PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

PERBANDINGAN KEMAMPUAN PENETRASI MULTIEMULSI A/M/A DAN SUSPENSI LIPOSOM YANG MENGANDUNG EKSTRAK METANOL KELOPAK BUNGA ROSELLA (Hibiscus sabdariffa L.)

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh : Yolana Kwartono NIM : 118114170

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2015


PERBANDINGAN KEMAMPUAN PENETRASI MULTIEMULSI A/M/A DAN SUSPENSI LIPOSOM YANG MENGANDUNG EKSTRAK METANOL KELOPAK BUNGA ROSELLA (Hibiscus sabdariffa L.)

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh : Yolana Kwartono NIM : 118114170

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2015

i


ii


iii


HALAMAN PERSEMBAHAN

Genius is 1% talent dan 99% percent hard work Albert Einstein

Kupersembahkan skripsi ini untuk... Tuhan yang selalu memberkati dan memberiku kekuatan serta kesehatan, Papa Mama dan keluargaku tercinta atas doa, dukungan, dan kasih sayang, Teman-teman dan sahabatku terkasih, Serta almamaterku

iv


v


vi


PRAKATA Puji Syukur kepada Tuhan Yesus Kristus dan Bunda Maria berkat kasih karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian serta penyusunan skripsi yang berjudul ―Perbandingan Kemampuan Penetrasi Multiemulsi A/M/A dan Suspensi Liposom yang mengandung Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella (Hibiscus Sabdariffa L.)‖ yang disusun untuk memenuhi persyaratan memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Program Studi Farmasi (S.Farm) dapat dikerjakan dengan baik dan lancar. Proses pelaksanaan skripsi ini tidak akan berhasil tanpa adanya bantuan dan dukungan dari berbagai pihak, sehingga pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada : 1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah mengijinkan penulis menjalankan pembelajaran selama masa studi. 2. Prof. Dr. Sri Noegrohati, Apt. selaku Dosen Pembimbing Skripsi yang telah memberikan pengarahan, bantuan, tuntutan, kritik dan saran sejak awal penelitian hingga akhir penyusunan skripsi ini. 3. Dr. Erna Tri Wulandari, Apt. dan Beti Pudyastuti, M.Sc., Apt. selaku dosen penguji atas segala masukan dan bimbingannya. 4. Agustina

Setiawati,

M.Sc.,

Apt.

selaku

Kepala

Penanggungjawab

Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam penggunaan fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian ini. 5. Pak Sanjaya atas waktu dan segala ilmu yang diberikan.

vii


6. Pak Mus, Pak Kayat, Pak Heru, Pak Wagiran, Pak Parlan, Pak Kunto, Pak Bima, dan Pak Bimo selaku laboran Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah membantu penulis dalam proses pelaksanaan penelitian di laboratorium. 7. Keluargaku tercinta terutama Papa dan Mama yang selalu memberi motivasi, perhatian, dukungan dan doa demi kelancaran studi dan penyusunan naskah skripsi. 8. Partner terkasih Ko Jimmy Pieter Chua atas doa, motivasi, dukungan, nasihat, yang diberikan selama penulis menjalani studi 9. Teman seperjuangan skripsi dan sahabat : Eva Mayangsari, Me Li untuk kesabaran, kebersamaan, dan suka dukanya 10. Teman sepermainan Dara Prabandari, Monita Natalia Siregar atas keceriaan, kebersamaan, suka duka, semangat, motivasi, doa, dukungan, dan nasihat yang diberikan selama peneliti menjalani studi 11. Seluruh dosen dan teman-teman FST-B 2011, serta seluruh angkatan 2011 Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. 12. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas akhir ini dengan baik. Penulis menyadari bahwa semakin banyak kekurangan dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini mengingat keterbatasan dan kemampuan penulis, sehingga sangat diharapkan adanya masukan dan saran yang membangun untuk penulis. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca dan berguna bagi dunia ilmu pengetahuan Penulis

viii


DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ............................................................................................ i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................... ii HALAMAN PENGESAHAN SKRIPSI BERJUDUL ......................................... iii HALAMAN PERSEMBAHAN .......................................................................... iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................... v LEMBAR PENYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ..... vi PRAKATA

................................................................................................... vii

DAFTAR ISI .................................................................................................... ix DAFTAR TABEL ............................................................................................. xii DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xiii DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xv INTISARI

.................................................................................................. xvi

ABSTRACT ................................................................................................. xvii BAB I PENDAHULUAN .................................................................................... 1 PENDAHULUAN ............................................................................................... 1 A. Latar Belakang .............................................................................................. 1 1. Perumusan masalah .................................................................................. 4 2. Keaslian penelitian ................................................................................... 4 3. Manfaat .................................................................................................... 5 B. Tujuan Penelitian ............................................................................................ 5 BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ................................................................... 7

ix


A. Rosella .......................................................................................................... 7 B. Antosianin .................................................................................................... 9 C. Multiemulsi ................................................................................................ 13 D. Monografi Bahan Tambahan ....................................................................... 17 E. Suspensi Liposom ....................................................................................... 23 F. Kulit ........................................................................................................... 27 G. Sinar Matahari ............................................................................................ 30 H. Enhancer .................................................................................................... 32 I.

Uji Penetrasi In Vitro .................................................................................. 34

J.

Spektrofotometri Derivatif .......................................................................... 36

K. Landasan Teori ........................................................................................... 38 L. Hipotesis ..................................................................................................... 40 BAB III METODOLOGI PENELITIAN ........................................................... 41 A. Jenis Penelitian ........................................................................................... 41 B. Variabel Penelitian ...................................................................................... 41 C. Definisi Operasional ................................................................................... 42 D. Bahan Penelitian ......................................................................................... 43 E. Alat Penelitian ............................................................................................ 44 F. Tata Cara Penelitian .................................................................................... 44 G. Analisis Hasil.............................................................................................. 56

x


BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................................. 58 A. Penetapan Bobot Tetap Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella ............... 59 B. Uji Penetrasi Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella ............................... 59 C. Optimasi Formula Multiemulsi A/M/A ....................................................... 61 D. Pembuatan Multiemulsi A/M/A .................................................................. 67 E. Evaluasi Multiemulsi A/M/A ...................................................................... 69 F. Evaluasi Sediaan Suspensi Liposom............................................................ 74 G. Kurva Baku Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella ................................. 76 H. Uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan suspensi liposom ............................................................... 80 I.

Statistik Uji T penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom ................................................... 91

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................. 93 A. Kesimpulan................................................................................................. 93 B. Saran

................................................................................................... 93

LAMPIRAN ................................................................................................... 99 BIOGRAFI PENULIS ..................................................................................... 113

xi


DAFTAR TABEL

Tabel 1.

Klasifikasi emulgator .................................................................. 17

Tabel 2.

Variabel untuk tiap uji ................................................................ 47

Tabel 3.

Formula optimum emulsi primer A/M ........................................ 66

Tabel 4.

Formula optimum multiemulsi A/M/A ........................................ 67

Tabel 5.

Perbandingan

koefisien

permeabilitas

beberapa

spesies

terhadap air ................................................................................. 81 Tabel 6.

Uji F standar deviasi suspensi liposom dan multiemulsi A/M/A ........................................................................................ 92

Tabel 7.

Uji signifikasi rata – rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang terpenetrasi kekulit dalam suspensi liposom dan multiemulsi A/M/A ................................................. 92

xii


DAFTAR GAMBAR

Gambar 1.

Kelopak bunga rosella .................................................................. 8

Gambar 2.

Struktur utama antosianin ........................................................... 10

Gambar 3.

Perubahan struktur kimia antosianin terhadap pH ....................... 11

Gambar 4.

Gambaran skema dan mikroskop multiemulsi A/M/A ................. 13

Gambar 5.

Struktur Tween 80 ...................................................................... 18

Gambar 6.

Struktur Span 80 ......................................................................... 19

Gambar 7.

Struktur setil alkohol................................................................... 20

Gambar 8.

Struktur dimethicone................................................................... 21

Gambar 9.

Struktur xanthan gum ................................................................. 22

Gambar 10.

Ilustrasi pembentukan liposom.................................................... 24

Gambar 11.

Klasifikasi liposom berdasarkan ukuran dan jumlah bilayer ........ 25

Gambar 12.

Mekanisme pelepasan obat dari liposom ..................................... 26

Gambar 13.

Struktur dan fungsi kulit ............................................................. 27

Gambar 14.

Jalur umum zat aktif dalam menembus kulit ............................... 29

Gambar 15.

Sel difusi Franz .......................................................................... 34

Gambar 16.

Penentuan gradien dari spektrum orde 0...................................... 37

Gambar 17.

Spektrogram derivatif orde 0 hingga 5 ........................................ 38

Gambar 18.

Rangkaian alat sel difusi Franz ................................................... 47

Gambar 19.

Kurva uji penetrasi ekstrak rosella .............................................. 60

Gambar 20.

Organoleptis multiemulsi A/M/A ................................................ 69

xiii


Gambar 21.

Pengamatan uji kelarutan ............................................................ 71

Gambar 22.

Foto partikel emulsi primer A/M dan multiemulsi A/M/A ........... 72

Gambar 23.

Hasil uji mekanik (sentrifugasi) .................................................. 73

Gambar 24.

Hasil uji volume creaming 28 hari setelah pembuatan ................. 74

Gambar 25.

Organoleptis suspensi liposom .................................................... 75

Gambar 26.

Foto partikel suspensi liposom (perbesaran 40x) ......................... 76

Gambar 27.

Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam metanol....................................................................................... 77

Gambar 28. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam aquadest ..................................................................................... 79 Gambar 29.

Hubungan dermal absorption orto-fenilfenol dengan waktu pada beberapa jenis kulit ............................................................. 82

Gambar 30.

Kurva multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada kompartemen donor .................................................................... 84

Gambar 31.

Kurva sediaan multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada kompartemen akseptor ................................................................ 86

Gambar 32.

Kurva sediaan mutiemulsi A/M/A dan suspensi liposom yang tertahan di dalam kulit ................................................................ 89

xiv


DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1.

Spektrum antosianin pada ekstrak metanol kelopak bunga rosella (Hibiscus sabdariffa L.) ................................................. 100

Lampiran 2.

Penetapan bobot tetap ekstrak metanol kelopak bunga rosella (Hibiscus sabdariffa L.) ............................................................ 101

Lampiran 3.

Data hasil optimasi emulsi primer A/M ..................................... 102

Lampiran 4.

Data hasil optimasi multiemulsi ................................................ 103

Lampiran 5.

Perhitungan mikromeritik ......................................................... 104

Lampiran 6.

Data Derivated Kurva Baku Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam metanol ............................................................... 106

Lampiran 7.

Data Derivated Kurva Baku Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam aquadest .............................................................. 107

Lampiran 8. Jumlah larutan ekstrak metanol kelopak bunga rosella Yang Terpenetrasi Ke dalam Kulit ..................................................... 108 Lampiran 9.

Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A yang terpenetrasi ke dalam kulit ................ 109

Lampiran 10. Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam suspensi liposom yang terpenetrasi ke dalam kulit .................................. 109 Lampiran 11. Uji T untuk jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan dalam kulit .................................................................. 110 Lampiran 12. Spektrum derivatif kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam pelarut aquadest .................................................. 112

xv


INTISARI Rosella merupakan tanaman yang banyak mengandung antosianin yang bermanfaat sebagai antioksidan. Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dapat masuk ke dalam kulit namun kemampuan penetrasinya bervariasi, sehingga diperlukan vesikel berupa multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom guna menjaga kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella ke dalam kulit. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui sifat fisis dan stabilitas fisis sediaan multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella hasil optimasi formula dan mengetahui apakah sediaan multiemulsi A/M/A mampu memberikan kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella ke dalam kulit yang lebih baik dibandingkan sediaan suspensi liposom Penelitian ini menggunakan rancangan eksperimental murni yang bersifat eksploratif yaitu mencari formula multiemulsi A/M/A yang optimal yang ditunjukkan dengan sifat fisis dan stabilitas fisis. Kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dianalisis dengan melakukan uji penetrasi in vitro menggunakan metode sel difusi Franz. Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang terpenetrasi ke dalam kulit diukur dengan menggunakan metode spektrofotometri UV-VIS derivatif. Hasil penelitian menunjukkan formula multiemulsi A/M/A yang optimal dan analisis statistik menunjukkan bahwa ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom memberikan kemampuan penetrasi yang berbeda signifikan. Kata kunci: ekstrak metanol kelopak bunga rosella, multiemulsi, suspensi liposom, sel difusi Franz

xvi


ABSTRACT

Roselle (Hibiscus sabdariffa L.) is a plant that contains anthocyanins that are useful as an antioxidant. Methanol extract of roselle flower petals can penetrate into the skin but the penetration rate is not constant, so it necessary to form in multi-emulsion W/O/W dan the suspension of liposomes in order to keep penetration rate of methanol extract of roselle flower petals into the skin. The aim of this study were to get the optimal formula of multi-emulsion dan compare the penetration capability of the methanol extract of roselle flower petals multiemulsion W/O/W dan the suspension of liposomes into the skin. This study is an experimental design that is purely explorative study to get an optimum formula of multi-emulsion W/O/W indicated with optimal physical properties dan stability. Penetration capability of methanol extract of roselle flower petals was analyzed by conducting in vitro penetration test using Franz diffusion cell method. The amount of roselle extract which was penetrated into the skin was measured using UV-VIS spectrophotometry derivatives. The results were obtained an optimal multi-emulsion formula W/O/W optimal dan statistical analysis showed that the penetration capability of roselle extract in multiemulsi W/O/W and the suspension of liposomes differ significantly. Key word: methanol extract of roselle flower petals, multi-emulsion, liposom suspension, Franz diffusion cell

xvii


BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Indonesia merupakan negara beriklim tropis yang terletak di sepanjang garis ekuator. Sebagai negara tropis, Indonesia mendapatkan intensitas sinar matahari yang lebih besar. Penyinaran sinar matahari secara terus menerus dapat berdampak buruk bagi kulit. Sinar matahari yang masuk ke bumi dan mendapat perhatian khusus yaitu sinar ultraviolet (UV). Sinar UV yang masuk ke bumi dibagi menjadi dua yaitu sinar UV-A merupakan penyebab radiasi paling tinggi dan dapat menembus kulit sampai bagian dermis sehingga dapat merusak sel yang berada di dalamnya dan sinar UV B juga berpotensi merusak kulit namun hanya sampai lapisan luar kulit (epidermis). Adanya radiasi sinar UV ini maka akan memicu terbentuknya radikal bebas dalam tubuh terutama kulit sehingga dapat berdampak buruk bagi kulit yaitu pigmentasi kulit, kerutan (penuaan dini), kerusakan kulit, serta kanker kulit. Adanya kosmetik yang bersifat antioksidan diharapkan mampu mencegah terbentuknya Reactive Oxygen Species (ROS) di dalam kulit terutama pada lapisan epidermis dan dermis. Rosella (Hibiscus sabdariffa L.) merupakan tanaman tropis yang secara luas terdapat di Indonesia dan sejak awal 1970-an, tanaman ini mendapat banyak perhatian khusus karena berpotensi sebagai sumber pewarna makanan alami, farmasi, dan kometik (Suzery, Lestari, dan Cahyono, 2010). Kelopak bunga rosella mengandung sumber penting seperti vitamin, mineral, dan komponen bioaktif seperti asam organik, phytosterol, dan polifenol, beberapa diantaranya

1


2

memiliki efek antioksidan. Senyawa fenolik yang berperan penting dalam kelopak bunga rosella yaitu antosianin yang memberikan pigmen warna merah pada kelopak bunga rosella (Rocha, Bonnlaender, Sievers, Pischel, Heinrich, 2014). Antosianin merupakan senyawa turunan kation flavilium di mana terdapat kekurangan elektron pada inti struktur sehingga sangat reaktif dan menyebabkan antosianin mudah terdegradasi. Oksigen, cahaya, dan suhu diketahui dapat menyebabkan rusaknya antosianin serta perubahan warna pada antosinin sangat

berpengaruh pada berbagai faktor

seperti pH,

suhu,

kopigmentasi, asam askorbat, dan enzim (Hui dan Sherkat, 2005). Senyawa fenolik inilah yang berkontribusi dalam memberikan sifat antioksidan. Menurut penelitian yang dilakukan oleh Pinsuwan, Amnuaikit, Ungphaiboon, dan Itharat (2010), kelopak bunga rosella memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 8,45 ± 0,35 mg/ml. Kelopak bunga rosella merupakan sumber antosianin yang berfungsi sebagai antioksidan guna menanggulangi terbentuknya radikal bebas dalam epidermis dan dermis. Penelitian pendahuluan yang dilakukan oleh peneliti terhadap ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang diaplikasikan pada kulit hewan percobaan menggunakan sel difusi Franz menunjukkan bahwa penetrasi antosianin sangat bervariasi. Hal ini diduga karena kerusakan antosianin dalam ekstrak metanol kelopak bunga rosella sebelum berpenetrasi ke dalam kulit akibat terpapar udara dan sinar, juga pengaruh berbagai reaksi dengan senyawa dan enzim dalam kulit seperti polifenoloksidase, peroksidase, glikosidase, dan esterase. Strategi untuk membawa ekstrak metanol kelopak bunga rosella supaya


3

dapat berpenetrasi ke dalam lapisan kulit target (epidermis dan dermis) dalam keadaan terlindungi dari pengaruh yang dapat menurunkan bioaktivitas antosianin yaitu dengan teknologi enkapsulasi. Mengingat kepolaran ekstrak metanol kelopak bunga rosella, maka pembawa enkapsulasi yang dipilih dalam penelitian ini yaitu multiemulsi dan suspensi liposom. Multiemulsi merupakan sistem kompleks yang biasa dikenal dengan emulsi dalam emulsi, memiliki struktur yang fleksibel, mampu menjerap dan melindungi zat aktif yang bersifat hidrofilik dalam water inner phase, aplikasi dalam industri kosmetik multiemulsi mampu memberikan sensasi nyaman dengan pelepasan zat aktif yang lebih lambat. Selain itu juga akan memberikan sifat mudah tercuci dengan air Liposom merupakan suatu vesikel berbentuk bulat dan kecil yang di dalamnya terdapat cairan yang dibungkus dengan satu atau lebih membran lipid bilayer yang umumnya terbuat dari fosfolipid alam dan kolesterol di mana mampu mengenkapsulasi dan efektif untuk penghantaran senyawa aktif baik yang bersifat hidrofilik maupun hidrofobik dan dapat digunakan sebagai vesikel non toksik untuk senyawa aktif yang larut, ukuran partikel pada liposom umumnya kecil. Sediaan multiemulsi A/M/A yang memiliki efek antioksidan diharapkan mampu meningkatkan stabilitas antosianin sehingga secara tidak langsung dapat memberikan perlindungan kemampuan penetrasi dan tertahannya dalam organ target ekstrak metanol kelopak bunga rosella ke dalam kulit yang lebih baik daripada suspensi liposom ekstrak metanol kelopak bunga rosella dikarenakan ukuran partikel dan entrapment efficiency sediaan multiemulsi yang lebih besar


4

daripada sediaan suspensi liposom sehingga dapat mengenkapsulasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam jumlah banyak dan memberikan kemampuan penetrasi serta tertahan dalam organ target ekstrak metanol kelopak bunga rosella di dalam kulit yang lebih baik daripada suspensi liposom. Studi yang dilakukan pada penelitian ini meliputi penetapan bobot tetap ekstrak metanol kelopak bunga rosella, optimasi formula multiemulsi A/M/A, pembuatan multiemulsi A/M/A, serta uji perbandingan kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A dan sediaan suspensi liposom. 1. Perumusan masalah a. Bagaimana sifat dan stabilitas fisis sediaan multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella hasil optimasi formula? b. Apakah sediaan multiemulsi A/M/A yang telah optimum mempunyai kemampuan sebagai pembawa ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang lebih baik dari pada suspensi liposom dalam berpenetrasi ke dalam lapisan epidermis dan dermis? 2. Keaslian penelitian Penelitian yang terkait dengan penelitian ini sejauh penelusuran penulis yaitu: ―Liposome-Containing Hibiscus sabdariffa Calyx Extract Formulations with Increased Antioxidant Activity, Improved Dermal Penetration dan Reduced Dermal Toxicity oleh

Pinsuwan, dkk (2010).

Penelitian yang akan dilakukan terdapat perbedaan yaitu pada liposom yang mengandung ekstrak metanol kelopak bunga rosella disuspensikan dalam air


5

dan dibandingkan dengan ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A. Sejauh penelusuran pustaka oleh peneliti, penelitian mengenai perbandingan kemampuan penetrasi multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom yang mengandung ekstrak metanol kelopak bunga belum pernah dilakukan. 3. Manfaat a. Manfaat teoritis Penelitian ini menambah informasi bagi dunia ilmu pengetahuan, khususnya dalam

ilmu kefarmasian mengenai

formulasi sediaan

multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella dan kemampuan multiemulsi A/M/A sebagai pembawa ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang lebih baik dari pada suspensi liposom dalam berpenetrasi ke dalam lapisan epidermis dan dermis. b. Manfaat praktis Penelitian ini akan menghasilkan sediaan multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella dan menambah variasi sediaan kosmetik antioksidan yang mengandung ekstrak metanol kelopak bunga rosella. B. Tujuan Penelitian 1. Mengetahui sifat fisis dan stabilitas fisis sediaan multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella hasil optimasi formula 2. Mengetahui apakah sediaan multiemulsi A/M/A yang telah optimum mempunyai kemampuan sebagai pembawa ekstrak metanol kelopak bunga


6

rosella yang lebih baik dari pada suspensi liposom dalam berpenetrasi ke dalam lapisan epidermis dan dermis


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Rosella 1. Klasifikasi Umum Kerajaan : Plantae Divisi

: Magnoliophyta

Kelas

: Magnoliopsida

Bangsa

: Malvales

Suku

: Malvaceae

Marga

: Hibiscus

Jenis

: Hibiscus sabdariffa L. (Maryani dan Kristiana, 2005)

2. Morfologi Rosella merupakan herba tahunan yang bisa mencapai ketinggian 0,53 meter. Batangnya bulat, tegak, berkayu, dan berwarna merah. Daunnya tunggal, berbentuk bulat telur, pertulangan menjari, ujung tumpul, tepi bergerigi, dan pangkal berlekuk. Bunga rosella yang keluar dari ketiak daun merupakan bunga tunggal. Bunga ini mempunyai 8 – 11 helai kelopak yang berbulu panjgannya 11 cm, pangkalnya saling berlekatan dan berwarna merah ditunjukkan pada gambar 1. Bagian inilah yang sering dimanfaatkan sebagai bahan makanan dan minuman. Mahkota bunga berbentuk corong, terdiri dari 5 helai, panjangnya 3-5 cm. Buahnya berbentuk kotak kerucut, berambut,

7


8

terbagi menjadi 5 ruang, dan berwarna merah. Bentuk biji menyerupai ginjal, berbulu dengan panjang 5 mm dan lebar 4 mm (Maryani dan Kristiana, 2005).

Gambar 1. Kelopak bunga rosella (Maryani dan Kristiana, 2005)

3. Kandungan kimia Kandungan kimia dalam bunga rosella yang erat kaitannya dengan efek farmakologi yaitu asam organik, antosianin, polisakarida dan flavonoid. Asam organik yang terkandung pada rosella merupakan kandungan kimia yang memiliki persentase paling tinggi. Asam organik yang terkandung meliputi asam sitrat, hydroxycitric acid, hibiscus acid, malic, oxalic, ascorbic acid dan tartaric acid. Antosianin merupakan turunan kelompok flavonoid dan merupakan pigmen alami yang terkandung pada bunga rosella dan memiliki aneka ragam warna yang dipengaruhi oleh pH. Beberapa peneliti mengindentifikasi

delphinidin-3-sambubiose

(delphinidin-3-O-(2-O-β-D-

xylopyranosyl)- β-D-glucopyranoise) dan sianidin-3-sambubioside (sianiding3-O-(2-O- β-D-xylopyranosyl)- β-D—glucopyranoise) merupakan antosianin utama yang terdapat dalam ekstrak metanol kelopak bunga rosella (Rocha, dkk, 2014).


9

4. Kegunaan Bunga rosella dapat bermanfaat sebagai antibakteri, antifungi, antipiretik, hepatoprotektif, antikanker dan antioksidan. Beberapa penelitian baik secara in vitro maupun in vivo menemukan bahwa ekstrak metanol kelopak bunga rosella memiliki efek antioksidan yang poten (Rocha dkk., 2014). Aktivitas antioksidan yang ditimbulkan ekstrak metanol kelopak bunga rosella disebabkan oleh efek scavenging yang kuat terhadap oksigen reaktif dan radikal bebas, menghambat aktivitas xanthine oksidase, melindungi sel dari kerusakan yang disebabkan oleh lipid peroksidasi, menghambat Cu 2+ dalam mediasi oksidasi LDL, dan membentuk Thiobarbituric acid reactive substances (TBARs) (Rocha dkk., 2014). B. Antosianin Antosianin merupakan metabolit sekunder dari keluarga flavonoid, dalam jumlah besar dapat ditemukan dalam buah-buahan dan sayur-sayuran, tidak berbahaya, dan mudah larut dalam air. Pigmen ini memiliki aneka ragam warna seperti jingga, merah muda, merah, ungu, dan biru (Pazmino, Giusti, Wrolstad, dan Gloria, 2001). Flavonoid memiliki aktivitas antioksidan dan berperan penting dalam mencegah penyakit kanker, diabetes, serta penyakit lainnya (Konczak dan Zhang, 2004). Antosianin terdiri dari cincin aromatik (A) yang mengikat cincin heterosiklik (C) yang mengandung oksigen, di mana juga diikat oleh ikatan karbon-karbon yang mengikat cincin aromatik (B) seperti ditunjukkan pada gambar 2 (Konczak dan Zhang, 2004). Secara kimia semua antosianin merupakan


10

turunan suatu struktur aromatik tunggal, yaitu sianidin, dan semuanya terbentuk dari pigmen sianidin dengan penambahan atau pengurangan gugus hidroksil, metilasi dan glikosilasi (Harbone, 1996). Sifat fisika dan kimia dari antosianin dilihat dari kelarutannya, antosianin larut dalam pelarut polar seperti metanol, aseton, kloroform atau dengan air yang diasamkan dengan asam klorida atau asam format. Antosianin memiliki rumus molekul C15H110 dengan berat molekul yaitu 207,08 gram/mol (Fennema, 1996). Dilihat dari penampakan warna, antosianin mempunyai panjang gelombang maksimum 514 – 545 nm (Harborne, 1996).

Gambar 2. Struktur utama antosianin (Rocha dkk., 2014)

Warna dan stabilitas pigmen antosianin bergantung pada struktur molekul secara keseluruhan. Substitusi pada struktur antosianin akan berpengaruh pada warna antosianin di mana pada kondisi asam, struktur antosianin ditentukan oleh banyaknya substitusi pada cincin B. Semakin banyak substitusi OH akan menyebabkan warna semakin biru (pelargonidin  sianidin  delphinidin), sedangkan metoksilasi menyebabkan warna menjadi semakin merah (sianidin  peonidin  pelargonidin  pelargonidin – 3- glukosida) (Hui dan Sherkat, 2005). Kestabilan antosianin dipengaruhi oleh beberapa faktor yaitu: 1. Pengaruh pH. Warna dan struktur pigmen antosianin dalam medium cair dipengaruhi oleh pH. Terdapat 4 bentuk struktur pigmen antosianin yaitu basa


11

quinonoidal warna biru, kation flavilium merah(R+), basa karbinol tak berwarna, dan kalkon tak berwarna seperti ditunjukkan pada gambar 3. Kation flavilium merah, dan basa karbinol tak berwarna merupakan 2 senyawa yang sangat penting ketika terjadi perubahan pH dari pH 1-6. pH 4-6, kation flavilium merah akan mendominasi, sedangkan pada pH yang tinggi basa karbinol biru meningkat dan warna menjadi lemah. Hilangnya warna disebabkan oleh hidrasi posisi C2 pada kation flavilium merah (Hui dan Sherkat, 2005).

Gambar 3. Perubahan struktur kimia antosianin terhadap pH (Hui dan Sherkat, 2005)


12

2. Pengaruh suhu. Degradasi pigmen antosianin dipengaruhi oleh suhu, di mana suhu dapat mengubah kesetimbangan 4 tipe antosianin menjadi kalkon tak berwarna. Perubahan yang terjadi ini bersifat irreversible. Antosianin terhidroksilasi kurang stabil pada keadaan panas daripada antosianin termetilasi terglikosilasi atau termetilasi (Hui dan Sherkat, 2005). Quinonoid

Flavilium

Basa karbinol

Kalkon

3. Pengaruh enzim. Adanya enzim glikosidase dan enzim polifenoloxidase dapat menyebabkan hilangnya warna dari pigmen antosianin. Enzim glikosidase akan menghidrolisis ikatan glikosida dan memproduksi gula serta aglikonnya sehingga antosianidin menjadi kurang larut air dan produksi warna menjadi berkurang. Enzim polifenoloksidase akan mengoksidasi antosianin yang mengandung

oksigen

dan

o-difenol.

Enzim

polifenoloksidase

akan

mengoksidase o-difenol menjadi o-benzoquinon yang akan bereaksi dengan antosianin untuk membentuk antosianin teroksidasi dan produk degradasi (Hui dan Sherkat, 2005). 4. Pengaruh kopigmenasi. Kopigmen merupakan penggabungan antosianin dengan antosianin atau komponen organik lainnya di mana dapat meningkatkan stabilitas dan intensitas warna antosianin sehingga sehingga penyerapan warna pada panjang gelombang maksimum meningkat (Shi, J., Mazza, G., dan Maquer, M.L., 2002). 5. Pengaruh oksigen. Oksigen dapat bereaksi dengan ikatan rangkap dua dari pigmen antosianin sehingga warna yang dihasilkan berkurang. Antosianin yang disimpan dibawah kondisi vakum atau dijenuhkan dengan nitrogen akan


13

lebih stabil daripada antosianin yang terpapar dengan oksigen. Hal ini mengimplementasikan bahwa kemasan produk yang mengandung antosianin harus memiliki penghalang oksigen yang tinggi atau headspace kemasan diminimalisir untuk mencegah terjadinya degradasi antosianin selama penyimpanan dan pemasaran (Shi, dkk., 2002). 6. Pengaruh cahaya. Secara umum, cahaya dapat mempercepat dekomposisi pigmen antosianin. Adanya cahaya membuat antosianin tereksitasi melewati transfer elektron yang dapat mempengaruhi pigmen terdekomposisi fotokimia (Shi, dkk., 2002). C. Multiemulsi Multiemulsi merupakan suatu sistem dispersi cairan kompleks yang dikenal dengan istilah ‗emulsi dalam emulsi‘, di mana droplet suatu dispersi cairan (air dalam minyak atau minyak dalam air) didispersikan ke cairan lainnya (air atau minyak) untuk menghasilkan multiemulsi A/M/A atau M/A/M (Lutz dan Aserin, 2008).

Gambar 4. Gambaran skema dan mikroskop multiemulsi A/M/A (Lutz dan Aserin, 2008)

Umumnya droplet pada multiemulsi bersifat polidispersi. Ukuran droplet diameter globul rata-rata multiemulsi umumnya sedikit lebih besar berkisar antara


14

15 – 50 µm dengan terdiri dari 50 – 100 droplet air pada setiap globul minyak dalam emulsi, sedangkan yang lainnya dapat lebih kecil berkisar antara 2 – 5 µm yang akan terdiri dari satu atau beberapa droplet air untuk setiap globul minyak dalam emulsi (Garti dan Bisperink, 1998). Pembuatan multiemulsi dapat dilakukan secara konvensional dengan beberapa metode yaitu sonikasi, agitasi dan inversi fase (Meyers, 2006). Metode pembuatan emulsi ganda yang paling umum yaitu metode inversi fase menggunakan proses emulsifikasi 2 tahap dengan dua jenis emulgator. Emulgator hidrofobik didesain untuk menstabilkan emulsi air dalam minyak sedangkan emulgator hidrofilik untuk menstabilkan emulsi minyak dalam air (Garti dan Bisperink, 1998). Pembuatan emulsi air dalam minyak menggunakan kondisi kecepatan pengadukan yang tinggi (ultrasonifikasi dan homogenisasi) agar memperoleh droplet yang kecil, sedangkan tahap emulsifikasi kedua dibuat tanpa pengadukan yang berlebihan karena dapat merusak droplet emulsi primer (Garti, 1997). Kegunaan utama sistem multiemulsi adalah membatasi dan melindungi sistem untuk pelepasan terkendali dari zat aktif. Namun, emulsi ganda dapat dimanfaatkan dalam berbagai bidang, diantaranya: 1. Aplikasi dalam industri makanan, emulsi ganda tipe A/M/A dapat meningkatkan kelarutan dari bahan tertentu, bahan larut, dan tidak larut minyak, namun mampu melindungi reservoir cairan untuk molekul yang sensitif terhadap aktivitas lingkungan luar seperti oksidasi, cahaya, dan enzim,


15

dan mampu menjerap reservoir untuk melindungi rasa dan aroma yang diinginkan (Lutz dan Aserin, 2008). 2. Aplikasi dalam industri kosmetik, multiemulsi A/M/A akan memberikan sensasi nyaman dengan pelepasan zat aktif yang lebih lambat. Selain itu juga akan memberikan sifat mudah tercuci dengan air (Lutz dan Aserin, 2008). 3. Sebagian besar aplikasi berhubungan dengan industri farmasetika, sediaan multiemulsi akan memberikan keuntungan dalam meningkatkan efek kemoterapi dari obat antikanker, imobilisasi obat, pengobatan overdosis obat, dan melindungi insulin dari degradasi enzimatik (Lutz dan Aserin, 2008). 4. Aplikasi dalam industri agrikultur, emulsi ganda dapat berperan sebagai sistem lepas lambat untuk penyubur dan pestisida (Lutz dan Aserin, 2008). 5. Aplikasi dalam kesehatan, zat aktif yang bersifat hidrofilik dapat dilarutkan pada fase air internal dari globul emulsi, yang menunjukkan pelepasan obat diperpanjang, dan dapat mengurangi efek toksik (Kumar, Kumar, dan Mahadevan, 2012). Kelebihan sistem multiemulsi yaitu biokompatibel, biodegradasi, dan memiliki struktur yang fleksibel, mampu menjerap dan melindungi zat aktif yang bersifat hidrofilik dan lipofilik, serta untuk pelepasan obat lepas lambat atau terkontrol. Selain kelebihan tersebut, terdapat beberapa kelemahan seperti sulit untuk diformulasikan, ukuran partikel besar dan rentan dari degradasi fisika dan kimia (Kumar, dkk., 2012). Tekanan osmotik akan berpengaruh terhadap kestabilan multiemulsi. Multiemulsi tipe A/M/A pemecahan emulsi dapat terjadi karena tekanan osmotik


16

yang tidak sama antara fase cair dalam dan luar. Tekanan osmotik pada fase air luar lebih tinggi daripada fase air dalam sehingga akan menyebabkan penyusutan cairan droplet dalam atau pecahnya lapisan minyak. Sodium klorida atau elektrolit lainnya ditambahkan pada fase air dalam maupun fase air luar pada multiemulsi tipe A/M/A yang dapat bermigrasi melewati lapisan minyak dan sampai pada fase cair lainnya melalui perpindahan melalui miselar terbalik, difusi melewati lamella emulgator tipis yang bergantung pada fluktuasi ketebalan minyak, dan perpindahan melalui emulgator terhidrasi (Benichou, Aserin dan Garti, 2004 ; Jiao dan Burgess, 2008). Tekanan Laplace muncul disebabkan karena tegangan permukaan campuran dua cairan pada lengkungan antarmuka ketika cairan satu terdispersi sebagai droplet ke cairan lainnya. Tekanan Laplace pada proses emulsifikasi menyebabkan suatu emulsi menjadi tidak efisien secara termodinamika. Untuk membentuk droplet yang kecil, sangat melengkung, dibutuhkan energi yang lebih besar. Penambahan konsentrasi garam yang mendekati optimal pada fase dalam berada antara tekanan Laplace dan tekanan osmotik pada droplet cairan dalam sehingga mencapai stabilitas maksimum (Jiao dan Burgess, 2008). Stabilitas merupakan masalah utama dalam sistem multiemulsi. Empat mekanisme yang mungkin dapat menyebabkan ketidakstabilan multiemulsi yaitu: 1) koalesense droplet air internal; 2) koalesense droplet minyak; 3) pecahnya lapisan minyak yang menyebabkan hilangnya droplet air internal; dan 4) pindahnya air dan senyawa hidrofilik melalui lapisan minyak. Hal ini dapat terjadi dengan dua cara yaitu: 1) melalui transportasi misel terbalik yang dibentuk oleh


17

emulgator lipofilik; dan 2) difusi sederhana karena adanya perbedaan osmotik pada kedua fase air (Kumar, dkk., 2012). D. Monografi Bahan Tambahan 1. Emulgator Emulgator

merupakan

suatu

molekul

yang

memiliki

rantai

hidrokarbon nonpolar dan polar pada tiap ujung rantai molekulnya. Emulgator memiliki kemampuan menarik fase air dan fase minyak sekaligus, serta dapat menempatkan diri di antara kedua fase tersebut. Keberadaan emulgator ini akan menurunkan tegangan permukaan fase air dan fase minyak (Friberg, Quencer, dan Hilton, 1996). Secara umum, jenis emulgator dibagi menjadi 3 seperti yang ditunjukkan pada tabel 1 (Troy dan Beringer, 2006). Tipe Sintetik

Tipe lapisan Monomol ekular

Tabel 1. Klasifikasi emulgator Contoh Anionik

Kationik

1. Sabun

Quaternary ammonium compounds Cetyltrimethyllammonium bromide Lauryldimethylbenzylammonium chloride Nonionic Polyoxyethylene fatty alcohol ethers Sorbitan fatty acid esters

a.

Potassium Laurate

b.

2.

3.

Triethanolamine stearate Sulfates a. Sodium lauryl Sulfate b. Alkyl polyoxyethylene sulfates Sulfonates a.

Natural

Multimol ekular

dioctyl sodium sulfosuccinate

Hydrophilic colloids a.

acacia

Polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters Polyoxyethylene polyoxypropylene block copolymers (poloxamers) Lanolin alcohols and ethoxylated lanolin alcohols


monomol ekular Finely divided solids

Solid particle

b. a.

18

gelatin lecithin

b. Cholesterol Colloidal clays

a. bentonite b. Veegum Metallic hydroxides a. Magnesium hydroxide (Troy dan beringer, 2006)

Surfaktan merupakan senyawa yang mampu menurunkan tegangan permukaan. Senyawa ini memiliki struktur rantai panjang serta memiliki gugus lipofil maupun hidrofil dalam molekulnya. Emulgator dalam fase air akan berorientasi sehingga bagian hidrofiliknya akan masuk ke cairan. Adsorpsi molekul emulgator pada permukan cairan menyebabkan terjadinya penurunan tegangan permukaan. Pada penambahan emulgator, tegangan permukaan mula – mula akan turun sangat cepat mencapai harga tertentu yang selanjutnya tidak akan berkurang meskipun dilakukan penambahan emulgator. Harga tertentu ini dikenal dengan CMC (critical micelle concentration) (Voight, 1995). a. Polioksietilen sorbitan monooleat (Tween 80)

Gambar 5. Struktur Tween 80


19

Tween 80 (gambar 5) berbentuk cairan kental berwarna kuning terang sampai kuning sawo. Tween 80 bersifat non toksik. Tween 80 mudah larut dalam air, etanol, minyak tumbuhan, etil asetat, metanol, tetapi tidak larut dalam minyak mineral. Tween 80 memiliki nilai HLB 15. Konsentrasi yang digunakan yaitu 1% - 15% apabila digunakan sebagai emulgator tunggal. Apabila dikombinasikan dengan surfaktan lipofilik, konsentrasi yang diperbolehkan yaitu 1% - 10% (Rowe, Sheskey, dan Quinn, 2009). Penggunaan Tween 80 dalam farmasi yakni sebagai emulsifying agent, wetting agent, penetrating agent, dan diffusian (Som, Bhatia, dan Yasir, 2012). b. Sorbitan monooleat (Span 80)

Gambar 6. Struktur Span 80

Span 80 (gambar 6) berbentuk cairan kental berwarna kuning terang. Span 80 tidak larut air, tetapi larut dalam pelarut organik. Span 80 memiliki nilai HLB 4,3. Span 80 sering digunakan dalam kosmetik, produk makanan, dan formulasi farmasi sebagai surfaktan non ionik. Aplikasi bagi sediaan farmasi, Span 80 sering digunakan sebagai emulgator dalam sediaan krim, emulsi, dan salep untuk sediaan topikal. Ketika digunakan sendiri, akan menghasilkan emulsi A/M dan mikroemulsi, tetapi sering dikombinasikan dengan polisorbat dalam


20

jumlah yang sesuai untuk menghasilkan emulsi air dalam minyak atau minyak dalam air atau krim. Konsentrasi yang digunakan yaitu 1% - 15% apabila digunakan sebagai emulgator tunggal. Apabila dikombinasikan dengan surfaktan hidrofilik, konsentrasi yang diperbolehkan yaitu 1% 10% (Rowe dkk., 2009). 2. Parafin cair Parafin dalam sediaan topikal digunakan untuk meningkatkan titik leleh atau meningkatkan pengerasan (bahan pengeras). Parafin tidak menyebabkan toksik ataupun iritasi. Parafin cair berbentuk cairan kental dan tidak berwarna. Konsentrasi yang digunakan dalam sediaan topikal yaitu 1,0% – 32,0% (Rowe dkk., 2009). Parafin cair dapat berfungsi sebagai emolien untuk mencegah dehidrasi pada saat sediaan diaplikasikan ke kulit (Tranggono, 2007). 3. Setil alkohol

Gambar 7. Struktur setil alkohol Setil alkohol (gambar 7) berupa kristal putih, tidak larut air, bercampur dengan alkohol, glikol dan miyak kosmetik (Windholz, 1976). Sediaan lotion, krim dan salep, setil alkohol digunakan sebagai emolien, penyerap air, dan pembantu pengemulsi. Setil alkohol dapat digunakan


21

sebagai emolien karena dapat mengabsorbsi air yang ada pada lingkungan sehingga kulit akan terjaga kelembabannya. Setil alkohol sebagai stiffening agent karena dapat menambah viskositas dan konsistensi sediaan emulsi. Setil alkohol digunakan sebagai pembantu emulgator tipe A/M karena dapat mengikat fase air dan minyak dalam sistem emulsi sehingga dapat mengurangi jumlah penambahan emulgator lain dalam sediaan. Setil alkohol dapat digunakan sebagai stiffening agent dengan konsentrasi 2% - 10% (Rowe dkk., 2009). 4. Dimethicone

Gambar 8. Struktur dimethicone

Dimethicone (gambar 8) berupa cairan tak berwarna dengan berbagai viskositas. Aplikasi dalam emulsi topikal, biasanya ditambahkan pada fase minyak sebagai antifoaming agent. Konsentrasi dimethicone dalam sediaan krim, lotion dan salep yaitu 10% - 30% (Rowe dkk., 2009).


22

5. Xanthan gum

Gambar 9. Struktur xanthan gum

Xanthan gum (gambar 9) berwarna krem hingga putih, tidak berbau, mudah mengalir dan berupa serbuk yang halus. Xanthan gum tergolong dalam gum polisakarida dengan berat molekul yang besar. Umumnya digunakan untuk sediaan oral maupun topikal, tidak toksik dan kompatibel dengan hampir semua bahan farmasetika. Gel xanthan gum umumnya bersifat pseudoplastik. Aplikasi dalam bentuk larutan, xanthan gum stabil terhadap enzim, garam, asam dan basa. Xanthan gum bersifat anionik dan umumnya tidak kompatibel dengan surfaktan kationik, polimer atau pengawet karena memungkinkan terjadi pengendapan. Konsentrasi surfaktan anionik dan amfoterik diatas 15% b/v dapat menyebabkan pengendapan pula pada larutan xanthan gum (Rowe dkk., 2009). Xanthan gum termasuk stabilisator multiemulsi hidrokoloid. Suatu hidrokoloid secara signifikan mampu meningkatkan stabilitas multiemulsi karena membantu enkapsulasi yang lebih baik pada fase dalam sehingga mencegah


23

pelepasan tidak terkendali dari bahan yang terjerap. Stabilisasi emulsi ganda ini dapat dicapai karena adanya stabilisasi deplesi. Stabilisasi deplesi diperoleh dari partikel koloidal yang diberikan oleh makromelekul yang terbebas di larutan (Lutz dan Aserin, 2008). E. Suspensi Liposom Liposom merupakan suatu vesikel berbentuk bulat dan kecil yang di dalamnya terdapat cairan yang dibungkus dengan satu atau lebih membran lipid bilayer yang umumnya terbuat dari fosfolipid alam dan kolesterol (Jesorka dan Orwar, 2008). Liposom mampu mengenkapsulasi dan efektif untuk penghantaran senyawa aktif baik yang bersifat hidrofilik maupun hidrofobik dan dapat digunakan sebagai vesikel non toksik untuk senyawa aktif yang larut. Liposom dapat membawa obat dalam satu atau tiga kompartemen yaitu: 1) senyawa aktif yang larut air berada pada central aqueous core; 2) senyawa aktif larut minyak berada pada lapisan membran; 3) peptida dan protein berukuran kecil berada pada permukaan air lemak (Bhai, Yadav, Mamatha, dan Prasanth, 2012). Secara umum, komposisi liposom terdiri dari fosfolipid alam dan atau sintetik. Phosphatidylcholine (lesitin) dan phosphatidylethanolamine merupakan dua komponen struktural utama dari sebagian besar membran biologis. Liposom bilayer juga mengandung komponen tambahan seperti kolesterol, lipid konjugat hidrofilik polimer, dan air. Kolesterol merupakan komponen tambahan yang paling sering digunakan untuk meningkatkan karakteristik bilayer pada liposom dengan cara meningkatkan fluiditas membran, stabilitas bilayer, dan mengurangi


24

permeabilitas molekul yang larut air untuk melewati membran (Laouini, Maalej, Blouza, Sfar, Charcosset, dan Fessi, 2012). Pemilihan komponen bilayer dilihat dari rigiditas atau fluiditas dan charge bilayer. Fosfatidilkolin unsaturated yang berasal dari telur atau fosfatidilkolin kedelai memberikan bilayer yang lebih permeable dan elastis sehingga dapat berperan sebagai penetration enhancer, dan memfasilitasi penetrasi molekul obat melalui stratum korneum sedangkan fosfolipid saturated dengan rantai asil yang panjang seperti dipalmiitoylphos phatidylcholine membentuk struktur bilayer yang rigid namun impermeable (Akbarzadeh, Sadabady, Davaran, Joo, Zarghami, Hanifehpour, dkk., 2013). Liposom terbentuk ketika lipid yang terdiri dari kelompok kepala hidrofilik dan ekor hidrofobik di dispersikan ke dalam air, membentuk lapisan tipis lipid bimolekular. Selama agitasi, lapisan lipid bimolekular tipis terhidrasi ini akan terpisah dan masing-masing akan bergabung membentuk vesikel yang mencegah interaksi antara hidrokarbon lapisan lipid dengan air sekitarnya, ditunjukkan pada gambar 10 (Jesorka dan Orwar, 2008).

Gambar 10. Ilustrasi pembentukan liposom (Jesorka dan Orwar, 2008)


25

Ukuran vesikel merupakan parameter terpenting dalam mendeterminasi liposom serta ukuran dan jumlah bilayer mempengaruhi jumlah obat yang terenkapsulasi dalam liposom. Berdasarkan ukuran dan jumlah bilayer, liposom dapat diklasifikasikan menjadi lima yaitu: 1. Small Unilamellar Vesicles (SUV). Liposom berukuran 20 – 100 nm dan terdiri dari 1 lapis bilayer 2.

Large Unilamellar Vesicles (LUV). Liposom berukuran >100 nm dan terdiri dari 1 lapis bilayer

3.

Giant Unilamellar Vesicles (GUV). Liposom berukuran >1000 nm dan terdiri dari 1 lapis bilayer

4. Oligolamellar Vesicles (OLV). Liposom berukuran 100 – 500 nm dan terdiri dari >1 lapis bilayer 5. Multilamellar Vesicles (MLV). Liposom berukuran >500 nm dan terdiri dari >1 lapis bilayer (Laouini, dkk., 2012).

Gambar 11. Klasifikasi liposom berdasarkan ukuran dan jumlah bilayer (Laouini, dkk., 2012)


26

Liposom dimanfaatkan sebagai pembawa obat dengan alasan vesikel ini dapat memberikan keuntungan seperti: liposom dapat mengarahkan obat pada target tertentu misalnya pada long circulating liposomes yang bekerja pada target selektif area patologis tertentu; liposom dapat berfungsi sebagai reservoir obat yang melepaskan obat secara perlahan sehingga akan meningkatkan efektivitas obat dan memperpanjang masa edar obat di dalam darah; liposom dapat melindungi obat yang tidak stabil (antimikrobia, antioksidan, dan senyawa bioaktif); liposom dapat melindungi obat dari degradasi sebelum mencapai target dan melindungi pasien dari efek samping yang berbahaya (Akbarzadeh, dkk., 2013). Mekanisme pelepasan obat melalui liposom dengan cara pertama melakukan fusi dengan membran sel plasma dengan menyisipkan lipid bilayer liposom ke membran plasma, kedua menstimulasi pelepasan obat yang terkdanung dalam liposom ke ruang interstisial untuk selanjutnya substansi secara aktif diambil oleh sel melalui transport paraseluler ditunjukkan pada gambar 12 (Akbarzadeh, dkk., 2013).

Gambar 12. Mekanisme pelepasan obat dari liposom (Wilczewska, 2012)


27

F. Kulit Kulit merupakan organ tubuh paling besar yang melapisi seluruh tubuh. Luas kulit pada manusia rata – rata sekitar 2 m2 dengan berat 10 kg jika ditimbang dengan lemaknya atau 4 kg jika tanpa lemak, atau beratnya 16% dari berat badan seseorang (Kusantati, Prihatin, dan Wiana, 2008). Struktur dan fungsi dari kulit manusia terdiri dari empat bagian utama yaitu stratum korneum, viable epidermis, dermis, dan jaringan subkutan yang ditunjukkan pada gambar 13.

Gambar 13. Struktur dan fungsi kulit (Walters, 2002)

Struktur kulit meliputi bagian – bagian di bawah ini: 1. Stratum korneum yang disebut juga non viable epidermis merupakan lapisan terluar dari kulit yang merupakan penghalang utama masuknya zat asing. Rata


28

– rata ketebalan stratum korneum yaitu 10 – 20 µm dengan struktur terdiri dari brick dan mortar yang merupakan barrier pengontrol kecepatan dalam absorbsi transdermal (Walters, 2002). 2. Epidermis merupakan bagian dari kulit yang berlapis-lapis dengan ketebalan 0,06 mm pada kelopak mata dan 0,08 mm pada telapak tangan dan telapak kaki. Epidermis tidak terdapat pembuluh darah (Benson, 2012). 3. Dermis mempunyai ketebalan yang bervariasi tergantung lokasi kulit. Dermis memiliki dua lapisan yaitu papillary layer yang berisi susunan tipis daris erat kolagen dan reticular layer yang tersusun dari seraat kolagen tebal dan tersusun sejajar

dengan permukaan kulit

(Brannon,

2007).

Dermis

mengandung banyak pembuluh darah yang memiliki peran penting dalam pengaturan suhu tubuh dan tekanan darah. Jaringan kapiler yang luas dalam stratum papiler berfungsi untuk mengatur suhu tubuh dan memberi makan epidermis di atasnya yang tidak memiliki pembuluh darah sendiri (Junquera dan Kelley, 1997). 4. Jaringan subkutan merupakan lapisan lemak dan jaringan ikat yang di dalamnya terdapat pembuluh darah dan syaraf. Lapisan ini berperan untuk pengaturan suhu kulit maupun suhu tubuh (Brannon, 2007). Penetrasi obat melintasi stratum korneum dapat terjadi karena adanya proses difusi melalui dua mekanisme, yaitu melalui jalur transepidermal dan jalur transppendageal (gambar 14)


29

Gambar 14. Jalur umum zat aktif dalam menembus kulit (Lane, 2013)

1. Jalur transepidermal. Jalur ini merupakan jalur difusi melalui stratum korneum yang terjadi melalui 2 jalur yaitu jalur transselular yang berarti jalur melalui protein di dalam sel dan melewati daerah yang kaya akan lipid, dan jalur interseluler yang berarti jalur melalui ruang antar sel. Penetrasi pada jalur transepidermal berlangsung melalui dua tahap yakni pertama, pelepasan obat dari pembawa ke stratum korneum tergantung koefisien partisi obat dalam pembawa dan stratum korneum. Kedua, difusi melalui epidermis dan dermis dibantu oleh aliran pembuluh darah dalam lapisan dermis (Benson, 2012). 2. Jalur transappendageal. Jalur ini merupakan jalur masuknya obat melalui folikel rambut dan kelenjar keringat yang disebabkan karena adanya pori-pori di antaranya, sehingga memungkinkan obat berpenetrasi. Penetrasi obat melalui jalur transepidermal lebih baik daripada jalur transappendageal, karena luas permukaan pada jalur transappendageal lebih kecil (Benson, 2012). Faktor – faktor yang mempengaruhi absorbsi perkutan yaitu: 1. Konsentrasi obat dalam sediaan. Konsentrasi obat dalam sediaan semakin tinggi maka jumlah obat yang diabsorbsi per unit luas permukaan akan semakin besar.


30

2. Luas permukaan tempat absorbsi. Apabila luas permukaan tempat absorbsi semakin besar, maka jumlah obat yang diabsorbsi per unit luas permukaan akan semakin besar. 3. Karakteristik pembawa. Pembawa yang mudah menyebar pada permukaan kulit akan meningkatkan absorbsi. Pembawa yang dapat meningkatkan kelembaban kulit akan meningkatkan absorbsi. 4. Hidrasi kulit. Hidrasi stratum korneum akan meningkatkan penetrasi obat ke dalam kulit. 5. Afinitas obat terhadap kulit obat harus mempunyai afinitas terhadap kulit yang lebih besar daripada terhadap pembawa 6. Koefisien partisi obat. Koefisien partisi obat mempengaruhi kelarutan obat dalam minyak dan air. 7. Cara aplikasi obat pada kulit. Pengolesan dan penggosokkan obat pada kulit akan meningkatkan penetrasi obat ke dalam kulit. 8. Tempat aplikasi obat. Tempat aplikasi obat berpengaruh terhadap kemampuan penetrasi obat. Aplikasi pada bagian kulit yang telah tipis akan meningkatkan penetrasi obat daripada aplikasi pada bagian kulit yang lebih tebal. 9. Waktu kontak obat dengan kulit. Semakin lama waktu kontak obat dengan kulit maka akan meningkatkan penetrasi obat ke dalam kulit. (Ansel, 2005) G. Sinar Matahari Sinar matahari merupakan sumber dari radiasi elektromagnetik. Ketika memancarkan radiasi, sebagian dari sinar matahari masuk ke bumi melewati


31

atmosfer hingga kemudian sampai ke permukaan bumi. Jumlah dari total radiasi matahari yang sampai ke bumi disebut insolasi (Kiil dan Houmoller, 2013). Spektrum elektromagnetik yang dipancarkan oleh matahari terdiri dari sinar tampak dan radiasi sinat tampak dekat seperti sinar X, ultraviolet, inframerah dan gelombang radio (Solarradiation, 2013). Sinar matahari ketika sampai di atmosfer akan dipantulkan oleh lapisan ozon, sedangkan sisanya diserap dan diubah menjadi panas (Kiil dan Houmoller, 2013). Radiasi sinar ultraviolet merupakan penyebab berbagai kerusakan kulit, termasuk kanker. Radiasi yang dipancarkan sinar matahari terdiri dari beberapa jenis. Salah satunya yaitu sinar ultraviolet (UV) yang terdiri dari beberapa jenis dengan panjang gelombang yang berbeda (Anna, 2015). Sinar ultraviolet (UV) merupakan bagian dari spektrum elektromagnetik yang mempunyai panjang gelombang antara 40 sampai 400 nm. Spektrum UV dibagi menjadi UV vakum (40-190 mn), UV jauh (190-220 nm), UV C (220-290 nm), UV B (290-320 nm), dan UV A (329-400 nm) (National Aeronautics dan Space Administration, 2007). Sinar UV A merupakan penyebab radiasi sinar UV paling tinggi. Radiasi sinar ini dapat menembus kulit sampai bagian dermis dan dapat merusak sel yang berada di dalamnya. Efek yang ditimbulkan akibat radiasi sinar ini yaitu pigmentasi kulit (timbul bercak hitam pada kulit), kerusakan kulit, dan kerutan (penuaan dini). Sinar UV B juga berpotensi merusak kulit namun hanya sampai lapisan luar kulit (epidermis). Sinar UV B membantu tubuh untuk mengolah vitamin D pada pagi hari terutama sebelum jam 10 pagi namun sinar ini


32

menyebabkan kerusakan fotokimia pada DNA sel sehingga memicu timbulnya kanker kulit (Mutia, 2015). H. Enhancer Enhancer kimia merupakan senyawa yang dapat meningkatkan penetrasi perkutan obat dengan berpartisi pada stratum korneum dan mengubah susunan lipid-protein yang ada di kulit. Perubahan ini menyebabkan perubahan sifat dan penurunan

pertahanan

pada

stratum

korneum.

Enhancer

kimia

dapat

meningkatkan permeabilitas stratum korneum melalui beberapa mekanisme yaitu : (1) meningkatkan fluiditas lipid di kulit; (2) melalui hidrasi jalur polar; (3) melalui aksi keratolitik; (4) meningkatkan kelarutan obat; dan (5) meningkatkan partisi stratum korneum (Kumar dan Philip, 2007). Enhancer kimia yang dapat berperan sebagai penetrating enhancer yaitu: 1. Asam lemak. Keefektifan asam lemak sebagai senyawa peningkat penetrasi ditentukan dari panjang rantai karbon. Panjang rantai karbon C7 - C12, akan meningkatkan penetrasi suatu obat, namun apabila panjang rantai karbon diatas 12 maka akan menurunkan penetrasi zat. Efektifitas optimal asam lemak sebagai senyawa peningkat penetrasi yaitu pada asam lemak dengan panjang karbon C9 – C12 karena mempunyai koefisien partisi dan afinitas yang sesuai dengan kulit. Asam lemak yang mempunyai panjang rantai karbon yang pendek tidak mempunyai lipofilisitas yang sesuai untuk penetrasi. Asam lemak yang mempunyai panjang rantai karbon yang lebih panjang akan mempunyai afinitas terhadap lemak stratum korneum sehingga dapat


33

memperlambat penetrasi. Asam lemak yang banyak digunakan sebagai senyawa peningkat penetrasi yaitu asam oleat (Pathan dan Setty, 2009). 2. Minyak esensial dan terpen. Senyawa ini bekerja dengan memodifikasi sifat alami pelarut stratum korneum serta senyawa ini dapat menurunkan waku lag penetrasi (Pathan dan Setty, 2009). 3. Urea. Urea bekerja dengan menghidrasi stratum korneum dan dengan membentuk kanal difusi hidrofilik. Urea siklik memiliki gugus polar dan non polar sehingga mekanisme peningkat penetrasi disebabkan oleh aktivitas hidrofilik dan oragnisasi lipid di stratum korneum(Pathan dan Setty, 2009). 4. Azon. Azon merupakan enhancer kimia pertama yang didesain sebagai senyawa peningkat penetrasi. Azon bekerja dengan cara mempengaruhi lipid sfingosin dan seramida yang secara alami ditemukan dilapisan kulit bagian atas (Pathan dan Setty, 2007). 5. Surfaktan. Penambahan surfaktan ke dalam suatu formula berfungsi untuk melarutkan senyawa aktif yang bersifat lipofilik. Surfaktan juga mempunyai potensi untuk melarutkan lipid pada lapisan stratum korneum. Surfaktan biasanya terdiri dari alkil lipofilik atau aril rantai lemak dengan gugus hidrofilik pada bagian kepala. Surfaktan yang biasanya digunakan yaitu polioxyethylene alkyl ether (Brij) dan polyoxythylene sorbitan fatty acid ester (Tween). Studi DSC pada surfaktan non ionik mengindikasikan bahwa surfaktan akan berinteraksi dengan kulit dan mengubah struktur lipid dan meningkatkan permeabilitas di mana kemampuan surfaktan mempengaruhi kulit tergantung dari sifat fisika kimianya (Lane, 2013).


34

I. Uji Penetrasi In Vitro Uji penetrasi in vitro dilakukan guna mengukur kecepatan dan jumlah senyawa yang melewati kulit, yang mana hal tersebut tergantung pada obat, bentuk sediaan, eksipien, bahan peningkat penetrasi dan variabel formulasi lainnya. (Witt dan Bucks, 2003). Kelebihan utama uji penetrasi in vitro yaitu kondisi penelitian yang dilakukan dapat dikontrol secara presisi seperti variabel kulit dan material yang digunakan. Namun hal ini dapat menimbulkan kerugian seperti informasi terkait metabolism, distribusi, dan efek aliran darah terhadap permeasi tidak dapat diketahui (Walters, 2002). Salah satu metode in vitro untuk mengukur jumlah obat yang terpenetrasi ke kulit yaitu dengan menggunakan sel difusi Franz. Sel difusi Franz merupakan sel difusi tipe vertikal untuk mengetahui penetrasi suatu senyawa ke dalam kulit secara in vitro. Sel difusi Franz terdiri dari dua kompartemen yaitu kompartemen donor dan kompartemen akseptor yang dipisahkan oleh membran seperti ditunjukkan pada gambar 15 (Walters, 2002).

Gambar 15. Sel difusi Franz (Bartosova dan Bajgar, 2012)


35

Membran yang dapat digunakan uji penetrasi in vitro yaitu kulit tikus, babi, marmot, kelinci, ular, manusia, atau membran kulit sintetik. Kulit manusia merupakan pilihan utama untuk uji penetrasi in vitro namun sulit untuk didapatkan sehingga banyak digunakan kulit tikus sebagai penggantinya (Nair dan Panchagula, 2004). Bagian kulit manusia yang sering digunakan yaitu kulit abdominal atau breast sedangkan kulit hewan yang biasanya digunakan yaitu bagian flank dan back (rat) dan flank dan ear (babi) (Bartosova dan Bajgar, 2012). Uji penetrasi in vitro menggunakan kulit tikus dapat memberikan informasi yang berguna untuk memanipulasi desain pemberian obat secara transdermal, sehingga dapat dicapai permeasi obat yang menembus kulit (Al-saidan, Krishnaih, Chdanrasekhar, Lalla, Rama, Jayaram, dkk., 2004). Cara melakukan uji penetrasi dengan sel difusi Franz yaitu sejumlah tertentu zat diaplikasikan pada membran dan dibiarkan berpenetrasi secara difusi pasif melalui membran. Mengetahui jumlah zat yang terpenetrasi maka dilakukan sampling pada cairan kompartemen akseptor selama waktu tertentu hingga mencapai kondisi tunak. Cairan dari kompartemen akseptor yang diambil harus digantikan dengan cairan awal sejumlah volume yang di ambil. Hal ini bertujuan untuk menjaga volume dalam cairan akseptor tetap konstan dan untuk menjaga supaya cairan di kompartemen akseptor tetap dalam keadaan tunak (Witt dan Bucks, 2003). Faktor yang perlu diperhatikan dalam uji penetrasi secara in vitro yaitu: 1. Pemilihan membran. Penggunaan kulit manusia sebagai membran uji memiliki beberapa kesulitan seperti mendapatkan kulit manusia tersebut,


36

kesulitan mengontrol jenis kelamin, ras, umur, dan kondisi kulit, sehingga untuk uji penetrasi secara in vitro bisa digunakan kulit hewan sebagai penggantinya seperti kulit tikus, babi, marmot, kelini, dan ular (Wiechers, 1989). 2. Larutan donor. Senyawa yang dilarutkan atau yang terkdanung dalam pembawa akan berdifusi dari pembawa menuju ke permukaan kulit sebelum obat diabsorpsi. Pembawa dapat mempengaruhi pelepasan senyawa dan berinteraksi dengan stratum korneum. Faktor yang mempengaruhi pelepasan obat yaitu sifat fisikokimia zat aktif dan pembawa seperti kelarutan, ukuran molekul, viskositas dan polaritas (Wiechers, 1989). 3. Larutan akseptor. Larutan yang digunakan sebaiknya tidak hanya berperan sebagai penerima obat yang mengalami penetrasi di dalamnya tetapi juga yang menyediakan air, bahan-bahan biokimia dan ion-ion yang diperlukan membran kulit dalam mempertahankan fungsinya (Skelly, 1987). Larutan yang dapat digunakan sebagai larutan akseptor seperti larutan fisiologis salin, larutan ringer, atau larutan fisiologis lainnya yang relevan. Faktor lain yang perlu diperhatikan yaitu suhu, kelarutan senyawa dalam medium dan pengadukan (Friend, 1992). J. Spektrofotometri Derivatif Spektrofotometri derivatif merupakan salah satu metode spektrofotometri yang dapat digunakan untuk analisis senyawa campuran baik organik maupun anorganik secara langsung tanpa harus melakukan pemisahan terlebih dahulu walaupun dengan panjang gelombang yang berdekatan. Metode ini merupakan


37

teknik analisis yang menggunakan sistem turunan orde 1 hingga 5 dari spektrum spektrofotometri UV-VIS. Kurva spektrum derivatif menggambarkan nilai turunan absorbansi suatu senyawa terhadap panjang gelombang seperti yang ditunjukkan pada persamaan berikut: n

Dx,λ = f…………………………………………………………(1)

Nilai n menunjukkan orde derivatif dan nDx,λ merupakan nilai derivatif pada orde ke-n dari suatu spektrum absorbansi substansi X terhadap panjang gelombang (Marczenko dan Balcerzak, 2000). Proses

yang

terjadi

dalam

derivatisasi

data

spektra

adalah

pendiferensialan kurva secara matematis yang tak lain adalah menentukan kemiringan/gradien serapan antara panjang gelombang tertentu secara menyeluruh seperti tampak dalam gambar 16.

Gambar 16. Penentuan gradien dari spektrum orde 0 (Nurhidayati, 2007)

Penentuan besar gradien secara individual adalah plot dA/dλ terhadap λ untuk mendapatkan plot derivatif pertama. Plot derivatif pertama ini dapat diturunkan lagi dengan cara yang sama untuk mendapatkan harga d2A/dλ2, yang


38

bila diplotkan terhadap panjang gelombang menghasilkan plot derivatif kedua. Pengulangan proses ini menghasilkan orde yang lebih tinggi, plot derivatif ke-n, atau dnA/ dnλ terhadap λ. Sebagai ilustrasi proses pengulangan, dari derivat kenol sampai dengan kelima ditunjukkan pada gambar 17 (Nurhidayati, 2007).

Gambar 17. Spektrogram derivatif orde 0 hingga 5 (Kus, Marczenko dan Obarski, 1996)

Metode

spektrofotometri

derivatif

memberikan

sensitivitas

dan

selektivitas yang tinggi dibdaningkan metode spektrofotometri normal (orde 0). Hasil selektivitas yang lebih tinggi didapatkan dengan mengurangi atau mengeleminasi noise tanpa mengurangi sinyal penting, serta mengurangi kesalahan yang disebabkan oleh spektrum senyawa lain dalam sampel yang tumbang tindih (Marczenko dan Balcerzak, 2000). K. Landasan Teori Sinar ultraviolet merupakan salah satu spektrum radiasi dari sinar matahari yang terdiri dari tiga jenis yaitu sinar UV A, UV B, dan UV C. Radiasi


39

sinar UV A merupakan penyebab radiasi paling tinggi dan dapat menembus kulit hingga bagian dermis sedangkan radiasi UV B juga berpotensi merusak kulit namun hanya sampai lapisan luar (epidermis). Efek dari radiasi sinar UV A dan UV B ini dapat menyebabkan pigmentasi kulit, kerusakan kulit, penuaan dini, serta memicu timbulnya kanker kulit. Adanya kosmetik yang bersifat antioksidan diharapkan dapat mencegah timbulnya ROS di dalam kulit terutama pada lapisan epidermis dan dermis (Mutia, 2015). Hibiscus sabdariffa L. atau yang biasa dikenal dengan rosella telah diketahui memiliki aktivitas antioksidan karena adanya kandungan fenolik di dalam bunga rosella. Salah satu kandungan fenolik yang ada di rosella yaitu antosianin. Antosianin merupakan metabolit sekunder dari famili flavonoid (Konczak dan Zhang, 2004). Berdasarkan struktur serta sifatnya,

stabilitas antosianin sangat

dipengaruhi oleh lingkungan seperti cahaya, suhu, dan oksigen. Studi kondisi penyimpanan multiemulsi yang dilakukan oleh Li (2015) menunjukkan kondisi optimum penyimpanan multiemulsi yaitu pada suhu -4

, tertutup rapat,

terlindung dari cahaya dan adanya pemberian gas nitrogen. Penggunan ekstrak metanol kelopak bunga rosella secara topikal dapat menyebabkan iritasi pada kulit (Pinsuwan dkk, 2010). Selain itu hasil penelitian pendahuluan yang dilakukan peneliti menunjukkan kemampuan penetrasi yang dihasilkan bervariasi. Berdasarkan target aksi antosianin sebagai penangkal radiasi sinar UV, stabilitas antosianin, dan kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella maka dibutuhkan sebuah vesikel untuk menjaga stabilitas antosianin dan


40

kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella supaya dapat tertahan di lapisan epidermis dan dermis sehingga tidak masuk ke sistemik. Vesikel yang digunakan yaitu multiemulsi dan suspensi liposom. Multiemulsi memiliki kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella ke dalam kulit yang lebih baik daripada suspensi liposom dikarenakan ukuran partikel pada multiemulsi lebih besar daripada suspensi liposom menyebabkan multiemulsi lebih tertahan di dalam kulit (lapisan epidermis dan dermis). Ukuran partikel suspensi liposom yang lebih kecil memungkinkan suspensi liposom lebih mudah untuk menembus lapisan-lapisan pada kulit sehingga dapat masuk ke sistemik. Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang terpenetrasi ke dalam kulit dapat diketahui dengan melakukan uji penetrasi secara in vitro menggunakan sel difusi Franz. Selanjutnya ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang terpenetrasi ke dalam kulit dan yang tersisa dalam kulit di ukur dengan menggunakan spektrofotometri derivatif. L. Hipotesis 1. Formula optimum multiemulsi yang terbentuk bertipe A/M/A, homogen, memiliki pH sesuai dengan pH kulit, dan stabil selama 28 hari, pada suhu penyimpanan -4 , dan pemberian gas nitrogen ditandai dengan tidak adanya pemisahan fase. 2. Sediaan multiemulsi A/M/A yang telah optimum mempunyai kemampuan sebagai pembawa ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang lebih baik dari pada suspensi liposom dalam berpenetrasi ke dalam lapisan epidermis dan dermis.


BAB III METODOLOGI PENELITIAN A. Jenis Penelitian Penelitian ini merupakan rancangan eksperimental murni yaitu untuk mengetahui sifat dan stabilitas fisis sediaan multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella dan mengetahui apakah sediaan multiemulsi A/M/A yang telah optimum mempunyai kemampuan sebagai pembawa ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang lebih baik dari pada suspensi liposom dalam berpenetrasi ke dalam lapisan epidermis dan dermis. B. Variabel Penelitian 1. Variabel bebas Variabel bebas dalam penelitian ini dibagi menjadi dua, yaitu: a. Variabel bebas dalam formulasi yaitu konsentrasi eksipien dan HLB multiemulsi A/M/A. b. Variabel bebas dalam uji penetrasi dengan sel difusi Franz yaitu waktu pengambilan sampel penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom. 2. Variabel tergantung Variabel tergantung dalam penelitian ini dibagi menjadi dua, yaitu: a. Variabel tergantung dalam formulasi yaitu sifat fisis dan stabilitas sediaan multiemulsi A/M/A hasil optimasi formula.

41


42

b. Variabel tergantung dalam uji penetrasi dengan sel difusi Franz yaitu kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella ke dalam kulit. 3. Variabel pengacau terkendali Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini dibagi menjadi dua, yaitu: a. Variabel pengacau terkendali dalam formulasi yaitu cahaya dan udara selama pembuatan multiemulsi A/M/A. b. Variabel pengacau terkendali dalam uji penetrasi dengan sel difusi Franz yaitu kondisi hewan uji, homogenitas sediaan, suhu, dan kecepatan pengadukan. 4. Variabel pengacau tak terkendali Variabel pengacau tak terkendali dalam penelitian ini dibagi menjadi dua, yaitu: a. Variabel pengacau tak terkendali dalam formula optimum yaitu kelembaban ruangan tempat pembuatan. b. Variabel pengacau tak terkendali dalam uji penetrasi dengan sel difusi Franz yaitu ketebalan kulit, waktu penyimpanan kulit, dan berat sediaan yang diaplikasikan. C. Definisi Operasional 1. Ekstrak metanol kelopak bunga rosella merupakan ekstrak kental kelopak bunga rosella berwarna merah tua dengan pelarut metanol.


43

2. Liposom ekstrak metanol kelopak bunga rosella adalah suatu vesikel yang terdiri dari satu lapis fosfolipid bilayer yang di dalamnya mengandung ekstrak metanol kelopak bunga rosella 3. Suspensi liposom adalah sediaan cair yang mengandung liposom ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang didispersikan ke dalam air 4. Multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella adalah sistem multiemulsi A/M yang mengandung ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang didispersikan dalam fase air dengan bantuan emulgator. 5. Emulgator adalah suatu senyawa yang berfungsi untuk menggabungkan fase minyak dengan fase air. 6. Multiemulsi A/M/A atau suspensi liposom dalam sampel larutan buffer fosfat pH 4 yang dianalisis merupakan sediaan semisolid atau sediaan cair yang terpenetrasi ke dalam kompartemen akseptor yang berisi larutan PBS pH 4. 7. Sel difusi Franz adalah serangkaian alat sel difusi Franz dengan ukuran water jacket 9 mm, lipatan dasar datar (ground o-ring), dan volume kompartemen akseptor 3 mL. 8. Waktu pengambilan sampel adalah waktu yang diperlukan untuk mengambil sampel pada kompartemen donor dan kompartemen akseptor pada sel difusi Franz . D. Bahan Penelitian Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dan suspensi liposom diperoleh dari Sanjayadi, aquadest dan aquabidest diperoleh dari laboratorium Farmasi USD, Tween 80 (pro analysis ,Merck), metanol (pro analysis, Merck), NaCl (pro


44

analysis, Merck), KCl (pro analysis, Merck), Na2HPO4 (pro analysis, Merck), KH2PO4 (pro analysis, Merck), HCl approx. 37% (pro analysis, Merck), setil alkohol (pharmaceutical grade), MgSO4 (pharmaceutical grade), dimethicone (pharmaceutical grade) diperoleh dari PT. Bratachem, Span 80 (pharmaceutical grade), xanthan gum (pharmaceutical grade), parafin (pharmaceutical grade) diperoleh dari PT. Bratachem, kulit tikus betina galur wistar, larutan ringer laktat yang diproduksi oleh PT. Widatra Bhakti, dan nitrogen teknis diperoleh dari CV. Perkasa. E. Alat Penelitian Hotplate Scilogex MS-H-S, waterbath Elbanton, mixer merk Miyako, alat-alat gelas, sel difusi Franz, termometer, seperangkat alat spektrofotometer UV-Vis

Shimadzu

UV-1800,

seperangkat

alat

mikroskop,

timbangan

analitik/digital scale (Mettler Toledo), flakon, aluminium foil, sonikator (Retsch), table top sentrifuse model PLC-03, mikro pipet (Socorex), spuit injeksi 1ml, dan penggaris segitiga (zigel). F. Tata Cara Penelitian 1. Ekstraksi kelopak bunga rosella Lima kilogram bunga rosella segar yang diperoleh dari Pontianak dicuci dengan air mengalir sebanyak tiga kali, kemudian dicuci dengan aquadest. Bunga rosella yang telah dicuci selanjutnya di maserasi dengan metanol sebanyak lima Liter menggunakan ultraturrax. Maserasi dilakukan pada suhu ruangan selama dua hari. Supernatan yang terbentuk disaring


45

menggunakan corong buchner dengan kertas saring whatman no 1. Filtrat yang diperoleh selanjutnya di pekatkan dengan rotary evaporator pada suhu 40

sehingga menghasilkan ekstrak metanol kelopak bunga rosella. Ekstrak

metanol kelopak bunga rosella yang dihasilkan di simpan pada botol fase gerak yang telah dilapisi dengan aluminium foil, dijenuhkan dengan N 2 dan disimpan pada suhu -4

hingga analisis berikutnya. Proses ekstraksi ini

dilakukan oleh Sanjayadi. 2. Penetapan bobot tetap ekstrak metanol kelopak bunga rosella Cawan porselen yang hendak digunakan dikeringkan terlebih dahulu selama 30 menit. Kemudian cawan porselen yang telah dikeringkan ditara. 500 µL ekstrak metanol kelopak bunga rosella dimasukkan ke dalam cawan porselen dan ditimbang seksama cawan porselen beserta isinya. Kemudian dikeringkan

dengan waterbath pada suhu 40

– 50

selama 1 jam.

Kemudian ditimbang lagi hingga 2 kali penimbangan berturut-turut berbeda tidak lebih dari 0,5 mg tiap gram sisa yang ditimbang (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1979).

3. Uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella Studi penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella mengikuti Organization for Economic Co-operation Development (OECD) Guideline for The Testing of Chemicals (Skin Absorption: in vitro Method) tahun 2004 yang disertai beberapa modifikasi oleh peneliti. Studi penetrasi pada penelitian ini memerlukan langkah-langkah seperti pembuatan larutan PBS, preparasi kulit tikus sebagai membran difusi, pemasangan alat sel difusi Franz (FDC), dan


46

penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen akseptor atau donor. a. Pembuatan 10 mM Phospate Buffer Saline (PBS) pH 4. Sebanyak 800 mL Aquabidest dimasukkan dalam gelas beker 1 L, kemudian ditambahkan 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,44 g Na2HPO4, dan 0,24 g KH2PO4 diaduk dengan pengaduk magnetik hingga larut sempurna. Derajat keasaman larutan diukur dengan pH meter, dan pH larutan dibuat 4 dengan penambahan HCl. Larutan dipindahkan dalam labu takar 1 L, kemudian ditambahkan aquabidest sampai tanda. Larutan ini akan digunakan medium pada kompartmen akseptor. b. Preparasi kulit tikus betina galur wistar sebagai membran difusi. Tikus dikorbankan dengan eter. Bulu pada tikus yang telah dikorbankan dicukur hingga bersih dengan menggunakan pisau pencukur bulu. Kulit tikus bagian punggung diambil, dibentangkan pada lilin, lalu dihilangkan lapisan lemaknya. Kulit dipotong sesuai dengan ukuran yang diinginkan yaitu 2,5 cm x 2,5 cm. Kulit yang telah dipotong dicuci dengan larutan ringer laktat hingga bersih. Kulit yang telah disiapkan dimasukkan ke dalam flakon yang berisi larutan ringer laktat kemudian disimpan dalam lemari es.


47

Gambar 18. Rangkaian alat sel difusi Franz

c. Pemasangan alat sel difusi Franz (FDC). Sebelum digunakan kulit tikus dihidrasi terlebih dahulu dengan larutan ringer laktat selama 30 menit. Berdasarkan gambar 18, maka kulit dipasang pada FDC dengan bagian stratum korneum menghadap ke bagian kompartemen donor, lalu kompartemen akseptor diisi dengan PBS sebanyak 2,7 mL dan dimasukkan magnetic stirrer. Sebanyak 100 µl ekstrak metanol kelopak bunga rosella diaplikasikan pada kompartemen donor. Selama FDC beroperasi, suhu dijaga pada 31

– 33

, pada kompartemen akseptor

tidak diperbolehkan adanya gelembung selama proses berlangsung, dan diaduk dengan magnetic stirrer dengan kecepatan 300 rpm. d. Penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak

bunga rosella

pada

kompartemen akseptor. Pengambilan sampel pada uji penetrasi dengan menggunakan FDC dilakukan sebanyak 6 kali dengan kulit tikus yang berbeda yang dapat dilihat pada tabel 2. Tabel 2. Variabel untuk tiap uji

Percobaan keI Waktu pengambilan 1 sampel (jam)

II

III

IV

V

2

3

4

5

VI 6


48

Sebanyak 100 µL ekstrak metanol kelopak bunga rosella diambil lalu diaplikasikan pada stratum korneum. Selanjutnya cairan PBS dalam kompartemen akseptor diambil pada jam yang tercantum pada tabel 2. Selanjutnya cairan PBS langsung di ukur dengan menggunakan spektrofotometri UV-VIS. Langkah ini diulangi sebanyak tiga kali sehingga terdapat tiga variasi jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen akseptor yang diaplikasikan. e. Penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak

bunga rosella

pada

kompartemen donor. Setiap pengambilan cairan PBS pada kompartemen akseptor yang ditunjukkan dalam tabel 2, maka ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen donor dibilas dengan aquadest. Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dibilas dengan 1,5 mL aquadest, lalu dimasukkan ke labu takar 5 mL dan ditambahkan dengan aquadest hingga batas selanjutnya diukur dengan spektrofotometer UV – Vis. 4. Optimasi formula multiemulsi A/M/A Optimasi formula multiemulsi A/M/A yang dilakukan yaitu optimasi konsentrasi HLB emulsi primer yang akan digunakan (5 – 5,8); optimasi kecepatan pengadukan emulsi primer yang akan digunakan (kecepatan 4 dan 5 pada mixer); optimasi lama pencampuran emulsi primer yang akan digunakan (10 menit – 20 menit); optimasi konsentrasi stiffening agent yang akan digunakan (4% - 10%); optimasi konsentrasi anti foaming agent yang akan digunakan (2% - 8%); optimasi jumlah emulsi primer yang ditambahkan (27,8g – 47,8g); optimasi konsentrasi emulgator sekunder yang digunakan (2%


49

- 6%); dan optimasi lama pencampuran multiemulsi (10 menit – 20 menit). Hasil optimasi dipilih yang menghasilkan % pemisahanan fase yang paling sedikit pada setiap perlakuan. 5. Pembuatan multiemulsi A/M/A Proses pembuatan multiemulsi pada penelitian ini disiapkan dalam dua tahap yaitu pembuatan emulsi primer A/M dan pembuatan multiemulsi A/M/A a. Pembuatan emulsi primer tipe A/M). Tween 80 dan ekstrak metanol kelopak bunga rosella dilarutkan dalam fase air internal. Span 80, dimethicone, setil alkohol, ditambahkan ke dalam parafin cair dan diaduk hingga homogen. Masing-masing fase dipanaskan pada suhu 50

±3 .

Fase air ditambahkan sedikit demi sedikit ke dalam fase minyak, diaduk dengan mixer selama 10 menit hingga homogen. Keseluruhan proses pencampuran disertai dengan penjenuhan nitrogen, lampu ruangan dimatikan, serta wadah ditutup dengan menggunakan aluminium foil. b. Pembuatan multiemulsi tipe A/M/A. Fase air yang digunakan dalam fase cair eksternal dibagi menjadi 2 bagian (2:1). Emulgator sekunder (Tween 80) dilarutkan dalam fase air pertama (2 bagian). Xanthan gum dikembangkan dalam fase air kedua (1 bagian) hingga terbentuk massa gel yang homogen. Setelah terbentuk massa gel yang homogen, maka dicampurkan ke fase air pertama (2 bagian) dan diaduk hingga homogen. Emulsi primer A/M yang telah ditimbang, sedikit demi sedikit ditambahkan pada fase cair eksternal yang telah mengandung Tween 80


50

dan xanthan gum dan sambil diaduk menggunakan mixer selama 10 menit hingga homogen. Keseluruhan proses pencampuran disertai dengan penjenuhan nitrogen, lampu ruangan dimatikan, serta wadah ditutup dengan menggunakan aluminium foil. Multiemulsi A/M/A yang telah jadi dimasukkan ke dalam flakon yang telah dibungkus dengan aluminium foil dan dijenuhkan dengan nitrogen sebelum ditutup rapat dengan parafilm. 6. Evaluasi sediaan multiemulsi Evaluasi sediaan multiemulsi dilakukan pada 1 hari setelah pembuatan multiemulsi. Evaluasi yang dilakukan meliputi sifat fisik sediaan dan stabilitas sediaan. sifat fisik sediaan yang dilakukan yaitu pengujian organoleptis, pengukuran pH, penentuan tipe emulsi, dan pengukuran mikromeritik. Stabilitas sediaan yang dilakukan yaitu uji mekanik dan uji volume creaming. a. Pengujian organoleptis. Uji organoleptis dilakukan dengan mengamati bau, warna, dan

homogenitas sediaan multiemulsi pada 1 hari setelah

pembuatan b. Penetapan pH. Sejumlah multiemulsi dioleskan pada kertas indikator dan kemudian ditentukan pH dari sediaan tersebut (Direktrorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1979). c. Penentuan tipe emulsi. Sejumlah emulsi primer dan multiemulsi masing – masing dilarutkan pada minyak dan air. Selanjutnya dilakukan pengamatan secara visual untuk menentukan apakah emulsi primer bertipe A/M atau M/A dan apakah multiemulsi bertipe A/M/A atau M/A/M. Jika emulsi


51

primer larut dalam minyak, maka tipe emulsi primer A/M dan apabila multimulsi larut dalam air, maka tipe multiemulsi A/M/A (Martin, 1990). d. Pengukuran mikromeritik. Uji mikromeritik dilakukan pada 1 hari setelah pembuatan. Sebelum dilakukan pengukuran, perlu dilakukan kalibrasi pada lensa mikroskop. Cara pengujian mikromeritik yaitu sejumlah multiemulsi dan emulsi primer masing-masing dioleskan pada gelas objek, kemudian diletakkan pada meja benda pada mikroskop. Ukuran globul yang terdispersi pada multiemulsi diamati. Penentuan objek, digunakan pembesar lemah kemudian diganti pembesar kuat (Martin, 1990). e. Uji mekanik. Sediaan multiemulsi dimasukkan ke dalam tabung sentrifugasi, kemudian dilakukan sentifugasi pada kecepatan 5000 rpm selama 20 menit. Hasil sentrifugasi dapat diamati dengan adanya pemisahan atau tidak (Mahmood, Akhtar, dan Manickam, 2014). f. Uji volume creaming. Multiemulsi ditempatkan pada tabung berskala kemudian diamati pada 28 hari setelah pembuatan, untuk melihat perubahan tinggi pemisahan fase akibat creaming. Multiemulsi disimpan pada suhu -4

, dijenuhkan dengan gas nitrogen, tertutup rapat, serta

terlindung dari cahaya. 7. Evaluasi sediaan suspensi liposom Suspensi liposom yang diperoleh dari Sanjayadi terbuat dari fosfatidilkolin dan kolesterol, selanjutnya dilakukan evaluasi sediaan suspensi liposom pada 1 hari setelah pembuatan suspensi liposom. Evaluasi yang


52

dilakukan meliputi sifat fisik sediaan yaitu pengujian organoleptis, penetapan pH dan pengukuran mikromeritik. a. Pengujian organoleptis. Uji organoleptis dilakukan dengan mengamati bau, warna, dan homogenitas sediaan suspensi liposom pada 1 hari setelah pembuatan b. Penetapan pH. Sejumlah suspensi liposom dioleskan pada kertas indikator dan kemudian ditentukan pH dari sediaan tersebut (Direktrorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1979). c. Pengukuran mikromeritik. Uji mikromeritik dilakukan pada 1 hari setelah pembuatan. Sebelum dilakukan pengukuran, perlu dilakukan kalibrasi pada lensa mikroskop. Cara pengujian mikromeritik yaitu sejumlah suspensi liposom di oleskan pada gelas objek, kemudian diletakkan pada meja benda pada mikroskop. Ukuran globul yang terdispersi pada suspensi liposom diamati. Penentuan objek, digunakan pembesar lemah kemudian diganti pembesar kuat (Martin, 1990). 8. Pembuatan kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella Penelitian ini menggunakan dua kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella yaitu kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam metanol dan kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam aquadest.


53

a. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam metanol 1)

Larutan stok (0,4% ⁄ ). Sebanyak 0,1 mL ekstrak metanol kelopak bunga rosella dilarutkan dalam metanol p.a dan diencerkan dalam labu takar 25 mL hingga batas tanda.

2)

Pembuatan larutan seri baku. Sebanyak 100; 200; 300; 400; 500 dan 600 µL larutan dari larutan stok dilarutkan ke dalam labu takar 10 mL, dan diencerkan dengan metanol p.a hingga batas tanda.

b. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam aquadest 1)

Larutan stok (1% ⁄ ). Sebanyak 0,1 mL ekstrak metanol kelopak bunga rosella dilarutkan dalam aquadest dan diencerkan dalam labu takar 10 mL hingga batas tanda.

2)

Pembuatan larutan seri baku. Sebanyak 80; 90; 100; 200; 300; 400; 500; 600; 700; 800; 900 dan 1000 µL larutan dari larutan stok diambil kemudian dilarutkan ke dalam labu takar 5 mL, dan diencerkan dengan aquadest hingga batas tanda.

9. Uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A dan dalam suspensi liposom Studi penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan dalam suspensi liposom, mengikuti Organization for Economic Co-operation Development (OECD) Guideline for The Testing of Chemicals (Skin Absorption: in vitro Method) tahun 2004 yang disertai beberapa modifikasi oleh peneliti. Studi penetrasi pada penelitian ini memerlukan langkah-langkah seperti pembuatan larutan PBS dan preparasi


54

kulit tikus sebagai membran difusi yang telah dijelaskan pada tatacara penelitian poin 3a dan 3b, pemasangan alat sel difusi Franz (FDC) dan penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada kompartemen akseptor atau donor. a. Pemasangan alat sel difusi Franz (FDC). Sebelum digunakan kulit tikus dihidrasi terlebih dahulu dengan larutan ringer laktat selama 30 menit. Berdasarkan gambar 18, maka kulit dipasang pada FDC dengan bagian stratum korneum menghadap ke bagian kompartemen donor, lalu kompartemen akseptor diisi dengan PBS sebanyak 2,7 mL dan dimasukkan magnetic stirrer. Sebanyak 100 µl ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam suspensi liposom atau 100 mg sampel ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A diaplikasikan pada kompartemen donor. Selama FDC beroperasi, suhu dijaga pada 31 – 33

, pada kompartemen akseptor tidak diperbolehkan adanya

gelembung selama proses berlangsung, dan diaduk dengan magnetic stirrer dengan kecepatan 300 rpm. b. Penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi dan dalam suspensi liposom pada kompartemen akseptor. Pengambilan sampel pada uji penetrasi dengan menggunakan FDC dilakukan sebanyak 6 kali dengan kulit tikus yang berbeda yang dapat dilihat pada tabel 2. Sebanyak 100 µL ekstrak metanol kelopak bunga rosella atau ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam suspensi liposom


55

atau 100 mg sampel ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi diambil lalu diaplikasikan pada stratum korneum. Selanjutnya cairan PBS dalam kompartemen akseptor diambil pada jam yang tercantum pada tabel 2. Selanjutnya cairan PBS langsung di ukur dengan menggunakan spektrofotometri UV-VIS. Langkah ini diulangi sebanyak tiga kali sehingga terdapat tiga variasi jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi dan dalam suspensi liposom pada kompartemen akseptor yang diaplikasikan. c. Penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi dan dalam suspensi liposom pada kompartemen donor. Setiap pengambilan cairan PBS pada kompartemen akseptor yang ditunjukkan dalam tabel 2, maka ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi dan dalam suspensi liposom pada kompartemen donor dibilas dengan aquadest atau metanol. Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam suspensi liposom yang masih tersisa pada kompartemen donor dibilas dengan 1,5 mL aquadest, lalu dimasukkan ke labu takar 5 mL dan ditambahkan dengan aquadest hingga batas selanjutnya diukur dengan spektrofotometer UV – Vis. Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi yang masih tersisa pada kompartemen donor dibilas

dengan 3 mL metanol, lalu

dituang dalam tabung sentrifuse dan di-vortex, selanjutnya di-degassing selama 20 menit dan di-sentifuse dengan kecepatan 5000 rpm selama 30


56

menit. Sebanyak 2,5 mL supernatan yang terbentuk diambil dengan menggunakan mikropipet, lalu dimasukkan ke dalam labu takar 5 ml dan ditambahkan dengan metanol hingga batas tanda. Selanjutnya diukur dengan menggunakan Spektrofotometer UV-Vis. G. Analisis Hasil Pada penelitian ini, analisa hasil yang dilakukan yaitu: 1. % pemisahan fase % pemisahan fase untuk mendapatkan formula optimum dihitung dengan cara: % pemisahan =

................................(2)

2. Kurva baku Persamaan kurva baku didapatkan dengan membuat kurva antara konsentrasi (mg/ml) vs tinggi derivat (cm), dari kurva akan didapatkan nilai slope (b), intersep (a), dan linearitas (r) yang selanjutnya dapat digunakan untuk membuat persamaan kurva baku y = bx+a. 3. Uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan dalam suspensi liposom Konsentrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan dalam suspensi liposom baik pada kompartemen donor maupun kompartemen akseptor dihitung berdasarkan persamaan kurva baku yang telah diperoleh di mana y = tinggi derivat yang diperoleh dari pengukuran spektrofotometri UV-VIS metode


57

derivatif, a = intersep, b = slope, sehingga didapatlah nilai x berupa konsentrasi (mg/mL). Konsentrasi yang didapatkan selanjutnya dikalikan dengan faktor pengenceran sehingga didapatkan jumlah (mg) ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan dalam suspensi liposom pada kompartemen donor maupun kompartemen reseptor. Jumlah (mg) ekstrak rosella yang didapatkan dibagi dengan berat mula-mula pengaplikasian sampel dan dikali 100% sehingga didapatkan jumlah (%) ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan dalam suspensi liposom pada kompartemen donor maupun kompartemen reseptor. Jumlah (%) ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan suspensi liposom yang tertahan pada kulit dihitung dengan cara massa total pengaplikasian sampel – (jumlah (%) pada kompartemen donor + Jumlah (%) pada kompartemen akseptor). Selanjutnya dibuat hubungan antara waktu pengambilan sampel vs jumlah (%) ekstrak metanol kelopak bunga rosella, ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan suspensi liposom pada kompartemen donor, kompartemen akseptor, serta yang tertahan dalam kulit. 4. Uji statistik Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella baik pada suspensi liposom maupun multiemulsi A/M/A yang tertahan dalam kulit selanjutnya diuji statistik dengan t-test pada taraf kepercayaan 95%.


58

BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui sifat dan stabilitas fisis sediaan multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella hasil optimasi formula dan mengetahui apakah sediaan multiemulsi A/M/A yang telah optimum mempunyai kemampuan sebagai pembawa ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang lebih baik dari pada suspensi liposom dalam berpenetrasi ke dalam lapisan epidermis dan dermis. Ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang digunakan pada penelitian ini diperoleh dari Sanjayadi. Ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang didapat selanjutnya dilakukan uji kualitatif menggunakan spektrofotometri UV-VIS untuk memastikan apakah dalam ekstrak metanol kelopak bunga rosella mengandung antosianin

yang

memiliki

aktivitas

antioksidan.

Hasil

yang

diperoleh

menunjukkan ekstrak metanol kelopak bunga rosella mengandung antosianin pada panjang gelombang 537 nm seperti yang ditunjukkan pada lampiran 1. Penelitian ini menggunakan metanol sebagai pelarut untuk ekstraksi kelopak bunga rosella. Pemilihan metanol sebagai pelarut karena kandungan kimia antosianin yang terkandung dalam rosella lebih mudah larut dalam metanol, sehingga peneliti menggunakan metanol sebagai pelarut supaya semua kandungan kimia antosianin yang terkandung dalam kelopak bunga rosella diharapkan dapat terekstraksi

dengan

sempurna.

Namun,

pada

sediaan

kosmetik

tidak

diperbolehkan mengandung metanol karena dapat menyebabkan iritasi pada kulit. Oleh karena itu, sebelum digunakan untuk formulasi maka metanol yang menjadi


59

pelarut ekstrak perlu diuapkan terlebih dahulu sehingga perlu adanya penetapan bobot tetap ekstrak metanol kelopak bunga rosella sebelum formulasi, selanjutnya dilakukan uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella untuk mengetahui kemampuan penetrasi dari ekstrak rosella, kemudian dilakukan optimasi formula untuk mendapatkan formula multiemulsi yang optimum dan dilanjutkan dengan uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan dalam suspensi liposom. A. Penetapan Bobot Tetap Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella Tujuan dilakukannya bobot tetap ekstrak metanol kelopak bunga rosella yaitu untuk mendapatkan bobot kering dari ekstrak metanol kelopak bunga rosella setelah proses pemanasan atau penguapan pelarut. Hasil yang didapat setiap 0,5 mL ekstrak metanol kelopak bunga rosella sama dengan 0,5117 gram ekstrak kering kelopak bunga rosella seperti yang ditunjukkan pada lampiran 2. Hasil ini selanjutnya akan digunakan untuk perhitungan konsentrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella baik dalam sediaan maupun kurva baku. B. Uji Penetrasi Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella Tujuan uji penetrasi ekstrak rosella yaitu untuk mengetahui kemampuan penetrasi larutan ekstrak rosella kedalam kulit. Sebanyak 100 µL larutan stok ektrak rosella 1,25%v/v diaplikasikan pada stratum korneum dan dilakukan pengambilan sampel pada kompartemen akseptor maupun kompartemen donor pada interval waktu tertentu. Hasil yang didapat ditunjukkan pada gambar 19. Gambar 19 menunjukkan bahwa pada kompartemen akseptor semakin


60

bertambahnya waktu, jumlah ekstrak rosella yang terpenetrasi berkurang. Hal ini sesuai dengan nilai koefisien korelasi yang didapat yaitu -0,3495. Nilai koefisien korelasi minus menunjukkan bahwa variabel x (waktu pengambilan sampel) berbanding terbalik dengan variabel y (jumlah ekstrak rosella yang terpenetrasi). Apabila dibuat persamaan regresi didapatkan nilai y = 39,32293 - 4,89500 x.

jumlah ekstrak rosella (%)

90 80 70 60 50

40

donor

30

akseptor

20 10 0 -10 0

2

4 waktu (jam)

6

8

Gambar 19. Kurva uji penetrasi ekstrak rosella

Nilai slope menunjukkan bahwa selama 6 jam kemampuan ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang masuk ke kompartemen akseptor terjadi penurunan sebesar 4,8949, sehingga dapat diduga bahwa larutan ekstrak rosella dapat masuk ke dalam kulit namun kemampuan penetrasi yang diberikan berkurang seiring waktu dan bervariasi. Hal ini dimungkinkan oleh beberapa faktor seperti ketebalan kulit yang

digunakan antar jam berbeda, pengaruh

berbagai reaksi dengan senyawa dan enzim dalam kulit seperti polifenoloksidase; peroxidase; glikosidase; dan esterase, terjadi kerusakan antosianin dalam ekstrak


61

metanol kelopak bunga rosella sebelum berpenetrasi ke dalam kulit akibat terpapar pada udara dan sinar. Gambar 19 pada kompartemen donor menunjukkan bahwa semakin bertambahnya waktu sisa jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tersisa pada kompartemen donor meningkat, terlihat pada garis korelasi mengalami kenaikan dengan nilai koefisien korelasi yang didapat yaitu 0.089. Persamaan regresi yang didapat yaitu y = 68,48568 + 0,41939 x. Nilai slope menunjukkan bahwa selama 6 jam jumlah ekstrak rosella yang tersisa pada kulit mengalami kenaikan. Hal ini mungkin disebabkan karena kesalahan ketika pencucian, di mana ketika pencucian masih ada ekstrak rosella yang tidak tercuci sehingga tidak semua ekstrak rosella yang tertinggal pada kulit dapat terukur, atau terpapar oleh udara dan sinar selama pengerjaan. Berdasarkan penjelasan pada Gambar 19 dapat diduga bahwa larutan ekstrak rosella dapat masuk ke dalam kulit namun kemampuan penetrasinya tidak konstan sehingga diperlukan vesikel yang mampu memberikan kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella supaya tetap konstan. C. Optimasi Formula Multiemulsi A/M/A Optimasi pembuatan multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella dibagi menjadi dua yaitu optimasi pada emulsi primer A/M ekstrak metanol kelopak bunga rosella dan optimasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A. Optimasi emulsi primer A/M ekstrak metanol kelopak bunga rosella terlebih dahulu menentukan nilai HLB yang akan digunakan; menentukan kecepatan pengadukan; menentukan lama pencampuran


62

dan komponen lain yang dibutuhkan untuk membentuk emulsi primer A/M ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang stabil. Setelah mendapatkan formula optimum emulsi primer A/M yang stabil, kemudian dilanjutkan dengan optimasi multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella. Parameter yang dilihat untuk menentukan sediaan yang dihasilkan telah optimum yaitu dengan menghitung % pemisahan fase creaming yang terjadi. % pemisahan yang paling sedikit menunjukkan bahwa emulsi yang dihasilkan stabil, dapat dilihat pada lampiran 3 dan 4. 1.

Optimasi emulsi primer A/M a. Optimasi nilai HLB yang akan digunakan Optimasi emulsi primer A/M ekstrak metanol kelopak bunga rosella, terlebih dahulu ditentukan nilai HLB yang akan digunakan. Nilai HLB yang digunakan pada optimasi ini yaitu 5; 5,3; 5,5 dan 5,8 dengan kecepatan pengadukan 4 selama 10 menit. Setelah didiamkan selama 1 hari, pada keempat HLB terjadi fenomena ketidakstabilan emulsi berupa creaming, dengan %pemisahan berturut-turut yaitu 66%; 64,6%; 60%; dan 56%. Creaming dapat terjadi dimungkinkan karena jumlah emulgator yang digunakan kurang cukup kuat untuk mengurangi tegangan antar muka emulsi primer A/M pada HLB tersebut. Emulsi primer A/M pada penelitian ini menggunakan dua emulgator yaitu emulgator hidfobik berupa ester asam lemak sorbitan monooleat (Span 80) dan emulgator hidrofilik ester asam lemak polioksietilen sorbitan monooleat (Tween 80) dengan konsentrasi


63

emulgator 10% karena berdasarkan Rowe dkk. (2009), kombinasi dua emulgator ini cukup mampu menstabilkan emulsi primer A/M. Pemilihan emulgator gabungan dikarenakan emulgator gabungan dapat menghasilkan pengurangan tegangan antar muka yang lebih besar dibandingkan emulgator tunggal sehingga emulsi yang dibentuk akan lebih stabil karena karakteristik hidrofilik dan lipofilik emulgator seimbang (Rowe dkk., 2009). b. Optimasi kecepatan pengadukan emulsi primer Tujuan menentukan kecepatan pengadukan ini yaitu untuk mengetahui kecepatan pengadukan yang dapat menghasilkan emulsi primer yang stabil. Kecepatan pengadukan yang digunakan yaitu kecepatan 4 dan kecepatan 5. Pemilihan kecepatan 4 dan kecepatan 5 karena untuk membuat multiemulsi diperlukan kecepatan pengadukan yang lebih tinggi untuk membuat emulsi primer supaya droplet yang terbentuk lebih kecil. Hasil yang didapat setelah didiamkan 1 hari emulsi dengan kecepatan pengadukan 5 menghasilkan % pemisahan yang lebih sedikit yaitu 52% sedangkan pada kecepatan 4 yaitu 56% sehingga peneliti memilih kecepatan pengadukan 5. c. Optimasi lama pencampuran emulsi primer Tujuan menentukan lama pencampuran emulsi primer yaitu untuk mengetahui waktu pencampuran yang dibutuhkan untuk mendapatkan emulsi primer yang stabil. Lama pencampuran yang digunakan yaitu 10, 15, dan 20 menit, dan dari ketiga waktu yang digunakan, setelah


64

didiamkan selama 1 hari terjadi creaming. Namun % pemisahan yang dihasilkan tidak terlalu berbeda sehingga peneliti memilih lama pencampuran 10 menit, karena lama pencampuran tidak terlalu berpengaruh terhadap stabilitas multiemulsi. Hasil pengamatan dapat dilihat pada lampiran 3c. d. Optimasi konsentrasi stiffening agent Tujuan menentukan konsentrasi stiffening agent yaitu untuk mengetahui konsentrasi stiffening agent yang dibutuhkan supaya dapat menghasilkan emulsi primer A/M yang stabil. Stiffening agent merupakan suatu zat yang ditambahkan ke dalam formulasi yang berfungsi untuk meningkatkan konsistensi dan viskositas sediaan. Stiffening agent yang digunakan dalam formulasi ini yaitu setil alkohol. Konsentrasi stiffening agent yang digunakan pada optimasi yaitu 4; 4,5; 5; 5,5; 6; 8; dan 10%. Hasil pengamatan dapat dilihat pada lampiran 3d. Berdasarkan ketujuh konsentrasi yang digunakan tersebut, hanya konsentrasi 6% yang menghasilkan emulsi primer A/M yang stabil. Namun, sediaan yang dihasilkan membentuk foaming. Selain sebagai stiffening agent, setil alkohol juga dapat memfasilitasi pengangkutan emulgator dari antarmuka minyak/air ke fase minyak sehingga dapat mengarahkan mempercepat penggabungan terbentuknya droplet internal. e. Optimasi konsentrasi anti foaming agent Tujuan menentukan konsentrasi anti foaming agent yaitu untuk mengetahui konsentrasi anti foaming agent yang dibutuhkan supaya dapat


65

menghasilkan emulsi primer A/M yang stabil. Tujuan penambahan anti foaming agent pada penelitian ini yaitu untuk mengurangi busa yang terbentuk yang disebabkan adanya penambahan setil alkohol sehingga dapat mengurangi resiko kerusakan ekstrak metanol kelopak bunga rosella akibat adanya udara dari busa. Optimasi konsentrasi anti foaming agent (dimethicone) yang digunakan pada penelitian ini yaitu 2%; 4%; 6%; dan 8%. Setelah 1 hari pembuatan emulsi primer, pada semua konsentrasi, % pemisahan fase yang dihasilkan 0% namun dilihat dari penampilannya, pada konsentrasi dimetichone 2%, 4%, dan 6% menunjukkan adanya tanda-tanda ketidakstabilan pada emulsi berupa keretakan, sedangkan pada konsentrasi 8% tidak menimbulkan tanda-tanda ketidakstabilan, sehingga peneliti memilih konsentrasi dimethicone yang digunakan yaitu 8%. Mekanisme dimethicone sebagai anti foaming agent yaitu (1) droplet dimetichone akan masuk ke dalam liquid film (antara gelembung) dan dengan segera akan menutupi busa sehingga terjadi penurunan tegangan permukaan yang menyebabkan terjadinya pemecahan film; (2) droplet dimetichone masuk ke dalam liquid film antara gelembung kemudian menyebar disekitar partikel busa dan membentuk monolayer campuran pada permukaan gelembung. apabila monolayer yang terbentuk telah stabil, maka akan mengacaukan film (Colas, Siang dan Ulman, 2006). Berdasarkan semua optimasi emulsi primer A/M, maka diperoleh formula optimum emulsi primer A/M seperti ditunjukkan pada tabel 3. Selanjutnya akan dilakukan optimasi multiemulsi A/M/A.


66

Tabel 3. Formula optimum emulsi primer A/M

Formula Minyak Span 80 Tween 80 Setil alkohol Dimethicone MgSO4 Aquadest

Berat (gram) 60,31 7,48 1,22 5,56 7,41 0,61 17,41

2. Optimasi multiemulsi A/M/A a. Menentukan jumlah emulsi primer Optimasi multiemulsi A/M/A diawali dengan menentukan rasio emulsi primer A/M yang akan diemulsikan ke fase air eksternal. Rasio yang digunakan yaitu 27,8; 37,8; dan 47,8 g. Hasil pengamatan dapat dilihat pada lampiran 4a. Berdasarkan ketiga rasio tersebut yang memberikan multiemulsi yang stabil selama 1 hari yaitu rasio emulsi primer 37,8 g. b. Menentukan konsentrasi emulgator sekunder Tujuan menentukan konsentrasi emulgator sekunder yaitu untuk mengetahui konsentrasi emulgator sekunder yang dibutuhkan supaya dapat menghasilkan multiemulsi A/M/A yang stabil. Konsentrasi Tween 80 yang digunakan pada optimasi yaitu konsentrasi 2%; 4%; dan 6%. Hasil pengamatan dapat dilihat pada lampiran 4b. Berdasarkan ketiga konsentrasi tersebut setelah didiamkan selama 3 hari, hanya konsentrasi 2% yang dapat menghasilkan multiemulsi A/M/A yang stabil, sehingga konsentrasi Tween 80 yang digunakan yaitu 2%. Emulgator sekunder yang digunakan yaitu Tween 80. Menurut Rowe dkk. (2009), Tween 80 dapat


67

dikatakan sebagai emulsifying agent pada emulsi minyak dalam air, apabila masuk rentang konsentrasi 1 – 15%. c. Menentukan lama pencampuran multiemulsi Tujuan menentukan lama pencampuran multiemulsi yaitu untuk mengetahui lama pencampuran pembuatan multiemulsi supaya dapat menghasilkan emulsi primer A/M yang stabil. Lama pencampuran yang digunakan yaitu 10, 15, dan 20 menit. Hasil optimasi menunjukkan dari ketiga waktu yang digunakan, setelah didiamkan selama 1 hari, tidak terjadi creaming, sehingga peneliti memilih lama pencampuran 10 menit, dikarenakan lama pencampuran tidak terlalu berpengaruh terhadap stabilitas multiemulsi. Berdasarkan hasil optimasi multiemulsi A/M/A maka didapatkan formula optimum multiemulsi A/M/A ekstrak metanol kelopak bunga rosella. Formula optimum yang didapatkan ditunjukkan pada tabel 4. Tabel 4. Formula optimum multiemulsi A/M/A

Formula Emulsi Primer Tween 80 Xanthan gum Aquadest eksternal

Berat (gram) 37,72 2,00 0,40 59,88 mL

D. Pembuatan Multiemulsi A/M/A Pembuatan multiemulsi diawali dengan tahap pembuatan emulsi primer tipe A/M. Emulsi primer dibuat dengan cara mengemulsikan aquadest yang telah ditambahkan Tween 80, magnesium sulfat, dan ekstrak metanol kelopak bunga rosella ke dalam campuran minyak yang terdiri dari parafin cair, Span 80,


68

dimethicone dan setil alkohol. Emulsi dihomogenkan dengan mixer kecepatan 5 selama 10 menit agar diperoleh ukuran globul yang kecil. Energi yang besar terbukti mampu memperkecil ukuran globul. Semakin kecil ukuran globul maka emulsi primer semakin stabil. Emulsi primer yang stabil mampu meningkatkan kestabilan emulsi sekunder. Parafin cair pada emulsi primer ini berfungsi sebagai fase minyak serta emolien yang dapat mencegah dehidrasi pada saat sediaan diaplikasikan ke kulit. Selain itu parafin cair akan menghasilkan multiemulsi yang lebih stabil dibandingkan dengan multiemulsi yang dihasilkan dari minyak nabati (Kumar, dkk., 2012). Sejumlah emulsi primer A/M diemulsikan ke dalam fase cair eksternal yang ditambahkan Tween 80 dan xanthan gum sebagai agen peningkat viskositas. Emulsi diaduk menggunakan mixer dengan kecepatan rendah (kecepatan 1) agar tidak memecah droplet air dalam emulsi primer A/M akibat energi tinggi. Peran xanthan gum dalam multiemulsi A/M/A yaitu sebagai biopolymer hidrofilik yang mampu meningkatkan stabilitas emulsi ganda dengan mencegah pelepasan tak terkendali dari bahan yang terjerap dan membantu proses enkapsulasi droplet fase dalam dengan lebih baik (Lutz dan Aserin, 2008). Peran magnesium sulfat dalam multiemulsi A/M/A yaitu sebagai elektrolit untuk mencegah adanya tekanan osmotik antara fase air internal dengan fase air eksternal. Keseluruhan proses pembuatan disertai dengan penjenuhan nitrogen, lampu ruangan dimatikan, serta wadah yang digunakan dilapisi dengan aluminium foil. Setelah tercampur homogen, multiemulsi kemudian disimpan dalam wadah yang tidak tembus cahaya serta dialiri gas nitrogen terlebih dahulu kemudian


69

ditutup rapat untuk mencegah kontaminasi serta penguraian aktivitas antioksidan karena cahaya. Proses pembuatan multiemulsi pada penelitian ini menggunakan dua tahap proses emulsifikasi dengan menggunakan dua jenis emulgator. Emulgator hidrofobik ditujukan untuk menstabilkan antarmuka dari emulsi air dalam minyak, sedangkan emulgator hidrofilik untuk menstabilkan emulsi minyak dalam air. Pembuatan emulsi primer A/M membutuhkan kecepatan pengadukan yang lebih besar dibandingkan dalam pembuatan emulsi sekunder M/A. Hal ini bertujuan untuk mencegah pecahnya droplet internal yang telah terbentuk. E. Evaluasi Multiemulsi A/M/A 1. Pengamatan organoleptis Pengamatan organoleptis dilakukan dengan mengamati warna, bau, dan homogenitas sediaan multiemulsi dan suspensi liposom. Berdasarkan hasil pengamatan, multiemulsi memiliki warna merah muda seperti yang ditunjukkan pada gambar 20. Warna merah muda pada multiemulsi disebabkan oleh warna ekstrak metanol kelopak bunga rosella sendiri yang berwarna merah sangat dominan mempengaruhi warna sediaan. Multiemulsi yang dihasilkan berbau khas dan homogen. Uji organoleptis ini sangat penting dikarenakan untuk menilai kenyaman dari sediaan multiemulsi.

Gambar 20. Organoleptis multiemulsi A/M/A


70

2. Penetapan pH multiemulsi Tujuan penetapan pH multiemulsi yaitu untuk mengetahui apakah pH multiemulsi yang dihasilkan telah sesuai dengan pH kulit. Uji pH pada penelitian ini dilakukan dengan menggunakan indikator kertas pH. Sediaan multiemulsi

yang dihasilkan memiliki pH 4 yang disebabkan karena pH

ekstrak metanol kelopak bunga rosella sendiri yaitu 4. pH multiemulsi yang dihasilkan telah sesuai dengan pH kulit yaitu 4 – 6 (Lambers, Piessens, Bloem, Pronk, dan Finkel, 2006). pH sediaan untuk pengaplikasian secara topikal tidak boleh terlalu asam dan tidak boleh terlalu basa. Apabila terlalu asam dapat mengiritasi kulit dan apabila terlalu basa dapat menyebabkan kulit bersisik. 3. Uji penentuan tipe emulsi primer A/M dan multiemulsi A/M/A Langkah pertama yang dilakukan dalam penentuan tipe multiemulsi yaitu menentukan tipe emulsi primer terlebih dahulu kemudian menentukan tipe multiemulsi. Pengujian tipe emulsi primer dan multiemulsi dilakukan dengan metode kelarutan. Berdasarkan hasil pengamatan, menunjukkan emulsi primer larut dalam minyak, sehingga dapat dikatakan emulsi primer yang dihasilkan merupakan tipe air dalam minyak (A/M) ditunjukkan pada gambar 21a. Emulsi primer yang dibuat harus tipe emulsi A/M karena untuk membuat multiemulsi A/M/A maka perlu menyiapkan emulsi primer A/M terlebih dahulu. Apabila emulsi primer yang dihasilkan bukan tipe A/M maka multiemulsi tidak akan terbentuk. Multiemulsi yang dihasilkan larut dalam air,


71

sehingga dapat dikatakan bahwa fase luar multiemulsi merupakan air dan tipe multiemulsi yang dihasilkan yaitu A/M/A ditunjukkan pada gambar 21b.

(a)

(b)

Gambar 21. Pengamatan uji kelarutan (a) emulsi primer larut dalam minyak, (b) multiemulsi larut dalam air

4. Pengukuran mikromeritik Tujuan

dilakukannya

pengukuran

mikromeritik

yaitu

untuk

mengetahui ukuran partikel multiemulsi yang dihasilkan. Pengukuran mikromeritik sediaan multiemulsi menggunakan mikroskop Optilab. Hasil pengukuran mikromeritik dapat dilihat pada lampiran 5. Rata-rata ukuran partikel emulsi primer yaitu 4,543 µm yang dapat dilihat pada gambar 22a, sedangkan ukuran partikel multiemulsi yaitu 12,191 µm yang dapat dilihat pada gambar 22b. Berdasarkan ukuran partikel multiemulsi yang dihasilkan dapat diduga bahwa multiemulsi yang dihasilkan dapat masuk ke kulit karena jarak interselular antar korneosit pada kulit yaitu 0,1 mm (Higaki, Amnuaikit, dan Kimura, 2003). Ukuran rata-rata diameter globul multiemulsi pada umumnya sedikit lebih besar, berkisar antara 15-50 µm yang terdiri dari 50-100 droplet air dalam setiap globul minyak dalam emulsi, sedangkan yang lainnya dapat lebih


72

kecil, berkisar antara 2-5 µm dan terdiri dari satu atau beberapa droplet air dalam setiap globul minyak dalam emulsi (Garti dan Bisperink, 1998).

(a)

(b) Gambar 22. Foto partikel (a) emulsi primer A/M; (b) multiemulsi A/M/A (perbesaran 40x)

5. Uji mekanik (sentrifugasi) Tujuan uji mekanik yaitu untuk mengetahui apakah sediaan multiemulsi yang dihasilkan dapat stabil terhadap pengadukan yang sangat kuat. Setelah dilakukan uji mekanik (sentrifugasi), terjadi pemisahan fase


73

menjadi 4 bagian seperti yang ditunjukkan pada gambar 23. Lapisan pertama merupakan lapisan minyak, lapisan kedua merupakan multiemulsi yang belum pecah, lapisan ketiga fase air, dan lapisan keempat berupa xanthan gum. Penentuan tiap lapisan pada uji mekanik ini berdasarkan berat jenis setiap bahan. Hal ini membuktikan bahwa multiemulsi yang dihasilkan masih kurang stabil terhadap penggojokkan yang sangat kuat akibat pemisahan gravitasional yang dipercepat.

Gambar 23. Hasil uji mekanik (sentrifugasi)

6. Evaluasi volume creaming Tujuan evaluasi volume creaming yaitu untuk mengetahui apakah multiemulsi yang telah disimpan mengalami creaming atau tidak yang dapat menyebabkan distribusi zat aktif yang tidak merata. Setelah 28 hari pembuatan pada kondisi penyimpanan optimum, multiemulsi yang dihasilkan belum menunjukkan

adanya

ketidakstabilan

ditunjukkan pada gambar 24.

berupa

creaming

seperti

yang


74

Gambar 24. Hasil uji volume creaming 28 hari setelah pembuatan

Hal ini dikarenakan adanya penambahan agen peningkat viskostas berupa xanthan gum yang cukup dapat menghambat laju creaming. Selain itu, emulgator eksternal juga cukup kuat mampu menjaga agar globul minyak tidak mengalami koalesen yang dapat menyebabkan pemisahan fase. F. Evaluasi Sediaan Suspensi Liposom 1. Pengamatan organoleptis Pengamatan organoleptis dilakukan dengan mengamati warna, bau, dan homogenitas suspensi liposom. Berdasarkan hasil pengamatan, suspensi liposom memiliki warna merah seperti yang ditunjukkan pada gambar 25. Warna merah pada suspensi liposom disebabkan oleh warna ekstrak metanol kelopak bunga rosella sendiri yang berwarna merah sangat dominan mempengaruhi warna sediaan. suspensi liposom yang dihasilkan tidak berbau dan homogen. Uji organoleptis ini sangat penting dikarenakan untuk menilai kenyaman dari sediaan suspensi liposom tersebut.


75

Gambar 25. Organoleptis suspensi liposom

2. Pengukuran pH suspensi liposom Tujuan penetapan pH suspensi liposom yaitu untuk mengetahui apakah pH multiemulsi yang dihasilkan telah sesuai dengan pH kulit. Uji pH pada penelitian ini dilakukan dengan menggunakan indikator kertas pH. Sediaan multiemulsi yang dihasilkan memiliki pH 4 yang disebabkan karena pH ekstrak metanol kelopak bunga rosella sendiri yaitu 4. pH suspensi liposom yang dihasilkan sesuai dengan pH kulit yaitu 4 – 6 (Lambers dkk., 2006). pH sediaan untuk pengaplikasian secara topikal tidak boleh terlalu asam dan tidak boleh terlalu basa. Apabila terlalu asam dapat mengiritasi kulit dan apabila terlalu basa dapat menyebabkan kulit bersisik. 3. Pengukuran mikromeritik Tujuan pengukuran mikromeritik suspensi liposom yaitu untuk mengetahui ukuran partikel suspensi liposom. Pengukuran mikromeritik suspensi liposom menggunakan mikroskop Optilab. Hasil pengukuran


76

mikromeritik dapat dilihat pada lampiran 3. Rata-rata ukuran partikel suspensi liposom yaitu 2,450 µm seperti yang ditunjukkan pada gambar 26.

Gambar 26. Foto partikel suspensi liposom (perbesaran 40x)

Liposom yang dihasilkan termasuk kategori Giant Unilamellar Vesicles (GUV). Berdasarkan ukuran partikel suspensi liposom yang dihasilkan dapat diduga bahwa suspensi liposom yang dihasilkan dapat masuk ke kulit karena jarak interselular antar korneosit pada kulit yaitu 0,1 mm (Higaki dkk., 2003). G. Kurva Baku Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella Fungsi kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella yaitu untuk mengetahui apakah metode analisis dapat memberikan hasil yang linear antara konsentrasi analit dengan respon uji yang kemudian dibuat kurva kalibrasi untuk mendapatkan persamaan regresi linear. Kurva baku atau kurva kalibrasi menyatakan hubungan antara konsentrasi analit pada beberapa seri baku dengan respon instrument. Respon instrument pada spektrofotometri UV-VIS derivative yaitu tinggi derivat.


77

Menurut ICH, dalam menguji linearitas setidaknya menggunakan 5 tingkat konsentrasi dan linearitas tercapai ketika nilai koefisien relasi (r) ≥ 0,9985. Slope dari persamaan kurva baku akan memberikan gambaran tentang sensitivitas (Chan, dkk., 2004). Dalam penelitian ini untuk mencari regresi linear digunakan working solution. Working solution merupakan larutan yang dipreparasi dari larutan stok yang kemudian diencerkan dengan pelarut yang sesuai dan membuat konsentrasi yang diinginkan. 1. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam metanol Tujuan pembuatan kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam metanol yaitu untuk menghitung jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi pada kompartemen donor, kompartemen akseptor, dan yang tertahan di dalam kulit. Enam seri konsentrasi baku esktrak rosella dibuat dengan cara melarutkan esktrak rosella menggunakan metanol p.a kemudian diukur menggunakan spektrofotometri UV-VIS derivatif. Selanjutnya konsentrasi seri larutan baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella diplotkan terhadap tinggi derivatif spektrum derivat menggunakan aplikasi Powerfit v.6.05 yang dikeluarkan oleh Universiteit Utrecht Faculteit

tinggi derivat (cm)

Scheikund. 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0.00

0.10 0.20 konsentrasi (mg/ml)

0.30

Gambar 27. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam metanol


78

Berdasarkan gambar 27 didapatkan persamaan kurva baku y = 1,32798x – 0,02313 dengan nilai koefisien relasi r = 0,997. Dilihat dari nilai r yang didapat sudah memenuhi persyaratan yang ditetapkan oleh ICH yaitu sekurang-kurangnya 5 konsentrasi dan hasil koefisien relasi yang didapatkan sebesar 0,997 menunjukan 99,7% perubahan tinggi derivat dipengaruhi oleh perubahan konsentrasi analit (ekstrak metanol kelopak bunga rosella). Hal ini menunjukkan hasil uji linearitas memenuhi syarat yang ditentukan oleh ICH dimana konsentrasi berbanding linear terhadap respon uji (tinggi derivat). Berdasarkan persamaan kurva baku, dapat dihitung nilai LOD dan LOQ untuk mengetahui konsentrasi analit terendah dalam sampel yang dapat dideteksi. LOD merupakan konsentrasi atau jumlah analit yang berbeda signifikan dari blanko dan dapat dideteksi oleh instrumen. LOQ merupakan kadar terkecil dari sampel yang masih bisa dikuantifikasi. Berdasarkan data persamaan kurva baku yang diperoleh dari Powerfit v.6.05, didapatkan nila Sa = 4,97043x10-2. Apabila nilai Sa dimasukkan ke dalam rumus LOD dan LOQ maka didapatkan nilai LOD sebesar 0,1235 mg/mL dan nilai LOQ sebesar 0,3743mg/mL. Nilai slope dari persamaan kurva baku yaitu 1,32798. 2. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam aquadest Tujuan pembuatan kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam aquadest yaitu untuk menghitung jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan suspensi liposom pada kompartemen donor, kompartemen akseptor, dan yang tertahan di dalam kulit. Sebanyak 10 seri


79

konsentrasi baku esktrak rosella dibuat dengan cara melarutkan masingmasing esktrak rosella menggunakan aquadest kemudian diukur menggunakan spektrofotometri UV-VIS derivatif. Selanjutnya konsentrasi seri larutan baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella diplotkan terhadap nilai tinggi derivatif spektrum derivat menggunakan aplikasi Powerfit v.6.05 yang dikeluarkan oleh

tinggi derivat (cm)

Universiteit Utrecht Faculteit Scheikund. 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0

0.5

1 1.5 Konsentrasi (mg/ml)

2

2.5

Gambar 28. Kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam aquadest

Berdasarkan gambar 28 didapatkan persamaan kurva baku y = 1,94163x – 0,18860 dengan nilai koefisien korelasi (r) = 0,99953. Nilai r yang didapat sudah memenuhi persyaratan yang ditetapkan oleh ICH yaitu sekurang-kurangnya 5 konsentrasi dan hasil koefisien korelasi yang didapatkan sebesar 0,9991 menunjukan 99,91% perubahan tinggi derivat dipengaruhi oleh perubahan konsentrasi analit (ekstrak metanol kelopak bunga rosella). Berdasarkan persamaan kurva baku yang didapat maka nilai LOD dan LOQ dapat dihitung. LOD merupakan konsentrasi atau jumlah analit yang


80

berbeda signifikan dari blanko dan dapat dideteksi oleh instrumen. LOQ merupakan kadar terkecil dari sampel yang masih bisa dikuantifikasi. Berdasarkan data persamaan kurva baku yang diperoleh dari Powerfit v.6.05, didapatkan nila Sa = 1,87650x10-2 apabila nilai Sa dimasukkan ke dalam rumus LOD dan LOQ maka didapatkan nilai LOD sebesar 0,0319 mg/mL dan nilai LOQ sebesar 0,0966 mg/mL. Nilai slope dari persamaan kurva baku yaitu 1,9416. H. Uji penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan suspensi liposom Uji penetrasi secara in vitro pada penelitian ini menggunakan sel difusi Franz (FDC). Uji penetrasi ini untuk mengetahui jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang terpenetrasi ke kulit selama kurun waktu 6 jam pada ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A dan dalam suspensi liposom. 1. Larutan 10mM Phospate Buffer Saline (PBS) pH 4 Tujuan dibuatnya Phospate Buffer Saline pH 4 sebagai sebagai medium pada kompartemen akseptor FDC. Larutan yang hendak digunakan sebagai medium pada kompartemen akseptor tidak boleh menggangu sistem kulit karena dapat mempengaruhi difusi zat. 2. Preparasi kulit tikus betina galur wistar sebagai membran difusi Studi penetrasi ini menggunakan kulit tikus sebagai membran dan FDC sebagai aparatusnya. Peneliti menggunakan kulit tikus sebagai membran karena cukup mudah diperoleh, biaya yang murah, dan penanganannya


81

sederhana (Godin dan Touitou, 2007). Berdasarkan tabel 5 dapat dilihat bahwa koefisien permeabilitas rat galur wistar tidak terlalu berbeda dengan kulit manusia dibandingkan spesies yang lainnya. Tabel 5. Perbandingan koefisien permeabilitas dari beberapa spesies terhadap air

Spesies Manusia Rat Mouse Guinea pig Rabbit

Galur

Alpk/AP Hairless mouse Alpk/AP Hairless mouse Dunkin-Hartley

Koefisien Permeabilitas terhadap air (cm/h x 10-5) 93 103 103 144 350 442

New Zealdan White

253 (Scott, Walker, dan Dugard, 1986)

Membran yang digunakan yaitu kulit punggung tikus betina galur Wistar yang berumur 2-3 bulan karena semakin tua umur tikus, maka ketebalan stratum korneum akan semakin besar sehingga permeabilitasnya akan semakin rendah (Walters, 2002). Dilihat dari ketebalan struktur kulitnya, kulit tikus memiliki kesamaan secara struktural dengan kulit manusia yaitu 2,09 mm untuk kulit tikus dan 2,97 mm untuk kulit manusia (Godin dan Touitou, 2007). Studi absorbsi perkutan ortho-phenylphenol yang dilakuan Cnubben dan colleagues (2002), menunjukkan penetrasi senyawa pada kulit utuh manusia dan tikus (epidermis dan dermis) lebih lambat daripada bagian epidermis pada manusia dan tikus seperti yang ditunjukkan pada gambar 29. Hal ini menunjukkan bahwa ketebalan kulit berpengaruh terhadap studi absorbsi perkutan.


82

Gambar 29. Hubungan dermal absorption orto-fenilfenol dengan waktu pada beberapa jenis kulit

Supaya bisa digunakan sebagai membran sel difusi Franz, tikus yang telah dikorbankan dicukur bulunya dengan hati-hati. Hal ini bertujuan untuk mencegah robeknya kulit yang akan digunakan. Selanjutnya lemak subkutan dihilangkan karena lemak dapat mempengaruhi penetrasi obat melalui kulit. Kulit yang telah dihilangkan lemak subkutannya dicuci terlebih dahulu dengan larutan ringer laktat selanjutnya dapat langsung digunakan atau bisa disimpan dalam freezer. Berdasarkan Organization for Economic Co-operation Development (OECD) Guideline for The Testing of Chemicals (Skin Absorption: in vitro Method), kulit hewan yang akan digunakan dapat disimpan selama beberapa bulan pada suhu -200C dan telah dilaporkan tidak menunjukkan perubahan permeabilitas dibandingkan dengan kulit segar. 3. Pemasangan alat Sel difusi Franz (FDC) Sebelum kulit digunakan sebagai membran difusi, kulit perlu dihidrasi terlebih dahulu dengan Phospate Buffer Saline pH 4 selama kurang lebih 30 menit pada suhu ruang. Proses hidrasi ini ditujukan untuk


83

mengkondisikan kulit ke kondisi semula sebelum disimpan dalam lemari pendingin sampai sebelum digunakan. Membran yang digunakan diletakkan antara kompartemen donor dan kompartemen akseptor, di mana membran harus kontak langsung dengan cairan akseptor supaya sediaan yang diaplikasikan pada membran dapat terpenetrasi menembus kulit dan masuk dalam cairan akseptor. Selama proses berlangsung, suhu tetap dijaga dengan thermostat sebesar 31 oC – 33oC di mana pada suhu tersebut menggambarkan kondisi suhu tubuh. Untuk menghomogenkan bahan aktif yang terpenetrasi ke cairan akseptor, maka pada cairan akseptor perlu adanya pengadukan dengan magnetik stirrer dengan kecepatan 300 rpm selama proses berlangsung. Semakin tinggi kecepatan pengadukan maka akan menimbulkan gelembung udara pada perbatasan antara membran kulit dengan kompartemen cairan akseptor sehingga akan menghalangi kontak langsung antara membran kulit dengan kompartemen cairan akseptor, sedangkan semakin rendah kecepatan pengadukan maka akan sulit untuk menghomogenkan bahan aktif yang terpenetrasi ke kulit. 4. Penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A dan dalam suspensi liposom pada kompartemen akseptor dan kompartemen donor Tujuan penetapan ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan suspensi liposom dalam kompartemen akseptor FDC yaitu untuk mengetahui kemampuan penetrasi sediaan multiemulsi dan suspensi liposom yang mengandung ekstrak metanol kelopak bunga rosella


84

yang dapat menembus kulit selama interval waktu tertentu sedangkan tujuan penetapan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi dan suspensi liposom pada kompartemen donor yaitu untuk mengetahui seberapa banyak sediaan multiemulsi dan suspensi liposom yang mengandung ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tidak dapat terpenetrasi ke dalam kulit. a. Perbandingan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan

multiemulsi

A/M/A dan

dalam suspensi

liposom pada

kompartemen donor Tujuan membandingkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A dan dalam suspensi liposom pada kompartemen donor yaitu untuk mengetahui jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella antara sediaan multiemulsi A/M/A dengan sediaan suspensi liposom yang tidak dapat terpenetrasi ke dalam kulit di mana selanjutnya akan digunakan untuk menghitung mass balance.


80 70 60 50 40 liposom

30

multiemulsi A/M/A

20 10 0 0

2

4

6

8

waktu (jam)

Gambar 30. kurva multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada kompartemen donor


85

Gambar 30 menunjukkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella baik dalam sediaan multiemulsi dan suspensi liposom pada kompartemen donor mengalami penurunan. Namun penurunan yang terjadi telah sesuai teori di mana semakin bertambahnya waktu jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertinggal pada kompartemen donor berkurang. Laju penurunan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen donor ditunjukkan dengan nilai slope pada persamaan regresi yang didapat. Persamaan regresi yang didapat pada sediaan multiemulsi A/M/A yaitu y = 29,474 – 1,7704x, sedangkan pada sediaan suspensi liposom yaitu y = 74,47 – 3,6762x. Berdasarkan nilai slope yang diperoleh, nilai slope pada sediaan multiemulsi A/M/A lebih kecil yaitu 1,7704 daripada nilai slope pada sediaan suspensi liposom yaitu 3,6762. Hal ini menunjukkan bahwa laju penurunan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A lebih kecil daripada sediaan suspensi liposom sehingga dapat diduga bahwa ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan suspensi liposom lebih cepat masuk ke dalam kulit dibandingkan dengan ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A. b. Perbandingan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada kompartemen akseptor Tujuan membandingkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada


86

kompartemen akseptor yaitu untuk mengetahui jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella antara sediaan multiemulsi A/M/A dengan sediaan suspensi liposom yang masuk ke kompartemen akseptor di mana


selanjutnya akan digunakan untuk menghitung mass balance. 50 40 30 liposom 20

multiemulsi A/M/A

10 0 0

2

4 waktu (jam)

6

8

Gambar 31. Kurva sediaan multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom pada kompartemen akseptor

Gambar 31 menunjukkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella baik dalam sediaan multiemulsi dan suspensi liposom pada kompartemen akseptor mengalami kenaikan. Kenaikan yang terjadi telah sesuai teori di mana semakin bertambahnya waktu jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang masuk pada kompartemen akseptor bertambah. Namun hal ini tidak diinginkan pada penelitian ini karena efek antosianin sebagai antioksidan dalam menangkal radiasi sinar UV ditujukan pada lapisan epidermis dan dermis kulit. Radiasi sinar UV hingga menembus lapisan dermis akan memicu terbentuknya radikal bebas dalam tubuh terutama kulit sehingga dapat berdampak buruk bagi kulit yaitu pigmentasi kulit, kerutan (penuaan dini), kerusakan kulit, serta kanker kulit. Jika


antosianin dapat

87

menembus kulit tikus hingga terdeteksi dalam

kompartemen akseptor, diasumsikan bahwa antosianin tidak tertahan di kulit dan efektivitas sebagai antioksidan berkurang. Laju kenaikan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen akseptor ditunjukkan dengan nilai slope pada persamaan regresi yang didapat. Persamaan regresi yang didapat pada sediaan multiemulsi A/M/A yaitu y = 5,8347 + 0,3766x sedangkan pada sediaan suspensi liposom yaitu y = 2,2796 + 6,1409x. Berdasarkan nilai slope yang diperoleh, nilai slope pada sediaan multiemulsi A/M/A lebih kecil daripada nilai slope pada sediaan suspensi liposom. Hal ini menunjukkan bahwa laju kenaikan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A lebih kecil yaitu 0,3766 daripada sediaan suspensi liposom yaitu 6,1409 sehingga dapat diduga bahwa ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan suspensi liposom lebih cepat masuk kedalam kompartemen akseptor dibandingkan dengan ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A. Hal ini dimungkinkan karena komponen penyusun yaitu lipid bilayer pada suspensi liposom menyerupai komponen penyusun pada membran sel plasma, sehingga ketika suspensi liposom menempel pada membran sel plasma maka akan melakukan fusi pada membran sel dengan menyisipkan lipid

bilayer ke

membran plasma kemudian akan

menstimulasi pelepasan ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang


88

terkandung pada suspensi liposom seperti yang ditunjukkan pada gambar 12. Multiemulsi dimungkinkan dapat menembus stratum korneum karena adanya surfaktan nonionik yaitu Tween 80 sebagai penetration enhancer. Surfaktan sendiri memiliki dua mekanisme dalam meningkatkan penetrasi senyawa melalui kulit yaitu (1) menembus stratum korneum dengan cara meningkatkan fluiditas, melarutkan, serta mengekstraksi komponen lipid; (2) surfaktan masuk ke dalam matriks interselular dan berinteraksi dengan mengikat filamen keratin sehingga korneosit mengalami gangguan dan akhirnya senyawa dapat masuk (Tyagi, Chandra, Singh, dan Rahman, 2011). Pelepasan obat pada multiemulsi dapat terjadi melalui mekanisme transport difusi dengan cara (1) solubilisasi secara langsung dan difusi senyawa hidrofilik melalui minyak; (2) permeasi melalui lapisan cairan yang tipis dan (3) solubilisasi senyawa yang terenkaplusasi dalam surfactant reverse micelles dan difusi misel melalui fase minyak (Bonnet, Cansell, Berkaoui, Ropers, Anton, Leal-Calderon, 2007). 5. Perhitungan mass balance ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi dan dalam suspensi liposom Tujuan perhitungan mass balance yaitu untuk mengetahui gambaran jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada setiap bagian. Perhitungan mass balance dapat dilakukan apabila semua bagian yang mengandung ekstrak metanol kelopak bunga rosella ditentukan jumlahnya. Penelitian ini,


89

peneliti hanya menetapkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen akseptor, sisa pada kompartemen donor, dan dalam sampel ketika pengaplikasian. Istilah mass balance pada penelitian ini hanya untuk menggambarkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen donor, kompartemen akseptor dan yang tertahan di dalam kulit.


100 80 60 40

liposom

20

multiemulsi

0 -20 -40

0

2

4

6

8

waktu (jam)

Gambar 32. Kurva sediaan mutiemulsi A/M/A dan suspensi liposom yang tertahan di dalam kulit

Gambar 32 menunjukkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A yang tertahan di dalam kulit mengalami kenaikan sedangkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan suspensi liposom mengalami penurunan. Laju kenaikan dan penurunan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan di dalam kulit ditunjukkan dengan nilai slope pada persamaan regresi yang didapat. Persamaan regresi yang didapat pada sediaan multiemulsi A/M/A yaitu y = 64,691 + 1,3938x sedangkan pada sediaan suspensi liposom yaitu y = 27,811 – 2,465x. Jam kelima pada suspensi liposom terlihat jumlah ekstrak


90

metanol kelopak bunga rosella mengalami penurunan yang sangat tajam dibandingkan jam-jam sebelumnya. Hal ini dikarenakan ketebalan kulit yang digunakan tiap jam berbeda sehingga permeabilitas kulit tiap jam berbeda pula yang mengakibatkan pada jam kelima jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang masuk ke kompartemen akseptor banyak sehingga yang tertahan pada kulit sedikit. Berdasarkan nilai slope yang diperoleh, laju kenaikan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella sebesar 1,3938 sedangkan pada suspensi liposom laju penurunan sebesar 2,465. Hal ini menunjukkan bahwa semakin bertambahnya waktu, jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan di dalam kulit semakin banyak sedangkan pada suspensi liposom semakin bertambahnya waktu jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan di dalam kulit semakin sedikit, sehingga dapat diduga bahwa multiemulsi A/M/A dapat memberikan kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang lebih baik daripada suspensi liposom sehingga mampu menangkal radiasi sinar UV A pada lapisan epidermis dan dermis. Berdasarkan penjelasan dari gambar 29, 30, dan 31 dapat disimpulkan bahwa kemampuan penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dari kompartemen ke kulit dan dari kulit ke kompartemen akseptor pada suspensi liposom lebih besar daripada multiemulsi A/M/A sehingga mengakibatkan jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan di dalam kulit lebih sedikit daripada multiemulsi A/M/A. Hal ini bisa


91

dimungkinkan karena ukuran partikel pada suspensi liposom yang lebih kecil daripada multiemulsi A/M/A sehingga lebih mudah menembus membran kulit. Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Mayangsari (2015) didapatkan IC50 ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A lebih kecil yaitu sebesar 22457,24 TE/100 gram daripada suspensi liposom yaitu 84528,39 TE/100 gram. Penelitian entrapment efficiency (EE) ekstrak rosella dalam multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom yang dilakukan oleh Li (2015) menunjukkan bahwa multiemulsi A/M/A memiliki EE yang lebih besar dibandingkan suspensi liposom namun kemampuan multiemulsi A/M/A dalam melindungi zat aktif rosella yang rendah menyebabkan penurunan aktivitas antioksidan dibuktikan dengan laju penurunan EE yang lebih tinggi pada multiemulsi A/M/A dibandingkan liposom. Walaupun IC50 pada multiemulsi A/M/A lebih kecil, EE multiemulsi A/M/A lebih besar dan kemampuan melindungi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A lebih kecil, namun kemampuan penetrasi multiemulsi A/M/A ke dalam kulit yaitu lapisan epidermis dan dermis lebih baik daripada suspensi liposom. I. Statistik Uji T penetrasi ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom Tujuan statistik uji T dalam penelitian ini yaitu untuk memastikan apakah rata-rata jumlah ekstrak rosella yang tertahan dalam kulit berbeda signifikan untuk 2 bentuk sediaan (suspensi liposom dan multiemulsi A/M/A). Peneliti menggunakan statistik uji T karena dalam penelitian ini membandingkan rata-rata


92

jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam 2 populasi sampel yang berbeda yaitu sediaan multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom. Sebelum melakukan uji T perlu dilakukan uji F terlebih dahulu untuk mengetahui apakah standard deviasi pada kedua populasi tersebut berbeda signifikan atau tidak. Berdasarkan hasil perhitungan yang ditunjukkan dalam tabel 6 dapat disimpulkan standard deviasi kedua populasi berbeda signifikan. Tabel 6. Uji F standar deviasi suspensi liposom dan multiemulsi A/M/A

Populasi Multiemulsi A/M/A Suspensi liposom

Ratarata 1,3938 2,71664

Standard F deviasi hitung 1,70129 4,70357

7,6436

Α

F tabel

kesimpulan

0,05

2,723

berbeda signifikan

Tahap selanjutnya dilakukan uji T. Hasil perhitungan yang ditunjukkan dalam tabel 7 dapat disimpulkan rata-rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan di dalam kulit dalam sediaan multiemulsi A/M/A berbeda signifikan terhadap rata-rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan di dalam kulit dalam sediaan suspensi liposom. Tabel 7. Uji signifikasi rata – rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang terpenetrasi kekulit dalam suspensi liposom dan multiemulsi A/M/A

Populasi Multiemulsi A/M/A Suspensi liposom

Ratarata 1,3938

Standard T deviasi hitung 1,70129

-2,71664

4,70357

3,4866

Α

T tabel

kesimpulan

0,05

2,09

berbeda signifikan


93

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan 1. Formula optimum multiemulsi yang terbentuk bertipe A/M/A, homogen, memiliki pH yang sesuai dengan kulit, dan stabil selama 28 hari, pada suhu penyimpanan -4 , dan pemberian gas nitrogen ditandai dengan tidak adanya pemisahan fase. 2. Sediaan multiemulsi A/M/A yang telah optimal mempunyai kemampuan sebagai pembawa ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang lebih baik dari pada suspensi liposom dalam berpenetrasi ke dalam lapisan epidermis dan dermis B. Saran 1. Perlu adanya optimasi lebih lanjut terkait formulasi multiemulsi supaya sediaan yang dihasilkan bisa lebih optimum. 2. Perlu adanya pertimbangan penggunaan ukuran FDC yang lebih besar untuk mengurangi variabel tak terkendali yaitu ketebalan membran. 3. Perlu adanya penelitian penetrasi lebih lanjut dengan menggunakan kulit hewan uji lainnya (misalnya kulit telinga babi) atau kulit manusia, supaya dapat menggambarkan penetrasi yang sebenarnya 4. Perlu adanya pembanding dengan zat yang telah diketahui penetrasi dan efeknya 5. Perlu adanya uji kebocoran FDC dan uji TEER sebelum dilakukan penetrasi dengan FDC.

\


94

DAFTAR PUSTAKA Akbarzadeh, A., Sadabady, R.R., Davaran, S., Joo, S.W., Zarghami, N., Hanifehpour, Y., dkk., 2013, Liposome : Clasification, Preparation, and Application, Nanoscale Research Letters, 8:102, pp. 1 – 9. Al-Saidan, S.M., Krishnaiah, Y.S.R., Chandrasekhar, D.V., Lalla, J.K., Rama, B., Jayaram, B., dkk., 2004, Formulation of An HPMC Gel Drug Reservoir System With Ethanol-Water As A Solvent System and Limonene As A Penetration Enhancer for Enhancing In vitro Transdermal Delivery of Nicordanil, Skin Pharmacol Physicol, 17:310-320. Ansel, H., 2005, Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi, Edisi ke 4, UI press, Depok, hal. 492-494. Bartosova, L., dan Bajgar, J., 2012, Transdermal Drug Delivery In Vitro Using Diffusion Cell, Current Medicinal Chemistry, 19:4671-4677. Benichou, A., Aserin, A., dan Garti, N., 2004, Double Emulsion Stabilized with Hybrids of Natural Polymers for Entrapment and Slow Release of Active Matters, Advances in Colloid dan Interface Science, 108-109:29-41. Benson, H.A., 2012, Topical dan Transdermal Drug Delivery, John Wiley & Sons, New Jersey, pp. 3-16. Bhai, S.A., Yadav, V., Mamatha, Y., dan Prasanth, V.V., 2012, Liposomes An Overview, Journal of Pharmaceutical dan Scientific Innovation, 1(1):1321. Bonnet, M., Cansell, M., Berkaoui, A., Ropers, M.H., Anton, M., dan LealCalderon, F., 2007, Release Rate profiles of magnesium from multiple W/O/W emulsion, food hydrocolloids, 23(2009):92-101. Brannon, J.C., 2007, Skin Anatomy, http://www/dermatology.about.com/ skinanatomy. diakses pada tanggal 30 Mei 2015. Colas, A., Siang, J., dan Ulman,K., 2006, Silicone Antifoams dan Silanes, Dow Corning Corporation, USA, p.2. Direktrorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1979, Farmakope Indonesia Edisi III, DepKes RI, Jakarta, hal. XXXIII, 757. Dikstein, S. dan Zlotogorski, A., 1994, Measurenment of skin pH, acta derm, venerol, 185:18 – 20.


95

Fennema, O.R., 1996, Food Chemistry, Third edition, Marcel Dekker Inc, New York. Friberg, S.E., Quencer, L.G., dan Hilton, M.C., 1996, Theory of Emulsions, in Lieberman, H.A., Rienger, M.M., dan Banker, G.S., Pharmaceutical Dossage Forms : Disperse Systems, Volume 1, 2nd ed, Marcell Dekker Inc, New York, p.57. Friend, D.R., 1992, In Vitro Permeation Technique, Journal of Control Release, 18:235-248. Garti, N., 1997, Double Emulsions: Scope, Limitations dan New Achievements, Colloids dan Surface A Physicochemical and Engineering Aspects, pp. 123,124. Garti dan Bisperink, 1998, Double Emulsions:Progress and Applications, Current Opinion in Colloid & Interface Science, 3:657-667. Harborne, J.B., 1996, Phytochemical Methods: A Guide to Modern Techniques of Plant Analysis, Springer Science & Business Media, London. Higaki K, Amnuaikit C, dan Kimura T., 2003, Strategies for Overcoming the Stratum Corneum: Chemical and Physical Approaches. Am J Drug Deliv; 1:187-214. Hui, Y.H., dan Sherkat, F., 2005, Handbook of Food Science, Technology, and Engineering, Volume 4, CRC Press, Florida, pp. 14-7. Jesorka, A. dan Orwar, O., 2008, Liposom: Technologies dan Analytical Applications, Annual Review of Analytical Chemistry, 1:801-832. Jiao, J. dan Burgess, D.J., 2008, Multiple Emulsion Stability : Pressure Balance and Interfacial Film Strength, Multiple Emulsion : Technology and Applications, New Jersey : John Wiley & Sons Inc, pp.1-19. Junquera, L.C., dan Kelley, O.R., 1997, Histologi Dasar, Terj. Dari Basic Histologi, oleh Jan Tamboyang, EGC, Jakarta, hal.357-364. Kiil,

L., dan Houmoller, M., 2013, Solar Radiation (Sunlight), http://climap.net/solar-radiation-sunlight, diakses tanggal 14 Juli 2015

Konczak, I., dan Zhang, W., 2004, Anthocyanins-more than natures colours, Journal of Biomedicine and Biotechnology, 2004(5):239-240.


Kumar,

96

R., dan Philip, 2007, Review Article Modified Transdermal Technologies:Breaking The Barriers of Drug Permeation Via The Skin, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 6(1):634-644.

Kumar, R., Kumar, M.S., dan Mahadevan, N., 2012, Multiple Emulsion : A Review, International Journal of Recent Advances in Pharmaceutical Research, India, 2(1):9-19. Kus, S., Marczenko, Z., dan Obarski, N., 1996, Derivative UV-VIS Spectrophotometry In Analytical Chemistry, chem.anal, 41:899-927. Kusantati, H., Prihatin, P.T., dan Wiana, W., 2008, Tata Kecantikan Kulit, Direktorat Pembinaan Sekolah Menegah Kejuruan, Jakarta. Lambers, H., Piessens, S., Bloem, A., Pronk, H., dan Finkel, P., 2006, Natural Skin Surface pH is on Average Below 5, Which is Beneficial for its Resident Flora, International Journal of Cosmetic Science, 28:359-370 Lane, M.E., 2013, Skin Penetration Enhancers, International Journal of Pharmaceutics, 447:12 - 21. Laouini, A., Maalej, J., Blouza, L., Sfar, S., Charcosset, C., dan Fessi, H., 2012, Preparation, Characterization dan Applications of Liposomes : State of The Art, Journal of Colloidal Science and Biotechnology, 1:147-168. Li, M., 2015, Pengaruh Penyimpanan Terhadap Stabilitas Ekstrak Rosella (Hibiscus sabdariffa L.) dalam Formulasi Multiemulsi A/M/A dan suspensi liposom, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Lutz dan Aserin, 2008, Multiple Emulsions Stabilized by Biopolimer, Multiple Emulsions : Technology Dan Applications, New Jersey : John Wiley & Sons Inc, pp. 85, 86. Mahmood, T., Akhtar, N., dan Manickam, S., 2014, Interfacial Film Stabilized W/O/W Nano Multiple Emulsions Loaded With Green Tea and Lotus Extracts: Systematic Characterization of Physicochemical Properties and Shelf-Storage Stability, Journal of Nanobiotechnology, 12(20):1-8. Marczenko, Z., dan Balcerzak,M., 2000, Separation, Preconcentration Dan Spechtrophotometry In Inorganic Analysis, Elsevier Science, Netherldans, pp.34-36. Maryani, H.dan Krisrtiana, L., 2005, Khasiat dan Manfaat Rosela, PT AgroMedia Pustaka, Jakarta, hal. 2-33.


97

Mayangsari, E., 2015, Perbandingan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Rosella (Hibiscus sabdariffa L.) dalam Multiemulsi A/M/A dan Suspensi Liposom, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Meyers, D., 2006, Surfactant Science dan Technology, New Jersey: John Wiley & Sons, Inc, p. 316. Mutia,

S., 2015, Dampak Radiasi Sinar Ultraviolet (UV), http://101gayahidupsehat.com/dampak-radiasi-sinar-ultraviolet-uv/, diakses tanggal 14 Juli 2015

Nair, V.B., dan Panchagula, R., 2004, The Effect of Pretreatment With Terpenes On Transdermal Iontophrotic Delivery of Arginine Vasopressin, IL FARMACO, 59:575-581. National Aeronautics, dan Space Administration, 2007, Ultraviolet Waves, http://missionscience.nasa.gov/ems/10_ultravioletwaves.html, diakses tanggal 14 Juli 2015 Nurhidayati, L., 2007, Spektrofotometri Derivative Dan Aplikasinya Dalam Bidang Farmasi, Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, 5(2):93-99. Pathan, I.B., dan Setty, C.M., 2009, Chemical Penetration Enhancers for Transdermal Drug Delivery Systems, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 8(2):173-179. Pazmino, D., Giusti, A.E., Wrolstad, R.E., dan Gloria, B.A., 2001, Anthocyanins From Oxalis Triangularis As Potensial Food Colorants, Food Chemistry, 75(2):211-216. Pinsuwan, S., Ammnnuaikit, T., Ungphaiboon, S., dan Itharat, A., 2010, LiposomContaining Hibiscus sabdariffa Calyx Extract Formulations with Increased Antioksidant Activity, Improved Dermal Penetration and Reduced Dermal Toxicity, J Med Assoc Thai, 93 (7):S216 – S226. Rocha, I.D.C., Bonnlaender, B., Sievers. H., Pischel, I., dan Heinrich, M., 2014, Hibiscus Sabdariffa L. – A Phytochemical And Pharmacological Review, Food Chemistry, 9-11. Rowe, R., Sheskey, P.J., dan Quinn, M.E., 2009, Handbook of Pharmaceutical Excipients Sixth Edition, 6th edition, Pharmaceutical Press, USA, pp. 155,233,234,445,446,675,782. Shi, J., Mazza, G., dan Maquer, M.L., 2002, Functional Food : Biochemical dan Processing Aspects, Volume 2, CRC Press, Florida, pp. 95-98.


Solarradiation, 2013, Solar Radiation: Sunlight and http://www.solarradiation.net/ diakses tangga 14 Juli 2015

98

More,

Som, I., Bhatia, K., dan Yasir, M., 2012, Status Of Surfactant As Penetration Enhancer In Transdermal Drug Delivery, Journal Pharmacy Bioallied Scienced, 4(1):2-9. Suzery,M., Lestari, S., dan Chayono, B., 2010, Penentuan Total Antosianin dari Kelopak Bunga Rosella (Hibiscus sabdariffa L.) dengan Metode Maserasi dan Sokhletasi, Jurnal Sains dan Matematika, 18(1):1-6 Tranggono, R.I., 2007, Buku Pegangan Ilmu Pengetahuan Kosmetik, Gramedia, Pustakan Utama, Jakarta, hal. 11-13, 78, 82-85. Troy, D.B., dan Beringer, P., 2006, Remington : The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams & Wilkins, USA, p. 330. Tyagi, R.K., Chandra, A., Singh, D., dan Rahman, A., 2009, Transdermal Drug Delivery System (TDDS) : An Overview, International Journal of Pharmaceutical Sciences dan Research, India, 2(6):1379-1388. Voight, R., 1995, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Edisi ke 5, Gajah Mada University Press, Yogyakarta. Walters, K.A., 2002, Dermatology dan Transdermal Formulations, Marcel Dekker, New York, pp.210, 211, 225. Wiechers, J.W., 1989, The Barrier Function Of The Skin In Relation To Percutaneous Absorption Of Drugs, Pharmaceutics Weekblad, 11:185187. Wilczewzka, A., Niemirowicz, K., Markiewicz, K.H., dan Car, H., 2012, Nanoparticle as Drug Delivery Systems, Pharmacological Reports, 64:1020-1037. Witt,K., dan Bucks, D., 2003, Studying In Vitro : Skin Preparation dan Drug Release to Optimize Dermatological Formulations, Formulation, Fill & Finish, pp. 22, 24, 26, 27.


LAMPIRAN

99


100

Lampiran 1. Spektrum antosianin pada ekstrak metanol kelopak bunga rosella (Hibiscus sabdariffa L.)


101

Lampiran 2. Penetapan bobot tetap ekstrak metanol kelopak bunga rosella (Hibiscus sabdariffa L.) Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 Berat cawan (gram)

27,4435

22,4916

21,7966

Berat cawan + Isi (gram)

28,0144

23,0566

22,3514

Berat awal (gram)

0,5709

0,5650

0,5547

Berat cawan akhir (gram)

27,5029

22,5462

21,8380

Berat akhir (gram)

0,5155

0,5104

0,5133

Rata – rata berat akhir


102

Lampiran 3. Data hasil optimasi emulsi primer A/M a. Optimasi HLB No 1 2 3 4

HLB 5 5,3 5,5 5,8

Span 80 9.35 9.07 8.88 8.60

Tween 80 0.65 0.93 1.12 1.40

Volume Pemisahan (ml) 16,5 16,1 15 14

% Pemisahan 66 64,4 60 56

b. Optimasi kecepatan pengadukan No 1 2

kecepatan pengadukan 4 5

c. Optimasi lama pencampuran Lama Pencampuran No (menit) 1 10 2 15 3 20

volume pemisahan (ml) 14 13

% Pemisahan 56 52

Volume Pemisahan (ml) 13 13 14

d. Optimasi konsentrasi stiffening agent Konsentrasi Volume Pemisahan No (%) (ml) 1 4 3 2 4,5 2,5 3 5 2 4 5,5 2 5 6 0 6 8 0 7 10 0 e. Optimasi konsentrasi anti foaming agent Konsentrasi No Volume Pemisahan (ml) (%) 1 2 0 2 4 0 3 6 0 4 8 0

% Pemisahan 52 52 56

% Pemisahan 12 10 8 8 0 0 0

% Pemisahan 0 0 0 0


103

Lampiran 4. Data hasil optimasi multiemulsi a. Optimasi rasio emulsi primer No Rasio (g) Volume Pemisahan (ml) 1 27,8 1 2 37,8 0 3 47,8 0.5 b. Optimasi konsentrasi emulgator sekunder Konsentrasi No Volume Pemisahan (ml) (%) 1 2 0 2 4 2,6 3 6 2,8 c. Optimasi Lama Pencampuran Lama Pencampuran No (menit) 1 10 2 12 3 15

% Pemisahan 4 0 2

% Pemisahan 0 10,4 11,2

Volume Pemisahan (ml) 0 0 0

% Pemisahan 0 0 0


Lampiran 5. Perhitungan mikromeritik 1. Emulsi Primer

t = hari ke-1 n = 75 k = 1+ 3,22log75 = 7,23 = 7 I= No Rentang ( ) 1 2,487 - 3,122 2 3,123 - 3,758 3 3,759 - 4,394 4 4,395 - 5,03 5 5,031 - 5,666 6 5,667 - 6,302 7 6,303 - 6,938 Jumlah (Σ)

Nilai tengah (d) 2.805 3.441 4.077 4.713 5.349 5.985 6.621

n 3 17 13 21 11 5 5 75

nxd 8.414 58.489 52.995 98.963 58.834 29.923 33.103 340.718

Nilai tengah (d) 10.173 11.466 12.760 14.053 15.346 16.640 17.933

n 20 24 12 11 6 0 2 75

nxd 203.463 275.194 153.117 154.583 92.078 0.000 35.866 914.300

d rata – rata = 2. Multiemulsi A/M/A

t = hari ke-1 n = 75 k = 1+ 3,22log75 = 7,23 = 7 I= No Rentang ( ) 1 9,527 - 10,819 2 10,820 - 12,113 3 12,114 - 13,406 4 13,407 - 14,699 5 14,700 - 15,992 6 15,993 - 17,286 7 17,287 - 18,579 Jumlah (Σ) d rata – rata =

104


3. Suspensi Liposom

t = hari ke-1 n = 75 k = 1+ 3,22log75 = 7,23 = 7 I= No Rentang ( ) 1 1,063 - 1,481 2 1,482 - 1,899 3 1,900 - 2,318 4 2,319 - 2,737 5 2,738 - 3,156 6 3,157 - 3,574 7 3,575 - 3,993 Jumlah (Σ) d rata – rata =

Nilai tengah (d) 1.272 1.691 2.109 2.528 2.947 3.365 3.784

n 7 12 12 15 19 6 4 75

nxd 8.903 20.287 25.311 37.920 55.988 20.193 15.137 183.738

105


Lampiran 6. Data Derivated Kurva Baku Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam metanol konsentrasi baku (mg/ml) 0.25 0.20 0.16 0.12 0.08 0.04

Tinggi derivat (cm) 0.3 0.25 0.2 0.13 0.08 0.03

106


Lampiran 7. Data Derivated Kurva Baku Ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam aquadest Konsentrasi baku (mg/ml) 2.0468 1.8421 1.6374 1.4328 1.2281 1.0234 0.8187 0.6140 0.4094 0.2047 0.1842 0.1637

Tinggi derivat (cm) 3.75 3.38 2.98 2.63 2.23 1.88 1.35 0.98 0.55 0.23 0.18 0.13

107


108

Lampiran 8. Jumlah larutan ekstrak metanol kelopak bunga rosella Yang Terpenetrasi Ke dalam Kulit

Waktu

Rata – rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen donor (%)

Rata – rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen akseptor (%)

1 2 3 4 5 6

56.324 77.2914 77.2914 71.0051 77.2914 60.5172

30.4133 0.0000 60.9895 41.7400 0.0000 0.0000

Rata – rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan dalam kulit (%) 13.263 22.7086 -38.2809 -12.7451 22.7086 39.4828

Contoh perhitungan uji penetrasi jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella secara in vitro Konsentrasi larutan ekstrak metanol kelopak bunga rosella

1. Pada kompartemen donor Konsentrasi awal ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen donor

Waktu = 1 jam Tinggi derivat = 0,08 cm Persamaan kurva baku  y = -0,1886 + 1,9416x Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang sisa pada kulit

2. Pada kompartemen akseptor Waktu = 1 jam Tinggi derivat = 0,08 cm Persamaan kurva baku  y = -0,1886 + 1,9416x Jumlah ekstrak rosella pada kompartemen akseptor

3. Tertahan dalam kulit


109

Lampiran 9. Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam multiemulsi A/M/A yang terpenetrasi ke dalam kulit

Waktu

Rata –rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen donor (%)


1 2 3 4 5 6

24,0977 24,1601 33,5161 23,7534 14,9606 19,1770

15,2552 0,0000 4,9319 0,0000 9,6301 13,0998

Rata – rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan dalam kulit (%) 60,6472 75,8399 61,5520 76,2466 75,4093 67,7273

Contoh perhitungan uji penetrasi jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella secara in vitro 1. Pada kompartemen donor Konsentrasi awal ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam sediaan multiemulsi A/M/A pada kompartemen donor


2. Pada kompartemen akseptor Waktu = 1 jam Tinggi derivat = 0,08 cm Persamaan kurva baku  y = -0,028 + 1,3471x Jumlah ekstrak rosella pada kompartemen akseptor



110

Lampiran 10. Jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam suspensi liposom yang terpenetrasi ke dalam kulit

Waktu

Rata – rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen donor (%)


1 2 3 4 5 6

67,9468 66,4789 60,6075 65,7450 69,4146 39,4264

0,0000 23,2719 13,4194 0,0000 47,3919 31,1983

Rata – rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan dalam (%) 32,0532 10,2492 25,9731 34,2550 -16,8065 29,3753

Contoh perhitungan uji penetrasi jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella secara in vitro Konsentrasi larutan ekstrak metanol kelopak bunga rosella

1. Pada kompartemen donor Konsentrasi awal ekstrak metanol kelopak bunga rosella pada kompartemen donor


2. Pada kompartemen akseptor Waktu = 1 jam Tinggi derivat = 0 cm Persamaan kurva baku  y = -0,1886 + 1,9416x Jumlah ekstrak rosella pada kompartemen akseptor = 0 mg = 0%



111

Lampiran 11. Uji T untuk jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan dalam kulit Populasi

Rata - Rata

Multiemulsi Suspensi liposom

1,3938 -2,71664

Standard (Sb) 1,70129 4,70357

Deviasi Jumlah (n) 18 18

i. uji signifikasi standar deviasi dengan uji F F= F= F hitung

α

F tabel

kesimpulan

7,6436

0,05

2,723

berbeda signifikan

ii. uji t untuk melihat signifikasi rata – rata jumlah ekstrak metanol kelopak bunga rosella yang tertahan dalam kulit antara sediaan multiemulsi dengan suspensi liposom Dari hasil perhitungan uji F diatas dapat dilihat SD antara suspensi liposom dan multiemulsi A/M/A berbeda signifikan, maka degree of freedom untuk uji T dihitung dengan persamaan : Perhitungan degree of freedom (df) =

df =

Perhitungan nilai t : √

√

T hitung

α

T tabel

kesimpulan

3,4866

0,05

2,09

berbeda signifikan


Lampiran 12. Spektrum derivatif kurva baku ekstrak metanol kelopak bunga rosella dalam pelarut aquadest

112


BIOGRAFI PENULIS

Penulis

skripsi

dengan

judul

“Perbandingan

Kemampuan Penetrasi Multiemulsi A/M/A Dan Suspensi Liposom Yang Mengandung Ekstrak metanol kelopak bunga rosella (Hibiscus Sabdariffa L.)”

dengan

nama

lengkap

Yolana

Kwartono,

merupakan putri kedua dari pasangan Yohanes Abeng Kwartono dan Ely Helen. Penulis Lahir di Bengkulu, 09 November 1993. Pendidikan formal yang telah ditempuh penulis yaitu TK Sint Carolus Bengkulu (1997-1999), tingkat Sekolah Dasar di SD Sint Carolus Bengkulu (1999-2005), tingkat Sekolah Menengah Pertama di SMP Sint Carolus Bengkulu (2005-2008), tingkat Sekolah Menengah Atas di SMA Sint Carolus Bengkulu (2008-2011). Pendidikan Informal yang telah ditempuh penulis yaitu Lembaga Kursus dan Pelatihan ―LKP COLOUR MODELS MANAGEMENT – ASMAT Pro‖ (2013-2014). Pada tahun 2011, penulis melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Semasa menempuh pendidikan sarjana, Penulis aktif dalam kegiatan kepanitiaan, seperti menjadi panitia seminar nasional diabetes mellitus 2011, aksi HIV AIDS 2011, pelepasan wisuda 2013, serta menjadi asisten praktikum kimia dasar 2012, kimia analisis 2013, analisa farmasi-validasi metode analisis 2014 – 2015.

113

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents