PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

PENGARUH WAKTU PROTEKTIF PEMBERIAN INFUSA DAUN Macaranga tanarius L. SECARA AKUT TERHADAP KADAR ALT-AST PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Luluk Rahendra Martha NIM : 098114122

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013 i


ii


iii


HALAMAN PERSEMBAHAN

Cuma kaki yang akan berjalan lebih jauh dari biasanya, tangan yang akan berbuat lebih banyak dari biasanya, mata yang akan menatap lebih lama dari biasanya, leher yang akan lebih sering melihat ke atas, lapisan tekad yang seribu kali lebih keras dari baja, dan hati yang akan bekerja lebih keras dari biasanya, serta mulut yang akan selalu berdoa. “5 cm” karya Donny Dhirgantoro halaman 362-363

Karya ini kupersembahan untuk : Yesus Kristus Juruselamat dan sumber kuatku Bapak,Ibu,adikku Rinda serta keluarga besarku atas doa, dukungan,dan nasihatnya Sahabat-sahabatku yang telah hadir dan mengisi kebahagiaanku Serta Almamaterku tercinta

iv


v


vi


PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas kasih, berkat dan karunia-Nya yang melimpah, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Pengaruh Waktu Protektif Pemberian Infusa Daun Macaranga tanarius L. Secara Akut Terhadap Kadar ALTAST Pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida ” ini dengan baik. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Penulis menyadari bahwa dalam penyelesaian skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan dan campur tangan dari berbagai pihak, baik secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu, penulis hendak mengucapkan terimakasih kepada: 1.

Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dosen Pembimbing dan Dosen Penguji pada skripsi ini atas segala kesabaran, bimbingan, bantuan, serta motivasi dan masukan kepada penulis dalam pengerjaaan skripsi ini.

2.

Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dosen Penguji skripsi yang telah banyak memberi perhatian, masukkan dan saran kepada penulis.

3.

Bapak Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt. selaku Dosen Penguji skripsi yang telah banyak memberi perhatian, masukkan dan saran kepada penulis.

vii


4. Ibu

Rini

Dwiastuti,

M.Si.,

Apt

selaku

Kepala

Penanggungjawab

Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian skripsi ini 5. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., yang telah memberikan bantuan dalam determinasi tanaman M. tanarius 6. Bapak Heru, Bapak Parjiman, Bapak Kayat, Bapak Wagiran, Bapak Kunto, Bapak Suparlan selaku laboran laboratorium Fakultas Farmasi dan

Ibu

Hartini serta Bapak Arzan selaku pengurus taman Universitas Sanata Dharma Kampus III yang telah banyak memberikan bantuan selama proses pelaksanaan penelitian. 7. Rekan-rekan dan sahabatku tim Macaranga jilid III, Nanda Chris Nurcahyanti, Theresia Garri Windrawati, M.R. Biri Kony Tiala, Fransisca Devita R.W., Christine Herdyana Febrianti, Bernadetta Amilia R., dan A.M. Inggrid Silli atas segala kerjasama, bantuan dan dukungan dalam pengerjaan skripsi. 8. Sahabat-sahabatku Veronika Dita Ayuningtyas, Niken Ambar Sayekti, Novia Sarwoning Tyas, atas motivasi, doa, kebersamaan dan persahabatannya. 9. Seluruh dosen dan teman-teman FSM C 09, FKK B 09 serta seluruh angkatan 2009 Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. 10. Semua pihak yang penulis tidak dapat menyebutkan satu-persatu yang telah ikut membantu selama penyusunan skripsi ini.

viii


ix


DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL ...................................................................................

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..........................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN .....................................................................

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ..................................................................

iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ......................................................

v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS.....................................

vi

PRAKATA...................................................................................................

vii

DAFTAR ISI................................................................................................

x

DAFTAR TABEL........................................................................................

xiv

DAFTAR GAMBAR ...................................................................................

xv

DAFTAR LAMPIRAN................................................................................

xvii

INTISARI .................................................................................................... xviii ABSTRACT...................................................................................................

xix

BAB I. PENGANTAR.................................................................................

1

A. Latar Belakang ......................................................................................

1

1. Perumusan masalah ..........................................................................

4

2. Keaslian penelitian ...........................................................................

4

3. Manfaat penelitian............................................................................

5

B. Tujuan Penelitian ..................................................................................

6

1. Tujuan umum ...................................................................................

6

x


2. Tujuan khusus ..................................................................................

6

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA .........................................................

7

A. Hati........................................................................................................

7

1. Anatomi dan fisiologi hati................................................................

7

2. Jenis kerusakan hati..........................................................................

9

3. Hepatotoksin ...................................................................................

11

4. ALT dan AST……...........................................................................

12

B. Karbon Tetraklorida .............................................................................

13

C. Metode Pengujian Hepatoprotektif .......................................................

18

1. Tes enzim serum ..............................................................................

18

2. Tes eskretori hepatik ........................................................................

18

3. Perubahan kandungan kimia hati .....................................................

19

4. Analisis histologik kerusakan hati ...................................................

19

D. Macaranga tanarius L. .........................................................................

19

1. Sinonim ............................................................................................

19

2. Nama lain .........................................................................................

19

3. Taksonomi........................................................................................

20

4. Penyebaran .......................................................................................

20

5. Morfologi .........................................................................................

20

6. Kandungan .......................................................................................

21

7. Khasiat dan kegunaan ......................................................................

23

E. Infusa ...................................................................................................

23

F. Landasan Teori .....................................................................................

24

xi


G. Hipotesis ..............................................................................................

25

BAB III. METODE PENELITIAN .............................................................

26

A. Jenis dan Rancangan Penelitian ............................................................

26

B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional.......................................

26

1. Variabel utama .................................................................................

26

2. Variabel pengacau ............................................................................

26

3. Definisi operasional .........................................................................

27

C. Bahan Penelitian ...................................................................................

28

1. Bahan utama.....................................................................................

28

2. Bahan kimia .....................................................................................

28

D. Alat Penelitian.......................................................................................

30

1. Alat pembuatan serbuk kering daun M. tanarius .............................

30

2. Alat pembuatan infusa daun M. tanarius .........................................

30

3. Alat uji kadar ALT-AST .................................................................

30

E. Tata Cara Penelitian..............................................................................

30

1. Determinasi daun M. tanarius .........................................................

30

2. Pengumpulan bahan uji ....................................................................

31

3. Pembuatan serbuk kering daun M. tanarius.....................................

31

4. Penetapan kadar air serbuk kering daun M. tanarius .......................

31

5. Pembuatan infusa daun M. tanarius.................................................

31

6. Pembuatan larutan karbon tetraklorida konsentrasi 50%.................

32

7. Uji pendahuluan ...............................................................................

32

8. Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji......................................

33

xii


9. Pembuatan serum .............................................................................

33

10. Pengukuran aktivitas ALT dan AST...............................................

34

F. Tata Cara Analisis Hasil .......................................................................

34

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................

36

A. Penyiapan Bahan ..................................................................................

36

1. Hasil determinasi tanaman ...............................................................

36

2. Penetapan kadar air serbuk kering daun M. tanarius ......................

36

B. Uji Pendahuluan....................................................................................

37

1. Penetapan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida ..........................

37

2. Penentuan waktu pencuplikan darah hewan uji ...............................

37

C. Hasil Uji Waktu Protektif Pemberian Infusa Daun M. tanarius Secara Akut Pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida....................

40

1. Kontrol negatif (olive oil 2 ml/kgBB) ..............................................

45

2. Kontrol hepatotoksin (karbon tetraklorida 2 ml/kgBB) ...................

47

3. Kontrol perlakuan (infusa M. tanarius dosis 10 g/kgBB ................

48

4. Kelompok perlakuan infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB ...........

49

D. Rangkuman Pembahasan ......................................................................

55

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN .....................................................

57

A. Kesimpulan ...........................................................................................

57

B. Saran .....................................................................................................

57

xiii


DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................

58

LAMPIRAN.................................................................................................

61

BIOGRAFI PENULIS .................................................................................

95

xiv


DAFTAR TABEL Halaman Tabel I.

Peningkatan relatif dari beberapa enzim pada cedera hati .......... 17

Tabel II.

Rata-rata aktivitas ALT tikus setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada pencuplikan darah jam ke-0, jam ke-24, dan jam ke-48................................................... 38

Tabel III. Hasil uji Scheffe aktivitas ALT tikus setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada pencuplikan darah jam ke-0, jam ke-24, dan jam ke-48................................................... 39 Tabel IV. Hasil uji Mann-Whitney aktivitas AST tikus setelah setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada pencuplikan darah jam ke-0, jam ke-24, dan jam ke-48 ............. 40 Tabel V.

Pengaruh waktu protektif pemberian secara akut infusa daun M. tanarius

terhadap hepatotoksisitas karbon

tetraklorida dilihat dari aktivitas ALT dan AST ......................... 42 Tabel VI. Hasil analisis statistik uji Scheffe dilihat dari kebermaknaan ALT antar kelompok .................................................................. 43 Tabel VII. Hasil analisis statistik uji Scheffe dilihat dari kebermaknaan AST antar kelompok ................................................................... 44 Tabel VIII. Perbandingan kontrol olive oil jam ke-0 dan jam ke-24 pada ALT dan AST tikus jantan .......................................................... 45

xv


DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Struktur mikroskopik hati ...........................................................

8

Gambar 2. Struktur molekul karbon tetraklorida .......................................... 13 Gambar 3. Mekanisme

biotransformasi

dan

oksidasi

karbon

tetraklorida .................................................................................. 15 Gambar 4. Stuktur senyawa dalam daun M. tanarius ................................... 22 Gambar 5. Diagram batang orientasi aktivitas ALT tikus setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada pencuplikan darah jam ke-0, jam ke-24, dan jam ke-48 ............. 38 Gambar 6. Diagram batang orientasi aktivitas AST tikus setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada pencuplikan darah jam ke-0, jam ke-24, dan jam ke-48 ............. 39 Gambar 7. Diagram

batang

rata-rata

pengaruh

waktu

protektif

pemberian infusa daun M. tanarius secara akut terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat dari aktivitas ALT ............................................................................................. 43 Gambar 8. Diagram

batang

rata-rata

pengaruh

waktu

protektif

pemberian infusa daun M. tanarius secara akut terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat dari aktivitas AST ............................................................................................. 44 Gambar 9. Diagram batang rata-rata perbandingan ALT kontrol olive oil jam ke-0 dan kontrol olive oil jam ke-24 ............................... 46

xvi


Gambar 10. Diagram batang rata-rata perbandingan AST kontrol olive oil jam ke-0 dan kontrol olive oil jam ke-24 ............................... 46

xvii


DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Foto daun M. tanarius .............................................................. 62 Lampiran 2. Foto infusa daun M. tanarius ................................................... 62 Lampiran 3. Surat determinasi tanaman M. tanarius.................................... 63 Lampiran 4. Surat Ethical Clearance ......................................................... 64 Lampiran 5. Hasil analisis statistik data ALT dan AST pada uji pendahuluan waktu pencuplikan darah hewan uji setelah induksi karbon tetraklorida 2ml/kg BB ................................... 65 Lampiran 6. Hasil analisis statistik data ALT dan AST pada kelompok perlakuan infusa daun M. tanarius dosis 10g/kg BB pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida 2ml/kg.................. 73 Lampiran 7. Hasil analisis statistik data ALT dan AST pada kelompok kontrol olive oil dosis 2ml/kgBB ............................................. 84 Lampiran 8. Perhitungan efek hepatoprotektif ALT...................................... 90 Lampiran 9. Perhitungan efek hepatoprotektif AST...................................... 91 Lampiran 10. Penetapan kadar air serbuk daun M. tanarius ......................... 92 Lampiran 11. Perhitungan konversi dosis untuk manusia ............................. 93 Lampiran 12. Hasil pengukuran validitas dan reabilitas................................ 94

xviii


INTISARI

Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan adanya pengaruh waktu protektif pemberian infusa daun Macaranga tanarius L. secara akut dan mengetahui waktu paling efektif yang dapat memberikan pengaruh terhadap penurunan kadar Alanine Aminotransferase (ALT) serum dan Aspartate Aminotransferase (AST) serum dari pemberian infusa daun Macaranga tanarius secara akut pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida. Penelitian ini bersifat eksperimental murni dengan rancangan penelitian lengkap pola searah. Metode yang dilakukan adalah pengukuran ALT-AST pada jam ke 24 setelah pemberian karbon tetraklorida sebagai hepatotoksin. Sebanyak 40 tikus jantan galur Wistar umur 2-3 bulan dibagi dalam delapan kelompok yaitu kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 50% dengan dosis 2 ml/kg BB secara i.p, kelompok kontrol negatif yaitu olive oil dosis 2 ml/kg BB secara i.p, kelompok kontrol infusa M. tanarius 10 g/kgBB secara p.o dan lima kelompok perlakuan yang diberi infusa daun M. tanarius 10 g/kgBB berturut-turut pada jam ke ½, 1, 2, 4, dan 6, kemudian diberi karbon tetraklorida 50% 2 ml/kg BB secara i.p. Pada jam ke 24 setelah pemberian karbon tetraklorida diambil darah pada sinus orbitalis mata untuk penetapan aktivitas ALT dan AST. Data ALT dan AST yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan one way ANOVA dan dilanjutkan dengan uji Scheffe dengan tingkat kepercayaan 95%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian infusa daun M. tanarius 10 g/kgBB secara akut memiliki pengaruh terhadap penurunan terhadap ALTAST tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB dengan waktu ½ , 1, 2, 4, dan 6 jam. Waktu efektif untuk menghasilkan penurunan terhadap kadar ALTAST tikus adalah jam ke-2 setelah pemberian infusa daun M. tanarius.

Kata kunci : Macaranga tanarius L., infusa, akut, ALT, AST, karbon tetraklorida

xix


ABSTRACT The aim of this study are to prove the influence of protection time of Macaranga tanarius L. aqueous extract in acute and to investigate the time of the most effective that give effect of Alanine Aminotransferase (ALT) serum and Aspartate Aminotransferase (AST) serum in acute leaves of Macaranga tanarius L. aqueous extract in male Wistar rats that induced by carbon tetrachloride. This study is a pure experimental with randomized complete direct sampling design. The method that use in this study is a method of measuring activity of ALT and AST at 24 hours after administration of carbon tetrachloride as a hepatotoxin. A total of 40 male Wistar rats, age 2-3 months were divided into eight groups: hepatotoxin carbon tetrachloride control 50% dose 2 ml/kg BW i.p, negative control group that given olive oil 2 ml/kg BW i.p, kontrol group leaves aqueous extract M. tanarius dose 10 g / kg BW orally, and five treatment groups were given doses of aqueous extract M. tanarius 10 g / kg BW consecutively for ½, 1, 2, 4, and 6 hours orally, then given by carbon tetrachloride 50% dose 2ml/kg BW i.p. At 24 hours after administration of carbon tetrachloride, blood samples were taken through the eyes orbital sinus for measuring of its activity ALT and AST. The data of ALT and AST were analyzed by one way ANOVA and then continued to Scheffe test with 95% level of confidence. The result of this study showed that acute leaves of M. tanarius aqueous extract has effect to reduce ALT-AST level in male Wistar rats that induced by carbon tetrachloride dose 2 ml/kgBW with a time of ½, 1, 2, 4, and 6 hours. The most effective time which reducing ALT and AST level of rats is at 2 hours after giving M. tanarius aqueous extract.

Keywords : Macaranga tanarius L., leaves aqueous extract, acute, ALT, AST, carbon tetrachloride

xx


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Hati mempunyai fungsi utama yaitu sebagai pusat metabolisme. Sel-sel hati mendapat suplai darah dari vena portae hepatis yang kaya makanan, tidak mengandung oksigen, dan kadang-kadang toksik, serta dari arteria hepatika yang mengandung oksigen. Adanya sistem peredaran darah yang tidak biasa ini, sel hati mendapat darah yang relatif kurang oksigen. Hal inilah yang menyebabkan sel hati lebih rentan terhadap kerusakan dan penyakit (Wibowo dan Paryana, 2009). Kerusakan hati dapat berupa perlemakan hati (steatosis), nekrosis, kolestasis, hingga sirosis. Berdasarkan review jurnal yang dilakukan oleh Kalbemed (2012) dituliskan bahwa sebuah studi di Jepang menyebutkan terdapat 31-86 kasus Non-Alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD ) per 1000 orang per tahun dan sebuah studi di Inggris menyebutkan angka kejadian NAFLD adalah 29 kasus per 100.000 orang per tahun. Penyebab penyakit hati bervariasi, antara lain infeksi virus hepatitis yang dapat ditularkan melalui selaput mukosa dan darah (parenteral), zat-zat toksik seperti alkohol atau obat-obat tertentu, gangguan imunologis, dan zat-zat karsinogenik (Direktorat Bina Farmasi Komunitas dan Klinik RI, 2007). Penelitian obat baru mengenai kerusakan hati di Indonesia belum banyak dilakukan, sehingga perlu dilakukan penelitian terhadap sumber daya hayati sebagai alternatif obat baru.

1


2

Macaranga merupakan tanaman yang banyak ditemukan tumbuh di daerah tropis terutama di daerah hutan hujan tropis. Tanaman ini banyak ditemukan di banyak negara antara lain : Australia, Brunei, Kamboja, China, Indonesia, Malaysia (World Agroforestry Centre, 2002). Di Malaysia, dekok akar Macaranga tanarius digunakan sebagai antipiretik dan antitusif, sedangkan di Cina, spesies ini dijadikan sebagai produk minuman kesehatan (Lim, Lim, dan Yule, 2009). Penelitian Phommart, Pakawadee, Nitirat, Somsak, dan Somyote (2005) menyebutkan

bahwa

kandungan

antioksidan

daun

M.

tanarius

yaitu

tanariflavanon C, dan tanariflavanon D, nimfaeol A, nimfaeol B, nimfaeol C memiliki aktivitas terhadap penghambatan radikal DPPH. Matsunami, Takamori, Shinzato, Aramoto, Kondo, Otsuka, dkk (2006) melaporkan adanya senyawa glikosida yaitu macarangioside A, B, C, D dan mallophenol B yang diisolasi dari ekstrak metanol M. tanarius menunjukkan aktivitas penangkapan radikal terhadap DPPH. Karbon tetraklorida merupakan salah satu senyawa model yang dapat digunakan untuk menimbulkan kerusakan hati. Menurut U.S. EPA (2010) senyawa ini sangat mudah menguap. Penggunaan senyawa ini antara lain untuk sintesis senyawa organik terklorinasi, pembuatan cairan pendingin, sebagai fumigan pertanian, aplikasi laboratorium. Ketoksikan senyawa ini tergantung oleh aktivitas sitokrom P-450 (CYP2E1) yang dapat

membentuk radikal bebas

triklorometil (•CCl3) (Gregus dan Klaaseen, 2001). Reaksi radikal bebas triklorometil dapat menghasilkan peroksidasi lipid. Peroksidasi lipid dapat


3

menyebabkan gangguan integritas membran dengan keluarnya berbagai isi sitoplasma antara lain enzim ALT, sehingga enzim ALT dalam darah meningkat. Proses peroksidasi lipid juga mengakibatkan terjadinya perlemakan hati (steatosis) karena adanya kerusakan keluarnya lemak dari hati yang disebabkan karena hambatan sintesis lipoprotein yang membawa trigliserida meninggalkan hati (Wahyuni, 2005). Penelitian terdahulu yang dilakukan oleh Nugraha dan Hendra (2011) melaporkan bahwa pemberian infusa daun M. tanarius dosis 5g/kgBB secara akut selama 1 jam dapat memberikan efek hepatoprotektif pada tikus terinduksi parasetamol. Oleh karena itu, penelitian dilakukan dengan induksi karbon tetraklorida pada tikus, untuk mengetahui adanya pengaruh waktu protektif pemberian infusa daun M. tanarius secara akut yang ditunjukkan dengan penurunan kadar Alanine Aminotransferase (ALT) serum dan Aspartate Aminotransferase (AST) serum. Tujuan penelitian ini dilakukan secara akut dan penentuan dosis infusa daun M. tanarius yang digunakan didasarkan pada penelitian Nurcahyanti (2012). Pada penelitian ini, pemberian infusa daun M. tanarius dilakukan secara akut untuk membandingkan pengaruh pemberian jangka panjang infusa daun M. tanarius 10g/kgBB pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Selain itu, juga ingin membuktikan apakah dengan pemberian infusa daun M. tanarius secara langsung dapat menurunkan aktivitas ALT-AST. Dosis infusa daun M. tanarius yang digunakan pada penelitian ini adalah 10g/kgBB, hal ini didasarkan pada penelitian tersebut, yang mana dosis ini memberikan penurunan purata ALT dan AST


4

terendah. Sediaan yang digunakan pada penelitian ini adalah infusa karena pada penelitian Matsunami, dkk (2006) menyebutkan bahwa senyawa antioksidan diperoleh dari hasil isolasi pelarut yang bersifat polar. Oleh karena itu, dengan menggunakan air sebagai pelarut, diharapkan dapat diperoleh senyawa antioksidan. Pembuatan infusa juga relatif mudah dan sederhana, sehingga menjadi dasar pemilihan sediaan ini.

1. Perumusan masalah Berdasarkan latar belakang di atas, dapat dirumuskan permasalahan sebagai berikut : a. Apakah pemberian infusa daun M. tanarius 10g/kgBB secara akut memiliki pengaruh terhadap penurunan kadar ALT-AST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida? b. Berapakah waktu paling efektif pemberian infusa daun M. tanarius 10g/kgBB secara akut untuk memberikan pengaruh terhadap penurunan kadar ALT-AST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida ?

2. Keaslian penelitian Penelitian menggunakan daun M. tanarius pernah dilakukan oleh Matsunami dkk, (2006) yang melaporkan adanya senyawa glikosida yaitu macarangioside A, B, C, D dan mallophenol B yang diisolasi dari ekstrak metanol M. tanarius menunjukkan aktivitas penangkapan radikal terhadap DPPH.


5

Penelitian yang dilakukan Phommart dkk, (2005) menyebutkan hasil isolasi ekstrak n-heksana dan kloroform dari daun M. tanarius, yaitu tanarifuranonol, tanariflavanon C, nimfaeol A, nimfaeol B, nimfaeol C, tanariflavanon B, blumenol A (vomifoliol), blumenol B (7,8 dihidrovomifoliol, dan annuionone). Selain itu, pernah dilakukan penelitian terhadap efek hepatoprotektif jangka panjang infusa daun M. tanarius pada tikus terinduksi parasetamol (Mahendra dan Hendra, 2011) dan efek hepatoprotektif secara akut daun M. tanarius pada tikus terinduksi parasetamol (Nugraha dan Hendra, 2011). Pada saat yang bersamaan dengan penelitian ini, juga dilakukan penelitian mengenai pengaruh pemberian infusa daun M. tanarius jangka panjang terhadap kadar ALTAST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida (Nurcahyanti, 2012). Sejauh penelusuran pustaka, penelitian waktu protektif pemberian infusa daun M. tanarius secara akut pada tikus terinduksi karbon tetraklorida belum pernah dilakukan.

3. Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan sumbangan ilmu khususnya ilmu kefarmasian mengenai pengaruh pemberian infusa daun M. tanarius secara akut terhadap penurunan kadar ALT-AST. b. Manfaat praktis. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi lama penggunaan tanaman M. tanarius sebagai alternatif pengobatan bagi penderita penyakit hati.


6

B. Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan adanya pengaruh waktu protektif pemberian infusa daun M. tanarius secara akut terhadap penurunan kadar ALT-AST tikus terinduksi karbon tetraklorida. 2. Tujuan khusus Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui waktu paling efektif yang dapat memberikan pengaruh terhadap penurunan kadar ALT-AST dari pemberian infusa daun M. tanarius secara akut pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Hati 1. Anatomi dan fisiologi hati Hati hati merupakan organ atau kelenjar terbesar dari tubuh. Hati disebut kelenjar karena menghasilkan empedu dan juga mengeluarkan hasil produksi dari makanan. Hati mempunyai dua facies, yaitu facies diaphragmatica dan facies visceralis. Facies diaphragmatica terletak di sebelah atas dengan bentuk sesuai lengkung diafragma dan mempunyai permukaan yang halus. Permukaan ini terdiri dari bagian anterior dan posterior, sedangkan facies visceralis atau posteroinferior menghadap ke bawah dan ke belakang sehingga permukaannya ireguler. Pada facies visceralis terdapat porta hepatis, yaitu suatu hilum dari hati yang merupakan tempat masuk dan keluar pembuluh darah, saluran empedu, pembuluh getah bening, dan plexus nervorum (Wibowo dan Paryana, 2009). Hati memiliki berat sekitar 1400 g pada orang dewasa dan dibungkus oleh suatu fibrosa. Hati menerima hampir sekitar 1500 ml darah per menit melalui dua sumber, yaitu vena portae dan arteri hepatika (Ganong dan McPhee, 2011). Hati dibagi menjadi dua lobus, yaitu lobus kanan dan lobus kiri. Lobus kanan dibagi menjadi bagian superior dan posterior oleh fisura segmentalis. Lobus kiri dibagi oleh ligamentum falsiformis menjadi segmen medial dan lateral. Setiap lobus pada hati dibagi menjadi struktur-stuktur yang disebut lobulus. Lobulus terdiri dari lempeng-lempeng sel hati yang berbentuk kubus dan tersusun mengelilingi vena sentralis. Di antara lempeng-lempeng sel hati terdapat kapiler-

7


8

kapiler yang disebut sinusoid yang merupakan cabang vena porta dan arteri hepatika (Gambar 1). Sinusoid dibatasi oleh sel Kupffer. Sel Kupffer memiliki fungsi utama yaitu untuk menelan bakteri dan benda asing lain dalam darah. Oleh karena itu, sel Kupffer sering disebut sebagai sel fagositik (Price dan Wilson, 2005).

Gambar 1. Struktur mikroskopik hati (Ganong and McPhee, 2011)

Hati menerima darah dari vena portae hepatis (70%) dan arteri hepatika (30%). Arteri hepatika membawa darah yang berisi oksigen yang berasal arteria


9

hepatika communis , di sebelah kiri ductus choledocus dan di depan vena porta (Wibowo dan Paryana, 2009), sedangkan vena porta membawa darah vena dari usus halus yang kaya akan nutrient yang baru diserap, obat, dan racun langsung ke hati. Vena porta membentuk jalinan khusus yang memungkinkan setiap hepatosit dibasuh langsung oleh darah porta (Ganong dan McPhee, 2011). Hati mempunyai fungsi utama yaitu sebagai pusat metabolisme. Hati mempunyai struktur seragam yang terdiri dari kelompok sel-sel yang saling dipersatukan oleh sinusoid. Sel-sel hati mendapat suplai darah dari vena portae hepatis yang kaya makanan, tidak mengandung oksigen, dan kadang-kadang toksik, serta dari arteria hepatika yang mengandung oksigen. Adanya sistem peredaran darah yang tidak biasa ini, sel hati mendapat darah yang relative kurang oksigen. Hal inilah yang menyebabkan sel hati lebih rentan terhadap kerusakan dan penyakit (Wibowo dan Paryana, 2009). 2. Jenis kerusakan hati Toksikan dapat mengakibatkan berbagai jenis kerusakan hati seperti : a. Perlemakan hati (Steatosis) Perlemakan hati adalah suatu keadaan dimana hati mengandung berat lipid lebih dari 5%. Lesi dapat bersifat akut seperti yang disebabkan oleh etionin, fosfor, atau tetrasiklin. Beberapa toksikan seperti tetrasiklin menyebabkan banyak butiran lemak kecil dalam suatu sel, toksikan lain seperti etanol, menyebabkan butiran lemak besar yang menggantikan inti. Sementara toksikan lain seperti karbon tetraklorida dapat menyebabkan penimbunan lipid hati dengan mekanisme penekanan konjugasi trigliserida dengan lipoprotein (Lu, 1995).


10

Perlemakan hati dapat berasal dari satu atau lebih peristiwa berikut: kelebihan pasokan asam lemak bebas ke hati, gangguan pada siklus trigliserida, peningkatan sintesis atau esterifikasi asam lemak, penurunan oksidasi asam lemak, penurunan sintesis apoprotein, dan penurunan sintesis atau sekresi lipoprotein densitas sangat rendah (VLDL) Steatosis adalah respon umum untuk pemejanan akut tapi tidak untuk semua hepatotoksin. Toksin yang disebabkan steatosis adalah bersifat reversibel dan tidak menyebabkan kematian hepatosit (Gregus dan Klaaseen, 2001). b. Nekrosis Nekrosis merupakan kematian sel-sel hati yang ditandai dengan pembengkakan sel, kebocoran, hancurnya inti dan masuknya sel-sel radang. Ketika nekrosis pada hepatosit terjadi, kebocoran plasma membran dapat dideteksi secara kimiawai dengan menguji kadar enzim yang berasal dari sitosol di plasma atau serum yaitu Alanine Aminotransferase (ALT) sebagai enzim hepatosit yang paling utama (Treinen dan Moslen, 2001). c. Kolestasis Kolestasis adalah jenis kerusakan hati yang bersifat akut, dan lebih jarang ditemukan dibandingkan dengan perlemakan hati dan nekrosis. Mekanisme utama terjadinya kolestasis adalah berkurangnya aktivitas ekskresi empedu pada membran kanalikulus (Lu, 1995). Kolestasis merupakan bentuk luka hati yang didefinisikan secara fisiologis sebagai penurunan volume empedu atau gangguan sekresi zat terlarut tertentu ke dalam empedu. Kolestasis dicirikan oleh tingkat serum senyawa yang biasanya


11

terkonsentrasi dalam empedu, khususnya garam empedu dan bilirubin. Bila ekskresi empedu dari pigmen bilirubin terganggu, dapat terakumulasi di kulit dan mata, menghasilkan penyakit kuning, dan ke dalam urin, yang menjadi kuning coklat atau gelap terang. Histologis kolestasis bisa sangat halus dan sulit untuk dideteksi tanpa penelitian ultrastruktur. Perubahan struktural mencakup pelebaran dari canaliculus empedu dan adanya colokan empedu dalam saluran empedu dan canaliculi (Lu, 1995). d. Sirosis Sirosis merupakan bentuk kerusakan yang terakhir, sering fatal, tahap kerusakan hati kronis. Sirosis ditandai dengan akumulasi sejumlah jaringan fibrosa yang luas, khususnya serabut-serabut kolagen, sebagai respon terhadap kerusakan atau terhadap peradangan. Sirosis bersifat irreversibel, memiliki harapan hidup yang kecil, dan biasanya merupakan hasil paparan berulang zat kimia beracun (Treinen dan Moslen, 2001). 3. Hepatotoksin Obat dan senyawa yang dapat menyebabkan kerusakan hati dibedakan menjadi : a. Hepatotoksin teramalkan Senyawa yang bila diberikan dapat mempengaruhi sebagian besar orang yang menelan senyawa tersebut dalam jumlah yang cukup untuk menimbulkan efek toksik. Hepatotoksin ini bergantung pada dosis pemberian (Forrest, 2006). Contoh hepatotoksin teramalkan yang dapat menimbulkan kerusakan nekrosis hepatoseluler

adalah

racun

jamur

(Amanita

phalloides),

aflatoksin,


12

karbontetraklorida, kloroform, parasetamol, dan lain sebagainya (Chandrasoma dan Taylor, 1995). b. Hepatotoksin tak teramalkan Senyawa yang tidak bersifat toksik pada hati tetapi bila diberikan kepada orang tertentu dapat menimbulkan efek toksik. Hepatotoksin ini tidak bergantung pada dosis pemberian (Forrest, 2006).

4. ALT dan AST Kerusakan hepatoseluler dapat dideteksi dengan mengukur indeks fungsional dan dengan mengamati produk hepatosit yang rusak atau nekrotik. Uji enzim sering menjadi satu-satunya petunjuk adanya cedera sel pada penyakit hati dini karena perubahan ringan kapasitas ekskretorik mungkin tersamar akibat kompensasi dari bagian hati lain yang masih fungsional (Sacher dan McPherson, 2002). Dua enzim yang sering berkaitan dengan kerusakan hepatoseluler adalah aminotransferase. Aminotransferase mengkatalisis pemindahan reversibel satu gugus amino antara asam amino dan sebuah asam alfa-keto, yang berfungsi dalam pembentukan asam-asam amino yang dibutuhkan untuk penyusunan protein di hati. Alanine Aminotransferase (ALT) berfungsi memindahkan satu gugus amino antara alanin dan asam alfa-ketoglutamat. Aspartate Aminotransferase (AST) berfungsi memerantai reaksi antara asam aspartat dan asam alfa-ketoglutamat (Sacher dan McPherson, 2002).


13

Sebagian besar AST terdapat di hati dan otot rangka, serta tersebar ke seluruh jaringan. Meskipun enzim ALT terdapat pula pada beberapa bagian jaringan, konsentrasi terbesarnya pada semua spesies adalah di hati sehingga ALT merupakan petunjuk yang lebih spesifik terhadap nekrosis hati daripada AST (Zimmerman, 1999). Transaminase ini sebagai nilai indeks kemungkinan kerusakan hati, dalam mendeteksi adanya toksisitas pada hati atau perubahan dalam membran sel hati (Edem dan Akpanabiatu, 2006). Angka hasil pemeriksaan aktivitas AST dibagi aktivitas ALT pada sampel serum disebut rasio de Ritis. Rasio ini digunakan untuk membedakan berbagai penyakit dengan AST maupun ALT-nya. ALT lebih cepat dibebaskan dari hepatosit ke dalam darah secara akut, sedangkan AST dibebaskan lebih besar pada gangguan kronis (Sacher dan McPherson, 2002).

B. Karbon Tetraklorida

Gambar 2. Struktur molekul karbon tetraklorida (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995)

Karbon tetraklorida (Gambar 2.) adalah suatu cairan jernih yang mudah menguap, tidak berwarna, dan dengan bau khas, BM 153,82 dan sangat sukar larut dalam air (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995). Karbon


14

tetraklorida merupakan cairan yang sangat larut dalam lemak dan apabila masuk tubuh baik melalui saluran pernapasan, pencernaan ataupun intravena maka akan didistribusikan secara luas ke seluruh tubuh (Wahyuni, 2005). Penggunaan senyawa ini antara lain untuk sintesis senyawa organik terklorinasi, pembuatan cairan pendingin, sebagai fumigan pertanian, aplikasi laboratorium (U.S. EPA, 2010). Karbon tetraklorida merupakan molekul sederhana, yang jika diberikan kepada berbagai spesies, menyebabkan nekrosis sentrilobular hepatik dan perlemakan di hati. Pemberian atau pemejanan secara kronis menyebabkan sirosis hati, tumor hati dan juga kerusakan ginjal. Hati menjadi target utama dari ketoksikan karbon tetraklorida karena ketoksikan senyawa ini tergantung pada metabolisme aktivasi oleh sitokrom P-450 (CYP2E1). Dosis rendah karbon tetraklorida hanya menyebabkan perlemakan hati dan destruksi sitokrom P-450 (Timbrell, 2008). Penghancuran sitokrom P-450 terjadi terutama di sentrilobular dan daerah tengah hati. Senyawa ini selektif untuk isoenzim tertentu, pada tikus diketahui selektif untuk CYP2E1, sedangkan pada isoenzim lain seperti CYP1A1 tidak terpengaruh. Penghancuran CYP2E1 dipengaruhi oleh jumlah oksigen yang tersedia, yang mana menjadi lebih besar ketika lebih banyak oksigen tersedia (Timbrell, 2008).


15

Gambar 3. Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida (Timbrell, 2008)

Sebagai enzim mikrosomal CYP2E1 akan mempengaruhi aktivasi metabolit dari senyawa yang terbentuk, hal ini dapat

meningkatkan atau

mengurangi sifat toksik dari senyawa induk. Dalam hal ini CYP2E1 berfungsi sebagai agen pereduksi dan mengkatalis adisi elekron dan mengakibatkan hilangnya satu ion klorin sehingga membentuk radikal bebas triklorometil (•CCl3) (Gambar 3.) yang merupakan metabolit reaktif. Radikal bebas triklorometil ini jika dengan adanya O2 (oksigen) akan berubah menjadi radikal bebas triklorometilperoksi (•OOCCl3) yang lebih reaktif (Gambar 3.) (Gregus dan Klaaseen, 2001). Radikal triklorometil yang dihasilkan dapat mengalami salah satu dari beberapa reaksi. Senyawa reaktif tersebut merusak sekitar dari sitokrom P-450, termasuk enzim itu sendiri dan retikulum endoplasma. Dengan demikian, radikal


16

bebas triklorometil berikatan secara kovalen dengan lemak mikrosomal dan protein, dan akan bereaksi secara langsung dengan membran fosfolipid dan kolesterol yang bersifat toksik. Reaksi ini juga akan menghasilkan kloroform, yang merupakan salah satu metabolit dari karbon tetraklorida. Hasil lain dari reaksi ini adalah radikal lipid yang akan mengaktifkan senyawa oksigen reaktif selanjutnya mengakibatkan peroksidasi lipid (Gambar 3.) (Timbrell, 2008). Pembentukan peroksidasi lipid hasil dari pemecahan lemak tak jenuh dapat

memberikan

senyawa

karbonil

seperti

4-hydroxyalkenal

dan

hydroxynonenal lainnya. Senyawa-senyawa tersebut diketahui memiliki efek biokimia, seperti menghambat sintesis protein dan menghambat enzim glukosa-6phophatase (Timbrell, 2008). Setelah pemejanan karbon tetraklorida selama satu sampai tiga jam, trigliserida menumpuk di hepatosit dan terlihat sebagai droplet lipid. Lipid dalam hati yang terbentuk ini dapat menghambat sintesis protein sehingga menurunkan produksi lipoprotein, yang mana lipoprotein ini bertanggung jawab dalam transport lipid untuk keluar dari hepatosit. Akibat menurunnya produksi lipoprotein akan terhambat sehingga menyebabkan steatosis (Timbrell, 2008). Pada keadaan steatosis ini, struktur retikulum endoplasma mengalami distorsi, sintesa protein menjadi lambat, selanjutnya akan terjadi penyimpangan dengan cepat terhadap aktivitas enzim yang berada di retikulum endoplasma (Wahyuni, 2005). Menurut penelitian Lettéron, Labbe, Degott, Berson, Fromenty, Delaforge, dkk (1990) pada pemberian silymarin 800mg/kg i.p selama dua jam memberikan penurunan sebesar 40% perlemakan hati pada tikus akibat ikatan kovalen dengan metabolit karbon tetraklorida.


17

Proses peroksidasi lipid juga dapat menghasilkan produk yang dapat menyebarkan kerusakan membran sel dan kerusakan mitokondria (Timbrell, 2008). Kerusakan ini berupa gangguan integritas membran yang menyebabkan keluarnya berbagai isi sitoplasma, antara lain enzim ALT. Enzim ALT yang ada di dalam sel hati akan keluar dan masuk ke dalam peredaran darah sehingga jumlah enzim ALT dalam darah meningkat (Wahyuni, 2005). Berdasarkan Zimmerman (1999) terdapat peningkatan serum enzim yang berbeda untuk toksikan yang berbeda (Tabel. I). Tabel. I Peningkatan relatif dari beberapa serum enzim pada cedera hati Degree of increase in serum enzyme levels

Lesion Toxicant CCl4 Thioacetamide Tetracycline Ethionine Phosphorous

Zona necrosis + + ±

steatosis

AST

ALT

OCT,SDH

+ + + +

4+ 4+ 2 + 1-2+

3+ 3+ + 1-2+

4+ 4+ 1+ + 1-2+

Menurut penelitian Madhavan, Murali, Yoganarsimhan, dan Pandey (2009) dilaporkan peningkatan nilai ALT hingga tiga kali lipat dari nilai normal pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Pada penelitian yang dilakukan oleh Yadav, Kumar, Singh, Sharma, dan Sutar (2011) juga menunjukkan adanya kenaikan nilai ALT hingga tiga kali lipat pada tikus yang diinduksi karbon tetraklorida. Tubuh sebenarnya mempunyai sistem pertahanan untuk mengatasi radikal bebas, salah satunya adalah glutation-S-transferase (GST) sebagai antioksidan endogen. Jika terdapat radikal bebas di dalam tubuh senyawa ini akan menangkap radikal bebas tersebut (Timbrell, 2008).


18

C. Metode Pengujian Hepatoprotektif Beberapa uji penting yang dapat dilakukan untuk mengevaluasi terjadinya kerusakan hati, dikategorikan menjadi tes enzim serum, tes ekskretori hepatik, perubahan kandungan kimia hati, dan analisis histologik kerusakan hati (Plaa dan Charbonneau, 2001). 1.

Tes enzim serum Untuk mengidentifikasi kerusakan hati, dapat digunakan empat kategori

enzim serum didasarkan spesifikasi dan sensitivitas berbagai tipe kerusakan hati. Kategori pertama adalah alkalinfosfatase, 5’-nukleotidase (5’NT), dan gammaglutamiltranspeptidase (ߛ-GT). Kenaikan aktivitas enzim-enzim serum tersebut menunjukkan kerusakan kolestatik. Enzim yang tidak spesifik dan dapat menunjukkan

kerusakan

jaringan

ekstrahepatik

misalnya

Aspartate

Aminotransferase (AST) dan laktat dehidrogenase (LDH) (Plaa dan Charbonneau, 2001). Penentuan ALT dan AST adalah cara paling umum untuk mendeteksi kerusakan hati, enzim mengalami peningkatan beberapa kali lipat dalam 24 jam pertama setelah kerusakan (Timbrell, 2008). 2.

Tes ekskretori hepatik Zat kimia yang memasuki sirkulasi sistemik dapat diekskresikan oleh hati

dalam bentuk tidak berubah atau diubah didalam hepatosit. Senyawa seperti bilirubin dan xenobiotika lainnya digunakan untuk mendeteksi dan menentukan kerusakan hepatik (Plaa dan Charbonneau, 2001).


3.

19

Perubahan kandungan kimia hati Zat hepatotoksik dapat menyebabkan perubahan struktural dan fungsional

hepatik berguna untuk mendeteksi dan menetapkan besarnya tingkat kerusakan hati yang terjadi. Perubahan efek farmakologis obat dapat digunakan untuk mendeteksi dan menentukan disfungsi hati (Plaa dan Charbonneau, 2001). 4.

Analisis histologik kerusakan hati Analisis potensi hepatotoksik zat kimia tidak lengkap tanpa deskripsi

histologi kerusakan yang dihasilkan. Ciri-ciri kerusakan hati ditentukan dengan pengamatan mikroskopik cahaya (Plaa dan Charbonneau, 2001).

D. Macaranga tanarius L. 1.

Sinonim Macaranga molliuscula Kurz., Macaranga tomentosa Druce, dan Mappa

tanarius Blume (World Agroforestry Centre, 2002). 2.

Nama lain a. Inggris

: hairy mahang

b. Filipina

: binunga, himindan, kuyonon

c. Indonesia

: hanuwa, mapu, mara, tutup ancur

d. Malaysia

: ka-lo, kundoh, mahang puteh, tampu

e. Thailand

: hu chang lek, ka-lo, lo khao, mek, paang

f. Vietnam

: hach dâu nam (World Agroforestry Centre, 2002).


3.

20

Taksonomi Kingdom

: Plantae

Subkingdom

: Tracheobionta (tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi

: Spermatophyta (menghasilkan biji)

Divisi

: Magnoliophyta (tumbuhan berbunga)

Kelas

: Magnoliopsida (berkeping dua/dikotil)

Sub Kelas

: Rosidae

Ordo

: Euphorbiales

Famili

: Euphorbiaceae

Genus

: Macaranga

Spesies

: Macaranga tanarius L. (Plantamor, 2008).

4.

Penyebaran Tanaman Macaranga tanarius banyak ditemukan tumbuh di daerah tropis

terutama di daerah hutan hujan tropis. Tanaman ini banyak ditemukan di banyak negara antara lain : Australia, Brunei, Kamboja, China, Indonesia, Vietnam, Jepang, Laos, Malaysia, Myanmar, Papua Nugini, Filipina, Taiwan, dan Thailand (World Agroforestry Centre, 2002). 5.

Morfologi Macaranga tanarius merupakan tanaman pohon yang tingginya dapat

mencapai 20 meter. Cabang pada pohon agak tebal dan berwarna hijau keabuabuan. Daun berwarna hijau dengan bentuk jantung dan pangkalnya berbentuk bulat, ukuran daun berkisar 8-32 x 5-28 cm dan panjang tangkai daun 6-27 cm.


21

Perbungaan terjadi di ketiak daun, bunga jantan dapat terdiri dari benang sari, sedangkan bunga betina dapat terdiri dari dua sel ovary. Buah berbentuk kapsul biccocus dengan panjang 1 cm, berwarna kekuningan, terletak di luar kelenjar. Biji berbentuk bulat dengan ukuran 5 mm, dan berkerut (World Agroforestry Centre, 2002).

6.

Kandungan Hasil identifikasi dari daun M. tanarius dilaporkan adanya tiga kandungan

baru yang ditemukan pada daun M. tanarius yaitu tanarifuranonol, tanariflavanon C, dan tanariflavanon D bersama dengan tujuh kandungan yang telah diketahui yaitu nimfaeol A, nimfaeol B, nimfaeol C, tanariflavanon B, blumenol A (vomifoliol), blumenol B (7,8 dihidrovomifoliol, dan annuionone). Ekstrak nheksan dan kloroform dari daun M. tanarius mempunyai aktivitas antioksidan terhadap DPPH

(Phommart dkk, 2005). Matsunami, dkk (2006) melaporkan

adanya senyawa glikosida yaitu macarangioside A, B, C, D, mallophenol B, lauroside E, methyl brevifolin carboxylate, hyperin, dan isoquercitrin yang diisolasi dari ekstrak metanol M. tanarius. Pada penelitian Matsunami, dkk (2009) menyebutkan adanya kandungan lignan glukosida, pinoresinol, dan dua megastigman glukosida yaitu macarangioside E dan F, serta 15 komponen lain yang telah diketahui dilaporkan terdapat pada daun M. tanarius menunjukkan aktivitas penangkapan radikal terhadap DPPH. (Gambar 4) merupakan struktur senyawa yang terkandung dalam daun M. tanarius.


Gambar. 4 Struktur senyawa dalam daun M. tanarius (Phommart dkk., 2005) dan (Matsunami dkk., 2006)

22


7.

23

Khasiat dan kegunaan Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Phommart dkk., (2005),

dekok akar M. tanarius sudah digunakan di Thailand sebagai antipiretik dan antitusif, akar kering digunakan sebagai agen emetik, dan daun segarnya dapat digunakan sebagai antiinflamasi. Adanya kandungan nimfaeol B pada daun M. tanarius dapat menghambat COX-2. Pada penelitian yang dilakukan Lim, dkk (2009), dilaporkan bahwa di Cina tanaman Macaranga ini menjadi tumbuhan yang komersil, karena dapat dijadikan sebagai produk minuman kesehatan. Menurut penelitian Puteri dan Kawabata (2010), pada ekstrak EtOAc daun M. tanarius dilaporkan adanya kandungan lima ellagitannin yaitu mallotinic acid, chebulagic acid, corilagin, macatannin A dan B. Kelima zat ini dilaporkan mempunyai aktivitas menghambat α-glukosidase yang berpotensi sebagai antidiabetik.

E. Infusa Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan cara mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 900C selama 15 menit. Pembuatan infus merupakan cara yang paling sederhana untuk membuat sediaan herbal dari bahan lunak seperti daun dan bunga. Dapat diminum panas atau dingin. Sediaan herbal yang mengandung minyak atsiri akan berkurang khasiatnya apabila tidak menggunakan penutup pada pembuatan infus (Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2010).


24

F. Landasan Teori Hati mempunyai fungsi utama yaitu sebagai pusat metabolisme. Sel-sel hati mendapat suplai darah dari vena portae hepatis yang kaya makanan, tidak mengandung oksigen, dan kadang-kadang toksik, serta dari arteria hepatika yang mengandung oksigen. Karena memiliki sistem peredaran darah yang tidak biasa ini, sel hati mendapat darah yang relatif kurang oksigen dan menyebabkan sel hati lebih rentan terhadap kerusakan dan penyakit (Wibowo dan Paryana, 2009). Kerusakan hepatoseluler dapat dideteksi dengan uji enzim. Enzim yang berkaitan dengan kerusakan hepatoseluler adalah ALT dan AST serum (Sacher dan McPherson, 2002). Karbon

tetraklorida

merupakan

molekul

sederhana,

yang

dapat

menyebabkan nekrosis sentrilobular hepatik dan perlemakan di hati. Hati menjadi target utama dari ketoksikan karbon tetraklorida karena ketoksikan senyawa ini tergantung pada metabolisme aktivasi oleh sitokrom P-450 (CYP2E1) (Timbrell, 2008). CYP2E1 berfungsi sebagai agen pereduksi dan mengkatalis adisi elekron dan mengakibatkan hilangnya satu ion klorin sehingga membentuk radikal bebas triklorometil (•CCl3) (Gregus dan Klaaseen, 2001). Reaksi radikal bebas triklorometil ini dapat mengaktifkan senyawa oksigen reaktif yang selanjutnya akan mengakibatkan peroksidasi lipid. Peroksidasi lipid dapat menyebabkan gangguan integritas membran dengan keluarnya berbagai isi sitoplasma antara lain ALT serum, sehingga ALT serum dalam darah meningkat. Proses peroksidasi lipid juga mengakibatkan terjadinya perlemakan hati (steatosis) karena adanya kerusakan keluarnya lemak dari hati


25

yang disebabkan karena hambatan sintesis lipoprotein yang membawa trigliserida meninggalkan hati (Wahyuni, 2005). Menurut penelitian Lettéron, Labbe, Degott, Berson, Fromenty, Delaforge, dkk (1990) pada pemberian silymarin 800mg/kg i.p selama dua jam memberikan penurunan sebesar 40% perlemakan hati pada tikus akibat ikatan kovalen dengan metabolit karbon tetraklorida. Senyawa glikosida yang diisolasi dari ekstrak metanol daun M. tanarius yaitu macarangioside A, B, C dan mallophenol B, mempunyai potensi dalam penangkapan radikal terhadap DPPH (Matsunami, 2006). Adanya senyawa glikosida yang memiliki potensi dalam penangkapan radikal bebas, dimungkinkan dapat menangkap radikal bebas seperti triklorometil (•CCl3) sehingga menghindari terjadinya steatosis pada sel hati. Penelitian terdahulu yang dilakukan oleh Nugraha dan Hendra (2011) melaporkan bahwa pemberian infusa daun M. tanarius dosis 5g/kgBB secara akut selama 1 jam dapat memberikan efek hepatoprotektif pada tikus terinduksi parasetamol. Penelitian ini dilakukan secara akut untuk membandingkan pengaruh pemberian jangka panjang infusa daun M. tanarius 10g/kgBB pada tikus terinduksi karbon tetraklorida yang dilakukan oleh Nurcahyanti (2012) yang juga dilakukan secara bersama. Selain itu, juga ingin membuktikan apakah dengan pemberian infusa daun M. tanarius secara langsung dapat menurunkan aktivitas ALT-AST. G. Hipotesis Waktu protektif pemberian infusa daun M. tanarius secara akut memiliki pengaruh terhadap penurunan kadar ALT-AST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.


BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah. B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional Variabel-variabel yang digunakan adalah sebagai berikut : 1. Variabel Utama a. Variabel bebas Lama pemberian infusa daun M. tanarius, yaitu variasi waktu pemberian infusa daun M. tanarius dengan dosis tertentu pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida b. Variabel tergantung Kadar ALT dan AST pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida setelah pemberian infusa daun M. tanarius secara akut. 2. Variabel Pengacau a. Variabel pengacau terkendali. Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini adalah kondisi hewan uji, yaitu tikus galur Wistar dengan jenis kelamin jantan, berat badan 150-250 g, dan umur 2-3 bulan, frekuensi pemberian infusa daun M. tanarius, yaitu secara berturut-turut selama ½, 1, 2, 4, dan 6 jam, cara pemberian hepatotoksin secara intraperitonial, cara pemberian infusa secara

26


27

per oral, bahan uji yang digunakan berupa daun M. tanarius, yang diperoleh dari Kebun Obat Fakultas Farmasi Sanata Dharma b. Variabel pengacau tak terkendali. Variabel pengacau tak terkendali dalam penelitian ini adalah keadaan patologis dan fisiologis hewan uji 3. Definisi Operasional a. Daun M. tanarius Daun yang diambil dari tanaman M. tanarius adalah yang berwarna hijau, segar, tidak bercacat, dan dipanen pada saat tanaman sedang berbunga. b. Infusa daun M. tanarius Infusa didapatkan dengan cara menginfundasi 100,0 g serbuk kering daun M. tanarius dalam 300,0 ml air pada suhu 900C selama 15 menit sehingga diperoleh konsentrasi infusa daun M. tanarius 100%. c. Pengaruh waktu protektif pemberian infusa M. tanarius Merupakan kemampuan infusa daun M. tanarius dosis tertentu yang diberikan dalam waktu tertentu secara akut yang melindungi hati dengan cara menurunkan kadar ALT-AST pada tikus Wistar terinduksi karbon tetraklorida. d. Akut Penelitian dilakukan secara berturut-turut dengan selang waktu ½, 1, 2, 4, dan 6 jam.


28

C. Bahan Penelitian 1. Bahan utama a. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini yaitu tikus jantan galur Wistar dengan umur 2-3 bulan dan berat badan 150-250 g yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. b. Bahan uji yang digunakan adalah daun M. tanarius yang diperoleh dari Kebun Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2. Bahan kimia a. Bahan hepatotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. b. Kontrol negatif berupa olive oil (Bertolli) c. Pelarut untuk infusa dengan aquadest yang diperoleh dari Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. d. Blanko pengujian ALT dan AST menggunakan aqua bidestilata yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis dan Instrumental Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. e. Kontrol serum Cobas (PreciKontrol ClimChem Multi 1) Roche/ Hitachi Analyzer. f. Reagen ALT


29

Reagen serum yang digunakan adalah reagen ALT dyasis. Komposisi dan konsentrasi dari reagen ALT adalah sebagai berikut. Komposisi R1 :

TRIS

pH 7,15

L-Alanine

140 mmol/L 700 mmol/L ≥ 2300 U/L

LDH (lactate dehydrogenase) R2 :

Konsentrasi

2-Oxoglutarate

85 mmol/L

NADH

1 mmol/L

Pyridoxal-5 phosphate FS : Good’s buffer

pH 9,6

Pyridoxal-5-phosphate

100 mmol/L 13 mmol/L

g. Reagen AST Reagen serum yang digunakan adalah reagen ALT dyasis. Komposisi dan konsentrasi dari reagen AST adalah sebagai berikut. Komposisi R1 :

TRIS

pH 7,65

Konsentrasi 110 mmol/L

L – Aspartate

320 mmol/L

MDH (malate dehydrogenase)

≥ 800 U/L

LDH (lactate dehydrogenase)

≥ 1200 U/L

R2 :

2-Oxoglutarate

65 mmol/L

NADH

1 mmol/L

Pyridoxal-5 phosphate FS : Good’s buffer Pyridoxal-5-phosphate

pH 9,6

100 mmol/L 13 mmol/L


30

D. Alat Penelitian 1. Alat pembuatan serbuk kering daun M. tanarius Oven, mesin penyerbuk, timbangan analitik, ayakan. 2. Alat pembuatan infusa daun M. tanarius Panci lapis aluminium, termometer, stopwatch, Beker glass, gelas ukur, cawan porselen, batang pengaduk, penangas air, timbangan analitik, kain flannel, waterbath. 3. Alat uji kadar ALT-AST Peralatan gelas, seperti Beker glass, labu ukur, batang pengaduk, gelas ukur, tabung reaksi, timbangan analitik, spuit injeksi per oral untuk tikus, spuit injeksi intraperitonial, pipa kapiler, mikro-vitalab 200, stopwatch, vortex, sentrifuge, Eppendorf.

E. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi daun M. tanarius Determinasi daun M. tanarius dilakukan dengan cara mencocokkan ciriciri tanaman daun M. tanarius dengan menggunakan buku acuan determinasi (Backer dan Bakhuizen van den Brink, 1963) hingga ke tingkat spesies dan disesuaikan dengan kunci determinasinya. Determinasi dilakukan oleh Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si. dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.


31

2. Pengumpulan bahan uji Bahan uji yang digunakan pada penelitian ini adalah daun M. tanarius. Daun yang dipilih adalah daun yang masih segar dan berwarna hijau. Daun diperoleh dari Kebun Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, yang dipanen pada bulan Mei 2012. 3. Pembuatan serbuk kering daun M. tanarius Daun M. tanarius yang telah dipetik dicuci dengan air mengalir dan diangin-anginkan hingga kering. Pengoptimalan pengeringan dilakukan dengan menggunakan oven pada suhu 500C selama 24 jam. Daun yang telah kering kemudian diserbuk dengan alat penyerbuk. Setelah didapatkan serbuk kasar daun, dilakukan pengayakan dengan ayakan no.40 untuk mendapatkan serbuk daun M. tanarius yang lebih halus. 4. Penetapan kadar air serbuk kering daun M. tanarius Serbuk kering daun M. tanarius yang sudah terayak, dimasukkan ke dalam alat moisture balance ± 5 g kemudian diratakan. Bobot serbuk kering daun tersebut ditimbang sebagai bobot sebelum pemanasan (bobot A), setelah itu dipanaskan pada suhu 1100C. Serbuk kering daun M. tanarius yang sudah dipanaskan ditimbang kembali dan dihitung sebagai bobot setelah pemanasan (bobot B). Kemudian dilakukan perhitungan terhadap selisih bobot A dan bobot B yang merupakan kadar air serbuk daun M. tanarius. 5. Pembuatan infusa daun M. tanarius Serbuk kering daun M. tanarius ditimbang 100,0 g. Serbuk kering tersebut dimasukkan dan dicampur ke dalam 100,0 ml pelarut aquadest dan dua kali


32

jumlah serbuk yang ditimbang, sehingga aquadest yang digunakan adalah 300,0 ml pada suhu 900C dan dijaga tetap dalam suhu tersebut selama 15 menit. Waktu 15 menit dihitung ketika suhu campuran mencapai 900C. Setelah 15 menit, campuran tersebut diambil dan diperas kemudian diuapkan di atas waterbath hingga didapatkan 100,0 g infusa daun M. tanarius. 6. Pembuatan larutan karbon tetraklorida konsentrasi 50% Berdasarkan penelitian Janakat dan Merie (2002), larutan karbon tetraklorida dibuat dalam konsentrasi 50% dimana perbandingan volume karbon tetraklorida dan pelarut adalah 1:1. Larutan karbon tetraklorida dibuat dengan cara dilarutkan dengan volume yang sama dengan olive oil. 7. Uji pendahuluan a. Penetapan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida Penetapan dosis hepatotoksik ini dengan melakukan studi literatur. Dosis hepatotoksin karbon tetraklorida yang digunakan untuk menginduksi kerusakan hati tikus jantan galur Wistar berdasarkan penelitian Janakat dan Merie (2002) adalah 2 ml/kg BB. Pemilihan dosis hepatotoksik ini karena pada dosis tersebut dapat menyebabkan kerusakan sel-sel hati pada tikus jantan yang ditunjukkan dengan peningkatan ALT dan AST, tetapi tidak menyebabkan kematian pada tikus jantan. b. Penetapan waktu pencuplikan darah Untuk mendapatkan waktu pencuplikan darah dilakukan orientasi dengan tiga kelompok perlakuan waktu. Setiap kelompok terdiri dari 5 ekor tikus. Pengambilan darah dilakukan melalui sinus orbitalis mata. Kelompok I-III


33

diambil darah masing-masing pada jam ke-0, 24, dan 48 setelah pemejanan karbon tetraklorida. Kemudian diukur aktivitas ALT dan AST. Penelitian terdahulu menunjukkan bahwa aktivitas ALT tikus terangsang karbon tetraklorida yang dilarutkan dalam olive oil volume (1:1) dengan dosis 2ml/kg BB mencapai maksimal pada jam ke-24 setelah pemberiannya, kemudian pada jam ke-48 berangsur-angsur menurun (Janakat dan Merie, 2002). 8. Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji Hewan uji yang dibutuhkan sebanyak 40 ekor tikus jantan yang dibagi secara acak dalam 8 kelompok sama banyak. Kelompok I (kontrol hepatotoksin) diberi karbon tetraklorida yang dilarutkan dalam olive oil volume (1:1) dengan dosis 2 ml/kg BB secara intraperitonial. Kelompok II (kontrol negatif) diberi olive oil dosis 2 ml/kg BB secara intraperitonial. Kelompok III (kontrol infusa) diberi infusa M. tanarius dosis 10 g/kg BB yang diberikan selama 6 jam kemudian diambil darahnya. Kelompok IV-VIII (kelompok perlakuan) diberi infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kg BB, kemudian secara berturut-turut pada jam ke ½, 1, 2, 4, dan 6 setelah pemberian infusa diberikan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kg BB. Pada jam ke-24 setelah pemberian karbon tetraklorida, semua kelompok diambil darahnya pada daerah sinus orbitalis mata untuk penetapan aktivitas ALT dan AST. 9. Pembuatan serum Darah diambil melalui sinus orbitalis mata tikus dan ditampung dalam tabung Eppendorf dan didiamkan selama 15 menit, setelah itu disentrifugasi dengan kecepatan 3500 rpm selama 15 menit dan diambil supernatannya (serum).


34

10. Pengukuran aktivitas ALT dan AST Alat yang digunakan untuk pengukuran aktivitas ALT dan AST adalah micro-vitalab 200. Sebelum melakukan pengukuran sampel, alat divalidasi dengan menggunakan kontrol serum Cobas. Kisaran nilai ALT dan AST kontrol serum Cobas adalah 33,9-48,9 U/L. Analisis fotometri ALT dilakukan dengan cara sebagai berikut, 100 µl serum dicampur dengan 800 µl reagen I, setelah itu dicampur dengan 200 µl reagen II, dan dibaca serapan setelah tiga menit. Untuk analisis fotometri dengan AST dilakukan sebagai berikut, 100 µl serum dicampur dengan 800 µl reagen I, kemudian dicampurkan 200 µl reagen II, dan dibaca resapan setelah tiga menit. Aktivitas ALT dan AST dinyatakan dalam U/L. Aktivitas enzim diukur pada panjang gelombang 340 nm, suhu 370C, dengan faktor koreksi -1745. Pengukuran aktivitas ALT dan AST ini dilakukan di Laboratorium Biokimia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

F. Tata Cara Analisis Hasil Data aktivitas ALT dan AST yang diperoleh dianalisis dengan uji Kolmogorov Smirnov untuk melihat distribusi data tiap kelompok. Apabila didapat distribusi data yang normal maka analisis dilanjutkan dengan analisis pola searah (One Way ANOVA) dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelompok. Kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk melihat perbedaan masing-masing antar kelompok bermakna (signifikan) (p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan) (p>0,05). Namun bila didapatkan


35

distribusi tidak normal, maka dilakukan analisis dengan uji Kruskal Wallis untuk mengetahui perbedaan aktivitas ALT dan AST antar kelompok. Setelah itu dilanjutkan dengan uji

Mann Whitney untuk mengetahui perbedaan tiap

kelompok. Perhitungan persen efek hepatoprotektif terhadap hepatotoksin karbon tetraklorida diperoleh dengan rumus sebagai berikut. ୮୳୰ୟ୲ୟ ୅୐୘/୅ୗ୘ ୩୭୬୲୰୭୪୩ୟ୰ୠ୭୬ ୲ୣ୲୰ୟ୩୪୭୰୧ୢୟି ୮୳୰ୟ୲ୟ ୅୐୘/୅ୗ୘ ୮ୣ୰୪ୟ୩୳ୟ୬ ୮୳୰ୟ୲ୟ ୅୐୘/୅ୗ୘ ୩୭୬୲୰୭୪୩ୟ୰ୠ୭୬ ୲ୣ୲୰ୟ୩୪୭୰୧ୢୟ

‫ݔ‬100 %


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN A. Penyiapan Bahan 1.

Hasil determinasi tanaman Pada penelitian ini digunakan serbuk daun M. tanarius sebagai bahan uji.

Tujuan dari determinasi tanaman adalah untuk membuktikan bahwa bagian dari tanaman yang digunakan benar berasal dari tanaman M. tanarius, sehingga tidak terjadi kesalahan dalam penyiapan bahan yang digunakan. Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Farmakognosi Fitokimia, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. Determinasi tanaman ini dilakukan dengan cara mencocokkan ciri-ciri tanaman dari batang, daun, bunga, buah dengan buku acuan (Backer dan Bakhuizen van den Brink, 1963) hingga ke tingkat spesies. Hasil dari determinasi membuktikan bahwa tanaman tersebut benar Macaranga tanarius L. 2.

Penetapan kadar air serbuk kering daun M. tanarius Penetapan kadar air bertujuan untuk mengetahui kandungan air dalam

serbuk daun M. tanarius, sehingga dapat diketahui serbuk daun M. tanarius memenuhi persyaratan serbuk yang baik atau tidak. Syarat serbuk yang baik memiliki kadar air kurang dari 10% (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995). Penetapan kadar air dilakukan dengan metode Gravimetri dengan menggunakan alat moisture balance. Serbuk dipanaskan di dalam alat pada suhu 1100C selama 15 menit, setelah itu dilakukan perhitungan terhadap kadar air yang diteliti. Hasil perhitungan menunjukkan bahwa serbuk daun M. tanarius memiliki kadar air 7,59%. Hal ini menyatakan bahwa serbuk daun M.

57


37

tanarius memenuhi persyaratan serbuk yang baik, yaitu dengan kadar air kurang dari 10% (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995).

B. Uji Pendahuluan 1.

Penentuan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida Pada penelitian ini digunakan karbon tetraklorida sebagai hepatotoksin.

Tujuan dari penentuan dosis karbon tetraklorida adalah untuk mengetahui pada dosis berapa karbon tetraklorida dapat menyebabkan kerusakan hati pada tikus yang ditunjukkan dengan peningkatan ALT dan AST tertinggi. Dosis rendah karbon tetraklorida hanya menyebabkan kerusakan ringan berupa perlemakan hati (Timbrell, 2008). Pada penyakit hati yang ringan, peningkatan ALT ditemukan setinggi 50-200 unit (Wahyuni, 2005). Pada penelitian ini digunakan dosis dari penelitian Janakat dan Merie (2002), yaitu 2 ml/kg BB, yang mana pada dosis ini sudah dapat menimbulkan efek hepatotoksik. 2.

Penentuan waktu pencuplikan darah hewan uji Tujuan dari penentuan waktu pencuplikan darah adalah untuk mengetahui

kehepatotoksikan karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB mencapai maksimal. Hal ini ditunjukkan dengan peningkatan ALT dan AST tertinggi pada waktu tertentu. Karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB diujikan pada tikus jantan, kemudian dilakukan pencuplikan darah melalui sinus orbitalis mata dengan selang waktu tertentu yaitu jam ke-0, 24, dan 48. Hasil uji ini berupa aktivitas ALT yang tersaji pada Tabel. II, III dan Gambar. 5 serta aktivitas AST yang tersaji pada Tabel. IV dan Gambar 6.


38

Tabel. II Rata-rata aktivitas ALT tikus setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada pencuplikan darah jam ke-0, jam ke-24, dan jam ke-48

Waktu pencuplikan jam ke-

Jumlah hewan uji (ekor)

0 24 48

5 5 5

Purata aktivitas ALT ± SE (U/L) 73,2 ± 12,9 246,4 ± 17,0 102,0 ± 14,6

Gambar 5. Diagram batang orientasi aktivitas ALT tikus setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada pencuplikan darah jam ke-0, jam ke-24, dan jam ke-48

Hasil dari analisis pola searah (One Way ANOVA) dari data ALT tikus setelah terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB, diketahui memiliki signifikansi 0,749 (p>0,05). Hal ini menunjukkan bahwa data homogen, sehingga dapat dilanjutkan ke uji Scheffe. Dengan menggunakan uji Scheffe, dapat diketahui kebermaknaan perbedaan antar kelompok. Data tersaji pada Tabel II.


39

Tabel. III Hasil uji Scheffe aktivitas ALT tikus setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada pencuplikan darah jam ke-0, jam ke-24, dan jam ke-48

Waktu pencuplikan Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48

Jam ke-0 B TB

Jam ke-24 B B

Jam ke-48 TB B -

Untuk data AST, dari hasil analisis dengan uji Kolmogorov Smirnov diperoleh signifikansi 0,031 (p<0,05). Hal ini menunjukkan bahwa data yang diperoleh memiliki distribusi tidak normal, sehingga dilanjutkan ke uji Kruskal Wallis. Hasil uji Kruskal Wallis diperoleh signifikansi 0,003 (p<0,05) yang menunjukkan bahwa terdapat perbedaan di antara ketiga kelompok. Selanjutnya dilakukan uji Mann Whitney, yang mana uji ini bertujuan untuk membandingkan kebermaknaan perbedaan antar kelompok. Apabila hasil data diperoleh signifikansi <0,05 menunjukkan berbeda bermakna. Data tersaji pada Gambar 6. dan Tabel. IV.

Gambar 6. Diagram batang orientasi aktivitas AST tikus setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada pencuplikan darah jam ke-0, jam ke-24, dan jam ke-48


40

Tabel. IV Hasil uji Mann Whitney aktivitas AST tikus setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB pada pencuplikan darah jam ke-0, jam ke-24, dan jam ke48

Waktu pencuplikan Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48

Jam ke-0 B

Jam ke-24 B B

Jam ke-48 B B -

Berdasarkan tabel II terlihat bahwa rata-rata aktivitas ALT tertinggi terjadi pada pencuplikan darah jam ke-24, yakni 246,4 ± 38,0 U/L dari nilai normal ALT yang dilaporkan Hastuti (2008), yakni 19,3-68,9 U/L. Pada jam ke-24 ini, kenaikan aktivitas ALT sudah sesuai dengan nilai kerusakan hati ringan, yaitu 50200 unit (Wahyuni, 2005). Hal ini juga didukung oleh data AST, pada Gambar 5. dan Gambar 6. terlihat peningkatan ALT dan AST yang signifikan pada jam ke24 dibanding pada jam ke-0 dan jam ke-48. Selain itu, dari Tabel. IV menunjukkan adanya perbedaan bermakna antar kelompok AST pada jam ke-0 dan ke-24 dan juga pada jam ke-0 dan ke-48. Pada Gambar 6. terlihat penurunan nilai AST pada jam ke-48. Hal ini menunjukkan bahwa karbon tetraklorida memiliki efek hepatotoksik maksimal pada jam ke-24. Oleh karena itu, berdasarkan hasil orientasi, pada penelitian ini digunakan waktu pencuplikan darah hewan uji jam ke-24 setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB.

C. Hasil Uji Waktu Protektif Pemberian Infusa Daun M. tanarius Secara Akut Pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida Tujuan dari penelitian ini adalah untuk membuktikan pengaruh waktu protektif pemberian infusa daun M. tanarius secara akut terhadap penurunan kadar ALT dan AST pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida. Dalam


41

penelitian ini dilakukan secara akut. Akut ini adalah selang waktu pemberian infusa daun M. tanarius yaitu ½, 1, 2, 4, dan 6 jam. Penetapan waktu secara akut ini didasarkan pada penelitian Nugraha dan Hendra (2011) yang mengikuti model pemberian infusa daun M. tanarius pada jam ke- ½, 1, 2, 4, dan 6, dan pada jam ke-48 setelah pemberian infusa diberi parasetamol dosis 2,5 g/kgBB. Penggunaan waktu pemberian secara akut ini dilakukan untuk membandingkan pengaruh pemberian infusa daun M. tanarius jangka panjang terhadap penurunan kadar ALT-AST. Dosis infusa daun M. tanarius yang digunakan pada penelitian ini adalah 10 g/kg BB. Pemilihan dosis ini didasarkan pada penelitian pemberian jangka panjang infusa daun M. tanarius pada tikus terinduksi karbon tetraklorida yang dilakukan oleh Nurcahyanti (2012). Dalam penelitian tersebut, pada infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kg BB memberikan rata-rata aktivitas penurunan ALT yang paling tinggi yaitu 103,2 U/L. Pencuplikan darah hewan uji dilakukan pada jam ke-24 setelah induksi karbon tetraklorida. Hasil penelitian ini berupa penurunan kadar ALT dan AST yang dinyatakan U/L dan disajikan dalam bentuk purata ± SE dalam tabel dan diagram batang berikut.


42

Tabel. V Pengaruh waktu protektif pemberian secara akut infusa daun M. tanarius terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat dari aktivitas ALT dan AST Aktivitas Kel.

I

II

III

IV

V

VI

VII

VIII

Perlakuan kontrol negatif olive oil 2 ml/kg BB kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 2ml/kg BB IMT 10 g/kg BB IMT 10 g/kg BB ½ jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB IMT 10 g/kg BB 1 jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB IMT 10 g/kg BB 2 jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB IMT 10 g/kg BB 4 jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB IMT 10 g/kg BB 6 jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB Ket. :

Efek hepatoprotektif (%)

Purata ± SE (U/L) ALT

Purata ± SE (U/L) AST

ALT

AST

82,2 ± 2,7

118,6 ± 5,1

-

-

246,4 ± 17,0

596,2 ± 25,3

0

0

65,6 ± 2,6

153,8 ± 6,6

-

-

152,4 ± 13,6

433,6 ± 28,3

38,1

27,27

151,6 ± 11,5

385,2 ± 26,8

38,5

35,39

99,2 ± 10,1

308,4 ± 27,6

59,7

48,27

130,6 ± 8,9

415,0 ± 23,4

47,0

30,39

159,0 ± 13,8

412,2 ± 31,1

35,5

30,86

IMT = Infusa Macaranga tanarius SE = Standar Error


43

Tabel. VI Hasil analisis statistik uji Scheffe dilihat dari kebermaknaan ALT antar kelompok

Kelompok Karbon tetraklorida Olive oil Infusa Macaranga tanarius Jam ke-1/2 Jam ke-1 Jam ke-2 Jam ke-4 Jam ke-6

Karbon tetraklorida

Olive oil

Infusa Macaranga tanarius

Jam ke-1/2

Jam ke-1

Jam ke-2

Jam ke-4

Jam ke-6

-

B

B

B

B

B

B

B

B

-

TB

B

B

TB

TB

B

B

TB

-

B

B

TB

B

B

B B B B B

B B TB TB B

B B TB B B

TB TB TB TB

TB TB TB TB

TB TB TB TB

TB TB TB TB

TB TB TB TB -

Ket : TB = berbeda tidak bermakna (p > 0,05)

B = berbeda bermakna (p < 0,05)

Gambar 7. Diagram batang rata-rata pengaruh waktu protektif pemberian infusa daun M. tanarius secara akut terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat dari aktivitas ALT


44

Tabel. VII Hasil analisis statistik uji Shceffe dilihat dari kebermaknaan AST antar kelompok

kelompok Karbon tetraklorida Olive oil Infusa Macaranga tanarius Jam ke-1/2 Jam ke-1 Jam ke-2 Jam ke-4 Jam ke-6

Karbon tetraklorida

Olive oil

Infusa Macaranga tanarius

Jam ke -½

Jam ke-1

Jam ke-2

Jam ke-4

Jam ke-6

-

B

B

B

B

B

B

B

B

-

TB

B

B

B

B

B

B

TB

-

B

B

B

B

B

B B B B B

B B B B B

B B B B B

TB TB TB TB

TB TB TB TB

TB TB TB TB

TB TB TB TB

TB TB TB TB -



Gambar 8. Diagram batang rata-rata pengaruh waktu protektif pemberian infusa daun M. tanarius secara akut terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat dari aktivitas AST


1.

45

Kontrol negatif (olive oil 2 ml/kgBB) Tujuan dari pengujian kelompok kontrol negatif adalah untuk memastikan

bahwa peningkatan aktivitas ALT-AST pada tikus adalah akibat pemberian hepatotoksin karbon tetraklorida dan bukan akibat pemberian pelarut yaitu olive oil. Dosis olive oil yang digunakan sama dengan dosis karbon tetraklorida, yakni 2 ml/kgBB. Hal ini dimaksudkan untuk mengetahui apakah dengan dosis yang sama, olive oil memberikan pengaruh terhadap kadar ALT-AST atau tidak, sehingga hasilnya dapat digunakan untuk perlakuan pada jam ke-1/2, 1, 2, 4, dan 6. Pada pengujian ini didapatkan nilai rata-rata ALT tikus, yaitu 82,2 ± 2,7 U/L (tersaji dalam Tabel. V). Tabel. VIII Perbandingan kontrol olive oil jam ke-0 dan jam ke-24 pada ALT dan AST tikus jantan

Kel

Perlakuan

I

Olive oil jam ke-0 Olive oil jam ke24

II

III IV

Olive oil jam ke-0 Olive oil jam ke24

Purata ± SE (U/L) 90,2 ± 4,9 82,2 ± 2,7

122,8 ± 5,7 118,6 ± 5,1


Perbandingan terhadap ALT Olive oil jam Olive oil jam ke-0 ke-24 TB TB

-

AST Olive oil jam Olive oil jam ke-0 ke-24 TB TB

-



46

Gambar 9. Diagram batang rata-rata perbandingan ALT kontrol olive oil jam ke-0 dan kontrol olive oil jam ke-24

Gambar 10. Diagram batang rata-rata perbandingan AST kontrol olive oil jam ke0 dan kontrol olive oil jam ke-24

Berdasarkan hasil pengukuran ALT yang tersaji pada Tabel. V dan Gambar 9. , terlihat rata-rata nilai ALT jam ke-0, yaitu sebelum pemberian olive oil adalah 90,2 ± 4,9 U/L. Rata-rata nilai ALT jam ke-24, yaitu setelah pemberian


47

olive oil adalah sebesar 82,2 ± 2,7 U/L. Secara statistik, hasil ini memberikan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) antara kelompok kontrol olive oil jam ke-0 dengan kelompok kontrol olive oil jam ke-24. Selain itu, juga dilakukan pengukuran terhadap aktivitas AST sebagai data pendukung. Melalui pengukuran tersebut, diperoleh rata-rata nilai AST jam ke-0 yaitu sebelum pemberian olive oil adalah 122,8 ± 57 U/L. Rata-rata nilai ALT jam ke-24 yaitu setelah pemberian olive oil adalah sebesar 118,6 ± 5,1 U/L (tersaji dalam Tabel. V). Hasil ini memberikan perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) antara kelompok kontrol olive oil jam ke-0 dengan kelompok kontrol olive oil jam ke-24. Hasil pengukuran terhadap aktivitas ALT dan AST, menunjukkan bahwa pemberian olive oil 2 ml/kgBB tidak memberikan peningkatan terhadap aktivitas ALT dan AST, artinya apabila terjadi peningkatan terhadap aktivitas ALT dan AST bukan karena penggunaan olive oil sebagai pelarut. Nilai ALT dan AST kelompok kontrol negatif ini akan dijadikan dasar nilai normal ALT dan AST penelitian selanjutnya. 2.

Kontrol hepatotoksin (karbon tetraklorida 2 ml/kgBB) Tujuan dari kontrol hepatotoksin adalah untuk mengetahui pengaruh

induksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB terhadap sel hati tikus yang ditunjukkan dengan peningkatan aktivitas ALT dan AST. Uji ini dilakukan dengan memejankan karbon tetraklorida 2 ml/kgBB pada tikus secara intraperitonial, kemudian pada jam ke-24 diambil darahnya untuk diukur aktivitas ALT dan AST. Hasil dari pengukuran ini terlihat pada tabel V, yaitu terjadi peningkatan aktivitas ALT hingga 246,4 U/L, yang memberikan perbedaan bermakna (p<0,05) terhadap


48

kelompok kontrol negatif olive oil. Hasil pengukuran ini menunjukkan terjadi kenaikan ALT sekitar tiga kalinya dari nilai rata-rata jam ke-0 ALT tikus, yaitu 73,2 U/L. Berdasarkan Zimmerman (1999) disebutkan bahwa kenaikan nilai ALT akibat pemejanan karbon tetraklorida adalah tiga kalinya. Hal ini dapat diartikan hasil penelitian dengan teori sudah sesuai. Sedangkan pada hasil pengukuran aktivitas AST, terjadi peningkatan sebesar 596,2 U/L, maka terlihat adanya kenaikan aktivitas AST sekitar empat kalinya dari nilai rata-rata jam ke-0 AST tikus, yaitu 157,2 U/L. Kenaikan aktivitas AST sudah sesuai dengan nilai kerusakan hati akibat pemejanan karbon tetraklorida, yaitu empat kalinya (Zimmerman, 1999). Hasil ini memberikan perbedaan bermakna (p<0,05) terhadap kelompok kontrol negatif olive oil (Tabel. VII). Dengan adanya kenaikan rata-rata aktivitas ALT dan AST menegaskan bahwa karbon tetraklorida 2 ml/kgBB memiliki efek hepatotoksik pada tikus jantan. 3.

Kontrol perlakuan (infusa M. tanarius dosis 10 g/kgBB) Tujuan dilakukannya kontrol perlakuan infusa M. tanarius adalah untuk

melihat bahwa pemberian infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB tidak memberikan pengaruh terhadap aktivitas ALT dan AST. Uji ini dilakukan dengan memberikan infusa M. tanarius pada tikus secara oral, dan pada jam ke-6 diambil darahnya kemudian diukur aktivitas ALT dan AST. Pada Tabel. V, kontrol perlakuan infusa M. tanarius 10 g/kg BB memberikan nilai aktivitas ALT sebesar 65,6 ± 2,6 U/L, yang memiliki perbedaan tidak bermakna (p>0,05) terhadap kelompok kontrol negatif olive oil.


49

Hasil pengukuran aktivitas AST tersaji dalam Tabel. V, dengan nilai ratarata sebesar 153,8 ± 6,6 U/L, yang memberikan perbedaan tidak bermakna (p>0,05) terhadap kelompok kontrol negatif olive oil. Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa dengan pemberian infusa daun M. tanarius selama enam jam tidak memberikan pengaruh terhadap aktivitas ALT maupun AST dan yang memberikan peningkatan terhadap ALT dan AST adalah akibat pemberian karbon tetraklorida 4.

Kelompok perlakuan infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB Pada kelompok perlakuan ini dilakukan secara akut, yaitu dengan

memberikan praperlakuan infusa daun M. tanarius 10g/kgBB pada jam ke-1/2, 1, 2, 4, dan 6 pada tikus jantan sebelum pemejanan dengan karbon tetraklorida 2 ml/kgBB. Hasil pada kelompok praperlakuan jam ke-1/2 (kelompok IV) (Tabel. IV), terlihat aktivitas rata-rata ALT sebesar 152,4 ± 13,6 U/L. Analisis secara statistik

dibandingkan

dengan

kontrol

hepatotoksin

karbon

tetraklorida

menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05). Hal ini dapat dikatakan bahwa infusa daun M. tanarius dosis 10g/kgBB memiliki efek hepatoprotektif dengan penurunan aktivitas ALT sebesar 38,1% dan efek hepatoprotetif AST sebesar 27,27%. Selain itu, juga dilakukan perbandingan terhadap kontrol olive oil, dengan hasil

perbedaan yang bermakna (p<0,05). Hal ini dapat diartikan

kerusakan yang terjadi belum kembali ke keadaan normal, sedangkan pada pengukuran aktivitas rata-rata AST diperoleh hasil (Tabel. V) 433,6 ± 28,3 U/L. Berdasarkan uji statistik diperoleh hasil, yaitu terdapat perbedaan yang bermakna (p<0,05) baik dengan kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida maupun


50

kontrol olive oil. Dapat disimpulkan bahwa praperlakuan infusa M. tanarius dosis 10g/kgBB pada jam ke-1/2 mampu memberikan perlindungan terhadap hati tikus akibat induksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB namun kerusakan yang terjadi belum kembali seperti normal. Kelompok praperlakuan jam ke-1 (kelompok V) infusa daun M. tanarius 10g/kgBB pada Tabel. V menunjukkan aktivitas rata-rata ALT sebesar 151,6 ± 11,5 U/L. Dibandingkan dengan kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida maupun kontrol olive oil, menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05). Efek hepatoprotektif yang dihasilkan kelompok ini adalah 38,5 %. Data aktivitas ALT tersebut didukung dengan pengukuran AST dengan hasil sebesar 385,2 ± 26,8 U/L dan efek hepatoprotektif yang dihasikan sebesar 35,39%. Secara statistik, pada kelompok ini juga memiliki perbedaan yang bermakna (p<0,05) baik dengan kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida maupun kontrol olive oil. Hal ini berarti praperlakuan 1 jam infusa daun M. tanarius mempunyai efek hepatoprotektif namun kerusakan yang terjadi belum kembali seperti normal. Pada kelompok praperlakuan jam ke-2 (kelompok VI) infusa daun M. tanarius menunjukkan hasil rata-rata aktivitas ALT sebesar 99,2 ± 10,1 U/L. Berdasarkan uji statistik (Tabel. VI) memberikan hasil berbeda bermakna (p<0,05) dibandingkan dengan kontrol hepatotoksin, hal ini menunjukkan bahwa infusa daun M. tanarius dosis 10g/kgBB memiliki efek hepatoprotektif, yaitu sebesar 59,7 %. Apabila dibandingkan dengan kelompok kontrol olive oil,


51

memberikan hasil berbeda tidak bermakna (p>0,05), hal ini menunjukkan bahwa kerusakan hati yang ditimbulkan sudah kembali ke keadaan normal. Data aktivitas AST menghasilkan nilai sebesar 308,4 ± 27,6 U/L dengan efek hepatoprotektif sebesar 48,27%. Uji statistik menunjukkan perbedaan yang bermakna (p<0,05) baik dengan kelompok kontrol hepatotoksin maupun kontrol olive oil. Dapat disimpulkan bahwa praperlakuan infusa M. tanarius dosis 10g/kgBB pada jam ke-2 mampu memberikan perlindungan terhadap hati tikus akibat induksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB. Praperlakuan jam ke-4 (kelompok VII) infusa daun M. tanarius memiliki rata-rata aktivitas ALT sebesar 130,6 ± 8,9 U/L. Berdasarkan uji statistik (Tabel. VI) kelompok VII memiliki perbedaan yang bermakna (p<0,05) dengan kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida. Dapat dikatakan bahwa infusa M. tanarius dosis 10g/kgBB mempunyai efek hepatoprotektif. Kelompok ini mempunyai perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) dengan kontrol olive oil. Hal ini menunjukkan bahwa kerusakan hati yang ditimbulkan pada praperlakuan infusa M. tanarius dosis 10g/kgBB pada jam ke-4 sudah kembali seperti keadaan normal. Efek hepatoprotektif yang dihasilkan adalah sebesar 47,0%, hasil ini lebih rendah bila dibandingkan dengan kelompok praperlakuan jam ke-2. Pengukuran pada rata-rata aktivitas AST praperlakuan jam ke-4 menunjukkan hasil sebesar 415,0 ± 23,4 U/L dengan efek hepatoprotektif sebesar 30,39%. Berdasarkan uji statistik, menunjukkan hasil yang berbeda bermakna (p<0,05) dengan kelompok kontrol hepatotoksin dan kelompok kontrol olive oil.


52

Data rata-rata aktivitas ALT praperlakuan jam ke-6 (kelompok VIII) menunjukkan hasil 159,0 ± 13,8 U/L. Secara statistik, menunjukkan hasil yang berbeda tidak bermakna (p>0,05) dengan kelompok kontrol hepatotoksin maupun kelompok kontrol olive oil. Dapat diartikan bahwa infusa daun M. tanarius pada kelompok ini memiliki efek hepatoprotektif, yaitu sebesar 35,5%. Efek hepatoprotektif yang dihasilkan dari kelompok ini adalah yang paling rendah bila dibandingkan dengan kelompok praperlakuan sebelumnya. Pengukuran aktivitas AST diperoleh rata-rata sebesar 412,2 ± 31,1 U/L dengan efek hepatoprotektif sebesar 30,86%. Uji statistik menunjukkan hasil yang berbeda bermakna (p<0,05) dengan kelompok kontrol hepatotoksin dan kelompok kontrol olive oil. Berdasarkan perbandingan terhadap uji statistik antar kelompok perlakuan (Tabel. VI dan Tabel. VII), dapat dilihat bahwa terdapat perbedaan yang tidak bermakna (p>0,05) antar kelompok perlakuan. Hal ini menunjukkan, setiap kelompok praperlakuan memiliki kemampuan yang sama dalam melindungi sel hati. Apabila dibandingkan dengan kelompok kontrol olive oil, yang memiliki perbedaan tidak bermakna (p<0,05) adalah kelompok perlakuan jam ke-2 dan 4. Dapat diartikan bahwa pada jam ke-2 dan 4 kerusakan hati yang ditimbulkan sudah kembali ke keadaan normal, sedangkan pada kelompok perlakuan jam ke1/2, 1, dan 6, terdapat perbedaan yang bermakna (p>0,05) terhadap kelompok kontrol olive oil. Hal ini dapat diartikan bahwa kerusakan hati yang ditimbulkan belum mencapai keadaan normal. Jangka waktu pemberian infusa daun M. tanarius yang paling baik adalah praperlakuan jam ke-2 dan 4. Hal ini didasarkan pada perbandingan terhadap


53

kelompok kontrol olive oil yang memberikan hasil berbeda tidak bermakna (p<0,05). Pada penelitian ini meskipun pada jam ke-2 dan 4 merupakan jangka waktu pemberian infusa daun M. tanarius yang paling baik, namun dipilih jam ke2 sebagai waktu efektif. Hal ini dikarenakan waktu yang dibutuhkan lebih singkat, yaitu 2 jam sudah memberikan penurunan terhadap ALT dan AST tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida. Selain itu, juga memiliki efek hepatoprotektif tertinggi yaitu 59,7%. Melalui hasil pengukuran terhadap ALT dan AST dari masing-masing kelompok perlakuan, menunjukkan bahwa pemberian infusa daun M. tanarius 10 g/kgBB secara akut memiliki pengaruh terhadap penurunan ALT dan AST tikus yang terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB. Kemungkinan adanya pengaruh penurunan ALT dan AST tersebut, dapat ditinjau dari mekanisme perusakan sel hati oleh karbon tetraklorida dan aktivitas antioksidan yang terkandung dalam infusa daun M. tanarius. Pemejanan dosis rendah karbon tetraklorida dapat menyebabkan terjadinya perlemakan hati (steatosis). Proses ini diperantarai oleh aktivasi CYP2E1 sehingga membentuk radikal bebas triklorometil (•CCl3). Radikal triklorometil tersebut dapat merusak retikulum endoplasma sel hati, selain itu juga dapat mengaktifkan senyawa oksigen reaktif selanjutnya mengakibatkan peroksidasi lipid (Timbrell, 2008). Pembentukan peroksidasi lipid menghasilkan senyawa 4-hydroxyalkenal dan hydroxynonenal lainnya yang dapat menghambat sintesis protein dan menghambat enzim glukosa-6-phophatase (Timbrell, 2008). Setelah pemejanan karbon tetraklorida selama satu sampai tiga jam, trigliserida menumpuk di hepatosit dan terlihat sebagai droplet lipid. Lipid


54

dalam hati yang terbentuk ini dapat menghambat sintesis protein sehingga menurunkan produksi lipoprotein, yang mana lipoprotein ini bertanggung jawab dalam transport lipid untuk keluar dari hepatosit. Akibat menurunnya produksi lipoprotein akan terhambat sehingga menyebabkan steatosis (Timbrell, 2008). Proses peroksidasi lipid juga dapat menghasilkan produk yang dapat menyebarkan kerusakan membran sel dan kerusakan mitokondria (Timbrell, 2008). Kerusakan ini berupa gangguan integritas membran yang menyebabkan keluarnya berbagai isi sitoplasma, antara lain ALT serum. ALT serum yang ada di dalam sel hati akan keluar dan masuk ke dalam peredaran darah sehingga jumlah enzim ALT dalam darah meningkat (Wahyuni, 2005). Kandungan dalam daun M. tanarius yang terlarut dalam pelarut infusa diduga

merupakan

senyawa

glikosida.

Kemungkinan

mekanisme

kerja

antioksidan dalam melindungi sel hati yang ditunjukkan dengan penurunan ALT dan AST adalah penangkapan radikal bebas triklorometil (•CCl3) menjadi produk non toksik yang dilakukan oleh senyawa glikosida sehingga tidak sampai merusak retikulum endoplasma sel hati. Kemungkinan mekanisme kerja senyawa glikosida yang lain adalah mampu meningkatkan jumlah enzim glutation-S-transferase (GST) dalam hati yang berfungsi sebagai antioksidan endogen. Jika terdapat radikal bebas di dalam tubuh senyawa ini akan menangkap radikal bebas tersebut. Dengan demikian dapat diduga bahwa infusa daun M. tanarius mampu melindungi sel hati dari kerusakan terkait dengan senyawa glikosida yang mampu meredam radikal bebas akibat pemberian karbon tetraklorida. Kemampuan ini ditunjukkan dengan adanya penurunan aktivitas ALT dan AST.


55

Pada penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Nugraha dan Hendra (2011), pemberian infusa daun M. tanarius secara akut pada tikus jantan terinduksi parasetamol 2,5 g/kgBB menghasilkan waktu efektif yaitu jam ke-1. Pada penelitian ini digunakan model hepatotoksin yang lain yaitu karbon tetraklorida, menghasilkan waktu efektif pada jam ke-2. Hal ini dapat diartikan bahwa dengan model hepatotoksin yang berbeda, menghasilkan waktu efektif yang berbeda pula. Selain itu, kerusakan yang dihasilkan juga berbeda, pada penelitian dengan hepatotoksin parasetamol, kerusakan yang terjadi berupa nekrosis sel hati karena terbentuknya metabolit NAPQI. Sedangkan pada hepatotoksin karbon tetraklorida, kerusakan yang ditimbulkan berupa steatosis yang diakibatkan oleh terbentuknya radikal bebas triklorometil. Oleh karena itu, dapat digunakan model hepatotoksin yang lain seperti galaktosamin untuk mengetahui waktu efektif yang dihasilkan dan juga kerusakan yang ditimbulkan.

D. Rangkuman Pembahasan Pada penelitian pengaruh waktu protektif pemberian infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB secara secara akut, mampu menurunkan ALT dan AST tikus terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB pada jam ke ½, 1, 2, 4, dan 6. Purata aktivitas penurunan ALT secara berturut-turut adalah 152,40 ± 13,6, 151,6 ± 11,5, 99,2 ± 10,1, 130,6 ± 8,9, 159,0 ± 13,8 U/L. Sedangkan purata aktivitas penurunan AST pada jam ke ½, 1, 2, 4, dan 6 secara berturut-turut adalah 433,6 ± 28,3, 385,2 ± 26,8, 308,4 ± 27,6, 415,0 ± 23,4, 412,2 ± 31,1 U/L. Hasil ini sesuai dengan hipotesis yaitu waktu protektif pemberian infusa daun M. tanarius secara


56

akut memiliki pengaruh terhadap penurunan ALT dan AST tikus terinduksi karbon tetraklorida. Pengukuran aktivitas ALT dan AST kelompok kontrol infusa M. tanarius dosis 10 g/kgBB menunjukkan hasil yang berbeda tidak bermakna apabila dibandingkan dengan kelompok kontrol olive oil. Hal ini dapat diartikan bahwa infusa M. tanarius tidak memberikan pengaruh terhadap aktivitas ALT dan AST. Dengan demikian, adanya kenaikan aktivitas ALT dan AST disebabkan oleh induksi karbon tetraklorida. Jangka waktu pemberian infusa daun M. tanarius yang paling baik adalah prapelakuan jam ke-2 dan 4. Hal ini didasarkan pada perbandingan terhadap kelompok kontrol olive oil yang memberikan hasil berbeda tidak bermakna (p<0,05). Dapat diartikan bahwa kerusakan yang terjadi sudah kembali ke keadaan normal. Pada penelitian ini dipilih jam ke-2 sebagai waktu efektif. Hal ini dikarenakan waktu yang dibutuhkan lebih singkat, yaitu 2 jam sudah memberikan penurunan terhadap ALT dan AST tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida. Selain itu juga memiliki efek hepatoprotektif ALT tertinggi yaitu 59,7%. Mekanisme kerja antioksidan dalam melindungi sel hati yang ditunjukkan dengan penurunan ALT dan AST adalah penangkapan radikal bebas triklorometil (•CCl3) menjadi produk non toksik yang dilakukan oleh senyawa glikosida sehingga tidak sampai merusak retikulum endoplasma sel hati. Kemungkinan mekanisme kerja senyawa glikosida yang lain adalah mampu meningkatkan jumlah enzim glutation-S-transferase (GST) dalam hati yang berfungsi sebagai antioksidan endogen.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan Berdasarkan hasil data yang diperoleh dan hasil uji analisis statistik yang dilakukan, maka dapat disimpulkan : 1. Pemberian infusa daun M. tanarius 10g/kgBB secara akut memiliki pengaruh terhadap penurunan kadar ALT-AST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB dengan waktu ½, 1, 2, 4, dan 6 jam dengan hasil purata aktivitas penurunan ALT secara berturut-turut adalah 152,40 ± 13,6, 151,6 ± 11,5, 99,2 ± 10,1, 130,6 ± 8,9, 159,0 ± 13,8 U/L dan purata aktivitas penurunan AST pada jam ke ½, 1, 2, 4, dan 6 secara berturut-turut adalah 433,6 ± 28,3, 385,2 ± 26,8, 308,4 ± 27,6, 415,0 ± 23,4, 412,2 ± 31,1 U/L. 2. Jangka waktu 2 jam pemberian infusa daun M. tanarius 10 g/kgBB merupakan waktu efektif untuk menghasilkan penurunan terhadap kadar ALT-AST tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida.

B. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang : 1. Pengaruh waktu protektif pemberian infusa daun M. tanarius secara akut dengan menggunakan model hepatotoksin yang lain seperti galaktosamin terhadap kadar ALT-AST tikus jantan. 2. Pengaruh variasi dosis pemberian infusa daun M. tanarius jangka waktu 2 jam terhadap kadar ALT-AST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.

57


58

DAFTAR PUSTAKA Backer, C.A., dan Bakhuizen van den Brink, R.C., 1963, Flora of Java, Vol 1, NV.P. Noordhoff-Groningen, The Netherlands. Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2010, Acuan Sediaan Herbal, Direktorat Obat Asli Indonesia, Jakarta, pp. 3. Chandrasoma, P., dan Taylor C. R., 1995, Concise Pathology, 2nd edition, FRC Path Prentice Hall International, USA, pp. 621-628. Direktorat Bina Farmasi Komunitas dan Klinik, 2007, Pharmaceutical Care Untuk Penyakit Hati, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp. 9. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995, Farmakope Indonesia, jilid IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta Edem, D.O., dan Akpanabiatu, M.I., 2006. Effects of palm oil-containing diets on enzyme activities of rats. Pakistan J Nutr 5(4):301- 305. Forrest, E., 2006, Hepatik Disorders, in Lee, A., (Ed.), Adverse Drug Reaction, 2nd ed, Pharmaceutical Press, London, pp.193, 201-202. Ganong, W.F., dan McPhee, S.J., 2011, Patofisiologi Penyakit : Pengantar Menuju Kedokteran Klinis, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 421-422. Gregus dan Klaaseen, C. D., 2001, Mchanism of Toxicity, in Klaaseen, C. D., Cassarett and Doull’s Toxicology: the Basic Science Poisons, 6th edition, McGraw-Hill, New York, pp. 57-64. Hastuti, T., 2008, Aktivitas Enzim Transaminase dan Gambaran Histopatologi Tikus yang Diberikan Kelapa Kopyor Pasca Induksi Parasetamol, Skripsi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor, Bogor. Janakat, S., dan Merie, A.H., 2002, Optimization of the Dose and Route of Injection, and characterization of the Time Course of Carbon Tetrachloride-Induced Hepatotoxicity in the Rat, JPT, 48, 41-44. Kalbemed, 2012, Penatalaksanaan NAFLD (Non-Alcoholic Fatty Liver Disease), http://www.kalbemed.com/News/tabid/229/id/1753/PenatalaksanaanNAFLD-Non-Alchoholic-Fatty-Liver-Disease.aspx, diakses tanggal 2 September 2012


59

Lim, T.Y., Lim, Y.Y., dan Yule, C. M., 2009, Evaluation of Antioxidant, antibacterial and anti-tyrosinase activities of Four Macaranga species, Food Chemistry, 114, 594-599. Lettéron, P., Labbe, G., Degott, C., Berson, A., Fromenty, B., Delaforge, M., dkk., 1990, Mechanism for the protective effects of silymarin against carbon tetrachloride-induced lipid peroxidation and hepatotoxicity in mice. Evidence that silymarin acts both as an inhibitor of metabolic activation and as a chain-breaking antioxidant, Biochem Pharmacol, 39 (12), 2027 Lu, F.C., 1995, Toksikologi Dasar, Edisi 2, UI Press, Jakarta, pp.209-210. Madhavan, V., Murali, A., Yoganarsimhan, S., dan Pandey, A.S., 2012, Protective Effect of The Roots of Capparis sepiaria Linn. (Himsra) on Carbon TetrachlorideIinduced Hepatotoxicity, AJTM, 7 (1), 23. Mahendra, A.A., dan Hendra, P., 2011, Efek Hepatoprotektif Infusa Daun Macaranga tanarius L. pada Tikus Jantan Terinduksi Parasetamol, JFSK, 7 (2), 91-97. Matsunami, K., Ichiko T., Takakazu S., Mitsunori A., Kazunari K., Hideaki O, et al, 2006, Radical-Scavenging Activities of New Megastigmane Glucosides from Macaranga tanarius (L.) MÜLL.-ARG., CPB, 54(10), 1403-1406. Matsunami, K., Otsuka, H., Kondo, K., Shinzato, T., Kawahata, M., Yamaguchi, K., dkk 2009, Absolute configuration of (+)-pinoresinol 4-O-[600-Ogalloyl]-b- D-glucopyranoside, macarangiosides E, and F isolated from the leaves of Macaranga tanarius, Phytochemistry, 70, 1277–1285. Nugraha, A.W., dan Hendra, P., 2011, Pengaruh Pemberian Secara akut Infusa Macaranga tanarius L. Terhadap Kadar ALT Tikus Jantan Terinduksi Parasetamol, Workshop & Seminar Nasional, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Nurcahyanti, C. N., 2012, Efek Hepatoprotektif Infusa Daun Macaranga tanarius L. Pada Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Phommart, S., Pakawadee Sutthivaiyakit, Nitirat Chimnoi, Somsak Ruchirawat, and Somyote Sutthivaiyakit, 2005, Constituents of the Leaves of Macaranga tanarius, J. Nat. Prod., 68, 927-930 Plaa, G.L., dan Charbonneau, M., 2001, Detection and Evaluation of Chemically Induced Liver Injury, in Hayes, W.A., Principles and Methods of Toxicology, 4th edition, 1148-1175, Taylor and Francis, Philadelphia


60

Plantamor, 2008, Informasi spesies Macaranga tanarius (L.) M.A., http://www.plantamor.com/index.php?plant=804, diakses tanggal 29 Maret 2012 Price, S.A., dan Wilson, L.M., 2005, PATOFISIOLOGI : Konsep Klinis ProsesProses Penyakit, Edisi 6, Vol 1, Penerbit EGC, Jakarta, pp. 473-476. Puteri, M.G., dan Kawabata, J. 2010, Novel α-glucosidase inhibitors from Macaranga tanarius leaves, Food Chemistry, 123, 384-389 Sacher, R.A., dan McPherson, R.A., 2002, Tinjauan Klinis Hasil Pemeriksaan, Edisi 11, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 369-370. Timbrell, J. A. 2008, Principles of Biochemical Toxicology, 4th Edition, Informa Healthcare, New York, pp 308-311. Treinen, M., dan Moslen, 2001, Toxic Responses of The Liver, in Klaassen, C.D., Cassarett and Doull’s Toxicology : The Basic Science of poisons, 6th edition, Mc. Graw Hill Companies, Inc., New York, pp.467-481. U.S. EPA, 2010, Toxicological Review Of Carbon Tetrachloride, U.S. Environmental Protection Agency, Washington DC, pp. 3-4. Wahyuni, S., 2005, Pengaruh Daun Sambiloto (Andrographis paniculata, Ness) Terhadap Kadar ALT dan AST Tikus Putih, GAMMA, 1 (1), 45-53. Wibowo, D.S., dan Paryana, W., 2009, Anatomi Tubuh Manusia, Graha Ilmu, Bandung, pp. 347-352. World Agroforestry Centre, 2002, Botanic Nomenclature to Agroforestry trees: Macaranga tanarius, World Agroforestry Centre, Available: http://www.worldagroforestry.org/sea/products/afdbases/af/asp/SpeciesInf o.asp?SpID=1092#Uses, diakses tanggal 29 Maret 2012 Yadav, M.S., Kumar, A., Singh, A., Sharma, U.S., Sutar, N., 2011, Phytochemical Investigation and Hepatoprotective Activity of Cissampelos pareira Against Carbon-Tetrachloride Induced Hepatotoxicity, Asian J. Pharm. Hea. Sci., 1, 109. Zimmerman, H. J., 1999, Hepatotoxicity, Appleton Century Crofts, New York, pp. 167-171.


LAMPIRAN

61


LAMPIRAN

Lampiran 1. Foto daun M. tanarius

Lampiran 2. Foto infusa daun M. tanarius

62


Lampiran 3. Surat determinasi tanaman M. tanarius

63


Lampiran 4. Surat Ethical Clearance

64


65

Lampiran 5. Hasil analisis statistik data ALT dan AST pada uji pendahuluan waktu pencuplikan darah hewan uji setelah induksi karbon tetraklorida 2ml/kg BB

ALT NPar Tests Descriptive Statistics ALT

N

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

15

1.4053E2

84.31901

51.00

311.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT N Normal Parametersa Most Extreme Differences

Mean Std. Deviation Absolute Positive Negative

Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) a. Test distribution is Normal.

15 1.4053E2 8.43190E1 .204 .204 -.157 .790 .561


66

Oneway Descriptives ALT

N

orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kg BB jam ke-0 orientasi Karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB jam ke-24 orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jam ke-48 Total

Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean Lower Bound

Upper Bound

Minimum Maximum

5

73.2000

28.89983

12.92440

37.3161

109.0839

51.00

123.00

5

2.4640E2

38.02368

17.00471

199.1874

293.6126

219.00

311.00

5

1.0200E2

32.71085

14.62874

61.3841

142.6159

68.00

139.00

15

1.4053E2

84.31901

21.77107

93.8390

187.2276

51.00

311.00

Test of Homogeneity of Variances ALT Levene Statistic .296

df1

df2 2

Sig. 12

.749

ANOVA ALT Sum of Squares

Df

Mean Square

Between Groups

86131.733

2

43065.867

Within Groups

13404.000

12

1117.000

Total

99535.733

14

F 38.555

Sig. .000


67

Post Hoc Tests

Multiple Comparisons ALT Scheffe

(I) orientasi_Karbon tetraklorida

(J) orientasi_Karbon tetraklorida

orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kg BB jam ke-0

orientasi Karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB jam ke-24


orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jam ke-48

95% Confidence Interval

Mean Difference (I-J)

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

*

21.13764

.000 -232.1228 -114.2772


-28.80000

21.13764

.422

-87.7228

30.1228


173.20000

*

21.13764

.000

114.2772

232.1228


144.40000

*

21.13764

.000

85.4772

203.3228


28.80000

21.13764

.422

-85.4772

87.7228


-144.40000

*

21.13764

.000 -203.3228

-173.20000

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Homogeneous Subsets ALT Scheffe Subset for alpha = 0.05 orientasi_Karbon tetraklorida orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kg BB jam ke-0 orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jam ke-48 orientasi Karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB jam ke-24 Sig.

Sig.

N

1

2

5

73.2000

5

102.0000

5

246.4000 .422

1.000


ALT Scheffe Subset for alpha = 0.05 orientasi_Karbon tetraklorida orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kg BB jam ke-0 orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jam ke-48 orientasi Karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB jam ke-24 Sig.

N

1

2

5

73.2000

5

102.0000

5

246.4000 .422

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

1.000

68


69

AST NPar Tests Descriptive Statistics N AST

Mean 15

Std. Deviation

3.1200E2

Minimum

211.52575

Maximum

114.00

669.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST N Normal Parameters

15 a

Mean

3.1200E2

Std. Deviation Most Extreme Differences

2.11526E2

Absolute

.373

Positive

.373

Negative

-.175

Kolmogorov-Smirnov Z

1.446

Asymp. Sig. (2-tailed)

.031

a. Test distribution is Normal.

Means Report AST Std. Error of orientasi_CCl4

Mean

N

Std. Deviation

Mean

orientasi CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke-0

157.20

5

42.020

18.792

596.20

5

56.672

25.344

188.60

5

7.301

3.265

314.00

15

210.419

54.330

orientasi CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke-24 orientasi CCl4 dosis 2ml/kgBB jam ke-48 Total


Kruskal-Wallis Ranks orientasi_Karbon tetraklorida AST

N

orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jam ke-0 orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jam ke-24 orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jamk ke-48 Total

Mean Rank 5

3.40

5

13.00

5

7.60

15

a,b

Test Statistics

AST Chi-Square

11.580

Df

2

Asymp. Sig.

.003

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: orientasi_Karbon tetraklorida

Mann-Whitney Test Ranks orientasi_Karbon tetraklorida AST

orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jam ke-0 orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jam ke-24 Total

N

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

70


Test Statistics

b

AST Mann-Whitney U

.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.008

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: orientasi_Karbon tetraklorida


N

orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jam ke-0 orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jamk ke-48 Total

b

AST 2.000

Wilcoxon W

17.000

Z

-2.193

Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.028 .032


a

Sum of Ranks

5

3.40

17.00

5

7.60

38.00

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank

71



N

orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jam ke-24 orientasi Karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB jamk ke-48 Total

b

AST .000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611

Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.009 .008


a

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank

72


Lampiran 6. Hasil analisis statistik data ALT dan AST pada kelompok perlakuan infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB ALT

NPar Tests Descriptive Statistics N ALT

Mean 40

Std. Deviation

135.88

Minimum

58.230

Maximum

60

311

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT N Normal Parameters

40 a

Most Extreme Differences

Mean

135.88

Std. Deviation

58.230

Absolute

.120

Positive

.120

Negative

-.096


.756


.617


73


74

Oneway Descriptives ALT 95% Confidence N

kontrol hepatotoksin

Mean

Std.

Std.

Deviation

Error

Interval for Mean Minimum Maximum Lower

Upper

Bound

Bound

5

246.40

38.024

17.005

199.19

293.61

219

311

4

81.75

6.946

3.473

70.70

92.80

77

92

6

68.67

9.158

3.739

59.06

78.28

60

84

perlakuan jam ke-1/2

5

152.40

30.435

13.611

114.61

190.19

123

187

perlakuan jam ke-1

5

151.60

25.745

11.513

119.63

183.57

115

177

perlakuan jam ke-2

5

99.20

22.665

10.136

71.06

127.34

81

124

perlakuan jam ke-4

5

130.60

20.045

8.964

105.71

155.49

108

157

perlakuan jam ke-6

5

159.00

30.960

13.846

120.56

197.44

131

194

Total

40

135.88

58.230

9.207

117.25

154.50

60

311

Karbon tetraklorida kontrol olive oil kontrol infusa macaranga

Test of Homogeneity of Variances ALT Levene Statistic 3.059

df1

df2 7

Sig. 32

.014

ANOVA ALT Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

Df

Mean Square

112038.692

7

16005.527

20199.683

32

631.240

132238.375

39

F 25.356

Sig. .000


75

Post Hoc Tests Multiple Comparisons ALT Scheffe 95% Confidence Interval

Mean

(I) kontrol_perlakuan

(J) kontrol_perlakuan


kontrol olive oil

Karbon tetraklorida

Std.

J)

Error

Sig.

Lower

Upper

Bound

Bound

164.650

*

16.854

.000

96.84

232.46

177.733

*

15.214

.000

116.52

238.95


94.000

*

15.890

.001

30.06

157.94

perlakuan jam ke-1

94.800

*

15.890

.001

30.86

158.74

perlakuan jam ke-2

147.200

*

15.890

.000

83.26

211.14

perlakuan jam ke-4

115.800

*

15.890

.000

51.86

179.74

perlakuan jam ke-6

87.400

*

15.890

.002

23.46

151.34

-164.650

*

16.854

.000

-232.46

-96.84

13.083

16.218

.998

-52.17

78.34

kontrol infusa macaranga

kontrol olive oil

Difference (I-

kontrol hepatotoksin Karbon tetraklorida kontrol infusa macaranga perlakuan jam ke-1/2

-70.650

*

16.854

.036

-138.46

-2.84

perlakuan jam ke-1

-69.850

*

16.854

.039

-137.66

-2.04

perlakuan jam ke-2

-17.450

16.854

.992

-85.26

50.36

perlakuan jam ke-4

-48.850

16.854

.331

-116.66

18.96

perlakuan jam ke-6

-77.250

*

16.854

.015

-145.06

-9.44

-177.733

*

15.214

.000

-238.95

-116.52

kontrol olive oil

-13.083

16.218

.998

-78.34

52.17


-83.733

*

15.214

.002

-144.95

-22.52

perlakuan jam ke-1

-82.933

*

15.214

.002

-144.15

-21.72

perlakuan jam ke-2

-30.533

15.214

.770

-91.75

30.68

perlakuan jam ke-4

-61.933

*

15.214

.045

-123.15

-.72

perlakuan jam ke-6

-90.333

*

15.214

.001

-151.55

-29.12

kontrol infusa


macaranga

Karbon tetraklorida


perlakuan jam ke-1/2 kontrol hepatotoksin

-94.000

*

15.890

.001

-157.94

-30.06

70.650

*

16.854

.036

2.84

138.46

83.733

*

15.214

.002

22.52

144.95

perlakuan jam ke-1

.800

15.890

1.000

-63.14

64.74

perlakuan jam ke-2

53.200

15.890

.171

-10.74

117.14

perlakuan jam ke-4

21.800

15.890

.962

-42.14

85.74

perlakuan jam ke-6

-6.600

15.890

1.000

-70.54

57.34

-94.800

*

15.890

.001

-158.74

-30.86

69.850

*

16.854

.039

2.04

137.66

82.933

*

15.214

.002

21.72

144.15

-.800

15.890

1.000

-64.74

63.14

perlakuan jam ke-2

52.400

15.890

.185

-11.54

116.34

perlakuan jam ke-4

21.000

15.890

.969

-42.94

84.94

perlakuan jam ke-6

-7.400

15.890

1.000

-71.34

56.54

*

15.890

.000

-211.14

-83.26

17.450

16.854

.992

-50.36

85.26

30.533

15.214

.770

-30.68

91.75


-53.200

15.890

.171

-117.14

10.74

perlakuan jam ke-1

-52.400

15.890

.185

-116.34

11.54

perlakuan jam ke-4

-31.400

15.890

.784

-95.34

32.54

perlakuan jam ke-6

-59.800

15.890

.083

-123.74

4.14

*

15.890

.000

-179.74

-51.86

48.850

16.854

.331

-18.96

116.66

*

15.214

.045

.72

123.15

-21.800

15.890

.962

-85.74

42.14


perlakuan jam ke-1

kontrol hepatotoksin Karbon tetraklorida kontrol olive oil kontrol infusa macaranga perlakuan jam ke-1/2

perlakuan jam ke-2

kontrol hepatotoksin Karbon tetraklorida kontrol olive oil kontrol infusa macaranga

perlakuan jam ke-4

76


-147.200

-115.800

61.933


perlakuan jam ke-6

perlakuan jam ke-1

-21.000

15.890

.969

-84.94

42.94

perlakuan jam ke-2

31.400

15.890

.784

-32.54

95.34

perlakuan jam ke-6

-28.400

15.890

.858

-92.34

35.54

-87.400

*

15.890

.002

-151.34

-23.46

77.250

*

16.854

.015

9.44

145.06

90.333

*

15.214

.001

29.12

151.55


6.600

15.890

1.000

-57.34

70.54

perlakuan jam ke-1

7.400

15.890

1.000

-56.54

71.34

perlakuan jam ke-2

59.800

15.890

.083

-4.14

123.74

perlakuan jam ke-4

28.400

15.890

.858

-35.54

92.34



Homogeneous Subsets ALT Scheffe Subset for alpha = 0.05 kontrol_perlakuan

N

1

2

3


6

68.67

kontrol olive oil

4

81.75

perlakuan jam ke-2

5

99.20

99.20

perlakuan jam ke-4

5

130.60

130.60

perlakuan jam ke-1

5

151.60


5

152.40

perlakuan jam ke-6

5

159.00

kontrol hepatotoksin Karbon tetraklorida Sig.

77

5

246.40 .067


.086

1.000


78


79

AST

NPar Tests Descriptive Statistics N AST

Mean 40

Std. Deviation

352.88

Minimum

155.517

Maximum

106

669

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST N

40

Normal Parameters

a

Mean

352.88


155.517

Absolute

.129

Positive

.122

Negative

-.129


.815


.520


Oneway Descriptives AST 95% Confidence Interval N


Mean

Std.

Std.

Deviation

Error

for Mean Minimum Maximum Lower

Upper

Bound

Bound

5

596.20

56.672

25.344

525.83

666.57

522

669

5

118.60

11.502

5.144

104.32

132.88

106

133

5

153.80

14.755

6.598

135.48

172.12

139

176


5

433.60

63.280

28.299

355.03

512.17

347

503

perlakuan jam ke-1

5

385.20

59.818

26.751

310.93

459.47

338

479

perlakuan jam ke-2

5

308.40

61.651

27.571

231.85

384.95

217

381



80

perlakuan jam ke-4

5

415.00

52.211

23.350

350.17

479.83

365

492

perlakuan jam ke-6

5

412.20

69.539

31.099

325.86

498.54

325

513

Total

40

352.88

155.517

24.589

303.14

402.61

106

669

Test of Homogeneity of Variances AST Levene Statistic

df1

1.875

df2 7

Sig. 32

.107

ANOVA AST Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

Mean Square

853205.575

7

121886.511

90026.800

32

2813.338

943232.375

39

F

Sig.

43.325

.000

Post Hoc Tests Multiple Comparisons AST Scheffe 95% Confidence Interval

Mean

(I) kontrol_perlakuan

(J) kontrol_perlakuan


kontrol olive oil

Karbon tetraklorida

Difference (I-

Std.

J)

Error

Sig.

Lower

Upper

Bound

Bound

477.600

*

33.546

.000

342.62

612.58

442.400

*

33.546

.000

307.42

577.38


162.600

*

33.546

.009

27.62

297.58

perlakuan jam ke-1

211.000

*

33.546

.000

76.02

345.98

perlakuan jam ke-2

287.800

*

33.546

.000

152.82

422.78

perlakuan jam ke-4

181.200

*

33.546

.002

46.22

316.18

perlakuan jam ke-6

184.000

*

33.546

.002

49.02

318.98



kontrol olive oil

kontrol hepatotoksin Karbon tetraklorida kontrol infusa macaranga

33.546

.000

-612.58

-342.62

-35.200

33.546

.992

-170.18

99.78

-315.000

*

33.546

.000

-449.98

-180.02

perlakuan jam ke-1

-266.600

*

33.546

.000

-401.58

-131.62

perlakuan jam ke-2

-189.800

*

33.546

.001

-324.78

-54.82

perlakuan jam ke-4

-296.400

*

33.546

.000

-431.38

-161.42

perlakuan jam ke-6

-293.600

*

33.546

.000

-428.58

-158.62

-442.400

*

33.546

.000

-577.38

-307.42

35.200

33.546

.992

-99.78

170.18


macaranga

Karbon tetraklorida kontrol olive oil perlakuan jam ke-1/2

-279.800

*

33.546

.000

-414.78

-144.82

perlakuan jam ke-1

-231.400

*

33.546

.000

-366.38

-96.42

perlakuan jam ke-2

-154.600

*

33.546

.015

-289.58

-19.62

perlakuan jam ke-4

-261.200

*

33.546

.000

-396.18

-126.22

perlakuan jam ke-6

-258.400

*

33.546

.000

-393.38

-123.42

-162.600

*

33.546

.009

-297.58

-27.62

315.000

*

33.546

.000

180.02

449.98

279.800

*

33.546

.000

144.82

414.78

perlakuan jam ke-1

48.400

33.546

.950

-86.58

183.38

perlakuan jam ke-2

125.200

33.546

.088

-9.78

260.18

perlakuan jam ke-4

18.600

33.546

1.000

-116.38

153.58

perlakuan jam ke-6

21.400

33.546

1.000

-113.58

156.38

-211.000

*

33.546

.000

-345.98

-76.02

266.600

*

33.546

.000

131.62

401.58

231.400

*

33.546

.000

96.42

366.38

-48.400

33.546

.950

-183.38

86.58

76.800

33.546

.633

-58.18

211.78


perlakuan jam ke-1

*

-477.600


kontrol infusa


81

kontrol hepatotoksin Karbon tetraklorida kontrol olive oil kontrol infusa macaranga perlakuan jam ke-1/2 perlakuan jam ke-2


perlakuan jam ke-2

perlakuan jam ke-4

-29.800

33.546

.997

-164.78

105.18

perlakuan jam ke-6

-27.000

33.546

.998

-161.98

107.98

-287.800

*

33.546

.000

-422.78

-152.82

189.800

*

33.546

.001

54.82

324.78

154.600

*

33.546

.015

19.62

289.58

-125.200

33.546

.088

-260.18

9.78

perlakuan jam ke-1

-76.800

33.546

.633

-211.78

58.18

perlakuan jam ke-4

-106.600

33.546

.223

-241.58

28.38

perlakuan jam ke-6

-103.800

33.546

.253

-238.78

31.18

-181.200

*

33.546

.002

-316.18

-46.22

296.400

*

33.546

.000

161.42

431.38

261.200

*

33.546

.000

126.22

396.18

-18.600

33.546

1.000

-153.58

116.38

perlakuan jam ke-1

29.800

33.546

.997

-105.18

164.78

perlakuan jam ke-2

106.600

33.546

.223

-28.38

241.58

perlakuan jam ke-6

2.800

33.546

1.000

-132.18

137.78

-184.000

*

33.546

.002

-318.98

-49.02

293.600

*

33.546

.000

158.62

428.58

258.400

*

33.546

.000

123.42

393.38

-21.400

33.546

1.000

-156.38

113.58

perlakuan jam ke-1

27.000

33.546

.998

-107.98

161.98

perlakuan jam ke-2

103.800

33.546

.253

-31.18

238.78

perlakuan jam ke-4

-2.800

33.546

1.000

-137.78

132.18


perlakuan jam ke-4


perlakuan jam ke-6

82




Homogeneous Subsets AST Scheffe Subset for alpha = 0.05 kontrol_perlakuan

N

1

2

3

kontrol olive oil

5

118.60


5

153.80

perlakuan jam ke-2

5

308.40

perlakuan jam ke-1

5

385.20

perlakuan jam ke-6

5

412.20

perlakuan jam ke-4

5

415.00


5

433.60

kontrol hepatotoksin Karbon tetraklorida Sig.

5

596.20 .992


.088

1.000

83


84

Lampiran 7. Hasil analisis statistik data ALT dan AST pada kelompok kontrol olive oil dosis 2ml/kg BB

ALT NPar Tests Descriptive Statistics N

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

ALT

10

86.2000

9.37846

77.00

108.00

Kelompok_Perlakuan

10

1.50

.527

1

2

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT N Normal Parameters

10 a

Most Extreme Differences

Mean

86.2000

Std. Deviation

9.37846

Absolute

.193

Positive

.193

Negative

-.163


.609


.851

Means Report ALT Std. Error of Kelompok_Perlakuan Kontrol negatif olive oil 2 ml/kgBB jam ke 0 Kontrol negatif olive oil 2 ml/kgBB jam ke 24 Total

Mean

N

Std. Deviation

Mean

90.2000

5

10.98636

4.91325

82.2000

5

6.09918

2.72764

86.2000

10

9.37846

2.96573


ANOVA Table

a

Sum of Squares ALT *

Between

(Combined

df

Square

160.000

1

160.000

Within Groups

631.600

8

78.950

Total

791.600

9

Kelompok_Perlak Groups uan

Mean

)

a. With fewer than three groups, linearity measures for ALT * Kelompok_Perlakuan cannot be computed.

Kruskal-Wallis Test Ranks Kelompok_Perlakuan ALT

Kontrol negatif olive oil 2 ml/kgBB jam ke 0 Kontrol negatif olive oil 2 ml/kgBB jam ke 24 Total

N

Mean Rank 5

6.70

5

4.30

10

a,b

Test Statistics

ALT Chi-Square Df Asymp. Sig. a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Kelompok_Perlakuan

1.580 1 .209

F 2.027

Sig. .192

85


Mann-Whitney Test Ranks Kelompok_Perlakuan ALT

N


b

ALT 6.500

Wilcoxon W

21.500

Z

-1.257

Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kelompok_Perlakuan

.209 .222

a

Sum of Ranks

5

6.70

33.50

5

4.30

21.50

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank

86


87

AST NPar Tests Descriptive Statistics N

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

AST

10

1.2070E2

11.65285

105.00

137.00

Kelompok_Perlakuan

10

1.5000

.52705

1.00

2.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST N Normal Parameters

10 a

Mean

1.2070E2


1.16528E1

Absolute

.206

Positive

.142

Negative

-.206


.650


.792


Means Report AST Kelompok_Perlakuan Kontrol negatif olive oil 2 ml/kgBB jam ke 0 Kontrol negatif olive oil 2 ml/kgBB jam ke 24 Total

Mean

N

Std. Deviation

Std. Error of Mean

1.2280E2

5

12.73578

5.69561

1.1860E2

5

11.50217

5.14393

1.2070E2

10

11.65285

3.68495


ANOVA Table

a

Sum of Squares AST *

Between

(Combined

df

Square

44.100

1

44.100

Within Groups

1178.000

8

147.250

Total

1222.100

9

Kelompok_Perlaku Groups an

Mean

)

a. With fewer than three groups, linearity measures for AST * Kelompok_Perlakuan cannot be computed.

Kruskal-Wallis Test Ranks Kelompok_Perlakuan AST


N

Mean Rank 5

5.90

5

5.10

10

a,b

Test Statistics

AST Chi-Square df Asymp. Sig. a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Kelompok_Perlakuan

.176 1 .675

F .299

Sig. .599

88


Mann-Whitney Test Ranks Kelompok_Perlakuan AST

N


b

AST Mann-Whitney U

10.500

Wilcoxon W

25.500

Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kelompok_Perlakuan

-.419 .675 .690

a

Sum of Ranks

5

5.90

29.50

5

5.10

25.50

10

Test Statistics

Z

Mean Rank

89


90

Lampiran 8. Perhitungan efek hepatoprotektif ALT

Rumus perhitungan efek hepatoprotektif : ୮୳୰ୟ୲ୟ ୅୐୘ ୩୭୬୲୰୭୪୩ୟ୰ୠ୭୬ ୲ୣ୲୰ୟ୩୪୭୰୧ୢୟି ୮୳୰ୟ୲ୟ ୅୐୘ ୮ୣ୰୪ୟ୩୳ୟ୬ ୮୳୰ୟ୲ୟ ୅୐୘ ୩୭୬୲୰୭୪୩ୟ୰ୠ୭୬ ୲ୣ୲୰ୟ୩୪୭୰୧ୢୟ

‫ݔ‬100 %

1. Kelompok Infusa Macaranga tanarius 10 g/kg BB ½ jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB : ଶସ଺,ସିଵହଶ,ସ ଶ଺ସ,ସ

x 100 %

=

38,1 %

2. Kelompok Infusa Macaranga tanarius 10 g/kg BB 1 jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB : ଶସ଺,ସିଵହଵ,଺ ଶ଺ସ,ସ

x 100 %

=

38,5 %

3. Kelompok Infusa Macaranga tanarius 10 g/kg BB 2 jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB : ଶସ଺,ସିଽଽ,ଶ ଶ଺ସ,ସ

x 100 %

=

59,7 %

4. Kelompok Infusa Macaranga tanarius 10 g/kg BB 4 jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB : ଶସ଺,ସିଵଷ଴,଺ ଶ଺ସ,ସ

x 100 %

=

47,0 %

5. Kelompok Infusa Macaranga tanarius 10 g/kg BB 6 jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB : ଶସ଺,ସିଵହଽ,଴ ଶ଺ସ,ସ

x 100 %

=

35,5 %


91

Lampiran 9. Perhitungan efek hepatoprotektif AST

Rumus perhitungan efek hepatoprotektif : ୮୳୰ୟ୲ୟ ୅ୗ୘ ୩୭୬୲୰୭୪୩ୟ୰ୠ୭୬ ୲ୣ୲୰ୟ୩୪୭୰୧ୢୟି ୮୳୰ୟ୲ୟ ୅ୗ୘ ୮ୣ୰୪ୟ୩୳ୟ୬ ௣௨௥௔௧௔ ஺ௌ் ௞௢௡௧௥௢௟௞௔௥௕௢௡ ௧௘௧௥௔௞௟௢௥௜ௗ௔

‫ݔ‬100 %

1. Kelompok Infusa Macaranga tanarius 10 g/kg BB ½ jam + Karbon tetraklorida 2ml/kg BB : ହଽ଺,ଶିସଷଷ,଺ ହଽ଺,ଶ

x 100 %

=

27,27 %

2. Kelompok Infusa Macaranga tanarius 10 g/kg BB 1 jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB : ହଽ଺,ଶିଷ଼ହ,ଶ ହଽ଺,ଶ

x 100 %

= 35,39 %

3. Kelompok Infusa Macaranga tanarius 10 g/kg BB 2 jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB : ହଽ଺,ଶିଷ଴଼,ସ ହଽ଺,ଶ

x 100 %

=

48,27 %

4. Kelompok Infusa Macaranga tanarius 10 g/kg BB 4 jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB : ହଽ଺,ଶିସଵହ,଴ ହଽ଺,ଶ

x 100 %

= 30,39 %

5. Kelompok Infusa Macaranga tanarius 10 g/kg BB 6 jam + karbon tetraklorida 2ml/kg BB : ହଽ଺,ଶିସଵଶ,ଵ ହଽ଺,ଶ

x 100 %

=

30,86 %


92

Lampiran 10. Penetapan kadar air serbuk daun M. tanarius

Penentuan kadar air dilakukan dengan metode Gravimetri dengan menggunakan alat moisture balance. Cara penentuan Kadar Air 1. Masukkan ± 5 g serbuk daun M. tanarius yang sudah diayak ke dalam alat, kemudian diratakan. 2. Timbang bobot serbuk daun M. tanarius sebagai bobot sebelum pemanasan (bobot A) 3. Panaskan serbuk daun M. tanarius pada suhu 1000C 4. Timbang serbuk daun M. tanarius setelah pemanasan (bobot B) 5. Selisih bobot A dan B merupakan kadar air dari zat yang diteliti. Rumus penentuan kadar air Kadar air =

஺ି஻

Perhitungan

஻

x 100%

Bobot serbuk daun M. tanarius Sebelum Sesudah Kadar air Rata-rata

Replikasi I

Replikasi II

Replikasi III

5,008 g 4,628 g 7,59 %

5,002 g 4,615 g 7,74 % 7,59 %

5,001 g 4,629 g 7,44 %

Replikasi I Kadar air = =

஺ି஻ ஻

x 100 %

ହ,଴଴଼ ௚ିସ,଺ଶ଼ ௚ ସ,଺ଶ଼ ௚

x 100 %

=

7,59 %

x 100 %

=

7,74 %

Replikasi II Kadar air = =

஺ି஻ ஻

x 100 %

ହ,଴଴ଶ ௚ିସ,଺ଵହ ௚ ସ,଺ଵହ ௚


93

Replikasi III Kadar air = =

Rata-rata = =

஺ି஻ ஻

x 100 %

ହ,଴଴ଵ ௚ିସ,଺ଶଽ ௚ ସ,଺ଶଽ ௚

x 100 %

=

7,44 %

௥௘௣௟௜௞௔௦௜ூା௥௘௣௟௜௞௔௦௜ூூା௥௘௣௟௜௞௔௦௜ூூூ ଷ

଻,ହଽ %ା଻,଻ସ%ା଻,ସସ%

= 7,59 %

ଷ

Lampiran 11. Perhitungan konversi dosis untuk manusia  Angka konversi tikus 200 g ke manusia 70 kg = 56,0  Dosis untuk manusia = dosis untuk tikus 200 g x (angka konversi ke manusia)

Oleh karena itu, dapat ditetapkan dosis infusa daun M. tanarius untuk manusia sebagai berikut : Infusa daun M. tanarius dosis 10g/kg BB tikus 10 g/kgBB = 10 g/1000 gBB = 2 g/200 gBB 2 g/200 gBB x 56,0 = 112 g/70 kgBB manusia


94

Lampiran 12. Hasil pengukuran validitas dan reabilitas

Tabel Hasil validitas dan reabilitas Dilihat dari serum kontrol (range 33,9-48,9 U/l) x (U/l)

x-

42

0,8

0,64

40

-1,2

1,44

-0,2

0,04

42

0,8

0,64

41

-0,2

0,04

41

41,2

∑ = 2,8

Range =

± SD

CV = (SD/ ) x 100%

= 41,2 ± 0,8

= (0,8/41,2) x 100%

= 40,4 – 42

= 1,94% Syarat CV yang baik ≤ 2%.


95

BIOGRAFI PENULIS

Penulis Skripsi dengan Judul “Pengaruh Waktu Protektif Pemberian Infusa Daun Macaranga tanarius L. Secara Akut Terhadap Kadar ALT-AST Pada Tikus

Terinduksi Karbon

Tetraklorida” memiliki nama lengkap Luluk Rahendra Martha, merupakan anak pertama dari dua bersaudara pasangan Indwi Raharjo dan Sri Indrati. Penulis dilahirkan di Klaten pada tanggal 5 Maret 1991. Pendidikan formal yang telah ditempuh penulis yaitu TK Kristen Kridawita Klaten (1995-1997), kemudian melanjutkan pendidikan tingkat Sekolah Dasar di SD Negeri 1 Klaten (1997-2003), tingkat Sekolah Menengah Pertama di SMP Negeri 2 Klaten (2003-2006), tingkat Sekolah Menengah Atas di SMF Indonesia Yogyakarta (2006-2009). Pada tahun 2009, penulis melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2009. Semasa menempuh pendidikan sarjana, penulis aktif dalam kegiatan kepanitiaan seperti Panitia Inisiasi Sanata Dharma tahun 2010 sebagai anggota P3K dan Panitia Hari Anti Tembakau tahun 2011 sebagai anggota Humas (Hubungan masyarakat). Selain itu, penulis pernah menjadi asisten praktikum Bentuk Sediaan Farmasi (2011), Farmakologi Dasar (2011), dan Toksikologi Dasar (2012).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents