PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

UJI ANTIOKSIDAN EKSTRAK TUMBUHAN SISIK NAGA (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price) PADA POHON INANG JAMBU AIR (Syzygium aqueum) DENGAN METODE 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH) DAN PENETAPAN KARAKTER EKSTRAK

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Eugenius Yogia Wirawan 128114073

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2016


UJI ANTIOKSIDAN EKSTRAK TUMBUHAN SISIK NAGA (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price) PADA POHON INANG JAMBU AIR (Syzygium aqueum) DENGAN METODE 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH) DAN PENETAPAN KARAKTER EKSTRAK

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Eugenius Yogia Wirawan 128114073

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2016

i


ii


iii


HALAMAN PERSEMBAHAN

“Life is like riding a bicycle. To keep your balance, you must keep moving.” -Albert Einstein-

“Finish each day and be done with it. You have done what you could. Some blunders and absurdities no doubt crept in; forget them as soon as you can. Tomorrow is a new day. You shall begin it serenely and with too high a spirit to be encumbered with your old nonsense.” -Ralph Waldo Emerson-

Kupersembahkan skripsi ini untuk: 

Tuhan Yesus, yang selalu memampukan diriku dan memberikan segala sesuatu yang terbaik selama kehidupan ini dan hingga saat ini



Kedua orang tuaku yang selalu mendoakan, mencukupi dan mendukung apa yang saya lakukan



Teman-teman yang selalu mendukung saya



Almamaterku...

iv


v


vi


PRAKATA

Puji syukur kepada Tuhan karena berkat rahmat dan karunia-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Antioksidan Ekstrak Tumbuhan Sisik Naga (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price) pada Pohon Inang Jambu Air (Syzygium aqueum) dengan Metode 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH) dan Penetapan Karakter Ekstrak“ sebagai salah satu syarat guna memperoleh gelar Sarjana Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Dalam proses penelitian dan penyusunan skripsi ini tidak lepas dari bantuan dan dukungan dari semua pihak sehingga skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terimakasih yang sebesar-besarnya kepada : 1.

Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt. sebagai Dosen Pembimbing yang telah memberikan bimbingan, pengarahan serta ilmu dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini.

2.

Yohanes Dwiatmaka, M.Si. selaku Dosen Penguji atas pengarahan dan kesediaannya menguji skripsi ini.

3.

Florentinus Dika Octa Riswanto M.Sc. selaku Dosen Penguji atas pengarahan dan kesediaannya menguji skripsi ini.

4.

Aris Widayati, M.Si., Ph.D., Apt. sebagai Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

5.

Segenap dosen dan karyawan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

vii


6.

Dionisius Laffyanto dan Gama Nindya Saputra, terimakasih atas perjalanan kerjasama yang telah kita lewati bersama ini.

7.

Teman-teman angkatan 2012, atas kerjasama, doa, semangat, kritik dan sarannya.

8.

Semua pihak yang telah memberikan bantuan dan dukungan yang tidak dapat disebut satu per satu. Penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi ini banyak kesalahan dan

kekurangan mengingat keterbatasan kemampuan dan pengetahuan penulis, untuk itu penulis mengharapkan saran dan kritik yang membangun dari semua pihak. Akhir kata semoga penelitian dan penyusunan skripsi ini bermanfaat bagi perkembangan ilmu pengetahuan khususnya di bidang Farmasi.

Yogyakarta, 7 Desember 2015

Penulis

viii


DAFTAR ISI HALAMAN HALAMAN JUDUL .................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .......................................... ii HALAMAN PENGESAHAN .................................................................... iii HALAMAN PERSEMBAHAN ................................................................. iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ...................................................... v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ...... vi PRAKATA ................................................................................................ vii DAFTAR ISI ............................................................................................ viii DAFTAR TABEL ..................................................................................... xii DAFTAR GAMBAR ............................................................................... xiii DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................ xiv INTISARI .................................................................................................. xv ABSTRACT ............................................................................................... xvi BAB I. PENGANTAR ................................................................................ 1 A. Latar Belakang ................................................................................ 1 1. Permasalahan ............................................................................. 3 2. Keaslian penelitian ..................................................................... 4 3. Manfaat ...................................................................................... 4 B. Tujuan ............................................................................................. 4 1. Tujuan umum ............................................................................. 4 2. Tujuan khusus ............................................................................ 5

ix


BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ....................................................... 6 A. Tumbuhan Sisik Naga ................................................................... 6 B. Fenolik dan Metabolit Sekunder ................................................... 7 C. Ekstraksi ........................................................................................ 9 D. Radikal Bebas ............................................................................. 10 E. Antioksidan ................................................................................. 11 F. Penetapan Karakter Ekstrak ........................................................ 12 G. Kromatografi Lapis Tipis ............................................................ 13 H. Metode Uji Antioksidan .............................................................. 15 I. Spektrofotometri ......................................................................... 17 J. Landasan Teori ............................................................................ 20 K. Hipotesis ...................................................................................... 21 BAB III. METODOLOGI PENELITIAN ............................................... 22 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................... 22 B. Variabel dan Definisi Operasional ............................................... 22 1. Variabel ....................................................................................... 22 2. Definisi operasional ..................................................................... 23 C. Bahan Penelitian ........................................................................... 23 D. Alat Penelitian .............................................................................. 24 E. Tata Cara Penelitian ...................................................................... 24 1. Determinasi tanaman ............................................................... 24 2. Pembuatan simplisia ................................................................ 24 3. Ekstraksi tumbuhan sisik naga ................................................. 25

x


4. Karakterisasi ekstrak .............................................................. 25 5. Uji aktivitas antioksidan ........................................................ 28 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................... 32 A. Hasil Determinasi Tumbuhan ..................................................... 32 B. Pengumpulan Bahan ................................................................... 32 C. Uji Mikroskopik ......................................................................... 34 D. Pembuatan Simplisia .................................................................. 37 E. Ekstraksi ..................................................................................... 38 F. Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak ........................................... 40 G. Uji Kromatografi Lapis Tipis ..................................................... 44 H. Uji Aktivitas Antioksidan (DPPH) ............................................. 48 1. Penentuan panjang gelombang maksimum .......................... 48 2. Penentuan OT ....................................................................... 49 3. Uji aktivitas rutin sebagai pembanding ................................ 51 4. Uji aktivitas antioksidan sampel .......................................... 53 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ................................................ 59 A. Kesimpulan ................................................................................. 59 B. Saran ........................................................................................... 59 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................. 60 LAMPIRAN ............................................................................................ 65 BIOGRAFI PENULIS ............................................................................ 94

xi


DAFTAR TABEL Tabel I. Nomor Mesh Ayakan dan Ukurannya ................................................... 38 Tabel II. Data Rendemen Ekstrak Diklorometan, Etil Asetat dan Metanol ........ 40 Tabel III. Data Kadar Abu Total ......................................................................... 41 Tabel IV. Data Pengujian Kadar Abu Tidak Larut Asam ................................... 42 Tabel V. Data Pengujian Kadar Sari Larut Air ................................................... 43 Tabel VI. Data Pengujian Kadar Sari Larut Etanol ............................................. 44 Tabel VII. Data KLT dengan Pembanding Eugenol ........................................... 45 Tabel VIII. Data KLT dengan Pembanding Rutin (Flavonoid) .......................... 46 Tabel IX. Data KLT dengan Pembanding Asam Tanat (Tanin) ......................... 47 Tabel X. Data KLT dengan Pembanding Β-Sitosterol (Steroid) ........................ 48 Tabel XI. Data Absorbansi Penentuan Operating Time ..................................... 50 Tabel XII. Konsentrasi, %IC dan Persamaan Regresi Linier Rutin .................... 52 Tabel XIII. Konsentrasi, %IC dan Persamaan Regresi Linier Ekstrak Diklorometan ....................................................................................................... 53 Tabel XIV. Konsentrasi, %IC dan Persamaan Regresi Linier Ekstrak Etil Asetat ................................................................................................................... 54 Tabel XV. Konsentrasi, %IC dan Persamaan Regresi Linier Ekstrak Metanol .. 54 Tabel XVI. Nilai IC50 Rutin dan Masing-Masing Ekstrak .................................. 55 Tabel XVII. Kategori Nilai IC50 Pada Rutin dan Setiap Ekstrak ........................ 56

xii


DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Struktur DPPH ............................................................................ 16 Gambar 2. Reduksi DPPH oleh senyawa antioksidan .................................. 16 Gambar 3. Jambu air (Syzygium aqueum) …................................................ 33 Gambar 4. Daun sisik naga ........................................................................... 34 Gambar 5. Hasil uji mikroskopik tumbuhan dan serbuk sisik naga ............. 36 Gambar 6. Kurva hasil absorbansi operating time tiap satuan waktu .......... 50 Gambar 7. Histogram perbandingan nilai IC50 rutin dan ekstrak sisik naga .............................................................................................................. 56

xiii


DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Surat determinasi tumbuhan sisik naga ..................................... 66 Lampiran 2. Penimbangan simplisia tumbuhan sisik naga untuk maserasi ... 67 Lampiran 3. Penggunaan pelarut untuk maserasi .......................................... 67 Lampiran 4. Perhitungan rendemen ekstrak .................................................. 68 Lampiran 5. Perhitungan kadar abu total ....................................................... 69 Lampiran 6. Penetapan kadar abu tidak larut asam ........................................ 70 Lampiran 7. Penetapan kadar sari larut etanol ............................................... 71 Lampiran 8. Penetapan kadar sari larut air ..................................................... 72 Lampiran 9. Foto hasil kromatografi lapis tipis ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tanaman sisik naga .............................................. 73 Lampiran 11. Data uji aktivitas antioksidan ................................................... 76 Lampiran 12. Data uji statistik ........................................................................ 92

xiv


INTISARI

Sisik naga merupakan tumbuhan epifit yang hidupnya merambat dan menempel pada pohon inang seperti teh, kopi, jambu air, mangga, dll. Penelitian ini membuktikan adanya aktivitas antioksidan pada ekstrak tanaman sisik naga (Pyrossia piloselloides (L.) M.G Price) pada pohon inang jambu air. Penetapan karakter simplisia, ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol berguna untuk mengetahui kualitasnya berupa uji kadar abu, kadar abu tidak larut asam, kadar sari larut etanol dan kadar sari larut air. Ekstraksi menggunakan metode maserasi dengan pelarut diklorometan, etil asetat dan metanol. Metode pengujian aktivitas antioksidan yang digunakan adalah 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH) yang merupakan radikal bebas kemudian dilihat serapannya menggunakan spektrofotometer visibel. Sejauh ini belum ada penelitian resmi mengenai uji aktivitas antioksidan pada ekstrak tumbuhan sisik naga (Pyrossia piloselloides (L.) M.G Price) pada pohon inang jambu air yang dipublikasikan. Parameter aktivitas antioksidan yang digunakan berupa IC50 (Inhibition Concentration 50) yaitu konsentrasi senyawa antioksidan yang mampu menangkap radikal bebas (DPPH) sebesar 50%. Hasilnya pada pembanding rutin didapatkan rata-rata IC50 sebesar 47,3±1,255 µg/mL. Sedangkan IC50 pada sampel ekstrak diklorometan 902,136±31,711 µg/mL, ekstrak etil asetat 920,526±69,588 µg/mL dan ekstrak metanol 466,833±9,824 µg/mL. Kata kunci: radikal bebas, sisik naga, DPPH, ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat, ekstrak metanol, IC50

xv


ABSTRACT

Sisik naga were epiphytic plants that propagate life and stick to the host trees such as tea, coffee, rose apple, mango, etc. This studied proves the antioxidant activity of extracts sisik naga (Pyrossia piloselloides (L.) MG Price) on the host tree rose apple. Characterization of simplicia, dichloromethane extract, ethyl acetate extract and methanol extract useful to know the quality test in the form of ash content, ash content acid insoluble, soluble extract content of ethanol and water soluble extract content. Extraction using maceration with dichloromethane, ethyl acetate and methanol. Antioxidant activity test method by 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH) which is a free radical absorbance is then seen using spectrophotometer visible. So far there has been no formal studies on the antioxidant activity test on plant extracts sisik naga (Pyrossia piloselloides (L.) MG Price) on the host tree rose apple have been published. Parameters used in the form of antioxidant activity IC50 (Inhibition Concentration 50) was the concentration of antioxidant compounds that can reduce 50% of free radicals (DPPH). The result in rutine IC50 obtained an average of 47.300±1.255 mg/mL. While the result of IC50 in dichloromethane was about 902.136±31.711 mg/mL, ethyl acetate extract 920.526±69.588 mg/mL and methanol extract 466.833±9.824 mg/mL. Keywords: free radicals, sisik naga, DPPH, dichloromethane extract, ethyl acetate extract, methanol extract, IC50

xvi


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Radikal bebas dapat ditemui dengan mudah pada gaya hidup sehari-hari seperti merokok, semakin banyaknya kendaraan yang menyebabkan polusi, makanan cepat saji yang mengesampingkan kandungan gizi dan banyak lagi. Radikal bebas merupakan atom atau molekul yang memiliki satu atau lebih elektron bebas yang tidak berpasangan. Radikal bebas dapat berasal dari dalam tubuh maupun dari lingkungan. Radikal bebas juga dapat dihasilkan dari dalam tubuh melalui proses metabolisme, fagositosis yang terjadi dalam mitokondria, retikulum endoplasma dan sitosol. Radikal bebas reaktif melakukan reaksi oksidasi patogenik terhadap sel atau komponennya, sehingga dapat menyebabkan disfungsi atau mutasi yang berakibat pada timbulnya penyakit degenertif seperti kanker, penyakit kardiovaskular, kerusakan hati dan penuaan dini (Winarsi, 2007). Cara pertahanan terbaik untuk mencegah kerusakan akibat radikal bebas adalah meningkatkan pertahanan tubuh dengan olahraga, mengatur pola makan, dan mengkonsumsi makanan yang mengandung antioksidan. Antioksidan merupakan senyawa yang dapat menangkal radikal bebas, senyawa antioksidan dapat memberikan elektron (electron donor). Dengan kata lain antioksidan merupakan senyawa yang dapat menghambat reaksi oksidasi dengan mengikat radikal bebas yang mengakibatkan kerusakan sel (Kim et al., 2002).

1


2

Antioksidan merupakan senyawa pendonor elektron yang mampu menginaktivasi reaksi oksidasi dengan cara mencegah terbentuknya radikal. Senyawa antioksidan dapat menghambat reaksi oksidasi dengan meredam atau menetralkan radikal bebas sehingga kerusakan sel bisa terhambat. Senyawa antioksidan dapat diperoleh dari senyawa-senyawa metabolit sekunder tumbuhan yang dalam strukturnya memiliki cincin aromatis fenol atau senyawa fenolik. Cincin aromatis fenol tersebut yang akan berkontribusi terhadap aktivitas antioksidan (Shahidi, 1997; Winarsi, 2007). Salah satu cara untuk mengendalikan kualitas simplisia dan ekstrak yang dibuat adalah dengan melakukan uji karakterisasi. Uji karakterisasi atau standarisasi mempunyai pengertian bahwa simplisia atau ekstrak yang digunakan sebagai bahan baku harys memenuhi persyaratan tertentu. Parameter mutu simplisia dan ekstrak meliputi pemeriksaan secara mikroskopik, penetapan kadar abu total, penetapan kadar abu tidak larut asam, penetapan kadar sari larut air, penetapan kadar sari larut etanol dan uji kandungan kimia ekstrak untuk mengetahui senyawa apa yang berperan dalam aktivitas antioksidan (DepkesRI, 2000). Tumbuhan sisik naga (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price) merupakan salah satu familia Polypodiaceae berupa tumbuhan herba yang hidup epifit pada pohon inang. Sisik naga dapat hidup epifit pada tumbuhan teh, kopi, jambu, palem dan lain-lain. Pada penelitian sebelumnya diperoleh hasil ekstrak diklorometana tumbuhan sisik naga berefek antioksidan dengan nilai

IC50 12,82 ug/mL

(Wulandari, et al., 2013). Tumbuhan sisik naga mengandung minyak atsiri, terpenoid, fenol, tanin, flavonoid, saponin, steroid (Widiyanti, 2010).


3

. Salah satu metode untuk menguji aktivitas antioksidan adalah metode DPPH. Tujuan metode DPPH adalah mengetahui parameter konsentrasi yang ekuivalen memberikan 50% efek aktivitas antioksidan (IC50). Hal ini dapat dicapai dengan cara menginterpretasikan data eksperimental dari metode tersebut. DPPH merupakan radikal bebas yang dapat bereaksi dengan senyawa yang dapat mendonorkan atom hidrogen, dapat berguna untuk pengujian aktivitas antioksidan komponen tertentu dalam suatu ekstrak. DPPH memberikan serapan kuat pada 517 nm. Ketika elektronnya menjadi berpasangan oleh keberadaan penangkap radikal bebas, maka absorbansinya menurun secara stoikiometri sesuai jumlah elektron yang diambil. Keberadaan senyawa antioksidan dapat mengubah warna larutan DPPH dari ungu menjadi kuning (Dehpour, Ebrahimzadeh, Fazel, dan Mohammad, 2009). Perubahan absorbansi akibat reaksi ini telah digunakan secara luas untuk menguji kemampuan beberapa molekul sebagai penangkap radikal bebas. Metode DPPH merupakan metode yang mudah, cepat, dan sensitif untuk pengujian aktivitas antioksidan senyawa tertentu atau ekstrak tumbuhan (Koleva, van Beek, Linssen, de Groot, dan Evstatieva, 2002; Prakash, Rigelhof, dan Miller, 2010). 1. Permasalahan a. Bagaimana karakter simplisia, ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tumbuhan sisik naga (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price) pada pohon inang jambu air? b. Berapakah nilai aktivitas antioksidan ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tumbuhan sisik naga (Pyrrosia


4

piloselloides (L.) M.G Price) pada pohon inang jambu air dengan menggunakan radikal bebas DPPH yang dinyatakan dengan IC50? 2. Keaslian penelitian Sejauh yang peneliti telusuri, belum ada penelitian yang sama seperti penelitian ini. Menurut penelitian (Wulandari, et al., 2013) ekstrak sisik naga (secara umum, mengabaikan pengaruh inang) memiliki aktivitas antioksidan. Dalam penelitian ini digunakan tumbuhan sisik naga yang menempel pada inang pohon jambu air dan digunakan 3 pelarut yang berbeda. 3. Manfaat a. Manfaat teoritis dari penelitian ini adalah akan diketahuinya aktivitas antioksidan yang berupa IC50 dari ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol dan karakter dari simplisia, ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tumbuhan sisik naga pada pohon inang jambu air. b. Manfaat praktis dari penelitian ini apabila terbukti, diharapkan masyarakat dapat memanfaatkan sisik naga yang menempel pada inang jambu air sebagai antioksidan alami. B. Tujuan 1. Tujuan umum: Menguji aktivitas antioksidan ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tumbuhan sisik naga pada pohon inang jambu air terhadap radikal bebas DPPH.


5

2. Tujuan khusus: a. Mengetahui karakter simplisia, ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tumbuhan sisik naga pada pohon inang jambu air. b. Mengetahui nilai aktivitas antioksidan ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tumbuhan sisik naga pada pohon inang jambu air dengan menggunakan radikal bebas DPPH yang dinyatakan dengan IC50.


BAB II TINJAUAN PUSTAKA

A. Tumbuhan Sisik Naga Famili

: Polypodiaceae

Genus

: Drymoglossum

Spesies

: Drymoglossum piloselloides (L.) C. Presl (Steenis, et al, 1992).

Sinonim

: Pyrrosia piloselloides (L.) M.G. Price (United States Department of Agriculture, 2015).

Sisik naga merupakan tumbuhan epifit kecil dengan akar rimpang tipis, merayap. Daun satu sama lain tumbuh berdekatan, tangkai pendek, tidak terbagi, pinggir utuh, berdaging atau seperti kulit, permukaan buah tidak berbulu sama sekali atau sedikit (Heyne, 1987). Nama lain sisik naga, Sumatra: picisan, sisik naga, sakat riburibu (Melayu). Jawa: paku duduwitan (Sunda), pakis duwitan (Jawa) (Anonim, 1989). Daun tumbuhan paku ini bentuknya bulat dan ukurannya kecil menyerupai sisik naga. Terdapat dua tipe daun, yaitu tropofil dan sporofil. Pada jenis yang tropofil, daun berbentuk bulat dan kecil, sedangkan jenis sporofil daunnya lebih panjang dibandingkan tropofil, sporofil juga memiliki sporangium. Sporangium terdapat pada daun fertil (Purnawati, 2014). Tumbuhan sisik naga tersebar di seluruh Asia Tropik, di daerah dengan musim kering yang banyak hujan, dari daerah datar hingga ± 1000 m di atas

6


7

permukaan laut, tumbuh secara umum pada batang, dahan pohon dan perdu yang daunnya tidak begitu lebat (Heyne, 1987). Tumbuhan paku ini ditemukan di hutan kerangas, rawa dan gambut, menempel pada batang pohon atau hidupnya epifit. Akarnya menjulur dan melekat kuat pada inangnya (Purnawati, 2014). Tumbuhan sisik naga (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price) merupakan salah satu familia Polypodiaceae berupa tumbuhan herba yang hidup epifit pada pohon Inang. Sisik naga dapat hidup epifit pada pohon mangga, angsana, mahoni, flamboyan, ketapang, palma, nangka, kerai payung, dan lain sebagainya (Sahid, et al, 2013). Sisik naga mengandung minyak atsiri, sterol/triterpene, fenol, flavonoid, gula, dan tanin. Hasil penelitian menunjukan bahwa ekstrak diklorometana tumbuhan sisik naga berefek antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 12,82 µg/mL (Wulandari, et al., 2013). B. Fenolik dan Metabolit Sekunder Senyawa fenolik merupakan sekelompok metabolit sekunder yang mempunyai cincin aromatik yang terikat dengan satu atau lebih substituen gugus hidroksi (OH) yang terbentuk melalui jalur metabolisme asam sikimat-fenil propanoid dan jalur aseat-polimalonat. Termasuk dalam kelompok senyawa ini adalah fenol sederhana, asam fenolat, kumarin, tanin dan flavonoid. Dalam tananaman, senyawa-senyawa ini biasanya berada dalam bentuk glikosida atau esternya (Proestos, Sereli, Komaitis, 2006). Golongan yang terbanyak dari senyawa fenolik adalah flavonoid. Pada umumnya flavonoid larut dalam pelarut polar (Markham, 1988). Flavonoid apabila


8

ditambahkan basa atau amonia warnanya akan berubah, jadi mudah dideteksi dengan kromatogram atau dalam larutan. Flavonoid mengandung sistem aromatik yang terkonjugasi dan menunjukan serapan yang kuat pada spektrum UV-Vis. Flavonoid dan aglikon flavonoid pada tumbuhan umumnya terikat pada gula sebagai glikosida. Penggolongan flavonoid dalam jaringan tumbuhan didasarkan pada sifat kelarutan dan reaksi warna (Harborne, 1987). Tanin merupakan senyawa polifenol larut air yang dapat memiliki bobot molekul tinggi. Secara garis besar, tanin dibagi menjadi dua golongan: tanin dapat terhidrolisis yang terbantuk dari esterifikasi gula (misalnya glukosa) dengan asam fenolat sederhana yang merupakan tanin turunan sikimat (misalnya asam galat) dan tanin yang tidak dapat terhidrolisis disebut tanin terkondensasi, yang berasal dari reaksi polimerisasi (kondensasi) antar flavonoid (Heinrich, et al, 2005). Eugenol merupakan komponen dari minyak cengkeh dan minyak wangi yang memiliki aktivitas antioksidan, antiinflamasi, antibakteri, dan efek antiviral (Pavithra,2015). Mekanisme senyawa fenolik sebagai antioksidan dijelaskan oleh Janeiro dan Brett (2004) yaitu melalui kemampuan dari gugus fenol untuk mengikat radikal bebas dengan memberikan atom hidrogennya melalui proses transfer elektron sehingga fenol berubah menjadi radikal fenoksil. Radikal fenoksil yang terbentuk sebagai hasil reaksi fenol dengan radikal bebas kemudian akan menstabilkan diri melalui efek resonansi. Karena alasan ini maka derivat dari fenol merupakan donor hidrogen yang baik yang dapat menghambat reaksi yang terjadi oleh senyawa radikal. Senyawa fenol disebut juga sebagai inhibitor radikal (Togo, 2004).


9

C. Ekstraksi Ekstrak merupakan sediaan kental yang diperoleh dengan cara mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai dan semua atau hampir semua pelarut diuapkan kemudian massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Depkes RI , 2000). Ekstraksi merupakan suatu proses penarikan kandungan kimia dari suatu bahan yang dapat larut dalam pelarut cair sehingga terpisah dari bahan yang tidak dapat larut. Senyawa aktif yang terdapat dalam berbagai simplisia dapat digolongkan ke dalam minyak atsiri, alkaloid, flavonoid dan lain-lain. Struktur kimia yang berbeda-beda akan mempengaruhi kelarutan serta stabilitas senyawasenyawa tersebut terhadap pemanasan, udara, cahaya, logam berat, dan derajat keasaman. Dengan diketahuinya senyawa aktif dalam suatu simplisia, maka pemilihan pelarut dan cara ekstraksi dapat dilakukan dengan cepat dan tepat (Depkes RI, 2000). Maserasi adalah proses ekstraksi dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari sehingga cairan penyari mampu menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif kemudian zat aktif tersebut akan terlarut, adanya perbedaan konsentrasi di dalam dan luar sel akan mengakibatkan terjadinya pendesakan larutan pekat ke luar sel (Depkes RI, 1986). Perkolasi merupakan metode ekstraksi yang dilakukan dengan cara mengalirkan penyari melalui serbuk simplisia yang telah dibasahi. Serbuk tumbuhan direndam pada sebuah alat bernama perkolator, bentuknya seperti


10

kerucut terbalik. Perkolasi cukup sesuai untuk ekstraksi pendahuluan maupun dalam jumlah besar. Bahan padat basah dimasukkan dalam jumlah yang tepat kemudian didiamkan selama sekitar 4 jam dalam keadaan tertutup. Setelah itu penyari akan menetes melewati serbuk tumbuhan mengganti pelarut yang keluar berupa ekstrak. Untuk mengekstrak secara menyeluruh dilakukan dengan penambahan pelarut yang baru dan semua ekstrak dikumpulkan. (Handa, et al, 2008) Sokletasi dilakukan dengan cara bahan yang akan diekstraksi diletakkan dalam kantung ekstraksi (kertas, karton, dan sebagainya) dibagian dalam alat ekstraksi dari gelas yang bekerja kontinyu (perkulator). Wadah gelas yang mengandung kantung diletakkan diantar labu penyulingan dengan pendingin aliran balik dan dihubungkan dengan labu melalui pipa. Labu tersebut berisi bahan pelarut yang menguap dan mencapai kedalam pendingin aliran balik. Menetes di atas bahan yang diekstraksi dan menarik keluar bahan yang diekstraksi. Larutan berkumpul didalam wadah gelas dan setelah mencapai tinggi maksimalnya, secara otomatis dipindahkan kedalam labu. Dengan demikian zat yang terekstraksi terakumulasi melaui penguapan bahan pelarut murni berikutnya (Voight, 1995). D. Radikal Bebas Radikal bebas adalah suatu senyawa atau molekul yang mengandung satu atau lebih elektron tidak berpasangan pada orbital luarnya. Adanya elektron tidak berpasangan menyebabkan senyawa tersebut sangat reaktif mencari pasangan dengan cara menyerang dan mengikat elektron molekul yang ada di sekitarnya. Target utama radikal bebas adalah protein, asam lemak tak jenuh, dan lipoprotein,


11

serta unsur DNA termasuk karbohidrat. Dari ketiga molekul tersebut, yang paling rentan terhadap radikal bebas adalah asam lemak tak jenuh, akibatnya dinding sel menjadi rapuh karena membran sel yang rusak akibat radikal bebas. Radikal bebas juga mampu merusak bagian dalam pembuluh darah sehingga meningkatkan pengendapan kolesterol dan menimbulkan aterosklerosis. Selain itu, radikal bebas juga berpotensi merusak basa DNA sehingga mengacaukan sistem info genetika, dan berlanjut pada pembentukan sel kanker (Winarsi, 2007). Radikal bebas selain berguna bagi tubuh untuk memerangi mikroba patogen juga membahayakan tubuh karena dapat merusak sel-sel jaringan di sekitarnya. Radikal bebas akan terus mencari elektron dari molekul-molekul di sekitarnya dan apabila tidak dikendalikan reaksi ini dapat berlangsung berantai secara terusmenerus (Muchtadi, 2013). Radikal bebas dapat merusak membran sel kemudian merusak komponen sel termasuk inti sel dan DNA dan berakibat matinya sel. Selain mengakibatkan kematian, destruksi tersebut juga meninggalkan sisa yang tidak mudah dibuang oleh tubuh. Akumulasi sisa-sia tersebut dapat menimbulkan bermacam-macam penyakit degeneratif bahkan menyebabkan kematian (Muchtadi, 2013). E. Antioksidan Antioksidan merupakan suatu senyawa yang memiliki pasangan elektron bebas yang dapat memutus jalannya reaksi dan radikal bebas dengan cara menyumbang elektronnya pada senyawa radikal bebas. Senyawa antioksidan dapat dibagi menjaadi antioksidan endogen yang berasal dari dalam tubuh dan antioksidan eksogen berasal dari luar tubuh (Kumalaningsih, 2007).


12

Antioksidan primer disebut juga sebagai antioksidan enzimatis. Antioksidan primer meliputi enzim superoksida dismutase, katlase, dan glutation peroksidase. Enzim-enzim ini menghambat pembentukan radikal bebas dengan cara memutus reaksi berantai (polimerisasi), dan mengubahnya menjadi produk yang lebih stabil. Antioksidan kelompok ini disebut juga chain-breaking-antioxidant (Winarsi, 2007). Antioksidan sekunder disebut juga antioksidan eksogenus tau non enzimatis. Cara kerja sistem antioksidan non-enzimatis yaitu dengan cara memotong reaksi oksidasi berantai dari radikal bebas. Akibatnya, radikal bebas tidak bereaksi dengan komponen seluler. Contoh antioksidan sekunder: vitamin C, vitamin E, flavonoid, asam urat, bilirubin dan albumin (Lampe, 1999). Antioksidan tersier contohnya enzim DNA-repair dan metionin sulfoksida reduktase yang berperan dalam perbaikan biomolekul yang dirusak oleh radikal bebas. Kerusakan DNA yang terinduksi senyawa radikal bebas dicirikan oleh rusaknya single dan double strand, baik gugus basa maupun non-basa. Perbaikan kerusakan basa dalam DNA yang diinduksi oleh senyawa oksigen reaktif terjadi melalui perbaikan jalur eksisi basa. Pada umumnya, eksisi basa terjadi dengan memusnahkan basa yang rusak yang dilakukan oleh DNA glikosilase (Winarsi, 2007). F. Penetapan Karakter Ekstrak Penetapan karakter ekstrak merupakan suatu proses yang bertujuan untuk mengetahui kualitas dari eksrak yang dibuat hingga kandungan senyawa yag terkandung dalam ekstrak. Menurut literatur, tumbuhan sisik naga mengandung flavonoid. Flavonoid merupakan senyawa polar karena mempunyai sejumlah gugus


13

hidroksi yang tidak tersubstitusi atau tersubstitusi suatu gula. Oleh karena itu, umumnya flavonoid cukup larut dalam pelarut polar seperti etanol, metanol, butanol, aseton, etil asetat, dimetilsulfoksida, dimetilformamid dan air (Markham, 1988). Aktivitas sebagai antioksidan dimiliki oleh sebagian besar flavonoid karena adanya gugus hidroksi fenolik dalam struktur molekulnya (Cuvelier, Richard dan Besset, 1992). Karakterisasi simplisia meliputi penetapan kadar abu total, kadar abu tidak larut asam, kadar sari larut air dan kadar sari larut etanol, dilakukan dengan tujuan untuk menjamin keseragaman mutu simplisia agar memenuhi persyaratan standar simplisia dan ekstrak. Beberapa faktor yang dapat mempengaruhi pemeriksaan karakteristik simplisia, diantaranya adalah bahan baku simplisia, cara pembuatan dan penyimpanan simplisia. Selain itu pemeriksaan ini juga menentukan jumlah cemaran dan pengotor yang terkandung pada simplisia (Febriani, Mulyanti dan Rismawati, 2015) G. Kromatografi Lapis Tipis Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran didasarkan atas perbedaan distribusi dari komponen-komponen campuran tersebut diantara dua fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase gerak membawa zat terlarut melalui media hingga terpisah dari zat terlarut lainnya, yang terelusi lebih awal atau lebih akhir. Bila fase diam berupa zat padat yang aktif, maka teknik ini disebut kromatografi penjerapan (adsorbtion chromatography), sementara bila berupa zat cair maka disebut dengan kromatografi pembagian (partition chromatography) (Harmita, 2006).


14

Kromatografi lapis tipis adalah suatu metode pemisahan fisikokimia yang didasarkan atas penjerapan, partisi atau gabungannya. Metode ini digunakan untuk pemisahan senyawa dengan cepat dengan menggunakan zat penjerap berupa serbuk harus yang dilapiskan secara merata pada lempeng kaca (Harmita, 2006; Depkes RI, 1979). Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan penjerap berukuran kecil dengan diameter partikel antara 10-30 µm. Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam maka semakin baik kinerja KLT dalam hal efisiesi dan resolusinya. Penjerap yang sering digunakan adalah silika dan serbuk selulosa. Mekanisme sorbsi yang utama yaitu partisi dan adsorbsi (Gandjar dan Rohman, 2007). Fase gerak pada KLT dapat dipilih dari pustaka, tetapi lebih sering dengan mencoba-coba karena waktu yang diperlukan hanya sebentar. Sistem yang paling sederhana adalah campuran 2 pelarut organik karena daya elusi campuran kedua pelarut ini dapat mudah diatur sedemikian rupa sehingga pemisahan dapat terjadi secara optimal. Petunjuk dalam memilih dan mengoptimasi fase gerak, antara lain: a. Fase gerak harus memiliki kemurnian yang sangat tinggi karena KLT merupakan teknik yang sensitif b. Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa sehingga harga Rf antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan c. Untuk pemisihan dengan menggunakan fase diam polar seperti silika gel, polaritas fase gerak akan menentukan kecepatan migrasi solut yang berarti juga menentukan nilai Rf


15

d. Solut-solut ionik dan solut-solut polar lebih baik digunakan campuran pelarut sebagai fase geraknya, seperti campuran air dan metanol dengan perbandingan tertentu (Gandjar dan Rohman, 2007). H. Metode Uji Antioksidan Metode DPPH merupakan salah satu metode yang paling sering dilakukan untuk uji aktivitas antioksidan suatu tumbuhan obat. Metode DPPH menggunakan radikal bebas 2,2 Diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH) (Shivaprasad, et, al., 2005). DPPH merupakan suatu senyawa radikal nitrogen yang tidak stabil karena memiliki elektron yang tidak berpasangan yang menyebabkan DPPH memiliki sifat yang reaktif. DPPH akan mengalami reduksi melalui proses donasi hidrogen atau elektron sehingga warna DPPH dapat mengalami perubahan warna dari ungu menjadi kuning (Halliwell dan Gutteridge, 2000). Metode ini bertujuan untuk mengetahui parameter yang menunjukan aktivitas antioksidan yaitu parameter konsekuensi yang ekuivalen dapat memberikan efek aktivitas antioksidan sebesar 50% (IC50). Parameter IC50 dapat diketahui dengan menginterpretasikan hasil uji dalam suatu data eksperimental (Molyneux, 2004). Radikal DPPH memberikan serapan kuat pada panjang gelombang 517 nm dengan warna violet gelap. DPPH dapat memberikan serapan karena memiliki gugus kromofor dan auksokrom pada struktur kimianya dan dengan adanya delokalisasi elektron pada DPPH akan memberikan warna violet (Dehpour, Ebrahimzadeh, dan Nabavi, 2009).


16

Gambar 1. Struktur DPPH (Molyneux, 2004)

Gambar 2. Reduksi DPPH oleh senyawa antioksidan (Prakash, Rigelhof dan Miller, 2001)

Metode deoksi ribosa, disebut juga sebagai hydroxyl radical scavenging assay merupakan saah satu metode sederhana dalam pengukuran aktivitas antioksidan. Metode deoksiribosa memiliki sensitivitas tinggi dan tidak memerlukan alat canggih dalam analisisnya. Prinsip dari metode deoksiribosa ini berdasarkan pemecahan oksidatif 2-deoksiribosa oleh senyawa radikal hidroksil dan hasil dari pemecahan tersebut akan bereaksi dengan asam tiobarbiturat dan menghasilkan warna. Penambahan senyawa yang memiliki aktivitas antioksidan


17

akan melindungi deoksiribosa dari radikal hidroksil sehingga pembentukan warna menjadi berkurang (Haliwell, 1987). Prinsip dari uji CUPRAC (Cupric Reducing Antioxidant Capacity) adalah pembentukan kelat oleh bis (neukuproin) besi (II) menggunakan pereaksi redoks kromogenik pada pH 7. Absorbansi dari pembentukan kelat Cu (I) Ne diperoleh dengan mereaksikan asam askorbat berbagai konsentrasi dengan reagen CUPRAC. Kondisi reaksi seperti konsentrasi reagen, pH, dan waktu oksidasi pada suhu kamar dan peningkatan suhu pada percobaan dapat berasal dari sumber lain (Apak et al, 2005) I. Spektrofotometri visibel Spektrofotometri visibel merupakan salah satu teknik analisis fisika-kimia yang mengamati tentang atom atau molekul dengan radiasi elektromagnetik pada panjang gelombang 380-780 nm. Serapan maksimum suatu senyawa kimia dipengaruhi oleh adanya kromofor dan gugus auksokrom. Interaksi antara senyawa kimia yang memiliki gugus kromofor dengan radiasi elektromagnetik dan spektra serapan elektromagnetik. Tiga hal yang mungkin timbul ketika terjadi interaksi molekul dengan radiasi elektromagnetik adalah hamburan, absorbsi dan emisi (Mulja dan Suharman, 1995). Terikatnya gugus auksokrom pada gugus kromofor akan meningkatkan absorbansinya dan menggeser puncak serapan ke panjang gelombang yang lebih panjang. Peningkatan intensitas absorbsi disebut efek hiperkromik. Pergeseran panjang gelombang dibedakan menjadi pergeseran batokromik, yaitu pergeseran panjang gelombang ke arah yang lebih panjang yang disebabkan karena substitusi


18

atau pengaruh pelarut, dan pergseran hipsokromik, yaitu pergeseran serapan ke arah panjang gelombang yang lebih pendek yang disebabkan karena substitusi atau pengaruh pelarut (pergeseran biru) (Sastrohamidjojo, 2001). Hal-hal yang harus diperhatikan dalam analisis spektrofotometri UV-Vis: 1. Pembentukan molekul yang dapat menyerap sinar UV-Vis Hal yang perlu dilakukan jika senyawa yang dianalisis tidak menyerap pada daerah tersebut. Cara yang digunakan adalah dengan merubah menjadi senyawa lain atau direaksikan dengan pereaksi tertentu. Pereaksi yang digunakan harus memenuhi beberapa persyaratan yaitu: 

Reaksinya selektif dan sensitif



Reaksinya cepat, kuantitatif, dan reprodusibel



Hasil reaksi stabil dalam dalam jangka waktu yang lama

Keselektifan dapat dinaikkan dengan mengatur pH, pemakaian masking agent atau penggunaan teknik ekstraksi (Gandjar dan Rohman, 2007). 2. Waktu Operasional (Operating Time) Cara ini biasa digunakan untuk pengukuran hasil reaksi atau pembentukan warna. Tujuannya adalah untuk mengetahui waktu pengukuran yang stabil. Waktu operasional ditentukan dengan mengukur hubungan antara waktu pengukuran dengan absorbansi larutan (Gandjar dan Rohman, 2007). Pada saat awal terjadi reaksi, absorbansi senyawa yang berwarna ini meningkat sampai waktu tertentu hingga diperoleh absorbansi yang stabil. Semakin lama pengukuran, maka ada kemungkinan senyawa yang berwarna


19

tersebut menjadi rusak atau terurai sehingga intensitas warnanya turun akibatnya absorbansinya juga turun (Gandjar dan Rohman, 2007). 3. Pemilihan Panjang Gelombang Panjang gelombang yang digunakan untuk analisis kuantitatif adalah panjang gelombang yang mempunyai absorbansi maksimal. Untuk memilih panjang gelombang maksimal, dilakukan dengan membuat kurva hubungan antara absorbansi dengan panjang gelombang dari suatu larutan baku pada konsentrasi tertentu (Gandjar dan Rohman, 2007). Ada beberapa alasan mengapa harus menggunakan panjang gelombang maksimal, yaitu: 

Pada panjang gelombang maksimal, bentuk kurva kepekaannya juga maksimal karena pada panjang gelombang maksimal tersebut, perubahan absorbansi untuk setiap satuan konsentrasi adalah yang paling besar



Di sekitar panjang gelombang maksimal, bentuk kurva absorbansi datar dan pada kondisi tersebut hukum Lambert-Beer akan terpenuhi



Jika dilakukan pengukuran ulang maka kesalahan yang disebabkan oleh pemasangan ulang panjang gelombang akan kecil sekali, ketika digunakan panjang gelombang maksimal (Gandjar dan Rohman, 2007).

4. Pembuatan Kurva Baku Dibuat seri larutan baku dari zat yang akan dianalisis dengan berbagai konsentrasi. Masing-masing absorbansi larutan dengan berbagai konsentrasi diukur, kemudian dibuat kurva yang merupakan hubungan antara absorbansi (y) dengan konsentrasi (x). Penyimpangan dari garis lurus biasanya dapat


20

disebabkan oleh kekuatan ion yang tinggi, perubahan suhu, dan reaksi ikutan yang terjadi (Gandjar dan Rohman, 2007). 5. Pembacaan Absorbansi Sampel atau Cuplikan Absorban yang terbaca hendaknya antara 0,2 - 0,8 atau 15% - 70% jika dibaca sebagai transmitans. Anjuran ini ini berdasarkan anggapan bahwa kesalahan dalam pembacaan T adalah 0,005 atau 0,5% (Gandjar dan Rohman, 2007). J. Landasan Teori Radikal bebas merupakan senyawa yang memiliki elektron tidak berpasangan penyebab terjadinya mutasi patogenik yang memicu timbulnya berbagai penyakit. Radikal bebas dapat dicegah dengan gaya hidup sehat dan diredam dengan antioksidan. Antioksidan meredam radikal bebas dengan memutus reaksi dari radikal bebas. Antioksidan banyak terdapat pada tumbuhan yang ada disekitar kita, salah satunya sisik naga. Sisik naga merupakan tumbuhan epifit yang menempel pada inang. Pada penelitian (Wulandari, et al., 2013), sisik naga telah terbukti mengandung senyawa yang dapat menimbulkan aktivitas antioksidan. Sampling dilakukan pada sisik naga yang menempel pada inang jambu air karena jambu air mempunyai banyak kandungan bermanfaat yang diperkirakan akan meningkatkan aktivitas dari ekstrak sisik naga. Kandungan senyawa yang dapat menimbulkan aktivitas antioksidan diketahui melalui uji kualitatif KLT dilanjutkan uji antioksidan. Karakterisasi simplisia dan ekstrak dilakukan untuk mengetahui


21

kualitas simplisia, ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol sisik naga. Metode yang digunakan adalah DPPH, karena relatif mudah dan spesifik untuk uji antioksidan menggunakan metode ini. Simplisia sisik naga dimaserasi kemudian dibuat ekstrak kental yang kemudian menjadi larutan uji untuk dihitung IC50. Penetapan karakter dilakukan menurut Farmakope Indonesia. Untuk mengetahui kandungan senyawa pada ekstrak sisik naga yang berpotensi menimbulkan aktivitas antioksidan digunakan KLT dengan berbgai standar. Perhitungan IC50 dilakukan dengan melakukan pengukuran absorbansi menggunakan Spektrofotometer UV-Vis double beam. Larutan uji (sisik naga) dibandingkan dengan kurva baku yang dibuat dengan standar rutin dengan konsentrasi tertentu. Digunakan rutin karena rutin (dalam hal ini baku) mempunyai efek antioksidan yang sudah diketahui secara pasti kadarnya. Penurunan absorbansi yang terjadi seiring dengan meningkatnya konsentrasi ekstrak merupakan respon yang kemudian dihitung menjadi IC50. K. Hipotesis 1. Simplisia, ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tumbuhan sisik naga yang menempel pada inang jambu air memiliki kualitas yang baik sesuai dengan standar. 2. Ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tumbuhan sisik naga yang menempel pada inang jambu air memiliki aktivitas antioksidan yang dinyatakan dengan (IC50).


BAB III METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental dengan rancangan acak lengkap pola searah. Merupakan jenis penelitian eksperimental karena penelitian ini mencari hubungan sebab akibat dari ekstrak tumbuhan sisik naga yang menempel pada inang jambu air yang digunakan dengan nilai IC50 yang dihasilkan. Rancangan acak karena pengambilan sampel tumbuhan sisik naga yang menempel pada inang jambu air dilakukan secara acak, tidak ada pemilihan secara khusus. Rancangan lengkap karena terdapat kontrol positif, kontrol negatif dan kelompok perlakuan. B. Variabel dan Definisi Operasional 1. Variabel a. Variabel bebas: konsentrasi ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tumbuhan sisik naga. b. Variabel tergantung: aktivitas antioksidan konsentrasi ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tumbuhan sisik naga (%IC). c. Variabel pengacau terkendali: waktu pemanenan, tempat tumbuh. d. Variabel pengacau tak terkendali: usia tumbuhan, kondisi lingkungan.

22


23

2. Definisi operasional a.

Ekstrak diklorometan tumbuhan sisik naga adalah hasil dari maserasi simplisia tumbuhan sisik naga menggunakan penyari diklorometan selama 24 jam lalu diuapkan membentuk cairan berwarna hijau kental.

b.

Ekstrak etil asetat tumbuhan sisik naga adalah hasil dari maserasi simplisia tumbuhan sisik naga menggunakan penyari etil asetat selama 24 jam lalu diuapkan membentuk cairan berwarna hijau kental.

c.

Ekstrak metanol tumbuhan sisik naga adalah hasil dari maserasi simplisia tumbuhan sisik naga menggunakan penyari metanol selama 24 jam lalu diuapkan membentuk cairan berwarna hijau kental.

d.

Persen inhibition concentration (%IC) adalah persen yang menyatakan kemampuan ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tumbuhan sisik naga dalam meredam radikal bebas dalam hal ini DPPH.

e.

Inhibition concentration 50 (IC50) adalah konsentrasi ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tumbuhan sisik naga yang dapat meredam 50% radikal bebas (DPPH). C. Bahan Penelitian

Bahan yang digunakan dalam penelitin ini: tumbuhan sisik naga yang diperoleh dari Madukismo Kasihan Bantul Yogyakarta; bahan kimia kualitas pro analitik E.Merck berupa etanol; bahan kimia kualitas pro analitik Sigma Chem. Co., USA berupa fenol, bahan kimia kualitas teknis CV. General Labora berupa etanol dan alumunium foil, air suling, dikorometana (teknis), etil asetat (teknis), metanol


24

(teknis), toluen (pro analisis), etil asetat (proanalisis), asam asetat (pro analisis), DPPH (Aldrich), metanol (pro analisis), n-butanol (pro analisis), lempeng KLT (Merck), Eugenol (Merck), Rutin (Sigma), Asam tanat (Sigma), β sitosterol (Sigma), Vanilin (Merck), asam sulfat (Merck), Dragendorf (Sigma), FeCl3, AlCl3. D. Alat Penelitian Alat yang digunakan dalam penelitian ini, antara lain: Shaker (Innova TM 2100), vortex (Janke&Kunkel), spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu UV double beam, alat penggiling, bejana maserasi, peralatan kromatografi lapis tipis, pH meter (Eutech Instrumen pH 510) penguap putar (rotary evaporator) (Buchi R-205, Jerman), peralatan gelas, mikropipet (Acura 825, Socorex). E. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi Tanaman Determinasi

dilakukan

terhadap

tumbuhan

sisik

naga

di

Laboratorium Kebun Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta menggunakan acuan United States Department of Agriculture. 2. Pembuatan Simplisia Tumbuhan sisik naga diambil dari kebun di daerah Madukismo Kaasihan Bantul Yogyakarta. Tumbuhan sisik naga yang sudah dipetik kemudian disortasi basah. Hasil sortasi kemudian dicuci untuk menghilangkan kotoran yang menempel seperti debu dan serangga dan pengotor lainnya. Tumbuhan sisik naga kemudian dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang melekat lalu ditiriskan sampai sisa air menghilang.


25

Tumbuhan sisik naga dikeringkan dengan panas sinar matahari dengan ditutup kain hitam kemudian dalam oven pada suhu 40 ºC. Dikatakan kering jika daun dapat hancur ketika diremas dengan tangan. Tumbuhan sisik naga yang telah dikeringkan kemudian diserbuk menggunakan blender, lalu diayak menggunakan ayakan nomor 40. 3. Ekstraksi Tumbuhan Sisik Naga Ditimbang kurang lebih 500 g serbuk kering tumbuhan sisik naga kemudian dimaserasi dengan pelarut diklorometan. Maserasi dilakukan berulang-ulang dengan pelarut yang sama sampai filtrat hasil maserasi jernih. Ampas diangin-anginkan kemudian dimaserasi kembali dengan pelarut etil asetat dilanjutkan metanol, kemudian hasil maserasi disaring dan filtrat yang diperoleh dipekatkan dengan vacuum rotary evaporator pada suhu lebih kurang 50 ºC sehingga diperoleh ekstrak kental etil asetat dan ekstrak kental metanol. Masing-masing ekstrak ditimbang dan dihitung rendemen ekstrak. 4. Karakterisasi Ekstrak a.

Pemeriksaan mikroskopik simplisia Pemeriksaan mikroskopik penampang melintang dan penampang

membujur daun serta batang tumbuhan sisik naga. Daun dan batang diiris setipis mungkin supaya didapatkan hasil yang bagus ketika diamati menggunakan mikroskop. Pengamatan mikroskopi juga dilakukan serbuk tumbuhan sisik naga kering dengan bantuan kloralhidrat kemudian dipanaskan untuk melihat fragmen pengenal pada tumbuhan sisik naga.


26

b. Penetapan kadar abu total Sejumlah 2 sampai 3g serbuk, ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol ditimbang seksama dan dimasukkan ke dalam krus silika yang telah dipijarkan dan ditara, dipijarkan pelahan-lahan hingga arang habis, didinginkan dan ditimbang. Jika dengan cara trsebut arang tidak dapat dihilangkan, ditambahkan air panas, diaduk, disaring melalui kertas saring bebas abu. Kertas saring beserta sisa penyaringan dipijarkan dalam krus yang sama. Filtrat dimasukan kedalam krus, diuapkan dan dipijarkan hingga bobot tetap. Kadar abu total dihitung terhadap berat bahan uji, dinyatakan dalam % b/b. c. Penetapan kadar abu tidak larut asam Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu total dididihkan menggunakan 25 mL asam klorida encer LP selama 5 menit. Dikumpulkan bagian yang tidak larut asam, disaring melalui kertas saring bebas abu, dicuci dengan air panas, dipijarkan dalam krus hingga bobot tetap. Kadar abu yang tidak larut asam dihitung terhadap berat bahan uji, dinyatakan dalam % b/b. d. Penetapan kadar sari larut air Sejumlah 5g serbuk, ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol ditimbang seksama. Dimasukkan kedalam labu bersumbat, ditambahkan 100 mL air jenuh kloroform, dikocok berkali-kali selama 6 jam, dibiarkan selama 18 jam, disaring, diuapkan 20 mL filtrat hingga kering dalam cawan dangkal beralas datar yang telah dipanaskan 105 oC dan


27

ditara, dipanaskan sisa pada suhu 105 oC hingga bobot tetap. Dihitung kadar dalam % sari larut air. e. Penetapan kadar sari larut etanol Sejumlah 5g serbuk, ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol ditimbang seksama, dimasukkan kedalam labu bersumbat, ditambahkan 100 mL etanol 95% P, dikocok berkali-kali selama 6 jam pertama, dibiarkan selama 18 jam. Disaring cepat untuk menghindari penguapan etanol, diuapkan 20 mL filtrat hingga kering dalam cawan dangkal beralas datar yang telah dipanaskan 105 oC dan ditara, dipanaskan sisa pada suhu 105 oC hingga bobot tetap. Dihitung kadar dalam % sari larut etanol. f. Uji kandungan kimia ekstrak Ekstrak diklorometan/ekstrak etil asetat/ekstrak metanol tumbuhan sisik naga yang digunakan untuk identifikasi ekstrak secara KLT dibuat dengan melarutkan 0,5 g ekstrak diklorometan/ekstrak etil asetat/ekstrak metanol tumbuhan sisik naga dengan pelarut yang sesuai dimana ekstrak larut. Ekstrak diklorometan/ekstrak etil asetat/ekstrak metanol kemudian ditotolkan pada fase diam silika 60 GF 254 dengan menggunakan pipa kapiler sebanyak 5-10 µL. Fase gerak yang digunakan meliputi: 

toluen : etil asetat (93:7 v/v) dengan pembanding eugenol



n butanol : asam asetat : air (4:1:5 v/v) dengan pembanding rutin



n butanol : asam asetat : air (5:1:4 v/v) dengan pembanding asam tanat 0,05% dalam etanol 70%




28

etil asetat : toluen (9:1: v/v) dengan pembanding β-sitosterol Deteksi dilakukan pada sinar UV 254 dan 366 nm dan pereaksi

semprot vanillin asam sulfat, Dragendorf, FeCl3, AlCl3. Bercak yang muncul dibandingkan dengan standar. 5. Uji aktivitas antioksidan Pada

masing-masing

ekstrak

tumbuhan

sisik

naga

(ekstrak

diklorometan, ekstrak etil asetat, ekstrak metanol) diuji aktivitas antioksidan menurut metode Bloiss dengan beberapa modifikasi. Nilai IC50 dihitung dengan menggunakan rumus persamaan regresi. a. Uji pendahuluan (optimasi panjang gelombang DPPH) Larutan DPPH yang telah dibuat dengan konsentrasi 20 µg/ml ditentukan spektrum serapannya menggunakan spektrofotometer UV pada panjang gelombang 400 nm hingga 600 nm dan ditentukan panjang gelombang optimumnya. b. Pembuatan larutan 1) Pembuatan larutan DPPH Sejumlah 10 mg DPPH ditimbang dan dilarutkan dalam 100 mL metanol p.a didapatkan kosentrasi 100 µg/mL. Kemudian dipipet 20 mL kemudian ditambahkan volumenya dengan 100 mL metanol p.a (20 µg/mL).


29

2) Persiapan Larutan Uji Ekstrak a. Ekstrak diklorometan dan etil asetat Pembuatan larutan induk (konsentrasi 5000 µg/mL). Sejumlah 50 mg ekstrak ditimbang dan dilarutkan dalam 10 mL metanol p.a hingga homogen. Pembuatan larutan seri (konsentrasi 0,05; 0,25; 0,5; 0,75; dan 1 mg/mL). Sejumlah masing-masing 0,1; 0,5; 1; 1,5; dan 2 mL dipipet dan dimasukkan kedalam labu ukur 10 mL dan dicukupkan volumenya dengan metanol p.a hingga 10 mL. b. Ekstrak metanol Pembuatan larutan induk (konsentrasi 2000 µg/mL). Sejumlah 20 mg ekstrak ditimbang dan dilarutkan dalam 10 mL metanol p.a hingga homogen. Pembuatan larutan seri (konsentrasi 0,06; 0,12; 0,2; 0,35; dan 0,5 mg/mL). Dipipet masing-masing 0,3; 0,6; 1; 1,75; dan 2,5 mL dimasukkan kedalam labu ukur 10 mL dan dicukupkan volumenya dengan metanol p.a hingga 10 mL. 3) Pembuatan larutan kontrol Larutan blanko yang digunakan adalah 0,2 mL metanol p.a dimasukkan kedalam tabung reaksi dan ditambahkan 3,8 mL DPPH, dikocok hingga homogen. Didiamkan selama 30 menit (operating time).


30

4) Pembuatan larutan rutin sebagai pembanding Pembuatan larutan induk (konsentrasi 1000 µg/mL). Sejumlah 10 mg rutin ditimbang dan dilarutkan dalam 10 mL metanol p.a hingga homogen. Pembuatan larutan seri (konsentrasi 10, 20, 30, 40 dan 50 µg/mL). Dipipet masing-masing 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 mL dimasukkan kedalam labu ukur 10 mL dan dicukupkan volumenya dengan metanol p.a hingga 10 mL. b. Pengujian aktivitas antioksidan Dari masing-masing larutan uji dipipet 0,2 mL dimasukkan kedalam tabung reaksi, ditambahkan 3,8 mL DPPH 20 µg/mL, digojog hingga homogen, didiamkan selama 30 menit (reaction time) dan diukur serapannya pada panjang gelombang 516 nm (hasil orientasi). Dilakukan pengujian yang sama untuk pembanding rutin. c. Perhitungan nilai IC50 Nilai IC50 dihitung berdasarkan presentase inhibisi terhadap radikal DPPH dari masing-masing konsentrasi larutan sampel dengan rumus : %𝒊𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒔𝒊 =

𝒂𝒃𝒔 𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 − 𝒂𝒃𝒔 𝒔𝒂𝒎𝒑𝒆𝒍 × 𝟏𝟎𝟎% 𝒂𝒃𝒔 𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍

Setelah didapatkan presentasi inhibisi dari masing-masing konsentrasi, kemudian dintentukan persamaan

y = a + bx dengan

perhitungan secara regresi linear dimana x adalah konsentrasi (µg/mL) dan y adalah presentase inhibisi (%). Aktivitas antioksidan dinyatakan dengan


31

Inhibition Concentration 50% (IC50) yaitu konsentrasi sampel yang dapat meredam radikal.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Determinasi Tumbuhan Determinasi tumbuhan berfungsi untuk memastikan tumbuhan yang digunakan benar Pyrrosia piloselloides (L.) M.G. Price atau biasa disebut dengan sisik naga yang dimaksudkan menurut ciri-cirinya. Determinasi dilakukan dengan cara mencocokan sampel tumbuhan yang diambil dengan literatur yang ada. Kecocokan yang telah didapat kemudian akan menyimpulkn hingga pada nama spesies yaitu Drymoglossum piloselloides (L.) C. Presl. Karena dari awal peneliti menggunakan nama spesies Pyrrosia piloselloides (L.) M.G. Price peneliti harus mencari sinonim dan (United States Department of Agriculture, 2015) menyatakan bahwa kedua nama spesies tersebut sama atau bersinonim. Hasil determinasi didukung dengan surat determinasi (lampiran 1) yang diterbitkan oleh Laboratorium Kebun Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. B. Pengumpulan Bahan Tumbuhan sisik naga diperoleh dari pohon inang jambu air yang berada di daerah Madukismo Kasihan Bantul Yogyakarta. Sisik naga yang digunakan sebagai sampel penelitian diambil dari 3 pohon jambu air yang berbeda dengan jarak pohon kurang lebih 100m. Pengambilan sampel sisik naga dilakukan pada bulan Mei 2015 pada pukul 06.00-07.00 WIB.

32


33

Gambar 3. Jambu air (Syzygium aqueum). (dokumen pribadi) Pengambilan sampel dilakukan pagi hari karena terkait dengan kandungan metabolit sekunder yang lebih baik ketika diambil pagi hari. Pada pagi hari, tumbuhan belum terpapar sinar matahari. Kandungan metabolit sekunder akan berkurang ketika tumbuhan diambil pada siang hari karena terjadi penguapan dan proses fotosintesis. Pemanenan pada musim kemarau juga berpengaruh terhadap kondisi tumbuhan, sebab pada musim penghujan tingkat kelembapan tinggi yang membuat jamur mudah tumbuh dan banyaknya kadar air sehingga mempersulit proses pengeringan (Agoes, 2006). Dipilih herba yang kondisinya baik supaya hasil yang didapatkan juga baik, setidaknya terhindar dari serangga. Daun yang digunakan berupa tropofil dan sporofil, daun tropofil berbentuk bulat berukuran lebih kecil dari sporofil, keduanya memiliki daun yang tebal.


34

Gambar 4. Daun sisik naga. (dokumen pribadi) C. Uji Mikroskopik Uji mikroskopik merupakan salah satu uji untuk memastikan bahwa tumbuhan yang diambil dan digunakan oleh peneliti tepat sesuai denga tumbuhan yang diharapkan, dalam hal ini sisik naga. Uji mikroskopik dapat digunakan untuk uji identifikasi kebenaran dalam pengambilan sampel karena setiap tumbuhan memiliki unsur-unsur anatomi yang khas, termasuk pada sisik naga. Pemeriksaan mikroskopik dilakukan pada serbuk simplisia, irisan daun membujur dan irisan daun melintang. Menurut Materia Medika Indonesia Jilid V, pengamatan mikroskopik pada penampang irisan melintang yang melalui tulang daun sisik naga akan tampak epidermis atas yang terdiri dari 1 lapis sel yang berbentuk empat persegi panjang, kutikula tebal di antaranya terdapat sel bernoktah, stomata sedikit, kadang-kadang terdapat rambut penutup berbentuk bintang. Epidermis bawah terdiri dari 1 lapis sel yang berbentuk empat persegi panjang, kutikula tebal, stomata lebih banyak daripada epidermis atas, terkadang ada ramput penutup berbentuk bintang. Mesofil tidak mempunyai jaringan palisade, jaringan bunga karang terdiri dari beberapa lapis sel, terdapat sel sekresi, berkas pembuluh tipe konsentris amfikibral. Serbuk berwarna hijau kecoklatan. Fragmen


pengenal adalah sel

35

epidermis atas bentuk tidak beraturan, dinding tebal

bergelombang, sel epidermis bawah tidak beraturan, pada epidermis bawah terdapat stomata kriptopor dengan tipe anomisitik, sel sekresi, rambut penutup bentuk bintang, dan sel parenkim mesofil besar bentuk poligonal (DepkesRI, 1989). Sedangkan fragmen khas serbuk simplisia sisik naga yang ada pada Materia Medika Indonesia jilid V yaitu sel epidermis atas bentuk tidak beraturan, dinding tebal bergelombang, warna kuning, ada sel bernoktah. Epidermis bawah bentuk tidak beraturan, dinding tebal bergelombang, dinding berwarna kuning, terdapat stomata kriptopor dengan tipe anomisitik. Sel parenkim mesofil besar, bentuk poligonal. Rambut penutup bentuk bintang atau tangan terdiri dari 1 sampai 2 sel, panjang ujung runcing, lumen lebar, sel sekresi dengan isi berwarna kuning coklat (DepkesRI, 1989). Hasil pemeriksaan mikroskopik tumbuhan sisik naga pada pohon inang jambu air didapatkan unsur-unsur anatomi antara lain: stomata, epidermis bawah dan rambut penutup. Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk tumbuhan sisik naga pada pohon inang jambu air didapatkan unsur-unsur anatomi yaitu epidermis bawah.


Hasil Mikrokopik

MMI Jilid V

36

Keterangan 1. Stomata 2. Epidermis bawah

2 1

2 1

Sayatan permukaan bawah daun 1. Rambut penutup

1

1 1

Penampang membujur daun 1. Epidermis bawah 1

1 Fragmen serbuk simplisia

Gambar 5. Hasil uji mikroskopik tumbuhan dan serbuk sisik naga.


37

D. Pembuatan Simplisia Herba tumbuhan sisik naga yang telah dipanen kemudian disortasi basah terlebih dahulu dengan tujuan menghilangkan bahan atau tumbuhan asing. Kemudian herba sisik naga dicuci dengan air bersih dengan tujuan untuk menghilangkan pengotor khususnya pengotor polar dan debu yang menempel pada herba. Digunakan air bersih supaya herba sisik naga tidak tercemar oleh bakteri yang banyak terdapat pada air yang tidak bersih. Setelah dicuci bersih, tumbuhan sisik naga dijemur dengan bantuan panas matahari karena daunnya yang tebal sehingga perlu bantuan sinar matahari supaya proses pengeringan dapat berlangsung lebih cepat. Pada saat penjemuran, sebisa mungkin herba sisik naga dihindarkan dari sinar matahari secara langsung karena sinar matahari langsung berpotensi merusak kandungan senyawa yang terdapat pada herba sisik naga. Pengeringan merupakan proses yang sangat penting dalam pembuatan simplisia. Tujuan pengeringan adalah menurunkan kadar air, sehingga tidak mudah ditumbuhi kapang dan bakteri, menghilangkan aktivitas enzim yang bisa menguraikan kandungan zat aktif, memudahkan proses pengolahan selanjutnya, sehingga dapat lebih ringkas, tahan lama dan mudah disimpan. Selain memperpanjang umur simpan juga menentukan kualitas simplisia. Hal yang perlu diperhatikan selama proses pengeringan adalah suhu pengeringan, kelembaban udara, aliran udara, waktu pengeringan dan luas permukaan bahan. Selama proses pengeringan bahan simplisia, faktor-faktor tersebut harus diperhatikan sehingga diperoleh simplisia kering yang tidak mudah mengalami kerusakan selama penyimpanan (Pramono, 2006).


38

E. Ekstraksi Sisik naga yang telah dikeringkan kemudian diblender dengan tujuan untuk mengecilkan partikel, kemudian diayak mengunakan ayakan dengan nomer mesh 40. Ukuran partikel (simplisia) yang kecil akan memperluas area kontak dengan pelarut. Area kontak yang lebih luas meningkatkan proses penarikan senyawa kimia yang diinginkan karena jarak zat yang terlarut untuk berdifusi menuju cairan penyari lebih kecil (Rahayu, 2009). Tabel I. Nomor Mesh Ayakan dan Ukurannya.

(Netafim, 2016) Ekstraksi dilakukan pada simplisia yang sudah dibuat oleh peneliti menggunakan metode maserasi. Kelebihan dari metode maserasi yaitu pengerjaannya yang sederhana dan waktu kontak sampel dan penyari yang lama (Agoes, 2006). Pada proses maserasi terjadi pemecahan membran sel dan dinding sel akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan luar sel sehingga senyawa metabolik dapat tertarik keluar oleh penyari (Fouad, 2005). Selain itu, maserasi juga


39

tidak membutuhkan panas, hal ini juga menurunkan resiko terjadi penurunan aktifitas antioksidan yang terdapat pada sampel. Proses maserasi dilakukan selama 24 jam kemudian sampel dan ekstrak dipisahkan dengan disaring. Dilakukan remaserasi pada setiap pelarut yang digunakan hingga pelarut menjadi bening, kemudian diganti dengan pelarut yang lain, hal ini bertujuan supaya senyawa kimia yang terdapat pada simplisia sisik naga dapat terambil dengan optimal. Proses maserasi ini dibantu dengan orbital shaker untuk pengadukan. Pengadukan dapat meningkatkan kontak antara cairan penyari dengan partikel-partikel sampel sehingga ekstraksi dapat berlangsung dengan efektif (Tanjung dan Utami, 2008). Penyaringan menggunakan kain putih bersih yang telah dijenuhkan menggunakan penyari terlebih dahulu sebelum digunakan. Menggunakan kain bertujuan untuk meningkatkan efisiensi. Ekstrak cair yang didapatkan dari hasil penyaringan kemudian dipekatkan menggunakan vacuum rotary evaporator hingga mengental. Prinsip kerja dari vacuum rotary evaporator yaitu menguapkan pelarut dengan menurunkan tekanan sehingga pelarut akan menguap pada suhu dibawah titik didihnya sehingga suhu yang diperlukan untuk pemanasan tidak tinggi, sekitar 50-60 oC. Penguapan menggunakan vacuum rotary evaporator harus dihentikan sebelum ekstrak mengering karena akan kesulitan pada saat pengeluaran ekstrak dari LAB. Untuk mengoptimalkan penguapan penyari, penguapan dilanjutkan dengan waterbath pada suhu 60 oC dan penyimpanan ekstrak pada oven dengan suhu 40 oC hingga bobot tetap untuk menghitung rendemen. Penggunaan pelarut dalam suatu metode ekstraksi harus disesuaikan dengan kepolaran senyawa-senyawa yang diinginkan. Pelarut polar cenderung lebih


40

melarutkan senyawa yang lebih polar, dalam simplisia bahan alam dan pelarut non polar akan melarutkan senyawa yang lebih non polar sehingga ekstraksi akan lebih efisien dalam menyari senyawa alam yang diinginkan (Heinrich, et al., 2012). Dalam penelitian kali ini peneliti menggunakan 3 pelarut yaitu diklorometan, etil asetat dan metanol. Jika dilihat dari kepolarannya, urutan proses pengambilan senyawa kimia berawal dari senyawa non polar–polar dengan teori like dissolve like dimana pelarut polar cenderung akan mengambil senyawa polar, demikian juga dengan pelarut non polar. Tujuan digunakan 3 pelarut yaitu supaya senyawa pada ekstrak tumbuhan sisik naga dapat terambil dengan optimal. Menurut Reichardt dan Welton (2011), diklorometan merupakan pelarut atau penyari yang bersifat non polar, etil asetat semi polar dan metanol cenderung dapat mengambil senyawa-senyawa polar. Jika dilihat dari rendemen yang didapatkan, dapat dikatakan bahwa sisik naga mempunyai kandungan senyawa kimia bersifat polar yang lebih dominan. Tabel II. Data Rendemen Ekstrak Diklorometan, Etil Asetat dan Metanol. Nama ekstrak Cawan kosong Cawan + isi Berat ekstrak Rendemen Diklorometan 56,2379 g 74,7981 g 18,5602 g 3,71204% Etil asetat 51,8946 g 57,2253 g 5,3307 g 1,06614% Metanol 56,5946 g 117,2851 g 60,6905 g 12,1381%

F. Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak Uji karakterisasi simplisia dan ektstrak bertujuan untuk memastikan bahwa simplisia dan ekstrak yang digunakan oleh peneliti memenuhi standar mutu dan kualitas yang telah ditentukan. Hal ini penting dilakukan apalagi jika simplisia yang digunakan dibuat sendiri oleh peneliti seperti yang dilakukan pada penelitian ini.


41

Prosedur uji karakterisasi simplisia dan ekstrak ini mengacu pada Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Uji yang dilakukan meliputi: 1. Uji kadar abu total Tujuan dari uji kadar abu total adalah untuk melihat gambaran kandungan mineral internal dan eksternal berupa senyawa organik dan anorganik yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya ekstrak (Depkes RI, 2000). Penetapan kadar abu dilakukan dengan memijarkan serbuk dan ekstrak menggunakan tanur. Serbuk atau ekstrak diletakan pada krus platina yang tahan terhadap temperatur tinggi kemudian dipijarkan hingga menjadi abu. Pemijaran dengan temperatur tinggi bertujuan untuk mendetruksi senyawa organik yang mengandung karbon sehingga akan menguap dan tertinggal hanya bahan anoranik baik yang logam maupun non logam. Tabel III. Data Kadar Abu Total. % Kadar abu total Serbuk Ekstrak Ekstrak etil Ekstrak Replikasi diklorometan asetat metanol 1 6,7394 % b/b 2,8661 % b/b 4,1110 % b/b 3,2546 % b/b 2 5,5806 % b/b 3,0865 % b/b 2,9093 % b/b 3,0727 % b/b 3 4,6422 % b/b 2,9582 % b/b 2,7238 % b/b 3,0163 % b/b Kadar abu total simplisia menurut Materia Medika Indonesia jilid V tidak boleh lebih dari 8%, jika dilihat dari tabel III data pengujian kadar abu total yang didapatkan peneliti, dapat dikatakan bahwa simplisia yang dibuat oleh peneliti telah memenuhi standar yang telah ditentukan oleh MMI jilid V.


42

2. Uji kadar abu tidak larut asam Uji ini bertujuan untuk mengetahui jumlah abu yang diperoleh dari faktor eksternal, berasal dari pengotor yang berasal dari pasir atau tanah silikat (Depkes RI, 2000). Uji penetapan kadar abu tidak larut asam dilakukan dengan cara mendidihkan abu simplisia dan ekstrak hasil penetapan kadar abu total dengan asam Klorida encer P dengan tujuan untuk melarutkan bahan anorganik logam yang terlarut dalam asam kuat, sehingga yang tersisa adalah bahan anorganik non logam. Tabel IV. Data Pengujian Kadar Abu Tidak Larut Asam. % Kadar abu tidak larut asam Serbuk Ekstrak Ekstrak etil Ekstrak Replikasi diklorometan asetat metanol 1 0,4079 % b/b 0,2338 % b/b 0,9529 % b/b 0,4 % b/b b b b 2 0,6122 % /b 0,4109 % /b 0,7415 % /b 0,389 % b/b 3 0,4941 % b/b 0,1671 % b/b 0,7821 % b/b 0,3501 % b/b Jika dilihat dari data uji kadar abu tidak larut asam yang diperoleh peneliti pada tabel IV kemudian dibandingkan dengan literatur yang telah ditetapkan oleh Materia Medika Indonesia jilid V yaitu tidak lebih dari 4,5 %, dapat dikatakan bahwa simplisia telah memenuhi standar yang ditetapkan oleh MMI jilid V. 3. Uji kadar sari larut air Uji kadar sari larut air bertujuan untuk memberikan gambaran awal jumlah senyawa yang dapat tersari degan pelarut air dari suatu simplisia dan ekstrak (Depkes RI, 2000). Air yang digunakan pada uji ini adalah air-kloroform. Kloroform ditambahkan dalam pelarut untuk mencegah terjadinya pembusukan zat selama


43

maserasi karena air sangat berpotensi menjadi tempat tumbuh bagi mikroba yang dapat menyebabkan pembusukan. Dalam penetapan kadar sari larut air, sejumlah simplisia dan ekstrak disari dengan pelarut air-kloroform. Proses maserasi ini bertujuan agar senyawa dalam simplisia dan ekstrak dapat tereksitasi ke dalam pelarut, kemudian maserat disaring dan diuapkan diuapkan untuk menghilangkan pelarut. Tabel V. Data Pengujian Kadar Sari Larut Air. % Kadar sari larut air Serbuk Ekstrak Ekstrak etil Ekstrak Replikasi diklorometan asetat metanol b b b 1 24,5549 % /b 1,7784 % /b 15,6721 % /b 83,1518 % b/b 2 24,3365 % b/b 4,2555 % b/b 15,1781 % b/b 73,6732 % b/b 3 24,4322 % b/b 1,6018 % b/b 14,919 % b/b 78,8817 % b/b Uji kadar sari larut air yang dilakukan oleh peneliti disajikan pada tabel V. Menurut Materia Medika Indonesia jilid V, kadar sari yang larut dalam air pada simplisia yang memenuhi syarat yaitu tidak kurang dari 25,5%. Jika dibandingkan dengan data yang didapatkan oleh peneliti, simplisia sisik naga inang jambu air tidak memenuhi standar yang telah ditentukan menurut Materia Medika Indonesia jilid V. Hal ini dapat disebabkan karena sedikit kandungan dari simplisia sisik naga pohon inang jambu air yang dapat larut dalam air. 4. Uji kadar sari larut etanol Uji kadar sari larut etanol bertujuan untuk memberikan gambaran awal jumlah senyawa yang dapat tersari degan pelarut etanol dari suatu simplisia dan ekstrak (Depkes RI, 2000). Digunakan pelarut etanol 95% dengan tujuan agar senyawa-senyawa yang dapat tersari lebih optimal. Setelah dimaserasi


44

selama 24 jam, maserat disaring dan diuapkan untuk menghilangkan pelarutnyanya. Tabel VI. Data Pengujian Kadar Sari Larut Etanol. % Kadar sari larut etanol Serbuk Ekstrak Ekstrak etil Ekstrak Replikasi diklorometan asetat metanol b b b 1 25,3760 % /b 20,8984 % /b 48,6896 % /b 72,3463 % b/b 2 23,3859 %b/b 20,7057 % b/b 48,1501 % b/b 81,1258 % b/b 3 44,7363 %b/b 20,3409 % b/b 52,3617 % b/b 84,1402 % b/b Menurut Materia Medika Indonesia jilid V, kadar sari yang larut dalam etanol pada simplisia tidak boleh kurang dari 6%. Jika dibandingkan dengan tabel VI data uji kadar sari larut etanol yang dilakukan oleh peneliti pada simplisia daun sisik naga dapat dikatakan bahwa simplisia telah memenuhi kriteria yang telah ditentukan dalam MMI jilid V. Sedangkan dalam MMI jilid V tidak menetapkan kadar sari larut etanol untuk ekstrak. G. Uji Kromatografi Lapis Tipis Pada penelitian ini, uji KLT bertujuan untuk mengetahui kandungan pada ekstrak dengan menggunakan standar sebagai pembanding. Kromatografi lapis tipis merupakan proses pemisahan menggunakan fase diam dan fase gerak. Fase diam yang digunakan dalam penelitian ini adalah silika gel GF254, silika gel dipanaskan terlebih dahulu pada suhu 110 oC selama 30 menit supaya penyerapan dan elusi dapat berjalan dengan baik, karena keberadaan air dalam silika dapat mengganggu elusi. Fase gerak dalam penelitian ini berfungsi sebagai pelarut pengembang yang bergerak secara menaik disepanjang fase diam. Dalam penelitian ini optimasi fase gerak dilakukan dengan menggunakan empat jenis fase gerak dan empat pembanding, yaitu toluen : etil asetat (93:7 v/v) dengan pembanding eugenol, n butanol : asam asetat : air (4:1:5 v/v) dengan


45

pembanding rutin, n butanol : asam asetat : air (5:1:4 v/v) dengan pembanding asam tanat dan etil asetat : toluen (9:1: v/v) dengan pembanding β-sitosterol . Fase gerak yang digunakan dalam KLT harus memiliki kemurnian yang tinggi, sehingga digunakanlah pelarut pro analisis dalam penelitian ini. Deteksi yang digunakan dalam penelitian ada deteksi fisika dan kimia. Deteksi fisika menggunakan lampu UV 254 nm dan 366 nm, sedangkan deteksi kimia menggunakan FeCl3 dan AlCl3. Fase Diam

: Silika gel GF254

Fase Gerak

: Toluen : Etil asetat (93:7 v/v)

Pembanding

: Eugenol

No.

1.

2.

3. 4.

Tabel VII. Data KLT dengan Pembanding Eugenol. Ekstrak Deteksi Pereaksi Deteksi UV 254 Deteksi UV 366 Kimia (FeCl3) Rf Warna Rf Warna Rf Warna Dikloro 0,16 Hijau 0,3 Pemada 0,16 Merah metan 0,19 man 0,19 0,34 0,28 0,34 0,55 0,63 0,68 0,81 Etil 0,15 Merah Asetat 0,17 0,27 0,31 0,33 0,55 0,62 Metanol 0,32 Merah Standar 0,51 Ungu 0,51 Pemada 0,11 Biru Eugenol man 0,31 0,55 Dari hasil KLT pada tabel VII, menunjukkan bahwa ekstrak diklorometan

dan etil asetat mengandung eugenol yang ditunjukan oleh nilai rf yang sama (dicetak warna merah) dari ekstrak dan standar eugenol sebagai pembanding. Akan


46

tetapi jika dilihat pada UV 366 (lampiran 10), warna pemendaran yang ditimbulkan oleh standar eugenol dan sampel berbeda. Dengan adanya perbedaan warna yang ditimbulkan, maka belum bias dikatakan bahwa sampel mengandung eugenol. Pada standar eugenol didapatkan beberapa rf, hal ini dapat disebabkan karena standar eugenol yang digunakan tidak murni. Fase Diam

: Silika gel GF254

Fase Gerak

: n butanol : asam asetat : air (4:1:5 v/v)

Pembanding

: Rutin

No.

1.

2.

3.

4.

Tabel VIII. Data KLT dengan Pembanding Rutin (Flavonoid). Ekstrak Deteksi Pereaksi Deteksi UV 254 Deteksi UV 366 Kimia (AlCl3) pada UV 366 Rf Warna Rf Warna Rf Warna Dikloromet 0,45 Putih 0,88 Pemada 0,88 Merah an 0,52 man Etil Asetat

0,52 Kuning 0,57 Biru 0,6 Biru 0,73 muda Metanol 0,15 Kuning 0,15 Pemada 0,15 Biru 0,39 0,65 man 0,41 0,41 Pemada 0,52 0,52 man 0,65 0,6 0,77 0,65 Biru Rutin 0,52 Kuning 0,52 Pemada 0,52 Pemada (flavonoid) 0,6 man man Dari hasil uji KLT pada tabel VIII, menunjukan bahwa hasil uji kualitatif KLT

dari ekstrak etil asetat dan metanol sisik naga inang jambu air memiliki kandungan flavonoid. Hal ini dapat dilhat dari nilai rf (dicetak warna merah) pada ekstrak etil asetat, metanol dan standar rutin sebagai pembanding yaitu 0,52 dengan deteksi menggunakan AlCl3 dan dalam sinar UV 366 nm. Adanya flavonoid dapat


47

teridentifikasi dengan pereaksi amoniak, NaOH, AlCl3, dan sitroborat yang ditunjukan dengan warna kuning (Mabry, et al., 1970). Fase Diam

: Silika gel GF254

Fase Gerak

: n butanol : asam asetat : air (5:1:4 v/v)

Pembanding

: Asam Tanat 0,05% dalam etanol 70%

No.

1. 2. 3. 4.

Tabel IX. Data KLT dengan Pembanding Asam Tanat (Tanin). Ekstrak Deteksi Pereaksi Deteksi UV 254 Deteksi UV 366 Kimia (FeCl3) Rf Warna Rf Warna Rf Warna Dikloro 0,85 Hijau 0,85 Pemadaman 0,85 Merah metan Etil 0,85 Hijau 0,85 Pemadaman 0,85 Merah Asetat 0,55 Biru Metanol 0,1 Hitam 0,1 Pemadaman 0,42 Biru 0,63 0,63 Asam 0,1 Hitam 0,1 Pemadaman 0,63 Kuning tanat 0,72 (tanin) Dari hasil uji kualitatif KLT pada tabel IX, menunjukan bahwa ekstrak

metanol sisik naga pada pohon inang jambu air mengandung tanin. Hal ini dapat dilihat dari nilai rf (dicetak warna merah) pada ekstrak dan standar tanin yaitu 0,1. Deteksi pada sinarUV 254 nm terjadi pemadaman sedangkan deteksi menggunakan FeCl3 terjadi perubahan warna menjadi hitam. Adanya tanin dalam bahan uji dapat diidentifikasi dengan menambahkan garam gelatin dalam ekstrak etanol bahan uji, maka akan terbentuk endapan (Farnsworth, 1966). Pereaksi lain yang sering digunakan untuk identifikasi tanin adalah FeCl3, garam fast blue, dan prusian blue, tannin dengan FeCl3 akan membentuk kompleks yang berwarna biru sampai hitam, dengan garam fast blue berwarna merah karena terbentuknya senyawa diazo, dan berwarna biru dengan prusian blue karena terjadi oksidasi dengan adanya garam feri (Jork et al., 1990).


Fase Diam

: Silika gel GF254

Fase Gerak

: etil asetat : toluen (9:1: v/v)

Pembanding

: β-sitosterol

No.

1. 2. 3. 4.

48

Tabel X. Data KLT dengan Pembanding Β-Sitosterol (Steroid) Ekstrak Deteksi Deteksi UV 254 Deteksi UV 366 Pereaksi Kimia (FeCl3) Rf Warna Rf Warna Rf Warna Dikloro 0,72 Hijau 0,54 Pemadaman 0,66 Merah metan 0,72 0,72 Etil 0,72 Hijau 0,72 Pemadaman 0,72 Merah Asetat Metanol 0,72 Merah 0,37 Biru Steroid 0,66 Ungu 0,66 Pemadaman 0,66 Biru Dari hasil KLT pada tabel X, menunjukkan bahwa pada ekstrak

diklorometan sisik naga pada pohon inang jambu air mengandung steroid. Hal ini disebabkan karena nilai rf (dicetak warna merah) yang dihasilkan sama pada deteksi sinar UV 366 nm pada ekstrak dan pembanding standar β-sitosterol yaitu sebesar 0,66. H. Uji Aktivitas Antioksidan (DPPH) 1. Penentuan panjang gelombang maksimum (lamda max) Pengujian antioksidan dengan metode DPPH diawali dengan scanning panjang gelombang maksimum DPPH karena yang akan dideteksi oleh Spektrofotometer UV adalah DPPH. Penentuan panjang gelombang serapan maksimum bertujuan untuk memperoleh panjang gelombang yang akan digunakan untuk mengukur serapan sampel. Digunakan panjang gelombang maksimum karena menurut Gandjar dan Rohman (2007) pada panjang

gelombang tersebut

perubahan

sedikit

konsentrasi

akan


49

menghasilkan perubahan absorbansi yang signifikan dengan kata lain pengukuran lebih peka atau sensitif. Scanning panjang gelombang maksimum larutan DPPH dilakukan pada range 600-400 nm. Penentuan panjang gelombang menggunakan DPPH dengan konsentrasi 20 µg/ml dan didapatkan panjang gelombang maksimum sebesar 516 nm, sedangkan menurut (Blois, Kedare and Singh, 2011) panjang gelombang serapan maksimum DPPH secara teoretis adalah 517 nm). Perbedaan panjang gelombang yang diperoleh dengan teoretis masih dapat diterima karena menurut Farmakope Indonesia edisi IV (1995), perbedaan panjang gelombang yang masih diperbolehkan yaitu 2 nm. 2. Penentuan Operating Time (OT) Operating time ditentukan untuk mengetahui waktu yang dibutuhkan agar suatu reaksi berlangsung dengan sempurna. Penentuan OT dilakukan dengan mengukur absorbansi larutan campuran antara DPPH 3,8 ml dengan rutin 0,2 ml pada panjang gelombang serapan maksimum yang telah didapatkan yaitu 516 nm memggunakan Spektrofotometer UV-Vis. Pengukuran dilakukan sebanyak 3 kali dengan konsentrasi rutin 0,005 mg/ml; 0,025 mg/ml dan 0,05 mg/ml. Penggunaan tiga konsentrasi tersebut diharapkan dapat merepresentasikan operating time dari konsentrasi yang berbeda. Pengukuran dilakukan setiap 5 menit, dimulai pada menit ke-5 sampai menit ke-60. Operating time ditentukan berdasarkan waktu ketika nilai absorbansi mulai stabil.


50

Tabel XI. Data Absorbansi Penentuan Operating Time. Konsentrasi Rutin 0,005 0,015 0,025 Keterangan mg/ml mg/ml mg/ml Menit ke-5 0,655 0,621 0,575 Menit ke-10 0,654 0,616 0,563 Menit ke-15 0,654 0,612 0,553 Menit ke-20 0,654 0,608 0,546 Menit ke-25 0,653 0,605 0,541 Menit ke-30 0,653 0,604 0,538 OT Menit ke-35 0,654 0,603 0,536 Menit ke-40 0,655 0,603 0,538 Menit ke-45 0,655 0,601 0,540 Menit ke-50 0,657 0,603 0,541 Menit ke-55 0,658 0,604 0,541 Menit ke-60 0,659 0,604 0,541

KURVA OPERATING TIME 0.7

Absorbansi

0.65

0,005 mg/ml

0.6

0,015 mg/ml 0,025 mg/ml 0.55

0.5 0

10

20

30

40

50

60

70

Waktu (menit)

Gambar 6. Kurva hasil absorbansi operating time tiap satuan waktu. Dari data operating time yang diperoleh pada tabel XI dan gambar 6 dapat ditentukan bahwa OT dari DPPH dengan rutin adalah 30 menit, yang berarti reaksi sudah berjalan sempurna setelah 30 menit.


51

3. Uji aktivitas antioksidan rutin sebagai pembanding Pengukuran aktivitas antioksidan rutin sebagai pembanding menggunakan metode DPPH. Metode DPPH merupakan metode uji anktivitas antioksidan menggunakan radikal bebas yang umum, sederhana, cepat dan sampel serta bahan kimia yang digunakan hanya sedikit. Pengukuran menggunakan Spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 516 nm dan operating time 30 menit. Prinsip dari metode DPPH adalah interaksi antioksidan dengan DPPH baik secara transfer elektron atau radikal hidrogen, antioksidan akan menetralkan karakter radikal bebas dari DPPH. Jika semua elektron pada radikal bebas DPPH telah berpasangan, maka warna larutan akan berubah dari ungu menjadi kuning terang (Green, 2004). Dari teori diatas, dapat dikatakan selanjutnya bahwa semakin kuat aktivitas antioksidan maka semakin banyak elektron bebas yang akan berpasangan yang menyebabkan perubahan warna semakin kuning cerah. Warna kuning cerah ini yang ketika diukur absorbansinya menggunakan Spektrofotometer UV-Vis akan menimbulkan absorbansi yang kecil (Molyneux, 2004). Rutin termasuk dalam golongan senyawa flavonoid yang mempunyai gugus OH fenolat yang telah terbukti dapat menimbulkan aktivitas antioksidan sehingga dapat digunakan sebagai pembanding. Kurva baku rutin sebagai pembanding dibuat dengan menyiapkan lima konsentrasi rutin sebagai seri dan dilakukan replikasi sebanyak tiga kali. Replikasi dilakukan dengan tujuan untuk melihat keterulangan data


52

sehingga data yang diperoleh lebih valid dan dapat dipercaya kebenarannya. Jika dilihat dari data yang diperoleh, dapat dikatakan bahwa %IC akan meningkat seiring dengan meningkatnya konsentrasi dari seri rutin. Settelah didapatkan data %IC kemudian digunakan untuk menghitung persamaan regresi linear. Parameter aktivitas antioksidan pada suatu senyawa atau ekstrak dinyatakan dalam IC50. IC50 merupakan konsentrasi dari senyawa atau ekstrak yang mempunyai aktivitas antioksidan yang dapat meredam radikal bebas (dalam penelitian ini DPPH) sebesar 50% yang diperoleh dari suatu persamaan regresi linear yang menyatakan hubungan antara konsentrasi senyawa atau ekstrak dengan % IC. Semakin kecil konsentrasi yang dapat menimbulkan IC50 maka aktivitas antioksidan dari senyawa atau ekstrak tersebut semakin baik (Zou, Lu dan Wei, 2004). Tabel XII. Konsentrasi, %IC dan Persamaan Regresi Linier Rutin Replikasi Konsentrasi rutin % IC Persamaan regresi linear (mg/ml) 0,01 17,21170 0,02 26,85026 y = 912,22x + 7,9862 1 0,03 34,42341 r = 0,998899 0,04 44,06196 0,05 54,21687 0,01 18,93287 0,02 29,60413 y = 777,97x + 12,22 2 0,03 34,59552 r = 0,994937 0,04 44,06196 0,05 50,60241 0,01 22,71945 0,02 28,05508 y = 755,59x + 14,269 3 0,03 37,3494 r = 0,997296 0,04 44,06196 0,05 52,4957


53

Dari data pada tabel XII, dapat dilihat bahwa semakin tinggi konsentrasi rutin yang digunakan, aktivitas antioksidan (%IC) yang ditimbulkan juga semakin besar. Hal ini disebabkan karena semakin banyak pula pendonor atom untuk radikal DPPH sehingga radikal DPPH menjadi lebih stabil. Nilai r menunjukan koefisien korelasi regresi linear antara rutin dengan %IC. Dari kurva (lampiran 11) dapat dilihat bahwa hubungan antara konsentrasi rutin dengan %IC korelasinya berbanding lurus, artinya semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka %IC juga semakin besar. Persamaan regresi linear yang didapatkan digunakan untuk menghitung IC50. 4. Uji aktivitas antioksidan sampel Tabel XIII. Konsentrasi, %IC dan Persamaan Regresi Linier Ekstrak Diklorometan Replikasi Konsentrasi % IC Persamaan regresi linear ekstrak diklorometan (mg/ml) 0,05 3,598485 0,25 11,36364 y = 53,109x + 0,9493 1 0,5 22,34848 r = 0,993881 0,75 41,09848 1 52,27273 0,05 8,118081 0,25 12,91513 y = 54,469x + 2,8458 2 0,5 22,69373 r = 0,996243 0,75 40,2214 1 53,69004 0,05 3,787879 0,25 10,98485 y = 53,88x - 0,5851 3 0,5 25,94697 r = 0,997948 0,75 39,96212 1 53,78788


54

Tabel XIV. Konsentrasi, %IC dan Persamaan Regresi Linier Ekstrak Etil Asetat Replikasi Konsentrasi %IC Persamaan regresi linear ekstrak etil asetat (mg/ml) 0,05 2,72373 0,25 11,47859 y = 50,391x + 0,4078 1 0,5 25,29182 r = 0,998899 0,75 36,18677 1 50,77821 0,05 2,755905 0,25 12,99212 y = 53,556x + 0,1276 2 0,5 27,75590 r = 0,999650 0,75 40,35433 1 53,34645 0,05 2,669405 0,25 12,32033 y = 57,822x - 1,0705 3 0,5 26,69405 r = 0,997647 0,75 44,55852 1 55,85216 Tabel XV. Konsentrasi, %IC dan Persamaan Regresi Linier Ekstrak Metanol Replikasi Konsentrasi % IC Persamaan regresi linear ekstrak metanol (mg/ml) 0,06 8,11808 0,12 12,91513 y = 106,62x + 1,2986 1 0,2 22,69373 r = 0,998299 0,35 40,2214 0,5 53,69004 0,06 7,01107 0,12 13,65314 y = 106,2x + 0,369 2 0,2 20,1107 r = 0,998849 0,35 38,37638 0,5 53,32103 0,06 7,590133 y = 103,03x + 0,9159 0,12 13,66224 r = 0,995289 3 0,2 21,82163 0,35 33,96584 0,5 54,26945


55

Tabel XVI. Nilai IC50 Rutin dan Masing-Masing Ekstrak Rutin Replikasi IC50 (µg/mL) Rerata ± SD 1 46,05 2 48,56 47,300±1,255 3 47,29 Ekstrak diklorometan sisik naga Replikasi IC50 (µg/ml) Rerata ± SD 1 923,58 2 865,71 902,136±31,711 3 917,12 Ekstrak etil asetat sisik naga Replikasi IC50 (µg/ml) Rerata ± SD 1 984,15 2 931,22 920,526±69,588 3 846,21 Ekstrak metanol sisik naga Replikasi IC50 (µg/ml) Rerata ± SD 1 456,77 2 467,33 466,833±9,824 3 476,40 Persamaan regresi linier dan hasil %IC ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol sisik naga ditunjukan pada tabel XIII, XIV dan XV. Korelasinya sama dengan rutin pada tabel XII, yaitu %IC meningkat seiring dengan kenaikan dari konsentrasi ekstrak. Konsentrasi ekstrak dibuat berbeda dan cenderung lebih besar dari konsentrasi rutin dengan tujuan untuk mendapatkan %IC lebih dari 50. Jika %IC tidak mencapai 50, IC50 yang didapatkan nantinya merupakan hasil ekstrapolasi yang kurang dapat dipercaya kebenaran datanya. Standar deviasi (SD) menunjukan variansi data yang diperoleh, dalam hal ini data yang diperoleh pada setiap replikasi. Standar deviasi nilainya cenderung mengikuti nilai mean. Apabila mean yang diperoleh besar maka nilai SD juga cenderung


56

besar, demikian pula sebaliknya jika nilai mean kecil, nilai SD juga akan cenderung kecil (Budiarto, 2002). Tabel XVII. Kategori Nilai IC50 pada Rutin dan Setiap Ekstrak (Fidrianny, Darmawanti dan Sukrasno, 2014).

Sampel

IC50 (µg/ml)

Tingkat Aktivitas Antioksidan (IC50) dengan Metode DPPH Sangat Kuat Sedang Lemah Kuat (< 50 (50-100 (101-150 (>150 µg/ml) µg/ml) µg/ml) µg/ml) ѵ ѵ

Rutin 47,3 Ekstrak 902,136 Diklorometa n Ekstrak Etil 920,526 ѵ Asetat Ekstrak 466,833 ѵ Metanol Menurut Fidrianny, Darmawanti dan Sukrasno (2014), rutin masuk dalam golongan antioksidan kuat, sedangkan ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol sisik naga pada pohon inang jambu air masuk dalam kategori antioksidan lemah.

NILAI IC 50 RUTIN DAN EKSTRAK SISIK NAGA Konsentrasi (µg/ml)

1000 800 600 400 200 0 % IC

Rutin 47.3

Diklorometan 902.13667

Etil asetat 920.5267

Metanol 466.8333

Gambar 7. Histogram perbandingan nilai IC50 rutin dan ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat serta ekstrak metanol sisik naga.


57

Setelah didapatkan data IC50 (tabel XVI) kemudian dilakukan uji statistik terhadap data yang diperoleh untuk memastikan perbedaan yang bermakna antara nilai IC50 rutin dan ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat serta ekstrak metanol sisik naga. Uji yang pertama dilakukan adalah uji normalitas Shapiro-wilk karena jumlah data yang diuji kurang dari 50 (Dahlan, 2012). Uji dilakukan pada data IC50 rutin dan ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat serta ekstrak metanol sisik naga untuk mengetahui apakah data yang didapatkan terdistribusi secara normal atau tidak. Uji normalitas data akan menentukan jenis uji statistik selanjutnya yang akan digunakan apakah uji parametrik (terdistribusi normal) atau non-parametrik (terdistribusi tidak normal). Pada uji normalitas, data yang didapatkan terbukti terdistribusi normal apabila p-value >0,05. Hasilnya adalah p-value untuk rutin sebesar 0,987; p-value ekstrak diklorometan sisik naga 0,195; p-value ekstrak etil asetat sisik naga 0,745; dan p-value ekstrak metanol sisik naga 0,916 sehingga dapat disimpulkan bahwa rutin dan ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat serta ekstrak metanol sisik naga memiliki data yang terdistribusi normal dan dapat dilanjutkan untuk uji parametrik. Uji statistik kedua yaitu uji parametrik (uji t tidak berpasangan). Uji ini bertujuan untuk mengetahui apakah ada perbedaan antara IC50 rutin dan ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat serta ekstrak metanol sisik naga. Hasil yang diperoleh nilai p tidak terdeteksi karena sangat kecil <0,05 dengan taraf kepercayaan 95%. Sehingga dapat disimpulkan bahwa terdapat signifikansi perbedaan antara nilai IC50 rutin dan ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat serta ekstrak metanol sisik naga. Sehingga, dapat disimpulkan bahwa ekstrak


58

diklorometan, ekstrak etil asetat serta ekstrak metanol sisik naga memiliki aktivitas antioksidan yang lebih kecil daripada rutin dengan perbedaan yang bermakna.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan 1. Dari uji karakteristik yang telah dilakukan simplisia sisik naga inang jambu air memenuhi standar yang ditetapkan oleh MMI jilid V, kecuali pada uji kadar sari larut air. 2. Berdasarkan nilai IC50 yang didapatkan melalui uji aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol sisik naga mempunyai aktivitas antioksidan yang masuk dalam kategori lemah dibandingkan dengan IC50 rutin.

B. Saran 1. Perlu dilakukan uji aktivitas antioksidan pada sisik naga yang menempel pada pohon inang selain jambu air untuk membandingkan pengaruh inang terhadap aktivitas antioksidan dari tumbuhan sisik naga. 2. Perlu dilakukan fraksinasi untuk mencari senyawa aktif dari ekstrak khususnya ekstrak metanolik tanaman sisik naga yang mempunyai aktivitas antioksidan paling besar.

59


60

DAFTAR PUSTAKA Agoes, G., 2006, Teknologi Bahan Alam (Serial Farmasi Industri-2), edisi revisi, Penerbit ITB, Bandung, hal. 10-20, 31-32. Apak, R., Guclu, K., Ozyurek, M., Karademir, S.E., Altun, M., 2005, Total Antioxidant Capacity Assay of Human Serum Using Copper (II)Neucuproine as Chromogenic Oxidant: The CUPRAC Method, Free Radiac Res., (39), 949-961. Bloiss M.S, 1958, Antioxidant Determinations by The Use of Stable Free Radicals, Nature, 181, 1199-1200. Budiarto, E., 2002, Biostatistika untuk Kedokteran dan Kesehatan Masyarakat, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, hal. 95. Cuvelier, M. E., Richard, H., dan Besset, C., 1992, Comparison of the Antioxidative of Some Acid Phenols: Structure-Activity Relationship, Biosci. Biotechmol. Biochem, 56 (2), 324-325. Dahlan, 2012, Statistik untuk Kedokteran dan Kesehatan, Salemba Medika, Jakarta, hal. 54, 57. Dehpour, A. A., Ebrahimzadeh, M. A, Nabavi, S. F., 2009, Antioxidant Activity of Methanol Extract of Ferula Assafoetida and its Essential Oil Composition, Grasas Aceites, 60 (4), 405-412. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1986, Sediaan Galenika, Jilid 2, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 11-12. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1989, Materia Medika Indonesia, Jilid V, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. xviii, 184188. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 10-11. Febriani, D., Mulyanti, D., Risnawati, E., 2015, Karakterisasi Simplisia dan Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona Muricata Linn), Prosiding Penelitian SPeSIA Unisba, 475-480.


61

Fidrianny, I., Darmawanti, A., dan Sukrasno, Antioxidant Capacities From Different Polarities Extracts of Cucurbitaceae Leaves Using Frap, DPPH Assays And Correlation With Phenolic, Flavonoid, Carotenoid Content, International Journal of Pharmacy nad Pharmaceutical Sciences, 2014, (6): 858-862. Fouad,

T., 2005, Antioxidant, Nature, and Chemistry, http://www.thedoctorslongue.net/medlongue/articles/antioxidant, diakses tanggal 12 November 2015.

Farnsworth, N.R., 1966, Biological and Phytochemical Screening of Plants, J. Pharm. Sci.,55 (3), 225-273. Gandjar, I., G., dan Rohman, A., 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, hal. 252-256, 324, 354, 359. Harborne, J. B., 1987, Metode Fitokimia, Terbitan Kedua, Penerbit ITB, Bandung, hal. 71-72. Halliwell, B., dan Gutteridge, J.M.C., 2000, Free Radical in Biology and Medicine, Oxford University Press, New York. Harmita, 2006, Buku Ajar Analisis Fisikokimia, Departemen Farmasi FMIPA Universitas Indonesia, Depok. Handa, S.S., Khanujaa, S.P.S., Longo, G., Rakes D.D., 2008, Extraction Technologies for Medicinal and Aromatic Plants, Trieste: International Centre of Sciences and High Technology, pp. 21-15. Heinrich, M., Barne, J., Gibbons, S., Williamson, E. M., 2005, Farmakognosi dan Fitoterapi, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, hal. 79, 85. Heyne, K., 1987, Tumbuhan Berguna Indonesia, Jilid III, Yayasan Sarana Wana Jaya, Jakarta, hal. 1819. Janeiro, P. and Bret, A.M.O., 2004, Catechin Electrochemical Oxidation Mechaninsms, Analytica Chimica Acta, 518, 109-115. Jork, H., Funk, W., Fischer, W., and Wimmer, H., 1990, Thin Layer Chromatography Reagent and Detection Methods, VCH publishers, USA, Vol. 1a, pp. 148, 152, 167, 207, 289. Kim, D.K., Lee, K.W., Lee, H.J., and Lee, C.Y., 2002, Vitamin C Equivalent Antioxidant capacity (VCEAC) of Phenolic Phytochemicals, J. Agric. Food Chem, Vol. 50, 3713-3717


62

Koleva, I.I., van Beek, T.A., Linssen, J.P.H., de Groot, A., dan Evstatieva, L.N., 2002, Screening of Plant Extracts For Antioxidant Activity: A Comparative Study on Three Testing Methods, Phytochemical Analysis, Vol. 13, 8-17. Kumalaningsih, 2007, Antioksidan Alami, http://repository.ipb.ac.id/bitstream /handle/123456789/48301/BAB%20II%20Tinjauan%20Pustaka_%20G11 hwi.pdf?sequence=5, diakses pada tanggal 23 April 2015. Lampe, J. W., 1999, Health Effects of Vegetables and Fruit: Assesing Mechanisms of Action in Human Experimental Studies, The American Journal of Clinical Nutrition, Vol. 70, (3) 475s-490s. Mabry, T.J., Markham, K.R., and Thomas, M.B., 1970, The Systematic Identification of Flavonoid, Springer-Verlag, Berlin, pp. 50, 52. Markham, K. R., 1988, Techniques of Flavonoids Identification, diterjemahkan oleh Padwanita, K., Penerbit ITB, Bandung, hal. 15. Molyneux, P., 2004, The Use of The Stable ree Radical DPPH for Estimating Antioxidant Activity, Songklanakarin J. Sci. Technol., Vol. 26 (2), 211-219 Muchtadi, Deddy, M.S., 2013, Antioksidan dan Kiat Sehat Diusia Produktif, Alfabeta, Bandung, hal. 18, Mulja, M., danSuharman, 1995, Analisis Instrumental, Airlangga University Press, Surabaya, hal. 7, 26-32. Netafi,

Mesh vs Micron Comparison Chart, 2016, http://www.netafimusa.com/files/literature/wastewater/Mesh-vs-Micron. pdf, diakses pada tanggal 13 Januari 2016.

Pavithra, B., 2014, Eugenol-A Review, Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 153-154. Pramono, S. 2006. Penanganan Pasca Panen Dan Pengaruhnya Terhadap Efek Terapi Obat Alami. Prosiding Seminar nasional Tumbuhan Obat Indonesia XXVIII, Bogor, hal. 1-6. Proestos, C., Sereli, D., and Komaitis, M., 2006, Determination of phenolic compounds in aromatic plant by RP-HPLC and GC-MS, J.Food Sci., 95: 44-52. Purnawati, U., Turnip, M,. Lovadi, I., 2014, Eksplorasi Paku-Pakuan (Pteridophyta) Di Kawasan Cagar Alam Mandor Kabupaten Landak, Jurnal Protobiont, 3 (2): 155-165.


63

Rahayu, S.S., 2009, Merawat Peralatan Ekstraksi, http://www.chem-istry.org/mteri_kimia/kimia-industri/teknologi-proses/merawat-peralatanekstraksi/, diakses tanggal 12 November 2015. Reichardt, C., Welton, T., 2011, Solvents and Solvent Effects in Organic Chemistry, Fourth Edition, Wiley-Vch GmbH & Co. KGaA, Wenheim, pp. 550-551. Sahid, A., Pandiangan, D., Siahaan, P., Rumondor, M .J., Uji Sitotoksisitas Ekstrak Metanol Daun Sisik Naga (Drymogsslossum piloselloides Pesl.) terhadap Sel Leukimia P388., Jurnal MIPA UNSRAT Online, 2 (2): 94-99. Sastrohamidjojo, H., 2001, Spektroskopi, Liberty, Yogyakarta, hal. 39-42. Shahidi, F., 1997, Natural Antioxidants: Chemistry, Health Effects, and Applications, AOCS Press, USA, hal. 1. Tanjung, B.L.M., dan Utami, F.H., 2008, Pengaruh pH dan Kecepatan Pada Ekstraksi Protein dari Tulang Ayam dengan Slovent Larutan NaOH, Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Diponegoro, Semarang Togo, H., 2004, Advanced Free Radical Reactions for Organic Synthesis, Chiba, Japan, hal. 13. United States Department of Agriculture, 2005, 10 February, Taxon: Pyrrossia piloselloides (L.) M.G. Price, Germplasm Resources Information Network, http://www.ars-grin.gov/cgi-bin/npgs/html/taxon.pl?447799, diakses tanggal 12 Oktober 2015. Voight, R., 1995, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, diterjemahkan oleh Soendari Noerono, Gajah Mada University Press, Yogyakarta, hal. 566- 567. Widiyanti, P.M, 2010, Aktivitas Anti Tumor Ekstrak Air Daun Sisik Naga (Pyrrosia nummulariforia (SW) Ching) Terhadap Sel Lestari Tumor MCM B2 Secara In Vitro. http://duniaveteriner.com/2010/07/aktivitas-anti-tumor-ekstrakair-daun-sisik-naga-pyrrosia-nummularifolia-sw-ching-terhadap-sellestari-tumor-mcm-b2-secara-in-vitro/print, diakses pada November 3, 2014. Winarsi, W., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas, Kanisius, Yogyakarta, hal. 15, 79-81. Wulandari, E.T., Elya, B., Hanani, E, Pawitan, J.A., 2013, In Vitro Antioxidant And Cytotoxicity Activity of Extract and Fraction Pyrrosia piloselloides (L) M.G Price, International Journal of PharmTech Research, 5 (1) 119-125.


64

Zou, Y., Lu, Y., dan Wei, D., 2004 Antioxidant activity of Flavonoid-rich Extract of Hypericum Perforratum L In Vitro, J. Agric. Food Chem, 52, 5032-5039.


LAMPIRAN

65


LAMPIRAN Lampiran 1. Surat determinasi tumbuhan sisik naga

66


67

Lampiran 2. Penimbangan simplisia tumbuhan sisik naga untuk maserasi Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Replikasi 4 Replikasi 5 Berat 100,15 g 100,07 g 100,11 g 100,03 g 100,05 g Sampel Lampiran 3. Penggunaan pelarut untuk maserasi a. Diklorometan DIKLOROMETAN Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Replikasi 4 300 mL 150 mL 150 mL

300 mL 100 mL 70 mL

300 mL 100 mL 70 mL

300 mL 100 mL 100 mL 150 mL 150 mL 200 mL 100 mL 100 mL 100 mL 150 mL 100 mL 100 mL

Replikasi 5 250 mL 150 mL 150 mL 250 mL 100 mL 300 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

b. Etil asetat Replikasi 1 300 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 150 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

ETIL ASETAT Replikasi 2 Replikasi 3 Replikasi 4 300 mL 100 mL 100 mL 100 mL 150 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

300 mL 100 mL 150 mL 100 mL 150 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

300 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

Replikasi 5 300 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL


68

c. Metanol Replikasi 1

Replikasi 2

300 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

300 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

METANOL Replikasi 3 300 mL 250 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

Replikasi 4

Replikasi 5

300 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

300 mL 100 mL 100 mL 100 mL 100 mL

Lampiran 4. Perhitungan rendemen ekstrak Nama ekstrak Replikasi Cawan kosong Cawan + isi Berat ekstrak 1 59,5145 g 62,2948 g 2,7803 g 2 56,2632 g 58,9637 g 2,7005 g Diklorometan 3 21,7658 g 24,5962 g 2,8304 g 4 53,2549 g 58,3953 g 5,1404 g 5 36,9836 g 42,7241 g 5,7405 g 1 36,7981 g 38,1087 g 1,3106 g 2 22,2457 g 23,0262 g 0,7805 g Etil asetat 3 22,3019 g 24,0626 g 1,7607 g 4 59,5032 g 60,2839 g 0,7807 g 5 56,3218 g 57,5025 g 1,1807 g 1 56,5982 g 69,1789 g 12,5807 g 2 20,8396 g 33,4599 g 12,6203 g Metanol 3 52,5467 g 67,3972 g 14,8505 g 4 21,4045 g 32,1549 g 10,7504 g 5 56,2237 g 67,3172 g 11,0935 g Berat ekstrak total Nama ekstrak Cawan kosong Diklorometan 56,2379 g Etil asetat 51,8946 g Metanol 56,5946 g

Cawan + isi 74,7981 g 57,2253 g 117,2851 g

Berat ekstrak 18,5602 g 5,3307 g 60,6905 g

Rendemen 3,71204% 1,06614% 12,1381%


Lampiran 5. Perhitungan kadar abu total a. Serbuk Kadar Abu Total Cawan Kosong 33,4949 Replikasi 1 Cawan + Isi 34,9520 Cawan + Abu 33,5931 Cawan Kosong 36,9556 Replikasi 2 Cawan + Isi 37,9537 Cawan + Abu 37,0113 Cawan Kosong 52,6171 Replikasi 3 Cawan + Isi 53,6468 Cawan + Abu 52,6649

% Rendemen 6,7394 % b/b

5,5806 % b/b

4,6422 % b/b

b. Ekstrak diklorometan

Replikasi 1

Replikasi 2

Replikasi 3

Kadar Abu Total Cawan Kosong 34,1715 Cawan + Isi 35,1554 Cawan + Abu 34,1997 Cawan Kosong 31,0060 Cawan + Isi 32,0039 Cawan + Abu 31,0368 Cawan Kosong 33,5492 Cawan + Isi 34,5667 Cawan + Abu 33,5793


3,0865 % b/b

2,9582 % b/b

c. Ekstrak etil asetat

Replikasi 1

Replikasi 2

Replikasi 3



2,9093 % b/b

2,7238 % b/b

69


70

d. Ekstrak metanol

Replikasi 1

Replikasi 2

Replikasi 3



3,0727 % b/b

3,0163 % b/b

Lampiran 6. Penetapan kadar abu tidak larut asam 𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑎𝑏𝑢 𝑡𝑖𝑑𝑎𝑘 𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 𝑎𝑠𝑎𝑚 (𝑔) % 𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = × 100% 𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑙𝑒 (𝑔) a. Serbuk Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Bobot sampel (g) 1,4571 0,9981 1,0297 Cawan kosong (g) 33,4949 36,9556 52,6171 Cawan + abu tidak larut 33,5021 36,9617 52,6219 asam (g) Bobot abu tidak larut asam 0,0072 0,0061 0,0042 (g) % Rendemen 0,4079 % b/b 0,6122 % b/b 0,4941 % b/b b. Etil asetat Replikasi 1 Bobot sampel (g) 0,3673 Cawan kosong (g) 52,6001 Cawan + abu tidak larut 52,6036 asam (g) Bobot abu tidak larut asam 0,0035 (g) % Rendemen 0,9529 % b/b

Replikasi 2 0,3506 33,5515 33,5541

Replikasi 3 0,3709 36,9826 36,9865

0,0026

0,0029

0,7415 % b/b

0,7821 % b/b

Replikasi 2 0,9979 31,0060 31,0101

Replikasi 3 1,0175 31,0368 33,5509

0,0041

0,0017

0,4109 % b/b

0,1671 % b/b

c. Diklorometan Replikasi 1 Bobot sampel (g) 0,9839 Cawan kosong (g) 34,1715 Cawan + abu tidak larut 34,1748 asam (g) Bobot abu tidak larut asam 0,0023 (g) % Rendemen 0,2338 % b/b


71

d. Ekstrak metanol Replikasi 1 Bobot sampel (g) 2,0248 Cawan kosong (g) 22,1827 Cawan + abu tidak larut 22,1908 asam (g) Bobot abu tidak larut asam 0,0081 (g) % Rendemen 0,4 % b/b

Replikasi 2 2,0275 31,0076 31,0155

Replikasi 3 2,0853 33,5506 33,5579

0,0079

0,0073

0,389 % b/b

0,3501 % b/b

Lampiran 7. Penetapan kadar sari larut etanol 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑟𝑖 (𝑔) 20 % 𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = × × 100% 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑒𝑟𝑏𝑢𝑘 (𝑔) 4 a. Serbuk Replikasi 1 1,0305 46,2416 46,2939 0,0523 25,3760 %b/b

Replikasi 2 1,0006 48,1651 48,1715 0,0468 23,3859 %b/b

Replikasi 3 1,0126 47,7567 47,8473 0,0906 44,7363 %b/b

b. Ekstrak diklorometan Replikasi 1 Bobot serbuk (g) 1,0204 Cawan kosong (g) 46,2410 Cawan + sari (g) 46,2842 Bobot sari (g) 0,0423 % Rendemen 20,8984 % b/b

Replikasi 2 1,0118 48,1232 48,1651 0,0419 20,7057 % b/b

Replikasi 3 1,0619 47,7561 47,7993 0,0432 20,3409 % b/b

Replikasi 1 0,3625 46,2419 46,2772 0,0353 48,6896 % b/b

Replikasi 2 0,3811 48,1238 48,1605 0,0367 48,1501 % b/b

Replikasi 3 0,3705 47,7559 47,7993 0,0388 52,3617 % b/b

Replikasi 1 5,0514 46,2389 46,9698 0,7309 72,3463 % b/b

Replikasi 2 5,0132 48,1220 48,9354 0,8134 81,1258 % b/b

Replikasi 3 4,9981 47,7567 48,5958 0,8394 84,1402 % b/b

Bobot serbuk (g) Cawan kosong (g) Cawan + sari (g) Bobot sari (g) % Rendemen

c. Ekstrak etil asetat Bobot serbuk (g) Cawan kosong (g) Cawan + sari (g) Bobot sari (g) % Rendemen d. Ekstrak metanol Bobot serbuk (g) Cawan kosong (g) Cawan + sari (g) Bobot sari (g) % Rendemen


Lampiran 8. Penetapan kadar sari larut air 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑟𝑖 (𝑔) 20 %𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = × × 100% 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑒𝑟𝑏𝑢𝑘 (𝑔) 4 a. Serbuk Bobot serbuk (g) Cawan kosong (g) Cawan + sari (g) Bobot sari (g) % Rendemen

Replikasi 1 0,9998 35,3721 35,4212 0,0491 24,5549 % b/b

Replikasi 2 1,0211 47,7440 47,7937 0,0497 24,3365 % b/b

Replikasi 3 1,0171 44,0232 47,0729 0,0497 24,4322 % b/b

Replikasi 2 0,9987 43,7961 43,8046 0,0085 4,2555 % b/b

Replikasi 3 1,0301 47,7583 47,7616 0,0033 1,6018 % b/b

Replikasi 1 0,3318 35,3732 35,3836 0,0104 15,6721 % b/b

Replikasi 2 0,3426 7,7572 47,7676 0,0104 15,1781 % b/b

Replikasi 3 0,3519 48,1149 48,1254 0,0105 14,919 % b/b

Replikasi 1 5,0504 43,1042 43,9441 0,8399 83,1518 % b/b

Replikasi 2 5,0405 43,7915 44,5339 0,7424 73,6732 % b/b

Replikasi 3 4,9701 46,2426 47,0267 0,7841 78,8817 % b/b

b. Ekstrak diklorometan Replikasi 1 Bobot serbuk (g) 1,0121 Cawan kosong (g) 46,2550 Cawan + sari (g) 46,2596 Bobot sari (g) 0,0036 % Rendemen 1,7784 % b/b c. Ekstrak etil asetat Bobot serbuk (g) Cawan kosong (g) Cawan + sari (g) Bobot sari (g) % Rendemen d. Ekstrak metanol Bobot serbuk (g) Cawan kosong (g) Cawan + sari (g) Bobot sari (g) % Rendemen

72


Lampiran 9. Foto hasil kromatografi lapis tipis ekstrak diklorometan, ekstrak etil asetat dan ekstrak metanol tanaman sisik naga

Rf 1

Rf 0,5

Rf 0 A

B

C

D

A

B

C

D

Ekstrak Diklorometan Ekstrak Etil Asetat Hasil KLT pembanding eugenol pada sinar UV 366

Keterangan: A: Standar eugenol B: Sisik naga inang jambu air C: Sisik naga inang kopi D: Sisik naga inang teh

73


Rf 1

Rf 0,5

Rf 0 A

B

C

D

A

B

C

D

Ekstrak Etil Asetat Ekstrak Metanol Hasil KLT dengan pembanding rutin (flavonoid)

Keterangan: A: Standar rutin B: Sisik naga inang jambu air C: Sisik naga inang kopi D: Sisik naga inang teh

74


Rf 1

Rf 0,5

A

B

C

D

Rf 0

A

B

C D

Ekstrak Metanol UV 254 Ekstrak Metanol (FeCl3) Hasil KLT dengan pembanding asam tanat (tanin).

Keterangan: A: Standar tanin B: Sisik naga inang jambu air C: Sisik naga inang kopi D: Sisik naga inang teh

75


76

Rf 1 Keterangan: A: Standar steroid B: Sisik naga inang jambu air Rf 0,5

C: Sisik naga inang kopi D: Sisik naga inang teh

Rf 0 A

B

C

D

Ekstrak Diklorometan UV 366 Hasil KLT dengan pembanding β-sitosterol (steroid). Lampiran 10. Data uji aktivitas antioksidan a. Penimbangan DPPH R1 R2 Arloji kosong 13,2521 g 13,2533 g Arloji + sampel 13,2622 g 13,2636 g Arloji + sisa 13,2522 g 13,2534 g Sampel 0,0100 g 0,0102 g

R3 13,2496 g 13,2599 g 13,2498 g 0,0101 g

b. Pengenceran DPPH Dibuat DPPH dengan konsentrasi 0,02 Volume pengambilan DPPH baku 

REPLIKASI 1

10 𝑚𝑔 𝑚𝑔 = 0,1 ⁄𝑚𝑙 100 𝑚𝑙

𝑚𝑔 µg ⁄𝑚𝑙 𝑎𝑡𝑎𝑢 20 ⁄𝑚𝑙

R4 13,3112 g 13,3214 g 13,3113 g 0,0101 g


𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 × 100 𝑚𝑙 = 20 𝑚𝑙 𝑚𝑔 0,1 ⁄𝑚𝑙

0,02



REPLIKASI 2

10,2 𝑚𝑔 𝑚𝑔 = 0,102 ⁄𝑚𝑙 100 𝑚𝑙 𝑚𝑔 0,02 ⁄𝑚𝑙 × 100 𝑚𝑙 = 19,607 𝑚𝑙 𝑚𝑔 0,102 ⁄𝑚𝑙 

REPLIKASI 3

10,1 𝑚𝑔 𝑚𝑔 = 0,101 ⁄𝑚𝑙 100 𝑚𝑙 𝑚𝑔 0,02 ⁄𝑚𝑙 × 100 𝑚𝑙 = 19,801 𝑚𝑙 𝑚𝑔 0,101 ⁄𝑚𝑙 

REPLIKASI 4

10,1 𝑚𝑔 𝑚𝑔 = 0,101 ⁄𝑚𝑙 100 𝑚𝑙 𝑚𝑔 0,02 ⁄𝑚𝑙 × 100 𝑚𝑙 = 19,801 𝑚𝑙 𝑚𝑔 0,101 ⁄𝑚𝑙 c. Data penimbangan ekstrak untuk uji DPPH  Ekstrak diklorometan R1 R2 R3 Arloji kosong 14,2422 g 13,8529 g 14,2420 g Arloji + sampel 14,2927 g 13,9034 g 14,2926 g Arloji + sisa 14,2424 g 13,8532 g 14,2422 g Sampel 0,0503 g 0,0502 g 0,0504 g 

Ekstrak etil asetat R1 Arloji kosong 14,2420 g Arloji + sampel 14,2924 g Arloji + sisa 14,2421 g Sampel 0,0503 g

R2 14,2419 g 14,2925 g 14,2421 g 0,0504 g

R3 14,2418 g 14,2923 g 14,2419 g 0,0504 g

77




Ekstrak metanol R1 Arloji kosong 13,8531 g Arloji + sampel 13,8736 g Arloji + sisa 13,8532 g Sampel 0,0204 g

R2 13,8529 g 13,8734 g 13,8532 g 0,0202 g

R3 14,2420 g 14,2626 g 14,2422 g 0,0204 g

d. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Penimbangan DPPH : Arloji Kosong

= 13,2624 gram

Arloji + Isi

= 13,2726 gram

Arloji + Sisa

= 13,2626 gram

Isi

= 0,0100 gram = 10 mg

10 𝑚𝑔 𝑚𝑔 = 0,1 ⁄𝑚𝑙 100 𝑚𝑙 𝑚𝑔 µg Dibuat DPPH dengan konsentrasi 0,02 ⁄𝑚𝑙 𝑎𝑡𝑎𝑢 20 ⁄𝑚𝑙 C1 x V1 = C2 x V2 𝑚𝑔 0,1 ⁄𝑚𝑙x 20 mL = C2 x 100 mL 𝑚𝑔 C2 = 0,02 ⁄𝑚𝑙 Didapatkan Panjang Gelombang maksimum = 516 nm

78


e. Penentuan Operating Time Operating Time (OT)  Konsentrasi Rutin 0,001 0,005

𝑚𝑔 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 ; 0,025 ⁄𝑚𝑙;

𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙

Kertas kosong

13,2176 g

Kertas + sampel

13,3177 g

Kertas + sisa

13,2177 g

Rutin

0,0100 g

10 mg mg ⁄mL = 1 10 mL Konsentrasi 1 : C1 x V1 = C2 x V2 𝑚𝑔 1 ⁄𝑚𝑙x 0,05 mL = C2 x 10 mL 𝑚𝑔 C2 = 0,005 ⁄𝑚𝑙 Konsentrasi 2 : C1 x V1 = C2 x V2 𝑚𝑔 1 ⁄𝑚𝑙x 0,015 mL = C2 x 10 mL 𝑚𝑔 C2 = 0,015 ⁄𝑚𝑙

79


80

Konsentrasi 3 : C1 x V1 = C2 x V2 𝑚𝑔 1 ⁄𝑚𝑙x 0,025 mL = C2 x 10 mL 𝑚𝑔 C2 = 0,025 ⁄𝑚𝑙 Konsentrasi Rutin Menit ke-5 Menit ke-10 Menit ke-15 Menit ke-20 Menit ke-25 Menit ke-30 Menit ke-35 Menit ke-40 Menit ke-45 Menit ke-50 Menit ke-55 Menit ke-60

0.005 mg/mL 0,655 0,654 0,654 0,654 0,653 0,653 0,654 0,655 0,655 0,657 0,658 0,659

Konsentrasi 0,05 mg/mL

0,015 mg/mL 0,621 0,616 0,612 0,608 0,605 0,604 0,603 0,603 0,601 0,603 0,604 0,604

0,025 mg/mL 0,575 0,563 0,553 0,546 0,541 0,538 0,536 0,538 0,540 0,541 0,541 0,541

Keterangan

OT




81


82

f. Pembuatan kurva baku  Penimbangan rutin R1 14,4146 g 14,4247 g 14,4147 g 0,0100 g

Kertas kosong Kertas + sampel Kertas + sisa Rutin

 Pembuatan Larutan Baku Rutin (𝟏 Replikasi 1 10 mg mg ⁄mL Konsentrasi baku: = 1 Konsentrasi Seri 1 Konsentrasi Seri 2 Konsentrasi Seri 3 Konsentrasi Seri 4 Konsentrasi Seri 5

R2 14,2496 g 14,2598 g 14,2497 g 0,0101 g 𝒎𝒈 ⁄𝒎𝒍)

10 mL 𝑚𝑔 ⁄ 0,01 : 𝑚𝑔 𝑚𝑙 × 10 𝑚𝑙 = 0,1 𝑚𝑙 ⁄𝑚𝑙 1 𝑚𝑔 ⁄ 0,2 : 𝑚𝑔 𝑚𝑙 × 10 𝑚𝑙 = 0,2 𝑚𝑙 ⁄𝑚𝑙 1 𝑚𝑔 ⁄ 0,3 : 𝑚𝑔 𝑚𝑙 × 10 𝑚𝑙 = 0,3 𝑚𝑙 ⁄𝑚𝑙 1 𝑚𝑔 ⁄ 0,4 : 𝑚𝑔 𝑚𝑙 × 10 𝑚𝑙 = 0,4 𝑚𝑙 ⁄𝑚𝑙 1 𝑚𝑔 ⁄ 0,5 : 𝑚𝑔 𝑚𝑙 × 10 𝑚𝑙 = 0,5 𝑚𝑙 ⁄𝑚𝑙 1

KONSENTRASI ABSORBANSI 0,01 0,481 0,02 0,425 0,03 0,381 0,04 0,325 0,05 0,266 KONSENTRASI 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 

R3 14,2363 g 14,2463 g 14,2363 g 0,0100 g

Replikasi 2 Konsentrasi baku: Konsentrasi Seri 1 : Konsentrasi Seri 2 :

% IC 17,21170 26,85026 34,42341 44,06196 54,21687 10,1 mg

= 1,01

10 mL 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 0,01 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 1,01 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 0,2 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 1,01

Absorbansi Kontrol = 0,581 y = -5,3x + 0,5346 r = 0,9989

y = 912,22x + 7,9862 r = 0,998899

mg ⁄mL

× 10 𝑚𝑙 = 0,099 𝑚𝑙 × 10 𝑚𝑙 = 0,198 𝑚𝑙


Konsentrasi Seri 3 : Konsentrasi Seri 4 : Konsentrasi Seri 5 :

𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 1,01 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 0,4 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 1,01 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 0,5 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 1,01 0,3

× 10 𝑚𝑙 = 0,297 𝑚𝑙 × 10 𝑚𝑙 = 0,396 𝑚𝑙 × 10 𝑚𝑙 = 0,495 𝑚𝑙

KONSENTRASI ABSORBANSI 0,01 0,471 0,02 0,409 0,03 0,380 0,04 0,325 0,05 0,287 KONSENTRASI 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 

Replikasi 3 Konsentrasi baku: Konsentrasi Seri 1 : Konsentrasi Seri 2 : Konsentrasi Seri 3 : Konsentrasi Seri 4 : Konsentrasi Seri 5 :

Konsentrasi 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05

Absorbansi Kontrol = 0,581 y = -4,52x + 0,51 r = 0,994937

% IC 18,93287 29,60413 34,59552 44,06196 50,60241

10,1 mg

= 1,01

10 mL 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 0,01 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 1,01 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 0,2 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 1,01 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 0,3 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 1,01 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 0,4 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 1,01 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 0,5 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 1,01

Absorbansi 0,449 0,418 0,364 0,325 0,276

83

y = 777,97x + 12,22 r = 0,994937

mg ⁄mL

× 10 𝑚𝑙 = 0,099 𝑚𝑙 × 10 𝑚𝑙 = 0,198 𝑚𝑙 × 10 𝑚𝑙 = 0,297 𝑚𝑙 × 10 𝑚𝑙 = 0,396 𝑚𝑙 × 10 𝑚𝑙 = 0,495 𝑚𝑙

Absorbansi kontrol = 0,581 y = -4,39x + 0,4981 r = 0,997296


KONSENTRASI 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05

% IC 22,71945 28,05508 37,3494 44,06196 52,4957

84

y = 755,59x + 14,269 r = 0,997296

KURVA KONSENTRASI VS %IC RUTIN 60

Absorbansi

50 40 Rep 1

30

Rep 2

20

Rep 3 10 0 0

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

Konsentrasi (mg/mL)

g. Data pengujian sampel denga metode DPPH 

Pengambilan Volume Seri Diklorometan Replikasi 1

Konsentrasi baku: Konsentrasi Seri 1 :

50,3 mg 10 mL

= 5,03

𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 5,03 0,05

mg ⁄mL

× 10 𝑚𝑙 = 0,099 𝑚𝑙

Konsentrasi Seri 2 :

𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 5,03

× 10 𝑚𝑙 = 0,497 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,994 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,491 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,988 𝑚𝑙

0,25

0,5

0,75

1

0.06


KONSENTRASI ABSORBANSI 0,05 0,509 0,25 0,468 0,5 0,41 0,75 0,311 1 0,252

KONSENTRASI 0,05 0,25 0,5 0,75 1

% IC 3,598485 11,36364 22,34848 41,09848 52,27273

Aborbansi kontrol: 0,528 y = -0,2804x + 0,533 r = 0,993881

y = 53,109x + 0,9493 r = 0,993881

Replikasi 2 Konsentrasi baku:

50,2 mg 10 mL

= 5,02

mg ⁄mL


× 10 𝑚𝑙 = 0,099 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,498 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,996 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,494 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,992 𝑚𝑙


0,05

0,25

0,5

0,75

1


Absorbansi kontrol: 0,527 y = -0,2871x + 0,542 R = 0,996243

85


KONSENTRASI 0,06 0,12 0,2 0,35 0,5

% IC 8,118081 12,91513 22,69373 40,2214 53,69004

y = 54,469x + 2,8458 r = 0,996243


50,4 mg 10 mL

= 5,04

mg ⁄mL


× 10 𝑚𝑙 = 0,099 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,496 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,992 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,488 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,984 𝑚𝑙


0,05

0,25

0,5

0,75

1


KONSENTRASI 0,05 0,25 0,5 0,75 1

% IC 3,787879 10,98485 25,94697 39,96212 53,78788

Absorbansi kontrol: 0,528 y = -0,2845x + 0,5311 r = 0,997948

y = 53,88x - 0,5851 r = 0,997948

86


KURVA KONSENTRASI VS %IC EKSTRAK DIKLOROMETAN 60

Absorbansi

50 40 30

Rep 1

20

Rep 2 Rep 3

10 0 0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

Konsentrasi (mg/mL)



Konsentrasi Seri Etil Asetat Replikasi 1 Konsentrasi baku: Konsentrasi Seri 1 :

50,3 mg 10 mL

= 5,03

𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 5,03 0,05

mg ⁄mL

× 10 𝑚𝑙 = 0,099 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,497 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,994 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,491 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,988 𝑚𝑙

0,25

0,5

0,75

1



87


KONSENTRASI % IC 0,05 2,72373 0,25 11,47859 0,5 25,29182 0,75 36,18677 1 50,77821 Replikasi 2 Konsentrasi baku:

50,4 mg 10 mL

y = 50,391x + 0,4078 r = 0,998899

= 5,04

mg ⁄mL


× 10 𝑚𝑙 = 0,099 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,496 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,992 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,488 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,984 𝑚𝑙


0,05

0,25

0,5

0,75

1

KONSENTRASI ABSORBANSI 0,05 0,494 0,25 0,442 0,5 0,367 0,75 0,303 1 0,239 KONSENTRASI 0,05 0,25 0,5 0,75 1

% IC 2,75590 12,99212 27,75590 40,35433 53,34645


y = 53,556x + 0,1276 r = 0,999650

Replikasi 3 Konsentrasi baku: Konsentrasi Seri 1 :

50,4 mg 10 mL

= 5,04

𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 𝑚𝑔 ⁄𝑚𝑙 5,04 0,05

mg ⁄mL

× 10 𝑚𝑙 = 0,099 𝑚𝑙

88




× 10 𝑚𝑙 = 0,496 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,992 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,488 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,984 𝑚𝑙

0,25

0,5

0,75

1

KONSENTRASI ABSORBANSI 0,05 0,474 0,25 0,427 0,5 0,357 0,75 0,27 1 0,215 KONSENTRASI 0,05 0,25 0,5 0,75 1

% IC 2,669405 12,32033 26,69405 44,55852 55,85216


y = 57,822x - 1,0705 r = 0,997647

KURVA KONSENTRASI VS %IC EKSTRAK ETIL ASETAT 60

Absorbansi

50 40 30

Rep 1

20

Rep 2 Rep 2

10 0 0

0.2

0.4

0.6

0.8

Konsentrasi (mg/mL)

1

1.2

89




Konsentrasi Seri Metanol Replikasi 1 Konsentrasi baku:

20,4 mg 10 mL

= 2,04

mg ⁄mL


× 10 𝑚𝑙 = 0,294 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,588 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,980 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,716 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 2,451 𝑚𝑙


0,06

0,12

0,2

0,35

0,5

KONSENTRASI ABSORBANSI 0,06 0,498 0,12 0,472 0,2 0,418 0,35 0,324 0,5 0,251 KONSENTRASI 0,06 0,12 0,2 0,35 0,5

% IC 8,118081 12,91513 22,69373 40,2214 53,69004


y = 106,62x + 1,2986 r = 0,998299


20,2 mg 10 mL

= 2,02

mg ⁄mL


× 10 𝑚𝑙 = 0,297 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,594 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,990 𝑚𝑙


0,06

0,12

0,2

90




× 10 𝑚𝑙 = 1,733 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 2,475 𝑚𝑙

0,35

0,5

KONSENTRASI ABSORBANSI 0,06 0,504 0,12 0,468 0,2 0,431 0,35 0,334 0,5 0,253 KONSENTRASI % IC 0,06 7,01107 0,12 13,65314 0,2 20,1107 0,35 38,37638 0,5 53,32103


y = 106,2x + 0,369 r = 0,998849


20,4 mg 10 mL

= 2,04

mg ⁄mL


× 10 𝑚𝑙 = 0,294 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,588 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 0,980 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 1,716 𝑚𝑙



× 10 𝑚𝑙 = 2,451 𝑚𝑙


0,06

0,12

0,2

0,35

0,5

KONSENTRASI ABSORBANSI 0,06 0,487 0,12 0,455 0,2 0,412 0,35 0,348 0,5 0,241


91


KONSENTRASI 0,06 0,12 0,2 0,35 0,5

% IC 7,590133 13,66224 21,82163 33,96584 54,26945

y = 103,03x + 0,9159 r = 0,995289

KURVA KONSENTRASI VS %IC EKSTRAK METANOL 60

Absorbansi

50 40 Rep 1

30

Rep 2

20

Rep 3 10 0 0

0.1

0.2

0.3

0.4

Konsentrasi (mg/mL)

Lampiran 12. Data uji statistik.

0.5

0.6

92


93


94

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi yang berjudul “Uji Antioksidan Ekstrak Tanaman Sisik Naga (Pyrossia piloselloides (L.) M.G Price) pada Pohon Inang Jambu Air (Syzygium aqueum) dengan Metode 2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl (DPPH) dan Penetapan Karakter Ekstrak“ memiliki nama lengkap Eugenius Yogia Wirawan. Penulis lahir di Bantul, 8 Juli 1994 dari pasangan Suparjana dan Monika Sarjiyanti. Penulis telah menyelesaikan pendidikan di TK Immaculata I Ganjuran pada tahun 1998 hingga 2000. Penulis melanjutkan pendidikan dasar di SD Kanisius Ganjuran pada tahun 2000 hingga 2006, kemudian penulis melanjutkan pendidikan menengah di SMP Kanisius Bambanglipuro pada tahun 2006 hingga 2009 dan SMA Kolese De Britto Yogyakarta pada tahun 2009 hingga 2012. Penulis melanjutkan pendidikan di perguruan tinggi di Fakultas Farmasi Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2012 hingga 2016. Selama menjadi mahasiswa Fakultas Farmasi Sanata Dharma Yogyakarta, penulis cukup aktif dalam kegiatan kemahasiswaan, kepanitiaan dan kegiatan lain yang terdapat di dalam maupun di luar Universitas Sanata Dharma antara lain: panitia Titrasi (2013); panitia Pharmacy Performance and Event Cup (2012); panitia Pharmacy Performance and Road to School (2013); Ketua Umum Titrasi (2013); Asisten Praktikum Farmakognosi Fitokimia (2014 dan 2015).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents