PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIAT MERUPAKAN MERUPAKAN TINDAKAN TINDAKAN TIDAK TIDAK TERPUJI TERPUJI

UJI POTENSI ANTI FUNGI INFUSA DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav) TERHADAP Candida albicans ATCC 10231 SECARA IN VITRO

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.) Program Studi Ilmu Farmasi

Oleh : Widaningrum NIM : 048114028

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2008

i


SKRIPSI

UJI POTENSI ANTI FUNGI INFUSA DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum Ruiz & Pav) TERHADAP Candida albicans ATCC 10231 SECARA IN VITRO

Yang diajukan oleh : Widaningrum NIM : 048114028

Telah disetujui oleh

Pembimbing

Erna Tri Wulandari M. Si. Apt Tanggal : 4 Agustus 2008

ii


iii


HALAMAN PERSEMBAHAN

Kita tau sekarang, bahwa Allah turut bekerja dalam segala sesuatu untuk mendatangkan kebaikan bagi mereka yangmengasihi Dia, V yaitu bagi mereka yang terpanggil sesuai dengan rencana Allah ♥

=

(Roma 6 : 28) =

Yesterday is history •

♥

Tomorrow is a secret •

Today is a gift That’s why we call it present ♥

Kupersembahkan buat : Ibu-bapakku untuk semua doa yang mengalir untukku Adikku irfan Andrianto ♥My Lovely untuk segenap perhatian dan dukunganmu Teman-teman dan almamaterku

iv


v


PRAKATA

Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala anugerah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Uji Potensi Antifungi Infusa Daun Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) Terhadap Candida albicans ATCC 10231 Secara In Vitro”. Skripsi ini dibuat untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) pada Program Studi Farmasi di Universitas Sanata Dharma. Penulisan skripsi ini tidak mungkin terwujud tanpa adanya bimbingan, bantuan dan dukungan dari berbagai pihak, maka pada kesempatan ini, penulis mengucapkan terima kasih kepada: 1. Ibu Rita Suhadi, M.Si., Apt. Selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2. Ibu Erna Tri Wulandari M.si, Apt. selaku dosen pembimbing yang telah banyak meluangkan waktu, tenaga dan atas segala masukan serta sarannya dalam penyusunan skripsi ini. 3. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., selaku dosen penguji yang telah berkenan menguji dan memberikan banyak masukan. 4. Ibu Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt., selaku dosen penguji yang telah berkenan menguji dan memberikan banyak masukan dan saran. 5. Bapak Ign. Y Kristio B, M.Si., yang telah memberikan banyak masukan dalam identifikasi dan determinasi tumbuhan.

vi


6. Segenap dosen dan karyawan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, terima kasih atas bantuannya selama ini. 7. Romo Drs. P. Sunu Hardiyanto, S.J atas bantuan dan penjelasan dalam pengolahan data selama penyusunan skripsi ini. 8. Mas Sarwanto selaku laboran Laboratorium Mikrobiologi, mas Sigit dan mas Wagiran selaku laboran Laboratorium Farmakognosi Fitokimia yang telah banyak membantu di Laboratorium dalam penelitian skripsi ini. 9. Orang tua dan adikku irfan tersayang, atas segala dukungan dan doa yang mengantarku sampai pada hari ini. 10. Herman Yosef Wiwit Saptono Hadi yang selalu memberi dukungan, perhatian,

kasih sayang, cinta, dan waktu yang selalu ada untuk

mendengar keluh kesahku selama penyusunan skripsi ini. 11. Bapak Mujiman dan Bapak Manteb yang telah bersedia menyiapkan daun sirih merah untuk penelitian ini. 12. Siska, Ana, Rudi, Marta Setiani dan Riawan atas dukungan, canda tawa,dan waktu yang selalu kalian luangkan untuk mendengarkan semua keluh kesahku dan terima kasih untuk persahabatan kita yang indah. 13. Nur, Rina , Made, Amanda, Novi, Risa, Reni, Sisil, Fila, Novita cahyadi, Bosco, Fajar, Atin dan semua teman-teman angkatan 2004, terima kasih atas segala semangat dan kebersamaan kita yang indah. 14. Mas Erit dan mbak wewen atas bantuannya selama penelitian di Laboratorium dan kebersamaannya. 15. Semua pihak yang telah banyak membantu penyusunan skripsi ini.

vii


Atas segala bantuan yang telah diberikan selama ini, penulis mengucapkan banyak terima kasih. Penulis juga menyadari sepenuhnya penulisan skripsi ini tidak terlepas dari keterbatasan dan kekurangan penulis. Oleh karena itu, diharapkan kritik dan saran yang membangun demi penyempurnaan skripsi ini. Besar harapan penulis bahwa skripsi ini dapat bermanfaat bagi perbendaharaan dan perkembangan ilmu pengetahuan.

Penulis

viii


PERNYATAAN KEASLIAN KARYA

Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi yang saya tulis ini tidak memuat karya atau bagian karya orang lain, kecuali yang telah disebutkan dalam kutipan dan daftar pustaka, sebagaimana layaknya karya ilmiah.

Yogyakarta, 4 Agustus 2008 Penulis

Widaningrum

ix


INTISARI

Rebusan daun sirih merah dapat digunakan untuk mengobati penyakit keputihan baik kronis dan akut yang sulit disembuhkan (Sudewo, 2005). Candida albicans merupakan jamur yang merupakan agen penyebab keputihan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi antifungi infusa daun sirih merah terhadap Candida albicans ATCC 10231 dan mengetahui senyawa yang terkandung dalam infusa daun sirih merah. Penelitian ini merupakan jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola satu arah. Pengujian daya antifungi terhadap Candida albicans ATCC 10231 dengan difusi paper disk dan dilusi padat. Konsentrasi infusa yang digunakan adalah 80%, 60%, 40%. Daya antifungi ditunjukkan dengan adanya zona hambat disekitar paper disk dan tingkat kekeruhan pada metode dilusi padat. Data yang diperoleh dianalisis secara ANOVA one way dan dilanjutkan dengan uji Least Significant Difference (LSD) dengan taraf kepercayaan 95%. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa infusa daun sirih merah mempunyai aktivitas antifungi terhadap Candida albicans ATCC 10231. Analisis kualitatif secara KLT dan uji tabung menunjukkan infusa daun sirih merah mengandung flavonoid, tanin, alkaloid, dan minyak atsiri. Kata kunci: Daya anti fungi, Piper crocatum, Candida albicans ATCC 10231, infusa daun sirih merah.

x


ABSTRACT

Decoction of Piper crocatum can be used to cure Fluor Albus or Leukore (Sudewo, 2005). Candida albicans is a kind of fungus, the causal agent of fluor albus. The aim of this study is to find out the antifungus capacity potential of Piper crocatum toward Candida albicans ATCC 10231 and to find out the compounds of Piper crocatum infusa. This research is a pure experimental research method by using one way pattern complete random plan. The testing of antifungus capacity toward Candida albicans ATCC 10231 by using paper disk diffusion and solid dilusion. The concentrations of infusa used in this research are 80%, 60%, 40%. Antifungus capacity is shown by the blocked zone around the paper disk and the turbidity level on the solid dilusion method. The data is analyzed by using ANOVA one way and continued by Least Significant Different (LSD) test at α = 95%. The result of this experiment shows that Piper crocatum infusa has antifungus activity toward Candida albicans ATCC 10231. Qualitative analysis by using KLT and test tube. It shows that Piper crocatum infusa consist of flavonoid, tannin, alkaloid, and volatile oil. Key term : antifungus capacity, Piper crocatum, Candida albicans ATCC 10231, Piper crocatum leaf infusa.

xi


DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL.....................................................................................

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ...........................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN........................................................................

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ...................................................................

iv

PRAKATA....................................................................................................

v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .......................................................

viii

INTISARI......................................................................................................

ix

ABSTRACT....................................................................................................

x

DAFTAR ISI.................................................................................................

xi

DAFTAR TABEL.........................................................................................

xv

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................

xvi

DAFTAR LAMPIRAN……………………………………………………

xvii

BAB I PENGANTAR………………………………………………………

1

A. Latar Belakang…………………………………………………

1

1. Rumusan Masalah....................……………………………..

2

2. Keaslian Penelitian...................................................................

3

3. Manfaat penelitian…………………………………………...

3

B. Tujuan Penelitian……………………………………………...

3

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA………………………………………

4

A. Sirih Merah……………………………………………………

4

1. Keterangan Botani............................................................

4

2. Nama Daerah...................................................................

4

xii


3. Ekologi dan penyebaran..................................................

4

4. Kandungan Kimia.............................................................

5

5. Kegunaan...........................................................................

5

B. Uraian Tentang Kandungan Kimiawi...........................................

5

1. Alkaloid…………………………………………………....

5

2. Flavonoid…………………………………………………..

6

3. Tanin………………………………………………………

7

4. Minyak Atsiri………………………………………………

7

C. Candida albicans…………………………………………….. ..

8

1. Klasifikasi Candida albicans…………………………...

8

2. Diskripsi…..……………………………………………..

8

3. Keputihan……………………………………………….

8

D. Ketokonazole………………………………………………...

9

E. Penyarian………………….….. .. ...........................................

10

1. Definisi dan Ruang Lingkup Penyarian..........................

10

2. Metode-metode penyarian..............................................

11

F. Kromatografi Lapis Tipis.....…………………….……………

14

G. Uji Potensi Antifungi………………………………...............

15

1. Metode dilusi………………………………………….

15

2. Metode difusi agar……………………………………. .

15

H. Mekanisme Kerja Antifungi………..........................………… .

16

I. Media…………………………………….................................. .

17

J. Sterilisasi…………………………………………................… .

18

xiii


K. Landasan Teori……………………………………..........…....

19

L. Hipotesis…………………………………..................................

20

BAB III. METODOLOGI PENELITIAN......................................................

21

A. Jenis Penelitian dan Rancangan Eksperimental........................

21

B. Variabel Penelitian....................................................................

21

C. Definisi Operasional.................................................................

22

D. Bahan........................................................................................

23

E. Alat...........................................................................................

23

F. Tata Cara Penelitian..................................................................

24

1. Determinasi Tanaman......................................................

24

2. Pengumpulan Bahan.........................................................

24

3. Pembuatan infusa..............................................................

24

4. Uji Kandungan Kimia dengan Uji tabung.......................

25

5. Uji Kandungan Kimia dengan KLT................................

27

6. Uji Antifungi...................................................................

29

G. Tata Cara Analisa Data............................................................

32

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN....................................................

34

A. Determinasi tanaman...............................................................

34

B. Pengumpulan bahan.................................................................

34

C. Pengeringan dan pembuatan serbuk...........................................

35

D. Identifikasi kandungan senyawa aktif daun sirih merah dengan uji tabung........................................................................................ E. Ekstraksi daun sirih merah...........................................................

xiv

36 39


F. Identifikasi kandungan senyawa aktif daun sirih merah dengan Kromatografi Lapis Tipis.................................................................39 G. Hasil uji potensi antifungi............................................................... 51 H. Pengukuran KHM dan KHM dengan metode dilusi padat.............. 56 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN............................................................. 59 A. Kesimpulan..................................................................................... 59 B. Saran............................................................................................... 59 DAFTAR PUSTAKA……………………………………………………… … 60 LAMPIRAN………………………………………………………………........ 63 BIOGRAFI PENULIS…...…………………………………………………….. 78

xv


DAFTAR TABEL Halaman Tabel I.

Pembuatan tingkatan konsentrasi larutan uji dengan pengenceran............................................................................ 30

Tabel II. Hasil uji tabung infusa daun sirih merah………………………….... 37 Tabel III. Hasil identifikasi senyawa flavonoid dari infusa daun sirih merah dengan fase gerak n-butanol-asam asetat-air (4:1:5) ………………………. 41 Tabel IV. Hasil identifikasi senyawa alkaloid dari infusa daun sirih merah dengan fase gerak tertier butanol-kloroform-dietil amina (2:7:1)………….... 44 Tabel V. Hasil identifikasi senyawa Tanin dari infusa daun sirih merah dengan fase gerak n-butanol-asam asetat-air (5:1:4)………………………… 46 Tabel VI. Hasil identifikasi senyawa Minyak Atsiri dari infusa daun sirih merah dengan fase gerak toluena-etil asetat (93:7)…………………………. 49 Tabel VII. Hasil pengukuran daya hambat pada metode difusi paper disk……. 52 Tabel VIII. Uji Anova diameter zona hambat terhadap pertumbuhan Candida albicans ATCC 10231 …….....…. 54 Tabel IX. Hasil uji LSD diameter zona hambat terhadap pertumbuhan Candida albicans ATCC 10231 .............…… 55 Tabel X. Hasil pengukuran daya hambat pada metode dilusi padat…………… 56

xvi


DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Struktur kimia ketokonazole…………………………………….. 10 Gambar 2. Profil KLT senyawa flavonoid yang terkandung pada infusa daun sirih merah……………………….. 42 Gambar 3. Profil KLT senyawa alkaloid yang terkandung pada infusa daun sirih merah……………………….. 45 Gambar 4. Profil KLT senyawa tanin yang terkandung pada infusa daun sirih merah……………………….. 47 Gambar 5. Profil KLT senyawa minyak atsiri yang terkandung pada infusa daun sirih merah……………………….. 50

xvii


DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Hasil determinasi tanaman sirih merah (Piper crocatum)……… 63 Lampiran 2. Hasil determinasi jamur Candida albicans ATCC 10231 ……... 64 Lampiran 3. Foto tanaman sirih merah (Piper crocatum)……………………. 65 Lampiran 4. Foto daun sirih merah…………………………………………… 65 Lampiran 5. Foto hasil pengamatan difusi paper disk……………………...... 66 Lampiran 6. Foto hasil pengamatan tanpa perlakuan pada dilusi padat ........... 66 Lampiran 7. Foto hasil pengamatan kontrol positif pada dilusi padat..............

67

Lampiran 8. Foto hasil pengamatan kontrol negatif pada dilusi padat.............

67

Lampiran 9. Foto hasil pengamatan konsentrasi 80% pada dilusi padat..........

68

Lampiran 10. Foto hasil pengamatan konsentrasi 60% pada dilusi padat.......... 68 Lampiran 11. Foto hasil pengamatan konsentrasi 40% pada dilusi padat.......... 69 Lampiran 12. Foto hasil pengamatan KBM konsentrasi 80%..........................

69

Lampiran 13. Foto profil KLT senyawa flavonoid secara vis setelah disemprot AlCl3…………………………………………..

70

Lampiran 14. Foto profil KLT senyawa alkaloid setelah disemprot FeCl3….

71

Lampiran 15. Foto profil KLT senyawa tanin secara vis setelah disemprot Dragendorff…………………….

72

Lampiran 16. Foto profil KLT senyawa minyak atsiri secara vis setelah disemprot vanillin-H2SO4………………………….

73

Lampiran 17. Hasil perhitungan Rerata dan SD............................................

74

Lampiran 18. Hasil perhitungan Statistik......................................................

77

xviii


BAB I PENGANTAR

A. Latar belakang Indonesia merupakan negara yang subur dan kaya akan bahan alam. Banyak jenis tumbuh-tumbuhan yang hidup di Indonesia, termasuk tumbuhan yang dapat dimanfaatkan sebagai bahan obat. Salah satu tumbuhan yang dapat digunakan sebagai bahan obat misalnya adalah sirih merah. Masyarakat cenderung lebih memilih menggunakan tanaman obat. Hal ini dikarenakan merebaknya kecenderungan atau trend hidup kembali ke alam (back to nature) sehingga semakin menambah keingintahuan masyarakat tentang khasiat tanaman obat. Rebusan daun sirih merah dapat digunakan untuk menjaga kebersihan dan kesehatan organ kewanitaan. Selain itu, juga dapat digunakan untuk mengatasi keputihan akut yang sulit disembuhkan dan kronis (Sudewo, 2005). Keputihan dapat disebabkan karena adanya infeksi oleh fungi. Salah satu fungi yang menyebabkan keputihan adalah Candida albicans. Wanita Indonesia yang mengalami penyakit keputihan sangat besar, 75% wanita usia subur pasti mengalami keputihan minimal 1 kali dalam hidupnya. Angka ini berbeda tajam dengan Eropa yang hanya 25% saja. Wanita Indonesia banyak yang mengalami keputihan karena hawanya lembab sehingga mudah terinfeksi jamur Candida albicans, penyebab keputihan. Sedangkan di Eropa berhawa dingin (Anonim , 2007b). Indonesia beriklim tropis dan mempunyai

1


2

curah hujan yang tinggi. Hal inilah menyebabkan kelembaban udara tinggi sehingga dapat mempermudah pertumbuhan jamur. Dalam penelitian ini digunakan infusa daun sirih merah. Hal ini didasarkan pada penggunaan di masyarakat. Dalam mengobati keputihan mereka menggunakan daun sirih merah dengan cara direbus. Dimana prinsip penyarian dengan infusa hampir sama dengan penggunaan di masyarakat yakni dengan cara merebus. Penelitian ini dilakukan untuk melihat potensi aktivitas infusa daun sirih merah dalam mengatasi keputihan yang umumnya disebabkan oleh Candida albicans. Sehingga diharapkan masyarakat akan mendapat pengetahuan mengenai kemampuan infusa daun sirih merah dalam mengatasi keputihan. Selain itu, dapat memberikan pengetahuan dalam perkembangan ilmu kefermasian untuk mencari antifungi baru. Hal ini dimaksudkan karena fungi dapat membentuk sistem kekebalan baru pada antifungi-antifungi yang sudah ada sehingga dapat menyebabkan terjadinya resisten. 1. Rumusan masalah a. Apakah infusa daun sirih merah memiliki daya antifungi pada Candida albicans ATCC 10231? b. Apakah dalam infusa daun sirih merah terdapat kandungan flavonoid, alkaloid, tanin, dan minyak atsiri?


3

2. Keaslian penelitian Sejauh yang diketahui penulis, belum pernah dilakukan penelitian mengenai uji potensi antifungi infusa daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) terhadap Candida albicans ATCC 10231 secara in vitro. 3. Manfaat Penelitian a. Manfaat Teoritis Penelitian ini diharapkan mampu memberikan pengetahuan bahwa infusa daun sirih merah dapat digunakan sebagai antifungi terhadap Candida albicans ATCC 10231. b. Manfaat Praktis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kepada masyarakat tentang penggunaan infusa daun sirih merah untuk mengobati keputihan yang disebabkan oleh Candida albicans ATCC 10231.

B. Tujuan Penelitian a. Mengetahui daya antifungi infusa daun sirih merah terhadap Candida albicans ATCC 10231. b. Mengetahui keberadaan kandungan flavonoid, alkaloid, tanin, dan minyak atsiri dalam infusa daun sirih merah.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Sirih Merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) 1. Keterangan Botani Familia

: Piperaceae

Genus

: Piper

Spesies

: Piper crocatum (Anonim , 2007a)

2. Nama Daerah Sirih merah (Jawa) (Sudewo, 2005) 3. Ekologi dan Penyebarannya Sirih merah bisa tumbuh dengan baik di tempat yang teduh dan tidak terlalu banyak terkena sinar matahari. Jika terkena sinar matahari langsung pada siang hari secara terus-menerus warna merah daunnya bisa menjadi pudar, buram, dan kurang menarik (Sudewo, 2005). Sirih merah tidak dapat tumbuh subur di daerah panas. Sementara itu, di tempat berhawa dingin sirih merah dapat tumbuh dengan baik. Tanaman sirih merah akan tumbuh dengan baik jika mendapatkan 60-75% cahaya matahari (Sudewo, 2005).

4


5

4. Kandungan Kimia Daun sirih merah mengandung flavonoid, tanin, alkaloid, senyawa polifenolat dan minyak atsiri (Sudewo, 2005). 5. Kegunaan Sirih

merah

memiliki

efek

antikejang,

antiseptik,

analgetik,

antiketombe, antidiare, antidiabetes, mempertahankan kekebalan tubuh, merangsang saraf pusat dan daya pikir,

penghilang bengkak, pencegah

ejakulasi dini, hepatitis, TBC, luka yang sulit sembuh, kanker payudara dan kanker rahim, leukaemia, ambeien, jantung koroner, darah tinggi, dan asam urat. Daun sirih merah juga mampu mengatasi radang pada gusi, radang pada payudara, hidung berdarah, batuk berdarah, keputihan menahun (kronis) dan akut yang sulit disembuhkan (Sudewo, 2005).

B. Uraian Tentang Kandungan Kimiawi 1. Alkaloid Alkaloid adalah senyawa basa nitrogen organik yang terdapat dalam tumbuhan. Kebanyakan alkaloid menunjukkan aktivitas fisiologis tertentu sehingga metabolit sekunder ini banyak digunakan sebagai obat, sedangkan perannya bagi tumbuhan penghasilnya diantaranya sebagai racun untuk melindungi tumbuhan dari gangguan serangga dan hewan (Mursyidi, 1990). Alkaloid berasa pahit dan sukar larut dalam air tetapi mudah larut dalam kloroform, eter dan pelarut organik lain yang relatif nonpolar dan


6

tidak campur dengan air (Mursyidi, 1990). Alkaloid dapat dipisahkan dengan cara KLT dengan pelat berlapiskan silika gel dan dideteksi dengan pereaksi Dragendorff. Fase gerak yang digunakan n-butanol: asam asetat: air (4:1:5) v/v. Dan deteksi UV yang digunakan adalah 254 nm dan 365nm (Harborne, 1987). Pada UV 254 nm bercak akan berfluoresensi dan pada UV 365 nm bercak berwarna biru/ kuning. Sedangkan dengan pereaksi semprot Dragendorff akan terjadi warna coklat/ orange (Wagner, 1984) 2. Flavonoid Flavonoid adalah senyawa fenol alam yang terdapat dalam hampir semua tumbuhan dari bangsa Algae hingga Gymnospermae. Pada tumbuhan tinggi, flavonoid terdapat baik dalam bagian vegetatif maupun dalam bunga sebagai pigmen bunga (Robinson, 1991). Flavonoid terutama berupa senyawa yang larut dalam air. Flavonoid baik dalam bentuk aglikon maupun glikosida dapat diekstraksi dengan etanol 70%. Flavonoid mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi dan karena itu menunjukkan pita serapan kuat pada daerah spektrum UV dan spektrum tampak (Harborne, 1987). Flavonoid dapat dipisahkan dengan cara KLT dengan pelat berlapiskan selulosa. Pengembangan yang umum digunakan adalah BAW (n-butanol, asam asetat, air; 4:1:5 v/v) dan asam asetat 5%. Pembanding baku yang digunakan adalah rutin (Markham, 1988). Flavonoid dapat dideteksi dengan sinar UV dengan panjang gelombang 254 nm dan 365


7

nm. Pada deteksi UV 254 nm akan terjadi warna biru tua sedangkan pada UV 365 nm terjadi warna kuning, biru, atau hijau. Senyawa flavonoid mempunyai aktivitas biologi sebagai antihelmintik, diuretika, hipotensi, hipertensi, antihistamin, estrogenik, bakterisidal dan antifungi (Harborne, 1987). 3. Tanin Tanin terdapat luas dalam tumbuhan berpembuluh, dalam angiospermae terdapat khusus dalam jaringan kayu. Letak tanin terpisah dari protein dan enzim sitoplasma (Harborne, 1987). Tanin dapat larut dalam pelarut organik yang nonpolar seperti benzen, kloroform. Larutan tanin dalam air dapat diendapkan dengan penambahan asam mineral atau garam (Robinson, 1991). Campuran tanin yang terdapat dalam ekstrak kasar dapat dipantau dengan KLT, memakai fase pengembang butanol-asam asetat-air (5:1:4 v/v). Tanin dapat dideteksi dengan sinar UV pendek berupa bercak lembayung yang bereaksi positif dengan setiap pereaksi semprot FeCl3 dan memberikan warna biru kehitaman (Harborne, 1987). 4. Minyak Atsiri Minyak atsiri merupakan senyawa minyak yang berasal dari tumbuhan dan terdistribusi pada bagian-bagian tumbuhan seperti daun, bunga, akar, dan batang. Minyak atsiri disebut volatile oils karena mudah menguap pada suhu kamar dan disebut essential oils karena minyak dari tumbuhan dengan bau yang kuat. Minyak atsiri juga mudah teroksidasi


8

apabila terkena sinar matahari jadi warnanya akan semakin gelap karena teroksidasi. Minyak atsiri larut dalam lipid dan pelarut organik. Minyak atsiri dapat dipisahkan dengan cara KLT menggunakan pengembang toluena: etil asetat (93:7 v/v). Dan fase diam yang digunakan adalah silika gel. Untuk deteksinya digunakan vanilin- H2SO4. Pada deteksi UV 254 nm dan 365 nm akan berfluoresensi berwarna hijau (Wagner, 1984).

C. Candida Albicans 1. Klasifikasi Candida Albicans : Familia

: Moniliaceae

Genus

: Candida

Spesies

: Candida albicans (Frobisher, 1974)

2. Diskripsi Pada sediaan apus eksudat, Candida tampak sebagai yeast lonjong, bertunas, gram positif, berukuran 2-3 x 4-6 µm, dan sel-sel bertunas menyerupai hifa (pseudohifa) (Jawetz, Melnick & Adelberg, 1996). 3. Keputihan Keputihan atau dalam istilah medisnya disebut Flour albus (flour = cairan kental, albus = putih) atau Leukorhoea. Secara umum keputihan adalah keluarnya cairan kental dari vagina yang bisa saja terasa gatal, rasa panas atau perih, kadang berbau, atau tidak merasa apa-apa. Penyebabnya dapat secara


9

non patologis (stress, saat menjelang atau setelah menstruasi, rangsangan seksual saat wanita hamil) maupun secara patologis (Infeksi jamur, bakteri, dan parasit)(Anonim , 2007c). Vagina dalam keadaan normal tidak mengeluarkan cairan. Vagina mempunyai sistem perlindungan alam yaitu keasaman yang lebih tinggi dari jaringan lainnya. Didalam vagina juga terdapat mikroba pelindung yang menguntungkan

tubuh

kita,

yaitu

Doderleins

yang

hidup

menjaga

keseimbangan ekosistem vagina sekaligus membuat lingkungan bersifat asam (pH 3,8-4,5) (Anonim, 2007c).

D. Ketokonazole Ketokonazole merupakan obat antijamur pertama yang efektif pada mikosis sistemik yang dapat diberikan per oral. Absorpsi akan lebih baik selama atau setelah makan dibandingkan dengan keadaan puasa. Karena penyerapan melalui saluran cerna akan berkurang pada pH lambung yang tinggi (Katzung, 1995). Ketokonazole berupa serbuk berwarna putih. Ketokonazole tidak larut dalam air, sedikit larut dalam alkohol, larut dalam metil alkohol, sangat larut dalam metil klorida (Anonim, 1996).


10

N Cl N H2C O

Cl O

O H2 C

O

N

N

C

CH3

Gambar 1. Struktur kimia ketokonazole Agen antifungi azole mencegah sintesis ergosterol (komponen utama membrane plasma fungi) dengan menghambat sitokrom P450 enzim lanosterol 14α-demetilase. Pemberian azol pada fungi menyebabkan penghilangan ergosterol dan pengumpulan sterol 14α-demetilase. Sitokrom P450 dibutuhkan untuk membantu pembentukan ergosterol fungi. Dengan dihambatnya sitokrom P450 maka pembentukan ergosterol tidak terjadi (Nester, dkk, 2004).

E. Penyarian 1. Definisi dan Ruang Lingkup Penyarian Penyarian merupakan kegiatan penarikan kandungan kimia yang dapat larut dengan pelarut cair sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut. Dengan diketahuinya senyawa aktif yang terkandung akan mempermudah pemilihan pelarut dan cara ekstraksi yang tepat (Anonim, 2000). Secara umum penyarian dapat dibedakan menjadi infundasi, Maserasi, Perkolasi dan Destilasi uap (Anonim, 1986). Cairan penyari yang digunakan untuk pembuatan infusa adalah air. Air merupakan penyari universal yang bersifat polar. Keuntungan digunakan bahan penyari air adalah murah dan mudah diperoleh, stabil, tidak mudah


11

menguap dan tidak mudah terbakar, tidak beracun, alamiah. Sedangkan kerugian penggunaan air sebagai penyari adalah tidak selektif, sari dapat ditumbuhi kapang dan kuman serta cepat rusak, dan untuk pengeringan diperlukan waktu lama. Air merupakan tempat tumbuh bagi kuman, kapang, dan khamir (Anonim, 1986). 2. Metode-metode penyarian Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari simplisia nabati atau hewani dengan menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dari massa atau serbuk yang tersisa diperlukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Anonim, 2000). Ragam ektraksi yang tepat sudah tentu tergantung pada tekstur dan kandungan air bahan tumbuhan yang diekstraksi dan pada jenis senyawa yang diisolasi (Harborne, 1987). Ekstraksi dengan menggunakan pelarut dapat dibedakan menjadi : a. Cara dingin 1) Maserasi Maserasi merupakan cara penyarian sederhana. Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (Anonim, 2000). Maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari yang digunakan dapat berupa air, etanol, air-etanol. Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan dan peralatan yang digunakan


12

sederhana dan mudah diusahakan. Kerugian cara maserasi adalah pengerjaan yang lama dan penyariannya kurang sempurna (Anonim, 1986). 2) Perkolasi Perkolasi adalah cara penyarian yang dilakukan dengan mengalirkan cairan penyari melalui serbuk simplisia yang telah dibasahi. Prinsip dari perkolasi yaitu serbuk simplisia ditempatkan dalam suatu bejana silinder, yang bagian bawahnya diberi sekat berpori. Cairan penyari dialirkan dari atas ke bawah melalui serbuk tersebut. Cairan penyari akan melarutkan zat aktif sel-sel yang dilalui sampai mencapai keadaan jenuh (Anonim, 1986). b. Cara panas 1) Refluks Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperature titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk proses ekstraksi sempurna. 2) Soxlet Soxlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang umumnya dilakukan dengan alat khusus

sehingga terjadi

ekstraksi kontinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik.


13

3) Digesti Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada temperatur yang lebih tinggi dari temperature ruangan (kamar), yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-50°C. 4) Infusa Infusa adalah sediaan cair yang dibuat dengan mengekstrasi simplisia nabati dengan air pada suhu 90°C selama 15 menit. Infus yang mengandung bukan bahan berkhasiat keras, dibuat dengan menggunakan 10% simplisia (Anonim, 1995). Infusa merupakan proses penyarian yang umumnya digunakan untuk menyari zat kandungan aktif yang larut dalam air dari bahanbahan nabati. Proses infusa ini menghasilkan sari yang tidak stabil dan mudah tercemar oleh kuman dan kapang karena air bisa menjadi media pertumbuhan kuman dan kapang. Sari yang diperoleh dengan cara ini tidak boleh disimpan lebih dari 24 jam. Keuntungan dari infusa adalah cara pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana (Anonim, 1986). 5) Dekok Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (≥30°C) dan temperatur sampai titik didih air. 6) Destilasi Uap Destilasi uap adalah ekstraksi senyawa kandungan menguap (minyak atsiri) dari bahan (segar atau simplisia) dengan uap air


14

berdasarkan peristiwa tekanan parsial senyawa kandungan menguap dengan fase uap air dari ketel secara kontinu sampai sempurna dan diakhiri dengan kondesasi fase uap sempurna (senyawa kandungan menguap ikut terdestilasi) menjadi destilat air bersama senyawa kandungan yang memisah sempurna atau memisah sebagian (Anonim, 2000). Destilasi uap digunakan untuk menyari serbuk simplisia yang mengandung komponen yang mempunyai titik didih tinggi pada tekanan udara normal. Pada pemanasan biasa kemungkinan akan terjadi kerusakan zat aktifnya (Anonim, 1986).

F. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Kromatografi lapis tipis merupakan metode pemisahan komponenkomponen atas dasar perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fase diam dibawah gerakan pelarut pengembang atau pelarut pengembang campur. Kromatografi lapis tipis terdiri dari fase diam dan fase gerak. Fase diam yang umum digunakan dan banyak dipakai adalah silika gel yang dicampur dengan kalsium sulfat (gips) untuk menambah daya lengket partikel silika gel pada pelat. Adsorben lain yang banyak digunakan adalah alumina, kieselguhr, celite, serbuk selulosa, serbuk poliamida, kanji dan sephadex (Suharman dan Mulja, 1995). Fase gerak adalah medium angkut dan terdiri atas satu atau beberapa pelarut. Sampel bergerak di dalam fase diam, yaitu suatu lapisan berpori, karena ada gaya kapiler. Jarak pengembangan senyawa pada kromatogram biasanya dinyatakan dengan angka Rf atau hRf.


Rf =

15

Jarak titik pusat bercak dari titik awal Jarak garis depan dari titik awal (Stahl, 1985)

G. Uji Potensi Antifungi

1. Metode dilusi Prinsip dari cara ini adalah larutan uji diencerkan hingga diperoleh beberapa konsentrasi. Tiap konsentrasi larutan uji ditambahkan suspensi mikroorganisme ke dalam media. Dengan metode ini akan didapat hasil secara kuantitatif. KHM dan KBM dalam media dapat ditentukan dengan mengukur kekeruhan setelah inkubasi (Hugo & Russel, 1987). Kelebihan dari metode dilusi (pengenceran) adalah dapat diketahui KHM dan KBM yang dapat diamati dari tidak adanya pertumbuhan fungi uji pada media kultur (Bonang & Koeswardono, 1982). 2. Metode difusi agar Pengukuran potensi antifungi menggunakan metode difusi agar yaitu metode yang mengukur aktivitas antifungi berdasarkan pengamatan luas daerah hambatan pertumbuhan fungi uji karena berdifusinya obat dari titik awal pemberian ke daerah difusi (Jawetz dkk, 1996). Metode difusi dikenal dengan beberapa cara yaitu : a. Cara Kirby-Bauwer Prinsip kerja metode difusi berdasarkan kemampuan obat untuk berdifusi kedalam media tempat mikroba uji dapat berkembangbiak secara


16

optimal, dengan meletakkan cakram kertas atau paper disk yang mengandung antibiotik atau zat uji diatas agar. Besarnya daerah difusi sesuai dengan pertumbuhan atau hambatan mikroba uji dan sebanding dengan kadar yang diberikan (Hugo dan Russel, 1987). b. Cara tuang (pour plate) Metode ini dilakukan dengan cara menginokulasikan suspensi mikroba uji ke tabung reaksi yang mengandung agar cair yang telah didinginkan pada suhu 45°C. Isi dalam tabung reaksi diaduk untuk memencarkan mikroba uji ke seluruh media. Campuran dituang ke dalam cawan Petri steril dan dibiarkan menjadi padat (Volk dan Wheeler, 1990). c. Cara sumuran Penyiapan dilakukan seperti cara Kirby-Bauwer. Pada agar yang telah ditanami mikroba uji, dibuat sumuran dengan garis tengah tertentu. Ke dalam sumuran diberi larutan uji dan diinkubasikan pada 37°C selama 18-24 jam. Kemudian hasilnya dibaca dengan mengukur daerah hambatan yang terbentuk (Ristanto, 1989).

H. Mekanisme Kerja antifungi Mekanisme kerja antifungi dibagi menurut target/ sasaran dari agen, yakni: 1. Merusak membran sel Obat-obat golongan antibiotik poliena terikat kuat ke membran sel jamur dan berikatan dengan ergosterol tertentu serta akan mengganggu sifat


17

permeabilitas dan transport membran itu. Hal ini akan menyebabkan hilangnya makromolekul serta ion dari sel serta menghasilkan kerusakan tak reversible. 2. Penghambatan Sintesis DNA Sel akan rentan bila ia merubah flusitosin menjadi fluorourasil yang akhirnya menghambat timidilat sintase dan sintesis DNA. 3. Penghambatan biosintesis lipid Imidazole antifungi sintetik ini menghambat jamur oleh penghambatan biosintesis lipid jamur terutama ergosterol didalam membran sel, dan mungkin dengan mekanisme tambahan (Katzung, 1995).

I. Media Media adalah suatu bahan atau substrat yang mengandung unsur-unsur makanan, dan digunakan untuk menumbuhkan dan mengembangkan mikroba. Unsur-unsur makanan tersebut dapat berupa garam-garam anorganik dan senyawa-senyawa organik seperti protein, pepton, asam-asam amino, dan vitamin yang diperlukan untuk pertumbuhan. Berdasarkan konsistensinya, media dapat dibagi menjadi 3 macam yaitu: 1. Media padat, dengan contoh media kentang, nasi, wortel. 2. Media cair, yaitu media yang berbentuk cair, misalnya media susu, nutrien broth (kaldu daging), glukosa, pepton. 3. Media semi padat (semi solid media), yaitu media yang dapat berbentuk padat, apabila suhunya dingin dan dapat berbentuk cair apabila suhunya panas.


18

Media ini merupakan media yang dibubuhi atau ditambah agar-agar sebgai bahan pemadat (Tarigan, 1988).

J. Sterilisasi Yang dimaksud dengan sterilisasi dalam mikrobiologi adalah suatu proses untuk mematikan semua mikroorganisme yang terdapat pada atau didalam suatu benda baik alat maupun bahan-bahan. Ada dua macam cara utama yang umum dipakai dalam sterilisasi yaitu sterilisasi fisik dan sterilisasi kimia. Bila panas digunakan bersama-sama dengan uap air maka disebut sterilisasi basah atau lembab, tetapi bila tanpa kelembaban maka disebut sterilisasi panas kering atau sterilisasi kering. 1. Sterilisasi Fisik a. Sterilisasi basah Sterilisasi basah biasanya dilakukan di dalam autoklav atau sterilisator uap yang mudah diangkat dengan menggunakan uap air jenuh bertekanan dengan suhu 121°C selama 15 menit. Sterilisasi basah dapat digunakan untuk mensterilkan bahan apa saja yang dapat tembus uap air dan tidak rusak bila dipanaskan dengan suhu yang berkisar 110°C dan 121°C. Bahan-bahan yang biasa disterilkan dengan cara ini antara lain medium biakan, air suling, peralatan laboratorium, biakan yang akan dibuang, medium tercemar, dan bahan-bahan dari karet (Hadioetomo, 1993).


19

b. Sterilisasi kering Pemanasan kering biasanya untuk alat-alat gelas dengan suhu 160°C-180°C selama 1,5-2 jam dengan sistem udara statis. Proses sterilisasi akan lebih cepat jika dilengkapi dengan sirkulasi udara panas (Fardiaz, 1992). c. Sterilisasi dengan penyaringan Proses sterilisasi lain yang juga dilakukan pada suhu kamar ialah penyaringan. Dengan cara ini larutan atau suspensi dibebaskan dari semua mikroorganisme hidup dengan cara melakukannya lewat saringan dengan ukuran pori yang sedemikian kecil (0,45 atau 0,22µ) sehingga bakteri dan sel-sel yang lebih besar tertahan diatasnya, sedangkan filtratnya ditampung didalam wadah yang steril (Hadioetomo, 1993). 2. Sterilisasi Kimia Pelaksanaanya dilakukan dengan menggunakan gas atau cairan pembunuh kuman yang khusus diterapkan untuk bahan yang tidak tahan pemanasan, sediaan atau barang yang jika dipanaskan sekali atau berulang kali sedikit banyak akan mengalami perubahan. Sterilisasi secara kimia dapat menggunakan etilen oksida, asam perasetat, dan formaldehide (Hadioetomo, 1993).

K. Landasan Teori Candida albicans adalah anggota flora normal selaput lendir saluran pernapasan, saluran cerna dan genitalia wanita. Jamur ini dapat menyebabkan


20

penyakit progresif pada penderita yang lemah atau kekebalan menurun. Penyakit oleh jamur ini dapat diobati dengan obat yang bersifat fungisida. Contohnya adalah ketokonazole, imidazole. Infundasi merupakan proses penyarian yang umumnya digunakan untuk menyari zat kandungan aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati (Anonim, 1986). Penyarian ini dilakukan dengan mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90°C selama 15 menit sambil sesekali diaduk (Anonim, 2000). Dengan penyarian secara infusa, senyawa flavonoid, alkaloid, tanin, dan minyak atsiri dapat larut dalam cairan penyari. Karena flavonoid mudah larut dalam air. Tanin termasuk dalam senyawa fenol sehingga tanin dapat larut pula dalam air (Harborne, 1987). Alkaloid dapat berada dalam bentuk garam sehingga alkaloid kemungkinan dapat larut juga dalam air. Selain itu, minyak atsiri kemungkinan juga dapat larut dalam air karena minyak atsiri juga dapat larut dalam pelarut polar (Robinson, 1995). Menurut Sudewo (2005), tanaman sirih merah mengandung flavonoid, alkaloid, tanin, dan minyak atsiri. Flavonoid berfungsi sebagai antifungi dan mencegah infeksi atau luka. Alkaloid dapat digunakan sebagai antifungi. Tanin berfungsi sebagai antifungi dan bersifat sebagai bakteriostatik. Sedangkan minyak atsiri juga dapat berfungsi menghambat pertumbuhan jamur (Robinson, 1995).

L. Hipotesis Infusa daun sirih merah diduga memiliki aktivitas antifungi terhadap Candida albicans.


BAB III METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis Penelitian dan Rancangan Eksperimental Penelitian tentang uji potensi infusa daun sirih merah terhadap Candida albicans ATCC 10231

ini termasuk penelitian eksperimental murni dengan

rancangan acak lengkap pola searah. Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia dan Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

B. Variabel Penelitian a. Variabel bebas Infusa daun sirih merah dengan berbagai macam konsentrasi. b. Variabel tergantung Diameter zona hambat, KHM, KBM. c. Variabel pengacau terkendali Media pertumbuhan mikroba uji, waktu inkubasi 24 jam, suhu inkubasi 37°C, kepadatan suspensi Candida albicans ATCC 10231 setara dengan larutan standar Mc Farland II (6.108 CFU/ml), volume larutan uji, suhu pengeringan daun sirih merah 50oC, dan tempat tumbuh tanaman. d. Variabel pengacau tak terkendali Umur tanaman.

21


22

C. Definisi Operasional 1. Potensi antifungi adalah kemampuan infusa daun sirih merah untuk menghambat pertumbuhan atau membunuh jamur Candida albicans ATCC 10231. 2. Candida albicans ATCC 10231 adalah fungi uji gram positif yang diperoleh dari Balai Laboratorium Kesehatan Yogyakarta. 3. Infusa daun sirih merah konsentrasi 100% adalah sediaan yang berbentuk cair yang dibuat dengan mengekstraksi serbuk daun sirih merah kering sebanyak 10 gram dalam aquadest 100 ml pada suhu 90°C selama 15 menit. 4. Infusa daun sirih merah konsentrasi 80%, 60%, dan 40% adalah sediaan yang berbentuk cair yang dibuat dengan melakukan pengenceran dari konsentrasi 100% dengan memipet sebanyak 0,8ml; 0,6ml; dan 0,4ml infusa daun sirih merah lalu ditambahkan aquadest sampai diperoleh volume 10 ml. 5. Zona hambat adalah zona jernih yang sama sekali tidak dijumpai pertumbuhan Candida albicans ATCC 10231 atau zona yang masih memperlihatkan pertumbuhan Candida albicans ATCC 10231 dalam jumlah sedikit. 6. KHM adalah konsentrasi minimal dari infusa daun sirih merah yang mampu menghambat pertumbuhan Candida albicans ATCC 10231. 7. KBM adalah konsentrasi minimal dari infusa daun sirih merah yang mampu membunuh Candida albicans ATCC 10231.


23

D. Bahan 1. Daun sirih merah yang diperoleh dari daerah Pekunden Rt.02/Rw.09, Ngluar, Magelang. 2. Kultur murni Candida albicans ATCC 10231 yang diperoleh dari Balai Laboratorium Kesehatan Yogyakarta. 3. Medium SDA, aquadest steril untuk penyari, injeksi ketokonazole, metanol, selulosa, silika gel GF 254, n-butanol, asam asetat, air, kloroform, toluene, eter, etanol, natrium karbonat, tertier butanol, dietil amina, toluena, etil asetat, pereaksi Lieberman-Burchard. Pereaksi semprot : Dragendorff, Mayer, dan vanilin-asam sulfat. Pembanding : asam tanat, rutin, HCl, NaCl 2%, besi (III) klorida, AlCl3.

E. Alat Panci, inkubator (Memmert, type BE 40, GmbH+Co KG-D91126, Swahaban FRG, Germany), Mycrobiologycal Safety Cabinet (MSC), Rotary evaporator (Janke & Kunkel, Ika-labotechnik, RV05-ST), autoklaf (Metode KT40, ALP co, Ltd, Hamurashi, Tokyo, Japan), lampu UV 254 nm dan UV 365 nm, oven (Memmert, Germany), penyerbuk (Retsch bv), Electric Sieve Shaker (IML Indotest Multi LAB), Laminar Air Flow (LAF), Lemari pendingin (Sharp), Glass beaker (pyrex), cawan petri, tabung reaksi (pyrex), Erlenmeyer (pyrex), flakon, pipet volume (pyrex), batang pengaduk, gelas ukur (pyrex), jarum ose, Mikropipet (Ependrof-Netler-Hinz), kertas payung, allumunium foil, kompor listrik, vortex, spreader, jangka sorong (Vernier caliper, Shanghai, China), lampu Bunsen, plat


24

KLT, pipa kapiler, penyemprot reagen tampak, bejana, neraca analitik (Mettler PC 2000). F. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi tanaman Determinasi tanaman sirih merah dilakukan oleh Laboratorium Farmakognosi, Bagian Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Gajah Mada Yogyakarta. Determinasi dilakukan terhadap tanaman segar dengan menggunakan acuan Flora of Java (Backer dan Van den Brink, 1965). 2. Pengumpulan bahan Bahan yang digunakan berupa daun sirih merah, diambil dari tanaman sirih merah di daerah Pekunden Rt.02/Rw.09, Ngluar, Magelang pada bulan November. Daun yang diambil adalah daun yang tidak terlalu muda ataupun terlalu tua. Daun tersebut dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran-kotoran yang melekat. Daun dikeringkan dalam oven dengan suhu 50°C. Setelah kering, lalu diserbuk dengan blender sampai halus dan diayak menggunakan ayakan. 3. Pembuatan Infusa Infusa dibuat dengan mengekstraksi sebanyak 10 gram serbuk kering daun sirih merah lalu dimasukkan dalam panci dengan air sebanyak 100 ml, panaskan diatas tangas air selama 15 menit terhitung mulai suhu mencapai 90°C sambil sekali-kali diaduk. Kemudian setelah dingin diserkai melalui kain flannel

lalu ditambahkan air secukupnya melalui ampas hingga

diperoleh volume infusa yang dikehendaki kurang lebih 25 ml.


25

4. Uji Kandungan Kimia dengan Uji Tabung a. Uji Alkaloid Infusa dari serbuk daun sirih merah sebanyak 2 gram dipanaskan dalam tabung reaksi besar dengan asam klorida 1% 10 ml selama 30 menit diatas penangas air mendidih. Larutan disaring dengan kapas ke dalam tabung reaksi A dan B sama banyak. Larutan A dibagi dua sama banyak, lalu kedalam larutan A-1 ditambah dengan pereaksi Dragendorf (3 tetes) dan larutan A-2 ditambah pereaksi Mayer (3 tetes). Terbentuknya endapan dengan kedua pereaksi tersebut menunjukkan adanya alkaloid b. Uji Tanin Infusa dari serbuk daun sirih merah sebanyak 2 gram dipanaskan dengan air sebanyak 10 ml selama 30 menit diatas tangas air. Disaring dan filtrat sebanyak 5ml ditambahkan larutan natrium klorida 2% sebanyak 1 ml. Bila terjadi suspensi atau endapan disaring melalui kertas saring. Kemudian filtrat ditambah larutan gelatin 1% sebanyak 5 ml. Terbentuknya endapan menunjukkan adanya tanin. c. Uji flavonoid Infusa dari serbuk daun sirih sebanyak 2 gram dipanaskan dengan air sebanyak 10 ml selama 10 menit diatas penangas air mendidih. Kemudian disaring panas-panas, setelah dingin ditambah 3 tetes pereaksi besi (III) klorida. Terjadinya warna hijau-biru menunjukkan adanya flavonoid.


26

d. Uji Minyak Atsiri Serbuk daun sirih merah ditambahkan 20 ml eter, kocok dan disaring. Kemudian filtrat dikeringuapkan. Bila sedikit berbau aromatik, larutan residu dengan sedikit etanol maka uapkan lagi sampai kering. Bila terjadi bau aromatik spesifik, menunjukkan adanya minyak atsiri. e. Uji Antrakinon Infusa daun sirih merah dididihkan selama 2 menit dengan Kalium hidroksida 0,5N (10ml) dan larutan hidrogen peroksida (1ml). Setelah dingin suspensi disaring melalui kapas. Filtrat (5ml) ditambah asam asetat (10 tetes) sampai pH 5, lalu ditambahkan toluena (10ml). Lapisan atas (5ml) dipisahkan dengan cara dipipet dan dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian ditambah kalium hidroksida 0,5N, warna merah yang terjadi pada lapisan air (basa) menunjukkan adanya senyawa antrakinon. f. Uji Kardenolida Infusa dari serbuk daun sirih sebanyak 2 gram dipanaskan dengan air sebanyak 10 ml selama 10 menit diatas penangas air mendidih. Kemudian ditambah asam 3,5-dinitratbenzoat (0,4ml) dan kalium hidroksida 1N (0,6ml) dalam metanol. Terjadinya warna biru-ungu menunjukkan adanya kardenolida (glikosida jantung). Untuk penegasan lebih lanjut, filtrat yang lain (2ml) dicampur dengan kloroform (2 ml). Lapisan atas diambil dengan pipet, lapisan bawah ditambah asam 3,5dinitrobenzoat (0,5 ml). Terjadinya warna biru-ungu menunjukkan adanya kardenolida.


27

g. Uji Saponin Tambahkan air suling (10ml) kedalam tabung reaksi yang berisi serbuk (100mg), tutup dan kocok kuat-kuat selama 30 detik. Biarkan tabung dalam posisi tegak selama 30 menit. Apabila buihh setinggi kurang lebih 3 cm dari permukaan cairan, maka menunjukkan adanya saponin. Uji lain dilakukan dengan menggunakan pipa kapiler (diameter 1 mm, panjang 12,5 cm). Larutan hasil pemanasan serbuk daun sirih merah (2 g) dengan air (10 ml) selama 30 menit diatas tangas air, setelah disaring, filtrat dimasukkan kedalam pipa kapiler penuh-penuh. Kapiler diletakkan dalam posisi tegak (vertikal), kemudian cairan dibiarkan mengalir bebas. Tinggi cairan tertinggal dibandingkan dengan tinggi air suling yang diperlakukan sama. Bila tinggi cairan yang diuji separo atau kurang dari tinggi air suling maka adanya saponin akan diperhitungkan. 5. Uji Kandungan Kimia dengan Kromatografi Lapis Tipis a. Uji Flavonoid Proses pemisahan dilakukan dengan menotolkan infusa daun sirih merah dengan konsentrasi 100% menggunakan pipa kapiler berukuran 5μl pada lempeng KLT. Fase diam yang digunakan adalah selulosa, fase gerak n-butanol: asam asetat: air (4:1:5) v/v. Sampel yang digunakan adalah infusa daun sirih merah dan pembandingnya rutin. Selanjutnya adalah pengelusian lempeng dengan jarak rambat 10 cm. Pengamatan dilakukan di bawah sinar UV 254 nm dan 365 nm dan dideteksi dengan pereaksi AlCl3. Harga Rf dan warna bercak uji dibandingkan dengan harga rf dan


28

warna bercak pembanding. Adanya harga rf dan warna bercak yang hampir serupa menunjukkan bahwa

bahan uji mengandung senyawa

Flavonoid. b. Alkaloid Proses pemisahan dilakukan dengan menotolkan infusa daun sirih merah dengan konsentrasi 100% menggunakan pipa kapiler berukuran 5μl pada lempeng KLT. Fase diam yang digunakan adalah silika gel GF 254, fase gerak tertier butanol: kloroform: dietil amina (2:7:1) v/v. Sampel yang digunakan infusa daun sirih merah dan pembandingnya skopolamin. Untuk pembuatan pembanding digunakan 5 mg skopolamin dalam 10 ml metanol. Selanjutnya adalah pengelusian lempeng dengan jarak rambat 10 cm. Pengamatan dilakukan di bawah sinar UV 254 nm dan 365 nm dan dideteksi dengan pereaksi Dragendorff. Harga Rf dan warna bercak uji dibandingkan dengan Rf dan warna bercak pembanding. Adanya harga Rf yang hampir serupa menunjukkan bahwa bahan uji mengandung senyawa alkaloid. b. Uji Tanin Proses pemisahan dilakukan dengan menotolkan infusa daun sirih merah dengan konsentrasi 100% menggunakan pipa kapiler berukuran 5μl pada lempeng KLT. Fase diam yang digunakan adalah silika gel GF 254, fase gerak n-butanol: asam asetat: air (5:1:4) v/v. Pembanding yang digunakan adalah asam tanat 0,05% dalam etanol 70%.


29

Selanjutnya adalah pengelusian lempeng dengan jarak rambat 10 cm. Pengamatan dilakukan di bawah sinar UV 254 nm dan 365 nm dan dideteksi dengan pereaksi FeCl3. Harga Rf dan warna

bercak uji

dibandingkan dengan Rf dan warna bercak pembanding. Adanya harga Rf yang hampir serupa menunjukkan bahwa bahan uji mengandung senyawa tanin. c. Minyak atsiri Proses pemisahan dilakukan dengan menotolkan infusa daun sirih merah menggunakan pipa kapiler berukuran 5μl pada lempeng KLT. Fase diam yang digunakan adalah silika gel GF 254, fase gerak toluena: etil asetat (93:7) v/v. Pembanding yang digunakan adalah eugenol. Selanjutnya adalah pengelusian lempeng dengan jarak rambat 10 cm. Pengamatan dilakukan di bawah sinar UV 254 nm dan 365 nm dan dideteksi dengan pereaksi vanillin-asam sulfat pekat. Harga Rf dan warna bercak uji dibandingkan dengan Rf dan warna bercak pembanding. Adanya harga Rf dan warna bercak yang hampir sama menunjukkan bahwa bahan uji mengandung senyawa minyak atsiri. 6. Uji antifungi a. Pembuatan larutan uji Larutan uji dibuat dari konsentrasi 100% yakni 10g serbuk daun sirih merah dalam aquadest 100ml. Selanjutnya dibuat konsentrasi larutan 80%, 60%, dan 40% dengan melakukan


30

pengenceran sampai 10 ml dengan menggunakan aquadest. Sebagai kontrol positif digunakan ketokonazole dan kontrol negatif Aquades. Tabel I. Pembuatan tingkatan konsentrasi larutan uji dengan pengenceran Konsentrasi Volume infusa (ml) Pelarut aquadest infusa (%) (ml) 80 60 40

8 6 4

2 4 6

b. Sterilisasi alat-alat dan bahan Alat-alat seperti cawan petri, tabung reaksi, erlenmeyer, dan medium SDA yang akan digunakan untuk pemeriksaan aktivitas antifungi disterilisasi dengan autoklaf, pada suhu 121°C selama 15 menit. c. Pembuatan media SDA Sebanyak 65 gram SDA dimasukkan kedalam erlenmeyer, ditambahkan dengan 1 liter aguadest dan dipanaskan hingga mendidih. Kemudian ditutup dengan menggunakan kapas, dan dimasukkan kedalam autoklaf untuk disterilkan pada suhu 121°C selama 15 menit dengan tekanan 1 atm. d. Pembuatan stok Candida albicans ATCC 10231 Media SDA yang sudah steril dicairkan kemudian dituang dalam tabung reaksi dan dimiringkan, biarkan hingga membeku. Setelah membeku diambil 1 ose fungi dari pertumbuhan dan diinokulasikan secara streak plate. Inkubasi dalam inkubator selama 24 jam pada suhu 37°C dan digunakan sebagai stok.


31

e. Pengujian potensi antifungi dengan metode difusi paper disk Dalam Laminar Air Flow Work Station, hasil inkubasi jamur selama 24 jam dalam media cair diambil 0,1ml menggunakan pipet volume dan diteteskan kedalam cawan petri yang berisi SDA yang telah dibekukan dan diratakan dengan menggunakan spreader. Selanjutnya didiiamkan selama kurang lebih 15 menit, kemudian dibagi menjadi lima bagian dan masing-masing bagian diberi paper disk (Anonim, 1993). Setiap paper disk pada media yang telah diinokulasi diteteskan 10µl infusa dengan kadar masing-masing 80%, 60%, 40%. Sebagai kontrol negatifnya digunakan aquadest dan kontrol positifnya adalah ketokonazole. Media yang telah ditetesi infusa dan kontrol diinkubasikan selama 24 jam pada suhu 37˚C. Hasil dibaca dengan luas daerah hambatan (Jawetz dkk, 1996). Lalu diukur dengan menggunakan penggaris. Pengulangan pengukuran masing-masing diameter sebanyak lima kali. f. Pengujian potensi antifungi dengan metode dilusi padat Diambil 1 ose fungi Candida albicans ATCC 10231 dari stok fungi, kemudian disuspensikan kedalam 5 ml media cair lalu campur rata dan inkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Hasil suspensi dibandingkan dengan Standard Mc. Farland II (6.10 8 CFU/ml) ingá kekeruhannya sama lalu diambil 0,5 ml.


32

Kemudian 0,5 ml infusa daun sirih merah dengan kadar tertentu ditambahkan dalam 0,5 ml suspensi fungi dan dicampur rata dengan 15 ml SDA yang dicairkan menggunakan vortex. Setelah itu, dituang dalam cawan petri secara pour plate. Selanjutnya diinkubasikan selama 24 jam pada suhu 37°C. Setelah masa inkubasi, kekeruhan yang menunjukkan pertumbuhan Candida albicans ATCC 10231 dalam media diamati dan diberi penilaian menggunakan notasi (+) untuk media yang tampak keruh. Hal ini berlaku untuk tiap infusa daun sirih merah, kontrol negatif (aquades) dan kontrol positif (ketokonazole). Hasil pengamatan dianalisis untuk mendapatkan Konsentrasi Hambat Minimun (KHM) senyawa uji dengan mengamati kekeruhannya (Hugo & Russel, 1987). Setelah ditentukan Kadar Hambat Minimum (KHM), kemudian dilakukan streak plate pada media SDA yang telah dibekukan dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C. Jika sudah tidak terdapat pertumbuhan jamur uji pada media maka konsentrasi tersebut menunjukkan KBMnya (Konsentrasi Bunuh Mikroba) (Larry & Judy, 1996).

G. Tata Cara Analisa Data Penentuan daya antifungi dengan metode difusi agar ditunjukkan dengan adanya zona hambat di sekitar paper disk. Besarnya diameter zona hambat yang terbentuk dianalisis dengan Kolmogorof Smirnov Z untuk mengetahui distribusinya. Selanjutnya dilakukan analisis dengan Anova one way dan


33

dilanjutkan dengan uji LSD dengan taraf kepercayaan 95 %. Sedangkan pada metode dilusi, dengan membandingkan kekeruhan dengan kontrol negatif sehingga akan diperoleh Konsentrasi Hambat Minimal dan Konsentrasi Bunuh Minimal. Analisis hasil KLT dilakukan dengan menghitung harga Rf dari bercak yang timbul dan mengamati warna bercak tersebut. Kemudian nilai Rfnya dibandingkan dengan Rf pembanding.


BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi Tanaman Langkah ini dilakukan dengan tujuan untuk menghindari kesalahan dan untuk memastikan bahwa tanaman yang diteliti benar-benar merupakan tanaman yang diharapkan, yakni tanaman sirih merah dengan spesies Piper crocatum Ruiz & Pav. Berdasarkan penelusuran secara makroskopik, menurut Sudewo (2005) tanaman sirih merah tumbuh menjalar seperti halnya sirih hijau. Batangnya bulat berwarna hijau keunguan dan tidak berbunga. Daunnya bertangkai membentuk jantung dengan bagian ujung meruncing, bertepi rata, dan permukaannya mengkilap atau tidak berbulu. Panjang daunnya bisa mencapai 15-20 cm. Warna daun bagian atas hijau bercorak putih keabu-abuan. Bagian bawah daun berwarna merah hati cerah. Daunnya berlendir, berasa sangat pahit, dan beraroma wangi khas sirih. Batangnya beruas dengan jarak buku 5-10 cm. Di setiap buku tumbuh bakal akar. Hal ini sesuai dengan tanaman sirih merah yang digunakan dalam penelitian.

B. Pengumpulan Bahan Daun sirih merah yang digunakan dalam penelitian ini diambil pada bulan November dan dilakukan pada pukul 09.00WIB. Pengambilan bahan dari satu tanaman dengan lokasi tumbuh yang sama dan dalam sekali waktu

34


35

pemanenan saja untuk menghindari adanya perbedaan kualitas kandungan kimia dalam daun. Dipilih daun yang tidak terlalu muda atau terlalu tua, sehingga diharapkan mempunyai kandungan senyawa aktif yang optimal. Daun yang dikumpulkan dibersihkan dari debu, serangga, serta benda asing yang terbawa saat pengumpulan daun sirih merah.

C. Pengeringan dan Pembuatan Serbuk Sebelum dilakukan pengeringan daun terlebih dahulu dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran-kotoran yang melekat. Pengeringan dilakukan untuk menghentikan reaksi enzimatik, menghindari pembusukan dan penjamuran serta mengurangi kadar air yang terkandung karena air merupakan media yang baik untuk pertumbuhan mikroorganisme karena dapat menguraikan zat kimia yang terkandung. Hal ini dapat menyebabkan khasiat dari daun sirih merah menjadi berkurang. Daun dikeringkan dalam oven dengan suhu 50°C. Pengeringan dihentikan jika ditandai dengan mudah patahnya simplisia jika diremas dengan tangan. Simplisia yang telah kering kemudian diserbuk menggunakan blender. Menurut Anonim (1986), tujuan dari penyerbukan adalah untuk mendapat serbuk yang halus sehingga dapat mempermudah proses penyarian. Karena daun dalam bentuk serbuk memiliki luas permukaan yang lebih besar dibandingkan dengan daun dalam bentuk utuh. Bila permukaan serbuk makin luas maka penyarian akan bertambah baik karena simplisia yang bersentuhan dengan cairan penyari makin luas.


36

Selanjutnya bahan diayak menggunakan ayakan berukuran 24 mesh. Digunakan ayakan dengan ukuran 24 mesh karena dengan ayakan ini didapatkan ukuran serbuk yang tidak terlalu besar ataupun terlalu halus. Menurut Anonim (1995), dengan ayakan ukuran 24 mesh serbuk yang dapat melalui ayakan mempunyai ukuran diameter maksimal 0,173 mm. Serbuk yang terlalu halus akan memberikan kesulitan pada proses penyarian, karena butir-butir halus tadi akan membentuk suspensi yang sulit dipisahkan dengan hasil penyarian. Jadi hasil penyarian tidak murni lagi tetapi tercampur dengan partikel-partikel halus tadi. Berat basah daun sebelum dikeringkan adalah 700 gram, berat kering 128,180 gram dan berat serbuk kering yang diperoleh 128 gram.

D. Identifikasi Kandungan Senyawa Aktif Infusa Daun Sirih Merah dengan Uji Tabung Uji tabung dilakukan untuk mengetahui kandungan kimia suatu tumbuhan melalui pengamatan warna yang terbentuk oleh karena adanya reaksi antara zat aktif yang ada dengan pereaksi yang digunakan. Masing-masing zat akan memberikan warna yang spesifik terhadap pereaksi tertentu (Tabel II).


37

Tabel II. Hasil Uji Tabung Infusa Daun Sirih Merah No. Pengujian Pengamatan Hasil 1. Uji Alkaloid Filtrat A1 + Dragendorff LP Ada endapan coklat merah + Filtrat A2 + Mayer LP Ada endapan putih kekuningan +

2.

Uji Tanin Terbentuk endapan hijau + Filtrat + NaCl 2% + gelatin 1% kecoklatan 3. Uji Minyak Atsiri Timbul bau aromatik + Filtrat + etanol, lalu dikering uapkan 4. Uji Antrakinon Lapisan basa Warna kecoklatan 5. Uji Flavonoid + Filtrat + besi (III) klorida Warna kehijauan 6. Uji Saponin Serbuk + aquadest, dikocok Tidak timbul buih 7. Uji Kardenolida Filtrat + asam 3,5-dinitrobenzoat Warna kuning kecoklatan + KOH 1N Filtrat + Kloroform Warna kuning kehijauan Keterangan : + : bereaksi positif terhadap pereaksi yang digunakan -

: bereaksi negatif terhadap pereaksi yang digunakan

Pemeriksaan terhadap adanya alkaloid dilakukan dengan menambahkan asam klorida 1% pada infusa daun sirih merah. Hal ini bertujuan untuk menggaramkan alkaloid yang terdapat dalam bentuk basa. Adanya alkaloid dapat dipertegas dengan reaksi pengendapan, yaitu dengan penambahan Dragendorff dan Mayer. Hasil uji menunjukkan adanya pengendapan pada penambahan Dragendorff dan Mayer. Hal ini disebabkan adanya pasangan elektron bebas dari atom nitrogen alkaloid yan berikatan dengan ion-ion logam pada pereaksi yang digunakan sehingga terbentuk endapan. Uji terhadap senyawa flavonoid, filtrat ditambah dengan pereaksi besi (III) klorida. Sebagai cairan penyari digunakan air karena senyawa flavonoid


38

cenderung mudah larut dalam air. Terjadinya warna hijau-biru menunjukkan adanya flavonoid. Dari hasil uji ini pada infusa daun sirih merah diperoleh larutan berwarna kehijauan. Hal ini berarti dalam infusa daun sirih merah terdapat kandungan senyawa flavonoid. Pada uji tanin, filtrat ditambahkan natrium klorida 2% untuk mengendapkan campuran tanin. Apabila terjadi endapan disaring melalui kertas saring. Dari hasil uji infusa daun sirih merah diperoleh endapan berwarna hijau kecoklatan. Karena dengan penambahan NaCl menyebabkan terjadinya salting out atau penggaraman sehingga akan terbentuk endapan. Endapan yang terbentuk selanjutnya disaring. Lalu dilakukan penambahan larutan gelatin 1% pada filtrat. Adanya tanin dapat diketahui jika pada larutan terbentuk endapan. Dari hasil uji didapatkan endapan berwarna hijau kecoklatan. Hal ini menunjukkan bahwa infusa daun sirih merah mengandung tanin. Pemeriksaan

terhadap

adanya

minyak

atsiri

dilakukan

dengan

menambahkan eter pada infusa daun sirih merah untuk mengisolasi minyak atsiri sehingga pada saat dipanaskan tercium bau khas daun sirih. Dari hasil percobaan didapatkan hasil positif. Lalu ditambahkan sedikit etanol dan dikeringuapkan lagi. Dari uji pada serbuk daun sirih merah menghasilkan bau aromatik. Bau aromatik ini diduga adanya kandungan terpenoid yang terdapat dalam minyak atsiri. Ini berarti dalam infusa daun sirih merah diduga terdapat kandungan minyak atsiri. Dari data yang diperoleh pada uji tabung maka dapat diketahui bahwa pada infusa daun sirih merah mengandung senyawa flavonoid, alkaloid, tanin, dan minyak atsiri.


39

E. Ekstraksi Daun Sirih Merah Pada penelitian ini, metode penyarian yang dilakukan adalah dengan cara infusa. Penyarian ini dibuat dengan mengekstrasi simplisia pada suhu 90°C selama 15 menit. Pemanasan dilakukan pada suhu 90°C dimaksudkan supaya senyawa kimia yang terdapat dalam daun sirih merah dapat tersari semua dan senyawa kimia yang terkandung tidak rusak. Infusa diserkai dengan menggunakan kain flannel. Penyerkaian ditunggu setelah dingin. Hal ini dimaksudkan supaya minyak atsiri yang terkandung dalam daun sirih merah juga dapat tersari. Karena jika diserkai selagi panas maka kemungkinan minyak atsiri yang terkandung dalam infusa daun sirih merah akan menguap. Selanjutnya untuk mencukupi kekurangan air ditambah air mendidih melalui ampasnya. Menurut Anonim (1995), infus yang mengandung bukan bahan berkhasiat keras, dibuat dengan menggunakan 10% simplisia.

F. Identifikasi Kandungan Senyawa Aktif Infusa Daun Sirih Merah dengan Kromatografi Lapis Tipis Setelah dilakukan analisis kualitatif kandungan kimia infusa daun sirih merah dengan uji tabung, dilanjutkan dengan analisis kualitatif kandungan kimia secara KLT untuk memperoleh gambaran mengenai kandungan senyawa kimia yang terdapat dalam infusa daun sirih merah. KLT bersifat sebagai analisis kualitatif karena parameter KLT terbatas pada persamaan nilai Rf dan intensitas warna yang dihasilkan. KLT termasuk kromatografi adsorbsi, dimana sebagai fase


40

diamnya digunakan zat padat dan fase geraknya zat cair. Analisis dengan KLT mempunyai keuntungan yaitu waktu yang dibutuhkan singkat, lebih murah, cuplikan dan pelarut yang digunakan sedikit. Analisis kualitatif kandungan kimia secara KLT dilakukan untuk mengetahui adanya kandungan senyawa flavonoid, tanin, alkaloid, dan minyak atsiri. Penelitian dilakukan dengan menotolkan larutan hasil infusa daun sirih merah dan pembanding sebanyak 3 totolan dengan menggunakan pipa kapiler. Setelah penotolan dilakukan, lempeng KLT kemudian dielusi dalam bejana yang telah jenuh dengan fase gerak yang digunakan. Untuk mengetahui bejana telah jenuh diperlukan kertas saring sesuai dengan tinggi bejana. Kertas saring dimasukkan dalam bejana dan bejana dikatakan jenuh jika kertas saring telah terbasahi dengan sempurna oleh fase gerak. Penjenuhan bertujuan supaya perambatan optimal. Jarak rambat elusi yaitu 10 cm dan apabila fase gerak telah melampaui maka lempeng diangkat dan dibiarkan kering terlebih dahulu. Selanjutnya dilakukan deteksi pada sinar tampak (visibel), UV 254 nm dan 365 nm. Selain itu juga digunakan pereaksi-pereaksi spesifik yang dapat menunjukkan dengan jelas senyawa yang diidentifikasi. Pada identifikasi flavonoid digunakan fase diam selulosa dan tidak digunakan silika gel GF 254 karena selulosa tidak mengandung unsur logam seperti silika. Dengan adanya unsur logam pada silika dapat menyebabkan terbentuknya ikatan antara senyawa uji dengan logam yang terkandung dalam silika. Hal ini dapat menyebabkan terbentuknya khelat yang tidak stabil sehingga senyawa uji akan terikat kuat pada fase diam sehingga dapat mengganggu elusi.


41

Sedangkan pada identifikasi alkaloid, tanin dan minyak atsiri digunakan fase diam silika gel GF 254. Sebelum digunakan silika gel GF 254 diaktifkan terlebih dahulu dalam oven 100°C selama 10 menit dan untuk selulosa dioven pada suhu 40°C selama 10 menit Hal ini bertujuan untuk membuka pori-pori dalam fase diam sehingga adsorbsinya menjadi optimum. 1. Identifikasi flavonoid Untuk uji adanya senyawa flavonoid digunakan fase gerak n-butanol – asam asetat – air (4 :1: 5) v/v dan yang digunakan adalah lapisan atas. Pembanding yang digunakan adalah rutin, yaitu suatu glikosida flavonol yang pada umumnya terdapat dalam tanaman (Harborne, 1984). Tabel III. Hasil Identifikasi Kandungan Flavonoid Infusa Daun sirih Merah dengan fase gerak n-butanol – asam asetat – air (4 :1: 5) Senyawa uji Sampel

Harga Rf 0,71

Rutin

0,74

Sebelum disemprot AlCl3 Vis UV 254 UV 365 Tidak Tidak Bertampak tampak fluoresens i ungu Tidak Tidak Bertampak tampak fluoresens i ungu

Setelah disemprot AlCl3 Vis UV 254 UV 365 Kuning Warna Berkecoklat kuning ke- fluoresensi an coklatan ungu Warna Berwarna Berkuning kuning fluoresensi ungu

42


I

II

III

Rf

Rf

Rf

1,00

1,00

1,00

0,90

0,90

0,90

0,80

0,80

0,80

0,70

0,70

0,70

0,60

0,60

0,60

0,50

0,50

0,50

0,40

0,40

0,40

0,30

0,30

0,30

0,20

0,20

0,20

0,10

0,10

0,10

0,00

0,00 B

S

0,00 B

S

B

Gambar 2. Profil KLT senyawa flavonoid yang terkandung pada infusa daun sirih merah setelah disemprot dengan AlCl3 Keterangan : Fase diam Fase gerak I II III B S

: selulosa : n-butanol – asam asetat – air (4 :1: 5) : UV 254 : UV 365 : Vis : Baku (Rutin) : Sampel

S


43

Senyawa flavonoid dideteksi pada UV 254 nm dan 365 nm karena flavonoid mempunyai ikatan rangkap terkonjugasi (gugus kromofor) sehingga dapat menyebabkan penyerapan pada sinar UV. Sesudah disemprot dengan AlCl3 pada pengamatan di UV 365 nm terlihat bercak berfluoresensi ungu dan Rf sampel yang dihasilkan 0,71 sedangkan Rf pembandingnya 0,74. Rf antara sampel dengan pembanding hampir sama, hal ini berarti sampel mengandung flavonoid. Hal ini dipertegas lagi dengan timbulnya warna bercak yang sama antara sampel dengan pembanding sesudah disemprot dengan AlCl3. Dimana sampel dan pembanding menghasilkan warna kuning pada pengamatan dengan sinar tampak. Menurut Wagner, adanya flavonoid akan menghasilkan warna kuning dengan pereaksi semprot AlCl3. Ini berarti dari hasil KLT uji flavonoid menunjukkan bahwa infusa daun sirih merah mengandung flavonoid. 2. Identifikasi senyawa Alkaloid KLT untuk senyawa alkaloid merupakan kromatografi fase normal karena fase diamnya adalah silika gel GF 254 yang bersifat polar. Fase geraknya adalah tertier butanol -kloroform – dietil amina (2 : 7 : 1). Fase gerak ini bersifat nonpolar sehingga diharapkan dapat mengelusi senyawa uji yang bersifat sama. Fase gerak yang digunakan harus memiliki sifat yang relatif sama dengan senyawa yang akan dipisahkan, namun sebaliknya harus memiliki sifat tidak campur dengan fase diam (Sastrohamidjojo, 1985). Pembanding yang


44

digunakan adalah skopolamin. Karena skopolamin juga merupakan alkaloid. Skopolamin merupakan tropan alkaloid. Tabel IV. Hasil Identifikasi Kandungan Alkaloid Infusa Daun Sirih Merah dengan Fase Gerak Tertier butanol -Kloroform – Dietil amina (2 : 7 : 1) Senyawa uji Sampel

Skopolamin

Harga Rf 0,96

Sebelum disemprot Dragendorff Vis UV 254 UV 365 Tidak Tidak Bertampak tampak fluoresensi ungu

0,07

Tidak tampak

Tidak tampak

0,97

Tidak tampak

Tidak tampak

Berfluoresensi ungu Tidak tampak

0,05

Tidak tampak

Tidak tampak

Tidak tampak

Setelah disemprot Dragendorff Vis UV 254 UV 365 Warna Warna Berorange kefluoresen hijauan si ungu Warna Tidak Tidak pink tampak tampak Warna orange

Tidak tampak

Warna pink

Tidak tampak

Berfluoresen si ungu Tidak tampak

Pada pengamatan di UV 365 terlihat bercak berfluoresensi ungu dan Rf

sampel yang dihasilkan 0,96 dan 0,07 sedangkan Rf

pembandingnya 0,97 dan 0,05. Harga Rf antara pembanding dengan sampel hampir sama. Hal ini berarti dalam sampel terdapat senyawa alkaloid. Untuk mempertegasnya dilakukan penyemprotan dengan pereaksi semprot Dragendorf. Pada pengamatan dengan sinar tampak, sampel dan pembanding menghasilkan 2 bercak dengan warna orange dan pink. Menurut Wagner, adanya senyawa alkaloid yang dideteksi dengan Dragendorff akan menghasilkan warna coklat/ orange. Dari hasil KLT uji alkaloid

menunjukkan bahwa infusa daun sirih merah mengandung

alkaloid. Hal tersebut dapat dilihat dari warna bercak yang timbul dan harga Rf yang hampir sama pada silika gel GF 254.

45


I

II

III

Rf

Rf

Rf

1,00

1,00

1,00

0,90

0,90

0,90

0,80

0,80

0,80

0,70

0,70

0,70

0,60

0,60

0,60

0,50

0,50

0,50

0,40

0,40

0,40

0,30

0,30

0,30

0,20

0,20

0,20

0,10

0,10

0,10

0,00

0,00

0,00

B

S

B

S

B

Gambar 3. Profil KLT senyawa alkaloid yang terkandung dalam infusa daun sirih merah setelah disemprot dengan Dragendorff Keterangan : Fase diam Fase gerak I II III B S

: silika gel GF 254 : Tertier butanol -Kloroform – Dietil amina (2 : 7 : 1) : UV 254 nm : UV 365 nm : Vis : Baku (Skopolamin) : Sampel

S


46

3. Identifikasi senyawa Tanin Senyawa tanin dapat dideteksi dengan pereaksi besi (III) klorida (FeCl3) (Robinson, 1995). Setelah disemprot dengan FeCl3, senyawa tanin akan memberikan warna biru kehitaman untuk terhidrolisis dan warna hijau untuk tanin tidak terhidrolisis (Robinson, 1995). Karena senyawa fenol dapat membentuk komplek berwarna dengan ion ferri yang terdapat dalam FeCl3. KLT untuk senyawa tanin digunakan fase diam silika gel GF 254 yang bersifat polar sedangkan fase geraknya adalah n-butanol – Asam Asetat – Air (5:1:4) v/v. Pembanding yang digunakan adalah asam tanat. Tabel V. Hasil Identifikasi Senyawa Tanin dengan Fase Gerak nbutanol –Asam asetat – Air (5 : 1 : 4) Dari Infusa Daun Sirih Merah Senya wa uji Sampel

Harga Rf 0,73

Asam Tanat

0,69

Sebelum disemprot FeCl3 Vis UV 254 UV 365 Tidak Tidak Bertampak tampak fluoresensi ungu Tidak Tidak Bertampak tampak fluoresensi ungu

Setelah disemprot FeCl3 Vis UV 254 UV 365 Warna KeBercoklat hijauan fluoresen kehitaman si ungu Warna KeBercoklat hijauan fluoresen muda si ungu

47


I

II

III

Rf

Rf

Rf

1,00

1,00

1,00

0,90

0,90

0,90

0,80

0,80

0,80

0,70

0,70

0,70

0,60

0,60

0,60

0,50

0,50

0,50

0,40

0,40

0,40

0,30

0,30

0,30

0,20

0,20

0,20

0,10

0,10

0,10

0,00

0,00

0,00

B

S

B

S

B

Gambar 4. Profil KLT senyawa tanin yang terkandung dalam infusa daun sirih merah setelah disemprot dengan FeCl3 Keterangan : Fase diam Fase gerak I II III B S

: Silika gel GF 254 : n-butanol – Asam Asetat – Air (5 : 1 : 4) : UV 254 : UV 365 : Vis : Baku (Asam Tanat) : Sampel

S


48

Pada pengamatan di UV 365 nm terlihat bercak berfluoresensi ungu yang sama dengan warna bercak pada pembanding setelah disemprot FeCl3 namun harga Rf nya berbeda dimana pada sampel memiliki harga Rf 0,73 dan untuk pembandingnya memiliki harga Rf 0,69. Sedangkan pada pengamatan di UV 254 nm terlihat bercak berwarna kehijauan pada sampel dan pembanding. Dari hasil pengamatan diperoleh warna bercak yang hampir sama. Hal ini menunjukkan bahwa dalam infusa daun sirih merah mengandung tanin. 4. Identifikasi senyawa Minyak Atsiri Senyawa minyak atsiri dapat dideteksi dengan sinar UV. Karena minyak atsiri daun sirih merah mengandung senyawa yang mempunyai ikatan rangkap yang terkonjugasi atau mempunyai cincin aromatis dan juga mempunyai gugus kromofor sehingga mampu berfluoresensi. Pada pengamatan, senyawa minyak atsiri dideteksi dengan UV 254 nm, UV 365 nm dan disemprot dengan pereaksi vanilin- asam sulfat. Vanilin-asam sulfat digunakan untuk identifikasi senyawa golongan terpen, fenol dan steroid (Harborne, 1987). Fase gerak yang digunakan adalah toluena : etil asetat (93:7) yang bersifat nonpolar sehingga diharapkan dapat mengelusi minyak atsiri yang bersifat sama. Fase diam yang digunakan untuk KLT dipilih silika gel GF 254 karena silika gel GF 254 bersifat polar. Perbedaan sifat kelarutan dari silika gel GF 254 dan minyak atsiri tersebut


49

diharapkan agar tidak terjadi pencampuran antara zat uji dengan fase diam sehingga zat uji dapat terelusi dengan baik dengan bantuan fase gerak yang sifatnya sama dengan zat uji. Pembanding yang digunakan adalah eugenol. Karena dalam daun sirih merah terdapat kandungan eugenol (Anonim, 2008). Eugenol mempunyai khasiat mengurangi rasa sakit. Tabel VI. Hasil Identifikasi Senyawa Minyak Atsiri dengan Fase Gerak Toluena –Etil asetat (93: 7) Dari Infusa Daun Sirih Merah Senyawa uji

Harga Rf

Sampel

0,37

Eugenol

0,46

Sebelum disemprot vanilin-asam sulfat pekat Vis UV 254 UV 365 Tidak Tidak Bertampak tampak fluoresensi warna biru kehijauan Tidak Tidak Tidak tampak tampak tampak

Setelah disemprot vanilin-asam sulfat pekat Vis UV 254 UV 365 Warna KeBercoklat coklatan fluoresensi warna biru kehijauan Warna Tidak Tidak coklat tampak tampak muda

Pada pengamatan di UV 365 terlihat bercak sampel berwarna biru kehijauan dengan harga Rf 0,37. Dengan jarak pengembangan 10 cm. Sesudah disemprot dengan vanilin-asam sulfat pekat, sampel berwarna coklat dan pembanding menghasilkan warna coklat muda. Namun harga Rf nya berbeda dimana pada sampel memiliki harga Rf 0,37 dan untuk pembandingnya memiliki harga Rf 0,46. Berdasarkan Wagner, terpen yang dideteksi dengan vanilin-asam sulfat memberikan warna bercak yaitu cokelat-merah/ violet, jingga ke merah- violet, biru / biru-violet dan abu-abu - biru. Warna bercak yang terlihat mengarah pada golongan terpen (Wagner, 1984), sehingga kemungkinan minyak atsiri ini mengandung golongan terpen.

50


I

II

III

Rf

Rf

Rf

1,00

1,00

1,00

0,90

0,90

0,90

0,80

0,80

0,80

0,70

0,70

0,70

0,60

0,60

0,60

0,50

0,50

0,50

0,40

0,40

0,40

0,30

0,30

0,30

0,20

0,20

0,20

0,10

0,10

0,10

0,00

0,00 B

S

0,00 B

S

B

Gambar 5. Profil KLT Senyawa Minyak Atsiri yang terkandung dalam infusa daun sirih merah setelah disemprot vanilin – asam sulfat pekat Keterangan : Fase diam Fase gerak I II III B S

: Silika gel GF 254 : Toluena : etil asetat (93:7) : UV 254 : UV 365 : Vis : Baku (Eugenol) : Sampel

S


51

G. Hasil Uji Potensi Antifungi dari Infusa Daun Sirih Merah Pengujian potensi antifungi dilakukan menggunakan metode difusi paper disk dan dilusi padat. Jamur yang digunakan adalah Candida albicans ATCC 10231. Pada penelitian ini konsentrasi senyawa aktif dari infusa daun sirih yang digunakan adalah 80%, 60%, dan 40%. Ini didasarkan dari orientasi yang telah dilakukan. Kontrol negatif yang digunakan adalah aqudest. Kontrol negatif digunakan untuk memastikan pelarut yang digunakan tidak mempunyai aktivitas antifungi. Sedangkan kontrol positifnya adalah Ketokonazole. Menurut Bahroelim Bahry (1995), ketokonazole mempunyai aktivitas antijamur dan efektif mengobati keputihan yang disebabkan oleh Candida albicans. Ketokonazole yang digunakan dilarutkan dengan menggunakan metanol karena ketokonazole mudah larut dalam metanol (Anonim, 1996). Konsentrasi Ketokonazole yang digunakan adalah 1,0 µg/µl karena pada konsentrasi tersebut mampu menghambat pertumbuhan Candida albicans (Anonim, 2007d). Media pertumbuhan jamur yang digunakan adalah SDA (Sabouraud Dextrosa Agar). SDA mempunyai sifat asam yang mempunyai pH 5,6±0,2 sehingga dimungkinkan jamur Candida albicans dapat tumbuh dalam media tersebut. Karena Candida albicans tumbuh pada pH 5-5,6. Media yang digunakan sebanyak 65 gram dilarutkan menggunakan aquadest sebanyak 1 liter. Media SDA mengandung pepton. Fungsi pepton dalam media adalah melengkapi sumber nitrogen yang tersedia. Sedangkan dekstrose dalam media SDA merupakan suatu senyawa organik yang berfungsi sebagai sumber energi dan sumber karbon. Suspensi jamur yang digunakan disetarakan kekeruhannya


52

dengan strandar Mc. Farland II (6.10 8 CFU/ml). Hal ini bertujuan supaya dalam perlakuan tiap plate memiliki populasi jamur yang kurang lebih sama. Volume cairan yang digunakan sebanyak 10µl. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Sebelum dilakukan penelitian semua alat dan media yang digunakan disterilisasi dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit. Hal ini bertujuan untuk mengurangi terjadinya kontaminasi. Sehingga media dan alat yang digunakan tidak ditumbuhi oleh mikroba lain. Dari hasil penelitian ekstrak infusa daun sirih merah dapat menghambat pertumbuhan jamur Candida albicans ATCC 10231. Hal ini terlihat dari tabel dibawah ini. Tabel VII. Hasil Pengukuran Daya Hambat pada Metode Difusi paper disk Keterangan

Rerata x ± SD

Kontrol positif

1,4 ± 0,25 cm

Kontrol negatif

-

Konsentrasi 80%

1,02 ± 0,13 cm

Konsentrasi 60%

0,86 ± 0,11 cm

Konsentrasi 40%

0,78 ± 0,04 cm

Pada metode difusi, daya antifungi ditunjukkan dengan adanya zona jernih disekitar paper disk. Pada tabel hasil pengukuran daya hambat pada metode difusi, konsentrasi 80%, 60%, dan 40% mampu menghambat pertumbuhan jamur. Hal ini dikarenakan ekstrak daun sirih merah mampu berdifusi kedalam media tempat jamur uji tumbuh. Dari data yang diperoleh semakin besar konsentrasi


53

infusa daun sirih merah, zona hambatnya semakin besar. Hal ini disebabkan semakin tinggi konsentrasi yang digunakan maka jumlah zat aktif yang terkandung dalam infusa daun sirih merah semakin besar, sehingga terjadi peningkatan aktivitas antifungi. Pada kontrol negatif terlihat bahwa tidak terdapat penghambatan pertumbuhan jamur. Hal ini disebabkan karena aquades tidak mempuyai kemampuan menghambat pertumbuhan jamur. Sedangkan pada kontrol positif terlihat

bahwa

ketokonazole

mampu

menghambat

pertumbuhan

jamur.

Ketokonazole mempunyai kemampuan mencegah sintesis ergosterol (komponen utama membran plasma fungi) dengan menghambat sitokrom P450 enzim lanosterol demetilase. Sehingga bila ergosterol tidak terbentuk maka pembentukan dinding sel juga akan terganggu. Dinding sel berlaku sebagai struktur pemberi bentuk pada sel, melindungi sel terhadap lisis osmotik. Dengan terganggunya pembentukan ergosterol menyebabkan sel menjadi lisis dan akhirnya mati. Untuk mengetahui perbedaan kelompok konsentrasi infusa daun sirih merah dengan kontrol dilakukan uji statistik anova satu arah yang sebelumnya dilakukan dahulu uji variasi homogenitas untuk melihat distribusinya normal atau tidak. Dari hasil analisis dapat diketahui bahwa setiap konsentrasi memiliki perbedaan daya hambat. Dimana nilai probabilitas dapat dilihat pada Levene Test tabel Test of Homogeneity of Variances yaitu 0,003 (<0,05) sehingga kelima varians populasi tidak identik (berbeda).


54

Tabel VIII. Uji Anova diameter zona hambat terhadap pertumbuhan Candida albicans ATCC 10231 Sum of df Mean Square F Sig. Squares Between Groups 5.258 4 1.315 67.783 .000 Within Groups .388 20 .019 Total 5.646 24 Data pengujian daya antifungi tersebut dianalisis dengan ANOVA-one way karena jumlah variabel bebas (independen variabel) hanya satu yaitu konsentrasi dan satu variabel tergantung yaitu diameter zona hambat terhadap pertumbuhan Candida albicans ATCC 10231 yang ditandai dengan adanya zona jernih disekeliling paper disk. Tetapi sebelum dilakukan analisis dengan ANOVA-one way dilakukan analisis Kolmogorov Smirnov Z terlebih dahulu untuk mengetahui distribusinya. Dimana, dari hasil analisis untuk kontrol positif, konsentrasi 80%, 60%, dan 40% kurang dari (<1,96). Hal ini berarti distribusi normal karena untuk tingkat kepercayaan 95% maka Ztabel = 1,96. Untuk data kontrol negatif tidak dapat diuji karena semua nilai daya hambat sama. Dari hasil uji anova diameter zona hambat terlihat bahwa terdapat perbedaan yang bermakna. Perbedaan bermakna dari diameter zona hambat dipengaruhi oleh konsentrasi infusa daun sirih merah yang mempunyai aktivitas antifungi pada konsentrasi 80%, 60%, dan 40% terhadap pertumbuhan Candida albicans ATCC 10231. Ini berarti mulai dari konsentrasi 40% infusa daun sirih merah sudah mampu menghambat pertumbuhan jamur Candida albicans ATCC 10231.


55

Pengujian selanjutnya menggunakan uji LSD untuk mengetahui perbedaan bermakna antar kelompok uji dapat dilihat dari tabel berikut ini: Tabel IX. Hasil Uji LSD diameter zona hambat terhadap pertumbuhan Candida albicans ATCC 10231 Kontrol Kontrol Infusa 40% Infusa Infusa 80% + 60% Kontrol BB BB BB BB + Kontrol BB BB BB BB Infusa BB BB BTB BB 40% Infusa BB BB BTB BTB 60% Infusa BB BB BB BTB 80% Keterangan : BTB : Berbeda Tidak Bermakna BB : Berbeda Bermakna Dari hasil uji LSD didapat harga P<0,05 berarti antar kelompok mempunyai perbedaan yang bermakna. Hal ini menunjukkan terdapat perbedaan yang bermakna pada besarnya zona hambat pertumbuhan Candida albicans ATCC 10231. Hasil ini menunjukkan semakin besar konsentrasi infusa daun sirih merah maka semakin besar zona hambat yang dihasilkan. Kontrol negatif tidak memberikan zona hambat, berarti hanya infusa daun sirih merah saja yang mempunyai aktivitas terhadap Candida albicans ATCC 10231. Zona hambat terbesar dihasilkan oleh kontrol positif yaitu ketokonazole. Konsentrasi infusa daun sirih merah terbesar yaitu 80% belum dapat memberikan zona hambat yang sama seperti kontrol positif. Hal ini dapat dilihat pada uji statistik yang mempunyai perbedaan bermakna pada kedua kelompok ini. Pada konsentrasi 40% dengan 60% terdapat perbedaan tetapi tidak bermakna. Hal ini disebabkan karena


56

perbedaan daya hambat konsentrasi 40% dengan 60% sangat kecil. Begitu juga dengan konsentrasi 60% dan 80%.

H. Pengukuran Konsentrasi Hambat Minimum dan Konsentrasi Bunuh Minimum Infusa Daun Sirih Merah dengan Metode Dilusi Padat Untuk mengetahui KHM dari infusa daun sirih merah dilakukan uji dengan metode dilusi padat. Dari penelitian didapatkan hasil sebagai berikut : Tabel X. Hasil Pengukuran Daya Hambat pada Metode Dilusi Padat Konsentrasi infusa (%) Hasil Kontrol positif Kontrol negatif +++++ Konsentrasi 80% Konsentrasi 60% ++ Konsentrasi 40% +++ Keterangan : tidak terlihat pertumbuhan koloni jamur +++++ Pertumbuhan koloni jamur sangat banyak +++ Pertumbuhan koloni jamur banyak ++ Pertumbuhan koloni jamur sedikit + Pertumbuhan koloni jamur sangat sedikit Tujuan dilusi padat yaitu untuk menegaskan konsentrasi terkecil dimana infusa daun sirih merah mampu menghambat pertumbuhan Candida albicans ATCC 10231 dengan membandingkan kekeruhan dalam cawan petri yang menggambarkan pertumbuhan koloni Candida albicans ATCC 10231. Prinsip dari uji dilusi padat adalah zat antifungi dicampur dengan medium yang kemudian diinokulasikan dengan jamur Candida albicans ATCC 10231. Keuntungan dari metode ini adalah dapat menunjukkan secara langsung nilai KHM larutan uji terhadap jamur uji. Dari hasil uji dilusi padat, infusa daun sirih merah yang mampu menghambat pertumbuhan jamur uji adalah konsentrasi 80%.


57

Untuk mengetahui KBM dilakukkan streak plate sehingga dapat diketahui pada konsentrasi berapa infusa daun sirih merah mampu membunuh jamur Candida albicans ATCC 10231. Pada penelitian dilakukan streak plate pada konsentrasi 80% saja. Karena pada dilusi padat didapatkan bahwa zona jernih dihasilkan pada konsentrasi 80%. Sehingga untuk mengetahui apakah pada konsentrasi 80% sudah mampu membunuh jamur Candida albicans ATCC 10231 atau belum maka dilakukan streak plate. Sedangkan pada konsentrasi 60% dan 40% tidak perlu dilakukan streak plate karena pada konsentrasi 60% dan 40% masih terdapat pertumbuhan jamur dengan ditandai terbentuknya kekeruhan pada pengamatan uji dilusi padat. Dari hasil penelitian didapatkan hasil bahwa pada konsentrasi 80% tidak terdapat pertumbuhan jamur Candida albicans ATCC 10231. Ini berarti KBMnya adalah konsentrasi 80%. Candida albicans mempunyai dinding sel yang kaku yang mengandung kitin dan membran selnya mengandung ergosterol. Kitin pada jamur berbentuk mikrofibril. Mikrofibril merupakan struktur utama dari dinding sel jamur dan terdiri atas jalinan rantai-rantai polisakarida yang saling bersilangan membentuk anyaman. Candida albicans merupakan fungi Gram + yang mempunyai pembungkus sel yang relatif sederhana yaitu selaput sitoplasma dan lapisan peptidoglikan yang tebal. Mekanisme kerja Ketokonazole adalah dengan menghambat sintesis ergosterol. Membran sel jamur Candida albicans mengandung ergosterol. Ergosterol inilah

yang kemungkinan bereaksi dengan senyawa kimia yang

terkandung dalam infusa daun sirih merah sehingga akan merusak permeabilitas


58

selektif dari sel Candida albicans. Kerusakan tersebut akan menyebabkan keluarnya berbagai komponen penting dari sel fungi. Kandungan kimia yang terkandung dalam infusa daun sirih merah yang kemungkinan dapat menghambat pertumbuhan jamur Candida albicans ATCC 10231 adalah tanin, alkaloid, flavonoid dan minyak atsiri. Menurut Mursyidi (1990), tanin berfungsi sebagai antifungi dan bersifat sebagai bakteriostatik yang biasanya digunakan untuk infeksi pada kulit, mukosa dan melawan infeksi pada luka. Alkaloid dapat digunakan sebagai antifungi. Flavonoid berfungsi sebagai antifungi dan mencegah infeksi atau luka. Minyak atsiri juga dapat berfungsi menghambat pertumbuhan jamur (Robinson, 1995).


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. KESIMPULAN 1. Infusa daun sirih merah mempunyai daya antifungi terhadap Candida albicans ATCC 10231. 2. Dalam infusa daun sirih merah yang memiliki kandungan kimia flavonoid, tanin, alkaloid, dan minyak atsiri.

B. SARAN Perlu dilakukan penelitian KLT preparatif untuk mengisolasi senyawa aktif yang diduga bertanggungjawab terhadap aktivitas antifungi dan diujikan pada jamur Candida albicans.

59


60

DAFTAR PUSTAKA

Anonim, 1986, Sediaan Galenik, 17, 25-26, Direktorat Pengawasan Obat dan Makanan Indonesia, Jakarta Anonim, 1991, Theraupeutic Drug, volume II, K21, Churchill Living Store, New York Anonim, 1993, Dasar-Dasar Pemeriksaan Mikrobiologi, 115-118, Fakultas Kedokteran UGM Bagian Mikrobiologi, Yogyakarta Anonim, 1995, Farmakope Indonesia Edisi IV, 9, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta Anonim, 1995, Materia Medika Indonesia, Jilid VI, 327, Departemen Kesehatan RI, Jakarta Anonim, 1996, The Extra Pharmacopeia, edisi 31, 410, Royal Pharmaceutical Society, London Anonim, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, cetakan pertama, 6, 13-38, Departemen Kesehatan RI, Jakarta Anonim, 2007a, Piper crocatum taxonomy, http://zipcadzoo.com/ plants/ p/ piper_crocatum.asp, diakses pada tanggal 22 Juni 2007 Anonim, 2007b, Keputihan, http:// www. majalah- farmacia. com/ rubrik/ one_news.asp?IDNews=546, diakses pada tanggal 9 September 2007 Anonim, 2007d, Evaluation Antifungal Susceptibility Tersting of Candida Spesies, www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?artid=525396, diakses pada tanggal 15 Desember 2007 Anonim, 2008, Sirih Merah sebagai Tanaman Obat Multi Fungsi, http ://[email protected], diakses pada tanggal 2 Maret 2008 Ansel, H.C. Popouich, N.G., 1990, Pharmaceutical Dosage Form and Drug Delivery System, 5 th edition, Lea and Febiger, Philadelphia, London Backer, C. A. and Bakhuizen van den Brink, R. C., 1963, Flora of Java volume I, 167, N.V.P. Noordhoff-Groningn, The Netherlands Bahry, Bahroelim, 1995, Farmakologi Dan Terapi, edisi 4, 562-563, Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta


61

Bonang, G., Koeswardono, E. S.,1982, Mikrobiologi Kedokteran (Untuk Laboratorium dan Klinik), 235, P.T Gramedia, Jakarta Fardiaz, S., 1992, Mikrobiologi Pangan, 80, 257, PT. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta Frobisher, 1974, Fundamental of Microbiology, 9 th ed., 161-171, W. B. saunders Company, Philadelphia Hadioetomo, R. S., 1993, Mikrobiologi Dasar dalam Praktek, 55-58, Penerbit PT. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta Harborne, J.B, 1987, Metode Fitokimia, 4-9, Penerbit ITB, Bandung Hugo, W. B., & Russel A. D., 1987, Pharmaceutical Microbiology, 6 edition, 202-205, Blackwell Scientific Publication, London Jawetz, E., Melnick, J. L, Adelberg, E. A, 1996, Medical Microbiology, diterjemahkan oleh Edi Nugroho dan RF Maulany edisi xx, 627-628, EGC, Penerbit Buku Kedokteran, Jakarta Jutono, 1980, Pedoman Praktikum Mikrobiologi Umum (Untuk Perguruan Tinggi), 135, 136, Departemen Mikrobiologi Fakultas Pertanian Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta Katzung, B. G. M, 1995, Basic Clinical and Pharmacology, 607-614, diterjemahkan oleh Kotualubun, edisi III, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta Larry, M., dan Judy, K., 1996, Microbiology: Essentials and Aplications, 2 edition, McGraw-Hill,Inc, New York Mursyidi, A., 1990, Analisa Metabolit Sekunder, 63-76, Pusat Antar Universitas Bioteknologi, UGM, Yogyakarta Nester, Anderson, Robert, Pearsall, 2004, Microbiologgy : A Human Perspective, fourt edition, 526-528, McGrow-Hill, New York Pelczar, M. J., dan E. S. Chan, 1988, Dasar-dasar Mikrobiologi, edisi 2, 489-491, Penerbit Universitas Indonesia, Jakarta Ristanto, 1989, Kursus Singkat Fisiologi Bakteri, 67, Penerbit Bioteknologi UGM, Yogyakarta


62

Robinson, Trevor, 1995, The Organik Constituents of Higher Plan, 6 th edition, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, 71, 132, 161, 191, 281, 157, Penerbit ITB, Bandung Sastroamidjojo, H., 1985, Kromatografi, edisi I, 35-36, Liberty, Yogyakarta Stahl, E., 1985, Drug Analysis by Chromatography and Microscopy, A Practical Suplement to Pharmacopeias, diterj. oleh Kosasih Padmawinata dan Iwang Sudiro, 3-17, Institut Teknologi Bandung, Bandung Sudewo, B., 2005, Basmi Penyakit Dengan Sirih Merah, Cet I, 33-36, 40, 45, P.T. Agromedia Pustaka, Jakarta Suharman dan Mulja, H. M., 1995, Analisis Instrumental, 224, Universitas Airlangga Press, Surabaya Tarigan, J., 1988, Pengantar Mikrobiologi, 112-115, Direktorat Jenderal Pendidikan Tinggi, Proyek Pembangunan Lembaga Pendidikan, Jakarta Volk, W. A. & Wheller, M. F, 1984, Basic Microbiology, Diterjemahkan oleh Mark ham, M, jilid I, 298, Penerbit Erlangga, Jakarta Wagner, H., Bladt, S., Zgainski, E.M., 1984, Plant Drug analysis : a Thin Layer Chromatography Atlas, (Transl. : Scott, Th.A.), 5, 51, 163, SpringerVerlag, Berlin-Heidelberg-New York-Tokyo


Lampiran 1. Hasil determinasi tanaman sirih merah (Piper crocatum)

63


Lampiran 2. Determinasi jamur Candida Albicans

64


Lampiran 3. Foto tanaman sirih merah (Piper crocatum)

Lampiran 4. Foto Daun Sirih Merah

65


Lampiran 5. Foto Hasil Pengamatan difusi paper disk

Lampiran 6. Foto hasil pengamatan pada Dilusi padat tanpa perlakuan

66


Lampiran 7. Foto hasil pengamatan kontrol positif pada Dilusi Padat

Lampiran 8. Foto hasil pengamatan kontrol negatif pada Dilisi padat

67


Lampiran 9. Foto hasil pengamatan konsentrasi 80% pada Dilusi padat


68



Lampiran 12. Foto hasil pengamatan KBM konsentrasi 80%

69


70

Lampiran 13. Foto profil KLT senyawa flavonoid yang terkandung pada infusa daun sirih merah dengan deteksi secara visual setelah disemprot AlCl3 Keterangan : Fase diam

: selulosa

Fase gerak

: n-butanol – asam asetat – air (4 :1: 5)

B

: Baku (Rutin)

A1

: Sampel 1

A2

: Sampel 2


71

Lampiran 14. Foto profil KLT senyawa alkaloid yang terkandung dalam infusa daun sirih merah setelah disemprot dengan Dragendorff Keterangan : Fase diam Fase gerak I II B A1 A2

: Silika Gel GF254 : Tertier butanol -Kloroform – Dietil amina (2 : 7 : 1) : UV 365 : Vis : Baku (Skopolamin) : Sampel 1 : Sampel 2


72

Lampiran 15. Foto profil KLT senyawa tanin yang terkandung dalam infusa daun sirih merah dengan deteksi UV 254 nm setelah disemprot FeCl3 Keterangan : Fase diam Fase gerak B A1 A2

: Silika gel GF254 : n-butanol – Asam Asetat – Air (5 : 1 : 4) : Baku (Asam Tanat) : Sampel 1 : Sampel 2


73

Lampiran 16. Foto profil KLT Senyawa Minyak Atsiri yang terkandung dalam infusa daun sirih merah dengan deteksi secara visual setelah disemprot vanilinH2SO4 Keterangan : Fase diam Fase gerak B A1 A2

: Silika gel GF254 : Toluena : etil asetat (93:7) : Baku (Eugenol) : Sampel 1 : Sampel 2


Lampiran 17. Hasil Perhitungan Rerata dan SD Tabel XI. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Keterangan I Kontrol + Kontrol Konsentrasi 80% Konsentrasi 60% Konsentrasi 40%

Diameter Zona Hambat (cm) II III IV V

1,4 1,1 1,0 0,8

1,2 1,1 0,9 0,8

1,1 1,0 0,7 0,7

1,7 1,1 0,9 0,8

1,6 0,8 0,8 0,8

Rerata x ± SD 1,4 ± 0,25 1,02 ± 0,13 0,86 ± 0,11 0,78 ± 0,04

Perhitungan x untuk masing-masing kontrol dan konsentrasi : Kontrol +

:

1,4 + 1,2 + 1,1 + 1,7 + 1,6 = 1,4 5

Konsentrasi 80%

:

1,1 + 1,1 + 1,0 + 1,1 + 0,8 = 1,02 5

Konsentrasi 60%

:

1,0 + 0,9 + 0,7 + 0,9 + 0,8 = 0,86 5

Konsentrasi 40%

:

0,8 + 0,8 + 0,7 + 0,8 + 0,8 = 0,78 5

Perhitungan SD untuk masing-masing kontrol dan konsentrasi :

Kontrol +

=

Σx 2 ⎛ Σx ⎞ −⎜ ⎟ N ⎝N⎠

=

2,012 − 1,96

=

0,052

= 0,25

2

74


Konsentrasi 80%

=

Σx 2 ⎛ Σx ⎞ −⎜ ⎟ N ⎝N⎠

2

= 1,054 − 1,0404 =

0,0136

= 0,13 Konsentrasi 60%

=

Σx 2 ⎛ Σx ⎞ −⎜ ⎟ N ⎝N⎠

=

0,75 − 0,7396

=

0,0104

2

= 0,11 Konsentrasi 40%

=

Σx 2 ⎛ Σx ⎞ −⎜ ⎟ N ⎝N⎠

=

0,61 − 0,6084

=

0,0016

= 0,04

2

75


76

Lampiran 18. Hasil perhitungan Statistik

Oneway Descriptives Daya hambat

N Kontrol positif Kontrol negatif Konsentrasi 80% Konsentrasi 60% Konsentrasi 40% Total

Mean 1.4000 .0000 1.0200 .8600 .7800 .8120

5 5 5 5 5 25

Std. Deviation .2550 .0000 .1304 .1140 4.472E-02 .4850

Std. Error .1140 .0000 5.831E-02 5.099E-02 2.000E-02 9.701E-02

95% Confidence Interval for Mean Lower Bound Upper Bound 1.0834 1.7166 .0000 .0000 .8581 1.1819 .7184 1.0016 .7245 .8355 .6118 1.0122

Minimum 1.10 .00 .80 .70 .70 .00

Maximum 1.70 .00 1.10 1.00 .80 1.70

Test of Homogeneity of Variances Daya hambat Levene Statistic 5.958

df1

df2 4

Sig. .003

20

ANOVA Daya hambat

Between Groups Within Groups Total

Sum of Squares 5.258 .388 5.646

df 4 20 24

Mean Square 1.315 1.940E-02

F 67.763

Sig. .000

NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

N Normal Parameters a,b Most Extreme Differences

Mean Std. Deviation Absolute Positive Negative

Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed)

Kontrol positif 5 1.4000 .2550 .184 .184 -.184 .411 .996

Kontrol negatif 5 .0000 .0000c

Konsentrasi 80% 5 1.0200 .1304 .330 .270 -.330 .738 .647

Konsentrasi 60% 5 .8600 .1140 .237 .163 -.237 .530 .941

a. Test distribution is Normal. b. Calculated from data. c. The distribution has no variance for this variable. One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test cannot be performed.

Konsentrasi 40% 5 .7800 4.472E-02 .473 .327 -.473 1.057 .214


77

Post Hoc Tests Multiple Comparisons Dependent Variable: Daya hambat LSD

(I) Difusi Kontrol positif

Kontorl negatif

Konsentrasi 80%

Konsentrasi 60%

Konsentrasi 40%

(J) Difusi Kontorl negatif Konsentrasi 80% Konsentrasi 60% Konsentrasi 40% Kontrol positif Konsentrasi 80% Konsentrasi 60% Konsentrasi 40% Kontrol positif Kontorl negatif Konsentrasi 60% Konsentrasi 40% Kontrol positif Kontorl negatif Konsentrasi 80% Konsentrasi 40% Kontrol positif Kontorl negatif Konsentrasi 80% Konsentrasi 60%

Mean Difference (I-J) 1.4000* .3800* .5400* .6200* -1.4000* -1.0200* -.8600* -.7800* -.3800* 1.0200* .1600 .2400* -.5400* .8600* -.1600 .0800 -.6200* .7800* -.2400* -.0800

*. The mean difference is significant at the .05 level.

Std. Error .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809 .08809

Sig. .000 .000 .000 .000 .000 .000 .000 .000 .000 .000 .084 .013 .000 .000 .084 .375 .000 .000 .013 .375

95% Confidence Interval Lower Bound Upper Bound 1.2162 1.5838 .1962 .5638 .3562 .7238 .4362 .8038 -1.5838 -1.2162 -1.2038 -.8362 -1.0438 -.6762 -.9638 -.5962 -.5638 -.1962 .8362 1.2038 -.0238 .3438 .0562 .4238 -.7238 -.3562 .6762 1.0438 -.3438 .0238 -.1038 .2638 -.8038 -.4362 .5962 .9638 -.4238 -.0562 -.2638 .1038


78

BIOGRAFI PENULIS

Penulis bernama Widaningrum yang lahir pada tanggal 24 Agustus 1986 di Sleman, Daerah Istimewa Yogyakarta. Penulis merupakan anak pertama dari pasangan Bapak Yohanes Heru Widagdo dan Ibu Cicilia Maryati. Tahun 1991 menempuh pendidikan di TK Kanisius Jetis Depok kemudian melanjutkan ke SD Kanisius Jetis Depok pada tahun 1992 dan lulus pada tahun 1998. Tahun 1998 sampai tahun 2001 menempuh pendidikan di SLTP Pangudiluhur Moyudan. Setelah menyelesaikan

pendidikan

SLTP,

tahun

2001

melanjutkan ke SMU Pangudiluhur Yogyakarta dan lulus pada tahun 2004. Tahun 2004 penulis melanjutkan pendidikan S1 di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents