PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

UJI ANTIINFLAMASI FRAKSI ETANOL-HEKSAN EKSTRAK METANOL-AIR DAUN Macaranga tanarius L. PADA MENCIT GALUR SWISS TERINDUKSI KARAGENIN

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Nurul Kusumawardani NIM : 128114081

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2015 i


ii



HALAMAN PERSEMBAHAN

“Karena sesungguhnya sesudah kesulitan itu ada kemudahan” (QS. Alam Nasyrah : 94:5-6) “Apabila kamu telah membulatkan tekad, maka bertawakallah kepada Allah. Sesungguhnya Allah menyukai orang-orang yang bertawakkal kepada-Nya.” (QS. Al-Imran/3 ayat 159)

Where there is a will, There is a way,,,,,

Kupersembahkan karya ini untuk : Allah SWT atas segala karunia yang telah diberikan, Bapak, Ibu, dan Adik yang senantiasa memberi doa, dukungan semangat dan kasih sayang Teman-teman yang telah mendukungku, serta Almamaterrku yang ku banggakan

iv


v


vi


PRAKATA Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat serta rahmat-Nya skripsi dengan judul “Uji Antiinflamasi Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L., pada Mencit Galur Swiss Terinduksi Karagenin” dapat penulis selesaikan dengan baik dan sesuai waktu yang telah ditetapkan. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat dalam memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Penyelesaian skripsi ini tidak lepas dari dukungan serta bantuan dari berbagai pihak, baik secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu, penulis mengucapkan terimakasih kepada: 1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma 2. Ibu Phebe Hendra, MSi., Ph.D., Apt. selaku Dosen Pembimbing dan Dosen Penguji pada skripsi ini, atas segala bimbingan, bantuan, dukungan, semangat dan motivasi selama penelitian dan penyusunan skripsi. 3. Bapak Christianus Heru Setiawan, M.Sc., Apt. selaku Dosen Pembimbing dan Dosen Penguji pada skripsi ini, atas segala bimbingan, bantuan dan dukungan selama penelitian dan penyusunan skripsi. 4. Ibu Dita Maria Virginia, M.Sc., Apt. selaku Dosen Penguji pada skripsi ini, atas segala saran dan bantuan selama penyusunan skripsi. 5. Ibu Damiana Sapta Candrasari, S.Si., M.Sc selaku Dosen Penguji pada skripsi ini, atas segala saran dan bantuan selama penyusunan skripsi.

vii


6. Ibu Agustina Setiawati, M.Sc., Apt. selaku Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan izin dalam penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan skripsi ini. 7. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., yang telah memberikan bantuan dalam determinasi daun Macaranga tanarius L. pada penelitian ini. 8. Bapak Heru, Bapak Parjiman, Bapak Wagiran selaku Laboran Laboratorium Fakultas Farmasi atas bantuan dan dukungannya kepada penulis selama proses pengerjaan skripsi. 9. Keluarga Bapak Setiyono, Ibu Isna Taviyani, S.Pd, Setia Kusumaningrum dan Eyang putri atas segala nasihat, dukungan, dan doa yang selalu mengiringi. 10. Rekan-rekan tim Macaranga tanarius L., sekaligus sahabat-sahabat yang selalu mendampingi : Antonia Vidya Kartika, Silvia Dwi Puspa Susanti, dan Kristiyani Irawati atas kerjasama, dukungan, saran dan bantuannya penelitian dan penyusunan skripsi ini. 11. Agriva Devaly Avista, S.Farm., Apt. atas segala bantuan, doa, dukungan, saran dan motivasinya selama ini. 12. Teman-teman FKK B 20102, FSM B 2012 dan teman-teman Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma khususnya angkatan 2012 atas kebersamaan dan dukungannya. 13. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu oleh penulis yang telah membantu selama proses penyusunan skripsi ini berlangsung.

viii


Penulis menyadari bahwa setiap manusia tidak ada yang sempurna, dan penulis menyadari bahwa dalam naskah skripsi ini masih terdapat kekurangan mengingat keterbatasan pengetahuan dan kemampuan yang dimiliki oleh penulis. Oleh karena itu, penulis mengharapkan adanya kritik dan saran yang membangun demi kemajuan di masa yang akan datang. Akhir kata, penulis berharap agar skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak, mahasiswa, lingkungan akademis, masyarakat serta dapat memberikan sumbangan kecil bagi perkembangan ilmu pengetahuan khususnya di bidang kefarmasian.

Yogyakarta, 12 Januari 2016 Penulis

ix


DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL................................................................................................ i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..................................................... ii HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................ iii HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................................ iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................. v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN ...................................................... vi PRAKATA ............................................................................................................ vii DAFTAR ISI ........................................................................................................... x DAFTAR TABEL ................................................................................................ xvi DAFTAR GAMBAR .......................................................................................... xvii DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xx INTISARI............................................................................................................ xxii ABSTRACT ......................................................................................................... xxiii BAB I. PENGANTAR ............................................................................................ 1 A. Latar Belakang ............................................................................................ 1 1. Rumusan masalah .............................................................................. 6 2. Keaslian penelitian ............................................................................. 6 3. Manfaat penelitian ............................................................................. 8 B. Tujuan Penelitian ........................................................................................ 8 1. Tujuan Umum .................................................................................... 8 2. Tujuan Khusus .................................................................................... 9 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA.......................................................................... 10 x


A. Macaranga tanarius L .............................................................................. 10 1. Keterangan botani ............................................................................ 10 2. Sinonim ............................................................................................ 11 3. Penyebaran ....................................................................................... 11 4. Morfologi ......................................................................................... 11 5. Kandungan kimia............................................................................. 12 6. Aktivitas farmakologis ..................................................................... 15 7. Kegunaan lain .................................................................................. 15 B. Inflamasi .................................................................................................... 15 1. Definisi inflamasi ............................................................................. 15 2. Tanda-tanda utama inflamasi ........................................................... 16 3. Jenis inflamasi.................................................................................. 17 4. Mekanisme terjadinya inflamasi ...................................................... 19 C. Karagenin .................................................................................................. 24 D. Obat Antiinflamasi Non Steroid (NSAID) ............................................... 26 E. Diklofenak. ................................................................................................ 28 F. Metode Uji Inflamasi ................................................................................ 30 G. Metode Penyarian...................................................................................... 34 1. Maserasi… ........................................................................................ 37 2. Ekstraksi Bertingkat ......................................................................... 38 H. Metanol .................................................................................................... 39 I. Etanol ........................................................................................................ 40 J. Heksan........................................................................................................ 41 xi


K. Landasan teori ........................................................................................... 41 L. Hipotesis.................................................................................................... 44 BAB III. METODE PENELITIAN....................................................................... 45 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................................ 45 B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional ........................................... 45 1. Variabel utama ................................................................................. 45 2. Variabel pengacau............................................................................ 45 3. Definisi operasional ......................................................................... 46 C. Bahan Penelitian........................................................................................ 49 1.Hewan uji.......................................................................................... 49 2.Bahan uji ........................................................................................... 49 D. Alat Penelitian ........................................................................................... 51 1. Alat pembuatan serbuk kering daun Macaranga tanarius L ........... 51 2. Pembuatan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun daun Macaranga tanarius L ..................................................................... 51 3. Alat induksi udem telapak kaki belakang ....................................... 51 E. Tata Cara Penelitian .................................................................................. 52 1. Determinasi tanaman daun Macaranga tanarius L ......................... 52 2. Pengumpulan bahan uji .................................................................... 52 3. Pembuatan serbuk daun Macaranga tanarius L .............................. 52 4. Penetapan kadar air serbuk kering daun Macaranga tanarius L ..... 52 5. Pembuatan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L ..................................................................... 54 xii


6. Pembuatan suspending agent CMC-Na 1% .................................. 56 7. Pembuatan larutan karagenin 1% sebagai penginduksi udem ......... 56 8. Pembuatan larutan kalium diklofenak sebagai obat antiinflamasi ... 56 9. Penentuan kontrol negatif ................................................................ 56 10.Uji pendahuluan.............................................................................. 57 11.Penetapan konsentrasi pekat fraksi etanol-heksan ekstrak metanolair daun Macaranga tanarius L ....................................................... 59 12.Penetapan dosis fraksi etaol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L ..................................................................... 59 13. Penyiapan hewan uji ....................................................................... 61 14. Pengelompokan hewan uji ............................................................. 61 F. Tata Cara Analisis Hasil .......................................................................... 64 1. Analisis hasil untuk melihat aktivitas antiinflamasi ......................... 64 2. Menghitung presen penghambatan inflamasi ................................... 64 3. Perhitungan (%) potensi relatif daya antiinflamasi .......................... 65 4. Analisis hasil secara statistika .......................................................... 65 G. Ruang Lingkup Penelitian ....................................................................... 67 H. Uji Fitokimia Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L. ................................................................. 68 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................. 71 A. Penyiapan Bahan ....................................................................................... 71 1. Hasil determinasi tanaman ............................................................... 72

xiii


2. Pembuatan serbuk daun Macaranga tanarius L……………..........73 3. Penetapan kadar air serbuk kering daun Macaranga tanarius L….75 3. Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. .................................................................... 75 B. Hasil Skrining Fitokimia. .......................................................................... 80 C. Uji Pendahuluan ........................................................................................ 84 D. Hasil Pengujian Efek Antiinflamasi Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L.. .............................................. 89 1. Kontrol negatif ...................................................................................... 94 2. Kontrol positif diklofenak (Cataflam Fast®50mg ) dosis 4,48 mg/kgBB ....................................................................................... 98 3. Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L........................................................................... 99 E. Potensi Relatif Daya Antiinflamasi Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L. ............................................. 105 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 114 A. Kesimpulan ............................................................................................. 114 B. Saran ........................................................................................................ 115 DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 116 LAMPIRAN ........................................................................................................ 123 BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................ 158

xiv


DAFTAR TABEL Tabel

I. Keaslian penelitian efek antiinflamasi daun Macaranga tanarius L...............................................................................

7

Tabel

II.

Tanda-tanda utama inflamasi………………….......................

16

Tabel

III.

Mediator yang berperan dalam reaksi inflamasi.....................

20

Tabel

IV. Hasil pengujian fraksi etanol-hexan ektrak metanol air daun Macaranga tanarius L..............................................................

Tabel

V.

Kandungan senyawa daun diduga

memiliki

Macaranga tanarius L. yang

aktivitas

antioksidan

terhadap

penghambatan inflamasi…………………………................... Tabel

VI.

81

82

Uji normalitas nilai rata-rata AUC (mm.menit) pada orientasi penetapan dosis kalium diklofenak dan selang waktu pemberiannya…........................................................................ 86

Tabel VII. Hasil uji LSD AUC total (mm.menit) pada orientasi dosis efektif diklofenak dan rentang waktu pemberian karagenin antara kelompok kontrol negatif dan kelompok diklofenak rentang 15 menit……………………………………………... Tabel VIII.

86

Hasil uji LSD AUC total (mm.menit) pada orientasi dosis efektif diklofenak dan rentang waktu pemberian karagenin antara kelompok kelompok diklofenak rentang 15 dan 30 menit…………………………………………….....................

Tabel IX.

87

Rata-rata nilai AUC (mm.menit) dan hasil pengujian normalitas pada kelompok uji antiinflamasi…………………. 89 xv


Tabel

X.

Hasil uji Mann-Whitney Test rata-rata nilai AUC (mm.menit) pada mencit terinduksi karagenin 1%.....................................

Tabel

XI.

92

Rata-rata persen (%) penghambatan inflamasi pada kelompok perlakuan uji antiinflamasi…………………………………… 93

Tabel XII. Uji Mann-Withney persen (%) penghambatan inflamasi kelompok perlakuan uji antiinflamasi………………………..

94

Tabel XIII. Rata-rata persen (%) potensi relatif kelompok fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dibandingkan dengan kontrol positif diklofenak pada uji antiinflamasi………………………………………………...... 106 Tabel XIV.

Hasil uji

Mann-Withney

Test persen (%) potensi

antiinflamasi………………………………………………….. 108

xvi


DAFTAR GAMBAR Gambar 1.

Tumbuhan Macarang tanarius L...........................................

Gambar 2.

Struktur senyawa kimia yang diisolasi dari daun Macaranga tanarius L............................................................................

Gambar 3.

10

13

Struktur senyawa kimia yang diisolasi dari daun Macaranga tanarius L............................................................

14

Gambar 4.

Manifestasi terjadinya inflamasi akut dan kronik……………

17

Gambar 5.

Metabolit asam arakidonat dan perannya dalam proses inflamasi serta target dari beberapa obat antiinflamasi………

23

Gambar 6.

Struktur Natrium dan Kalium Diklofenak…………………… 28

Gambar 7.

Flowchart langkah pembuatan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L…………………………………….....

Gambar 8.

54

Flowchart langkah pembuatan fraksi etanol-heksan dari hasil ekstrak kental metanol-air daun Macaranga tanarius (L)……………………………………………………………. 55

Gambar 9.

Flowchart pengelompokan hewan uji pada tahap uji pendahuluan (orientasi)………………………………………

Gambar 10

62

Flowchart pengelompokan hewan uji pada tahap perlakuan uji antiinflamasi…………………………………………........ 63

Gambar 11

Flowchart ruang lingkup penelitian………………………….

xvii

67


Gambar 12

Diagram batang rata-rata nilai AUC (mm.menit) pada orientasi dosis efektif diklofenak dan rentang waktu pemberian karagenin antara kelompok diklofenak rentang 15 dan 30 menit……………………………………………….....

Gambar 13

86

Diagram batang rata-rata nilai AUC (mm.menit) pada dosis efektif diklofenak dan rentang waktu pemberian karagenin antara

kelompok

diklofenak

rentang

15

dan

30

menit………………………………………………................. 87 Gambar 14

Diagram batang rata-rata nilai AUC pada kelompok perlakuan uji antiinflamasi…………………………………...

Gambar 15

92

Diagram batang persen (%) penghambatan inflamasi pada masing-masing kelompok perlakuan uji antiinflamasi………. 94

Gambar 16

Grafik Nilai AUC Kontrol Negatif CMC-Na……………....... 96

Gambar 17

Diagram batang persen potensi (%) relatif daya antiinflamasi pada masing-masing kelompok kontrol positif diklofenak

Gambar 18

dan perlakuakan uji antiinflamasi…………………………....

107

Pelepasan radikal bebas pada proses inflamasi………………

109

xviii


DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1.

Surat pengesahan Medical and Health Research Ethics Committee(MHREC)………………………………………….......

124

Lampiran 2.

Surat pengesahan determinasi daun Macaranga tanarius L….......

125

Lampiran 3.

Surat pengujian kadar air Serbuk Daun Macaranga tanarius L…..

126

Lampiran 4.

Surat kalibrasi jangka sorong digital………………………...........

127

Lampiran 5.

Surat legalitas penggunaan SPSS…..……………………………..

128

Lampiran 6.

Pengeringan dan serbuk daun Macaranga tanarius L….................

129

Lampiran 7.

Hasil Fraksi Etanol-heksan dari Ekstrak Metanol-Air daun Macaranga tanarius L………………………………….................

129

Lampiran 8.

Pembuatan udem dan pengukuran udem kaki mencit……………...

130

Lampiran 9.

Perhitungan dosis…………………………………………………... 131

Lampiran 10. Perhitungan persen rendamen fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L……………………..........

132

Lampiran 11. Analisis Statistika Data Orientasi Penentuan Dosis dan Selang Waktu Pemberian Kalium Diklofenak……………………….......... Lampiran 12. Hasil

Pengolahan

Analisis

Statistika

Data

Perlakuan

133

Uji

Antiinflamasi Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L., pada Mencit Galur Swiss Terinduksi Karagenin…………………………………………………………... 137 Lampiran 13. Hasil uji statistika % penghambatan inflamasi pada perlakuan fraksi etanol-heksan ektrak metanol-air daun Macaranga tanarius.. 145 Lampiran 14. Hasil

pengolahan

analisis

statistika xix

potensi

relatif

daya


antiinflamasi fraksi etanol-hekasan ektrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., pada mencit galur Swiss terinduksi karagenin…………………………………………………………..

151

Lampiran 14. Hasil pengujian fitokimai secar kualitatif dengan metode uji tabung pada fraksi etanol-heksan, ektrak metanol-air daun Macaranga tanarius L.,…………………………………………...

xx

156


INTISARI Macaranga tanarius L. merupakan tanaman yang secara tradisional telah banyak dilaporkan berkhasiat, salah satunya digunakan untuk pencegahan peradangan. Tanaman ini diduga memiliki potensi untuk dikembangkan sebagai alternatif pengobatan inflamasi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian sediaan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. terhadap efek antiinflamasi pada mencit galur Swiss yang terinduksi karagenin 1% . Penelitian ini bersifat eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Digunakan tiga puluh ekor mencit jantan galur Swiss, umur 2-3 bulan, dengan berat 20-30 gram yang terbagi secara acak menjadi enam kelompok. Kelompok I dan II (kontrol negatif aquadest dan CMC-Na 1%), kelompok III (kontrol positif diklofenak 4,48 mg/kgBB), kelompok IV,V,VI merupakan kelompok perlakuan dengan pemberian dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. berturut-turut sebesar 47,95; 95,9; dan 191,8 mg/kgBB. Udem pada telapak kaki mencit diukur menggunakan jangka sorong digital selama enam jam mulai setelah terinduksi karagenin 1%. Analisis hasil dilakukan dengan uji statistika non-parametrik test menggunakan uji Krusskal-Wallis untuk mengetahui keberbedaan pada kelompok uji. Kemudian dilanjutkan dengan analisis Post-Hoc untuk mengetahui kelompok mana yang berbeda bermakna dengan uji Mann-Whitney. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. memiliki efek antiinflamasi yang peningkatan penghambatan inflamasinya sebanding dengan peningkatan dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Persen penghambatan inslamasi pada dosis 47,95; 95,9; dan 191,8 mg/kgBB secara berturut-turut sebesar 18,62; 24,19; dan 39,57 %, dengan potensi relatif daya antiinflamasi dibandingkan terhadap diklofenak yang memiliki potensi relatif daya antiinflamasi sebesar 100%, secara berturut-turut adalah 32,75; 42,55; dan 69,55 %.

Kata kunci: Antiinflamasi, Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L.

xxi


ABSTRACT Macaranga tanarius L. is traditionally used to treat infllmation. This plant has potential to be used in alternative inflammation treatment. The aim of the research were to prove the anti-inflammatory effect of ethanol-hexane fraction methanolic extract of Macaranga tanarius L., leaves in male Swiss mice induced carrageenin 1%. This research was purely experimental research with randomized complete direct sampling design. The research used thirty male Swiss mice, in range of the age of 2-3 month, and 20 – 30 gram weight. Group I and II was negative control by giving aquadest and CMC-Na 1% dosed 191.8 mg/kgBW orally. Group III was positive control given diclofenac potassium dosed 4.48 mg/kgBW orally. Group IV-VI were the treatment group for fraction ethanol-hexane extract methanolaquadest of Macaranga tanarius L., leaves dosed 47.95; 95.9; and 191.8 mg/kgBW orally. Data were analyzed using non- parametric statistical with Krusskal-Wallis test to know the difference in the test group. After that, the data were analyzed using Post-Hoct to determine the differences significant in each group by Mann-Whitney test. The result showed there were anti-inflammatory effect fraction ethanolhexane extract methanol-aquadest of Macaranga tanarius L., leaves at doses of 47.95; 95.9; and 191.8 mg/kgBW reduced edema of the mice hind paw induced by carrageenin progressively. Percent (%) inhibition were 18.62; 24.19; and 39.57 %. The relative potential of anti-inflammatory power compared to potassium diclofenac which has a relative potency of anti-inflmmatory power of 100%, respectively were 32.75; 42.55; and 69.55%.

Keywords: Anti-inflammatory, Fraction ethanol-hexane extract methanolaquadest of Macaranga tanarius L. leaves

xxii


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Inflamasi atau peradangan merupakan suatu mekanisme perlindungan tubuh yang berkaitan dengan adanya kerusakan jaringan. Perlindungan tersebut dilakukan dengan cara menginaktifkan atau merusak organisme yang menyerang, menghilangkan iritan, dan perbaikan jaringan. Inflamasi dapat diakibatkan karena adanya infeksi mikroba, virus, atau akibat dari adanya rangsangan yang merugikan baik secara kimia maupun mekanis. Tanda-tanda umum terjadinya inflamasi seperti bengkak, nyeri, kemerahan, panas, dan hilangnya fungsi sel yang mengakibatkan ketidaknyamanan bagi penderitanya, sehingga diperlukan suatu penanganan untuk mengatasi terjadinya inflamasi tersebut (Supriyatna, Moelyono, Iskandar, dan Febriyanti, 2015). Saat ini telah tersedia obat-obat modern yang dapat mengendalikan reaksi inflamasi, salah satunya adalah pemberian obat antiinflamasi non steroid (NSAID) secara per oral (Tjay dan Kirana, 2002). NSAID bekerja pada kedua isoform dari enzim cyclooxigenase, yaitu cyclooxigenase-1 (COX-1) dan COX-2. COX-1 merupakan suatu isoform konstitutif yang terdapat dalam jaringan normal, sedangkan COX-2 terinduksi ketika berkembangnya peradangan. Penghambatan pada jalur metabolisme cyclooxigenase yang memicu timbulnya mediator inflamasi tersebut akan dapat mengendalikan proses inflamasi, sehingga inflamasi dapat teratasi dengan pemberian NSAID.

1


2

Selain adanya obat-obat modern antiinflamasi, pemanfaatan tumbuhan obat dengan khasiat antiinflamasi perlu dilakukan sebagai alternatif pengobatan inflamasi. Penggunaan obat tradisional hingga saat ini masih banyak digunakan untuk meningkatkan kesehatan masyarakat di Indonesia. Pemanfaatan tanaman tersebut merupakan upaya untuk mengembalikan dan memperkuat penyembuhan secara alami, terutama digunakan untuk alternatif pengobatan penyakit ringan. Menurut Magadula (2014), Genus Macaranga (Euphorbiaceae) yang terdiri dari 300 spesies banyak ditemukan di daerah tropis, salah satunya di Indonesia. Salah satu spesies dari genus Macaranga adalah Macaranga tanarius L., di Thailand rebusan akarnya digunakan sebagai antipiretik dan antitusif, sedangkan daunnya digunakan untuk menutupi luka sebagai antiinflamasi (Magadula, 2014). Pemanfaatan tanaman obat tersebut menjadikan daun Macaranga tanarius L, sebagai salah satu bahan alam yang berpotensi sebagai alternatif untuk mengatasi inflamasi. Hal ini didasarkan pula pada hasil penelitian sebelumnya

oleh

Phomart,

Sutthivaiyakit,

Chimnoi,

Ruchirawat,

and

Sutthivaiyakit (2005) melaporkan bahwa salah satu konstituen dari ekstrak nheksan dan kloroform dari daun Macaranga tanarius L. berupa flavonoid yaitu tanarifuranonol, tanariflavanon C, tanariflavanon D yang memperlihatkan adanya aktivitas antioksidan terhadap DPPH dan nymphaenol B sebagai agen antiinflamasi pada uji siklooksigenase-2. Senyawa aktif sebagai antioksidan akan mereduksi DPPH, dengan meyumbangkan elektron atau hindrogen, sehingga radikal bebas (DPPH) akan menangkap satu elektron dari senyawa antioksidan tersebut.


3

Radikal bebas merupakan perantara yang dapat dengan cepat diubah menjadi substansi tidak membahayakan bagi tubuh, namun apabila radikal bebas tersebut bertemu dengan asam lemak tak jenuh ganda seperti halnya asam arakidonat yang terbentuk ketika adanyanya proses inflamasi akan memperparah terjadinya kerusakan sel. Ketika terjadi kerusakan jaringan, jumlah radikal bebas akan meningkat seiring dengan peningkatan produksi mediator inflamasi hasil metabolisme asam arakidonat, dengan begitu antioksidan endogen yang dihasilkan oleh tubuh untuk menstabilkan radikal bebas tak mampu lagi mengatasinya secara efektif sehingga dibutuhkan antioksidan dari luar atau eksogen (Wulandari dan Hendra, 2011). Penelitian oleh Matsunami, Takamori, Shinzato, Aramoto, Kondo, dan Otsuka (2006) terhadap daun Macaranga tanarius L., menggunakan metode penyarian ekstrak metanol melaporkan adanya kandungan senyawa dari daun Macaranga tanarius L., yaitu glukosida megastigman (megastigmane glucoside), terdiri dari macarangiosida A-C dan mallophenol B yang memiliki kemampuan dalam menangkap radikal bebas. Penelitian tersebut dilanjutkan oleh Matsunami, Otsuka, Kondo, Shizanto, Kawahata, Yamaguchi, dan Takeda (2009) dengan menggunakan metode penyarian sama, melaporkan bahwa daun Macaranga tanarius L., mengandung ligan glukosida yaitu (+)-pinoresinol 4-O-[6”-Ogalloyl]-β-D-glucopyranoside dan macarangioside E, kandungan senyawa tersebut memiliki aktivitas penangkapan radikal bebas terhadap 2,2-diphenyl-1picrylhydrazyl (DPPH).


4

Dalam penyariannya, metanol mampu melarutkan hampir semua komponen bersifat polar hingga semi-polar (Al-Ash’ary, Supriyanti, dan Zackiyah, 2010), sehingga tidak hanya senyawa glikosida namun masih banyak senyawa semipolar lainnya yang dapat tersari dengan menggunakan pelarut tersebut. Hal tersebut dibuktikan pada penelitian yang telah dilakukan oleh Puteri dan Kawabata (2010) terhadap daun Macaranga tanarius L. menggunakan metode penyarian ekstraksi dengan pelarut metanol yang dipartisi dengan air dan etil asestat, kemudian hasil fraksi tersebut dianalisis dengan kromatografi kolom. Hasil penelitian tersebut melaporkan adanya kandungan ellagitannins yang merupakan golongan senyawa tanin. Kandungan tersebut terdiri dari mallotinic acid, corilagin, macatannin, chebulagic acid, dan macatannin B yang memiliki aktivitas penghambatan sukrase dan maltase pada pengujian antidiabetes. Selain itu hasil penelitian Valdés, Figueroa, Carbo, Barragán, Herrera, and Aguilar (2011) melaporkan bahwa kandungan ellagitannins memiliki kemampuan penangkapan radikal bebas dan berperan terhadap inflamasi. Adanya aktivitas antioksidan tersebut diduga dapat menangkap radikal bebas yang berperan terhadap pembentukan inflamasi, sehingga kandungan senyawa ellagitannins tersebut berpotensi untuk dikembangkan dan dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai aktivitasnya dalam penghambatan inflamasi. Pada penelitian ini digunakan metode penyarian fraksi dengan pelarut yang digunakan berupa etanol-heksan. Pemilihan pelarut tersebut didasarkan pada prinsip like dissolve like dilihat dari kedekatan nilai log P antara struktur senyawa yang telah dilaporkan terkandung dalam ekstrak metanol-air daun Macaranga


5

tanarius L. dengan nilai log P pelarut yang digunakan, log P tersebut menggambarkan sifat polaritas masing-masing senyawa. Penggunaan prinsip penyarian tersebut pada proses fraksinasi diharapkan dapat dilakukan secara optimal sesuai tingkat kelarutan senyawa dalam pelarut yang digunakan, sehingga memungkinkan diperolehnya senyawa antioksidan spesifik ellagitannins yang dilaporkan terkandung pada hasil campuran ekstrak metanol-air. Proses fraksinasi pada penelitian ini digunakan etanol-heksan, nilai log P etanol sebesar -0,16 dan heksan sebesar 3,13 dengan log P campuran sebesar 2,97 yang merupakan pelarut semi-polar, tujuannya adalah ingin mendapatkan senyawa chebullagic acid dengan nilai log P sebesar 2,30 dan macatannin b sebesar 2,57 yang merupakan senyawa semi polar, kedua senyawa tersebut merupakan kelompok senyawa ellagitannins yang telah dilaporkan oleh Puteri dan Kawabata (2010). Oleh karena itu pada penelitian ini, akan dilakukan pengujian apakah senyawa dari golongan tannin tersebut selain memberikan efek antidiabetes dapat pula menghambat inflamasi dengan kandungan senyawa yang memiliki aktivitas dalam penangkapan radikal bebas tersebut. Berdasarkan uraian di atas, maka peneliti tertarik untuk melakukan pengujian terhadap aktivitas antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dengan menggunakan metode induksi karagenin 1% pada telapak kaki belakang mencit yang merupakan model standar percobaan inflamasi akut (Chakraborty, Devi, Rita, Sharatchandara, and Singh, 2004) dan penelitian dengan menggunakan metode penyarian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. berdasarkan penelusuran pustaka belum


6

pernah dilakukan sebelumnya. Penelitian ini diharapkan dapat memperoleh data ilmiah yang mendukung dalam penggunaan serta pemanfaatan daun Macaranga tanarius L. sebagai antiinflamasi.

1.

Permasalahan Berdasarkan uraian yang telah dikemukakan di atas, maka permasalahan

yang akan digunakana sebagai dasar penelitian adalah: a. Apakah pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. memiliki efek antiinflamasi pada mencit galur Swiss ? b. Seberapa besar presentase fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dalam memberikan penghambatan inflamasi akibat injeksi karagenin 1% pada udem kaki belakang mencit ? c. Berapakah besar potensi relatif daya antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. pada mencit galur Swiss ? d. Apakah terdapat hubungan kekerabatan antara dosis pemberian fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., terhadap efek antiinflamasi pada mencit terinduksi karagenin 1% ?

2. Keaslian Penelitian Beberapa penelitian terkait Macaranga tanarius L. dan aktivitasnya sebagai antiinflamasi, sebagai berikut:


Judul dan Peneliti

7

Tabel I. Keaslian Penelitian Efek Antiinflamasi Macaranga tanarius L. Metode Hasil Penelitian

Constituents of the Leaves of Metode penyarian Macaranga tanarius oleh menggunakan n-heksan Phommart et al (2005) dan ekstrak kloroform Macaranga tanarius.

Radical Scavanging Activities of Metode penyarian New Megastigmane Glucosides ekstrak metanol daun from Macaranga tanarius (L.) Macaranga tanarius L. Mull-Arg, oleh Matsunami et al. (2006). Absolute configuration of (+)- Metode penyarian pinoresinol 4-O-[6” -O-galloyl]-β- ekstrak metanol daun Macaranga tanarius L. D glucopyranoside, macarangiosides E, and F isolated from the leaves of Macaranga tanarius oleh Matsunami et al. (2009).

Novel α-glucosidase inhibitors from Macaranga tanarius L. leaves oleh Puteri dan Kawabata (2010).

Efek antiinflamasi daun Macaranga tanarius L. dengan pemberian ekstrak metanol-air secara per oral oleh Kurniawaty dkk. (2011).

Ekstrak etanol daun Macaranga tanarius L. dianalisis kromatografi (HPLC) untuk mengisolasi senyawa aktif yang memiliki aktivitas penghambatan α-glucosidase yang penting dalam pengobatan hiperglikemia. Metode penyarian ekstraksi metanol-air, daun Macaranga tanarius L.

Kandungan nymphaeol dan tanariflavon dari ekstrak n-heksan daun Macaranga tanarius L., sebagai antioksidan terhadap uji DPPH serta nymphaeol B memiliki efek antiinflamasi pada uji cyclooxigenase-2. Kandungan macarangiosida A-C, dan malofenol B, yang diisolasi dari ekstrak metanol Macaranga tanarius L., memperlihatkan adanya aktivitas penangkapan radikal terhadap DPPH. Kandungan glukosida berupa senyawa (+)-pinoresinol 4-O-[6” –O-galloyl]-β-D-glucopyranoside, dan dua senyawa baru megastigmane glucosides yaitu macarangiosides E, and F memperlihatkan adanya aktivitas penangkapan radikal terhadap DPPH. Kandungan ellagitannis berupa senyawa mallotinic acid, corilagn, macatanni A, chebulagic acid, dan macatannin B. Kandungan senyawa tersebut memiliki kemampuan penghambatan sukrase dan matase pada pengujian antidiabetes.

Menunjukkan persen penghambatan inflamasi pada dosis 0,71; 2,1; dan 6,4 g/kgBB secara berurutan adalah 23,3; 35,3; dan 47 %.


8

Berdasarkan atas penelusuran pustaka mengenai efek antiinflamasi daun Macaranga tanarius L. tersebut, penelitian tentang efek antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., yang diberikan secara per-oral pada mencit yang terinduksi karangenin 1% secara suplantar belum pernah dilakukan.

3. Manfaat Penelitian a. Manfaat teoritis. Hasil penelitian ini diharapkan dapat mengembangkan ilmu mengenai pengobatan inflamasi secara herbal dan membuktikan efek antiinflamasi pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. b. Manfaat praktis. Penelitian ini diharapkan mampu memberikan informasi ilmiah terkait manfaat, kemampuan penghambatan respon inflamasi, dan dosis pemberian sediaan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. yang dapat diaplikasikan untuk pengobatan inflamasi secara herbal pada masyarakat.

B. Tujuan Penelitian 1.

Tujuan umum Mengetahui pengaruh pemberian sediaan fraksi etanol-heksan ekstrak

metanol-air daun Macaranga tanarius L. terhadap efek antiinflamasi pada mencit galur Swiss yang terinduksi karagenin 1% .


9

2. Tujuan Khusus a. Mengetahui besar penghambatan inflamasi dari fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. terhadap efek antiinflamasi pada mencit galur Swiss terinduksi karagenin 1%. b. Mengetahui potensi relatif daya antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. pada mencit galur Swiss terinduksi karagenin 1%. c. Mengetahui ada tidaknya hubungan kekerabatan antara pemberian dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., terhadap efek antiinflamasi pada mencit terinduksi karagenin 1%.


BAB II TINJAUAN PUSTAKA

A. Macaranga tanariuss L.

Gambar 1. Tumbuhan Macaranga tanarius L.

1. Keterangan Botani Macaranga tanarius L., yang dapat dilihat pada (Gambar 1) dikenal menjadi beberapa nama daerah antara lain Karahan, Tutup, Tutup ancur, dan Senu (Jawa), Mapu (Batak) yang termasuk dalam family Euphorbiaceae dan genus Macaranga (Anonim, 2013). Taksonomi Macaranga tanarius L., menurut Magadula (2014) adalah sebagai berikut: Kingdom

: Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom

: Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi

: Spermatophyta (Menghasilkan biji) 10


Divisi

: Maginoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas

: Maginoliospsida (Berkeping dua/dikotil)

Sub Kelas

: Rosidae

Ordo

: Euphorbiaceae

Famili

: Euphorbiaceae

Sub Famili

: Acalyphoides

Bangsa

: Acalypheae

Sub Bangsa

: Macaranginae

Genus

: Macaranga

Spesies

: Macaranga tanarius (L.) Benth. Mull. Arg

11

(Magadula, 2014). 2. Sinonim Ricinus tanarius L., Macaranga molliuscula Kurz, Macaranga tomentosa Blume, Mappa tanarius (L.) Blume (Starr, Starr, and Loope, 2003). 3. Penyebaran Macaranga tanarius L., merupakan tanaman pada daerah tropis seperti Afrika, Madagaskar, Asia Tenggara, dan Pasifik. Di Malaysia, dilaporkan terdapat sekitar 40 spesies yang dapat tumbuh (Lim, Lim, dan Yule, 2009). 4. Morfologi Merupakan perdu atau pohon yang memiliki ukuran kecil sampai sedang dengan ukuran pohon ± 27 meter. Tumbuhan ini akan mulai reproduktif apabila telah memiliki tinggi mulai 5 meter. Macaranga tanarius L., memiliki ranting yang padat, gundul, hingga berambut (rambut tunggal, pendek), cabang agak


12

tebal, berwarna hijau dan keabu-abuan. Jenis tanaman ini memiliki batang tegak, daun berbentuk seperti bagun hati dan bulat (Steenis, Blommbergen, dan Eyma, 1992). Daun Macaranga tanarius L., berseling, agak membundar, dengan stipula besar. Daun penumpu bulat telur hingga segitiga, semi-persisten, tegak hingga menyebar. Tidak melingkari ranting seluruhnya, dengan panjang 10-29 mm, lebar 4-12 mm. Tangkai daun gundul hingga berambut yang memiliki panjang hingga 22 cm. Daun berseling, bulat telur, memerisai dengan panjang 12-36 cm, lebarnya 7-28 cm. Memiliki urat daun yang sekunder 7-10 cm dan akan berakhir di tepi daun. Permukaan atas daun gundul hingga berambut yang terletak pada urat-urat daun, permukaan bawah daun gundul hingga berambut rapat (Steenis et al., 1992). Jenis tanaman ini akan berbuah dan berbunga sepanjang tahun. Bunga terletak di ketiak dan ditutupi oleh daun, perbungaan jantan bercabang, bungabunga dalam ikatan di tiap brakteola dan tepi brakteola berjumbai. Perbungaan betina bercabang, dengan brakteola yang melebar seperti daun (Steenis et al., 1992). 5. Kandungan Kimia Phommart et al. (2005) melaporkan adanya tiga kandungan baru dari ekstrak n-heksan dan kloroform yang menunjukkan adanya aktivitas antioksidan terhadap DPPH (2,2-difinil-1-pikrilhidrazil) yaitu tanarifuranonol, tanariflavonon C, tanariflavanon D, beserta dengan tujuh kandungan yang telah diketahui yaitu


13

nymphaeol A, nymphaeol B, nymphaeol C, tanariflavanon B, blumenol A (vomifoliol), blumenol B (7,8-dihydrovomifoliol), dan annuionone E. Kandungan lain dari daun Macaranga tanarius L., dilaporkan oleh Matsunami et al. (2006) menggunakan metode ekstrak metanol, yang dihilangkan lemaknya dengan n-heksan dan dipartisi menggunakan pelarut etil asetat dan butanol sehingga menghasilkan fraksi terlarut, untuk dianalisis spektroskopi. Berdasarkan hasil penelitiannya ditemukan empat senyawa baru dari Macaranga tanarius L., yaitu glukosida megastigman (megastigmane glucoside) yang dinamakan macarangiosida A-D bersama dengan campuran mallophenol B, lauriside E, methyl brevifolin carboxylate, hyperin, dan isoquercitrin (Gambar 2).

Gambar 2. Struktur senyawa kimia yang diisolasi dari daun Macaranga tanarius L. (Matsunami et al., 2006).


14

Hasil isolasi dan elusidasi struktur dari empat kandungan baru glukosida megastigman bersama dengan lima senyawa lainnya memperlihatkan adanya aktivitas penangkapan radikal bebas. Selain itu juga dilaporkan oleh Kawakami, Harinantenaina, Matsunami, Otsuka, Shinzato, and Takeda (2008) daun Macaranga tanarius L. mengandung senyawa prenylated flavanones yaitu macaflavanones A-G, dua senyawa lainnya nymphaea C dan diterpene kolavenol. Kemudian penemuan senyawa-senyawa tersebut dilanjutkan oleh Matsunami et al. (2009), yang melaporkan bahwa daun Macaranga tanarius L., juga mengandung ligan glukosida yaitu (+)-pinoresinol 4-O-[6”-O-galloyl]-β-Dglucopyranoside, macarangioside E, dan F.

Gambar 3. Struktur senyawa kimia yang diisolasi dari daun Macaranga tanarius L. (Puteri dan Kawabata, 2009). Selain itu kandungan lain yang diisolasi dari daun Macaranga tanarius L., dilaporkan oleh Puteri dan Kawabata (2010) dengan metode ekstrak metanol, yang residunya dipartisi menggunakan etil asetat dan air. Hasilnya menunjukkan


15

adanya kandungan senyawa tannin berupa ellagitannins yang terdiri dari mallotinic acid (1), corilagin (2), macatannin A (3), chebulagic acid (4), dan macatannin B (5) dapat dilihat pada (Gambar 3). Kandungan tersebut memiliki aktivitas penghambatan sukrase dan maltase pada uji antidiabetes. 6. Aktivitas Farmakologis Secara empirik, Macaranga tanarius L. digunakan untuk mengatasi luka, bengkak, bisul, dan memar (Magadula, 2014). Malaysia dan Thailand menggunakan dekoksi akar Macaranga tanarius L. sebagai pengobatan tradisional yaitu antitusif dan antipiretik. Akar keringnya digunakan sebagai agen emetik, sedangkan daun segarnya digunakan untuk menutupi luka sebagai antiinflamasi (Lim et al., 2009). 7.

Kegunaan Lain Secara tradisional, tumbuhan Macaranga tanarius L. digunakan sebagai

fermentasi pada tempe dan pakan hewan. Di China, digunakan sebagai produk manufaktur seperti minuman sehat, dan ekstraknya digunakan sebagai bahan pembuatan pasta gigi. Selain itu di Taiwan dan China, rebusan daun Macaranga tanarius L., digunakan sebagai bahan pembuatan teh herbal (Lim et al., 2009).

B. Inflamasi 1. Definisi Peradangan atau inflamasi adalah salah satu respon biologis terhadap trauma fisik, panas, bahan kimia, infeksi karena virus dan bakteri (Wilmana and Gan, 2007). Ketika proses inflamasi berlangsung, terjadi reaksi vaskular di mana cairan, elemen-elemen darah, sel darah putih (leukosit), dan mediator kimia


16

berkumpul pada tempat jaringan untuk menetralkan dan menghilangkan agenagen berbahaya, serta untuk memperbaiki jaringan yang rusak (Kumar, Abbas, and Aster, 2014). 2. Tanda-tanda utama inflamasi Tanda-tanda kemerahan (rubor), pembengkakan (tumor), nyeri (dolor), panas (calor), dan hilangnya fungsi (function laesa) (Supriyatna dkk., 2015), dapat dilihat pada (Tabel II). Tabel II. Tanda-tanda utama inflamasi Tanda-tanda inflamasi Kemerahan atau Rubor

Keterangan

Terjadi pada tahap pertama dari inflamasi. Darah berkumpul pada daerah cedera akibat pelepasan mediator kimia dari tubuh (kinin, prostaglandin, dan histamin). Tahap kedua dari inflamasi. Plasma merembes ke dalam Pembengkakan jaringan interstisial pada tempat cedera. Kinin akan mendilatasi atau tumor arteriol dan meningkatkan permeabilitas kapiler. Panas pada tempat inflamasi dapat disebabkan adanya pertambahan pengumpulan darah yang disalurkan oleh tubuh ke permukaan yang mengalami radang lebih banyak daripada darah Panas atau yang disalurkan ke permukaan yang normal dan dapat terjadi calor karena adanya pirogen yang merupakan substansi penyebab timbulnya demam sehingga akan mengganggu pusat pengatur panas pada hipotalamus. Nyeri disebabkan oleh pembengkakan yang terjadi pada proses Nyeri atau inflamasi, kerusakan awal atau yang dihasilkan dari respon dolor inflamasi dan adanya pelepasan mediator-mediator kimia. Hilangnya Disebabkan karena adanya penumpukan cairan pada tempat fungsi atau cedera jaringan dan rasa nyeri yang ditimbulkan, sehingga akan function laesa mengurangi mobilitas pada daerah yang mengalami inflamasi. (Punchard, Whelan, and Adcock, 2004).


17

3. Jenis Inflamasi

Gambar 4. Manifestasi terjadinya inflamasi akut dan kronik (Kumar et al., 2014). Inflamasi dapat dibedakan menjadi dua jenis yaitu inflamasi akut dan kronik. Perbeaan inflamasi akut dan kronik (Gambar 4) dapat dijelaskan sebagai berikut: a. Inflamasi akut Inflamasi akut dapat terjadi selama beberapa menit atau dalam hitungan hari. Inflamasi akut dapat terjadi karena infeksi bakteri, racun, dan trauma. Tahapan terjadinya inflamasi terjadi setelah adanya goresan ataupun cedera yang dapat mengakibatkan inflamasi. Terjadinya inflamasi akut ditandai dengan adanya kemerahan yang akan menyebar di sekitar area cedera, panas (daerah yang meradang akan lebih hangat dibandingkan dengan kulit disekitarnya), bengkak


18

karena adanya cairan eksudasi protein plasma maupun akumulasi leukosit neutrofilik yang dominan, dan nyeri (Greene and Harris, 2008). Karakteristik utama dalam peradangan akut adalah eksudasi cairan dan protein plasma (udem) serta emigrasi leukosit terutama neutrofil. Berikut tiga komponen utama terjadinya peradangan akut: 1. Dilatasi pada pembuluh darah dan peningkatan aliran darah sehingga menyebabkan eritema dan timbulnya rasa hangat 2. Ekstravasasi, pengendapan cairan dan protein plasma yang menyebabkan terjadinya udem 3. Emigrasi dan adanya akumulasi leukosit terutama neutrofil di tempat cedera. Neutrofil akan mendominasi infiltrat peradangan selama 6-24 jam pertama kemudian akan digantikan oleh monosit pada 24-48 jam berikutnya (Kumar et al., 2014). Apabila pada keadaan inflamasi akut tidak segera pulih atau kembali ke fungsi normal dengan pembersihan rangsangan yang merugikan, pembersihan mediator yang dilepaskan pada tahap inflamasi akut, penggantian sel yang luka dapat menyebabkan adanya nanah jika terjadi pembentukan abses yang berlebihan sehingga akan dapat berkembang menjadi fibrosis (hilangnya fungsi ditandai dengan pergantian jaringan ikat) (Kumar et al., 2014). b. Inflamasi kronik Merupakan reaksi inflamasi yang dapat terjadi selama berbulan-bulan atau bahkan bertahun-tahun yang menandakan masih adanya stimulus pro-inflamasi. Inflamasi kronik dapat terjadi karena adanya infeksi virus, infeksi persisten (basil


19

tubercule, treponemia palidium (sifilis), atau mikroba lainnya), autoimmune disease (rheumatoid arthritis). Apabila inflamasi yang terjadi berlangsung selama lebih dari 6 bulan atau berkepanjangan, adanya cedera pada jaringan, terbentuknya jaringan parut, dan respon imun maka inflamasi tersebut merupakan inflamasi kronik. Selain dari durasi terjadinya hal yang utama untuk membedakan inflamasi akut dan kronik adalah keterlibatan leukosit dan terjadinya fibrosis. Leukosit yang terlibat dalam peradangan kronik adalah makrofag, yang akan segera menggantikan neutrofil pada tahap awal terjadinya inflamasi akut (Greene and Harris, 2008). Inflamasi kronik ditentukan oleh peningkatan limfosit dan makrofag yang berhubungan dengan proliferasi vaskular dan fibrosis. Kejadian vaskular tersebut merupakan dilatasi awal dari arteriola-arteriola kecil yang berakibat pada peningkatan aliran darah, diikuti dengan penurunan kemudian berhentinya aliran darah dan peningkatan permeabilitas dari venula post kapiler, dengan eksudasi cairan (Kumar, Abbas, Fausto, dan Mitchell, 2007). 4.

Mekanisme terjadinya inflamasi Inflamasi distimulasi oleh mediator kimiawi seperti histamin, bradikinin,

serotonin, leukotrien, dan prostaglandin yang dilepaskan oleh sel yang berperan sebagai mediator inflamasi di dalam sistem kekebalan untuk melindungi jaringan sekitar dari penyebaran infeksi. Sel yang berperan dalam proses terjadinya inflamasi adalah jaringan makrofag, mast cell, dan endothelial cells, sel tersebut akan melepaskan mediator inflamasi yang berbeda. Beberapa mediator yang berperan pada proses inflamasi dapat dilihat pada tabel III.


20

Tabel III. Mediator yang berperan dalam reaksi inflamasi Reaksi Inflamsi Mediator Vasodilatasi Histamin, Prostaglandin Peningkatan permeabilitas vaskular Histamin, Serotonin, C3a dan C5a (membebaskan vasoaktif amin dari sel mast, dan sel lainnya), Leukotrien C4, D4, E4 Kemotaksis, peningkatan leukosit TNF, IL-1, Kemokin, C3a, C5a, Leukotrien B4 Panas IL-1, TNF, Prostaglandin Nyeri Prostaglandin, Bradikinin Kerusakan jaringan Enzim Lysosomal dari leukosit, reactive oxygen (Kumar et al., 2014). Mediator inflamasi amin (histamine, 5-HT) akan segera muncul dan dilepas, lipid (prostgladin, leukotrien, dan PAF) yang muncul beberapa menit dan protein (sitokin seperti interleukin dan TNF) yang membutuhkan lebih dari 30 menit untuk keluar (Supriyatna dkk., 2015). Vasoactive amines, terdiri dari histamin dan serotonin merupakan molekul yang disimpan dan dihasilkan dari sel mast. Histamin dan serotonin, mediator pertama yang akan dilepaskan saat terjadinya inflamasi akut. Pelepasan histamin oleh sel mast salah satunya dapat terjadi karena adanya rangsangan cedera fisik seperti trauma atau panas. Namun histamin tidak memberikan efek pada proses terjadinya inflamasi akut. Histamin akan banyak berperan terhadap reaksi hipersensitivitas, seperti rhinitis alergi dan urticaria (Rang, Dale, Ritter, Moore, 2003). Eicosanoid dihasilkan de novo dari fosfolipid. Eicosanoid merupakan modulator dari reaksi inflamasi. Apabila membran sel mengalami kerusakan karena adanya rangsangan kimiawi, fisik, maupun mekanis maka enzim fosfolipase akan diaktifkan untuk mengubah fosfolipid menjadi asam arakidonat (Rang et al., 2003).


21

Sumber utama dari eicosanoid adalah asam arakidonat atau arachidonic acid (5,8,11,14-eicosatetraenoic acid) merupakan 20-karbon asam lemak tak jenuh yang mengandung empat ikatan ganda (Rang et al., 2003). Produk metabolime dari asam arakidonat akan mengakibatkan adanya proses biologi seperti inflamasi dan hemostasis. Metabolit asam arakidonat disebut eicosanoid yang akan memediasi hampir pada setiap proses terjadinya inflamasi (Kumar et al., 2007). Peran asam arakidonat dalam proses terjadinya inflamasi yang dapat dimetabolisme melalui dua jalur yaitu : 1. Jalur cyclooxygenase Asam lemak cyclooxygenase yang terbagi menjadi dua bentuk yaitu COX-1 dan COX-2. Enzim tersebut yang akan mengubah asam arakidonat menjadi prostaglandin dan tromboksan (Rang et al., 2003). Produk yang dihasilkan melalui jalur cyclooxygenase berupa Prostaglandin E2 (PGE2), PGD2, PGF2α, PGI2 (prostacyclin), dan tromboksan A2 (TXA2). PGD2 merupakan metabolit utama yang dihasilkan melalui jalur cyclooxygenase, bersama dengan PGE2 dan PGF2α di sel mast, adanya metabolit tersebut mengakibatkan terjadinya vasodilatasi dan mempotensiasi pembentukan udem karena adanya peningkatan permeabilitas vaskular. Pada saat proses terjadinya inflamasi akut PGE2 dan PGI2 akan dihasilkan oleh jaringan lokal dan pembuluh darah, selain itu juga sel mast akan melepaskan PGD2. Pada inflamasi kronis, sel monosit atau makrofag akan melepaskan PGE2 dan tromboksan A2 (TXA2) (Rang et al., 2003).


22

2. Jalur Lipoxygenases Lipoxygenases yang akan berperan pada sintesis leukotrien, lipoxins, dan komponen lainnya. 5-Lipoxygenase merupakan enzim metabolit asam arakidonat yang dominan di neutrofil. Lipooksigenase bekerja pada asam arakidonat untuk membentuk 5-hydroperoxy derivat dari asam arakidonat, 5-HPETE (5hydroperoxyeicosatetraenoic acid) yang kurang stabil dan direduksi menjadi 5HETE (5-hydroxyeicosatetraenoic acid) sebagai kemotaksis neutrofil atau diubah menjadi golongan leukotrien (Rang et al., 2003). Produk dari 5-HPETE disebut leukotriene A4 (LTA4) membentuk LTB4 atau LTC4 (cysteinyl-leukotrienes). LTB4 diproduksi oleh neutrofil dan makrofag yang merupakan agen kemotaktik untuk neutrofil. LTC4, LTD4 dan LTE4 diproduksi oleh sel mast yang mengakibatkan vasokonstriksi, bronkopasma, dan peningkatan permeabilitas vaskular. Lipoxins yang merupakan hasil dari jalur lipoksigenase akan berperan dalam penghambatan inflamasi. Setelah leukosit masuk jaringan akan mengubah lipoxygenase turunan dari asam arakidonat menjadi lipoxin, yang menghambat kemotaksis neutofil dan adhesi endoelium, sehingga berfungsi sebagai antagonis endogen leukotrien. Selain itu trombosit juga diaktifkan, namun tidak dapat mensintesis lipoxin A4 dan B4 (LXA4 dan LXB4), tetapi trombosit dapat membentuk metabolit dari intermediet LTA4 dari neutrofil, dengan jalur biosintesis transelular. Mekanisme tersebut mengakibatkan metabolit-metabolit asam arakidonat melewati satu sel ke sel yang lain, yang terlibat dalam tahap inflamasi (Kumar et al., 2007). Mekanisme terjadinya inflamasi dapat dilihat pada (Gambar 5).


23

LTC4 (cysteinyl-leukotrienes) akan mengakibatkan adanya kontraksi pada otot bronkial, dan terjadinya vasodilatasi pada pembuluh namun jantung akan mengalami vasokonstriksi. LTB4 dapat ditemukan eksudat inflamasi dan meruapakan mediator yang terdapat pada beberapa tipe inflamasi, seperti rheumatoid arthritis, psoriasis (inflamasi kronis yang terjadi pada kulit) dan ulcerative colitis. LTC4 merupakan mediator penting terjadinya asma (Rang et al., 2003).

Gambar 5. Metabolit asam arakidonat dan perannya dalam proses inflamasi serta target dari beberapa obat antiinflamasi (Kumar et al., 2014).


24

C. Karagenin Karagenin merupakan hasil ekstraksi spesies tertentu dari rumput laut merah kelas Rhodophyceae yaitu Chondrus, Gigartina, dan Eucheuma species. Jenis rumput laut tersebut pada umumnya banyak ditemukan di Samudera Atlantik, Eropa, dan Amerika Utara (Necas dan Bartosikova, 2013). Secara struktural karagenin atau sering disebut karagenan merupakan kelompok polisakarida yang terdiri dari monomer galaktosa (Morris, 2003). Pemeriannya berupa serbuk berwarna kecoklatan, berbentuk butiran kasar hingga serbuk halus, tidak berbau, dan tidak berasa (Rowe, Sheskey, and Quinn, 2009). Karagenin dapat digunakan dalam berbagai aplikasi seperti sebagai pembentuk gel, stabilizing, thickening, formulasi pada kosmetik, dan aplikasi industri. Selain itu karagenin memiliki kegunaan khusus sebagai senyawa iritan yang digunakan untuk pengujian obat antiinflamasi dan merupakan senyawa penginduksi inflamasi akut pada tikus atau mencit. Selain itu karagenin merupakan model penginduksi inflamasi yang sederhana dan digunakan untuk mengevaluasi nyeri di lokasi peradangan tanpa adanya cedera atau kerusakan pada kaki yang meradang (Necas dan Bartosikova, 2013). Berdasarkan Posadas, Bucci, Roviezzo, Rossi, Parente, Sautebin, and Cirino (2004) melaporkan bahwa terdapat sekitar 400 laporan penelitian yang menggunakan karagenin sebagai penginduksi inflamasi pada kaki tikus ataupun mencit untuk menguji obat antiinflamasi serta untuk mempelajari mekanisme yang terlibat dalam peradangan.


25

Penelitian penggunaan karagenin sebagai model uji inflamasi juga telah dilakukan oleh Necas dan Bartosikova (2013) pada kaki secara subplantar dengan konsentrasi 1-3% yang dilarutkan pada larutan garam NaCl fisiologis 0,9% b/v. Penggunaan konsentrasi yang lebih tinggi digunakan untuk model pengujian pada kondisi patofisiologi tertentu. Karagenin diberikan secara suplantar dengan volume sebesar 0,1 mL untuk tikus dan 0,05 mL untuk mencit (Suleyman, Demircan, Karagoz, dan Ozta, 2004). Berdasarkan kandungan sulfat dan potensi pembentukan gel, karagenin dibedakan menjadi tiga yaitu lamda (λ) karagenin, iota (i) karagenin dan kappa (k) karagenin. Lamda (λ) karagenin merupakan salah satu jenis karagenin yang diketahui cepat menyebabkan inflamasi dan memiliki bentuk gel yang tidak keras (Tobacman, Wallace, Zimmerman., 2001), sehingga dalam penelitian ini digunakan karagenin sigma tipe (λ) sebagai penginduksi inflamasi pada mencit jantan galur Swiss. Mekanisme aksi karagenin sebagai senyawa penginduksi inflamasi sinergis dengan beberapa mediator inflamasi seperti bradikinin, serotonin, histamin, prostaglandin, leukotrien, dan chemotactic agents (Mariana, Fernandes, Fingolo, Boylan, 2013). Penginduksian karagenin digambarkan secara bhipasic yaitu memiliki dua fase untuk menyebabkan inflamasi. Berdasarkan Suleyman et al. (2004) fase awal akan berakhir 60 menit setelah injeksi dan dihubungkan dengan pelepasan histamin, serotonin, dan bradikinin. Fase akhir terjadi antara 60 menit setelah injeksi dan berakhir setelah 3 jam, yang dihubungkan dengan


26

adanya pelepasan prostaglandin dan nutrofil yang menghasilkan radikal bebas seperti superoksida dan radikal hidroksil. Histamin, serotonin dan bradikinin adalah mediator yang terdeteksi pada fase setelah diinduksi karagenin. Prostaglandin (PG) akan terlibat dalam peningkatan permeabilitas vaskuler dan akan terdeteksi pada tahap akhir dari peradangan. Terjadinya peradangan lokal atau sistemik dikaitkan dengan peningkatan sitokin pro-inflamasi TNF-α, IL-1, dan IL-6. Fase kedua terjadi peningkatan pembengkakan karena adanya produksi prostaglandin yang meningkat dan adanya induksi cyclooxigenase (COX-2) pada kaki belakang (Necas dan Bartosikova, 2013). Zat lain yang dapat digunakan untuk memicu terbentuknya udem antara lain: mustard oil 5%, dextran 1%, egg white fresh undiluted, serotonin kreatinin sulfat, suspension of kaolin 5%, dan ovalbumin solution 1% (Vogel, 2002).

D. Obat Antiinflamasi Non Steroid (NSAID) Non-Steroidal

Antiinflamatory

Drugs

(NSAID)

merupakan

suatu

kelompok senyawa yang heterogen karena sering tidak berikatan secara kimiawi atau memiliki struktur kimia berbeda yang sebagian besar merupakan asam organik, namun memiliki kerja terapeutik dan efek samping tertentu yang sama. Efek terapeutik utama NSAID adalah kemampuannya mengahambat pembentukan prostaglandin. Enzim pertama pada jalur sintetik prostaglandin adalah prostaglandin endoperoksida sintase atau asam lemak cyclooxigenase. Terdapat dua bentuk cyclooxigenase, yaitu cyclooxigenase-1 (COX-1) dan cyclooxigenase-


27

2 (COX-2). COX-1 merupakan suatu isoform konstitutif yang terdapat dalam kebanyakan sel dan jaringan normal, sedangkan COX-2 terinduksi saat berkembang peradangan oleh sitokin dan mediator radang (Goodman dan Gilman, 2007). Prostaglandin dibentuk melalui COX-2 dengan aktivitasnya memediaasi adanya nyeri, inflamasi, demam, dan menghambat agregasi platelet. NSAID akan menghambat baik COX-1 dan COX-2 yang disebut NSAID non-selektif, sedangkan NSAID yang didominasi menghambat COX-2 disebut COX-2 inhibitor (Day and Graham, 2013) Kebanyakan NSAID merupakan asam organik yang bekerja sebagai inhibitor aktivitas cyclooxigenase yang reversibel dan kompetitif. Sebagai asam organik, senyawa tersebut akan diabsorpsi dengan baik secara oral, banyak yang berikatan dengan protein plasma, dan diekskresi melalui filtrasi glomerulus atau melalui sekresi tubulus. Kalium diklofenak, salah satu dari NSAID yang merupakan asam organik akan menumpuk pada tempat radang, sehingga memiliki efek sebagai antiradang (Goodman dan Gilman, 2007). NSAID secara garis besar dibagi menjadi dua kelompok, yaitu NSAID yang mempunyai waktu paruh pendek (≤ 6 jam) dan yang mempunyai waktu paruh lama (>10 jam). NSAID long-acting seperti Naproxen, diformulasikan untuk pengobatan dengan kondisi kronis, yang hanya membutuhkan dosis hanya sekali atau dua kali sehari. NSAID short-acting memiliki onset yang relatif lebih cepat dan akan lebih cocok untuk pengobatan yang termasuk dalam kategori akut. Namun,

paparan terus-menerus NSAID

akan menimbulkan efek

pada


28

gastrointestinal yang dapat merugikan (Masso, Patrignani, Tacconelli, Garcia, 2010). E. Diklofenak Diklofenak termasuk golongan NSAID (nonsteroidal anti-inflammatory drug inhibitor COX nonselektif), bekerja dengan menghambat cyclooxygenase (COX) yaitu isoform COX-1 dan COX-2 yang memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi, analgesik (nyeri ringan hingga sedang), dan antipiretik. NSAID diklofenak terdapat dua basis yaitu kalium dan natrium diklofenak. Diklofenak memiliki rumus kimia 2-[(2,6 dichlorophenyl)amino)] benzene acetic acid monopotassium atau monosodium salt] yang tergantung pada basis garamnya (Cole, 2011). Struktur kalium dan natrium diklofenak dapat dilihat pada (Gambar 6).

Gambar 6. Struktur Natrium dan Kalium Diklofenak (Altman et al., 2015). Kalium diklofenak, ion sodium dari sodium diklofenak diganti dengan ion kalium. Zat aktif yang terkandung pada kalium diklofenak sama dengan zat aktif sodium diklofenak, perbedaan hanya terdapat pada jenis garamnya. Pada penelitian ini digunakan Diclofenac Potassium Powder, karena akan lebih mudah


29

larut dalam air dan memberikan pelepasan dan penyerapan yang lebih cepat dari natrium diklofenak (Altman, Bosch, Brune, Patrignani, dan Young, 2015). Kalium diklofenak berupa serbuk, ketika tertelan akan lebih cepat mencapai sirkulasi sistemik. Konsentrasi plasma puncak akan dicapai dalam waktu 10-15 menit setelah pemberian dosis (Altman et al., 2015). Bioavaibilitas sistemiknya hanya antara 30-70% karena melewati first pass metabolism (Katzung, 2001). Diklofenak akan diakumulasi di cairan sinovilia yang menjelaskan efek terapi di sendi jauh lebih panjang dari waktu paruh (t1/2) obat tersebut di dalam plasma yang singkat yaitu 2 jam. Dua jam setelah diklofenak mencapai konsentrasi maksimal di dalam plasma, konsentrasi diklofenak akan lebih tinggi di cairan sinovial, dengan waktu paruh eliminasi dari cairan sinovial sekitar 3-6 jam. Efek samping yang lazim ialah mual, gastritis, eritemia kulit dan sakit kepala. Kontraindikasi obat ini adalah penderita hipersensitivitas terhadap diklofenak atau penderita asma, urtikria atau alergi pada pemberian NSAID, serta penderita tukak lambung. Dosis yang digunakan untuk orang dewasa 100-150 mg/hari terbagi dua atau tiga dosis (Altman et al,, 2015). Mekanisme diklofenak menghambat enzim COX-1 dan COX-2. Pengikatan COX isozim untuk menghambat sintesis prostaglandin [PG]-E2. [PG]E2 merupakan prostanoid dominan yang diproduksi dalam peradangan dan akan dihambat oleh obat golongan NSAID yang diyakini menjadi mekanisme utama untuk memberikan efek analgsik dan anti-inflamasi yang kuat. Diklofenak memiliki selektivitas tinggi untuk mengahmbat COX-2 dibandingkan COX-1


30

isoenzim. COX-2 diinduksi oleh rangsangan proinflamasi seperti TNF α, IL-2, IFNγ dan mediator inflamasi yang lainnya (Altman et al., 2015). Metabolit utama dari diklofenak adalah 4-hydroxydiclofenac, setelah biotransformasi menjadi glukuronida dan konjugat sulfat dari metabolitnya, diekskeresikan dalam urin dan empedu. Sekitar 65% dari dosis diklofenak diekskresikan dalam urin dan 35% empedu sebagai konjugat diklofenak (Altman et al, 2015). Penggunaan diklofenak serbuk yang dikemas dalam bentuk powder packets secara umum dilakukan dengan cara melarutkan 1 packets ke dalam 30-60 mL air atau tidak melebihi 240 mL air. Kalium diklofenak serbuk akan larut sempurna dengan air (Uppoor, 2007).

F. Metode Uji Inflamasi a.

Model Inflamasi Akut 1. Induksi Karagenin Pengujian inflamasi akut untuk menentukan aktivitas antiinflamasi secara

non-imunologi dapat digunakan penginduksi berupa suspensi karagenin yang disuntikan secara subplantar pada kaki belakang tikus. Pengukuran aktivitas penghambatan inflamasi dapat digunakan plethysmometer method, sehingga dapat diketahui volume kaki tikus yang telah terinduksi oleh senyawa inflamasi (Gupta, 2013). Aktivitas antiinflamasi obat ditunjukkan oleh kemampuannya mengurangi udem yang diinduksi pada kaki tikus jantan atau betina (Vogel, 2002). Respon inflamasi akut ditandai dengan peningkatan permeabilitas pembuluh darah dan infiltrasi seluler yang meyebabkan pembentukan udem


31

sehingga terjadi ekstravasasi cairan dan protein serta akumulasi leukosit di lokasi inflamasi. Metode carageenan-induced paw edema merupakan metode yang telah banyak digunakan sebagai metode pengujian aktivitas antiinflamasi dengan menggunakan hewan uji (Necas, 2013). Metode tersebut telah dijelaskan pula oleh Chakraborty et al (2004), merupakan standar metode yang digunakan untuk penelitian inflamasi akut. Selain itu, penggunaan metode tersebut dengan induksi karagenin pada kaki tikus telah banyak digunakan untuk menguji obat antiinflamasi baru serta digunakan untuk mempelajari mekanisme yang terlibat dalam peradangan. Sekitar 400 penelitian telah menggunakan metode udem kaki tikus. Karagenin merupakan salah satu senyawa iritan yang digunakan sebagai agen patologi penyebab inflamasi (Chakraborty et al, 2004). Karagenin yang diinduksi pada telapak kaki tikus merupakan pengujian yang telah banyak digunakan untuk menentukan aktivitas antiinflamasi (Posadas et al., 2004). Berdasarkan penelitian terdahulu yang dilakukan oleh Nantel, Denis, Gordon, Northey, Cirino, dan Metters (1999) menunjukkan bahwa COX-2 yang merupakan mediator yang diinduksi ketika adanya peradangan akan mencapai maksimal setelah 1 jam penginjeksian karagenin. Berdasarkan analisis literatur yang telah dilakukan Posadas et al. (2004) menunjukkan bahwa injeksi karagenin 1% pada kaki mencit menyebabkan udem selama waktu pengamatan yaitu 6 jam pengamatan.


32

Pengukuran besarnya udem pada telapak kaki mencit sebagai tanda adanya respon inflamasi pada penelitian ini digunakan jangka sorong digital yang telah dilakukan kalibrasi (Lampiran 4). Jangka sorong memiliki kelibihan dibandingkan dengan metode pengukuran dengan potong kaki, berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan oleh Juma’a, Ahmed, Nurman, and Hussain (2009) menunjukkan hasil bahwa dengan menggunakan metode potong kaki hasil pengukuran pada setiap tikus berbeda tergantung pada tempat pemotongan kakinya, sedangkan apabila pengukuran dengan menggunakan jangka sorong menunjukkan hasil pengukuran yang tidak bervariasi atau sama pada setiap pengukuran pada telapak kaki tikus yang mengalami udem. Selain itu jangka sorong memiliki beberapa kelebihan dalam penggunaannya, antara lain yaitu mudah dalam pengaplikasiannya, memiliki angka yang cukup akurat, dan tidak diperlukannya pengorbanan hewan uji seperti pada metode potong kaki. Kelebihan dari metode uji carageenan-induced paw edema pada penelitian ini adalah sederhana dan sering digunakan untuk mengevaluasi potensi senyawa yang belum diketahui (sebagai skrining awal), cepat, pengukuran udema dapat dilakukan lebih akurat dengan mengukur pada bagian telapak kaki yang mengalami udem secara langsung, dan mudah diamati pembentukan udemnya (Vogel, 2002). Kekurangan dari metode uji ini adalah pada teknik penyuntikan induksi udem pada telapak kaki hewan uji dengan menggunakan karagenin secara suplantar yang tidak menjamin pembentukan volume udem yang seragam sehingga dapat mempengaruhi nilai simpangan pada masing-masing kelompok jewan uji yang cukup besar. Oleh karena itu, pengatasannya adalah pada saat


33

penyuntikan udem dilakukan oleh orang yang telah terlatih dan terbiasa dalam melakukan penyuntikan secara suplantar, sehingga hasil volume udem pada setiap kaki mencit akan sama dan dapat mengurangi variansi yang dihasilkan pada masing-masing kelompok hewan uji. 2.

Induksi Formalin Formalin merupakan larutan formaldehid yang sekitar 37% larut dalam air,

kandungan unsur aldehid yang terdapat dalam formalin akan mudah bereaksi dengan protein sehingga mengakibatkan kematian sel. Formalin akan menghasilkan inflamasi lokal dan nyeri. Pada penelitian yang dilakukan oleh Nathania (2011), formalin yang digunakan memiliki konsentrasi 0,5% dan diberikan sebanyak 0,025 mL dengan cara diinjeksikan pada mencit secara subplantar. Pengukuran tebal kaki mencit dilakukan pada menit ke 0, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330, 360 selama 6 jam, dengan menggunakan jangka sorong yang telah dikalibrasi. b. Model Inflamasi Sub-akut Modifikasi

metode

udem

buatan

dengan

granuloma

pounch,

penginduksian udem dilakukan dengan cara mencukur bulu pada bagian punggung mencit terlebih dahulu dengan diameter ± 3 cm hingga bulu benarbenar hilang. Pada bagian punggung yang telah dicukur disuntikkan 5 mL udara secara subkutan hingga terbentuk kantong udara. Setelah 24 jam kantong udara yang terbentuk dihisap udaranya hingga kempes. Ditambahkan larutan karagenin 2% sebanyak 0,2 mL pada tempat yang terdapat kantong udara (Verawati, Aria, dan Novicaresa, 2011).


34

Sediaan uji yang digunakan adalah hidrokortinson asetat diberikan secara topikal segera setelah pemberian karagenin 2%, adapun pemberian obat dilakukan selama 4 hari. Pengukuran volume radang dilakukan pada hari ke lima, eksudat (cairan yang tertimbun dalam jaringan atau ruangan yang diakibatkan adanya peningkatan permeabilitas pembluh darah) yang terbentuk diambil dengan menggunakan jarum suntuk dan diukur volumenya. Selain itu juga, pada eksudat tersebut dilakukan pengamatan menggunakan mikroskop untuk melihat jumlah sel neutrofil, eusinofil, limfosit, dan sel monosit (Verawati dkk. (2011). c.

Model Inflamasi Kronik Metode Induksi Arthritis, merupakan metode yang digunakan untuk

induksi arthritis rheumatoid yang merupakan inflamasi kronik. Motede induksi ini bertujuan untuk menghasilkan reaksi imun yang menyebabkan inflamasi. Induksi dapat dilakukan dengan menginjeksikan sejumlah antigen ke hewan uji. Pada penelitian yang dilakukan Gupta, Bharadwaj, Lata, Sharma, Kacker, and Sharma (2013) digunakan formaldehid sebagai penginduksi arthritis. Formaldehid 2% (v/v) diinjeksikan secara subplantar sebanyak 0,1 mL pada telapak kaki tikus pada hari pertama hingga ketiga selama percobaan. Agen antiartritis diberikan secara berturut-turut selama 10 hari. Perubahan volume telapak kaki berupa udem diukur dengan menggunakan plethysmometer.

G. Metode Penyarian Ekstraksi merupakan proses pemisahan bahan dari campuran dengan menggunakan pelarut. Ekstrak secara terminologi umum terdiri dari ekstrak air, ekstrak kental, dan ekstrak kering. Ekstrak adalah sediaan yang diperoleh dengan


35

cara ekstraksi tanaman obat dengan ukuran partikel tertentu dan menggunakan medium pengekstraksi (menstruum) yang tertentu pula. Ekstrak yang diperoleh setelah pemisahan cairan dari residu tanaman obat dinamakan “micella” (Agoes, 2009). Cairan penyari dalam proses ekstraksi menggunakan pelarut yang sesuai dengan kandungan senyawa atau optimal untuk kandungan senyawa yang berkhasiat sehingga dalam ekstrak dapat mengandung senyawa yang diinginkan dan dapat terpisah dari senyawa-senyawa lain (Depkes RI, 2000). Pemilihan pelarut untuk ekstraksi sangat penting supaya ekstraksi senyawa aktif dapat efisien dan mengeliminasi komponen yang tidak diinginkan serta pemilihan pelarut tersebut tidak mengubah aktivitas farmakologinya (Supriyatna dkk., 2014). Ekstrak air, merupakan ekstrak menggunakan pelarut air sebagai cairan pengekstraksi. Hasil ekstraksi dalam bentuk ekstrak ini dapat digunakan langsung atau digunakan setelah waktu tertentu. Pembuatan ekstrak air dapat dilakukan dengan cara decoctum (dekok) yaitu penyari menggunakan simplisia dengan perbandingan dan derajat kehalusan tertentu. Cairan penyari air digunakan pada suhu 900-950C selama 30 menit. Infusum (infus) seperti halnya dekok hanya saja waktu penyarian selama 15 menit (Agoes, 2009). Pada umumnya, penyari infusum dalam bentuk infus zat larut air dari simplisia tanaman. Penyarian dapat dilakukan dengan penambahan bahan tertentu untuk optimasi proses penyarian. Coque (Penggodokan) penyarian dengan cara menggodok tanaman obat atau jamu menggunakan api langsung.


36

Hasil godokan setelah mendidih dimanfaatkan sebagai obat secara keseluruhan. Cara ini sering digunakan dalam konsumsi jamu tradisional. Seduhan, metode ini menggunakan air mendidih, simplisia direndam dalam air panas selama waktu tertentu (5-10 menit) seperti halnya membuat teh seduhan. Cara ini masih sering digunakan untuk konsumsi jamu seduh dan kelompok teh. Maserasi merupakan penyarian simplisia menggunakan bermacam pelarut pada suhu kamar selama beberapa waktu. Sedangkan, perkolasi merupakan penyarian dengan menggunakan pelarut yang selalu baru sampai semua bahan aktif terekstraksi secara keseluruhan (Agoes, 2009). Ekstrak kental, pada suhu kamar apabila hangat tidak berbentuk cair. Ekstrak yang diperoleh dari ekstrak cair yang diuapkan larutan penyarinya secara hati-hati. Ekstrak kental merupakan massa kental yang mengandung bermacam konsentrasi dan kekuatan bahan berkhasiat serta dapat disesuaikan (sesuai ketentuan) dengan penambahan bahan aktif alam atau dengan penambahan sejumlah bahan inert, seperti dekstrin, laktosa, dan sebagainya. Ekstrak kental memiliki stabilitas yang rendah dan mudah ditumbuhi mikroorganisme, pemakaian ekstrak kental secara luas telah digantikan oleh ekstrak kering (Agoes, 2009). Ekstrak kering (extr sicca), merupakan ekstrak tanaman yang diperoleh dengan cara pemekatan dan pegeringan ekstrak cair di bawah kondisi lemah (suhu dan tekanan rendah). Konsentrasi bahan aktif dalam sediaan akhir dapat disesuaikan dengan penambahan bahan inert (Agoes, 2009).


37

Metode penyarian yang digunakan dalam penelitian ini adalah fraksinasi dari hasil ekstraksi padat-cair dengan maserasi yang maseratnya diuapkan pada rotary evaporator hingga menghasilkan ekstrak kental untuk proses selanjutnya yaitu fraksinasi menggunakan pelarut etanol-heksan. Penentuan penggunaan pelarut berdasarkan tingkat kelarutan senyawa pada pelarut yang digunakan sehingga suatu senyawa akan mudah larut dalam pelarut yang memiliki polaritas sama (Dharmawan, Darmaji, dan Harmayani, 1999). Berikut penjelasan proses ekstraksi yang dilakukan pada penelitian ini: 1. Maserasi Maserasi adalah proses ekstraksi yang dilakukan pada suhu kamar, maserasi memungkinkan untuk pelarut menembus struktur seluler pada tumbuhan dan melarutkan senyawa aktif di dalamnya (Supriyatna, Moelyono, Iskandar, Febriyanti, 2014). Cara penyarian simplisia secara maserasi dengan menggunakan cairan penyari dan pengojokan beberapa kali pada suhu ruangan akan mengakibatkan cairan penyari menembus dinding sel dan masuk ke rongga sel. Perbedaan konsentrasi antara larutan di dalam dan di luar sel membuat larutan terpekat yang mengandung zat aktif akan terdesak ke luar dan larut pada pelarut yang telah digunakan dan sesuai dengan kandungan zat aktif yang terkandung dalam tumbuhan. Peristiwa ini terjadi secara berulang sehingga terjadi kesetimbangan konsentrasi di dalam dan di luar sel. Jika telah terjadi kesetimbangan maka penyarian akan berhenti, sehingga perlu dilakukannya remaserasi. Remaserasi adalah pengulangan penambahan pelarut yang sama dengan pelarut sebelumnya digunakan untuk maserasi. Penambahan pelarut


38

dilakukan setelah penyarian maserasi yang pertama dan seterusnya (Depkes RI, 1986). Keuntungan penyarian maserasi yaitu, peralatan yang digunakan sederhana dengan pengerjaan yang mudah. Kerugian dari metode tersebut adalah waktu yang dibutuhkan lama dan penyarian yang kurang sempurna (Depkes RI, 1986). 2. Ekstraksi Bertingkat Menurut

Damayanti

dan

Suparjana

(cit

Prasetyo,

2013),

telah

dikembangkan metode baru yaitu ekstraksi bertingkat dimana ekstraksi menggunakan sederet pelarut dengan kepolaran yang berbeda, mulai dari pelarut non polar lalu pelarut yang lebih polar. Penyarian menggunakan metode ekstraksi bertingkat yang dilakukan dengan maserasi menggunakan beberapa cairan penyari disebut sebagai fraksinasi karena cairan penyari yang digunakan berbeda kepolarannya sehingga senyawa dalam fraksi yang didapat telah mengalami pemisahan bersadarkan kepolarannya. Pada penelitian ini digunakan pelarut heksan dan etanol, heksan memiliki nilai log P = 3,13 bersifat semi-polar sedangkan etanol memiliki nilai log P = - 0,16 bersifat polar. Kriteria penggolongan kepolaran senyawa didasarkan pada nilai Log P, apabila nilai log P < 2 tergolong polar, log P 2 < log P < 4 (semi-polar) dan log P > 4 (nonpolar) (Holmberg, 2003). Kandungan yang didapatkan dari ekstrak metanol-air masih tergolong kompleks karena dapat menyari senyawa seperti anthocyanine, terpenoid, saponin, tanin, flavonoid, pholyphenols, lactones, lectin (Tiwari, Kumar, Kaur,


39

Kaur, dan Kaur, 2011). Sedangkan pada penelitian ini akan mengambil senyawa megastigmane glycosides dan kelompok senyawa ellagitannins, sehingga digunakan pelarut etanol-heksan yang memiliki kepolaran berbeda dan telah disesuaikan dengan tingkat kelarutan senyawa terhadap pelarut yang digunakan. Hal ini dapat dilihat dari kedekatan nilai log P senyawa dengan log P campuran pelarut yang digunakan untuk menarik senyawa tersebut. Keuntungan metode ekstraksi bertingkat ini adalah semua senyawa yang berbeda polaritasnya dapat diekstraksi berdasarkan kepolaran terhadap pelarut tertentu. Keuntungan penggunaan metode fraksi dibandingkan dengan dekok dan infusa yang dibuat dengan air adalah pada dekok dan infusa konsentrasi termaserasi umumnya lebih rendah dan dibutuhkan penambahan pengawet. Selain itu, fraksi mengandung bahan aktif hasil penguraian dengan tahapan yang lebih banyak

dan

kandungan

alkohol

sehingga

tidak

diperlukan

pengawet

(Agoes,2009). H. Metanol Pelarut yang cocok digunakan untuk campuran dengan air (panas atau dingin) adalah metanol, etanol, aseton, dan etil asetat. Metanol dan etanol telah banyak digunakan untuk mengekstrak antioksidan (Sultana, Anwar, dan Ashraf, 2009). Metanol atau methyl alcohol memiliki rumus molekul CH4O, merupakan cairan yang tidak berwarna dan mudah menguap dengan bau yang menyengat seperti etil alkohol, selain itu metanol dapat bercampur sempurna dengan air. Metanol memiliki titik didih 650C dan nilai log P sebesar -0,76 yang tergolong


40

polar, pada umumnya digunakan sebagai pelarut dalam sintesis kimia, pengawet, pembuatan bahan kimia, pelarut pada pembuatan cat dan plastik (National Center for Biotechnology Information, 2015). Metanol banyak digunakan sebagai larutan penyari pada metode ekstraksi maserasi, hal ini dikarenakan metanol diduga mampu melarutkan hampir semua komponen baik yang bersifat polar, semi polar, maupun non-polar sehingga metanol disebut sebagai pelarut universal (Al-Ash’ary dkk., 2010). Efek metanol pada kesehatan manusia bergantung pada banyaknya metanol yang terpejankan. Metanol jika terhirup atau tertelan dapat menyebabkan gangguan penglihatan, seperti kabur. Dalam jumlah kecil metanol akan berefek pada sistem saraf manusia dan apabila kontak dengan dengan metanol dapat menghasilkan dermatitis ringan pada manusia (United States Environmental Protection Agency, 2013). I. Etanol Etanol atau ethyl alcohol dengan rumus molekul C2H6O memiliki titik didih sebesar 78,20C dan nilai log P -0,16 yang tergolong polar merupakan cairan jernih tidak berwarna dapat dengan cepat diserap oleh saluran pencernaan dan didistribusikan ke seluruh tubuh. Etanol memiliki aktivitas bakterisida dan sering digunakan sebagai desinfektan topikal, selain itu juga banyak digunakan sebagai pelarut dan pengawet dalam sediaan farmasi, dan bahan utama minuman beralkohol (National Center for Biotechnology Information, 2015). Etanol di dalam tubuh akan mengalami oksidasi oleh suatu enzim hati yaitu alcohol dehydrogenase. Hasil dari oksidasi etanol adalah asetaldehid dan


41

asam asetat. Namun, hasil oksidasi tersebut kurang toksik dibandingkan dengan metanol yang menghasilkan toksik seperti formaldehid dan asam formiat atau formic acid (Stoker, 2010). J. Heksan Heksan atau n-Hexane memiliki rumus molekul C6H14 dengan titik didih 68,70C dan nilai log P sebesar 3,13 menunjukkan bahwa heksan bersifat semi polar merupakan cairan jernih tidak berwarna dengan bau seperti minyak. Heksan tidak dapat larut air dan banyak digunakan sebagai pelarut, thinner, reaksi kimia dan sebagai agen pembersih (National Center for Biotechnology Information, 2015). Toksisitas heksan, paparan dalam waktu jangka pendek melalui inhalasi dapat mempengaruhi sistem saraf pusat ringan (CNS) seperti pusing, mual, dan sakit kepala. Paparan jangka panjang dapat berakibat pada efek poluneuropati seperti penglihatan kabur, otot lemah dan sakit kepala. Efek neurotoksik juga telah dilaporkan dari hasil pengamatan pada tikus dengan paparan jangka panjang (United States Environmental Protection Agency, 2013).

K. Landasan teori Proses inflamasi menandakan adanya mekanisme perlindungan di dalam tubuh terhadap berbagai rangsangan seperti infeksi dan cedera jaringan dengan membasmi agen-agen yang berbahaya untuk memperbaiki jaringan. Inflamasi merupakan respon terhadap kerusakan jaringan akibat adanya rangsangan yang merugikan baik rangsangan kimia maupun mekanis, infeksi dari benda asing seperti bakteri dan virus. Pada proses inflamasi akan terjadi reaksi vaskular,


42

sehingga cairan, elemen-elemen darah, sel darah putih (leukosit), dan mediator kimia berkumpul pada tempat cedera untuk menetralkan dan menghilangkan agen-agen berbahaya serta memperbaiki jaringan yang rusak. Adanya kerusakan jaringan tersebut akan memicu terjadinya pembebasan asam arakidonat yang berubah menjadi prostaglandin suatu mediator inflamasi yang diperantarai oleh enzim siklooksigenase (COX). Radikal bebas akan terbentuk ketika asam arakidonat dikonversi menjadi endoperoksida melalui jalur siklooksigenase dan hidroperoksida melalui jalur lipooksigenase sehingga terjadi pelepasan mediator inflamasi. Radikal bebas merupakan elektron tidak berpasagan yang akan bersifat reaktif mendapatkan pasangan elektron, apabila reaksi tersebut berlebih dan tidak terkendali akan dapat mengakibatkan kerusakan pada fungsi sel manusia. Karagenin, merupakan senyawa yang memiliki kegunaan khusus sebagai senyawa iritan, dimana dalam penelitian sering digunakan untuk pengujian antiinflamasi dan merupakan senyawa penginduksi inflamasi akut pada tikus atau mencit. Selain itu karagenin merupakan model penginduksi inflamasi yang sederhana dan digunakan untuk mengevaluasi adanya peradangan tanpa adanya cedera atau kerusakan pada kaki yang meradang. Apabila terjadinya inflamasi tersebut dibiarkan dan terjadi secara berlebihan akan dapat memberikan efek merugikan

bagi

tubuh

sehingga

diperlukan

agen

antiinflamasi

untuk

mengendalikan reaksi inflamasi tersebut. Kandungan baru yang ditemukan dalam penelitian Puteri dan Kawabata (2010) dari daun Macaranga tanarius L. yaitu senyawa ellagitannins dinamakan mallotinic acid, corilagin, macatannin A, chebulagic acid, dan macatannin B


43

dimana pada penelitian ini senyawa yang dituju adalah chebulagic acid (nilai Log P = 2,30), dan macatannin B (nilai Log P = 2,57) yang memiliki nilai kepolaran sama dengan pelarut etanol-heksan (nilai Log P = 2,97) dengan sifat semipolar pada metode pembuatan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Isolasi senyawa pada tanaman tersebut akan bergantung pada polaritas senyawa terhadap pelarut yang digunakan untuk mengisolasi senyawa tersebut. Senyawa-senyawa yang telah dilaporkan dari hasil penelitian Puteri dan Kawabata (2010), memperlihatkan adanya aktivitas penangkapan radikal bebas. Valdés, Figueroa, Carbo, Barragán, Herrera, and Aguilar (2011) melaporkan bahwa kandungan ellagitannis memiliki kemampuan penangkapan radikal bebas dan berperan terhadap inflamasi. Kemampuan tersebut menjadikan daun Macaranga tanarius L, dengan kandungan senyawa ellagitannins sebagai salah satu bahan alam yang berpotensi sebagai alternatif untuk mengatasi inflamasi. Melalui penelitian ini akan diketahui apakah dengan pemberian fraksi heksan-etanol ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., dengan senyawa yang dituju adalah chebullagic acid dan macatannin B dapat menurunkan inflamasi pada telapak kaki belakang mencit, mengetahui berapa persen penghambatan inflamasi, besar potensi relatif daya antiinflamasi, dan mengetahui adanya hubungan kekerabatan antara dosis pemberian fraksi heksan-etanol ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., terhadap efek antiinflamasi pada mencit terinduksi karagenin 1%.


44

Pengujian efek antiinflamasi pada penelitian ini menggunakan metode induksi udem pada telapak kaki mencit, dengan senyawa penginduksi berupa karagenin 1%. Penurunan udem pada telapak kaki belakang mencit dapat diketahui dengan pengukuran menggunakan jangka sorong digital pada setiap menit ke-0, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330, 360 selama 6 jam yang kemudian dihitung dengan metode trapezoid untuk melihat tebal udem yang dihasilkan pada tiap satuan waktu (menit).

L. Hipotesis Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. yang diberikan secara oral dapat memberikan efek antiinflamasi pada mencit terinduksi karagenin 1 %.


BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni karena dilakukan dengan adanya perlakuan, secara rendomisasi, dan tanpa ada penelitian sebelumnya. Selain itu pada penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap pola searah. Rancangan acak lengkap pola searah digunakan karena faktor yang dilakukan pengujian hanya ada satu yaitu pengaruh pemberian dosis fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., terhadap udem pada telapak kaki mencit jantan galur Swiss yang diinduksi karagennin 1% secara subplantar dengan pengukuran menggunakan jangka sorong digital.

B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional Variabel yang digunakan dalam penelitian ini adalah: 1. Variabel utama a. Variabel bebas. Dosis sediaan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. b. Variabel tergantung. Besarnya udem telapak kaki belakang pada mencit galur Swiss yang terinduksi karagenin 1% . 2. Variabel pengacau a. Variabel pengacau terkendali. Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini adalah subyek uji berupa mencit dengan galur Swiss berjenis kelamin jantan, dengan berat badan 20-30 gram, umur 2-3 bulan. Bahan uji yang digunakan berupa daun Macaranga tanrius L., yang berasal dari Paingan, 45


46

Maguwoharjo, Sleman, Yogyakarta. b. Variabel pengacau tak terkendali. Variabel pengacau tak terkendali dalam penelitian ini adalah keadaan patofisiologis dari hewan uji yang digunakan, kemampuan tubuh hewan uji untuk mengabsorpsi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., serta kemampuan hewan uji untuk menerima induksi udem pada telapak kaki mencit sebagai bentuk terjadinya proses peradangan atau inflamasi. 3. Definisi operasional a. Daun Macaranga tanarius L. yang digunakan adalah daun yang berwarna hijau segar, tidak berlubang, serta tidak terdapat kotoran binatang kecil. Pengambilan daun dilakukan pada pagi hari, pukul 07.00 – 10.00 WIB di daerah Paingan, Maguwoharjo, Sleman, Yogyakarta. b. Ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. adalah proses pemisahan bahan dari campuran menggunakan pelarut yang sesuai dengan sifat kepolaran senyawa yang dituju. Proses pembuatan ekstrak pada penelitian ini menggunakan metode ekstraksi padat-cair dengan cara mengekstraksi serbuk daun Macaranga tanarius L., yang dilarutkan dalam metanol dan air dan dilakukan maserasi selama 72 jam. c. Fraksi etanol-heksan daun Macaranga tanarius L. merupakan metode ekstraksi bertingkat dilakukan dengan maserasi menggunakan beberapa cairan penyari yang berbeda kepolarannya. Proses fraksinasi pada penelitian ini dilakukan dengan cara hasil dari proses ekstraksi metanol-air


47

berupa ekstrak kental diekstraksi kembali menggunakan pelarut etanolheksan, dengan proses maserasi. d. Dosis pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanariius L. merupakan jumlah fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macarangan tanarius L. yang didapatkan dari penetapan konsentrasi terpekat fraksi sebesar 0,6 gram/25 mL atau 2,4 % dan hasil konversi penggunaan pada tikus dengan dosis tertinggi sebesar 137 mg/kgBB. e. Pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air secara peroral merupakan pemberian tingkatan dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. sebesar 47,95; 95,9; dan 191,8 mg/kgBB dengan cara menginjeksikan menggunakan spuit injeksi oral. Pemberian peroral fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air Macaranga tanarius L. dilakukan setelah kaki mencit diinjeksikan dengan karagenin 1% secara subplantar, dengan selang waktu yang didapatkan dari optimasi selang waktu pemberian 15 dan 30 menit. f. Inflamasi adalah respon tubuh terhadap adanya benda asing yang ditandai dengan munculnya kemerahan, rasa nyeri, bengkak, panas, dan perubahan fungsi. Dalam penelitian ini dilakukan pengamatan pada besarnya udem telapak kaki mencit sebagai respon adanya inflamasi. g. Injeksi subplantar adalah injeksi di bawah kulit telapak kaki mencit. h. Pembuatan inflamasi dilakukan dengan cara penginduksian pada Kaki kiri mencit dengan senyawa iritan berupa karagenin 1% secara subplantar, dimana adanya respon inflamasi ditandai dengan terbentuknya udem.


48

Sedangkan kaki mencit sebelah kanan hanya disuntik secara subplantar tanpa karagenin. i. Tebal udem, adalah tebal telapak kaki mencit yang diinduksi oleh larutan karagenin 1% yang diinjeksikan secara subplantar dan diukur dengan jangka sorong dalam satuan millimeter selama 6 jam. Pengukuran terletak pada ketebalan telapak kaki mencit, dengan posisi jangka sorong vertikal. j. Uji antiiflamasi merupakan pengujian antiinflamasi dengan menggunakan mencit jantan galur Swiss sebagai hewan uji yang diradangkan pada telapak kaki kirinya menggunakan karagenin 1% secara subplantar, dan diukur tebal udemnya menggunakan jangka sorong digital selama 6 jam. Kemudian dibandingkan antar kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., dengan kelompok kontrol positif diklofenak 4,48 mg/kgBB dan kelompok kontrol negatif CMC-Na, yang diberikan secara peroral. k. AUC (Area Under Curve) yaitu luas daerah di bawah kurva antara rata-rata tebal udem terhadap waktu pengamatan. Nilai AUC menggambarkan tebal udem tiap satuan waktu (mm.menit) yang diukur menggunakan jangka sorong digital. Perhitungan nilai AUC didapatkan dengan menggunakan metode trapezoid di mana merupakan selisih udem antara kaki kiri (dengan karagenin 1%) dan kanan (tanpa karagenin) dikalikan selisih waktu pengukuran yang dilakukan dari menit ke 0 hingga menit 360 selama 6 jam pengamatan.


49

l. Efek antiinflamasi adalah kemampuan suatu zat atau sediaan pada dosis tertentu terhadap penurunan udem telapak kaki belakang pada mencit galur Swiss yang terinduksi karagenin 1% sebagai penginduksi inflamasi. m. Persen

penghambatan

penghambatan

inflamasi

inflamasi

setelah

adalah

besarnya

diberikannya

senyawa

kemampuan uji

yang

digambarkan dalam persentase, semakin besar prosentase yang dihasilkan maka semakin besar pula aktivitas penghambatan inflamasi pada telapak kaki mencit. n. Persen potensi relatif daya antiinflamasi adalah potensi pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. terhadap diklofenak sebagai obat antiinflamasi dalam menghambat inflamasi pada telapak kaki mencit.

C. Bahan Penelitian 1. Hewan uji Mencit jantan galur Swiss dengan umur 2-3 bulan dan bobot badan 20-30 g dalam keadaan sehat yang diperoleh dari Laboraturium Imono Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2. Bahan uji Bahan uji utama yang digunakan adalah daun Macaranga tanarius L., diperoleh dari Paingan, Maguwoharjo, Sleman, Yogyakarta.


50

Bahan-bahan kimia untuk pengujian farmakologi yang digunakan dalam penelitian ini yaitu: a. Zat inflamatogen berupa Karagenin tipe I (Sigma Chemical Co.) yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. b. NaCl fisiologis 0,9% (Ossuka) sebagai pelarut karagenin 1% yang diperoleh dari Apotek Kimia Farma UNY Jalan Colombo No.1 Depok, Sleman, Yogyakarta. c. Cataflam Fast®50mg (Novartis Indonesia) berupa serbuk yang mengandung kalium diklofenak 50 mg sebagai kontrol positif antiinflamasi yang diperoleh dari Apotek Kimia Farma UNY Jalan Colombo No.1 Depok, Sleman, Yogyakarta. d. Aquadest sebagai pelarut Cataflam Fast®50mg yang berupa serbuk larut air diperoleh dari Brataco Chemika Jalan Letjen Suprapto 70 Ngampilan, Yogyakarta. e. Carboxymethylcellulose-Natrium atau CMC-Na sebagai pelarut fraksi yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. f. Metanol teknis sebagai pelarut yang digunakan bersama dengan air dalam proses ekstraksi daun Macaranga tanarius L. diperoleh dari Brataco Chemika Jalan Letjen Suprapto 70 Ngampilan, Yogyakarta.


51

g. Alkohol 95% (etanol) dan heksan teknis sebagai pelarut yang digunakan dalam proses fraksi daun Macaranga tanarius L. diperoleh dari Brataco Chemika Jalan Letjen Suprapto 70 Ngampilan, Yogyakarta. h. Alkohol 70% digunakan untuk pencucian alat yang akan digunakan selama penelitian diperoleh dari Brataco Chemika Jalan Letjen Suprapto 70 Ngampilan, Yogyakarta. i. Ketamin digunakan untuk mematikan hewan uji yang telah digunakan selama penelitian, didapatkan dari Laboraturium Imono Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

D. Alat Penelitian 1. Alat pembuatan serbuk kering daun Macaranga tanarius L. Alat-alat yang digunakan antara lain adalah oven, mesin penyerbuk, dan ayakan nomor 40. 2. Pembuatan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun M. tanarius L. Seperangkat alat gelas berupa gelas beker, erlenmeyer, gelas ukur 25 mL, labu ukur 25 mL, cawan porselen, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrek Iwaki Glass®), shaker, water bath, vacuum filtration, dan oven. 3. Alat induksi udem telapak kaki belakang mencit Seperangkat alat gelas berupa beaker glass, gelas ukur, labu ukur 10 mL, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®), timbangan analitik, stopwatch, spuit per oral, spuit subplantar, dan syringe 1 mL, serta jangka sorong digital Caliper “Wipro”.


52

E. Tata Cara Penelitian

1. Determinasi serbuk daun Macaranga tanarius L. Determinasi tanaman dilakukan dengan mencocokkan ciri-ciri yang terdapat pada tanaman Macaranga tanarius L., dengan herbarium Macaranga tanarius L. yang telah tersedia di Laboratorium Botani Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, yang telah berdasarkan buku acuan (Steenis, Hoed, Blommbergen, dan Eyma, 1992). 2. Pengumpulan bahan uji Bahan uji yang digunakan adalah daun Macaranga tanarius L. yang masih segar berwarna hijau, tidak berlubang, tidak ditemukan penyakit pada tumbuhan. Pemanenan dilakukan pada pagi hari pukul 07.00-10.00 WIB, pengumpulan bahan uji dimulai pada bulan April 2015. 3. Pembuatan serbuk daun Macaranga tanarius L. Pembuatan serbuk daun Macaranga tanarius L. dilakukan di Laboratorium Pengujian “LPPT-UGM”, menggunakan daun yang telah dikeringkan kemudian dilakukan pencucian dan pengeringan untuk selanjutnya dipotong untuk memudahkan penyerbukan. Pengeringan daun dilakukan dalam oven dengan suhu 450C selama 20 jam. Penyerbukan menggunakan mesin penyerbuk dengan diameter lubang saringan 1 mm. 4. Penetapan kadar air pada serbuk kering daun Macaranga tanarius L. Penetapan kadar air pada serbuk kering daun Macaranga tanarius L., dilakukan di Laboratorium Pengujian LPPT-UGM menggunakan metode gravimetri, dengan prosedur yang sesuai. Berdasarkan prosedur, dilakukan


53

penimbangan krus kosong terlebih dahulu sebagai bobot (A) dalam gram. Kemudian dilanjutkan dengan menimbang sampel hingga homogen dengan memasukkan serbuk kering ± 5 gram, bobot serbuk kering daun tersebut ditetapkan sebagai bobot sebelum

pemanasan bobot (B),

lalu dilakukan

pemanasan pada suhu 105°C selama 3 jam hingga berat konstan, artinya selama waktu 3 jam dengan pemanasan pada suhu oven 1050C diharapkan seluruh kandungan air telah menguap, sehingga diperoleh serbuk dengan kadar air yang tetap dibawah 10%. Serbuk kering Macaranga tanarius L., yang telah dipanaskan kemudian ditimbang kembali dan dihitung sebagai bobot setelah pemanasan (bobot C). Kemudian dilakukan perhitungan terhadap selisih bobot (A+B) terhadap bobot C yang merupakan kadar air serbuk daun Macaranga tanarius L. Proses penetapan kadar air dilakukan oleh Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu Unversitas Gadjah Mada. Rumus perhitungan untuk mendapatkan kadar air sebagai berikut ini: Kadar air =

𝐴+𝐵 − 𝐶 𝐵

x 100%

Keterangan: A = berat krus kosong (gram) B = bobot serbuk kering sebelum pemanasan (gram) C = bobot setelah pemanasan (gram)


54

5. Pembuatan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air Macaranga tanarius a. Pembuatan ekstrak kental daun Macaranga tanarius L. 40 gram serbuk M.tanarius Maserasi (140 rpm) selama 72 jam, 40 gram serbuk dalam 100 mL metanol dan 100 mL aquadest 100 mL metanol 70% dan 100 mL aquadest Remaserasi 2x Maserat  Saring dengan corong buchner  Dipekatkan dengan Rotary evaporator (3 rpm) pada suhu 650C.

Ekstrak cair

Uapkan pada water bath untuk menghilangkan aquadest

Ekstrak Kental

Oven suhu 400C ± 24 jam

Didapatkan bobot tetap ekstrak kental daun M.tanarius

Gambar 7. Flowchart langkah pembuatan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L.


b.

55

Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Ekstrak kental M.tanarius Maserasi (140 rpm) selama 24 jam sebanyak 1 gram ekstrak kental dalam 5 ml pelarut etanol-heksan (2,5 mL etanol dan 2,5 mL heksan). Alkohol 95% atau etanol dan heksan (ml)

Remaserasi 1x Filtrat  Saring dengan corong Buchner.  Dipekatkan dengan rotary evaporator (3 rpm) pada suhu didih campuran etanol – heksan 58,60 ≈ 600C (Agoes,2009).

Fraksi kental daun M.tanarius Oven pada suhu 400C Hingga didapatkan bobot tetap fraksi kental daun M.tanarius

Gambar 8. Flowchart langkah pembuatan fraksi etanol-heksan dari hasil ekstrak kental metanol-air daun Macaranga tanarius L.


56

6. Pembuatan suspending agent CMC-Na 1% Suspending agent CMC-Na 1% dibuat dengan cara mendispersikan 1,0 gram CMC-Na yang telah ditimbang seksama, kemudian dilarutkan menggunakan aquadest hangat hingga volume 100,0 mL dan aduk hingga didapatkan larutan yang homogen. Larutan CMC-Na digunakan sebagai pelarut fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. 7. Pembuatan larutan karagenin 1% sebagai penginduksi udem Larutan karagenin yang digunakan sebagai zat peradang dibuat dengan cara 100 mg karagenin dilarutkan dalam larutan NaCl fisiologis 0,9% hingga volume 10 mL, akan diperoleh konsentrasi karagenin 1 % (b/v) yang setara dengan dosis 25 mg/kgBB. Perhitungan karagenin adalah sebagai berikut:Dosis Karagenin =

1 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 2

𝑚𝑎𝑘𝑠𝑖𝑚𝑎𝑙 𝑢𝑛𝑡𝑢𝑘 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡 𝑥 𝐾𝑜𝑛𝑠𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑠𝑖 𝐾𝑎𝑟𝑎𝑔𝑒𝑛𝑖𝑛 𝐵𝑜𝑏𝑜 𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑘𝑒𝑐𝑖𝑙 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡 0,05 𝑚𝐿 𝑥 1

=

𝑔𝑟𝑎𝑚 100

0,02 𝑘𝑔

𝑚𝐿

= 25 mg/kgBB

8. Pembuatan larutan kalium diklofenak sebagai obat antiinflamasi Cataflam Fast®50mg (Novartis Indonesia) berupa serbuk, ditimbang sebanyak 0,05 gram, kemudian dilarutkan ke dalam aquadest hingga volume 100 mL sehingga diperoleh konsentrasi 0,5 mg/mL. 9. Penentuan kontrol negatif Kontrol negatif adalah zat yang tidak memiliki efek antiinflamasi sehingga dapat digunakan sebagai pembanding terhadap zat diuji. Pada penelitian ini digunakan CMC-Na sebagai kontrol negatif yang merupakan pelarut dalam


57

pembuatan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air Macaranga tanarius L. serta digunakan kontrol negatif aquadest sebagai pelarut kontrol positif diklofenak. 10. Uji Pendahuluan a. Penetapan dosis kalium diklofenak Penggunaan dosis kalium diklofenak ditentukan berdasarkan orientasi dengan dosis berdasarkan atas penelitian yang pernah dilakukan sebelumnya oleh (Djunarko, Donatus, dan Noni, 2003) dengan dosis pemberian sebesar 4,48 mg/kgBB, dan dosis 9,1 mg/kgBB yang digunakan oleh (Sagala, 2013) dan (Manurung, 2013) untuk penelitian antiinflamasi. Menurut (Djunarko, Donatus, dan Noni, 2003), dosis diklofenak untuk tikus dengan bobot badan 250 gram adalah 40 mg/kgBB. Sehingga dosis diklofenak untuk tikus dengan bobot badan 200 gram sebesar: Dosis Kalium Diklofenak =

200 𝑔𝑟𝑎𝑚 𝑥 40 𝑚𝑔 /𝑘𝑔𝐵𝐵 250 𝑔𝑟𝑎𝑚

= 32 mg/kgBB

Bila akan diaplikasikan untuk mencit degan bobot badan 20 gram maka perlu dilakukan konversi untuk mengubah dosis penggunaan dari tikus 200 gram ke mencit dengan bobot 20 gram, maka dosis kalium diklofenak menjadi: Dosis Kalium Diklofenak = Hasil Konversi Tikus ke Mencit x Dosis Diklofenak = 0,14 x 32 mg/kgBB = 4,48 mg/kgBB Kemudian, digunakan satu dosis lain yang diperoleh dari penelitian yang telah dilakukan oleh (Sagala, 2013) dan (Manurung, 2013) berdasarkan dosis lazim pemakaian diklofenak pada manusia dengan bobot 50 kg adalah 50 mg. Sehingga dosis kalium diklofenak untuk manusia dengan bobot 70 kg sebesar:


Dosis Kalium Diklofenak untuk Manusia =

70 𝑘𝑔 𝑥 50 𝑚𝑔 50 𝑘𝑔

58

= 70 mg

Bila akan diaplikasikan untuk mencit degan bobot badan 20 gram maka perlu dilakukan konversi untuk mengubah dosis penggunaan dari manusia dengan BB 70 kg ke mencit dengan bobot 20 gram, maka dosis kalium diklofenak menjadi: Dosis Kalium Diklofenak = Hasil Konversi Manusia ke Mencit x Dosis Diklofenak untuk Manusia = 0,0026 x 70 mg = 0,182 mg/20 gramBB mencit = 9,1 mg/kgBB mencit b. Penetapan selang waktu pemberian dosis efektif kalium diklofenak sebelum diinduksi karagenin 1 % b/v secara subplantar Pada penentuan selang waktu pemberian karagenin ini digunakan dosis diklofenak (mg/kgBB) yang memberikan penurunan udem pada telapak kaki mencit dengan selang waktu yang diujikan adalah 15 dan 30 menit. Dalam penetapan ini digunakan 15 ekor mencit yang terbagi menjadi 5 kelompok. Kelompok kontrol negatif aquadest diberikan secara p.o dengan selang waktu pemberian 15 menit (I), kontrol positif diklofenak diberikan p.o pada dosis 4,48 mg/kgBB selang waktu pemberian 15 menit (II), kontrol positif diklofenak 4,48 mg/kgBB selang waktu pemberian 30 menit (III), kelompok kontrol positif diklofenak 9,1 mg/kgBB selang waktu pemberian 15 menit (IV), dan kontrol positif diklofenak 9,1 mg/kgBB selang waktu pemberian 30 menit (V) sebelum diinjeksikan karagenin 1% secara subplantar.


59

Pengukuran udem dilakukan pada menit ke-0, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330, dan 360 setalah diinjeksikan karagenin 1% secara subplantar. Selanjutnya dihitung rata-rata penurunan udem pada berbagai selang waktu tersebut. Kedua selang waktu pemberian yang berbeda tersebut akan dipilih berdasarkan rentang waktu pada waktu antara saat dan setelah pemberian senyawa uji hingga injeksi karagenin yang mampu menurunkan udem secara berarti. 11. Penetapan konsentrasi pekat fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Konsentrasi yang digunakan adalah konsentrasi terpekat yang dapat dibuat dan dapat dimasukkan serta dikeluarkan dari sepuit oral 1 mL. Konsentrasi terpekat didapatkan dengan cara melarutkan sebanyak 0,6 gram fraksi larut ke dalam CMC-Na 1% pada labu ukur 25 mL, sehingga didapatkan konsentrasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air sebesar 0,6 gram/25 mL atau sebesar 2,4%. 12. Penetapan dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Dalam penelitian ini, fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dibuat dalam tiga peringkat dosis. Penetapan dosis berdasarkan konsentrasi terpekat fraksi dan penggunaan dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air pada tikus dengan dosis tertinggi sebesar 137 mg/kgBB. Berikut perhitungan dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. pada tikus: Dosis x BB Tikus (gram)

= Konsentrasi fraksi terpekat x Volume pemberian


60

2

Dosis x 350 gramBB

= 0,6 gram/25 mL x 2 mL (5 volume maksimal tikus)

Dosis x 0,350 kgBB

= 600 mg/25 mL x 2 mL

Dosis pemberian fraksi

= 137,1 mg/kgBB = 137 mg/kgBB

Telah diketahui dosis pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. untuk tikus sebesar = 137 mg/kgBB, bila akan diberikan pada tikus dengan BB = 200 mg, sebagai berikut: D X BB = C X V Keterangan: D = dosis (mg/kgBB) BB = berat badan hewan uji (gram) C = konsentrasi (gram/mL) V = volume (mL) D = 137 mg/kgBB D = 0,137 mg/gram x 200 gram BB tikus D = 27,4 mg/200 gram BB tikus Penetapan dosis tertinggi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. untuk mencit dilakukan konversi dari tikus degan BB = 200 gram ke mencit dengan BB = 20 gram, konversinya sebesar 0,14, maka dosis tertinggi dapat ditentukan sebagai berikut: D = 27,4 mg/200 gram x 0,14 (hasil konversi tikus  mencit) D = 3,836 mg/20 gram BB mencit = 191,8 mg/kgBB (dosis III) Sehingga, peringkat dosis untuk penentuan dosis rendah dan dosis tengah didapatkan dengan menurunkan dua kelipatan dari dosis tertinggi sehingga


61

diperoleh dosis tengah sebesar 95,9 mg/kgBB (dosis II) dan dosis terendah sebesar 47,95 mg/kgBB (dosis I). 13. Penyiapan hewan uji Hewan uji yang dibutuhkan untuk uji perlakuan adalah tiga puluh ekor mencit jantan galur Swiss, umur 2-3 bulan dengan bobot badan 20-30 gram. Selain itu, pada tahap uji pendahuluan digunakan lima belas ekor mencit yang masing-masing kelompok terdapat tiga mencit digunakan untuk orientasi dan tiga puluh ekor mencit digunakan untuk perlakuan dengan masing-masing kelompok terdapat lima ekor mencit. Sebelum digunakan hewan uji dipuasakan selama 1824 jam. 14. Pengelompokan hewan uji Pada penelitian ini mencit yang digunakan untuk uji pendahuluan sebanyak lima belas ekor mencit digunakan sebagai orientasi dimana terbagi menjadi lima kelompok yaitu kontrol negatif aquadest, kontrol positif diklofenak dosis 4,48 mg/kgBB selang waktu pemberian 15 dan 30 menit, kontrol positif diklofenak dosis 9,1 mg/kgBB dengan selang waktu 15 dan 30 menit, lima kelompok tersebut untuk orientasi penentuan dosis dan selang waktu yang efektif dalam menurunkan udem. Tiga puluh ekor mencit lainnya digunakan dalam kelompok perlakuan yang terbagi menjadi enam kelompok yaitu (kontrol negatif berupa CMC-Na dan aquadest, kontrol positif diklofenak, dan kelompok perlakuan pemberiaan fraksi). Berikut rincian pengelompokan hewan uji dan perlakuan yang diberikan dalam penelitian, yang dapat dilihat pada (Gambar 9 dan 10).


62

a. Pengelompokan hewan uji pada orientasi (uji pendahuluan) 15 ekor mencit diberi senyawa secara per-oral sesuai dengan kelompok berikut

Kel. I

Kel. II

Aquadest p

Kalium Diklofenak 4,48 mg/kgBB selang waktu 10 Selang waktu menit p



Kalium Diklofenak 9,1 mg/kgBB selang waktu 10 Selang menitwaktu p

15 menit

30 menit

15 menit

30 menit

Selang waktu 15 menit

Kel. III

Kel. IV

Kel. V

Masing-masing kaki kiri diinjeksikan karagenin 1% secara subplantar dan kaki kanan disuntik dengan spuit tanpa larutan karagenin Masing-masing kaki kiri dan kaki kanan yang akan dilakukan pengukuran diberikan tanda berupa titik menggunakan tinta hitam pada telapak kaki yang mengalami udem sebagai penanda bagian yang akan diukur ketebalan udem pada telapak kaki belakang mencit. Udem diukur menggunakan jangka sorong selama 6 jam dan pengukuran dilakukan pada menit ke-0, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 210, 240, 270, 300, 330 dan 360. Dihitung selisih udem kaki-kiri yang telah terinduksi karagenin 1% dengan kaki kanan yang hanya dilakukan penyuntikan secara subplantar tanpa karagenin (mm), hasil selisih tebal udem dilanjutkan dengan perhitungan AUC (mm.menit). Gambar 9. Flowchart pengelompokan hewan uji pada tahap uji pendahuluan (orientasi) Keterangan: Kelompok I kontrol negatif, kelompok II, III, IV dan V adalah kelompok kontrol positif diklofenak dengan dosis dan selang waktu pemberian karagnein yang berbeda yaitu 15 dan 30 menit.


63

b. Pengelompokan hewan uji pada perlakuan 30 ekor mencit diberi senyawa secara per-oral sesuai dengan kelompok berikut

Kel. I

Kel. II

Kel. III

Aquadest

CMC-Na 1%

Kalium Diklofenak 4,48 mg/kgBB

Kel. IV

Fraksi M.tanarius dosis 47,95mg/kg BB

Kel. V

Fraksi M.tanarius dosis 95,9 mg/kgBB

Kel. VI

Fraksi M.tanarius dosis 191,8 mg/kgBB

Selang waktu 15 menit kemudian Masing-masing kaki kiri diinjeksikan karagenin 1% secara subplantar dan kaki kanan disuntik dengan spuit tanpa larutan karagenin Masing-masing kaki kiri dan kaki kanan yang akan dilakukan pengukuran diberikan tanda berupa titik menggunakan tinta hitam pada telapak kaki yang mengalami udem sebagai penanda bagian yang akan diukur ketebalan udem pada telapak kaki belakang mencit. Udem diukur menggunakan jangka sorong selama 6 jam dan pengukuran dilakukan pada menit ke-0, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 210, 240, 270, 300, 330 dan 360 Dihitung selisih udem kaki-kiri yang telah terinduksi karagenin 1% dengan kaki kanan yang hanya dilakukan penyuntikan secara subplantar tanpa karagenin (mm), hasil selisih tebal udem dilanjutkan dengan perhitungan AUC (mm.menit). Gambar 10. Flowchart pengelompokan hewan uji pada tahap perlakuan uji antiiflamasi Keterangan: Kelompok I dan II kontrol negatif, III kontrol positif diklofenak, IV, V, dan VI adalah kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L.


64

F. Tata Cara Analisis Hasil 1. Analisis hasil untuk melihat aktivitas antiinflamasi Pengukuran

aktivitas

antiinflamasi

dilakukan

dengan

mengukur

ketebalan udem telapak kaki mencit menggunakan jangka sorong digital. Nilai selisih udem pada setiap rentang waktu pengukuran, diukur dan dihitung nilai AUC total (Area Under Curve) dari ketebalan udem telapak kaki mencit terinduksi karagenin pada masing-masing perlakuan untuk melihat penurunan udem dengan menggunakan metode trapezoid. Rumus perhitungan sebagai berikut: AUC0-x = (

C1−C0 2

x t1-t0 ) + (

C2−C1 2

x t2-t0 ) + …. + (

Cn−Cn−1 2

x tn-tn-1 )

Keterangan : AUC0-x = Area Under Curve dari ketebalan (udem) telapak kaki mencit dari menit ke-0 sampai menit ke-360 Cn – Cn-1 = Besarnya tebal udem dari menit ke-0 sampai menit ke-360 tn – tn-1 = Lamanya waktu pengukuran mulai dari menit ke-0 sampai menit ke360 (Ikawati, Suparjan, dan Asmara, 2007). 2. Menghitung presentase penghambatan inflamasi Metode penentuan persen (%) penghambatan inflamasi yang digunakan dalam penelitian ini adalah dengan cara menghitung luas area di bawah kurva (AUC-Area Under Curve) untuk setiap mencit pada masing-masing rentang waktu pengukuran dari menit ke-0, 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330, dan 360 sehingga akan dapat digunakan untuk menentukan % penghambatan inflamasi pada tiap-tiap kelompok perlakuan yang dilakukan dalam penelitian. Persen (%) penghambatan inflamasinya dapat dihitung berdasarkan rumus di bawah ini:


% penghambatan inflamasi =

𝐴𝑈𝐶 (0−𝑋 )0 −𝐴𝑈𝐶 (0−𝑋 )𝑛 𝐴𝑈𝐶 (0−𝑋 )0

65

x 100

Keterangan : 𝐴𝑈𝐶(0−𝑋)0 = Nilai rata-rata AUC kelompok kontrol negatif (mm.menit) 𝐴𝑈𝐶(0−𝑋)𝑛 = Nilai rata-rata AUC kelompok perlakuan yang diberikan senyawa uji dengan besar dosis n (Ikawati, Suparjan, dan Asmara, 2007). 3. Perhitungan (%) potensi relatif daya antiinflamasi Tujuannya adalah untuk mengetahui % potensi relatif daya antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., terhadap diklofenak sebagai kontrol positif, digunakan rumus sebagai berikut: Potensi relatif daya antiinflmasi (%) =

𝐷𝐴𝑝 𝐷𝐴𝑑

x 100%

Keterangan: DAp = % penghambatan inflamasi kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. DAp = % penghambatan inflamasi kelompok kontrol positif larutan kalium diklofenak 4. Analisis hasil secara statistika Penelitian pengujian antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., merupakan deskriptif numerik, sehingga untuk mengetahui sebaran data yang telah diperoleh, dianalisis dengan metode analitik yaitu Shapiro-Wilk karena jumlah subjek ≤50. Shapiro-Wilk digunakan untuk melihat distribusi data, bila nilai (p) > 0,05 maka dapat disimpulkan bahwa data terdistribusi normal. Keunggulan penggunaan metode analitis sebagai metode untuk menguji normalitas data karena lebih objektif. Jika hasil data hanya disajikan dalam bentuk plot atau histogram, mungkin saja interpretasi penulis dengan pembaca berbeda sehingga akan mempegaruhi kesimpulan yang berbeda,


66

sehingga motede tersebut dapat mengurangi unsur subjektivitas pengamatan terhadap histogram maupun plot (Dahlan, 2008). Hasil analisis data secara statistika pada uji pendahuluan penelitian ini menunjukkan data terdistribusi normal dan homogen, maka untuk menguji hipotesis pada penelitian ini dengan jenis data komparatif, numerik dan tidak berpasangan lebih dari dua kelompok maka analisis dapat dilanjutkan dengan menggunakan uji parametik yaitu One-way ANOVA dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelompok data tidak berpasangan lebih dari dua kelompok. Kemudian dilanjutkan dengan uji post hoc LSD untuk melihat perbedaan masing-masing antar kelompok bermakna (p) < 0,05 atau tidak bermakna (p) > 0,05, pemilihan alternatif manapun pada uji post hoc menunjukkan hasil yang relatif sama (Dahlan, 2008). Sedangkan pengujian hasil analisis data pada kelompok perlakuan penelitian ini, menunjukkan hasil data yang tidak terdistribusi normal (p) < 0,05 maka gunakan uji non-parametrik yaitu Kruskal-Wallis dengan post hoc MannWhitney. Apabila pada uji Kruskal-wallis menghasilkan nilai (p) < 0,05 artinya menunjukkan “paling tidak terdapat dua kelompok yang mempunyai rerata yang berbeda bermakna”. Selanjutnya untuk mengetahui kelompok manakah yang mempunyai perbedaan, dapat dilanjutkan dengan analisis post-hoc. Post-hoc pada uji Kruskal-Wallis adalah uji Mann-Whitnney. Pada uji Mann-Whitnney jika nilai (p) < 0,05 artinya terdapat perbedaan bermakna antar dua kelompok yang dibandingkan tersebut, sebaliknya jika nilai (p) > 0,05 maka menunjukkan bahwa dua kelompok tersebut berbeda tidak bermakna (Dahlan, 2008).


67

G. Ruang Lingkup Penelitian Dosis Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air daun Macaranga tanarius L. dosis 137 mg/kgBB

Hepatoprotektif pada tikus terinduksi karbon tetraklorida Antiinflamasi pada mencit terinduksi karagenin 1% Analgesik pada mencit terinduksi asam asetat 1% Gambar 11. Flowchart ruang lingkup penelitian Keterangan : = Peneliti fokus pada pengujian efek antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. yang diberikan secara peroral pada mencit terinduksi karagenin 1% Penelitian ini merupakan penelitian payung, yang dilakukan berkelompok untuk mengetahui efek hepatoprotektif, antiinflamasi, dan analgesik pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Peneliti hanya fokus pada pengaruh pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. secara peroral terhadap aktivitasnya dalam penghambatan inflamasi pada mencit terinduksi karagenin 1% sebagai senyawa iritan (Gambar 11), dengan dosis pemberian fraksi sebesar 47,95; 95,9; dan 191,8 mg/kgBB.


68

H. Uji Fitokimia Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L. Pendekatan skrining fitokimia digunakan untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder, seperti alkaloid, antrakinon, flavonoid, kumarin, saponin (steroid dan triterpenoid), tannin (polifenolat), minyak atsiri (terpenoid), dan sebagainya. Skrining fitokimia secara kualititatif merupakan tahap pendahuluan dalam suatu penelitian fitokimia yang bertujuan untuk mengetahui gambaran tentang golongan senyawa yang terkandung pada tanaman yang sedang diteliti. Metode skrining

fitokimia dilakukan dengan melihat perubahan warna pada

reaksi pengujian dengan menggunakan suatu pereaksi warna (Kristianti, Aminah, Tanjung, dan Kurniadi, 2008). Berikut skrining fitokimia yang dilakukan pada penelitian ini: 1. Uji Alkaloid Sebanyak 3 mL larutan fraksi ditambahkan dengan 1 mL HCl 2 N dan 6 mL aquadest. Kemudian dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit, didinginkan dan disaring. Sebanyak 3 tetes filtrat dipindahkan pada kaca arloji, hasilnya diperiksa adanya senyawa alkaloid dengan menambahkan pereaksi Mayer dan Dragendroff, masing-masing sebanyak 2 tetes. Adanya alkaloid ditandai dengan terbentuknya endapan putih dengan pereaksi Mayer dan endapan merah dengan pereaksi Dragendorff (DepKes RI, 2000).


69

2. Uji Flavonoid Larutan fraksi diambil sebanyak 2 mL ditambah dengan sedikit serbuk seng atau magnesium dan 2 mL HCl 2 N. Senyawa flavonoid akan menimbulkan warna jingga sampai merah (Depkes RI, 2000). 3. Uji Saponin Larutan ekstrak sebanyak 1 mL ditambahkan 10 mL aquadest dan dikocok kuat selama 10 menit. Hasil dinyatakan positif apabila buih yang terbentuk stabil selama tidak kurang dari 10 menit, setinggi 1 cm sampai 10 cm. Pada penambahan 1 tetes HCl 2 N, buih tidak hilang (DepKes RI, 2000). 4. Uji Triterpenoid/Steroid Sebanyak 1 mL larutan ekstrak kental diuapkan sampai kering, kemudian ditambah dengan pereaksi Lieberman-Burchad. Jika warna berubah menjadi biru atau ungu, menandakan adanya senyawa steroid. Jika warna berubah menjadi merah, menunjukkan adanya senyawa terpenoid (Harborne, 1987). 5. Uji Fenolik Sebanyak 2 mL

ekstrak ditambahkan dengan 10 mL aquadest lalu

dididihkan selama 10 menit dalam tangas air mendidih. Larutan kemudian disaring dan filtratnya ditambahkan dengan 3 tetes FeCl3 1%. Terjadinya warna hijau-biru menunjukkan adanya fenolik (Harborne, 1987). 6. Uji Glikosida Sebanyak 0,1 mL fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dimasukkan ke dalam tabung reaksi lalu ditambahkan 2


70

mL aquadest, 5 tetes Molisch, dan 2 mL H2SO4 pekat secara hati-hati melalui dinding tabung reaksi. Hasil positif ditunjukkan dengan adanya cincin ungu pada batas cairan (Azizah, Suarsini, dan Prabaningtyas, 2014). 7. Uji Tanin Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. sebanyak 1 mL dan dipindahkan ke atas plat tetes lalu ditambah beberapa tetes FeCl3. Hasil positif dibuktikan dengan perubahan warna larutan menjadi hijau sampai biru kehitaman (Azizah, Suarsini, dan Prabaningtyas, 2014).


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui khasiat fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., sebagai antiinflamasi pada mencit galur Swiss yang terinduksi karagenin 1%, tujuan tersebut dicapai dengan membedakan pengujian terhadap penurunan udem yang diamati pada menit ke 0360 dengan menggunakan jangka sorong digital. Selain itu dalam penelitian ini dilakukan skrining fitokimia secara kualitatif, sebagai skrining awal untuk mengetahui metabolit sekunder yang terkandung dalam fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L, menggunakan metode uji tabung terhadap alkaloid, flavonoid, saponin, terpenoid/steroid, polifenolik, glikosida, dan tannin. A. Penyiapan Bahan Bahan utama yang digunakan dalam penelitian uji antiinflamasi ini adalah daun Macaranga tanarius L. Penggunaan daun pada penelitian ini didasarkan pada penelitian yang telah dilakukan oleh Kumazawa, Murase, Momose, and Fukumoto (2014) terhadap kandungan prenylflavonoids di bagian daun, tangkai daun, batang, bunga, dan buah menggunakan metode ekstraksi dengan pelarut metanol. Aktivitas penangkapan radikal bebas terdapat di seluruh bagian tumbuhan tersebut, dengan aktivitas sebagai antioksidan sebesar > 30%, sehingga Macaranga tanarius L. dapat dikembangkan sebagai tanaman yang fungsional.

71


72

Bagian tanaman Macaranga tanarius L., yang dapat diperoleh dengan mudah adalah bagian daun dan dapat dikembangkan menjadi tanaman berkahasiat dengan kemampuannya menangkap radikal bebas terhadap DPPH. Oleh karena itu, pada penelitian ini dipilih menggunakan daun sebagai bahan utama selain mudah dalam memperolehnya juga telah terbukti memiliki aktivitas antioksidan yang dapat berperan sebagai antiinflamasi. 1. Hasil determinasi tanaman Determinasi tanaman pada penelitian ini dilakukan untuk memastikan bahwa tanaman yang digunakan sebagai antiinflamasi adalah benar daun Macaranga tanarius L., sehingga tidak menyebabkan adanya kesalahan dalam penyiapan penggunaan bahan. Bahan dalam penelitian ini berupa serbuk dari daun Macaranga tanarius L., yang diperoleh dari lingkungan Paingan, Maguwoharjo, Sleman, Yogyakarta. Determinasi dilakukan di Laboratorium Botani Farmasi Fakultas Farmasi Universitas

Sanata

Dharma

Yogyakarta.

Determinasi

dilakukan

dengan

membandingkan bagian dari tanaman seperti daun, batang, bunga, dan buah menggunakan herbarium Macaranga tanarius L. (Gilda, 2014). Selain itu untuk membuktikan kebenarannya juga dilakukan determinasi bagian tumbuhan menggunakan buku acuan (Steenis et al., 1992) hingga tingkat spesies.


73

Berdasarkan hasil determinasi dan telah sesuai dengan herbarium Macaranga tanarius L., yang ada di Botani Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, maka terbukti bahwa daun yang digunakan dalam penelitian ini adalah benar merupakan daun Macaranga tanarius L. (Lampiran 2). 2. Pembuatan serbuk daun Macaranga tanarius L. Proses penyerbukan dilakukan oleh Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu Universitas Gadjah Mada (LPPT UGM) Yogyakarta. Sebelum dilakukan proses penyerbukan, penyiapan daun Macaranga tanarius L. dilakukan oleh peneliti dimulai dari pengambilan, penyortiran, pencucian hingga pengeringan daun Macaranga tanarius L. Pengambilan daun Macaranga tanarius L. dilakukan pada pagi hari pukul 07.00-10.00 WIB. Menurut Santoso (2008), waktu panen sebaiknya dilakukan pada pagi hari pukul 07.00-10.00 atau sore hari. Waktu panen pada pagi hari merupakan waktu yang paling baik, yaitu saat embun mulai menghilang dan cahaya matahari belum terlalu terik. Jika panen dilakukan pada siang hari, faktor cuaca panas dan penguapan membuat hasil panen rusak. Jika keterbatasan waktu yang tidak dapat melakukan panen pada pagi hari, panen dapat dilakukan pada sore hari (Rahayu dan Soeleman, 2013). Pencucian daun Macaranga tanarius L. dilakukan dengan menggunakan air mengalir, bertujuan agar daun yang diperoleh bebas kotoran dan debu. Selain itu, dilakukan penyortiran untuk memilih daun yang sesuai dengan kriteria dalam


74

penelitian yaitu berwarna hijau, tidak berlubang, tidak berpenyakit dan busuk. Proses pengeringan dilakukan ± 3 hari dengan cara ditutup kain hitam, hingga didapatkan daun yang layu untuk selanjutnya dilakukan proses penyerbukan. Proses penyerbukan dilakukan sesuai prosedur yang tersedia di LPPT UGM. Daun Macaranga tanarius L. yang telah layu dipotong-potong untuk memudahkan proses penyerbukan, kemudian dilakukan proses pengeringan kembali dalam almari pengering pada suhu 45ºC selama 20 jam, hingga menghasilkan potongan daun yang benar-benar kering (dapat diremas). Pengeringan tersebut bertujuan untuk mengurangi kadar air, mencegah timbulnya jamur sehingga dapat disimpan lebih lama tanpa bahan pengawet dan tidak mudah rusak sehingga komposisi kimianya tidak mengalami perubahan. Setelah itu potongan daun tersebut diserbuk menggunakan mesin penyerbuk dengan diameter lubang saringan 1 mm, hasil penyerbukan ditimbang dan dikemas. Serbuk dengan penghalusan yang tinggi memungkinkan sel-sel yang rusak semakin besar, sehingga memudahkan pengambilan kandungan senyawa langsung oleh pelarut yang digunakan. Serbuk yang digunakan untuk proses ekstraksi mekanik (maserasi), disaring lagi menggunakan pengayak dengan nomor mess 40, hal ini dikarenakan ukuran serbuk yang masih terlalu besar. Pengayakan dilakukan dengan tujuan agar didapatkan ukuran serbuk yang kecil dengan luas permukaan besar, sehingga interaksi zat cairan (pelarut) dengan serbuk akan semakin besar dan proses ekstraksi akan semakin efektif. Selain itu waktu yang diperlukan juga lebih singkat dan mempermudah proses penyarian karena semakin luas permukaan serbuk maka


75

perpindahan massa pada proses ekstraksi akan berlangsung cepat (Susiana dkk., 2012). Daun kering Macaranga tanarius L. yang digunakan dalam penelitian ini sebayak 2,7 kg dan setelah dilakukan penyerbukan pada LPPT UGM didapatkan bobot serbuk daun Macaranga tanarius L. seberat 1200 gram serbuk halus yang akan digunakan untuk proses pembuatan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. 3. Penetapan kadar air serbuk daun Macaranga tanarius L. Penetapan kadar air pada serbuk kering daun Macaranga tanarius L. dilakukan di Laboratorium Pengujian “LPPT-UGM” menggunakan metode gravimetri dengan prosedur yang telah tersedia. Tujuan dari penetapan kadar air dari serbuk kering daun Macaranga tanarius L. yaitu untuk mengetahui serbuk yang digunakan telah memenuhi persyaratan serbuk yang baik, yaitu kurang dari 10% (Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, 1995). Hasil perhitungan kadar air dari serbuk daun Macaranga tanarius L. sebesar 6,66%b/b (lampiran 3). Berdasarkan hasil pengujian tersebut menunjukkan bahwa kadar air serbuk daun Macaranga tanarius L., telah memenuhi persyaratan kadar air yang telah ditetapkan. 4. Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. Metode fraksinasi daun Macaranga tanarius L., pada penelitian ini menggunakan pelarut metanol 70% dan air untuk proses ekstraksi hingga didapatkan ekstrak kental, yang selanjutnya di fraksinasi menggunakan dua pelaut dengan nilai polaritas yang berbeda yaitu heksan dan etanol 95%. Perbedaan


76

kepolaran ini diharapkan dapat selektif menyari komponen yang telah tersari pada hasil ekstrak kental metanol-air sehingga didapatkan senyawa yang terlarut sesuai dengan kepolaran senyawa yang terkandung di dalamnya. a. Proses ekstraksi metanol-air daun Macaranga tanarius L. Proses ekstraksi metanol-air dilakukan melalui proses maserasi yaitu penggojokan menggunakan shaker, dengan kecepatan penggojokan yang konstan (140 rpm). Tujuan maserasi ini adalah agar seluruh serbuk dapat kontak dengan pelarut dan senyawa yang dituju dapat terekstrak. Selain itu penggojokan menggunakan shaker membantu mempercepat ekstraksi sehingga waktu yang dibutuhkan lebih singkat dibandingkan dengan metode penyarian dengan cara merendam serbuk dengan sesekali penggojokan. Ekstraksi yang dilakukan dengan metode ini disebut ekstraksi mekanik. Pemilihan metode maserasi pada tahap ekstraksi disebabkan karena metode penyarian ini lebih sederhana, tidak menggunakan alat yang spesifik, pengerjaannya relatif mudah untuk dilakukan dan lebih efisien, selain itu metode maserasi dapat digunakan untuk jenis senyawa yang tahan terhadap panas maupun tidak tahan terhadap panas sehingga pada penelitian ini digunakan metode maserasi, karena kandungan senyawa daun Macaranga tanarius tidak diketahui merpakan jenis senyawa yang tahan terhadap panas atau tidak. Seberat 40 gram serbuk kering daun Macaranga tanarius L., dimasukkan ke dalam erlenmeyer dan direndam dalam 200 mL pelarut metanol dan air (100 mL metanol dan 100 mL air), kemudian diaduk dengan kecepatan konstan menggunakan shaker, selama 72 jam (Puteri dan Kawabata, 2010). Semakin lama


77

waktu maserasi maka kesempatan untuk bersentuhan antara serbuk dengan pelarut akan semakin besar, sehingga proses ekstraksi akan lebih sempurna. Penggunaan metanol 70% pada proses maserasi ekstrak metanol-air karena mayoritas senyawa antioksidan konstituen akan berhasil diekstrak dalam ekstraksi pertama dengan pelarut metanol (Lim et al., 2009). Selain itu, konsentrasi tinggi metanol dapat menghambat aktivitas dari oksidase, yang menghancurkan senyawa polifenol dalam daun, karena cedera atau kerusakan daun (Pinelo, Rubilar, Sineire, and Nunez, 2004). Sedangkan air merupakan perlarut yang aman dan mampu manyari komponen senyawa glikosida dan tanin sesuai dengan kandungan yang telah dilaporkan pada penelitian terhadap daun Macaranga tanarius L. Oleh karena itu pada penelitian ini dipilih menggunakan pelarut metanolair. Pemilihan pelarut ini berdasarkan kesesuaian kepolaran antara senyawa aktif dengan larutan penyari yang digunakan, sehingga diharapkan dapat melarutkan komponen senyawa yang larut dan bercampur dengan cairan penyari. Hasil maserat yang didapatkan dari gabungan proses maserasi dan remaserasi yang telah disaring, dipekatkan menggunakan vaccum rotary evaporator. Suhu yang digunakan pada proses evaporasi metanol-air ini adalah 650C yang merupkan titik didih metanol. Proses pemekatan dilakukan ± 3 jam, penghentian proses pemekatan ini dilihat pada tetesan pelarut yang telah berhenti menetes di bagian pembuangan labu alas bulat yang terpasang pada alat vaccum rotary evaporator, yang menunjukkan bahwa sebagian besar pelarut telah menguap dan hanya meninggalkan senyawa aktif yang dituju. Evaporasi dengan menggunakan bantuan pompa vakum akan menurunkan tekanan uap pelarut


78

sehingga pelarut akan menguap di bawah titik didih normalnya. Tekanan yang diberikan dari pompa vakum tersebut mengakibatkan pelarut menguap dari campuran kemudian akan terkondensasi masuk ke dalam labu penampung. Setelah proses pemekatan masih tersisa filtrat yang cukup banyak, dengan kandungan pelarut air maka filtrat tersebut ditempatkan pada cawan porselin untuk selanjutnya dilakukan proses pemekatan dibantu dengan waterbath, tujuannya adalah menghilangkan pelarut air yang belum menguap saat proses evaporator. Hasil yang didapatkan berupa ekstrak kental yang kemudian disimpan dalam oven pada suhu ± 400C selama 24 jam untuk mendapatkan bobot tetap. Ekstrak kental yang berada dalam cawan ditimbang setiap waktu tertentu selama 24 jam atau hingga mendapatkan bobot konstan. Hasil yang diperoleh pada pembuatan ekstrak kental metanol-air daun Macaranga tanarius L., sebanyak 126,24 gram yang selanjutnya digunakan untuk fraksinasi dengan etanol-heksan. b. Proses fraksi etanol-heksan daun Macaranga tanarius L. Setelah didapatkan ekstrak kental dengan bobot tetap, maka proses selanjutnya adalah fraksinasi menggunakan pelarut heksan dan etanol. Penggunaan pelarut tersebut disesuaikan pada tingkat kelarutan senyawa aktif pada pelarut yang digunakan. Hal ini dikarenakan pemilihan cairan penyari yang tepat tergantung pada sifat fisika kimia zat aktif dalam simplisia dengan prinsip like dissolve like. Pemilihan penggunaan etanol dikarenakan etanol merupakan pelarut pilihan untuk memperoleh ekstrak secara klasik seperti ekstrak kering, kental, dan cair. Perbandingan penggunaan pelarut etanol-heksan sebesar 1:1, karena dengan perbandingan tersebut dapat dicegah terjadinya ekstraksi klorofil atau zat yang


79

bersifat resin dan polimer yang pada umumnya bukan merupakan bagian penting untuk aktivitas ekstrak (Agoes, 2009). Oleh karena itu, pada proses fraksinasi ini digunakan pelarut etanol-heksan dari eksrak kental metanol-air daun Macaranga tanarius L. Penggunaan kedua campuran pelarut tersebut diharapkan dapat selektif menarik senyawa yang lebih spesifik berdasarkan kedekatan nilai log P yang menggambarkan nilai kepolaran antara senyawa yang dituju dengan pelarut yang digunakan. Proses fraksinasi, menggunakan ekstrak kental yang telah didapatkan dari penyarian

sebelumnya

menggunakan

metanol-air,

kemudian

dimaserasi

menggunakan etanol-heksan dengan kecepatan konstran 140 rpm selama 24 jam dan dilakukan remaserasi. Hasil filtrat disaring menggunakan kertas saring dan corong Buchner digabungkan untuk selanjutnya dipekatkan menggunakan vaccum rotary evaporator pada suhu campuran heksan dan etanol yaitu 58,70C ≈ 600C (Agoes, 2009). Setelah tidak terdapat tetesan pada labu alas bulat yang terpasang pada evaporator maka filtrat yang berwarna coklat pekat tersebut ditempatkan pada cawan porselin untuk selanjutnya disimpan dalam oven pada suhu 40-500C untuk mendapatkan bobot fraksi yang tetap. Penetapan bobot pada fraksi didapatkan dari pengeringan tetap dengan penyusutan sebesar 0% pada pemanasan 400C. Tujuannya penetapan bobot tersebut adalah untuk menentukan batasan seberapa banyak senyawa yang hilang selama proses pengeringan, karena dapat mempengaruhi bobot fraksi yang didapatkan. Bobot tersebut akan mempengaruhi konsentrasi dan dosis fraksi yang akan diberikan ke hewan uji untuk melihat aktivitas penghambatan inflamasi. Hasil dari


80

proses pengeringan didapatkan tidak ada perubahan pada bobot frakasi sehingga didapatkan bobot pengeringan tetap. Pengeringan fraksi untuk setiap cawannya, dilakukan dengan cara penimbangan pada masing-masing cawan untuk mendapatkan bobot fraksi yang tetap. Pembuatan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dalam bentuk kental dengan bobot tetap (penyusutan 0%) dibutuhkan 1200 gram serbuk kering, menghasilkan 126,24 gram ekstrak kental metanol-air hingga didapatkan fraksi kental sebanyak 30,5806 gram. Dari hasil penimbangan bobot fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., didapatkan rendemen sebesar 2,55%. Rendemen didapatkan dari penimbangan bobot total fraksi kental yang diperoleh dibandingkan bobotnya dengan serbuk simplisia awal yang digunakan (dinyatakan dalam persen (%)). Rendemen merupakan presentase bagian bahan baku yang dapat digunakan atau dimanfaatkan dengan total bahan baku. Rendemen yang didapatkan sangatlah kecil sehingga untuk menghasilkan fraksi etanol-heksan memerlukan sampel yang banyak.

B. Hasil Skrining Fitokimia Skrining fitokimia dalam penelitian ini bertujuan untuk mengetahui golongan senyawa yang terkandung pada fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Skirining fitokimia merupakan metode yang sederhana, mudah untuk dilakukan, dan dapat digunakan untuk mengidentifikasi golongan senyawa serta mengetahui keberadaan senyawa-senyawa aktif biologis yang terdistribusi dalam jaringan tanaman. Pada penelitian ini dilakukan pengujian


81

terhadap adanya kandungan alkaloid, flavonoid, saponin, polifenolik, glikosida, tannin, dan steroid/triterpenoid untuk kemudian disesuaikan dengan senyawa yang telah dilaporkan memiliki kemampuan dalam menghambat peradangan atau inflamasi. Hasil dari skrining fitokimia secara kualitatif menggunakan uji tabung dapat dilihat pada tabel IV dibawah ini dan terlampir pada (Lampiran 14). Tabel IV. Hasil pengujian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. No

Pengujian Fitokimia

1

Alkaloid Reagen Dragendroff Reagen Mayer Flavonoid Terpenoid/Steroid Fenolik Saponin

Tanda Positif

Hasil Pengujian Sediaan

Endapan merah Endapan merah + Endapan putih Endapan putih + 2 Kuning-Jingga Jingga +++ 3 Merah Coklat 4 Hijau-Biru Hijau-biru ++ 5 Busa > 1 cm Busa ≤ 1 cm bertahan selama 30 menit 6 Tanin Biru Kehitaman Biru Kehitaman +++ 7 Glikosida Cincin warna Terdapat cincin wana ++ biru-ungu pada ungu tua pada batas batas cairan cairan Keterangan: (+++) intensitas kuat, (++) intensitas sedang, (+) intensitas rendah, (-) tidak terdeteksi Berikut perkiraan senyawa yang dapat tersari pada fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air, berdasarkan kedekatan nilai log P yang menggambarkan polaritas antara senyawa yang dituju yaitu ellagitannis yang dapat tersari melalui penyarian ekstraksi metanol-air dengan pelarut yang digunakan pada proses fraksinasi yaitu etanol-heksan yang cenderung bersifat semi polar.


82

Tabel V. Kandungan senyawa daun Macaranga tanarius L. yang dituju dan diduga memiliki aktivitas antioksidan terhadap penghambatan inflamasi Golongan Senyawa

Ellagitannis

Kandungan Senyawa

Nilai Log P senyawa

1. Chebullagic Acid 1. 2,30 2. Macatannin B 2. 2,57

Nilai Log P pelarut (etanol+ heksan) 2,97 (semi polar)

Hasil Pengujian Skrining Fitokimia

Positif (+++), hasil uji tabung menunjukkan adanya perubahan warna menjadi biru kehitaman

Flavonoid

-

-

Positif (+++), hasil uji tabung menunjukkan terbentuknya warna jingga

Glikosida

-

-

Positif (++), hasil uji tabung menunjukkan cincin berwarna ungu tua pada batas cairan fraksi.

Alkaloid

-

-

Positif (+), hasil uji tabung menunjukkan terbentuknya endapan merah dan endapan putih.

Keterangan: Kriteria penggolongan kepolaran bila log P 2 < log P < 4 (semi-polar) (Holmberg, 2003). Hasil skrining fitokimia (Tabel IV) menunjukkan bahwa fraksi etanolheksan ekstrak metanol air mengandung flavonoid, flavonoid merupakan salah satu kelompok produk alami tanaman yang terbesar terutama sebagai fenol baik dalam kondisi bebas maupun sebagai glikosida yang berikatan. Hasil uji flavonoid pada fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. memberikan hasil positif berupa terbentuknya warna jingga dengan intensitas kuat. Namun pada penelitian ini tidak diketahui jenis senyawa spesifik dari flavonoid yang mungkin


83

dapat tersari melalui fraksi etanol-heksan dari ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. (Tabel V). Hasil pengujian skrining fitokimia uji tabung pada fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. menunjukkan adanya kandungan glikosida ditandai dengan adanya cincin berwarna ungu tua pada batas cairan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. selain itu hasil skrining fitokimia menunjukkan pula adanya kandungan alkaloid (Tabel IV), ditunjukkan dengan terbentuknya endapan merah dan endapan putih yang memiliki intensitas lemah. Namun pada penelitian ini tidak diketahui jenis senyawa spesifik dari glikosida dengan intensitas sedang dan alkaloid dengan intensitas lemah yang mungkin dapat tersari melalui fraksi etanol-heksan dari ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. (Tabel V). Selain itu, pada penelitian ini senyawa yang diduga memberikan aktivtas antiinflamasi adalah chebullagic acid dan macatannin B yang merupakan kelompok senyawa tanin. Perkiraan senyawa tersebut berdasarkan kedekatan nilai log P senyawa dengan nilai log P campuran fraksi etanol-heksan, etanol sebesar 0,16 dan heksan sebesar 3,13 dengan log P campuran sebesar 2,97. Hasil uji tabung menunjukkan adanya kandungan tanin ditandai dengan adanya perubahan warna menjadi biru kehitaman (Tabel V). Ellagitannins merupakan golongan tanin yang terhidrolisis. Tanin merupakan kelompok utama lainnya dari polifenol yang terdiri dari dua kelompok yaitu tanin terhidrolisis dan tanin terkondensasi. Tanin terhidrolisis merupakan senyawa yang mengandung inti pusat dari glukosa atau polyol lain yang teresterifikasi dengan gallic acid, biasa disebut dengan gallotanins


84

atau teresterifikasi dengan hexahydroxydiphenic acid yang biasa disebut dengan ellagitanin (Dai dan Mumper, 2010). Sehingga hasil skrining fitokimia dengan uji tabung menunjukkan adanya kandung senyawa tanin dengan intensitas kuat dan fenolik dengan intensitas sedang. Pengujian kandungan fenolik dilakukan untuk membuktikan adanya gugus OH dari fenol pada fraksi daun Macaranga tanarius L. Adanya gugus fenolik akan memberikan warna hijau hingga biru (Tabel IV). Hasil pengujian menunjukkan warna hijau, hal ini membuktikan bahwa fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. mengandung senyawa fenolik. Pada pengujian kandungan senyawa tannin menunjukkan hasil positif, ditandai dengan terbentuknya warna biru kehitaman. Pada pengujian skrining fitokimia secara kualitatif dengan menggunakan uji tabung menunjukkan hasil yang negatif pada pengujian terpenoid dan saponin. C. Uji Pendahuluan Sebelum dilakukannya perlakuan terhadap uji antiinflamasi fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., perlu dilakukannya serangkaian uji pendahuluan untuk menetapkan dosis dan selang waktu pemberian senyawa aktif yang akan digunakan pada perlakuan yang sebenarnya. Uji pendahuluan yang dilakukan yaitu penetapan dosis kalium diklofenak (Cataflam Fast®50mg)

dan

selang

waktu

pemberian

kalium

diklofenak

sebelum

penginduksian karagenin 1% secara subplantar. Tujuan orientasi ini adalah untuk menetapkan dosis dan rentang waktu pemberian kalium diklofenak sebagai kontrol positif antiinflamasi yang efektif dalam mengurangi udem pada kaki mencit.


85

Penetapan dosis dan rentang waktu pemberian kalium diklofenak dapat dilihat berdasarkan nilai AUC untuk masing-masing kelompok perlakuan pada tabel VI berikut ini. Tabel VI. Uji normalitas nilai rata-rata AUC (mm.menit) pada orientasi penetapan dosis kalium diklofenak dan selang waktu pemberian 15 dan 30 menit Rata-rata AUC Kelompok total (mm.menit) Nilai p (X ± SE) Kontrol negatif aquadest selang waktu (N) 711,20 ± 6,41 0,390 pemberian 15 menit Diklofenak dosis 4,48 mg/kgBB selang (N) 181,63 ± 15,92 0,726 waktu pemberian 15 menit Diklofenak dosis 4,48 mg/kgBB selang (N) 267,15 ± 16,26 0,772 waktu pemberian 30 menit Diklofenak dosis 9,1 mg/kgBB selang (N) 280,35 ± 25,81 0,605 waktu pemberian 15 menit Diklofenak dosis 9,1 mg/kgBB selang (N) 246,50 ± 11,15 0,790 waktu pemberian 30 menit Keterangan : X = Mean (Rata-rata) SE = Standard Error (SD/√𝑛) N = Distribusi data normal (p > 0,05) Hasil tersebut (Tabel VI) menunjukkan bahwa data terdistribusi normal ditandai dengan nilai p pada seluruh kelompok data (p > 0,05), dan memiliki nilai homogenitas (p > 0,05) yang menunjukkan bahwa hasil data yang diperoleh homogen sehingga analisis data pada penentuan dosis efektif kalium diklofenak dan rentang waktu pemberiannya dilakukan menggunakan uji non-parametrik yaitu one way ANOVA dengan taraf kepercayaan 95%. Uji one way ANOVA dengan taraf kepercayaan 95% pada penelitian ini digunakan untuk mengetahui apakah terdapat perbedaan antar kelompok yaitu pada kelompok perlakuan kalium diklofenak dengan pemberian dosis dan rentang waktu yang berbeda, serta kontrol negatif aquadest yang digunakan. Dari hasil


86

analisis variansi satu arah, diketahui nilai probabilitasnya 0,000 (p < 0,05) yang berarti menunjukkan “paling tidak terdapat dua kelompok yang mempunyai rerata nilai AUC (mm.menit) yang berbeda bermakna”. Oleh karena itu, untuk mengetahui antara kelompok manakah yang berbeda atau memiliki perbedaan dilakukan analisis post hoc berupa uji LSD. Hasil analisisnya dapat dilihat pada tabel VII dan VIII berikut ini. Tabel VII. Hasil uji LSD AUC total (mm.menit) pada orientasi dosis efektif diklofenak dan rentang waktu pemberian karagenin antara kelompok kontrol negatif dan kelompok diklofenak rentang 15 menit Kelompok Nilai p Kontrol negatif aquadest waktu (BB) Diklofenak dosis 4,48 0,000 pemberian 15 menit mg/kgBB waktu Diklofenak dosis 9,1 mg/kgBB (BB) pemberian 15 menit 0,008 waktu pemberian 15 menit Kontrol negatif aquadest waktu (BB) 0,000 pemberian 15 menit Diklofenak dosis 9,1 mg/kgBB waktu Diklofenak dosis 4,48 pemberian 15 menit mg/kgBB waktu pemberian 15 0,008(BB) menit Keterangan : BTB = Berbeda tidak bermakna (p > 0,05) BB = Berbeda bermakna (p < 0,05)

711,20 ± 6,41

181,63 ± 15,92

280,35 ± 25,81

Gambar 12. Diagram batang rata-rata nilai AUC (mm.menit) pada orientasi Tabel VIII.diklofenak Hasil uji LSD total (mm.menit) padakaragenin orientasi antara dosis dosis efektif dan AUC rentang waktu pemberian efektif diklofenak dan rentang waktu pemberian antara kelompok kontrol negatif dan kelompok diklofenakkaragenin rentang 15 menit


87

Tabel VIII. Hasil uji LSD AUC total (mm.menit) pada orientasi dosis efektif diklofenak kelompok diklofenak rentang 15 dan 30 menit Kelompok Perlakuan Diklofenak Nilai p Dosis 9,1 mg/kgBB waktu (BB) 0,005 pemberian 15 menit Dosis 4,48 mg/kgBB Dosis 4,48 mg/kgBB waktu (BB) 0,010 waktu pemberian 15 menit pemberian 30 menit Dosis 9,1 mg/kgBB waktu (BB) 0,035 pemberian 30 menit Dosis 4,48 mg/kgBB waktu (BTB) 0,620 pemberian 30 menit Dosis 9,1 mg/kgBB waktu pemberian 15 menit Dosis 9,1 mg/kgBB waktu (BTB) 0,222 pemberian 30 menit Dosis 4,48 mg/kgBB Dosis 9,1 mg/kgBB waktu (BTB) 0,443 waktu pemberian 30 menit pemberian 30 menit Keterangan : BTB = Berbeda tidak bermakna (p > 0,05) BB = Berbeda bermakna (p < 0,05)

181,63 ± 15,92

280,35 ± 25,81

267,15 ± 16,26

246,50 ± 11,15

Gambar 13. Diagram batang rata-rata nilai AUC (mm.menit) pada dosis efektif diklofenak dan rentang waktu pemberian karagenin antara kelompok diklofenak diklofenak rentang 15 dan 30 menit Berdasarkan hasil uji post hoc LSD (Tabel VII) kontrol negatif aquadest yang merupakan pelarut kalium diklofenak menunjukkan hasil statistika nilai AUC yang berbeda secara signifikan terhadap pemberian kalium diklofenak dosis 4,48 dan 9,1 mg/kgBB dengan selang waktu pemberian 15 menit sebelum injeksi


88

karagenin 1% secara subplantar. Dilihat dari tabel rata-rata nilai AUC (mm.menit), nilai AUC aquadest = 711,20 ± 6,41 yang menunjukkan pada kelompok aquadest masih memberikan udem yang paling besar dibandingkan kontrol positif diklofenak (Tabel VI) dan (Gambar 12). Berdasarkan hasil tersebut dapat diketahui bahwa pemberian aquadest tidak memberikan penurunan udem yang berarti dibandingkan dengan kelompok perlakuan dengan pemberian kalium diklofenak pada dosis 4,48 dan 9,1 mg/kgBB selang waktu pemberian 15 menit. Dosis pemberian kalium diklofenak dosis 4,48 mg/kgBB dengan selang waktu pemberian 15 menit berbeda bermakna (Tabel VIII) dan (Gambar 13) terhadap dosis 4,48 mg/kgBB dengan selang waktu pemberian 30 menit, dosis 9,1 mg/kgBB dengan selang waktu pemberian 15 menit, dan dosis 9,1 mg/kgBB dengan selang waktu pemberian 30 menit sebelum penginjeksian karagenin 1% secara subplantar. Berdasarkan tabel rata-rata nilai AUC (mm.menit) dosis 4,48 mg/kgBB selang waktu pemberian 15 menit memberikan nilai AUC yang paling rendah dibandingkan kelompok perlakuan yang lainnya yaitu sebesar 181,63 ± 15,92. Hal tersebut menunjukkan bahwa pemberian kalium diklofenak pada dosis 4,48 mg/kgBB secara peroral dengan selang waktu pemberian 15 menit telah memberikan penurunan udem yang paling rendah, artinya diklofenak telah dapat menimbulkan efek antiinflamasi yang maksimal pada dosis dan rentang waktu tersebut. Oleh karena itu pada penelitian ini dipilih pemberian kalium diklofenak dosis 4,48 mg/kgBB dengan selang waktu pemberian 15 menit.


89

D. Hasil Pengujian Efek Antiinflamasi Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L. Parameter utama yang digunakan untuk mengevaluasi efek antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. yaitu adanya penurunan nilai AUC (mm.menit) yang menggambarkan penurunan tebal udem pada telapak kaki mencit terinduksi karagenin 1% tiap satuan waktu (menit). Pengujian efek antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dilakukan sesuai dengan hasil uji pendahuluan (orientasi). Penghambatan inflamasi dapat ditunjukkan dengan penurunan besar udem telapak kaki mencit terinduksi karagenin 1% pada kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. beserta kelompok kontrol negatif dan kelompok kontrol positif. Data purata nilai AUC yang menunjukkan nilai besar udem tiap satuan menit dan hasil uji normalitas pada kelompok perlakuaan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L, beserta kelompok kontrol negatif (aquadest dan CMC-Na), dan kelompok kontrol positif disajikan dalam bentuk purta ± SE dapat dilihat pada tabel IX. Tabel IX. Rata-rata nilai AUC (mm.menit) dan hasil pengujian normalitas pada kelompok uji antiinflamasi (n = 5) Kelompok Kelompok kontrol negatif aquadest 25mg/kgBB Kelompok kontrol negatif CMC-Na 3,836mg/20gramBB Kelompok perlakuan Kalium Diklofenak 4,48mg/kgBB mencit

𝑿 ± SE AUC (mm.menit)

Nilai p

696,99 ± 9,39

0,423

724,19 ± 8,07

0,006

312,39 ± 5,72

(N)

(TN)

0,102

(N)


90

Tabel IX. Lanjutan Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan 589,34 ± 4,78 ekstrak metanol air dosis 47,95 mg/kgBB Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan 548,97 ± 5,62 ekstrak metanol air dosis 95,9 mg/kgBB Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan 438,53 ± 1,41 ekstrak metanol air dosis 191,8 mg/kgBB Keterangan : X = Mean (rata-rata) SE = Standard error N = Distribusi data normal (p>0,05) TN = Distribusi data tidak normal (p<0,05)

0,189 0,074 0,387

(N) (N) (N)

Hasil nilai rata-rata AUC (mm.menit) dari masing-masing kelompok perlakuan (kontrol negatif, kontrol positif, dan kelompok perlakuan fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L dengan tiga peringkat dosis), menunjukkan hasil bahwa sebaran data tidak terdistribusi normal (Tabel IX) sehingga digunakan pengujian non-parametrik test yaitu Kruskal-Wallis Test, hasilnya menunjukkan nilai probabilitas (p) < 0,05 artinya “paling tidak” terdapat dua kelompok yang berbeda. Maka dilanjutkan analisis post hoc berupa MannWhitney untuk mengetahui antara kelompok manakah yang berbeda atau memiliki perbedaan. Hasil analisis Mann-Whitney dapat dilihat pada tabel X. Berdasarkan hasil analisis secara statistika menggunakan Mann-Whitney Test (Tabel X) dan diagram batang (Gambar 14) dapat diketahui perbedaan antar kelompok perlakuan. Kontrol negatif aquadest dan CMC-Na dosis pemberian 191,8 mg/kgBB, menunjukkan nilai probabilitas (p > 0,05) yang artinya nilai AUC (tebal udem (mm.menit)) antara kelompok pemberian aquadest dan CMCNa berbeda tidak bermakna pada pengujian efek antiinflamasi. Penggunaan CMCNa dan aquadest sebagai kontrol negatif memiliki hasil yang sama, maka untuk analisis selanjutnya dapat digunakan salah satu kontrol negatif untuk melihat


91

perbedaannya dalam memberikan penghambatan inflamasi dengan kelompok kontrol negatif dan kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Tabel X. Hasil uji Mann-Whitney Test rata-rata nilai AUC (mm.menit) pada mencit terinduksi karagenin 1% Kelompok Kontrol negatif CMC-Na Kontrol positif diklofenak 4,48 mg/kgBB Kontrol negatif aquadest

Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB Kontrol positif diklofenak 4,48 mg/kgBB

Kontrol negatif CMC-Na

Kontrol positif diklofenak 4,48 mg/kgBB Fraksi etanolheksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB Fraksi etanolheksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB

Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB

Nilai p 0,076

(BTB)

0,009 0,009 0,009 0,009 0,009 0,009 0,009 0,009 0,009 0,009 0,009

Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB

0,009


0,009


0,009

(BB) (BB) (BB) (BB) (BB) (BB) (BB) (BB) (BB) (BB) (BB) (BB)

(BB)

(BB)

Keterangan : BB = Berbeda Bermakna (p < 0,05) BTB = Berbeda Tidak Bermakna (p > 0,05)


696,99 ± 9,39

724,19 ± 8,07

312,39 ± 5,72

589,34 ± 4,78

548,97 ± 5,62

92

438,53 ± 1,41

Gambar 14. Diagram batang rata-rata nilai AUC pada kelompok perlakuan uji antiinflamasi Keterangan: I = Kelompok kontrol negatif aquadest II = Kelompok kontrol negatif CMC-Na 3,836mg/20gramBB mencit III = Kelompok perlakuan Kalium Diklofenak 4,48mg/kgBB mencit IV = Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB V = Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB VI = Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB Tabel XI. Rata-rata persen (%) penghambatan inflamasi pada kelompok perlakuan uji antiinflamasi Kelompok Perlakuan Kelompok kontrol negatif CMC-Na 191,8 mg/kgBB mencit Kelompok perlakuan Kalium Diklofenak 4,48mg/kgBB mencit Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air dosis 47,95 mg/kgBB Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air dosis 95,9 mg/kgBB Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air dosis 191,8 mg/kgBB Keterangan : X = Mean (Rata-rata) SE = Standard Error (SD/√𝑛) N = Distribusi data normal (p > 0,05)

𝒙 ± SE (%)

Nilai p

0,00 ± 1,11

0,006

56,86 ± 0,79

0,102

18,62 ± 0,66

0,189

24,19 ± 0,77

0,032

39,57 ± 0,15

0,599

(TN) (N) (N) (TN) (N)


93

Hasil purata persen penghambatan inflamasi antar kelompok perlakuan (Tabel XI) kontrol negatif, kontrol positif beserta kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air pada tiga peringkat dosis menunjukkan bahwa data tidak terdistribusi normal sehingga digunakan pengujian non-parametrik test yaitu Kruskal-Wallis Test, hasilnya menunjukkan nilai probabilitas (p) < 0,05 artinya “paling tidak” terdapat dua kelompok yang berbeda. Kemudian dilanjutkan analisis menggunakan Mann-Whitney test untuk mengetahui kelompok mana yang memiliki perbedaan bermakna terhadap kemampuannya untuk memberikan efek antiinflamasi, hasil analisis Mann-Whitney test dapat dilihat pada (Tabel XII) dan grafik yang menunjukkan keberbedaan antar kelompok kontrol dan perlakuan (Gambar 15). Tabel XII. Uji Mann-Withney persen (%) penghambatan inflamasi kelompok perlakuan uji antiinflamasi

Kontrol negatif CMC-Na

Kontrol positif diklofenak 4,48 mg/kgBB Fraksi etanolheksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB

Kelompok Kontrol positif diklofenak 4,48 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB

Nilai p (BB) 0,009 (BB) 0,009 0,009 0,009 0,009 0,009 0,009 0,009

0,009

(BB) (BB) (BB) (BB) (BB) (BB)

(BB)


94

Tabel XII. Lanjutan Fraksi etanolheksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB


0,009

(BB)

Keterangan: BB = Berbeda Bermakna (p < 0,05) BTB = Berbeda Tidak Bermakna (p > 0,05)

0,00 ± 1,11

56,86 ± 0,79

18,62 ± 0,66

24,19 ± 0,77

39,57 ± 0,15

Gambar 15. Diagram batang persen (%) penghambatan inflamasi pada masing-masing kelompok perlakuan uji antiinflamasi Keterangan: I = Kelompok kontrol negatif CMC-Na 191,8 mg/kgBB II = Kelompok perlakuan Kalium Diklofenak 4,48mg/kgBB mencit III = Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB IV = Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB V = Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB

1. Kontrol negatif Pada penelitian ini digunakan kontrol negatif bertujuan untuk memastikan bahwa pemberian aquadest sebagai pelarut kalium diklofenak dan CMC-Na sebagai pelarut fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius


95

L., tidak memberikan pengaruh terhadap efek antiinflamasi kalium diklofenak sebagai obat antiinflmasi dan pemberian sediaan fraksi yang diduga berpotensi memiliki aktifitas penghambatan inflamasi pada mencit terinduksi karagenin 1%. Hasil pengukuran tebal udem selama 6 jam akan didapatkan nilai tebal udem (mm) tiap satuan menit yang selanjutnya dapat dilakukan perhitungan nilai AUC yang menggambarkan tebal udem telapak kaki mencit terinduksi karagenin 1% dalam mm.menit (millimeter.menit). Tujuannya adalah untuk melihat pengaruh pemberian senyawa uji yang telah dihitung menggunakan metode trapezoid (Tabel IX) pada kelompok kontrol negatif aquadest dan CMC-Na menghasilkan purata tebal udem yang paling besar diantara kelompok perlakuan lainnya. Nilai AUC kontrol negatif aquadest sebesar 696,99 ± 9,39 mm.menit dan kontrol negatif CMC-Na sebesar 724,19 ± 8,07 mm.menit, dengan hasil uji statistika menunjukkan adanya perbedaan yang tidak bermakna antar keduanya (Tabel X). Pada penelitian ini kontrol negatif yang digunakan untuk membandingkan dengan kelompok perlakuan pemberian fraksi heksan-etanol ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., adalah CMC-Na yang merupakan pelarut sediaan fraksi tersebut. Berikut ini (Gambar 15) hasil tebal udem yang dihasilkan selama 6 jam, kelompok kontrol negatif CMC-Na pada mencit terinduksi karagenin 1%.

Mean Nilai AUC (mm.menit)


70.00 60.00 50.00 40.00 30.00 20.00 10.00 0.00

63.09 62.61 60.54

59.04 58.17 57.45 56.79 55.77

96

54.42 53.25

27.66 28.43 29.28 30.50

Waktu (menit) Kontrol Negatif CMC-Na

Gambar 16. Grafik nilai AUC kontrol negatif CMC-Na Berdasarkan (Gambar 16) udem akan mulai meningkat pada menit ke 15 yang merupakan fase awal yang terjadi pada inflamasi akut puncaknya pada menit ke 60. Adanya peningkatan udem tersebut dikarenakan induksi senyawa iritan dari karagenin secara suplantar pada telapak kaki mencit yang menyebabkan adanya kerusakan jaringan. Inflamasi merupakan respon tubuh terhadap kerusakan jaringan akibat adanya rangsangan merugikan seperti rangsangan kimia. Kerusakan jaringan tersebut akan memicu pelepasan mediator yang mengawali proses inflamasi seperti histamin, serotonin, kinin dan prostaglandin sehingga dapat menimbulkan udem yang mampu bertahan selama 6 jam (Hidayati, Listyawati, dan Setyawan, 2005). Pemberian karagenin tanpa adanya senyawa yang bertindak sebagai antiinflamasi akan mengakibatkan adanya peningkatan tebal udem kaki yang ditandai dengan bertambah besarnya pada telapak kaki mencit mendakan terjadinya inflamasi. Beberapa penurunan tebal udem pada telapak kaki mencit terjadi pada menit-menit terakhir dapat disebabkan oleh respon dari tubuh yang berupaya untuk


97

mempertahankan dan memulihkan tubuhnya dari peradangan yang terjadi, namun respon tubuh tersebut tidak dapat mengatasi udem dengan baik dibandingkan kelompok uji lainnya Karagenin yang digunakan pada penelitian ini adalah karagenin tipe λ sebagai penginduksi udem. Penginduksian karagenin digambarkan secara bhipasic yaitu memiliki dua fase untuk menyebabkan inflamasi. Berdasarkan Suleyman et al. (2004) fase awal ditandai dengan pelepasan histamin, serotonin, dan bradikinin yang akan berakhir hingga menit ke- 60 dan fase kedua berhubungan dengan pelepasan mediator inflamasi lainnya seperti prostaglandin yang mengakibatkan terjadinya peningkatan COX (enzim siklooksigenase) dan pelepasan radikal bebas terjadi antara menit ke- 60 menit setelah injeksi dan berakhir setelah menit ke 180. Setelah pelepasan mediator inflamasi maka udem akan bertahan selama 6 jam dan berangsur-angsur akan berkurang dalam waktu 24 jam sehingga pada grafik di atas terlihat terjadi penurunan tebal udem yang tidak terlalu signifikan. Hasil penelitian uji antiinflamasi ekstrak metanol-air Macaranga tanarius L. pada mencit yang terinduksi karagenin 1% oleh Kurniawaty dkk. (2010), penggunaan kontrol negatif CMC-Na sebagai pelarut ekstrak dan aquadest sebagai pelarut kalium diklofenak didapatkan hasil rata-rata bobot udem berbeda tidak bermakna dengan kelompok kontrol karagenin 1% yang menunjukkan tidak adanya penurunan udem yang berarti, sehingga hal tersebut menunjukkan tidak adanya kemampuan sebagai antiinflamasi pada kedua kontrol negatif tersebut. Dengan demikian, hasil pengukuran penggunaan kontrol negatif aquadest dan CMC-Na terhadap aktivitas antiinflamasi pada mencit yang terinduksi


98

karagenin 1% menunjukkan adanya peningkatan udem pada telapak kaki hewan uji dengan persen pura penghambatan 0,00 ± 1,11, sehingga dapat disimpulkan bahwa pemberian CMC-Na dan aquadest tidak memberikan efek antiinflamasi. 2. Kontrol positif diklofenak (Cataflam Fast®50mg ) dosis 4,48 mg/kgBB Pada penelitian uji antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., pada mencit terinduksi karagenin, digunakan kontrol positif berupa kalium diklofenak yang merupakan obat antiinflamasi. Tujuan adanya kontrol positif adalah untuk membandingkan efek antiinflamasi dengan senyawa uji pada penelitian ini yaitu fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., pada tiga peringkat dosis 47,95; 95,9; dan 191,8 mg/kgBB apakah memiliki efek antiinflamasi yang lebih baik dibandingkan kontrol positif diklofenak yang merupakan obat antiinflamasi. Aktivitas kalium diklofenak sebagai obat antiinflamasi menunjukkan hasil penurunan udem yang paling besar dengan nilai rata-rata tebal udem tiap satuan waktu (AUC) 312,392 ± 5,72 mm.menit dan persen penghambatan inflamasi sebesar 56,86% yang lebih besar dibandingkan kelompok lainnya (Tabel XI). Persen penghambatan inflamasi kontrol positif diklofenak berdasarkan analisis non-parametrik dengan uji Mann-Whitney menunjukkan nilai probabilitas (p < 0,05) yang artinya kemampuan penghambatan inflamasi ditunjukkan dengan penurunan tebal udem pada pemberian diklofenak berbeda bermakna dengan kelompok perlakuan lainnya (kontrol negatif CMC-Na, tiga peringkat dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air) daun Macaranga tanarius L (Tabel XII) dan (Gambar 15).


99

Kontrol positif diklofenak dibandingkan dengan kontrol negatif CMC-Na berdasarkan hasil analisis Mann-Whitney nilai probabilitas (p < 0,05) menunjukkan bahwa adanya perbedaan bermakna antara kontrol positif diklofenak dosis 4,48 mg/kgBB dengan nilai purata AUC 312,39 ± 5,72 dan persen penghambatan inflamasi 56,86 % dibandingkan dengan dengan kontrol negatif CMC-Na dosis yang memiliki nilai purata AUC 724,19 ± 8,07 dan persen penghambatan 0,00 %. Hal ini menunjukkan bahwa, kalium diklofenak dengan dosis pemberian 4,48 mg/kgBB memiliki penghambatan inflamasi yang lebih besar dibandingkan kontrol negatif yang menunjukkan tidak adanya potensi penghambatan inflamasi. 3. Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Adanya penurunan udem pada telapak kaki mencit akibat perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. yang dapat dilihat dari penurunan nilai AUC (mm.menit). Penurunan tersebut merupakan parameter utama untuk mengevaluasi efek antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanolair daun Macaranga tanarius L. terhadap mencit jantan galur Swiss terinduksi karagenin 1%. a. Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., dosis terendah (47,95 mg/kgBB). Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB memiliki nilai purata AUC sebesar 589,34 ± 4,78 mm.menit dengan persen penghambatan inflamasi 18,62%. Nilai AUC tersebut dibandingkan dengan kontrol negatif CMC-Na sebagai pelarut fraksi


100

yang memiliki nilai purata AUC sebesar 724,19 ± 8,07 mm.menit dan persen penghambatan inflamasi 0%, kemudian hasilnya dianalisis dengan Mann-Whitney test didapatkan nilai probabilitas (p < 0,05) menunjukkan adanya perbedaan bermakna antar kedua kelompok tersebut. Hasil analisis tersebut menunjukkan bahwa fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB memiliki efek penghambatan inflamasi. Apabila dibandingkan dengan kontrol positif diklofenak yang memiliki nilai purata AUC sebesar 312,39 ± 5,72 mm.menit dan persen penghambatan inflamasi 56,86 %, kemudian dianalisis dengan Mann-Whitney test didapatkan nilai probabilitas (p < 0,05) menunjukkan adanya perbedaan bermakna antar kelompok kontrol positif dengan kelompok perlakuan dosis 47,95 mg/kgBB. Hasil analisis tersebut menunjukkan bahwa fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB tersebut memiliki potensi penghambatan inflamasi lebih rendah dibandingkan dengan kelompok perlakuan kalium diklofenak sebagai obat antiinflamasi (NSAID) dengan dosis pemberian 4,48 mg/kgBB. b. Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., dosis tengah (95,9 mg/kgBB). Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB memiliki nilai purata AUC sebesar 548,97 ± 5,62 mm.menit dan persen penghambatan inflamasi 24,19%. Nilai AUC dosis tengah tersebut bila dibandingkan dengan kontrol negatif CMC-Na sebagai pelarut fraksi yang memiliki nilai purata AUC sebesar 724,19 ± 8,07 mm.menit dan


101

persen penghambatan inflamasi 0%, kemudian dianalisis dengan Mann-Whitney test didapatkan nilai probabilitas (p < 0,05) menunjukkan adanya perbedaan bermakna antar kedua kelompok. Hasil analisis tersebut menunjukkan bahwa fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L.dosis 95,9 mg/kgBB memiliki efek penghambatan inflamasi. Apabila dibandingkan dengan kontrol positif diklofenak yang memiliki nilai purata AUC sebesar 312,39 ± 5,72 mm.menit dan persen penghambatan inflamasi 56,86 %, yang kemudian dianalisis dengan Mann-Whitney Test didapatkan nilai probabilitas (p < 0,05) menunjukkan adanya perbedaan bermakna antar kedua kelompok. Hasil analisis tersebut menunjukkan bahwa fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L.dosis 95,9 mg/kgBB memiliki potensi penghambatan inflamasi lebih rendah dibandingkan dengan kelompok perlakuan kalium diklofenak sebagai obat antiinflamasi (NSAID). c. Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., dosis tertinggi (191,8 mg/kgBB). Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB memiliki nilai purata AUC sebesar 438,53 ± 1,41 mm.menit dan persen penghambatan inflamasi 39,57 %. Nilai AUC tersebut bila dibandingkan dengan kontrol negatif CMC-Na sebagai pelarut fraksi yang memiliki nilai purata AUC sebesar 724,19 ± 8,07 mm.menit dan persen penghambatan inflamasi 0% yang dianalisis dengan Mann-Whitney test didapatkan nilai probabilitas (p < 0,05), hal ini menunjukkan adanya perbedaan bermakna antar kedua kelompok. Hasil analisis tersebut menunjukkan bahwa fraksi etanol-


102

heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB memiliki efek penghambatan inflamasi. Apabila dibandingkan dengan kontrol positif diklofenak yang memiliki nilai purata AUC sebesar 312,39 ± 5,72 mm.menit dan persen penghambatan inflamasi 56,86 %, yang kemudian dianalisis dengan Mann-Whitney test didapatkan nilai probabilitas (p < 0,05) menunjukkan adanya perbedaan bermakna antar kedua kelompok. Hasil analisis tersebut menunjukkan bahwa fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB memiliki potensi penghambatan inflamasi lebih rendah dibandingkan dengan kelompok perlakuan kalium diklofenak sebagai obat antiinflamasi (NSAID). d. Perbandingan efek antiinflamasi antar kelompok perlakuan fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB menghasilkan nilai purata AUC sebesar 589,34 ± 4,78 mm.menit dan persen penghambatan inflamasi 18,62 %. Apabila dibandingkan dengan kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB dengan nilai purata AUC sebesar 548,97 ± 5,62 mm.menit

dan persen penghambatan 24,19 %,

kemuadin dianalisis dengan menggunakan Mann-Whitney test, hasil analisis statistika tersebut didapatkan nilai probabilitas (p < 0,05) yang menunjukkan adanya perbedaan bermakna antar kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. pada dosis 47,95 mg/kgBB dengan dosis pemberian 95,9 mg/kgBB. Berdasarkan persen penghambatan


103

inflamasi dan hasil analisis secara statistika, efek antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB memiliki potensi penghambatan inflamasi lebih rendah dibandingkan dengan kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. pada dosis 95,9 mg/kgBB. Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB dengan nilai purata AUC sebesar 548,97 ± 5,62 mm.menit dan persen penghambatan inflamasi 24,19 % dibandingkan dengan kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB yang memiliki nilai purata AUC 438,53 ± 1,41 mm.menit dan persen penghambatan inflamasi sebesar 39,57%, kemudian hasilnya dianalisis dengan Mann-Whitney test. Hasil analisis statistika didapatkan nilai probabilitas (p < 0,05) menunjukkan adanya perbedaan bermakna antar kedua kelompok perlakuan tersebut. Berdasarkan persen penghambatan inflamasi dan hasil analisis secara statistika menunjukkan bahwa fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB memiliki efek penghambatan inflamasi lebih rendah dibandingkan dengan kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. pada dosis 191,8 mg/kgBB. Pada kelompok perlakuan pemberian fraksi heksan-etanol ekstrak metanolair daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB yang merupakan dosis terendah memiliki nilai purata AUC 589,34 ± 4,78 mm.menit dan persen penghambatan inflamasi 18,62 %. Kelompok perlakuan pemberian fraksi heksan-


104

etanol ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB, dibandingkan dengan pemberian dosis 191,8 mg/kgBB yang merupakan dosis tertinggi dengan nilai purata AUC sebesar 438,53 ± 1,41 mm.menit dan persen penghambatan infalamasi sebesar 39,57%, dianalisis statistika dengan MannWhitney test, didapatkan nilai probabilitas (p < 0,05) menunjukkan adanya perbedaan bermakna antar kedua kelompok perlakuan tersebut. Berdasarkan persen penghambatan inflamasi dan hasil analisis secara statistika menunjukkan bahwa fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB memiliki potensi penghambatan inflamasi lebih rendah dibandingkan dengan kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. pada dosis tertinggi 191,8 mg/kgBB. Dengan demikian, dari hasil tersebut dapat diketahui bahwa pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB memiliki potensi penghambatan inflamasi paling besar dibandingkan dengan kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. pada dosis 47,95 dan 95,9 mg/kgBB. Berdasarkan hasil penurunan tebal udem yang dapat dilihat dari nilai AUC (mm.menit) pada (Tabel IX) dan persen penghambatan inflamasi pada (Tabel XI), menunjukkan bahwa kemampuan penghambatan inflamasi akan mengalami peningkatan seiring dengan kenaikan pemberian dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Hal tersebut dapat dilihat dari semakin meningkatnya dosis fraksi yang diberikan 47,95; 95,9; dan 191,8 mg/kgBB, semakin meningkat pula efek antiinflamasi yang diberikan yaitu sebesar


105

18,62; 24,19; dan 39,57%. Berdasarkan hasil tersebut, dapat disimpulkan bahwa terdapat hubungan kekerabatan antara dosis dengan efek antiinflamasi fraksi heksan-etanol ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L.

E. Potensi Relatif Daya Antiinflamasi Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L. Efek antiinflamasi dari ketiga peringkat dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. yaitu 47,95; 95,9; dan 191,8 mg/kgBB memiliki

kemampuan

penghambatan

inflamasi,

namun

kemampuan

penghambatannya lebih rendah dibandingkan kalium diklofenak sebagai obat antiinflamasi. Adanya kemampuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dalam memberikan efek antiinflamasi, maka kelompok perlakuan tersebut dapat dibandingkan potesi relatif daya antiinflamasinya dengan obat antiinflamasi yaitu diklofenak. Rata-rata persen (%) potensi relatif daya antiinflamasi dari kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dapat dilihat pada tabel XIII. Tabel XIII. Rata-rata persen (%) potensi relatif kelompok fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dibandingkan dengan kontrol positif diklofenak pada uji antiinflamasi (n=5) Potensi Relatif Daya Antiinflamasi Nilai p Kelompok Uji 𝒙 ± SE AUC (%) Kontrol positif diklofenak dosis 4,48 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB

(N)

100,00 ± 1,39

0,101

32,75 ± 1,16

0,191

(N)


106

Tabel XIII. Lanjutan Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air (TN) daun Macaranga tanarius L. dosis 42,54 ± 1,37 0,033 95,9 mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air (N) daun Macaranga tanarius L. dosis 69,59 ± 0,33 0,428 191,8 mg/kgBB Keterangan : X = Mean (Rata-rata) SE = Standard Error (SD/√𝑛) dan N = Distribusi data normal (p > 0,05) Potensi relatif daya antiinflamasi di dapatkan dari hasil perbandingan antara persen penghambatan inflamasi kelompok perlakuan dengan persen penghambatan inflamasi kelompok kontrol positif diklofenak. Purata potensi relatif daya antiinflamasi kelompok kontrol positif diklofenak dan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dianalisis secara statistika untuk melihat distribusi data, hasil analisis menunjukkan nilai probabilitas p = 0,00 (p < 0,05) yang artinya data persen potensi relatif daya antiinflamasi pada kelompok perlakuan tidak terdistribusi normal (Tabel XIII), sehingga analisis dilanjutkan dengan uji non-parametrik Kruskal-Wallis Test, dilanjutkan dengan uji MannWhitney. Pada uji Mann-Whitney didapatkan hasil nilai probabilitas untuk semua kelompok perlakuan baik kelompok kontrol positif diklofenak dan ketiga peringkat dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., sebesar p = 0,008 (p < 0,05), yang artinya bahwa pada tiap-tiap kelompok berbeda bermakna terhadap potensi relatif daya antiinflamasinya. Hasil analisis tersebut dapat dilihat pada (Tabel XIV) dan yang memperlihatkan hasil analisis statistika non-parametrik

Mann-Whitney

Test

dan

diagram

batang

(Gambar

17)

memperlihatkan keberbedaan persen potensi relatif daya antiinflamasi terhadap kontrol positif diklofenak.


107

Tabel XIV. Hasil uji Mann-Whitney test persen (%) potensi relatif daya antiinflamasi pada masing-masing kelompok uji antiinflamasi Kelompok Nilai p Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun (BB) 0,009 Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB Kontrol positif Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun (BB) diklofenak 4,48 0,009 Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB mg/kgBB Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun (BB) 0,009 Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB Fraksi etanolFraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun (BB) heksan ekstrak 0,009 Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB metanol air daun Macaranga Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun (BB) tanarius L. dosis 0,009 Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB 47,95 mg/kgBB Fraksi etanolheksan ekstrak metanol air daun Fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun (BB) 0,009 Macaranga Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB Keterangan: BB = Berbeda Bermakna (p < 0,05); BTB = Berbeda Tidak Bermakna (p > 0,05)

39,57 ± 0,15

32,75 ± 1,16

42,54 ± 1,37

62,59 ± 0,33

Gambar 17. Diagram batang persen (%) potensi relatif daya antiinflamasi pada kelompok kontrol positif diklofenak dan perlakuan uji antiinflamasi


108

Potensi relatif daya antiinflamasi kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., dapat dilihat pada tabel XIII menunjukkan bahwa pada ketiga dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air memiliki nilai purata potensi relatif daya antiinflamasinya < 100%, sehingga dapat dikatakan bahwa ketiga kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanolair daun Macaranga tanarius L. tersebut memiliki potensi yang lebih kecil dibandingkan diklofenak dalam menghambat inflamasi pada telapak kaki mencit yang terinduksi karagenin 1% yang menggambarkan terjadinya inflamasi akut. Hasil pengujian antiinflamasi pada ketiga peringkat dosis 47,95; 95,9; dan 191,8 mg/kgBB, setelah dilakukan analisis secara statistika menunjukkan adanya potensi dalam memberiakan efek antiinflamasi, kemampuan tersebut dapat dikaitkan dengan kandungan senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam fraksi etanol-heksan ekstrak daun Macaranga tanarius L. Senyawa-senyawa metabolit sekunder pada daun Macaranga tanarius L. yang diduga dapat berperan dalam penghambatan inflamasi adalah chebulagic acid dan macatannin B, merupakan senyawa golongan ellagitanin dengan kemampuannya menangkap radikal bebas penyebab inflamasi. Radikal bebas diartikan sebagai molekul yang mempunyai satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan di orbit luarnya sehingga relatif tidak stabil, untuk mendapatkan kestabilannya molekul yang bersifat reaktif tersebut akan mencari pasangan elektronnya, sehingga disebut reactive oxygen species (ROS). Radikal bebas dapat terbentuk selain secara alamiah melalui sistem biologis tubuh, juga dapat berasal dari lingkungan, salah


109

satunya pada reaksi inflamasi yang akan menghasilkan oksidan sebagai radikal bebas (Raymond, 2011). Menurut Tjay & Rahardja (cit., Wulandari dan Hendra, 2011), terdapat hubungan antara penangkapan radikal bebas dengan penghambatan mediatormediator nyeri dan peradangan. Berikut merupakan proses pelepasan mediator kimia dan radikal bebas yang memperantarai terjadinya proses inflamasi akut (Gambar 18).

Ketika terjadi kerusakan jaringan, jumlah radikal bebas akan meningkat.

Gambar 18. Pelepasan radikal bebas pada proses inflamasi Peningkatan tersebut seiring dengan peningkatan produksi peroksida, sedangkan di dalam tubuh akan memproduksi antioksidan endogen yang terbatas seperti superoksida dismutase (SOD) yang kerjanya dalam menstabilkan radikal. Sumber utama radikal bebas pada mamalia di antaranya pada proses sintesis prostaglandin. Dalam proses nyeri dan peradangan, radikal bebas terbentuk ketika


110

asam arakidonat dikonversi menjadi endoperoksida melalui jalur siklooksigenase dan hidroperoksida melalui jalur lipooksigenase sehingga terjadi pelepasan mediator nyeri dan inflamasi (Wulandari dan Hendra, 2011). Bila jumlah radikal bebas semakin meningkat dengan adanya kerusakan jaringan maka antioksidan endogen yang diproduksi oleh tubuh tidak mampu lagi mengatasinya secara efekstif, sehingga dibutuhkan antioksidan eksogen. Senyawa ellagitanin berupa chebulagic acid dan macatannin B merupakan antioksidan eksogen dan senyawa yang dituju pada penelitian ini, senyawa tersebut merupakan golongan senyawa ellagitannins kelompok senyawa fenolik. Senyawa yang termasuk kelompok fenolik memiliki satu atau lebih gugus hidroksil yang terikat pada satu atau lebih cincin aromatik benzen, sehingga senyawa ini dapat teroksidasi. Kemampuannya membentuk radikal fenoksi yang stabil, menyebabkan senyawa ini banyak digunakan sebagai antioksidan. Proses penangkapan radikal bebas oleh chebulagic acid dan macatannin B melalui mekanisme pengambilan atom hydrogen dari senyawa antioksidan oleh radikal bebas sehingga radikal bebas akan menangkap satu elektron dari antioksidan (Matheos, Runtuwene, dan Sudewi, 2014). Berdasarkan hasil skrining fitokimia menunjukkan adanya senyawa lain yaitu glikosida dan flavonoid yang terdapat pada fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. namun pada penelitian ini tidak diketahui senyawa spesifik dari kedua golongan tersebut. Kedua senyawa tersebut diduga memiliki peran dalam penghambatan inflamasi, berdasarkan hasil penelitian oleh Wulandari dan Hendra (2011) dilihat dari pendekatan strukturnya senyawa glikosida dapat memiliki aktivitas penangkapan radikal bebas karena adanya


111

senyawa karbonil (C=O) dengan ikatan rangkap terkonjugasi dan memiliki ikatan α-𝛽 tidak jenuh, yang dapat menyebabkan adanya perpindahan elektron. Atom C yang terdapat pada posis β akan bermuatan positif. Hal ini dikarenakan adanya lompatan elektron pada ikatan phi. Kemungkinan besar, atom C pada posisi β inilah yang akan menangkap radikal bebas. Selain itu senyawa flavonoid juga memiliki peran dalam penghambatan inflamasi, berdasarkan Hidayati dkk (2005) mekanisme antiinflamasi yang dilakukan oleh flavonoid dapat melalui beberapa jalur seperti penghambatan aktivitas enzim COX dan atau lipooksigenase yang dapat menyebabkan penghambatan biosintesis eikosanoid sehingga hasil metabolismenya berupa pelepasan mediator inflamasi seperti prostaglandin dapat dihambat, penghambatan degranulasi netrofil, dan penstabil ROS (Reactive Oxygen Spesies) sehingga radikal menjadi inaktif. Proses penangkapan radikal bebas oleh chebulagic acid dan macatannin B, dan beberapa senyawa yang belum diketahui secara spesifik yang merupakan golongan flavonid dan glikosida tersebut dengan mekanisme penangkapan radikal bebas dan penghambatan mediator inflamasi tersebut, maka proses terjadinya peradangan juga dapat terhambat. Hal tersebut dibuktikan dengan adanya penurunan udem setelah pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L secara oral pada ketiga peringkat dosis 47,95; 95,9; dan 191,8 mg/kgBB. Penelitian ini merupakan penelitian skrining awal yang menunjukkan bahwa fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L.,


112

memiliki efek antiinflamasi yang diberikan secara oral, sehingga membuktikan bahwa daun Macaranga tanarius L, berpotensi untuk dijadikan sebagai salah satu tanaman alternatif pengobatan antiinflamasi. Selain itu, perlu dilakukannya uji efek antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., pada mencit jantan galur Swiss terinduksi karagenin 1% menggunakan senyawa iritan yang berbeda seperti 1-3 mL dextran 1%, 0,05 mL egg white fresh undiluted, serotonin kreatinin sulfat, 0,1 mL suspension of kaolin 5%, dan 0,1 mL ovalbumin solution 1% (Vogel, 2002), dengan metode uji inflamasi akut untuk mempertegas kemampuan fraksi heksan-etanol ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dalam menghambat inflamasi. Tujuannya adalah untuk melihat apakah sediaan fraksi heksan-etanol ekstrak metanol-air daun Macarana tanarius L. pada metode uji inflamasi akut dengan induksi senyawa yang berbeda akan memiliki kemampuan yang sama dalam menghambat inflamasi pada telapak kaki belakang mencit yang diinduksi karagenin. Selain itu, dapat pula dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai uji antiinflamasi dengan menggunakan formulasi sediaan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., untuk digunakan secara topikal sebagai alternatif pengobatan inflamasi. Hasil penelitian uji antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. ini perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk memastikan senyawa aktif yang bertanggung jawab dalam memberikan efek antiinflamasi pada fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. Pemastian kandungan senyawa metabolit sekunder dapat dilakukan dengan menggunakan metode kuantitatif untuk menentukan banyaknya senyawa


113

yang terkandung dalam campuran, dan mengidentifikasi senyawa yang berperan terhadap efek antiinflamasi dapat digunakan KLT. Selain itu berdasarkan Talamona (2005) dapat pula digunakan metode kuantitatif menggunakan kromatografi kolom (flash chromatography column), dengan menggunakan metode tersebut akan dapat diketahui senyawa aktif apa saja yang berperan dalam efek antiinflamasi pada fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dan pengujian tersebut merupakan sebagai langkah lanjutan untuk penegasan dari hasil skrining fitokimia secara kualitatif dengan uji tabung yang telah dilakukan pada penelitian ini. Apabila kandungan senyawa aktif dari fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. telah diketahui sepenuhnya dan melalui pengujian secara klinis memenuhi kriteria sebagai pengobatan inflamasi, maka bahan aktif dari fraksi tersebut dapat berguna untuk dijadikan dalam produk oral untuk pengobatan inflamasi, seperti yang telah dilaporkan oleh Lim et al. (2009) produk oral dari daun Macaranga tanarius dapat digunakan dalam pengobatan karies gigi, gingivitis dan peradangan gusi.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan Berdasarkan hasil yang telah diperoleh dan analisis statistik yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan: 1. Pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., memiliki efek antiinflamasi pada mencit terinduksi karagenin 1%. 2. Efek antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., pada dosis 47,95; 95,9; dan 191,8 mg/kgBB yang dinyatakan oleh persen penghambatan inflamasi berturut-turut sebesar 18,62; 24,19; dan 39,57 %. 3. Potensi relatif daya antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., pada dosis 47,95; 95,9; dan 191,8 mg/kgBB yang dinyatakan oleh persen potensi relatif daya antiinflamasi berturut-turut sebesar 32,75; 42,54; dan 69,59 %. 4. Adanya hubungan kekerabatan antara dosis dengan efek antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L.

114


115

B. Saran Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang: 1. Perlu dilakukannya uji efek antiinflamasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanolair daun Macaranga tanarius L., pada mencit jantan galur Swiss terinduksi karagenin 1% menggunakan senyawa

penginduksi yang berbeda dengan

metode uji inflamasi akut untuk mempertegas kemampuan fraksi heksan-etanol ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. dalam menghambat inflamasi. 2. Penelitian lebih lanjut mengenai antiinflamasi dengan formulasi sediaan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., secara topikal sebagai alternatif pengobatan inflamasi. 3. Penelitian lebih lanjut menggunakan metode kromatografi untuk mengetahui senyawa aktif apa saja yang berperan sebagai antiinflamasi pada fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., dan sebagai penegasan dari skrining fitokimia secara kualitatif dengan uji tabung yang telah dilakukan pada penelitian ini.


116

Daftar Pustaka Agoes, G., 2009, Teknologi Bahan Alam (Serial Farmasi Industri-2), Edisi revisi dan perluasan, Penerbit ITB, Bandung, pp. 31-40, 174. Al-Ash’ary, M.N., Supriyanti, T.E.M., Zackiyah, 2010, Penentuan Pelarut Terbaik dalam Mengekstraksi Senyawa Bioaktif dari Kulit Batang Artocarpus heterophyllus, Universitas Pendidikan Indonesia Al Wasel, A.H., and Bashandy, S.A., 2011, Carbon Tetrachloride-induced Hepatotoxicty and Nephrotoxicity in Rats: Protective Role Vitamin C, Journal of Pharmacology and Toxicology, 6(3), 283-292. Altman, R., Bosch, B., Brune, K., Patrignani, P., Young, C., 2015, Advances in NSAID Devlopment: Evolution of Diclofenac Product Using Pharmaceutical Technology, Drugs, 75, 859-877. Anonim, 2013, Organisme-IPB Biodiversity Informatics-Bogor Agricultural University, http://apps.cs.ipb.ac.id/ipbiotics/user/organism/detail/detail_organisme_oba t.php?id=749, diakses tanggal 21 April 2015. Azizah, N., Suarsini, E., dan Prabaningtyas, S., 2014, Analisis Kandungan Kimia Infusa Tanaman Saringkaet (Basilicum polystachyon (L.) Moench) dan Uji Efektivitas Antifungal Infusa Tanaman Sangket Terhadap Penghambatan Pertumbuhan Candida albicans secara In Vitro, Skripsi, Universitas Negeri Malang. Chakraborty, A., R.K.B., Devi, S., Rita,Kh., Sharatchandara, and Th. I. Singh, 2004, Preliminary Studies on Antiinflammatory and Analgesic Activities of Spilanthes Acmella in Experimental animal models, Indian Journal Pharmacology, 36 (3), 148-150. Cole, B.E.M.D., 2011, Treating Mild to Moderate Acute Pain With Oral Diclofenac Potassium Liquid-Filled Capsules: Rapid Absorption With ProSorb Dispersion Technology, Pain Medicine News, 2. Dahlan, M.S., 2008, Statistik untuk Kedokteran dan Kesehatan, Edisi III, Salemba Medika, Jakarta, pp. 55-58, 85-105. Dai, J., and Mumper, R., 2010, Plant Phenolics: Extraction, Analysis and Their Antioxidant and Anticancer Properties, Molecules, 15, 7313-7352. Day, R.O., and Graham, G.G., 2013, Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs), BMJ, 346, 3195.


117

Departemen Kesehatan RI, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Departemen Republik Indonesia, Jakarta, pp. 5, 9-12. Dharmawan, N., Darmaji, P., Harmayani E., 1999, Kemampuan Ekstrak FraksiFraksi Buah Pace (Morinda citrifolia) sebagai Antibakteri, Seminar Nasional Pangan, Universitas Pangan dan Gzi UGM, Yogyakarta. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, p. 46. Djunarko, I., Donatus, I.A., dan Noni, 2003, Pengaruh Perasan Buah Mengkudu (Morinda citrifolia L.) terhadap Daya Antiradang Diklofenak pada Mencit Jantan, Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas, 1, 10-17. Gilda, T., 2014, Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Metanol-Air Daun Senu (Macaranga tanarius L. Mull. Arg) pada Mencit betina terinduksi karagenin, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Goodman and Gilman, 2007, Dasar Farmakologi Terapi, Edisi 10, Volume 1, EGC, Jakarta, pp. 666-673. Greene, R.J., and Harris, N.D., 2008, Pathology and Therapeutics for Pharmacist; A Basis for Clinical Pharmacy Practice, 3thed, Pharmaceutical Press, USA, pp. 46-63. Gupta, A.K., Bharadwaj, V., Lata, S., Sharma, R., Kacker, S., and Sharma, A.K., 2013, To Evaluate The Activity of Glycyrrhiza Glabra Linn and Vanda Roxburghi in Animal Model of Arthritis, Medical Science, 2277, 405-406. Harborne, J. B., 1987, Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, Penerbit ITB. Bandung. Holmberg, K., 2003, Novel Surfactants, second edition vol.144, revised and expanded, Marcel Dekker, Inc., United States of America, pp.101. Ikawati, Z., Suparjan, A.M., dan Asmara, L.S., 2007, Pengaruh Senyawa Heksagamavunon-1 (HGV-1) terhadap Inflamasi Akut Akibat Reaksi Anafilaksis Kutaneus Aktif pada Tikus Wistar Jantan Terinduksi Ovalbumin, Kemajuan Terkini Riset Universitas Gadjah Mada, 36-46. Jocher, A., Kessler, S., Hornstein, S., Schulte, M., Schempp, C.M., 2005, The UV Erythema Test as a Model to Investigate the Anti-Inflammatory Potency of Topical Preparations – Reevaluation and Optimization of the Method, Skin Pharmacol Appl Skin Physiol, 18, 234-240.


118

Juma’a, K.M., Ahmed, Z.A., Nurman, I.T., and Hussain, R., 2009, Dose-dependent anti-inflammatory effect of silymarin in experimental animal model of chronic inflammation, African Journal of Pharmacy and Pharmacology, 3 (5), pp. 242-247. Katzung, B.G., 2001, Basic and Clinical Pharmacology, diterjemahkan oleh bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga, edisi 8, Penerbit Salemba Medika, Jakarta, pp.449-462, 637. Kawakami, S., Harinantenaina, L., Matssunami, K., Otsuka, H., Shinzato, T., and Takeda, Y., 2008, Macaflavanones A-G, Prenylated Flavanones from the Leaves of Macaranga tanarius, J. Nat. Prod, 71, pp. 1872–1876. Kristianti, A. N, N. S., Aminah, M. Tanjung, dan B. Kurniadi., 2008, Buku Ajar Fitokimia Jurusan Kimia Laboratorium Kimia Organik FMIPA, Universitas Airlangga, Surabaya, pp. 47-48. Kumar, V., Abbas, A.K., Fausto, N., dan Mitchell, R.N., 2007, Robbins Basic Pathology, 8th edition, Philadelpia, Saunders Elsevier, pp. 29, 37-41, 43-50, 53-54. Kumar, V., Abbas, A.K., Aster, J.C., 2014, Pathologic Basis of Disease, 9th edition, Philadelphia, Elsavier Health Sciences, pp. 69-72, 84, 90, 91. Kumazawa, S., Murase, M., Momose, N., and Fukumoto, S., 2014, Analysis of antioxidant prenylflavonoids in different parts of Macaranga tanarius, the plant origin of Okinawan propolis, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, pp. 16-20. Kurniawaty, A.Y., Adrianto, E.E., dan Hendra, P., 2011, Uji Praklinik Ekstrak Metanol-Air Macaranga tanarius L. Kajian : Aktivitas Antiinflamasi dan Hepatoprotektif, Kongres Ilmiah IAI XIX dan Rapat Kerja Nasional IAI, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Lim, T.Y., Lim, Y.Y., Yule, C.M., 2009, Evaluation of antioxidant, antibacterial and anti-tyrosinase activities of four Macaranga species, Food Chemistry, 114, pp. 594-599. Magadula, J.J., 2014, Phytochemistry and Pharmacology of The Genus Macaranga; A Review, Journal of Medical Plant Research, 8 (2), 489-503. Matheos, H., Runtuwenw, M.R.J., dan Sudewi, S., 2014, Aktivitas antioksidan dari ekstrak daun kayu bulan (Psinonia alba), Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi, 3 (3), p. 236.


119

Manurung, D.Y.S., 2013, Efek Antiinflamasi Infusa Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) pada Udem Telapak Kaki Mencit Betina Terinduksi Karagenin dengan Pengukuran Jangka Sorong, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, p. 25. Mariana, M.G., Fernandes, P.D., Fernandes, S.B.O., Fingolo, C.E., Boylan, F., 2013, Anti-inflammatory activity of ethanol extract and fractions from Couroupita guianensis Aublet leaves, Journal of Ethnopharmacology, 146, pp. 324-330. Massó, G.E.L, Patrignani, P., Tacconelli, S., García, R.L.A., 2010, Variability among nonsteroidal antiinflammatory drugs in risk of upper gastrointestinal bleeding, Arthritis Rheum, 62(6), p. 601. Matsunami, K., Takamori, I., Shinzato, T., Aramoto, M., Kondo, K., Otsuka, H., 2006, Radical Scavanging Activities of New Megastigmane Glucosides from Macaranga tanarius (L.) MULL.-ARG., Chem. Pharm. Bull., 54 (10), pp. 1403-1407. Matsunami, K., Otsuka, H., Kondo, K., Shinzato, T., Kawahata, M., Yamaguchi, K., Takeda, Y., 2009, Absolute configuration of (+)-pinoresinol 4-O-[6 00-O-galloyl]-b-D-glucopyranoside macarangiosides E, and F isolated from the leaves of Macaranga tanarius, Phytochemistry, 70, pp. 127-1285. Morris, J.C., 2003, Carrageenan-Induced Paw Edema in the Rat and Mouse, Methods in Molecular Biology, 225, p. 115. Nantel, F., Denis, D., Gordon, R., Northey, A., Cirino, M., Metters, K.M., Chan, Ch.Ch., 1999, Distribution And Regulation Of Cyclooxygenase-2 In Carrageenan-Induced Inflammation, British Journal of Pharmacology, 28, pp. 853–859. Nathania, D., 2011, Efek Antiinflamasi Asetil Eugenol secara Topikal Terhadap Edema Kaki yang Diinduksi Formalin 0,5% pada Mencit Jantan Galur Swiss, Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, p. 18. National Center for Biotechnology Information, 2015, Ethanol, http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/ethanol, diakses pada tanggal 12 Agustus 2015. National Center for Biotechnology Information, 2015, Hexane, http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/hexane, diakses pada tanggal 12 Agustus 2015.


120

National Center for Biotechnology Information, 2015, Methanol, www. http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/methanol, diakses pada tanggal 12 Agustus 2015. Necas, J., dan Bartosikova., 2013, Carragenan : a review, Veterinarni Medicina 58, pp. 187-205. Phommart, S., Sutthivaiyakit, P., Chinmnoi, N., Ruchirawat, S., and Sutthivaiyakit, S., 2005, Constituents of the leaves of Macaranga tanarius, J.Nat.Prod., 68, pp. 927-930. Pinelo, M., Rubilar, M., Sineire, J., and Nunez, M. J., 2004, Extraction of antioxidants phenolics from almond hulls (Prunus amygdalus) and pine sawdust (Pinus pinaster), Food Chemistry, 85, pp. 267–273. Posadas, I., Bucci, M., Roviezzo, F., Rossi, A., Parente, L., Sautebin, L., and Cirino, G., 2004, Carrageenan-induced mouse paw oedema is biphasic, ageweight dependent and displays differential nitric oxide cyclooxygenase-2 expression, British Journal of Pharmacology, 142 (2), pp. 331–338. Prasetyo, H.D., 2013, Aktivitas Antimikroba Fraksi Petroleum Eter, Kloroform, Etanol Bunga Pulu (Chartamus tinctorius L.) Terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, p.18. Punchard, N.A., Whelan, C.J., and Adcock, 2004, Journal of Inflammation, BioMed Central, 1 (1), pp. 1-4. Puteri, M. D. P. T. G., dan Kawabata, J., 2010, Novel α- glucosidase inhibitors from Macaranga tanarius leaves, Food Chemistry, 123, pp. 384-389. Rahayu, D., dan Soeleman, S., 2013, Halaman Organik, Agromedia Pustaka, Jakarta, p. 122. Rang, H.P., Dale, M.M., Ritter, J.M., Moore, P.K., 2003, Pharmacology, 4th edition, Elsevier Science, Phiadelphia, pp. 222, 229, 231-239. Raymond, C.R., and Paul, S., 2003, Handbook of Pharmaceutical Excipient, 4th edition, Pharmaceutical Press, USA. Raymond, T.R., 2011, Anti Aging, Medicinus Scientific Journal of Pharmaceutical Development and Medical Application, 24 (1), p. 5. Rowe, R.C., Sheskey, P.J., and Quinn, M.E., 2009, Handbook Pharmaceutical Excipients, 6thed, Pharmaceutical Press, London, pp.122-125.


121

Sagala, N., 2013, Efek Antiinflamasi Kombinasi Infusa Daun Ilee (Coleus atropurpureus L. Benth) Dosis 140 mg/kgBB dengan Bunga Telang (Clitoria ternatea L.) Dosis 328; 655; 1310 mg/kgBB pada Udem Telapak Kaki Mencit Betina Terinduksi Karagenin dengan Pengukuran Jangka Sorong, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, pp. 35-36. Santoso, H.B., 2008, Ragam dan Khasiat Tanaman Obat, Agromedia Pustaka, Jakarta, p. 134. Schror, K., and Meyer, K.J., 2000, Cyclooxygenase-2 Inhibition and Side effects of Non-steroidal Antiinflammatory Drugs in the Gasteointestinal Tract, Curr.Med.Chem, 7, pp. 1121-1129. Starr, F., Starr, K., and Loope, L., 2003, Biological Resources Division Ppeakala Field Station, Maui, Hawai’I, United States Geological Survey, 1. Steenis, C.G.G.J.van., Hoed, D., Blommbergen, S., dan Eyma, P.J., 1992, Flora: Untuk Sekolah di Indonesia, cetakan keenam, diterjemahkan oleh Moeso, S., dkk., PT Pradnya Paramita, Jakarta, pp. 35, 36, 37, 49-50. Stoker, S.H., 2010, General Organik and Biological Chemistry, 5th edition, Cengage Learning, Inc., USA, pp. 404-405. Suleyman, H., Demircan, B., Karagoz, Y., dan Ozta, N., 2004, Antiinflamattory Effect of Selective COX-2 Inhibitors, J.Pharmacol., 56 (6), pp. 775-780. Sultana, B., Anwar, F., Ashraf, M., 2009, Effect of Extraction Solvent/Technique on the Antioxidant Activity of Selected Medicinal Plant Extracts, Molecules, 14, p. 2168. Supriyatna, M.W. Moelyono, Iskandar, Y., Febriyanti, M., 2014, Ed. 1, Cet. 1., Prinsip Obat Herbal: Sebuah Pengantar untuk Fitoterapi, CV Budi Utama, Yogyakarta, p.49. Supriyatna, Febriyanti, R., Dewanto, Wijaya, I., dan Ferdiansyah, F., 2015, Fitoterapi Sistem Organ: Pandangan Dunia Barat terhadap Obat Herbal Global, Ed. 2, Cet. 2, CV Budi Utama, Yogayakarta, pp. 223-224. Talamona, A., 2005, Laboratory Chromatography Guide, Buchi Labortech nik AG, Switzerland, p. 12. Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., Kaur, G.,Kaur, H., 2011, Phytochemical screening and Extraction: A Review, International Pharmaceutica Sciencia, 1 (1), pp. 98-106.


122

Tjay, T.H., dan Kirana R., 2002, Obat-Obat Penting: Khasiat Penggunaan dan Efek-Efek Sampingnya, Edisi Lima, PT. Elexmedia Komputindo Gramedia, Jakarta, p. 313. Tjay, T.H., dan Rahardja, K., 2007, Obat-Obat Penting:Khasiat Penggunaan dan Efek Sampingnya, Edisi ke Vi, Cetakan ke-1, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, p.312. Tobacman, J.K., Wallace, R.B, Zimmerman, M.B., 2001, Consumption of carrageenan and other water-soluble polymers used as food additives and incidence of mammary carcinoma, Medical Hypotheses, 58, pp. 589-598. United

States Environmental Protection Agency, 2013, Hexane, http://www.epa.gov/ttnatw01/hlthef/hexane.html, diakses pada tanggal 12 Agustus 2015.

United

States Environmental Protection Agency, 2013, Methanol, http://www.epa.gov/ttn/atw/hlthef/methanol.html, diakses pada tanggal 12 Agustus 2015.

Uppoor, R.S., 2007, Clinical Pharmacology and Biopharmaceutics Review(s), Center for Drug Evaluation and Research, pp. 2,3,12,13,20. Verawati, Aria, W., Novicaresa, M., 2011, Aktifitas Anti Inflamasi Ekstrak Etanol Daun Kembang Bulan (Tithonia Diversifolia. A. Gray) Terhadap Mencit Putih Betina, Scientia Jurnal Farmasi dan Kesehatan, 1 (1), pp. 47-51. Valdés, J.A.A., Figueroa, J.J.B., Carbo, A.A., Barragán, A.P., Herrera, R.R., and Aguilar, C.N., 2011, Ellagitannins: Biosynthesis, biodegradation and biological properties, Journal of Medicinal Plants Research, 5 (19), pp. 4696-4703. Vogel, H.G., 2002, Drug Discovery & Evaluation: Pharmacological Assays, 2nd edition, Sringer, New York, pp. 669-691, 725, 751-761. Wilmana, P. F. & Gan, S., 2007, Farmakologi dan Terapi, Ed. 5, Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta, pp. 230, 231, 233. Wulandari, D., dan Hendra, P., 2011, Efek Analgesik Infusa Duan Macaranga tanarius L. pada Mencit Betina Galur Swiss, Bionatura-Jurnal Ilmu-ilmu Hayati dan Fisik, 13 (2), pp. 108-116.


123

LAMPIRAN


Lampiran 1. Surat Pengesahan Medical and Health Research Ethics Committee (MHREC)

124


125

Lampiran 2. Surat Pengesahan Determinasi Daun Macaranga tanarius L.


126

Lampiran 3. Surat Pengujian Kadar Air Serbuk Daun Macaranga tanarius L.


Lampiran 4. Surat Kalibrasi Jangka Sorong Digital

127


Lampiran 5. Surat Legalitas Penggunaan SPSS

128


129

Lampiran 6. Pengeringan dan Serbuk Daun Macaranga tanarius L.

Gambar 1. Tumbuhan (Daun dan Buah) Macaranga tanarius L.

Gambar 2. Tanaman dan Serbuk Macaranga tanarius L.

Lampiran 7. Hasil Fraksi Etanol-heksan dari Ekstrak Metanol-Air daun Macaranga tanarius L.

Gambar 3. Hasil Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L.

Gambar 4. Hasil Fraksi Etanol-Heksan dari Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L.


Gambar 5. Sediaan Fraksi Etanol-Heksan dari Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L. Lampiran 8. Pembuatan udem dan pengukuran udem kaki mencit

Gambar 6. Pembuatan Udem Telapak Kaki Belakang Mencit Terinduksi Karagenin 1%

Gambar 7. Pengukuran Udem Telapak Kaki Mencit

130


131

Lampiran 9. Perhitungan dosis a. Dosis Aquadest Berikut Perhitungan dosis untuk aquadest: 0,5 𝑚𝑙

= 20 𝑔𝑟𝑎𝑚

𝐵𝐵 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡

b. Dosis Karagenin Dosis karagenin ditetapkan berdasarkan penelitian yang telah dilakukan oleh Williamson et al (1996) yaitu karagenin yang digunakan dengan konsentrasi 1% dilarutkan ke dalam NaCl fisiologis 0,9%. Karagenin diberikan secara subplantar pada telapak kaki mencit dengan volume pemberian 0,05 mL, maka dosis yang dapat diberikan dalam penelitian ini sebesar: 0,05 𝑚𝑙 𝑥

1𝑔𝑟𝑎𝑚

𝑚𝑙 Dosis karagenin 1% = 0,020 𝑘𝑔 𝐵𝐵 100 𝑚𝑒𝑛𝑐𝑖𝑡

= 0,0025 gram/kgBBmencit = 25 mg/kgBBmencit c. Dosis Kalium Diklofenak Didapatkan dari hasil orientasi, dimana didapatkan dosis 4,48 mg/kgBB dengan selang waktu pemberian yang efektif memberikan penurunan udem pada menit ke-15. Pada dosis 4,48 mg/kgBB juga telah dapat memberikan penurunan udem pada telapak kaki mencit yang telah terinduksi karagenin 1%. Berikut perhitungan dosis kalium diklofenak yang mengacu pada penelitian yang telah dilakukan oleh (Djunarko, Donatus, dan Noni, 2003) :  Dosis Kalium Diklofenak pada tikus dengan BB= 250 gram sebesar 40 mg/kgBB tikus. Bila akan digunakan untuk tikus dengan BB 200 gram maka dapat dikonversikan sebagai berikut: Dosis Kalium Diklofenak = 

200 𝑔𝑟𝑎𝑚 𝑥 40 𝑚𝑔 /𝑘𝑔𝐵𝐵 250 𝑔𝑟𝑎𝑚

= 32 mg/kgBB tikus

Apabila akan digunakan untuk penelitian antiinflamasi pada mencit dengan dosis 32mg/kgBB tikus untuk BB 200 kg, maka perhitungan dosis kalium diklofenak dapat dikonversikan sebagai berikut: Dosis Kalium Diklofenak = 0,14 (tabel konversi tikus 200 gram  mencit 20 gram) x 32 mg/kgBB = 4,48 mg/kgBB menciit d. Dosis Sediaan Fraksi Macaranga tanarius L.  Penetapan peringkat dosis didasarkan pada penggunaan fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L., pada tikus galur Swiss dengan dosis tertinggi sebesar 137 mg/kgBB.  Konsentrasi fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L, yang dapat dimasukkan dan dikeluarkan memalui spuit oral yaitu 0,6 gram/ 25 mL. Bila penetapan peringkat dosis fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L pada penelitian








 



132

ini akan digunakan mencit jantan galur Swiss dengan BB = 20 gram, maka konversi dari tikus dengan BB 200 gram = 0,14, sehingga perhitungan dosis fraksi untuk mencit menjadi: Dosis tertinggi dari penelitian efek hepatoprotektif fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. = 137 mg/kgBB, maka untuk tikus dengan BB = 200 mg adalah: = 137 mg/kgBB = 0,137 mg/gram x 200 gram BB tikus = 27,4 mg/200 gram BB tikus Penentuan Dosis Tertinggi Konversi dari tikus 200 gram  mencit 20 gram = 0,14, maka dosis tertinggi dapat ditentukan sebagai berikut: = 27,4 mg/200 gram x 0,14 = 3,836 mg/20 gram BB mencit Dosis rendah dan dosis tengah ditentukan dengan menurunkan dua kelipatan dari dosis tertinggi sehingga diperoleh dosis sebagai berikut: Dosis tengah = 1,918 mg/20 gramBB Dosis terendah = 0, 959 mg/20 gram BB Penentuan dosis untuk manusia dengan perhitungan konversi dari mencit 20 gram ke manusia 70 kg = 387,90 Dosis tertinggi untuk mencit = 3,836 mg / 20 gram BB = 0,003836 gram / 20 gram BB mencit Dosis tertinggi untuk manusia 70 kg = 387,90 x 0,003836 gram = 1,487 gram / 70 kgBB manusia = 0,0212 gram/kgBB = 21,24 mg/kgBB

Lampiran 10. Perhitungan persen rendemen fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Fraksi kental yang diperoleh kemudian ditimbang dan dibandingkan bobotnya dengan srbuk simplisia awal yang digunakan. Perbandingan tersebut dinyatakan dalam persen (%). % Rendemen =

=

𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑓𝑟𝑎𝑘𝑠𝑖 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑠𝑒𝑟𝑏𝑢𝑘

x 100%

30,5806 𝑔𝑟𝑎𝑚 1.200 𝑔𝑟𝑎𝑚

x 100% = 2,55 %


133

Lampiran 11. Analisis Statistika Data Orientasi Penentuan Dosis dan Selang Waktu Pemberian Kalium Diklofenak Nilai AUC Data Orientasi Penentuan Dosis dan Selang Waktu Pemberian Kalium Diklofenak dan Kontrol negatif selang waktu 15 menit 1. Pengujian Normalitas Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Dosis_Selang_Waktu AUC

Statistic

df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

df

Sig.

Kontrol negatif aquadest selang waktu 15 menit

.308

3

.

.901

3

.390

Kontrol positif diklofenak 4,48 mg/kgBB selang waktu 15 menit

.232

3

.

.980

3

.726


.221

3

.

.986

3

.772

a. Lilliefors Significance Correction

2. Pengujian Homogenitas Test of Homogeneity of Variances AUC Levene Statistic

df1

1.761

df2 2

Sig. 6

.250

Hasil pengujian statistika mengenai uji normalitas menunjukkan bahwa data terdistribusi normal karena nilai p untuk masing-masing kelompok data adalahp > 0,05, sehingga analisis data dilanjutkan menggunakan ANOVA Test. 3.

ANOVA

ANOVA AUC Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

475838.740 5767.325 481606.065

df

Mean Square 2 6 8

237919.370 961.221

F 247.518

Sig. .000

Hasil pengujian statistika mengenai uji homogenitas menunjukkan bahwa data homogen karena nilai p > 0,05, dan hasil uji ANOVA menunjukkan p = 0,000 (p < 0,05) menunjukkan paling tidak terdapat dua kelompok yang memiliki perbedaan rerata AUC yang berbeda bermakna, maka untuk mengetahui kelompok manakah yang berbeda bermakna dilakukan analisis menggunakan post hoc ANOVA Test (LSD).


134

4. Post Hoc LSD Multiple Comparisons AUC LSD

(I) Dosis_Selang_Waktu Kontrol negatif aquadest selang waktu 15 menit


(J) Dosis_Selang_Wa Mean Difference ktu (I-J) Std. Error

95% Confidence Interval Sig.

Lower Bound

Upper Bound


529.58000* 25.31430

.000

467.6381

591.5219


430.85667* 25.31430

.000

368.9148

492.7985

Kontrol negatif aquadest selang waktu 15 menit

-529.58000* 25.31430

.000

-591.5219

-467.6381


-98.72333* 25.31430

.008

-160.6652

-36.7815

-430.85667* 25.31430

.000

-492.7985

-368.9148

98.72333* 25.31430

.008

36.7815

160.6652

Kontrol positif diklofenak 9,1 Kontrol negatif mg/kgBB selang waktu 15 aquadest selang menit waktu 15 menit Kontrol positif diklofenak 4,48 mg/kgBB selang waktu 15 menit *. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Gambar 8. Diagram batang rata-rata nilai AUC (mm.menit) pada orientasi dosis efektif diklofenak dan rentang waktu pemberian karagenin antara kelompok kontrol negatif dan kelompok diklofenak rentang 15 menit


135

Pengujian Normalitas Nilai AUC Data Orientasi Penentuan Dosis dan Selang Waktu Pemberian Kalium Diklofenak selang waktu 15 dan 30 menit 1. Pengujian Normalitas Tests of Normality a

Kolmogorov-Smirnov Dosis_Selang_Waktu AUC

Statistic

df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

df

Sig.

Kontrol Positif Diklofenak 4,48 Selang Waktu

.232

3

.

.980

3

.726

.221

3

.

.986

3

.772

.260

3

.

.958

3

.605

.217

3

.

.988

3

.790

Pemberian 15 menit Kontrol Positif Diklofenak 9,1 Selang Waktu 15 menit Kontrol Positif Diklofenak 4,48 Selang Waktu 30 menit Kontrol Positif Diklofenak 9,1 Selang Waktu 30 menit a. Lilliefors Significance Correction

2. Pengujian Homogenitas Test of Homogeneity of Variances AUC Levene Statistic

df1

df2

Sig.

.730

3

8

.562

3. Hasil ANOVA ANOVA AUC Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

17260.433 7853.147 25113.580

df

Mean Square 3 8 11

5753.478 981.643

F 5.861

Sig. .020


136

4. Post Hoc LSD Multiple Comparisons AUC LSD

(I) Dosis_Selang_Waktu

(J) Dosis_Selang_Waktu

Kontrol Positif Diklofenak 4,48 Kontrol Positif Diklofenak 9,1 Selang Waktu Pemberian 15 Selang Waktu 15 menit menit Kontrol Positif Diklofenak 4,48 Selang Waktu 30 menit

Kontrol Positif Diklofenak 9,1 Selang Waktu 15 menit

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

-98.72000* 25.58181

.005

-157.7118 -39.7282

-85.52000* 25.58181

.010

-144.5118 -26.5282


-64.87000* 25.58181

.035

-123.8618

Kontrol Positif Diklofenak 4,48 Selang Waktu Pemberian 15 menit

98.72000* 25.58181

.005


13.20000 25.58181

.620

-45.7918

72.1918


33.85000 25.58181

.222

-25.1418

92.8418

85.52000* 25.58181

.010


-13.20000 25.58181

.620

-72.1918

45.7918


20.65000 25.58181

.443

-38.3418

79.6418

Kontrol Positif Diklofenak 4,48 Selang Waktu Pemberian 15 menit

64.87000* 25.58181

.035


-33.85000 25.58181

.222

-92.8418

25.1418


-20.65000 25.58181

.443

-79.6418

38.3418

Kontrol Positif Diklofenak 4,48 Kontrol Positif Diklofenak 4,48 Selang Waktu 30 menit Selang Waktu Pemberian 15 menit


Mean Difference (IJ) Std. Error

95% Confidence Interval

-5.8782

39.7282 157.7118

26.5282 144.5118

5.8782 123.8618


137

Gambar 9. Diagram batang rata-rata nilai AUC (mm.menit) pada dosis efektif diklofenak dan rentang waktu pemberian karagenin antara kelompok diklofenak diklofenak rentang 15 dan 30 menit Lampiran 12. Hasil Pengolahan Analisis Statistika Nilai AUC Data Perlakuan Uji Antiinflamasi Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L., pada Mencit Galur Swiss Terinduksi Karagenin 1. Uji Normalitas Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Kelompok AUC

Statistic

Df

Shapiro-Wilk

Sig. .200

Statistic

df

Sig.

*

.902

5

.423

Kontrol Negatif Aquadest

.236

5

Kontrol Negatif CMC-Na Dosis 191,8 mg/kgBB

.377

5

.019

.679

5

.006

Kontrol positif diklofenak Dosis 4,48 mg/kgBB

.325

5

.091

.813

5

.102

Perlakuan Fraksi Macaranga Dosis 47,95 mg/kgBB

.226

5

.200*

.848

5

.189


.333

5

.074

.795

5

.074


.223

5

.200*

.896

5

.387

a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance.

Hasil pengujian statistika mengenai uji normalitas menunjukkan bahwa data tidak terdistribusi normal karena nilai p < 0,05 (0,006) sehingga analisis data dilanjutkan menggunakan Kruskal-Wallis Test


138

2. Nilai SE pada kelompok kontrol negatif, positif, dan perlakuan Descriptives Dosis AUC

Statistic


Mean 95% Confidence Interval for Mean

6.9699E2 Lower Bound

6.7094E2

Upper Bound

7.2305E2

5% Trimmed Mean

6.9673E2

Median

7.0268E2

Variance

2.09861E1

Minimum

674.93

Maximum

723.75

Range

48.82

Interquartile Range

39.78

Skewness Kurtosis

.043

.913

-1.941

2.000

7.2419E2

8.06902

Lower Bound

7.0178E2

Upper Bound

7.4659E2

5% Trimmed Mean

7.2299E2

Median

7.1640E2

Variance

325.545

Std. Deviation

Kontrol positif diklofenak 4,48 mg/kgBB

9.38527

440.417

Std. Deviation

Kontrol Negatif CMC-Na 191,8 Mean mg/kgBB 95% Confidence Interval for Mean

Std. Error

1.80429E1

Minimum

713.78

Maximum

756.08

Range

42.30

Interquartile Range

24.49

Skewness

2.109

.913

Kurtosis

4.512

2.000

3.1239E2

5.71943


Lower Bound

2.9651E2

Upper Bound

3.2827E2

5% Trimmed Mean

3.1303E2

Median

3.1575E2

Variance Std. Deviation

163.559 1.27890E1

Minimum

290.48

Maximum

322.80

Range Interquartile Range Skewness

32.32 19.42 -1.785

.913


Kurtosis Kelompok Perlakuan Fraksi Mean Dosis Terendah 47,95 mg/kgBB 95% Confidence Interval for Mean

2.000

5.8934E2

4.77994

5.7607E2

Upper Bound

6.0261E2

5% Trimmed Mean

5.8945E2

Median

5.9145E2 114.239

Std. Deviation

Kelompok Perlakuan Fraksi Dosis Tengah 95,9 mg/kgBB

3.462

Lower Bound

Variance

139

1.06883E1

Minimum

577.13

Maximum

599.48

Range

22.35

Interquartile Range

21.19

Skewness

-.266

.913

Kurtosis

-2.930

2.000

5.4897E2

5.62489


Lower Bound

5.3335E2

Upper Bound

5.6459E2

5% Trimmed Mean

5.4963E2

Median

5.5260E2

Variance

158.197

Std. Deviation

1.25776E1

Minimum

527.03

Maximum

559.05

Range

32.02

Interquartile Range

17.17

Skewness

-1.952

Kurtosis Kelompok Perlakuan Fraksi Mean Dosis Tertinggi 191,8 mg/kgBB 95% Confidence Interval for Mean

4.144

2.000

4.3853E2

1.41093

Lower Bound

4.3461E2

Upper Bound

4.4244E2

5% Trimmed Mean

4.3850E2

Median

4.3845E2


.913

9.954 3.15494

Minimum

435.23

Maximum

442.20

Range

6.97

Interquartile Range

6.26

Skewness

.090

.913

-2.689

2.000

Kurtosis


140

3. Uji Keberbedaan Dalam Kelompok Perlakuan Uji Kruskal-Wallis Apabila hasil analisis test statistics menghasilkan p < 0,05 atau pada kolom test statistics “Asymp. Sig. = < 0,05”, maka menunjukkan “paling tidak terdapat perbedaan antara dua kelompok”.

Ranks Kelompok AUC

N

Mean Rank


5

23.80


5

27.20


5

3.00


5

18.00


5

13.00


5

8.00

Total

30 a,b

Test Statistics

AUC Chi-Square Df Asymp. Sig.

27.792 5 .000

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Kelompok

4. Uji Keberbedaan Antar Kelompok Perlakuan Uji Mann-Whitney Apabila hasil analisis test statistics menghasilkan p < 0,05 atau pada kolom test statistics “Asymp. Sig. (2-tailed) = < 0,05”, maka menunjukkan perbedaan yang bermakna pada kelompok terhadap efek yang diberikan. Pengujian Perbedaan Kelompok Kontrol Negatif Aquadest (Pelarut Kalium Diklofenak) dan Kontrol Negatif CMC-Na (Pelarut Fraksi Macaranga) Ranks Kelompok AUC

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.80

19.00

Kontrol Negatif CMC-Na Dosis191,8 mg/kgBB

5

7.20

36.00

Total

10


141

Test Statisticsb AUC Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

4.000 19.000 -1.776 .076 .095a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kelompok

Pengujian Perbedaan Kelompok Kontrol Negatif Aquadest (Pelarut Kalium Diklofenak) dan Kontrol positif diklofenak Ranks Kelompok AUC

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10 Test Statisticsb AUC Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.000 15.000 -2.611 .009 .008a


Pengujian Perbedaan Kelompok CMC-Na (Pelarut Frkasi) dan Kompok Perlakuan Fraksi Etanol-Heksan Eksrak Metanol-Air M.tanarius L., dosis 47,95 mg/kgBB Ranks Kelompok AUC

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10 Test Statisticsb AUC Mann-Whitney U Wilcoxon W Z

.000 15.000 -2.611


Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

142

.009 .008a


*Hasil uji statistika dengan Mann Whitney menunjukkan nilai p yang sama yaitu (0,009) untuk pengujian kontrol negatif dengan seluruh peringkat dosis pemberian fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. (Membuktikan bahwa pemberian CMC-Na berbeda bermakna dengan seluruh kelompok perlakuan fraksi) dalam memberikan penurunan nilai AUC (mm.menit).

Pengujian Perbedaan Kelompok Kompok Perlakuan Fraksi Etanol-Heksan Eksrak Metanol-Air M.tanarius L. Dosis 47,95 mg/kgBB dan Kelompok Kontrol positif diklofenak 4,48 mg/kgBB Ranks Kelompok AUC

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total


.000 15.000 -2.611 .009 .008a


*Hasil uji statistika dengan Mann Whitney menunjukkan nilai p yang sama yaitu (0,009) untuk pengujian kontrol positif diklofenak dengan seluruh peringkat dosis pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. (Membuktikan bahwa pemberian diklofenak berbeda bermakna dengan seluruh kelompok perlakuan fraksi) dalam memberikan penurunan nilai AUC (mm.menit). Pengujian Perbedaan Kelompok Kompok Perlakuan Fraksi Etanol-Heksan Eksrak Metanol-Air M.tanarius L. Dosis 47,95 mg/kgBB dan 95,9 mg/kgBB Ranks Kelompok AUC

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00


143

Ranks Kelompok AUC

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10

Test Statisticsb AUC Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.000 15.000 -2.611 .009 .008a


Pengujian Perbedaan Kelompok Kompok Perlakuan Fraksi Etanol-Heksan Eksrak Metanol-Air M.tanarius L. Dosis 47,95 mg/kgBB dan 191,8 mg/kgBB Ranks Kelompok AUC

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total


.000 15.000 -2.611 .009 .008a


Pengujian Perbedaan Kelompok Kompok Perlakuan Fraksi Etanol-Heksan Eksrak Metanol-Air M.tanarius L. Dosis 95,9 mg/kgBB dan 191,8 mg/kgBB Ranks Kelompok AUC


N

Mean Rank 5

8.00

Sum of Ranks 40.00


Perlakuan Fraksi Macaranga Dosis 191,8 mg/kgBB Total

5

3.00

144

15.00


.000 15.000 -2.611 .009 .008a


*Hasil uji statistika dengan Mann Whitney menunjukkan nilai p yang sama yaitu (0,009) untuk pengujian pada tiap kelompok perlakuan (pemberian ketiga peringkat dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Membuktikan bahwa pemberian fraksi dengan dosis 47,95; 95,9; 191,8 mg/kgBB memiliki hasil yang berbeda bermakna antar kelompoknya dalam memberikan penurunan udem telapak kaki mencit yang digambarkan melalui nilai AUC (mm.menit).

Gambar 10. Diagram batang rata-rata nilai AUC pada kelompok perlakuan uji antiinflamasi I II III IV V VI

Keterangan: = Kelompok kontrol negatif aquadest = Kelompok kontrol negatif CMC-Na 3,836mg/20gramBB mencit = Kelompok perlakuan Kalium Diklofenak 4,48mg/kgBB mencit = Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB = Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB = Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB


145

Lampiran 13. Hasil uji statistika % penghambatan inflamasi pada perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Descriptives Kelompok Persen_Penghambata n_Inflamasi

Statistic

Kontrol Negatif CMC- Mean Na Dosis 191,8 95% Confidence Interval for mg/kgBB Mean

.0004 1.11435 Lower Bound

-3.0935

Upper Bound

3.0943

5% Trimmed Mean

.1652

Median

1.0760

Variance

6.209

Std. Deviation

Kontrol Positif Kalium Diklofenak Dosis 4,48mg/kgBB

2.49177

Minimum

-4.40

Maximum

1.44

Range

5.84

Interquartile Range

3.38

Skewness

-2.109

.913

Kurtosis

4.512

2.000

56.8634

.78976


Lower Bound

54.6707

Upper Bound

59.0561

5% Trimmed Mean

56.7752

Median

56.4000

Variance

3.119

Std. Deviation

Kelompok Perlakuan Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air 47,95 mg/kgBB

Std. Error

1.76596

Minimum

55.43

Maximum

59.89

Range

4.46

Interquartile Range

2.68

Skewness

1.784

.913

Kurtosis

3.460

2.000

18.6210

.66005


Lower Bound

16.7884

Upper Bound

20.4536


5% Trimmed Mean

18.6051

Median

18.3290

Variance

2.178

Std. Deviation

1.47591

Minimum

17.22

Maximum

20.31

Range

3.09

Interquartile Range

2.93

Skewness

.267

.913

-2.930

2.000

24.1950

.77677

Kurtosis Kelompok Perlakuan Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air 95,9 mg/kgBB


Lower Bound

22.0383

Upper Bound

26.3517

5% Trimmed Mean

24.1040

Median

23.6940

Variance

3.017

Std. Deviation


146

1.73691

Minimum

22.80

Maximum

27.22

Range

4.42

Interquartile Range

2.37

Skewness

1.951

.913

Kurtosis

4.143

2.000

39.5676

.14793


Lower Bound

39.1569

Upper Bound

39.9783

5% Trimmed Mean

39.5759

Median

39.5470


.109 .33078

Minimum

39.08

Maximum

39.90

Range

.82

Interquartile Range

.61

Skewness

-.632

.913


Kurtosis

147

-.319

Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Kelompok

Statistic

Persen_Penghambatan Kontrol Negatif CMC-Na _Inflamasi Dosis 191,8 mg/kgBB

df

Sig.

Shapiro-Wilk Statistic

df

Sig.

.377

5

.019

.679

5

.006


.325

5

.091

.813

5

.102


.226

5

.200*

.848

5

.189


.393

5

.011

.754

5

.032


.203

5

.200*

.930

5

.599

a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Kruskal-Wallis Test Ranks Kelompok

N

Persen_Penghambatan_Infla Kontrol Negatif CMC-Na Dosis masi 3,836mg/20gramBB

5

3.00


5

23.00

Kelompok Perlakuan Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air 0,959mg/20gramBB

5

8.00


5

13.00


5

18.00

Total

25 Test Statisticsa,b Persen_Penghambatan_Inflamasi

Chi-Square df

Mean Rank

23.077 4

2.000


Asymp. Sig.

148

.000

NPar Tests Mann-Whitney Test Ranks Kelompok Persen_Penghambatan_ Inflamasi

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10

Test Statisticsb Persen_Penghamb atan_Inflamasi Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.000 15.000 -2.611 .009 .008a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kelompok Ranks Kelompok

Mean Rank

N

Persen_Penghambatan_Inflama Kontrol Negatif CMC-Na si Dosis 191,8 mg/kgBB Kelompok Perlakuan Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air 47,95 mg/kgBB Total

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a

a. Not corrected for ties. c. Grouping Variable: Kelompok

*Hasil uji statistika dengan Mann Whitney menunjukkan nilai p yang sama yaitu (0,009) untuk pengujian kontrol negatif dengan seluruh peringkat dosis pemberian fraksi etanolheksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. (Membuktikan bahwa pemberian CMC-Na berbeda bermakna dengan seluruh kelompok perlakuan fraksi) pada % penghambatan inflamasi.


149

Ranks Kelompok

N

Persen_Penghambatan_Inflama Kontrol Positif Kalium si Diklofenak Dosis 4,48mg/kgBB Kelompok Perlakuan Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air 47,95 mg/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a

*Hasil uji statistika dengan Mann Whitney menunjukkan nilai p yang sama yaitu (0,009) untuk pengujian kontrol positif diklofenak dengan seluruh peringkat dosis pemberian fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. (Membuktikan bahwa pemberian kontrol positif diklofenak berbeda bermakna dengan seluruh kelompok perlakuan fraksi) pada % penghambatan inflamasi. Ranks Kelompok

N

Mean Rank Sum of Ranks

Persen_Penghambatan_Infla Kelompok Perlakuan masi Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air 47,95 mg/kgBB

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total Test Statistics

10

b

Persen_Pengham batan_Inflamasi Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kelompok

.000 15.000 -2.611 .009 .008a


150

Ranks Kelompok

N


Persen_Penghambatan_Infla Kelompok Perlakuan masi Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air 47,95 mg/kgBB

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a


Ranks Kelompok

N


Persen_Penghambatan_Inflamasi Kelompok

Perlakuan Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak MetanolAir 95,9 mg/kgBB Kelompok Perlakuan Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak MetanolAir 191,8 mg/kgBB Total Test Statistics


3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

b

Persen_Pengham batan_Inflamasi Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

5

.000 15.000 -2.611 .009 .008a

*Hasil uji statistika dengan Mann Whitney menunjukkan nilai p yang sama yaitu (0,009) untuk pengujian pada tiap kelompok perlakuan (pemberian ketiga peringkat dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Membuktikan bahwa pemberian fraksi dengan dosis 47,95; 95,9; 191,8 mg/kgBB memiliki hasil yang berbeda bermakna antar kelompoknya dengan seluruh kelompok perlakuan fraksi pada % penghambatan inflamasi.


151

Gambar 11. Diagram batang persen (%) penghambatan inflamasi pada masing-masing kelompok perlakuan uji antiinflamasi I II III IV V

Keterangan: = Kelompok kontrol negatif CMC-Na 191,8 mg/kgBB = Kelompok perlakuan Kalium Diklofenak 4,48mg/kgBB mencit = Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 47,95 mg/kgBB = Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 95,9 mg/kgBB = Kelompok perlakuan fraksi etanol-heksan ekstrak metanol air daun Macaranga tanarius L. dosis 191,8 mg/kgBB

Lampiran 14. Hasil Pengolahan Analisis Statistika Potensi Relatif Daya Antiinflamasi Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L., pada Mencit Galur Swiss Terinduksi Karagenin Descriptives Kelompok_Perlakuan Persen_PotensiRelatif DayaAntiinflamasi

Kontrol Positif Diklofenak 4,48mg/kgBB

Statistic Mean 95% Confidence Interval for Mean

1.0001E2 Lower Bound

96.1552

Upper Bound

1.0386E2

5% Trimmed Mean

99.8544

Median

99.2000

Variance Std. Deviation Minimum

9.638 3.10455 97.49

Std. Error 1.38840


Maximum

105.33

Range

7.84

Interquartile Range

Fraksi EtanolHeksan Ekstrak Metanol-Air daun M.tanarius Dosis 47,95 mg/kgBB

4.72

Skewness

1.786

.913

Kurtosis

3.465

2.000

32.7500

1.16276


Lower Bound

29.5216

Upper Bound

35.9784

5% Trimmed Mean

32.7222

Median

32.2400

Variance

6.760

Std. Deviation

2.60002

Minimum

30.28

Maximum

35.72

Range

5.44

Interquartile Range

5.15

Skewness

.265

.913

-2.928

2.000

42.5520

1.36844

Kurtosis Fraksi EtanolHeksan Ekstrak Metanol-Air Daun M.tanarius Dosis 95,9 mg/kgBB


Lower Bound

38.7526

Upper Bound

46.3514

5% Trimmed Mean

42.3917

Median

41.6600

Variance

9.363

Std. Deviation

3.05993

Minimum

40.10

Maximum

47.89

Range

7.79

Interquartile Range

Fraksi EtanolHeksan Ekstrak Metanol-Air Daun M.tanarius Dosis 191,8 mg/kgBB

152

4.18

Skewness

1.951

.913

Kurtosis

4.143

2.000

69.5950

.33567


Lower Bound

68.5267

Upper Bound

70.6633

5% Trimmed Mean

69.6111

Median

69.7400

Variance

.451


Std. Deviation

153

.67134

Minimum

68.73

Maximum

70.17

Range

1.44

Interquartile Range

1.25

Skewness

-.772

1.014

Kurtosis

-1.588

2.619

Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Kelompok_Perlakuan Persen_Potens i Relatif Daya Antiinflamasi

Statistic

df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

df

Sig.

Kontrol Positif Diklofenak 4,48mg/kgBB

.326

5

.089

.812

5

.101

Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak MetanolAir daun M.tanarius Dosis 47,95 mg/kgBB

.226

5

.200*

.849

5

.191

Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak MetanolAir Daun M.tanarius Dosis 95,9 mg/kgBB

.392

5

.012

.754

5

.033

Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak MetanolAir Daun M.tanarius Dosis 191, 8 mg/kgBB

.265

4

.

.899

4

.428

a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Kruskal-Wallis Test Ranks Kelompok_Perlakuan Persen_PotensiRelatifDayaAntii Kontrol Positif Diklofenak 4,48mg/kgBB nflamasi Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air daun M.tanarius Dosis 47,95 mg/kgBB

18.00

5

3.00

Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air Daun M.tanarius Dosis 95,9 mg/kgBB

5

8.00


5

13.00

Test Statisticsa,b Persen_PotensiRel atifDayaAntiinfla masi

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Kelompok_Perlakuan

Mean Rank 5

Total

Chi-Square df Asymp. Sig.

N

17.857 3 .000

20


154

Mann-Whitney Test Ranks Kelompok_Perlakuan

N

Persen_PotensiRelatifDayaAntii Kontrol Positif Diklofenak nflamasi 4,48mg/kgBB Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak Metanol-Air daun M.tanarius Dosis 47,95 mg/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statisticsb Persen_PotensiRel atifDayaAntiinfla masi Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.000 15.000 -2.611 .009 .008a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kelompok_Perlakuan Ranks Kelompok_Perlakuan

N

Mean Rank

Sum of Ranks

Persen_PotensiRelatifDayaAntii Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak nflamasi Metanol-Air daun M.tanarius Dosis 47,95 mg/kgBB

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10

Test Statisticsb Persen_PotensiRel atifDayaAntiinfla masi Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.000 15.000 -2.611 .009 .008a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kelompok_Perlakuan Ranks Kelompok_Perlakuan

N

Mean Rank

Sum of Ranks


155

Persen_PotensiRelatifDayaAntii Fraksi Etanol-Heksan Ekstrak nflamasi Metanol-Air Daun M.tanarius Dosis 95,9 mg/kgBB

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10

Test Statisticsb Persen_PotensiRel atifDayaAntiinfla masi Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kelompok_Perlakuan

.000 15.000 -2.611 .009 .008a

*Hasil uji statistika dengan Mann Whitney menunjukkan nilai p yang sama yaitu (0,009) untuk pengujian pada tiap kelompok perlakuan (pemberian ketiga peringkat dosis fraksi etanol-heksan ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. Membuktikan bahwa pemberian fraksi dengan dosis 47,95; 95,9; 191,8 mg/kgBB memiliki hasil yang berbeda bermakna antar kelompoknya dengan seluruh kelompok perlakuan fraksi pada % potensi relatif daya antiinflamasi

Gambar 12. Diagram batang persen (%) potensi relatif daya antiinflamasi pada masing-masing kelompok perlakuan uji antiinflamasi


156

Lampiran 15. Hasil Pengujian Fitokimia secara Kualitatif dengan Metode Uji Tabung pada Fraksi Etanol-Heksan, Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L.

Gambar 13. Hasil Pengujian Kandungan Alkaloid (Kiri) Reagen Dragendroff (Endapan Merah) dan (Kanan) Reagen Mayer (Endapan Putih)

Gambar 14. Hasil Pengujian Kandungan Flavonoid Berwarna Jingga

Gambar 15. Hasil Pengujian Kandungan Terpenoid/Steroid Menghasilkan Warna Coklat

Gambar 16. Hasil Pengujian Kandungan Fenolik Menghasilkan Hijau kebiruan

Gambar 17. Hasil Pengujian Kandungan Saponin Menghasilkan Busa < 1 cm


157

Gambar 18. Hasil Pengujian Kandungan Tanin Menghasilkan Warna Biru Kehitaman Gambar 19. Hasil Pengujian Kandungan Glikosida Menghasilkan Cincin Berwarna Ungu pada Batas Cairan


BIOGRAFI PENULIS Penulis Skripsi berjudul “Uji Antiinflamasi Fraksi

Etanol-Heksan

Ekstrak

Metanol-Air

Daun Macaranga Tanarius L. pada Mencit Galur Swiss Terinduksi Karagenin” memiliki nama lengkap Nurul Kusumawardani, merupakan anak pertama dari dua bersaudara pasangan dari Bapak Setiyono dan Ibu Isna Taviyani S.Pd. Penulis dilahirkan di Salatiga pada tanggal 2 Januari 1994 silam. Pendidikan formal yang telah ditempuh penulis yaitu TK Islam Sultan Fatah (1999-2000), tingkat Sekolah Dasar di SDN 06 Salatiga (2000-2006), tingkat Sekolah Menengah Pertama di SMP Negeri 09 Salatiga (2006-2009), dan tingkat Sekolah Menengah Atas di SMA Negeri 01 Salatiga (2009-2012). Pada tahun 2012, penulis melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Semasa studinya, penulis aktif dalam kegiatan kepanitiaan seperti Desa Mitra (2013) sebagai sekretaris, CBIA (Cara Belajar Ibu Aktif) (2014) sebagai sekretaris, dan Pelayanan Kesehatan Dies Natalis ke 59 Universitas Sanata Dharma Yogyakarta (2014) sebagai sekretaris. Penulis juga pernah terlibat dalam Program Kreativitas Mahasiiswa dalam bidang PKM-M “MANG TOGA” yang dibiayai oleh Dinas Pendidikan Tinggi (2015). Penulis juga aktif berperan sebagai asisten dosen di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta yaitu menjadi asisten praktikum Bentuk Sediaan Farmasi (2014), asisten praktikum Komunikasi Farmasi (2015), dan asisten praktikum FarmakologiToksikologi (2015).

158

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents