PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

AKTIVITAS ANTIMIKROBA FRAKSI PETROLEUM ETER, KLOROFORM, ETANOL BUNGA PULU (Chartamus tinctorius L.) TERHADAP Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans

SKRIPSI Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh :

Hermawan Deny Prasetyo NIM : 098114036

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013


AKTIVITAS ANTIMIKROBA FRAKSI PETROLEUM ETER, KLOROFORM, ETANOL BUNGA PULU (Chartamus tinctorius L.) TERHADAP Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans

SKRIPSI Diajukan Untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh Hermawan Deny Prasetyo NIM : 098114036

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013

i


30 Mei 2013

ii


31 Mei 2013

iii


Kupersembahkan karya kecilku untuk Ayah Ibuku, serta orang-orang yang hidup dengan cinta dan mencintai hidupnya dan Almamaterku

iv


LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi yang saya tulis ini tidak memuat karya orang lain, kecuali yang telah disebutkan dalam kutipan dan daftar pustaka, sebagaimana layaknya karya ilmiah.

Yogyakarta, 11 Maret 2013 Penulis,

Hermawan Deny Prasetyo

v


LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS Yang bertanda tangan dibawah ini, saya mahasiswa Universitas Sanata Dharma: nama : Hermawan Deny Prasetyo nomor mahasiswa : 098114036 Demi pengembangan ilmu pengetahuan, saya memberikan kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma karya ilmiah saya yang berjudul: AKTIVITAS ANTIMIKROBA FRAKSI PETROLEUM ETER, KLOROFORM, ETANOL BUNGA PULU (Chartamus tinctorius L.) TERHADAP Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans. beserta perangkat yang diperlukan (bila ada). Dengan demikian saya memberikan kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma hak untuk menyimpan, mengalihkan dalam bentuk media lain, mengelolanya dalam bentuk pangkalan data, mendistribusikannya secara terbatas, dan mempublikasikannya di internet atau media lain untuk kepentingan akademis tanpa perlu meminta izin kepada saya maupun memberikan royalti kepada saya selama tetap mencantumkan nama saya sebagai penulis. Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya.

Dibuat di Yogyakarta Pada tanggal : 23 Mei 2013 Yang Menyatakan

Hermawan Deny Prasetyo

vi


KATA PENGANTAR Puji syukur kehadirat Allah atas rahmat dan hidayahNya sehingga pada akhirnya penulis dapat menyelesaikan penyusunan skripsi dengan judul “Aktivitas Antimikroba Fraksi Petroleum Eter, Kloroform, Etanol Bunga Pulu (Chartamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans”. Penyusunan skripsi ini sebagai syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi Program Studi Farmasi Universitas Sanata Dharma. Perjuangan panjang dalam penyusunan skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan dan kerja sama berbagai pihak. Oleh karena itu, penulis ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada: 1. Bapak dan Ibu tercinta, Harya Adi Setiawan dan Sumarsih atas kesabaran dan kepercayaan, tulusnya doa dan kasih sayang, dukungan moral dan materi, serta semangat yang selali mengiringi langkahku. 2. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. Selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. 3. Ibu Agustina Setiawati M.Sc., Apt. selaku Dosen Pembimbing yang telah meluangkan waktunya untuk memberikan bimbingan, dukungan moril, pengarahan, evaluasi dan saran mulai penyusunan proposal hingga skripsi ini selesai. 4. Bapak Yohanes Dwiatmaka M. Si. dan Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt. selaku Dosen Penguji yang telah meluangkan waktunya untuk memberikan bimbingan, pengarahan dan saran baik langsung ataupun tidak.

vii


5. Ibu Rini Dwiastuti selaku dosen pembimbing akademik yang telah begitu perhatian, terima kasih atas saran, masukan dan petuah yang sangat berarti baik itu menunjang akademik maupun kepribadian saya. 6. Ibu Maria Dwi Jumpowati, S.Si yang telah bersedia meluangkan waktu untuk berdiskusi, memberi semangat serta masukan kepada penulis. 7. Teman-teman IA1 SMAN I Kolaka yang telah banyak mengisi cerita hidup. 8. Teman-teman seperjuanganku : Wanda Indriani W., Johanes Putra W., Bernadeta Arum W., terimaksih untuk doa, kerjasama, dan dukungannya. 9. Seluruh laboran dari lantai satu sampai empat, terutama Mas Wagiran, Mas Sigit, Pak Mukmin yang telah banyak membantu selama penelitian sampai skripsi dapat diselesaikan. 10. Teman-teman kelas A FSM 2009 untuk kebersamaan dan dukungannya. 11. Teman-teman KKN Kelompok 20 XLIV: Victor, Evy Feny Veronika, Maria Sukma, Agustin Nugroho, Fenny, Elsa Ridho terimakasih untuk pelajaran hidup yang berharga, canda tawa dan kebersamaan kita. 12. Semua pihak yang telah membantu dan mendukung penulis dari awal sampai skripsi ini selesai yang tidak dapat disebutkan satu persatu. Penulis menyadari bahwa penelitian dan penyusunan skripsi ini jauh dari kesempurnaan dan masih memerlukan kritik dan saran yang membangun dari segi manapun. Akhir kata, penulis berharap hasil penelitian ini bermanfaat dikemudian hari.

Penulis

viii


DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING

ii

HALAMAN PENGESAHAN

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN

iv

LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA

v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS

vi

KATA PENGANTAR

vii

DAFTAR ISI

ix

DAFTAR TABEL

xii

DAFTAR GAMBAR

xiii

DAFTAR LAMPIRAN

xiv

INTISARI

xvi

ABSTRACT

xvii

BAB I. PENGANTAR

1

A. Latar Belakang

1

1. Permasalahan

2

2. Keaslian penelitian

3

3. Manfaat penelitian

4

B. Tujuan Peneltian

4

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA

5

A. Bunga Pulu

5

1. Klasifikasi

5

2. Uraian tanaman

5

3. Kandungan kimia

6

4. Sifat kimiawi dan aktivitas farmakologi

6

B. Staphylococcus aureus

7

ix


1. Struktur Antigen

8

2. Toksin dan enzim

9

3. Patogrnesis dan patologi

10

C. Escherechia coli

11

1. Struktur antigen

11

2. Patogenesis dan tanda klinis

12

D. Candida albicans

15

1. Struktur fisik

16

2. Patogenesis

17

E. Ekstraksi Bertingkat

.

18

F. Maserasi

18

G. Kromatografi Lapis Tipis

19

H. Minyak Atsiri

20

I. Flavonoid

22

J. Metode Pengujian Aktivitas Antimikroba

24

1. Metode dilusi

24

2. Metode difusi

24

K. Landasan Teori

25

L. Hipotesis

25

BAB III. METODOLOGI PENELITIAN

26

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

26

B. Variabel dan Definisi Operasional

26

1. Variabel penelitian

26

2. Definisi operasional

27

C. Bahan dan Alat Penelitian

27

1. Bahan

27

2. Alat

28

D. Tata Cara Penelitian

28

1. Determinasi bunga pulu

28

x


2. Pengumpulan bahan

29

3. Pengeringan dan pembuatan serbuk

29

4. Ekstraksi bertingkat serbuk bunga pulu

29

5. Pengujian potensi antimikroba

30

6. Identifikasi kandungan senyawa bunga pulu dengan uji tabung

33

E. Kromatografi Lapis Tipis (Uji Penegasan Flavonoid)

36

F. Kromatografi Lapis Tipis (Uji Penegasan Minyak Atsiri)

36

G. Analisis Hasil

37

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN

38

A. Determinasi Tanaman

38

B. Hasil Pengumpulan dan Pembersihan

38

C. Hasil Pengeringan

38

D. Hasil Penyarian Serbuk

40

E. Uji Aktivitas Antimikroba Fraksi Petroleum Eter, Kloroform, Etanol Bunga Pulu terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans dengan Metode Difusi

41

F. Skrining Fitokimia

45

1. Uji tabung

46

2. Uji kualitatif secara kromatografi lapis tipis

51

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN

58

DAFTAR PUSTAKA

59

LAMPIRAN

63

BIOGRAFI PENULIS

84

xi


DAFTAR TABEL Halaman Tabel I.

Pembuatan variasi konsentrasi uji

31

Tabel II.

Hasil maserasi serbuk bunga pulu

39

Tabel III. Kepolaran relatif pelarut organik

40

Tabel IV. Diameter zona hambat fraksi petroleum eter bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus,Escherechia coli dan Candida albicans 43 Tabel V. Diameter Zona Hambat fraksi kloroform bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus,Escherechia coli dan Candida albicans 43 Tabel VI.

Diameter zona hambat fraksi etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus,Escherechia coli dan Candida albicans

44

Tabel VII. Hasil Pengamatan uji tabung terhadap serbuk bunga pulu

46

Tabel VIII. Nilai Rf dan warna bercak pada uji KLT dengan fase diam selulosa dan fase gerak n-butanol - asam asetat glasial - air (4:1:5)v/v dan pembanding rutin 0,05% untuk analisis flavonoid

53

Tabel IX. Nilai Rf dan warna bercak pada uji KLT dengan fase diam silika gel dan fase gerak toluen - etil asetat (93:7) v/v dan pembanding terpenoid untuk analisis minyak atsiri 55

xii


DAFTAR GAMBAR Halaman

Gambar 1. Bunga Pulu....................................................................................

5

Gambar 2. Staphylococcus aureus..................................................................

7

Gambar 3. Escherecia coli pada media LA, Inkubasi 370C...........................

11

Gambar 4. Mikrograf Fluoresensi Candida albicans dewasa........................

15

Gambar 5. Rumus Bangun Carvacrol............................................................

21

Gambar 6. Rumus Bangun Flavon.................................................................

22

Gambar 7. Reaksi antara NaCl dengan senyawa fenolik................................

48

Gambar 8. Reaksi antara senyawa fenolik dengan FeCl3...............................

50

Gambar 9. Interaksi Flavonoid dengan CaSO4 membentuk kompleks khelat

52

Gambar 10. Hasil Uji KLT Flavonoid............................................................. 52 Gambar 11. Reaksi Flavonoid dengan NH3...................................................

54

Gambar 12. Hasil Uji KLT Minyak Atsiri......................................................

55

xiii


DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Surat Keterangan Selesai Melakukan Determinasi

63

Lampiran 2. Sertifikat Hasil Uji Staphylococcus aureus ATCC 25923

64

Lampiran 3. Sertifikat Hasil Uji Escherichia coli ATCC 32518

65

Lampiran 4. Sertifikat Hasil Uji Candida albicans ATCC 10231

66

Lampiran 5. Foto Tanaman Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) dan Serbuk Bunga Pulu

67

Lampiran 6. Foto Maserasi, Penguapan Menggunakan Rotaevaporator, Variasi Konsentrasi Fraksi Etanol, Fraksi Kloroform, Fraksi Petroleum eter

68

Lampiran 7. Foto Hasil Uji Pendahuluan Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) dengan uji tabung

71

Lampiran 8. Foto Hasil Uji Alkaloid Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) dengan Uji Tabung

71

Lampiran 9. Foto Hasil Uji Antrakinon Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) dengan Uji Tabung

72

Lampiran 10. Foto Hasil Uji Polifenol Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) dengan Uji Tabung

72

Lampiran 11. Foto Hasil Uji Tanin Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) dengan Uji Tabung

73

Lampiran 12. Foto Hasil Uji Saponin Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) dengan Uji Tabung

73

Lampiran 13. Foto Hasil KLT Fraksi Metanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) dengan Deteksi UV 254, UV 365, dan Uap Amonia pada Analisis Flavonoid

74

Lampiran 14. Foto Hasil KLT Fraksi Metanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) dengan Deteksi UV 254, UV 365, dan Vanilin-Asam Sulfat pada Analisis Minyak Atsiri

75

xiv


Lampiran 15. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Petroleum Eter terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dengan Metode Difusi Sumuran

76

Lampiran 16. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Kloroform terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dengan Metode Difusi Sumuran

76

Lampiran 17. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Etanol terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dengan Metode Difusi Sumuran

77

Lampiran 18. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Petroleum Eter terhadap Escherichia coli ATCC 32518 dengan Metode Difusi Sumuran

77

Lampiran 19. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Kloroform terhadap Escherichia coli ATCC 32518 dengan Metode Difusi Sumuran

78

Lampiran 20. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Etanol terhadap Escherichia coli ATCC 32518 dengan Metode Difusi Sumuran

78

Lampiran 21. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Petroleum Eter terhadap Candida albicans ATCC 10231 dengan Metode Difusi Sumuran

79

Lampiran 22. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Kloroform terhadap Candida albicans ATCC 10231 dengan Metode Difusi Sumuran

79

Lampiran 23. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Etanol terhadap Candida albicans ATCC 10231 dengan Metode Difusi Sumuran

80

Lampiran 24. Foto Kontrol Media dan Pertumbuhan Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans

80

Lampiran 25. Foto Kemampuan Difusi Fraksi Petroleum Eter, Kloroform, Etanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) pada Media Agar

xv

83


INTISARI Bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) merupakan tanaman obat yang secara empiris digunakan untuk mengatasi kolesterol tinggi, angina pectoris, dan berbagai penyakit lainnya. Kandungan dari Carthamus tinctorius L. ialah flavonoid yang terdiri dari chalcones, carthamin, carthamone, lignin, linalool, carvacrol,dan thymol. Profil resistensi antibiotik terus berkembang terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans. Perlu dilakukan eksplorasi aktivitas antimikroba dari bunga pulu terhadap bakteri atau fungi tersebut untuk menemukan agen antimikroba alternatif yang lebih poten. Penelitian ini termasuk penelitian eksperimental murni rancangan acak lengkap pola satu arah. Ekstraksi bertingkat bunga pulu dilakukan menggunakan pelarut petroleum eter, kloroform, dan etanol menggunakan metode maserasi. Uji aktivitas antimikroba menggunakan metode difusi sumuran, dilanjutkan metode dilusi padat untuk mengetahui Kadar Hambat Minimal (KHM) dan Kadar Bunuh Minimum (KBM). Serbuk bunga pulu kemudian diuji secara kualitatif untuk mengidentifikasi kandungan senyawanya. Data zona hambat yang diperoleh kemudian dianalisis secara deskriptif komparatif. Hasil penelitian menunjukkan fraksi petroleum eter, kloroform, etanol tidak memiliki aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli, Candida albicans. Kandungan senyawa aktif hasil uji KLT diperkirakan adalah flavonoid, senyawa fenolik dan minyak atsiri. Kata kunci : Aktivitas antimikroba, Bunga pulu (Carthamus tinctorius L.), Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida albicans

xvi


ABSTRACT Pulu flower (Carthamus tinctorius L.) is a medicinal plant, that is empirically used to treat high cholesterol, angina pectoris, and other disease. Constituents of Carthamus tinctorius L. is flavonoid such as chalcones, carthamin, carthamone, lignin, linalool, carvacrol,and thymol Profil of antibiotic resistance is growing among Staphylococcus aureus, Escherechia coli, and Candida albicans. Need some exploration of antimicrobial activity Pulu flower towards bacterial or fungi, to discover alternative antimicrobial agents are potently. This research is purely experimental, completely randomized design. Terraced extraction pulu flower perfomed using petroleum ether, chloroform, and ethanol using material method. Antimcrobial activity test using diffusion method, followed by dense dilution method to determine the Minimal Inhibitory Concentration (MIC) and Minimal Bactericidal Concentration (MBC). The data then tested qualitatively to identify the content of the active compound. The result was analysed using comparative-descriptive analysing method. The result showed petroleum ether, chloroform, and ethanol extract does not have antimicrobial activity againts Staphylococcus aureus, Escherechia coli, and Candida albicans. The content of active compound predicted with TLC assay are flavonoids and essential oil (Carvacrol). Keyword : Antimcrobial Activity, Pulu Flower (Carthamus tinctorius L.) Escherechia coli, Candida albicans, Staphylococcus aureus.

xvii


BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Penyakit infeksi merupakan salah satu masalah dalam bidang kesehatan yang dari waktu ke waktu dan terus berkembang dan pada tahun 2002, sebanyak 14,9 juta manusia meninggal akibat penyakit infeksi. Penyakit infeksi kulit, demam, dan sakit perut merupakan penyakit yang banyak dijumpai dimasyarakat. Penyakit tersebut antara lain disebabkan oleh bakteri Staphylococcus aureus (10.460 kasus), Escherichia coli (7.632 kasus) dan jamur. Jamur yang paling menginfeksi manusia adalah jamur oportunistik. Salah satu agen jamur yang ditemui dengan frekuensi terbesar adalah Candida albicans dengan jumlah 7.808 kasus di Amerika Serikat (Madigan, Martinko, Dunlap, Clark, 2009). Sejak satu dekade terakhir, telah terjadi perubahan profil resistensi antibiotik.

Penisilinase

menyebabkan

resistensi

hampir

disemua

strain

Staphylococcus hingga 4,8% pada tahun 2007 (Sudibyo, Rohmawati, Munira, Febriana, Radiono, Suswanto, 2008). Resistensi E. coli terjadi peningkatan 0,59 %/tahun pada amoksisilin (Tadesse, Zhao, Tong, Ayers, Singh, Bartholommew, dkk., 2002). Biofilm Candida albicans resisten terhadap delapan senyawa antifungal diantaranya ialah ketokonazol (Safina, 2011). Seiring dengan meningkatnya resistensi bakteri harus diimbangi dengan penemuan obat baru. Hal ini mendorong usaha penemuan agen antimikroba alternatif yang lebih poten, memiliki efek samping yang lebih kecil, dan tersedia terus-menerus sehingga penyakit infeksi bisa diatasi.

1


2

Bunga pulu atau kasumba turatea (Carthamus tinctorius L.) dalam bahasa Bugis digunakan secara empiris untuk menurunkan kolesterol tinggi, mengatasi angina pectoris, tromboangitis, hipertensi, kanker, nyeri haid, dan sakit perut setelah melahirkan (Wijayakusama, 2008). Analisis kimia dari ekstrak bunga pulu mengungkapkan senyawa utama ialah chartamin, chartamone, neo-chartamin, nona-cosane, zat warna kuning saflawer, safflomin A, dipalmitin, adenosid, betasitosterol, dan polisakarida (Wijayakusuma, 2008a). Analisis minyak atsiri bunga pulu ditemukan thymol, carvacrol, linalool, dan eugenol (Ziarati, Asgarpanah, Klanifard, 2012). Beberapa senyawa tersebut berpotensi mempunyai aktivitas antimikroba (Nostro dan Papalia, 2012); (Akroum, Satta, Lalaoui, 2009). Sehubungan dengan potensi tersebut, maka perlu dilakukan eksplorasi yang merupakan penelitian pendahuluan, untuk mencari bahan alam yang mempunyai kemampuan sebagai antimikroba dari beberapa penyari untuk mempermudah menyari senyawa-senyawa tersebut diatas, berdasarkan kelarutan dan aktivitasnya terhadap Staphylococcus aureus yang mewakili Gram positif, Escherichia coli yang mewakili Gram negatif dan Candida albicans yang mewakili fungi. Setelah diketahui adanya kemampuan sebagai antimikroba pada tanaman ini, tanaman ini dapat dikembangkan sebagai bahan dasar obat antimikroba baru.


3

1. Permasalahan a. Apakah fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu memiliki aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans? b. Berapa Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) dari fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans? c. Golongan senyawa apakah yang terkandung didalam bunga pulu?

2. Keaslian penelitian Pernah dilakukan penelitian mengenai potensi antibakteri ekstrak tanaman Carthamus tinctorius L. pada Propionibacterium acne and Staphylococcus epidermidis (Chomnawang, Surassmo, Nukoolkam, Gritsanapan, 2005). Selain itu, pernah dilakukan pengujian ekstrak metanol dan air panas pada tanaman Carthamus tinctorius pada beberapa bakteri diantaranya Staphylococcus aureus (Mothana, Abdo, Hason, Althawab Fasial, Alaghbari, Lindequist, 2008) dan ekstrak metanol, etanol pada campuran bunga dan daun Carthamus tinctorius pada beberapa bakteri (Akroum, Satta, Lalaoui, 2009). Sejauh penelusuran pustaka oleh penulis, penelitian mengenai aktivitas antimikroba fraksi petroleum eter, kloroform, etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans ini berbeda dalam proses ekstraksi, yaitu menggunakan metode ekstraksi bertingkat, dan asal bunga yang digunakan, sehingga penelitian ini belum pernah dilakukan.


4

3. Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis Penelitian ini diharapkan dapat mengembangkan khasanah ilmu pengetahuan khususnya di bidang kesehatan tentang penggunaan bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) yang berkhasiat sebagai antimikroba. b. Manfaat praktis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi tentang manfaat bunga pulu sebagai pengobatan alternatif bagi masyarakat terutama untuk mengobati penyakit yang disebabkan oleh infeksi bakteri dan jamur.

B. Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum Tujuan umum dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antimikroba fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans. 2. Tujuan khusus a. Mengetahui aktivitas antimikroba fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans. b. Mengetahui Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) dari fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans. c. Mengetahui golongan senyawa yang terkandung didalam bunga pulu.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Bunga Pulu 1. Klasifikasi (Birla Institute of Scientific Research, 2010). Kingdom

: Plantae (Tumbuhan)

Divisio

: Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Sub Divisio : Spermatophyta (Tumbuhan berbiji) Classis

: Dicotyledoneae (Tumbuhan berkeping dua)

Ordo

: Asterales

Famili

: Asteraceae

Genus

: Carthamus

Spesies

: Carthamus tinctorius Linn.

Gambar 1. Bunga Pulu (Nagaraj dkk., 2012)

2. Uraian tanaman Bunga pulu merupakan herba tahunan, tanaman bercabang yang tingginya dapat mencapai 0,3 -1,5 m. Tanaman ini memiliki sistem akar yang luas dengan akar tunggang yang kuat berdaging mencapai 2-3 m. Akar lateral mendalam dan tipis masuk

5


6

30 cm kedalam tanah. Batang yang licin, berkayu, silinder dan berwarna kehijauan di dekat pangkalan. Daun diatur dalam roset dari dasar, panjang 4-20 cm dan luas 1-5 cm, hijau tua mengkilap, daun atas menanggung banyak duri tajam. Setiap batang beruang perbungaan terminal. Ini adalah kapitulum bulat, 1,3 -3,5 cm, mengandung 20-80 tabung oranye-merah, bunga menjadi merah tua saat berbunga. Bunga masing-masing menghasilkan satu buah. Buah safflower adalah achenes, biasanya disebut biji, dikelilingi oleh lambung fibrosa tebal yang halus, mengkilap dan runcing sekitar 6-9 mm, berwarna putih atau kecoklatan dan putih dengan abu-abu, cokelat atau garis-garis hitam (Heuze dan Tran, 2011).

3. Kandungan kimia Kandungan dari Carthamus tinctorius L. ialah flavonoid yang terdiri dari chalcones, carthamin, carthamone, dan lignin (Cai, Luo, Sun, Corke, 2003). Analisis

kimia dari ekstrak bunga pulu mengungkapkan konstituen utama ialah chartamin, chartamone, neo-chartamin, nona-cosane, zat warna kuning saflower, safflomin A, dipalmitin, adenosid, beta-sitosterol, dan polisakarida (Wijayakusuma, 2008a). 4. Sifat kimiawi dan aktivitas farmakologi Bunga pulu memiliki rasa pedas dan agak pahit, berbau aromatik, dan bersifat hangat. Bunga pulu dapat meningkatkan sirkulasi darah, mencegah pembekuan darah, peluruh haid (emenagog), pencahar (laxative) dan sebagai stimulan (Wijayakusuma, 2008a).


7

B. Staphylococcus aureus

Gambar 2. Staphylococcus aureus (Stierman, 2012)

Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif, anaerob fakultatif yang tidak membentuk spora, tidak bergerak dinding selnya mengandung peptidoglikan dan asam teikoat. Selnya berbentuk bola dengan diameter kira-kira 1 µm tersusun berkelompok menyerupai buah anggur. Tumbuh paling cepat pada suhu 37 0

C. Staphylococcus aureus relatif tahan terhadap panas (500C selama 30 menit) dan

tahan terhadap natrium klorida 9%, tetapi dapat dihambat zat kimia tertentu (Jawetz, Melnick, Adelberg, 2005). Sifat patogenesis dapat diamati terhadap kemampuan memfermentasi materi secara aerob, kemampuan memecah gelatin, dan menghemolisis darah (Todar, 2012). Staphylococcus aureus membentuk koloni abu-abu hinga kuning emas, karakteristik pertumbuhan dengan menghasilkan katalase, yang membedakan dengan streptokokus, bakteri ini memfermentasi karbohidrat, menghasilkan asam laktat dan tidak menghasilkan gas. Aktifitas proteolitik bervariasi dari satu galur ke galur lain, menyebabkan penyakit pada hampir semua jaringan tubuh yang terutama adalah abses. Bakteri ini merupakan flora normal pada rongga hidung bagian depan, perineum, saluran pencernaan, atau kulit (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005). Staphylococcus aureus dapat menyebabkan penyakit berkat kemampuannya melakukan pembelahan dan menyebar luas ke dalam jaringan dan melalui produksi


8

beberapa bahan ekstraseluler. Beberapa bahan tersebut adalah enzim, yang lain dapat berupa toksin, meskipun fungsinya adalah sebagai enzim. Beberapa toksin berada dibawah kontrol genetik plasmid, beberapa dibawah kontrol kromosom dan yang lain mekanisme kontrol genetiknya belum ditemukan (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005). 1. Struktur antigen Staphylococcus mengandung antigen polisakarida dan protein seperti zat lain yang penting dalam struktur dinding sel. Peptidoglikan, suatu polimer polisakarida yang mengandung subunit-subunit yang bergabung memberikan eksoskeleton yang kaku dari dinding sel. Peptidoglikan dirusak oleh asam kuat atau paparan terhadap lisozim. Infeksi akan merangsang pembentukan interleukin (pirogen endogen) dan antibodi opsonin oleh monosit; dan ini dapat menjadi penarik kimiawi bagi leukosit polimorfonuklear, mempunyai aktivitas seperti endotoksin dan mengaktivasi komplemen (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005). Protein

A

merupakan

komponen

dinding

sel

kebanyakan

galur

Staphylococcus aureus yang bisa mengikat ke bagian Fc molekul IgG kecuali IgG3. Meskipun IgG terikat pada protein A, namun fragmen Fab tetap bisa bebas berikatan dengan antigen spesifik. Protein A telah menjadi reagen yang penting dalam imunologi dan teknologi laboratorium diagnostik. Beberapa galur Staphylococcus aureus mempunyai kapsul yang menghambat fagositosis oleh lekosit polimorfonuklear kecuali jika terdapat antibodi spesifik. Sebagian besar galur Staphylococcus aureus mempunyai koagulase atau faktor penggumpalan pada permukaan dinding sel, ikatan koagulase secara non enzimatik pada fibrinogen, menyebabkan agregasi pada bakteri (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).


9

2. Toksin dan enzim Staphylococcus aureus menghasilkan katalase, yang mengubah hidrogen peroksida menjadi air dan oksigen; koagulase, protein yang menyerupai enzim yang mampu menggumpalkan plasma yang ditambah dengan oksalat atau sitrat dengan adanya suatu faktor yang terdapat dalam serum. Faktor serum bereaksi dengan koagulase untuk membentuk esterase dan aktivitas penggumpalan, dengan cara yang sama ini untuk mengaktivasi protrombin menjadi trombin. Cara kerja koagulase adalah dalam lingkup kaskade penggumpalan plasma normal. Koagulase dapat membentuk fibrin pada permukaan Staphylococcus, ini bisa mengubah ingestinya oleh sel fagositik atau pengrusakannya dalam sel fagosit; eksotoksin, ini meliputi beberapa toksin yang bersifat letal jika disuntikkan pada binatang, menyebabkan nekrosis pada kulit, dan berisi larutan hemolisis yang dapat dipisahkan dengan elektroforesis. Aflatoksin (hemolisin) adalah protein heterogen yang dapat melisiskan eritrosit dan merusak platelet serta dimungkinkan sama dengan faktor dermonekrotik dari eksotoksin; Lekosidin, toksin Staphylococcus aureus ini dapat membunuh sel darah putih pada berbagai binatang. Peran toksin dalam patogenesis tidak jelas, karena Staphylococcus aureus yang patogenik tidak dapat membunuh sel darah putih dan dapat difagositosis efektif seperti yang nonpatogenik; enterotoksin, ada sedikitnya enam (A-F) toksin larut yang dihasilkan oleh hampir 50 % galur Staphylococcus aureus. Seperti TSST-1, enteroktoksin adalah superantigen yang berikatan dengan molekul MHC kelas II, menimbulkan stimulasi sel T, entertoksin stabil terhadap panas dan resisten terhadap aksi enzim usus (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).


10

3. Patogenesis dan patologi Staphylococcus aureus yang patogenik dan bersifat invasif menghasilkan koagulase dan cenderung untuk menghasilkan pigmen kuning dan menjadi hemolitik. Kemampuan patogenik Staphylococcus aureus adalah pengaruh gabungan antara faktor ektraseluer dan toksin bersama dengan daya sebar invasif (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005). Staphylococcus aureus menetap di folikel rambut menyebabkan nekrosis jaringan (faktor dermonekrotik). Koagulase dihasilkan dan mengkoagulasi fibrin di sekitar lesi dan di dalam limfatik, membentuk dinding yang menghambat proses penyebaran dan diperkuat lagi oleh akumulasi sel inflamasi dan kemudian jaringan fibrosa. Di dalam pusat lesi, terjadi likuefaksi dan nekrosis jaringan (dipacu oleh hipersensitivitas tipe lambat) pada bagian abses yang lemah. Drainase cairan pusat jaringan nekrotik diikuti dengan pengisian secara kavitas oleh jaringan granulasi dan akhirnya terjadilah penyembuhan (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005). Supurasi fokal (abses) adalah khas untuk infeksi stafilokokus. Dari tiap fokus manapun, organisme dapat menyebar melalui aliran limfatik dan aliran darah ke bagian lain dalam tubuh. Supurasi yang terjadi dalam pembuluh darah vena, yang berhubungan dengan trombosis, merupakan gambaran umum proses penyebaran tersebut. Pada osteomielitis, fokus primer pertumbuhan Staphylococcus aureus adalah khas di pembuluh darah tepi dari metafisis menyebabkan pneumonia, meningitis, empiema, endokarditis atau sepsis dengan supurasi di tiap organ. Staphylococcus aureus mempunyai kemampuan invasi yang rendah, terlibat dalam banyak infeksi kulit (misalnya akne, pioderma atau impetigo) (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).


11

C. Escherichia coli

Gambar 3. Eschericia coli pada SEM (Rogers, 2011)

Escherichia coli merupakan bakteri Gram negatif yang banyak ditemukan pada ileum caudal, berbentuk batang pendek, dan dapat begerak. Pada lingkungan yang kurang baik dapat membentuk spora, dan merupakan kuman aerob fakultatif. Escherichia coli menghasilkan tes positif terhadap indole, lisin dekarboksilase, dan memfermentasi manitol dan menghasilkan gas dari glukosa. Bakteri ini merupakan bagian terbesar dari flora usus dan dianggap sebagai bakteri yang tidak patogen dalam saluran pencernaan. Escherichia coli akan bersifat patogen apabila berada terdapat di luar saluran pencernaan dan pada saat kondisi tubuh manusia menurun (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).

1. Struktur antigen a. Antigen O merupakan bagian terluar dinding sel lipopolisakarida dan terdiri dari unit berulang polisakarida. Beberapa polisakarida spesifik O mengandung gula unik. Antigen O tahan terhadap panas dan alkohol biasanya dideteksi dengan cara aglutinasi bakteri. b. Antigen K merupakan bagian terluar dari antigen O pada beberapa enterobacteriaceae. Beberapa antigen K adalah polisakarida, antigen K


12

dapat berpengaruh pada reaksi aglutinasi dengan antisera O. Antigen K menyebabkan perlekatan bakteri pada sel epitelial yang memungkinkan invasi ke sistem gastrointestinal atau saluran air kemih. c. Antigen H terletak pada flagella dan didenaturasi oleh panas atau alkohol. Antigen H mengadakan aglutinasi dengan antibodi H, biasanya IgG (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).

2. Patogenesis dan tanda klinis Manifestasi klinis infeksi Escherechia coli tergantung pada tempat infeksi, dan tidak dapat dibedakan dengan gejala atau tanda dari proses-proses yang disebabkan oleh bakteri lain. Berikut beberapa penyakit yang berhubungan dengan Escherechia coli: a. Infeksi sistem saluran kencing, Escherechia coli merupakan penyebab paling banyak dari infeksi sistem saluran kencing dari jumlah untuk infeksi saluran

kencing.

memproduksi

Nefropatogenik

hemolisin.

Escherechia

Kebanyakan

infeksi

coli

secara

khas

disebabkan

oleh

Escherechia coli dari sejumlah antigen O. Antigen K menjadi penting dalam patogenesis infeksi sistem saluran bagian atas. b. Escherechia coli yang berhubungan dengan penyakit diare. Escherechia coli yang umumnya menyebabkan diare ini diklasifikasikan berdasarkan sifat karakteristik dari virulensinya dan tiap kelompok menyebabkan penyakit dengan mekanisme yang berbeda. 1) Enterophatogenic E coli (EPEC) merupakan penyebab penting diare pada bayi. EPEC melekat pada sel mukosa usus kecil. Faktor yang


13

berhubungan dengan kromosom mendukung pelekatan yang erat. Terjadi kehilangan microvili (affecement), pembentukan filamentasi actin atau struktur seperti cangkir, dan biasanya masuk ke dalam sel mukosa. 2) Enteroxigenic E. coli (ETEC) merupakan penyebab umum diare pada musafir. Strain ETEC memproduksi sebuah eksotoksin yang sifatnya labil terhadap panas (LT) dibawah kontrol plasmid. Sub unit B melekat dengan Gml gangliosida pada sisi sel epitel dari usus kecil dan memberikan fasilitas sebuah pemasukan dari subunit A ke dalam sel, dimana mengaktivasi adenylyl cyclase. Hal ini ditandai dengan adanya peningkatan konsentrasi lokal dari cyclic adenosine monophosfat (cAMP), yang menghasilkan hiperekskresi yang sering dan lama dari air dan klorid serta menghambat penyerapan natrium. Lumen usus digelembungkan dengan cairan hipermotility dan diare terjadi. 3) Enterohemorhagic E. coli (EHEC) memproduksi verotoksin, dan dinamakan berdasarkan efek sitotoksik pada sel vero, merupakan biakan sel ginjal dari monyet hijau Afrika. Terdapat sedikitnya dua bentuk antigenik dari toksin. EHEC berhubungan dengan kolitis hemoragik, bentuk diare yang berat dan dengan sindroma uremia hemolitik, suatu penyakit akibat gagal ginjal akut, anemia hemolitik mikroangiopatik, dan trombositopenia. 4) Enteroinvasive E. coli (EIEC) menyebabkan penyakit yang mirip dengan shigellosis. Penyakit yang terjadi umumnya pada anak di negara


14

berkembang dan dalam perjalanan ke negara tersebut. Strain EIEC memfermentasi laktosa dengan lambat atau tidak memfermentasi laktosa dan tidak motil. EIEC menyebabkan penyakit dengan menyerang sel epithelial mukosa usus. 5) Enteroagregative E. coli (EAEC) menyebabkan diare akut dan kronis. Patogenesis EAEC penyebab diare tidak begitu dipahami dengan baik, meskipun demikian dinyatakan bahwa EAEC melekat pada mukosa intestinal dan menghasilkan enterotoksin dan sitotoksin. Akibatnya adalah kerusakan mukosa, pengeluaran sejumlah besar mukus, dan terjadi diare. c. Sepsis bila pertahanan inang normal tidak mencukupi. Escherechia coli dapat memasuki aliran darah dan menyebabkan sepsis. Bayi yang baru lahir dapat sangat rentan terhadap sepsis Escherechia coli karena tidak memiliki antibodi IgM. Sepsis dapat terjadi akibat infeksi saluran kemih. d. Meningitis pada bayi, salah satunya disebabkan oleh Escherechia coli yang mempunyai antigen K1. Antigen ini bereaksi silang dengan grup B kapsular polisakarida dari N meningitidis. Mekanisme virulensi berhubungan dengan antigen KI belum dipahami (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005).


15

D. Candida albicans

Gambar 4. Mikrograf fluoresensi Candida albicans dewasa. A) sebelum diinkubasi dengan thymol, biofilm sangat banyak pada jaringan multi-layer sel fungi dan berbentuk serabut. B) setelah diinkubasi dengan Thymol ½x dari MIC selama 24 jam, terdapat sedikit perubahan terlihat dibandingkan dengan kontrol. C) setelah diinkubasi dengan Thymol 1x dari MIC terjadi perubahan struktur biofilm. D) setelah diinkubasi dengan Thymol 2x dari MIC jelas menghambat semua unsur dan merusak struktur filamen (Braga, Sasso, Culici, Alfieri, 2008)

Candida albicans termasuk organisme eukariotik dengan bentuk lonjong dan bertunas, yang menghasilkan pseudomiselium yang terdiri atas pseudohifa yang membetuk blastokonidia pada nodus-nodus dan kadang-kadang klamidokonidia pada ujung-ujungnya baik dalam biakan maupun dalam jaringan. Pada agar sabouraud yang diinkubasi pada suhu kamar atau 37 0C selama 24 jam, spesies Candida menghasilkan koloni-koloni halus berwarna krem yang mempunyai bau seperti ragi. Pertumbuhan permukaan terdiri atas sel-sel bertunas lonjong. Candida adalah anggota flora normal selaput lendir saluran pernafasan, saluran pencernaan, dan genitalia wanita. Pada tempat ini Candida albicans menjadi dominan dan cenderung patogen. Candida albicans patogen dapat menimbulkan infeksi dalam aliran darah, endokardiosis, atau infeksi pada mata dan organ lain (Simatupang, 2009). Candida dapat eksis dalam rongga mulut sebagai saprofit tanpa menyebabkan lesi apapun. Antara genus Candida, albicans diduga spesies patogen dan diterima


16

sebagai faktor penyebab paling umum kandidiasis oral. Candida albicans dapat ditemukan dalam rongga mulut yang sehat pada konsentrasi rendah (20 sel/cc saliva). Dalam konsentrasi ini, organisme tidak bisa terdeteksi di bawah mikroskop, tetapi hanya dapat dideteksi melalui kultur dalam media tertentu seperti pada Dextrose Sabouroud Agar dalam bentuk koloni. Keseimbangan flora rongga mulut dapat berubah menimbulkan suatu keadaan patologis atau penyakit karena beberapa faktor seperti kesehatan mulut yang buruk, obat immunosupresan, penyakit sistemik yang menurunkan daya tahan lokal tubuh (Tanjong cit., Sudiono, 2006).

1. Struktur fisik Dinding sel Candida albicans berfungsi sebagai pelindung dan juga sebagai target dari beberapa mikotik. Dinding sel berperan pula dalam proses penempelan dan kolonisasi serta bersifat antigenik. Fungsi utama dinding sel tersebut adalah memberikan bentuk pada sel dan melindungi sel ragi dari lingkungannya. Candida albicans mempunyai struktur dinding sel yang kompleks, tebalnya 100 sampai 400 nm. Komposisi primer terdiri dari glukan, manan, dan khitin. Manan dan protein berjumlah sekitar 15,2 – 30% dari berat kering dinding sel, 1,3 – D-glukan dan 1,6 – D – glukan sekitar 47-60 %, khitin sekitar 0,6 – 9 %, dan lipid 1-7 %. Dalam bentuk ragi, kecambah dan miselium, komponen-komponen ini menunjukan proporsi yang serupa tetapi bentuk miselium memiliki khitin tiga kali lebih banyak dibandingkan dengan sel ragi. Dinding sel Candida albicans terdiri dari lima lapisan yang berbeda (Tjampaksari, 2006).


17

2. Patogenesis Infeksi Candida albicans berkaitan dengan perubahan bentuk sel-sel Candida albicans dari bentuk yeast menjadi bentuk mycelium. Mycelium berbentuk panjang dengan struktur seperti akar yang disebut rhizoid. Rhizoid dapat menembus mukosa, dan dapat juga masuk melalui sel-sel epitel di saluran cerna, invasi ini dapat berlanjut hingga ke pembuluh darah dan menyebabkan septikemia (Riskillah cit., Kayser, Bienz, Eckert, Zinkernage, 2005). Menempelnya mikroorganisme dalam jaringan sel host menjadi syarat mutlak untuk berkembangnya infeksi. Secara umum diketahui bahwa interaksi antar mikroorganisme dan sel pejamu diperantarai oleh komponen spesifik dari dinding sel mikroorganisme, adhesin dan reseptor. Makanan dan manoprotein merupakan molekul-moleku Candida albicans yang mempunyai aktifitas adhesif. Khitin, komponen kecil yang terdapat pada dinding sel Candida albicans juga berperan dalam aktifitas adhesif. Setelah terjadi proses penempelan, Candida albicans berpenetrasi ke dalam sel mukosa. Dalam hal ini enzim yang berperan adalah aminopeptidase dan asam fosfatase. Setelah proses penetrasi, semua tergantung dari keadaan imun dari host (Tjampaksari, 2006). Sembilan faktor virulen Candida albicans yaitu perubahan fenotip, bentuk dan susunan hifa, thigmotropism, hydrophobicity, kemampuan meniru molekulmolekul permukaan, produksi enzim yang bersifat litik, dan kebutuhan nutrisi (Riskillah cit., Arenas, 2001).


18

E. Ekstraksi Bertingkat Ekstraksi adalah teknik pemisahan suatu senyawa berdasarkan perbedaan distribusi zat diantara dua pelarut yang saling bercampur. Pada umumnya zat terlarut yang diekstrak bersifat tidak larut atau sedikit larut dalam suatu pelarut tetapi mudah larut dengan pelarut lain. Metode ekstraksi yang tepat ditemukan oleh tekstur kandungan air bahan-bahan yang akan diekstrak dan senyawa-senyawa yang akan diisolasi (Harbone,1996). Telah dikembangkan suatu teknik ekstraksi dengan ekstraksi bertingkat menggunakan pelarut yang berbeda tingkat polaritasnya. Metode ekstraksi bertingkat memiliki keuntungan karena semua senyawa aktif yang berbeda polaritasnya dapat diekstraksi sesuai dengan tingkat polaritasnya terhadap pelarut (Damayanti dan Suparjana, 2007).

F. Maserasi Maserasi merupakan cara penyarian yang sederhana, maserasi dilakukan dengan merendam serbuk atau daun segar dalam cairan penyari. Cairan penyari akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif. Zat aktif larut dan karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan didalam dengan diluar sel, maka larutan yang terpekat akan terdesak ke luar. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi kesetimbangan konsentrasi antara di luar dan di dalam sel (Departemen Kesehatan RI, 1986). Maserasi digunakan untuk penyarian simplisia yang mengandung zat aktif yang mudah larut dalam cairan penyari, tidak mengandung zat yang mudah mengembang dalam cairan penyari, tidak mengandung benzoin, stirak dan lain-lain (Departemen Kesehatan RI, 1986). Proses pemisahan senyawa dalam simplisia,


19

menggunakan pelarut tertentu sesuai dengan sifat senyawa yang akan dipisahkan. Pemisahan pelarut berdasarkan kaidah like dissolved like artinya suatu senyawa polar akan larut dalam pelarut polar. Ekstraksi dapat dilakukan dengan bermacam-macam metode, tergantung dari tujuan ekstraksi, jenis pelarut yang digunakan dan senyawa yang diinginkan (Pratiwi, 2008). Keuntungan cara penyarian dengan maserasi adalah cara pengerjaan, peralatan sederhana, dan mudah dilakukan. Adapun kerugian cara maserasi adalah waktu pengerjaan yang lama dan penyarian kurang sempurna. Cara maserasi ini dapat dipercepat dengan menggunakan mesin pengaduk yang terus-menerus berputar sehingga mempersingkat waktu maserasi menjadi 6 – 24 jam (Departemen Kesehatan RI, 1986).

G. Kromatografi Lapis Tipis Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ialah metode pemisahan fisikakimia. Pada KLT ini menggunakan dua macam fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam merupakan lapisan berpori dan akan menghasilkan pemisahan pada plat. Fase gerak atau pelarut pengembang ialah media angkut dan terdiri atas satu atau beberapa pelarut, yang bergerak didalam fase diam karena adanya gaya kapiler (Rohman dan Gandjar, 2007). Prinsip kerja KLT berupa lapisan yang memisahkan terdiri atas bahan berbutir atau fase diam ditempatkan pada penyangga berupa plat gelas, logam atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah berupa larutan dan ditotolkan berupa bercak atau pita. Setelah plat ditaruh di dalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang atau fase gerak yang cocok, pemisahan terjadi selama masa perambatan kapiler atau


20

pengembangan, selanjutnya senyawa yang tidak berwarna harus ditampakkan atau dideteksi dengan lampu ultraviolet atau dengan pereaksi semprot (Rohman dan Gandjar, 2007). Pada kromatogram KLT dikenal istilah faktor retardasi (Rf) yang didefinisikan 𝑅𝑓 =

𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢ℎ 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡 𝐽𝑎𝑟𝑎𝑘 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑡𝑒𝑚𝑝𝑢ℎ 𝑓𝑎𝑠𝑒 𝑔𝑒𝑟𝑎𝑘 (Rohman dan Gandjar, 2007).

H.

Minyak Atsiri

Minyak atsiri (disebut juga minyak menguap atau minyak etheral) adalah cairan berwujud minyak yang beraroma yang berasal dari berbagai bagian tumbuhan (bunga, kuncup, biji, daun, ranting, kulit, batan, dan rempa, kayu, buah, dan akar)(Di Pasqua, De Feo, Villani, Mauriello cit. Burt., 2004). Minyak atsiri yang bagian utamanya terpenoid, biasanya terdapat pada fraksi yang tersuling. Zat inilah penyebab wangi, harum, atau bau yang khas pada banyak tumbuhan minyak atsiri larut alkohol, eter, dan pelarut lipid lainnya praktis tidak larut air (Kokate, Purohit, Gokhale, 2009). Zat pengawet alami salah satunya adalah komponen-komponen minyak atsiri dari ekstrak tumbuhan seperti rempah-rempah, tanaman tahunan, dan rumput-rumputan (Ardiansyah, 2007). Carvacrol, thymol dan eugenol adalah komponen minyak atsiri yang diketahui memilik aktivitas antibakteri yang tinggi. Ketiga senyawa ini masuk dalam golongan fenol (Bouhdid, Skali, Idaomar, Zhiri, Baudoux, Amensour, dkk., 2008).


21

Gambar 5. Rumus bangun carvacrol (Nostro dan Papalia, 2012)

Carvacrol atau 2-metil- 5-(1 Metiletil)- fenol adalah monoterpen fenol. Dibiosintesis dari -terpinen melewati p-cimen. Aktivitas antibakteri carvacrol telah dikaitkan dengan efek yang cukup besar terhadap struktur dan fungsi dari membran sitoplasma (Nostro dan Papalia, 2012). Carvacrol berinteraksi dengan lipid bilayer dari membran sitoplasma menyebabkan perluasan dan destabilisasi struktur membran dan meningkatkan fluiditas dan permeabilitas membran. Pada konsentrasi subletal carvacrol mengubah komposisi asam lemak dari sitoplasma yang mengarah terhadap perubahan struktur permukaan sel membentuk saluran membran untuk ion, materi seluler, asam nukleat, dan ATP meninggalkan sitoplasma, menyebabkan kerusakan pada kolam ATP intrasel, baik dengan pengurangan sintesis ATP atau peningkatan hidrolisis ATP (Nostro dan Papalia, 2012).

I.

Flavonoid

Senyawa flavonoid diturunkan dari unit C6–C3 (fenil-propana) yang bersumber dari asam sikimat (via fenilalanin) dari unit C 6 yang diturunkan dari jalur poliketida. Fragmen poliketida ini disusun dari tiga molekul malonil-KoA, yang bergabung dengan unit C6-C3 (sebagai KoA triester) untuk membentuk unit awal


22

triketida. Oleh karena itu, flavonoid berasal dari biosintesis gabungan terdiri atas unitunit yang diturunkan dari asam sikimat dan jalur poliketida (Heinrich, Barnes, Gibbons, Williamson, 2010). Unit awal triketida mengalami siklisasi oleh enzim kalkon sintase untuk membentuk gugus kalkon pada flavonoid. Kemudian terjadi siklisasi untuk menghasilkan cincin piranon yang mengandung inti flavonon, yang memiliki ikatan C2-C3 teroksidasi (tak jenuh) untuk menghasilkan gugus flavonol pada flavonoid. Senyawa flavonoid berperan dalam memberikan warna di alam terutama mahkota kuning dan jingga, bahkan flavonoid yang tidak berwarna mengabsorbsi cahaya pada spektrum UV (karena banyak gugus kromofor) (Heinrich, Barnes, Gibbons, Williamson, 2010).

Gambar 6. Rumus bangun flavon (Flavonoid) (Cushnie dan Lamb, 2005)

Flavonoid merupakan senyawa polar yang umumnya mudah larut dalam pelarut polar seperti etanol, metanol, butanol, dan aseton. Flavonoid merupakan golongan terbesar dari senyawa fenol, senyawa fenol mempunyai sifat efektif menghambat pertumbuhan virus, bakteri dan jamur (Khunaifi, 2010). Mekanisme flavonoid menghambat pertumbuhan bakteri, yaitu dengan menyebabkan terjadinya kerusakan permeabilitas dinding sel, mikrosom, dan lisosom. Selain itu, gugus hidroksil pada gugus flavonoid dapat meyebabkan perubahan


23

komponen organik dan transpor nutrisi yang akhirnya akan mengakibatkan timbulnya efek toksik bagi bakteri (Sabir, 2008).

J. Metode Pengujian Aktivitas Antimikroba Pengujian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan suatu larutan uji dalam menghambat atau membunuh mikroba. Metode pengujian antimikroba dapat dibedakan menjadi dua yaitu: 1. Metode dilusi Metode dilusi, pada prinsipnya antibiotik diencerkan sehingga diperoleh beberapa macam kadar. Pada dilusi cair, tiap-tiap kadar sampel obat ditambahkan pada suspensi bakteri pada media. Pada dilusi padat setiap kadar obat dicampur dengan media agar kemudian ditanami bakteri. Pengamatannya adalah ada tidaknya pertumbuhan bakteri atau bila mungkin tingkat kesuburan bakteri. Metode dilusi ini dapat digunakan untuk menentukan KHM dan KBM (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005). 2. Metode difusi Metode difusi merupakan metode yamg digunakan untuk mengukur potensi antibakteri berdasarkan pengamatan luas zona jernih yang terbentuk disekitar tempat penginokulasian obat karena berdifusinya obat (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 2005). Dilakukan dengan cara menempatkan senyawa uji pada media padat yang lebih ditanami dengan biakan bakteri. Metode difusi terdapat beberapa cara salah satunya ialah metode sumuran, metode ini dilakukan dengan membuat lubang pada agar padat yang telah diinokulasi dengan bakteri. Jumlah dan letak lubang disesuaikan dengan tujuan penelitian, kemudian lubang diinjeksikan dengan ekstrak yang akan diuji.


24

Setelah dilakukan inkubasi, pertumbuhan bakteri diamati untuk melihat ada tidaknya daerah hambatan di sekeliling lubang (Kusmayanti dan Agustini, 2007). Prinsip metode pengenceran adalah senyawa antibakteri diencerkan hingga diperoleh beberapa macam konsentrasi, kemudian masing-masing konsentrasi ditambahkan suspensi bakteri uji dalam media cair. Perlakuan tersebut akan diinkubasi dan diamati ada atau tidaknya pertumbuhan bakteri, yang ditandai dengan terjadinya kekeruhan. Larutan uji senyawa antibakteri pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa adanya pertumbuhan bakteri uji, ditetapkan sebagai Kadar Hambat Minimum (KHM) atau Minimal Inhibitory Concentration (MIC). Larutan yang ditetapkan KHM selanjutnya dikultur ulang pada media cair tanpa pertumbuhan bakteri uji ataupun senyawa antibakteri, dan diinkubasi selama 18-24 jam. Media cair yang tetap terlihat jernih setelah inkubasi ditetapkan sebagai Kadar Bunuh Minimum (KBM) atau Minimal Bactericidal Concentration (MBC) (Pratiwi, 2008).

K. Landasan Teori Penyakit infeksi terus berkembang disertai dengan profil resistensi antibiotik yang meningkat oleh beberapa bakteri dan fungi oportunistik diantaranya Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans. Sehubungan dengan itu perlu dilakukan eksplorasi bahan alam yang mempunyai aktivitas antimikroba yang memiliki efek samping lebih kecil dan tersedia terus menerus. Bunga pulu berkhasiat menurunkan kolesterol tinggi, mengatasi angina

pectoris (nyeri dada akibat penyempitan pembuluh darah jantung), tromboangitis (radang pembuluh darah disertai pembekuan darah dalam lumennya), hipertensi, kanker, nyeri haid, dan sakit perut setelah melahirkan (Wijayakusama, 2008).


25

Salah satu senyawa yang terkandung di dalam bunga pulu adalah flavonoid (Cai, Luo, Sun, Corke, 2003). Flavonoid dapat tersari dalam etanol dan memiliki aktivitas sebagai antibakteri (Akroum, Satta, Lalaoui, 2009). Penelitian Ziarati,

Asgarpanah, Kianifard (2012) menyebutkan bahwa terdapat 29 konstituen yang dapat diidentifikasi pada minyak atsiri Carthamus tintorius. Dua puluh sembilan konstituen tersebut sebagian besar mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri patogen (Sokovic, Glamoclija, Marin, Brkic, van Griensven, 2010). Aktivitas antimikroba fraksi petroleum eter, kloroform, etanol bunga pulu dilakukan dengan metode difusi sumuran yang ditunjukan dengan diameter zona hambat (zona jernih) yang dihasilkan dan metode dilusi untuk menentukan nilai KHM dan KBM. Prinsip metode difusi, yaitu pengamatan luas zona jernih pertumbuhan bakteri karena berdifusinya senyawa uji ke sekitar daerah penginokulasian. Penelitian mengenai adanya aktivitas antimikroba fraksi petroleum eter, kloroform, etanol bunga pulu terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candia albicans diharapkan dapat memberikan informasi kepada masyarakat dan perkembangan ilmu pengetahuan mengenai manfaat bunga pulu sebagai salah satu terapi alternatif penyakit infeksi yang disebabkan oleh mikroba di atas. L. Hipotesis Fraksi petroleum eter, kloroform, etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius) memiliki aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia

coli,dan Candida albicans. Kandungan senyawa yang diduga memiliki aktivitas antimikroba adalah golongan flavonoid dan minyak atsiri.


BAB III METODOLOGI PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian rancangan eksperimental murni, dengan rancangan penelitian acak lengkap pola satu arah. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia, Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, dan Laboratorium Mikrobiologi, Balai Laboratorium Kesehatan Yogyakarta.

B. Variabel dan Definisi Operasional 1.

Variabel penelitian a. Variabel bebas

: Fraksi petroleum eter, kloroform, etanol dengan

konsentrasi 50 %(b/v) ; 25 %(b/v) ; 12,5 %(b/v) ; 6,25 %(b/v) dan 3,125 %(b/v). b. Variabel tergantung

: Diameter zona hambat, Rf.

c. Variabel terkendali

: Waktu inkubasi (24 jam), suhu inkubasi (37 0C), jenis

bakteri uji, volume suspensi bakteri uji yang di inokulasikan dalam media (50 µL), konsentrasi suspensi mikroba uji setara dengan larutan standar Mc. Farland II (6 x 108 CFU/mL), tempat tumbuh tanaman, suhu pengeringan ± 450C. d. Variabel tak terkendali: Umur tanaman.

26


2.

27

Definisi operasional a. Aktivitas antimikroba adalah kemampuan fraksi petroleum eter, kloroform, etanol bunga pulu untuk menghambat atau membunuh mikroba uji Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 32518, dan Candida albicans ATCC 10231. b. Sampel bunga pulu adalah kumpulan bunga-bunga yang terkumpul dalam satu karangan atau satuan bunga yang menyusun bunga majemuk tanpa daun pelindung. c. Zona hambat adalah zona jernih pada media agar yang telah ditanami bakteri uji, yang terbentuk disekitar lubang sumuran.

C. Bahan dan Alat Penelitian 1. Bahan a. Bunga pulu (Carthamus tintorius L.) diperoleh dari petani (Bapak Mubarak) pada tanggal 15 Agustus 2012, Kabupaten Bone, Sulawesi Selatan. b. Bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Balai Laboratorium Kesehatan Yogyakarta. c. Medium Nutrien Agar (Oxoid®), Media Potato Dextrose Agar (Oxoid®), DMSO (Merck®), Alkohol (Jayamas Medica Industri®), Kloroform (Merck®), Etanol


28

96% (Brataco®), Petroleum eter teknis (Brataco®), Ketoconazole (Indofarma®), Amoksisillin (Hexpharm Jaya®).

2. Alat Alat-alat yang digunakan adalah alat-alat gelas, yaitu Erlenmeyer, tabung reaksi, corong, labu ukur, pipet tetes, pH meter, cawan petri, batang pengaduk, gelas ukur, sendok, pelubang sumuran, Platform Shaker (InnovaTM 2100), autoclave (Model KT-40, ALP Co. Ltd Hamurasi Tokyo Japan), oven (memmert), rotary evaporator (Janke dan Kunkel, Ika-labotechnik, RV 05-ST), inkubator (Mammert tipe BE 400, GmbH + CoKG-D91126, Swahaban FRG Germany microbiological safety cabinet), neraca analitik (Scaltec Instruments Heiligen stadt Germany), densicheck (Vitek®), bunsen, jarum ose, flakon, tempat pengembangan (Chamber) KLT, mikrokapiler, penyangga lempeng kaca, kertas saring, lempeng kromatografi lapis tipis.

D. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi bunga pulu Bunga pulu dideterminasi dengan mencocokan ciri-ciri tanaman dengan yang dimiliki tanaman bunga pulu (Carthamus tintorius L.) menggunakan pustaka acuan Idtools (2003).


29

2. Pengumpulan bahan Bunga pulu didapat dari Kabupaten Bone, Sulawesi Selatan. Bagian yang diambil adalah bagian dasar bunga hingga pucuk bunga. Bunga diambil pada sore hari, kemudian dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan pengotor kemudian ditiriskan untuk menghilangkan sisa-sisa air cucian.

3. Pengeringan dan pembuatan serbuk Pengeringan dilakukan dengan memasukkan bunga ke dalam oven ± 3 hari dengan suhu 450C. Pengeringan dilakukan hingga bunga tersebut mudah dipatahkan. Daun diserbuk dengan menggunakan mesin penyerbuk, serbuk yang diperoleh, diayak dengan mengunakan pengayak no. 40 sehingga diperoleh serbuk dengan ukuran partikel yang homogen.

4. Ekstraksi bertingkat serbuk bunga pulu Ditimbang 300 g serbuk bunga pulu, dimasukkan dalam erlenmeyer dan ditambah pelarut petroleum eter sampai serbuk terendam semua. Erlenmeyer ditutup rapat dengan alumunium foil, digojog menggunakan shaker selama 3 hari, kemudian disaring dengan corong Buchner. Filtratnya diuapkan dengan rotary evaporator dan dipekatkan di atas penangas air hingga didapatkan fraksi protelum eter. Ampas I (sisa petroleum eter dibiarkan menguap) dimaserasi dengan cairan penyari kloroform selama kurang lebih 3 hari dengan shaker dan ditutup dengan alumunium foil. Ampas II (sisa kloroform dibiarkan menguap) dan filtrat kloroform. Filtrat kloroform ini diuapkan


30

dengan rotary evaporator dan dipekatkan diatas penangas air hingga didapatkan fraksi kental kloroform. Ampas II dimaserasi dengan etanol 96% kurang lebih 3 hari dengan shaker dan ditutup dengan alumunium foil. Saring dengan corong Buchner hingga didapat filtrat etanol dan ampas III (disisihkan). Filtrat etanol diuapkan dengan rotary evaporator dan dipekatkan di atas penangas air hingga didapatkan fraksi etanol.

5. Pengujian potensi antimikroba a. Penyiapan stok mikroba uji Diambil dari kultur mikroba simpanan menggunakan jarum ose steril sebanyak 1 hingga 2 koloni tunggal. Diinokulasikan pada 5 mL Nutrien Agar miring dan diinkubasi selama 24 jam dan pada suhu 37 0C. b. Pembuatan suspensi mikroba uji Pembuatan suspensi mikroba dilakukan dengan mengambil 1-2 ose mikroba dari stok yang telah dibuat sebelumnya, diinokulasikan pada 5 mL media Nutrien Broth, suspensi tersebut diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C, kemudian divortex, diambil 1 mL suspensi tersebut ditambah NB dan disetarakan kekeruhannya dengan larutan standar Mc. Farland II (6 x108 CFU/mL) menggunakan alat Densicheck. c. Pembuatan variasi konsentrasi larutan uji Larutan yang digunakan untuk uji antimikroba didapatkan dengan melarutkan fraksi petroleum eter, kloroform, etanol dengan DMSO. Fraksi masing-


31

masing dibuat dalam berbagai variasi konsentrasi 50 %(b/v) ; 25 %(b/v) ; 12,5 %(b/v) ; 6,25 %(b/v) dan 3,125 %(b/v). Pembuatan masing-masing fraksi dengan konsentrasi 50 % (stok larutan uji) dibuat dengan cara ekstrak kental (hasil penyarian) yang diperoleh ditimbang sejumlah 5 g yang kemudian dilarutkan ke dalam 10 mL DMSO untuk masingmasing fraksi. Stok larutan uji yang dibuat, dapat dibuat variasi konsentrasi larutan uji sebagai berikut: Tabel I. Pembuatan variasi konsentrasi uji Konsentrasi Larutan Uji ( %b/v ) 25 12,5 6,25 3,125

Volume yang diambil dari stok larutan uji (mL) 5,0 5,0 5,0 5,0

Di add dengan DMSO sampai (mL) 10 10 10 10

d. Uji potensi antimikroba 1) Pembiakan suspensi bakteri dan fungi secara pour plate. Mula-mula dari suspensi mikroba uji diambil sebanyak 0,2 mL, diinokulasikan kedalam 20 mL media NA dalam tabung reaksi dan divortex. NA yang telah bercampur dengan suspensi tersebut dituang kedalam petri steril kemudian digoyang-goyang dan biarkan memadat. 2) Uji potensi antimikroba dilakukan dengan metode difusi sumuran Larutan uji dibuat variasi konsentrasi 50% (b/v); 25%(b/v); 12,5%(b/v); 6,25%(b/v) dan 3,125%(b/v). Setelah pembiakan suspensi bakteri secara pour


32

plate, dibuat sumuran dengan menggunakan pelubang sumuran no.4 (berdiameter 8 mm) sebanyak 7 sumuran. Tiap lubang sumuran masing-masing ditambal dengan 50 µL setelah memadat kemudian diisi 50 µL dengan fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol yang berkonsentrasi 50 %(b/v); 25 %(b/v); 12,5 %(b/v); 6,25 %(b/v) dan 3,125 %(b/v). Amoksisilin 0,0005 mg/mL sebagai kontrol positif untuk Staphylococcus aureus, Escherechia coli dan Ketoconazole 0,1 g/mL untuk Candida albicans. DMSO sebagai kontrol negatif dari fraksi petroleum, kloroform dan etanol. Petri-petri tersebut diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C kemudian diamati ada tidaknya zona hambat disekitar sumuran. Zona hambat yang terbentuk diukur dengan penggaris. Pada uji potensi antimikroba ini direplikasi sebanyak 3 kali untuk masing-masing fraksi. e. Pengukuran KHM dengan metode dilusi padat Uji potensi antimikroba pada metode difusi didapatkan konsentrasi terkecil dari fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol yang dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans. Konsentrasi terkecil tersebut dibuat rentang konsentrasi yang lebih rendah sebanyak variasi konsentrasi untuk mengetahui besarnya kadar hambat minimal dari masingmasing fraksi. Fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol dibuat variasi konsentrasi, mula-mula pengujian dilakukan dengan membuat suspensi bakteri yang disetarakan kekeruhannya dengan larutan standar Mc. Farland II (6 x 108 CFU/mL) menggunakan alat Densicheck. Suspensi tersebut diambil 0,5 mL, ditambah dengan kadar tertentu dan dicampur rata dengan 30 mL media. Setelah itu dituang dalam


33

cawan petri dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0C. Diamati banyak sedikit atau ada tidaknya pertumbuhan bakteri uji pada berbagai variasi konsentrasi dengan ditandai suatu notasi tertentu. Larutan uji untuk fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol dibuat masing-masing dengan cara yang sama.

6. Identifikasi kandungan senyawa bunga pulu dengan uji tabung. a.

Uji pendahuluan Dua gram serbuk bunga pulu dipanaskan dengan 10 mL air selama 30

menit diatas air mendidih. Larutan yang diperoleh disaring menggunakan kapas. Jika larutan menjadi berwarna kuning sampai merah dan bila pada saat penambahan KOH warna larutan menjadi lebih intensif berarti menunjukkan adanya senyawa yang mengandung kromofor dengan gugus hidrofilik. b. Uji alkaloid Dua gram serbuk dimasukkan dalam tabung reaksi besar, tambahkan asam klorida 1% (10 mL), dipanaskan selama 30 menit dalam penangas air mendidih. Suspensi disaring dengan kapas kedalam tabung reaksi A dan tabung reaksi B sama banyak. Larutan A dibagi dua sama banyak, lalu ke dalam tabung reaksi A-1 ditambah pereaksi Dragendorff (3 tetes) dan larutan A-2 ditambah dengan pereaksi Mayer (3 tetes). Terbentuknya endapan dengan kedua pereaksi tersebut menunjukkan adanya alkaloid.


34

c. Uji tanin Dua gram serbuk bunga pulu dipanaskan dengan 10 mL air selama 30 menit diatas penangas air. Disaring 5 mL filtrat ditambah 1 mL larutan NaCl 2%, bila terjadi suspensi atau endapan, disaring melalui kertas saring. Filtrat ditambah 5 mL larutan gelatin 1%. Bila terbentuk endapan berarti menunjukan adanya tanin atau zat samak. d. Uji antrakinon Tiga ratus mg serbuk bunga pulu didihkan 2 menit dengan 10 mL kalium hidroksida 0,5 N dan 1 mL larutan hidrogen peroksida. Setelah dingin suspensi disaring menggunakan kapas. Lima mL filtrat ditambah 10 tetes asam asetat sampai pH 5. Ditambahkan 10 mL toluene. Lima mL lapisan atas dipisahkan dengan dipipet dan dimasukkan dalam tabung reaksi. Ditambah kalium hidroksida 0,5 N, bila didapatkan warna merah pada lapisan air berarti menunjukan adanya senyawa antrakinon. e. Uji polifenol Dua gram serbuk bunga pulu dipanaskan dengan 10 mL air selama 10 menit dalam penangas air mendidih. Disaring panas-panas, setelah dingin ditambah 3 tetes pereaksi besi (III) klorida. Bila didapatkan warna hijau-biru menunjukan adanya polifenol. Uji diulang dengan filtrat hasil pendidihan 2 g serbuk dengan 910 ml etanol 80 % selama 10 menit dalam penangas air.


35

f. Uji saponin Seratus mg serbuk bunga pulu ditambahkan 10 mL air suling kedalam tabung reaksi, ditutup dan dikocok kuat-kuat selama 30 detik. Tabung dibiarkan dalam posisi tegak selama 30 menit. Apabila terbentuk buih setinggi kurang lebih 3 cm dari permukaan cairan, maka menunjukan adanya saponin, uji lain dilakukan dengan menggunakan pipet kapiler (diameter 1 mm, panjang 12,5 cm). Larutan hasil pemanasan 2 g serbuk bunga pulu dengan 10 mL air dipanaskan selama 30 menit diatas penangas air. Setelah disaring filtrat dimasukkan kedalam pipa kapiler penuhpenuh. Kapiler diletakkan dalam posisi tegak (vertikal), lalu cairan dibiarkan mengalir bebas. Tinggi air suling yang diperlukan sama. Bila didapatkan tinggi cairan yang diuji setengah atau kurang dari tinggi air suling maka menunjukkan adanya saponin. g. Uji minyak atsiri Sebanyak 10 g serbuk ditambah 20 mL eter, dikocok kemudian disaring, filtrat yang didapat dikeringuapkan. Bila sedikit berbau aromatik, larutan residu ditambahkan dengan sedikit etanol, uapkan lagi sampai kering. Bila terjadi bau aromatik spesifik menunjukan adanya minyak atsiri. h. Uji flavonoid Sebanyak 0,2 g serbuk dilarutkan kedalam NaOH terjadi pembentukan intensitas warna kuning. Dengan penambahan HCl intensitas warna kuning berubah mengindikasikan adanya flavonoid.


36

E. Kromatografi Lapis Tipis (Uji Penegasan Flavonoid) Sejumlah 1 gram serbuk diekstrak menggunakan 10 mL metanol, dipanaskan diatas water bath (± 60 0C) disaring, kemudian filtrat ditotolkan sebanyak 25 - 30 µL pada plat KLT. Standar rutin dilarutkan dalam metanol 0,05% dan 10 µL ditotolkan pada plat KLT. Fase diam yang digunakan adalah selulosa dengan fase gerak n-butanol : asam asetat glasial : air ( 40:10:50) v/v. Spot dideteksi pada panjang gelombang 254 nm, 366 nm, dan pereaksi uap amonia.

F. Kromatografi Lapis Tipis (Uji Penegasan Minyak Atsiri) Sejumlah 1 g serbuk diekstrak menggunakan 10 mL heksana, divortex selama 2 menit, kemudian disentrifugasi selama 3 menit. Standar terpenoid dan sampel ditotolkan sebanyak 10 µL pada plat KLT, fase diam yang digunakan adalah silika gel 60 F254 dengan fase gerak toluena : etil asetat (93:7) v/v. Spot dideteksi pada panjang gelombang 254 nm, 366 nm, dan pereaksi vanillin asam sulfat.

G. Analisis Hasil Uji potensi antimikroba ditunjukkan dengan data diameter zona hambat yang diperoleh dengan metode pengujian menggunakan difusi sumuran pada berbagai variasi konsentrasi dibandingkan dengan kontrol positif dan direplikasi sebanyak 3 kali. Analisis hasil dilakukan secara deskriptif dengan membandingkan hasil antara kelompok kontrol dan kelompok uji.


37

Kandungan senyawa dalam serbuk bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) diperoleh dengan uji tabung dan KLT. Analisis hasil KLT bersifat deskriptif dan komparatif, hasilnya dapat dilihat dari warna bercak yang tampak pada sinar UV 254 nm, UV 365 nm dan setelah disemprot dengan pereaksi yang sesuai dan dilihat perolehan harga Rfnya.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. Determinasi Tanaman Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Botani Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma yang diidentifikasi menurut acuan Idtools (2003). Identifikasi tanaman ini bertujuan untuk memastikan bahwa tanaman yang digunakan adalah bunga pulu atau kasumba turate. Hasil determinasi menunjukkan bahwa bunga pulu yang digunakan dalam penelitian ini memiliki nama ilmiah Carthamus tinctorius L. dengan variasi daun dengan tepi berduri, warna bunga pada saat muda kuning – jingga (didominasi oleh jingga), dan warna bunga pada saat tua berwarna jingga.

B. Hasil Pengumpulan dan Pembersihan Sampel berupa bunga pulu diambil dari daerah Soppeng, Sulawesi Selatan. Bunga yang diambil adalah bunga yang sudah tua yang berwarna merah karena diharapkan kandungan senyawa yang terkandung berada dalam jumlah yang maksimal. Waktu pengambilan dilakukan pada sore hari, dengan asumsi bahwa pada sore hari, hasil dari metabolisme suatu tanaman mencapai puncaknya, sehingga didapatkan hasil yang maksimal.

C. Hasil Pengeringan Pengeringan dilakukan untuk mengurangi kadar air sampai kadar air dalam sampel mencapai kadar tertentu, sehingga terjamin kualitasnya yakni mencegah

38


39

tanaman dari pencemaran jamur, kapang, atau mikroba. Pengeringan juga berfungsi untuk menginaktifkan enzim-enzim dalam tumbuhan sehingga menekan terjadinya peruraian senyawa kimia dalam bunga atau herba oleh enzim-enzim tersebut. Pengeringan pada penelitian ini dilakukan dengan menggunakan oven pada suhu 45 0C sampai didapatkan herba yang dapat dihancurkan dengan tangan. Hasil pengeringan bunga tersebut berwarna jingga. Setelah kering dan dapat dihancurkan dengan tangan, bunga diserbuk dan diayak menggunakan pengayak dengan nomor mesh 40 untuk memperkecil ukuran partikel, sehingga proses penyarian lebih efektif dan optimal, dengan memperkecil ukuran partikel (dalam batas optimal) luas partikel yang kontak dengan pelarut semakin besar. Kandungan zat aktif yang didapatkan akan larut lebih cepat dan lebih banyak.

Tabel II. Hasil maserasi serbuk bunga pulu Pelarut

Volume filtrat

Rendemen

Etanol

2100 mL

5,30 g

Kloroform

2100 mL

6,61 g

Petroleum eter

2100 mL

11,93 g

Berdasarkan tabel diatas, rendemen fraksi kental etanol lebih besar dibandingkan rendemen pelarut kloroform dan petroleum eter. Hasil tersebut diduga bahwa kandungan senyawa polar bunga pulu lebih banyak dibandingkan semipolar dan non polar. Fraksi kental yang didapatkan kemudian digunakan untuk uji selanjutnya.


40

D. Hasil Penyarian Serbuk Penyarian dilakukan dengan menggunakan pelarut petroleum eter, kloroform, dan etanol. Petroleum eter merupakan pelarut organik yang mampu menarik senyawa nonpolar. Penggunaan kloroform dimaksudkan untuk menarik senyawa yang bersifat non polar sampai semi polar. Etanol digunakan untuk menarik senyawa yang bersifat semi polar sampai polar, sehingga diharapkan zat aktif yang terkandung di dalam tanaman tersebut tersari maksimal sesuai dengan sifat polaritasnya. Tabel III. Kepolaran relatif pelarut organik Pelarut Petroleum eter Kloroform Etanol Air

Formula C6H14 CHCl3 C2H6O H2O

Kepolaran Relatif 0,009 0,259 0,654 1 (Murov, 2002).

Metode penyarian maserasi digunakan dalam penelitian ini karena tidak memerlukan pemanasan sehingga zat aktif yang terkandung di dalam bahan tidak mudah rusak. Selain itu, maserasi merupakan metode penyarian yang sederhana, mudah dikerjakan, menggunakan peralatan yang sederhana. Penyarian secara maserasi dilakukan dengan cara merendam 300 gram serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan penyari menembus dinding sel dan masuk ke rongga sel yang mengandung zat aktif. Zat aktif akan larut karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan zat aktif yang berada

di

luar

sel,

sehingga

larutan

yang

terpekat

terdesak

keluar.

Pengulangan/penggantian pelarut sebanyak sekali dengan tujuan untuk memenuhi


41

efisiensi dalam mengekstraksi dan untuk mencapai keseimbangan konsentrasi antara cairan di dalam sel dengan cairan di luar sel, dan untuk menarik zat-zat yang diperkirakan masih ada. Pengadukan dimaksudkan untuk meratakan konsentrasi di luar butir simplisia sehingga derajat perbedaan konsentrasi di dalam dan di luar sel tetap terjaga. Hasil maserasi (maserat) kemudian disaring dan diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator, agar hasil maserat lebih pekat, maka harus diuapkan lagi di atas waterbath.

E. Uji Aktivitas Antimikroba Fraksi Petroleum Eter, Kloroform, Etanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans dengan Metode Difusi Pengujian aktivitas antimikroba dilakukan secara difusi menggunakan metode sumuran. Prinsip metode difusi yaitu senyawa uji ditempatkan dalam media padat yang sebelumnya telah diinokulasikan bakteri uji. Senyawa uji akan berdifusi ke dalam media dan menghambat pertumbuhan bakteri uji. Sebelum

dilakukan

pengujian,

terlebih

dahulu

dibuat

suspensi

menggunakan Staphylococcus aureus, Escherechia coli dan Candida albicans kemudian disetarakan dengan larutam standar Mc. Farland II menggunakan alat Densicheck (vitek®). Penyetaraan ini dilakukan berguna dalam reprodusibilitas percobaan. Apabila dilakukan replikasi, dapat diasumsikan jumlah bakteri per satuan yang digunakan selalu sama. Sumuran yang dibuat berdiameter 8 mm, konsentrasi fraksi yang digunakan 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,125% dengan pelarut DMSO digunakan sebagai pelarut fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol. DMSO digunakan sebagai pelarut dikarenakan ketiga fraksi larut DMSO


42

sampai pada konsentrasi 50%. DMSO digunakan sebagai kontrol pelarut bertujuan untuk mengetahui apakah pelarut yang digunakan memiliki pengaruh terhadap zona hambat yang terbentuk. Dalam penelitian ini digunakan amoksisilin dan ketokonazol sebagai kontrol positif. Amoksisilin merupakan suatu antibiotik golongan beta laktam derivat penisilin dengan spektrum luas. Amoksisilin mempunyai aktivitas bakterisida terhadap bakteri Gram negatif maupun Gram positif dengan mekanisme menghambat pembentukan atau sintesis dinding sel mikroba (Todar, 2012). Ketokonazol merupakan turunan imidazol yang mempunyai aktivitas antifungi, turunan azol bekerja dengan menghambat sintesa ergosterol. Ergosterol adalah komponen lipid pada membran plasma fungi, sehingga permeabilitas membran meningkat, isi sitoplasma keluar, dan sel lisis (Hidayah, 2010). DMSO merupakan pelarut yang bersifat nonpolar tetapi diindikasikan tidak mempunyai daya hambat terhadap pertumbuhan bakteri. Volume fraksi, kontrol positif, dan kontrol negatif yang dimasukkan dalam sumuran adalah 50 L. Setelah diinkubasi selama 24 jam, maka senyawa uji akan berdifusi dalam media dan menghambat pertumbuhan dan bahkan membunuh bakteri uji. Penghambatan pertumbuhan bakteri uji ini dapat dilihat dari zona hambat yang terbentuk setelah inkubasi selama 24 jam. Setelah diinkubasi selama 24 jam, hasil yang diperoleh untuk uji terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans yaitu berupa zona hambat dapat dilihat sebagai berikut:


43

Tabel IV. Diameter zona hambat fraksi petroleum eter bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans Diameter zona hambat (mm) terhadap Staphylococcus aureus Escherichia coli Candida albicans Senyawa I II III I II III I II III Amoxicilin 12 11 11 9 13 12 0 0 0 Ketokonazol 0 0 0 0 0 0 7 7 8 DMSO 5% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 50% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 25% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 12,5% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 6,25% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 3,125% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Hasil

yang

diperoleh

untuk

fraksi

petroleum

eter

terhadap

Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans yaitu kontrol negatif tidak menunjukan zona hambat, kontrol positif menunjukan adanya zona jernih disekitar sumuran dengan rata-rata diameternya dari tiga replikasi yaitu 11,3 mm, 11,6 mm untuk amoksisilin dan 8,3 untuk ketokenazol. Hasil uji variasi konsentrasi fraksi tidak menunjukkan adanya zona hambat. Hal ini menunjukan tidak adanya penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri uji yaitu Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans. Dalam penelitian ini fraksi tidak menunjukkan aktivitas antimikroba.

Tabel V. Diameter zona hambat fraksi kloroform bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans Diameter zona hambat (mm) terhadap Staphylococcus aureus Escherichia coli Candida albicans Senyawa I II III I II III I II III Amoxicilin 14 13 12 10 13 12 0 0 0 Ketokonazol 0 0 0 0 0 0 8 9 8 DMSO 5% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 50% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 25% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Konsentrasi 12,5% 0 0 0 0 0 0 0 0 0


44

Diameter zona hambat (mm) terhadap Senyawa Konsentrasi 6,25% Konsentrasi 3,125%

Staphylococcus aureus

I 0 0

II 0 0

III 0 0

Escherichia coli

I 0 0

II 0 0

III 0 0

Candida albicans

I 0 0

II 0 0

III 0 0

Hasil yang diperoleh untuk fraksi kloroform terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans yaitu kontrol negatif tidak menunjukan zona hambat, kontrol positif menunjukan adanya zona jernih disekitar sumuran dengan rata-rata diameternya dari tiga replikasi yaitu 13 mm, 11,6 mm untuk amoksisilin dan 8,3 mm untuk ketokenazol. Hasil uji variasi konsentrasi fraksi tidak menunjukkan adanya zona hambat. Hal ini menunjukan tidak adanya penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri uji yaitu Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans. Dalam penelitian ini fraksi tidak menunjukkan aktivitas antimikroba.

Tabel VI. Diameter zona hambat fraksi etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans Senyawa Diameter zona hambat (mm) terhadap Staphylococcus aureus Amoxicilin Ketokonazol DMSO 5% Konsentrasi 50% Konsentrasi 25% Konsentrasi 12,5% Konsentrasi 6,25% Konsentrasi 3,125%

I 13 0 0 0 0 0 0 0

II 12 0 0 0 0 0 0 0

III 12 0 0 0 0 0 0 0

Escherichia coli

I 10 0 0 0 0 0 0 0

II 10 0 0 0 0 0 0 0

III 12 0 0 0 0 0 0 0

Candida albicans

I 0 7 0 0 0 0 0 0

II 0 6 0 0 0 0 0 0

Hasil yang diperoleh untuk fraksi etanol terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans yaitu kontrol negatif tidak menunjukan zona hambat, kontrol positif menunjukan adanya zona jernih disekitar sumuran

III 0 6 0 0 0 0 0 0


45

dengan rata-rata diameternya dari tiga replikasi yaitu 12,3 mm, 10,6 mm untuk amoksisilin dan 6,3 untuk ketokonazol. Hasil uji variasi konsentrasi fraksi tidak menunjukkan adanya zona hambat. Hal ini menunjukan tidak adanya penghambatan terhadap pertumbuhan bakteri uji yaitu Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans. Dalam penelitian ini fraksi tidak menunjukkan aktivitas antimikroba. Analisis data keseluruhan menunjukkan bahwa variasi konsentrasi uji fraksi petroleum eter, kloroform, etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) hingga konsentrasi 50% tidak mempunyai kemampuan sebagai antimikroba terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans.

F. Skrining Fitokimia Skrining fitokimia bertujuan untuk mengidentifikasi kandungan bioaktif pada tumbuhan atau kandungan yang mempunyai aktivitas dalam hal ini sebagai antimikroba. Skrining pada penelitian ini perlu dilakukan untuk mengetahui ada tidak senyawa yang berpotensi sebagai antimikroba. Sebagai contoh, yaitu senyawa flavonoid, alkaloid, fenolik, tanin, dan lain-lain. Analisis kualitatif untuk mengetahui golongan senyawa dalam tumbuhan tersebut dapat dilakukan dalam dua tahap, yaitu uji tabung dan uji kualitatif secara KLT.


46

1. Uji tabung Uji tabung bertujuan untuk mengetahui kandungan kimia bunga pulu, yang kemudian dipertegas dengan KLT. Uji tabung meliputi uji pendahuluan, uji alkaloid, uji antrakinon, uji polifenol, uji tanin, uji saponin, dan uji minyak atsiri. Tabel VII. Hasil pengamatan uji tabung terhadap serbuk bunga pulu No 1.

2

3 4 5

6

7

8

Pengujian Uji Pendahuluan Larutan hasil penyaringan Filtrat + KOH Uji Alkaloid Filtrat A1 + Dragendorf Filtrat A2 + Mayers Uji Antrakinon Filtrat + KOH 0,5 N Uji Polifenol Filtrat + FeCl3 Uji Tanin Filtrat + NaCl 2% + Gelatin 1% Uji Saponin Pembentukan buih ≥3 cm dari tinggi larutan Uji Flavanoid Serbuk + NaOH Serbuk + NaOH + HCl Uji Minyak Atsiri Filtrat Residu + etanol

Pengamatan

Hasil

Warna merah Warna merah semakin intensif

+

Larutan berwarna hitam Larutan berwarna kecoklatan

_ _

Lapisan atas(air) bening Larutan berwarna hijau biru

+

Tidak terdapat endapan

_

_ Kurang dari 3 cm Merah bata Jingga kemerah-merahan

+

Bau khas Bau khas

+

a. Uji pendahuluan Uji pendahuluan bertujuan untuk mengetahui apakah senyawa di dalam bunga pulu mengandung gugus kromofor seperti flavonoid, antrakinon, dan lainlain atau gugus hidrofilik seperti gula, asam fenolat, dan sebagainya. Hasil penelitian didapatkan hasil positif yang ditunjukkan dengan larutan yang berwarna merah bata dan warna menjadi lebih intensif ketika ditambahkan


47

beberapa tetes kalium hidroksida. Kesimpulan sementara yang diperoleh, yaitu serbuk diduga mengandung senyawa yang mempunyai gugus kromofor dan gugus hidrofilik.

b. Uji alkaloid Alkaloid adalah senyawa yang mengandung atom N dan kebanyakan bersifat basa. Identifikasi alkaloid dapat dilakukan dengan cara reaksi pengendapan dan reaksi warna, yaitu dengan cara melarutkan 2 g serbuk bunga pulu dengan HCl. Penambahan HCl bertujuan untuk mengubah alkaloid yang bersifat basa menjadi garam alkaloid, agar bisa larut dalam air. Pemanasan di atas penangas air dilakukan untuk mempercepat reaksi pembentukan garam alkaloid. Setelah dingin, kemudian disaring dan direaksikan dengan larutan Dragendorff (gabungan bismut (III) dalam nitrat pekat dan kalium iodida) dan Mayer (gabungan raksa (II) klorida dan kalium iodida). Reaksi positif terjadi jika terbentuk endapan endapan coklat pada penambahan Dragendorf dan endapan putih pada penambahan Mayer. Hasil penelitian tidak diperoleh endapan dari kedua tabung uji yang menunjukkan kemungkinan tidak terdapat alkaloid pada sampel.


48

c. Uji tanin Serbuk bunga pulu dilarutkan dalam air dan dilakukan pemanasan untuk mempercepat reaksi. Penambahan larutan natrium klorida 2% dimaksudkan untuk membentuk endapan garam Na asam dari tanin. Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut:

Gambar 7. Reaksi antara NaCl dengan senyawa fenolik (Herlianawati, 2003)

Penambahan gelatin dimaksudkan untuk mengendapan tanin yang terlarut dalam air. Gelatin merupakan senyawa yang bisa menarik air, selain itu gelatin mengandung protein dimana tanin mengendapkan protein dan NaCl akan bereaksi semakin cepat dengan tanin untuk membentuk endapan garam Na asam. Hasil penelitian dari serbuk bunga pulu adalah negatif yaitu tidak terjadi endapan.

d. Uji antrakinon Uji ini dilakukan dengan mendidihkan serbuk dengan KOH dan larutan hidrogen peroksida selama 2 menit, yang kemudian disaring dengan kapas. Pemanasan dengan kalium hidroksida bertujuan untuk menghidrolisis glikosida antrakinon menjadi aglikonnya (antrakinon). Larutan hidrogen peroksida berfungsi untuk mengoksidasi bentuk tereduksi dari antrakinon, yaitu antron,


49

oksantron, dan diantron menjadi antrakinon. Penambahan asam asetat sampai pH 5 dan toluen bertujuan untuk memisahkan lapisan air (basa) dengan fase pelarut organik. Setelah dingin, larutan disaring kemudian filtrat ditambah asam asetat glasial yang berfungsi untuk menghidrolisis antrakinon menjadi komponen gula dan aglikonnya. Hasil hidrolisis ini akan diekstraksi dalam pelarut toluen yang bersifat nonpolar. Lapisan air berwarna merah yang menunjukan adanya antrakinon. Hasil dari penelitian ini negatif dimana tidak terjadi warna merah pada lapisan air.

e. Uji saponin Uji saponin dilakukan dengan menggojog kuat serbuk yang dilarutkan dengan aquadest, sehingga terbentuk buih setinggi 3 cm. Buih ini akan tahan dalam jangka waktu yang relatif lama. Buih yang terbentuk disebabkan karena terbentuknya sabun pada saat penggojogan dengan aquadest. Saponin merupakan suatu senyawa yang mempunyai gugus hidrofob dan gugus hidrofil. Sifat ini menyerupai surfaktan/sabun yang dapat menurunkan tegangan permukaan antara udara/gas dengan air berupa emulsi gas dalam air (buih). Hasil dari uji diperkirakan bahwa serbuk bunga pulu tidak mengandung saponin, disebabkan buih yang terbentuk kurang dari 3 cm.

f. Uji flavonoid Serbuk bunga pulu dilarutkan kedalam NaOH yang selanjutnya ditambahkan HCL. Larutan NaOH berfungsi sebagai basa kuat yang dapat


50

mengionisasi hampir diseluruh gugus hidroksi pada inti flavonoid yang menyebabkan terjadinya pergeseran batokromik (Markham, 1988). Pergeseran batokromik tersebut menyebabkan intensitas warna pada flavonoid menjadi lebih besar. Larutan HCl berfungsi sebagai agen yang menghentikan reaksi tersebut (kembali pada warna asli) (Packer,2001).

g. Uji polifenol Serbuk bunga pulu dilarutkan ke dalam air dan dipanaskan dengan penangas air selama 10 menit, karena polifenol merupakan senyawa yang larut dalam air panas. Penambahan pereaksi besi (III) klorida mengindikasikan adanya gugus fenol. Reaksi senyawa polifenol dengan FeCl3 akan membentuk kompleks warna. Terjadinya warna hijau-biru menunjukan adanya polifenol. Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut:

Gambar 8. Reaksi antara senyawa fenolik dengan FeCl3 (Herlianawati, 2003)

Hasil dari penelitian ini, terjadi warna biru, diperkirakan terdapat senyawa polifenol didalam serbuk bunga pulu.


51

h. Uji minyak atsiri Uji minyak atsiri dilakukan dengan cara menggojog 10 gram serbuk simplisia dengan 20 mL eter kemudian disaring. Minyak atsiri adalah zat berbau yang pada suhu kamar, mudah menguap di udara, dan pada umumnya larut pada pelarut organik. Hasil pengujian didapatkan bau aromatik yang menunjukan bahwa serbuk simplisia yang diuji mengandung minyak atsiri. Filtrat yang didapat dipisahkan, kemudian residu dilarutkan dengan sedikit etanol kemudian diuapkan hingga kering. Hasil pengujian tersebut diperoleh bau khas aromatik serbuk bunga pulu, dari kedua uji tersebut dapat disimpulkan bahwa simplisia yang diteliti mengandung minyak atsiri. Hasil yang didapatkan sesuai dengan penelitian. Dari hasil uji tabung serbuk bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) yang telah dilakukan dapat diperkirakan adanya kandungan senyawa flavonoid, polifenol, dan minyak atsiri. 2. Uji Kualitatif secara Kromatografi Lapis Tipis Identifikasi kualitatif serbuk bunga pulu dilakukan dengan menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT). Analisis dengan KLT memiliki beberapa keuntungan diantaranya ialah penanganannya sederhana dan cuplikan serta pelarut yang digunakan sedikit. a. Uji KLT flavonoid Fase diam yang digunakan yaitu selulosa gel dan fase gerak yang digunakan adalah n-butanol - asam asetat - air (4:1:5) v/v. Selulosa digunakan sebagai fase diam karena jika digunakan silika gel, maka akan terbentuk kompleks


52

khelat antara salah satu gugus yang terdapat pada flavonoid dengan gypsum (CaSO4). Kompleks khelat tersebut terikat kuat pada fase diam yang dapat menyebabkan tidak terjadinya elusi. Reaksinya adalah sebagai berikut:

2 CaSO4

Gambar 9. Interaksi flavonoid dengan CaSO4 membentuk kompleks khelat (Herlianawati, 2003)

10 cm



  Rutin

sampel

Fase gerak n-butanol – asam asetat- air (4:1:5) v/v Fase diam selulosa Deteksi uap amoniak

sampel

Gambar 10. Hasil uji KLT flavonoid

Pembanding yang digunakan adalah rutin. Penotolan pembanding pada fase diam dilakukan dengan mikropipet 5 L. Sampel dan pembanding kemudian ditotolkan pada lempeng KLT kemudian dielusi pada batas tertentu


53

(10 cm). Elusi dilakukan sepanjang 10 cm di dalam bejana yang sudah jenuh. Bejana yang berisi larutan pengembang harus dijenuhkan telebih dahulu agar proses elusi dapat berlangsung dengan baik. Tabel VIII. Nilai Rf dan warna bercak pada uji KLT dengan fase diam selulosa dan fase gerak butanol : asam asetat glasial : air (4:1:5) dan pembanding rutin 0,05% untuk analisis flavonoid Bercak

Sampel Pembanding

No

1 2 1

Deteksi UV254 UV365 Rf Warna Rf Warna 0,64 Kuning 0,64 Ungu 0,64 Kuning 0,64 Ungu 0,61 Kuning 0,61 Ungu

Uap amoniak Rf Warna 0,64 Kuning 0,64 Kuning 0,61 Kuning

Dilihat dari hasil yang dapat dilihat dari tabel, maka dapat disimpulkan mengandung flavonoid. Hal ini terbukti dengan terdapatnya bercak dengan warna bercak yang mirip dengan bercak pembanding. Jika dilihat dari Rf-nya diperkirakan yang terjadi adalah flavonoid yang terdapat pada sampel berbeda dengan pembanding. Flavonoid mempunyai gugus auksokrom OH yang terikat pada atom karbon nomor 4 pada cincin B. Flavonoid juga mempunyai gugus O yang bersifat elektrofil (senang menarik elektron). Adanya basa (NH3), OH akan mudah melepaskan H yang kemudian diikat oleh NH3, setelah itu terjadi reaksi penyusunan kembali yang menyebabkan O akan memiliki pasangan elektron tambahan. Adanya tambahan elektron tersebut, maka energi yang diperlukan semakin kecil, sehingga akan terjadi pergeseran panjang gelombang menuju panjang gelombang yang lebih besar.


54

Reaksi yang terjadi sebagai berikut:

Gambar 11. Reaksi flavonoid dengan NH3 (Herlianawati, 2003)

Warna kuning yang terjadi dapat dengan cepat hilang karena di udara terdapat banyak uap air (H-OH) sehingga H dari uap air akan berikatan dengan O yang kelebihan elektron, sehingga struktur senyawa tersebut akan kembali seperti semula. Warna yang terbentuk merupakan warna yang reversibel.

b. Uji KLT minyak atsiri Fase diam yang digunakan yaitu silika gel GF254. Silika gel GF254 merupakan fase diam yang bersifat polar. Silika gel merupakan adsorben yang paling banyak digunakan dalam Kromatografi Lapis Tipis (KLT) yang berupa silika gel yang direkatkan dengan CaSO4 dan yang berfluoresensi pada panjang gelombang 254 nm. Fase gerak yang digunakan adalah benzena : metanol (10:1). Pembanding yang digunakan adalah terpenoid. Penotolan bercak dan pembanding pada fase diam dilakukan dengan mikropipet 5 µL. Sampel dan pembanding ditotolkan pada lempeng KLT kemudian dielusi pada batas tertentu (10 cm). Elusi dilakukan sepanjang 10 cm di dalam bejana yang sudah jenuh, agar proses elusi dapat berlangsung dengan baik.


55

Tabel IX. Nilai Rf dan warna bercak pada uji KLT dengan fase diam silika gel F254 dan fase gerak toluen : etil asetat (93:7) dan pembanding terpenoid untuk analisis minyak atsiri Bercak No Deteksi UV254 UV365 Vanilin-Asam Sulfat Rf Warna Rf Warna Rf Warna Sampel 1 0,25 Ungu 0,25 Merah muda Pembanding 1 0,21 Ungu 0,21 Merah Muda

Berdasarkan hasil yang terlihat pada tabel diatas, dapat diasumsikan bahwa sampel mengandung minyak atsiri. Hal ini terbukti dengan adanya profil bercak dengan profil bercak yang mirip dengan pembanding.

10 cm

   Terpenoid

sampel

Gambar 12. Hasil uji KLT minyak atsiri

Fase gerak toluen : etil asetat (93:7) v/v Fase diam silika gel F 254 Deteksi vanilin asam sulfat


56

Warna violet yang terdeteksi pada plat KLT diakibatkan oleh reaksi Liebermann-Burchard, yaitu salah satu reaksi warna yang paling umum pada senyawa atsiri (terpenoid, fenilpropan, fenol dan turunannya) dengan mekanisme abstraksi H+ sehingga terbentuk senyawa ikatan rangkap terkonjugasi. Ikatan rangkap dua pada struktur kimia terpenoid memiliki spektrum serapan pada sinar ultraviolet dan sinar visibel, sehingga di daerah cahaya tampak terlihat berwarna violet. Jika ditinjau ulang pada uji KLT, diketahui bahwa serbuk mengandung senyawa flavonoid dan minyak atsiri yang merupakan senyawa antimikroba. Ketika diuji, fraksi petroleum eter, kloroform, etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) hingga konsentrasi 50% tidak mempunyai kemampuan untuk menghambat pertumbuhan bakteri dan fungi uji. Hal ini diperkirakan disebabkan oleh: 1. Jumlah komponen senyawa antimikroba Beberapa jenis komponen kimia yang terkandung pada serbuk bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) memiliki sifat sebagai antimikroba seperti flavonoid dan minyak atsiri. Walaupun demikian, jelas terlihat bahwa fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu secara keseluruhan tidak memiliki kemampuan untuk menghalangi pertumbuhan mikroba uji. Hal ini dapat diperkirakan terjadi karena komponen yang bersifat sebagai antimikroba hanyalah sebagai komponen minor sehingga perannya sebagai antimikroba tidaklah signifikan, dengan kata lain komponen utama yang memberikan kontribusi yang signifikan terhadap sifat dan karakteristik fraksi bunga pulu bukanlah senyawa yang potensial sebagai antimikroba (Jamal, Agusta, dan Praptiwi, 2003).


57

2. SEES ( Side Effect Eliminating Substances/ Secondary Efficacy Enhancing Subtances) Ekstraksi bertingkat dalam penelitian ini bertujuan untuk menyari atau mengisolasi senyawa aktif yang berbeda polaritasnya. Teori SEES (Side Effect Elimnating Substances) menjelaskan adanya zat yang meniadakan efek samping/ utama oleh zat-zat yang lain. SEES (Secondary Efficacy Enhancing Subtances) juga menjelaskan bahwa terdapat zat-zat yang ketika dalam keadaan senyawa tunggal tidak berefek, sehingga zat yang diisolasi efeknya dalam hal ini sebagai antimikroba diperkirakan bisa menurun karena tidak terdapat zat sekunder.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan 1. Fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) tidak mempunyai aktivitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus, Escherechia coli, dan Candida albicans. 2. Tidak diketahui seberapa besar Kadar Hambat Minimum (KHM)

dan

Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) dari fraksi petroleum eter, kloroform, dan etanol bunga pulu (Carthamus tinctorius L.) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli,dan Candida albicans. 3. Berdasarkan uji tabung yang dilakukan, serbuk bunga pulu diduga mengandung flavonoid, polifenol, dan minyak atsiri. Uji KLT menunjukan ada profil bercak yang mirip dengan profil bercak flavonoid dan minyak atsiri.

B. Saran 1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai kandungan kimia dari bunga pulu secara kuantitatif sehingga dapat diketahui berapa kadar senyawa-senyawa yang terkandung di dalam bunga pulu. 2. Perlu diteliti mengenai potensi antimikroba dari batang, daun atau bagian lainnya dari tanaman pulu.

58


59

DAFTAR PUSTAKA Akroum, S., Satta, D., Lalaoui, K., 2009, Antimicrobial, Antioxidant, Cytotoxic Activities and Phytochemical Screening of Some Algerian Plant, EJSR,Vol 31 (2), p. 291. Ardiansyah, 2007, Antibakteri dari Tumbuhan (bagian www.beritaiptek.com, diakses 15 Januari 2013 pukul 16.03.

pertama),

Arenas, R., Estrada, R., 2001, Tropical Dermatology, Landes Bioscience, Georgetown, p. 106-9. Birla Institute of Scientific Research, 2010, Database of Medicinal and Aromatic Plants in Rajasthan, http://bioinfo.bisr.res.in/project/domap/plant_details.php?plantid=0014& bname=Carthamus%20tinctorius, diakses 11 Januari 2013 pukul 16.30. Bouhdid, S., Skali, S.N., Idaomar, M., Zhid, A., Baudoux, D., Amensour, M., dkk., 2008, Antibacterial and antioxidant activities of origanum compactum essential oil, AJB, Vol 7 (10), pp. 1563-1570. Braga, P.C., Sasso, M.D., Culici, M., Alfieri, M., 2008, Thymol inhibits mature Candida albicans biofilm Scaning electron miccroscopy (SEM) study, 130 World Congress of Ginaecological Endrocrinology. Florence, Italia. Burt, S.A., 2004, Essential oil : Their bacterial properties and potential application in food, a review int. Journal Food microbiology, Vol. 94, pp. 223-253. Cai, Y., Luo, Q., Sun, M., Corke, H., 2003, Antioxidant activity and phenoloc compound of 112 traditionla Chines medicinal plants asociated with anticancer, Life Science, p. 2161.

Chomnawang, M.T., Surassmo, S., Nukoolkam, V.S., Gritsanapan, W., 2005, Antomicrobial effects of Thai Medicinal Plants against Acne-Inducing Bacteria, Journal of Ethnopharmacology, pp. 1-4. Damayanti, E., Suparjana, T.,B., 2007, Efek Penghambatan Beberapa Fraksi Ekstrak Buah Mengkudu Terhadap Shigella dysenteria, Prosiding Seminar Nasional Teknik Kimia “Kajuangan”, UPT BPPTK LIPI, Yogyakarta, p. A05-2

Departemen Kesehatan RI, 1986, Sediaan galenik, Edisi 1, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 4 - 6. Hedetniemi, K., Liao, M., 2006, Luria Broth (LB) and Luria Agar(LA) Media and Their Uses : Enterobacter aerogenes, www.microbelibrary.org, diakses 11 Januari 2013, Pukul 16.07


60

Herlianawati, M., 2003, Uji Potensi Antibakteri Ekstrak Etanol Umbi Binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steen) terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Skripsi, Universitas Sanata Dharma. Heuze, V., Tran, G., 2011, Safflower (Carthamus tinctorius)forage, feepedia.org & programe by INRA,CIRAD,AFZ and FAO, www.feepedia.org/node/173 , diakses 25 September 2011 pukul 17.12. Hidayah, A.N., 2010, Efektifitas Air Perasan Jeruk Lemon (Citrus Lion Burm) 25 % diabndingkan ketokonazol 2% terhadap pertumbuhan Malassezia Sp. Pada ketombe, Artikel Karya Tulis Ilmiah, Universitas Diponegoro, Semarang.

Idtools,

2013, Cut Flower Exports of Africa : Carthamus L., http://idtools.org/id/cutflowers/key/Cut_Flower_Exports_of_Africa/Medi a/Html/Fact_sheets/Carthamus.htm, diakses pada tanggal 24 Januari 2013 pukul 22.03 WIB.

Jamal, Y., Agusta, A., dan Praptiwi, 2003, Kompisisi Kimia dan Efek Antibakteri Minyak Atsiri Buah Gedebong (Piper aduncum L.), Majalah Famasi Indonesia , 14 (1), pp. 284 – 289. Jawetz, E., Melnick, J.L., dan Adelberg, E.A., 2005, Mikrobiologi Kedokteran (Medical Microbiology), diterjemahkan oleh bagian mikrobiologi fakultas Kedokteran Universitas Airlangga,pp. 100-101, 235, 318-319, 352, EGC, Jakarta. Kayser, F.H., Bienz, K.A., Eckert, J., Zinkernage, R.M., 2005, Medical Microbiology, Ed.10, Stuttgart : Thieme, p. 362-4. Khunaifi, M., 2010, Uji AktivitasAntibakteri Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis ) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa, Skripsi, 30, Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim, Malang. Kokate, Purohit, Gokhale, 2009, Pharmacognosi, Nirali Prakashan, Bangalore, p.11.7. Kusmayati, Agustini, N.W.R., 2007, Uji Aktivitas Senyawa Antibakteri dari Mikroalga (Porphyridium cruentum), Biodiversitas, Vol. 8 (1), pp. 48-53. Madigan, M.T., Martinko J.M., Dunlap, P.V., Clark, D.P., 2009, Brock Biology of Microorganism, Pearson Benjamin Cumming, United State, Chapter 3 : epdemiology, pp. 935-954. Markham, K.R., 1988, Cara Mengidentifikasi Flavonoid, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, Penerbit ITB, Bandung. p. 15.


61

Murov, S., 2002, Properties of Organik Solvent, www.murov.info/orgachem.htm, diakses 2 Agustus 2012 pukul 21:59. Mothana, R.A.A., Abdo S.A.A., Hason, S., Althawab, F.M.N., Alaghbari, A.Z., Lindequist, U., 2008, Antimicrobial,Antioxidant and Cytotoxic Activities and Phytochemical Screening of Some Yemeni Medicinal Plants, eCam Vol. 7 (3), pp. 324-326. Nostro, A., Papalia, T., 2012, Antimicrobial Activity of Carvacrol : Current Progress and Future Prospectives, RPADD, Vol. 7, No. 1, pp. 28-35. Nagaraj, B., Malakar, B., Divya, T.K., Krisnhamurthy, N.B., Liny, P., Dinesh, R., Iconaru, S.L., Ciobanu, C.S., 2012, Synthesis of plant mediated gold nanoparticle using flower extracts of Carthamus tinctorius (Safflower) and evaluation of their biological activities, Digest Journal of Nanomaterials and Biostructure, Vol. 7 (3), p.1290. Packer, L., 2001, Flavonoids Ana Other Polyphenols, Acedemic Press, USA, p. 55. Pratiwi, S.,T., 2008, Mikrobiologi Farmasi, Erlangga, Jakarta, pp.136-147. Rogers,

K., 2011, Evil E.Coli, Encyclopedia Britanica, http://www.britannica.com/blogs/2011/06/evil-coli, diakses 11 Januari 2013 pukul 15:11.

Rohman, A. dan Gandjar, I.G., 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, pp. 354-356. Sabir, A., 2005, Aktivitas antibakteri flavonoid propolis Trigona sp terhadap bakteri Streptococcus mutans (in vitro), Majalah Kedokteran Gigi (Dent. J.), Vol. 38, pp. 135-141. Simatupang, M.M., 2009, Candida albicans, Departemen Mikrobiologi Fakultas Kedokteran USU, Sumatera Utara. Sokovic, M., Glamoclija, J., Marin, P.D., Brkic, D., van Griensven, L.J.L.D., 2010, Antibacterial effect of the essential oil of commonly consumed medicinal herbs using an In Vitro model, Molecules 2010, 15, pp.7532-7546 Staf Pengajar Departemen Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijaya, 2009, Kumpulan Kuliah Farmakologi, Ed.2 pp.222, 616, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.

Stierman, B., 2012, Vancomycin Resistance in Stphylococcus aureus: A Danger Dent in Our Armamentarium, Clinical Correlations The NYU Langone Online Journal of Medicine, http://www.clinicalcorrelations.org/?p=5810, diakses 11 Januari 2013 pukul 15.00.


62

Sudibyo, E.S., Rohmawati, E., Munira., Febriana, S.A., Radiono, S., Suswanto, 2008, Profil Resistensi Antibiotik pad Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa, Berkala Kesehatan Klinik, Vol XIV, No. 2, p.100. Sudiono, J., 2001, Peran Candida albicans di dalam rongga mulut, MI Kedokteran Gigi Fakultas Kedokteran Usakti, 44 (16), p.96. Tadesse, D.A., Zhao, S., Tong, E., Ayers, S., Singh, A., Bartholommew, M.,J., McDermott, P.,F., 2012, Antimiccrobial Drug Resistance in Escherichia coli from Humans and Food Animals, United States, 1950-2002, EIDJ, Vol. 18, No. 5, p. 744. Tjampaksari, C.R., 2006, Karakteristik Candida albicans, http://www.kalbe.ci.id/files/cdk/files/13_15_karakteristikbiologicandidaa lbicans.pdf., diakses 11 Januari 2013. Todar, K., 2012, Staphylococcus aureus and Staphylococcal Disease, Todar’s Online Textbook of Bacteriology, http://textbookofbacteriology.net/staph.html, diakses 11 Januari pukul 15.11. Wijayakusuma, H., 2008, Ramuan Herbal Penurun Kolesterol, Perpustakaan Bunda (Grup Puspa Swara), Jakarta, p. 61. Wijayakusuma, H., 2008a, Atasi Kanker Dengan Tanaman Obat, Puspa Swara, Jakarta, pp.45-46. Ziarati, P., Asgarpanah, J., Kianifard, M., 2012, The essential oil composition of Carthamus tintoris L. Flower growing in Iran, AJB Vol. 11 (65), pp. 1292112924.


LAMPIRAN


Lampiran 1. Surat Keterangan Selesai Melakukan Determinasi

63


Lampiran 2. Sertifikat Hasil Uji Staphylococcus aureus ATCC 25923

64


Lampiran 3. Sertifikat Hasil Uji Escherichia coli ATCC 32518

65


Lampiran 4. Sertifikat Hasil Uji Candida albicans ATCC 10231

66


67

Lampiran 5. Foto Tanaman Bunga Pulu (Carthamus tinctorius), Foto Serbuk, dan Foto Bunga Kering

Foto Tanaman Bunga Pulu (Carthamus tinctorius)

Foto Serbuk Bunga Pulu ( Carthamus tinctorius)


68

Foto Bunga Pulu Kering Lampiran 6. Foto Maserasi, Penguapan Menggunakan Rotaevaporator, Variasi Konsentrasi Fraksi Etanol, Fraksi Kloroform, Fraksi Petroleum eter

Foto Maserasi


69

Foto Penguapan Menggunakan Rotary Evaporator

Keterangan: C1= Konsentrasi 50% C4= Konsentrasi 25% C7= Konsentrasi 12,5% C10= Konsentrasi 6,25% C13= Konsentrasi 3,125%

Foto Variasi Konsentrasi Fraksi Petroleum Eter Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.)


70


Foto Variasi Konsentrasi Fraksi Kloroform Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.)


Foto Variasi Konsentrasi Fraksi Etanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.)


71

Lampiran 7. Foto Hasil Uji Pendahuluan Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius) dengan Uji Tabung

Keterangan : A. Sampel + Aquadest B. Sampel + Aquadest + KOH

Lampiran 8. Foto Hasil Uji Alkaloid Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius) dengan Uji Tabung

Keterangan : A. Sampel + Mayer B. Sampel + Dragendorf


72

Lampiran 9. Foto Hasil Uji Antrakinon Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius) dengan Uji Tabung

Keterangan : Lapisan atas + KOH

Lampiran 10. Foto Hasil Uji Polifenol Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius) dengan Uji Tabung

Keterangan : A. Sampel + Aquadest B. Sampel + Etanol 80%


73

Lampiran 11. Foto Hasil Uji Tanin Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius) dengan Uji Tabung

Keterangan : C. Sampel + NaCl 2% D. Sampel + NaCl 2% + Gelatin

Lampiran 12. Foto Hasil Uji Saponin Serbuk Bunga Pulu (Carthamus tinctorius) dengan Uji Tabung


74

Lampiran 13. Foto Hasil KLT Fraksi Metanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) dengan Deteksi UV 254, UV 365, dan Uap Amonia pada Analisis Flavonoid

Keterangan : I. Deteksi UV 254 nm a. Pembanding Rutin 0,05 % b. Sampel c. Sampel II. Deteksi UV 365 nm a. Pembanding Rutin 0,05 % b. Sampel c. Sampel III. Deteksi Uap Amoniak a. Pembanding Rutin 0,05 % b. Sampel c. Sampel


75

Lampiran 14. Foto Hasil KLT Fraksi Metanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) dengan Deteksi UV 254, UV 365, dan Vanilin Asam Sulfat pada Analisis Minyak Atsiri.

Keterangan : I. Deteksi UV 254 nm P. Pembanding S. Sampel II. Deteksi 365 nm P. Pembanding S. Sampel III. Deteksi Vanilin Asam Sulfat P. Pembanding S. Sampel


76

Lampiran 15. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Petroleum Eter (PE) terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dengan Metode Difusi Sumuran

Keterangan a. Kontrol Positif b. Fraksi PE Bunga Pulu 50% c. Fraksi PE Bunga Pulu 25 % d. Fraksi PE Bunga Pulu 12,5% e. Fraksi PE Bunga Pulu 6,25% f. Fraksi PE Bunga Pulu 3,125% g. Kontrol Negatif

Lampiran 16. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Kloroform (CHCL3) terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dengan Metode Difusi Sumuran

Keterangan a. Kontrol Positif b. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 50% c. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 25 % d. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 12,5% e. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 6,25% f. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 3,125% g. Kontrol Negatif


77

Lampiran 17. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Etanol terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 dengan Metode Difusi Sumuran

Keterangan a. Kontrol Positif b. Fraksi EtOH Bunga Pulu 50% c. Fraksi EtOH Bunga Pulu 25 % d. Fraksi EtOH Bunga Pulu 12,5% e. Fraksi EtOH Bunga Pulu 6,25% f. Fraksi EtOH Bunga Pulu 3,125% g. Kontrol Negatif

Lampiran 18. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Petroleum Eter terhadap Escherichia coli ATCC 32518 dengan Metode Difusi Sumuran

Keterangan a. Kontrol Positif b. Fraksi PE Bunga Pulu 50% c. Fraksi PE Bunga Pulu 25 % d. Fraksi PE Bunga Pulu 12,5% e. Fraksi PE Bunga Pulu 6,25% f. Fraksi PE Bunga Pulu 3,125% g. Kontrol Negatif


78

Lampiran 19. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Kloroform terhadap Escherichia coli ATCC 32518 dengan Metode Difusi Sumuran

Keterangan a. Kontrol Positif b. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 50% c. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 25 % d. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 12,5% e. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 6,25% f. Fraksi CHCL3 Bunga Pulu 3,125% g. Kontrol Negatif

Lampiran 20. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Etanol terhadap Escherichia coli ATCC 10231 dengan Metode Difusi Sumuran

Keterangan a. Kontrol Positif b. Fraksi EtOH Bunga Pulu 50% c. Fraksi EtOH Bunga Pulu 25 % d. Fraksi EtOH Bunga Pulu 12,5% e. Fraksi EtOH Bunga Pulu 6,25% f. Fraksi EtOH Bunga Pulu 3,125% g. Kontrol Negatif


79

Lampiran 21. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Petroleum Eter terhadap Candida albicans ATCC 10231 dengan Metode Difusi Sumuran

Keterangan K+ : Kontrol Positif 1 : Fraksi PE Bunga Pulu 50% 2 : Fraksi PE Bunga Pulu 25 % 3 : Fraksi PE Bunga Pulu 12,5% 4 : Fraksi PE Bunga Pulu 6,25% 5 : Fraksi PE Bunga Pulu 3,125% K- : Kontrol Negatif

Lampiran 22. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Kloroform terhadap Candida albicans ATCC 10231 dengan Metode Difusi Sumuran

Keterangan K+ : Kontrol Positif 6 : Fraksi CHCl3 Bunga Pulu 50% 7 : Fraksi CHCl3 Bunga Pulu 25 % 8 : Fraksi CHCl3 Bunga Pulu 12,5% 9 : Fraksi CHCl3 Bunga Pulu 6,25% 10 : Fraksi CHCl3 Bunga Pulu 3,125% K- : Kontrol Negatif


80

Lampiran 23. Foto Hasil Uji Potensi Antibakteri Fraksi Etanol terhadap Candida albicans ATCC 10231 dengan Metode Difusi Sumuran

Keterangan K+ : Kontrol Positif 11 : Fraksi EtOH Bunga Pulu 50% 12 : Fraksi EtOH Bunga Pulu 25 % 13 : Fraksi EtOH Bunga Pulu 12,5% 14 : Fraksi EtOH Bunga Pulu 6,25% 15 : Fraksi EtOH Bunga Pulu 3,125% K- : Kontrol Negatif

Lampiran 24. Foto Kontrol Media dan Pertumbuhan Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans

Foto Kontrol Media NA Agar


Foto Kontrol Media PDA Agar

Foto Kontrol Pertumbuhan Candida albicans

81


Foto Kontrol Pertumbuhan Escherichia coli

Foto Kontrol Pertumbuhan Staphylococcus aureus

82


83

Lampiran 25. Foto Kemampuan Difusi Fraksi Petroleum Eter, Kloroform, Etanol Bunga Pulu (Carthamus tinctorius L.) pada Media Agar

Foto Media Agar tanpa FeCl3 Keterangan: A: Standar rutin B: Etanol C: Klorofrom D: Petroleum Eter E: DMSO 5%

Foto Media Agar dengan FeCl3


BIOGRAFI PENULIS HERMAWAN DENY PRASETYO

lahir

pada tanggal 7 Februari 1992 di Yogyakarta dari pasangan Bapak Harya Adi Setiawan dan Ibu Sumarsih. Menjalani Taman Kanan-Kanak di TK IDHATA (Ikatan Dharma Wanita) Kolaka, Sulawesi Tenggara, pada tahun 1996. Kemudian pada tahun 1997 melanjutkan untuk menuntut ilmu di SD Negeri 2 Balandete. Tamat dari Madrasah Tsanawiyah Negeri Kolaka pada tahun 2006. Dan Lulus dari Sekolah Menengah Atas Negeri 1 Kolaka pada tahun 2009, dan berhasil menyelesaikan S1 di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2013. Selama menempuh pendidikan di Fakultas Farmasi, penulis aktif dalam berbagai kegiatan baik di luar kampus maupun bidang kerohanian dan kemahasiswaan, seperti menjabat sebagai Komisaris Jaringan Mahasiswa Kesehatan Indonesia (JMKI) Komisariat Fak. Farmasi USD periode 2011-2012, Seksi Kesenian Insadha 2010 & 2011, UKM KSR PMI Unit VI USD 2009-2010, UKM Teater Seriboe Djendela 2009-2010, Kepala Departemen Informasi & Komunikasi JMKI Wilayah yogyakarta 2011-2012, Badan Pengawas Wilayah JMKI Yogyakarta 2012-2013.

84

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents