PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

EFEK HEPATOPROTEKTIF JANGKA PANJANG FRAKSI HEKSANETANOL EKSTRAK METANOL-AIR DAUN Macaranga tanarius L. TERHADAP AKTIVITAS LAKTAT DEHIDROGENASE PADA TIKUS BETINA GALUR WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) Program Studi Farmasi

oleh : Penina Kurnia Uly NIM : 128114142

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2015


EFEK HEPATOPROTEKTIF JANGKA PANJANG FRAKSI HEKSANETANOL EKSTRAK METANOL-AIR DAUN Macaranga tanarius L. TERHADAP AKTIVITAS LAKTAT DEHIDROGENASE PADA TIKUS BETINA GALUR WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) Program Studi Farmasi

oleh : Penina Kurnia Uly NIM : 128114142

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2015

i


PERSETUJUAN PEMBIMBING

ii


PENGESAHAN SKRIPSI

iii


PERSEMBAHAN

Orang-orang yang berhenti belajar akan menjadi pemilik masa lalu. Orangorang yang masih terus belajar, akan menjadi pemilik masa depan (Mario Teguh) I never dreamed about success. I worked for it (Estee Lauder) Bukan kemampuan yang memutuskan kesuksesan hidup orang. Namun kesungguhan dan tekad berusaha (Mario Teguh)

Kupersembahkan skripsi untuk……………… Tuhan Yesus Kristus, sumber segala

pengharapan,

kekuatan, berkat, dan jalan keluar dari setiap persoalan, Papa, Mama, Kakak Ariata dan Beatrix Sahabat-sahabat dan teman-temanku tersayang, Almamaterku tercinta

iv


PERNYATAAN KEASLIAN

v


LEMBAR PERNYATAAN

vi


PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat dan rahmat-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Efek Hepatoprotektif Jangka Panjang Fraksi Heksan-Etanol Ekstrak Metanol-Air

Daun

Macaranga

tanarius

L.

Terhadap

Aktivitas

Laktat

Dehidrogenase Pada Tikus Betina Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida” ini dengan baik. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Penulis menyadari bahwa dalam penyelesaian skripsi tentunya tidak lepas dari bantuan dan campur tangan dari berbagai pihak, baik secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu, penulis hendak mengucapkan terimakasih kepada : 1.

Ibu Aris Widayati, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

2.

Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dosen Pembimbing dan Dosen Penguji pada skripsi ini atas segala kesabaran, masukan, bantuan, bimbingan, dan motivasi kepada penulis selama pengerjaan skripsi ini.

3.

Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, Apt. selaku Dosen Penguji skripsi yang telah memberi banyak perhatian, masukan, dan saran kepada penulis.

4.

Ibu Dita Maria Virginia, S. Farm., M.Sc., Apt. selaku Dosen Penguji skripsi yang telah memberi banyak perhatian, masukan, dan saran kepada penulis.

5.

Ibu Agustina Setiawati, M.Sc., Apt. selaku Kepala Penanggungjawab Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian skripsi ini. vii


6.

Pak Heru, Pak Parjiman, Pak Kayat, Pak Wagiran, dan Pak Agung selaku laboran laboratorium Fakultas Farmasi, atas segala bantuan dan kerja sama selama di laboratorium.

7.

Rekan-rekan tim skripsi Macaranga 2015, Novita, Cyndi Yulanda P., Cinthya Anggarini, Oktariani Aurelia J., Dian Ayu M., Maria Angelika S., Rahayu Triwanti, dan Sona Karisnata I., atas segala kerja sama, bantuan dan dukungan dalam pengerjaan skripsi.

8.

Seluruh dosen dan teman-teman FSM D 012, FKK B 012 serta seluruh angkatan 2012 Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

9.

Orang tua penulis yang selalu memotivasi dan mendanai sebagian besar penelitian ini.

10.

Kedua kakak penulis yang selalu setia membantu dan mendukung pengerjaan skripsi.

11.

Pihak-pihak lain yang ikut membantu selama penyusunan skripsi yang tidak dapat disebutkan satu-persatu Penulis menyadari bahwa setiap manusia tidak ada yang sempurna. Oleh

karena itu, penulis mengharapkan adanya kritik, saran dan masukan yang berguna bagi kemajuan di masa yang akan datang. Semoga tulisan ini dapat memiliki manfaat sekecil apapun bagi perkembangan ilmu pengetahuan khususnya di bidang kefarmasian, serta semua pihak, baik mahasiswa, lingkungan akademis, maupun masyarakat. Yogyakarta, 5 November 2015

Penulis

viii


DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL ..............................................................................

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ....................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN ................................................................

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................

iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................

v

PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ..................................

vi

PRAKATA .............................................................................................

vii

DAFTAR ISI ..........................................................................................

ix

DAFTAR TABEL ..................................................................................

xiv

DAFTAR GAMBAR .............................................................................

xv

DAFTAR LAMPIRAN ..........................................................................

xvii

INTISARI ...............................................................................................

xviii

ABSTRACT .............................................................................................

xix

BAB I. PENGANTAR ...........................................................................

1

A. Latar Belakang ............................................................................

1

1. Perumusan masalah ..................................................................

4

2. Keaslian penelitian .................................................................

5

3. Manfaat penelitian ..................................................................

6

a. Manfaat teoritis .................................................................

6

b. Manfaat praktis ................................................................

6

B. Tujuan Penelitian .........................................................................

6

ix


1. Tujuan umum ........................................................................

6

2. Tujuan khusus ......................................................................

7

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ....................................................

8

A. Hepar .............................................................................................

8

1. Anatomi dan Fisiologi hepar ...................................................

8

2. Kerusakan hepar ......................................................................

11

B. Laktat Dehidrogenase .................................................................

19

C. Hepatotoksin ...............................................................................

23

D. Karbon tetraklorida .....................................................................

24

E. Macaranga tanarius L. ...............................................................

27

1. Sinonim ...........................................................................

27

2. Nama lain .......................................................................

28

3. Taksonomi ......................................................................

28

4. Morfologi ........................................................................

28

5. Kandungan …….............................................................

29

6. Khasiat dan kegunaan ......................................................

31

F. Ekstraksi .......................................................................................

32

G. Fraksinasi .....................................................................................

34

H. Landasan teori .............................................................................

35

I. Hipotesis ......................................................................................

37

BAB III. METODE PENELITIAN ........................................................

38

A. Jenis dan Rancangan Penelitian ..................................................

38

x


B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional .............................

38

1. Variabel utama.......................................................................

38

2. Variabel pengacau .................................................................

39

3. Definisi operasional ..............................................................

39

C. Bahan Penelitian .........................................................................

41

1. Bahan utama .........................................................................

41

2. Bahan kimia ..........................................................................

41

D. Alat Penelitian ............................................................................

42

1. Alat pembuatan serbuk kering daun M. tanarius ………….

42

2. Alat pembuatan fraksi daun M. tanarius …………………..

42

3. Alat uji hepatoprotektif …………………………………….

43

E. Tata Cara Penelitian ...................................................................

43

1. Determinasi daun M. tanarius ............................................

43

2. Pengumpulan bahan uji ........................................................

43

3. Pembuatan serbuk daun M. tanarius ...................................

44

4. Penetapan kadar air serbuk daun M. tanarius ......................

44

5. Pembuatan ekstrak metanol-air daun M. tanarius ...............

44

6. Pembuatan fraksi daun M. tanarius .....................................

45

7. Pembuatan larutan CMC-Na 1% ......................................

46

8. Pembuatan suspensi FHEMM …………… .....................

46

9. Pembuatan larutan karbon tetraklorida ………………….

46

10. Uji Pendahuluan .................................................................

46

xi


11. Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji .......................

47

12. Pengukuran aktivitas LDH .................................................

48

F. Tata Cara Analisis Hasil .............................................................

49

G. Ruang Lingkup Penelitian …………………………………….

50

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ..............................................

51

A. Penyiapan Bahan ........................................................................

51

1. Hasil determinasi tanaman ...................................................

51

2. Pembuatan serbuk daun M. tanarius ....................................

52

3. Penetapan kadar air serbuk daun M. tanarius ....................

52

B. Hasil Penimbangan Bobot Pengeringan tetap dan rendemen FHEMM ....................................................................................

53

C. Uji Pendahuluan ..........................................................................

56

1. Penetapan dosis FHEMM .....................................................

56

2. Penetapan dosis hepatotoksin CCl4 ………………………...

56

3. Penetapan waktu pencuplikan darah ……………………….

57

4. Penetapan lama pemejanan FHEMM.....................................

64

D. Hasil Uji Efek Hepatoprotektif FHEMM Jangka Panjang Terhadap Tikus Betina Galur Wistar Terinduksi CCl4 berdasarkan Aktivitas Serum LDH ............................................................................

64

1. Kontrol Negatif ……………….............................................

67

2. Kontrol Hepatotoksin ............................................................

67

3. Kontrol Dosis tertinggi atau kontrol dosis III .......................

70

xii


4.

Kelompok perlakuan FHEMM dosis I (34,28 mg/kgBB), dosis II (68,57 mg/kgBB) dan dosis III (137,14 mg/kgBB) pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4 dengan dosis 2 mL/kgBB…………………………………..............

71

E. Rangkuman Pembahasan ............................................................

75

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ................................................

77

A. Kesimpulan .................................................................................

77

B. Saran ...........................................................................................

77

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................

78

LAMPIRAN ...........................................................................................

86

BIOGRAFI PENULIS ...........................................................................

110

xiii


DAFTAR TABEL Tabel I.

Nilai purata ± SE aktivitas serum ALT darah tikus setelah pemberian CCl4 dengan dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam ………………………………...........................

Tabel II.

59

Perbedaan kenaikan aktivitas serum ALT setelah pemberian 2 mL/kgBB CCl4 pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24 dan 48 …………………………………………………

Tabel III.

61

Nilai purata ± SE aktivitas serum AST darah tikus setelah pemberian CCl4 dengan dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam …………………………………………….......

Tabel IV.

61

Perbedaan kenaikan aktivitas serum AST setelah pemberian 2 mL/kgBB CCl4 pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24 dan 48 …………………………………………………

Tabel V.

63

Efek hepatoprotektif FHEMM jangka panjang pada dosis 34,28; 68,57; 137,14 mg/kgBB terhadap

aktivitas serum LDH darah tikus

terinduksi CCl4 ……………………………….. Tabel VI.

65

Hasil statistik dengan uji Scheffe nilai aktivitas serum LDH tikus setelah pemberian FHEMM jangka panjang dan induksi CCl4 dengan dosis 2 ml/kgBB …………………………………….

xiv

66


DAFTAR GAMBAR Gambar 1.

Anatomi Hepar ...............................................................

8

Gambar 2.

Lobulus Hepar ...............................................................

10

Gambar 3.

Mekanisme kerusakan sel hepar karena obat ................

14

Gambar 4.

Patogenesis perlemakan hepar .......................................

16

Gambar 5.

Isoenzim LDH ...............................................................

20

Gambar 6.

Mekanisme produksi dan eliminasi laktat ……………...

22

Gambar 7.

Struktur Karbon Tetraklorida ………………………….

24

Gambar 8.

Mekanisme CCl4 merusak hepar ……………………….

25

Gambar 9.

Mekanisme CCl4 terhadap akumulasi lemak di hepar ….

27

Gambar 10. Kandungan senyawa ekstrak metanol M. tanarius …….

29

Gambar 11. Kandungan senyawa ekstrak etanol M. tanarius …........

30

Gambar 12. Tiga senyawa baru dari M. tanarius: tanarifuranolol (1) tanariflavanone C (2) tanariflavanone D (3) ….........

30

Gambar 13. Kandungan senyawa ekstrak etil asetat M. tanarius: mallotinic acid (1), corilagin (2), macatannin A (3), chebulagic acid (4) dan macatannin B (5) …..................

31

Gambar 14. Flowchart ruang lingkup penelitian ................................

50

Gambar 15. Diagram batang rata-rata aktivitas serum ALT tikus setelah pemberian 2 ml/kgBB CCl4 pada waktu pencuplikan 0, 24, dan 48 jam ………………………...

xv

59


Gambar 16. Diagram batang rata-rata aktivitas serum AST tikus setelah pemberian 2 ml/kgBB CCl4 pada waktu pencuplikan 0, 24, dan 48 jam ………………………...

62

Gambar 17. Diagram batang purata aktivitas serum LDH setelah praperlakuan pemberian FHEMM selama 6 hari dan pada hari ke-7 diberi 2 ml/kgBB CCl4 …………………

xvi

66


DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Foto daun M. tanarius L. ...............................................

87

Lampiran 2. Foto ekstrak daun M. tanarius L. ....................................

87

Lampiran 3. Foto fraksi daun M. Tanarius .........................................

88

Lampiran 4. Surat determinasi tanaman M. tanarius ..........................

89

Lampiran 5. Surat Ethical Clearance ..................................................

90

Lampiran 6. Hasil analisis statistik data ALT dan AST pada uji pendahuluan waktu pencuplikan darah hewan uji setelah induksi CCl4 2 ml/kgBB ………………………

91

Lampiran 7. Hasil analisis statistik data kontrol CMC-Na 1%, kontrol CCl4, kontrol dosis tertinggi, dan perlakuan pemberian FHEMM dosis 34,28; 68,57; 137,14 mg/kgBB ……….

100

Lampiran 8. Perhitungan penetapan peringkat dosis fraksi daun M. tanarius pada kelompok perlakuan …………………

106

Lampiran 9. Perhitungan konversi dosis untuk manusia ……………..

107

Lampiran 10. Penetepan kadar air serbuk daun M. tanarius ................

108

Lampiran 11. Perhitungan Rendemen FHEMM ..................................

109

xvii


INTISARI

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang fraksi heksan-etanol ekstrak metanol-air daun Macaranga tanarius L. (FHEMM) pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida berdasarkan penurunan aktivitas laktat dehidrogenase (LDH) serta untuk mengetahui kekerabatan antar dosis pemberian FHEMM terhadap penurunan aktivitas LDH pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida. Penelitian ini bersifat eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Hewan uji yang digunakan adalah tikus putih betina galur Wistar umur 2-3 bulan dengan berat 130-180 gram. Tiga puluh ekor tikus dibagi acak dalam 6 kelompok perlakuan. Kelompok I merupakan kontrol negatif CMCNa 1% yang diberikan selama 6 hari berturut-turut. Kelompok II merupakan kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB. Kelompok III diberikan FHEMM dosis tertinggi tanpa induksi karbon tetraklorida selama 6 hari berturutturut. Kelompok IV-VI merupakan perlakuan FHEMM dengan 3 peringkat dosis (34,28; 68,57; dan 137,14 mg/kgBB) yang diberikan selama 6 hari berturutan, pada hari ke-7 diberikan karbon tetraklorida. Pengambilan darah dilakukan pada jam ke-24 untuk pengukuran kadar LDH. Kadar LDH dianalisis dengan metode Shapiro-Wilk dan diperoleh distribusi data tiap kelompok normal maka dilanjutkan dengan analisis pola searah (One Way Anova) dengan taraf kepercayaan 95%. Uji Scheffe dilakukan untuk melihat perbedaan antar kelompok bermakna (signifikan) (p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan) (p>0,05). Hasil penelitian menunjukkan bahwa FHEMM terbukti berpengaruh dalam menurunkan aktivitas serum LDH tikus betina galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB. Tidak terdapat kekerabatan antar dosis FHEMM dengan aktivitas serum LDH yang muncul, yang terlihat dari semakin besar dosis praperlakuan FHEMM, kadar LDH relatif sama. Kata kunci: Macaranga tanarius L., fraksi ekstrak metanol, karbon tetraklorida, laktat dehidrogenase.

xviii


Abstract

The purposes of this research were to find out the long-term effect of hexane-ethanol fraction, derived from methanol-water extract Macaranga tanarius L. leaves (FHEMM), toward Wistar female rats that were induced by carbon tetrachloride based on the decreased lactate dehydrogenase (LDH) activity; and to perceive the correlation of FHEMM doses toward the decreased in LDH activity on Wistar female rats induced by carbon tetrachloride. This research was done in a pure experimental method by using completely randomized design in one direction. Animal tested for this research was Wistar female rats at the age of 2 to 3 months and with a weight of 130-180 grams. Thirty rats were divided randomly into 6 groups. The first group was the negative control of 1% CMC-Na which was given for 6 days in a row. The second group was the control of 2 ml/kgBW carbon tetrachloride as a hepatotoxin. The third group was given the highest dose of FHEMM without being induced by carbon tetrachloride for six days in a row. The fourth to sixth group were provided with FHEMM with three rankings of dose (34.28; 68.57; and 137.14 mg/kgBW) for six days in a row, and on the 7th day carbon tetrachloride was granted. The blood sampling was accomplished on the 24th hour to carry out the measurement of LDH level. LDH level was analyzed by refering to Shapiro-Wilk, and since the data distribution of each group was normal, One Way Anova design with 95% confidence interval continued. Scheffe test was performed to witness the difference between significant groups (p<0.05) and insignificant groups (p>0.05) The result showed that the FHEMM had an effect in lowering the serum LDH activity of Wistar female rats induced by 2 ml/kgBW carbon tetrachloride. There’s no correlation found between FHEMM doses and the emergence of serum LDH activity, which was seen from the more the dose of FHEMM pre-treatment given, the more LDH levels looked relatively the same. Keywords: Macaranga tanarius L., fraction, methanol extract, carbon tetrachloride, lactate dehydrogenase

xix


BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang

Hepar merupakan organ terbesar dalam tubuh manusia. Pada hepar terjadi proses-proses penting bagi kehidupan seperti metabolisme karbohidrat, lemak, protein, dan detoksifikasi racun atau obat yang masuk ke dalam tubuh (Price and Wilson, 2005). Hepar merupakan organ yang paling sering rusak (Lu, 1995). Beberapa penyebab kerusakan hepar yaitu infeksi virus, imunologi, dan obat-obat yang dapat merusak hepar (Williamson, David, and Fred, 1996). Karbon tetraklorida (CCl4) adalah salah satu dari bahan-bahan kimia beracun yang menyebabkan model kerusakan hepar atau bersifat hepatotoksik. Pada penelitian ini, CCl4 digunakan sebagai induktor kerusakan hepar. Hepatotoksik yang ditimbulkan oleh CCl4 disebabkan oleh senyawa hasil metabolisme yang bersifat radikal bebas. Senyawa radikal bebas tersebut adalah triklorometil

yang

dapat

bereaksi

dengan

oksigen

membentuk

triklorometilperoksida (Weber, Boll, and Stampfl, 2003). Triklorometil dengan bantuan katalis enzim sitokrom P-450 dapat menimbulkan peroksidasi lipid. Hasil ini dapat menyebabkan kerusakan sel berupa perlemakan hepar (steatosis) (Timbrell, 2008).

1


2

Pada tahun 2001, angka kejadian perlemakan hepar 30,6% dari 1000 orang dengan usia 25 tahun ke atas di kota Depok. Pasien perlemakan hepar umumnya berusia 40-50 tahun. Perlemakan hepar dapat menyebabkan sirosis, tetapi potensinya lebih kecil dibandingkan akibat virus. Dari 100 orang penderita perlemakan hepar, 10-15 orang dapat mengalami sirosis (Sey, 2003). Prevalensi kejadian steatosis dan steatohepatitis pada obesitas tipe 1 (BMI 30-39,9 kg/m2) adalah 65% dan 20%, sedangkan pada obesitas tipe 2 (BMI ≥ 40 kg/m2) adalah 85% dan 40% (Petersen, Dufour, Feng, Befroy, Dziura, and Dalla Man, 2006). Sel-sel hepar yang mengalami kerusakan akan mengakibatkan enzimenzim yang terdapat di dalam hepatosit tersebut terlepas ke dalam sirkulasi sistemik sehingga kadar enzim-enzim tersebut akan meningkat dalam darah. Enzim-enzim

tersebut

antara

lain

alkaline

phosphatase

(ALP),

laktat

dehidrogenase (LDH), aspartat aminotransferase (AST), alanin aminotransferase (ALT), dan gamma glutamil transferase (GGT) (Weber, Boll, and Stampfl, 2003). Pada penelitian ini digunakan enzim LDH sebagai parameter kerusakan hepar. Laktat dehidrogenase (LDH) merupakan enzim intraseluler yang terdapat pada hampir semua sel yang bermetabolisme. LDH memfasilitasi proses glukosa menjadi energi di dalam sel. LDH terdapat pada banyak organ dan jaringan di dalam tubuh seperti hepar, jantung, pankreas, ginjal, otot rangka, otak, dan sel darah. Aktivitas LDH total dalam serum dapat meningkat pada hampir semua keadaan kerusakan organ atau jaringan atau bila terjadi destruksi sel. Ada 5 tipe LDH yang biasa disebut sebagai isoenzim, yaitu isoenzim LDH 1, LDH 2, LDH

2


3

3, LDH 4, dan LDH 5. Isoenzim LDH-5 mempunyai konsentrasi yang tertinggi pada organ hepar (Vincent and Muhopadhyay, 2008). Radikal bebas dari CCl4 dapat diredam oleh suatu antioksidan. Dalam kondisi normal radikal bebas jumlahnya seimbang dengan antioksidan sebagai suatu mekanisme pertahanan. Hepar berfungsi sebagai sistem pertahanan tubuh tentunya juga memiliki sistem antioksidan yang cukup baik. Tetapi bila hepar telah rusak karena bahan toksik, maka perlu diberi tambahan antioksidan dari luar (Zimmerman, 1999). Salah satu tanaman yang mempunyai aktivitas antioksidan yaitu

Macaranga

tanarius

L.

Macaranga

tanarius

L.

(M.

tanarius,

Euphorbiaceae) merupakan tanaman tropis yang tersebar secara merata di Asia Selatan dan biasanya disebut sebagai tanaman bersemut (Kumazawa, Murase, Momose, and Fukumoto, 2013). Akan tetapi, M. tanarius juga dapat ditemukan di Indonesia dan merupakan tanaman asli Indonesia (World Agroforestry Centre, 2002). Pada penelitian Kumazawa et al. (2013) melaporkan bahwa ekstrak etanol M. tanarius mempunyai aktivitas antioksidan dan antimikroba. Phommart, Sutthivaiyakit, Chimnoi, Ruchirawat, and Sutthivaiyakit (2005) melaporkan bahwa M. tanarius mempunyai aktivitas antiinflamasi. Pada penelitian Matsunami, Otsuka, Kondo, Shinzato, Kawahata, Yamaguchi, and Takeda (2009) melaporkan bahwa ekstrak metanol M. tanarius mempunyai aktivitas antioksidan karena mempunyai macarangiosida A-C dan malofenol B yang dapat menangkap radikal terhadap DPPH. Berdasarkan penelitian Adrianto (2010) melaporkan bahwa ekstrak metanol-air daun M. tanarius mempunyai efek hepatoprotektif. Nurcahyanti (2013) melaporkan bahwa infusa air daun M. tanarius mempunyai


efek hepatoprotektif.

Fraksi

heksan-diklorometan ekstrak metanol

4

daun

Macaranga denticulate dan Macaranga pruinosa memiliki kandungan aktivitas antioksidan tertinggi dibandingkan fraksi pelarut lainnya (Mazlan, Mediani, Abas, Ahmad, Shaari, Khamis, dan Lajis, 2013). Belum ada penelitian mengenai fraksi heksan-etanol ekstrak metanol-air M. tanarius (FHEMM). Oleh karena itu, dilakukan penelitian mengenai efek hepatoprotektif pemberian jangka panjang FHEMM terhadap aktivitas LDH pada tikus yang terinduksi CCl4. Selain itu, pemilihan pelarut fraksi heksan dan etanol didasarkan pada kepolaran senyawa M. tanarius. Kepolaran heksan dan etanol diketahui dengan menggunakan aplikasi Marvin sketch yaitu sebesar 2,97 yang memiliki kepolaran yang hampir sama dengan senyawa ellagitannin pada M. tanarius yang berhasil diteliti oleh Puteri dan Kawabata (2010) yaitu Chebulagic acid (2,64), Macatanin A (2,76) dan Macatanin B (2,94) sehingga diharapkan ketiga senyawa tanin tersebut dapat diisolasi dengan pelarut heksan dan etanol karena adanya persamaan kepolaran. Fraksi ekstrak metanol-air M. tanarius dipilih karena pada bentuk ekstrak dan infusa sudah dapat menghasilkan efek hepatoprotektif, sehingga diharapkan pada bentuk fraksi juga dapat menghasilkan efek hepatoprotektif dengan kandungan senyawa yang lebih spesifik yaitu ellagitannin. 1.

Perumusan Masalah Permasalahan yang diajukan dalam penelitian ini berdasarkan uraian latar belakang di atas adalah :


a.

5

Apakah pemberian jangka panjang FHEMM pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4 mempunyai efek hepatoprotektif berdasarkan aktivitas LDH ?

b.

Apakah terdapat kekerabatan antara dosis FHEMM jangka panjang terhadap penurunan kadar serum LDH pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4 ?

2.

Keaslian Penelitian Sebelumnya pernah dilakukan penelitian yang berhubungan dengan daun M. tanarius. Berdasarkan penelitian Phommart et al. (2005) melaporkan bahwa flavonoid dari ekstrak n-heksan dan kloroform daun M. tanarius mempunyai aktivitas antioksidan terhadap 1,1-diphenyl-2pycrylhydrazyl

(DPPH).

Macarangioside

A,

macarangioside

B,

macarangioside C, dan malofenol B yang diisolasi dari ekstrak metanol daun M. tanarius menunjukkan aktivitas yang poten terhadap DPPH (Matsunami et al., 2009). Pada penelitian invivo menunjukkan bahwa ekstrak metanol-air M. tanarius mempunyai efek analgesik pada mencit betina (Andini, 2010).

Windrawati (2013) melaporkan bahwa dosis

sebesar 3840 mg/kgBB merupakan dosis efektif untuk memberikan efek hepatoprotektif jangka panjang ekstrak metanol-air daun M. tanarius. Berdasarkan penelitian Tiala (2013) telah dilakukan penelitian efek hepatoprotektif dengan pemberian ekstrak metanol-air daun M. tanarius. Nurcahyanti (2013) melaporkan bahwa infusa air daun M. tanarius mempunyai efek hepatoprotektif. Fraksi heksan dan diklorometan ekstrak


6

metanol daun Macaranga denticulate dan Macaranga pruinosa memiliki kandungan aktivitas antioksidan tertinggi (Mazlan dkk., 2013). Sejauh penelurusan

pustaka

yang

dilakukan,

penelitian

mengenai

efek

hepatoprotektif jangka panjang FHEMM pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4 berdasarkan aktivitas LDH belum pernah dilakukan. 3.

Manfaat Penelitian a.

Manfaat Teoritis Hasil penelitian dapat memberikan informasi dalam bidang kefarmasian yang berhubungan dengan efek hepatoprotektif jangka panjang FHEMM

b.

Manfaat Praktis Hasil penelitian dapat memberikan informasi kepada masyarakat mengenai manfaat penggunaan jangka panjang daun M. tanarius dalam menurunkan kadar LDH. B. Tujuan Penelitian

a.

Tujuan Umum Untuk mengetahui FHEMM terhadap penurunan aktivitas LDH pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4.


b.

7

Tujuan Khusus -

Untuk mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang FHEMM pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4 berdasarkan aktivitas LDH.

-

Untuk mengetahui kekerabatan antar dosis pemberian FHEMM terhadap penurunan kadar serum LDH pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Hepar 1.

Anatomi dan Fisiologi Hepar Hepar merupakan organ terbesar dalam tubuh manusia dengan berat

kurang lebih 1,5 kg, 2,5% dari berat tubuh orang dewasa normal (Jungueira and Carneiro, 2002). Pada kondisi hidup, hepar berwarna merah tua karena kaya akan persediaan darah (Sloane, 2004). Permukaan atas hepar terletak bersentuhan dibawah diafragma, permukaan bawah terletak bersentuhan diatas organ-organ abdomen. Batas atas hepar sejajar dengan ruang interkosta V kanan dan batas bawah menyerong ke atas dari iga IX kanan ke iga VIII kiri. Permukaan posterior hepar berbentuk cekung dan terdapat celah transversal sepanjang 5 cm dari sistem porta hepatis (Gambar 1) (Amirudin, 2009).

Gambar 1: Anatomi Hepar (Toole and Susan, 1999) Secara anatomis hepar terdiri dari lobus kanan yang besar dan lobus kiri yang lebih kecil. Keduanya dipisahkan di anterosuperior oleh ligamentum 8


9

falsiforme dan postero-inferior oleh fisura untuk ligamentum venosum dan ligamentum teres. Pada klasifikasi anatomis, lobus kanan terdiri dari lobus kaudatus dan kuadratus. Akan tetapi, secara fungsional lobus kaudatus dan sebagian besar lobus kuadratus merupakan bagian dari lobus kiri karena mendapat darah dari arteri hepatika sinistra dan aliran empedunya menuju duktus hepatika sinistra. Oleh karenanya, klasifikasi fungsional hepar menyatakan bahwa batas antara lobus kanan dan kiri terletak pada bidang vertikal yang berjalan ke posterior dari kandung empedu menuju vena kava inferior (Faiz and Moffat, 2003). Bila permukaan postero-inferior (viseral) hepar dilihat dari belakang terlihat bentuk huruf H yang terdiri dari sulkus dan fosa. Batas-batas huruf H ini adalah : a.

Kaki anterior kanan-fosa kandung empedu.

b.

Kaki posterior kanan-sulkus untuk vena kava inferior.

c.

Kaki anterior kiri-fisura yang berisi ligamentum teres (sisa vena umbilikalis sinistra fetus yang mengalirkan kembali darah yang mengandung oksigen dari plasenta ke fetus).

d.

Kaki posterior kiri-fisura untuk ligamentum venosum (struktur ini merupakan sisa ductus venosus fetus; pada fetus duktus venosus berfungsi sebagai jalan pintas yang mempersingkat aliran darah dari vena umbilikalis sinistra langsung ke vena kava inferior tanpa melalui hepar).

e.

Kaki horizontal-porta hepatis. Lobus kaudatus dan kuadratus hepar adalah daerah yang terletak di atas dan di bawah batang horizontal H.


10

Hepar terdiri dari banyak unit fungsional (Gambar 2). Hepar disuplai oleh dua pembuluh darah yaitu vena porta hepatika yang berasal dari lambung dan usus yang kaya akan nutrien seperti asam amino, monosakarida, vitamin yang larut dalam air dan mineral; dan arteri hepatika, cabang dari arteri koliaka yang kaya akan oksigen. Cabang-cabang vena porta dan arteri hepatika mentranspor darah melalui kanalis porta menuju vena sentralis melalui sinusoid yang melintasi lobulus. Vena sentralis akhirnya bergabung dengan vena hepatika dekstra, sinistra, dan sentralis yang mengalirkan darah dari daerah hepar di sekitarnya kembali ke vena kava inferior. Kanalis porta juga mendapat percabangan dari duktus hepatika yang mengalirkan empedu dari lobulus ke bawah ke cabang bilier dimana empedu bisa dikonsentrasikan dalam kandung empedu dan akhirnya dikeluarkan ke duodenum. Panjang usus yang darahnya mengalir melalui vena porta menjelaskan predisposisi tumor usus bermetastasis ke hepar (Faiz and Moffat, 2003).

Gambar 2: Lobulus Hepar (Faiz and Moffat, 2003). Hepar adalah organ metabolik terbesar dan terpenting di tubuh. Organ ini penting bagi sistem pencernaan untuk sekresi empedu. Hepar menghasilkan empedu sekitar satu liter per hari, yang diekskresi melalui duktus hepatikus kanan dan kiri yang kemudian bergabung membentuk duktus hepatikus komunis. Selain


11

sekresi empedu, hepar juga melakukan berbagai fungsi lain, mencakup hal-hal berikut: 1.

Pengolahan metabolik kategori nutrien utama (karbohidrat, lemak, protein).

2.

Detoksifikasi atau degradasi zat-zat sisa dan hormon serta obat dan senyawa asing lainnya.

3.

Sintesis berbagai protein plasma, mencakup protein-protein yang penting untuk pembekuan darah serta untuk mengangkut hormon tiroid, steroid dan kolesterol dalam darah.

4.

Penyimpanan glikogen, lemak, besi, tembaga dan banyak vitamin.

5.

Pengaktifan vitamin D yang dilakukan oleh hepar bersama dengan ginjal.

6.

Pengeluaran bakteri dan sel darah merah yang sudah tua atau rusak.

7.

Ekskresi kolesterol dan bilirubin yang merupakan produk penguraian yang berasal dari pemecahan sel darah merah yang sudah tua atau rusak (Sherwood, 2001).

2.

Kerusakan Hepar Kondisi toksisitas hepar dipersulit oleh berbagai kerusakan hepar dan

mekanisme yang menyebabkan kerusakan tersebut. Hepar sering menjadi organ sasaran zat toksikan karena sebagian besar toksikan memasuki tubuh melalui sistem gastrointestinal dan setelah toksikan diserap lalu dibawa oleh vena porta ke dalam hepar (Lu, 1995).


12

Kerusakan hepar karena zat toksik dipengaruhi oleh beberapa faktor, seperti jenis zat kimia, dosis yang diberikan, dan lamanya paparan zat tersebut seperti akut, subkronik atau kronik. Semakin tinggi konsentrasi suatu senyawa yang diberikan maka respon toksik yang ditimbulkan semakin besar. Kerusakan hepar dapat terjadi segera atau setelah beberapa minggu sampai beberapa bulan. Kerusakan dapat berbentuk nekrosis hepatosit, kolestasis, atau timbulnya disfungsi hepar secara perlahan-lahan (Amalina, 2009). Hepatotoksisitas akibat senyawa kimia merupakan komplikasi potensial yang hampir selalu ada pada setiap senyawa kimia yang diberikan karena hepar merupakan pusat disposisi metabolik dari semua obat dan bahan asing yang masuk. Sebagaimana yang dinyatakan Robins and Kumar (1992) bahwa kerusakan sel hepar jarang disebabkan oleh suatu substansi secara langsung, melainkan seringkali oleh metabolit toksik dari substansi yang bersangkutan. Hepar merupakan organ paling sering rusak (Lu, 1995). Karena metabolisme obat/ berbagai senyawa terutama terjadi dalam hepar, sehingga kemungkinan terjadinya kerusakan organ ini menjadi sangat besar (Powell and Piper, 1989). Apabila proses metabolisme tidak berjalan dengan normal, maka akan menimbulkan berbagai penyakit, salah satunya adalah penyakit yang terjadi di hepar. Sel-sel yang terdapat di hepar akan terdeposit sehingga akan mengalami perubahan (Sherwood, 2001). Selain itu, hepar juga mempunyai kemampuan untuk mengeluarkan toksikan dengan kapasitasnya yang lebih tinggi dalam proses biotransformasi toksikan. Akan tetapi paparan oleh berbagai bahan toksik secara berlebih dapat menyebabkan kerusakan hepar.


13

Kerusakan hepar dapat dibedakan menjadi 2 yaitu kerusakan hepar akut dan kerusakan hepar kronis. Kerusakan hepar akut disebabkan karena virus, obatobatan, alkohol dan keadaan iskemik. Kerusakan hepar akut ditandai dengan adanya penyakit kuning, hipoglikemia, gangguan elektrolit dan asam-basa, ensefalopati hepar, dan kenaikan serum enzim yang berhubungan dengan kasus nekrosis hepar. Kerusakan hepar akut memiliki angka kematian yang tinggi. Sedangkan kerusakan hepar kronis yaitu hepatitis kronis, sirosis hepar dan hepatoma (Chandrasoma and Taylor, 1995). Mekanisme kerusakan sel hepar karena obat (Gambar 3) : 1.

Apabila

reaksi

energi

tinggi

melibatkan

enzim

sitokrom

p-450

menyebabkan ikatan kovalen obat dengan protein intrasel, maka akan terjadi disfungsi intraseluler berupa hilangnya gradien ion, penurunan kadar ATP, dan disrupsi aktin pada permukaan hepatosit yang menyebabkan pembengkakan sel. 2.

Disrupsi aktin pada membran kanalikuli dapat menghalangi aliran bilier menyebabkan kolestasis. Kolestasis bersama dengan proses kerusakan intrasel akan menyebabkan akumulasi asam empedu sehingga menyebabkan kerusakan hepatosit lebih lanjut.

3.

Reaksi

hepatoseluler

yang

melibatkan

senyawa

besi

heme

akan

menyebabkan timbulnya ikatan kovalen antara enzim dengan obat sehingga reaksi enzimatik tidak bekerja. 4.

Obat dengan molekul kecil berfungsi sebagai hapten membentuk kompleks apoprotein yang bermigrasi dalam bentuk vesikel. Vesikel kemudian


14

menginduksi sel T untuk membentuk antibodi atau menginduksi respon sitotoksik sel T dan sitokin. 5.

Obat yang bersifat imunogenik dapat mengaktifasi Tumor Necrosis Factorα (TNF-α) sehingga memicu terjadinya apoptosis.

6.

Obat yang menghambat proses oksidasi dan sistem respirasi mitokondria, akan menyebabkan penumpukan Reactive Oxygen Species/Reactive Ntrogen Species (ROS/RNS), gangguan sintesis ATP. Selama sel tidak mendapat energi dari proses oksidatif, maka akan terjadi glikolisis anaerob yang memproduksi ATP dan energi. Akibatnya, produksi asam laktat meningkat menyebabkan DNA inti memadat, sehingga sintesis RNA baru dan protein akan terhenti. Selain itu, akumulasi ROS/RNS yang berlebihan dapat memacu proses apopotosis (Lee, 2003).

Gambar 3. Mekanisme kerusakan sel hepar karena obat (Lee, 2003).


15

Jenis-jenis kerusakan hepar yang dapat timbul dari berbagai jenis senyawa toksik : 1.

Steatosis (Perlemakan hepar) Perlemakan hepar adalah keadaan dimana lemak yang terdapat di hepar

melebihi 5% dari berat hepar normal (Soemarto, 1996). Secara teoritis lemak dapat mengalami akumulasi di hepar melalui beberapa mekanisme (Gambar 4) yaitu, a.

Peningkatan transfer lemak atau asam lemak dari usus ke hepar. Makanan berlemak dikirim melalui sirkulasi terutama dalam bentuk kilomikron. Lipolisis pada jaringan adiposa melepaskan asam lemak kemudian bergabung dengan trigliserida di dalam adiposit, tetapi beberapa asam lemak dilepaskan ke dalam sirkulasi dan diambil oleh hepar, sisa kilomikron juga dikirim ke hepar.

b.

Peningkatan sintesis asam lemak atau pengurangan oksidasi di mitokondria, keduanya akan meningkatkan sintesis trigliserida melalui proses esterifikasi.

c.

Gangguan pengeluaran trigliserida keluar dari sel hepar. Pengeluaran trigliserida dari sel hepar tergantung ikatannya dengan apoprotein, fosfolipid dan kolesterol untuk membentuk very low density lipoprotein (VLDL).

d.

Kelebihan karbohidrat yang dikirim ke hepar dapat dirubah menjadi asam lemak (Carithers and McClain, 2010).


16

Gambar 4 : Patogenesis perlemakan hepar (Zivkovic, German, and Sanyal 2007).

2.

Nekrosis Hepar Nekrosis hepar merupakan kematian hepatosit dan merupakan kerusakan

hepar akut. Beberapa zat kimia dapat menyebabkan nekrosis akut (Lu, 1995). Nekrosis ditandai dengan pembengkakan sel, kebocoran, disintegrasi nukleus, dan adanya sel-sel inflamasi. Nekrosis sel hepar fokal adalah nekrosis yang terjadi secara acak pada satu sel atau sekelompok kecil sel pada seluruh daerah lobuluslobulus hepar. Nekrosis ini dikenali pada biopsi melalui badan asidofilik (councilman) yang merupakan sel hepar nekrotik dengan inti piknotik atau lisis dan sitoplasma terkoagulasi berwarna merah muda. Selain itu dapat dikenali juga pada daerah lisis sel hepar yang dikelilingi oleh kumpulan sel kupffer dan sel radang. Nekrosis zona sel hepar adalah nekrosis sel hepar yang terjadi pada regioregio yang identik disemua lobulus hepar, sedangkan nekrosis submasif merupakan nekrosis sel hepar yang meluas melewati batas lobulus, sering menjembatani daerah portal dengan vena sentralis (bridging necrosis).


17

(Chandrasoma and Taylor, 2005). Nekrosis dapat dideteksi dengan pengujian biokimia plasma (atau serum) untuk enzim yang dihasilkan di sitosol, aktivitas enzim alanin aminotransferase (ALT) yang mendominasi enzim di hepatosit dan aktivitas enzim LDH yang terdapat di berbagai jaringan (Gregus and Klaaseen, 2001). 3.

Kolestasis Kegagalan produksi atau pengeluaran empedu merupakan definisi dari

kolestasis. Kolestasis dapat menyebabkan gagalnya penyerapan lemak, vitamin dan juga terjadi penumpukan asam empedu, bilirubin, dan kolesterol di hepar (Depkes RI, 2007). 4.

Sirosis Hepar Sirosis hepar adalah penyakit hepar menahun yang ditandai dengan

adanya pembentukan jaringan ikat disertai nodul. Biasanya dimulai dengan adanya proses peradangan nekrosis sel hepar yang luas, pembentukan jaringan ikat dan usaha regenerasi nodul. Distorsi arsitektur hepar akan menimbulkan perubahan sirkulasi mikro dan makro menjadi tidak teratur akibat penambahan jaringan ikat dan nodul tersebut. Telah diketahui bahwa penyakit ini merupakan stadium terakhir dari penyakit hepar kronis dan terjadinya pengerasan dari hepar yang akan menyebabkan penurunan fungsi hepar dan bentuk hepar yang normal akan berubah disertai terjadinya penekanan pada pembuluh darah dan terganggunya aliran darah vena porta yang akhirnya menyebabkan hipertensi


18

portal. Pada sirosis dini biasanya hepar membesar, kenyal, tepi tumpul, dan terasa nyeri bila ditekan. Secara fungsional sirosis hepar dibagi menjadi: a.

Sirosis hepar kompensata atau sirosis hepar laten, yang berarti belum adanya gejala klinis yang spesifik. Skrining adalah cara untuk mengetahui penyakit ini.

b.

Sirosis hepar dekompensata atau Active Liver Cirrhosis, dimana terdapat gejala dan tanda klinis yang jelas. Sirosis hepar kompensata merupakan kelanjutan dari proses hepatitis kronik dan pada satu tingkat tidak terlihat perbedaanya secara klinis, hanya dapat dibedakan melalui biopsi hepar (Nurdjanah, 2007). Secara morfologi sirosis hepar bedasarkan besar kecilnya nodul, yaitu:

a.

Makronodular Sirosis makronodular ditandai dengan terbentuknya septa tebal, besarnya bervariasi dan terdapat nodul besar di dalamnya sehingga terjadi regenerasi parenkim (Lawrence, 2005).

b.

Mikronodular Sirosis mikronodular ditandai dengan terbentuk septa tebal teratur yang terdapat dalam parenkim hepar, mengandung nodul halus dan kecil tersebar diseluruh lobul (Lawrence, 2005).

c.

Kombinasi antara bentuk makronodular dan mikronodular Terdapat mikro dan makronodular yang tampak (Lawrence, 2005).


19

Menurut Gall seorang ahli penyakit hepar, membagi penyakit sirosis hepar atas: a.

Sirosis Postnekrotik, atau sesuai dengan bentuk sirosis makronodular atau subacute yellow, atrophy cirrhosis yang terbentuk karena banyak terjadi jaringan nekrosis.

b.

Nutritional cirrhosis , atau sesuai dengan bentuk sirosis mikronodular, sirosis alkoholik, Laennec´s cirrhosis atau fatty cirrhosis. Sirosis terjadi sebagai akibat kekurangan gizi, terutama faktor lipotropik.

c.

Sirosis Post hepatic, sirosis yang terbentuk sebagai akibat setelah menderita hepatitis (Nurdjanah, 2007).

5.

Kanker Hepar Kanker pada hepar yang banyak terjadi yaitu Hepatocellular carcinoma

(HCC) yang merupakan komplikasi dari hepatis kronis yang serius terutama karena virus hepatitis B, C dan hemochromatosis (Lu, 1995).

B. Laktat Dehidrogenase LDH adalah enzim intraseluler yang terdapat pada hampir semua sel yang bermetabolisme dan jika sel rusak maka ditemukan peningkatan kadar LDH dalam serum. LDH serum total tidak spesifik terhadap suatu jaringan tertentu, melainkan isoenzimnya yang dikenal sebagai LDH 1 hingga LDH 5 yang spesifik terhadap jaringan tertentu (Gavaghan, 1999). Ada 5 tipe LDH atau isoenzim dengan konsentrasi yang berbeda pada jaringan atau organ yang berbeda pula, yaitu LDH 1 terdapat pada jantung dan sel


20

darah merah, LDH 2 terdapat pada sel darah putih, LDH 3 terdapat pada paruparu, LDH 4 terdapat pada ginjal, plasenta, dan pankreas, LDH 5 terdapat pada hepar dan otot rangka (Rahaju, 2003) (Gambar 5).

Gambar 5: Isoenzim LDH (Berg, Tymoczko and Stryer, 2002) Nilai normal LDH berdasarkan umur yaitu umur 1-3 hari sebesar 135750 U/L; 31 hari- 11 bulan sebesar 180-435 U/L; 1-3 tahun sebesar 160-370 U/L; 4-6 tahun sebesar 145-345 U/L; 7-9 tahun sebesar 143-290 U/L; 10-12 tahun sebesar 120-293 U/L; 13-15 tahun sebesar 110-283 U/L; 16-17 tahun sebesar 105233 U/L; lebih besar sama dengan 18 tahun sebesar 122-222 (Burtis and Ashwood, 2006). Pengukuran isoenzim dilakukan apabila terjadi peningkatan LDH. Presentasi kadar normal isoenzim pada dewasa yaitu, LDH 1 sebesar 17-27%; LDH 2 sebesar 27-37%; LDH 3 sebesar 18-25%; LDH 4 sebesar 3-8%; LDH 5 sebesar 0-5%. Peningkatan LDH 5 menandakan bahwa terjadi kerusakan pada hepar atau penyakit hepar (Marianne, 2015). Laktat dehidrogenase mengkatalisis proses reduksi piruvat menjadi laktat menghasilkan NADH. Reaksi ini berlangsung di sitosol. Asam laktat atau laktat merupakan hasil akhir dari proses metabolisme. Diperkirakan 1400 mmol asam


21

laktat diproduksi setiap hari. Semua jaringan dapat memproduksi laktat dan asam piruvat dari glukosa (Luft, 2001). Jalur metabolisme glikolisis merupakan langkah awal metabolisme glukosa dan terjadi pada sitoplasma sel. Produk akhir dari proses ini adalah piruvat, yang selanjutnya berdifusi ke dalam mitokondria dan dimetabolisme menjadi karbon dioksida melalui siklus kreb. Metabolisme glukosa menjadi piruvat juga terjadi sebagai akibat reduksi dari kofaktor enzim yang mengoksigenasi bentuk nicotinic acid dehydrogenase (NAD+) menjadi nicotinic acid dehydrogenase (NADH), bentuk tereduksi (Murray, Granner, and Mayes, 1995). NADH/NAD+ merupakan kofaktor pertukaran atom hidrogen yang dilepaskan atau yang dipakai. Oleh karena itu, rasio laktat/piruvat selalu sebanding dengan rasio NADH/NAD+ di sitosol. Konsentrasi laktat yang tinggi juga disertai dengan konsentrasi yang tinggi dari piruvat atau NADH di sitosol, atau keduanya. Sintesis laktat meningkat bila pembentukan piruvat di sitosol melebihi penggunaannya oleh mitokondria. Sintesis laktat juga dapat terjadi bila metabolisme glukosa melebihi kapasitas oksidatif mitokondria (Luft, 2001). Laktat berdifusi keluar dari sel dan dikonversi menjadi piruvat dan selanjutnya dimetabolisme secara aerob menjadi karbondioksida dan ATP. Jantung, hepar, dan ginjal menggunakan laktat dengan cara ini. Sebagai alternatif, jaringan hepar dan ginjal dapat menggunakan laktat untuk menghasilkan glukosa melalui jalur lain yaitu glukoneogenesis. Laktat diproduksi oleh otot, otak, usus


22

dan eritrosit. Laktat dimetabolisme oleh hepar, ginjal, dan jantung (Gambar 6) (Duke, 1999). Glucose

Mitochondrial pO2 (mmHg)

Pyruvic acid

10

Oxidation by Krebs cycle 36 molecules of ATP (1270 kJ energy) Metabolic adaption:

Liver glycogen

Recruitment of redox component

4

of electron transport

1

changes in phosphorylation state requiring DYSOXIA

Glucose

Cori cycle

Pyruvic acid

ATP

2 molecules of ATP + lactate (67 kJ energy)

Membrane transport

Increased intra-

Cell consumption

cellular lactate

Microcirculatory blood flow Increased blood ATP production

lactate

Unable to match demand Sepsis

Clearance by liver,

Alkalosis

Kidney, GI tact,

Regional blood flow

Decreased

Liver function

Intracellular pH

Muscle

Disruption of Transport proteins, Cell membrane synthesis and Specialized cell function

Gambar 6 : Mekanisme produksi dan eliminasi laktat (Duke, 1999)


23

C. Hepatotoksin Hepatotoksin adalah senyawa yang dapat menyebabkan gangguan pada jaringan hepar (Robbins and Kumar, 1995). Hepatotoksin juga merupakan zat yang mempunyai efek toksik pada hepar dengan dosis berlebih atau dalam jangka waktu yang lama (Watt and Zimmerman, 1978). Berdasarkan mekanisme kerusakan hepar, hepatotoksin dibagi menjadi dua macam : a.

Hepatotoksin intrinsik Hepatotoksin intrinsik merupakan hepatotoksin yang dapat diprediksi,

tergantung dosis dan melibatkan mayoritas individu yang menggunakan obat dalam jumlah tertentu. Rentang waktu antara mulainya dan timbulnya kerusakan hepar sangat bervariasi (dari beberapa jam sampai beberapa minggu). Contoh obat dari hepatotoksin tipe ini antara lain tetrasiklin, parasetamol, karbon tetraklorida, dan salisilat (Aslam, Tan dan Prayitno, 2003). b.

Hepatotoksin idiosinkratik Hepatotoksin idiosinkratik merupakan hepatotoksin yang tidak dapat

diprediksi. Hepatotoksin ini terkait dengan hipersensitivitas atau kelainan metabolisme. Respon dari hepatotoksin ini tidak dapat diprediksi dan tidak tergantung pada dosis pemberian. Contoh obat dari hepatotoksin tipe ini antara lain isoniazid, halothane dan chlorpromazine (Aslam dkk., 2003).


D.

24

Karbon Tetraklorida

Gambar 7. Struktur Karbon Tetraklorida (Dirjen POM, 1995).

CCl4 (Gambar 7) merupakan cairan jernih, tak berwarna, tidak larut dalam air, mudah menguap dan mempunyai bau khas. Berat Molekul CCl4 yaitu 153,82 (Dirjen POM, 1995). CCl4 merupakan cairan yang tidak mudah terbakar dan larut dalam etanol, aseton, benzene, dan karbon disulfida. CCl4 digunakan dalam industri sebagai pelarut organik. (Oehha, 2000). CCl4 karsinogenik.

merupakan Pada

senyawa

penelitian

kimia

Haki

yang sudah

(2009)

telah

terbukti

dilakukan

bersifat penelitian

menggunakan hepatotoksin CCl4. Panjaitan, Handharyani, Chairul, Masriani, Zakiah, dan Manalu (2007) melaporkan bahwa sekelompok tikus galur Sprague Dawley yang diinduksi karbon tetraklorida mengalami steatosis pada sel-sel hepar tikus dan kerusakan yang diakibatkan oleh CCl4 sebanding dengan dosis yang diinduksikan. Rosnalini (1995) melakukan penelitian mengenai hepatotoksin CCl4 dengan menggunakan senyawa hepatoprotektif kurkuminoid. CCl4 dapat melalui membran sel dan CCl4 yang tertelan akan didistribusikan ke semua organ, tetapi efek toksiknya terutama terlihat pada hepar (Gambar 8).


25

Gambar 8: Mekanisme CCl4 merusak hepar (Fausto, 2006)

Hepar menjadi target utama karena senyawa ini bergantung pada aktivasi metabolisme sitokrom P-450 (CYP2E1). Dosis rendah karbon tetraklorida dapat menyebabkan perlemakan hepar dan destruksi CYP2E1. Destruksi CYP2E1 terjadi terutama di sentrilobular dan daerah tengah hepar. Senyawa ini selektif untuk isoenzim tertentu, pada tikus diketahui selektif untuk CYP2E1, sedangkan pada isoenzim lain seperti CYP1A1 tidak mempengaruhi (Timbrell, 2008). CCl4 merupakan xenobiotik yang lazim digunakan untuk menginduksi peroksidasi lipid dan keracunan. Dalam endoplasmik retikulum hepar CCl4 dimetabolisme oleh sitokrom P-450 2E1 (CYP2E1) menjadi radikal bebas triklorometil (CCl3*) (Jeon, Hwang, Park, Shin, Choi, Park, 2003). Triklorometil dengan oksigen akan membentuk radikal triklorometilperoksi yang dapat menyerang lipid membran endoplasmik retikulum dengan kecepatan yang melebihi

radikal

bebas

triklorometil.

Selanjutnya

triklorometilperoksi

menyebabkan peroksidasi lipid sehingga mengganggu homeostasis Ca2+, dan


26

akhirnya menyebabkan kematian sel (Shanmugasundaram and Venkataraman, 2006). Penyusun utama membran sel adalah lipid, protein, dan karbohidrat. Lipid yang menyusun membran adalah fosfolipid. Fosfolipid merupakan molekul yang bersifat amfipatik, artinya memiliki daerah hidrofilik dan hidrofobik. Keberadaan dua lapis fosfolipid mengakibatkan membran memiliki permeabilitas selektif, tetapi protein juga ikut menentukan sebagian besar fungsi spesifik membran. Membran plasma dan membran organel memiliki ragam protein yang spesifik. Molekul lipid dan molekul protein pada membran tidak terikat secara kovalen, melainkan melalui interaksi nonkovalen yang kooperatif (Delgado and Remers, 1991). Asam lemak penyusun membran sel khususnya asam lemak rantai panjang tak jenuh (PUFAs) amat rentan terhadap radikal bebas. Menurut Jeon et al. (2003) jumlah PUFAs dalam fosfolipid membran endoplasmik retikulum akan berkurang sebanding dengan jumlah CCl4 yang diinduksikan. Pemberian CCl4 dalam dosis tinggi dapat merusak endoplasmik retikulum, mengakumulasi lipid, mengurangi sintesis protein, mengacaukan proses oksidasi, menurunkan bobot badan, menyebabkan pembengkakan hepar sehingga bobot hepar menjadi bertambah, dan pemberian jangka panjang dapat menyebabkan nekrosis sentrilobular serta degenerasi lemak di hepar. (Jeon et al., 2003) (Gambar 9)


27

Gambar 9: Mekanisme CCl4 terhadap akumulasi lemak di hepar (Fausto, 2006) E. Macaranga tanarius L. Hepatoprotektor merupakan senyawa atau zat berkhasiat yang dapat melindungi sel-sel hepar terhadap pengaruh zat toksik yang dapat merusak sel hepar. Mekanisme senyawa hepatoprotektif antara lain dengan cara detoksifikasi senyawa racun baik yang masuk dari luar (eksogen) maupun yang terbentuk dalam tubuh (endogen) pada proses metabolisme, meningkatkan regenerasi hepar yang rusak, antiradang, dan sebagai imunostimulator (Dalimarta, 2000). Hepar berfungsi sebagai pertahanan tubuh tentunya juga memiliki sistem antioksidan yang cukup baik. Tetapi bila hepar telah rusak karena bahan toksik, maka perlu diberi tambahan antioksidan dari luar. Pada penelitian ini, M. tanarius dipilih sebagai senyawa yang mempunyai fungsi hepatoprotektif terhadap kerusakan yang diinduksi oleh CCl4. 1.

Sinonim Macaranga molliuscula Kurz., Macaranga tomentosa Druce, dan Mappa

tanarius Blume (World Agroforestry Centre, 2002).


2.

28

Nama lain Inggris

: hairy mahang

Filipina

: binunga, himindan, kuyonon

Indonesia

: hanuwa, mapu, mara, tutup ancur

Malaysia

: ka-lo, kundoh, mahang puteh, tampu

Thailand

: hu chang lek, ka-lo, lo khao, mek, paang

Vietnam

: hach dâu-nam (World Agroforestry Centre, 2002)

3.

4.

Taksonomi Kerajaan

: Plantae

Subkerajaan

: Tracheobionta

Divisi

: Spermatophyta

Subdivisi

: Magnoliophyta

Kelas

: Magnoliopsida

Subkelas

: Rosidae

Ordo

: Euphorbiales

Famili

: Euphorbiaceae

Genus

: Macaranga

Spesies

: Macaranga tanarius L.

(Mus, 2008).

Morfologi Tinggi pohon tanaman M. tanarius mencapai 20 meter. Daun berwarna

hijau, berbentuk jantung dan pangkalnya berbentuk bulat dengan ukuran daun sekitar 8-32 x 5-28 cm. Panjang tangkai daun sekitar 6-27 cm. Cabang pohon


29

tebal dan berwarna hijau keabu-abuan. Buah tanaman berbentuk kapsul biccocus dengan panjang 1 cm, berwarna kekuningan. Biji tanaman berbentuk bulat dengan ukuran 5 mm (World Agroforestry Centre, 2002). 5.

Kandungan M. tanarius memiliki berbagai macam kandungan kimia. Daun M.

tanarius mempunyai kandungan senyawa lauroside E, metil brevifolin karboksilat,

isoquercitrin,

hiperin,

mallophenol

B,

macarangioside

A,

macarangioside B, macarangioside C, macarangioside D yang diisolasi dari ekstrak metanol (Gambar 10) (Matsunami, Ichiko, Takakazu, Mitsunori, Kazunari, Hideaki, et al., 2006).

Gambar 10 : Kandungan senyawa ekstrak metanol M. tanarius (Matsunami et al., 2006) Kumazawa et al. (2013) menganalisis mengenai kandungan senyawa antioksidan dari ekstrak etanol M. tanarius yaitu nymphaeol A, nymphaeol B, nymphaeol C, isonymphaeol B, dan 3’-geranyl-naringenin (Gambar 11)


30

Gambar 11 : Kandungan senyawa ekstrak etanol M. tanarius (Kumazawa et al., 2013) Berdasarkan penelitian Phommart et al. (2005) terdapat tiga kandungan senyawa baru ekstrak n-heksan dan kloroform daun M. tanarius yaitu tanarifuranonol, tanariflavanone C, dan tanariflavanone D (Gambar 12) beserta tujuh kandungan yang telah diketahui yaitu nymphaeol A, nymphaeol B, nymphaeol C, tanariflavanone B, blumenol A (vomifoliol), blumenol B (7,8 dihydrovomifoliol dan annuionone)

Gambar 12 : Tiga senyawa baru dari M. tanarius: tanarifuranonol (1) tanariflavanone C (2) tanariflavanone D (3) (Phommart et al., 2005) Puteri dan Kawabata (2010) menganalisis kandungan senyawa antioksidan dari ekstrak etil asetat daun M. tanarius yaitu mallotinic acid, corilagin, macatannin A, chebulagic acid dan macatannin B (Gambar 13)


31

Gambar 13: Kandungan senyawa ekstrak etil asetat M. tanarius: mallotinic acid (1), corilagin (2), macatannin A (3), chebulagic acid (4) dan macatannin B (5) (Puteri dan Kawabata, 2010) 6.

Khasiat dan Kegunaan Daun M. tanarius dapat digunakan sebagai obat diare dan sebagai

antiseptik (Lin, Nonaka, and Nishioka, 1990). Akar M. tanarius dapat digunakan sebagai agen emetik dan ekstrak metanol daun M. tanarius mempunyai aktivitas antibakteri (Lim, Lim, and Yule, 2009). Kumazawa et al. (2013) melaporkan bahwa ekstrak etanol M. tanarius mempunyai aktivitas antioksidan dan antimikroba. Ekstrak metanol-air daun M. tanarius memiliki khasiat sebagai hepatoprotektor jangka panjang (Ardianto, 2010). Nugraha (2010) melaporkan bahwa infusa daun M. tanarius juga memiliki khasiat sebagai efek hepatoprotektif. Ekstrak metanol-air daun M. tanarius memiliki khasiat sebagai antiinflamasi (Kurniawaty, 2007). Menurut penelitian Puteri dan Kawabata (2010), pada ekstrak etil asetat daun M. tanarius mempunyai aktivitas menghambat α-glukosidase yang berpotensi sebagai antidiabetik. Khasiat lain yaitu bahwa kombinasi ekstrak metanol-air daun M. tanarius dengan metformin


32

dapat digunakan sebagai antidiabetes (Oktavia, 2012). Di Cina, tanaman ini dijadikan sebagai produk minuman kesehatan (Lim, et al., 2009). F. Ekstraksi Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari simplisia nabati atau hewan menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian rupa hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Dirjen POM, 1995). Ekstrak dikelompokan atas dasar sifatnya, yaitu : a.

Ekstrak encer adalah sediaan yang memiliki konsistensi semacam madu dan dapat dituang.

b.

Ekstrak kental adalah sediaan yang dilihat dalam keadaan dingin dan tidak dapat dituang. Kandungan airnya berjumlah sampai 30%. Tingginya kandungan air menyebabkan ketidakstabilan sediaan obat karena cemaran bakteri.

c.

Ekstrak kering adalah sediaan yang memiliki konsistensi kering dan mudah dituang, sebaiknya memiliki kandungan lembab tidak lebih dari 5%.

d.

Ekstrak cair adalah ekstrak yang dibuat sedemikian sehingga satu bagian simplisia sesuai dengan dua bagian ekstrak cair (Voight, 1994). Ekstrak diperoleh dengan cara ekstraksi. Ekstraksi adalah penarikan

konstituen yang diinginkan dari simplisia dengan pelarut tertentu, yang dapat melarutkan konstituen yang diinginkan. Secara umum, metode ekstraksi dapat


dibedakan

menjadi

infudasi,

maserasi,

perkolasi,

dan

33

penyarian

berkesinambungan (Dirjen POM, 1979). Proses ekstraksi dapat melalui tahap pembuatan serbuk, pembasahan, penyarian, dan pemekatan. Sistem pelarut yang digunakan dalam ekstraksi harus dipilih berdasarkan kemampuannya dalam melarutkan jumlah yang maksimum dari zat aktif dan yang seminimum mungkin bagi unsur yang tidak diinginkan (Depkes RI, 2000). Ekstraksi dengan metode maserasi merupakan cara penyarian sederhana yang dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari selama beberapa hari pada temperatur kamar dan terlindung dari cahaya sambal diaduk (Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2010) . Proses maserasi berakhir artinya bahwa keseimbangan antara bahan yang diekstraksi pada bagian dalam sel dan luar sel telah tercapai maka proses difusi segera berakhir. Selama maserasi atau proses perendaman dilakukan pengocokan berulang-ulang. Upaya ini menjamin keseimbangan konsentrasi bahan ekstraksi yang lebih cepat di dalam cairan. Sedangkan keadaan diam selama maserasi menyebabkan turunnya perpindahan bahan aktif. Secara teoritis pada suatu maserasi tidak memungkinkan terjadinya ekstraksi absolut. Semakin besar perbandingan simplisia terhadap cairan pengekstraksi, akan semakin banyak hasil yang diperoleh (Voight, 1994). Kerugian dari ekstraksi dengan metode maserasi yaitu pengerjaannya lama dan penyarian kurang sempurna. Maserasi kinetik berarti dilakukan pengulangan penambahan pelarut setelah dilakukan penyaringan maserasi


34

pertama, dan seterusnya. Penyarian diakhiri setelah pelarut tidak berwarna lagi (Depkes RI, 2000). G. Fraksinasi Fraksinasi merupakan proses pemisahan antara zat cair dengan zat cair. Fraksinasi dilakukan secara bertingkat berdasarkan tingkat kepolarannya yaitu dari non polar, semi polar, dan polar. Senyawa yang memiliki sifat non polar akan larut dalam pelarut non polar, yang semi polar akan larut dalam pelarut semi polar, dan yang bersifat polar akan larut dalam pelarut polar (Harborne, 1987). Fraksinasi umumnya dilakukan dengan menggunakan metode corong pisah atau kromatografi kolom. Kromatografi kolom merupakan salah satu metode pemurnian senyawa dengan menggunakan kolom (Sastrohamidjojo, 1985). Corong pisah merupakan peralatan laboratorium yang digunakan untuk memisahkan komponen-komponen dalam campuran antara dua fase pelarut yang memiliki massa jenis berbeda yang tidak tercampur. Macam-macam proses fraksinasi : a.

Proses fraksinasi kering (Winterization) Fraksinasi kering adalah suatu proses fraksinasi yang didasarkan pada berat molekul dan komposisi dari suatu material. Proses ini lebih murah dibandingkan

dengan

proses

yang

lain,

namun

hasil

kemurnian

fraksinasinya rendah. b.

Proses fraksinasi basah (Wet fractionation) Fraksinasi basah adalah suatu proses fraksinasi dengan menggunakan zat pembasah (wetting agent) atau disebut juga proses hydrophilization atau


35

proses detergen. Hasil fraksi dari proses ini sama dengan proses fraksinasi kering. c.

Proses

fraksinasi

dengan

menggunakan

solvent/pelarut

(Solvent

fractionation) Proses fraksinasi ini menggunakan pelarut. Proses fraksinasi ini lebih mahal dibandingkan dengan proses fraksinasi lainnya karena menggunakan bahan pelarut. d.

Proses fraksinasi dengan pengembunan (Fractional condentation) Proses fraksinasi ini didasarkan pada titik didih dari suatu zat/bahan sehingga dihasilkan suatu produk dengan kemurnian yang tinggi. Fraksinasi pengembunan ini membutuhkan biaya yang cukup tinggi (Stahl, 1985). H. Landasan Teori Hepar adalah organ metabolik terbesar dan terpenting di tubuh. Organ ini

penting untuk sekresi empedu, metabolisme karbohidrat, lemak, dan protein, serta detoksifikasi atau degradasi zat-zat sisa, hormon, obat dan juga senyawa asing lainnya (Sherwood, 2001). Senyawa yang bersifat hepatotoksin dapat menyebabkan kerusakan hepar. Salah satu model senyawa hepatotoksin yaitu CCl4. CCl4 merupakan molekul sederhana, yang dapat menyebabkan nekrosis sentrilobular hepatik dan perlemakan di hepar. Target utama dari ketoksikan CCl4 adalah hepar. Toksisitas CCl4 bergantung pada metabolisme aktivasi oleh sitokrom P-450 (CYP2E1) (Timbrell, 2008). CCl4 diaktivasi oleh CYP2E1, CYP2B1 atau CYP2B2 dan


36

CYP3A untuk membentuk radikal triklorometil (Naik and Panda, 2007). CCl4 akan bereasi dengan oksigen membentuk radikal triklorometil peroksi (Gregus dan Klaaseen, 2001). Radikal bebas triklorometil dengan katalis enzim sitokrom P-450 dapat menimbulkan peroksidasi lipid serta dapat berikatan secara kovalen dengan protein dan lipid sehingga mengakibatkan steatosis dan penimbunan lipid yang dapat mengganggu integritas membran sel hepar (Timbrell, 2008). Kadar LDH menjadi tinggi secara abnormal saat serangan jantung dan penyakit hepar, juga beberapa jenis penyakit lain. LDH memegang peranan penting dalam produksi energi dalam sel-sel tubuh (Michael and Roizen, 2007). Daun M. tanarius memiliki aktivitas antioksidan dengan kandungan senyawa laurosida E, metil brevifolin karboksilat, isokuercitin, hiperin, mallophenol B, macarangioside A, macarangioside B, dan macarangioside C, macarangioside D yang diisolasi dari ekstrak metanol yang dapat menangkap radikal bebas terhadap DPPH (Matsunami et al., 2009). Kumazawa et al. (2013) menganalisis mengenai kandungan senyawa antioksidan dari M. tanarius yaitu nymphaeol A, nymphaeol B, nymphaeol C, isonymphaeol B, dan 3’-geranylnaringenin. Berdasarkan penelitian Phommart et al. (2005) terdapat tiga kandungan senyawa baru yaitu tanarifuranonol, tanariflavanon C, dan tanariflavanon D. Berdasarkan penelitian Tiala (2013) telah dilakukan penelitian efek hepatoprotektif dengan pemberian ekstrak metanol-air daun M. tanarius. Nurcahyanti (2013) melaporkan bahwa infusa daun M. tanarius mempunyai efek hepatoprotektif. Fraksi heksan dan diklorometan ekstrak daun Macaranga


37

denticulate dan Macaranga pruinosa memiliki kandungan aktivitas antioksidan tertinggi (Mazlan dkk., 2013). Kandungan senyawa-senyawa ellagitannin M. tanarius yang terlarut dalam pelarut heksan-etanol diharapkan dapat menghambat perlemakan hepar sehingga dapat mengurangi ketoksikan yang disebabkan oleh CCl4.

I. Hipotesis Pemberian jangka panjang FHEMM dapat menurunkan kadar serum LDH pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4.


BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni untuk mengetahui hubungan ada tidaknya akibat setelah perlakuan yaitu penurunan aktivitas serum LDH setelah diberi FHEMM, kemudian terdapat kelompok kontrol sebagai pembanding dan kelompok perlakuan yang diberi perlakuan yang sama. Setiap kelompok diambil darahnya sebelum dan sesudah perlakuan untuk perbandingan. Penelitian ini menggunakan rancangan penelitian acak lengkap pola searah dimana hewan uji diambil secara random dan variabel bebas yang digunakan hanya satu yaitu dosis FHEMM. B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional Variabel-variabel yang digunakan adalah sebagai berikut : 1.

Variabel utama a.

Variabel bebas. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah variasi dosis pemberian FHEMM. Dosis FHEMM yang digunakan adalah miligram FHEMM tiap kilogram berat badan hewan uji.

b.

Variabel tergantung. Variabel tergantung penelitian ini adalah penurunan kadar LDH serum pada sel hepar tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4 setelah pemberian jangka panjang FHEMM.

38


2.

39

Variabel pengacau a.

Variabel pengacau terkendali. Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini adalah kondisi hewan uji, yaitu tikus betina galur Wistar dengan berat badan 130-180 g dan umur 2-3 bulan, frekuensi pemberian FHEMM satu kali sehari selama 6 hari berturut-turut pada waktu pemberian yang sama, cara pemberian senyawa dilakukan secara per oral dan intraperitoneal, dan bahan uji yang digunakan berupa daun M. tanarius yang diperoleh dari daerah Paingan, Yogyakarta.

b.

Variabel pengacau tak terkendali. Variabel pengacau tak terkendali dalam penelitian ini adalah kondisi patologis tikus betina galur Wistar.

3.

Definisi Operasional a.

Ekstrak metanol-air daun M. tanarius. Didefinisikan sebagai ekstrak kental dari 40 gram serbuk daun M. tanarius yang diekstraksi dengan pelarut 100 ml metanol dan 100 ml air ke dalam labu erlenmyer secara maserasi menggunakan shaker selama 24 jam dengan putaran 140 rpm. Kemudian disaring menggunakan corong Buchner yang dilapisi dengan kertas saring dengan bantuan pompa vakum, dievaporasi, dan diuapkan di oven selama 24 jam pada suhu 45°C, hingga bobot pengeringan tetap.


b.

40

Fraksi daun M. tanarius. Fraksi dihasilkan dari proses maserasi ekstrak metanol-air daun M. tanarius. Sejumlah ekstrak pekat yang diperoleh, ditimbang dan dilarutkan dengan pelarut heksan etanol 1:1 dimana perbandingan antara pelarut dan ekstrak pekat yaitu 1:5. Setelah dilarutkan dalam labu erlenmeyer, dilakukan penggojogan menggunakan shaker selama 24 jam dengan putaran 140 rpm. Kemudian disaring menggunakan corong buchner yang dilapisi dengan kertas saring dengan bantuan pompa vakum lalu di oven selama 24 jam pada suhu 45°C hingga bobot pengeringan tetap.

c.

Pemberian jangka panjang. Pemberian FHEMM satu kali sehari selama enam hari berturut-turut dalam waktu pemberian yang sama.

d.

Efek hepatoprotektif. Efek hepatoprotektif adalah kemampuan FHEMM yang diberikan secara jangka panjang pada dosis tertentu dapat menunjukkan potensi penurunan aktivitas LDH pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4. e.

Penurunan

aktivitas

serum

LDH.

Didefinisikan

sebagai

kemampuan FHEMM pada dosis tertentu untuk menurunkan kadar LDH secara signifikan dibandingkan dengan kontrol CCl4 pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4.


41

C. Bahan Penelitian 1.

Bahan utama a.

Hewan uji yang digunakan berupa tikus betina galur Wistar berumur 2-3 bulan dengan berat badan 130-180 gram yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

b.

Bahan uji yang digunakan adalah daun M. tanarius yang diperoleh dari daerah Paingan, Yogyakarta pada bulan Februari 2015. Daun yang dipilih adalah yang berwarna hijau, segar, dan tidak bercacat.

2.

Bahan kimia a.

Bahan hepatotoksin yang digunakan adalah CCl4 yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis dan Instrumental Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

b.

Kontrol negatif yang digunakan adalah CMC-Na 1% yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi-Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

c.

Olive Oil (Bertolli®) sebagai pelarut hepatotoksin CCl4 yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi-Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.


d.

42

CMC-Na 1% sebagai pelarut FHEMM yang diperoleh dari Laboratorium

Farmakologi-Toksikologi

Fakultas

Farmasi

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. e.

Pelarut ekstrak daun M. tanarius yang digunakan adalah metanol teknis dan aquadest yang diperoleh dari CV General Labora Yogyakarta.

f.

Pelarut fraksi daun M. tanarius yang digunakan yaitu heksan dan etanol teknis yang diperoleh dari CV General Labora Yogyakarta.

g.

Blanko pengukuran aktivitas LDH menggunakan aquabidestilata yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis dan Instrumental Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

h.

Reagen LDH yang digunakan adalah reagen serum LDH (Thermo Scientific). D. Alat Penelitian

1.

Alat pembuatan serbuk kering daun M. tanarius Alat untuk pembuatan serbuk kering daun M. tanarius adalah oven, mesin penyerbuk, ayakan, dan timbangan analitik (Mettler Toledo).

2.

Alat pembuatan fraksi daun M. tanarius Seperangkat alat gelas yaitu erlenmeyer, beaker glass, gelas ukur, labu ukur, batang pengaduk, kertas saring, cawan porselen, labu alas bulat,


43

pipet tetes, rotary evaporator (IKAVAC); shaker (Orbital Shaker Optima); timbangan analitik (Mettler Toledo); dan oven. 3.

Alat uji hepatoprotektif Seperangkat alat gelas, yaitu beaker glass, labu ukur, gelas ukur, batang pengaduk, dan tabung reaksi; timbangan analitik; spuit injeksi per oral dan intraperitonial; pipa kapiler, microlab 200 Merck, stopwatch, vortex (Genie Wilten), centrifuge (Centurium Scientific), dan eppendorf. E. Tata Cara Penelitian

1.

Determinasi daun M. tanarius. Determinasi daun M. tanarius dilakukan dengan mencocokkan ciri-ciri tanaman M. tanarius pada buku acuan determinasi dan disesuaikan dengan kunci determinasinya. Determinasi dilakukan di Unit II Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada.

2.

Pengumpulan bahan uji Bahan uji yang digunakan adalah daun M. tanarius yang diperoleh dari Paingan, Yogyakarta pada bulan Februari 2015. Daun yang dipilih adalah daun yang masih segar, muda, berwarna hijau dan tidak berlubang.


3.

44

Pembuatan serbuk daun M. tanarius Daun M. tanarius dicuci dengan air mengalir hingga bersih. Setelah bersih daun diangin-anginkan hingga kering kemudian dilakukan pengeringan menggunakan oven pada suhu 30°C selama 3 hari. Daun yang telah kering kemudian diserbuk dan diayak dengan ayakan nomer mesh 50 untuk mendapatkan serbuk daun M. tanarius yang lebih halus.

4.

Penetapan kadar air serbuk daun M. tanarius Penetapan kadar air bertujuan mengetahui kadar air dalam serbuk agar memenuhi persyaratan serbuk yang baik, yaitu kurang dari 10% (Dirjen POM, 1995). Serbuk dimasukkan ke dalam alat moisture balance ± 5 g. Bobot serbuk kering ditimbang sebagai bobot sebelum pemanasan. Serbuk kemudian dipanaskan pada suhu 110°C selama 15 menit. Serbuk yang sudah dipanaskan ditimbang kembali dan dihitung sebagai bobot setelah pemanasan. Selisih bobot sebelum pemanasan dan sesudah pemanasan merupakan kadar air serbuk daun M. tanarius.

5.

Pembuatan ekstrak metanol-air daun M. tanarius Serbuk daun M. tanarius diekstraksi secara maserasi. 40 gram serbuk dilarutkan dengan 100 ml pelarut metanol dan 100 ml air di dalam labu erlenmeyer pada suhu kamar 24 jam menggunakan shaker dengan kecepatan 140 rpm. Hasil maserasi disaring menggunakan kertas saring dan corong buchner dengan bantuan pompa vakum . Hasil saringan dipindahkan ke dalam cawan porselen yang telah ditimbang sebelumnya


45

kemudian digunakan rotary vaccum evaporator untuk memisahkan cairan penyari. Setelah itu, dimasukkan ke dalam oven selama 24 jam pada suhu 45°C hingga didapatkan ekstrak dengan bobot tetap. Proses remaserasi tetap dilanjutkan hingga ekstrak menjadi bening. 6.

Pembuatan fraksi daun M. tanarius Fraksinasi dilakukan dengan menggunakan pelarut heksan dan etanol 1:1 dengan metode maserasi. Ekstrak pekat ditimbang dan dilarutkan dengan pelarut heksan dan etanol 1:1 ke dalam labu erlenmeyer dimana volume pelarut disesuaikan dengan bobot ekstrak 1:5. Hasil maserasi disaring menggunakan kertas saring dan corong buchner dengan bantuan pompa vakum. Hasil saringan dipindahkan ke dalam cawan porselen yang telah ditimbang sebelumnya kemudian digunakan rotary vaccum evaporator. Setelah itu, dimasukkan ke dalam oven selama 24 jam pada suhu 45°C hingga didapatkan fraksi dengan bobot tetap. Proses remaserasi tetap dilanjutkan hingga fraksi menjadi bening. Rendemen fraksi merupakan selisih berat cawan berisi fraksi dan berat cawan kosong. Rata-rata rendemen dihitung dari jumlah bobot fraksi dari semua replikasi per jumlah replikasi. Persentase rendemen FHEMM didapatkan dari total jumlah bobot fraksi per total jumlah bobot ekstrak dikalikan 100%. Persentase rendemen FHEMM merupakan banyaknya fraksi yang didapatkan dari ekstrak daun M. tanarius.


7.

46

Pembuatan larutan CMC-Na 1% 5,0 gram CMC-Na yang telah ditimbang seksama didispersikan ke dalam 250 ml air mendidih dan didiamkan selama 24 jam hingga CMCNa mengembang di dalam gelas beaker. Larutan CMC-Na 1% yang telah mengembang dipindahkan ke labu takar 500 ml dan di add 250 ml sisa air mendidih hingga tanda batas.

8.

Pembuatan suspensi FHEMM Sejumlah FHEMM ditimbang kemudian diujikan kelarutannya terlebih dahulu di dalam olive oil dan CMC-Na 1%. Berdasarkan hasil pengujian, FHEMM mempunyai kelarutan yang paling besar terhadap CMC-Na 1%. Dari hasil orientasi, didapatkan jumlah FHEMM yang dapat larut dalam CMC-Na 1% adalah 600 mg dalam 25 ml, sehingga diperoleh konsentrasi suspensi FHEMM sebesar 600 mg/25 ml.

9.

Pembuatan larutan karbon tetraklorida Berdasarkan penelitian Janakat dan Al-Merie (2002), larutan karbon tetraklorida dibuat dalam konsentrasi 50% dengan perbandingan volume CCl4 dan pelarut adalah 1:1. Pelarut yang digunakan yaitu olive oil.

10.

Uji pendahuluan a.

Penetapan dosis toksin karbon tetraklorida. Berdasarkan penelitian Janakat dan Al-Merie (2002), dosis hepatotoksin CCl4 yang dapat


47

menyebabkan kerusakan sel-sel hepar pada tikus yaitu sebesar 2 ml/kgBB yang diberikan secara intraperitonial (i.p). b.

Penetapan konsentrasi fraksi daun M. tanarius. Konsentrasi yang digunakan adalah konsentrasi pekat yang dapat dibuat dimana pada konsentrasi tersebut fraksi dapat terlarut sempurna dalam pelarut CMC-Na 1%. Konsentrasi fraksi yang dapat ditetapkan yaitu 600 mg/25 ml.

c.

Penetapan dosis fraksi daun M. tanarius. Penetapan dosis FHEMM diperoleh berdasarkan konsentrasi dan volume FHEMM yang disesuaikan dengan berat badan tertinggi tikus. Dosis tertinggi yang dapat ditetapkan yaitu 137,14 mg/kgBB. Peringkat dosis II ditetapkan dengan menurunkan seperdua dari dosis tertinggi (½ x 137,14 mg/kgBB) = 68,57 mg/kgBB) dan peringkat dosis I ditetapkan dengan menurunkan seperdua dari peringkat dosis II (½ x 68,57 mg/kgBB = 34,28 mg/kgBB)

d.

Penetapan waktu pencuplikan darah. Hewan uji terdiri dari 5 ekor tikus yang diambil darahnya pada jam ke-0, 24, dan 48. Pengambilan darah dilakukan melalui sinus orbitalis mata.

11.

Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji Hewan uji yang digunakan sebanyak 30 ekor tikus yang dibagi secara acak ke dalam 6 kelompok perlakuan.


a.

48

Kelompok I merupakan kontrol negatif yaitu CMC-Na 1% yang diberikan secara per oral selama 6 hari beturut-turut dan dilakukan pengukuran darah pada jam ke-24.

b.

Kelompok II merupakan kontrol hepatotoksin CCl4 yang dilarutkan dalam olive oil (1:1) dengan dosis 2 ml/kgBB secara intraperitonial (i.p) dan dilakukan pengukuran darah pada jam ke-24.

c.

Kelompok III merupakan kontrol FHEMM jangka panjang dimana kontrol diberikan FHEMM dosis tertinggi yaitu 137,14 mg/kgBB selama 6 hari berturut-turut pada waktu yang sama secara per oral dan dilakukan pengukuran darah pada jam ke-24.

d.

Kelompok IV-VI merupakan kelompok perlakuan FHEMM dengan 3 peringkat dosis yaitu dosis 1 atau dosis terendah sebesar 34,28 mg/kgBB, dosis II atau dosis tengah sebesar 68,57 mg/kgBB, dan dosis III atau dosis tertinggi sebesar 137,14 mg/kgBB yang diberikan selama 6 hari berturut-turut pada waktu yang sama secara per oral dan pada hari ke-7 diberikan CCl4. Pengukuran darah dilakukan pada jam ke-24 setelah penyuntikan CCl4.

12.

Pengukuran aktivitas LDH Pengukuran aktivitas

LDH dilakukan di

Laboratorium

Bethesda

Yogyakarta. Alat yang digunakan yaitu konelab prime 30 dan atau cobas 501 (ROCHE). Reagen yang digunakan yaitu reagen serum LDH (Thermo Scientific). Hasil pengukuran dinyatakan dengan satuan U/L. Pengukuran sampel dimulai dengan pembuatan serum darah tikus terlebih dahulu. Pertama-tama, sampel darah


49

sebanyak 2-3 ml dimasukkan dalam tabung vaccum, kemudian sampel dibiarkan membeku ± 15-30 menit. Setelah itu, tabung darah dimasukkan ke dalam alat centrifuge dengan kecepatan 3500 rpm selama 10 menit yang akan membentuk 2 lapisan dimana lapisan atas merupakan serum dan lapisan bawah merupakan selsel darah. Serum diambil dan selanjutnya dilakukan pengukuran. Persiapan reagen dimulai dengan mencampurkan substrat bersama 11,4 ml air yang sudah dipurifikasi ke dalam tabung kerucut 15 ml hingga larut, kemudian tambahkan 0,6 ml Assay buffer ke dalamnya dan lindungi dari cahaya hingga siap digunakan. Pengukuran aktivitas serum LDH dilakukan dengan panjang gelombang 490 nm dan 680 nm. F. Tata Cara Analisis Hasil Data aktivitas serum LDH diuji dengan metode Shapiro-Wilk untuk mengetahui distribusi data setiap kelompok hewan uji dan didapatkan data terdistribusi normal. Data yang terdistribusi normal selanjutnya dianalisis variansi pola searah (One Way ANOVA) untuk mengetahui signifikansi perbedaan rata-rata antara kelompok sampel yang satu dengan yang lain namun tidak spesifik kelompok manakah yang berbeda dengan taraf kepercayaan 95%. Kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe yang lebih spesifik untuk melihat perbedaan masing-masing kelompok bermakna (signifikan) (p<0,05) atau tidak bermakna (p>0,05).


50

G. Ruang Lingkup Penelitian

Dosis FHEMM Daun M. tanarius dosis 34,28; 68,57; dan 137,14 mg/kgBB

Hepatoprotektif pada tikus terinduksi karbon tetraklorida

Antiinflamasi pada mencit terinduksi karagenin 1%

Analgesik pada mencit terinduksi asam asetat 1%

Gambar 14. Flowchart ruang lingkup penelitian Keterangan : = Peneliti fokus pada pengujian efek hepatoprotektif FHEMM daun

Macaranga tanarius yang diberikan secara peroral pada tikus betina galur Wistar terinduksi CCl4

Penelitian

ini

merupakan

penelitian

payung,

yang

dilakukan

berkelompok untuk mengetahui efek hepatoprotektif, antiinflamasi, dan analgesik pemberian FHEMM daun M. tanarius. Peneliti hanya fokus pada pengaruh pemberian FHEMM daun M. tanarius secara peroral terhadap aktivitasnya sebagai hepatoprotektor pada tikus betina galur Wistar terinduksi CCl4 (Gambar 14), dengan dosis pemberian fraksi sebesar 34,28; 68,57; dan 137,14 mg/kgBB.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang FHEMM pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4 berdasarkan aktivitas LDH serta untuk mengetahui kekerabatan antar dosis pemberian FHEMM terhadap penurunan kadar serum LDH pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4. Kekerabatan antar dosis pemberian FHEMM dapat ditunjukkan dengan semakin besar tingkatan dosis, maka efek yang dihasilkan juga semakin baik atau penurunan aktivitas serum LDH yang terjadi semakin baik dan berbeda signifikan. A. Penyiapan Bahan 1.

Hasil Determinasi Tanaman Penelitian mengenai efek hepatoprotektif ini menggunakan daun tanaman

M. tanarius sebagai hepatoprotektor yang diuji akitivitasnya. Daun M. tanarius didapat dari daerah Paingan Yogyakarta. Sebelum melakukan penelitian dilakukan determinasi terlebih dahulu untuk memastikan bahwa daun tanaman yang akan digunakan benar-benar berasal dari daun tanaman M. tanarius. Determinasi ini menggunakan bagian batang dan daun tanaman M. tanarius kemudian dicocokan dengan ciri-ciri morfologis daun M. tanarius pada buku acuan determinasi. Determinasi dilakukan di Unit II Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada . Hasil determinasi menunjukan bahwa daun tanaman memang benar daun tanaman M. tanarius. 51


2.

52

Pembuatan serbuk daun M. tanarius Daun M. tanarius yang masih segar, muda, berwarna hijau dan tidak

bercacat diambil di daerah Paingan Yogyakarta kemudian daun dicuci dengan dialiri air mengalir hingga bersih. Tujuan pencucian agar daun M. tanarius bebas dari kotoran dan debu yang menempel. Setelah pencucian, daun dikeringkan terlebih dahulu sebelum dimasukkan ke dalam oven. Daun M. tanarius yang sudah cukup kering kemudian dimasukkan ke dalam oven pada suhu 30°C hingga daun benar-benar kering selama 3 hari. Daun yang kering kemudian dipisahkan dari tulang daun dan dipotong-potong menjadi bagian yang lebih kecil sehingga hanya diperoleh serpihan daun. Serpihan daun kemudian diserbuk menggunakan mesin penyerbuk yaitu blender. Daun M. tanarius yang sudah menjadi serbuk kemudian diayak lagi menggunakan ayakan dengan nomor mesh 50. Semakin besar nomer mesh maka ukuran partikel yang didapatkan semakin kecil atau semakin halus serbuk yang diperoleh. Semakin kecil ukuran serbuk maka luas permukaan semakin besar sehingga kontak antara pelarut dengan serbuk semakin baik. 3.

Penetapan Kadar Air Serbuk Daun M. tanarius Persyaratan serbuk yang baik yaitu apabila serbuk memiliki kadar air

kurang dari 10% (Dirjen POM, 1995). Penetapan kadar air dilakukan dengan cara serbuk kering dimasukkan ke dalam alat moisture balance ± 5 g. Bobot serbuk kering ditimbang sebagai bobot sebelum pemanasan. Serbuk kemudian dipanaskan pada suhu 110°C agar kandungan air telah menguap dan selama 15


53

menit. Serbuk yang sudah dipanaskan ditimbang kembali dan dihitung sebagai bobot setelah pemanasan. Selisih bobot sebelum pemanasan dan sesudah pemanasan merupakan kadar air serbuk daun M. tanarius. Penetapan kadar air dilakukan di Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Hasil pengujian didapatkan bahwa kandungan air dari serbuk kering daun M. tanarius sebesar 8,76% sehingga dapat dikatakan telah memenuhi persyaratan serbuk simplisia yang baik. B. Hasil Penimbangan Bobot Pengeringan Tetap dan Rendemen FHEMM Pembuatan FHEMM dilakukan dengan metode maserasi. Keuntungan utama metode maserasi yaitu prosedur dan peralatan yang digunakan sederhana, serta metode ekstraksi maserasi tidak dipanaskan sehingga metabolit-metabolit yang tidak tahan pemanasan tidak menjadi terurai. Akan tetapi, metode maserasi memiliki kekurangan antara lain membutuhkan waktu pengerjaan yang lama dan peralatan yang mahal. Proses ekstraksi dilakukan terlebih dahulu sebelum dilanjutkan ke tahap fraksinasi. Proses ekstraksi dimulai dengan memasukkan serbuk daun M. tanarius sebanyak 40 gram ke dalam erlenmeyer kemudian diekstraksi dalam pelarut 100 ml metanol dan 100 ml air. Penggojogan dilakukan dengan menggunakan shaker selama 24 jam dengan putaran 140 rpm. Kemudian disaring dengan corong buchner yang dilapisi dengan kertas saring dengan bantuan pompa vakum, dievaporasi, dan diuapkan di oven selama 24 jam pada suhu 45°C, hingga bobot pengeringan tetap. Proses remaserasi tetap dilanjutkan hingga ekstrak menjadi bening yang menunjukkan bahwa sudah tidak ada lagi senyawa metabolit yang bisa diikat oleh pelarut. Pada setiap pengulangan, jumlah


54

filtrat yang dihasilkan semakin banyak. Hal ini disebabkan oleh berkurangnya senyawa yang dapat ditarik oleh pelarut pada setiap perendaman yang dikarenakan oleh penguapan pelarut dan tingkat penyerapan oleh sampel. Namun, ekstrak yang dihasilkan pada perendaman pertama jauh lebih banyak daripada saat pengulangan atau remaserasi karena sebagian besarnya sudah terikat pada perendaman pertama. Tingkat penyerapan pelarut juga dapat dilihat dari perubahan warna saat perendaman, dimana semakin banyak senyawa yang diikat, warna filtrat pun semakin pekat dan semakin sedikit senyawa yang diikat maka warna filtrat yang dihasilkan akan semakin bening. Pemilihan pelarut pada proses ekstraksi didasarkan pada kandungan zat aktif yang terdapat pada daun M. tanarius sehingga diharapkan zat aktif tersebut dapat larut dalam cairan penyari. Bagian tanaman yang diambil berupa daun karena penelitian ini mengacu pada penelitian Puteri dan Kawabata (2010) dimana kandungan senyawa ellagitannin terdapat pada bagian daun. Berdasarkan penelitian Matsunami et al., (2006) bahwa senyawa antioksidan yang diperoleh dari daun M. tanarius merupakan hasil isolasi dari ekstrak metanol yang bersifat polar. Kandungan senyawa glikosida fenolik dari daun M. tanarius dapat larut dalam air. Untuk menentukan bobot pengeringan yang sudah tetap dilakukan dengan cara menimbang ekstrak yang berada dalam cawan setiap waktu tertentu atau hingga berat menjadi konstan. Tujuan penimbangan bobot ekstrak yaitu untuk menghitung berat zat setelah dilakukan pengeringan pada suhu 45°C sehingga dapat diketahui pelarut penyari ekstrak sudah tidak terdapat sisa. Bobot penimbangan ekstrak yang diperoleh selama 3 kali penimbangan berturut-turut tiap hari setelah 24 jam di


55

oven dinyatakan tetap ketika selisih antar bobot sebesar 0% sehingga dapat dikatakan tidak ada sisa dari pelarut ekstrak. Proses fraksinasi dapat dikatakan hampir sama dengan proses ekstraksi. Setelah bobot pengeringan dari ekstrak tetap, maka selanjutnya dilakukan fraksinasi. Seluruh ekstrak digunakan karena yang akan digunakan pada tahap selanjutnya dari ekstraksi adalah fraksi-fraksi yang terbentuk dari proses fraksinasi ekstrak pekat. Fraksinasi dilakukan dari pelarut dengan tingkat kepolaran rendah atau non polar bertujuan agar proses pengikatan senyawa terjadi secara seimbang dimana pelarut polar akan menarik kandungan senyawa yang polar dan pelarut non polar akan menarik kandungan senyawa yang non polar. Pelarut yang digunakan untuk proses fraksinasi yaitu heksan sebagai pelarut non polar dan etanol sebagai pelarut polar dengan perbandingan 1:1. Sejumlah ekstrak pekat yang diperoleh ditimbang dan dilarutkan dengan pelarut heksan-etanol dimana perbandingan antara pelarut dan ekstrak pekat yaitu 1:5. Proses maserasi selanjutnya sama dengan proses maserasi pada saat ekstraksi. Remaserasi tetap dilanjutkan hingga fraksi menjadi bening yang menunjukkan bahwa sudah tidak ada lagi senyawa metabolit yang bisa diikat oleh pelarut. Pemilihan pelarut heksan-etanol dalam fraksinasi didasarkan pada kepolaran senyawa antioksidan daun M. tanarius. Nilai kepolaran dari heksan dan etanol sebesar 2,97. Menurut Puteri dan Kawabata (2010) terdapat tiga senyawa yang larut dalam heksan dan etanol berdasarkan kepolarannya yaitu chebulagic acid sebesar 2,64; macatanin A sebesar 2,76; dan macatanin B sebesar 2,94. Penentuan bobot pengeringan yang sudah tetap sama seperti penentuan bobot tetap pada ekstrak. Bobot penimbangan


56

tetap yang diperoleh selama 3 kali penimbangan berturut-turut tiap hari setelah 24 jam di oven sebesar 0% sehingga dapat dikatakan tidak ada sisa dari pelarut fraksi. Dari hasil penimbangan bobot fraksi didapatkan rendemen FHEMM sebesar 19,46%. Untuk pembuatan fraksi, digunakan 156 g ekstrak metanol-air daun M. tanarius sehingga dapat dihasilkan 30 g fraksi. C. Uji Pendahuluan 1.

Penetapan dosis FHEMM Dosis FHEMM didapatkan dengan menggunakan rumus konsentrasi

FHEMM dikalikan dengan volume FHEMM dan dibagi dengan berat badan tikus. Konsentrasi FHEMM ditetapkan terlebih dahulu melalui tahap orientasi dan diperoleh sebanyak 600 mg FHEMM yang dapat larut dalam 25 mL CMC-Na 1%. Berat badan tikus yang digunakan merupakan berat badan tertinggi tikus sebesar 350 gBB (Lampiran 8). Dari hasil orientasi dapat ditetapkan 3 peringkat dosis dengan dosis rendah 34,28 mg/kgBB, dosis tengah 68,57 mg/kgBB, dan dosis tinggi 137,14 mg/kgBB (Lampiran 8). 2.

Penetapan dosis hepatotoksin CCl4 Hepatotoksin yang digunakan dalam penelitian ini adalah CCl4. Penetapan

dosis hepatotoksin CCl4 bertujuan untuk menentukan seberapa besar dosis yang dapat menyebabkan kerusakan hepar terutama stetatosis pada tikus. Berdasarkan penelitian Janakat dan Al-Merie (2002), dosis optimum CCl4 yang terbukti dapat


57

meningkatkan aktivitas ALT dan AST adalah 2 mg/kgBB tikus. Pelarut CCl4 yang digunakan adalah olive oil dengan perbandingan 1 : 1. Pemberian hepatotoksin CCl4 diberikan secara intraperitonial. Pemberian secara intraperitonial dipilih selain karena mengacu pada beberapa penelitian sebelumnya dimana pemberian CCl4 diberikan secara i.p, dan juga karena terdapatnya banyak pembuluh darah di dalam rongga perut sehingga hepatotoksin akan langsung masuk ke dalam pembuluh darah dan efek yang dihasilkan lebih cepat. Setelah pemberian CCl4 terjadi kenaikan serum ALT dan AST sebesar 3-4 kali dari kondisi normal yang menandakan telah terjadi kerusakan pada hepar tikus (Zimmerman, 1999). Hasil penelitian menunjukkan bahwa dosis hepatotoksin CCl4 sebesar 2 ml/kgBB dapat meningkatkan serum ALT sebesar 3-4 kali dari kondisi normal dan serum AST sebesar 4-5 kali dari kondisi normal yang menandakan telah terjadi kerusakan pada hepar tikus setelah induksi CCl4. 3.

Penetapan Waktu Pencuplikan Darah Penetapan waktu pencuplikan darah bertujuan untuk mengetahui waktu

dimana hepatotoksin CCl4 dengan dosis 2 ml/kgBB mencapai efek atau respon yang maksimum dalam merusak organ hepar. Sebelum hepatotoksin diberikan secara i.p kepada tikus, serum darah tikus diambil terlebih dahulu sebagai jam ke0 atau sebagai kontrol yang bertujuan untuk membandingkan kadar serum ALT dan AST sebelum dan sesudah perlakuan. Pada penelitian ini dilakukan penentuan waktu pencuplikan darah pada jam ke-24 dan 48. Dari pengujian ini kemudian didapatkan waktu terjadinya peningkatan ALT dan AST yang paling besar. Waktu inilah yang kemudian dijadikan pedoman pengambilan darah tikus dalam


58

melakukan penelitian lebih lanjut. Apabila ketoksikan CCl4 sampai pada hepar, maka serum aminotransferase yaitu ALT dan AST yang merupakan enzim utama dalam hati akan terlebih dahulu keluar ke dalam darah dan mengalami peningkatan. ALT berperan dalam membentuk glutamat ke piruvat. Piruvat yang terbentuk bereaksi dengan 2,4-dimitro phenylhidrasin dalam suasana alkalis. Piruvat kemudian diubah menjadi laktat dikatalisis oleh LDH yang membutuhkan NADH (Campbell, Mitchell, Reece, Taylor, and Simon, 2006). Oleh karena itu, apabila terjadi peningkatan ALT maka piruvat yang terbentuk juga semakin banyak dan LDH yang dibutuhkan untuk mengkatalisis juga semakin banyak, maka laktat yang terbentuk juga semakin banyak, sedangkan hepar juga mengalami penurunan fungsi untuk membersihkan laktat akibat ketoksikan dari CCl4 sehingga terjadilah kenaikan aktivitas serum LDH. Berdasarkan hasil penelitian Ohta, Kaida, Chiba, Tada, Teruya, Imai, et al., (2009) menyatakan bahwa terjadi peningkatan aktivitas serum ALT, AST, LDH, kreatin kinase, urea nitrogen dan kreatinin pada tikus yang mengalami stres oksidatif. Hal ini dapat dikaitkan dengan stres oksidatif yang terjadi pada tikus akibat radikal bebas yang ditimbulkan oleh CCl4 sehingga setelah pemberian hepatotoksin CCl4 terjadi peningkatan aktivitas serum ALT dan AST kemudian LDH. Pada penelitian Ho, Lai, Lin, Liu, Huang, Chiu, et al., (2009) terjadi peningkatan yang signifikan antara serum AST, ALT dan LDH setelah pemberian 8-24 jam pada tikus yang terinduksi hepatotoksin acetaminophen. Peningkatan LDH terkait dengan steatosis sebesar 1-2 kali dari normal (Gupta, 2014), namun pada penelitan ini merupakan penelitian payung dimana terdapat parameter-parameter kerusakan hati lain


59

seperti albumin, bilirubin, dan ALP yang belum diketahui besarnya peningkatan yang berhubungan dengan kerusakan hati steatosis oleh induksi hepatotoksin CCl4. Oleh karena itu, ALT dan AST digunakan sebagai patokan waktu pencuplikan darah pada penelitian ini. Hasil pengujian aktivitas serum ALT dapat dilihat pada tabel I dan gambar 15. Tabel I. Nilai purata ± SE aktivitas serum ALT darah tikus setelah pemberian CCl4 dengan dosis 2 ml/kgBB pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam Selang waktu (jam) Purata Aktivitas serum ALT ± SE (U/L) 0

66,8 ± 0,8

24

184,0 ± 16,5

48

62,3 ± 15,6 Keterangan : SE = Standard Error

Gambar 15. Diagram batang rata-rata aktivitas serum ALT tikus setelah pemberian 2 ml/kgBB CCl4 pada waktu pencuplikan 0, 24, dan 48 jam


60

Pada tabel I dan gambar 15 dapat dilihat bahwa aktivitas serum ALT yang paling besar terjadi pada jam ke -24 (184,0 ± 16,5 U/L) jika dibandingkan dengan jam ke-0 (66,8 ± 0,8 U/L). Aktivitas serum ALT mengalami kenaikan sebesar 3 kali dari keadaan normal pada jam ke-24, kemudian pada saat jam ke-48 (62,3 ± 15,6 U/L) aktivitas serum ALT mulai mengalami penurunan. Hasil uji statistik aktivitas serum ALT menyatakan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna antara aktivitas serum ALT pada jam ke-24 dengan jam ke-0, namun terdapat perbedaan yang tidak bermakna antara aktivitas ALT pada jam ke-0 dengan jam ke-48. Hal ini berarti bahwa pada jam ke-48, aktivitas serum ALT sudah kembali normal (mendekati jam ke-0). Dari hasil yang didapatkan dapat dikatakan bahwa CCl4 dengan dosis 2 ml/kgBB menyebabkan kerusakan hepar yang paling parah pada jam ke-24. Hepar mempunyai kemampuan untuk mengeluarkan toksikan dengan kapasitasnya yang lebih tinggi dalam proses biotransformasi toksikan, sehingga CCl4 perlahan-lahan mulai dikeluarkan dan hepar mempunyai fungsi fisiologis dalam menetralkan racun atau obat yang masuk dalam tubuh kita apabila tidak diberikan dalam jumlah berlebihan dan waktu yang lama sehingga kedua hal inilah yang menyebabkan pada saat jam ke-48 terjadi penurunan aktivitas serum ALT (Chandrasoma and Taylor, 1995). Hasil pengujian statistik aktivitas serum ALT dapat dilihat pada tabel II.


61

Tabel II. Perbedaan kenaikan aktivitas serum ALT setelah pemberian 2 ml/kgBB CCl4 pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24, dan 48 jam Jam 0 Jam 0 Jam 24

BB

Jam 48

BTB

Jam 24

Jam 48

BB

BTB BB

BB

BB= Berbeda bermakna (p<0,05); BTB= Berbeda tidak bermakna (p>0,05) Selain ALT, dilakukan juga analisis uji statistik aktivitas serum AST. Pengukuran aktivitas serum AST juga dilakukan karena kedua enzim ini merupakan indikator spesifik kerusakan hepar. Jika sel hepar mengalami kerusakan maka kedua enzim utama ini yang ada dalam sel hepar akan keluar dan masuk kedalam peredaran darah sehingga jumlah ALT dan AST dalam darah meningkat. Aktivitas serum AST juga diukur pada waktu pencuplikan 0, 24, dan 48 jam. Pengukuran waktu pencuplikan ini dilakukan untuk mengetahui kenaikan aktivitas serum AST yang paling besar. Hasil pengujian aktivitas serum AST dapat dilihat pada tabel III dan gambar 16. Tabel III. Nilai purata ± SE aktivitas serum AST darah tikus setelah pemberian CCl4 dengan dosis 2 ml/kgBB pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam Selang waktu (jam) Purata Aktivitas serum AST ± SE (U/L) 0

154,2 ± 2,1

24

669,6 ± 8,4

48

197,7 ± 9,6 Keterangan : SE = Standard Error


62

Gambar 16. Diagram batang rata-rata aktivitas serum AST tikus setelah pemberian 2 ml/kgBB CCl4 pada waktu pencuplikan 0, 24, dan 48 jam Dari gambar 16 dan tabel III menunjukkan bahwa kenaikan aktivitas serum yang paling besar terjadi pada jam ke-24 (669,6 ± 8,4 U/l). Berdasarkan hasil uji yang juga telah dilakukan pada ALT, kenaikan aktivitas serum yang paling besar terjadi pada jam ke-24, sehingga dapat dikatakan bahwa kerusakan hepar yang paling parah terjadi pada jam ke-24. Kenaikan aktivitas serum AST pada jam ke-24 sebesar 4-5 kali lipat dari keadaan normal. Pada jam ke-48 (197,7 ± 9,6 U/l) sudah mulai terjadi penurunan aktivitas serum AST. Secara statistik pada pencuplikan jam ke-0, 24, dan 48 memiliki perbedaan yang bermakna satu sama lain yang berarti bahwa terdapat perbedaan aktivitas serum AST secara signifikan setelah penginduksian CCl4. Perlu diperhatikan bahwa antara jam ke-0 dan 48 terjadi perbedaan yang bermakna, artinya bahwa aktivitas serum AST belum berada pada keadaan normal atau belum mendekati jam ke-0. Hal ini dikarenakan bahwa serum AST tidak hanya terdapat di hepar namun juga terdapat


63

dalam sel jantung, ginjal, pankreas dan eritrosit (Thapa dan Walia, 2007) sehingga apabila terjadi kerusakan pada salah satu organ dapat mempengaruhi konsentrasi AST dalam tubuh yang menyebabkan pada jam ke-48 belum mendekati normal atau jam ke-0. Meskipun ketoksikan CCl4 yang utama terlihat pada hepar, namun senyawa ini mudah larut dalam komponen lemak, yang mengakibatkan senyawa ini terdistribusi ke seluruh tubuh melalui aliran sistemik, sehingga kerusakan tidak hanya terjadi pada hepar namun juga dapat terjadi pada sel-sel jantung, ginjal dan pankreas (Timbrell, 2008). CCl4 sebagai pelarut lipid memudahkan senyawa tersebut dalam menyeberangi membran sel dan dapat menimbulkan efek pada berbagai organ tubuh termasuk susunan saraf pusat, hepar, ginjal dan peredaran darah (Gene, 1999). Apabila kerusakan terjadi di luar hepar, maka kemampuan untuk regenerasinya lebih lambat daripada sel hepar sehingga pada jam ke-48 belum mendekati normal atau jam ke-0. Hasil pengujian statistik aktivitas serum AST dapat dilihat pada tabel IV. Tabel IV. Perbedaan kenaikan aktivitas serum AST setelah pemberian 2 ml/kgBB CCl4 pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24, dan 48 jam Jam 0 Jam 0 Jam 24

BB

Jam 48

BB BB= Berbeda bermakna (p<0,05)

Jam 24

Jam 48

BB

BB BB

BB


64

Berdasarkan pengujian pencuplikan waktu terhadap kadar ALT dan AST, maka penelitian tentang efek hepatoprotektif pemberian jangka panjang FHEMM dipilih waktu pencuplikan darah yaitu pada jam ke-24 setelah pemberian 2 ml/kgBB CCl4. 4.

Penetapan lama pemejanan FHEMM Penetapan waktu praperlakuan FHEMM didasarkan pada penelitian-

penelitian sebelumnya mengenai pemberian jangka panjang senyawa antioksidan sebagai hepatoprotektor dimana pemberian praperlakuan dilakukan selama 6 hari dan pada hari ke-7 diberi hepatotoksin. Pada penelitian Adrianto (2010) dan Mahendra (2011) melaporkan bahwa praperlakuan ekstrak dan infusa daun M. tanarius dilakukan selama 6 hari dan pada hari ke-7 diberikan senyawa hepatotoksin. D.

Hasil Uji Efek Hepatoprotektif FHEMM Jangka Panjang terhadap Tikus Betina Galur Wistar terinduksi CCl4 berdasarkan Aktivitas Serum LDH Penelitian mengenai efek hepatoprotektif FHEMM jangka panjang

menggunakan 3 variasi dosis yaitu pada dosis I atau dosis terendah sebesar 34,28 mg/kgBB, dosis II atau dosis tengah sebesar 68,57 mg/kgBB, dan dosis III atau dosis tertinggi sebesar 137,14 mg/kgBB. Pemberian FHEMM dilakukan secara per oral selama 6 hari berturut-turut kemudian 24 jam setelahnya atau pada hari ke-7 diberikan hepatotoksin CCl4

dengan dosis 2 ml/kgBB secara i.p.


65

Pengambilan darah dilakukan setelah 24 jam pemberian CCl4 berdasarkan hasil uji pencuplikan waktu serum ALT dan AST. Pengaruh pemberian FHEMM terhadap kadar LDH dilihat dari ada tidaknya penurunan aktivitas serum LDH akibat praperlakuan pemberian FHEMM jangka panjang terhadap aktivitas LDH serum kontrol hepatotoksin CCl4 . Pemberian FHEMM diberikan terlebih dahulu untuk melihat apakah FHEMM memiliki efek hepatoprotektif terhadap induksi CCl4.

Aktivitas serum LDH

dinyatakan dalam satuan U/L dapat dilihat pada tabel V,VI dan gambar 17 di bawah ini. Tabel V. Efek hepatoprotektif FHEMM jangka panjang pada dosis 34,28; 68,57; 137,14 mg/kgBB terhadap aktivitas serum LDH darah tikus terinduksi CCl4 Kelompok

Perlakuan

Purata Aktivitas serum LDH ± SE (U/L)

I

Kontrol Negatif CMC-Na 1% (137,14 mg/kgBB)

877,8 ± 79,2

II

Kontrol hepatotoksin CCl4 (2 ml/kgBB

1848,8 ± 47,8

III

Kontrol dosis III FHEMM (137,14 mg/kgBB)

964,4 ± 84,7

IV

Dosis I FHEMM (34,28 mg/kgBB) + CCl4

1064,0 ± 80,9

V

Dosis II FHEMM (68,57 mg/kgBB) + CCl4

1069,0 ± 34,0

VI

Dosis III FHEMM (137,14 mg/kgBB) + CCl4

902,2 ± 23,4


66

Gambar 17. Diagram batang purata aktivitas serum LDH setelah praperlakuan pemberian FHEMM selama 6 hari dan pada hari ke-7 diberi 2 ml/kgBB CCl4 Tabel VI. Hasil statistik dengan uji Scheffe nilai aktivitas serum LDH tikus setelah pemberian FHEMM jangka panjang dan induksi CCl4 dengan dosis 2 ml/kgBB Kelompok I II III IV V VI BB BTB BTB BTB BTB I BB BB BB BB BB II BTB BB BTB BTB BTB III BTB BB BTB BTB BTB IV BTB BB BTB BTB BTB V BTB BB BTB BTB BTB VI Keterangan : BB= Berbeda bermakna (p<0,05); BTB= Berbeda tidak bermakna (p>0,05) I. Kontrol CMC-Na 1% II. Kontrol hepatotoksin CCl4 III. Kontrol dosis III IV. Dosis I (34,28 mg/kgBB) + CCl4 V. Dosis II (68,57 mg/kgBB) + CCl4 VI. Dosis III (137,14 mg/kgBB) + CCl4


1.

67

Kontrol negatif Pada penelitian ini digunakan kontrol negatif berupa CMC-Na 1% dengan

dosis 137,14 mg/kgBB secara per oral. Kontrol negatif merupakan kontrol dari pelarut FHEMM. Kontrol CMC-Na 1% bertujuan untuk membuktikan bahwa CMC-Na 1% sebagai pelarut FHEMM tidak bersifat toksik dan tidak berpengaruh terhadap aktivitas serum LDH sehingga dapat dijadikan patokan nilai normal yang akan

dibandingkan

dengan

kelompok

perlakuan

dosis.

Aznam,

Atun,

Arianingrum, Sulisdiarto, Utami, dan Sholeh (2010) mengatakan bahwa hasil histopatologi hepar tikus yang diinduksi dengan CMC-Na 0,5% sebagai kontrol selama 4 hari menunjukkan hasil yang normal. Begitupula juga pada penelitian Rao and Kumar (2013) menyatakan bahwa pada kelompok kontrol CMC yang diberikan selama 8 hari menunjukkan hasil histopatologi normal yang signifikan dibandingkan dengan perlakuan hepatotoksin parasetamol. Clichici, Olteanu, Nagy, Oros, Filip, and Mircea (2014) menyatakan bahwa tidak ditemukan peningkatan kadar LDH pada kelompok hewan uji dengan perlakuan CMC. Oleh karena itu, dapat dikatakan bahwa tidak ada pengaruh CMC-Na 1% terhadap kerusakan hepar sehingga tidak mempengaruhi aktivitas serum LDH. 2.

Kontrol hepatotoksin Kontrol hepatotoksin bertujuan untuk melihat kerusakan hepar yang

ditimbulkan oleh pemberian CCl4 dengan dosis 2 ml/kgBB secara i.p pada jam ke24 berdasarkan peningkatan aktivitas serum LDH yang dibandingkan dengan kontrol negatif CMC-Na 1%. Kontrol hepatotoksin dibandingkan dengan kontrol


68

CMC-Na 1% karena seperti yang sudah dibahas sebelumnya bahwa CMC-Na 1% tidak memberikan pengaruh apapun pada hepar tikus sehingga dapat menggambarkan keadaan hepar tikus yang normal dimana tidak terjadi peningkatan aktivitas LDH. Berdasarkan tabel V, dapat dilihat bahwa hasil pengukuran aktivitas LDH kontrol hepatotoksin pada jam ke-24 yaitu 1848,8 ± 47,8 U/L. Hasil ini kemudian dibandingkan dengan kontrol negatif CMC-Na 1% yaitu sebesar 877,8 ± 79,2 U/L sehingga dapat dilihat bahwa telah terjadi kenaikan serum LDH secara signifikan setelah pemejanan hepatotoksin CCl4. Hal ini sesuai dengan teori dimana bila hepar mengalami kerusakan akibat hepatotoksin, maka aktivitas serum LDH akan meningkat. Hasil uji statistik dengan menggunakan uji Scheffe menyatakan bahwa terdapat perbedaan aktivitas serum LDH yang bermakna antara kontrol hepatotoksin dan kontrol negatif secara signifkan, seperti yang ditunjukkan pada tabel VI dan gambar 17. Peningkatan aktivitas serum LDH disebabkan oleh produksi laktat yang meningkat atau penurunan bersihan laktat oleh hepar. Hal ini dikarenakan CCl4 akan menarik oksigen dan berikatan membentuk metabolit yang lebih reaktif yaitu triklorometilperoksi, sehingga sel akan kekurangan oksigen dan mengganggu jalannya fungsi mitokondria (Timbrell, 2008). Apabila ketersediaan oksigen berkurang, maka metabolisme berganti dengan menonaktifkan transfer elektron di mitokondria dan mengaktifkan glikolisis anaerob. Pada keadaan aerob, isozim LDH 1 mengubah laktat menjadi piruvat. Sebaliknya pada keadaan anaerob, isozim LDH 5 akan mengubah piruvat menjadi laktat. ATP yang dihasilkan melalui metabolisme aerob lebih tinggi dibandingkan energi yang dihasilkan oleh


69

anaerob. Glikolisis anaerob hanya menghasilkan 2 ATP, sedangkan glikolisis aerob menghasilkan 36 ATP. Oleh karena itu diperlukan 18 kali glukosa yang lebih banyak. Untuk memenuhi kebutuhan glukosa tersebut diperoleh dari proses glukoneogenesis yaitu proses pembentukan glukosa baru dari bahan lain yaitu protein (Bartrons and Jaime, 2007). Peningkatan glukosa sejalan dengan meningkatnya aktivitas serum LDH (isoenzim LDH 4 dan isoenzim LDH 5) dan sintesis asam lemak (Lieberman and Allan, 2009). Kadar glukosa yang tinggi merangsang pembentukan glikogen dari glukosa, sintesis asam lemak dan kolesterol dari glukosa. Kadar glukosa darah yang tinggi dapat mempercepat pembentukan trigliserida dalam hepar. Trigliserida merupakan salah satu bagian komposisi lemak yang ada dalam tubuh. Dimana jika kadar trigliserida dalam batas normal mempunyai fungsi yang normal dalam tubuh, semisal sebagai sumber energi. Tetapi apabila berlebihan, dapat menyebabkan perlemakan hepar atau steatosis (Koestadi, 1989). Selain itu, setelah pemejanan CCl4 selama satu sampai tiga jam, trigliserida dapat menumpuk di hepatosit. Lipid yang terbentuk dapat menghambat sintesis protein sehingga menurunkan produksi lipoprotein, yang bertugas dalam transport lipid untuk keluar dari hepatosit sehingga CCl4 juga dapat menyebabkan stetatosis (Wahyuni, 2005). Apabila keadaan ini terjadi secara terus menerus, dapat menyebabkan kematian sel. Dengan demikian, dapat dikatakan bahwa tikus yang diberikan CCl4 secara i.p dengan dosis 2 ml/kgBB pada jam ke-24 mengalami kerusakan hepar akut yaitu steatosis dengan adanya bukti kenaikan serum LDH pada tikus pada jam ke-24.


3.

70

Kontrol dosis tertinggi atau Kontrol dosis III Kontrol dosis III merupakan kontrol dosis tertinggi yaitu 137,14 mg/kgBB

yang diberikan secara p.o. Tujuan dilakukan kontrol dosis III untuk melihat pengaruh pemberian FHEMM jangka panjang tanpa adanya penginduksi hepatotoksin CCl4, dimana pada dosis tertinggi dianggap memiliki kandungan senyawa FHEMM yang paling tinggi sehingga dapat menurunkan aktivitas LDH yang paling baik. Dosis tertinggi dipilih karena dianggap dapat mewakili efek atau respon yang ditimbulkan oleh dosis I dan II FHEMM dalam menurunkan aktivitas serum LDH. Uji ini dilakukan dengan memberikan FHEMM selama 6 hari berturut-turut dan 24 jam kemudian atau pada hari ke-7 diambil darahnya untuk pengukuran aktivitas serum LDH. Hasil pengukuran aktivitas serum LDH pada kontrol dosis III yaitu sebesar 964,4 ± 84,7 U/L. Pada tabel VI hasil uji statistik menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna antara kontrol dosis III (964,4 ± 84,7 U/L) dengan kontrol negatif CMC-Na 1% (877,8 ± 79,2 U/L) yang berarti bahwa aktivitas serum LDH ketika diberikan dosis III atau tertinggi (137,14 mg/kgBB) FHEMM berada dalam keadaan normal. Perbedaan yang bermakna terjadi pada kontrol dosis III dengan kontrol hepatotoksin (1848,8 ± 47,8 U/L) yang berarti bahwa dosis III atau dosis tertinggi (137,14 mg/kgBB) FHEMM secara per oral tidak menyebabkan kerusakan hepar sehingga tidak menyebabkan peningkatan serum LDH pada jam ke-24.


4.

71

Kelompok perlakuan FHEMM dosis I (34,28 mg/kgBB), dosis II (68,57 mg/kgBB), dan dosis III (137,14 mg/kgBB) pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4 dengan dosis 2 ml/kgBB Pengaruh pemberian FHEMM dapat dilihat dengan ada tidaknya

penurunan aktivitas serum LDH pada tikus yang terinduksi CCl4. Kelompok IV merupakan kelompok praperlakuan dosis I FHEMM yaitu sebesar 34,28 mg/kgBB. Kelompok V merupakan kelompok praperlakuan dosis II FHEMM yaitu sebesar 68,57 mg/kgBB. Kelompok VI merupakan kelompok praperlakuan dosis III FHEMM yaitu sebesar 137,14 mg/kgBB. Pada tabel V dapat dilihat bahwa aktivitas serum LDH kelompok IV yaitu 1064,0 ± 80,9 U/L, aktivitas serum LDH kelompok V yaitu 1069,0 ± 34,0 U/L, dan aktivitas serum LDH kelompok VI yaitu 902,2 ± 23,4 U/L. Berdasarkan tabel VI dari hasil uji statistik menunjukan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna antara perlakuan dosis I (1064,0 ± 80,9 U/L) dengan kontrol hepatotoksin (1848,8 ± 47,8 U/L). Hal ini berarti bahwa pada dosis 1 (34,28 mg/kgBB) FHEMM jangka panjang mempunyai pengaruh dalam menurunkan aktivitas serum LDH pada tikus setelah diinduksi CCl4. Untuk hasil uji statistik kelompok CMC-Na 1% (877,8 ± 79,2 U/L) dengan perlakuan dosis I sebesar 34,28 mg/kgBB menunjukkan hubungan perbedaan yang tidak bermakna. Hal ini berarti bahwa pemberian FHEMM jangka panjang dengan dosis terendah 34,28 mg/kgBB, mampu menyebabkan penurunan aktivitas serum LDH yang setara dengan keadaan normal.


72

Pada kelompok dosis tengah atau dosis II FHEMM sebesar 68,57 mg/kgBB (1069,0 ± 34,0 U/L) menunjukkan perbedaan yang bermakna dengan kontrol hepatotoksin CCl4 (1848,8 ± 47,8 U/L). Hal ini berarti bahwa dosis II (68,57 mg/kgBB) FHEMM jangka panjang mempunyai pengaruh terhadap penurunan aktivitas serum LDH pada tikus setelah diinduksi CCl4. Untuk hasil uji statistik kelompok CMC-Na 1% (877,8 ± 79,2 U/L) dengan perlakuan dosis II sebesar 68,57 mg/kgBB menunjukkan hubungan perbedaan yang tidak bermakna. Hal ini berarti bahwa pemberian FHEMM jangka panjang dengan dosis tengah 68,57 mg/kgBB, mampu menyebabkan penurunan aktivitas serum LDH yang setara dengan keadaan normal. Pada kelompok dosis tertinggi atau dosis III FHEMM sebesar 137,14 mg/kgBB ( 902,2 ± 23,4 U/L) menunjukkan perbedaan yang bermakna dengan kontrol hepatotoksin CCl4 (1848,8 ± 47,8 U/L). Hal ini berarti bahwa dosis III (137,14 mg/kgBB) FHEMM jangka panjang mempunyai pengaruh terhadap penurunan aktivitas serum LDH pada tikus setelah diinduksi CCl4. Untuk hasil uji statistik kelompok CMC-Na 1% (877,8 ± 79,2 U/L) dengan perlakuan dosis III sebesar 137,14 mg/kgBB menunjukkan hubungan perbedaan yang tidak bermakna. Hal ini berarti bahwa pemberian FHEMM jangka panjang dengan dosis tertinggi 137,14 mg/kgBB, mampu menyebabkan penurunan aktivitas serum LDH yang setara dengan keadaan normal. Pada tabel VI terdapat perbedaan yang tidak bermakna antara perlakuan dosis I dengan perlakuan dosis II (68,57 mg/kgBB) yang berarti bahwa terjadi penurunan aktivitas serum LDH yang relatif sama pada kedua tingkatan dosis. Hal


73

ini juga terjadi pada perlakuan dosis I yang dibandingkan dengan perlakuan dosis III (137,14 mg/kgBB)

(902,2 ± 23,4 U/L) setelah pemejanan CCl 4 terjadi

perbedaan yang tidak bermakna yang berarti bahwa kedua dosis ini dapat memberikan penurunan aktivitas serum LDH yang relatif sama. Pada perlakuan dosis II (68,57 mg/kgBB) FHEMM jika dibandingkan dengan perlakuan dosis III (137,14 mg/kgBB) FHEMM jangka panjang memiliki perbedaan yang tidak bermakna secara statistik yang berarti bahwa baik dosis II maupun dosis III juga menyebabkan penurunan aktivitas serum LDH yang relatif sama. Dari hasil ini dapat disimpulkan bahwa secara statistik dengan uji Scheffe antara dosis I (34,28 mg/kgBB), dosis II (68,57 mg/kgBB), dan dosis III (137,14 mg/kgBB) terjadi perbedaan yang tidak bermakna satu sama lain berdasarkan penurunan aktivitas serum LDH pada tikus yang terinduksi CCl4. Oleh karena itu, tidak ada pengaruh tingkatan dosis yang signifikan dan bermakna terhadap respon atau efek yang ditimbulkan atau dengan kata lain tidak terdapat kekerabatan dosis dengan aktivitas serum LDH yang muncul, yang terlihat dari semakin besar dosis praperlakuan FHEMM yang diberikan, kadar LDH relatif sama. Senyawa ellagitannin dapat menurunkan kadar serum LDH dikarenakan potensi ellagitannin sebagai antioksidan. Antioksidan merupakan senyawa yang jika berada pada konsentrasi yang relatif lebih rendah dibandingkan konsentrasi suatu substrat, maka akan teroksidasi lebih dulu, sehingga dapat mencegah terjadinya

oksidasi

substrat

tersebut.

Ellagitannin

dapat

menghambat

pembentukan oksigen aktif yang dapat menyebabkan oksidasi. Aktivitas antioksidatif ellagitannin berkaitan dengan struktur kimianya. Naiknya jumlah


74

gugus galloil, berat molekul, dan struktur ortohidroksil meningkatkan aktivitas antioksidatif dari ellagitannin. Aktivitas antioksidatif ellagitannin meliputi penghambatan peroksidasi lipid yang diinduksi oleh adenine 5’ diphosphate (ADP) pada mitokondria hepar tikus, menghambat peroksidasi lipid yang diinduksi oleh ADP dan NADPH pada mikrosom hepar tikus, penghambatan anion radikal superoksida dan aktivitas penangkapan radikal terhadap DPPH (Okuda, Yoshida, and Hatano, 1992). Oleh karena itu, senyawa ellagitannin dapat melindungi hepar dengan berikatan dengan radikal bebas yang terbentuk (triklorometil) sehingga senyawa radikal tersebut tidak menimbulkan efek toksik Dengan demikian pada penelitian ini dapat disimpulkan bahwa pemberian FHEMM pada dosis 34,28; 68,57; dan 137,14 mg/kgBB terbukti berpengaruh dalam menurunkan aktivitas serum LDH tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4 dengan dosis 2 ml/kgBB dan tidak terdapat kekerabatan dosis FHEMM dengan aktivitas serum LDH yang muncul, yang terlihat dari semakin besar dosis praperlakuan FHEMM yang diberikan, kadar LDH relatif sama. Berdasarkan hasil penelitian, pemberian FHEMM mampu melindungi hepar dari perlemakan hepar yang diakibatkan oleh model hepatotoksin CCl4. Untuk menguji kemampuan FHEMM apakah juga mampu melindungi hepar pada bentuk kerusakan hepar yang sama, perlu dilakukan penelitian dengan hepatotoksin lain seperti parasetamol. Adanya kemampuan FHEMM dalam melindungi hepar diharapkan karena adanya kandungan ellagitannin pada FHEMM yaitu chebulagic acid, macatanin A dan B. Namun, dari ketiga senyawa


75

ellagitannin tersebut belum diketahui senyawa mana yang benar-benar berperan dalam melindungi hepar. Oleh karena itu, pada penelitian selanjutnya dapat dilakukan uji kandungan spesifik ketiga senyawa ellagitannin yang berpengaruh dalam melindungi hepar. Selain LDH, ada beberapa parameter lain yang dapat digunakan sebagai penanda kerusakan hepar, salah satunya adalah gammaglutamil transferase (GGT). E. Rangkuman Pembahasan Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang FHEMM pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4 berdasarkan aktivitas LDH serta untuk mengetahui kekerabatan antar dosis pemberian FHEMM terhadap penurunan kadar serum LDH pada tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4. Kekerabatan antar dosis pemberian FHEMM dapat ditunjukkan dengan semakin besar tingkatan dosis, maka efek yang dihasilkan juga semakin baik atau penurunan aktivitas serum LDH yang terjadi semakin baik dan berbeda signifikan. Dosis FHEMM yang digunakan yaitu 34,28; 68,57; dan 137,14 mg/kgBB. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian FHEMM jangka panjang dengan dosis 34,28; 68,57; dan 137,14 mg/kgBB menunjukkan hubungan yang tidak bermakna yang berarti bahwa efek penurunan aktivitas serum LDH yang ditimbulkan relatif sama atau dengan kata lain tidak terdapat kekerabatan dosis dengan aktivitas serum LDH yang muncul, yang terlihat dari semakin besar dosis praperlakuan FHEMM yang diberikan, kadar LDH relatif sama.


76

Berdasarkan analisis hasil statistik menunjukkan bahwa aktivitas LDH pada perlakuan FHEMM jangka panjang dengan dosis 34,28; 68,57; dan 137,14 mg/kgBB menunjukkan perbedaan yang bermakna dan signifikan dengan aktivitas serum LDH pada kontrol hepatotoksin , sehingga dapat dikatakan FHEMM mampu melindungi hepar dengan menurunkan aktivitas serum LDH. FHEMM dengan dosis 34,28; 68,57; dan 137,14 mg/kgBB dianggap dapat melindungi hepar dari pemberian CCl4 dikarenakan adanya kandungan Ellagitannin dari FHEMM yaitu chebulagic acid, macatanin A dan B yang dapat menangkap radikal bebas triklorometil dari CCl4 sehingga ketoksikan yang dihasilkan berkurang dan dapat menghambat terjadinya steatosis dengan memindahkan senyawa oksigen reaktif yang ada dalam tubuh menjadi produk non toksik.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan Berdasarkan hasil yang telah diperoleh dan analisis statistik yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan bahwa : 1.

Pemberian FHEMM pada dosis 34,28; 68,57; dan 137,14 mg/kgBB terbukti berpengaruh dalam menurunkan aktivitas serum LDH tikus betina galur Wistar yang terinduksi CCl4 dengan dosis 2 ml/kgBB

2.

Tidak terdapat kekerabatan dosis FHEMM dengan aktivitas serum LDH yang muncul, yang terlihat dari semakin besar dosis praperlakuan FHEMM yang diberikan, kadar LDH relatif sama. B. Saran

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai : 1.

Pengaruh FHEMM untuk induksi hepatotoksin yang lain seperti parasetamol

2.

Uji kandungan antioksidan spesifik dalam FHEMM yang berperan sebagai hepatoprotektor

3.

Parameter lain yang dapat digunakan sebagai penanda kerusakan hati seperti gamma-glutamil transferase (GGT)

77


78

DAFTAR PUSTAKA

Adrianto, E., E., 2010, Efek Hepatoprotektif Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L. Pada Tikus Jantan Terinduksi Parasetamol, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Amalina, N., 2009, Uji Toksisitas Akut Ekstrak Valerian (Valeriana officinalis) Terhadap Hepar Mencit Balb/C. Karya Tulis Ilmiah, Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang. Amirudin, R., 2009, Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam : Fisiologi dan Biokimia Hati, Edisi V, Interna Publishing, Jakarta, hal. 627. Andini, A., P., 2010, Efek Analgesik Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L. Pada Mencit Betina Galur Swiss, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Arafah, E., 2005, Perlindungan dan Efek Penyembuhan Sediaan Bangle (Zingiber cassumunar Roxb) Terhadap Peradangan Hati Tikus serta Mekanismenya pada Sel Makrofag dan Limfosit, IPB, Bogor. Aslam, M., Tan, C., K., dan Prayitno, A., 2003, Farmasi Klinis (Clinical Pharmacy) Menuju Pengobatan Rasional dan Penghargaan Pilihan Pasien, Elex Media Komputindo, Jakarta. Aznam, N., Atun, S., Arianingrum, R., Sulisdiarto, S., S., Utami, B., S.,dan Sholeh, A., B., 2010, Antihepatotoxic Activity and Toxicity of Ethanolic Extract From Stem Bark of Hopea mengarawan, Department of Chemistry Education, Yogyakarta, pp. 1-4. Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2010, Acuan Sediaan Herbal, 5 (1), Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, hal. 6. Bartrons, R., and Jaime, C., 2007, Hypoxia, Glucose Metabolism and The Warburg’s Effect, J Bioenergy Biomembr, pp. 39, 223-29. Berg, J., M., Tymoczko, J., L., and Stryer, L., 2002, Biochemistry, 5th edition, Freeman and Company, New York, p. 542. Burtis, C., Ashwood, E., R., 2006,http://www.mayomedicallaboratories.com/test catalog/Clinical+and+Interpretive/8344, diakses pada tanggal 17 April 2015. Campbell, N., A., Mitchell, L., G., Reece, J., B., Taylor, M., R., and Simon, E., J., 2006, Biology, 5th edition, Benjamin Cummings Publishing Company Inc., Redword City, England.


79

Carithers, and McClain, 2010, Alcoholic Liver Disease, In: textbook of Gastrointestinal and Liver Disease, 9th edition, Saunders Elsevier Publishing, Philadelphia, pp. 400-1383. Chandrasoma, P., and Taylor, C., R., 1995, Concise Pathology, 2nd Ed., FRC Path Prentice-Hall International Inc., USA, pp. 620-633. Clichici, S., Diana, O., Nagy, A., Oros, A., Filip, A., and Mircea, P., A., 2014, Silymarin Inhibits the Progression of Fibrosis in the Early stages of Liver Injury in CCl4- Treated Rats, Journal of Medicinal Food, pp. 1-9. Dalimarta, S., 2000, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia, Jilid 2, Trubus Agriwidya, Jakarta. Delgado, J., and Remers, W., 1991, Textbook of Organic Medical and Pharmaceutical Chemistry, Edisi ke-9, J.B.Lippincott Co, Philadephia, pp. 2-10. Departemen Kesehatan RI, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Dirjen POM-Depkes RI, Jakarta. Departemen Kesehatan RI, 2007, Profil Kesehatan Provinsi Jawa Tengah 2006, Jakarta, http://www.depkes.go.id, diakses tanggal 29 Maret 2015. Direktorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan, 1979, Farmakope Indonesia, Edisi III, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal.9. Direktorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan RI, Jakarta. Duke, T., 1999, Dysoxia and Lactate, Arch Dis Child, pp. 81, 343-50 Faiz, O., and Moffat, D., 2003, Anatomy at a Glance, Erlangga, Jakarta, pp. 40-41 Fausto, N., 2006, Cell Injury Cell Death, 7th edition, Elsevier-Saunders Washington, pp. 16-17 Gavaghan, M., 1999, Biochemical markers in myocardial injury, Aorn J, pp. 50, 70, 840. Gene, D., L., 1999, Acute Carbon Tetrachloride Feeding Induces Damage of Large, 1.Med G, pp. 1289-301. Gregus dan Klaaseen, C. D., 2001, Mechanism of Toxicity, in Klaaseen, C. D., Cassarett and Doull’s Toxicology: the Basic Science Poisons, 6th edition, McGraw-Hill, New York, pp. 57-64, 476, 481. Gupta, R., C., 2014, Biomarkers in Toxicology, Elsevier Inc., USA, pp. 296, 926.


80

Haki, M., 2009, Efek Ekstrak Daun Talok (Muntingia calabura L.) Terhadap Aktivitas Enzim SGPT pada Mencit Yang Diinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret, Surakarta. Halliwell, B., Gutteridge JMC, 2007, Free Radicals In Biology and Medicine, Edisi 4, Oxford University Press, U.K. Harborne, J., B., 1987, Metode Fitokimia, ITB, Bandung. Ho, Y., Lai, M., Lin, F., Liu, P., Huang, Y., Chiu, J., et al., 2009, Antioxidative and Hepatoprotective Effects of Magnolol on Acetaminophen-induced Liver Damage in Rats, Arch Pharm Res., Vol. 32, No. 2, 221-228. Janakat, S., dan Al-Merie, H., 2002, Optimization of The Dose and Route of Injection and Characterisation of The Time Course of Carbon Tetrachloride-Induced Hepatotoxicity in the Rat, JPTM 48, pp. 41-44. Jeon, T., I., Hwang, S., G., Park, N., G., Shin, S., I., Choi, S., D., and Park, D., K., 2003, Antioxidative Effect of Chitosan on Chronic Carbon Tetrachloride Induced Hepatic Injury in Rat, Toxicology,187: 67-73. Jungueira, L., C., and Carneiro, J., 2002, Basic Histology, 3rd ed., diterjemahkan oleh Adji Dharma, CV EGC, Jakarta, pp. 342-344, 354. Koestadi, 1989, Kimia Klinik Teori dan Praktek Darah, AAK Bhakti Wiyata, Kediri. Koorders, S.H., and Valeton, 1918, Atlas Der Baumarten Von Java, Buch und Steindruckerei von Fa. P. W. M. TRAP, Leiden. Kumazawa, S., Murase, M., Momose, N., and Fukumoto, S., 2013, Analysis of Antioxidant Prenylflavonoids in different parts Macaranga tanarius, The Plant Origin of Okinawan Propolis, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine, Elsevier, Jepang, pp. 1-2. Kurniawaty, Y., A., 2007, Efek Antiinflamasi Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L. Pada Mencit Betina Galur Swiss, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Lawrence, 2005, Health Education Planing A Diagnostic Approach, The Johns Hopkins University: Mayfield Publishing Company, 2005. Lee, W., M., 2003, Drug-Induced hepatotoxicity, J.Med, England, pp. 349, 474485.


81

Lieberman, M., and Allan, D., 2009, Basic Medical Biochemistry, a Clinical Approcah, 3rd Edition, Lippincott Williams and Wilkins, Philadelpia, pp. 341-420. Lin, J., Nonaka, G., dan Nishioka, I., 1990, Tannins and Related Compounds. XCIV. Isolation and Characterization of Seven New Hydrolyzable. Lim, T.Y., Lim, Y.Y., and Yule, C. M., 2009, Evaluation of Antioxidant, antibacterial and anti-tyrosinase activities of Four Macaranga species, Food Chemistry, pp. 114, 594-599. Luft, F., C., 2001, Lactic Acidosis Update for Critical Care Clinicians, J Am Soc Nephrol, pp. 9, 12, 15. Lu, F.C., 1995, Toksikologi dasar, Asas, Organ Sasaran dan Penilaian Resiko, Edisi kedua, UI press, Jakarta, Indonesia, hal. 206-215. Mahendra, A., A., 2011, Efek Hepatoprotektif Infusa Daun Macaranga tanarius (L.) Pada Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Parasetamol, Skripsi, Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, hal. 28-47. Marianne, F., 2015,http:/ /www.urmc.rochester.edu/ encyclopedia/ content.aspx? ContentTypeID= 167&ContentID= lactate_dehydrogenase_isoenzymes, diakses tanggal 17 April 2015. Matsunami, K., Ichiko, T., Takakazu, S., Mitsunori, A., Kazunari, K., and Hideaki, O., et al., 2006, Radical-Scavenging Activities of New Megastigmane Glucosides from Macaranga tanarius (L.) MULL-ARG. 54(10): 1403-1406. Matsunami, K., Otsuka, H., Kondo, K., Shinzato, T., Kawahata, M., Yamaguchi, K., and Takeda, Y., 2009, Absolute configuration of (+)-pinoresinol 4-O[600-Ogalloyl]- b-D glucopyranoside, macarangiosides E, and F isolated from the leaves of Macaranga tanarius, Phytochemistry, 70, 1277-1285. Mazlan, N.A., Mediani, A., Abas, F., Ahmad, S., Shaari, K., Khamis, S., and Lajis, N.H., 2013, Antioxidant, Antityrosinase, Anticholinesterase, and Nitric Oxide Inhibition Activities of Three Malaysian Macaranga Species, The Scientific World Journal, 9. Michael, F., and Roizen, M.,.D., 2007. Staying Young (Jurus Menyiasati Kerja Gen Agar Muda Sepanjang Hidup), Free Press, New York. Murray, R., K., Granner, D., K., and Mayes, P., A., 1995, Glycolisis and Piruvate Oxidation, Edisi ke-22, Appleton and lange, London, pp. 197-206.


82

Mus, 2008, Mara Macaranga tanarius (L.) M. A., http:// plantamor.com/ index.php?plant= 804, diakses pada 29 Maret 2015. Naik, S., R., and Panda, V., S., 2007, Antioxidant and hepatoprotective effects of Ginkgo biloba phytosomes in carbon tetrachloride-induced liver injury in rodents. Liver Int., 27:393-399. Nugraha, A., W., 2010, Efek Hepatoprotektif Jangka Pendek Infusa Daun M. tanarius (L.) pada Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Parasetamol, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Nurcahyanti, N., C., 2013, Efek Hepatoprotektif Infusa Daun Macaranga tanarius L. pada Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Nurdjanah, S., 2007, Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam, Jilid I, Edisi ke-4, Pusat Penerbit Departemen Ilmu Penyakit Dalam FK UI, Jakarta. Oehha,

2000, Chronic Toxicity Summary Carbon Tetrachloride, http://www.oehha.ca.gov/air/chronic_rels/pdf/56235.pdf, diakses tanggal 29 Maret 2015.

Ohta, Y., Kaida, S., Chiba, S., Tada, M., Teruya, A., Imai, Y., et al., 2009, Involvement of Oxidative Stress in Increases in the Serum Levels of Various Enzymes and Components in Rats with Water-Immersion Restraint Stress, J. Clin. Biochem. Nutr., 45, 347-354 Oktavia, T., 2012, Efek Hipoglikemik Kombinasi Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga tanarius L. Dengan Metformin Pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar Terbebani Glukosa, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Okuda, T., Yoshida, Hatano, 1992, Pharmacologically Active Tannins Isolated from Medicinal Plants, In Hemingway, R.W. and P. E. Laks (ed), Plant Polyphenols : Synthesis, Properties, and Significance, New York: Plenum Press. Panjaitan, R., G., P., Handharyani, E., Chairul, Masriani, Zakiah, Z., dan Manalu, W., 2007, Pengaruh Pemberian Karbon Tetraklorida Terhadap Fungsi Hati dan Ginjal Tikus, Makara, Kesehatan, hal. 11-16. Petersen, K., F., Dufour, S., Feng, J., Befroy, D., Dziura, J., and Dalla Man, C., 2006, Increased Prevalence of Insulin Resistance and Nonalcoholic Fatty Liver Disease in Asian-Indian Men, Proc Natl Acad Sci, pp.18273-77 Phommart, S., Sutthivaiyakit, P., Chimnoi, N., Ruchirawat, S., and Sutthivaiyakit, S., 2005, Constituents of the Leaves of Macaranga tanarius, J. Nat,. Prod. 68 : 927-930.


83

Powell, L., W., and Piper, D., W., 1989, Dasar Gastroenterologi Hepatologi, Edisi 4, PT. Pharos, Jakarta. Price, S., A., and Wilson, L., M., 2005, Patofisiologi : Konsep Klinis ProsesProses Penyakit, Edisi 6, EGC, Jakarta, pp. 472-476. Puteri, G. M., D., P., T., dan Kawabata, J., F, 2010, Novel α-glucosidase inhibitors from Macaranga tanarius leaves, Food Chemistry, 123: 384389. Rahaju, M., 2003, Uji Diagnostik Pemeriksaan LDH dalam Cairan Tubuh Untuk Penentuan Klasifikasi Transudat dan Eksudat Dibandingkan dengan Klasifikasi Konvensional, Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang, pp. 20. Rao, R., and Kumar, V., 2013, A Study to Evaluate Prophylactic Hepatoprotective Effect of Phyllanthus Niruri Against The Paracetamol Induced Liver Toxicity in Albino Rats, International Journal of Basic and Applied Medical Sciences, Vol. 5(1), 4-7. Robbins, S., L., and Kumar, V., 1995, Buku Ajar Patologi 1, Edisi 4, Buku kedokteran EGC, Jakarta, pp. 290-293. Rosnalini, 1995, Optimasi Dosis Kurkumin Sebagai Hepatoprotektor pada Tikus, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Sastrohamidjojo, H., 1985, Kromatografi, Liberty, Yogyakarta. Sen, S., Chakraborty, R., Sridharl, C., and Reddy, Y., De, B., 2010, Free Radicals, Antioxidants, Diseases and Phytomedicines : Current Status and Future Prospect, International Journal of Pharmaceutical Science Review and Research, 3(1), pp. 91-100. Sey, A., V., 2003, Nonalcoholic Fatty Liver Disease : Epidemiology and Diagnosis Hepatol, pp. 917-23. Shanmugasundaram, P., and Venkataraman, S., J., 2006, Ethnopharmacol, pp. 124-128. Sherwood, L., 2001, Fisiologi Manusia dari Sel ke Sistem, Edisi 2, EGC, Jakarta. Sloane, 2004, Pengantar Hematologi dan Imun-Hematologi, Edisi 4, Jakarta. Soemarto, W., 1996, Perlemakan Hati, Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam, Jilid 1, Edisi ketiga, Balai Pustaka FKUI, Jakarta, hal. 333-335. Stahl, E., 1985, Analisa Obat Secara Kromatografi dan Mikroskopi, ITB, Bandung.


84

Tiala, M. R. B. K., 2013, Efek Hepatoprotektif Jangka Pendek Ekstrak MetanolAir Daun Macaranga tanarius L. Terhadap Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Thapa, B., R., and Walia, A., 2007, Liver Function Tests and Their Interpretation, Indian Journal of Pediatrics, vol. 74. Timbrell, J. A. 2008, Principles of Biochemical Toxicology, 4th Edition, Informa Healthcare, New York, pp 308-311. Toole, G., and Susan, 1999, Understanding Biology for Advanced Level Stanley Tornes: Cheintenham Vincent, A., and Muhopadhyay, A., 2008, Human Skin Keloid Fibroblasts Display Bioenergetics of Cancer Cells, J invest Dermatol, pp. 128, 702709. Voight, R., 1994, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, edisi V., Universitas Gadjah Mada Press, Yogyakarta. Pp. 577-578. Wahyuni, S., 2005, Pengaruh Daun Sambiloto ( Andrographis paniculata, Ness) Terhadap Kadar SGPT dan SGOT Tikus Putih, GAMMA, Volume I, Nomor I, hal. 45-53. Watt, L., R., and Zimmerman, J., L., 1978, Toward a Positive Theory of The Determination of Accounting Standard, The Accounting Review, Vol. 53, No.1. Weber, L., Boll, M.B., and Stampfl, A., 2003, Hepatotoxicity and Mechanism of Action of Haloalkanes: Carbon Tetrachloride as a Toxicological Model. Critical Reviews in Toxicology, pp. 105-136. Williamson, E. M., David, T.O., and Fred, J.E, 1996, Pharmacological Methods in Phytotherapy Research Vol. 1 : Selection, Preparation and Pharmacological Evaluation of Plant Material, John Wiley & Sons, Cichester, England, p. 49. Windrawati, T. G., 2013, Efek Hepatoprotektif Ekstrak Metanol:Air (50:50) Daun Macaranga tanarius L. Terhadap Kadar ALT-AST Serum pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.


85

World Agroforestry Centre, 2002, Botanic Nomenclature to Agroforestry trees : Macaranga tanarius. World Agroforestry Centre. Available : http://www.worldagroforestry.org/sea/products/afdbases/af/asp/SpeciesIn fo.asp?SpID=1092#Uses, diakses tanggal 29 Maret 2015. Wyngaarden, J., B., 1982, The Textbook of Medicine, Vol I, W.B. Saunders Co. Philadelphia, pp. 169. Zimmerman, H., J., 1999, Hepatotoxicity, Appleton Century Crofts, New York, pp. 210. Zivkovic, A., M., German, J., B., and Sanyal, A., J., 2007, Comparative review of diets for the metabolic syndrome: implications for nonalcoholic fatty liver disease, Am J Clin Nutr, pp. 86, 285-300.


LAMPIRAN

86


LAMPIRAN Lampiran 1. Foto daun M. tanarius

Lampiran 2. Foto ekstrak daun M. tanarius

87


Lampiran 3. Foto fraksi daun M. tanarius

88


Lampiran 4. Surat determinasi tanaman M. tanarius

89


Lampiran 5. Surat ethical clearence

90


91

Lampiran 6. Hasil analisis statistik data ALT dan AST pada uji pendahuluan waktu pencuplikan darah hewan uji setelah induksi CCl4 2 ml/kgBB

ALT

Case Processing Summary Waktu

Cases Valid N

ALT

d

i

m

Missing

Percent

N

Total

Percent

N

Percent

0

3

100.0%

0

.0%

3

100.0%

24

3

100.0%

0

.0%

3

100.0%

48

3

100.0%

0

.0%

3

100.0%

e

n

s

i

o

n

1

Descriptives Waktu ALT

0

Statistic Mean

Std. Error

66.8333

95% Confidence Interval for

Lower Bound

63.1965

Mean

Upper Bound

70.4701

5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation

. 66.6000 2.143 1.46401

Minimum

65.50

Maximum

68.40

Range Interquartile Range

2.90 .

.84525


Skewness

.699

1.225

.

.

184.0000

16.48949

Kurtosis 24

Mean 95% Confidence Interval for

Lower Bound

113.0514

Mean

Upper Bound

254.9486

5% Trimmed Mean

.

Median

181.1000

Variance

815.710

Std. Deviation

28.56064

Minimum

157.00

Maximum

213.90

Range

56.90

Interquartile Range

.

Skewness

.452

1.225

.

.

62.3333

15.58518

Kurtosis 48

92


Lower Bound

-4.7243

Mean

Upper Bound

129.3909

5% Trimmed Mean

.

Median

49.0000

Variance

728.693

Std. Deviation

26.99432

Minimum

44.60

Maximum

93.40

Range

48.80

Interquartile Range

.

Skewness

1.680

1.225

.

.

Kurtosis

Tests of Normality Waktu

a

Kolmogorov-Smirnov Statistic

ALT

df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

df

Sig.

0

.230

3

.

.981

3

.736

24

.207

3

.

.992

3

.832

d

i


48

m

.356

3

.

.817

3

93

.156

e

n

s

i

o

n

1

a. Lilliefors Significance Correction

Oneway Descriptives ALT 95% Confidence Interval for Mean N

Mean

Std. Deviation

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimum

Maximum

0

3

66.8333

1.46401

.84525

63.1965

70.4701

65.50

68.40

24

3

184.0000

28.56064

16.48949

113.0514

254.9486

157.00

213.90

48

3

62.3333

26.99432

15.58518

-4.7243

129.3909

44.60

93.40

Total

9

104.3889

62.89291

20.96430

56.0451

152.7327

44.60

213.90

Test of Homogeneity of Variances ALT Levene Statistic 3.654

df1

df2 2

Sig. 6

.092

ANOVA ALT Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

Df

Mean Square

28551.056

2

14275.528

3093.093

6

515.516

31644.149

8

F 27.692

Sig. .001


94

Multiple Comparisons ALT Scheffe (I) Waktu

(J) Waktu

95% Confidence Interval

Mean Difference (I-J)

0

Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

24

-117.16667

*

18.53853

.002

-176.6245

-57.7088

48

4.50000

18.53853

.971

-54.9578

63.9578

117.16667

*

18.53853

.002

57.7088

176.6245

121.66667

*

18.53853

.002

62.2088

181.1245

-4.50000

18.53853

.971

-63.9578

54.9578

*

18.53853

.002

-181.1245

-62.2088

dimension3

24

0

dimension2

dimension3

48 48

0 dimension3

24

-121.66667

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Post Hoc Tests

Homogeneous Subsets

ALT Scheffe

a

Waktu

Subset for alpha = 0.05 N

d

i

m

e

1

2

48

3

62.3333

0

3

66.8333

24

3

Sig.

184.0000 .971

1.000

n

s

i

o

n

1

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000.


AST

Case Processing Summary Waktu

Cases Valid N

AST

d

i

m

e

n

s

i

o

n

1

Missing

Percent

N

Total

Percent

N

Percent

0

3

100.0%

0

.0%

3

100.0%

24

3

100.0%

0

.0%

3

100.0%

48

3

100.0%

0

.0%

3

100.0%

95


96

Descriptives Waktu AST

0

Statistic Mean

154.2000


Lower Bound

145.2433

Mean

Upper Bound

163.1567

5% Trimmed Mean

153.2000

Variance

13.000

Std. Deviation

3.60555

Minimum

151.20

Maximum

158.20

Range

7.00

Interquartile Range

.

Skewness Kurtosis Mean

1.152

1.225

.

.

669.5667

8.36985


Lower Bound

633.5541

Mean

Upper Bound

705.5792

5% Trimmed Mean

.

Median

661.6000

Variance

210.163

Std. Deviation

14.49701

Minimum

660.80

Maximum

686.30

Range

25.50

Interquartile Range

.

Skewness Kurtosis 48

Mean

1.726

1.225

.

.

197.7333

9.55167


Lower Bound

156.6358

Mean

Upper Bound

238.8309

5% Trimmed Mean Median Variance Std. Deviation

2.08167

.

Median

24

Std. Error

. 193.1000 273.703 16.54398


Minimum

184.00

Maximum

216.10

Range

97

32.10

Interquartile Range

.

Skewness

1.161

1.225

.

.

Kurtosis

Tests of Normality a

Waktu


AST

d

i

m

df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

df

Sig.

0

.276

3

.

.942

3

.537

24

.375

3

.

.774

3

.053

48

.277

3

.

.941

3

.532

e

n

s

i

o

n

1

a. Lilliefors Significance Correction

Oneway Descriptives AST 95% Confidence Interval for Mean

Std. N

Mean

Deviation

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimum

Maximum

0

3

154.2000

3.60555

2.08167

145.2433

163.1567

151.20

158.20

24

3

669.5667

14.49701

8.36985

633.5541

705.5792

660.80

686.30

48

3

197.7333

16.54398

9.55167

156.6358

238.8309

184.00

216.10

Total

9

340.5000

247.76965

82.58988

150.0474

530.9526

151.20

686.30


98

Test of Homogeneity of Variances AST Levene Statistic

df1

3.315

df2 2

Sig. 6

.107

ANOVA AST Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

Df

Mean Square

490124.647

2

245062.323

993.733

6

165.622

491118.380

8

F

Sig.

1479.646

.000

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons AST Scheffe (I) Waktu

(J) Waktu


Mean Difference (I-J)

0

24

-43.53333

*

10.50785

.017

-77.2347

-9.8320

0

515.36667

*

10.50785

.000

481.6653

549.0680

48

471.83333

*

10.50785

.000

438.1320

505.5347

43.53333

*

10.50785

.017

9.8320

77.2347

-471.83333

*

10.50785

.000

-505.5347

-438.1320

0 24

10.50785

.000

-549.0680

-481.6653


Homogeneous Subsets

AST

Waktu

a

N

Upper Bound

48

dimension3

Scheffe

Lower Bound

-515.36667

dimension3

48

Sig.

24 dimension3

dimension2

Std. Error *

Subset for alpha = 0.05


1 d

i

m

e

0

3

48

3

24

3

Sig.

2

3

154.2000 197.7333 669.5667 1.000

1.000

1.000

n

s

i

o

n

1


99


100

Lampiran 7. Hasil analisis statistik data kontrol CMC-Na 1%, kontrol CCl4, kontrol dosis tertinggi, dan perlakuan pemberian FHEMM dosis 34,28; 68,57; 137,14 mg/kgBB

Case Processing Summary Kelompok

Cases Valid N

LDH

Missing

Percent

N

Total

Percent

N

Percent

Kontrol CMC-Na 1 %

5

100.0%

0

.0%

5

100.0%

Kontrol hepatotoksin CCl4

5

100.0%

0

.0%

5

100.0%

Kontrol dosis III

5

100.0%

0

.0%

5

100.0%

Dosis I

5

100.0%

0

.0%

5

100.0%

Dosis II

5

100.0%

0

.0%

5

100.0%

Dosis III

5

100.0%

0

.0%

5

100.0%

Descriptives Kelompok LDH

Kontrol CMC-Na 1 %

Statistic Mean

877.8000


Lower Bound

657.8302

Mean

Upper Bound

1097.7698

5% Trimmed Mean

876.0000

Median

888.0000

Variance

31384.700

Std. Deviation

177.15727

Minimum

647.00

Maximum

1141.00

Range

494.00

Interquartile Range

278.50

Skewness Kurtosis Kontrol hepatotoksin CCl4

Mean

Std. Error 79.22714

.434

.913

1.701

2.000

1848.8000

47.78640


Lower Bound

1716.1237

Mean

Upper Bound

1981.4763

5% Trimmed Mean

1850.2222

Median

1881.0000

Variance

11417.700


Std. Deviation

106.85364

Minimum

1692.00

Maximum

1980.00

Range

288.00

Interquartile Range

181.50

Skewness Kurtosis Kontrol dosis III

Mean

.913

.687

2.000

964.4000

84.73051

Lower Bound

729.1504

Mean

Upper Bound

1199.6496 965.5556

Median

1000.0000

Variance

35896.300

Std. Deviation

189.46319

Minimum

744.00

Maximum

1164.00

Range

420.00

Interquartile Range

374.00

Skewness Kurtosis Mean

-.239

.913

-2.749

2.000

1064.0000

80.91601


Lower Bound

839.3412

Mean

Upper Bound

1288.6588

5% Trimmed Mean

1066.5556

Median

1165.0000

Variance

32737.000

Std. Deviation

180.93369

Minimum

855.00

Maximum

1227.00

Range

372.00

Interquartile Range

342.50

Skewness Kurtosis Dosis II

-.543


5% Trimmed Mean

Dosis I


101

Lower Bound

-.552

.913

-3.170

2.000

1069.0000

34.03968

974.4907


Mean

Upper Bound

1163.5093

5% Trimmed Mean

1066.8889

Median

1032.0000

Variance

5793.500

Std. Deviation

76.11504

Minimum

995.00

Maximum

1181.00

Range

186.00

Interquartile Range

136.50

Skewness

.891

.913

-.687

2.000

902.2000

23.44014

Kurtosis Dosis III

102


Lower Bound

837.1197

Mean

Upper Bound

967.2803

5% Trimmed Mean

900.7778

Median

897.0000

Variance

2747.200

Std. Deviation

52.41374

Minimum

853.00

Maximum

977.00

Range

124.00

Interquartile Range

99.00

Skewness Kurtosis

.617

.913

-.937

2.000

Tests of Normality Kelompok

a


LDH

df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

df

Sig.

Kontrol CMC-Na 1 %

.277

5

.200

*

Kontrol hepatotoksin

.218

5

.200

*

.961

5

.816

Kontrol dosis III

.217

5

.200

*

.894

5

.378

Dosis I

.312

5

.127

.796

5

.075

.903

5

.424

.915

5

.498

.940

5

.667

CCl4

Dosis II

.287

5

.200

*

Dosis III

.216

5

.200

*


103

a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance.

Oneway Descriptives LDH 95% Confidence Interval for

N

Mean

Mean

Std.

Std.

Deviation

Error

Maximu

Lower Bound Upper Bound Minimum

m

Kontrol CMC-Na 1 %

5

877.8000

177.15727 79.22714

657.8302

1097.7698

647.00

1141.00


5 1848.8000

106.85364 47.78640

1716.1237

1981.4763

1692.00

1980.00

Kontrol dosis III

5

964.4000

189.46319 84.73051

729.1504

1199.6496

744.00

1164.00

Dosis I

5 1064.0000

180.93369 80.91601

839.3412

1288.6588

855.00

1227.00

Dosis II

5 1069.0000

76.11504 34.03968

974.4907

1163.5093

995.00

1181.00

Dosis III

5

902.2000

52.41374 23.44014

837.1197

967.2803

853.00

977.00

30 1121.0333

362.74105 66.22715

985.5836

1256.4831

647.00

1980.00

CCl4

Total

Test of Homogeneity of Variances LDH Levene Statistic

df1

2.620

df2 5

Sig. 24

.050

ANOVA LDH Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

Post Hoc Tests

df

Mean Square

3335945.367

5

667189.073

479905.600

24

19996.067

3815850.967

29

F 33.366

Sig. .000


104

Multiple Comparisons LDH Scheffe (I) Kelompok

(J) Kelompok

Mean


Difference (IJ) Kontrol CMC-Na 1 %

Std. Error

Sig.

Lower Bound Upper Bound

*

89.43392

.000

-1294.7369

-647.2631

-86.60000

89.43392

.964

-410.3369

237.1369

Dosis I

-186.20000

89.43392

.518

-509.9369

137.5369

Dosis II

-191.20000

89.43392

.489

-514.9369

132.5369

Dosis III

-24.40000

89.43392

1.000

-348.1369

299.3369

971.00000

*

89.43392

.000

647.2631

1294.7369

884.40000

*

89.43392

.000

560.6631

1208.1369

784.80000

*

89.43392

.000

461.0631

1108.5369

Dosis II

779.80000

*

89.43392

.000

456.0631

1103.5369

Dosis III

946.60000

*

89.43392

.000

622.8631

1270.3369

86.60000

89.43392

.964

-237.1369

410.3369

*

89.43392

.000

-1208.1369

-560.6631

Dosis I

-99.60000

89.43392

.937

-423.3369

224.1369

Dosis II

-104.60000

89.43392

.923

-428.3369

219.1369

Dosis III

62.20000

89.43392

.992

-261.5369

385.9369

186.20000

89.43392

.518

-137.5369

509.9369

*

89.43392

.000

-1108.5369

-461.0631

Kontrol dosis III

99.60000

89.43392

.937

-224.1369

423.3369

Dosis II

-5.00000

89.43392

1.000

-328.7369

318.7369

Dosis III

161.80000

89.43392

.661

-161.9369

485.5369

Kontrol CMC-Na 1 %

191.20000

89.43392

.489

-132.5369

514.9369


-779.80000

*

89.43392

.000

-1103.5369

-456.0631

104.60000

89.43392

.923

-219.1369

428.3369

5.00000

89.43392

1.000

-318.7369

328.7369

166.80000

89.43392

.632

-156.9369

490.5369

24.40000

89.43392

1.000

-299.3369

348.1369

*

89.43392

.000

-1270.3369

-622.8631

-62.20000

89.43392

.992

-385.9369

261.5369

-161.80000

89.43392

.661

-485.5369

161.9369


-971.00000

CCl4 Kontrol dosis III


Kontrol CMC-Na 1 % Kontrol dosis III Dosis I

Kontrol dosis III

Kontrol CMC-Na 1 % Kontrol hepatotoksin

-884.40000

CCl4

Dosis I


-784.80000

CCl4

Dosis II

CCl4 Kontrol dosis III Dosis I Dosis III Dosis III


-946.60000

CCl4 Kontrol dosis III Dosis I


Dosis II

-166.80000

89.43392


Homogeneous Subsets

LDH Scheffe

a

Kelompok

Subset for alpha = 0.05 N

1

2

Kontrol CMC-Na 1 %

5

877.8000

Dosis III

5

902.2000

Kontrol dosis III

5

964.4000

Dosis I

5

1064.0000

Dosis II

5

1069.0000


5

Sig.

1848.8000 .489


1.000

.632

-490.5369

105

156.9369


106

Lampiran 8. Perhitungan penetapan peringkat dosis fraksi daun M. tanarius pada kelompok perlakuan 

Bobot maksimal tikus = 350 g



Konsentrasi FHEMM yang digunakan = 600mg/25mL Dengan dasar tersebut maka ditetapkan dosis pemberian FHEMM D x BB = C x V Dosis x Berat Badan Tikus = Konsentrasi x Volume Pemberian a. Dosis rendah V = ½ x 1 mL = 0,5 mL

=

= 0,03428 mg/gBB = 34,28 mg/kgBB b. Dosis tengah V = 1 mL

= = 0,06857 mg/gBB = 68,57 mg/kgBB


107

c. Dosis tinggi V = 2 x 1 mL = 2 mL

= = 0,13714 mg/gBB = 137,14 mg/kgBB Lampiran 9. Perhitungan konversi dosis untuk manusia Konversi perhitungan dosis tikus 200 g ke manusia 70 kg = 56,0 Dosis untuk manusia 70 kg = dosis untuk tikus 200 g x nilai konversi Sehingga dapat diketahui dosis FHEMM untuk manusia adalah sebagai berikut : 1. FHEMM dosis 34,28 mg/kgBB tikus Dosis untuk tikus 200 g = 34,28 mg/kgBB = 6,856 mg Dosis untuk manusia 70 kg = 6,856 mg x 56,0 = 383,94 mg Dosis untuk manusia = 383,94 mg/70 kgBB = 5,49 mg/kgBB 2. FHEMM dosis 68,57 mg/kgBB tikus Dosis untuk tikus 200 g = 68,57 mg/kgBB = 13,714 mg Dosis untuk manusia 70 kg = 13,714 mg x 56,0 = 767,984 mg Dosis untuk manusia = 767,984 mg/70kgBB = 10,97 mg/kgBB


108

3. FHEMM dosis 137,14 mg/kgBB tikus Dosis untuk tikus 200 g = 137,14 mg/kgBB = 27,428 mg Dosis untuk manusia 70 kg = 27,428 mg x 56,0 = 1535,97 mg Dosis untuk manusia = 1535,97 mg/70kgBB = 21,94 mg/kgBB

Lampiran 10. Penetapan kadar air serbuk daun M. tanarius Penetapan kadar air dilakukan menggunakan alat moisture balance dengan metode Gravimetri. Pemanasan serbuk daun M. tanarius L. dilakukan pada suhu 110ºC dalam waktu 15 menit. Tabel VII. Hasil penetapan kadar air serbuk daun M. tanarius L. Bobot

Replikasi I

Replikasi II

Replikasi III

Sebelum pemanasan

5,014 g

5,027 g

5,022 g

Sesudah pemanasan

4,561 g

4,589 g

4,593 g

Kadar air

0,453 g

0,438 g

0,429 g

Rata-rata kadar air

= 9,03 %

= 8,71% Replikasi III = = 8,54%

0,440 g


109

= 8,765 Kadar air serbuk yang dipersyaratkan adalah kurang dari 10%. Kadar air serbuk daun M. tanarius L. sebesar 8,76%, sehingga memenuhi persyaratan.

Lampiran 11. Perhitungan Rendemen FHEMM Berat Serbuk = 862, 6983 gram Berat Ekstrak Pekat = 155, 5665 gram Berat Fraksi = 30, 2727 gram % Rendemen Ekstrak =

= 18, 03% % Rendemen Fraksi =

= 19, 46%


110

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi dengan judul “Efek Hepatoprotektif Jangka Panjang Fraksi Heksan-Etanol Ekstrak Metanol-Air Daun Macaranga Tanarius L. Terhadap Aktivitas Laktat Dehidrogenase Pada Tikus Betina Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida” memiliki nama lengkap Penina Kurnia Uly, merupakan anak ketiga dari tiga bersaudara pasangan Julius Uly dan Harjanti Kristiani Uly dilahirkan di Kupang pada tanggal 8 Desember 1993. Pendidikan formal yang telah ditempuh, yaitu TK Pertiwi II Institut Ilmu Pemerintahan Jakarta (1999-2000), kemudian melanjutkan pendidikan tingkat Sekolah Dasar di SD Katolik Santo Yoseph 2 Kupang (2000-2006). Pendidikan Sekolah Menengah Pertama ditempuh oleh penulis di SMP Kristen Mercusuar Kupang (2006-2009), kemudian melanjutkan pendidikan tingkat menengah atas di SMA Negeri 9 Yogyakarta (2009-2012). Penulis kemudian melanjutkan pendidikan S-I Farmasi di Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2012. Selama menjadi mahasiswi, penulis aktif dalam kegiatan kepanitiaan seperti Divisi Usaha Dana Seminar Nasional dan Komisi Pemilihan Umum Universitas Sanata Dharma. Penulis juga pernah menjadi Asisten Praktikum Farmasi Fisika (2015).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents