PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

UJI EFEK ANTIINFLAMASI EKSTRAK ETANOL DAUN TRENGGULI (Cassia fistula L.) SECARA TOPIKAL TERHADAP NEUTROFIL DAN SIKLOOKSIGENASE-2 (COX-2) PADA MENCIT TERINDUKSI KARAGENIN

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh : Rury Henggar Tyas Utami NIM : 128114164

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2015


UJI EFEK ANTIINFLAMASI EKSTRAK ETANOL DAUN TRENGGULI (Cassia fistula L.) SECARA TOPIKAL TERHADAP NEUTROFIL DAN SIKLOOKSIGENASE-2 (COX-2) PADA MENCIT TERINDUKSI KARAGENIN

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh : Rury Henggar Tyas Utami NIM : 128114164

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2015

i


ii


iii


HALAMAN PERSEMBAHAN

“I believe in prayer. It is the best way draw strength from heaven” – Josephine Baker

“Don’t pray for an easy life, pray for strength to endure a difficult one” – Bruce Lee

Dengan sujud syukur, saya mempersembahkan skripsi ini kepada Kemuliaan Tuhan Yesus Kristus Allah Bapa sumber segala kekuatan Bapak dan ibu tersayang yang selalu setia mendukung dalam segala hal Para teman dan sahabat terbaik dalam hidup saya Almamater Universitas Sanata Dharma Yogyakarta

iv


v


vi


PRAKATA

Penulis memanjatkan puji dan syukur ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa atas segala berkat dan rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Daun Trengguli (Cassia fistula L.) Secara Topikal Terhadap Neutrofil Dan Siklooksigenase-2 (COX-2) Pada Mencit Terinduksi Karagenin” dengan baik. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat dalam memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Pada proses penyusunan skripsi dari awal hingga akhir penulis tidak lepas dari dukungan dan bantuan dari berbagai pihak secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu, mengucapkan banyak teriakasih kepada: 1. Ibu Aris Widayati, M.Si., Ph.D., Apt, selaku dekan fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2. Ibu drh. Sitarina Widyarini, MP., Ph.D., selaku Pembimbing Utama skripsi yang dengan sabar selalu mendukung, memotivasi, membimbing, dan memberikan masukan kepada penulis dalam menyusun skripsi ini. 3. Bapak Prof. Dr. C. J Soegihardjo, Apt., selaku Pembimbing Pendamping skripsi ini atas dukungan dan memberikan masukan kepada penulis dalam menyusun skripsi ini. 4. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt., selaku Dosen Penguji yang memberikan saran dan kritik yang membangun hingga skripsi ini tersusun dengan baik.

vii


5. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., selaku Dosen Penguji yang memberikan saran dan kritik yang membangun hingga skripsi ini tersusun dengan baik. 6. Ibu Agustina Setyawati, M.Si., Apt, selaku Kepala Penanggung Jawab Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta yang telah memberikan izin kepada peneliti untuk menggunakan sarana dan prasarana berupa laboratorium dan alat-alatnya untuk kepentingan penelitian ini. 7. Ibu Dr. Rita Suhadi, M.Si, selaku Dosen Pembimbing Program Kreatifitas Mahasiswa dalam bidang pengabdian masyarakat (PKM-M) yang dengan sabar telah membimbing, memotivasi, dan memberikan masukan kepada penulis selama menjalani proses kegiatan PKM-M sehingga penulis mampu menyelesaikan tugas pengabdian masyarakat dalam bentuk PKM-M. 8. Bapak Jeffry Julianus, M.Sc, selaku Dosen Pembibing Akademik (DPA) yang telah memberikan dukungan dan masukan dari awal masa perkuliahan hingga dalam proses penyusunan skripsi, sehingga penulis berhasil menyelesaikan skripdi dan memperoleh gelar sarjana strata satu. 9. Staf laboratorium farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, atas segala bantuan dan kerjasamanya selama penulis melakukan penelitian di laboratorium farmasi. 10. Keluarga yang terkasih, terutama kepada Ibu dan Bapak, yang selalu memberikan semangat, kasih saying, doa dan dukungan baik secara materi maupun non-materi sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini dengan baik.

viii


11. Saudaraku khususnya Cecilia Tri Artha Prahastiningrum, A.Md, yang selalu memberikan motivasi, doa, dan semangat kepada penulis hingga penulis mampu menyelesaikan skripsi ini dengan baik. 12. Sahabat-sahabatku, Thomas Haryo Pambudi, S.Kom, Yustina Dwi Ratnawati, Anthony Felix, S.Farm., Apt, Amelya Christina, dan Fitri Gandamana, yang selalu memberikan dukungan, motivasi, semangat, doa, kritik, saran, dan perhatian juga inspirasi kepada penulis dalam proses penyusunan skripsi. 13. Alexander Dista, yang telah memberikan dukungan, semangat, motivasi, doa, kritik, saran, dan perhatian kepada penulis dalam proses penyusunan skripsi hingga selesai. 14. Teman-teman seperjuangan angkatan 2012 Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta dan juga teman-teman dari fakultas lain, untuk kebersamaannya yang dilalui penulis dari awal masa perkuliahan hingga sekarang. 15. Teman, sahabat seperjuangan, dan keluarga di FSM D dan FKK B 2012 yang telah menjadi motivasi, memberikan dukungan, doa, dan perhatian kepada penulis dalam proses penyusunan skripsi dan kebersamaan selama masa perkuliahan di Fakultas Farmasi, yang telah memberikan berbagai pengalaman berharga. 16. Teman-teman seperjuangan dalam penelitian efek antiinflamasi : Kathrin Dian Cintika, Dui Sostales, Monika Febrianti, Farra Ayu Efariyanti, dan Sinta Atmi Utami, atas bantuan, kerjasama, perjuangan serta suka dan duka yang dialami selama penelitian.

ix


17. Keluarga baru “Keluarga Cemara”

Maria Angelika Suhadi, Natalia Putri

Arumsari, Bonifasia Anna Carisa, Cyndi Yulanda Putri, Rahayu Triwanti, Lucia Ida Ayu Kristiana, Sona Karisnata Inriano, Novita, Lusia Christin Setiawati, Lucia Joice, Patricia Yosepha Jelarut, Satrio Budi Utomo, Kresensia Trisna Hasrat, Yeni Mardiati, Veronika, Siti Sisca, Aditya Lela, Nanda Tia, Cinthya Anggarini, Penina Kurnia Ully dan Monalisa Mangkoan untuk perhatian, semangat, dorongan, motivasi, kebersamaan, dan doa, yang diberikan juga sebagai tempat penulis untuk menumpahkan segala cerita baik suka maupun duka dan terima kasih untuk setiap canda tawa, senyuman dan pelukan yang telah diberikan kepada penulis. 18. Kelompok PKM-M PENGANTEN ; Andriana Cindy Salim, Hastyamida Shepa Silvia, Rosalia Stefani Making, dan Andre Sofiyan, yang telah memberikan pengalaman yang berharga, kerja sama dalam menjalankan PKM-M, dan kebersamaannya sehingga program PKM-M dapat berjalan dengan baik dan membawa hasil yang baik bagi masyarakat. 19. Kos Putri Aditara, khusunya bagi ; Vicky Wijoyo, Suzan, Cresentia Claresta, Patricia Valentina Hendriana, Ira Felisia, Ira Yoshida, Lidwina Florentiana Sindoro, Cia cia dan Tria Noviana, untuk segala bantuan, motivasi, kritik, saran, doa, dan kebersamaan dalam suka maupun duka. 20. Semua pihak yang tidak bias disebutkan satu per satu oleh penulis sehingga penulis mampu menyelesaikan skripsi ini dengan baik. Penulis menyadari bahwa tidak ada manusia yang sempurna termasuk penulis.

Penulis

menyadari

masih

terdapat

x

banyak

kekurangan

dan


ketidaksempurnaan yang ada dalam penyusunan skripsi ini. Maka penulis mengharapkan adanya kritik dan saran yang membangun sehingga dapat membuat karya ini menjadi lebih baik. Akhir kata penulis berharap skripsi ini akan memberikan manfaat dalam bidang kefarmasian, bermanfaat bagi pembaca, dan perkembangan ilmu pengetahuan.

Yogyakarta, November 2015

Penulis

xi


DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ......................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBINGAN .......................................... ii HALAMAN PENGESAHAN ........................................................................... iii HALAMAN PERSEMBAHAN ....................................................................... iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................ v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ............. vi PRAKATA ........................................................................................................ vii DAFTAR ISI ...................................................................................................... xii DAFTAR TABEL .............................................................................................. xvi DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xvii DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xx INTISARI .......................................................................................................... xxii ABSTRACT ......................................................................................................... xxiii BAB I. PENGANTAR ...................................................................................... 1 A. Latar Belakang .............................................................................................. 1 1. Rumusan masalah................................................................................... 4 2. Keaslian penelitian ................................................................................. 4 3. Manfaat penelitian .................................................................................. 6 B. Tujuan Penelitian .......................................................................................... 6 1. Tujuan umum ........................................................................................ 6 2. Tujuan khusus ........................................................................................ 6

xii


BAB II. TINJAUAN PUSTAKA....................................................................... 7 A. Tanaman Cassia fistula L. ............................................................................ 7 1. Taksonomi tanaman ............................................................................... 7 2. Nama daerah .......................................................................................... 8 3. Morfologi ............................................................................................... 8 4. Kegunaan ............................................................................................... 9 5. Kandungan kimia ................................................................................... 9 B. Metode Penyarian ......................................................................................... 11 C. Metode Uji Daya Antiinflamasi ................................................................... 11 D. Kulit .............................................................................................................. 14 E. Inflamasi ....................................................................................................... 17 1. Definisi ................................................................................................... 17 2. Gejala .................................................................................................... 21 3. Mekanisme ............................................................................................ 23 F. Antiinflamasi ................................................................................................ 28 G. Karagenin ..................................................................................................... 29 H. Biocream® ................................................................................................... 30 I. Hidrokortison Asetat ...................................................................................... 31 J. Landasan Teori .............................................................................................. 31 K. Hipotesis ........................................................................................................ 31 BAB III. METODE PENELITIAN ................................................................... 34 A. Jenis dan Rancangan Penelitian .................................................................... 34 B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional .............................................. 34 1. Variabel Penelitian ................................................................................ 34

xiii


2. Skala Variabel ....................................................................................... 35 3. Definisi Operasional .............................................................................. 35 C. Bahan Penelitian ........................................................................................... 36 D. Alat Penelitian dan Instrumen Penelitian ...................................................... 38 E. Tata Cara Penelitian ...................................................................................... 39 1. Determinasi tanaman .............................................................................. 39 2. Pengumpulan bahan .............................................................................. 39 3. Pembuatan simplisia ............................................................................. 39 4. Pembuatan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. .................................. 40 5. Penentuan dosis konsentrasi dan pembuatan krim ekstrak daun Cassia fistula L. ................................................................................................ 40 6. Ethical Clearence ................................................................................... 41 7. Penyiapan Hewan Uji ............................................................................ 41 8. Pembuatan larutan Karagenin ............................................................... 42 9. Pengujian ekstrak etanol daun Cassia fistula L. .................................... 42 10. Pengambilan kulit punggung mencit ..................................................... 42 F. Analisis Hasil ................................................................................................. 43 1. Hasil Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L. Dalam Pengurangan Jumlah Sel Neutrofil ............................ 43 2. Hasil Persen (%) Penghambatan Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L. Dalam Eksppresi COX-2 ......... 44 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................... 45 A. Hasil Determinasi Daun Cassia fistula L. .................................................... 45 B. Pembuatan Serbuk Daun Cassia fistula L. .................................................... 46 C. Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L. .......................................................... 46 D. Uji Orientasi Karagenin ............................................................................... 48

xiv


E. Pengujian Efek Antiinflamasi Ekstrak tanol Daun Cassia fistula L. ............ 50 F. Hasil Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L. Pada Jumlah sel Neutrofil ............................................................. 52 G. Hasil Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L. Dalam Eksppresi COX-2 .............................................................. 59 H. Pembahasan Umum ...................................................................................... 67 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................... 72 A. Kesimpulan ................................................................................................... 72 B. Saran ............................................................................................................. 72 DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 73 LAMPIRAN ...................................................................................................... 77 BIOGRAFI PENULIS ....................................................................................... 117

xv


DAFTAR TABEL

Tabel 1.

Hasil rerata jumlah sel neutrofil pada setiap perlakuan .................... 53

Tabel 2.

Hasil uji Scheffe aktivitas efek antiinflamasi pada mencit setelah pemberian ekstrak etanol daun Cassia fistula L. secara topikal ....... 57

Tabel 3.

Rerata persen penghambatan inflamasi dalam penekanan COX-2 pada kelompok perlakuan beserta kontrol ................................................. 62

xvi


DAFTAR GAMBAR

Gambar 1.

Tanaman Cassia fistula L. ............................................................. 7

Gambar 2.

Struktur kandungan tanaman Cassia fistula L. kelas utama pada flavonoid ......................................................................................... 10

Gambar 3.

Struktur kulit manusia ................................................................... 15

Gambar 4.

Manifestasi lokal pada peradangan akut ........................................ 19

Gambar 5.

Manifestasi lokal pada peradangan kronis ..................................... 19

Gambar 6.

Komponen respon peradangan akut dan kronik ............................. 20

Gambar 7. Skema kejadian setelah terjadi inflamasi…………………………….21 Gambar 8.

Metabolit asam arakidonat dalam proses inflamasi dan target dari beberapa obat antiinflamasi ............................................................ 25

Gambar 9.

Diagram mediator inflamasi dan target obat antiinflamasi ........... 29

Gambar 10. Kurva grafik peningkatan tebal lipat kulit selama enam jam ......... 49 Gambar 11. Mikrofotografi kulit normal tanpa perlakuan dan kulit setelah diberikan perlakuan menunjukkan adanya inflamasi pada daerah subkutan dan neutrofil (Pengecatan HE pembesaran 200x dan 400x) ......................................................................................................... 55 Gambar 12. Diagram batang aktivitas efek inflamasi pada mencit setelah pemberian ekstrak etanol daun Cassia fistula L. secara topikal ..... 56

xvii


Gambar 13a. Ekspresi protein COX-2 pada neutrofil (pengecatan imunohistokimia antibody COX-2 pembesaran 400x dan 1000x) . 59 Gambar 13b. Mikrofotografi kulit normal tanpa perlakuan dan setelah diberikan perlakuan menunjukkan adanya inflamasi pada daerah sub kutan dan ekspresi COX-2 (Pengecatan imunohistokimia antibody COX-2 pembesaran 200x dan 400x) ........................................................... 61 Gambar 14. Diagram persen penghambatan inflamasi dengan penekanan ekspresi COX-2 antar tiap kelompok perlakuan beserta kontrol .................. 62 Gambar 15. Mekanisme aksi dari golongan steroid ............................................. 64 Gambar 16. Jalur target dari senyawa flavonoid pada mediator-mediator proinflamasi .......................................................................................... 69 Gambar 17. Mencit betina galur Swiss ................................................................. 78 Gambar 18. Kulit punggung mencit setelah dilakukan pencukuran .................... 78 Gambar 19. Kulit punggung mencit terinduksi karagenin ................................... 79 Gambar 20. Kulit punggung mencit yang diberi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. .......................................................................................... 79 Gambar 21. Pemotongan kulit punggung mencit ............................................... 80 Gambar 22. Pengawetan kulit mencit dengan formalin 10% ............................... 80 Gambar 23. Biocream® (kontrol Biocream®) dan basis ekstrak ....................... 81 Gambar 24. Hirocortisone (hidrokortison asetat 2,5%) sebagai kontrol

xviii


positif ............................................................................................. 81 Gambar 25. Serbuk karagenin yang digunakan dalam penelitian ...................... 82 Gambar 26. Ekstrak yang dilarutkan dalam basis Biocream® .......................... 82 Gambar 27. Spuit injeksi yang digunakan dalam penelitian ............................. 83

xix


DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1.

Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ............................. 78

Lampiran 2.

Pemotongan kulit untuk histopatologi ....................................... 80

Lampiran 3.

Alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian ...................... 81

Lampiran 4.

Hasil determinasi tanaman Cassia fistula L. .............................. 84

Lampiran 5.

Surat ethical clearance penelitian ............................................... 85

Lampiran 6.

Data tebal lipat kulit dalam uji pendahuluan karagenin .............. 86

Lampiran 7.

Data rata-rata perhitungan jumlah neutrofil ................................ 87

Lampiran 8.

Data rerata persen penghambatan inflamasi dalam penekanan COX-2 ......................................................................................... 89

Lampiran 9.

Hasil analisis statistik perhitungan rata-rata jumlah sel-sel neutrofil pada masing-masing .................................................................... 95

Lampiran 10. Hasil analis statistik uji normalitas dengan uji Shapiro-Wilk ..... 98 Lampiran 11. Hasil pengujian ANOVA ............................................................. 99 Lampiran 12. Hasil pengujian uji Post-Hoct dengan uji Scheffe ...................... 100 Lampiran 13. Perhitungan persen penghambatan inflamasi ekspresi COX-2 ....................................................................................... 103 Lampiran 14. Hasil uji normalitas dengan Shapiro-Wilk .................................. 103

xx


Lampiran 15. Hasil perhitungan rata-rata persen penghambatan inflamasi penekanan ekspresi COX-2 pada masing-masing perlakuan ..................................................................................... 105 Lampiran 16. Hasil pengujian Kruskal-Wallis .................................................. 107 Lampiran 17. Hasil pengujian Mann-Whitney Test……………………………..108

xxi


INTISARI Inflamasi adalah peradangan lokal pada jaringan terhadap infeksi atau cedera dan yang melibatkan banyak mediator. Respon inflamasi berupa rubor, kalor, dolor, tumor, dan function laesa. Tanaman trengguli (Cassia fistula L.) diketahui memiliki banyak efek farmakologis, diantaranya dapat digunakan sebagai antiinflamasi, pada inflamasi akut maupun inflamasi kronis. Tujuan penelitian ini adalah untuk menguji efek antiinflamasi topikal dan melihat jumlah sel-sel neutrofil dan penghambatan ekspresi COX-2 pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L. pada kulit punggung mencit terinduksi karagenin 3%. Penelitian tentang efek antiinflamasi secara topikal dengan menggunakan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. pada mencit, merupakan jenis penelitian eksperimental murni dengan menggunakan rancangan acak lengkap pola searah. Hewan uji dibagi menjadi enam kelompok, yaitu kelompok kontrol negatif karagenin 3%, kelompok kontrol positif Hidrokortison asetat® 2,5%, kontrol Biocream®, dan kelompok perlakuan ekstak daun trengguli (Cassia fistula L.) 1,67; 2,5%; dan 3,75% B/B. Hewan uji dikorbankan dengan dislokasi servikal setelah 24 jam untuk diambil bagian kulit mencit yang terdapat edema, kemudian dimasukkan dalam larutan fiksatif 10%. Dilakukan pengecatan dengan HE dan imunohistokimia antibody COX-2. Efek antiinflamasi daun trengguli dilihat dari pengurangan jumlah neutrofil dan persen penekanan ekspresi COX-2 pada daerah sub kutan punggung mencit yang terinduksi karagenin 3%. Data yang diperoleh kemudian diuji statistika dengan menggunakan taraf kepercayaan 95%. Hasil penelitian efek antiinflamasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. menunjukkan jumlah sel neutrofil yang bermigrasi sebesar 70,44 ± 5,04; 55,84 ± 4,97; dan 43,28 ± 3,89. Konsentrasi yang cukup tinggi menunjukkan adanya efek antiinflamasi dari adanya migrasi neutrofil sebesar 3,75%. Persen penghambatan penekanan ekspresi COX-2 pada konsentrasi 1,67; 2,5%; dan 3,75% secara berturut-turut adalah 14,54; 18,05; dan 14,76%, sedangkan pada kontrol negatif persen penghambatan penekanan ekspresi COX-2 sebesar 1,44%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Cassia fistula L. memiliki efek antiinflamasi topikal dan mekanisme dari ekstrak etanol daun Cassia fistula L. diduga melalui penghambatan migrasi sel neutrofil dan penghambatan ekspresi COX-2 pada daerah sub kutan yang diinduksi dengan karagenin 3%.

Kata kunci: antiinflamasi, topikal, Cassia fistula L., ekspresi neutrofil, ekspresi COX-2.

xxii


ABSTRACT Inflammation is a inflammatory in tissues to infection or injury and that involves a lot of mediators. Inflammatory response such as rubor, calor, dolor, tumor, and function laesa. Trengguli (Cassia fistula L.) has been known to have pharmacological effects, which can be used as anti-inflammatory, in acute inflammation and chronic inflammation. The purpose of this study was to test the effect of topical anti-inflammatory and see the amount of neutrophils cells and inhibition of expression of COX-2 in the ethanol extract of Cassia fistula L. the back skin of mice induced carrageenin 3%. This study on topical anti-inflammatory effect by using the ethanol extract of the leaves of Cassia fistula L. in mice, is a kind of purely experimental study with completely randomized design direction. Animals were divided into 6 groups: negative control group carrageenin 3%, positive control group Hidrokortison asetat® 2,5%, control Biocream®, and the ethanol extract treatment group trengguli (Cassia fistula L.) 1.67; 2.5%; 3.75% B/B. Animalss test were sacrificed by cervical dislocation after 24 hours to take the skin of mice contained edema, then included in a solution of fixative 10%. HE and immunohistochemical staining with antibodies COX-2. Antiinflammatory effect of trengguli seen from a reduction in the expression of neutrophils and percent suppression of expression of COX-2 e in the sub-cutaneous at the back skin of mice induced carrageenin 3%. The data obtained were then tested using a statistical confidence level of 95%. Result of the study of anti-inflammatory effects of ethanol extract of Cassia fistula L. the number of neutrophils migration in this study amounted to 70.44 ± 5.04; 55.84 ± 4.97; and 43.28 ± 3.89. The optimum concentration which in the neutrophil migration of 3.75%. Percent inhibition of suppression of expression COX-2 at a concentration of 1.67; 2.5%; 3.75% respectively was 14.54; 18.05; and 14.76%, while in the negative control percent inhibition of COX-2 expression of 1.44%. Result of the study showed that the Cassia fistula L. ethanol extract has topical anti-inflammatory effects anda mechanism of ethanol extract of Cassia fistula L. estimated by inhibition of neutrophils cell migration and inhibition of expression of COX-2 In the sub cutaneous induced by carrageenan 3%.

Keywords: anti-inflammatory, topical, Cassia fistula L., neutrophil expression, COX-2 expression.

xxiii


BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang

Inflamasi didefinisikan sebagai reaksi peradangan lokal pada jaringan terhadap infeksi atau cedera dan yang melibatkan lebih banyak mediator dibanding respon imun yang didapat. Inflamasi merupakan respon fisiologis terhadap berbagai rangsangan seperti infeksi dan cedera pada jaringan. Inflamasi dapat terjadi secara lokal, sistemik, akut dan kronis yang dapat menimbulkan kelainan paofisiologis (Karnen dan Iris, 2012). Proses inflamasi akan melepaskan mediator kimia selama proses inflamasi. Salah satu diantara adalah prostaglandin, yang telah berhasil diisolasi dari eksudat pada tempat inflamasi. Respon tersebut penting, untuk memungkinkan tubuh bertahan selama infeksi atau cedera dan mempertahankan homeostasis jaringan saat kondisi berbahaya (Hayes dan Kee, 1996). Pada era zaman sekarang, masyarakat memiliki banyak cara untuk mengobati atau mengurangi kondisi inflamasi yaitu salah satu cara dengan memberikan atau mengkonsumsi obat secara topikal maupun per oral. Pemberian secara topikal untuk keadaan inflamasi merupakan pertolongan pertama yang dilakukan dengan cara mengoleskan obat pada bagian yang mengalami inflamasi. Obat yang digunkan untuk inflamasi adalah golongan obat nonsteroidal antiinflammatory drugs (NSAID) dan golongan kortikosteroid. Tetapi, untuk golongan NSAID memiliki efek yang buruk untuk gastrointestinal (GI), dapat menyebabkan iritasi pada lambung. Karena obat golongan NSAID bekerja mengikat

1


2

cyclooxygenase (COX) dan golongan kortikosteroid mengurangi fosfolipase A2 dan mengikat enzim lipogenase, dan mengikat enzim lipogenase (Endro, 2012). Penggunaan obat antiinflamasi secara per oral efek terapi yang dihasilkan lebih lama. Untuk mengatasi efek tersebut maka jalur pemberian obat antiinflamasi diberikan secara topikal. Pemberian secara topikal lebih aman dan lebih mudah daripada pemberian secara per oral, sehingga akan mengurangi efek samping yang ditimbulkan dengan pemberian secara per oral dan pemberian secara topikal efek terapi yang dihasilkan lebih cepat dibandingkan dengan per oral. Indonesia merupakan negara tropis yang memiliki keanekaragaman tanaman yang dapat digunakan sebagai obat herbal, salah satunya adalah tanaman Cassia fistula L. Efek ekstrak Cassia fistula L, memiliki khasiat-khasiat, beberapa diantaranya. Penelitian Ilavarasan, Moni, dan Subramanian (2005) melaporkan bahwa aktivitas antiinflamasi dan aktivitas antioksidan dalam ekstrak etanol dari kulit batang Cassia fistula L. yang dilakukan pada tikus albino galur Wistar, dengan metode edema kaki yang disuntikan karagenin 1% dengan volume 0,1 mL ke dalam jaringan sublantar pada kaki belakang tikus. Dilaporkan memiliki efek antiinflamasi yang signifikan dalam dua tipe inflamasi, yaitu inflamasi akut dan kronis. Ekstrak kulit batang Trengguli (Cassia fistula L.) dilaporkan dapat menghambat peroksidasi lipid yang dipicu oleh CCl4 dan FeSO4 dalam hati dan ginjal tikus. Ekstrak tersebut juga menunjukkan aktivitas antioksidan terhadap DPPH, nitric oxyde, and hydroxyl pada pengujian in vitro. Penelitian Ali et al., (2012) melaporkan bahwa ekstrak etanol kulit batang Cassia fistula L. memiliki aktivitas analgesik pada dosis pemberian 200 dan


3

400 mg/kg secara per oral, dengan menggunakan model injeksi intraperitonial pada mencit yang diinduksi asam asetat 1%. Penelitian Guata et al., (2009) penelitian ini melaporkan bahwa terdapat aktivitas antiinflamasi dari ekstrak air akar Cassia sieberiana dengan dosis pemberian 30, 100, 300 mg/kg secara oral pada mencit galur Swiss yang diinduksi karagenin 1% pada telapak kaki belakang mencit. Penelitian Kanakam, et al., (2013) melaporkan bahwa ekstrak daun Cassia occidentalis Linn. memiliki aktivitas antiinflamasi dan analgetik. Dengan dosis pemberian ekstrak sebesar 200 mg/kg dan 400 mg/kg pada masing-masing perlakuan. Uji antiinflamasi dilakukan dengan menggunakan metode induksi sublantar kaki tikus dengan karagenin 1%. Berdasarkan penelitian Khan, et al., (2012) melaporkan bahwa ekstrak etanol 80% daun Cassia fistula L. memiliki aktivitas antioksidan yang besar diantara pelarut lain. Senyawa yang menunjukkan aktivitas antioksidan salah satunya adalah flavonoid. Berdasarkan penelitian Kim, Son, Chang, dan Kang (2004) flavonoid merupakan senyawa antioksidan yang memiliki mekanisme dalam menghambat sel-sel peradangan seperi, neutrofil dan ekspresi COX-2 yang banyak diekspresikan pada jenis-jenis sel peradangan. Neutrofil akan mendominasi peradangan pada 24 jam pertama, kemudian digantikan oleh monosit setelah 24 jam hingga 48 jam. Siklooksigenase-2 (COX-2) merupakan enzim yang terinduksi oleh beragam rangsangan inflamatorik dan tidak terdapat pada sebagian jaringan pada keadaan normal, COX-2 merangsang pembentukan prostaglandin (PG) yang berperan dalam reaksi peradangan (Kumar, Abbas, dan Fausto, 2005). Adapun aktivitas dari COX-2 dan neutrofil berperan penting dalam reaksi peradangan. Oleh


4

karena itu, dalam penelitian peran sel neutrofil dan COX-2 dijadikan sebagai parameter yaitu, dengan melihat jumlah migrasi sel neutrofil dan ekspresi dari COX-2. Berdasarkan dari penelitian tersebut metode perlakuan ekstrak yang digunakan adalah per oral. Pada penelitian ini akan diaplikasikan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. secara topikal sebagai antiinflamasi pada model kulit punggung mencit yang diinduksi karagenin 3%. Parameter yang diamati adalah jumlah neutrofil dan ekspresi pada siklooksigenase-2 (COX-2) pada kulit punggung mencit yang diinduksi karagenin dan diberikan dengan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. 1.

Rumusan Masalah Berdasarkan uraian diatas, rumusan permasalahan yang akan diteliti dalam

penelitian ini adalah : a.

Apakah dalam ekstrak etanol daun trengguli (Cassia fistula L.) memiliki aktifitas antiinflamasi topikal terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi siklooksigenase-2 (COX-2) pada mencit?

b.

Bagaimana mekanisme aktifitas antiinflamasi ekstrak etanol daun trengguli (Cassia fistula L.) pada mencit yang diinduksi karagenin 3%?

2.

Keaslian penelitian Penelitian Gobianand, Vivekanandan, dan Mohan (2010) melaporkan

bahwa senyawa flavonoid memiliki aktivitas antiinflamsi dan antipiretik dalam ekstrak etanol Cassia fistula Linn. (ELE) pada tikus albino galur Wistar melalui


5

pemberian secara per oral, aktivitas antiinflamasi secara signifikan menghambat inflamasi dengan model sublantar pada kedua kaki belakang tikus yang telah diinduksi karagenin 1% dengan pada dosis 750 mg kg/bb pemberian ekstrak etanol 250 – 500 mg kg/bb juga dilaporkan dapat mengurangi demam karena induksi polysaccharide typhoid vaccine (TAB vaccine). Mali, Hivrale, Bandawane dan Chaudhauri (2012) melaporkan bahwa ekstrak air, metanol, hydroalcoholic, etil asetat daun Cassia auriculata, masingmasing dosis pemberian 250 dan 500 mg/kg dan diberikan satu jam sebelum diinduksi karagenin. Memiliki aktivitas antiinflamasi yang dilakukan dengan model edema kaki yang diinduksi karagenin pada jaringan sub lantar pada bagian kaki belakang tikus. Penelitian Sermakkani dan Thangapandian (2013) melaporkan bahwa pada ekstrak metanol daun Cassia italica dengan dosis 250, 500, 750 mg/kgBB menunjukkan adanya aktivitas antiinflamasi yang diberikan satu jam sebelum induksi karagenin. Sejauh pengamatan penulis berdasarkan uraian diatas, penelitian tentang efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol daun Cassia fistula L. pada mencit yang terinduksi karegenin 3% secara subkutan dan dilakukan pengamatan secara kualitatif histopatologis kulit mencit (pengecatan hematoksilin eosin (HE) dan imunohistokimia dengan antibodi COX-2) belum pernah dilaporkan.


3.

6

Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis Penelitian ini dapat menambah informasi dan pengetahuan tentang efek antiinflamasi ekstrak daun tanaman trengguli (Cassia fistula L.) secara topikal. b. Manfaat praktis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi mengenai pembuktian efek antiinflamasi dari ekstrak daun trengguli (Cassia fistula L.) sehingga dapat dijadikan alternatif untuk menggobati inflamasi.

B. Tujuan Penelitian 1.

Tujuan Umum. Untuk mengetahui aktifitas antiinflamasi yang terdapat pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L.

2.

Tujuan Khusus. a.

Untuk mengetahui aktifitas antiinflamasi topikal pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L. terhadap jumlah neutrofil dan ekspresi COX-2 pada mencit.

b.

Untuk mengetahui mekanisme aktifitas antiinflamasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. pada mencit yang diinduksi karagenin 3%.


BAB II PENELAHAAN PUSTAKA

A. Tanaman Cassia fistula L.

1.

Gambar 1. Tanaman Cassia fistula L. Taksonomi tanaman

Kingdom

: Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom

: Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi

: Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisi

: Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas

: Magnoliopsida (Berkeping dua/ dikotil)

Sub Kelas

: Rosidae

Ordo

: Fabales

Famili

: Fabaceae (Suku polong-polongan)

Subfamili

: Caesalpinaceae

Genus

: Cassia

Spesies

: Cassia fistula L. (Neelam, Ranjan, Komal, dan Nootan, 2011)

7


2.

8

Nama daerah

Aceh

: Bak biraktha

Timor

: Babuni daun besar, nain-nain

Dayak

: Tilai

Sunda

: Bobondelan, bondel, tanggoli,

Jawa

: Trengguli, tenguli, tangguli, klohor, peyok, klohur

Madura

: Kalobur, Klobor

Bali

: Tangguli

Sumba

: Ketoka, konjur

Flores

: Klowang

Alor

: Kikili,ladau

Makasar

: Kayu raja

Bugis

: Pong raja

Rote

: Bubuni sela

Ambon

: Papa pauno

tranguli

(IPB, 2015)

3.

Morfologi Tanaman Cassia fistula L. dapat dilihat pada gambar 1, merupakan bentuk

pohon tinggi yang mencapai 10-20 m, bentuk batang berkayu bulat bercabang, dengan batang yang lurus. Daun memiliki panjang 30-40 cm, 3-8 pasang dan berbentuk bulat telur. Panjang daun setiap lembarnya 3,5-9cm. Memiliki warna bunga kuning cerah, tandan bunga melorot, memiliki kelompak bunga yang


9

berbentuk persegi panjang dan bagian ujungnya tumpul. Daun mahkota panjang 23,5 cm. 3 tangkai sari yang terbawah membentuk S, lebih panjang dari pada lainnya. Bakal buah bertangkai. Polongan menggantung, diatas tanda bekas mahkota bertangkai, bulat silindris, hitam, oleh karna sekatan yang melintang dibagi dalam ruang-ruang yang berbiji 1, 20-45 kali 1,5 cm, tidak membuka. Biji melintang, 40100 (Steenis, Hoed, Bloembergen, dan Eyma, 1992).

4.

Kegunaan Bagian – bagian dari tanaman Cassia Fistula L. dapat digunakan atau

berkhasiat untuk terapi berbagai macam penyakit, dari rebusan isi buahnya berkhasiat untuk sembelit dan obat wasir, sedangkan daunnya sebagai obat kudis, sembelit, pencahar dan obat malaria. Penelitian yang sudah dilakukan pada bagian tumbuhan Cassia fistula, misalnya ekstrak metanol kulit batang yang berpotensi untuk chemopreventive, mempunyai aktivitas antiinflamasi dan antioksidan. ekstrak metanol daun mempunyai aktivitas sebagai larvasida, ovisida, dan repelen nyamuk Aedes aegypti. Ekstrak metanol biji mempunyai aktivitas antitumor, antirematik. Sedangkan dari ekstrak bunga mempunyai aktivitas antioksidan. pada akar terdapat senyawa flavonoid glikosida yang mempunyai aktivitas antifungi (Hermien, 2014).

5.

Kandungan kimia Kandungan yang ada didalam daun tanaman Cassia fistula L. antara lain

senyawa glycosides-sennosides A dan B, hentriacontanoic, triaconsanoic,


10

nonacontanoic dan heptacosanoic acid, anthraquinone, tannin, oxyanthraquinone, dan volatile oils. Dan juga dalam tanaman ini terdapat kandungan flavonoids, biflavonoids, rhein, rhein glucoside, sennoside A dan B, chrysophanol, dan isoflavon (Thirumal, Srimanthula, dan Kishore, 2012). Struktur beberapa flavonoid dapat dilihat pada gambar 2:

Gambar 2. Struktur kandungan tanaman Cassia fistula L. kelas utama pada flavonoid (Rathee, et al., 2009)


11

B. Metode Penyarian Ekstrak adalah sediaan pekat yang diperoleh dengan mengekstraksi zat aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995). Ekstraksi adalah suatu proses yang dilakukan untuk memperoleh kandungan senyawa kimia dari jaringan tumbuhan maupun hewan. Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair dibuat dengan menyari simplisia nabati atau hewani menurut cara yang cocok, di luar pengaruh cahaya matahari langsung, ekstrak kering harus mudah digerus atau dihancurkan menjadi serbuk. Pelarut yang digunakan sebagai penyari seperti; air, etanol dan campuran air etanol (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995).

C. Metode Uji Daya Antiinflamasi Proses inflamasi dapat ditimbulkan oleh berbagai rangsangan, seperti agen infeksi, interaksi antigen dengan antibodi, bahan kimia, cedera termal atau mekanis. Respon inflamasi disertai tanda-tanda klinis eritema, edema, hiperalgesia dan nyeri. Respon inflamasi terjadi dengan tiga tahap yang berbeda dan mekanisme yang berbeda : a.

Fase akut ditandai dengan adanya vasodilatasi lokal dan peningkatan permeabilitas kapiler

b.

Fase sub akut ditandai dengan adanya infiltrasi leukosit dan sel fagosit


12

c. Fase poliferasi kronis ditandai dengan terjadi degenerasi jaringan dan fibrosis Berdasarkan fase diatas, terdapat beberapa metode yang telah dikembangkan untuk menguji daya antiinflamasi akut dan sub akut secara in vivo: a. Permeabilitas vaskuler Pengujian dengan metode permeabilitas vaskuler digunakan untuk mengevaluasi

aktivitas

penghambatan

suatu

obat

terhadap

peningkatan

permeabilitas pembuluh darah yang disebabkan oleh mediator inflamasi (zat radang). Mediator inflamasi seperti histamine, prostaglandin, dan leukotriens. Sehingga, hal ini akan menyebabkan terjadinya pelebaran arteriol, venula dan permeabilitas pembuluh darah meningkat, dan terbentuk edema dari cairan dan protein plasma yang dikeluarkan (Vogel, 2008). Pengujian dilakukan dengan cara menginjeksi senyawa radang secara intravena. Sembilan puluh menit setelah hewan uji diinjeksi, kemudian hewan uji dikorbankan dan pada bagian yang diinjeksi diambil untuk diberikan perwarnaan dengan Evans’s blue yang fungsinya untuk memberikaan tanda agar dapat mengetahui peningkatan permeabilitas vaskuler. Diameter resapan dari pewarnaan Evan’s blue diukur dalam dua arah tegak lurus dan nilai rata-rata semua area yang diinjeksi dihitung. Dibandingkan antara kelompok control dan kelompok uji, dinyatakan sebagai persen penghambatan. Kelompok uji yang menunjukkan nilai kurang dari 50% dari control dinyatakan positif memiliki aktivitas antiinflamasi (Vogel, 2008).


b.

13

Eritema Ultraviolet Merupakan metode uji aktivitas antiinflamasi dengan menggunakan sinar

ultraviolet untuk membentuk eritema pada kulit hewan uji. Hewan uji yang akan digunakan dicukur terlebih dahulu pada kedua bagian sisi (kiri dan kanan) dan bagian belakang. Diberikan krim penghilang bulu, dapat mengunakan barium sulfat. Dua puluh menit kemudian, krim penghilang bulu yang telah dioleskan pada hewan uji dibersihkan dengan air hangat atau mengalir. Pada hari berikutnya, setengah senyawa yang akan diujikan (senyawa antiinflamasi) diberikan tiga puluh menit sebelum dilakukan paparan sinar ultraviolet. Setelah pemaparan sinar ultraviolet selama dua menit, diberikan lagi setengah dari senyawa uji yang telah diberikan sebelumnya. Pengukuran eritema dilakukan dua dan empat jam setelah paparan sinar ultraviolet pada hewan uji. Karena pada jam kedua dan keempat setelah paparan baru memberikan efek (Vogel, 2008). c.

Edema telinga dengan induksi oxazolone pada mencit Pada metode ini hewan uji diberikan 2% oxazolone (4-ethoxymethylene-2-

fenil-2-oxazolin-5-one) yang dilarutkan dalam aseton. Hewan uji diaplikasikan anestesi halotan 0,1 ml pada bagian kulit perut yang telah dicukur atau 0,01 ml pada bagian kedua telinga bawah . hewan uji dibiarkan selama delapan hari, kemudian diaplikasikan oxazolone 0,01 ml dengan konsentrasi 2% pada bagian dalam telinga kanan, dan telinga kiri digunakan sebagai kontrol. Setalah 24 jam akan terjadi peradangan, kemudian hewan uji dikorbankan dengan anestesi. Kedua telinga diambil dan ditimbang. Perbedaan dari berat kedua telinga merupakan indikator terjadinya inflamasi (Vogel, 2008).


d.

14

Edema telapak kaki Metode ini dapat digunakan untuk melihat aktivitas antiinflamasi suatu

senyawa. Biasanya senyawa yang digunakan untuk menginduksi terjadinya inflamsi seperti, agen iritasi ragi, formaldehid, dekstran, dan karagenin. Untuk melihat efeknya dapat diukur dengan beberapa cara yaitu, dilakukan pembedahan pada sendi talocrural dan ditimbang. Pengujian dilakukan dengan cara, terlebih dahulu hewan uji dipuasakan. Kemudian diberikan 5 ml air (kontrol) dan diberikan senyawa uji yang telah dilarutkan atau dijadikan suspens dalam volume yang sama (perlakuan). Setelah 30 menit, hewan uji diberikan injeksi subkutan 0,05 ml dari konsentrasi 1% karagenin pada bagian telapak belakang kaki hewan uji (Vogel, 2008).

D. Kulit Kulit merupakan lapisan atau jaringan yang ada pada tubuh yang menutupi seluruh tubuh dan melindungi tubuh dari bahaya luar (Wibowo, 2008). Merupakan massa jaringan yang terbesar pada tubuh dan fungsi lain dari kulit adalah menginsulasi struktur-struktur yang berasa di bawah kulit dan juga dapat berfungsi sebagai cadangan kalori. Kulit terdiri atas tiga lapisan yang masing-masing tersusun dari berbagai jenis sel dan fungsi yang bermacam-macam. Ketiga lapisan kulit tersebut adalah epidermis, dermis dan subkutis (Corwin, 2008). Salah satu sel saraf yang ada di dalam kulit adalah terdapat ujung saraf peraba yang memiliki banyak fungsi, antara lain membantu mengatur suhu dan mengendalikan hilangnya air dari


15

tubuh dan sebagai ekskretori, sekretori dan absorpsi (Pearce, 2009). Struktur kulit dapat dilihat pada gambar 3:

Gambar 3. Struktur kulit manusia (Waugh dan Grant, 2001). Lapisan epidermis tersusun atas epitelium berlapis dan terdiri atas sejumlah lapisan sel yang disusun atas dua lapisan yaitu lapisan tanduk dan selapis zona geminalis. Lapisan tanduk berada pada lapisan paling luar, dan tersusun tiga lapisan sel yang membentuk epidermis, yaitu stratum korneum, stratum lusidum, dan stratum granulosum. Sedangkan zona germinalis terletak di bawah lapisan tanduk dan terdiri atas dua lapisan epitel, yaitu sel berduri dan sel basal (Pearce, 2009). Pada lapisan epidermis mengandung reseptor sensorik untuk suhu, sentuhan, getaran dan nyeri. Komponen utama dalam epidermis adalah protein kreatinin yang dihasilkan oleh sel keratinosit yang dapat mencegah hilangnya air dari dalam tubuh dan melindungi epidermis dari iritan dan mikroorganisme penyebab infeksi dan juga merupakan komponen utama apendiks kulit ; rambut dan kuku (Corwin, 2008).


16

Lapisan dermis adalah lapisan yang tersusun atas fibrus dan jaringan ikat yang elastis dan pada permukaan dermis tersusun papil-papil kecil yang berisi pembuluh darah kapiler (Pearce, 2009). Di sini juga terdapat kelenjar keringat dan kelenjar minyak (glandula sebacea) (Price, 1982) dan juga terdapat pembuluh darah yang menyuplai makanan dan oksigen pada dermis dan epidermis, dan membuang produk-produk sisa. Selain pembuluh darah dalam dermis juga terdapat pembuluh limfe dan folikel rambut. Dermis terletak tepat dibawah epidermis, yang tersusun dari serabut-serabut kolagen dan elastin tersusun secara acak sehingga menyebabkan dermis terenggang dan memiliki daya tahan (Corwin, 2008). Lapisan subkutis pada kulit merupakan lapisan yang terletak dibawah dermis (lapisan paling dalam). Pada lapisan ini terdiri atas lemak dan jaringan ikat dan berfungsi sebagai peredam kejut dan insulator panas. Fungsi dari lapisan subkutis adalah sebagai tempat penyimpanan kalori selain lemak dan dapat dipecah menjadi sumber energi apabila diperlukan (Corwin, 2008). Kulit dapat mengalami cedera yang disebabkan karena zat kimia atau mikroorganisme, sehingga dapat menimbulkan infeksi (Pearce, 2009). Pada kulit terdapat kondisi, edema dan dermatitis kedua istilah yang identik dalam menggambarkan kondisi inflamasi yang dapat bersifat akut atau kronis. Dalam dermatitis akut terdapat kemerahan, pembengkakan dan eksudasi dari cairan serosa biasanya disertai dengan rasa gatal pada kulit. Hal ini sering diikuti oleh adanya krusta dan scaling. Jika kondisi menjadi kronis, kulit akan menebal dan dapat menjadi kasar (Waugh dan Grant, 2001). Krusta adalah akumulasi eksudat serurosa yang mengering di kulit dan berwana kuning keemasan (Corwin, 2008). Keadaan


17

ini dapat terjadi karena adanya kontak langsung dengan iritan misalnya, kosmetik, sabun, detergen, asam kuat atau alkali, dan bahan kimia toksik (Waugh dan Grant, 2001). Dapat juga terjadi pruritus yang parah pada bagian kulit yang terpapar akan zat toksik. Pruritus merupakan rasa gatal pada kulit, dapat terjadi sebagai respon primer terhadap iritan yang menyebabkan peradangan. Pruritus primer terjadi akibat pelepasan histamin dalam proses inflamasi. Pruritus sekunder dapat timbul apabila ada suatu kelainan pada sistemik, karena pada pruritus sistemik toksin metabolik tertimbun di cairan intertisium di bawah kulit (Corwin, 2008). Kulit yang menglami cedera atau kerusakan akan melalui serangkaian proses penyembuhan atau regenerasi jaringan yang rusak (Pearce, 2009).

E. Inflamasi 1.

Definisi Inflamasi didefinisikan sebagai reaksi peradangan lokal pada jaringan

terhadap infeksi atau cedera dan yang melibatkan lebih banyak mediator dibanding respon imun yang didapat. Inflamasi merupakan respon fisiologis terhadap berbagai rangsangan seperti infeksi dan cedera pada jaringan. Inflamasi dapat terjadi secara lokal, sistemik, akut dan kronis yang menimbulkan kelainan paofisiologis (Karnen dan Iris, 2012). Inflamasi adalah usaha tubuh untuk menginaktivasi atau merusak organisme yang menyerang, menghilangkan zat iritan, dan mengatur derajat perbaikan jaringan. Inflamasi terjadi karena ada pelepasan mediator kimiawi dari jaringan yang rusak dan migrasi sel (Mycek, Harvey, dan Champe, 2001). Proses inflamasi akan melepaskan mediator kimia selama proses inflamasi. Salah satu


18

diantara adalah prostaglandin, yang telah berhasil diisolasi dari eksudat pada tempat inflamasi (Hayes dan Kee, 1996). Tanpa terjadinya peradangan (inflamasi), infeksi akan terus berkembang, luka tidak akan pernah sembuh, dan organ yang cidera dapat menjadi luka yang terus bernanah. Akan tetapi, peradangan dan perbaikan juga dapat merugikan, misalnya seperti reumatoid arthritis, aterosklerosis, fibrosis paru, dan reaksi hipersensitivitas terhadap gigitan serangga, obat, dan toksin yang dapat mengancam nyawa. Perbaikan oleh fibrosis dapat menyebabkan terbentuknya jaringan parut yang menimbulkan kecacatan pada jaringan (Kumar, dkk, 2005). Peradangan atau inflamasi dibagi menjadi pola akut dan kronik. Peradangan akut memiliki awalan yang cepat dengan hitungan detik atau menit dan berlangsung relatif singkat, dalam beberapa menit, jam, atau hari. Peradangan akut adalah suatu respon cepat terhadap agen yang merugikan dan berfungsi untuk menyalurkan mediator-mediator pertahanan leukosit dan protein plasma ke tempat yang cedera. Karakteristik utama pada peradangan akut adalah adanya eksudasi cairan dan protein plasma (edema) dan emigrasi leukosit terutama neutrofil (Kumar, dkk, 2005). Pada peradangan akut terdapat tiga komponen, yaitu perubahan kapiler pembuluh darah yang menyebabkan peningkatan aliran darah, perubahan strutural mikrovaskular yang memungkinkan pengeluaran protein plasma dan leukosit dari sirkulasi darah, dan emigrasi leukosit dari mikrosirkulasi, akumulasi terdapat di fokus cedera, dan aktivasi leukosit untuk membuang agen penyebab peradangan.


19

Manifestasi dari peradangan akut yang menunjukkan terjadinya inflamasi dapat dilihat pada gambar 4:

Gambar 4. Manisfestasi lokal pada peradangan akut (Kumar, dkk, 2005). Sedangkan peradangan kronik berlangsung lebih lama dan secara histologi ditandai dengan adanya limfosit dan makrofag, proliferasi pembuluh darah, fibrosis, dan nekrosis jaringan (Kumar, Abbas, dan Fausto, 2005). Manifestasi dari peradangan kronik dapat dilihat pada gambar 5:

Gambar 5. Manisfestasi lokal pada peradangan kronis (Kumar, dkk, 2005).


20

Reaksi vaskular dan selular pada peradangan (inflamasi) akut dan kronik diperantarai oleh mediator-mediator kimiawi yang berasal dari protein plasma atau sel dan diproduksi sebagai respon terhadap atau diaktifkan oleh rangsangan peradangan. Respon inflamasi terdiri atas dua komponen utama, yaitu reaksi vaskular dan reaksi selular. Pada respon tersebut banyak jaringan dan sel yang terlibat dalam reaksi ini, termasuk cairan dan protein plasma, sel dalam darah, pembuluh darah, serta konstituen selular dan ekstraselular dari jaringan ikat. Komponen yang terdapat dalam respon inflamasi dapat dilihat pada gambar 6:

Gambar 6. Komponen respon peradangan akut dan kronik (Kumar, dkk, 2005). Pada inflamasi atau peradangan akan terjadi migrasi neutrofil dari sirkulasi darah yang mendominasi infiltrat peradangan pada 24 jam pertama dan digantikan dengan monosit setelah 24 jam hingga 48 jam dapat dilihat pada gambar 7:


21

Gambar 7. Skema kejadian setelah terjadi reaksi inflamasi (Kumar, dkk, 2005). Proses Inflamasi merupakan mekanisme pertahanan tubuh sebagai respon normal terhadap trauma fisik, zat kimia berbahaya atau agen mikrobiologi. Adapun respon yang umumnya muncul meliputi rubor (kemerahan), kalor (panas), dolor (nyeri) dan tumor (pembengkakan) (Corwin, 2008) dan functio laesa (hilangnya fungsi) (Price dan Wilson, 1982). 2.

Gejala Tanda-tanda utama respon inflamasi yang umumnya adalah rubor

(kemerahan), kalor (panas), dolor (nyeri), tumor (pembengkakan) dan functio laesa (hilangnya fungsi) (Hayes dan Kee, 1996):


22

a. Rubor (kemerahan) Rubor atau kemerahan terjadi pada tahap pertama dari inflamasi. Darah berkumpul pada daerah jaringan yang cedera akibat adanya pelepasan mediator kimiawi tubuh, seperti kinin, prostaglandin dan histamin. Histamin akan mendilatasi arteriol (Hayes dan Kee, 1996). Maka arteriol yang mensuplai darah menjadi melebar, lebih banyak darah mengalir kedalam mikrosirkulasi lokal. Sehingga, pembuluh kapiler yang sebelumnya kosong, dengan cepat akan terisi darah. Keadaan disebut dengan hiperemia atau kongesti, yang menyebabkan warna merah pada bagian yang cedera karena peradangan akut. Hiperemia timbul pada permulaan reaksi peradangan yang diatur oleh tubuh baik secara neurogenik maupun secara kimia, melalui pengeluaran zat seperti histamin (Price dan Wilson, 1982). b. Kalor (panas) Panas pada tempat inflamasi dapat disebabkan oleh bertambahnya pengumpulan darah yang mengganggu pusat pengatur panas pada hipotalamus (Hayes dan Kee, 1996). Reaksi peradangan pada permukaan badan, yang dalam keadaan normal lebih dingin dari 370C suhu didalam tubuh. Karena terdapat lebih banyak darah yang disalurkan dari dalam tubuh ke permukaan daerah yang terkena, sehingga daerah inflamasi pada kulit menjadi panas dibanding dengan sekelilingnya (Price dan Wilson, 1982). c. Dolor (nyeri) Disebabkan oleh adanya pembengkaan dan pelepasan mediator-mediator kimia pada jaringan yang cedera (Hayes dan Kee, 1996). Dipengaruhi juga oleh


23

perubahan pH lokal atau konsentrasi lokal ion-ion tertentu dapat merangsang ujung-ujung saraf, dan pengeluaran zat kimia tertentu seperti histamin atau zat kimia bioaktif lainnya dapat merangsang saraf sehingga menimbulkan rasa nyeri pada jaringan yang cedera (Price dan Wilson, 1982). d. Tumor (pembengkakan) Tumor atau pembengkaan terjadi karena kinin mendilatasi arteriol sehingga meningkatkan permeabilitas kapiler (Price dan Wilson, 1982). Plasma merembes ke dalam jaringan interstisial pada tempat jaringan yang cedera (Hayes dan Kee, 1996). Pada keadaan awal reaksi peradangan eksudat adalah cair. Cairan eksudat akan timbul dengan cepat dalam luka yang melepuh dari kulit. Kemudian, sel darah putih atau leukosit meninggalkan aliran darah dan tertimbun sebagai bagian dari eksudat (Price dan Wilson, 1982). e. Functio laesa (hilangnya fungsi) Hilangnya fungsi disebabkan karena penumpukan cairan pada tempat jaringan yang cedera dan karena adanya rasa nyeri (dolor), yang mengurangi mobilitas pada daerah jaringan yang terjadi inflamasi (Hayes dan Wilson, 1996). 3.

Mekanisme inflamasi Mekanisme inflamasi terjadi karena ada pelepasan mediator kimiawi dari

jaringan yang rusak dan migrasi sel (Mycek, dkk, 2001). Pada proses inflamasi akan melepaskan mediator kimia selama proses inflamasi. Salah satu diantara adalah prostaglandin, yang telah berhasil diisolasi dari eksudat pada tempat inflamasi (Hayes dan Kee, 1996). Mediator kimiawi yang spesifik dalam peradangan selain


24

prostaglandin terdapat pula histamin, bradikinin (peptida kecil) dan interleukin-1 (peptida besar) (Mycek, dkk, 2001). Reaksi peradangan akut dapat dipicu oleh berbagai rangsangan, misal infeksi (bakteri, virus, parasit), trauma, agen fisik dan kimiawi, nekrosis jaringan, benda asing, atau reaksi imun. Setiap stimulus tersebut dapat memicu terjadinya reaksi peradangan (Kumar, dkk, 2005). Adanya kejadian vaskular merupakan dilatasi awal dari arteriola kecil, sehingga aliran darah meningkat yang diikuti dengan perlambatan dan kemudian aliran darah berhenti dan terjadi peningkatan permeabilitas venula post capillary dengan adanya eksudasi cairan. Vasodilatasi yang disebabkan oleh mediator termasuk histamin, prostaglandin (PG) E2 dan PGI2 (prostasiklin) yang dihasilkan oleh interaksi mikroorganisme dengan jaringan, beberapa di antaranya bertindak bersama-sama dengan sitokin untuk meningkatkan permeabilitas pembuluh darah (Rang, Dale, Ritter, dan Flower, 2007). Apabila terdapat rangsangan secara mekanik, fisik maupun kimia akan memicu keluarnya asam arakidonat (AA). Asam arakidonat adalah suatu asam lemak tidak jenuh ganda yang mengandung 20 karbon (asam eikosatetranoat 5,8,11,14-) dan berasal dari makanan atau dari konversi asam lemak esensial asam linoleat. AA dibebaskan dari fosfolipid membran melalui kerja fosfolipase sel. Metabolit AA yang disebut eikosanoid, eikosanoid berikatan dengan reseptor (yang berikatan dengan protein G) di banyak jenis sel dan dapat memperantarai hampir semua tahap peradangan. Peran metabolit asam arakidonat pada proses inflamasi dapat dilihat pada gambar 8.


25

Ada dua jalan utama untuk metabolit asam arakidonat yang disebut dengan eikosanoid dapat dimetabolisme dengan:

Gambar 8. Metabolit asam arakidonat dalam proses inflamasi dan target dari beberapa obat antiinflamasi (Kumar, dkk, 2005). a.

Jalur siklo-oksigenase Semua

eikosanoid

berstruktur

cincin

sehingga,

prostaglandin,

tromboksan dn prostasiklin, disintesis melalui jalur siko-oksigenase. Jalur siklooksigenase diaktifkan oleh dua enzim, yang pertama bersifat ada dimana-mana dan pembentuk, sedangkan yang kedua diinduksi dalam respon terhadap rangsangan inflamasi (Mycek, dkk, 2001). Prostaglandin dibagi menjadi seri-seri yang didasarkan pada gambaran struktural dan memiliki kode huruf dan angka yang berbeda, yaitu PGD, PGE, PGF, PGG, dan PGH. Pada jalur siklooksigenase ini dihasilkan prostaglandin E2 (PGE2),


26

PGD2, PGF2α, PGI2 (prostasiklin), dan TXA2 (trombosan) yang dihasilkan dari kerja enzim spesifik pada suatu zat dalam jalur siklooksigenase. Akan tetapi, sebagian dari enzim ini terdistribusi hanya pada jaringan tertentu, misal trombosit mengandung enzim tromboksan sintetase, yang menghasilkan TXA2 yang merupakan produk utama pada sel ini. TXA2 adalah suatu zat yang menggumpalkan trombosit dan sebagai vasokontriktor yang poten dan bersifat tidak stabil. Akan tetapi, pada endotel vaskular tidak terdapat trombosan sintetase, tetapi memiliki protasiklin sintetase, yang memicu terbentuknya prostasklin (PGI2) dan produknya akhirnya yang stabil PGF1α. Prostasklin adalah vasodilator, inhibitor agregasi trombosit yang paten, dan juga meningkatkan permeabilitas dan efek kemotaktik dari mediator lain (Kumar, dkk, 2005). Prostaglandin juga berperan dalam patogenesis nyeri dan demam. Prostaglandin E2 (PGE2) memiliki sifat hiperalgesik, yang dapat menyebabkan kulit menjadi hipersensitif terhadap rangsangan nyeri dan meningkatkan rasa nyeri. PGD2 merupakan metabolit utama yang dihasilkan pada jalur siklooksigenase pada sel mast, bersama dengan PGE2 dan PGF2α yang terdistribusi lebih luas, yang menyebabkan vasodilatasi dan peningkatan permeabilitas venula post kapiler sehingga terbentuk edema. Siklooksigenase-1 (COX-1) diproduksi sebagai respon terhadap rangsangan peradangan dan juga diekspresikan oleh sebagian besar jaringan. COX-1 bertanggung jawab dalam pembentukan prostaglandin, yang berperan pada peradangan, akan tetapi memiliki fungsi homeostatis. Sedangkan COX-2, merupakan enzim yang terinduksi oleh beragam rangsang inflamatorik dan tidak terdapat pada sebagian jaringan pada keadaan normal, COX-2 merangsang


27

pembentukan prostaglandin yang berperan dalam reaksi peradangan (Kumar, dkk, 2005). b.

Jalur lipo-oksigenase Produk-produk awal dihasilkan oleh tiga lipoksigenase yang berbeda,

yang terdapat hanya di beberapa jenis sel (Kumar, dkk, 2005). Beberapa lipoksigenase dapat bekerja pada asam arakidonat untuk membentuk 5-HPETE, 12HPETE, dan 15-HPETE, yang merupakan turunan peroksidasi tidak stabil yang dikonversi menjadi turunan hidroksilasi yang sesuai (HETES), atau menjadi leukotrien atau lipoksin, yang tergantung pada jaringan (Mycek, Harvey, dan Champe, 2001). 5-lipoksigenase (5-LO) merupakan enzim predominan di neutrofil. Produk utama yang dihasilkan, yakni 5-HPETE yang bersifat kemotaktik bagi neutrofil, diubah menjadi suatu famili senyawa yang secara kolektif disebut leukotrien. Leukotrien B4 adalah suatu zat kemoktaktik kuat dan aktivator respon fungsinal neutrofil, seperti agregasi dan perlekatan leukosit pada endotel venula, pembentukan radikal bebas oksigen, dan pelepasan enzim-enzim lisosom. Produk dari 5-HPETE adalah Leukotrien C4, D4, dan E4, mengandung sisteinil yang menyebabkan

terjadinya

vasokontriksi,

bronkospasme,

dan

peningkatan

permeabilitas vaskular. Lipoksin merupakan produk yang dihasilkan dari jalur lipoksigenase, yang berupa produk bioaktif yang dihasilkan dari AA, melalui mekanisme biosintesis transelular. Efek utama dari lipoksin adalah menghambat rekrutmen leukosit dan komponen-komponen selular peradangan. Lipoksin juga menghambat kemotaksis neutrofil dan perlekatannya pada endotel. Pada leukosit, terutama


28

neutrofil akan menghasilkan zat antara dalam sintesis lipoksin, zat-zat tersebut diubah oleh trombosit yang berinteraksi dengan leukosit menjadi lipoksin. Lipoksin A4 dan B4 dihasilkan dari 12-lipoksigenase trombosit pada LTA4 yang berasal dari neutrofil (Kumar, dkk, 2005).

F. Antiinflamasi Obat antiinflamasi Non steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) bekerja dengan menghambat enzyme siklooksigenase dan prostaglandin. Obat NSAIDs pada generasi pertama bekerja pada COX-1 dan COX-2, dan lebih dominan dalam menghambat COX-1. NSAIDs akan menurunkan produksi vasodilator prostaglandin (PGE2 dan PGI2), sehingga menurunkan vasodilatasi, menurunkan edema serta rasa nyeri yang terjadi. Akan tetapi, NSAIDs memiliki efek jangka panjang yaitu pada saluran pencernaan yang dapat mengiritasi lambung. Efek samping tersebut diakibatkan karena adanya penghambatan pada COX-1. Enzim COX-1 bertanggungjawab dalam produksi prostaglandin yang secara normal akan menghambat sekresi asam lambung. Sedangkan, NSAIDs yang selektif menghambat COX-2, menghasilkan efek samping pada gastro intestinal lebih rendah karena hanya terekspresi pada sel inflamasi. Mekanisme NSAIDs selektif memiliki penghambatan yang poten pada COX-2, sehingga akan enurunkan pembentukan PGI2 yang merupakan penghambat agregasi platelet (Endro, 2012). Selain obat golongan NSAIDs, untuk inflamasi dapat digunakan juga obat golongan steroid seperti kortikosteroid. Mekanisme dari golongan obat ini adalah menghambat pembentukan interleukin, tumor neckrosis faktor (TNF) dan


menurunkan permeabilitas kapiler (Dipiro, 2008).

29

Kortikosteroid merupakan

antiinflamasi yang identik dengan kortisol, hormone steroid pada manusia yang disentesis dan di ekskresi oleh korteks adrenal. Efek dari antiinflamasi kortikosteroid mempengaruhi berbagai sel imunokompeten seperti sel T, makrofag, sel dendritic, eosinofil, neutrofil, dan sel mast, dengan cara menghambat respon inflamasi yang menyebabkan apoptosis (Sitompul, 2011). Mekanisme aksi target golongan obat steroid dan NSAIDs dapat dilihat pada gambar 9.

Gambar 9. Diagram mediator inflamasi dan target obat antiinflamasi (Rang, dkk, 2007).

G. Karagenin Karagenin adalah senyawa rantai polisakarida rantai panjang yang mengandung ester sulfat yang digunakan sebagai stimulus atau penginduksi inflamasi kronis, akan tetapi kemudian digunakan untuk menguji antiinflamasi akut (Bonney et.al., 1978).


30

Karagenin adalah polisakarida sulfat yang diperoleh dari rumput laut, yang secara luas digunakan sebagai penginduksi agen inflamasi, yang menunjukkan tanda-tanda dan gejala inflamasi yang dapat dinilai sebagai peningkatan ketebalan kaki pada tikus sebagai akibat dari peningkatan peradangan (edema) dan peningkatan perembesan vaskular, diketahui sensitif terhadap siklooksigenase (COX) inhibitor (Sermakkani dan Thangapandian, 2013). Karena karagenin mampu menginduksi reaksi antiinflamasi yang bersifat akut, non imun dan juga dapat diamati dengan baik serta mempunyai reprodusibilitas yang cukup tinggi (Morris, 2003). Mekanisme kerja karagenin adalah merangsang terjadinya udem dengan cara melepaskan mediator-mediator inflamasi yaitu histamin, serotonin, dan kinin pada jam pertama, sedangkan pada jam kedua dan ketiga mediator-mediator inflamasi yang dilepaskan adalah prostaglandin dan lisosom (Sharma et al., 2009).

H. Biocream® Menurut Departemen Kesehatan Republik Indonesia (Depkes RI), 1995, krim adalah bentuk sediaan setengah padat mengandung satu atau lebih bahan obat yang terlarut atau terdispersi dalam bahan dasar yang sesuai. Digunakan untuk sediaan setengah padat yang mempunyai konsistensi relatif cair, diformulasi sebagai emulsi air dalam minyak atau emulsi minyak dalam air. Biocream merupakan sediaan obat topikal adalah yang mengandung dua komponen dasar, yaitu zat pembawa (vehikulum) yang merupakan bagian inaktif dari sediaan topikal, yang dapat berbentuk cair ataupun padat yang fungsinya untuk


31

membawa bahan aktif agar dapat berkontak dengan kulit, dan zat aktif merupakan komponen bahan topikal yang memiliki efek terapi. Biocream merupakan satu bahan pembawa untuk sediaan topikal yang berbentuk krim dan memiliki sifat amfibilik yang artinya berkhasiat sebagai W/O atau O/W (Yanhenri dan Yenny, 2012). I. Hidrokortison Asetat Hidrokortison asetat adalah golongan kortikosteroid yang mempunyai daya kerja sebagai antialergi dan antiradang. Efek terapi yang dihasilkan oleh kortikosteroid

topikal

golongan

rendah,

yaitu

vasokontriksi,

penurunan

permeabilitas membran, dan penekanan aktivitas mitosis respon imun (Carlos, 2013). Hidrokortison mengandung tidak kurang dari 97,0% dan tidak lebih dari 102,0% C23H32O6 dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan. Pemerian dari sedian ini adalah berbentuk serbuk hablur, berwarna putih, dan tidak memiliki bau atau tidak berbau. Dapat melebur atau meleleh dan mengalami peruraian pada suhu 2000C (Depkes RI, 1995). Krim hidrokortison asetat adalah hidrokortison asetat dalam dasar krim yang sesuai, mengandung hidrokortison asetat, C23H32O6 tidak kurang dari 90% dan tidak lebih dari 110% dari jumlah yang tertera pada etiket (Depkes RI, 1995).

J. Landasan Teori Inflamasi adalah reaksi peradangan lokal pada jaringan terhadap infeksi atau cedera dan yang melibatkan lebih banyak mediator dibanding respon imun yang didapat. Inflamasi merupakan respon fisiologis terhadap berbagai rangsangan


32

seperti infeksi dan cedera pada jaringan (Karnen dan Iris, 2012). Proses Inflamasi merupakan mekanisme pertahanan tubuh sebagai respon normal terhadap trauma fisik, zat kimia berbahaya atau agen mikrobiologi (Corwin, 2008). Tanda-tanda utama respon inflamasi yang umumnya muncul meliputi rubor (kemerahan), kalor (panas), dolor (nyeri) dan tumor (pembengkakan) (Hayes dan Kee, 1996). Mekanisme inflamasi terjadi karena adanya pelepasan mediator-mediator inflamasi dari jaringan yang rusak dan migrasi sel. Pada proses inflamasi asam arakidonat bertanggung jawab dalam produksi mediator-mediator inflamasi. Mediator yang spesifik dalam inflamasi adalah prostaglandin, prostasiklin dan tromboksan yang merupakan metabolit dihasilkan dari jalur siklooksigenase pada sel mast, sedangkan leukotriene dan lipoksin merupakan metabolit yang dihasilkan dari melalui jalur lipooksigenase. Dalam tanaman daun Cassia fistula L. terdapat kandungan flavonoid sehingga terdapat aktivitas antiinflamasi dan antioksidan. Pada peneletian Felix, (2013) Cassia fistula L. menunjukkan bahwa memiliki aktivitas antioksidan, penelitian dilakukan dengan cara menggunakan radikal 1,1-Difenil-2-Pikrilhidrazil (DPPH). Aktivitas antiinflamasi pada flavonoid dengan cara menghambat pembentukan asam arakidonat sehingga produksi mediator inflamasi dari jalur lipooksigenase dan siklooksigense juga terhambat, dan juga flavonoid dapat menangkap radikal bebas, sehingga pembentukan asam arakidonat yang dipicu oleh radikal bebas juga terhambat. Flavonoid dapat menangkap radikal bebas, karena sebagai antioksidan yang berperan dalam mengurangi respon imun.


33

Pada penelitian Sermakkani dan Thangapandian (2009) Cassia italica memiliki kandungan flavonoid. Flavonoid diketahui memiliki target fase akhir peradangan. Pada fase akhir peradangan yang berperan dalam produksi prostaglandin adalah enzim siklooksigenase (COX). Flavonoid memiliki target aksi pada prostaglandin karena prostaglandin memiliki aksi utama yaitu sebagai mediator inflamasi sehingga flavonoid akan menghambat ekspresi dari COX-2 yang merupakan enzim penginduksi yang merangsang pembentukan prostaglandin. Berdasarkan uraian diatas, dilakukan pengujian terhadap efek antiinflamasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dengan pengamatan histopatologis jaringan kulit punggung mencit yang diinduksi karagenin 3%.

Dengan pengecetan

Hematoksilin eosin (HE) dan imunohistokimia, untuk melihat migrasi sel neutrofil dan ekspresi pada COX-2 pada kulit punggung mencit yang terinduksi karagenin 3%.

K. Hipotesis Ekstrak etanol daun Cassia fistula L. memberikan efek antiinflamasi topikal dengan berkurangnya sel-sel neutrofil dan ekspresi pada COX-2 kulit punggung mencit yang diinduksi karagenin 3%.


BAB III METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian tentang efek antiinflamasi secara topikal dengan menggunakan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. pada mencit, merupakan jenis penelitian eksperimental murni dengan menggunakan rancangan acak lengkap pola searah.

B. Variabel penelitian dan Definisi Operasional 1.

Variabel penelitian a. Variabel utama 1) Variabel bebas : konsentrasi dari ektrak etanol Cassia fistula L. 2) Variabel tergantung : jumlah sel-sel neutrofil dan ekspresi pada COX-2 pada daerah sub kutan yang diinduksi karagenin dan diberikan dengan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. b. Variabel pengacau 1.

Variabel pengacau terkendali a) Subyek uji

: mencit betina

b) Umur subyek uji

: 2-3 bulan (6–8 minggu)

c) Berat badan subyek uji

: 20–30 gram

d) Keadaan subyek uji

: sehat

2. Variabel pengacau tidak terkendali : kondisi patofisiologis mencit yang digunakan dalam penelitian ini.

34


2.

35

Skala Variabel 1. Ekstrak etanol-air daun Cassia fistula L. : skala nominal 2. Penghitungan jumlah sel neutrofil dan melihat ekspresi COX-2 dari efek antiinflamasi : skala numerik

2.

Definisi Operasional a. Inflamasi merupakan mekanisme pertahanan tubuh sebagai respon normal terhadap trauma fisik, zat kimia berbahaya atau agen mikrobiologi. Adapun respon yang umumnya muncul meliputi rubor (kemerahan), kalor (panas), dolor (nyeri) dan tumor (pembengkakan). b. Daun Cassia fistula L. yang digunakan merupakan daun yang berwarna hijau segar, tidak berlubang, serta tidak terdapat kotoran dari binatang kecil yang didapat dari Kebun Obat Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. c. Ekstrak etanol daun Cassia fistula L. merupakan hasil ekstraksi simplisia daun Cassia fistula L. seberat 25 gram yang dimaserasi pada 250 mL etanol 80% selama lima hari. Kemudian diremaserasi dalam jumlah pelarut yang sama selama dua hari, disaring dengan kertas saring, dan dipekatkan dalam oven hingga menjadi ekstrak kental. d. Konsentrasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. merupakan berat ekstrak kental etanol daun Cassia fistula L. (gram) dalam basis (gram) dengan satuan b/b. Konsentrasi ekstrak kental daun Cassia fistula L. yang digunakan adalah 1,67; 2,5; dan 3,75 %.


36

e. Neutrofil merupakan jumlah neutrofi yang bermigrasi dari pembuluh darah ke daerah subkutan (punggung mencit) secara mikroskopik

pada

pengukuran 24 jam setelah diinjeksikan karagenin 3 %. f. Ekspresi COX-2 adalah ekspresi oleh sel-sel neutrofil yang diamati dengan menggunakan metode imunohistokimia. Apabila terdapat ekspresi COX-2 akan terjadi perubahan warna menjadi coklat pada sel didaerah sub kutan. g. Efek antiinflamsi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. adalah kemampuan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. untuk mengurangi akumulasi sel-sel neutrofil dan penghambatan ekspresi COX-2 di daerah subkutan secara mikroskopik pada pengukuran 24 jam setelah diinjeksi karagenin 3 %. h. Pemberian secara topikal ekstrak daun Cassia fistula L. dilakukan dengan cara mengoleskan sediaan sebanyak 0,1 gram (secara tipis) yang menutupi area seluas 2,25 cm2 (1,5 cm x 1,5 cm) pada kulit punggung kulit mencit setelah pemberian dengan karagenin secara merata. i. Injeksi subkutan merupakan injeksi yang dilakukan pada jaringan di bawah kulit pada punggung kulit mencit yang sudah dicukur rambutnya terlebih dahulu.

C. Bahan Penelitian Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu : 1.

Hewan uji pada penelitian ini mengunakan mencit galur swiss yang berumur sekitar 6 – 8 minggu (2-3 bulan) dengan bobot sekitar 20- 30 gram dalam


37

kondisi yang sehat yang diperoleh dari Laboratorium Imuno Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2.

Bahan uji : daun Cassia fistula L. diperoleh dari Lingkungan kampus III Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

3.

Karagenin tipe I (Sigma Chemical co.) sebagai Inflamatogen diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Falkutas Farmasi Universitas Islam Indonesia Yogyakarta.

4.

Etanol 80% diperoleh dari PT. Brataco di Jl. Letjend Suprapto No. 70, Ngampilan, Yogyakarta.

5.

NaCl 0,9% sebagai pelarut karagenin diperoleh dari Apotek K-24 Yogyakarta.

6.

Akuades diperoleh dari PT. Brataco di Jl. Letjend Suprapto No. 70, Ngampilan, Yogyakarta.

7.

Biocream® sebagai basis krim diproduksi oleh Meck, diperoleh dari Apotek K-24 Yogyakarta, Depok, Sleman, Yogyakarta.

8.

Hidrokortison cream sebagai kontrol positif mengandung hidrokortison asetat 2.5% diproduksi oleh Galenium, diperoleh dari dari Apotek K-24 Yogyakarta, Depok, Sleman, Yogyakarta.

9.

Veet® sebagai perontok bulu diproduksi oleh Reckitt Benckiser, diperoleh dari Alfamart Paingan Sleman.


D. Alat Penelitian dan Instrumen Penelitian Alat – alat yang digunakan dalam penelitian terdiri dari : 1.

Alat dan bahan Ekstraksi : a. Oven b. Etanol c. Mesin penyerbuk d. Ayakan no. 40 e. Alat – alat gelas Labu ukur, gelas beker, erlenmeyer, gelas ukur, cawan porselin, pipet tetes, batang pengaduk dan gelas arloji.

2.

Alat induksi dan pengukuran edema kulit punggung mencit dan lain-lain a. Gunting b. Alat pencukur bulu mencit c. Spuit injeksi 1 ml d. Mortir dan stamper e. Neraca analitik f. Stopwatch g. Jangka sorong digital h. Mikroskop cahaya (Olympus® CX21)

3.

Alat dan bahan yang digunakan untuk pemotongan organ kulit a. Karton b. Container c. Papan lilin dan pines

38


39

d. Gunting bedah e. Pinset f. Formalin 10%

E. Tata cara Penelitian 1.

Determinasi Tanaman Determinasi dilakukan dengan cara mencocokan ciri-ciri tanaman Cassia

fistula L. secara maskroskopik, yang meliputi daun, bunga, buah dan batang dengan literature (Steenis, Hoed, Blombergen, dan Eyma, 1992). Dilakukan di Laboratorium Kebun Tanaman Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2.

Pengumpulan bahan Pengumpulan sampel dilakukan secara purposif, yaitu tanpa membandingkan dengan daerah lain. Daun Cassia fistula L. didapat dari kebun obat Universitas Sanata Dharma Yogyakarta dan dipanen serta dikumpulkan. Daun yang digunakan adalah daun yang berwarna hijau, segar, tidak berlubang dan tidak terdapat kotoran binatang.

3.

Pembuatan Simplisia Pembuatan simplisia daun Cassia fistula L. dilakukan dengan cara yaitu daun yang telah dipanen dan telah dikumpulkan dicuci dengan menggunakan air mengalir, kemudian ditiriskan untuk menghilangkan air pada daun serta kembali dikeringkan dengan menggunakan oven pada suhu 30-45oC hingga daun benar-benar kering dan dapat diserbuk dengan mesin penyerbuk. Serbuk


40

simplisia yang telah didapatkan diayak menggunakan ayakan no. 40 agar didapatkan serbuk simplisia yang halus. 4.

Pembuatan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. Ekstraksi etanol-air daun Cassia fistula L. dilakukan dengan mengambil 25 gram serbuk kering daun Cassia fistula L. dilarutkan dalam 250 ml etanol 80% pada erlemeyer bersumbat. Ekstraksi dilakukan secara maserasi selama lima hari terlindungi dari cahaya pada suhu kamar, dengan cara melakukan pengadukan menggunakan shaker, kemudian setelah lima hari ampas dari serbuk daun Cassia fistula L. sebelum dilakukan remaserasi dengan dilarutkan kembali dalam jumlah dan volume pelarut yang sama yaitu 250 mL etanol 80% selama dua hari dan terlindung dari cahaya kemudian disaring untuk mendapatkan filtrat. Hasil filtrat maserasi dan remaserasi disatukan kemudian filtrat diuapkan di atas waterbath, hingga mendapatkan ekstrak kental dengan bobot yang tetap. Setelah didapatkan ekstrak dengan bobot tetap, kemudian ekstrak disimpan dengan cara menutup rapat dan diletakan dalam lemari pendingin.

5.

Penentuan dosis konsentrasi dan pembuatan krim ekstrak daun Cassia fistula L. Konsentrasi krim ekstrak etanol daun Cassia fistula L. ditentukan bedasarkan konsentrasi zat aktif hidrokortison asetat 2,5 % pada Hidrokortison® cream sebagai krim control positif. Konsentrasi tersebut dijadikan konsentrasi tengah (konsentrasi kedua) untuk sedian krim ekstrak etanol daun Cassia fistula L. Konsentrasi pertama diturunkan 1,5 kalinya dan


41

konsentrasi ketiga dinaikan 1,5 kalinya. Maka didapat tiga konsentrasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dalam krim yaitu 1,67; 2,5; dan 3,75 % b/b. Pembuatan krim ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dengan menimbang ekstrak etanol daun Cassia fistula L. seberat 0,167; 0,25; dan 0,375 g yang dilarutkan dalam 10 g basis boicream®. 6.

Ethical Clearence Pengujian menggunakan hewan uji mencit galur Swiss dalam penelitian ini sudah mendapatkan persetujuan dari Medical and Health Research Ethics Commite (MHREC) Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada.

7.

Penyiapan Hewan Uji Hewan uji yang dibutuhkan sebanyak 30 ekor mencit betina, berumur 2-3 bulan, dengan bobot 20-30 gram. Hewan uji dibagi secara acak menjadi enam kelompok. Kelompok perlakuan terdiri dari enam kelompok yang masing-masing kelompok terdiri dari lima ekor mencit. Hewan uji terlebih dahulu dicukur bulu punggungnya dengan gunting, kemudian dioleskan Veet® untuk merontokkan bulu yang belum tercukur sempurna. Kulit punggung yang telah dicukur bulunya dibiarkan selama satu hari untuk menghindari adanya inflamasi yang disebabkan oleh pencukuran dan pemberian Veet®.


8.

42

Pembuatan larutan Karagenin Karagenin 3% dibuat dengan melarutkan 0,75 g karagenin dalam larutan NaCl 0,9% hingga 25 mL sehingga diperoleh larutan karagenin 3% b/v.

9.

Pengujian ekstrak etanol daun Cassia fistula L. Sebanyak 30 ekor mencit betina dibagi secara acak menjadi enam kelompok perlakuan : a.

Kelompok I Terdiri dari lima ekor mencit sebagai kontrol negatif (karagenin). Mencit diinjeksi secara karagenin dengan konsentrasi 3%.

b.

Kelompok 2,3,4, 5, dan 6 Masing-masing terdiri dari lima ekor mencit sebagai perlakuaan Biocream®, Hidrokortison asetat 2,5%, ekstrak etanol daun Cassia fistula L. 1,67%; 2,5%; dan 3,75% b/, yang sebelumnya diinjeksikan karagenin 3%. Ekstrak seberat 1,67; 2,5; dan 3,75 gram masing-masing dicampur dengan basis krim (Biocream®) seberat 10 gram sehingga didapat konsentrasi 1,67; 2,5%; 3,75% b/b. Biocream®, Hidrokortison asetat 2,5%, dan masing-masing konsentrasi ekstrak dalam basis krim diambil sebanyak 0,1 gram untuk dioleskan seluas 2,25 cm2 disekitar suntikan.

10.

Pengambilan kulit punggung mencit Setelah 24 jam diinjeksi karagenin 3%, mencit dikorbankan dengan cara dislokasi tulang leher mencit dan dilakuakan pengambilan

kulit


43

punggung mencit dengan cara dibedah yang dilakukan dipapan bedah. Area pengambilan kulit disekitar daerah injeksi subkutan dengan ukuran 1 x 1 cm. Hasil pemotongan organ diletakkan pada kertas karton, kemudian dimasukkan dalam container berisi larutan fiksatif Selanjutnya

(Formalin 10%).

dilakukan pengecatan hematoksilin dan eosin (HE) dan

Imunohistokimia dengan antibody COX-2, di bawah mikroskop cahaya (Olympus CX21) dengan perbesaran 400x di Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran, Universitas Gadjah Mada. Pengamatan dilakukan pada bidang pandang (lima bidang pandang dalam perbesaran 400x) dari masing-masing kulit. Selanjutnya, dihitung jumlah sel neutrofil maupun sel radang yang mengekspresikan COX-2. Jumlah sel yang mengekspresikan COX-2 dapat dianalisis sebagai berikut: 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑚𝑒𝑛𝑔𝑒𝑘𝑠𝑝𝑟𝑒𝑠𝑖𝑘𝑎𝑛 𝐶𝑂𝑋−2 % penekanan = 100% − { 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑠𝑒𝑙 𝑥 100% } 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑠𝑒𝑙 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑡𝑒𝑟ℎ𝑖𝑡𝑢𝑛𝑔

(Ikawati dan Nugroho, 2006 )

F. Analisis Hasil 1.

Hasil Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L Dalam Pengurangan Jumlah Sel Neutrofil Data yang diperoleh dianalisis dengan Shapiro-Wilk untuk menguji normalitas data. Data yang terdistribusi normal dilanjutkan dengan uji One Way ANOVA dengan taraf kepercayaan 95% untuk melihat apakah ada perbedaan tiap kelompok perlakuan. Kemudian, analisis dilanjutkan dengan mengunakan uji Scheffe untuk melihat perbedaan bermakna (signifikan,


44

p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan, p>0,05) antar kelompok. Data kuantitatif penurunan jumlah neutrofil ditunjukkan dalam nilai rata-rata ± standart error (Mean ± SE). 2.

Hasil Persen (%) Penghambatan Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L Dalam Ekspresi COX-2 Data yang diperoleh dianalisis dengan Shapiro-Wilk untuk menguji normalitas data (p > 0,05). Apabila data sudah tidak terdistribusi secara normal pengujian dilanjutkan dengan uji Kruskal wallis untuk melihat data yang dianalisis apakah ada yang berbeda atau tidak. Kemudian dilanjutkan dengan uji Mann-whitney Test, pengujian tersebut untuk mengetahui perbedaan antara kelompok perlakuan bermakna (signifikan, p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan, p>0,05) antar kelompok. Data kuantitatif penghambatan inflamasi pada ekspresi COX-2 ditunjukkan dalam nilai rata-rata ± standart error (Mean ± SE).


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktifitas antiinflamasi topikal pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dan melihat jumlah sel-sel neutrofil dan penghambatan ekspresi COX-2 pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L. pada jaringan sub kutan pada penelitian ini. Hasil yang akan dibahas dalam penelitian ini meliputi determinasi daun Cassia fistula L., pembuatan ekstrak etanol daun Cassia fistula L., uji orientasi karagenin, dan pengujian efek antiinflamasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L.

A. Hasil Determinasi Tanaman Pada penelitian uji aktifitas antiinflamasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. secara topikal, bahan yang digunakan adalah serbuk daun Cassia fistula L. yang didapatkan dari lingkungan Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Bahan yang digunakan dalam pembuatan ekstrak pada penelitian ini diperlukan determinasi terlebih dahulu, untuk mengetahui apakah daun yang digunakan benarbenar daun yang berasal dari tanaman Cassia fistula L. yang biasa dikenal oleh masyarakat dengan sebutan tanaman trengguli (hujan mas). Determinasi dilakukan dengan mencocokan ciri-ciri makroskopis tanaman Cassia fistula L. yang meliputi daun, bunga, buah, dan batang dengan literatur yang ada. Determinasi pada penelitian ini dilakukan dengan menggunakan buku acuan hingga kategori jenis untuk membuktikan bahwa daun, bunga, buah dan batang

45


46

yang didetrminasi adalah merupakan tanaman Cassia fistula L. Berdasarkan determinasi yang telah dilakukan pada lampiran 4, maka terbukti bahwa daun yang digunakan dalam penelitian ini merupakan bagian dari tanaman Cassia fistula L.

B. Pembuatan Serbuk Daun Cassia fistula L. Daun Cassia fistula L. diambil dari lingkungan sekitar kampus Paingan Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada pukul 06.00 – 07.00 WIB. Hal pertama yang dilakukan dalam pembuatan serbuk daun Cassia fistula L. adalah pembuatan simplisia daun Cassia fistula L. dilakukan dengan cara yaitu daun yang telah dipanen dan telah dikumpulkan dicuci dengan menggunakan air mengalir, kemudian ditiriskan untuk menghilangkan air pada daun serta kembali dikeringkan dengan menggunakan oven pada suhu 30-45oC hingga daun benar-benar kering, dengan tanda apabila daun tersebut sudah dapat mudah dihancurkan atau patah dengan diremas. Setelah daun benar-benar kering dilakukan penyerbukan dengan menggunakan mesin penyerbuk (blender). Serbuk simplisia yang telah didapatkan diayak kembali menggunakan ayakan no. 40 agar didapatkan serbuk simplisia yang halus. Penyerbukan dilakukan untuk meperluas permukaan serbuk, agar mudah kontak dengan pelarut sehingga mempermudah penyarian.

C. Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L. Ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dibuat dengan cara menyari serbuk kering dari daun Cassia fistula L., dengan menggunakan metode maserasi. Sebelum tahap maserasi, dilakukan terlebih dahulu penyerbukan pada daun Cassia fistula L.


47

untuk memperkecil luas permukaan dari daun Cassia fistula L., agar luas permukaan serbuk dapat kontak dengan pelarut, sehingga kandungan fitokimia yang terkandung didalam daun lebih mudah untuk keluar atau diekstraksi. Cara pembuatan ekstrak etanol daun Cassis fistula L. adalah 25 g serbuk kering daun Cassis fistula L. dimasukkan dalam erlenmeyer 500 mL dan direndam menggunakan 250 mL pelarut etanol 80% selama lima hari, setelah lima hari dilakukan penyaringan, kemudian dilakukan remaserasi kembali dalam jumlah dan volume pelarut yang sama dan dilakukan remaserasi selama dua hari kemudian dilakukan penyaringan. Tujuan dari perendaman serbuk daun Cassia fistula L. pada pelarut etanol agar senyawa kimia yang ada didalam daun Cassia fistula L. dapat terlarut pada pelarut, sehingga senyawa dapat keluar. Maserasi dilakukan dengan menggunkan shaker dan kemudian hasil remaserasi disaring menggunakan corong Buchner sehingga didapatkan senyawa yang diinginkan, kemudian hasil penyarian diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator. Tujuan menggunakan rotary evaporator agar pelarut yang berupa etanol 80% dalam larutan tersebut dapat menguap dan menghasilkan senyawa yang diinginkan, suhu yang digunakan untuk menguapkan adalah 40 oC karena pada suhu tersebut etanol akan menguap dan pada suhu tersebut tidak merusak senyawa yang diinginkan. Berdasarkan Khan et. al., (2012), pelarut yang sesuai untuk membuat ekstrak etanol daun Cassia fistula L. adalah etanol 80% dengan suhu pada rotary evaporator 40 oC. Pada maserasi dan remaserasi

menghasilkan filtrat yang kemudian

dicampur menjadi satu dan dipindahkan dalam cawan porselin yang sudah ditimbang bobot kosongnya, untuk mempermudah proses penghitungan hasil


48

ekstrak kental yang akan diperoleh. Hasil filtrat yang telah dijadikan satu dipanaskan diatas waterbath untuk menguapkan pelarut pada suhu 30-45oC hingga didapatkan ekstrak kental sebanyak 7,9 g dan rendemen ekstrak 31,6%.

D. Uji Orientasi Karagenin Uji orientasi dilakukan sebelum melakukan uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol daun Cassia fistula L. Tujuan dilakukan uji orientasi adalah untuk menetapkan konsentrasi karagenin yang akan digunakan. Uji orientasi diawali dengan penetapan konsentrasi dari karagenin yang akan diinjeksikan pada mencit sebagai penginduksi terjadinya inflamasi. Pada penelitian ini, konsentrasi yang digunakan dalam orientasi adalah 1,5%; 2% dan 3%. Dengan dibagi berdasarkan tiga kelompok perlakuan, setiap kelompok terdapat satu ekor mencit dan diberikan injeksi karagenin dengan rute pemberian secara subkutan. Setelah diinjeksikan dengan karagenin, mencit diamati dengan mengukur tebal lipat kulit punggung yang dilakukan setiap satu jam sekali selama enam jam. Setelah diinjeksikan dengan karagenin, maka akan menunjukkan peningkatan tebal lipat kulit punggung mencit sekitar 2-3 kali dari tebal lipat kulit pada awalnya, sehingga tebal tersebut yang dipilih menjadi konsentrasi karagenin penginduksi inflamasi. Pada penelitian uji efek antiinflamasi, hasil dari pengukuran tebal lipat kulit menunjukkan adanya edema pada setiap jam selama enam jam. Edema yang terjadi karena injeksi karagenin dengan konsentrasi 1,5% belum menunjukkan adanya peningkatan tebal lipatan kulit punggung mencit hingga 2-3 kali dari tebal lipat kulit pada awalnya. Pada awalnya tebal lipat kulit 0,35 mm, setelah diinjeksi


49

karagenin pada satu jam pertama tebal kulit hanya menjadi 0,41 mm, sehingga peningkatan edema yang terjadi hanya 1,17 kali. Pada injeksi karagenin 2% sudah menunjukkan adanya peningkatan tebal edema pada jam pertama yang mencapai 2,31 kali lipat kulit awalnya dari 1,27 mm menjadi 2,94 mm, tetapi pada injeksi karagenin 2% ini edema yang terjadi tidak cukup bagus. Sehingga pada penelitian ini, konsentrasi karagenin yang digunakan sebagai penginduksi inflamasi sebesar 3% karena pada konsentrasi ini terjadi peningkatan tebal edema pada kulit punggung mencit jam pertama sebesar 4,52 kali. Pada konsentrasi 3% memperlihatkan adanya peningkatan tebal kulit yang signifikan dan penebalannya lebih dari 2-3 kali lipat kulit awal dan menetap hingga jam ke-6. Kurva grafik hasil pengukuran peningkatan tebal lipat kulit yang menunjukkan edema yang terjadi pada setiap jam selama enam jam dapat dilihat pada gambar 10. Karagenin 1,5%

4

Karagenin 2%

Karagenin 3%

Edema (mm)

3,5 3

2,5 2 1,5 1 0,5 0 0

1

2

3

4

5

6

waktu (jam) Gambar 10. Kurva grafik peningkatan tebal lipat kulit selama enam jam. Pada kurva diatas menunjukkan bahwa injeksi karagenin dengan konsentrasi 3% terlihat adanya peningkatan tebal lipat kulit punggung mencit sebesar 4,25 kali dari tebal awal 0,75 mm menjadi 3,39 mm. Sehingga pada


50

penelitian uji efek antiinflamasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. menggunakan karagenin dengan konsentrasi 3%. Konsentrasi karagenin yang digunakan dalam penelitian ini berdasarkan Ilavarsan, et al., (2005) pengujian efek antiinflamasi ekstrak Cassia fistula L. dengan induksi inflamasi metode edema kaki pada bagian kaki belakang tikus, diinduksi dengan karagenin 1% dengan volume injeksi 0,1 mL. Akan tetapi, pada penelitian efek antiinflamasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. pemberian karagenin dengan konsentrasi 1% tidak menghasilkan edema yang diinginkan. Sehingga, pada uji orientasi ini konsentrasi karagenin dinaikan menjadi 1,5; 2; dan 3%, hingga pada akhirnya konsentrasi karagenin sebagai induksi inflamasi yang digunakan adalah 3%.

E. Pengujian Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L. Tujuan dari pengujian efek antiinflamasi ekstrak daun Cassia fistula L. adalah untuk mengetahui apakah ekstrak tersebut memiliki efek antiinflamasi dan mengetahui persen penghambatan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. secara topikal. Metode yang digunakan untuk penelitian ini adalah metode inflamasi pada kulit punggung mencit dengan menginduksi karagenin 3%. Efek antiinflamasi dilihat dari adanya penurunan jumlah sel-sel neutrofil dan ekspresi COX-2 pada jaringan sub kutan kulit punggung mencit secara mikroskopik pada pengukuran 24 jam setelah diinduksi dengan karagenin 3% dan diberikan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. Pemberian ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dilakukan dengan cara mengoleskan sedian topikal pada area kulit punggung mencit secara merata


51

setelah diinduksi dengan karagenin 3%. Sebelum dilakukan induksi dengan karagenin, terlebih dahulu bulu mencit pada bagian punggung dicukur atau dibersihkan hingga tidak ada bulu yang menutupi bagian kulit dan sebelum dilakukan injeksi karagenin setelah pencukuran terlebih dahulu mencit didiamkan selama satu hari, yang bertujuan untuk menghindari adanya iritasi yang diakibatkan oleh pencukuran bulu pada kulit punggung mencit. Agar pada saat diinjeksi dengan karagenin 3%, edema yang terjadi benar merupakan reaksi dari karagenin dan bukan reaksi iritasi akibat pencukuran yang dilakukan. Setelah 24 jam diberikan injeksi karagenin dan ekstrak etanol daun Cassia fistula L, mencit dieutanasia dengan cara dislokasi tulang leher yang kemudian diambil kulit punggung mencit pada bagian yang terdapat edema. Setelah itu, potongan kulit mencit diletakan pada kertas karton tebal dan dimasukan kedalam formalin. Tujuan dari perendaman dengan formalin untuk mengawetkan morfologi sel atau jaringan kulit punggung mencit yang telah diambil, agar tetap sesuai dengan kondisi pada saat hewan masih hidup. Setelah itu, diproses untuk pengecatan dengan hematoksilin dan eosin (HE) dan juga pengecatan COX-2 dengan menggunakan imunohistokimia antibody anti COX-2, kemudian diamati dibawah mikroskop cahaya (Olympus® CX21) dengan perbesaran 400x untuk melihat jumlah sel-sel neutrofil dan ekspresi COX-2 pada daerah subkutan. Pengecatan dengan heatoksilin eosin bertujuan untuk melihat adanya migrasi dari sel-sel neutrofil pada daerah yang terdapat inflamasi pada jaringan sub kutan. Dengan mengamati jumlah sel-sel neutrofil pada daerah peradangan dan dihitung secara langsung dengan menggunakan mikroskop cahaya (Olympus®


52

CX21) pada setiap bidang yang berbeda dengan menggunakan perbesaran 400 kali. Seangkan, pengecatan imunohistokima bertujuan untuk melihat adanya ekspresi COX-2 pada bagian peradangan. Dilakukan penghitungan pada jumlah ekspresi COX-2 secara langsung enggunakan menggunkaan mikroskop cahaya (Olympus® CX21). F. Hasil Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L Pada Jumlah Sel Neutrofil Pada penelitian uji efek antiinflamasi topikal ekstrak etanol daun Cassia fistula L, menunjukkan adanya pengurangan jumlah sel-sel neutrofil pada bagian sub kutan kulit punggung mencit yang telah diinduksi menggunakan karagenin 3% dan telah diberikan perlakuan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. secara topikal, serta dilihat pengurangan sel-sel neutrofil dari masing-masing kelompok perlakuan terhadap kelompok kontrol. Pada umumnya reaksi inflamasi yang terjadi adalah adanya reaksi pembuluh darah yang mengakibatkan terjadinya eksudasi cairan dan protein plasma (edema) yang memicu terjadinya emigrasi leukosit terutama neutrofil pada jarigan ekstravaskular (Kumar, dkk, 2005). Pada penelitian aktifitas antiinflamasi secara makroskopik dilakukan setelah 24 jam pemberian karagenin dan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. Data yang didapatkan adalah jumlah sel neutrofil yang berada di daerah sub kutan pada area yang terjadi edema setelah 24 jam dari masing-masing kulit yang diberikan perlakuan, sehingga data tersebut yang digunakan untuk melihat aktifitas antiinflamasi. Terlebih dahulu dihitung rata-rata pada tiap jumlah sel yang ada pada


53

perlakuan. Dari hasil rerata masing-masing kelompok perlakuan dan kontrol dapat dilihat pada tabel 1. Tabel 1. Hasil rerata jumlah sel neutrofil pada setiap kelompok perlakuan Kelompok Perlakuan Rerata Jumlah sel Perlakuan neutrofil ± SE Kontrol negatif 111,36 ± 6,98 I Kontrol Biocream® 109,32 ± 13,26 II Kontrol positif 67,68 ± 7,50 III Ekstrak etanol daun Cassia 70,44 ± 5,04 IV fistula L 1,67% Ekstrak etanol daun Cassia 55,84 ± 4,97 V fistula L 2,5% Ekstrak etanol daun Cassia 43,28 ± 3,89 VI fistula L 3,75% Tabel 1. diatas meperlihatkan hasil pengujian dari efek antiinflamasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L secara topikal pada setiap perlakuan hewan uji. Pada kontrol negatif yang hewan uji hanya diinjeksi dengan karegenin saja menunjukkan rerata jumlah neutrofil pada daerah sub kutan paling besar yaitu 111,36 ± 6,98 dan pada perlakuan kontrol Biocream® juga memiliki rerata jumlah neutrofil yang cukup besar yaitu 109,32 ± 13,26 dibanding dengan kelompok perlakuan yang lain. Hal ini berarti bahwa karagenin dapat menyebabkan inflamasi dengan ditandai adanya peningkatan jumlah neutrofil pada daaerah sub kutan kulit punggung mencit. Berdasarkan pengamatan secara mikroskopik, pada perlakuan sebagai kontrol positif dan perlakuan yang diberikan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. menunjukkan bahwa adanya pengurangan jumlah sel-sel neutrofil yang cukup berarti. Pada perlakuan kontrol positif (hidrokortison asetat 2,5%) rerata jumlah sel neutrofil yaitu 67,68 ± 7,50. Sedangkan, pada kelompok perlakuan ekstrak etanol


54

daun Cassia fistula L. pada konsentrasi 3,75% menunjukkan penurunan sel neutrofil yang lebih besar yaitu 43,28 ± 3,89. Untuk selanjutnya diikuti kelompok perlakuan eksrak etanol daun Cassia fistula L. konsentrasi 2,5%, kelompok perlakuan ekstrak 1,67% rerata sel neutrofil sebesar, 55,84 ± 4,97 dan 70,44 ± 5,04. Hal ini menunjukkan bahwa kelompok kontrol positif dan kelompok perlakuan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dapat menghambat jumlah sel-sel neutrofil yang bermigrasi pada daerah sub kutan. Gambar mikroskopik dari kulit punggung mencit dengan berbagai perlakuan dapat dilihat pada gambar 11. Kontrol positif yang diberikan pada perlakuan ini adalah hidrokortison asetat 2,5%, yang merupakan golongan obat kortikosteroid. Memiliki mekanisme menghambat pembentukan interleukin, tumor neckrosis faktor (TNF) dan menurunkan permeabilitas kapiler (Dipiro, 2008).

Kortikosteroid merupakan

antiinflamasi yang identik dengan kortisol yaitu hormon steroid pada manusia yang disentesis dan di ekskresi oleh korteks adrenal. Efek dari antiinflamasi kortikosteroid mempengaruhi berbagai sel imunokompeten seperti sel T, makrofag, sel dendritik, eosinofil, neutrofil, dan sel mast, dengan cara menghambat respons inflamasi yang menyebabkan apoptosis (Sitompul, 2011).


A.

B.

C.

D.

E.

F.

55

Gambar 11. Mikrofotografi kulit normal tanpa perlakuan dan kulit setelah diberikan perlakuan menunjukkan adanya inflamasi pada daerah sub kutan dan neutrofil (Pengecatan HE pembesaran 200x dan 400x). Keterangan: A. Kulit normal 200x B. Kulit normal 400x C. Kulit dengan karagenin 200x D. Kulit dengan karagenin 400x E. Kulit dengan karagenin + perlakuan (konsentrasi 3,75%) 200x F. Kulit dengan karagenin + perlakuan (konsentrasi 3,75%) 400x


56

Gambar 12. Diagram batang aktivitas efek antiinflamasi pada mencit setelah pemberian ekstrak etanol daun Cassia fistula L secara topikal. Hasil diatas didapatkan dari masing-masing kulit, yaitu kontrol negatif, kontrol positif, kontrol Biocream®, dan perlakuan yang diberikan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. Dari masing-masing perlakuan diambil lima kulit dan tiap kulit diambil lima bidang pandang dengan perbesaran 400x menggunakan mikroskop cahaya (Olympus® CX21). Berdasarkan gambar 12, pada perlakuan pemberian ekstrak etanol daun Cassia fistula L dengan konsentrasi 3,75% memiliki rerata penghambatan sel neutrofil yang lebih besar yaitu 43,28 ± 3,89, dibandingkan dengan kelompok perlakuan dengan konsentrasi 2,5% memiliki rerata 55,84 ± 4,97 dengan konsentrasi 1,67% rerata yang didapatkan yaitu 70,44 ± 5,04. Hal ini menunjukkan


57

bahwa pemberian ekstrak tersebut dapat memberikan efek pengurangan jumlah migrasi sel-sel neutrofil pada daerah sub kutan, dibandingkan dengan kontrol negatif dan kontrol Biocream®. Konsentrasi dosis respon aktivitas antiinflamsi yang tingi didapatkan pada penelitian ini sebesar 3,75%. Hasil uji Scheffe aktifitas antiinflamasi dari ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dapat dilihat pada tabel 2. Tabel 2. Hasil uji Scheffe aktivitas efek antiinflamasi pada mencit setelah pemberian ekstrak etanol daun Cassia fistula L secara topikal. Kontrol Kontrol Kontrol EECF EECF EECF negatif Biocream® positif 1,67% 2,5% 3,75% BTB

Kontrol negatif

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BTB

BTB

BTB

BTB

BTB

Kontrol Biocream®

BTB

Kontrol positif

BB

BB

EECF 1,67%%

BB

BB

BTB

EECF 2,5%

BB

BB

BTB

BTB

EECF 3,75%

BB

BB

BTB

BTB

Keterangan : Kontrol positif Kontrol negatif EECF BB BTB

BTB BTB

: Hidrokortison asetat 2,5% : Injeksi karagenin : Ekstrak etanol daun Cassia fistula L. : Berbeda bermakna (p < 0,05) : Berbeda tidak bermakna (p > 0,05)

Pada tabel 2 diatas, dapat dilihat pengurangan jumlah migrasi neutrofil pada daerah subkutan hasil pemberian ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dengan konsentrasi 1,67; 2,5; dan 3,75% masing-masing menunjukkan adanya perbedaan yang berbeda bermakna (p < 0,05) dengan kontrol negatif (induksi karagenin) dan


58

kontrol biocream, akan tetapi dengan kontrol positif (hidrokortison asetat 2,5%) hasil yang didapatkan berbeda tidak bermakna (p > 0,05) secara statistik. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dengan konsentrasi 1,67; 2,5; dan 3,75% memiliki efek penghambatan migrasi neutrofil pada daerah sub kutan yang sebanding dengan kontrol positif (hidrokortison asetat 2,5%). Tetapi, pada setiap masing-masing konsentrasi ekstrak menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna, sehingga ketiga ekstrak tersebut berdasarkan statistik memiliki efek penghambatan sel-sel neutrofil yang sama. Penelitian yang dilakukan oleh Thirumal, et al., (2012) kandungan yang ada didalam daun Cassia fistula L. antara lain senyawa glycosides-sennosides A dan B, hentriacontanoic, triaconsanoic, nonacontanoic dan heptacosanoic acid, anthraquinone, tannin, oxyanthraquinone, dan volatile oils. Pada tanaman ini juga terdapat kandungan flavonoids, biflavonoids, rhein, rhein glucoside, sennoside A dan B, chrysophanol, dan isoflavon. Menurut Kim, et al., (2004) bahwa flavonoid memiliki aktivitas antioksidan dalam menangkap radikal bebas sehingga memiliki efek antiinflamasi, dan dapat mengatur aktivitas regulasi seluler dari sel-sel peradangan seperti, sel mast, makrofag, limfosit dan neutrofil. Rathee, et al., (2009) melaporkan bahwa flavonoid memiliki kemampuan untuk menghambat degranulasi neutrofil, dan juga mengurangi pelepasan asam arakidonat oleh neutrofil dan selsel mediator inflamasi lainnya. Sehingga dapat mengurangi eksudat dan jumlah migrasi leukosit pada penelitian ini.


59

G. Hasil Pengujian Efek Antiinflamasi Topikal Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L Dalam Ekspresi COX-2 Pada penelitian efek antiinflamasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. menunjukkan adanya ekspresi COX-2 pada daerah sub kutan. Ekspresi protein COX-2 pada neutrofil dalam sel radang ditunjukan pada gambar 13a.

a b

Gambar 13a. Ekspresi protein COX-2 pada neutrofil (pengecatan imunohistokimia antibody COX-2 pembesaran 400x dan 1000x). Keterangan: a. Sel yang tidak mengekspresikan COX-2 (berwarna biru) b. Sel yang mengekspresikan COX-2 (berwarna coklat) Gambar 13a diatas menunjukkan adanya ekspresi COX-2 pada sel-sel radang, dengan adanya warna coklat yang terdapat pada sel-sel radang. Sedangkan, sel yang masih berwarna biru menunjukkan bahwa pada sel tersebut tidak mengekspresikan COX-2. Penelitian sebelumnya Kim, et al., (2004) menunjukkan bahwa COX-2 yang banyak diekspresikan oleh sel-sel radang seperti pada sel mast dan makrofag. Untuk menentukan persen penghambatan inflamasi pada uji efek antiinflamasi daun Cassia fistula L. setelah diberikan perlakuan. Persen penghambatan inflamasi dihitung pada masing-masing kelompok perlakuan,


60

dengan menggunakan uji statistik Shapiro-wilk untuk melihat apakah data penelitian yang diolah menunjukkan hasil yang terdistribusi normal atau tidak. Hasil yang diperoleh dari uji Shapiro-wilk menunjukkan bahwa data yang diolah tidak terdistribusi secara normal yaitu dengan nilai p = 0,000 (P > 0,05). Apabila data sudah tidak terdistribusi secara normal pengujian dilanjutkan dengan uji Kruskal wallis untuk melihat data yang dianalisis apakah ada yang berbeda atau tidak. Setelah dilakukan uji tersebut didapatkan nilai p = 0,000 (p < 0,05), hal ini menunjukkan bahwa data yang diolah terdapat kelompok yang berbeda bermakna. Kemudian dilanjutkan dengan uji Mann-whitney Test, pengujian tersebut untuk mengetahui perbedaan antara kelompok perlakuan bermakna atau tidak bermakna. Hasil pada pengujian ini menunjukkan bahwa adanya persen penghambatan inflamasi dengan penekanan ekspresi COX-2 antar tiap kelompok perlakuan terdapat perbedaan yang bermakna. Gambar mikroskopik dari kulit punggung mencit dengan berbagai perlakuan dapat dilihat pada gambar 13b. Hasil uji statistik menunjukkan bahwa pada kelompok perlakuan ekstrak daun Cassia fistula L. konsentrasi 2,5% dan kontrol positif menunjukkan persen penghambatan inflamasi dengan penekanan ekspresi COX-2 yang cukup tinggi yaitu 18,06% dan 76,60%. Kemudian pada kelompok perlakuan dengan konsentrasi 1,67% dan konsentrasi 3,75% persen penekanan COX-2 sebesar 14,55% dan 14,76%. Hal ini menunjukkan bahwa masing-masing kelompok perlakuan ekstrak daun Cassia fistula L. memiliki efek penekanan pada COX-2, akan tetapi efek tersebut tidak setinggi pada kelompok kontrol, dapat dilihat pada gambar 14. Rerata


61

persen penghambatan inflamasi dalam penekanan COX-2 pada kelompok perlakuan beserta kontrol dapat dilihat pada tabel 3. A.

B.

C.

D.

E.

F.

Gambar 13b. Mikrofotografi kulit normal tanpa perlakuan dan kulit setelah diberikan perlakuan menunjukkan adanya inflamasi pada daerah sub kutan dan ekspresi COX-2 (Pengecatan imunohistokimia dengan antibody COX-2 pembesaran 200x dan 400x). Keterangan: A. Kulit normal 200x B. Kulit normal 400x C. Kulit dengan karagenin 200x D. Kulit dengan karagenin 400x E. Kulit dengan karagenin + perlakuan (konsentrasi 1,67%) 200x F. Kulit dengan karagenin + perlakuan (konsentrasi 1,67%) 400x


62

Gambar 14. Diagram persen penghambatan inflamasi dengan penekanan ekspresi COX-2 antar tiap kelompok perlakuan besrta kontrol. Tabel 3. Rerata persen penghambatan inflamasi dalam penekanan COX-2 pada kelompok perlakunan beserta kontrol. Kelompok Rerata % PI I II III IV V VI ± SE 1,44 ± 0,37 BTB BB BB BB BB I 2,01 ± 0,22 BTB BB BB BB BB II 76,60 ± 0,88 BB BB BB BB BB III 14,54 ± 0,85 BB BB BB BTB BTB IV 18,05 ± 2,98 BB BB BB BTB BTB V 14,76 ± 1,45 BB BB BB BTB BTB VI Keterangan : Kelompok I : Kontrol negative (Karagenin 3%) Kelompok II : Kontrol Biocream ® Kelompok III : Kontrol positif (Hidrokortison asetat 2,5%) Kelompok IV : Ekstrak etanol daun Cassia fistula L. Kelompok V : Ekstrak etanol daun Cassia fistula L. Kelompok VI : Ekstrak etanol daun Cassia fistula L. %PI : Persen penghambatan inflamasi BB : Berbeda bermakna (p < 0,05 ) BTB : Berbeda tidak bermakna (p > 0,05) SE : Standart error


63

Berdasarkan tabel diatas, bahwa masing-masing konsentrasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L memiliki efek antiinflamasi dalam menghambat COX-2 yang dapat dilihat dari hasil rerata pada tabel diatas. Dari hasil tersebut diperoleh rerata persen penghambatan inflamasi dalam menekan ekspresi COX-2 pada kontrol positif (hidrokosrtison asetat 2,5%) yaitu sbesar 76,60%. Pada penelitian ini kontrol positif (hidrokortison asetat 2,5%) merupakan

golongan kostikosteroid yang

bekerja pada jalur posfolipase A2, akan tetapi pada pengujian ini menunjukkan bahwa kontrol positif dapat juga menekan ekspresi COX-2, karena pada golongan kortikosteroid berdasarkan Rang, et al., (2007) pada kortikosteroid dapat menghambat transkripsi gen pada siklooksigenase-2 (COX-2), yang diinduksi dalam sel inflamasi oleh mediator inflamasi. Pada kontrol positif hasil statistik menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna dengan masing-masing kelompok perlakuan. Hal ini dikarenakan kontrol positif hidrokortison asetat merupakan golongan steroid yang memiliki mekanisme utama penghambatan pada penghambatan metabolit asam arakidonat melalui jalur reseptor glukokortikoid pada jalur lipooksigenase. Glukokortikoid akan menghambat dan mengaktifkan reseptor glukokortikoid tertentu, sehingga akan menekan sitokin, kemokin, leukotriene, lipoksin dan pada jalur siklooksigenase akan menghambat enzim inflamasi (seperti COX-2) yang merupakan enzim inflamatorik merangsang pembentukan prostaglandin yang berperan dalam reaksi peradangan, sehingga ekspresi dari COX-2 pada jalur siklooksigenase akan terhambat sempurna, dapat dilihat pada gambar 15.


64

Pemilihan kontrol positif menggunakan hidrokortison asetat karena pada penelitian ini sediaan antiinflamasi diberikan secara topikal, sehingga dipilih krim hidrokortison asetat merupakan sediaan anti radang yang diberikan secara topikal. Akan tetapi, pemberian kontrol positif pada penelitian efek antiinflamasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. memiliki kelemahan, yaitu tidak dapat dibandingkan antara hasil dari jumlah neutrofil dan ekspresi COX-2 pada penelitian ini, karena hidrokortison asetat merupakan obat antiinflamasi yang mekanismenya dapat menghambat dua jalur metabolit asam arakidonat, akan tetapi mekanisme utamanya menghambat pada jalur lipooksigenase yang berperan dalam migrasi sel neutrofil. Oleh karena itu pada penelitian ini krim hidrokortison asetat menghambat sempurna pada jalur siklooksigenase yang berperan dalam mengekspresikan COX-2.

Gambar 15. Mekanisme akasi dari golongan steroid (Rang, et al., 2007). Pada perlakuan ekstrak daun Cassia fistula L. dengan masing-masing konsentrasi 1,67; 2,5; dan 3,765% menunjukkan penghambatan sebesar 14,54%;


65

18,05%; dan 14,76%. Pada pemberian ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dengan konsentrasi 3,75% mengalami penurunan persen penghambatan inflamasi terhadap penekanan COX-2. Hal tersebut menunjukkan bahwa semakin besar konsentrasi yang diberikan tidak semakin besar efek penghambatannya, dengan melihat dari hasil uji statistik yang menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna antara kelompok perlakuan. Hasil persen penghambatan pada penekanan ekspresi COX-2 pada masing-masing konsentrasi tersebut, terlihat pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L. konsentrasi 1,67% memiliki persen penghambatan sebesar 14,54%, lebih besar daripada kelompok kontrol negatif dan kontrol Biocream®. Pada hasil uji statik menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Cassia fistula L. memilliki perbedaan yang bermakna dengan kelompok kontrol negatif. Akan tetapi, rerata persen penghambatan ekspresi COX-2 pada konsentrasi 1,67% lebih kecil daripada kontrol positif. Hal ini menunjukkan bahwa efek antiinflamasi dari ekstrak daun Cassia fistula L. konsentrasi 1,67% lebih kecil dibandingkan dengan kelompok kontrol positif. Pada kelompok perlakuan ekstrak etanol Cassia fistula L. dengan konsentrasi 2,5% memiliki nilai yang paling besar yaitu 18,05% dibandingkan dengan kontrol Biocream®, kontrol negatif dan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. konsentrasi 1,67% dan 3,75%. Hasil uji statistik kelompok perlakuan ekstrak daun Cassia fistula L. konsentrasi 2,5% menunjukkan perbedaan yang bermakna dengan kontrol positif dan kontrol Biocream®. Akan tetapi dengan kontrol positif memiliki perbedaan berbeda bemakna secara statistik. Sedangkan, pada kelompok perlakuan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. konsentrasi 3,75% memiliki rerata


66

persen penghambatan sebesar 14,76% lebih besar daripada kelompok kontrol negatif, kelompok kontrol positif, dan kelompok perlakuan konsentrasi 1,67%. Pada hasil statistik menunjukkan bahwa kelompok perlakuan ekstrak etanol konsentrasi 3,75% memiliki perbedaan yang bermkana dengan kontrol negatif dan kontrol positif. Akan tetapi, dengan kontrol posditif memiliki perbedaan yang bermakna. Hal ini menunjukkan bahwa efek antiinflamasi daun Cassia fistula L. lebih kecil disbanding kelompok kontrol positif. Berdasarkan penelitian Kim, et al., (2004)

senyawa flavonoid

menunjukkan adanya aktivitas antiinflamsi. Flavonoid dapat menghambat eicosanoid yang menghasilkan enzim mediator inflamasi. Sehingga, flavonoid dapat menghambat ekspresi dari COX-2 yang banyak diekspresikan pada jenis selsel peradangan yang terkait termasuk makrofag dan sel mast. Dari uraian diatas, menunjukkan bahwa pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L. konsentrasi 2,5% memiliki persen penghambatan ekspresi COX-2 yang lebih besar. Akan tetapi, belum memiliki efek antiinflamasi yang sebanding dengan kontrol positif. Pada setiap masing-masing perlakuan konsentrasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna, sehingga ketiga ekstrak tersebut berdasarkan statistik memiliki efek penghambatan inflamasi yang sama dan pada ketiga konsentrasi tersebut sudah memiliki perbedaan berbeda bermakna dengan kontrol negatif dan Biocream®, sehingga dapat dikatakan memiliki efek penghambatan inflamasi dalam ekspresi COX-2.


67

H. Pembahasan Umum Flavonoid merupakan senyawa salah satu senyawa yang terdapat pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L. yang dapat digunakan sebagai antiinflamasi. Inflamasi ditandai dengan adanya pelepasan mediator kimiawi seperti prostaglandin, adanya ekspresi COX-2 dan migrasi sel-sel neutrofil pada daerah yang terjadi inflamasi atau peradangan. Pada reaksi inflamasi akan terjadi peningkatan ekspresi COX-2 dan jumlah neutrofil pada daerah peradangan. pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L. yang memiliki kandungan flavonoid diduga dapat menurunkan efek inflamasi. Sehingga pada penelitian ini, dilakukan untuk melihat aktifitas antiinflamasi topikal pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dengan melihat pengurangan jumlah sel-sel neutrofil dan mengetahui persen penghambatan inflamasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dengan melihat persen penekanan ekspresi COX-2 pada jaringan sub kutan. Pada penelitian ini diharapkan dengan pemberian ekstrak etanol daun Cassia fistula L. maka jumlah sel-sel neutrofil yang bermigrasi kedaerah sub kutan dan pada ekspresi COX-2 mengalami penurunan. Pada penelitian ini diberikan tiga konsentrasi dosis ekstrak etanol daun Cassia fistula L. pada masing-masing perlakuan yang terinduksi karagenin 3%. Konsentrasi dosis yang diberikan sebesar 1,67; 2,5; dan 3,75%, efek antiinflamasi yang dimiliki oleh ekstrak etanol daun Cassia fistula L. ditunjukkan dengan adanya penurunan jumlah sel-sel neutrofil dan ekspresi COX-2 pada daerah yang mengalami inflamasi atau peradangan.


68

Dilakukan uji analisis data pada penelitian penurunan jumlah sel neutrofil, didapatkan hasil bahwa pada kelompok kontrol negatif dengan rerata sebesar 111,36 ± 6,98, kelompok kontrol Biocream® sebesar 109,32 ± 13,26 dan kelompok kontrol positif, kelompok perlakuan dengan konsentrasi dosis 1,67; 2,5; dan 3,75% masing-masing memiliki rerata sebesar 67,68 ± 7,50; 70,44 ± 5,04; 55,84 ± 4,97; dan 43,28 ± 3,89. Pada masing-masing kelompok perlakuan menunjukkan hasil yang berbeda bermakna dengan kelompok kontrol negatif dan kelompok kontrol Biocream®. Sedangkan dengan kelompok kontrol positif masing-masing kelompok perlakuan menunjukkan adanya perbedaan akan tetapi tidak bermakna. Pada kelompok perlakuan tidak menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna, akan tetapi pada masing-masing perlakuan dengan pemberian konsentrasi dosis menunjukkan adanya efek antiinflamasi dengan penurunan sel-sel neutrofil pada daerah sub kutan. Sedangkan, asing-asing perlakuan menunjukkan perbedaan yang tidak bermakana secara statistik. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Cassia fistula L. meiliki efek antiinflamasi yang sebanding. Pada pengujian data persen penekanan ekspresi COX-2 didapatkan hasil pada kelompok kontrol negatif dan kontrol Biocream® sebesar 1,44% dan 2,01%, sedangkan pada kelompok kontrol positif dan masing-masih perlakuan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. menghasilkan persen penekanan sebesar 76,60 ± 0,88; 14,54 ± 0,85; 18,05 ± 2,98; dan 14,76 ± 1,45. Pada dosis konsentrasi 2,5% menunjukkan persen penekanan yang cukup tinggi dibandingkan dengan perlakuan konsentrasi 1,67% dan 3,75%. Akan tetapi, pada konsentrasi 2,5% menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna dengan kelompok kontrol positif, hal ini


69

menunjukkan bahwa ekstrak Cassia fistula L. memiliki efek antiinflamasi dengan menekan ekspresi COX-2 pada daerah peradangan, akan tetapi belum sebanding dengan kontrol positif yaitu hidrokosrtison asetat 2,5%. Berdasarkan Gomes, Fernandes, Lima, Mira, dan Corvo (2008) bahwa flavonoid memiliki mekanisme yang menghambat pada jalur arachidonic acid dengan menghambat terjadi ekspresi dari mediator inflamasi yaitu COX-2. Penghambatan dari ekspresi COX-2 ini akan mengakibatkan terjadinya pengurangan jumlah dari prostaglandin yang khususnya mediator pro-inflamasi seperti PGE2, sehingga respon inflamasi akan berkurang. Jalur penghambatan dari jenis-jenis flavonoid dapat dilihat pada gambar 16.

Gambar 16. Jalur target dari senyawa flavonoid pada mediator-mediator proinflamasi (Gomes, et al., 2008). Berdasarkan Gomes, et al., (2008), flavonoid juga memiliki aktivitas antioksidan yang dapat menghambat ekspresi dari sel mast, makrofag, eosinofil dan neutrofil


70

yang merupakan penanda dalam terjadinya peradangan atau inflamasi. Sehingga peradangan atau inflamasi menjadi berkurang. Hasil penelitian efek antiinflamasi ekstrak etanol daun Cassia fistula L. didukung dengan hasil data pengamatan secara makroskopik yaitu melihat tebal kulit punggung mencit, dengan pengukuran menggunakan jangka sorong digital. Pengukuran dilakukan setiap satu jam sekali selama enam jam. Hasil penelitian yang didapatkan rata-rata AUC tebal kulit punggung mencit pada masing-masing perlakuan kelompok kontrol negatif, kontrol Biocream®, kontrol positif dan konsentrasi 1,67; 2,5; dan 3,75%, secara berturut-turut sebesar, 11,59 ± 2,49; 13,05 ± 2,94; 2,87 ± 0,26; 5,57 ± 0,35; 4,45 ± 0,56; dan 2,79 ± 0,34 (mm.jam), dan pada penelitian ini juga didapatkan hasil persen penghambatan inflamasi pada kelompok perlakuan dengan masing-masing konsentrasi 1,67; 2,5; dan 3,75% sebesar 51,87; 61,58; dan 75,94%. Hasil yang didapatkan menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Cassia fistula L. memiliki efek antiinflamasi, ditunjukkan pada konsentrasi pemberian ekstrak pada masing-masing kelompok perlakuan menunjukkan adanya perbedaan bermakna dengan kontrol negatif dan kontrol Biocream®, walaupun dengan kontrol positif tidak menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna. Akan tetapi, pada perlakuan yang diberikan ekstrak daun Cassia fistula L. menunjukkan adanya daya penghambatan inflamasi yang besar pada konsentrasi 3,75% (Cintika, 2015). Penelitian ini merupakan skrining awal pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L. Pada penelitian ini menunjukkan bahwa adanya efek antiinflamasi secara topikal dari ekstrak etanol daun Cassia fistula L. senyawa yang diduga berperan


71

dalam efek antiinflamasi pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L. adalah senyawa flavonoid, karena berdasarkan penelitian dari Anitha dan Miruthula (2014) bahwa daun Cassia fistula L. memiliki kandungan senyawa flavonoid. Hasil dari penelitian ini tidak menggunakan senyawa aktif tunggal, sehingga senyawa aktif lain yang terdapat pada ekstrak etanol daun Cassia fistula L. masih terkandung dalam ekstrak sehingga dapat mempengaruhi hasil penelitian ini. Oleh karena itu diharapkan adanya penelitian lanjutan mengenai senyawa-senyawa yang bertanggungjawab dalam ekstrak etanol daun Cassia fistula L. yang menunjukkan adanya efek antiinflamasi secara oral maupun topikal.


72

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan Berdasarkan penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa: 1.

Ekstrak etanol daun Cassia fistula L. memiliki efek antiinflamasi topikal terhadap mecit yang diinduksi dengan karagenin 3%. Ekstrak etanol daun Cassia fistula L. yang memiliki efek antiinflamasi topikal yang cukup tinggi dalam penurunan jumlah sel neutrofil yang ada pada daerah sub kutan yaitu konsentrasi sebesar 3,75% dan penghambatan ekspresi COX-2 pada daerah sub kutan dari ekstrak etanol daun Cassia fistula L. dengan konsentrasi berturutturut yaitu sebesar 14,54; 18,05; dan 14,76%.

2.

Mekanisme dari ekstrak etanol daun Cassia fistula L. diduga melalui penghambatan migrasi sel neutrofil dan penghambatan ekspresi COX-2 pada daerah sub kutan kulit punggung mencit yang diinduksi dengan karagenin 3%.

B. Saran Berdasarkan penelitian yang dilakukan, perlu dilakukan kembali penelitian lebih lanjut mengenai senyawa-senyawa yang bertanggungjawab dalam ekstrak etanol daun Cassia fistula L. yang menunjukkan adanya efek antiinflamasi secara topikal maupun secara oral.


73

DAFTAR PUSTAKA

Ali, M. A., Ahmad, Hashim. S., Chand, Most. K., Azad, A. K., Begum, Kohinur., Imam, Mir. I. W., 2012, Antihyperglycemic and Analgesic Activities of Ethanolic Extract of Cassia fistula (L.) Stem Bark, Departement of Pharmacy, Bangladesh University, International Journal Pharmaceutical Sciences Research, 3(2): 416-423. Anitha, J., and Miruthula, S., 2014, Anti-inflammatory and Phytocemicals Analysis of Cassia fistula Linn. Fruit Pulp Extracts, International Journal of Pharmacognosy, 1(3): 207-215. Bonney, R.J., Gery, I., Lin, T.Y., Meyenhofer, M.F., Acevedo, W., Davies, P., 1978, Mononuclear Phagocytes from Carragenan-Induced Granulomas Isolation, Cultivation, and Characterization, J Exp Med, 261-275. Carlos, 2013, Rational Use of Topical Cortikosteroids, www.australianprescriber.com/magazine/36/5/article/1452.pdf, diakses pada tanggal 29 April 2015. Cintika, K. D., 2015, Uji Efe Antiinflaasi Ekstrak Etanol Daun Trengguli (Cassia fistula L.) Pada Edema Punggung Mencit Terinduksi Karagenin, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Corwin, E. J, 2009, Buku Saku Patofisiologi, Edisi 3, Penerbit EGC, Jakarta, p. 99. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, pp. 4, 7, 63, 436. Dipiro, J. T., Talbert, R. T., Yee, G. C., Matzke, G. R., Wells, B. G., and Posey, L. M., 2008, Pharmacotherapy : A Phatophysiologic Approach, 7th edition, McGraw Hill, USA, pp. 1544-1545. Endro, A., 2012, Farmakologi : Obat-obat Penting dalam Pembelajaran Ilmu Farmasi dan Dunia Kesehatan, Penerbit Pustaka Pelajar, Yogyakarta, pp. 181-184. Felix, A., 2013, Uji Aktivitas Antioksidan Menggunakan Radikal 1,1-Difenil-2Pikrilhidrazil (DPPH) dan Penetapan Kandungan Fenolik Total Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Daun Trenguli (Cassia fistula L.), Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Gobianand, K., Vivekanandan, K. Pradeep., Mohan, C.V.R., 2010, Antiinflammatory and Antipyretic Activities of Indian Medicinal Plant Cassia fistula Linn. (Golden Shower) in Wistar Albino Rats, Departement of


74

Pharmacology and Eviromental Toxicology, International Journal of Pharmacology, 6(5) : 719-725. Gomes, A., Fernandes, E., Lima, J. F. C., Mira, L., and Corvo, M. L., 2008, Molecular Mechanism of Anti-inflammatory Activity Mediated by Flavonoids, Current Medicinal Chemistry, Bentham Science Publishers Ltd, 15: 1586-1605. Guata, Y. S., Alioune, D. F., William, D., Malick, G., Khady, B., Emmanuel, B., and Babacar, F., 2009, Analgesic and Anti-inflammatory Activity of Aqueous Root Extract of Cassia sieberiana D. C. (Caesalpiniaceae), African Journal of Pharmacy and Pharmacology, 3(12): 651-653. Hayes, E.R., dan Kee, J.L., 1996, Farmakologi Pendekatan Proses Keperawatan, Edisi 5, diterjemahkan Peter, A., Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 310317. Hermien, N., 2014, Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kulit Batang Trenguli (Cassia fistula L.) Dengan Uji DPPH, Prosiding Seminar Nasional Sains dan Pendidikan Sains IX, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Satya Wacana, Salatiga, Vol. 5, No. 1, ISSN. 2087-0922. Ikawati, Z., Nugroho, A. E., Werdhinindah, W., 2006, Efek Ekstrak Etanol Daun Erythrina fusca Lour (Cangkring) Terhadap Penekanan Ekspresi Enzim Siklooksigenase-2 Pada Kultur Sel Raji, Majalah Farmasi Indonesia, 17(2): 85-90. Ilavarasan, R., Moni, M., Subramanian, V., 2005, Anti-Inflammatory and Antioxidant Activities of Cassia fistula Linn Bark Extracts, African Journal of Traditional Complementay and Alternative Medicines, 2(1) : 70-85. IPB, 2015, IPB Biodeversity – IPBiotics, http://apps.cs.ipb.ac.id/ipbiotics/user/organism/detail/detail_organisme_obat .php, diakses tanggal 18 Maret 2015. Kanakam, V., Kalakota, C., Srisailam, K., Naikal, M. A., Swathi, S., and Prameela, S., 2013, Analgesic and Anti-inflamatory Activities of The Extract of Cassia occidentalis Linn Animal Model, Departement of Pharmacognosy and Chemistry, International Journal of Research in Pharmacy and Chemistry, 3(4): 759-762. Karnen, B.G., dan Iris, R., 2012, Imunologi Dasar, Edisi Ke-10, Balai Penerbit FKUI, Jakarta, p. 259. Khan, A. B., Akhtar, N., Rasul, A., Mahmood, T., Khan, H.M.S., Zaman, S. U., Iqbal, M., and Murtaza, G., 2012, Investigation of The Effects of Extraction


75

Solvent/Technique on The Antioxidant Activity of Cassia fistula L., Journal of Medicine Research, 6(3): 500-503. Kim, H. P., Son, K. H., Chang, H. W., and Kang, S. K., 2004, Anti-inflammatory Plant Flavonoids and Cellular Action Mechanism, Journal of Pharmacological Sciences, 96: 22-45. Kumar, V., Abbas, A.K., and Fausto, N., 2005, Phatologic Basis of Disease, 7th ed, Elsevier Saunders, Philadelphia, pp. 49-52. Mali, A. A., Hivrale, M. G., Bandawane, D. D., and Chaudhari, P. D., 2012, Study of Anti-inflammatory Activity of Cassia auriculata Linn. Leaves Wistar Rats, Deprtement of Pharmacology, Indian Drugs, 49(11): 44-47. Morris, C.J., 2003, Carragenn Induced Paw Edema in the Rat and Mouse Inflammation Protocols, Method in Molecular Biology, 2, 115-122. Mycek, M.J., Hrvey, R.A., Champe, P.C., 2011, Farmakologi: Ulasan Bergambar, Edisi II, Nidya Medika, Jakarta, p. 404 Neelam, Chauhan., Ranjan, Bairwa., Komal, S., Nootan, C., 2011, Review on Cassia fistula, ISSN 2229-3566, International Journal of Research Ayurveda & Pharmacy, 2 (2), pp. 426-430. Pearce, E.C. 2009, Anatomi dan Fisiologi untuk Paramedis, PT. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta, pp. 290-297. Price, S.A., dan Wilson, L.N., 1992, Patophysiology, diterjemahkan oleh Peter Anugrah, Edisi 4, Buku I, EGC, Jakarta, p. 36. Rang, H.P., Dale, M.M., Ritter, J.M., and Flower, R.J., 2007, Pharmacology, 6th ed, Churcill Livingstone, London, pp. 204, 215. Rathee, P., Chaudhary, H., Rathee, S., Rathee, D., Kumar, V., and Kohli, K., 2009, Mechanism of Action of Flavonoids as Anti-inflammatory Agents: A Review, Inflammation & Allergy – Drugs Target, Bentham Science Publisher Ltd, PDM College of Pharmacy, Bahadurgarh, India, 8: 229-235. Sermakkani, M., V. Thangapandian., 2013, Anti-Inflmmatory Potential of Cassia Italica (Mill) Lam. Ex. Fw. Andrews Leaves, PG and Research Department of Botany, Kongunadu Arts and Science College, India, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 5(1): 18-22. Sharma, U.R., Surendra, V., Jha, S.K., Nitesh, S.C., Praskah, T., Goli, D., 2009, Evaluation of Anti-inflammatory Activity of Rhododendron arboretum Herb Extract on Experimental Animal, Arch Pharm Res, 1, pp. 58-61.


76

Sitompul, R., 2011, Kortikosteroid Dalam Tatalaksana Uveitis: Mekanisme Kerja, Aplikasi Klinis dan Efek Samping, Departemen Ilmu Kesehatan Mata, Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, J Indon Med Assoc, 61: 265-9. Steenis, C.G.G.J., Hoed, D. D., Blombergen, S., Eyma, P. J., 1992, Flora untuk Sekolah di Indonesia, PT Pradnya Paramita, Jakarta. Thirumal, M., Srimanthula, S., Kishore, G., 2012, Cassia fistula Linn – Pharmacognostical, Phytochemical and Pharmalogical Review, Departement of Pharmacognosy, Jaya College Pharmacy, C.T.H.road, Thiruninravur, Chennai, T.N, India. Vogel, H.G., 2008, Drug Discovery and Evaluation : Pharmacological Assay, 3th edition, Spinger, New York, pp. 1094-1103. Waugh, A., and Grant, A., 2011, Ross and Wilson: Anatomy and Phisiology In Health and Ilness, 9th ed, Churcill Livingstone, London, pp. 362-369. Wibowo, D.S., 2008, Anatomi Tubuh Manusia, Penerbit Grasindo, Jakarta, p. 13. Yanhendri., Yenny, S.W., 2012, Berbagai Bentuk Sedian Topikal Dalam Dermatologi, Bagian Ilmu Kesehatan Kulit dan Kelamin Fakultas Kedokteran Universitas Andalas, Padang, Sumatera Barat, pp. 423-428.


77

LAMPIRAN


Lampiran 1. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian

Gambar 17. Mencit betina galur Swiss

Gambar 18. Kulit punggung mencit setelah dilakukan pencukuran

78


Gambar 19. Kulit punggung mencit terinduksi karagenin

Gambar 20. Kulit punggung mencit yang diberi ekstrak Cassia fistula L.

79


Lampiran 2. Pemotongan kulit untuk histopatologi

Gambar 21. Pemotongan kulit punggung mencit

Gambar 22. Pengawetan kulit mencit dengan formalin 10%

80


Lampiran 3. Alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian

Gambar 23. Biocream® (Kontrol Biocream®) dan basis ekstrak

Gambar 24. Hidrocortisone (hidrokortison asestat 2,5%) sebagai kontrol positif

81


Gambar 25. Serbuk karagenin yang digunakan dalam penelitian

Gambar 26. Ekstrak yang dilarutkan dalam basis Biocream®

82


Gambar 27. Spuit injeksi yang digunakan dalam penelitian

83


Lampiran 4. Hasil Determinasi Tanaman Cassia fistula L

84


Lampiran 5. Surat Ethical Clearence

85


Lampiran 6. Data tebal lipat kulit dalam uji pendahuluan karagenin Jam ke0

Karagenin 1,5% 0.35

Karagenin 2% 1.27

Karagenin 3% 0.75

1

0.41

2.94

3.39

2

1.46

1.98

2.89

3

1.52

1.76

2.5

4

1.56

1.64

2.4

5

1.54

1.52

2.07

6

1.33

1.41

2.03

Lampiran 7. Data rata-rata perhitungan jumlah neutrofil Kontrol Negatif 3% KETERANGAN K-1 K-2 K-3 K-4 K-5 RATA-RATA Rerata Jumlah sel neutrofil ± SE

KULIT 1 84 125 94 138 128 113,8

KULIT 2 103 129 108 118 79 107,4

KULIT 3 78 86 72 111 92 87,8

KULIT 4 164 133 111 142 102 130,4

KULIT 5 93 105 107 127 155 117,4

111,36 ± 6,98

Kontrol Biocream® KETERANGAN B-1 B-2 B-3 B-4 B-5 RATA-RATA Rerata Jumlah sel neutrofil ± SE

KULIT 1 185 187 109 204 98 156,6

KULIT 2 183 144 89 103 84 120,6

KULIT 3 100 103 85 75 101 92,8

KULIT KULIT 4 5 108 70 90 93 72 84 88 102 80 96 87,6 89

109,32 ± 13,26

86


Kontrol Positif KETERANGAN H-1 H-2 H-3 H-4 H-5 RATA-RATA Rerata Jumlah sel neutrofil ± SE

KULIT KULIT KULIT KULIT KULIT 1 2 3 4 5 77 68 41 94 61 43 79 30 96 77 38 54 73 92 84 49 50 61 89 90 62 51 63 83 87 53,8 60,4 53,6 90,8 79,8 67,68 ± 7,50

Perlakuan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. konsentrasi 1,67% KETERANGAN EC-1 EC-2 EC-3 EC-4 EC-5 RATA-RATA Rerata Jumlah sel neutrofil ± SE

KULIT KULIT KULIT KULIT KULIT 1 2 3 4 5 57 64 104 75 67 53 59 98 73 55 59 35 89 83 74 62 66 63 72 89 77 64 77 65 81 61,6 57,6 86,2 73,6 73,2 70,44 ± 5,04

Perlakuan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. konsentrasi 2,5% KULIT KULIT KULIT KULIT KULIT KETERANGAN 1 2 3 4 5 EC-1 76 46 49 57 63 EC-2 53 34 48 63 68 EC-3 79 51 30 51 89 EC-4 43 52 37 52 59 EC-5 63 54 45 68 66 RATA-RATA 62,8 47,4 41,8 58,2 69 Rerata Jumlah sel 55,84 ± 4,97 neutrofil ± SE

87


Perlakuan ekstrak etanol daun Cassia fistula L. konsentrasi 3,75% KULIT KULIT KULIT KULIT KULIT KETERANGAN 1 2 3 4 5 EC-1 42 76 40 31 30 EC-2 46 62 31 39 41 EC-3 41 43 40 38 35 EC-4 43 37 42 38 52 EC-5 31 73 47 31 53 RATA-RATA 40,6 58,2 40 35,4 42,2 Rerata Jumlah sel 43,28 ± 3,89 neutrofil ± SE

88


89

Lampiran 8. Data rerata persen penghambatan inflamasi dalam penekanan COX-2. Preparat

Sel Sel % Kulit Repetisi COXMEAN Hitung Penekanan 2

I

II

Karagenin

III

IV

V

1

126

125

0,79

2 3

136

134

1,47

122

121

0,82

4

136

135

0,74

5

156

155

0,64

1

217

216

0,46

2 3

161

158

1,86

165

163

1,21

4

182

180

1,10

5

184

183

0,54

1

257

246

4,28

2 3

274

267

2,55

260

254

2,31

4

229

222

3,06

5

167

163

2,40

1

179

178

0,56

2 3

159

157

1,26

186

185

0,54

4

143

141

1,40

5

192

189

1,56

1

241

237

1,66

2 3

258

255

1,16

257

254

1,17

4

271

268

1,11

5

258

254

1,55

Rerata % PI ± SE

0,89

1,04

2,92

1,06

1,33

1,44 ± 0,37


Preparat

Kulit Repetisi 1

I

II

Biocream®

III

IV

V

Sel Sel % COXMEAN Hitung Penekanan 2 228 222 2,63

2 3

249 211

245 206

1,61

4

195

189

3,08

5 1

178 221

171 217

3,93 1,81

2 3

261

255

2,30

247

243

1,62

4

239

237

0,84

5 1

268 222

265 217

1,12 2,25

2 3

210

205

2,38

184

182

1,09

4

220

215

2,27

5 1

203 239

199 234

1,97 2,09

2 3

242

238

1,65

165

164

0,61

4

285

280

1,75

5 1

220 207

216 203

1,82 1,93

2 3

210

204

2,86

208

203

2,40

4

204

200

1,96

5

140

137

2,14

90

Rerata % PI ± SE

2,72

2,37

1,54

1,99

1,58

2,26

2,01 ± 0,22


Preparat

Kulit Repetisi 1

I

II

Kontrol positif

III

IV

V


2 3

206

36

82,52

218

47

78,44

4

208

58

72,12

5 1

223 230

58 55

73,99 76,09

2 3

218

48

77,98

195

48

75,38

4

230

44

80,87

5 1

218 228

56 55

74,31 75,88

2 3

228

49

78,51

198

48

75,76

4

256

61

76,17

5 1

250 225

53 58

78,80 74,22

2 3

209

51

75,60

131

22

83,21

4

192

42

78,13

5 1

144 211

27 58

81,25 72,51

2 3

179

40

77,65

164

44

73,17

4

154

45

70,78

5

154

43

72,08

91

Rerata % PI ± SE

77,35

76,93

77,02

78,48

73,24

76,60 ± 0,88


Preparat

Kulit Repetisi 1

I

II

Cassia fistula L. 1,67%

III

IV

V


2 3

75

68

9,33

98

84

14,29

4

85

71

16,47

5 1

125 113

107 101

14,40 10,62

2 3

59

49

16,95

64

51

20,31

4

46

35

23,91

5 1

77 93

67 80

12,99 13,98

2 3

88

76

13,64

57

44

22,81

4

90

76

15,56

5 1

113 66

97 60

14,16 9,09

2 3

58

50

13,79

68

58

14,71

4

64

57

10,94

5 1

61 66

53 59

13,11 10,61

2 3

40

32

20,00

68

61

10,29

4

47

42

10,64

5

92

75

18,48

92

Rerata % PI ± SE

13,42

16,96

16,03

12,33

14,00

14,54 ± 0,85


Preparat

Kulit Repetisi 1

I

II


III

IV

V


2 3

53

44

16,98

66

55

16,67

4

134

112

16,42

5 1

95 93

78 82

17,89 11,83

2 3

119

105

11,76

105

91

13,33

4

100

89

11,00

5 1

99 89

86 72

13,13 19,10

2 3

91

65

28,57

102

85

16,67

4

103

81

21,36

5 1

125 97

84 82

32,80 15,46

2 3

86

50

41,86

66 70

15,38

4

78 82

5 1

126 66

72 62

42,86 6,06

2 3

40

35

12,50

60

51

15,00

4

70

60

14,29

5

63

58

7,94

93

Rerata % PI ± SE

17,14

12,21

23,70

26,04

14,63

11,16

18,05 ± 2,98


Preparat

Kulit Repetisi 1

I

II


III

IV

V


2 3

89

70

21,35

80

69

13,75

4

99

88

11,11

5 1

99 101

85 90

14,14 10,89

2 3

104

94

9,62

101

85

15,84

4

122

102

16,39

5 1

82 85

73 72

10,98 15,29

2 3

86

76

11,63

56

48

14,29

4

74

60

18,92

5 1

82 83

67 66

18,29 20,48

2 3

70

55

21,43

69

51

26,09

4

88

75

14,77

5 1

72 105

60 93

16,67 11,43

2 3

98

86

12,24

83

73

12,05

4

83

73

12,05

5

69

62

10,14

94

Rerata % PI ± SE

13,92

12,74

15,68

19,89

11,58

14,76 ± 1,45


95

Lampiran 9. Hasil analisi statistik perhitungan rata-rata jumlah sel-sel neutrofil pada masing-masing kelompok. Descriptives

Perlakuan Neutrofil KONTROL NEGATIF

Statistic Mean

111,3600

95% Confidence

Lower

Interval for Mean

Bound Upper

Std. Error 6,98467

91,9675

130,7525

Bound 5% Trimmed Mean

111,6111

Median

113,8000

Variance

243,928

Std. Deviation

KONTROL BIOCREAM

15,61819

Minimum

87,80

Maximum

130,40

Range

42,60

Interquartile Range

26,30

Skewness

-,656

,913

Kurtosis

1,268

2,000

109,3200

13,26689

Mean 95% Confidence

Lower

Interval for Mean

Bound Upper

72,4852

146,1548


107,9000

Median

92,8000

Variance

880,052

Std. Deviation

29,66567


Minimum

87,60

Maximum

156,60

Range

69,00

Interquartile Range

50,30

Skewness

1,340

,913

,846

2,000

67,6800

7,50109

Kurtosis KONTROL POSITIF

96

Mean 95% Confidence

Lower

Interval for Mean

Bound Upper

46,8536

88,5064


67,1778

Median

60,4000

Variance

281,332

Std. Deviation

16,77295

Minimum

53,60

Maximum

90,80

Range

37,20

Interquartile Range

31,60

Skewness Kurtosis EC KONSENTRASI

Mean

1,67%

95% Confidence

Lower

Interval for Mean

Bound Upper

,732

,913

-1,895

2,000

70,4400

5,04476

56,4335

84,4465


70,2778

Median

73,2000

Variance

127,248

Std. Deviation

11,28043

Minimum

57,60

Maximum

86,20

Range

28,60

Interquartile Range

20,30

Skewness Kurtosis

,337

,913

-,656

2,000


EC KONSENTRASI

Mean

55,8400

2,5%

95% Confidence

Lower

Interval for Mean

Bound Upper

97

4,97771

42,0197

69,6603


55,8889

Median

58,2000

Variance

123,888

Std. Deviation

11,13050

Minimum

41,80

Maximum

69,00

Range

27,20

Interquartile Range

21,30

Skewness

-,223

,913

-1,786

2,000

43,2800

3,89749

Kurtosis EC KONSENTRASI

Mean

3,75%

95% Confidence

Lower

Interval for Mean

Bound Upper

32,4588

54,1012


42,8889

Median

40,6000

Variance Std. Deviation

75,952 8,71504

Minimum

35,40

Maximum

58,20

Range

22,80

Interquartile Range

12,50

Skewness

1,748

,913

Kurtosis

3,610

2,000


98

Lampiran 10. Hasil analisis statistic uji normalitas dengan uji Shapiro-Wilk Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Statistic Neutrofil

df

,139

Shapiro-Wilk

Sig. 30

Statistic

,144

df

,937

Sig. 30

,073

a. Lilliefors Significance Correction

Tests of Normality Perlakuan

Kolmogorov-Smirnova Statistic

df

Sig.

Shapiro-Wilk Statistic

df

Sig.

Neutrofil KONTROL NEGATIF

,200

5

,200*

,968

5

,860

KONTROL

,311

5

,128

,813

5

,102

KONTROL POSITIF

,268

5

,200*

,854

5

,207

EC KONSENTRASI

,197

5

,200*

,943

5

,685

,184

5

,200*

,959

5

,798

,349

5

,046

,810

5

,097

BIOCREAM

1,67% EC KONSENTRASI 2,5% EC KONSENTRASI 3,75% a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. *. EC : Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L.


99

Perlakuan Case Processing Summary Perlakuan

Cases Valid N

Neutrofil KONTROL NEGATIF

Missing

Percent

N

Total

Percent

N

Percent

5

100,0%

0

,0%

5

100,0%

KONTROL BIOCREAM

5

100,0%

0

,0%

5

100,0%

KONTROL POSITIF

5

100,0%

0

,0%

5

100,0%

EC KONSENTRASI

5

100,0%

0

,0%

5

100,0%

5

100,0%

0

,0%

5

100,0%

5

100,0%

0

,0%

5

100,0%

F

Sig.

1,67% EC KONSENTRASI 2,5% EC KONSENTRASI 3,75%

Lampiran 11. Hasil pengujian ANOVA

Oneway Test of Homogeneity of Variances Neutrofil Levene Statistic 2,835

df1

df2 5

Sig. 24

,038

ANOVA Neutrofil Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

Mean Square

19685,488

5

3937,098

6929,600

24

288,733

26615,088

29

13,636

,000


100

Lampiran 12. Hasil pengujian uji Post-Hoct dengan uji Scheffe

Multiple Comparisons Neutrofil Scheffe (I) Perlakuan

(J) Perlakuan

95% Confidence Interval

Mean Difference

Lower

Upper

Sig.

Bound

Bound

2,04000 10,74678

1,000

-36,8617

40,9417

43,68000* 10,74678

,021

4,7783

82,5817

40,92000* 10,74678

,035

2,0183

79,8217

55,52000* 10,74678

,002

16,6183

94,4217

68,08000* 10,74678

,000

29,1783

106,9817

-2,04000 10,74678

1,000

-40,9417

36,8617

41,64000* 10,74678

,030

2,7383

80,5417

38,88000 10,74678

,050

-,0217

77,7817

53,48000* 10,74678

,003

14,5783

92,3817

66,04000* 10,74678

,000

27,1383

104,9417

-43,68000* 10,74678

,021

-82,5817

-4,7783

(I-J) KONTROL

KONTROL

NEGATIF

BIOCREAM KONTROL

Std. Error

POSITIF EC KONSENTRASI 1,67% EC KONSENTRASI 2,5% EC KONSENTRASI 3,75% KONTROL

KONTROL

BIOCREAM

NEGATIF KONTROL POSITIF EC KONSENTRASI 1,67% EC KONSENTRASI 2,5% EC KONSENTRASI 3,75%

KONTROL

KONTROL

POSITIF

NEGATIF


KONTROL

101

-41,64000* 10,74678

,030

-80,5417

-2,7383

-2,76000 10,74678

1,000

-41,6617

36,1417

11,84000 10,74678

,939

-27,0617

50,7417

24,40000 10,74678

,422

-14,5017

63,3017

-40,92000* 10,74678

,035

-79,8217

-2,0183

-38,88000 10,74678

,050

-77,7817

,0217

2,76000 10,74678

1,000

-36,1417

41,6617

14,60000 10,74678

,865

-24,3017

53,5017

27,16000 10,74678

,306

-11,7417

66,0617

-55,52000* 10,74678

,002

-94,4217

-16,6183

-53,48000* 10,74678

,003

-92,3817

-14,5783

-11,84000 10,74678

,939

-50,7417

27,0617

-14,60000 10,74678

,865

-53,5017

24,3017

12,56000 10,74678

,923

-26,3417

51,4617

-68,08000* 10,74678

,000 -106,9817

-29,1783

-66,04000* 10,74678

,000 -104,9417

-27,1383

BIOCREAM EC KONSENTRASI 1,67% EC KONSENTRASI 2,5% EC KONSENTRASI 3,75% EC

KONTROL

KONSENTRASI

NEGATIF

1,67%

KONTROL BIOCREAM KONTROL POSITIF EC KONSENTRASI 2,5% EC KONSENTRASI 3,75%

EC

KONTROL

KONSENTRASI

NEGATIF

2,5%

KONTROL BIOCREAM KONTROL POSITIF EC KONSENTRASI 1,67% EC KONSENTRASI 3,75%

EC

KONTROL

KONSENTRASI

NEGATIF

3,75%

KONTROL BIOCREAM


KONTROL

102

-24,40000 10,74678

,422

-63,3017

14,5017

-27,16000 10,74678

,306

-66,0617

11,7417

-12,56000 10,74678

,923

-51,4617

26,3417

POSITIF EC KONSENTRASI 1,67% EC KONSENTRASI 2,5% *. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Homogeneous Subsets

Neutrofil Scheffea Perlakuan

Subset for alpha = 0.05 N

1

2

EC KONSENTRASI 3,75%

5

43,2800

EC KONSENTRASI 2,5%

5

55,8400

KONTROL POSITIF

5

67,6800


5

70,4400

KONTROL BIOCREAM

5

KONTROL NEGATIF

5

Sig.

70,4400 109,3200

109,3200 111,3600

,306

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5,000.

3

,050

1,000


103

Lampiran 13. Perhitungan persen penghambatan inflamasi ekspresi COX-2

Case Processing Summary Cases Valid N

Missing

Percent

PersenPI

30

N

Total

Percent

100,0%

0

N

,0%

Percent 30

100,0%

Descriptives Statistic PersenPI

Mean

21,2383

95% Confidence Interval for

Lower Bound

11,4640

Mean

Upper Bound

31,0127

5% Trimmed Mean

19,2069

Median

13,0800

Variance

685,197

Std. Deviation

Std. Error 4,77911

26,17627

Minimum

,89

Maximum

78,48

Range

77,59

Interquartile Range

18,65

Skewness

1,588

,427

Kurtosis

1,069

,833

Lampiran 14. Hasil uji normalitas dengan Shapiro-Wilk

Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Statistic PersenPI

,296

Df

Shapiro-Wilk

Sig. 30

a. Lilliefors Significance Correction

,000

Statistic ,687

df

Sig. 30

,000


104

Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova

Perlakuan

Statistic PersenPI KONTROL NEGATIF

df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

df

Sig.

,356

5

,037

,717

5

,014

KONTROL BIOCREAM

,213

5

,200*

,925

5

,562

KONTROL POSITIF

,365

5

,028

,820

5

,116

EC KONSENTRASI

,213

5

,200*

,947

5

,719

,209

5

,200*

,900

5

,410

,202

5

,200*

,924

5

,553

1,67% EC KONSENTRASI 2,5% EC KONSENTRASI 3,75% a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. *. EC : Ekstrak Etanol Daun Cassia fistula L.

Perlakuan Case Processing Summary Perlakuan

Cases Valid N

Percent

Missing N

Total

Percent

N

Percent

PersenP KONTROL NEGATIF

5

100,0%

0

,0%

5

100,0%

I

5

100,0%

0

,0%

5

100,0%

KONTROL POSITIF

5

100,0%

0

,0%

5

100,0%

EC KONSENTRASI

5

100,0%

0

,0%

5

100,0%

5

100,0%

0

,0%

5

100,0%

5

100,0%

0

,0%

5

100,0%

KONTROL BIOCREAM

1,67% EC KONSENTRASI 2,5% EC KONSENTRASI 3,75%


105

Lampiran 15. Hasil perhitungan rata-rata persen penghambatan inflamasi penekanan ekspresi COX-2 pada masing-masing perlakuan

Descriptives Perlakuan

Std. Statistic

Persen

KONTROL NEGATIF

Mean

98,5520

ekspresi

95% Confidence

Lower Bound

97,5115

COX-2

Interval for Mean

Upper Bound

99,5925

5% Trimmed Mean

98,6028

Median

98,9400

Variance

,37477

,702

Std. Deviation

,83802

Minimum

97,08

Maximum

99,11

Range

2,03

Interquartile Range

1,16

Skewness Kurtosis

-2,045

,913

4,274

2,000

97,9820

,22051

KONTROL

Mean

BIOCREAM

95% Confidence

Lower Bound

97,3698

Interval for Mean

Upper Bound

98,5942

5% Trimmed Mean

97,9944

Median

98,0100

Variance

,243

Std. Deviation

,49307

Minimum

97,28

Maximum

98,46

Range

1,18

Interquartile Range

KONTROL POSITIF

Error

,93

Skewness

-,580

,913

Kurtosis

-,909

2,000

23,3960

,88520

Mean 95% Confidence

Lower Bound

20,9383

Interval for Mean

Upper Bound

25,8537


5% Trimmed Mean

23,3133

Median

22,9800

Variance

106

3,918

Std. Deviation

1,97938

Minimum

21,52

Maximum

26,76

Range

5,24

Interquartile Range

2,83

Skewness

1,663

,913

Kurtosis

3,466

2,000

85,4520

,85165

EC KONSENTRASI

Mean

1,67%

95% Confidence

Lower Bound

83,0874

Interval for Mean

Upper Bound

87,8166

5% Trimmed Mean

85,4628

Median

86,0000

Variance

3,627

Std. Deviation

1,90436

Minimum

83,04

Maximum

87,67

Range

4,63

Interquartile Range

3,62

Skewness Kurtosis

-,288

,913

-1,862

2,000

EC KONSENTRASI

Mean

81,9500 2,98470

2,5%

95% Confidence

Lower Bound

73,6632

Interval for Mean

Upper Bound

90,2368

5% Trimmed Mean

82,0111

Median

82,8600

Variance Std. Deviation

44,542 6,67399

Minimum

73,96

Maximum

88,84

Range

14,88

Interquartile Range

13,19

Skewness

-,229

,913


Kurtosis

-2,637

EC KONSENTRASI

Mean

3,75%

95% Confidence

Lower Bound

81,2116

Interval for Mean

Upper Bound

89,2644 85,3461

Median

86,0800

Variance

10,515

Std. Deviation

3,24275

Minimum

80,11

Maximum

88,42

Range

8,31

Interquartile Range

5,63

Skewness Kurtosis

-1,155

,913

1,179

2,000

Lampiran 16. Hasil pengujian Kruskal-Wallis

Descriptive Statistics Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

PersenPI

30

21,2383

26,17627

,89

78,48

Perlakuan

30

3,5000

1,73702

1,00

6,00

Kruskal-Wallis Test Ranks Perlakuan PersenPI

N

Mean Rank

KONTROL NEGATIF

5

4,00

KONTROL BIOCREAM

5

7,00

KONTROL POSITIF

5

28,00


5

17,80

EC KONSENTRASI 2,5%

5

19,00


5

17,20

Total

2,000

85,2380 1,45020

5% Trimmed Mean

N

107

30


Test Statisticsa,b

PersenPI Chi-square

24,592

Df

5

Asymp. Sig.

,000

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Perlakuan

Lampiran 17. Hasil pengujian Mann-Whitney Test

Ranks

Perlakuan PersenPI

N

Mean Rank

Sum of Ranks

KONTROL NEGATIF

5

4,00

20,00

KONTROL BIOCREAM

5

7,00

35,00

Total

10

108


109

Test Statisticsb

PersenPI Mann-Whitney U

5,000

Wilcoxon W

20,000

Z

-1,567

Asymp. Sig. (2-tailed)

,117

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

,151a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan

Ranks Perlakuan PersenPI

N

Mean Rank

Sum of Ranks

KONTROL NEGATIF

5

3,00

15,00

KONTROL POSITIF

5

8,00

40,00

Total

10

Test Statisticsb PersenPI Mann-Whitney U

,000

Wilcoxon W

15,000

Z

-2,611

Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan

,009 ,008a



N

Mean Rank

Sum of Ranks

KONTROL NEGATIF

5

3,00

15,00


5

8,00

40,00

Total

10


,000

Wilcoxon W

15,000

Z

-2,611


,009 ,008a

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan


N

Mean Rank

Sum of Ranks

KONTROL NEGATIF

5

3,00

15,00

EC KONSENTRASI 2,5%

5

8,00

40,00

Total

10


,000

Wilcoxon W

15,000

Z

-2,611


,009 ,008a

110



N

Mean Rank

Sum of Ranks

KONTROL NEGATIF

5

3,00

15,00


5

8,00

40,00

Total

10


,000

Wilcoxon W

15,000

Z

-2,611


,009 ,008a



N

Mean Rank

Sum of Ranks

KONTROL BIOCREAM

5

3,00

15,00

KONTROL POSITIF

5

8,00

40,00

Total

10


,000

Wilcoxon W

15,000

Z

-2,611


,009 ,008a

111



N

Mean Rank

Sum of Ranks

KONTROL BIOCREAM

5

3,00

15,00


5

8,00

40,00

Total

10


,000

Wilcoxon W

15,000

Z

-2,611


,009 ,008a



N

Mean Rank

Sum of Ranks

KONTROL BIOCREAM

5

3,00

15,00

EC KONSENTRASI 2,5%

5

8,00

40,00

Total

10


,000

Wilcoxon W

15,000

Z

-2,611


,009 ,008a

112



N

Mean Rank

Sum of Ranks

KONTROL BIOCREAM

5

3,00

15,00


5

8,00

40,00

Total

10


,000

Wilcoxon W

15,000

Z

-2,611


,009 ,008a



N

Mean Rank

Sum of Ranks

KONTROL POSITIF

5

8,00

40,00


5

3,00

15,00

Total

10


,000

Wilcoxon W

15,000

Z

-2,611


,009 ,008a

113



N

Mean Rank

Sum of Ranks

KONTROL POSITIF

5

8,00

40,00

EC KONSENTRASI 2,5%

5

3,00

15,00

Total

10


,000

Wilcoxon W

15,000

Z

-2,611


,009 ,008a



N

Mean Rank

Sum of Ranks

KONTROL POSITIF

5

8,00

40,00


5

3,00

15,00

Total

10


,000

Wilcoxon W

15,000

Z

-2,611


,009 ,008a

114



N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

5,00

25,00

EC KONSENTRASI 2,5%

5

6,00

30,00

Total

10


10,000

Wilcoxon W

25,000

Z

-,522


,602 ,690a



N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

5,80

29,00


5

5,20

26,00

Total

10


11,000

Wilcoxon W

26,000

Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan

-,313 ,754 ,841a

115



N

Mean Rank

Sum of Ranks

EC KONSENTRASI 2,5%

5

6,00

30,00


5

5,00

25,00

Total

10


10,000

Wilcoxon W

25,000

Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan

-,522 ,602 ,690a

116


117

Biografi Penulis

Penulis

skripsi

dengan

judul

“Uji

Efek

Antiinflamasi Ekstrak Etanol Daun Trengguli (Cassia fistula L.) Secara Topikal Terhadap Neutrofil dan Siklooksigenase-2 (COX-2) Pada Mencit Terinduksi Karagenin” memiliki nama lengkap Rury Henggar Tyas Utami, merupakan putri tunggal dalam keluarga Bapak Tri Rudi Yuwono dan Ibu Ery Purwaningtyas, S.Pd. Penulis dilahirkan di Jawa Timur tepatnya di Kediri pada 23 Juli 1994. Pendidikan formal yang telah ditempuh yaitu mengawali masa pendidikan di TK Dharma Wanita Kediri (1998-2000), kemudian penulis melanjutkan pendidikan Sekolah Dasar (SD) di SD N Banjaran II Kediri (2000-2006). Pendidikan Tingkat Lanjutan Pertama (SLTP) ditempuh penulis di SMP Katolik Santa Maria Kediri (2006-2009), kemudian melanjutkan pendidikan tingkat menengah atas di SMA N 8 Kediri (2009-2012). Penulis kemudian melanjutkan pendidikan sarjana farmasi di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2012. Selama masa studi, penulis pernah mengikuti beberapa kegiatan seperti menjadi panitia paskah sebagai sie liturgi (2013), panitia Ekaristi Kaum Muda “If We Hold On Together” sebagai koordinator sie liturgi (2014). Penulis juga pernah terlibat dalam kegiatan Program Kreativitas Mahasiswa dalam bidang pengabdian masyarakat (PKM-M) dengan judul “Sosialisasi Dan Edukasi Akan Bahaya Hipertensi Melalui Metode PENGANTEN (Pengenalan Hidangan Anti-Hipertensi)” (2015).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents