. 53: 515-522. Perez-Sanches J. 2000. The involvement of growth hormone in growth regulation, energy homeostasis and immune function in the gilthead sea bream (Sparus aurata): a short review. Fish Physiol Biochem. 22: 135-144. Poen S. 2009. Cloning, over-expression and characterization of growth hormone from stripped catfish (Pangasianodon hypophthalmus) [Thesis]. Master of Science (Genetic Engineering) Graduate School, Kasetsart University. Pozios KC, Ding J, Degger B, Upton Z, Duan C. 2001. IGFs stimulate zebrafish cell proliferation by activating MAP kinase and PI3-kinase-signaling pathways. American Journal of Physiology Regulatory Integrative and Comparative Physiology. 280: 1230-1239. Putra HGP. 2011. Pertumbuhan dan kelangsungan hidup ikan gurame yang diberi protein rekombinan GH melalui perendaman dengan dosis berbeda [Skripsi]. ID: Bogor. Institut Pertanian Bogor. Promdonkoy B, Warit S, Panyim S. 2004. Production of a biologically active growth hormon from giant catfish (Pangasianodon gigas) in Escherichia coli. Biotechnology Letters. 26: 649-653. Ryynanen HJ, Primmer CR. 2006. Varying signals of the effects of natural selection during teleost growth hormone gene evolution. Genome. 49: 42-53. Safir M. 2012. Respons benih ikan gurame (Osphronemus goramy) yang diberi hormon pertumbuhan rekombinan melalui oral pada dosis berbeda [Tesis]. ID: Bogor. Institut Pertanian Bogor. Sakai, M. Kobayashi, M. and Kawauchi. H. 1996. In-vitro activation of fish phagocytic cells by growth hormone, prolactin and somatolactin. Journal Endocrinology. 151:1l3-118. Sakai M, Kajita Y, Kobayashi M, Kawauchi H. 1997. Immunostimulating effect of growth hormone: in-vivo administration of growth hormone in rainbow trout enhances resistence to Vibrio anguillarum infection. Veterinary Immunology and Immunopathology. 57: 17-152. Sakamoto T, Shepherd BS, Madsen SS, Nishioka RS, Siharath K, Richman NH, Grau EG. 1997. Osmoregulatory actions of growth hormone and prolactin in an advanced teleost. Gen Comp Endocrinol. 106: 95-101. Sanchez JP, Pierre YLB. 1999. Growth hormone axis as marker of nutritional status and growth performance in fish. Aquaculture. 177: 117–128. Sekine S, Mizukami T, Nishi T, Kuwana Y, Saito A, Sato M, Itoh S, Kawauchi H.1985. Cloning and expression of cDNA for salmon growth hormon in Escherichia coli. Proceeding of the National Academy of Sciences of the United States of America. 82: 4306-4310. Silverstein JT, Wolters WR, Shimizu M, Dickhoff WW. 2000. Bovine growth hormone treatment of channel catfish: strain and temperature effects on growth, plasma IGF-I levels, feed intake and efficiency, and body composition. Aquaculture. 190:77-88. Shimeno S, Ming DC, Takeda M. 1993.Metabolic respon to dietary carbihidrate to lipid ratios in Oreochromis niloticus. Nippon Suisan Gakkasishi. 59: 827-833.

26 Shimizu M, Fukada H, Hara A, Dickhoff WW. 2007. Response of the salmon somatotropic axis to growth hormone administration under two different salinities. Aquaculture. 273: 320–3281. Shin-Etsu. 2002. USP Hypromellose Phthalate HPMCP. Tokyo: Japan. Stryer, L. 2000. Biokimia. Tim penerjemah bagian biokimia FKUI. Penterjemah; Soebianto SZ, Setiadi E., Editor. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Terjemahan dari: Biochemistry. Jakarta. Sumpter JP. 1992. Plasma growth hormone levels during sexual maturation in diploid and triploid rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). Gen Comp Endocrinol. 83(1): 103-10. Suprayudi MA, Bintang M, Takeuchi T, Mokoginta I, Toha S. 1999. Defatted soybean meal as an alternative source to substitusi fish meal in the feed of giant gouramy (Osphronemus gouramy Lac). Suisanzozhoku. 47:551-557. Suprayudi MA, Takeuchi T, Mokoginta I, Kartikasari T. 2000. The effect of additional arginine in the high defatted soybean meal diet on the growth of giant gouramy (Osphronemus gouramy Lac.). Fisheries Science. 13:178 - 187. Suprayudi, MA, 2010. Bahan Baku Pakan Lokal. Tantangan dan Harapan Akuakultur Indonesia. Disampaikan dalam: Simposium Nasional Bioteknologi Akuakultur III. IPB International Convention Center. Bogor. Syazili A, Irmawati, Alimuddin, Sumantadinata K. 2011. Kinerja pertumbuhan dan kelangsungan hidup juvenil ikan gurame direndam hormon pertumbuhan rekombinan dengan frekuensi berbeda. Jurnal Akuakultur Indonesia: 10 (in press). Tahoun AMA. 2007. Studies on some factors affecting the production and reproduction of Nile tilapia [Dissertation]. Egypt: University of Kafr El-sheikh. Takeuchi T. 1988. Laboratory work chemical evaluation of dietary nutrients. P. 179-233. In: Watanabe T. (ed.). Fish Nutrition and Mariculture. JICA textbook. The General Aquaculture Course. Japan. Tsadik GG, Bart AN. 2007. Effects of feeding, stocking density and waterflowrate on fecundity, spawning frequency and egg quality of Nile tilapia (Oreochromis niloticus L.). Aquaculture. 272: 380-388. Tsai HJ, Chen HM, Lo CF. 1994. Secretory synthesis of active recombinant fish growth hormon by insect cells using a baculovirus vector. Can Journal Fish Aquatic Science. 51: 1-7. Turner CD, Bagnara TJ. 1976. General Endocrinology. Sixth Editon. W.B. Sauders Company. Philadelphia. P. 28: 561 – 597. Utomo DSC. 2010. Produksi dan Uji Bioaktivitas Protein Rekombinan Hormon Pertumbuhan Ikan Mas [Tesis]. ID: Bogor. Institut Pertanian Bogor. Van der Kraak G, Rosenblumm PM, Peter RE. 1990. Growth hormone dependent potentiation of gonadotropin stimulated steroid production by ovarian follicles of the goldfish. Gen Comp Endocrinol. 79: 233-239. Volkoff H, Canosa LF, Unniappan S, Cerdá-Reverterfer JM, Bernier NJ, Kelly SP, Peter RE. 2005. Neuropeptides and the control of food intake in fish. General and Comparative Endocrinology. 142:3–19. Wedemeyer GA, Yasutake WT. 1977. Clinical method for the assessment of the effect of environmental stress on fish health. Tech. Pap. Of the U.S. fish and wildlife serv. Washingtong DC.

27 Wong, N.P., R. Jennes, M. Keeny and E.H. Marth. 1988. Fundamental of Dairy Chemistry. An Aspen Publication. 796 hal. Wong AOL, Hong Z, Yonghua J, Wendy K, Ko W. 2006. Feedback regulation of growth hormone and secretion in fish and the emerging concept of intrapituitary feedback loop: review. Comparative Biochemistry and Physiology. 144:284-305. Yada T, Muto K, Azuma T, Hyodo S, Schreck CB. 2005. Cortisol stimulates growth hormone gene expression in rainbow trout leucocytes in vitro. General Comparative Endocrinology. 42: 248-255. Zairin MJr. 2003. Endokrinologi dan perannya bagi masa depan perikanan Indonesia. Orasi Ilmiah Guru Besar Tetap Ilmu Fisiologi Reproduksi dan Endokrinologi Hewan Air Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor 13 September 2003. 45 hal.

28

LAMPIRAN

29 Lampiran 1 Hasil analisis statistik biomassa pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan metode pelleting pada ikan nila. One-way ANOVA: Kontrol, HP-55, PMC, Kuning Telur, Pelleting Source Factor Error Total

DF 4 10 14

SS 338203 463462 801665

S = 215.3

Level Kontrol HP-55 PMC Yolk Pelleting

MS 84551 46346

R-Sq = 42.19%

N 3 3 3 3 3

Mean 1262.2 1588.9 1538.4 1723.1 1543.4

StDev 167.0 85.0 269.2 299.4 185.7

F 1.82

P 0.201

R-Sq(adj) = 19.06% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -------+---------+---------+---------+-(--------*--------) (--------*--------) (--------*---------) (--------*---------) (--------*---------) -------+---------+---------+---------+-1200 1500 1800 2100

Pooled StDev = 215.3 Grouping Information Using Fisher Method Yolk HP-55 Pelleting PMC Kontrol

N 3 3 3 3 3

Mean 1723.1 1588.9 1543.4 1538.4 1262.2

Grouping A A B A B A B B

Means that do not share a letter are significantly different. Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Simultaneous confidence level = 75.51% Kontrol subtracted from: Lower Center Upper ----+---------+---------+---------+----HP-55 -64.9 326.8 718.4 (---------*---------) PMC -115.4 276.3 667.9 (---------*---------) Yolk 69.3 460.9 852.6 (---------*--------) Pelleting -110.4 281.2 672.9 (---------*---------) ----+---------+---------+---------+-----400 0 400 800 HP-55 subtracted from: Lower Center Upper ----+---------+---------+---------+----PMC -442.2 -50.5 341.1 (---------*---------) Yolk -257.5 134.1 525.8 (--------*---------) Pelleting -437.2 -45.6 346.1 (---------*---------) ----+---------+---------+---------+-----400 0 400 800

30 PMC subtracted from: Lower Center Upper ----+---------+---------+---------+----Yolk -207.0 184.6 576.3 (---------*--------) Pelleting -386.7 4.9 396.6 (---------*---------) ----+---------+---------+---------+-----400 0 400 800 Yolk subtracted from: Lower Center Upper ----+---------+---------+---------+----Pelleting -571.4 -179.7 212.0 (---------*--------) ----+---------+---------+---------+-----400 0 400 800

Descriptive Statistics: Kontrol, HP-55, PMC, Kuning Telur, Pelleting Variable Kontrol HP-55 PMC Yolk Pelleting

N 3 3 3 3 3

N* 0 0 0 0 0

Percent 100 100 100 100 100

Mean 1262.2 1588.9 1538 1723 1543

SE Mean 96.4 49.1 155 173 107

StDev 167.0 85.0 269 299 186

Sum 3786.5 4766.8 4615 5169 4630

Minimum 1080.8 1505.5 1303 1405 1408

Q1 1080.8 1505.5 1303 1405 1408

31 Lampiran 2 Hasil analisis statistik laju pertumbuhan spesifik (LPS) pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila. One-way ANOVA: Kontrol, HP-55, PMC, Kuning Telur, Pelleting Source Factor Error Total

DF 4 10 14

SS 0.3698 0.2296 0.5993

S = 0.1515

Level Kontrol HP-55 PMC Yolk Pelleting

MS 0.0924 0.0230

R-Sq = 61.70%

N 3 3 3 3 3

Mean 1.4279 1.7647 1.7176 1.9116 1.6960

F 4.03

P 0.034

R-Sq(adj) = 46.38% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+---------+---------+---------+-------(-------*-------) (-------*------) (-------*-------) (------*-------) (-------*-------) -+---------+---------+---------+-------1.25 1.50 1.75 2.00

StDev 0.1443 0.0648 0.2232 0.1315 0.1504

Pooled StDev = 0.1515 Grouping Information Using Fisher Method Yolk HP-55 PMC Pelleting Kontrol

N 3 3 3 3 3

Mean 1.9116 1.7647 1.7176 1.6960 1.4279

Grouping A A A A B B

Means that do not share a letter are significantly different. Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Simultaneous confidence level = 75.51% Kontrol subtracted from: Lower Center Upper ----+---------+---------+---------+----HP-55 0.0611 0.3367 0.6124 (-------*------) PMC 0.0140 0.2897 0.5653 (-------*-------) Yolk 0.2081 0.4837 0.7593 (-------*-------) Pelleting -0.0076 0.2680 0.5437 (-------*-------) ----+---------+---------+---------+-----0.35 0.00 0.35 0.70 HP-55 subtracted from: PMC Yolk Pelleting

Lower -0.3227 -0.1287 -0.3443

Center -0.0471 0.1470 -0.0687

Upper 0.2286 0.4226 0.2069

----+---------+---------+---------+----(-------*-------) (-------*-------) (-------*-------) ----+---------+---------+---------+-----0.35 0.00 0.35 0.70

32 PMC subtracted from: Yolk Pelleting

Lower -0.0816 -0.2973

Center 0.1940 -0.0216

Upper 0.4697 0.2540

----+---------+---------+---------+----(-------*------) (------*-------) ----+---------+---------+---------+-----0.35 0.00 0.35 0.70

Upper 0.0600

----+---------+---------+---------+----(-------*-------) ----+---------+---------+---------+-----0.35 0.00 0.35 0.70

Yolk subtracted from: Pelleting

Lower -0.4913

Center -0.2157

Descriptive Statistics: Kontrol, HP-55, PMC, Kuning Telur, Pelleting Variable Kontrol HP-55 PMC Yolk Pelleting

N 3 3 3 3 3

N* 0 0 0 0 0

Percent 100 100 100 100 100

Mean 1.4279 1.7647 1.718 1.9116 1.6960

SE Mean 0.0833 0.0374 0.129 0.0759 0.0868

StDev 0.1443 0.0648 0.223 0.1315 0.1504

Sum 4.2838 5.2940 5.153 5.7349 5.0879

Minimum 1.2619 1.7125 1.487 1.7738 1.5588

Q1 1.2619 1.7125 1.487 1.7738 1.5588

33 Lampiran 3 Hasil analisis statistik kelangsungan hidup (KH) pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila. One-way ANOVA: Kontrol, HP-55, PMC, Kuning Telur, Pelleting Source Factor Error Total

DF 4 10 14

SS 36.523 9.387 45.909

S = 0.9688

Level Kontrol HP-55 PMC Yolk Pelleting

MS 9.131 0.939

F 9.73

R-Sq = 79.55%

N 3 3 3 3 3

Mean 93.067 97.333 96.267 97.067 96.800

StDev 1.222 0.924 1.222 0.462 0.800

P 0.002

R-Sq(adj) = 71.38% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+---------+---------+---------+-------(-----*------) (------*-----) (-----*------) (-----*------) (-----*-----) -+---------+---------+---------+-------92.0 94.0 96.0 98.0

Pooled StDev = 0.969 Grouping Information Using Fisher Method HP-55 Yolk Pelleting PMC Kontrol

N 3 3 3 3 3

Mean 97.3333 97.0667 96.8000 96.2667 93.0667

Grouping A A A A B

Means that do not share a letter are significantly different. Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Simultaneous confidence level = 75.51% Kontrol subtracted from: Lower Center Upper -+---------+---------+---------+-------HP-55 2.5041 4.2667 6.0293 (------*------) PMC 1.4374 3.2000 4.9626 (------*------) Yolk 2.2374 4.0000 5.7626 (------*------) Pelleting 1.9707 3.7333 5.4959 (------*------) -+---------+---------+---------+--------2.5 0.0 2.5 5.0 HP-55 subtracted from: PMC Yolk Pelleting

Lower

Center

Upper

-+---------+---------+---------+-------

-2.8293 -2.0293 -2.2959

-1.0667 -0.2667 -0.5333

0.6959 1.4959 1.2293

(------*------) (------*------) (------*------) -+---------+---------+---------+-------

-2.5

0.0

2.5

5.0

34 PMC subtracted from: Lower Center Upper -+---------+---------+---------+-------Yolk -0.9626 0.8000 2.5626 (------*------) Pelleting -1.2293 0.5333 2.2959 (------*------) -+---------+---------+---------+--------2.5 0.0 2.5 5.0 Yolk subtracted from: Pelleting

Lower

Center

Upper

-+---------+---------+---------+-------

-2.0293

-0.2667

1.4959

(------*------) -+---------+---------+---------+-------

-2.5

0.0

2.5

5.0

Descriptive Statistics: Kontrol, HP-55, PMC, Kuning Telur, Pelleting Variable Kontrol HP-55 PMC Yolk Pelleting

N 3 3 3 3 3

N* 0 0 0 0 0

Percent 100 100 100 100 100

Mean 93.067 97.333 96.267 97.067 96.800

SE Mean 0.706 0.533 0.706 0.267 0.462

StDev 1.222 0.924 1.222 0.462 0.800

Sum 279.200 292.000 288.800 291.200 290.400

Minimum 92.000 96.800 95.200 96.800 96.000

Q1 92.000 96.800 95.200 96.800 96.000

35 Lampiran 4 Hasil analisis statistik tingkat konversi pakan (TKP) pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila. One-way ANOVA: Kontrol, HP-55, PMC, Kuning Telur, Pelleting Source Factor Error Total

DF 4 10 14

SS 0.5478 0.9774 1.5252

S = 0.3126

Level Kontrol HP555 PMC Yolk Pelleting

MS 0.1369 0.0977

R-Sq = 35.91%

N 3 3 3 3 3

Mean 3.0055 2.7018 2.8584 2.4619 2.5971

F 1.40

P 0.302

R-Sq(adj) = 10.28% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+---------+---------+---------+-------(-----------*----------) (----------*-----------) (-----------*----------) (----------*-----------) (----------*-----------) -+---------+---------+---------+-------2.10 2.45 2.80 3.15

StDev 0.3416 0.1230 0.5096 0.1884 0.2484

Pooled StDev = 0.3126 Grouping Information Using Fisher Method Kontrol PMC HP55 Pelleting Yolk

N 3 3 3 3 3

Mean 3.0055 2.8584 2.7018 2.5971 2.4619

Grouping A A A A A

Means that do not share a letter are significantly different. Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Simultaneous confidence level = 75.51% Kontrol subtracted from: HP-55 PMC Yolk Pelleting

Lower -0.8725 -0.7159 -1.1124 -0.9772

Center -0.3037 -0.1471 -0.5436 -0.4084

Upper 0.2651 0.4217 0.0252 0.1604

---------+---------+---------+---------+ (---------*--------) (---------*--------) (---------*--------) (--------*---------) ---------+---------+---------+---------+ -0.60 0.00 0.60 1.20

Upper 0.7254 0.3289 0.4641

---------+---------+---------+---------+ (---------*--------) (--------*--------) (--------*---------) ---------+---------+---------+---------+ -0.60 0.00 0.60 1.20

HP-55 subtracted from: PMC Yolk Pelleting

Lower -0.4122 -0.8087 -0.6735

Center 0.1566 -0.2399 -0.1047

36 PMC subtracted from: Yolk Pelleting

Lower -0.9653 -0.8301

Center -0.3965 -0.2613

Upper 0.1723 0.3075

---------+---------+---------+---------+ (--------*---------) (---------*--------) ---------+---------+---------+---------+ -0.60 0.00 0.60 1.20

Yolk subtracted from: Lower Center Upper ---------+---------+---------+---------+ (--------*---------) Pelleting -0.4335 0.1352 0.7040 ---------+---------+---------+---------+ -0.60 0.00 0.60 1.20

Descriptive Statistics: Kontrol, HP-55, PMC, Kuning Telur, Pelleting Variable Kontrol HP-55 PMC Yolk Pelleting

N 3 3 3 3 3

N* 0 0 0 0 0

Percent 100 100 100 100 100

Mean 3.005 2.7018 2.858 2.462 2.597

SE Mean 0.197 0.0710 0.294 0.109 0.143

StDev 0.342 0.1230 0.510 0.188 0.248

Sum 9.016 8.1054 8.575 7.386 7.791

Minimum 2.728 2.5602 2.379 2.296 2.338

Q1 2.728 2.5602 2.379 2.296 2.338

37 Lampiran 5 Hasil analisis statistik retensi protein pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila. One-way ANOVA: HP55, PMC, Kuning Telur, Pelleting, Kontrol Source Factor Error Total

DF 4 10 14

S = 2.002

SS 19.53 40.09 59.62

MS 4.88 4.01

F 1.22

R-Sq = 32.76%

P 0.363

R-Sq(adj) = 5.87%

Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev ------+---------+---------+---------+--HP55 3 19.713 2.381 (---------*---------) PMC 3 20.387 2.204 (----------*---------) KuningTelur 3 21.529 0.459 (---------*---------) Peleting3 21.656 2.861 (----------*---------) Kontrol3 18.615 1.061 (---------*----------) ------+---------+---------+---------+--17.5 20.0 22.5 25.0 Pooled StDev = 2.002 Grouping Information Using Tukey Method Peleting Kuning Telur PMC HP55 Kontrol

N 3 3 3 3 3

Mean 21.656 21.529 20.387 19.713 18.615

Grouping A A A A A

Means that do not share a letter are significantly different. Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.18% HP55 subtracted from: Lower Center PMC Kuning Telur Peleting Kontrol

Upper -4.701 -3.559 -3.432 -6.474

-------+---------+---------+---------+-0.674 6.050 (---------*----------) 1.816 7.191 (----------*---------) 1.943 7.319 (----------*----------) -1.098 4.277 (----------*----------) -------+---------+---------+---------+--5.0 0.0 5.0 10.0

PMC subtracted from: Lower Center Upper Kuning Telur -4.233 Peleting -4.106 Kontrol -7.148

-------+---------+---------+---------+-1.142 6.517 (---------*----------) 1.269 6.644 (----------*---------) -1.773 3.603 (---------*----------) -------+---------+---------+---------+--5.0 0.0 5.0 10.0

38 KuningTelur subtracted from: Lower Center Upper -------+---------+---------+---------+-Peleting -5.248 0.127 5.503 (---------*----------) Kontrol -8.290 -2.915 2.461 (----------*----------) -------+---------+---------+---------+--5.0 0.0 5.0 10.0 Peleting subtracted from: Lower Center Upper -------+---------+---------+---------+-Kontrol -8.417 -3.042 2.334 (----------*----------) -------+---------+---------+---------+--5.0 0.0 5.0 10.0

Descriptive Statistics: HP55, PMC, Kuning Telur, Pelleting, Kontrol Variable HP55 PMC Kuning Telur Peleting Kontrol

Total Count 3 3 3 3 3

N 3 3 3 3 3

N* 0 0 0 0 0

Mean 19.71 20.39 21.529 21.66 18.615

SE Mean 1.37 1.27 0.265 1.65 0.612

StDev 2.38 2.20 0.459 2.86 1.061

Minimum 16.99 17.85 21.129 18.99 17.417

Q1 16.99 17.85 21.129 18.99 17.417

Median 20.78 21.50 21.428 21.31 18.994

39 Lampiran 6 Hasil analisis statistik retensi lemak pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila. One-way ANOVA: HP55, PMC, Kuning Telur, Pelleting, Kontrol Source Factor Error Total

DF 4 10 14

S = 1.818

SS 457.72 33.05 490.76

MS 114.43 3.30

R-Sq = 93.27%

Level HP55 PMC Kuning Telur Peleting Kontrol Level HP55 PMC KuningTelur Peleting Kontrol

N 3 3 3 3 3

Mean 26.554 11.523 22.584 24.775 25.786

F 34.62

P 0.000

R-Sq(adj) = 90.57%

StDev 1.838 2.765 1.338 0.741 1.777

Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev --+---------+---------+---------+------(----*----) (----*----) (----*----) (----*---) (----*---) --+---------+---------+---------+------10.0 15.0 20.0 25.0

Pooled StDev = 1.818 Grouping Information Using Tukey Method HP55 Kontrol Peleting Kuning Telur PMC

N 3 3 3 3 3

Mean 26.554 25.786 24.775 22.584 11.523

Grouping A A A A B

Means that do not share a letter are significantly different. Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.18% HP55 subtracted from: PMC KuningTelur Peleting Kontrol PMC KuningTelur Peleting

Lower -19.911 -8.851 -6.660 -5.649

Center -15.031 -3.970 -1.779 -0.768

Upper -10.150 0.910 3.101 4.112

+---------+---------+---------+--------(----*----) (----*----) (----*----)

40 Kontrol

(----*----) +---------+---------+---------+---------20 -10 0 10

PMC subtracted from: Lower Center Upper +---------+---------+---------+--------Kuning Telur 6.180 11.060 15.941 (----*----) Peleting 8.371 13.251 18.132 (----*----) Kontrol 9.382 14.262 19.143 (----*----) +---------+---------+---------+--------20 -10 0 10 KuningTelur subtracted from: Lower Center Upper +---------+---------+---------+--------Peleting -2.689 2.191 7.072 (----*----) Kontrol -1.678 3.202 8.083 (----*----) +---------+---------+---------+---------20 -10 0 10 Peleting subtracted from: Lower Center Upper +---------+---------+---------+--------Kontrol -3.869 1.011 5.892 (----*----) +---------+---------+---------+---------20 -10 0 10

Descriptive Statistics: HP55, PMC, Kuning Telur, Pelleting, Kontrol Variable HP55 PMC Kuning Telur Peleting Kontrol

Total Count 3 3 3 3 3

N 3 3 3 3 3

N* 0 0 0 0 0

Mean 26.55 11.52 22.584 24.775 25.79

SE Mean 1.06 1.60 0.772 0.428 1.03

StDev 1.84 2.77 1.338 0.741 1.78

Minimum 24.97 9.11 21.645 24.116 23.95

Q1 24.97 9.11 21.645 24.116 23.95

Median 26.12 10.93 21.990 24.632 25.91

41 Lampiran 7 Hasil analisis statistik glukosa darah pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila. One-way ANOVA: HP55, PMC, Kuning Telur, Pelleting, Kontrol Source Factor Error Total

DF 4 5 9

SS 85.80 18.58 104.37

S = 1.927

Level HP55 PMC Yolk Peleting Kontrol

MS 21.45 3.72

R-Sq = 82.20%

N 2 2 2 2 2

Mean 20.810 18.208 17.341 11.847 17.630

StDev 1.640 1.226 2.452 2.047 2.044

F 5.77

P 0.041

R-Sq(adj) = 67.96% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev ---------+---------+---------+---------+ (--------*--------) (--------*-------) (-------*--------) (--------*-------) (--------*--------) ---------+---------+---------+---------+ 12.0 16.0 20.0 24.0

Pooled StDev = 1.927 Grouping Information Using Tukey Method HP55 PMC Kontrol Yolk Peleting

N 2 2 2 2 2

Mean 20.810 18.208 17.630 17.341 11.847

Grouping A A B A B A B B

Means that do not share a letter are significantly different. Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 98.98% HP55 subtracted from: Lower Center Upper -+---------+---------+---------+-------PMC -10.330 -2.602 5.126 (---------*--------) Yolk -11.197 -3.469 4.259 (---------*--------) Peleting -16.690 -8.963 -1.235 (---------*--------) Kontrol -10.908 -3.180 4.548 (---------*---------) -+---------+---------+---------+--------16.0 -8.0 0.0 8.0 PMC subtracted from: Lower Center Upper -+---------+---------+---------+-------Yolk -8.595 -0.867 6.861 (---------*---------) Peleting -14.088 -6.361 1.367 (---------*---------) Kontrol -8.306 -0.578 7.150 (--------*---------) -+---------+---------+---------+--------16.0 -8.0 0.0 8.0

42 Yolk subtracted from: Lower Center Upper -+---------+---------+---------+-------Peleting -13.221 -5.494 2.234 (---------*---------) Kontrol -7.439 0.289 8.017 (--------*---------) -+---------+---------+---------+-------0.0 8.0 -16.0 -8.0 Peleting subtracted from: Lower Center Upper Kontrol -1.945 5.783

-+---------+---------+---------+-------13.510 (--------*---------) -+---------+---------+---------+--------16.0 -8.0 0.0 8.0

Descriptive Statistics: HP55, PMC, Kuning Telur, Pelleting, Kontrol Variable HP55 PMC Yolk Peleting Kontrol

Total Count 2 2 2 2 2

N 2 2 2 2 2

N* 0 0 0 0 0

CumN 2 2 2 2 2

Percent 100 100 100 100 100

CumPct 100 100 100 100 100

Mean 20.81 18.208 17.34 11.85 17.63

SE Mean 1.16 0.867 1.73 1.45 1.45

TrMeanStDev * 1.64 * 1.226 * 2.45 * 2.05 * 2.04

43 Lampiran 8 Hasil analisis statistik glikogen hati pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila. One-way ANOVA: HP55, PMC, Kuning Telur, Pelleting, Kontrol Source Factor Error Total

DF 4 5 9

S = 0.5506

Level HP55 PMC Yolk Peleting Kontrol

N 2 2 2 2 2

SS 14.617 1.516 16.133

MS 3.654 0.303

F 12.05

P 0.009

R-Sq = 90.60%

R-Sq(adj) = 83.09%

Mean 0.5510 0.4594 3.5660 0.4699 0.7337

Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev ----+---------+---------+---------+----(------*-----) (------*------) (------*-----) (------*------) (------*------) ----+---------+---------+---------+----0.0 1.5 3.0 4.5

StDev 0.1964 0.1020 0.9916 0.0641 0.6925

Pooled StDev = 0.5506 Grouping Information Using Tukey Method Yolk Kontrol HP55 Peleting PMC

N 2 2 2 2 2

Mean 3.5660 0.7337 0.5510 0.4699 0.4594

Grouping A B B B B

Means that do not share a letter are significantly different. Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 98.98% HP55 subtracted from: PMC Yolk Peleting Kontrol

Lower -2.2992 0.8075 -2.2887 -2.0248

Center -0.0916 3.0150 -0.0811 0.1827

Upper 2.1159 5.2226 2.1264 2.3903

--------+---------+---------+---------+(-------*------) (------*------) (-------*------) (-------*------) --------+---------+---------+---------+-3.0 0.0 3.0 6.0

PMC subtracted from: Lower Center Upper --------+---------+---------+---------+Yolk 0.8991 3.1066 5.3142 (------*-------) Peleting -2.1971 0.0105 2.2180 (------*------) Kontrol -1.9332 0.2743 2.4819 (------*------) --------+---------+---------+---------+-3.0 0.0 3.0 6.0

44 Yolk subtracted from: Peleting Kontrol

Lower -5.3037 -5.0399

Center -3.0962 -2.8323

Upper -0.8886 -0.6247

--------+---------+---------+---------+(-------*------) (-------*------) --------+---------+---------+---------+-3.0 0.0 3.0 6.0

Peleting subtracted from: Lower Center Upper --------+---------+---------+---------+Kontrol -1.9437 0.2639 2.4714 (------*------) --------+---------+---------+---------+-3.0 0.0 3.0 6.0

Descriptive Statistics: HP55, PMC, Kuning Telur, Pelleting, Kontrol Variable HP55 PMC Yolk Peleting Kontrol

Total Count 2 2 2 2 2

N 2 2 2 2 2

N* 0 0 0 0 0

CumN 2 2 2 2 2

Percent 100 100 100 100 100

CumPct 100 100 100 100 100

Mean 0.551 0.4594 3.566 0.4699 0.734

SE Mean 0.139 0.0721 0.701 0.0453 0.490

TrMeanStDev * 0.196 * 0.1020 * 0.992 * 0.0641 * 0.692

45 Lampiran 9 Hasil analisis statistic glikogen otot pada ikan perlakuan rGH dengan metode penyalutan dan pelleting pada ikan nila. One-way ANOVA: HP55, PMC, Kuning Telur, Pelleting, Kontrol Source Factor Error Total

DF 4 7 11

S = 0.3469

Level HP55 PMC Yolk Peleting Kontrol

N 2 3 3 2 2

SS 4.900 0.843 5.742

MS 1.225 0.120

F 10.18

P 0.005

R-Sq = 85.33%

R-Sq(adj) = 76.94%

Mean 1.1205 2.6288 1.7550 0.8059 1.5609

Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -------+---------+---------+---------+-(------*------) (-----*-----) (-----*-----) (------*------) (-------*------) -------+---------+---------+---------+-0.80 1.60 2.40 3.20

StDev 0.2555 0.3532 0.1690 0.2705 0.6306

Pooled StDev = 0.3469 Grouping Information Using Tukey Method PMC Yolk Kontrol HP55 Peleting

N 3 3 2 2 2

Mean 2.6288 1.7550 1.5609 1.1205 0.8059

Grouping A A B A B B B

Means that do not share a letter are significantly different. Tukey 95% Simultaneous Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Individual confidence level = 99.10% HP55 subtracted from: PMC Yolk Peleting Kontrol

Lower

Center

Upper

+---------+---------+---------+--------

0.3750 -0.4988 -1.5560 -0.8010

1.5082 0.6344 -0.3147 0.4404

2.6414 1.7676 0.9267 1.6818

(------*-------) (------*-------) (-------*-------) (-------*-------) +---------+---------+---------+--------

-3.0 PMC subtracted from: Yolk Peleting Kontrol

Lower -1.8874 -2.9561 -2.2011

Center -0.8738 -1.8229 -1.0678

Upper 0.1398 -0.6897 0.0654

-1.5

0.0

1.5

46 Yolk Peleting Kontrol

+---------+---------+---------+--------(------*------) (-------*------) (-------*------) +---------+---------+---------+---------3.0 -1.5 0.0 1.5

Yolk subtracted from: Peleting Kontrol

Lower

Center

Upper

+---------+---------+---------+--------

-2.0823 -1.3273

-0.9491 -0.1941

0.1841 0.9392

(-------*------) (-------*------) +---------+---------+---------+--------

-3.0

-1.5

0.0

1.5

Peleting subtracted from: Lower Center Upper Kontrol -0.4863 0.7551

+---------+---------+---------+--------1.9964 (-------*-------) +---------+---------+---------+---------3.0 -1.5 0.0 1.5

Descriptive Statistics: HP55, PMC, Kuning Telur, Pelleting, Kontrol Variable HP55 PMC Yolk Peleting Kontrol

Total Count 2 3 3 2 2

N 2 3 3 2 2

N* 0 0 0 0 0

CumN 2 3 3 2 2

Percent 100 100 100 100 100

Mean 1.121 2.629 1.7550 0.806 1.561

SE Mean 0.181 0.204 0.0976 0.191 0.446

TrMeanStDev * 0.255 * 0.353 * 0.1690 * 0.270 * 0.631

47

RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Banda Ely, Kecamatan Kei Besar Utara Timur, Kabupaten Maluku Tenggara, Propinsi Maluku pada tanggal 07 Maret 1982 dari Ayah Andi T. Latar dan Ibu Muharni Latar. Penulis merupakan anak pertama dari lima bersaudara. Tahun 1995 penulis menyelesaikan pendidikan dasar di SD N 2 Banda Ely, Kec. Kei Besar Utara Timur.Pada tahun 1998 penulis menyelesaikan pendidikan di SLTP Al-Hilaal, Kec. Kei Besar Utara Timur, dan pada tahun 2001 penulis menyelesaikan pendidikan di Madrasah Aliyah Negeri (MAN) Tual, Kabupaten Maluku Tenggara. Pada tahun yang sama (2001) penulis melanjutkan pendidikan tinggi di Sekolah Tinggi Agama Islam Negeri (STAIN) Ambon, pada program studi Tarbiyah (Pendidikan) Biologi, dan lulus pada tahun 2006. Selama menjadi mahasiswa penulis aktif dalam berbagai organisasi ekstra maupun intra kampus. Pada tahun 2008 melalui jalur seleksi peneriman CPNS penulis diterima sebagai tenaga pengajar (Dosen) pada Politeknik Perikanan Negeri Tual. Karena penulis memiliki keinginan yang tinggi untuk kuliah, penulis mendaftarkan diri sebagai calon mahasiswa pascasarjana IPB dengan status pembiayaan mandiri. Pada tahun 2010 penulis melanjutkan study di Sekolah PascasarjanaIPB, pada program studi Ilmu Akuakultur (AKU). Pada tahun pertama (semester I-II) penulis berproses dengan biaya sendiri, dan pada tahun kedua (semester III-IV) penulis mendapatkan beasiswa BPPS On Going. Untuk menyelesaikan studi di sekolah pascasarjana tersebut, penulis melakukan penelitian dengan judul tesis “Efektivitas Pemberian Hormon Pertumbuhan Rekombinan Melalui Pakan dengan Bahan Penyalut Berbeda dan Pelleting pada Ikan Nila dibimbing oleh Dr. Alimuddin, S.Pi, M.Sc, dan Dr. Ir. M. Agus Suprayudi, M.Si.