PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

DAYA ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN BELUNTAS (Pluchea indica Less) DAN DAUN KEMANGI (Ocimum basilicum L) TERHADAP Staphylococcus epidermidis ATCC 12228

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm) Program Studi Farmasi

Oleh : Putu Eny Guna Pramita NIM : 098114078

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013

i


Persetujuan Pembimbing


Skripsi yang diajukan oleh: Putu Eny Guna Pramita NIM : 098114078

telah disetujui oleh

Pembimbing Utama

C. M. Ratna Rini Nastiti M.Pharm., Apt

Tanggal 12 Juni 2013

ii


iii


PERNYATAAN KEASLIAN KARYA

Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi yang saya tulis ini tidak memuat karya atau bagian karya orang lain, kecuali yang telah disebutkan dalam kutipan dan daftar pustaka, sebagaimana layaknya karya ilmiah. Apabila dikemudian hari ditemukan indikasi plagiarisme dalam naskah ini, maka saya bersedia menanggung segala sanksi sesuai peraturan perundangundangan yang berlaku.

Yogyakarta, 12 Juni 2013 Penulis

Putu Eny Guna Pramita

iv


HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI

Yang bertanda tangan di bawah ini, saya mahasiswa Universitas Sanata Dharma : Nama

: Putu Eny Guna Pramita

Nomor Mahasiswa : 098114078

Demi pengembangan ilmu pengetahuan, saya memberikan kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma karya ilmiah saya yang berjudul :


Dengan demikian saya memberikan kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma hak untuk menyimpan, mengalihkan dalam bentuk media lain, mengelolanya dalam bentuk pangkalan data, mendistribusikan secara terbatas, dan mempublikasikannya di internet atau media lain untuk kepentingan akademis tanpa perlu meminta ijin dari saya maupun memberikan royalti kepada saya selama tetap mencantumkan nama saya sebagai penulis.

Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya. Dibuat di Yogyakarta Pada tanggal 12 Juni 2013 Yang menyatakan

Putu Eny Guna Pramita v


HALAMAN PERSEMBAHAN

“Gatir bharta prabhuh saksi nivasah saranam suhrt, prabhavah pralayah, stahanam nidhanam bijam avyayam” “Aku adalah tujuan, pengemban, penguasa, saksi, tempat

kediaman, perlindungan, dan kawan. Aku adalah asal mula dan pelebur dasar, tempat bersandar dan benih abadi” (Bhagawadgita, IX. 18)

Karya ini kupersembahkan untuk : ˘Orang tuaku˘ ˘Kedua adikku˘ ˘Tri Suputra˘ ˘Almamaterku˘ ˘Diriku sendiri˘

vi


PRAKATA

Puji syukur dan terima kasih kepada Ida Sang Hyang Widhi Wasa atas anugerah dan berkat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi berjudul “Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Beluntas (Pluchea indica Less) Dan Daun Kemangi (Ocimum basilicum L) Terhadap Staphylococcus epidermidis ATCC 12228”. Berbagai kesulitan yang dihadapi penulis dalam proses penyelesaian skripsi tidak akan dapat terlewati tanpa bantuan, dukungan, bimbingan, kritik dan saran dari berbagai pihak. Pada kesempatan ini, penulis hendak menyampaikan ungkapan terima kasih sebesar-besarnya kepada : 1. Ibu C.M. Ratna Rini Nastiti, M.Pharm., Apt selaku Dosen Pembimbing dan dosen penguji yang telah banyak memberikan bimbingan, saran dan evaluasi sejak penyusunan proposal ini hingga terselesainya penulisan skripsi ini. 2. Bapak Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt selaku Dosen Penguji yang telah banyak memberikan bimbingan, arahan dan penjelasannya. 3. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M. Si selaku Dosen Penguji yang juga telah banyak memberikan bimbingan, arahan dan penjelasannya. 4. Ibu Maria Dwi Jumpowati, S.Si yang telah banyak memberikan pengarahan, penjelasan dan saran dalam penyusunan skripsi ini. 5. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

vii


6. Teman-teman angkatan 2009 yang telah sangat membantu dan memberi semangat dan doa. 7. Laboran Laboratorium Mikrobiologi dan Farmakognosi Fitokimia atas segala bantuan yang diberikan. 8. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu-persatu, atas segala bantuan demi kelancaran penyelesaian skripsi ini. Penulis menyadari bahwa skripsi ini jauh dari kata sempurna mengingat keterbatasan wawasan dan kemampuan penulis. Untuk itu, penulis sangat mengharapkan kritik dan saran yang membangun sehingga skripsi ini menjadi lebih baik. Penulis berharap semoga tulisan ini berguna bagi pembaca.

Penulis

viii


DAFTAR ISI

Halaman HALAMAN JUDUL ................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ........................................... ii HALAMAN PENGESAHAN .................................................................... iii PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ..................................................... iv HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ............................................... v HALAMAN PERSEMBAHAN ................................................................. vi PRAKATA ............................................................................................... vii DAFTAR ISI ............................................................................................. ix DAFTAR TABEL ................................................................................... xiii DAFTAR GAMBAR ............................................................................... xiv DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................ xvi INTISARI .............................................................................................. xviii ABSTRACT .............................................................................................. xix BAB I PENGANTAR ................................................................................. 1 A. Latar Belakang ..................................................................................... 1 1. Permasalahan ................................................................................ 2 2. Keaslian penelitian ........................................................................ 3 3. Manfaat penelitian ......................................................................... 4 B. Tujuan Penelitian ................................................................................. 4 BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ......................................................... 6

ix


A. Beluntas (Pluchea indica Less) ............................................................ 6 1. Keterangan botani ......................................................................... 6 2. Deskripsi daun beluntas ................................................................. 7 3. Kandungan kimia daun beluntas .................................................... 7 4. Khasiat dan kegunaan .................................................................... 7 B. Kemangi (Ocimum basilicum L)........................................................... 8 1. Keterangan botani ......................................................................... 8 2. Deskripsi daun kemangi ................................................................ 9 3. Kandungan kimia daun kemangi.................................................... 9 4. Khasiat dan kegunaan .................................................................. 10 C. Maserasi............................................................................................. 10 D. Staphylococcus epidermidis ............................................................... 12 E. Antimikrobia ...................................................................................... 13 F. Pengujian Aktivitas Antimikrobia ...................................................... 14 G. Landasan Teori .................................................................................. 16 H. Hipotesis ............................................................................................ 17 BAB III METODE PENELITIAN ........................................................... 18 A. Jenis dan Rancangan Penelitian .......................................................... 18 B. Variabel dan Definisi Operasional ...................................................... 18 1. Variabel ...................................................................................... 18 2. Definisi operasional..................................................................... 19 C. Bahan Penelitian ................................................................................ 20 D. Alat Penelitian ................................................................................... 20

x


E. Tata Cara Penelitian ........................................................................... 20 1. Determinasi daun beluntas dan daun kemangi ............................. 20 2. Pengumpulan, pengeringan dan pembuatan serbuk bahan ............ 21 3. Pembuatan ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi dengan metode maserasi .............................................................. 21 4. Pembuatan seri konsentrasi.......................................................... 21 5. Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis ............................ 22 F. Analisis Data...................................................................................... 26 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................. 27 A. Determinasi Tanaman ........................................................................ 27 B. Pengumpulan, Pengeringan Dan Pembuatan Serbuk Bahan ................ 27 C. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Beluntas Dan Daun Kemangi Dengan Metode Maserasi ................................................................... 28 D. Uji Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Beluntas Dan Daun Kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis .................................. 30 1. Uji daya antibakteri ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dengan difusi sumuran ...................................................................................... 30 2. Penentuan KHM dan KBM ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi dengan dilusi padat ............................................... 41 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN..................................................... 47 A. Kesimpulan ........................................................................................ 47

xi


B. Saran.................................................................................................. 47 DAFTAR PUSTAKA .............................................................................. 49 LAMPIRAN ............................................................................................ 52 BIOGRAFI PENYUSUN....................................................................... 108

xii


DAFTAR TABEL

Halaman Tabel I.

Hasil orientasi jumlah rendemen yang dihasilkan oleh masing-masing volume pelarut ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi................................................. 29

Tabel II.

Data diameter zona hambat kontrol pelarut (etanol 70%), kontrol positif (Mediklin®), ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi ....................................................................... 32

Tabel III.

Normalitas distribusi data diameter zona hambat ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi .............................. 38

Tabel IV.

Hasil analisis Wilcoxon ekstrak etanol daun beluntas dengan kontrol pelarut (etanol 70%) dan kontrol positif (Mediklin®) ........................................................................ 39

Tabel V.

Hasil analisis Wilcoxon ekstrak etanol daun kemangi dengan kontrol pelarut (etanol 70%) dan kontrol positif (Mediklin®) ........................................................................ 40

Tabel VI.

Hasil uji daya antibakteri ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi dengan metode dilusi padat ................... 41

xiii


DAFTAR GAMBAR

Halaman Gambar 1.

Hasil uji difusi sumuran ekstrak etanol daun beluntas konsentrasi 10, 15, 20, 25% terhadap Staphylococcus epidermidis ........................................................................ 31

Gambar 2.

Hasil uji difusi sumuran ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 10, 15, 20, 25% terhadap Staphylococcus epidermidis ........................................................................ 31

Gambar 3.

Hasil uji difusi sumuran ekstrak etanol daun beluntas konsentrasi 30, 35, 40, 45, 50% terhadap Staphylococcus epidermidis ........................................................................ 32

Gambar 4.

Hasil uji difusi sumuran ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 30, 35, 40, 45, 50% terhadap Staphylococcus epidermidis ........................................................................ 33

Gambar 5.

Histogram mean data diameter zona hambat ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis ............................................... 33

Gambar 6.

Hasil uji difusi sumuran kontrol media ............................... 34

Gambar 7.

Hasil uji difusi sumuran kontrol pertumbuhan bakteri uji ... 35

Gambar 8.

Hasil uji difusi sumuran kontrol pelarut (etanol 70%) ......... 36

Gambar 9.

Hasil uji difusi sumuran kontrol positif (Medikin ®) tanpa diencerkan .......................................................................... 37

xiv


Gambar 10.

Hasil uji difusi sumuran kontrol positif (Medikin ®) konsentrasi 2% ................................................................... 37

Gambar 11.

Hasil uji dilusi padat kontrol media .................................... 42

Gambar 12.

Hasil uji dilusi padat kontrol pertumbuhan bakteri uji ......... 42

Gambar 13.

Hasil uji dilusi padat kontrol pelarut (etanol 70%) .............. 43

Gambar 14.

Hasil streak ekstrak etanol daun beluntas konsentrasi 17,5%................................................................................. 45

Gambar 15.

Hasil streak ekstrak etanol daun beluntas konsentrasi 20, 25, 30% .............................................................................. 45

Gambar 16.

Hasil streak ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 17,5%................................................................................. 46

Gambar 17.

Hasil streak ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 20, 25, 30% .............................................................................. 46

xv


DAFTAR LAMPIRAN

Halaman Lampiran 1.

Kunci hasil determinasi daun beluntas dan daun kemangi ... 53

Lampiran 2.

Surat pengesahan determinasi daun beluntas ...................... 54

Lampiran 3.

Surat pengesahan determinasi daun kemangi ...................... 55

Lampiran 4.

Sertifikat hasil uji bakteri Staphylococcus epidermidis ....... 56

Lampiran 5.

Foto beluntas dan kemangi ................................................. 57

Lampiran 6.

Volume sisa pelarut setelah pemekatan ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi ........................................ 57

Lampiran 7.

Beberapa hasil perhitungan bobot ekstrak kental daun beluntas dan daun kemangi................................................. 58

Lampiran 8.

Hasil pengamatan uji difusi sumuran ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi................................................. 58

Lampiran 9.

Hasil pengamatan uji dilusi padat ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi................................................. 60

Lampiran 10. Hasil streak penentuan KHM dan KBM ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi ........................................ 62 Lampiran 11. Uji normalitas diameter zona hambat ekstrak etanol daun beluntas

terhadap

Staphylococcus

epidermidis

menggunakan Shapiro-Wilk ............................................... 63

xvi


Lampiran 12. Uji normalitas diameter zona hambat ekstrak etanol daun kemangi

terhadap

Staphylococcus

epidermidis

menggunakan Shapiro-Wilk ............................................... 65 Lampiran 13. Uji Kruskal-Wallis ekstrak etanol daun beluntas seluruh konsentrasi ......................................................................... 67 Lampiran 14. Uji Kruskal-Wallis ekstrak etanol daun kemangi seluruh konsentrasi ......................................................................... 67 Lampiran 15. Uji Wilcoxon antar konsentrasi ekstrak etanol daun kemangi ............................................................................. 68 Lampiran 16. Uji Wilcoxon antar konsentrasi ekstrak etanol daun beluntas .............................................................................. 80 Lampiran 17. Uji Wilcoxon kontrol pelarut (etanol 70%) dengan kontrol positif (Mediklin®) ................................................. 93 Lampiran 18. Uji Wilcoxon kontrol pelarut (etanol 70%) dengan ekstrak etanol daun beluntas seluruh konsentrasi ................ 93 Lampiran 19. Uji Wilcoxon kontrol pelarut (etanol 70%) dengan ekstrak etanol daun kemangi seluruh konsentrasi ................ 97 Lampiran 20. Uji Wilcoxon kontrol positif (Mediklin®) dengan ekstrak etanol daun beluntas seluruh konsentrasi .......................... 100 Lampiran 21. Uji Wilcoxon kontrol positif (Mediklin®) dengan ekstrak etanol daun kemangi seluruh konsentrasi .......................... 104

xvii


INTISARI Kelenjar apokrin pada kulit manusia mensekresikan keringat yang mengandung lemak, protein dan karbohidrat. Bakteri di permukaan kulit, salah satunya Staphylococcus epidermidis akan menguraikan keringat dari kelenjar tersebut menjadi asam isovalerik yang menyebabkan bau tidak sedap. Daun beluntas (Pluchea indica Less) dan daun kemangi (Ocimum basilicum L) merupakan salah satu tanaman yang berguna sebagai antibakteri. Kandungan yang diduga sebagai antibakteri adalah fenol hidrokuinon, tanin, alkaloid, flavonoid, minyak atsiri. Penelitian ini bertujuan mengetahui apakah ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi memiliki daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis, mengetahui besar KHM dan KBM dan mengetahui ekstrak manakah yang berpotensi lebih besar terhadap Staphylococcus epidermidis. Jenis penelitian ini termasuk penelitian eksperimental murni rancangan acak lengkap pola searah dan hasil dianalisis menggunakan program R 2.14.1 dengan uji Shapiro-Wilk, Kruskal-Wallis dan Wilcoxon. Hasil penelitian yang diperoleh yaitu ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi memiliki daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis. Daun beluntas memiliki KHM dan KBM berturut-turut sebesar 17,5% dan 20%. Daun kemangi memiliki KHM dan KBM berturut-turut sebesar 17,5% dan 20%. Kata kunci : Daun beluntas (Pluchea indica Less), Daun kemangi (Ocimum basilicum L), Kadar Hambat Minimal (KHM), Kadar Bunuh Minimal (KBM), Staphylococcus epidermidis

xviii


ABSTRACT Apocrine glands in human skin secrete sweat that contains fat, protein and carbohydrates. Staphylococcus epidermidis, one of the bacteria on the surface of the skin, will outline sweat from these glands become isovaleric acids that cause odor. Beluntas leaves (Pluchea indica Less) and basil (Ocimum basilicum L) is one of the plants that are useful as antibacterial. The content that is suspected as antibacterial are phenol hydroquinone, tannins, alkaloids, flavonoids, and essential oils. This study aims to determine whether the ethanol extract of beluntas and basil leaves have an antibacterial against Staphylococcus epidermidis, to know the MIC and MBC, and to find out which one has the potential to extract greater against Staphylococcus epidermidis. This research is included in the pure experimental research with one way model of completely randomized design and the results are analyzed with R 2.14.1 program with Shapiro-Wilk, Kruskal-Wallis and Wilcoxon test. The results of the research are the ethanol extract of beluntas and basil leaves has an antibacterial against Staphylococcus epidermidis. Beluntas leaves have MIC and MBC, respectively for 17.5% and 20%. Basil leaves have a MIC and MBC, respectively for 17.5% and 20%. Keywords: Beluntas leaf (Pluchea indica Less), Basil leaf (Ocimum basilicum L), Minimal Inhibitory Concentration (MIC), Minimum Bactericidal Concentration (MBC), Staphylococcus epidermidis

xix


BAB I PENGANTAR

A. Latar belakang Kulit merupakan bagian terbesar dari tubuh manusia dan memiliki luas permukaan sekitar 1,8 m2 dengan berat 10 kg. Fungsi kulit adalah sebagai barier terhadap masuknya bahan berbahaya dan dampak fisik lingkungan serta melindungi dari infeksi oleh patogen, parasit, jamur, bakteri dan virus. Beberapa jenis bakteri yang membentuk flora normal pada kulit antara lain : Micrococci dengan Staphylococci koagulase negatif, Peptococcus spp, Micrococcus spp, Diphtheroids dengan Corynebacteria dan Brevibacterium spp, Propionibacteria dan gram negatif bentuk batang (Elsner, 2006). Bakteri di permukaan kulit menguraikan keringat dari kelenjar apokrin menjadi asam yang mudah menguap dan melepaskan bau tidak sedap. Salah satu asam yang menyebabkan bau tidak sedap adalah asam isovalerik yang dihasilkan dari Staphylococcus epidermidis (Majalah Kesehatan, 2010). Bahan alam yang dapat dimanfaatkan sebagai antibakteri diantaranya daun beluntas dan daun kemangi. Daun beluntas (Pluchea indica Less) yang sebelumnya hanya merupakan tanaman pagar tidak berguna dan biasanya dikonsumsi sebagai sayur pecel atau untuk urap, bahkan lalapan kini sudah banyak dimanfaatkan dan salah satunya sebagai antibakteri. Begitu juga kemangi (Ocimum basilicum L) yang dulunya hanya dikonsumsi sebagai lalapan mentah

1


2

atau sebagai sayuran pun saat ini banyak digunakan sebagai antibakteri menurut Peter (cit., Hendrawati, 2009) dan Meyer et al (cit., Hendrawati, 2009). Kandungan daun kemangi yang bersifat sebagai antibakteri adalah minyak atsiri (Maryati, Fauzia dan Rahayu, 2007) dan berdasarkan Purnomo (2001), flavonoid pada daun kemangi bersifat sebagai antibakteri. Penelitian Ardiansyah, Nuraida dan Andarwulan tahun 2003 menduga kandungan yang bersifat sebagai antibakteri dari daun beluntas antara lain fenol hdrokuinon, tanin dan alkaloid. Sulistiyaningsih (2009) mengatakan bahwa ekstrak etanol daun beluntas (Pluchea indica Less) memiliki daya antibakteri terhadap Pseudomonas aeruginosa Multi Resistant dan Methicillin Resistant Staphylococcus aureus dan ekstrak etanol daun kemangi (Ocimum basilicum) yang pernah diteliti oleh Khalil (2013) menunjukkan adanya daya antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Suatu penelitian untuk ekstrak etanol daun beluntas (Pluchea indica Less) dan daun kemangi (Ocimum basilicum L) terhadap Staphylococcus epidermidis diperlukan terkait dengan adanya penelitian terdahulu yang telah menguji kedua ekstrak daun ini terhadap bakteri yang berbeda.

1.

Permasalahan a. Apakah ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi memiliki daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis? b. Jika kedua ekstrak tersebut memiliki daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis, maka berapa Konsentrasi Hambat Minimal


3

(KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimal (KBM) ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis? c. Bagaimana daya antibakteri ekstrak etanol daun beluntas jika dibandingkan

dengan

ekstrak

etanol

daun

kemangi

terhadap

Staphylococcus epidermidis? 2.

Keaslian penelitian Penelitian sebelumnya yang terkait dengan daya antibakteri terhadap

Staphylococcus epidermidis dari senyawa atau tanaman beluntas dan kemangi antara lain penelitian daun beluntas (Pluchea indica Less) terhadap Pseudomonas aeruginosa Multi Resistant dan Methicillin Resistant Staphylococcus aureus oleh Sulistiyaningsih (2009) dengan hasil, aktivitas antibakteri terhadap MRSA ditunjukkan mulai konsentrasi 25-75% sedangkan terhadap PAMR ditunjukkan mulai konsentrasi 50-75%. Penelitian

Ardiansyah, Nuraida dan Andarwulan

(2003) mengenai daun beluntas (Pluchea indica Less) yang menunjukkan nilai KHM

berkisar

antara

2,26-3,19%

terhadap

bakteri Salmonella

typhii,

Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Bacillus subtilis, Bacillus cereus. Penelitian daun Ocimum basilicum yang menghasilkan diameter zona hambat 21 mm pada konsentrasi 200 mg/ml terhadap Escherichia coli dan 16 mm pada konsentrasi 200 mg/ml terhadap Staphylococcus aureus (Khalil, 2013). Penelitian oleh Patil, Mhaske and Wadhawa (2011) yang menunjukkan bahwa ekstrak metanol akar Ocimum basilicum mempunyai penghambatan yang baik terhadap bakteri Gram-positif (Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Bacillus paludis, Bacillus subtilis) dan


4

Gram-negatif (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Shigella flaxinely, Enterobacter aerogenes) (KHM antara 10-80 µg/ml). Penelitian mengenai ekstrak daun Ocimum basilicum yang menunjukkan aktivitas antibakteri pada konsentrasi minimal (50, 100 dan 200 mg) terhadap Propionibacterium acnes (Raja, Sathyanathan, Sekhar, Roosewelt, 2012). Sejauh pengamatan penulis, penelitian berjudul “Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Beluntas (Pluchea indica Less) dan Daun Kemangi (Ocimum basilicum L) terhadap Staphylococcus epidermidis” belum pernah dilakukan. 3.

Manfaat penelitian a. Manfaat teoretis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi ilmiah terkait daya antibakteri

dari

daun

beluntas

dan

daun

kemangi

terhadap

Staphylococcus epidermidis. b. Manfaat praktis Dengan penelitian ini, diharapkan para formulator dan industri farmasi dapat memperoleh informasi awal sebagai dasar pertimbangan formulasi sediaan dari ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi sebagai antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis.

B. Tujuan 1.

Mengetahui daya antibakteri ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis.


2.

5

Mengetahui Kadar Hambat Minimal (KHM) dan Kadar Bunuh Minimal (KBM) ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis.

3.

Membandingkan daya antibakteri ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Beluntas (Pluchea indica Less) 1.

Keterangan botani Beluntas (Pluchea indica Less) termasuk dalam keluarga Asteraceae

(Plantamor, 2012). Di berbagai daerah di Indonesia, beluntas dikenal dengan nama beluntas (Sumatera), barunas (Sunda), luntas (Jawa Tengah), baluntas (Madura), lamutasa (Makassar). Di luar Indonesia beluntas juga dikenal dengan nama lenabou (Timor), beluntas (Malaysia), beluntas (Singapura) dan khlu (Thailand) (Heyne (cit., Sulistiyaningsih, 2009)). Klasifikasi beluntas adalah : Kingdom

: Plantae

Super divisi: Spermatophyta Divisi

: Magnoliophyta

Kelas

: Magnoliopsida

Sub kelas : Asteridae Ordo

: Asterales

Famili

: Asteraceae

Genus

: Pluchea

Spesies

: Pluchea indica Less (Plantamor, 2012).

6


2.

7

Deskripsi daun beluntas Daun beluntas berbentuk taji atau berbentuk telur, ujungnya tumpul atau

tajam, panjang sampai 5 cm, bergerigi atau rata, wangi seperti cengkeh, pahit. (Sastroamidjojo, 2001). Daun tunggal, pangkal tumpul, berbulu halus, panjang 3,8-6,4 cm, lebar 2-4 cm, pertulangan menyirip, warna hijau muda hingga hijau (Syamsuhidayat dan Hutapea (cit., Sulistiyaningsih, 2009)). 3.

Kandungan kimia daun beluntas Daun beluntas mengandung alkaloid, flavonoid, tanin, minyak atsiri,

asam khlorogenik, natrium, kalium, aluminium, kalsium, magnesium dan fosfor, sedangkan akarnya mengandung flavonoid dan tanin (Susetyarini, 2007). 4.

Khasiat dan kegunaan Menurut Purnomo (2001), flavonoid dalam daun beluntas memiliki

aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus sp, Propionibacterium sp dan Corynebacterium sp. Flavonoid mengandung suatu senyawa fenol yang merupakan suatu alkohol yang bersifat asam sehingga disebut juga asam karbolat. Tanaman beluntas berkhasiat untuk meningkatkan nafsu makan, membantu pencernaan, peluruh keringat, pereda demam dan penyegar. Akar beluntas berkhasiat sebagai peluruh keringat dan penyejuk (Susetyarini, 2007). Beluntas biasanya berguna sebagai tanaman pagar, secara tradisional daunnya dapat digunakan sebagai penghilang bau badan, penurun panas, pereda batuk dan antidiare. Rebusan daun beluntas juga sering digunakan untuk mengobati penyakit kulit (Winarno dan Sundari (cit., Sulistiyaningsih, 2009)). Daun beluntas juga


8

dapat digunakan sebagai pereda nyeri pada rheumatik dan sakit pinggang (Wijayakusuma (cit., Sulistiyaningsih, 2009)).

B. Kemangi (Ocimum basilicum L) 1.

Keterangan botani Kemangi merupakan salah satu tanaman berkhasiat yang tidak hanya

tumbuh di Indonesia, tetapi juga di India, Taiwan, Cina dan Asia Tenggara. Kemangi seringkali disebut tulsi, tulasi, holy basil, sacred basil. (Hendrawati, 2009). Kemangi (Ocimum basilicum L) merupakan anggota dari keluarga Lamiaceae yang berarti kelompok tanaman dengan bunga berbibir. Genus kemangi yaitu Ocimum berarti tanaman beraroma dan aroma tersebut dihasilkan dari daunnya (Siemonsma dan Piluek, 1994). Klasifikasi kemangi adalah : Kingdom

: Plantae

Super divisi: Spermatophyta Divisi

: Magnoliophyta

Kelas

: Magnoliopsida

Sub kelas : Asteridae Ordo

: Lamiales

Famili

: Lamiaceae

Genus

: Ocimum

Spesies

: Ocimum basilicum L (Plantamor, 2012).


2.

9

Deskripsi daun kemangi Daun kemangi tunggal, berhadapan, tangkai daun berukuran 0,25-3 cm,

berbentuk bulat telur sampai elips memanjang dengan ujung meruncing atau tumpul, kedua permukaan berambut halus, tepi daun bergerigi lemah dan bergelombang sampai rata. (Sudarsono, Gunawan, Wahyuono, Donatus (cit., Hendrawati, 2009)). Pangkal daun pasak sampai membulat, kedua permukaan

berambut halus dan berbintik-bintik kelenjar rapat 0,75-7,5 x 0,5-2,75 cm (Hendrawati, 2009). 3.

Kandungan kimia daun kemangi Daun kemangi mengandung tanin (4,6%), flavonoid, steroid atau

triterpenoid, minyak atsiri (2%), asam heksauronat, pentosa, xilosa, asam metil homoanisat, molludistin dan asam ursolat (Peter (cit., Hendrawati, 2009)). Menurut Sudarsono dkk (cit., Sulistiyaningsih, 2009) dan Depkes RI, 1995), kandungan flavonoid terdiri dari flavonepigenin, luteolin, flavon-O-glikosida apigenin 7-Oglukoronida, luteolin 7-oglukoronida, flavon C-glukosida orientin, vicenin, cirsilineol, cirsimaritin, isothymusin dan isothymonin. Komponen minyak atsirinya terdiri eugenol (62%), α-pinen, β-pinen, sabinen, mirsen, limonen, 1,8 sineol, Z-β-osimen, E-β-osimen, E-sabinenhidrat, E-α-bergamoten, βkariofilen, E-β-farnesen, α-humulen, metilkavikol, α-terpineol, germakaran-D, βbisabolen, α-bisabolen, metileugenol, α-bisabolol, eukaliptol, estragol, borneol, osimen, geraniol, anetol, 10-kadinol, β-karofilen, α-terpinol, kamfora, 3-oktanon, safrol, seskuitujen, linalool (Hendrawati, 2009).


4.

10

Khasiat dan kegunaan Ekstrak etanol daun kemangi mampu menghambat pertumbuhan bakteri

seperti Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus, Pseudomonas fluorescens, Streptococcus alfa, Bacillus subtilis, Mycobacterium tuberculosa, Klebsiella, Proteus, Salmonella typhi, Shigella, Vibrio cholera, Neisseria gonorrhea dan fungi seperti Aspergillus flavus, Candida albicans, Rhizopus stolinifera dan Penicillium digitatum (Hendrawati, 2009). Kegunaan kemangi diantaranya menghilangkan bau badan dan bau mulut, anestesi, membantu mengatasi ejakulasi prematur, merangsang aktivitas saraf pusat, melebarkan pembuluh darah, melancarkan sirkulasi dan mencegah pengeroposan tulang. Kemangi juga dapat mencegah kemandulan dan menurunkan gula darah (Ebit, 2010). Selain itu, berdasarkan penelitian-penelitian yang telah dilakukan, didapatkan bahwa kemangi berkhasiat sebagai analgesik, anthelmentik, antibakterial, anti katarak, anti inflamasi, antitusif, anti ulkus, imunomodulator, radioprotektif dan anti kanker (Hendrawati, 2009).

C. Maserasi Maserasi merupakan cara ekstraksi yang paling sederhana. Bahan simplisia yang digunakan dihaluskan sesuai dengan persyaratan dalam Farmakope (biasanya terpotong-potong atau berupa serbuk halus) dan disatukan dengan bahan pengekstraksi. Rendaman selanjutnya disimpan terlindung dari cahaya langsung untuk mencegah reaksi yang dikatalisis oleh cahaya atau perubahan warna dan dikocok kembali. Lamanya waktu maserasi

berbeda-beda,


11

masing-masing Farmakope mencantumkan 4-10 hari, kira-kira 5 hari menurut pengalaman sudah memadai, diperas dengan kain pemeras (Voigt, 1994). Proses yang mendasari maserasi adalah melarutnya bahan kandungan simplisia dari sel yang rusak saat penghalusan, ekstraksi bahan kandungan dari sel yang masih utuh. Setelah selesai maserasi artinya keseimbangan antara bahan yang diekstraksi pada bagian dalam sel dengan yang masuk ke dalam cairan telah tercapai, maka proses ekstraksi berakhir. Rendaman harus diaduk berulang-ulang (kira-kira 3 kali sehari) (Voigt, 1994). Maserasi banyak digunakan untuk menyari simplisia yang mengandung zat aktif yang mudah larut dalam cairan penyari dan tidak mengandung zat yang mudah mengembang dalam cairan penyari (Depkes RI, 1986). Proses pemilihan cairan penyari harus dipertimbangkan dan sesuai dengan zat aktif yang berkhasiat yang artinya dapat memisahkan zat aktif tersebut dari senyawa lainnya dalam bahan, sehingga ekstrak yang dihasilkan mengandung sebagian besar senyawa aktif berkhasiat tersebut (Depkes RI, 2000). Cairan penyari harus memenuhi kriteria murah, mudah diperoleh, stabil secara fisika dan kimia, tidak toksik, netral, tidak mudah terbakar dan selektif yang artinya dapat menarik zat berkhasiat yang dikehendaki (Depkes RI, 1986) Etanol dipertimbangkan sebagai cairan penyari yang baik karena selektif, relatif tidak beracun, netral, dapat bercampur dengan air dalam segala perbandingan, dapat diabsorpsi dengan baik, memerlukan sedikit panas untuk memekatkan dan pada konsentrasi di atas 20% dapat menghambat mikrobia. Selain itu, etanol dapat melarutkan alkaloid basa, minyak menguap, glikosida,


12

kurkumin, kumarin, antrakuinon, flavonoid, steroid, sedangkan lemak, malam, tannin dan saponin hanya sedikit larut sehingga pengganggu dapat dibatasi (Depkes RI, 1986). Etanol tidak menyebabkan pembengkakan membran sel, memperbaiki stabilitas bahan obat terlarut. Umumnya berlaku sebagai cairan ekstraksi adalah campuran bahan pelarut yang berlainan, terutama campuran etanol-air (Voigt, 1994).

D. Staphylococcus epidermidis Staphylococcus biasanya hidup pada hidung dan kulit, serta merupakan bakteri patogen yang dapat menimbulkan penyakit saat imunitas menurun. Kebanyakan mikroba yang menetap dikulit merupakan basil difteroid aerob dan anaerob

(seperti

Corynebacterium,

Propionibacterium);

Stapylococcus

nonhemolitik aerob dan anaerob (Staphylococcus epidermidis,

terkadang

Staphylococcus aureus dan spesies Peptostreptococcus); bakteri Gram-positif, aerob, pembentuk spora yang banyak terdapat di udara, air, dan tanah; Streptococcus

alfa-hemolitik

(Streptococcusviridans)

dan

Enterococcus

(Enterococcusfaecalis); serta bakteri koliform Gram-negatif dan Acinetobacter (Jawetz, Melnick dan Adeberg, 1996). Staphylococcus epidermidis merupakan bakteri Gram-positif, koloni berwarna putih atau kuning dan bersifat anaerob fakultatif. Bakteri ini tidak mempunyai lapisan protein A pada dinding sel, dapat meragi laktosa, tidak meragi manitol dan bersifat koagulase negatif (Radji, 2011). Staphylocooccus epidermidis


13

yang bersentuhan dengan keringat yang dihasilkan akan menghasilkan bau yang tidak sedap yang disebabkan oleh asam isovalerik (Majalah Kesehatan, 2010).

E. Antimikrobia Berdasarkan sifat toksisitas selektif, sifat antimikrobia ada yang dapat menghambat pertumbuhan mikrobia, dikenal sebagai aktivitas bakteriostatik, dan ada yang bersifat membunuh mikrobia, dikenal sebagai aktivitas bakterisida. Kadar minimal yang diperlukan untuk menghambat pertumbuhan mikrobia atau membunuhnya masing-masing dikenal sebagai Kadar Hambat Minimal (KHM) dan Kadar Bunuh Minimal (KBM). Aktivitas antimikrobia tertentu dapat meningkat dari bakteriostatik menjadi bakterisid apabila kadar antimikrobianya ditingkatkan melebihi KBM (Ganiswara, 1995). Agen antimikrobia penyebab infeksi pada manusia harus memiliki sifat toksisitas selektif setinggi mungkin, artinya obat harus bersifat sangat toksis untuk mikrobia, tetapi relatif tidak toksis untuk hospes (Setiabudy dan Gan, 1995). Menurut Ganiswara (1995), mekanisme kerjanya antimikrobia dibagi menjadi 5 kelompok, yaitu: 1) Antimikrobia yang menghambat sintesis dinding sel mikroba, 2) antimikrobia yang mengganggu metabolisme sel mikroba, 3) antimikrobia yang mengganggu keutuhan membran sel mikroba, 4) antimikrobia yang mengganggu sintesis protein sel mikroba, dan 5) antimikrobia yang mengganggu sintesis asam nukleat.


14

Agen antimikrobia yang dapat berguna terhadap penyakit infeksi harus memenuhi kriteria diantaranya : 1) Obat harus rendah dalam toksisitas bagi sel inang untuk memusnahkan atau menghambat agen penyakit, yang artinya obat harus bisa menunjukkan toksisitas selektif bagi agen penyakit, 2) inang harus tidak menjadi alergi (sangat peka) terhadap obat, 3) organisme tidak boleh dengan mudah menjadi resisten terhadap obat, 4) inang harus tidak merusak, menetralkan atau mengeluarkan obat, dan 5) obat harus mencapai tempat infeksi (Volk and Wheeler, 1988).

F. Pengujian Aktivitas Antimikrobia Pengujian aktivitas bahan antimikrobia dapat dilakukan dengan 2 cara yaitu metode difusi agar dan dilusi (pengenceran). Prinsip metode difusi adalah potensi antimikrobia berdasarkan luasnya daerah hambat pertumbuhan bakteri akibat berdifusinya senyawa uji dari titik awal pemberian ke daerah difusi. Mikrobia ditanam pada media yang sesuai dan di atasnya diletakkan kertas cakram yang mengandung senyawa uji atau dibuat sumuran dengan diameter tertentu yang diisi senyawa uji. Ada beberapa metode difusi, yaitu : 1.

Cara Kirby Bouwer Cara ini dilakukan dengan memulaskan suspensi bakteri konsentrasi tertentu

pada permukaan media agar hingga rata. Kertas disk yang mengandung antimikrobia diletakkan di atas media dan diinkubasi pada suhu 37oC selama 1824 jam kemudian dibaca hasilnya. Potensi antimikrobia diukur dengan mengukur


15

diameter zona hambat yang terbentuk. Pada zona hambat akan terlihat adanya pertumbuhan kurang subur atau lebih jarang jika dibandingkan dengan daerah di luar pengaruh senyawa uji tersebut. Melalui cara ini, dikenal dua zona yaitu : a. Zona radikal, yaitu suatu daerah di sekitar disk yang sama sekali tidak ditemukan adanya pertumbuhan mikrobia. b. Zona iradikal, yaitu suatu daerah di sekitar disk yang menunjukkan pertumbuhan mikrobia yang dihambat oleh antimikrobia tertentu tetapi tidak mematikan (Hugo and Russel, 1987). 2.

Cara Tuang (pour plate) Mula-mula 1 ml suspensi bakteri dicampur dengan 4 ml agar base 1,5% pada

temperatur 50oC hingga homogen kemudian dituang dalam media Mueller Hinton Agar (MHA), dibiarkan membeku. Disk antimikrobia diletakkan di atasnya kemudian diinkubasi pada suhu 37 oC selama 18-24 jam. Hasilnya dibaca seperti cara Kirby Bouwer (Trihendrokesowo, 1986). 3.

Cara Sumuran Penyiapan dilakukan seperti cara Kirby Bouwer. Setelah siap, dibuat sumuran

dengan diameter tertentu dan tegak lurus terhadap permukaan media. Senyawa uji diinokulasikan ke dalam sumuran dan diinkubasi pada suhu 37 oC selama 18-24 jam. Hasilnya dibaca seperti cara Kirby Bouwer (Trihendrokesowo, 1986). Metode dilusi digunakan untuk menentukan Kadar Hambat Minimal (KHM) dan Kadar Bunuh Minimal (KBM) dari bahan antimikrobia (Tortora, 2001). Prinsip metode dilusi (pengenceran) adalah senyawa uji diencerkan hingga diperoleh berbagai macam konsentrasi. Pada dilusi cair, masing-masing


16

konsentrasi senyawa uji ditambahkan dengan suspensi bakteri uji dalam media cair. Perlakuan diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Senyawa uji agen antimikrobia pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa adanya pertumbuhan bakteri uji ditetapkan sebagai KHM. Senyawa yang ditetapkan sebagai KHM tersebut diuji kembali pada media cair tanpa penambahan bakteri uji ataupun agen antimikrobia dan media tersebut diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Konsentrasi senyawa dalam media cair yang tetap terlihat jernih (jika dibandingkan dengan kontrol media dan kontrol pertumbuhan bakteri) setelah diinkubasi ditetapkan sebagai KBM. Pada dilusi padat, tiap konsentrasi tersebut dicampur dengan suspensi bakteri uji dan media padat kemudian dituang pada petri untuk diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Konsentrasi yang menunjukkan hasil jernih kemudian di-streak pada media agar padat. Setelah inkubasi, konsentrasi terkecil yang tetap menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri uji ditetapkan sebagai KHM sedangkan konsentrasi terkecil yang sudah tidak menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri uji (jernih) ditetapkan sebagai KBM (Pratiwi, 2008).

G. Landasan Teori Kulit memiliki beberapa jenis bakteri sebagai flora normal seperti Micrococci

dengan

Staphylococci

koagulase

negatif,

Peptococcus

spp,

Micrococcus spp, Diphtheroids dengan Corynebacteria dan Brevibacterium spp, Propionibacteria dan gram negatif bentuk batang (Elsner, 2006). Bakteri di permukaan kulit yaitu Staphylococcus epidermidis akan menguraikan keringat


17

dari kelenjar apokrin menjadi asam mudah menguap yaitu asam isovalerik dan menimbulkan bau tidak sedap (Majalah Kesehatan, 2010). Banyaknya jenis tanaman yang dapat digunakan sebagai antimikrobia merupakan alternatif sebagai pengobatan herbal. Contoh tanaman yang dapat digunakan yaitu beluntas dan kemangi. Beluntas sebelumnya hanya tanaman pagar dan dimanfaatkan sebagai urap atau lalapan sedangkan kemangi biasanya dikonsumsi sebagai lalapan mentah menurut Peter (cit., Hendrawati, 2009) dan Meyer et al, (cit., Hendrawati, 2009). Pada penelitian sebelumnya, kedua tanaman ini sudah pernah digunakan sebagai antibakteri karena adanya kandungan zat aktif masing-masing. Kandungan dari daun beluntas yang diduga bersifat sebagai antibakteri, yaitu fenol hidrokuinon, tanin dan alkaloid (Ardiansyah dkk, 2003). Berdasarkan penelitian Maryati, dkk (2007), kandungan daun kemangi yang bersifat sebagai antibakteri adalah minyak atsiri dan menurut Purnomo (2001), flavonoid pada daun kemangi yang bersifat sebagai antibakteri. Pada penelitian ini akan dilihat daya antibakteri ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis.

H. Hipotesis 1.

Ekstrak etanol daun beluntas (Pluchea indica Less) memiliki daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis.

2.

Ekstrak etanol daun kemangi (Ocimum basilicum L) memiliki daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis.


BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah.

B. Variabel dan Definisi Operasional 1.

Variabel a. Variabel bebas : seri konsentrasi ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi (10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50%). b. Variabel

tergantung

:

diameter

zona

hambat

pertumbuhan

Staphylococcus epidermidis (mm). c. Variabel pengacau terkendali : media penanaman bakteri (Mueller Hinton Agar), suhu inkubasi (37oC), lama inkubasi (18-24 jam), diameter sumuran (6 mm), kepadatan suspensi bakteri uji yang setara dengan larutan standar 0,5 Mac Farland (1,5.108 CFU/ml), asal simplisia daun beluntas (Merapi Farma Medika) dan daun kemangi (pasar Beringharjo), pelarut ekstrak (etanol 70%). d. Variabel pengacau tak terkendali : umur tanaman dan kondisi lingkungan tempat tumbuh tanaman beluntas dan kemangi.

18


2.

19

Definisi operasional a. Maserasi adalah maserasi yang dilakukan secara mekanis dengan pengadukan secara terus-menerus dengan orbital shaker selama ± 72 jam. b. Ekstrak etanol daun beluntas adalah sediaan kental yang dibuat dengan mengekstraksi secara maserasi serbuk daun beluntas dengan etanol 70% pada suhu ruangan. c. Ekstrak etanol daun kemangi adalah sediaan kental yang dibuat dengan mengekstraksi secara maserasi serbuk daun kemangi dengan etanol 70% pada suhu ruangan. d. Daya antibakteri adalah kemampuan ekstrak etanol daun beluntas atau daun kemangi untuk menghambat pertumbuhan atau membunuh Staphylococcus epidermidis yang ditunjukkan dengan adanya zona hambat. e. Zona hambat adalah daerah diameter area hambatan yang terlihat jernih dari ekstrak etanol daun beluntas atau daun kemangi terhadap pertumbuhan Staphylococcus epidermidis yang terdapat di sekitar sumuran. f. Kontrol positif adalah antibiotika yang telah beredar di pasaran dengan nama dagang Mediklin® (Klindamisin fosfat 1,2%). g. KHM adalah kadar minimal ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi untuk menghambat pertumbuhan Staphylococcus epidermidis.


20

h. KBM adalah kadar minimal ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi untuk membunuh pertumbuhan Staphylococcus epidermidis.

C. Bahan Penelitian Daun beluntas kering diperoleh dari Merapi Farma Herbal, daun kemangi segar diperoleh dari pasar Beringharjo, pelarut ekstrak (etanol 70%), kultur murni Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 diperoleh dari Balai Laboratorium Kesehatan Yogyakarta, media MHA (Mueller Hinton Agar), NaCl diperoleh dari Laboratorium Balai Kesehatan Yogyakarta, aquadest, Mediklin ® (Klindamisin fosfat 1,2%) sebagai kontrol positif, etanol 70% sebagai kontrol pelarut.

D. Alat Penelitian Oven, vaccum rotary evaporator, vakum, autoklaf, inkubator, vortex, alat-alat gelas, ose, neraca analitik, mikropipet, pelubang sumuran, densicheck, seperangkat alat maserasi, kompor listrik, blender, pengayak, penggaris satuan mm, lampu spiritus.

E. Tata Cara Penelitian 1.

Determinasi daun beluntas dan daun kemangi Determinasi dilakukan dengan menggunakan kunci determinasi dengan mengacu pada Buku Acuan Flora untuk Sekolah di Indonesia.


2.

21

Pengumpulan, pengeringan dan pembuatan serbuk bahan Dua kilogram daun beluntas kering diperoleh dari Merapi Farma Herbal. Dua puluh lima kilogram kemangi segar diperoleh dari Pasar Beringharjo. Daun kemangi dipisah dengan batang dan bunganya untuk selanjutnya dicuci dengan air bersih dan dikeringkan. Pengeringan daun kemangi dilakukan di dalam oven pada suhu 40-50oC selama ± 24 jam. Kedua daun yang sudah kering kemudian diserbuk dengan cara diblender dan diayak dengan ayakan tepung.

3.

Pembuatan ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi dengan metode maserasi Tiga puluh gram serbuk kering simplisia daun beluntas ditambah dengan 160 ml etanol 70% kemudian dimaserasi. Tiga puluh gram serbuk simplisia daun kemangi ditambah dengan 180 ml etanol 70% dan dimaserasi. Maserat daun beluntas disaring dengan bantuan vakum dan dipekatkan menggunakan vaccum rotary evaporator hingga pelarutnya menguap sebanyak ± 35 ml (Lampiran 6 gambar A). Maserat daun kemangi juga disaring dan dipekatkan hingga pelarutnya menguap sebanyak ± 40 ml (Lampiran 6 gambar B). Untuk mendapatkan ekstrak kental, setelah dipekatkan maka ekstrak dioven pada suhu 50oC selama ± 24 jam.

4.

Pembuatan seri konsentrasi Dibuat konsentrasi 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50% dari ekstrak kental daun beluntas dan daun kemangi. Pembuatan konsentrasi 50% dengan mengambil ekstrak daun kemangi atau ekstrak daun beluntas


22

sebanyak 5 gram kemudian dilarutkan dalam 10 ml etanol 70% kemudian diturunkan menjadi konsentrasi 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 10% dengan melarutkan ke dalam etanol 70% hingga 10 ml. 5.

Uji daya antibakteri ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis a. Pembuatan suspensi bakteri uji Pembuatan suspensi bakteri uji dilakukan dengan cara menanam kultur bakteri uji di dalam NaCl fisiologis kemudian kekeruhannya diukur menggunakan densicheck sampai 0,5 sesuai dengan larutan standar 0,5 Mac Farland (1,5.108 CFU/ml). b. Uji daya antibakteri ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dengan metode difusi sumuran Pengujian daya antibakteri dengan metode difusi sumuran menggunakan 2 macam kontrol, yaitu kontrol media dan kontrol pertumbuhan bakteri uji. Pembuatan kontrol media yaitu dengan menuang 30 ml MHA pada petri sampai memadat kemudian dibuat sumuran lalu diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Pembuatan kontrol pertumbuhan bakteri uji yaitu pertama dibuat base layer menggunakan MHA 5 ml tanpa inokulasi bakteri. Setelah memadat, di atas base layer ditambahkan seed layer menggunakan MHA 25 ml yang sebelumnya telah ditambahkan dengan 2 ml suspensi bakteri uji dan dibiarkan memadat lagi untuk kemudian dibuat sumuran. Petri diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam.


23

1) Penanaman isolat Staphylococcus epidermidis secara pour plate Media yang akan digunakan dibagi menjadi 2 bagian dengan perbandingan volume 1:5. Satu bagian (5 ml) berupa MHA steril tanpa inokulasi bakteri digunakan sebagai base layer, dituang ke dalam cawan petri steril dan dibiarkan memadat terlebih dahulu. Lima bagian (25 ml) digunakan sebagai seed layer yang dituang ke atas base layer setelah diinokulasi dengan bakteri uji. Untuk layer atas, diambil 2 ml dari stok suspensi bakteri uji yang sudah disetarakan sesuai dengan larutan standar 0,5 Mac Farland kemudian diinokulasikan ke media MHA secara pour plate. Media MHA yang mengandung bakteri dibiarkan sampai memadat. 2) Inokulasi ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi dengan metode difusi sumuran Media agar yang telah diinokulasikan dengan 2 ml suspensi Staphylococcus epidermidis dibuat 5-6 sumuran. Pembuatan sumuran hanya menembus seed layer. Base layer digunakan sebagai alas agar ekstrak tidak menyebar pada dasar cawan petri. Pada pengujian pertama digunakan konsentrasi ekstrak 10, 15, 20, 15% untuk masing-masing ekstrak, dan pengujian dilanjutkan dengan konsentrasi 30, 35, 40, 45, 50%. Semua konsentrasi ekstrak diinokulasikan pada sumuran yang


24

telah dibuat. Masing-masing petri juga diinokulasikan dengan kontrol pelarut (etanol 70%). Volume inokulasi sebesar 50 µl. Kontrol positif yang digunakan adalah Mediklin ® (Klindamisin fosfat 1,2%) dengan konsentrasi 2% dan petri diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam dan diukur diameter zona hambatnya menggunakan penggaris. c. Penentuan nilai KHM dan KBM dengan metode dilusi padat Pada uji ini menggunakan 3 macam kontrol, yaitu kontrol media, kontrol pertumbuhan bakteri uji dan kontrol pelarut (etanol 70%). Kontrol media dibuat dengan menuang 15 ml media MHA pada petri. Kontrol pertumbuhan bakteri uji dibuat dengan menambahkan 1 ml bakteri uji ke dalam15 ml media MHA kemudian dituang ke petri. Kontrol pelarut dibuat dengan mencampur pelarut ekstrak yaitu 1 ml etanol 70% dan 1 ml bakteri uji dengan 15 ml media MHA kemudian dituang ke petri. Semua petri diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. 1) Uji daya antibakteri dengan dilusi padat Uji ini menggunakan 1 ml ekstrak daun beluntas dan ekstrak daun kemangi dengan masing-masing konsentrasi 5, 7,5, 10, 12,5, 15, 17,5, 20, 25, 30, 35, 40, 50% ditambahkan dengan 1 ml suspensi bakteri uji yang sudah setara dengan larutan standar 0,5 Mac Farland dan 15 ml media MHA kemudian dituang ke petri. Petri diinkubasi pada suhu 37 oC, diamati setelah 18-24 jam.


25

Kekeruhan media yang menunjukkan kepadatan pertumbuhan bakteri uji diamati, diberi penilaian menggunakan notasi (+) untuk media yang agak keruh, (++) keruh, (+++) sangat keruh dan notasi (-) jika tidak ada kekeruhan yang menandakan tidak ada pertumbuhan dari bakteri uji dalam media tersebut. Kekeruhan masing-masing perlakuan dibandingkan dengan kontrol media dan kontrol pertumbuhan bakteri uji. 2) Penentuan nilai KHM dan KBM Pengujian selanjutnya dilakukan dengan menentukan nilai KHM dan KBM. Penentuan nilai KHM dan KBM dilakukan dengan melakukan streak plate dari hasil uji daya antibakteri secara dilusi padat. Hasil uji yang digunakan adalah media yang menunjukkan kejernihan secara visual dan selanjutnya di-streak pada media MHA kemudian diinkubasi pada suhu 37 oC selama 18-24 jam. KHM adalah kadar terkecil yang dapat menghambat bakteri uji, ditandai dengan Staphylococcus epidermidis masih dapat tumbuh pada hasil streak plate, sedangkan KBM adalah kadar terkecil yang dapat membunuh bakteri uji, ditandai dengan Staphylococcus epidermidis sudah tidak dapat tumbuh pada hasil streak plate yang menandakan bakteri uji mati karena senyawa uji pada konsentrasi tersebut.


26

F. Analisis Data Data diameter zona hambat pada difusi sumuran dianalisis menggunakan program R 2.14.1, distribusinya diuji dengan Shapiro-Wilk. Jika normal diuji kesamaan variannya dengan Levene’s test dan jika hasilnya memiliki kesamaan varian maka dilanjutkan dengan One Way Anova. Data yang tidak terdistribusi normal dianalisis menggunakan Kruskal-Wallis untuk mengetahui ada tidaknya perbedaan tiap kelompok perlakuan dan dilanjutkan dengan analisis Post-Hoc yaitu uji Wilcoxon untuk mengetahui kelompok yang mempunyai perbedaan. Data uji antibakteri dengan dilusi padat didapat dengan melihat kekeruhan media secara visual dan dianalisis dengan deskriptif. Nilai KHM dan KBM didapat dari hasil penegasan dengan metode streak plate.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi Tanaman Determinasi tanaman beluntas dan kemangi dilakukan untuk menghindari kesalahan dalam penelitian dan memastikan bahwa tanaman yang akan digunakan adalah benar-benar Pluchea indica Less dan Ocimum basilicum L. Hasil yang didapat adalah benar kedua tanaman tersebut adalah Pluchea indica Less dan Ocimum basilicum L sesuai dengan hasil determinasi pada lampiran 1.

B. Pengumpulan, Pengeringan dan Pembuatan Serbuk Bahan Daun beluntas yang sudah kering diperoleh dari Merapi Farma Herbal kemudian dipisahkan antara daun dengan batang yang masih tercampur. Kemangi segar diperoleh dari pasar Beringharjo, daun dipisahkan dari bagian yang lain kemudian dicuci dengan air bersih mengalir untuk menghilangkan pengotor yang mungkin tercampur dan diangin-anginkan. Tujuan mengangin-anginkan ini untuk menghilangkan air sehingga daun tidak akan mudah membusuk dan senyawa aktif yang diinginkan masih tetap ada dan tidak berubah. Daun kemangi yang sudah tidak mengandung air kemudian dikeringkan dalam oven pada suhu ± 50 oC selama ± 24 jam atau sampai daun sudah bisa hancur saat digenggam. Tujuan pengeringan dengan oven ini untuk memaksimalkan proses pengeringan sehingga daun akan lebih mudah diserbuk. Selain itu pengeringan bertujuan mencegah tumbuhnya kapang atau mikrobia lain. Daun beluntas ataupun daun kemangi masing-masing diserbuk dan diayak. Tujuan penyerbukan ini untuk memperluas 27


28

kontak antara pelarut dengan bahan yang akan diekstraksi sehingga pelarut dapat lebih mudah masuk saat dilakukan maserasi dan penarikan zat aktif oleh pelarutnya dapat maksimal.

C. Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Beluntas dan Daun Kemangi dengan Metode Maserasi Proses ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi. Dipilihnya metode ini karena mempunyai beberapa keuntungan seperti cara yang sederhana, peralatannya sederhana dan mudah untuk dilakukan. Prinsip metode maserasi adalah adanya perbedaan konsentrasi antara larutan senyawa aktif dalam sel dengan pelarut ekstraksi yang menyebabkan terjadinya difusi sehingga akan terjadi kesetimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Alasan digunakannya pelarut etanol 70% adalah karena dapat mencegah tumbuhnya kapang, tidak toksis, lebih selektif dan menggunakan sedikit panas untuk pemekatan. Senyawa aktif pada masing-masing daun yang sebelumnya telah diteliti bersifat sebagai antibakteri, dapat larut dalam etanol 70%. Senyawa aktif tersebut adalah minyak atsiri dan flavonoid pada daun kemangi dan fenol hidrokuinon, tanin, alkaloid pada daun beluntas. Peneliti sebelumnya telah melakukan orientasi terkait volume pelarut yang digunakan sehingga untuk masing-masing ekstrak digunakan volume pelarut yang berbeda. Berikut hasil orientasi volume pelarut untuk masing-masing serbuk daun.


29

Tabel I. Hasil orientasi jumlah rendemen yang dihasilkan oleh masing-masing volume pelarut ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi Ekstrak Daun Kemangi

Daun Beluntas

Pelarut (ml) 92 135 181 300 600 84 117 160 300 600

Rendemen (%) 4,87 9,30 12,30 11,30 14,27 5,73 8,73 10,17 15,07 16,9

Keterangan (serbuk:pelarut) 1:3 1:4,5 1:6 1:10 1:20 1:2,8 1:3,9 1:5,3 1:10 1:20

Dari tabel I terlihat bahwa perbandingan jumlah serbuk dan volume pelarut mempengaruhi % rendemen yang dihasilkan. Untuk serbuk daun kemangi dengan volume 181 ml menghasilkan rendemen 12,30%. Hasil tersebut lebih besar jika dibandingkan dengan % rendemen menggunakan volume pelarut perbandingan 1:10 dan 1:20. Untuk serbuk daun beluntas dengan volume pelarut 160 ml menghasilkan rendemen 10,17%. Persen rendemen tersebut juga lebih besar jika dibandingkan dengan % rendemen dari volume pelarut perbandingan 1:10 dan 1:20. Jadi digunakan volume etanol 70% sebesar 181 ml yang dibulatkan menjadi 180 ml sebagai volume pelarut untuk maserasi serbuk daun kemangi dan 160 ml untuk maserasi serbuk daun beluntas. Hasil ekstraksi kemudian disaring dengan kertas saring yang diletakkan pada corong buchner dengan bantuan pompa vakum untuk mempercepat proses penyaringan. Adanya penyedotan udara dari pompa vakum saat penyaringan akan mempercepat turunnya pelarut. Hasil yang didapat selanjutnya dipekatkan menggunakan vaccum rotary evaporator agar pelarutnya dapat menguap


30

maksimal. Pengaturan pada vaccum rotary evaporator adalah set poin ∆P 175oC, ∆P (mbar) 10, ∆P (%) 50. Setelah cukup, dilanjutkan dengan mengoven selama ± 24 jam untuk mendapat ekstrak kental dan digunakan untuk pengujian potensi antibakteri. Bobot ekstrak kental daun beluntas dan daun kemangi yang didapat untuk setiap pembuatan ekstrak berkisar ± 2-4 gram seperti pada lampiran 7.

D. Uji Daya Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Beluntas dan Daun Kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis Penelitian ini menggunakan bakteri Staphylococcus epidermidis yang merupakan flora normal pada kulit manusia dan dapat menguraikan keringat dari kelenjar apokrin sehingga menghasilkan bau yang tidak sedap. Uji daya antibakteri ini menggunakan 2 macam metode yaitu difusi sumuran dan dilusi padat. 1.

Uji daya antibakteri ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dengan metode difusi sumuran Uji daya antibakteri secara sumuran bertujuan untuk mengetahui besarnya diameter zona hambat ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap pertumbuhan bakteri uji. Difusi sumuran dipilih karena senyawa yang akan diujikan adalah ekstrak. Ekstrak terdiri dari beberapa komponen aktif dengan sifat kepolaran yang berbeda sehingga dengan difusi sumuran diharapkan semua komponen tersebut dapat terdifusi keseluruhan. Seri konsentrasi awal kedua ekstrak yang digunakan yaitu 10, 15, 20, 25%. Pada ekstrak etanol daun beluntas, konsentrasi 10, 15, 20, 25%


31

sudah ditemukan adanya zona hambat yang kecil (Gambar 1). Namun pada ekstrak daun kemangi ada beberapa replikasi yang tidak menghasilkan zona hambat (Gambar 2). Ini diduga karena komponen senyawa aktif ekstrak etanol daun kemangi yang memiliki daya antibakteri, lebih sedikit jika dibandingkan komponen senyawa aktif ekstrak etanol daun beluntas yang memiliki daya antibakteri.

Gambar 1. Hasil uji difusi sumuran ekstrak etanol daun beluntas konsentrasi 10, 15, 20, 25% terhadap Staphylococcus epidermidis

Gambar 2. Hasil uji difusi sumuran ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 10, 15, 20, 25% terhadap Staphylococcus epidermidis


32

Selanjutnya konsentrasi kedua ekstrak ditingkatkan menjadi 30, 35, 40, 45, 50% (Gambar 3 dan 4) dengan zona hambat seperti tabel II. Tabel II. Data diameter zona hambat kontrol pelarut (etanol 70%), kontrol positif (Mediklin®), ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi Konsentrasi ekstrak (%) Kontrol pelarut (etanol 70%) Kontrol positif (Mediklin®) 10 15 20 Ekstrak 25 etanol 30 daun 35 beluntas 40 45 50 10 15 20 Ekstrak 25 etanol 30 daun 35 kemangi 40 45 50

Diameter zona hambat (mm) I II III 0,00 0,00 0,00 29,0 29,0 29,0 3,00 3,00 0,00 4,00 2,00 3,00 4,00 4,00 4,00 5,00 4,00 5,00 16,0 12,0 14,0 16,0 11,0 14,0 16,0 12,0 14,0 16,0 13,0 14,0 16,0 12,0 15,0 0,00 0,00 0,00 0,00 1,00 0,00 0,00 1,00 3,00 0,00 2,00 3,00 12,0 12,0 15,0 13,0 13,0 17,0 16,0 14,0 17,0 15,0 14,0 19,0 19,0 17,0 20,0

̅ ± SD 0,00 ± 0,00 29,0 ± 0,00 2,00 ± 1,73 3,00 ± 1,00 4,00 ± 0,00 4,70 ± 0,58 14,0 ± 2,00 13,7 ± 2,52 14,0 ± 2,00 14,3 ± 1,53 14,3 ± 2,08 0,00 ± 0,00 0,30 ± 0,58 1,30 ± 1,53 1,70 ± 1,53 13,0 ± 1,73 14,3 ± 2,31 15,7 ± 1,53 16,0 ± 2,65 18,7 ± 1,53

Gambar 3. Hasil uji difusi sumuran ekstrak etanol daun beluntas konsentrasi 30, 35, 40, 45, 50% terhadap Staphylococcus epidermidis


33

Gambar 4. Hasil uji difusi sumuran ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 30, 35, 40, 45, 50% terhadap Staphylococcus epidermidis

Ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi dikatakan memiliki daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis karena menghasilkan zona hambat, seperti yang terlihat pada histogram berikut (Gambar 5).

Data Diameter Zona Hambat Ekstrak Etanol terhadap Staphylococus epidermidis 18 15,5

Diameter Zona Hambat

16

13,7 13,713,7 13,7 13,5

14

15,7 15,7 14,2 14

12 10 Daun beluntas

8 6 4 2 0

2,8

2 0 10

0,3 15

3,8 1,2 20

Daun kemangi

4,3 1,3 25 30 35 40 Konsentrasi Ekstrak

45

50

Gambar 5. Histogram mean data diameter zona hambat ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis


34

Kontrol yang digunakan ada 4, yaitu kontrol media, kontrol pertumbuhan bakteri uji, kontrol pelarut dan kontrol positif. Kontrol media bertujuan untuk mengetahui bahwa media yang digunakan tidak terkontaminasi oleh apapun yang nantinya dapat mengacaukan hasil penelitian. Hasil pengamatan setelah inkubasi menunjukkan, media tampak jernih yang artinya media dan pelubang sumuran yang digunakan bebas dari kontaminasi (Gambar 6).

Gambar 6. Hasil uji difusi sumuran kontrol media

Kontrol pertumbuhan bakteri uji bertujuan untuk mengetahui bahwa bakteri uji yang digunakan dapat tumbuh subur pada media, ditandai dengan penampakan media yang keruh. Hasil yang ditunjukkan adalah adanya pertumbuhan bakteri yang subur ditandai dengan media yang tampak keruh jika dibandingkan dengan kontrol media (Gambar 7).


35

Gambar 7. Hasil uji difusi sumuran kontrol pertumbuhan bakteri uji

Kontrol pelarut bertujuan untuk mengetahui pelarut yang digunakan (etanol 70%) memiliki kemampuan dalam menghambat bakteri uji atau tidak. Etanol digunakan sebagai pelarut karena kedua ekstrak kurang larut sempurna jika dilarutkan dalam aquadest steril panas. Komponen aktif dalam ekstrak dengan sifat yang berbeda diduga merupakan penyebab ekstrak tidak larut sempurna dalam aquadest steril. Hasil setelah inkubasi tidak ditemukan adanya zona hambat. Ini diduga karena etanol tersebut cepat mengalami penguapan sesaat setelah diinokulasikan ke dalam sumuran sehingga belum cukup dalam menghambat bakteri uji (Gambar 8, sumuran bagian tengah).


36

Gambar 8. Hasil uji difusi sumuran kontrol pelarut (etanol 70%)

Kontrol positif yang digunakan, yaitu Mediklin ® (Klindamisin fosfat 1,2%) dengan konsentrasi 2%, bertujuan sebagai pembanding besarnya daya hambat terhadap ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi. Selain itu kontrol positif bertujuan untuk mengetahui validitas metode. Jika hasil kontrol positif sama dengan kontrol pelarut (kontrol negatif) maka metode yang digunakan tidak valid. Jika zona hambat kedua ekstrak dapat melampaui zona hambat kontrol positif maka dapat disimpulkan bahwa daya antibakteri ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi lebih besar dibandingkan kontrol positif (Mediklin®) yang sudah ada di pasaran. Alasan digunakannya konsentrasi 2% (0,5 ml dalam 25 ml aquadest) adalah diasumsikan satu kali penggunaan dari Mediklin® saat dioleskan ke kulit sebesar 0,5 ml dan jika tidak diencerkan, diameter zona hambat yang dihasilkan sangat besar yaitu 43 mm (Gambar 9). Maka dari itu kontrol positif yang digunakan


37

tetap 0,5 ml tetapi diencerkan menjadi 25 ml dan diameter zona hambatnya sebesar 29 mm (Gambar 10).

®

Gambar 9. Hasil uji difusi sumuran kontrol positif (Mediklin ) tanpa diencerkan

Gambar 10. Hasil uji difusi sumuran kontrol positif (Mediklin®) konsentrasi 2%

Hasil diameter zona hambat kontrol positif setelah diencerkan (konsentrasi 2%) tetap lebih besar dibandingkan diameter zona hambat kedua ekstrak, disebabkan karena kedua ekstrak masih mengandung


38

banyak campuran komponen senyawa aktif serta konsentrasi yang digunakan kecil (hanya sampai konsentrasi 50%). Dari hal ini ditunjukkan bahwa ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi sampai konsentrasi 50% mempunyai daya antibakteri yang lebih kecil dibandingkan kontrol positif (Mediklin®). Hasil pengukuran diameter zona hambat kedua ekstrak diuji distribusinya menggunakan Shapiro-Wilk untuk mengetahui normalitas distribusi data. Tabel III. Normalitas distribusi data diameter zona hambat ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi Konsentrasi (%)

Normalitas

Konsentrasi (%)

Normalitas

10 TN 10 15 N 15 20 TN 20 Ekstrak Ekstrak 25 TN 25 etanol etanol 30 TN 30 daun daun 35 N 35 beluntas Kemangi 40 N 40 45 N 45 50 N 50 Ket : N = data terdistribusi normal nilai p > 0,05, TN = data tidak terdistribusi normal nilai p < 0,05

TN TN N N N N N N N

Hasilnya dari uji normalitas untuk diameter zona hambat disimpulkan bahwa data tidak terdistribusi normal karena terdapat zona hambat yang bernilai nol. Pengujian dilanjutkan dengan uji Kruskal-Wallis untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan masing-masing ekstrak terhadap kontrol pelarut dan kontrol positif. Hasil uji Kruskal-Wallis menunjukkan bahwa nilai p < 0,05 (Lampiran 12 dan 13) untuk ekstrak etanol daun beluntas dan daun


39

kemangi yang artinya terdapat minimal dua kelompok data (dari masingmasing kelompok data ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi) yang mempunyai perbedaan. Untuk mengetahui kelompok mana yang mempunyai perbedaan, harus dilakukan analisis Post-Hoc, yaitu dengan uji Wilcoxon. Hasilnya dapat dilihat pada tabel IV. Tabel IV. Hasil analisis Wilcoxon ekstrak etanol daun beluntas dengan kontrol pelarut (etanol 70%) dan kontrol positif (Mediklin®) Kontrol Kontrol pelarut positif Kontrol pelarut Kontrol positif 10 15 20 25 30 35 40 45 50

10

15

20

25

30

35

40

45

50

-

B

TB

B

B

B

B

B

B

B

B

B

-

B

B

B

B

B

B

B

B

B

TB B TB B B B B B B B B TB TB B B B B B B B B TB TB B B B B B B B B TB B B B B B B B B B B TB TB TB B B B B B B TB TB TB B B B B B B TB TB TB B B B B B B TB TB TB B B B B B B TB TB TB TB Ket : B = berbeda (nilai p < 0,05), TB = tidak berbeda (nilai p > 0,05)

B B B B TB TB TB TB -

Dari tabel IV terlihat bahwa kelompok ekstrak daun beluntas yang mempunyai perbedaan dengan kontrol pelarut (etanol 70%) adalah konsentrasi 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50%. Hasil ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun beluntas mempunyai daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis.


40

Tabel V. Hasil analisis Wilcoxon ekstrak etanol daun kemangi dengan kontrol pelarut (etanol 70%) dan kontrol positif (Mediklin®) Kontrol Kontrol pelarut positif Kontrol pelarut Kontrol positif 10 15 20 25 30 35 40 45 50

10

15

20

25

30

35

40

45

50

-

B

TB

TB

TB

TB

B

B

B

B

B

B

-

B

B

B

B

B

B

B

B

B

TB B TB TB TB B B B B TB B TB TB TB B B B B TB B TB TB TB B B B B TB B TB TB TB B B B B B B B B B B TB TB TB B B B B B B TB TB TB B B B B B B TB TB TB B B B B B B TB TB TB B B B B B B B TB TB TB Ket : B = berbeda (nilai p < 0,05), TB = tidak berbeda (nilai p > 0,05)

B B B B B TB TB TB -

Dari tabel V, kelompok ekstrak etanol daun kemangi yang mempunyai perbedaan dengan kontrol pelarut (etanol 70%) adalah konsentrasi 30, 35, 40, 45, 50%. Ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun kemangi memiliki daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis. Dari kedua tabel juga terlihat adanya perbedaan dari kontrol positif dengan keseluruhan konsentrasi ekstrak (ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi) yang menunjukkan bahwa kemampuan kontrol positif dalam menghambat bakteri uji lebih besar dibandingkan konsentrasi 50% dari masing-masing ekstrak. Untuk dapat menyamakan kemampuan dengan kontrol positif dalam menghambat bakteri uji, dapat dilakukan peningkatan konsentrasi dari masing-masing ekstrak. Perbedaan hasil yang didapat dari perbandingan kontrol pelarut dengan ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi diduga disebabkan


41

karena kemampuan ekstrak etanol daun kemangi dalam menghambat bakteri uji membutuhkan konsentrasi yang besar jika dibandingkan dengan ekstrak etanol daun beluntas. Mekanisme penghambatan terhadap bakteri uji dari ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi belum diketahui secara pasti dikarenakan masih kompleksnya komponen senyawa aktif yang terdapat pada masingmasing ekstrak. 2.

Penentuan KHM dan KBM ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi dengan dilusi padat Metode dilusi digunakan untuk mengetahui daya antibakteri kedua ekstrak terhadap bakteri uji serta untuk menentukan Kadar Hambat Minimal (KHM) dan Kadar Bunuh Minimal (KBM) bakteri. Penentuan dari KHM dan KBM ini dilakukan secara visual dengan melihat kekeruhan media atau pertumbuhan yang terjadi pada bakteri setelah diberi larutan uji dan diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Senyawa uji dikatakan memiliki sifat antibakteri jika saat dicampur dengan media dan bakteri menghasilkan kejernihan yang sama dengan kontrol media yang diamati secara visual. Kontrol yang digunakan untuk dilusi padat adalah kontrol media, kontrol pertumbuhan bakteri dan kontrol pelarut. Tujuan kontrol media adalah untuk melihat bahwa media yang digunakan bebas kontaminasi yang dapat mengganggu penelitian. Hasil pengamatan menunjukkan tidak adanya pertumbuhan bakteri pada media yang berarti media tersebut bebas kontaminasi atau steril (Gambar 11).


42

Gambar 11. Hasil uji dilusi padat kontrol media

Tujuan kontrol pertumbuhan bakteri uji adalah untuk melihat bahwa bakteri uji dapat tumbuh dengan baik pada media yang digunakan. Hasil setelah inkubasi menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri ditandai dengan media yang tampak keruh jika dibandingkan dengan kontrol media. Ini berarti bakteri uji dapat tumbuh subur pada media yang digunakan (Gambar 12).

Gambar 12. Hasil uji dilusi padat kontrol pertumbuhan bakteri uji


43

Tujuan kontrol pelarut adalah untuk melihat bahwa pelarut yang digunakan (etanol 70%) mempunyai daya antibakteri atau tidak. Hasil yang didapat bahwa media tampak sedikit keruh jika dibandingkan dengan kontrol pertumbuhan bakteri yang sangat keruh. Ini menunjukkan adanya penghambatan dari pelarut terhadap bakteri uji, diduga karena pelarut langsung dicampurkan ke dalam media sehingga meminimalkan adanya penguapan (Gambar 13).

Gambar 13. Hasil uji dilusi padat kontrol pelarut (etanol 70%)

Konsentrasi masing-masing ekstrak yang digunakan untuk dilusi padat adalah 5, 7,5, 10, 12,5, 15, 17,5, 20, 25, 30, 40, 50%. Hasil yang didapat seperti pada tabel VI.


44

Tabel VI. Hasil uji daya antibakteri ekstrak etanol daun beluntas dan daun daun kemangi dengan metode dilusi padat Konsentrasi (%)

Ekstrak etanol daun beluntas

Kekeruhan

Konsentrasi (%)

Kekeruhan

5

+++

5

++

7,5

+++

7,5

++

10

++

10

+

12,5

++

12,5

+

15

++

15

+

17,5

-

17,5

-

20

-

20

-

25

-

25

-

30

-

30

-

40

-

40

-

Ekstrak etanol daun kemangi

50 50 Ket : (-) jernih, (+) agak keruh, (++), keruh, (+++) sangat keruh

Ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi mulai konsentrasi 17,5, 20, 25, 30, 40, 50% tidak menunjukkan adanya pertumbuhan bakteri uji pada media yang artinya daya hambat dari masing-masing ekstrak berada pada konsentrasi tersebut. Untuk menegaskan nilai KHM dan KBM perlu dilakukan uji penegasan

dengan

metode

streak

plate

pada

konsentrasi

yang

menunjukkan media jernih. Setelah inkubasi, ekstrak etanol daun beluntas pada konsentrasi 17,5% masih menunjukkan pertumbuhan bakteri (Gambar 14) sedangkan mulai konsentrasi 20, 25, 30, 40, 50% sudah tidak menunjukkan pertumbuhan bakteri (Gambar 15), maka dapat disimpulkan KHM dan KBM dari ekstrak etanol daun beluntas secara berurutan adalah 17,5% dan 20%.


45

Gambar 14. Hasil streak ekstrak etanol daun beluntas konsentrasi 17,5%

Gambar 15. Hasil streak ekstrak etanol daun beluntas konsentrasi 20, 25, 30%

Untuk ekstrak etanol daun kemangi, pertumbuhan bakteri masih ditunjukkan pada konsentrasi 17,5% (Gambar 16) dan mulai konsentrasi 20, 35, 30, 40, 50% tidak menunjukkan pertumbuhan bakteri (Gambar 17). Nilai KHM dan KBM dari ekstrak etanol daun kemangi secara berurutan adalah 17,5% dan 20%.


Gambar 16. Hasil streak ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 17,5%

Gambar 17. Hasil streak ekstrak etanol daun kemangi konsentrasi 20, 25, 30%

46


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

1. Kesimpulan Berdasarkan hasil penelitian, dapat diambil kesimpulan sebagai berikut : 1. Ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi mempunyai daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis. 2. KHM dan KBM ekstrak etanol daun beluntas masing-masing sebesar 17,5% dan 20%. KHM dan KBM ekstrak etanol daun kemangi berturutturut 17,5% dan 20%. 3. Walaupun nilai KBM ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi sama, namun ekstrak etanol daun beluntas mempunyai daya antibakteri (ditunjukkan dengan diameter zona hambat) lebih besar dibandingkan ekstrak etanol daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis.

2. Saran 1. Perlu dilakukan standardisasi terkait ekstrak yang digunakan, terutama proses pengeringan sampai bobot konstan. 2. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk memastikan senyawa yang bertanggung jawab pada efek antibakteri dari ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis.

47


48

3. Perlu dilakukan isolasi senyawa aktif yang bertanggung jawab sebagai antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis pada ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi. 4. Perlu dilakukan studi formulasi terkait isolat dari ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi untuk menghasilkan sediaan antibakteri yang aman dan berkhasiat.


49

DAFTAR PUSTAKA Ardiansyah, Nuraida, L., dan Andarwulan, N., 2003, Aktivitas Antimikroba Ekstrak Daun Beluntas (Pluchea indica L) dan Stabilitas Aktivitasnya pada Berbagai Konsentrasi Garam dan Tingkat pH, Hasil Penelitian Jurnal Teknologi dan Industri Pangan, Volume XIV, No 2, UNIDA dan IPB, Bogor. Depkes RI, 1986, Sediaan Galenik, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, pp. 10-13, 47-48. Depkes RI, 1995, Materia Medika Indonesia, Jilid VI, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, pp 25. Depkes RI, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Cetakan I, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, pp. 5-10. Ebit, 2010, Kemangi sebagai Tumbuhan Obat, http://id.shvoong.com/medicineand-health/alternative-medicine/2040994-kemangi-sebagai-tumbuhan-obat/, diakses tanggal 1 Mei 2012. Elsner, P., 2006, Antimicrobial and the Skin Physiological and Pathological Flora, Volume 33, Germany, pp. 35-41. Ganiswara, S. G., 1995, Farmakologi dan Terapan, Bagian Farmakologi Fakultas Kedoteran Universitas Indonesia, Jakarta, pp. 4, 571. Hendrawati, A. R. E., 2009, Uji Toksisitas Akut Ektrak Etanol Daun Kemangi (Ocimum Sanctum Linn) Terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BST), Laporan Penelitian, Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang. Hugo, W. B., Russel, A. D., 1987, Pharmaceutical Microbiology, 6th ed, Blackwell Scientific Publication, Oxford, pp. 285-286. Jawetz, Melnick, Adeberg., 1996, Mikrobiologi Kedokteran, Edisi XX, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 160, 164-165, 189, 682-683. Khalil, A., 2013, Antimicrobial Activity of Ethanolic Extract of Ocimum basilicum Leaf from Saudi Arabia, Thesis, Saudi Arabia. Majalah Kesehatan, 2010, Lima Penyebab Bau Badan Tidak Sedap, http://majalahkesehatan.com/keringat-dan-bau-keringat/, diakses tanggal 13 Mei 2012. Maryati, Fauzia, R. S., dan Rahayu, T., 2007, Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi (O. Basilicum L) terhadap S. aureus dan E. Coli, Laporan Penelitian, Volume 8, Fakultas Farmasi, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Muhammadiyah Surakarta, Surakarta.


50

Patil, D. D., Mhaske, D. K., and Wadhawa, G. C., 2011, Antibacterial and Antioxidant Study of Ocimum Basilicum Labiatae (Sweet Basil), JAPER. Plantamor, 2012, Informasi Spesies, http://www.plantamor.com/index.php?plant=1029, http://www.plantamor.com/index.php?plant=913, diakses tanggal 7 Juli 2013. Pratiwi, S. T., 2008, Mikrobiologi Farmasi, Erlangga, Jakarta, pp. 188-192. Purnomo, M., 2001, Isolasi Flavonoid dari Daun Beluntas (Pluchea indica Less) yang Mempunyai Aktivitas Antimikroba Terhadap Penyebab Bau Keringat Secara Bioutografi, Tesis, Universitas Airlangga, Surabaya. Radji, M., 2011, Buku Ajar Mikrobiologi, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 194. Raja, R., Sathyanathan., Sekhar., Roosewelt., 2012, Standardization and Antibacterial Screening of Ocimum basilicum (Lamiaceae) Leaf, Seed and Stem Extracts Against the Organism of Propionibacterium acnes, IJPIR. Sastroamidjojo, H., 2001, Kimia Minyak Atsiri, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, UGM, Yogyakarta, pp. 60. Setiabudy, R., dan Gan, V. H. S., 1995, Pengantar Antimikroba, dalam Ganiswara, S. G., Farmakologi dan Terapi, Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta, pp. 571. Siemonsma, J. S dan Piluek, K., 1994, Plant Resources of South-East Asia : Vegetable, Prosea, Bogor. Steenis, C. G. G. J Van, 1975, Buku Acuan Flora untuk Sekolah di Indonesia, PT Pradnya Pramita, Jakarta, pp. 35-37, 48-54, 63-67, 354-355, 359-350, 402403. Sulistiyaningsih, Rr., 2009, Potensi Daun Beluntas (Pluchea indica Less) sebagai Inhibitor terhadap Pseudomonas aeruginosa Multi Resistant dan Methicillin Resistant Staphylococcus aureus, Laporan Penelitian Mandiri, Universitas

Padjajaran, Bandung. Susetyarini, E., 2007, Pengaruh Dekok Daun Beluntas Terhadap LD50 (Toksisitas Akut) Tikus Putih Jantan (Ratus norwegicus), Laporan Penelitian, Universitas Muhammadiyah Malang, Malang. Tortora, G.J., Funke, B. R., and Case, C. L., 2001, Microbiology, Addison Wesley Longman Inc, San Fransisco. pp. 315. Trihendrokesowo, 1986, Dasar-dasar Pemeriksaan Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran UGM, Yogyakarta, pp. 7-8, 33, 36, 42.


51

Voigt, R., 1994, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, UGM Press, Yogyakarta, pp. 564. Volk, A. W., and Wheeler, F., 1988, Mikrobiologi Dasar, Jilid 1, Erlangga, Jakarta. pp. 76.


LAMPIRAN

52


53

Lampiran 1. Kunci hasil determinasi tanaman beluntas dan kemangi 1. Beluntas (Pluchea indica Less) 1b-2b-3b-4b-6b-7b-9b-10b-11b-12b-13b-14a-15a-109b-119b-120b-128b129b-135b-136b-139b-140b-143b-146b-154b-155b-156a-157a-158b-159b160a ............................................................. Goodeniaceae 1a-2b-3b-4b-5a-6b-8b-9b-10a ........................................ Pluchea (Pluchea indica Less) 2. Kemangi (Ocimum basilicum L) 1b-2b-3b-4b-6b-7b-9b-10b-11b-12b-13b-14b-16a-239b-243b-244b-248b249b-250b-266b-267a-268b-271b ........................ Lamiaceae 1a-2b-4b-6b-7b .............................................................. Ocimum (Ocimum basilicum L)


Lampiran 2. Surat pengesahan determinasi tanaman beluntas

54


Lampiran 3. Surat pengesahan determinasi tanaman kemangi

55


Lampiran 4. Sertifikat hasil uji bakteri Staphylococcus epidermidis

56


57

Lampiran 5. Foto beluntas dan kemangi

A

B

Keterangan : A. Beluntas B. Kemangi Lampiran 6. Volume sisa pelarut setelah pemekatan ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi

A

B


58

Keterangan : A. Sisa pelarut ekstrak etanol daun beluntas (± 35 ml) B. Sisa pelarut ekstrak etanol daun kemangi (± 40 ml) Lampiran 7. Beberapa hasil perhitungan bobot ekstrak kental daun beluntas dan daun kemangi Replikasi

Cawan kosong

Ekstrak cair

Ekstrak kental (setelah dioven dan dikurangi bobot cawan)

1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5

Ekstrak daun beluntas (gram) 59,09 41,25 55,56 38,33 38,30 27,01 29,97 25,18 25,09 31,20 2,92 2,82 2,22 2,91 2,54

Ekstrak daun kemangi (gram) 61,50 61,55 38,30 43,30 45,50 37,10 36,19 37,40 40,50 31,10 3,34 3,52 3,90 3,80 3,90

Lampiran 8. Hasil pengamatan uji difusi sumuran ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi

A

B

C

D

E

F


M

G

H

I

J

K

L

N

O

P Keterangan : A. Kontrol media B. Kontrol pertumbuhan bakteri uji C. Konsentrasi ekstrak etanol daun beluntas 10, 15, 20, 25% replikasi 1 D. Konsentrasi ekstrak etanol daun beluntas 10, 15, 20, 25% replikasi 2 E. Konsentrasi ekstrak etanol daun beluntas 10, 15, 20, 25% replikasi 3 F. Konsentrasi ekstrak etanol daun beluntas 30, 35, 40, 45, 50% replikasi 1 G. Konsentrasi ekstrak etanol daun beluntas 30, 35, 40, 45, 50% replikasi 2 H. Konsentrasi ekstrak etanol daun beluntas 30, 35, 40, 45, 50% replikasi 3 I. Konsentrasi ekstrak etanol daun kemangi 10, 15, 20, 25% replikasi 1 J. Konsentrasi ekstrak etanol daun kemangi 10, 15, 20, 25% replikasi 2 K. Konsentrasi ekstrak etanol daun kemangi 10, 15, 20, 25% replikasi 3 L. Konsentrasi ekstrak etanol daun kemangi 30, 35, 40, 45, 50% replikasi 1 M. Konsentrasi ekstrak etanol daun kemangi 30, 35, 40, 45, 50% replikasi 2 N. Konsentrasi ekstrak etanol daun kemangi 30, 35, 40, 45, 50% replikasi 3 O. Kontrol positif (Mediklin®) tanpa diencerkan P. Kontrol positif konsentrasi 2% (0,5 ml dalam 25 ml aquadest)

59


Lampiran 9. Hasil pengamatan uji dilusi padat ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi

A

B

C

E

F

G

H

I

J

K

M

N

O

P

D

L

Q

60


R

S

T

U

V

W

X

Y

Keterangan : A. Kontrol media B. Kontrol pertumbuhan bakteri uji C. Ekstrak etanol daun beluntas 5% D. Ekstrak etanol daun beluntas 7,5% E. Ekstrak etanol daun beluntas 10% F. Ekstrak etanol daun beluntas 12,5% G. Ekstrak etanol daun beluntas 15% H. Ekstrak etanol daun beluntas 17,5% I. Ekstrak etanol daun beluntas 20% J. Ekstrak etanol daun beluntas 25% K. Ekstrak etanol daun beluntas 30% L. Ekstrak etanol daun beluntas 35% M. Ekstrak etanol daun beluntas 40% N. Ekstrak etanol daun beluntas 50% O. Ekstrak etanol daun kemangi 5% P. Ekstrak etanol daun kemangi 7,5% Q. Ekstrak etanol daun kemangi 10% R. Ekstrak etanol daun kemangi 12,5% S. Ekstrak etanol daun kemangi 15% T. Ekstrak etanol daun kemangi 17,5% U. Ekstrak etanol daun kemangi 20% V. Ekstrak etanol daun kemangi 25% W. Ekstrak etanol daun kemangi 30%

61


X. Ekstrak etanol daun kemangi 40% Y. Ekstrak etanol daun kemangi 50% Lampiran 10. Hasil streak penentuan KHM dan KBM ekstrak etanol daun beluntas dan daun kemangi

A

B

D

E

G Keterangan : A. Kontrol media dan kontrol pertumbuhan bakteri uji B. Ekstrak etanol daun beluntas 17,5% C. Ekstrak etanol daun beluntas 20, 25, 30% D. Ekstrak etanol daun beluntas 35, 40, 50% E. Ekstrak etanol daun kemangi 17,5% F. Ekstrak etanol daun kemangi 20, 25, 30% G. Ekstrak etanol daun kemangi 40, 50%

C

F

62


63

Lampiran 11. Uji normalitas diameter zona hambat ekstrak etanol daun beluntas terhadap Staphylococcus epidermidis menggunakan Shapiro-Wilk


64


65

Lampiran 12. Uji normalitas diameter zona hambat ekstrak etanol daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis menggunakan Shapiro-Wilk


66


Lampiran 13. Uji Kruskal-Wallis ekstrak etanol daun beluntas seluruh konsentrasi

Lampiran 14. Uji Kruskal-Wallis ekstrak etanol daun kemangi seluruh konsentrasi

67


Lampiran 15. Uji Wilcoxon antar konsentrasi ekstrak etanol daun kemangi

68


69


70


71


72


73


74


75


76


77


78


79


Lampiran 16. Uji Wilcoxon antar konsentrasi ekstrak etanol daun beluntas

80


81


82


83


84


85


86


87


88


89


90


91


92


93

Lampiran 17. Uji Wilcoxon kontrol pelarut (etanol 70%) dengan kontrol positif (Mediklin®)

Lampiran 18. Uji Wilcoxon kontrol pelarut (etanol 70%) dengan ekstrak etanol daun beluntas seluruh konsentrasi


94


95


96


97

Lampiran 19. Uji Wilcoxon kontrol pelarut (etanol 70%) dengan ekstrak etanol daun kemangi seluruh konsentrasi


98


99


100

Lampiran 20. Uji Wilcoxon kontrol positif (Mediklin®) dengan ekstrak etanol daun beluntas seluruh konsentrasi


101


102


103


104

Lampiran 21. Uji Wilcoxon kontrol positif (Mediklin®) dengan ekstrak etanol daun kemangi seluruh konsentrasi


105


106


107


108

BIOGRAFI PENULIS

Putu Eny Guna Pramita merupakan anak pertama dari tiga bersaudara yang lahir di Tabanan, Bali pada tanggal 6 Agustus 1991. Penulis merupakan anak dari I Nyoman Marna dan Ni Luh Kade Suratmi. Pada tahun 1995-1997 penulis menempuh pendidikan di TK Astiti, Bali dilanjutkan tahun 1997-2003 duduk di bangkus SD No 4 Tonja, Bali. Tahun 2003-2006 menempuh pendidikan SMP di SMPN 8 Denpasar, Bali dilanjutkan pendidikan SMA pada tahun 2006-2009 di SMK Farmasi Saraswati 3 Denpasar, Bali. Selepas SMA, penulis memilih untuk melanjutkan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Kegiatan yang pernah diikuti penulis selama kuliah diantaranya Volunteer dalam Kampanye Informasi Obat (2009), Koordinator sie Kesehatan dalam kepanitiaan Nyepi KMHD se-Jogja (2009), Ketua Malam Keakraban Keluarga Mahasiswa Hindu Dharma (KMHD) pada tahun 2010, sie Humas dalam Kampanye Informasi Obat (2010), Koordinator sie DDU dalam Dies Natalis Keluarga Putra Bali (2010), Bendahara KMHD periode 2010-2011, sie Konsumsi Malam Keakraban KMHD (2011), sie Kesenian dalam Titrasi (2011).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents