PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG POHON PETAI (Parkia speciosa Hassk.) TERHADAP Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Aloysius Ade Pratama NIM : 118114150 FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2015

1


UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG POHON PETAI (Parkia speciosa Hassk.) TERHADAP Staphylococcus aureus dan Escherichia coli

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Aloysius Ade Pratama NIM : 118114150

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2015 i


ii


iii


iv


Halaman Persembahan

“TERJADILAH PADAKU SETURUT KEHENDAK-MU” “Aku ingin mendaki puncak tantangan, menerjang batu granit kesulitan, menggoda mara bahaya, dan memecahkan misteri dengan sains. Aku ingin menghirup berupa-rupa pengalaman lalu terjun bebas menyelami labirin lika-liku hidup yang ujungnya tak dapat disangka. Aku mendamba kehidupan dengan kemungkinan-kemungkinan yang bereaksi satu sama lain seperti benturan molekul uranium: meletup tak terduga-duga, menyerap, mengikat, mengganda, berkembang, terurai, dan berpencar ke arah yang mengejutkan. Aku ingin kehidupan yang menggetarkan, penuh dengan penaklukan. (Andrea Hirata-Edensor)

Aku persembahkan karyaku ini untuk: Tuhan Yesus dan Bunda Maria, Bapa, mama beserta adikku Almamaterku tercinta

v


vi


PRAKATA Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala perlindungan dan berkat, kasih dan sayang, serta tuntunan yang diberikan sehingga skripsi berjudul “UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG POHON PETAI (Parkia speciosa Hassk.) TERHADAP Staphylococcus aureus dan Escherichia coli” dengan baik dan lancar. Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini tidak terlepas dari berbagai pihak. Kesempatan ini, penulis pergunakan untuk mengungkapkan rasa terima kasih kepada: 1. Ibu Aris Widayati, M. Si., Ph.D., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. 2. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M. Si. selaku dosen pembimbing skripsi yang telah membimbing, mendampingi dan memberikan arahan, evaluasi serta kritik dan saran mulai dari pembuatan proposal penelitian hingga penulisan skripsi ini selesai. 3. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, M. Si., Apt. selaku dosen penguji yang telah meluangkan waktu untuk memberi kritik dan saran selama penulisan skripsi. 4. Ibu Damiana Sapta Candrasari, S. Si., M. Sc. selaku dosen penguji yang telah meluangkan waktu untuk memberi kritik dan saran selama penulisan skripsi. 5. Ibu Agustina Setiawati, M. Sc., Apt. selaku Kepala Penanggungjawab Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian skripsi. vii


6. Ibu Maria Dwi Budi Jumpowati, S. Si. atas masukan dan arahan dalam bidang Mikrobiologi. 7. Bapak Ir. Ignatius Aris Dwiatmoko, M. Sc. atas masukan dan arahan dalam bidang statistik. 8. Bapak Mukminin, Bapak Wagiran, Bapak Kunto, Bapak Parlan, serta semua laboran yang telah membantu selama proses penelitian di laboratorium. 9. Anisetus Ratnasari Jebarus, Sabrina Handayani Tambun dan Metta Maurilla atas bantuannya baik tenaga maupun ide-ide cemerlangnya serta motivasi dalam suka dan duka selama penelitian di laboratorium. 10. Keluargaku tercinta, Bapak Matius Daryono, Mama Dra. M.M Iin Sarkinah, Adikku tercinta Veronika Yuli Indarwati yang selalu memberikan dukungan, doa, kasih sayang, dan semangat kepada penulis. 11. Teman-teman FKK dan FST 2011 atas doa dan dukungan. 12. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas akhir ini dengan baik. Penulis menyadari bahwa naskah skripsi ini masih banyak kekurangan dengan keterbatasan yang ada sehingga penulis membuka diri terhadap semua kritik dan saran dari semua pihak yang membangun untuk kemajuan diri dan ilmu pengetahuan. Akhir kata, penulis berharap semoga naskah skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak terutama di bidang Farmasi.

Penulis

viii


DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL ..........................................................................................

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................

iii

HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH .................

iv

HALAMAN PERSEMBAHAN ...................................................................

v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................................

vi

PRAKATA ....................................................................................................

vii

DAFTAR ISI .................................................................................................

ix

DAFTAR TABEL ..........................................................................................

xiii

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................

xiv

DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................

xv

INTISARI ......................................................................................................

xvii

ABSTRACT ...................................................................................................... xviii BAB I PENGANTAR ....................................................................................

1

A. LATAR BELAKANG .....................................................................

1

1. Permasalahan ................................................................................

3

2. Keaslian Penelitian ......................................................................

4

3. Manfaat Penelitian .......................................................................

5

B. TUJUAN PENELITIAN ...................................................................

6

1. Tujuan Umum ..............................................................................

6

ix


2. Tujuan Khusus ..............................................................................

6

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA .............................................................

7

A. Petai ...................................................................................................

7

B. Staphylococcus aureus ........................................................................

8

1. Morfologi dan Fisiologi ...................................................................

8

2. Patogenesis ......................................................................................

9

C. Escherichia coli .................................................................................

10

1. Morfologi dan Fisiologi ...................................................................

10

2. Patogenesis dan Gejala Penyakit .....................................................

10

D. Ekstraksi .............................................................................................

11

E. Alkaloid ..............................................................................................

14

F. Fenolik ................................................................................................

15

G. Terpenoid ...........................................................................................

16

H. Flavonoid ...........................................................................................

17

I. Metode Pengujian Aktivitas Antibakteri .............................................

18

1. Metode Difusi ...................................................................................

18

2. Metode Dilusi ...................................................................................

19

J. Landasan Teori ....................................................................................

19

K. Hipotesis ............................................................................................

21

BAB III METODE PENELITIAN .................................................................

23

A. Jenis dan Rancangan Penelitian .........................................................

23

B. Variabel dan Defenisi Operasional ....................................................

23

1. Variabel Penelitian ........................................................................

23

x


2. Definisi Operasional ......................................................................

23

C. Bahan dan Alat Penelitian ..................................................................

24

D. Tata Cara Penelitian ...........................................................................

25

1. Determinasi Kulit Batang Pohon Petai ..........................................

25

2. Pengumpulan Kulit Batang Pohon Petai ........................................

26

3. Pengeringan dan Pembuatan Serbuk Kulit Batang Pohon Petai ....

26

4. Penetapan Susut Pengeringan Pada Serbuk Kulit Batang Pohon Petai .....................................................................................

26

5. Pembuatan Ekstak Etanol Kulit Batang Pohon Petai .....................

27

6. Identifikasi Kandungan Senyawa Kimia Kulit Batang Pohon Petai Dengan Uji Tabung ........................................................................

28

7. Uji Identifikasi Bakteri....................................................................

30

8. Uji Potensi Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai Terhadap S. aureus dan E. coli .......................................................................

31

9. Analisis Hasil .................................................................................

33

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................

35

A. Determinasi dan Pengumpulan Tanaman ..........................................

35

B. Pembuatan Serbuk Simplisia Kulit Batang Pohon Petai ....................

36

C. Penetapan Susut Pengeringan Serbuk Kulit Batang Pohon Petai ......

37

D. Pembuatan Ekstak Etanol Kulit Batang Pohon Petai ........................

38

E. Skrining Fitokimia ..............................................................................

40

F. Identifikasi Bakteri .............................................................................

50

G. Uji Potensi Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai xi


Terhadap S. aureus dan E. coli ........................................................

51

H. Pengukuran Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai Terhadap S. Aureus Dengan Metode Dilusi Cair .............................................

59

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .......................................................

64

A. Kesimpulan ......................................................................................

64

B. Saran ................................................................................................

64

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................

65

LAMPIRAN ..................................................................................................

70

BIOGRAFI PENULIS ..................................................................................

128

xii


DAFTAR TABEL Tabel I. Bobot Tetap Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai .................

39

Tabel II. Hasil Pengamatan Uji Tabung Terhadap Larutan Uji Ekstrak Kulit Batang Pohon Petai ..............................................................

40

Tabel III. Diameter Zona Hambat Yang Dihasilkan Seri Konsentrasi Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai, Kontrol Positif dan Kontrol Negatif Terhadap S. aureus ..........................................................................

53

Tabel IV. Kriteria Kekuatan Aktivitas Antibakteri ........................................

54

Tabel V. Kriteria Kekuatan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai Terhadap Staphylococcus aureus ................................

54

Tabel VI. Hasil Mann Withney – Wilcoxon Test Diameter Zona Hambat Seri Konsentrasi Ekstrak Etanol, Kontrol Negatif dan Positif ...............

56

Tabel VII. Hasil Pengukuran Absorbansi Pada Uji KHM dan KBM Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai Terhadap Staphylococcus aureus ... 60

xiii


DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Struktur Fenol .................................................................................. 16 Gambar 2. Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai ....................................... 39 Gambar 3. Uji Pendahuluan .............................................................................. 41 Gambar 4. Uji Saponin ...................................................................................... 42 Gambar 5. Uji Flavonoid ................................................................................... 43 Gambar 6. Larutan Uji Pada Uji Alkaloid ........................................................ 43 Gambar 7. Reaksi Uji Alkaloid dengan Penambahan Pereaksi Mayer .............. 44 Gambar 8. Uji Alkaloid dengan Penambahan Mayer ........................................ 45 Gambar 9. Reaksi Uji Alkaloid dengan Penambahan Pereaksi Dragendorff..... 45 Gambar 10. Uji Alkaloid dengan Penambahan Dragendorff ............................. 46 Gambar 11. Uji Tanin ....................................................................................... 47 Gambar 12. Uji Fenolik ..................................................................................... 48 Gambar 13. Uji Terpenoid ................................................................................ 49 Gambar 14. Hasil Streak Uji KHM dan KBM .................................................. 61

xiv


DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Surat Keterangan Keaslian Tanaman Petai (Parkia speciosa Hassk.) .............................................................. 69 Lampiran 2. Surat Izin Melakukan Penelitian di Laboratorium Balai Kesehatan Yogyakarta ................................................................. 70 Lampiran 3. Sertifikat Hasil Uji Staphylococcus aureus ATCC 25923 ........... 71 Lampiran 4. Sertifikat Hasil Uji Escherichia coli ATCC 25922 ...................... 72 Lampiran 5. Pereaksi-Pereaksi yang Digunakan Untuk Uji Fitokimia ............. 73 Lampiran 6. Hasil Uji Identifikasi Staphylococcus aureus ................................ 74 Lampiran 7. Uji Identifikasi Bakteri Escherichia coli ...................................... 77 Lampiran 8. Uji Aktivitas Antimikroba Difusi Sumuran Terhadap Staphylococcus aureus ................................................................. 80 Lampiran 9. Uji Aktivitas Antimikroba Difusi Sumuran Terhadap Escherichia coli ............................................................................ 82 Lampiran 10. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai ............................................................. 84 Lampiran 11. Hasil Perhitungan Statistik Zona Hambat Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai Terhadap Staphylococcus aureus ................ 85

xv


INTISARI Penyakit infeksi merupakan salah satu faktor penyebab kematian di seluruh dunia. Selain virus dan jamur, bakteri juga dapat menyebabkan infeksi diantaranya, Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Kulit batang pohon petai (Parkia speciosa) mengandung alkaloid dan fenolik. Biji petai sering digunakan masyarakat sebagai makanan sedangkan kulit batang pohon petai jarang digunakan. Oleh sebab itu, perlu dilakukan penelitian terkait dengan distribusi senyawa dalam kulit batang pohon petai dan potensi senyawa tersebut sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang dilanjutkan dengan menentukan Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi padat dan penentuan KHM dan KBM menggunakan metode dilusi cair. Jenis penelitian ini termasuk eksperimental murni. Data yang diperoleh dianalisis menggunakan Shapiro Wilk untuk distribusi data, Levene Test untuk homogenitas data, Kruskal Wallis untuk mengetahui perbedaan bermakna secara menyeluruh, dan Mann-Whitnney untuk mengetahui kebermaknaan antar konsentrasi, kontrol positif dan kontrol negatif. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit batang pohon petai mampu menghambat bakteri Staphylococcus aureus tetapi tidak mampu menghambat Escherichia coli. KHM dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap bakteri Staphylococcus aureus sebesar 21,875% dan KBM pada konsentrasi 21,875% belum diperoleh. Kata kunci : kulit batang, petai (Parkia speciosa), antibakteri, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, metode difusi sumuran, metode dilusi cair

xvi


ABSTRACT Infection disease is one of the causes of death in the world. In addition to viruses and fungi, bacteria also can cause infections such Staphylococcus aureus and Escherichia coli. The tree bark of Parkia speciosa contain the alkaloid and phenolic. Parkia speciosa seeds are often used by people as food, while the tree bark of Parkia speciosa is rarely used. Therefore, it is necessary to do research related to the distribution of compounds in the tree bark of Parkia speciosa and the potential of these compounds as antibacterial. This study aims to determine the antibacterial activity of ethanol extract of the tree bark of Parkia speciosa, followed by determining the Minimum Inhibition Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) against Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Testing of antibacterial activity using solid diffusion method and determination of MIC and MBC using liquid dilution method. This type of research is purely experimental. The data obtained were analyzed using Shapiro Wilk to see the data distribution, Levene Test for viewing data homogeneous, Kruskal Wallis for knowing the significant differences overall, and the Mann-Whitnney to determine the significance between concentration, positive and negative control. The results showed that the ethanol extract of the tree bark of Parkia speciosa is able to inhibit Staphylococcus aureus but are not capable of inhibiting Escherichia coli. MIC of an ethanol extract of the tree bark of Parkia speciosa obtained against bacteria Staphylococcus aureus is 21,875% and MBC of this concentrations has not been obtained. Keywords : bark, Parkia speciosa Hassk., antibacterial, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, solid diffusion method, liquid dilution method.

xvii


BAB I PENGANTAR A.

Latar Belakang

Penyakit infeksi merupakan salah satu penyakit yang sering diderita oleh masyarakat, seperti infeksi saluran kemih, pernapasan, pencernaan dan infeksi lainnya. Penyebab timbulnya penyakit infeksi adalah bakteri, virus dan jamur. Penyakit infeksi yang umumnya dialami oleh masyarakat Indonesia adalah diare dan pneumonia. Menurut hasil Riskesdas (2007), pneumonia merupakan penyebab kematian nomor dua pada balita (13,2%) setelah diare (17,2%). Penyakit diare merupakan penyebab kematian nomor satu pada bayi (31,4%) dan pada balita (25,2%), sedangkan pada golongan semua umur merupakan penyebab kematian yang keempat (13,2%). Menurut Mardiastuti, Karuniawati, Kiranasari, Ikaningsih, dan Kadarsih, (2007) salah satu bakteri yang menyebabkan diare adalah bakteri Escherichia coli dan penyakit infeksi saluran pernapasan umumnya disebabkan oleh bakteri Staphylococcus aureus. Pada penelitian ini Staphylococcus aureus dan Escherichia coli digunakan sebagai bakteri uji karena Staphylococcus aureus merupakan salah satu bakteri Gram positif dan Escherichia coli merupakan salah satu bakteri Gram negatif. Namun, meningkatnya penyalahgunaan serta penggunaan antibiotik yang irrasional maka penyembuhan penyakit infeksi tidak dapat disembuhkan. Salah satu alternatif untuk memecahkan masalah tersebut,

1


2

peneliti melakukan eksplorasi bahan alam yang berpotensi sebagai antibakteri yaitu petai. Dalam kehidupan sehari-hari, biji petai sering digunakan oleh masyarakat sebagai makanan seperti sambel goreng ati, lalapan, nasi goreng petai atau masakan lainnya. Sedangkan, bagian tanaman lainnya seperti daun, kulit batang pohon, bunga dan kulit buah petai kurang dimanfaatkan. Menurut Kamisah, Faizah, Qodriyah, dan Kamsiah (2013), biji petai mengandung alkaloid, terpenoid, flavonoid dan fenolik. Petai dapat digunakan sebagai antibakteri, antimutagenik, antitumor, dan antioksidan. Menurut Kurniawati (2014), kulit petai yang berasal dari Kabupaten Bogor mengandung golongan senyawa fitokimia seperti alkaloid, terpenoid, saponin, dan tanin serta ekstrak etanol kulit petai tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Oleh sebab itu, peneliti melakukan eksplorasi bahan alam menggunakan tanaman yang sama tetapi berbeda daerah yaitu petai yang berasal dari Kabupaten Sleman, Yogyakarta dengan bagian kulit batang pohon petai. Lingkungan yang berbeda dapat mempengaruhi kandungan senyawa kimia yang terkandung dalam tanaman. Menurut Nitisapto dan Siradz (cit., Mahatriny, Payani, Oka dan Astuti, 2014), faktor lingkungan tanaman yang berbeda dapat mempengaruhi hasil metabolit sekunder tanaman. Faktor-faktor lingkungan yang dapat mempengaruhi adalah iklim, cahaya matahari, suhu, lingkungan atmosfer (CO2, O2, dan kelembaban), lingkungan perakaran (sifat kimia dan fisika tanah) dan ketersediaan air di dalam tanah.


3

Berkaitan dengan distribusi senyawa dalam bagian tanaman petai dan potensi senyawa tersebut sebagai antibakteri, maka perlu dilakukan penelitian terkait distribusi kandungan senyawa aktif pada bagian tanaman petai lainnya seperti kulit batang pohon. Untuk mengetahui distribusi senyawa aktif pada kulit batang pohon petai maka peneliti melakukan penyarian menggunakan penyari yang sesuai untuk mempermudah menyari senyawa yang diduga berpotensi sebagai antibakteri tersebut di atas berdasarkan kelarutannya. Menurut Agnes, Lois, Aning, dan Nani (2013), salah satu pelarut yang dapat digunakan sebagai penyari adalah etanol. Etanol digunakan sebagai penyari karena dapat menyari senyawa yang bersifat semi polar sampai polar sehingga kandungan kimia yang diharapkan dapat tersari dengan baik sesuai dengan kepolarannya. Berdasarkan potensi antibakteri yang terdapat pada tanaman petai, maka tanaman petai dapat digunakan sebagai bahan baku dalam pembuatan antibiotik baru. 1. Permasalahan a. Kandungan kimia apa saja yang terkandung dalam ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang bermanfaat sebagai antibakteri? b. Apakah ekstrak etanol kulit batang pohon petai memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ? c. Berapa kadar hambat minimum (KHM) dan kadar bunuh minimum (KBM) ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ?


4

2. Keaslian penelitian Sejauh pengamatan penulis, penelitian dengan judul “Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai (Parkia speciosa Hassk.) Terhadap Staphylococcus aureus Dan Escherichia coli” belum pernah dilakukan. Penelitian sebelumnya yang berkaitan dengan uji aktivitas antibakteri kulit buah petai yaitu: a.

Uji aktivitas antibakteri ekstrak biji petai terhadap pertumbuhan bakteri Helicobacter

pylori

dan

Escherichia

coli

(Sakunpak

dan

Panichayupakaranant, 2012). b.

Potensi antibakteri ekstrak metanol biji petai terhadap Helicobacter pylori, ekstrak etil asetat biji Parkia speciosa Hassk terhadap Eschericia coli, suspensi air biji petai menghambat pertumbuhan Aeromonas hydrophila, Staphylococcus

aureus,

Streptococcus

agalactiae,

Streptococcus

anginosus, dan Vibrio parahaemolyticu (Kamisah, dkk., 2013). c.

Aktivitas antibakteri ekstrak kulit petai (Parkia speciosa Hassk.) terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus (Kurnawati, 2014).

d.

Fraksinasi ekstrak kulit petai berpotensi antioksidan (Mahardika, 2013). Hasil uji identifikasi pada penelitian tersebut adalah kulit petai mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, dan tanin.

e.

Ekstraksi dan identifikasi senyawa dari biji Parkia speciosa dengan karbon dioksida superkritis (Azizi, Salman, Nik, dan Mohd, 2006). Salah satu hasil identifikasi senyawa dari penelitian ini tersebut adalah pada kulit petai terdapat terpenoid.


5

Perbedaan penelitian yang dilakukan oleh penulis dengan penelitian lainnya adalah pada penelitian yang dilakukan oleh Sakunpak dan Panichayupakaranant (2012) menggunakan biji petai yang diekstraksi dengan etil asetat; sedangkan penelitian yang dilakukan penulis menggunakan kulit batang pohon petai yang diekstraksi dengan etanol 70%. Penelitian yang dilakukan Kamisah, dkk (2013) dilakukan di Malaysia menggunakan biji petai dengan penyari metanol, etil asetat dan air; sedangkan penelitian yang dilakukan penulis berada di Indonesia dengan penyari etanol. Selain itu, penelitian yang dilakukan Kurnawati (2014), serbuk kulit petai diekstraksi dengan ultrasonikasi secara bertingkat dengan pelarut n-heksana, etil asetat, dan etanol 70%; sedangkan penelitian yang dilakukan penulis menggunakan metode ekstraksi maserasi mekanik (shaker) dengan etanol 70% dan sampel yang digunakan adalah kulit batang pohon petai yang diambil di Kabupaten Sleman. 3. Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis Penelitian ini diharapkan dapat mengembangkan khasanah ilmu pengetahuan khususnya di bidang kesehatan tentang penggunaan kulit batang pohon petai yang berkhasiat sebagai antibakteri. b. Manfaat praktis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang manfaat kulit batang pohon petai sebagai antibakteri dan dapat digunakan sebagai pengobatan alternatif bagi masyarakat terutama untuk mengobati


6

penyakit infeksi yang disebabkan oleh Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.

B. Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum Tujuan umum dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antibakteri

ekstrak

etanol

kulit

batang

pohon

petai

terhadap

Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. 2. Tujuan khusus a. Mengetahui kandungan kimia yang terdapat dalam ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang bermanfaat sebagai antibakteri. b. Mengetahui kadar hambat minimal (KHM) dan kadar bunuh minimal (KBM) dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Petai 1. Menurut Plantamor (2008) diklasifikasikan sebagai berikut: Kingdom

: Plantae

Subkingdom

: Tracheobionta

Super Divisi

: Spermatophyta

Divisi

: Magnoliophyta

Kelas

: Magnoliopsida

Sub Kelas

: Rosidae

Ordo

: Fabales

Famili

: Fabaceae

Genus

: Parkia

Spesies

: Parkia speciosa Hassk.

2. Uraian tanaman Petai merupakan tanaman berbentuk pohon dengan ketinggian antara 5-14 m dan membentuk percabangan yang banyak. Daun majemuk serta berwarna hijau. Bunga majemuk dan pangkal mahkota berwarna putih kekuningan dan melekat pada benang sari. Karangan bunga berbentuk bongkol yang terkulai dengan tangkai yang panjang, bunga yang masih 7


8

muda dan belum mekar bewarna hijau. Setelah dewasa, bunga petai berubah menjadi warna kuning. Batang pohon berwarna coklat dan keras. Kulit buah berbentuk polong panjang dan pipih. Biji tersusun rapi dalam polong yang menggantung di pohon dan pada setiap polong terdapat 10-18 biji. Akar tanaman petai berbentuk tunggang dan berwarna coklat (Adi, 2008). 3. Kandungan kimia Tanaman petai mengandung zat kimia seperti alkaloid, saponin, terpenoid, fenolik, flavonoid dan tanin. Beberapa dari senyawa tersebut berpotensi sebagai antibakteri. Bagian tanaman petai seperti kulit batang pohon petai mengandung alkaloid dan fenolik (Kamisah, dkk, 2013).

B. Staphylococcus aureus 1. Morfologi dan fisiologi Staphylococcus aureus termasuk dalam family Micrococcaceae dan termasuk dalam golongan bakteri Gram positif. Bakteri ini berbentuk bulat sedangkan koloni mikroskopiknya berbentuk seperti buah anggur. Koloni bakterinya dapat ditemukan di saluran hidung dan di bagian tubuh yang lain. Bakteri ini bersifat anaerob fakultatif dan menghasilkan enzim katalase. Bakteri Staphylococcus aureus dapat tumbuh dalam larutan NaCl 15 %. Staphylococcus aureus memiliki diameter 0,8-1 mikron, tidak bergerak dan tidak menghasilkan spora. Bakteri ini dapat tumbuh dengan baik pada suhu 370C. Kisaran suhu pertumbuhan bakteri ini adalah 15-400C dan suhu


9

optimumnya adalah 350C. Staphylococcus aureus memiliki daya tahan paling kuat diantara semua bakteri yang tidak membentuk spora. Pada agar miring, Staphylococcus aureus dapat hidup hingga berbulan-bulan, baik dalam lemari es maupun pada suhu kamar. Dalam keadaan kering pada benang, kertas, kain, dan dalam nanah, bakteri ini dapat hidup selama 6-14 minggu (Radji, 2009).

2. Patogenesis Bakteri Staphylococcus aureus menyebabkan berbagai jenis infeksi pada manusia, diantaranya infeksi pada kulit, seperti bisul; infeksi yang lebih lebih serius, seperti pneumonia, mastitis, flebitis, dan meningitis; dan infeksi pada saluran urin. Selain itu, bakteri ini dapat menyebabkan infeksi kronis, seperti osteomyelitis dan endokarditis. Staphylococcus aureus adalah salah satu penyebab utama terjadinya infeksi nosokomial (infeksi yang diakibatkan luka tindakan operasi dan pemakaian alat-alat perlengkapan perawatan rumah sakit). Bakteri ini juga dapat menyebabkan keracunan makanan akibat enterotoksin yang dihasilkannya dan menyebabkan sindrom kejut toksik (toxic shock syndrome) akibat pelepasan superantigen ke dalam aliran darah (Radji, 2009).


10

C. Escherichia coli 1. Morfologi dan fisiologi Escherichia coli merupakan bakteri Gram negatif yang banyak ditemukan pada ileum caudal, termasuk dalam famili Enterobacteriaceae, berbentuk batang pendek (kokobasil), memiliki flagel, berukuran 0,4 - 0,7 µm x 1,4 µm. Pada lingkungan yang kurang baik dapat membentuk spora, dan merupakan mikroba anaerob fakultatif. Escherichia coli akan bersifat patogen apabila berada di luar saluran pencernaan dan pada saat kondisi tubuh lemah (Radji, 2009).

2. Patogenesis dan gejala penyakit Kolonisasi Escherichia coli dalam saluran cerna biasa terjadi setelah 40 hari dilahirkan. Escherichia coli dapat bertahan dan melekat di usus besar selama beberapa bulan bahkan beberapa tahun. Perubahan populasi bakteri Escherichia coli dapat terjadi dalam periode yang lama, hal ini terjadi setelah infeksi usus atau setelah penggunaan kemoterapi atau antimikroba yang dapat membunuh flora normal (Radji, 2009). Escherichia coli menjadi penyebab infeksi manusia, seperti infeksi saluran kemih, infeksi saluran meningitis pada neonates, dan infeksi intestine (gastroenteritis). Ketiga penyakit ini sangat bergantung pada ekspresi faktor virulensi masing-masing serotipe Escherichia coli, termasuk


11

adanya adhesin, invasion, jenis toksin yang diproduksi, dan kemampuan mengatasi pertahanan tubuh hospes (Radji, 2009). Infeksi Escherichia coli sering kali berupa diare yang disertai darah, kejang perut, demam, dan terkadang dapat menyebabkan gangguan pada ginjal. Sekitar 2-7% infeksi Escherichia coli pada beberapa penderita, misalnya anak-anak di bawah 5 tahun dan orang tua, dapat menimbulkan komplikasi yang disebut dengan sindrom uremik hemolitik. Sebagian besar penyakit yang disebabkan oleh infeksi Escherichia coli ditularkan melalui makanan yang tidak dimasak dan daging yang terkontaminasi. Penularan penyakit ini dapat terjadi melalui kontak langsung dan biasanya terjadi di tempat yang memiliki sanitasi dan lingkungan yang kurang bersih (Radji, 2009).

D. Ekstraksi Ekstraksi adalah teknik memisahkan suatu senyawa berdasarkan distribusi zat dalam pelarut. Umumnya zat terlarut yang diekstrak bersifat tidak larut atau sedikit larut dalam pelarut tetapi mudah larut dengan pelarut lain. Metode ekstraksi yang tepat ditunjukkan dengan tekstur kandungan air bahan-bahan yang akan diekstrak dan senyawa-senyawa yang akan diisolasi (Dirjen POM, 1996).


12

Jenis-jenis metode ekstraksi yang dapat dilakukan diantaranya adalah ekstraksi menggunakan pelarut, yakni: 1. Cara dingin a. Maserasi adalah proses penyarian simplisia menggunakan pelarut dan dilakukan beberapa kali penggojogan atau pengadukan pada suhu kamar (ruang). Secara teknologi maserasi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian konsentrasi pada keseimbangan. Maserasi kinetik adalah proses maserasi yang pengadukannya dilakukan secara kontinyu

(terus-menerus).

Remaserasi

merupakan

pengulangan

penambahan pelarut. Pengulangan penambahan pelarut dilakuakan setelah penyaringan maserat pertama dan seterusnya. b. Perkolasi adalah metode ekstraksi yang menggunakan pelarut selalu baru sampai sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada temperature ruang. Proses ekstraksi terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi bahan dan tahap perkolasi sebenarnya (penetesan / penampungan ekstrak). Tahapan ini dilakukan terus-menerus sampai diperoleh perkolat (ekstrak) yang jumlahnya 1-5 kali bahan. 2. Cara panas a.

Refluks adalah ekstraksi yang menggunakan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relative konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan


13

pengulangan proses pada residu 3-5 kali sehingga proses refluks ini termasuk proses ekstraksi sempurna. b.

Sokhlet merupakan metode ekstraksi yang menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kontinyu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.

c.

Digesti adalah maserasi kinetik dengan pengadukan berkala pada suhu yang lebih tinggi dari suhu ruang (kamar), yaitu secara umum dilakukan pada 40-500C.

d.

Infus merupakan ekstraksi dengan menggunakan air sebagai pelarut pada suhu penangas air mendidih, suhu terukur 96- 980C selama waktu tertentu (15-20 menit).

e.

Dekok adalah metode infusa yang memerlukan waktu yang lebih lama (lebih dari 30 menit) dan titik didihnya sampai titik didih air (1000C).

f.

Destilasi uap adalah ekstraksi senyawa kandungan yang menguap (minyak atsiri) dari bahan (simplisia atau bahan segar) dengan uap berdasarkan peristiwa tekanan parsial senyawa kandungan akan menguap dengan fase uap air dari ketel secara kontinyu sampai sempurna dan diakhiri dengan kondensasi fase uap campuran (senyawa kandungan menguap ikut terdestilasi) menjadi destilat air bersama senyawa kandungan yang memisah sempurna atau memisah sebagian (Sampurno, 2000).


14

E. Alkaloid Alkaloid merupakan suatu golongan senyawa organik yang banyak ditemukan di alam. Alkaloid dapat ditemukan dalam berbagai bagian tumbuhan seperti biji, daun, ranting dan kulit batang. Semua alkaloid mengandung paling sedikit satu atom nitrogen yang biasanya bersifat basa dan dalam sebagian besar atom nitrogen ini merupakan bagian dari cincin heterosiklik (Lenny, 2006). Menurut Soegihardjo (2013), peran alkaloid dalam tumbuhan antara lain berperan dengan keberadaan asam organik tertentu, misalnya alkaloid opium berhubungan dengan adanya asam mekonat, alkaloid kinkona terkait dengan asam kuinat dan kinkotonat. Selain itu, alkaloid berperan dalam berperan dalam hubungannya dengan oksigen in statu nascendi (oksigen singlet) yang berbahaya bagi organisme hidup, hal ini dibuktikan dengan adanya sinar UV yang kuat pada tumbuhan akan meningkatkan biosintesis alkaloid. Selain itu, menurut Robinson (1991), alkaloid berfungsi sebagai senyawa antibakteri. Mekanisme alkaloid sebagai antibakteri adalah dengan mengganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri sehingga lapisan dinding selnya tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel. Identifikasi alkaloid selain dengan analisis kualitatif alkaloid dapat dilakukan dengan bantuan pereaksi. Misalnya pereaksi Mayer, Dragendroff, Wagner, dan Buchardt; reaksi warna, misalnya dengan pereaksi asam sulfat


15

pekat, asam nitrat pekat, dan fluoresensi. Kelarutan alkaloid dalam farmasi sangat penting karena perbedaan kelarutan antara alkaloid bebas dan garamnya, terutama berkaitan dengan isolasinya dari bahan tumbuhan. Alkaloid bebas umumnya sedikit larut dalam air, tetapi larut dalam pelarut organik, sedangkan kebalikannya pada garamnya kecuali garam sulfas kinina yang kelarutannya dalam air (1 : 1000), sedangkan kinina hidroklorida larut dalam air kurang dari satu bagian (Soegihardjo, 2013).

F. Fenolik Menurut Fessenden (1986), fenolik merupakan senyawa yang banyak ditemukan pada tumbuhan. Fenolik memiliki cincin aromatik dengan satu atau lebih gugus hidroksi (OH-) dan gugus-gugus penyerta lainnya. Senyawa ini diberi nama berdasarkan nama senyawa induknya, fenol. Fenol biasanya dikelompokkan

berdasarkan

jumlah

atom

karbon

pada

kerangka

penyusunnya. Menurut Robinson (1991), aktivitas fisiologis senyawa fenolik pada tumbuhan banyak dan beragam. Beberapa senyawa fenolik bersifat racun terhadap hewan pemangsa tumbuhan (herbivor) dan beberapa bersifat racun serangga. Senyawa fenolik lain mempunyai aktivitas antiinflamasi, karena senyawa ini menghambat sintesis prostaglandin. Menurut Dwidjoseputro (1994),

fenolik

memiliki

fungsi

sebagai

antibakteri.

Mekanisme


16

antibakterinya adalah dengan membentuk senyawa kompleks terhadap protein ekstraseluler yang mengganggu integritas membrane sel bakteri. OH

Gambar 1. Struktur fenol

G. Terpenoid Terpenoid adalah golongan hidrokarbon yang banyak ditemukan dalam tumbuhan terutama pada getah dan vakuola selnya. Semua senyawa golongan terpen atau terpenoid dan turunannya termasuk hasil metabolit sekunder. Terpen atau terpenoid mempunyai aktivitas antibakteri, antivirus dan antiprotozoa (Salni, Hanifa, dan Ratna, 2011). Mekanisme antibakteri yang dimiliki oleh terpenoid adalah bereaksi dengan porin (protein transmembran) yang terdapat pada membran luar dinding sel bakteri sehingga membentuk ikatan polimer yang kuat sehingga porin menjadi rusak. Porin adalah jalan keluar masuknya substansi sehingga rusaknya porin mengurangi permeabilitas dinding sel bakteri yang membuat sel bakteri kekurangan nutrisi. Oleh karena itu, pertumbuhan bakteri menjadi terhambat atau mati (Salni, Hanifa, dan Ratna, 2011).


17

H. Flavonoid Flavonoid adalah suatu golongan senyawa fenol terbesar yang ditemukan di alam. Flavonoid memiliki warna merah, ungu, biru, dan sebagai zat kuning yang terkandung dalam tumbuhan. Senyawa ini memiliki struktur dasar karbon yang terdiri dari 15 atom karbon, dimana dua cincin benzen (C6) terikat pada rantai propana (C3) sehingga terbentuk susunan C6-C3-C6 (Lenny, 2006). Flavonoid memiliki beberapa gugus hidroksil, gula dan flavonoid adalah senyawa polar sehingga flavonoid cukup larut dalam pelarut polar seperti etanol, metanol, butanol, aseton, dimetilsulfoksida (DMSO), dimetilformamida (DMF), air dan lain-lain. Senyawa ini juga memiliki aktivitas antibakteri (Subramani, 2002; Rosidah dan Afizia, 2012). Mekanisme antibakteri dari flavonoid adalah membentuk senyawa kompleks dengan protein ekstraseluler dan larut sehingga dapat merusak membran sel bakteri dan senyawa intraseluler pun ikut keluar (Nuria, Arvin, Sumantri, 2009). Selain itu, flavonoid dapat merusak permeabilitas dinding sel bakteri (Sabir, 2008).

I. Metode Pengujian Aktivitas Antibakteri Metode pengujian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan suatu larutan uji dalam menghambat atau membunuh bakteri. Metode pengujian antimikroba dapat dibedakan menjadi dua yaitu:


18

1. Metode difusi Metode difusi merupakan metode yang digunakan untuk mengukur potensi antibakteri berdasarkan pengamatan luas zona jernih yang terbentuk di sekitar tempat penginokulasian obat/ekstrak karena terdifusinya obat/ekstrak (Jawetz, Melnick, Brooks, dan Adelberg, 2005). Terdapat beberapa cara metode difusi, salah satunya ialah metode sumuran Kirby Bauer. Metode ini merupakan metode untuk menguji senyawa kimia yang terkandung dalam tanaman yang berpotensi sebagai antimikroba berdasarkan pada ukuran zona inhibisi pertumbuhan kultur bakteri di sekitar disk yang diresapi dengan obat antimikroba. Metode ini dilakukan dengan membuat lubang pada agar padat yang telah diinokulasi dengan bakteri (Mpila, Fatimawai, dan Weny, 2012). Jumlah dan letak lubang sumuran disesuaikan dengan tujuan penelitian, kemudian lubang sumuran diinjeksikan dengan ekstrak yang akan diuji. Setelah dilakukan inkubasi, pertumbuhan bakteri diamati untuk melihat ada tidaknya daerah hambatan di sekeliling lubang (Kusmayanti dan Agustini, 2007). 2. Metode dilusi Prinsip metode dilusi adalah antibiotik diencerkan sehingga diperoleh beberapa macam kadar. Pada dilusi cair, setiap kadar sampel obat ditambahkan pada suspensi bakteri pada media kemudian diukur dengan spektrofotometri

UV-VIS

(UVmini-1240

UV-Vis

Spectrophotometer

Shimadzu) pada λ 480 nm untuk mengukur kekeruhan dari media yang telah


19

ditambahkan suspensi bakteri dan ekstrak. Pada dilusi padat setiap kadar obat dicampur dengan media agar kemudian ditanami bakteri. Pengamatannya dengan melihat ada tidaknya pertumbuhan bakteri atau tingkat kesuburan bakteri. Metode dilusi ini dapat digunakan untuk menentukan KHM dan KBM (Jawetz, dkk., 2005).

J. Landasan Teori Penyakit infeksi merupakan salah satu penyakit yang sering diderita oleh masyarakat. Penyebab timbulnya penyakit infeksi adalah bakteri, virus dan jamur. Bakteri yang menimbulkan infeksi antara lain Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Oleh sebab itu, perlu dilakukan eksplorasi bahan alam yang memiliki potensi antibakteri dengan efek samping lebih kecil karena bahan alam mudah tersedia secara terus-menerus. Daun petai mengandung alkaloid, terpenoid, fenolik, dan flavonoid. Biji petai mengandung alkaloid, terpenoid, flavonoid, fenolik. Kulit batang pohon petai mengandung senyawa fenolik dan alkaloid (Kamisah, dkk, 2013). Sedangkan menurut Kurniawati (2014) menggunakan kulit petai yang diambil dari Kabupaten Bogor diekstraksi dengan etanol 70% menggunakan metode maserasi ultrasonifikasi. Hasil yang diperoleh Kurniawati (2014) menyatakan bahwa kulit petai yang berasal dari Kabupaten Bogor mengandung golongan senyawa kimia seperti alkaloid, terpenoid, saponin, dan tanin serta ekstrak etanol kulit petai tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus


20

aureus dan Escherichia coli. Oleh sebab itu, peneliti melakukan eksplorasi bahan alam menggunakan tanaman yang sama yaitu petai yang berasal dari Kabupaten Sleman, Yogyakarta dengan bagian kulit batang pohon petai. Menurut Nitisapto dan Siradz (cit., Mahatriny, Payani, Oka dan Astuti, 2014), faktor lingkungan tanaman yang berbeda dapat mempengaruhi hasil metabolit sekunder tanaman. Faktor-faktor lingkungan yang dapat mempengaruhi adalah iklim, cahaya matahari, suhu, lingkungan atmosfer (CO2, O2, dan kelembaban), lingkungan perakaran (sifat kimia dan fisika tanah) dan ketersediaan air di dalam tanah. Untuk mendapatkan senyawa kimia yang terkandung dalam kulit batang pohon petai maka dapat dilakukan dengan metode maserasi menggunakan penyari yang sesuai sehingga mempermudah menyari senyawa kimia tersebut berdasarkan kelarutannya. Salah satu pelarut yang digunakan sebagai penyari senyawa kimia yang terkandung dalam kulit batang pohon petai adalah etanol. Menurut Agnes, dkk (2013), etanol dapat digunakan sebagai penyari karena dapat menarik senyawa kimia yang bersifat semi polar sampai polar sehingga kandungan kimia yang diharapkan dapat tersari dengan optimal sesuai dengan kepolarannya. Pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang pohon petai dilakukan dengan menggunakan metode difusi sumuran. Hasil dari metode difusi sumuran dapat ditunjukkan dengan diameter zona hambat (zona jernih). Untuk mengukur KHM dan KBM menggunakan metode dilusi cair yang


21

hasilnya ditunjukkan dengan kadar terendah dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang mampu menghambat dan membunuh pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Penelitian terkait adanya aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli diharapkan

dapat

memberikan

informasi

kepada

masyarakat

dan

perkembangan ilmu pengetahuan mengenai manfaat kulit batang pohon petai sebagai salah satu terapi alternatif penyakit infeksi yang disebabkan oleh Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.

K. Hipotesis Kandungan senyawa kimia yang terdapat dalam kulit batang pohon petai yang memiliki aktivitas antibakteri adalah senyawa alkaloid, fenolik, saponin, tanin, flavonoid. Ekstrak etanol kulit batang pohon petai memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli, memiliki kadar hambat minimum (KHM) dan kadar bunuh minimal (KBM).


BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni, dengan rancangan acak lengkap pola satu arah. Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia

dan

Laboratorium

Mikrobiologi

Fakultas

Farmasi

Universitas Sanata Dharma, Laboratorium Mikrobiologi Balai Kesehatan Yogyakarta.

B. Variabel dan Definisi Operasional 1. Variable Penelitian a. Variabel bebas

: konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai.

b. Variabel tergantung

: diameter zona hambat.

c. Variabel pengacau terkendali

: asal tanaman, cara ekstraksi, waktu lamanya inkubasi, suhu inkubasi, jenis mikroba uji, volume larutan uji yang diinokulasikan, umur tanaman.

2. Definisi Operasional a. Aktivitas antibakteri adalah kemampuan bahan uji yang mampu menghambat atau membunuh pertumbuhan mikroba uji Staphylococcus aureus dan Escherichia coli yang dapat dilihat dari zona jernih yang 22


23

menggambarkan zona hambat pertumbuhan bakteri, dibandingkan dengan kontrol negatif (DMSO 5%). b. Kulit batang pohon petai adalah kulit batang pohon petai yang berwarna cokelat dari pohon yang berumur 3-5 tahun berasal dari Kabupaten Sleman, Yogyakarta. c. Zona hambat adalah zona jernih di sekitar sumuran pada media pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia coli, dilihat dari kejernihan media yang dibandingkan dengan kontrol negatif (DMSO). d. Kadar Hambat Minimum (KHM) adalah kadar terendah dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. e. Kadar Bunuh Minimal (KBM) adalah kadar terendah dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang dapat membunuh pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.

C. Bahan dan Alat Penelitian 1.

Bahan Bahan-bahan yang digunakan adalah serbuk kulit batang pohon petai diperoleh dari CV. Merapi Farma Herbal, kultur murni bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dari Balai Kesehatan Yogyakarta, media Mueller Hinton Agar (MHA) dan Mueller Hinton Broth (MHB) dari Merck, Etanol


24

70% (Mediss), Amoksisilin (BERNOFARM), DMSO 5% (Merck), larutan Mac Farland 0,5 (1,5.108 CFU), aquadest steril. 2.

Alat Alat-alat yang digunakan adalah spektrofotometer UV-Vis (UVmini1240 UV-Vis Spectrophotometer Shimadzu), Microbiological Safety Cabinet, moisture balance (HG53 Halogen Moisture Analyzer), Platform Shaker (Innova 2100 New Brunswick Scientific), autoclave, rotary vacuum evaporator (Buchi Labortechnik AG CH-9230), timbangan digital, waterbath (Memmert), mikropipet (Socorex), Bunsen, jarum ose, flakon, kertas saring, kuvet, alat-alat gelas (PYREX dari Laboratorium Mikrobiologi dan Farmakognosi Fitokimia Fakultas Farmasi Sanata Dharma), pipet tetes, cawan petri, batang pengaduk, inkubator (Heraeus), sendok, pelubang sumuran diameter 6 mm.

D. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi kulit batang pohon petai Determinasi dilakukan di CV. Merapi Farma Herbal, Yogyakarta. Kulit batang pohon petai dideterminasi secara makroskopis dengan mencocokkan ciri - ciri yang ada pada tanaman.


25

2. Pengumpulan bahan kulit batang pohon petai Sampel yang digunakan adalah kulit batang pohon petai yang diambil dari Kabupaten Sleman. Kulit batang pohon petai yang diambil berwarna cokelat. 3. Pengeringan dan pembuatan serbuk bahan Kulit batang pohon petai yang telah diperoleh, dicuci bersih dari kotoran dengan menggunakan air mengalir. Kulit batang pohon petai dipotong menjadi beberapa bagian lalu dikeringkan. Pengeringan dihentikan ketika kulit batang pohon petai mudah remuk saat diremas lalu dilanjutkan dengan proses penyerbukan menggunakan mesin penggiling kopi hingga halus. Setelah serbuk didapatkan lalu serbuk diayak menggunakan ayakan tepung. Serbuk yang telah halus dimasukkan dalam toples yang tertutup rapat dan disimpan dalam lemari penyimpanan. 4. Penetapan susut pengeringan pada serbuk kering kulit batang pohon petai Serbuk kering kulit batang pohon petai yang sudah diayak ditimbang sebanyak lebih kurang 5 gram ke dalam alat moisture balance lalu diratakan. Bobot serbuk kering kulit batang pohon petai ditimbang sebelum pemanasan dan sesudah pemanasan. Serbuk kering kulit batang pohon petai dipanaskan pada suhu 1050C selama 15 menit. Bobot serbuk setelah pemanasan diperoleh lalu dihitung selisih antara bobot sebelum pemanasan dan bobot setelah


26

pemanasan yang merupakan hasil susut pengeringan serbuk kulit batang pohon petai. Hasil pengukuran dinyatakan dalam persen. 5. Pembuatan ekstak etanol kulit batang pohon petai Ekstrak etanol kulit batang pohon petai dibuat dengan metode maserasi. Maserasi dilakukan dua kali dengan perbandingan 1 : 7,5 bagian pada maserasi pertama dan maserasi kedua dengan perbandingan 1 : 2,5 bagian. Maserasi pertama dilakukan dengan menimbang 50 g serbuk kulit batang pohon petai kemudian direndam dalam 375 ml pelarut etanol 70% selama 2 x 24 jam menggunakan shaker. Ekstrak yang didapat disaring menggunakan corong Buchner, kertas saring dan pompa vakum. Sisa serbuk hasil maserasi pertama yang masih ada kemudian diremaserasi menggunakan pelarut etanol sebanyak 125 mL dan diperoleh maserat II. Maserat I dan maserat II digabung kemudian dipekatkan menggunakan rotary vacuum evaporator dengan suhu 70 0C sampai terbentuk cairan kental. Penguapan dilanjutkan dengan menggunakan penangas air selama dengan suhu antara 5060oC sampai diperoleh ekstrak kental dengan bobot tetap.


27

6. Identifikasi kandungan senyawa kimia kulit batang pohon petai dengan uji tabung a. Pembuatan larutan uji fitokimia Pembuatan larutan uji untuk uji fitokimia dilakukan dengan cara melarutkan sebanyak 500 mg ekstrak etanol 70% kulit batang pohon petai dilarutkan dalam 50 mL etanol 70%. b. Skrinning Fitokimia 1) Uji pendahuluan Dua gram serbuk kulit batang pohon petai ditambahkan dengan 20 mL aquadest lalu dipanaskan di atas waterbath selama lebih kurang 15 menit, lalu disaring. Hasil positif yang diperoleh apabila larutan menjadi berwarna merah hingga kuning dan saat penambahan KOH LP, warna larutan menjadi lebih intensif menunjukkan adanya senyawa yang mengandung kromofor dengan gugus hidrofilik. 2) Uji Saponin Sebanyak 100 mg serbuk kulit batang pohon petai ditambahkan 10 mL aquadest ke dalam tabung reaksi, ditutup dan dikocok selama 30 detik. Tabung dibiarkan dalam posisi tegak selama 30 menit. Apabila terbentuk buih dari permukaan cairan dan setelah lebih kurang 30 menit ditetesi lebih kurang 1 tetes HCl 2 N, busa tidak hilang maka menunjukkan adanya saponin.


28

3) Uji Flavonoid Sebanyak 3 mL larutan uji ditetesi dengan NaOH LP lebih kurang 2 tetes, terjadi pembentukan intensitas warna kuning. Penambahan HCL membuat intensitas warna kuning berubah. Perubahan ini mengindikasikan adanya flavonoid (Jones and Kinghorn, 2006). 4) Uji Alkaloid Sebanyak 2 mL larutan uji diuapkan di atas porselin dan penangas air lebih kurang 5 menit, lalu sisanya dilarutkan dengan 5 mL HCl 2 N. Kemudian, larutan yang diperoleh dibagi dalam 3 tabung reaksi yaitu : blanko (larutan uji yang telah diuapkan dan ditambah HCL 2N), blanko ditambah 3 tetes pereaksi Dragendorff, dan blanko ditambah 3 tetes peraksi Mayer. Apabila terdapat endapan jingga setelah ditambah pereaksi Dragendorff dan endapan kuning setelah ditambahkan pereaksi Mayer menunjukkan adanya alkaloid (Jones and Kinghorn, 2006). 5) Uji Tanin Sebanyak 1 mL larutan uji dilarutkan dengan larutan FeCl3 10% lebih kurang 3 tetes. Adanya tanin ditunjukkan dengan terbentuknya warna biru tua atau hitam kehijauan (Jones and Kinghorn, 2006). 6) Uji Fenolik Sebanyak 3 mL larutan uji ditambahkan beberapa tetes (lebih kurang 6 tetes) larutan FeCl3 1%. Hasil positif berwarna hijau, merah, ungu atau hitam (Jones and Kinghorn, 2006).


29

7) Uji Terpenoid Sebanyak 2,5 mL larutan uji dicampur dengan 1 mL kloroform dan ditambah 1,5 mL H2SO4 pekat secara hati-hati (lewat dinding). Hasil positif ditunjukkan dengan larutan menjadi warna coklat kemerahan pada permukaan dalam larutan (Edeoga, Okwu, dan Mbaebre, 2005).

7. Uji identifikasi bakteri a. Staphylococcus aureus Bakteri ditanam di media geolitik, diinkubasi selama 24 jam pada suhu 370C. Bakteri diisolasi dari media geolitik ke media Enrich, diinkubasi selama 2 x 24 jam pada suhu 37 0C. Jika terdapat endapan hitam dengan kabut putih diduga bakteri Staphylococcus aureus. Kemudian, diambil 1-2 ose bakteri, diinokulasi ke dalam media gula (glukosa, laktosa, manitol, maltosa, sakarosa), media NA miring, media Simons Citrate (SC), media Sulfure Indole Motil (SIM) dan diinkubasi selama 24 jam. Pengecatan Gram dilakukan setelah inkubasi selama 24 jam pada suhu 370C. b. Escherichia coli Bakteri ditanam ke media penyubur Brilliant Green Lactose Blue (BGLD) kemudian diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 440C. Jika terdapat gelembung udara dari tabung Durham yang terdapat di dalam tabung reaksi diduga bakteri Escherichia coli. Setelah itu, bakteri diisolasi lalu ditanam ke media TBX (Tryptone Bile X-Glucoronide) dan diinkubasi pada suhu 370C


30

selama 24 jam. Pada media isolasi setelah 24 jam diketahui tersangka Escherichia coli dengan timbulnya warna hijau. Kemudian, bakteri diambil 1-2 ose, diinokulasi ke dalam media gula (laktosa, glukosa, sakarosa, manitol, maltosa), NA, SC (Simon Citrate), SIM (Sulfur Indol Motil) dan diinkubasi selama 24 jam. Setelah 24 jam diinkubasi, dilakukan pengecatan Gram.

8. Uji potensi ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap S. aureus dan E. coli. a. Pembuatan variasi konsentrasi larutan uji Sebanyak 2,5 gram ekstrak kental kulit batang pohon petai ditimbang kemudian dilarutkan dengan 5 mL DMSO 5% sehingga diperoleh konsentrasi 50%. Konsentrasi 50% diencerkan sehingga diperoleh konsentrasi 25%; 12,5%; 6,25%; 3,125%. Kontrol negatif yang digunakan dalam penelitian ini adalah DMSO 5% dan kontrol positif yang digunakan adalah amoksisilin 125 mg/ 5 mL untuk S. aureus dan E. coli. b. Pembuatan suspensi bakteri uji Sebanyak 1-3 ose diambil dari stok bakteri S. aureus dan E. coli, kemudian diinokulasikan ke dalam tabung reaksi yang berisi MHB (Mueller Hinton Broth) dan divortex agar tercampur rata, lalu dilihat kekeruhannya. Kekeruhan suspensi bakteri disetarakan dengan larutan Mac Farland 0,5 (1,5 x 108 CFU/mL).


31

c. Uji aktivitas antibakteri dengan metode difusi sumuran Sebanyak 15 mL MHA steril dituang ke dalam cawan petri steril dan dibiarkan memadat. Media MHA yang telah memadat pada cawan petri kemudian dapat di streak menggunakan cotton bud steril yang sebelumnya dicelup dahulu ke dalam suspensi bakteri uji secara merata. Metode ini menggunakan metode Kirby Bauer (Mpila, dkk, 2012). Sumuran dibuat dengan menggunakan pelubang sumuran no. 6 sebanyak 7 lubang sumuran pada media yang telah padat dan ditumbuhi bakteri uji. Ekstrak etanol kulit batang pohon petai dengan variasi konsentrasi (50%; 25%; 12,5%; 6,25%; 3,125%), kontrol negatif (DMSO 5%), dan kontrol positif (Amoksisilin 125 mg/5 mL) dimasukkan pada lubang sumuran sebanyak 50 µL. Media uji yang telah berisi ekstrak, control positif dan kontrol negatif diinkubasi selama 24 jam pada suhu 370C lalu diamati dan diukur diameter zona hambat yang dihasilkan. Zona hambat yang terbentuk diukur dengan penggaris. Dalam uji aktivitas antibakteri ini dilakukan replikasi sebanyak 3 kali replikasi. d. Penentuan KHM dan KBM dengan metode dilusi cair Pada uji aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi sumuran, didapatkan konsentrasi terkecil dari ekstrak kulit batang pohon petai yang mempunyai aktivitas antibakteri. Dari konsentrasi terkecil tersebut, dibuat variasi konsentrasi yang rentangnya lebih sempit sebanyak 10 konsentrasi (0,785%; 1,563%; 3,125%; 6,25%; 12,5%; 15,625%; 18,750%; 21,875%; 25%; 50%) untuk mengetahui KHM dan KBM dari masing-masing ekstrak. Pengujian


32

dilakukan dengan membuat suspensi bakteri yang kekeruhannya disetarakan dengan larutan Mac Farland 0,5 (1,5 x 108 CFU). Dari suspensi tersebut, diambil 200 µL, ditambah dengan larutan uji yang berisi ekstrak etanol kulit batang pohon petai dengan konsentrasi tertentu dan dicampur rata dengan 5 mL MHB. Setelah itu diukur nilai absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis (λ 480 nm) sebelum inkubasi dan setelah inkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C. Hasil selisih dari absorbansi tersebut digunakan sebagai nilai Optical Density (OD). Kemudian konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang mempunyai nilai ∆ OD = 0 akan ditegaskan ke dalam media MHA padat, diinkubasi selama 24 jam pada suhu 370C, lalu diamati pertumbuhan bakteri. Apabila pada media MHA tumbuh koloni bakteri maka konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai tersebut menghambat pertumbuhan bakteri (KHM) dan jika media MHA tersebut tidak terdapat pertumbuhan bakteri maka konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai membunuh pertumbuhan bakteri (KBM). Penentuan KHM dan KBM dengan metode dilusi cair dilakukan 3 kali replikasi. E. Analisis Hasil Data yang didapat berupa diameter zona hambat, dianalisis secara statistik menggunakan uji Shapiro Wilk untuk mengetahui apakah terdistribusi normal atau tidak kemudian diikuti dengan uji Levene bertujuan untuk melihat homogenitas data. Apabila distribusi data tidak normal maka analisis dilanjutkan menggunakan uji Kruskal Wallis untuk melihat perbedaan bermakna antara


33

kelompok ekstrak etanol kulit batang pohon petai, kontrol negatif (DMSO 5%), dan kontrol positif (Amoksisilin 125 mg/ 5 mL). Selanjutnya, dilakukan analisis post hoc menggunakan Mann-Whitnney Test. Data yang didapat berupa diameter zona hambat, dianalisis secara statistik menggunakan uji Kruskal Wallis untuk mengetahui perbedaan bermakna antara kelompok ekstrak etanol kulit batang pohon petai, kontrol negatif (DMSO 5%), dan kontrol positif (Amoksisilin 125 mg/ 5 mL). Selanjutnya, dianalisis post hoc dengan Mann-Withney Wilcoxon Test. Nilai KHM dan KBM yang didapat dianalisis secara deskriptif. Nilai KHM dan KBM yang diperoleh dengan metode dilusi cair dan diukur kekeruhannya dengan melihat absorbansi menggunakan spektrofotometer UV-Vis sehingga didapatkan nilai optical density (OD). Nilai KHM dan KBM diperoleh jika nilai ∆ OD = 0 yakni absorbansi setelah inkubasi dikurangi absorbansi sebelum inkubasi. Kemudian ditegaskan pada media MHA di cawan petri untuk menunjukkan konsentrasi dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai mampu menghambat atau membunuh pertumbuhan koloni bakteri.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN Penelitian ini secara umum mempunyai tujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap S. aureus dan E. coli. Selain itu, penelitian ini juga bertujuan untuk mengetahui kandungan senyawa kimia yang terdapat dalam ekstrak etanol kulit batang pohon petai, mengetahui kadar hambat bakteri dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap S. aureus dan E. coli. A. Determinasi dan Pengumpulan Tanaman Determinasi tanaman bertujuan untuk menghindari kesalahan dalam penelitian dan memastikan bahwa tanaman yang digunakan adalah petai. Tanaman petai memiliki ciri-ciri sebagai berikut tinggi pohon 5-14 meter. Batang berkayu, bulat, bercabang, warna coklat kemerahan. Daun majemuk, anak daun dengan ujung runcing, pangkal membulat, panjang 4-20 mm, lebar 23 cm, warna hijau. Bunga majemuk, jumlah benang sari 10. Pangkal mahkota berwarna putih kekuningan, melekat pada benang sari. Kelopak bertajuk, bagian ujung berkelamin ganda. Tangkai sari panjang. Buah berbentuk polong, pipih, warna hijau. Biji berbentuk pipih, tebal, warna hijau. Akar tunggang, warna coklat (Adi, 2008).Kulit batang pohon petai diperoleh dari Kabupaten Sleman, Yogyakarta dalam bentuk kulit batang pohon petai yang segar. Kulit batang pohon petai yang dipilih adalah kulit batang pohon yang berwarna coklat dan 34


35

memiliki permukaan yang keras. Kebenaran tanaman yang digunakan dibuktikan dengan surat keterangan dari CV Merapi Farma Herbal yang terdapat dalam lampiran 1. Berdasarkan surat keterangan tersebut, didapatkan bahwa tanaman yang dipakai dalam penelitian ini adalah benar petai (Parkia speciosa Hassk.).

B. Pembuatan Serbuk Simplisia Kulit Batang Pohon Petai Kulit batang pohon petai yang telah diperoleh, dicuci bersih dari kotoran dengan menggunakan air mengalir untuk menghilangkan pengotor yang mungkin masih ada. Kulit batang pohon petai dipotong menjadi beberapa bagian lalu dikeringkan. Pengeringan dihentikan ketika kulit batang pohon petai mudah remuk saat diremas lalu dilanjutkan dengan proses penyerbukan menggunakan mesin penggiling kopi. Pengeringan dilakukan untuk menurunkan kandungan air yang terdapat dalam kulit batang pohon petai agar tidak mudah ditumbuhi kapang dan bakteri. Selain itu, apabila kandungan air dalam kulit batang pohon petai masih tinggi, dapat mendorong enzim mengubah kandungan kimia menjadi produk lain yang tidak memiliki efek farmakologi seperti senyawa aslinya (Pramono, 2005; Ma’mun, 2006). Beberapa enzim perusak kandungan kimia antara lain : hidrolase, oksidase dan polimerase (Ma’mun, 2006). Setelah serbuk didapatkan lalu serbuk diayak menggunakan ayakan tepung hingga halus. Penyerbukan ini berfungsi untuk meningkatkan luas permukaan kontak dengan pelarut, sehingga saat proses ekstraksi dapat diperoleh rendemen yang banyak.


36

Setelah itu serbuk dimasukkan dalam toples yang tertutup rapat dan disimpan dalam ruangan penyimpanan. C. Penetapan susut pengeringan pada serbuk kulit batang pohon petai Dalam penelitian, penetapan kadar air tidak dilakukan karena belum diketahui apakah serbuk kulit batang pohon petai hanya mengandung air dalam bentuk serapan atau tidak. Oleh sebab itu, dilakukan susut pengeringan. Alasan dilakukan susut pengeringan dalam penelitian ini adalah untuk mengetahui kandungan air yang terdapat dalam serbuk kulit batang pohon petai dan dapat digunakan untuk menetapkan jumlah semua jenis bahan yang mudah menguap dan hilang pada kondisi tertentu (proses pengeringan) (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995). Susut pengeringan umumnya dinyatakan sebagai nilai persen terhadap bobot awal. Penetapan susut pengeringan dalam penelitian ini menggunakan metode Gravimetri. Gravimetri adalah suatu metode analisis kuantitatif berdasarkan berat konstannya (berat tetap). Hal ini dibuktikan dengan nilai persen terhadap bobot awal serbuk sebelum dipanaskan. Serbuk kulit batang pohon petai yang telah diayak dipanaskan menggunakan alat moisture balance pada suhu 1050C selama 15 menit dengan asumsi air sudah menguap semua. Tujuan digunakan suhu 1050C adalah agar air yang terdapat di dalam serbuk menguap (diatas titik didih air). Setelah serbuk dipanaskan, dilakukan perhitungan terhadap kadar air


37

yang terdapat dalam serbuk yang diteliti. Persyaratan yang ditetapkan oleh Menteri Kesehatan Republik Indonesia 2009 untuk susut pengeringan adalah nilai susut pengeringan kurang dari 10%. Dalam penelitian dilakukan tiga kali replikasi dan diperoleh rata-rata susut pengeringan dalam serbuk kulit batang pohon petai sebesar 6,75 %. Hal ini menunjukkan bahwa serbuk kulit batang pohon petai yang digunakan dalam penelitian ini telah memenuhi persyaratan yang telah ditetapkan yaitu tidak lebih dari 10 %.

D. Pembuatan Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai Ekstrak etanol kulit batang pohon petai dibuat menggunakan metode maserasi. Serbuk kulit batang pohon petai yang telah ditimbang kemudian diekstraksi menggunakan pelarut etanol 70 % dengan tujuan untuk menarik senyawa kimia yang terdapat dalam kulit batang pohon petai. Menurut Padmasari, Astuti, dan Warditiani (2013), etanol 70% digunakan sebagai pelarut karena etanol merupakan pelarut universal yang dapat menarik senyawa kimia dan mempunyai indeks polaritas sebesar 5,2. Alasan lain digunakan etanol karena etanol tidak beracun, tidak ditumbuhi oleh kapang dan jamur, dan absorbsinya baik (Hargono, 1986). Alasan mengunakan metode maserasi adalah mudah dilakukan, caranya sederhana, dan peralatannya sederhana. Metode maserasi juga dapat menghindari perubahan kimia pada senyawa-senyawa tertentu akibat pemanasan (Pratiwi, 2008). Ekstrak etanol kulit batang pohon


38

petai tidak ditumbuhi oleh kapang dan jamur dibuktikan dengan ekstrak yang didapat dalam penelitian ini (Gambar 2). Proses ekstraksi dibantu dengan penggojogan menggunakan shaker. Penggojogan ini bertujuan agar seluruh serbuk dapat kontak dengan pelarut sehingga senyawa yang berpotensi sebagai antibakteri dapat tersari. Penggojogan juga mempercepat waktu ektraksi dibandingkan jika serbuk hanya direndam. Ekstraksi dengan metode ini dapat disebut sebagai ekstraksi mekanik. Serbuk kulit batang pohon petai yang telah ditimbang terlebih dahulu dibasahi dengan pelarut. Apabila sudah terbasahi seluruhnya, ditambahkan pelarut sampai ketinggian pelarut ± 2 cm dari permukaan serbuk pada Erlenmeyer. Penggojogan menggunakan shaker dilakukan selama 2 x 24 jam kemudian disaring menggunakan kertas saring dengan bantuan pompa vacuum. Pompa vacuum berfungsi untuk membantu proses ekstraksi. Hasil saringan (filtrat) kemudian dimasukkan ke dalam labu alas bulat untuk dipekatkan menggunakan vacuum rotary evaporator. Suhu yang digunakan pada proses evaporasi ini adalah 70 0C sampai terbentuk cairan kental. Prinsip kerja rotary vacum evaporator adalah destilasi, yaitu memisahkan cairan penyari dan zat tersari dengan cara penurunan tekanan pada labu alas bulat dan pemutaran labu alas bulat sehingga pelarut dapat menguap lebih cepat di bawah titik didih. Apabila setelah proses pemekatan masih tersisa filtrat yang cukup banyak, maka pemekatan bisa dibantu dengan pemanasan di atas waterbath dengan suhu antara 50-60 0C. Sebelum dipanaskan di atas waterbath,


39

filtrat ditampung dalam cawan porselin kemudian ditimbang dan setiap 1 jam ditimbang hingga diperoleh bobot tetap. Menurut Depkes RI (1995), bobot tetap adalah selisih penimbangan dari dua kali penimbangan berturut-turut setelah pemanasan di atas waterbath selama satu jam dan tidak lebih dari 0,5 mg tiap gram sisa yang ditimbang. Penimbangan dilakukan setelah 1 jam ekstrak diuapkan. Bobot tetap ekstrak ditunjukkan pada tabel I. Tabel I. Bobot Tetap Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai Selisih Keterangan Bobot (g) bobot (mg) 12,24 Penimbangan awal 12,24 0 0 1 jam pemanasan 12,24 0 0 2 jam pemanasan

Ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang telah diperoleh dilanjutkan dengan menentukan rendemen. Penentuan rendemen memiliki tujuan untuk mengukur efektivitas jenis pelarut yang digunakan untuk mengekstrak kandungan kimia yang terkandung dalam kulit batang pohon petai. Semakin besar nilai rendemen yang diperoleh semakin efektif pelarut yang digunakan ketika dilakukan ekstraksi. Hasil rendemen yang didapat dalam penelitian ini sebesar 24,52%.

Gambar 2. Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai


40

E. Skrining Fitokimia Tujuan dilakukan skrining fitokimia dalam penelitian adalah untuk mengetahui kandungan bioaktif atau kandungan senyawa kimia yang berfungsi sebagai antibakteri. Pada penelitian, skrining perlu dilakukan untuk mengetahui senyawa yang berpotensi sebagai antibakteri, seperti : alkaloid, polifenol, flavonoid, tanin, dan lain-lain. Analisis kualitatif yang digunakan dalam penelitian adalah uji tabung. Tujuan dilakukan uji tabung adalah untuk mengetahui kandungan kimia yang terdapat dalam kulit batang pohon petai. Uji tabung yang dilakukan dalam penelitian meliputi uji pendahuluan, uji saponin, uji flavonoid, uji alkaloid, uji tanin, uji fenolik dan uji terpenoid terdapat pada tabel II. Hasil yang diperoleh Kurniawati (2014) menyatakan bahwa kulit petai mengandung golongan senyawa kimia seperti alkaloid, terpenoid, saponin, dan tanin yang berpotensi sebagai antibakteri.

Tabel II. Hasil pengamatan uji tabung terhadap larutan uji ekstrak kulit batang pohon petai No

Pengujian

Pengamatan

Hasil

1 Uji pendahuluan Warna lebih pekat + 2 Uji saponin Tidak terbentuk buih/busa 3 Uji flavonoid Warna kuning + 4 Uji alkaloid Adanya endapan + 5 Uji tanin Tidak terdapat warna hijau 6 Uji fenolik Terdapat warna ungu kehitaman + 7 Uji terpenoid Terdapat warna merah + Keterangan : (+) = mengandung senyawa yang dimaksud ; (-) = tidak mengandung senyawa yang dimaksud.


41

1. Uji pendahuluan Uji pendahuluan merupakan uji tahap awal yang menggambarkan adanya kemungkinan senyawa spesifik seperti flavonoid, tanin, alkaloid, saponin, fenolik, terpenoid dan sebagainya (Arisandi, 1990 cit. Anwar, 2014). Tujuan dilakukan uji pendahuluan adalah untuk mengetahui kandungan kimia yang terkandung dalam ekstrak etanol kulit batang pohon petai. Pada uji pendahuluan (Gambar 3), serbuk kulit batang pohon petai yang telah dilarutkan dengan etanol 70% dipanaskan lalu ditambahkan dengan KOH LP sehingga menghasilkan warna kuning yang lebih intensif (kuning pekat). Hal ini menunjukkan bahwa kulit batang pohon petai mengandung kromofor seperti tanin, flavonoid, alkaloid dan lain-lain.

Sebelum ditambah KOH LP

Setelah ditambah KOH LP

Gambar 3. Uji Pendahuluan

2. Uji saponin Saponin merupakan metabolit sekunder yang mengandung gugus gula terutama glukosa, galaktosa, xylosa, rhamnosa atau metilpentosa yang


42

berikatan dengan suatu aglikon hidrofobik (sapogenin) berupa triterpenoid, steroid alkaloid. Saponin bersifat polar dan dapat larut dalam pelarut air. Saponin juga bersifat nonpolar karena memiliki gugus hidrofobik yaitu aglikon (Suparjo, 2008 cit. Marliana dan Chairul, 2011). Gugus hidrofil dan hidrofobik ini akan membentuk misel. Ketika misel terbentuk maka gugus hidrofil akan menghadap ke dalam dan gugus hidrofobik akan menghadap keluar dan fenomena ini tampak seperti busa. Sifat ini menyerupai surfaktan/sabun yang berfungsi dapat menurunkan tegangan permukaan antara udara dengan air yang berupa emulsi gas dalam air (Robinson, 1995). Hasil yang diperoleh pada uji saponin (Gambar 4) adalah tidak terbentuk buih. Dalam uji saponin, tidak terbentuk buih setelah serbuk dilarutkan dalam aquadest kemudian digojog selama 30 detik.

(a)

(b)

Gambar 4. Uji saponin (a) sebelum penggojogan; (b) setelah penggojogan


43

3. Uji flavonoid Dalam uji flavonoid menurut, penambahan natrium hidroksida akan melarutkan flavonoid yang merupakan senyawa polifenol yang memiliki sifat asam lemah (Kumalasari dan Sulistyani, 2011). Ekstrak yang mengandung flavonoid ketika ditambahkan dengan natrium hidroksida akan menghasilkan warna kuning (Syajid, 2008). Dalam uji ini menunjukkan hasil positif yang dibuktikan dengan terbentuknya warna kuning. Hasil positif ini menunjukkan bahwa kulit batang pohon petai mengandung flavonoid. Hasil positif penelitian ini ditunjukkan pada Gambar 5.

(a) (b) (c) Gambar 5. Uji Flavonoid (a) Larutan uji sebelum ditambahkan NaOH dan KCl ; (b) Setelah ditambahkan NaOH ; (c) Setelah ditambahkan KCl 4. Uji alkaloid Dalam uji alkaloid, hasil positif dibuktikan dengan terbentuknya endapan ketika larutan uji ditambahkan dengan pereaksi Mayer dan Dragendorff. Larutan uji dilarutkan dengan etanol sebelum dipanaskan. Larutan uji ditunjukkan pada Gambar 6.


44

Sebelum diuapkan Setelah diuapkan Gambar 6. Larutan uji pada uji alkaloid Menurut Harbone (1996) dalam uji alkaloid, penambahan HCl berfungsi untuk melarutkan ekstrak yang mengandung alkaloid karena alkaloid bersifat basa. Hasil positif alkaloid setelah ditambahkan pereaksi Mayer ditunjukkan dengan terbentuknya endapan putih. Endapan putih yang terbentuk merupakan kompleks kalium alkaloid. Dalam pembuatan pereaksi Mayer, larutan merkurium (II) klorida ditambah kalium iodide akan bereaksi membentuk endapan merah merkurium (II) iodida. Apabila penambahan kalium iodida terlalu banyak maka akan membentuk kalium tetraiodomerkurat (II). Reaksi yang terjadi ketika ditambahkan pereaksi Mayer ditunjukkan pada Gambar 7. Hasil yang didapatkan dalam uji alkaloid yang ditambahkan dengan pereaksi Mayer ditunjukkan pada Gambar 8. Gambar 8 menunjukkan adanya endapan setelah larutan uji ditambah dengan pereaksi Mayer ditunjukkan dengan anak panah.


45

Gambar 7. Reaksi uji alkaloid dengan penambahan pereaksi Mayer

Sebelum ditambah Mayer Setelah ditambah Mayer Gambar 8. Uji alkaloid dengan penambahan pereaksi Mayer Menurut McMurry (2004), alkaloid memiliki atom nitrogen yang memiliki pasangan elektron bebas sehingga dapat digunakan untuk membentuk ikatan kovalen koordinat dengan ion logam ketika ditambahkan dengan pereaksi Dragendorff. Menurut Miroslav (1971) pada uji alkaloid dengan pereaksi Dragendorff, nitrogen digunakan untuk membentuk ikatan kovalen koordinat dengan K+ yang merupakan ion logam. Reaksi pada uji alkaloid dengan penambahan Dragendorff ditunjukkan pada Gambar 9.


46

Gambar 9. Reaksi pada uji alkaloid dengan penambahan Dragendorff Hasil yang diperoleh setelah ditambahkan pereaksi Dragendorff ditunjukkan pada Gambar 10.

Sebelum ditambah Dragendorff Setelah ditambah Dragendorff Gambar 10. Uji alkaloid dengan penambahan pereaksi Dragendorff Hasil yang diperoleh dalam uji alkaloid adalah adanya endapan ketika ditambahkan pereaksi Mayer dan Dragendorff sehingga kulit batang pohon petai mengandung alkaloid. Hasil yang diperoleh dalam uji tanin ditunjukkan pada Gambar 8 dan Gambar 10.


47

5. Uji tanin Dalam uji ini penambahan larutan FeCl3 10% bertujuan untuk bereaksi dengan salah satu gugus hidroksi yang terdapat pada senyawa tanin. Tujuan digunakan pereaksi FeCl3 secara umum adalah untuk mengidentifikasi senyawa fenol termasuk tanin. Hasil positif dari uji tannin setelah penambahan larutan FeCl3 ditunjukkan dengan adanya warna hijau (Marlinda, Meiske, dan Audy, 2012).

Sebelum ditambah FeCl3 10% Setelah ditambah FeCl3 10% Gambar 11. Uji Tanin Hasil yang diperoleh dalam uji tanin adalah tidak menunjukkan warna hijau ketika ditetesi larutan FeCl3 10% sehingga kulit batang pohon petai tidak mengandung tanin. Hasil yang diperoleh dalam uji tanin ditunjukkan pada Gambar 11. 6. Uji fenolik Larutan uji kulit batang pohon petai direaksikan dengan FeCl3 1% sehingga menunjukkan hasil positif dengan munculnya warna ungu kehitaman. Senyawa fenolik memiliki ciri yang khas yaitu membentuk ikatan kompleks dengan besi (III) klorida berwarna biru atau biru ungu. Kompleks yang


48

terbentuk diduga senyawa besi (III) heksa fenolat sehingga hasil positif dari uji ini menunjukkan adanya gugus OH aromatik. Warna yang terbentuk ketika besi (III) klorida bereaksi dengan sampel yang diuji. Dalam uji ini, ion Fe3+ mengalami hibridisasi orbital d2sp3. Berdasarkan hasil hibridisasi tersebut, ion Fe3+ mempunyai 6 orbital kosong yang dapat diisi oleh gugus pendonor pasangan electron dimana gugus pendonor pasangan elektron pada senyawa fenolik berasal dari pasangan elektron bebas dari atom oksigen. Fenolik memiliki fungsi penting dalam transport elektron pada fotosintesis, memiliki aktivitas sitokinin, pemacu pertumbuhan, mampu menyerap sinar UV serta memiliki aktivitas antiinflamasi (Ardiansyah, 2007; Marliana dan Chairul, 2011). Hasil uji fenolik pada penelitian (Gambar 12) menunjukkan adanya warna ungu kehitaman setelah ditambahkan dengan larutan FeCl3 1% sehingga kulit batang pohon mengandung senyawa fenolik.

(a)

(b)

Gambar 12. Uji Fenolik, larutan uji (a) belum ditambahkan FeCl3 1%; dan (b) sudah ditambahkan FeCl3 1%.


49

7. Uji terpenoid Analisis senyawa dalam uji terpenoid ini berdasarkan pada kemampuan senyawa membentuk warna ketika bereaksi dengan H2SO4 pekat. Senyawa terpenoid larut dalam kloroform dan akan menghasilkan warna merah ketika ditambahkan dengan H2SO4 pekat. Hasil dalam uji ini (Gambar 13) menunjukkan adanya warna merah yang terdapat pada permukaan larutan uji sehingga kulit batang pohon petai mengandung terpenoid.

Larutan uji

ditambah kloroform ditambah H2SO4 Gambar 13. Uji Terpenoid

F. Identifikasi Bakteri Tujuan dilakukan identifikasi bakteri adalah untuk mengetahui apakah bakteri uji yang digunakan adalah S. aureus dan E. coli. Identifikasi bakteri uji dilakukan dengan uji gula (glukosa, laktosa, maltosa, sakarosa, manitol), NA, SC (Simon Citrate), SIM (Sulfur Indol Motil) dan pengecatan Gram. Tujuan dilakukan pengecatan Gram adalah untuk menentukan apakah bakteri uji termasuk E. coli (Gram negatif) atau S. aureus (Gram positif).


50

Menurut Kismiyati, Sri, Wahid dan Rahayu (2009), tujuan dilakukan uji gula-gula dalam penelitian adalah untuk mendeterminasi kemampuan bakteri dalam mendegradasi gula dan menghasilkan asam organik yang berasal dari tiap jenis gula, yaitu glukosa, laktosa, manitol, maltosa, dan sakarosa. Menurut Rostinawati (2008), hasil positif yang diperoleh pada uji gula-gula ditunjukkan dengan adanya perubahan warna media gula-gula menjadi kuning dari warna media sebelumnya. Hasil yang diperoleh pada uji gula-gula dalam penelitian adalah media gula-gula tersebut berubah warna menjadi warna kuning setelah diinkubasi selama 24 jam, baik pada bakteri S. aureus maupun E. coli. Menurut Rostinawati (2008), hasil positif yang diperoleh pada uji motil dalam media dapat dilihat dengan mengamati penyebaran pertumbuhan bakteri di sekitar tusukan. Hasil yang diperoleh pada uji motil dalam penelitian adalah adanya penyebaran bakteri di sekitar tusukan. Berdasarkan hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa koloni bakteri uji memiliki alat gerak yang menyebabkan penyebaran bakteri pada media merata. Oleh karena itu dapat disimpulkan bahwa bakteri tersebut bersifat fakultatif anaerob. Menurut Rostinawati (2008), hasil positif pada uji indol ditunjukkan dengan cincin merah yang terdapat pada permukaan media. Hasil yang diperoleh pada uji indol dalam penelitian adalah terdapat cincin merah pada permukaan media. Menurut Cappucino dan Sherman (cit. Rostinawati 2008), adanya produksi indol pada bakteri bertujuan untuk mengetahui kemampuan bakteri mendegradasi asam amino esensial triptofan.


51

Produk metabolit yang dihasilkan dari triptofan adalah indol, asam urat dan ammonia. Menurut Dewi (2010) bakteri S. aureus memiliki bentuk coccus dan berwarna ungu ketika dilakukan pengecatan Gram. Hasil yang diperoleh dari uji identifikasi bakteri uji menunjukkan bahwa S. aureus memiliki sel berbentuk bulat (coccus) dan koloninya menyerupai buah anggur serta berwarna ungu dapat dilihat pada lampiran no. 6. Menurut Purwohadisantoso, Elok dan Ella, (2009), bakteri E. coli memiliki bentuk batang pendek dan menghasilkan warna merah ketika dilakukan pengecatan Gram. Hasil yang didapat dari uji identifikasi bakteri uji menunjukkan bahwa pada bakteri E. coli memiliki warna merah muda, selnya berbentuk batang (basil) dapat dilihat pada lampiran no. 7. Berdasarkan pustaka yang diacu (Purwohadisantoso, Elok dan Ella, 2009), (Dewi, 2010) dan hasil yang diperoleh oleh penulis dalam penelitian ini menunjukkan bahwa bakteri uji yang digunakan adalah benar bakteri S. aureus dan E. coli.

G. Uji Potensi Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai Terhadap S. aureus dan E. coli dengan Metode Difusi Sumuran Uji ini merupakan uji pendahuluan yang bertujuan untuk memastikan adanya aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap pertumbuhan S. aureus dan E. coli. Pengujian potensi antibakteri dilakukan menggunakan metode difusi sumuran. Prinsip metode difusi yaitu senyawa uji


52

ditempatkan dalam media padat yang sebelumnya sudah diinokulasikan bakteri uji. Senyawa uji akan berdifusi ke dalam media dan akan menghambat pertumbuhan bakteri. Ekstrak etanol kulit batang pohon petai disiapkan terlebih dahulu lalu dilarutkan menggunakan DMSO karena DMSO dapat melarutkan ekstrak etanol kulit batang pohon petai dan aman digunakan untuk uji aktivitas antibakteri sebab tidak menunjukkan adanya zona hambat ketika diujikan pada bakteri S. aureus dan E. coli. Menurut Alfath, Vera, dan Sunnati (2013) DMSO juga digunakan sebagai pelarut karena DMSO dapat berfungsi sebagai pelarut yang cepat menyerap ke dalam ekstrak tanpa merusak ekstrak. Pembuatan variasi konsentrasi (3,125%; 6,25%; 12,5%; 25%; 50%) dengan melarutkan ekstrak etanol kulit batang pohon petai sebesar 2,5 gram dalam 5 mL DMSO 5% (konsentrasi 50%). Konsentrasi 50% merupakan konsentrasi paling besar. Konsentrasi paling besar ini akan menentukan empat konsentrasi di bawahnya. Empat konsentrasi tersebut ditentukan dengan pengenceran sebesar setengah dari konsentrasi sebelumnya. Dalam penelitian yang dilakukan oleh Efendi dan Triana (2013) menggunakan DMSO 5% sebagai kontrol negatif untuk menguji aktivitas antimikroba ekstrak etanol sarang semut terhadap Candida albicans, Escherichia coli, dan Staphylococcus aureus. Hermawan, Hana, dan Wiwiek (2007) menggunakan DMSO 10% sebagai kontrol negatif dalam penelitian tentang pengaruh ekstrak daun sirih terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus dan


53

Escherichia coli dengan metode difusi disk. Selain itu, dalam penelitian yang dilakukan Nauman dan Muhammad (2003) dalam penelitiannya terkait skrinning ekstrak metanol air terhadap aktivitas antibakteri dengan kontrol negatif adalah DMSO 100% dengan bakteri uji Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Corynebacterium bovis, Pasturella multocida dan Escherichia coli. Hasil yang diperoleh dari penelitian di atas dengan kontrol negatif adalah DMSO 5%, 10%, dan 100% adalah DMSO tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri uji. Oleh sebab itu, peneliti melakukan orientasi menggunakan DMSO dengan konsentrasi terkecil yaitu 1 %, 2%, dan 5% untuk melarutkan ekstrak etanol kulit batang pohon petai dan digunakan sebagai kontrol pelarut. Hasil yang diperoleh adalah DMSO 1% dan 2% belum bisa melarutkan ekstrak etanol kulit batang pohon petai sebaik mungkin, sedangkan DMSO 5% dapat melarutkan ekstrak etanol kulit buah petai dengan baik dan tidak menghambat pertumbuhan bakteri. DMSO dengan konsentrasi 5% sudah dapat melarutkan ekstrak etanol kulit batang pohon petai maka pada konsentrasi DMSO di atas 5% sudah pasti dapat melarutkan ekstrak etanol kulit batang pohon petai. Pembuatan variasi konsentrasi dilakukan untuk mengetahui konsentrasi minimum dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai dalam menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dan E. coli. Hasil yang diperoleh Kurniawati (2014) menyatakan bahwa ekstrak etanol kulit petai tidak memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. aureus dan E. coli. Data diameter zona hambat yang diperoleh oleh peneliti disajikan dalam tabel III.


54

Tabel III menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit batang pohon petai hanya mampu menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus sedangkan tidak mampu menghambat pertumbuhan bakteri E. coli. Ekstrak etanol kulit batang pohon petai mampu menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus karena adanya perbedaan struktur dinding sel bakteri Gram positif dan Gram negatif yang mengakibatkan perbedaan kemampuan penetrasi ekstrak uji ke dalam bakteri tersebut. Tabel III. Diameter zona hambat yang dihasilkan seri konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai, kontrol positif dan kontrol negatif terhadap S. aureus Diameter zona hambat (mm) Kelompok perlakuan (Rerata ± SD) Konsentrasi ekstrak etanol kulit 18.9 ± 2.4 batang pohon petai 50% Konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai 25%

17.1 ± 1.0

Konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai 12,5%

15.1 ± 1.6


11.3 ± 0.6


9.1 ± 0.5

Kontrol positif

35.1 ± 0.8

Kontrol negatif

0

NB: diameter zona hambat sudah dikurangi diameter sumuran 6 mm, n = 3 S. aureus (bakteri Gram positif) mempunyai struktur dinding sel dengan banyak lapisan peptidoglikan dan memiliki sedikit lipid sedangkan bakteri E. coli


55

(bakteri Gram negatif) memiliki struktur dinding sel yang lebih kompleks dimana adanya membran luar yang melindungi peptidoglikan yaitu fosfolipid (lapisan dalam) dan lipopolisakarida (lapisan luar) (Pratiwi, 2008). Oleh karena dinding sel bakteri E. coli lebih kompleks mengakibatkan ekstrak etanol sulit menembus dan merusak integritas dinding sel E. coli. Kriteria kekuatan aktivitas antibakteri menurut Davis dan Stout (1971) ditunjukkan pada tabel IV dan hasil penelitian ditunjukkan pada tabel V. Berdasarkan tabel V, konsentrasi 6,25%, 12,5%, 25% dan 50% merupakan konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri S. aureus karena konsentrasi tersebut menunjukkan aktivitas antibakteri termasuk kuat sehingga dapat menghasilkan zona hambat yang besar. Tabel IV. Kriteria kekuatan aktivitas antibakteri Menurut Davis dan Stout (1971) Diameter zona hambat

Kekuatan aktivitas antibakteri

≤ 5 mm

Lemah

5 – 10 mm

Sedang

10 – 20 mm

Kuat

> 20 mm

Sangat kuat


56

Tabel V. Kriteria kekuatan aktivitas antibakteri ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap S. aureus Hasil penelitian Konsentrasi

Diameter zona hambat

Kekuatan aktivitas antibakteri

3, 125%

9,1 ± 0,5

Sedang

6,25%

11,3 ± 0,6

Kuat

12,5%

15,1 ± 1,6

Kuat

25%

17,1 ± 1,0

Kuat

50%

18,9 ± 2,4

Sangat kuat

Kontrol negatif (DMSO) yang digunakan dalam penelitian ini tidak menunjukkan zona hambat sehingga DMSO tidak mempunyai aktivitas antibakteri dan aman digunakan dalam uji antibakteri. Kontrol negatif atau kontrol pelarut bertujuan untuk melihat apakah pelarut yang digunakan untuk melarutkan ekstrak memiliki aktivitas antibakteri atau tidak. Sedangkan kontrol positif yang digunakan (amoksisilin) dalam penelitian ini menunjukkan zona hambat dengan kekuatan daya antibakterinya sangat kuat. Amoksisilin digunakan dalam penelitian karena memiliki spektrum yang luas dalam golongan penisilin. Menurut McEvoy (cit., Sulistiyaningsih, 2007), amoksisilin digunakan untuk mengobati penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri Gram negatif (E. coli) dan Gram positif (S. aureus). Menurut Istiantoro dan Ganiswarna (cit., Sulistiyaningsih, 2007), mekanisme kerja amoksisilin menghambat pembentukan peptidoglikan yang diperlukan untuk sintesis dinding sel bakteri. Selain


57

digunakan sebagai kontrol positif, amoksisilin juga digunakan sebagai kontrol metode. Kontrol metode (amoksisilin) bertujuan untuk melihat aktivitas antibakteri yang digunakan di pasaran sebagai terapi bagi penyakit yang disebabkan karena bakteri dan untuk melihat apakah metode yang dilakukan peneliti sudah benar atau belum. Data diameter zona hambat ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap S. aureus yang diperoleh dari masing-masing variasi konsentrasi, kontrol negatif, kontrol positif dianalisis secara statistik menggunakan Microsoft Excel dengan rumus yang sesuai. Data tersebut diuji apakah terdistribusi normal atau tidak menggunakan Shapiro-Wilk dan homogenitas data dengan uji Levene. Dari kedua uji tersebut menunjukkan bahwa distribusi data diameter zona hambat tidak normal dan data diameter zona hambat ekstrak etanol kulit batang pohon petai tidak homogen. Oleh karena itu, analisis data dilanjutkan menggunakan analisis non parametrik dengan uji Kruskal-Wallis bertujuan untuk melihat apakah antara seri konsentrasi dengan kontrol positif dan kontrol negatif berbeda tidak bermakna atau tidak. Kemudian dilanjutkan dengan uji post hoc menggunakan Mann Withney-Wilcoxon Test bertujuan untuk melihat perbedaan hasil diameter zona jernih antara seri konsentrasi, kontrol positif, dan kontrol negatif. Mann Withney-Wilcoxon Test ini menunjukkan bahwa data yang diperoleh disajikan dalam tabel VI. Seri konsentrasi ekstrak etanol pada data tabel VI menunjukkan berbeda bermakna secara statistik terhadap kontrol positif maupun kontrol negatif. Pada


58

kontrol negatif, seluruh seri konsentrasi mempunyai perbedaaan yang bermakna terkait aktivitas hambat karena kontrol negatif tidak menghasilkan aktivitas hambat. Tabel VI. Hasil Mann Withney-Wilcoxon Test diameter zona hambat seri konsentrasi ekstrak etanol, kontrol negatif, kontrol positif terhadap Staphylococcus aureus Kelompok perlakuan

Kontrol Kontrol + –

K. 50%

K. 25%

K. 12,5%

K. 6,25%

Kontrol +

BTB

Kontrol –

BB

BTB

Konsentrasi 50%

BB

BB

BTB

Konsentrasi 25%

BB

BB

BTB

BTB

Konsentrasi 12,5%

BB

BB

BB

BB

BTB

Konsentrasi 6,25%

BB

BB

BB

BB

BB

BTB

Konsentrasi 3,125%

BB

BB

BB

BB

BB

BB

K. 3,125%

BTB

Keterangan: *BB = berbeda bermakna, BTB = berbeda tidak bermakna *Rerata ± SD diameter zona hambat ekstrak etanol kulit batang pohon petai setiap kelompok perlakuan : kontrol + (35,1 ± 0,8); kontrol – (0,0 ± 0,0); konsentrasi 50% (18,9 ± 2,4); konsentrasi 25% (17,1 ± 1,0); konsentrasi 12,5% (15,1 ± 1,6), konsentrasi 6,25% (11,3 ± 0,6); dan konsentrasi 3,125% (9,1 ± 0,5). *K : Konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai

Apabila membandingkan antar seri konsentrasi, meningkatnya daya hambat sebanding dengan meningkatnya seri konsentrasi. Tetapi pada seri konsentrasi 25%


59

dan 50%, data diameter zona hambat menunjukkan berbeda tidak bermakna atau bisa dikatakan memiliki daya hambat yang sama antar kedua seri konsentrasi tersebut. Selain itu, hasil ini juga menunjukkan bahwa pada konsentrasi yang lebih besar (50%) tidak selalu daya hambatnya makin besar. Hal ini disebabkan karena etanol yang digunakan untuk menyari senyawa kimia yang terkandung dalam kulit batang pohon petai adalah etanol 70% dimana komposisi etanol 70% terdiri dari etanol 70% dan air 30%. Menurut Djide (2004) mengatakan bahwa etanol dapat menghambat pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 50 - 70% dan membunuh pertumbuhan bakteri pada konsentrasi 70%. Tersedianya molekul air dalam etanol 70% akan mempercepat proses penguapan dan proses penetrasi ke jaringan. Hal ini didukung oleh fakta yang menyatakan bahwa alkohol absolut yang tidak mengandung air, memiliki aktivitas antibakteri jauh lebih rendah dibandingkan dengan alkohol yang mengandung air. Menurut Sulistiyaningsih (2010) mekanisme kerja alkohol dengan mendenaturasi protein. Hal ini disebabkan karena pada proses denaturasi protein memerlukan air pada konsentrasi tertentu. Oleh karena itu, variasi konsentrasi ekstrak etanol dapat menghambat pertumbuhan S. aureus dan daya hambatnya tidak lebih baik dibandingkan dengan kontrol positif. Berdasarkan hasil yang diperoleh menyatakan bahwa ekstrak etanol kulit batang pohon petai mempunyai potensi antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri S. aureus. Kemudian dilanjutkan dengan mengukur kadar hambat minimum (KHM) dan kadar bunuh minimum (KBM) dari ekstrak etanol kulit batang pohon petai.


60

H. Pengukuran Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM) Ekstrak Etanol Kulit Batang Pohon Petai Terhadap S. aureus dengan Metode Dilusi Cair Seri konsentrasi dalam pengukuran KHM dan KBM diperoleh dari konsentrasi terkecil ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dengan metode difusi sumuran yang mempunyai zona hambat yang lebih besar dari kontrol negatif (DMSO) yaitu 3,125%. Prinsip metode dilusi yaitu pengenceran senyawa uji antibakteri sehingga diperoleh beberapa konsentrasi. Seri konsentrasi yang digunakan 0,782%; 1,563%; 3,125%; 6,25%; 12,5%; 15,625%; 18,750%; 21,875%; 25% dan 50%. Uji dilusi cair ini hanya dilakukan terhadap bakteri S. aureus karena bakteri E.coli tidak memiliki zona hambat pada uji difusi sumuran. Senyawa uji memiliki daya antibakteri apabila nilai kekeruhan yang dimiliki media uji sama atau lebih kecil dibandingkan dengan kontrol pertumbuhan. Uji dilusi cair dilakukan tiga kali replikasi. Penentuan KHM dan KBM dilakukan secara kuantitatif dengan mengukur Optical Density (OD) menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Prinsip spektrofotometri UV-Vis berdasarkan hukum Lambert-Beer, yaitu suatu cahaya monokromatis dilewatkan melalui suatu media, maka bertambah-turunnya intensitas cahaya yang ditransmisikan sebanding dengan tebal dan kepekaan media yang digunakan (Yanlinastuti, Dian, Fatimah, dan Yusuf, 2011).


61

Parameter Optical Density (OD) yang digunakan adalah absorbansi. Seri konsentrasi ditambahkan ke dalam media MHB lalu ditambahkan suspensi bakteri ke dalam media uji yang telah terdapat ekstrak etanol. Tabung yang berisi media uji (MHB, ekstrak etanol dan suspensi bakteri) divortex lalu diukur Optical Density (OD) menggunakan spektrofotometer (λ 480 nm). Tabung yang berisi media, ekstrak etanol kulit batang pohon petai tersebut diinkubasi selama 18-24 jam dengan suhu 370C dalam inkubator. Setelah 18-24 jam inkubasi, tabung diukur Optical Density (OD) menggunakan spektrofotometer (λ 480 nm). Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Dewi (2010), panjang gelombang 480 nm menunjukkan bahwa nilai absorbansi terhadap seri konsentrasi kultur bakteri dengan ketelitian tertinggi dibandingkan dengan panjang gelombang lainnya. Pengukuran Optical Density (OD) dilakukan sebelum dan setelah inkubasi dimana selisih dari kedua nilai tersebut digunakan untuk menentukan pertumbuhan bakteri. Jumlah koloni bakteri dapat diukur dengan kekeruhan (turbiditas) kultur. Semakin keruh media uji maka makin banyak jumlah bakteri yang tumbuh. Cahaya yang dipancarkan pada spektrofotometer akan mengenai sel bakteri sehingga sebagian cahaya akan diserap dan sebagian diteruskan. Banyaknya cahaya yang diabsorbsi sebanding dengan banyaknya sel bakteri pada batas-batas tertentu (Purwoko, 2007; Dewi, 2010). Tabel VII adalah data hasil uji kekeruhan dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Data yang ditampilkan pada tabel VII merupakan data yang paling baik dari ketiga data yang didapatkan.


62

Tabel VII menunjukkan bahwa konsentrasi 21,875%, 25% dan 50% menghasilkan nilai ∆OD sebesar nol. Nilai ΔOD nol ini menyatakan bahwa tidak ada perubahan nilai absorbansi sebelum dan setelah inkubasi. Nilai ΔOD ≥ 0 menunjukkan masih terdapat pertumbuhan bakteri dengan meningkatnya nilai absorbansi. Adanya pertumbuhan bakteri berarti menunjukkan konsentrasi ekstrak etanol tersebut belum mampu menghambat pertumbuhan bakteri. Konsentrasi 21,875%, 25% dan 50% dilanjutkan uji penegasan apakah ketiga konsentrasi tersebut termasuk KHM atau KBM.

Tabel VII. Hasil pengukuran absorbansi pada penentuan KHM dan KBM ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap bakteri S. aureus Optical Density (OD) Konsentrasi ΔOD No. (%) (Abs) Sebelum inkubasi Setelah inkubasi 1. 0,782 0,2406 1,6082 1,3676 2. 1,563 0,4312 1,7579 1,3267 3. 3,125 1,5535 2,4662 0,9127 4. 6,25 2,5331 3,1652 0,6321 5. 12,5 3,6123 3,9133 0,301 6. 15,625 3,9133 4,0163 0,103 7. 18,750 3,9133 3,9990 0,0857 8. 21,875 3,9999 3,9999 0 9. 25 3,9133 3,9133 0 10. 50 3,9133 3,9133 0 n=3


63

a

c b

Keterangan: A: konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai 21,875 %; B: konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai 25 %; C: konsentrasi ekstrak etanol kulit batang pohon petai 50 %

Gambar 14. Hasil penegasan KHM dan KBM Hasil dari uji penegasan pada media MHA (Gambar 14) yang distreak dengan konsentrasi 21,875%, 25%, dan 50% menunjukkan bahwa ketiga konsentrasi tersebut tumbuh bakteri sehingga dapat disimpulkan bahwa ketiga bakteri tersebut hanya mampu menghambat pertumbuhan bakteri. Jadi, konsentrasi terkecil ekstrak etanol kulit batang pohon petai yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus (KHM) adalah konsentrasi 21,875% dan pada konsentrasi ini, Kadar Bunuh Minimal (KBM) belum diperoleh.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan 1. Berdasarkan uji tabung yang dilakukan, ekstrak etanol kulit batang pohon petai mengandung flavonoid, alkaloid, fenolik, dan terpenoid 2. Ekstrak etanol kulit batang pohon petai mempunyai aktivitas antibakteri terhadap S. aureus, tetapi tidak mempunyai aktivitas antibakteri terhadap E. coli. 3. Kadar Hambat Minimal (KHM) ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap bakteri S. aureus adalah pada konsentrasi 21,875%. Pada konsentrasi 21,875%, Kadar Bunuh Minimal (KBM) ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap S. aureus belum didapatkan.

B. Saran Perlu dilakukan penelitian tentang uji penegasan senyawa kimia yang terdapat dalam ekstrak etanol kulit batang pohon petai menggunakan bioautografi

KLT

preparative insitu

yang

dilanjutkan

(bioautografi

64

dengan

uji

kontak).


65

Daftar Pustaka Adi, L. T., 2008, Tanaman Obat dan Jus Untuk Mengatasi Penyakit Jantung, Hipertensi, Kolesterol, PT Agromedia Pustaka, Jakarta, hal 141. Agnes, Lois, Aning, dan Nani, 2013, Ekstraksi Kulit Petai Sebagai Sumber Antioksidan Alami Dengan Metode Domestic Microwave Maceration, Jurnal Teknik Kimia Indonesia, Volume 11 (5), 237 – 242. Alfath, C.R., Vera, Y., dan Sunnati, 2013, Antibacterial Effect Of Granati Fructus Cortex Extract On Streptococcus Mutans In Vitro, Journal of Dentistry Indonesia, Vol. 20, No. 1,5 – 8. Ardiansyah, 2007 in Marliana dan Chairul, 2011, Uji Fitokimia dan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol, Fraksi n-Heksana, Etil Asetat dan Metanol Dari Buah Labu Air (Lagenari siceraria (Molina) Standl), Jurnal Kimia Mulawarman,Volume 8 Nomor 2, Samarinda, hal. 28. Arisandi, 1990 in Anwar, L., 2014, Uji Pendahuluan Fitokimia, Karya Ilmiah, Indramayu, hal. 3. Azizi, C. Y. M., Salman, Nik, dan Mohd, 2006, Extraction and Identification of Compounds From Parkia Speciosa Seeds by Supercritical Carbon Dioxide, Journal of Chemical and Natural Resources Engineering, University Technology Malaysia, hal. 153 – 163. Cappucino dan Sherman, 1983 in Rostinawati, T., 2008, Skrining dan Identifikasi Bakteri Penghasil Enzim Kitinase dari Air Laut di Perairan Pantai Pondok Bali, Penelitian Mandiri, Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Jatinangor, hal. 30. Davis and Stout, 1971, Disc Plate Methode of Microbiological Antibiotic Assay, Journal of Microbiology, Vaol. 22, No. 4, 666 – 670. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1986, Sediaan Galenik, Edisi 1, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 4-6. Depkes RI, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 7, 1036. Depkes RI,. 1995, Materi Medika Indonesia, Jilid VI, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. xvii. Dewi, F.K., 2010, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Mengkudu (Morinda citrifolia, L.) Terhadap Bakteri Pembusuk Daging Segar, Skripsi, 3-8, 20, Universitas Sebelas Maret, Yogyakarta. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1996, Inventaris Tanaman Obat Indonesia, Jilid 1, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 357. Djide, N., 2004, Mikrobiologi Farmasi, Laboratorium Mikrobiologi Farmasi Fakultas MIPA UNHAS Makasar, hal. 77, 84, 86, 110-119, 153-157, 202203. Dwidjoseputro, D., 1994, Dasar-dasar mikrobiologi, Djambatan, Jakarta. Edeoga, H.O., Okwu, and Mbaebre, B., 2005, Phytochemical Constituent of Some Nigerian Medicinal Plants, Afr Journal of Biotechnology, 4:685-688. Efendi, Y. N. dan Triana, H., 2013, Potensi Antimikroba Ekstrak Etanol Sarang Semut (Myrmecodia tuberosa Jack.) Terhadap Candida albicans,


66

Escherichia coli dan Staphylococcus aureus, Traditional Medicine Journal, Volume 18 (1), Universitas Gajah Mada, Yogyakarta, hal. 53 – 58. Fessenden, R. J. dan Joan S. F., 1986, Organic Chemistry, Third Edition, diterjemahkan oleh Aloysius Hadyana Pudjaatmaka, hal. 259-260, Penerbit Erlangga, Jakarta. Harborne, J., 1996, Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, Cetakan kedua, Penerjemah: Padmawinata, K. dan I. Soediro., ITB, Bandung, hal. 23 – 24. Hargono, D., 1986. Sediaan Galenik, Depkes RI., Jakarta, hal. 1 -7. Hermawan, A., Hana, E., dan Wiwiek, T., 2007, Pengaruh Ekstrak Daun Sirih (Piper betle L.) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan Metode Difusi Disk, Artikel Ilmiah, Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga, Surabaya, hal. 3 – 6. Istiantoro, YH., dan Vincent H.S. Ganiswarna, 2002 in Sulistiyaningsih, Rr., 2007, Pengujian Potensi Sediaan Injeksi Kering Amoksisilin Dalam Aqua Pro Injeksi Pada Variasi Suhu Penyimpanan dan Konsentrasi, Laporan Penelitian, Universitas Padjadjaran, Bandung. Jawetz, Melnick, Adelberg, Brooks, Butel, and Ornston, 2005, Mikrobiologi Kedokteran. Edisi ke-20, EGC, Jakarta, hal. 211,213,215. Jones, W. P. and Kinghorn, A.D., 2006. Extraction of Plant Secondary Metabolites, In: Sarker, S. D., Latif, Z. and Gray, A. I., eds. Natural Products Isolation. 2nd Ed. New Jersey: Humana Press. P.341-342. Kamisah, Y., Faizah Othman, Hj Mohd Saad Qodriyah, and Kamsiah Jaarin, 2013, Review Article : Parkia speciosa Hassk.: A Potential Phytomedicine, hal. 1-10. Kismiyati, Sri, Wahid, dan Rahayu, 2009, Isolasi dan Identifikasi Bakteri Gram Negatif Pada Luka Ikan Maskoki (Carassius Auratus) Akibat Infestasi Ektoparasit Argulus Sp., Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan, Volume I, No. 2, Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga, Surabaya, hal. 132. Kumalasari, E. dan Sulistyani, N., 2011, Aktivitas Antifungi Ekstrak Etanol Batang Binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steen.) Terhadap Candida albicans serta Skrining Fitokimia, Jurnal Ilmiah Kefarmasian, 1 (2): 51 – 62. Kurniawati, D. A., 2014, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kulit Petai (Parkia speciosa Hassk.) Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus, Skripsi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor, hal. 6-35. Kusmayanti, dan Agustini, N. W. R., 2007, Uji Aktivitas Senyawa Antibakteri dari Mikroalga (Porphyridium cuentum), Biodiversitas, Vol 8 (1), hal. 48-53. Lenny, S., 2006, Senyawa Flavonoida, Fenil Propanoida, Dan Alkaloida, karya ilmiah, Universitas Sumatera Utara, Medan, hal 14-21. Mahardika, C., 2013, Fraksionasi Ekstrak Kulit Petai Berpotensi Antioksidan, Skripsi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor, hal. 5 – 28. Mardiastuti H. W., Anis, K., Ariyani, K., Ikaningsih, dan Retno, K., 2007,


67

Emerging Resistance Pathogen : Situasi Terkini di Asia, Eropa, Amerika Serikat, Timur Tengah dan Indonesia, Majalah Kedokteran Indonesia Volume 57, Departemen Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta, hal. 76. Markham, K.R., 1988, Cara Mengidentifikasi Flavonoid, Terjemahan Padmawinata, ITB Press, Bandung, hal. 23 - 24, 42 – 43. Marlinda, M., Meiske, S., dan Audy, D.W., 2012, Analisis Senyawa Metabolit Sekunder dan Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Biji Buah Alpukat (Persea americana Mill), Jurnal MIPA UNSRAT, Manado, hal. 27. McEvoy, 2002 in Sulistiyaningsih, Rr., 2007, Pengujian Potensi Sediaan Injeksi Kering Amoksisilin Dalam Aqua Pro Injeksi Pada Variasi Suhu Penyimpanan dan Konsentrasi, Laporan Penelitian, Universitas Padjadjaran, Bandung. MC Murry, 2004; Marliana dan Chairul, 2011, Uji Fitokimia dan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol, Fraksi n-Heksana, Etil Asetat dan Metanol Dari Buah Labu Air (Lagenari siceraria (Molina) Standl), Jurnal Kimia Mulawarman, Volume 8 Nomor 2, Samarinda, hal. 28 - 29. Miroslav, V. 1971. Detection and Identification of Organic Compound, New York: Planum Publishing Corporation and SNTC Publishers of Technical Literatur. Nitisapto dan Siradz, 2005 in Mahatriny, N. N., Payani, Oka dan Astuti, 2014, Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Pepaya (Carica papaya L.) yang diperoleh daerah Ubud , Kabupaten Gianyar, Bali, Skripsi, Universitas Udayana Bali, hal. 9. Nuria, M.C., Arvin, F., Sumantri, 2009, Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Jarak Pagar (Jatropha curcas L.) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, dan Salmonella typhi ATCC 1408, Jurnal Ilmu-Ilmu Pertanian, Universitas Gajah Mada,Yogyakarta, hal. 7 – 10. Padmasari, P.D., Astuti, K.W., dan Warditiani, N.K., 2013, Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol 70% Rimpang Bangle (Zingiber purpureum Roxb.), Jurnal Farmasi Udayana, Bali, hal. 2 – 4. Plantamor, 2008, Klasifikasi Botani Petai, http://www.plantamor.com/index. php?plant=955, diakses tanggal 4 Mei 2014 Pramono, 2005 in Ma’mun, dkk., 2006, Teknik Pembuatan Simplisia dan Ekstrak Purwoceng, http://herbalnet.healthrepository.org/bitstream/123456789/2578/1/5d.pdf, diakses tanggal 20 November 2014. Pratiwi, S.T., 2008, Mikrobiologi Farmasi, Erlangga, Jakarta, hal. 136 - 147. Purwohadisantoso, K., Elok, Z., dan Ella, S., 2009, Isolasi Bakteri Asam Laktat dari Sayur Kubis yang Memiliki Kemampuan Penghambatan Bakteri Patogen (Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Escherichia coli, dan Salmonella thypimurium), Jurnal Teknologi Pertanian, Volume 10, Nomor 1, 19 – 27, Universitas Brawijaya, Malang. Purwoko, 2007 in Dewi, F.K., 2010, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Mengkudu (Morinda citrifolia, L.) Terhadap Bakteri Pembusuk Daging


68

Segar, Skripsi, 3 – 8, Universitas Sebelas Maret, Yogyakarta. Radji, M., 2009, buku ajar mikrobiologi panduan mahasiswa farmasi dan kedokteran, EGC, Jakarta, hal. 125, 127, 179-181, dan 184. Riskesdas, 2007, Riset Kesehatan Dasar, Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 10. Robinson, T., 1991, Kandungan Organic Tumbuhan Tingkat Tinggi, ITB, bandung, p.132. Robinson, T., 1995, Kandungan Senyawa Organik Tumbuhan Tinggi, diterjemahkan oleh Prof. Dr. Kosasih Padmawinata, ITB, Bandung, hal. 45 – 46. Rostinawati, T., 2008, Skrining dan Identifikasi Bakteri Penghasil Enzim Kitinase dari Air Laut di Perairan Pantai Pondok Bali, Penelitian Mandiri, Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Jatinangor, hal. 30. Sabir, A. 2008. In Vitro Antibacterial Activity Of Flavonoids Trigona Sp Propolis Against Streptococcus Mutans, http://www.journal.unair.ac.id/filerPDF/ DENTJ-38-3-08.pdf, diakses tanggal 23 September 2014. Sakunpak, A. dan Panichayupakaranant, 2012, Antibacterial Activity of Thai Edible Plants Against Gastrointestinal Pathogenic Bacteria and Isolation of a New Broad Spectrum Antibacterial Polyisoprenylated Benzophenone, Chamuangone, Food Chemistry, 130:826 – 831. Salni, Hanifa, M., dan Ratna, W. M., 2011, Isolasi Senyawa Antibakteri Dari Daun Jengkol (Pithecolobium lobatum Benth) dan Penentuan Nilai KHMnya, Jurnal Penelitian Sains, Vol. 14, 40, Universitas Sriwijaya, Sumatera Selatan. Sardjono, T.W., 2009, Strategi Penanggulangan dan Pencegahan Penyakit Parasitik di Masyarakat, Majalah Kedokteran Indonesia, Volume 59, Malang. Sjahid, L.R. 2008. Isolasi dan Indentifikasi Flavonoid Dari Daun Dewandaru (Eugenia uniflora L.), Skripsi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta. Soegihardjo, C. J., 2013, Farmakognosi, PT Citra Aji Parama, Yogyakarta, hal 10-11,45,50-57. Subramani, 2002 in Rosidah dan Afizia, 2012, Potensi Ekstrak Daun Jambu Biji Sebagai Antibakterial Untuk Menanggulangi Serangan Bakteri Aeromonas Hydrophila Pada Ikan Gurame (Osphronemus oouramy lacepede), Jurnal Kuatika, Universitas Padjadjaran, Bandung. Sulistiyaningsih, Rr., 2010, Uji kepekaan beberapa sediaan antiseptic terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Staphylococcus aureus resisten Metisilin (MRSA), http://pustaka.unpad.ac.id/wpcontent/uploads/2010/11/pdf, diakses tanggal 17 Februari 2015. Suparjo, 2008 in Marliana dan Chairul, 2011, Uji Fitokimia dan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol, Fraksi n-Heksana, Etil Asetat dan Metanol Dari Buah Labu Air (Lagenari siceraria (Molina) Standl), Jurnal Kimia Mulawarman, Volume 8 Nomor 2, Samarinda, hal. 65. Yanlinastuti, Anggraini, D., Fatimah, S., dan Yusuf, N., 2011, Penentuan Kadar Zirkonium Dalam Paduan U-ZR Menggunakan Spektrofotometer UV-Vis


69

dengan Pengompleks Arsenazo III, Seminar Nasional, Sekolah Tinggi Teknologi Nuklir, Yogyakarta, hal. 567 – 568.


LAMPIRAN

70


71

Lampiran 1. Surat Keterangan Keaslian Tanaman Petai (Parkia speciosa Hassk)


Lampiran 2. Surat Izin Melakukan Penelitian di Laboratorium Balai Kesehatan Yogyakarta

72


Lampiran 3. Sertifikat hasil uji Staphylococcus aureus ATCC 25923

73


Lampiran 4. Sertifikat hasil uji Escherichia coli ATCC 25922

74


Lampiran 5. Pereaksi-pereaksi yang digunakan untuk uji fitokimia

FeCl3 10% dan FeCl3 1%

KOH LP

Kloroform

Pereaksi Mayer dan Dragendorff

NaOH LP

H2SO4 Pekat

HCL 2N

Larutan uji

75


Lampiran 6. Hasil Uji Identifikasi S. aureus

Ada endapan hitam pada media geolitik

a

b

Ada kabut putih pada media Enrich

c

d

e

NB: a: glukosa, b: laktosa, c: manitol, d: maltosa, e: sakarosa.

76


g f

NA miring

SIM (Sulfur Indol Motil)

h

SC (Simon Citrate)

77


78

Hasil identifikasi bakteri S. aureus dengan uji gula-gula Label

A

Gula-gula

Glukosa

Sebelum inkubasi 24 jam (Warna)

Setelah inkubasi 24 jam (Warna)

Kuning

Bagian atas berwarna kuning, dan bawahnya berwarna jingga

B

Laktosa

Ungu

Kuning

C

Manitol

Hijau

Jingga

D

Maltosa

Merah

Kuning

E

Sakarosa

Biru

Kuning

F

Na

Bening Kekuningan

Sedikit hitam

G

SIM

Bening Kekuningan

Ada gelembung atau motil

H

SC

Hijau

Sedikit hitam

Keterangan

Positif karena terjadi perubahan warna

Negatif karena perubahan warna yang terjadi tidak sesuai sehingga dilakukan uji DNAse

Hasil uji DNAse Uji DNAse sebagai proses aglutinase, Hasil positif karena terjadi gumpalan.

Hasil Pengecatan Gram Positif


79

Lampiran 7. Uji Identifikasi Bakteri Escherichia coli

Ada gelembung gas dari tabung Durham yang ada di dalam tabung reaksi media BGLD

a

b

Ada warna hijau kebiruan menunjukkan tersangka adalah Escherichia coli

c

d

NB: a: glukosa, b: laktosa, c: manitol, d: maltosa, e: sakarosa.

e


80

f g

SIM (Sulfur Indol Motil)

SC (Simon Citrate)

Hasil identifikasi bakteri E. aureus dengan uji gula-gula Label

A

Gula-gula

Glukosa

Sebelum inkubasi 24 jam (Warna)

Setelah inkubasi 24 jam (Warna)

Kuning

Bagian atas berwarna kuning, dan bawahnya berwarna jingga

B

Laktosa

Ungu

Kuning

C

Manitol

Hijau

Jingga

D

Maltosa

Merah

Kuning

E

Sakarosa

Biru

Kuning

F

G

SC

SIM

Hijau

Kuning kecoklatan

Bening Kekuningan

Permukaan berbentuk cincin jingga (indol), agak hitam (sulfur) dan terbentuk gelembung yang melebar (motil)

Keterangan

Positif karena terjadi perubahan warna

Negatif karena tidak berubah warna menjadi biru


Hasil Pengecatan Gram negatif

81


Lampiran 8. Uji aktivitas antimikroba difusi sumuran terhadap S. aureus a

d

g

b

c

f

e

h

i

j

82


Keterangan : Label

Plate

A

Lima seri konsentrasi replikasi I

B

Kontrol pertumbuhan replikasi I

C

Kontrol positif dan negatif replikasi I

D

Lima seri konsentrasi replikasi II

E

Kontrol pertumbuhan replikasi II

F

Kontrol positif dan negatif replikasi II

G

Lima seri konsentrasi replikasi III

H

Kontrol pertumbuhan replikasi III

I

Kontrol positif dan negatif replikasi III

J

Kontrol kontaminasi media

83


Lampiran 9. Uji aktivitas antimikroba difusi sumuran terhadap E. coli a

d

g

b

c

e

f

h

i

j

84


Keterangan : Label

Plate

A

Lima seri konsentrasi replikasi I

B

Kontrol positif dan negatif I

C

Kontrol pertumbuhan replikasi I

D

Lima seri konsentrasi replikasi II

E

Kontrol positif dan negatif II

F

Kontrol pertumbuhan replikasi II

G

Lima seri konsentrasi replikasi III

H

Kontrol positif dan negatif III

I

Kontrol pertumbuhan replikasi III

J

Kontrol kontaminasi media

85


86

Lampiran 10. Hasil Pengukuran diameter zona hambat ekstrak etanol kulit batang pohon petai 1. Terhadap bakteri S. aureus Konsentrasi (%) Diameter I (mm) Diameter II (mm) Diameter III (mm) SD ± RataRata

X1

X2

X3

X4

X5

X5

X6

8,6

10,6

14,3

17,3

19,3

36

0

9

12

17

18

21

34.3

0

9,6

11,3

14

16

16,3

35

0

9,1 ± 0.5

11,3 ± 0,6

15,1 ± 1,6

17,1 ± 1,0

18,8 ± 2,4

35.1 ± 0.8

0

2. Terhadap bakteri E. coli Konsentrasi X1 X2 X3 X4 X5 X6 (%) Diameter I 0 0 0 0 0 34 (mm) Diameter II 0 0 0 0 0 34.3 (mm) Diameter III 0 0 0 0 0 35 (mm) 34.4 ± SD ± Rata0 0 0 0 0 0.5 Rata NB : X1: konsentrasi 3,125%; X2: konsentrasi 6,25%; X3: konsentrasi 12,5%; X4: konsentrasi 25%; X5: konsentrasi 50%; X6: kontrol positif; X7: kontrol negatif

X7 0 0 0 0


87

Lampiran 11. Hasil perhitungan statistik zona hambat ekstrak etanol kulit Batang pohon petai terhadap S. aureus Uji Distribusi Normal dengan Shapiro-Wilk 1. H0 : data terdistribusi normal H1 : data tidak terdistribusi normal 2. Taraf kepercayaan, α : 0,05 3. Wilayah Kritis = Keterangan : D = Berdasarkan rumus di bawah = Koefisient test Shapiro Wilk X n-i+1 = Angka ke n – i + 1 pada data X i = Angka ke i pada data D= Keterangan : X I = Angka ke I pada data = Rata-rata data T (α ; n) = T (0,05 ; 3) = 0,05 ; 0,767 Ho diterima jika T hitung < Ttabel maka distribusi data normal (DN) Ho ditolak jika T hitung > Ttabel maka distribusi data tidak normal (DTN)

1

Kontrol positif 1 2 3 Jumlah Rata-rata

36 34,333 35 105,333 35,111

34,333 35 36

Xi - rata -0,778 -0,111 0,889 D

(Xi - rata)^2 0,605284 0,012321 0,790321 1,407926


88

Hitung Nilai T I 1 Jumlah 2

Ai 0,7071

X n–I+ 1 - Xi 1,667

ai (X n – I [∑ai (X n – I + + 1 – Xi) 1 – Xi)]^2 1,179 1,179 1,389

1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2 0,987

DTN

Kontrol negatif 1 2 3 Jumlah Rata-rata

0 0 0 0 0

0 0 0

Xi - rata 0 0 0 D

(Xi - rata)^2 0 0 0 0

Hitung Nilai T I

Ai 1

Jumlah

X n–I+ 1 - Xi 0-0= 0,7071 0

ai (X n – I [∑ai (X n – I + 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2 + 1 – Xi) 1 – Xi)]^2 0 0

0

#DIV/0!

#DIV /0!


89

3 Kadar 50% 1 2 3 Jumlah Ratarata

19,333 21 16,333 56,666

Xi - rata (Xi - rata)^2 16,333 -2,556 6,531 19,333 0,444 0,197 21 2,111 4,458 D 11,187

18,889

Hitung Nilai T I

Ai

1 Jumlah

X n – I + ai (X n – I [∑ai (X n – I + 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2 1 - Xi + 1 – Xi) 1 – Xi)]^2 0,7071 4,667 3,300 3,300 10,890

4 Kadar 25%

1 2 3 Jumlah Ratarata

17,333 18 16 51,333 17,111

Xi - rata (Xi - rata)^2 16 -1,111 1,234 17,333 0,222 0,049 18 0,889 0,790 D 2,074

0,974 DTN


90

Hitung Nilai T X n – I + ai (X n – I [∑ai (X n – I + I Ai 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2 1 - Xi + 1 – Xi) 1 – Xi)]^2 1 0,7071 2 1,414 Jumlah 1,414 2,000

0,964 DTN

5 Kadar 12,5%


14,333 17 14 45,333

Xi - rata (Xi - rata)^2 14 -1,111 1,234 14,333 -0,778 0,605 17 1,889 3,568 D 5,408

15,111

Hitung Nilai T i 1 Jumlah

Ai

X n – I + ai (X n – I [∑ai (X n – I + 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2 1 - Xi + 1 – Xi) 1 – Xi)]^2 0,7071 3 2,121 2,121 4,500

0,832 DTN


91

6 Kadar 6,25%


10,667 12 11,333 34

Xi - rata (Xi - rata)^2 10,667 -0,666 0,444 11,333 0,000 0,000 12 0,667 0,444 D 0,888

11,333

Hitung Nilai T i

Ai

1 Jumlah

X n – I + ai (X n – I [∑ai (X n – I + 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2 1 - Xi + 1 – Xi) 1 – Xi)]^2 0,7071 1,333 0,943 0,943 0,888

7 Kadar 3,125%


8,667 9 9,667 27,334 9,111

Xi - rata (Xi - rata)^2 8,667 -0,444 0,197 9 -0,111 0,012 9,667 0,556 0,309 D 0,519

1,000 DTN


92

Hitung Nilai T i 1 Jumlah

Ai

X n – I + ai (X n – I [∑ai (X n – I + 1/D * [∑ai (X n – I + 1 – Xi)]^2 1 - Xi + 1 – Xi) 1 – Xi)]^2 0,7071 1 0,7071 0,7071 0,500

0,964 DTN

Konsentrasi 50% data terdistribusi normal dan kontrol positif, konsentrasi 25%, konsentrasi 12,5%, konsentrasi 6,25%, konsentrasi 3,125% data tidak terdistribusi normal, Jadi, dapat disimpulkan bahwa tidak semua data terdistribusi normal,


Uji Homogenitas dengan Levene’s Test 1. Menentukan Hipotesa Ho : σ1 = σ2 = σ3 = σ4 = σ5 = σ6 = σ7 (Semua variansi sama) H1 : Tidak semua variansi sama 2. Dengan α = 0,05 3. Statistik Uji F Levene = K : Jumlah kelompok N : Jumlah semua sampel (n1 + n2 + n3 + n4 + n5 + n6 + n7 ) n : Jumlah sampel per kelompok Di : Xi – Xi : Diameter zona hambat kelompok ke-i : Rata-rata diameter zona hambat kelompok ke-i : Rata-rata Dij untuk perlakuan ke i : Rata-rata semua Dij

93


Kelompok Replikasi I Replikasi II Replikasi III Mean A N

kontrol Kadar positif 50% 36 19,3 34,3 21,0 35 16,3 35,1 18,8 3 3 D1

Replikasi I Replikasi II Replikasi III Mean B AA n(Bx-AA)^2 TOTAL

0,8 0,7 0,1 0,6 0,73 0,057 5,973

D2

Kadar 25% 17,3 18 16 17,1 3 D3

Kadar 12,5% 14,3 17 14 15,1 3

Kadar 6,25% 10,6 12 11,3 11,3 3

D4

D5

Kadar 3,125% 8,6 9 9,6 9,1 3 D6

94

kontrol negatif 0 0 0 0 3 D7

0,4 2,1 2,5 1,7

0,2 0,8 1,1 0,7

0,7 1,8 1,1 1,3

0,6 0,6 0 0,4

0,4 0,1 0,6 0,37

0 0 0 0

2,844

0

0,840

0,245

0,388

1,6


(D1 (D2 (D1 (D1 (D1 (D1 (D1 B1)^2 B2)^2 B1)^2 B1)^2 B1)^2 B1)^2 B1)^2 Replikasi I 0,088 1,586 0,269 0,232 0,049 0,005 0,000 Replikasi II 0,034 0,166 0,022 0,396 0,049 0,067 0,000 Replikasi III 0,232 0,726 0,137 0,022 0,197 0,034 0,000 TOTAL 4,313

F Levene =

=

=

= 3,2321

95


4. Menentukan wilayah kritis : Ho ditolak jika, FLevene ≥ Fα (K – 1, N – K) F 0,05 (6,14) = 2,85 FLevene = 3,2321 , F Levene > F 0,05 (6,14) Jadi, Ho ditolak, tidak semua variansi sama, *Karena tidak semua variansi sama, maka analisis dilanjutkan dengan metode non parametrik Kruskal Wallis,

96


97

Uji Kruskal Wallis 1. Menentukan Hipotesis Ho : Tidak ada perbedaan bermakna antara kelompok (Ho : μ1 = μ2 = μ3 = μ4 = μ5 = μ6 = μ7), H1 : Ada perbedaan bermakna antara kelompok (H1 : μ1 # μ2 # μ3 # μ4 # μ5 # μ6 # μ7), 2. Jumlah kelompok (k) = 7 kelompok, maka untuk k >3 dan >5 menggunakan tabel chi square, df = k – –1=6 N (total n) = 21 3. Hitung nilai dari statistik uji Perhitungan data menggunakan Excel, Konsentrasi (%) Diameter I (mm) Diameter II (mm) Diameter III (mm)

Kontrol Kontrol positif negatif

3,125

6,125

12,5

25

50

8,667

10,667

14,333

17,333

19,333

36

0

9

12

17

18

21

34,333

0

9,667

11,333

14

16

16,333

35

0


No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21

Diameter zona hambat (mm) 0 0 0 8,667 9 9,667 10,667 12 11,333 14,333 17 14 17,333 18 16 19,333 21 16,333 36 34,333 35

Urutan data

Kelompok

Rangking

Urutan rangking

0 0 0 8,667 9 9,667 10,667 11,333 12 14 14,333 16 16,333 17 17,333 18 19,333 21 34,333 35 36

3,13% 3,13% 3,13% 6,25% 6,25% 6,25% 12,50% 12,50% 25% 50% 12,50% 25% 25% 50% 50% Kontrol + Kontrol + Kontrol +

1 1 1 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21

2 2 2 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21

R1 (-) Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 ∑R ∑R ^2 ∑(R ^2)/3 Urutan

2 2 2 6 36 12 6

R2 R3 R4 R5 (3,125%) (6,25%) (12,5%) (25%) 4 7 10 12 5 8 11 15 6 9 14 16 15 24 35 43 225 576 1225 1849 75 192 408,333 616,333 15 24,5 34 43

R6 (50%) 13 17 18 48 2304 768 48,5

98

R7 (+) 19 20 21 60 3600 1200 60


99

Total ∑(R ^2)/3 = 3271,667 R1
- 3 (N + 1) - 3 (21 + 1) - 3 (22)

= 84,978 – 66 = 18,978 4. Nilai kritis df = k – 1 – chi square = 12,592 dengan nilai taraf kepercayaan = 95%, Jadi, t tabel < t hitung, sehingga Ho ditolak, Oleh karena itu, ada perbedaan bermakna antara kelompok, Kemudian dilanjutkan dengan uji post hoc menggunakan Mann WithneyWilcoxon Test untuk melihat kebermaknaan dalam perbedaan hasil diameter zona jernih tiap konsentrasi dengan konsentrasi lain, kontrol positif, dan kontrol negatif,


100

Mann whitney-Wilcoxon test Untuk uji ini, dengan sampel n1≤8 dan n2 ≤ 8, menggunakan rumus

U1 = U2 = Kemudian, untuk nilai U hitung yang akan dibandingkan dengan U tabel adalah U yang bernilai paling kecil, Perhitungan Mann withney menggunakan Excel, a. Hipotesis Ho = Konsentrasi x dan y berbeda tidak bermakna Ha = Konsentrasi x dan y berbeda bermakna b. Taraf kepercayaan 95%, α = 0,05 c. Menghitung statistik uji dengan Excel d. Nilai kritis dilihat pada tabel mann whitney, n(y) = 3 dan m (x) = 3, dengan α = 0,05 e. Ho diterima jika: Uhitung = Utabel dan Uhitung < Utabel Ho ditolak jika : Uhitung >Utabel


1. Kontrol positif Kontrol + dan kontrol + Replikasi I II III Kontrol + (X) 36 34,333 35 Kontrol + (Y) 36 34,333 35

X Kontrol + (X)

Y Kontrol + (Y)

Nx

Ny 3

Y Kontrol - (Y)

Nx

Ny 3

5,5 5,5

∑Ranking III 3,5 3,5

10,5 10,5

Nx(nx+1)/ Ny(ny+1)/ Nx*ny 2 2 Ux 3 9 6 6

Kontrol + dan kontrol Replikasi I II III Kontrol + (X) 36 34,333 35 Kontrol - (Y) 0 0 0

X Kontrol + (X)

I

Ranking II 1,5 1,5

I 6 2

Ranking II 4 2

4,5

U

Ket 4,5 BTB

U

Ket 0 BB

4,5

∑Ranking III 5 2

Nx(nx+1)/ Ny(ny+1)/ Nx*ny 2 2 Ux 3 9 6 6

101

Uy

15 6

Uy 0

9


Kontrol positif dan konsentrasi 50% Replikasi I II III Kontrol + (X) 36 34,333 35 50% (Y) 19,333 21 16,333

X Kontrol +

Y Nx Konsentrasi 50%

Ny 3


Ny 3

6 2

∑Ranking III 5 1

15 6

Nx(nx+1)/ Ny(ny+1)/ Nx*ny 2 2 Ux 3 9 6 6

Kontrol + dan konsentrasi 25% Replikasi I II III Kontrol + 36 34,333 35 Konsentrasi 25% 17,333 18 16

X Kontrol +

I

Ranking II 4 3

102

I 6 2

Ranking II 4 3

Uy 0

U

Ket 0 BB

U

Ket 0 BB

9

∑Ranking III 5 1

Nx(nx+1)/ Ny(ny+1)/ Nx*ny 2 2 Ux 3 9 6 6

15 6

Uy 0

9


Kontrol + dan konsentrasi 12,5% Replikasi I II III Kontrol + 36 34,333 35 Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14

X Kontrol +


Ny 3

Kontrol +

Y Konsentrasi 6,25%

Nx

Ny 3

6 2

∑Ranking III

3

5

15

1

6

Nx(nx+1)/ Ny(ny+1)/ Nx*ny 2 2 Ux 3 9 6 6

Kontrol + dan konsentrasi 6,25% Replikasi I II III Kontrol + 36 34,333 35 Konsentrasi 6,25 % 10,667 12 11,333

X

I

Ranking II 4

103

3

I 6

Ranking II 4

Uy 0

U

Ket 0 BB

U

Ket

9

∑Ranking III 5

15 6

1

3

2

Nx*ny

Nx(nx+1)/ 2

Ny(ny+1)/ 2

9

6

6

Ux

Uy 0

9

0 BB


104

Kontrol + dan konsentrasi 3,125% Replikasi II III 36 34,333 35

I Kontrol + Konsentrasi 3,125 %

X Kontrol +

8,667

Y Konsentrasi 3,125%

9

Nx

9,667

Ny 3

3

Ranking II 4

I 6

∑Ranking III 5

15 6

1

2

3

Nx*ny

Nx(nx+1)/ 2

Ny(ny+1)/ 2

9

6

6

Ux 0

2. Kontrol negatif Kontrol - dan kontrol + Replikasi I II III Kontrol (X) 0 0 0 Kontrol + 34,33 (Y) 36 3 35

Ranking II

I

Uy

∑Ranking III

2

2

2

6

6

4

5

15

U 9

Ket 0 BB


X Kontrol (X)

Y

Nx

Kontrol + (Y)

Ny 3

Y Kontrol -

Nx

Ny 3

Nx(nx+1)/ 2

Ny(ny+1)/ 2

9

6

6

3

KONTROL - DAN KONTROL Replikasi I II III Kontrol (X) 0 0 Kontrol (Y) 0 0

X Kontrol -

Nx*ny

Ranking II

I

105

Ux

Uy 9

3,5

3,5

10,5

0

3,5

3,5

3,5

10,5

Nx(nx+1)/ Ny(ny+1)/ Nx*ny 2 2 Ux 3 9 6 6

I 2 5

2 6

0 BB

III

3,5

Ranking II

0

Ket

∑Ranking

0

Kontrol negatif dan konsentrasi 50% Replikasi I II III KONTROL (X) 0 0 0 50% (Y) 19,333 21 16,333

U

Uy 4,5

∑Ranking III 2 4

6 15

U 4,5

Ket 4,5 BTB


X Kontrol -

Y

Nx 50%

Ny 3

Nx(nx+1)/ Ny(ny+1)/ Nx*ny 2 2 Ux 3 9 6 6

Kontrol - dan konsentrasi 25% Replikasi I II III Kontrol 0 0 0 25% 17,333 18 16

X Kontrol -

Y

Nx 25%

Ny 3

Kontrol -

Y Konsentrasi 25%

Nx

Ny 3

2 5

3

I 2

Ranking II 2

Uy 9

U

Ket 0 BB

U

Ket 0 BB

U

Ket

0

∑Ranking III 2 4

6 15

Nx(nx+1)/ Ny(ny+1)/ Nx*ny 2 2 Ux 3 9 6 6

Kontrol - dan konsentrasi 12,5% Replikasi I II III Kontrol 0 0 0 Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14

X

I

Ranking II 2 6

106

Uy 9

0

∑Ranking III 2

6 15

5

6

4

Nx*ny

Nx(nx+1)/ 2

Ny(ny+1)/ 2

9

6

6

Ux

Uy 9

0

0 BB


Kontrol - dan konsentrasi 6,25% Replikasi I II III Kontrol 0 0 0 Konsentrasi 6,25 % 10,667 12 11,333

X Kontrol -

Y Konsentrasi 6,25%

Nx

Ny 3

Kontrol -


Nx

Ny 3

2

3

∑Ranking III 2

6 15

4

6

5

Nx*ny

Nx(nx+1)/ 2

Ny(ny+1)/ 2

9

6

6

3

Kontrol - dan konsentrasi 3,125% Replikasi I II III Kontrol 0 0 0 Konsentrasi 3,125 % 8,667 9 9,667

X

I

Ranking II 2

I 2

Ranking II 2

107

Ux

Uy 9

U 0

Ket 0 BB

∑Ranking III 2

6 15

4

5

6

Nx*ny

Nx(nx+1)/ 2

Ny(ny+1)/ 2

9

6

6

Ux

Uy 9

U 0

Ket 0 BB


108

3. Konsentrasi 50% Konsentrasi 50% dan kontrol + Replikasi I II III Konsentrasi 50% (X) 19,333 21 16,333 Kontrol + (Y) 36 34,333 35

X Konsentrasi 50% (X)

Y

Nx

Kontrol + (Y)

Ny 3


Y Konsentrasi 50% (Y)

Nx

Ny 3

I

3

∑Ranking III

2 6

3 4

1 5

Nx*ny

Nx(nx+1)/ 2

Ny(ny+1)/ 2

9

6

6

3

Konsentrasi 50% dan kontrol Replikasi I II III Konsentrasi 50% (X) 19,333 21 16,333 Kontrol - (Y) 0 0 0

Ranking II

Ranking II

I

6 15

Ux

Uy 9

U 0

Ket 0 BB

∑Ranking III

5 2

6 2

4 2

Nx*ny

Nx(nx+1)/ 2

Ny(ny+1)/ 2

9

6

6

15 6

Ux

Uy 0

U 9

Ket 0 BB


Konsentrasi 50% dan konsentrasi 50% Replikasi I II III Konsentrasi 50% (X) 19,333 21 16,333 Konsentrasi 50% (Y) 19,333 21 16,333

X Konsentrasi 50%

Y Konsentrasi 50%

Nx

Ny 3

Y Konsentrasi 25%

Nx

Ny 3

∑Ranking III

3,5

5,5

1,5

10,5

3,5

5,5

1,5

10,5

Nx(nx+1)/ Ny(ny+1)/ Nx*ny 2 2 Ux 3 9 6 6

Konsentrasi 50% dan konsentrasi 25% Replikasi I II III Konsentrasi 50% 19,333 21 16,333 Konsentrasi 25% 17,333 18 16

X Konsentrasi 50%

Ranking II

I

109

I 5 3

Ranking II 6 4

Uy 4,5

U

Ket 4,5 BTB

U

Ket 2 BTB

4,5

∑Ranking III 2 1

Nx(nx+1)/ Ny(ny+1)/ Nx*ny 2 2 Ux 3 9 6 6

13 8

Uy 2

7


Konsentrasi 50% dan konsentrasi 12,5% Replikasi I II III Konsentrasi 50% 19,333 21 16,333 Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14

X Konsentrasi 50%

Y Konsentrasi 25%

Nx

Ny 3

Konsentrasi 50%

Y Konsentrasi 6,25%

Nx

Ny 3

5 2

∑Ranking III 3 1

14 7

Nx(nx+1)/ Ny(ny+1)/ Nx*ny 2 2 Ux 3 9 6 6

Konsentrasi 50% dan konsentrasi 6,25% Replikasi I II III Konsentrasi 50% 19,333 21 16,333 Konsentrasi 6,25 % 10,667 12 11,333

X

I

Ranking II 6 4

I 5 1

4 2 Ny(ny+1)/ 2

9

6

6

I 5 1

1

U

Ket 1 BB

U

Ket

8

III

Nx(nx+1)/ 2

Ranking II 6 2

Uy

∑Ranking

Nx*ny 3

Konsemtrasi 50% dan konsentrasi 3,125% Replikasi I II III Konsentrasi 50% 19,333 21 16,333 Konsentrasi 3,125 % 8,667 9 9,667

Ranking II 6 3

110

15 6

Ux

Uy 0

∑Ranking III 4 3

15 6

9

0 BB


X Konsentrasi 50%


Nx

Ny 3

Nx*ny

Nx(nx+1)/ 2

Ny(ny+1)/ 2

9

6

6

3

111

Ux

Uy

U

0

9

Ket 0 BB

4. Konsentrasi 25% Konsentrasi 25% dan kontrol + Replikasi I II III Konsentrasi 25% (X) 17,333 18 16 34,33 Kontrol + (Y) 36 3 35


Y Kontrol + (Y)

Nx

Ny 3

3

Ranking II

I

∑Ranking III

2

3

1

6

6

4

5

15

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny(ny+1) /2

9

6

6

Ux

Uy 9

U 0

Ket 0 BB


Konsentrasi 25% dan kontrol Replikasi I II III Konsentrasi 25%(X) 17,333 18 16 Kontrol - (Y) 0 0 0

X Konsentrasi 25%(X)

Y Konsentrasi 25% (Y)

Nx

3

Konsentrasi 25% dan konsentrasi 50% Replikasi I II III Konsentrasi 25% (X) 17,333 18 16 50% (Y) 19,333 21 16,333

X Konsentrasi 25%

Y Konsentrasi 50%

Nx

Ny 3

5 2

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny 3

I

Ranking II 6 2

9

I 3 5

∑Ranking III 4 2 Ny(ny+1) /2

6

Ranking II 4 6

112

15 6

Ux

6

Uy 0

U 9

Ket 0 BB

∑Ranking III 1 2

Nx(nx+1) Ny(ny+1) Nx*ny /2 /2 Ux 3 9 6 6

8 13

Uy 7

U 2

Ket 2 BTB


Konsentrasi 25% dan konsentrasi 25% Replikasi I II III Konsentrasi 25% 17,333 18 16 Konsentrasi 25% 17,333 18 16

X Konsentrasi 25%

Y Konsentrasi 25%

Nx

Ny 3

Konsentrasi 25%

Y Konsentrasi 12,5%

Nx

I 5 2

Ranking II 6 4

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny 3


10,5 10,5

Nx(nx+1) Ny(ny+1) Nx*ny /2 /2 Ux 3 9 6 6

Konsentrasi 25% dan konsentrasi 12,5% Replikasi I II III Konsentrasi 25% 17,333 18 16 Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14

X

I 3,5 3,5

Ranking II 5,5 5,5

3

9

6

113

Uy U Ket 4,5 4,5 4,5 BTB

∑Ranking III 3 1 Ny(ny+1) /2 6

14 7

Ux

Uy 1

U 8

Ket 1 BB


Konsentrasi 25% dan konsentrasi 6,25% Replikasi I II III Konsentrasi 25% 17,333 18 16 Konsentrasi 6,25 % 10,667 12 11,333

X Konsentrasi 25%

Y Konsentrasi 6,25%

Nx

3

Konsentrasi 25% dan konsentrasi 3,125% Replikasi I II III Konsentrasi 25% 17,333 18 16 Konsentrasi 3,125 % 8,667 9 9,667

X Konsentrasi 25%


Nx

9

I 5 1

3

9


6

Ranking II 6 2

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny 3

5 1

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny 3

I

Ranking II 6 3

6

114

15 6

Ux

6

Uy 0

U 9

Ket 0 BB


15 6

Ux

Uy 0

U 9

Ket 0 BB


115

5. Konsentrasi 12,5% Konsentrasi 12,5% dan kontrol + Replikasi I II III Konsentrasi 12,5% (X) 14,333 17 14 Kontrol + (Y) 36 34,333 35

X Konsentrasi 12,5% (X)

Y

Nx

Kontrol + (Y)

Y Kontrol - (Y)

Nx

9

5 2

3

9

III 1 5

Ny(ny+1)/2

6

Ux

Uy 9

U 0

Ket 0 BB

∑Ranking III

6 2

6

6 15

6

Ranking II

I

∑Ranking

3 4

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny 3

2 6

3

Konsentrasi 12,5% dan kontrol Replikasi I II III Konsentrasi 12,5%(X) 14,333 17 14 Kontrol - (Y) 0 0 0

X Konsentrasi 12,5%(X)

I

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny 3

Ranking II

4 2

Ny(ny+1)/2

15 6

Ux 6

Uy 0

U 9

Ket 0 BB


Konsentrasi 12,5% dan konssentrasi 50% Replikasi I II III Konsentrasi 12,5% (X) 14,333 17 14 16,33 50% (Y) 19,333 21 3

X Konsentrasi 12,5%

Y Konsentrasi 50%

Nx

Konsentrasi 12,5%

Y Konsentrasi 25%

Nx 3

3

III

4

3,5

9,5

3,5

5,5

5,5

14,5

9

I 2 5

9

Ny(ny+1)/2

6

6

Ux 6

Ranking II 4 6

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny

∑Ranking

2

3

Konsentrasi 12,5% dan konsentrasi 25% Replikasi I II III Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 Konsentrasi 25% 17,333 18 16

X

I

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny 3

Ranking II

116

Uy 5,5

U

0,5

Ket 0,5 BB

∑Ranking III 1 3

Ny(ny+1)/2

7 14

Ux 6

Uy 8

U 1

Ket 1 BB


Konsentrasi 12,5% dan konsentrasi 12,5% Replikasi I II III Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 X Konsentrasi 12,5%

Y Konsentrasi 12,5%

Nx

Ny 3

Konsentrasi 12,5%

Y Konsentrasi 6,25%

Nx

3

9

III 5,5 5,5

I 5 1

6

3

9

Ux

Uy 4,5

U

4,5

Ket 4,5 BTB

∑Ranking III

3

6

10,5 10,5

6

Ranking II 6

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny 3

∑Ranking

Nx*ny Nx(nx+1)/2 Ny(ny+1)/2

Konsentrasi 12,5% dan konsentrasi 6,25% Replikasi I II III Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 11,33 Konsentrasi 6,25 % 10,667 12 3

X

I 1,5 1,5

Ranking II 3,5 3,5

117

4

15

2

6

Ny(ny+1)/2

Ux 6

Uy 0

U 9

Ket 0 BB


Konsentrasi 12,5% dan konsentrasi 3,125% Replikasi I II III Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14 Konsentrasi 3,125 % 8,667 9 9,667

X Kons. 12,5%

Y Kons. 3,125%

Nx

Ny 3

I 5 1

Ranking II 6 2

118

∑Ranking III 4 3

15 6

Nx(nx+1) Nx*ny /2 Ny(ny+1)/2 Ux 3 9 6 6

Uy

U

0

9

Uy

U

Ket 0 BB

6. Konsentrasi 6,25% Konsentrasi 6,25% dan kontrol + Replikasi I II III Konsentrasi 6,25% (X) 10,667 12 11,333 34,33 Kontrol + (Y) 36 3 35


Y Kontrol + (Y)

Nx

Ny 3

3

Ranking II

I

∑Ranking III

1

3

2

6

6

4

5

15

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny(ny+1) /2

9

6

6

Ux 9

0

Ket 0 BB


Konsentrasi 6,25% dan kontrol Replikasi I II III Konsentrasi 6,25%(X) 10,667 12 11,333 Kontrol - (Y) 0 0 0


Y

Nx

Kontrol -

Ny 3

X Konsentrasi 6,25%

Y Konsentrasi 50%

Nx

Ny 3

I 4 2

∑Ranking III

6 2

5 2

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny(ny+1) /2

3

Konsentrasi 6,25% dan konsentrasi 50% Replikasi I II III Konsentrasi 6,25% (X) 10,667 12 11,333 Konsentrasi 50% (Y) 19,333 21 16,333

Ranking II

9

6

Ranking II

I

119

15 6

Ux

6

Uy 0

U 9

Ket 0 BB

∑Ranking III

1

3

2

6

5

6

4

15

Nx(nx+1) Ny(ny+1) Nx*ny /2 /2 Ux 3 9 6 6

Uy 9

U 0

Ket 0 BB


Konsentrasi 6,25%dan konsentrasi 25% Replikasi I II III Konsentrasi 6,25% 10,667 12 11,333 Konsentrasi 25% 17,333 18 16

X Konsentrasi 6,25%

Y Konsentrasi 25%

Nx

Ny 3

Konsentrasi 6,25%

Y Konsentrasi 6,25%

Nx

I 1 5

Ranking II 3 6

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny 3

1 5

∑Ranking III 2 4

6 15

Nx(nx+1) Ny(ny+1) Nx*ny /2 /2 Ux 3 9 6 6

Konsentrasi 6,25% dan konsentrasi 12,5% Replikasi I II III Konsentrasi 6,25% 10,667 12 11,333 Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14

X

I

Ranking II 3 6

3

9

6

120

Uy 9

U

Ket 0 BB

U

Ket

0


6 15

Ux

Uy 9

0

0 BB


Konsentrasi 6,25% dan konsentrasi 6,25% Replikasi I II III Konsentrasi 6,25% 10,667 12 11,333 Konsentrasi 6,25 % 10,667 12 11,333

X Konsentrasi 6,25%

Y Konsentrasi 6,25%

Nx

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny 3

3

Konsemtrasi 6,25% dan konsentrasi 3,125% Replikasi I II III Konsentrasi 6,25% 10,667 12 11,333 Konsentrasi 3,125 % 8,667 9 9,667

X Konsentrasi 6,25%


Nx

Ny 3

I 1,5 1,5

Ranking II 5,5 5,5

3

9

I 4


Ny(ny+1) /2

6

Ranking II 6

121

10,5 10,5

Ux

6

Uy 4,5

2

3

6

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny(ny+1) /2

6

4,5 BTB

III 15

9

4,5

Ket

∑Ranking 5

1

U

6

Ux

Uy 0

U 9

Ket 0 BB


122

7. Konsentrasi 3,125% Konsentrasi 3,125% dan kontrol + Replikasi I II III Konsentrasi 3,125% (X) 8,667 9 9,667 Kontrol + (Y) 36 34,333 35


Y

Nx

Kontrol + (Y)

Ny 3


Y Kontrol -

Nx

Ny 3

I 1 6

3

∑Ranking III

2 4

3 5

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny(ny+1) /2

3

Konsentrasi 3,125% dan kontrol Replikasi I II III Konsentrasi 3,125% (X) 8,667 9 9,667 Kontrol - (Y) 0 0 0

Ranking II

9

6

Ranking II

I 4 2

Uy 9

U 0

Ket 0 BB

∑Ranking III 6 2

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny(ny+1) /2

6

Ux

6

5 2

9

6 15

6

15 6

Ux

Uy 0

U 9

Ket 0 BB


123

Konsentrasi 3,125% dan konsentrasi 50%

I

Replikasi II

III

Konsentrasi 3,125% (X)

8,667

9

Konsentrasi 50% (Y)

19,333

21

X Konsentrasi 3,125%

Y Konsentrasi 50%

Nx

I

9,667 16,33 3

Ny 3

Konsentrasi 3,125%

Y Konsentrasi 25%

Nx 3

3

III

2

3

6

5

6

4

15

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny(ny+1) /2

9

I 1 5

6

Ranking II 2 6

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny

∑Ranking

1

3

Konsentrasi 3,125% dan konsentrasi 25% Replikasi I II III Konsentrasi 3,125% 8,667 9 9,667 Konsentrasi 25% 17,333 18 16

X

Ranking II

9

6

Ux

6

Uy 9

U 0

Ket 0 BB


6 15

Ux

Uy 9

U 0

Ket 0 BB


Konsentrasi 3,125% dan konsentrasi 12,5% Replikasi I II III Konsentrasi 3,125% 8,667 9 9,667 Konsentrasi 12,5% 14,333 17 14



Nx

3

Konsentrasi 3,125% dan konsentrasi 6,25% Replikasi I II III Konsentrasi 3,125% 8,667 9 9,667 11,33 Konsentrasi 6,25 % 10,667 12 3



Nx

Ny 3

1 5

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny 3

I

Ranking II 2 6

3

9

I 1


6

Ranking II 2

124

6 15

Ux

6

Uy 9

6

5

15

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny(ny+1) /2

6

0 BB

III 6

9

0

Ket

∑Ranking 3

4

U

6

Ux

Uy 9

U 0

Ket 0 BB


Konsentrasi 3,125% dan Konsentrasi 3,125% Replikasi I II III Konsentrasi 3,125% 8,667 9 9,667 Konsentrasi 3,125 % 8,667 9 9,667



Nx

Nx(nx+1) Nx*ny /2

Ny 3

I 1,5 1,5

Ranking II 3,5 3,5

3

9

6

125

∑Ranking III 5,5 5,5 Ny(ny+1) /2 6

10,5 10,5

Ux

Uy 4,5

4,5

U

Ket 4,5 BTB


Kelompok perlakuan Kontrol + (35,1 ± 0,8) Kontrol – (0,0 ± 0,0) Konsentrasi 50% (18,9 ± 2,4) Konsentrasi 25% (17,1 ± 1,0) Konsentrasi 12,5% (15,1 ± 1,6) Konsentrasi 6,25% (11,3 ± 0,6) Konsentrasi 3,125% (9,1 ± 0,5)

Oleh karena itu, hasil test Mann Withney dapat disimpulkan sebagai berikut : Kontrol Kontrol Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi + (35,1 – (0,0 50% 25% 12,5% 6,25% 3,125% ± 0,8) ± 0,0) (18,9 ± 2,4) (17,1 ± 1,0) (15,1 ± 1,6) (11,3 ± 0,6) (9,1 ± 0,5) BTB BB

BTB

BB

BB

BTB

BTB

BB

BB

BTB

BTB

BB

BB

BB

BB

BTB

BB

BB

BB

BB

BB

BTB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

*BB = Berbeda Bermakna BTB = Berbeda Tidak Bermakna

126

BTB


127

Hasil pengukuran absorbansi pada penentuan KHM dan KBM ekstrak etanol kulit batang pohon petai terhadap bakteri S. aureus Replikasi 1 Konsentrasi No. (%) 1. 0.782 2. 1.563 3. 3.125 4. 6.25 5. 12.5 6. 15.625 7. 18.750 8. 21.875 9. 25 10. 50

Optical Density (OD) Sebelum inkubasi Setelah inkubasi 0,2406 1,6082 0,4312 1,7579 1,5535 2,4662 2,5331 3,1652 3,6123 3,9133 3,9133 4,0163 3,9133 3,9990 3,9999 3,9999 3,9133 3,9133 3,9133 3,9133

ΔOD (Abs) 1,3676 1,3267 0,9127 0,6321 0,301 0,103 0,0857 0 0 0

Replikasi 2 Konsentrasi No. (%) 1. 0.782 2. 1.563 3. 3.125 4. 6.25 5. 12.5 6. 15.625 7. 18.750 8. 21.875 9. 25 10. 50

Optical Density (OD) Sebelum inkubasi Setelah inkubasi 0.2626 1.6232 0.3765 1.7348 0.4829 2.5033 1.6583 3.3928 2.4749 3.9373 3.2312 4.0393 3.4739 3.9992 3.8999 3.9922 3.7133 3.9122 3.6133 3.9234

ΔOD (Abs) 1.3606 1.3583 2.0204 1.7345 1.4624 0.8081 0.5183 0.0923 0.1989 0.3101

Replikasi 3 Konsentrasi No. (%) 1. 0.782 2. 1.563 3. 3.125 4. 6.25 5. 12.5 6. 15.625 7. 18.750 8. 21.875 9. 25 10. 50

Optical Density (OD) Sebelum inkubasi Setelah inkubasi 0.2506 1.6182 0.4455 1.7689 1.5676 2.4792 2.5876 3.2222 3.6987 3.9243 3.9426 4.0273 3.8382 3.9670 3.8473 3.9989 3.8778 3.9989 3.2456 3.9333

ΔOD (Abs) 1.3676 1.3234 0.9116 0.6346 0.2256 0.0847 0.1288 0.1516 0.1211 0.6877


BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi berjudul “ UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG POHON PETAI (Parkia speciosa Hassk.) TERHADAP Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ” ini memiliki nama lengkap Aloysius Ade Pratama. Penulis lahir di Karawang pada tanggal 3 April 1993 sebagai anak pertama dari dua bersaudara. Pendidikan formal yang pernah ditempuh penulis adalah TK Yos Sudarso Karawang (1998-1999), SD Yos Sudarso Karawang (1999-2005), SMP Yos Sudarso Karawang (2005-2008), SMA Yos Sudarso Karawang (2008-2011), kemudian tahun 2011 penulis melanjutkan kuliah di Fakultas Farmasi Sanata Dharma Yogyakarta. Selama kuliah penulis aktif dalam beberapa kegiatan dan organisasi antara lain sebagai anggota Divisi Unit Kegiatan Mahasiswa Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma periode 2013-2014, anggota Unit Kegiatan Fakultas Bidang Olahraga Sepak Bola (2012-2013), Panitia Road to School 2013 dan Pharmacy Performance 2013 sebagai koordinator seksi perlengkapan, asisten praktikum Kultur Jaringan periode 2013-2014, asisten praktikum Mikrobiologi periode 2014-2015 dan sebagai peserta dalam Program Kreativitas Mahasiswa Bidang Pengabdian Masyarakat yang lolos didanai oleh DIKTI (2014).

128

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents