PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

PENGARUH PEMBERIAN MADU KELENGKENG (Nephelium longata L.) TERHADAP RESPON HIPERSENSITIVITAS TIPE LAMBAT (DELAYED-TYPE HYPERSENSITIVITY/ DTH) PADA TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm) Program Studi Farmasi

Oleh : Chrissa Hygianna NIM : 098114046

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI PENGARUH PEMBERIAN MADU KELENGKENG (Nephelium longata L.) TERHADAP RESPON HIPERSENSITIVITAS TIPE LAMBAT (DELAYED-TYPE HYPERSENSITIVITY/ DTH) PADA TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm) Program Studi Farmasi

Oleh : Chrissa Hygianna NIM : 098114046

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013

i




iv


v


LEMBAR PERSEMBAHAN

Janganlah takut, sebab AKU menyertai engkau, janganlah bimbang, sebab AKU ini ALLAHmu; AKU akan meneguhkan, bahkan akan menolong engkau; AKU akan memegang engkau dengan tangan kanan-KU yang membawa kemenangan (Yesaya 41: 10)

“Tugas kita bukanlah untuk berhasil. Tugas kita adalah untuk mencoba karena di dalam mencoba itulah kita menemukan dan belajar membangun kesempatan untuk berhasil” “Berani lah untuk bermimpi, dan beranikan dirimu untuk mewujudkan semua impian kamu. Karena impian tidak akan tercapai tanpa keberanian” – Mario Teguh –

Karya kecil ini kupersembahkan kepada:

TUHAN YESUS KRISTUS, sebagai wujud syukurku atas penyertaan dan kasih-NYA yang

luar biasa.

PAPAH PENDI, MAMAH WATI, KAKAK IMA, KAKAK VENTI dan ADE CHRIST. Kalianlah

yang memberiku cinta, motivasi, dukungan yang luar biasa dan selalu mendoakanku. Tidak akan ada yang bisa membalas semua jasa kalian.

ADDITYA TERSAYANG, yang membawa kepercayaan dan membuat perubahan terbesar

dalam hidupku.

TEMAN-TEMAN FARMASI USD 2009 dan ALMAMATERKU.

vi


PRAKATA Puji syukur dan terima kasih penulis panjatkan kepada Tuhan Yesus Kristus, atas segala berkat dan anugerah-NYA sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi ini. Skripsi dengan judul “Pengaruh Pemberian Madu Kelengkeng (Nephelium longata L.) Terhadap Respon Hipersensitivitas Tipe Lambat (Delayed-Type Hypersensitivity/ DTH) Pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar” merupakan karya ilmiah penulis untuk memenuhi syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. Dalam proses penyelesaian skripsi ini, banyak kesulitan yang penulis hadapi, namun berkat dukungan, bimbingan, kritik dan saran dari berbagai pihak, penulis dapat menyelesaikannya. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada: 1. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. 2. Ibu CM. Ratna Rini Nastiti, M.Pharm.,Apt., selaku Ketua Program Studi Farmasi sekaligus Ketua Tim Panitia Skripsi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. 3. Ibu Yunita Linawati M.Sc, Apt selaku Dosen Pembimbing atas kebijaksanaan, perhatian, dan kesabarannya dalam membimbing penulis menyelesaikan skripsi ini. 4. Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt. dan dr. Fenty, M.Kes., Sp. PK selaku Dosen Penguji yang telah memberikan saran yang menjadikan penulisan skripsi menjadi lebih baik. 5.

Teknisi LPPT UGM dan Balkes Yogyakarta: Bu Istini dan Bu Atika atas semua bantuan yang telah diberikan.

6.

Teman-teman

seperjuangan

penelitian

yang

selalu

membantu

dan

mengingatkan: Raisa Novitae, Defi Krishartantri, dan Inthari Alselusia. 7. Para sahabat terkasih yang menjadi tempat tawa dan keluh kesah penulis, bersedia membantu serta berbagi suka dan duka: Retno Wahyu Ningsih, Hertarinda, Kak Loveynk, Kak Bangun Indrayana, Kak Ellen Naomi Nauli

vii


Sinaga, Kak Perthy Melati Kasih; Dewi 2’s: Yuningsih Wulan Oei, Ina Juni Natasia, A.A.Istri Yulianty, Realita Rosada; Kelompok seperjuangan praktikum dan tugas kelas: Berta Trifina Mardani, Listya Purbarini, Diah Intan Sari. 8. Teman-teman angkatan 2009, khususnya FKK A dan FSM C 2009. 9. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu, yang telah membantu dalam kelancaran penyelesaian skripsi ini. Penulis menyadari bahwa skripsi ini jauh dari sempurna. Oleh karena itu, segala kritik dan saran yang membangun sangat penulis harapkan demi sempurnanya skripsi ini. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat dan memberikan informasi bagi pembaca.

Penulis

viii


DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL............... ........................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................................ii HALAMAN PENGESAHAN.............................................................................iii PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .............................................................iv HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ......................................................v HALAMAN PERSEMBAHAN .........................................................................vi PRAKATA ..........................................................................................................vii DAFTAR ISI .......................................................................................................ix DAFTAR TABEL ............................................................................................... xii DAFTAR GAMBAR ..........................................................................................xiii DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................... xiv INTISARI............................................................................................................ xv ABSTRACT .......................................................................................................... xvi BAB I. PENGANTAR A. Latar Belakang ............................................................................................. 1 1. Permasalahan ........................................................................................... 4 2. Keaslian penelitian .................................................................................. 4 3. Manfaat penelitian ................................................................................... 6 a. Manfaat teoritis ................................................................................ 6 b. Manfaat praktis ................................................................................. 6 B. Tujuan Penelitian ......................................................................................... 6 1.

Tujuan umum ........................................................................................ 6

2.

Tujuan khusus ....................................................................................... 6

BAB II. PENALAAHAN PUSTAKA A. Madu ............................................................................................................ 7 1. Jenis madu ............................................................................................... 7 2. Komposisi madu ...................................................................................... 8 3. Manfaat madu .......................................................................................... 9 B. Sistem Imun ................................................................................................. 10 ix


1. Sistem imun nonspesifik ......................................................................... 11 2. Sistem imun spesifik ............................................................................... 11 a. Sistem imun spesifik humoral........................................................ 13 b. Sistem imun spesifik selular .......................................................... 13 C. Hipersensitivitas Tipe Lambat ..................................................................... 14 D. Inflamasi ...................................................................................................... 16 E. Imunomodulator ........................................................................................... 17 F. Landasan Teori ............................................................................................. 18 G. Hipotesis ...................................................................................................... 19 BAB III. METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................................... 20 B. Variabel dan Definisi Operasional ............................................................... 21 1. Variabel penelitian .................................................................................. 21 2. Definisi operasional ................................................................................. 21 C. Bahan Penelitian .......................................................................................... 22 D. Alat Penelitian .............................................................................................. 22 E. Tata Cara Penelitian ..................................................................................... 23 1. Pengumpulan sampel ............................................................................... 23 2. Tahap penentuan dosis madu kelengkeng ............................................... 23 3. Penyiapan antigen ................................................................................... 24 4. Tahap pra perlakuan hewan uji ............................................................... 25 5. Tahap orientasi dosis madu kelengkeng.................................................. 25 6. Tahap percobaan ..................................................................................... 26 7. Pengukuran respon hipersensitivitas tipe lambat (Delayed-Type Hypersensitivity/ DTH) ........................................................................... 27 F. Analisis Hasil ............................................................................................... 28 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN A. Identifikasi Senyawa Uji .............................................................................. 29 B. Penyiapan Antigen ....................................................................................... 31 C. Tahap Orientasi Dosis Madu Kelengkeng ................................................... 32

x


D. Pengaruh Pemberian Madu Kelengkeng Dosis 0,60 ml/ 200 g BB; 1,20 ml/ 200 g BB; dan 2,30 ml/ 200 g BB Pada Tahap Percobaan ............ 37 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan .................................................................................................. 42 B. Saran ............................................................................................................ 42 DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 43 LAMPIRAN ........................................................................................................ 46 BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................ 55

xi


DAFTAR TABEL

Tabel I.

Rata-rata ± SD Hasil Selisih Peningkatan Volume Bengkak Kaki sebagai Respon DTH pada Tahap Orientasi ....................................... 35

Tabel II.

Rata-rata ± SD Hasil Selisih Peningkatan Volume Bengkak Kaki sebagai Respon DTH Terhadap Pengaruh Pemberian Madu Kelengkeng .........................................................................................38

xii


DAFTAR GAMBAR Gambar 1.

Gambaran Umum Sistem Imun .......................................................... 11

Gambar 2.

Reaksi Hipersensitivitas Tipe I, II, III, dan IV Menurut Gell dan Coombs ............................................................................................... 15

Gambar 3.

Grafik Rata-rata±SD Hasil Selisih Peningkatan Volume Bengkak Kaki sebagai Respon DTH pada Tahap Orientasi .............................. 36

Gambar 4.

Grafik Rata-rata ±SD Hasil Selisih Peningkatan Volume Bengkak Kaki sebagai Respon DTH Terhadap Pengaruh Pemberian Madu Kelengkeng .........................................................................................38

xiii


DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Surat Kelaikan Etik ................................................................................ 47 Lampiran 2. Surat Keterangan Ijin Penelitian/ Penggunaan Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma ..................................................... 48 Lampiran 3. Surat Keterangan Ijin Penelitian/ Penggunaan Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu Universitas Gadjah Mada .............. 49 Lampiran 4. Foto Madu Kelengkeng PT. Madu Pramuka ......................................... 50 Lampiran 5. Foto Pengujian Identifikasi Madu Kelengkeng ..................................... 50 Lampiran 6. Foto Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah (SDMD) 1% .................... 51 Lampiran 7. Perhitungan Dosis Madu Kelengkeng Tahap Orientasi Dosis dan Percobaan ....................................................................................... 52 Lampiran 8. Pengujian Statistik Respon DTH Tahap Orientasi ................................ 53 Lampiran 9. Pengujian Statistik Respon DTH Tahap Percobaan .............................. 54

xiv


INTISARI Sistem imun tubuh memberikan respon ketika mengenali molekul asing (antigen) terpajan. Aktivitas ini untuk mengeliminasi antigen, namun dapat menimbulkan kerusakan jaringan yang disebut respon hipersensitivitas tipe lambat/ Delayed-Type Hypersensitivity (DTH). Banyak bahan alam yang mampu mempengaruhi sistem imun (imunomodulator), salah satunya madu. Madu memiliki banyak jenis, diantaranya madu kelengkeng. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh pemberian madu kelengkeng terhadap respon DTH pada tikus putih jantan galur Wistar. Rancangan penelitian yang digunakan adalah eksperimental murni rancangan acak pola searah. Sebanyak 20 ekor tikus dibagi menjadi 4 kelompok, 1 kelompok kontrol negatif dan 3 kelompok perlakuan dengan pemberian madu kelengkeng dosis 0,60;1,20;2,30ml/200gBB secara per-oral selama 8 hari. Tikus diinjeksi pada hari ke-0 dengan antigen (suspensi Sel Darah Merah Domba(SDMD) 1%) secara peritoneal dan pada hari ke-8 secara subkutan di kaki tikus dengan sebelumnya mengukur bengkak kaki dengan jangka sorong digital sebagai data Pre-DTH dan setelah 24 jam antigen II dinjeksikan, diukur lagi sebagai data Post-DTH dan selisih dari keduanya digunakan dalam mengukur respon DTH. Data dievaluasi dengan metode Kolmogorov-Smirnov, dilanjutkan dengan uji one way ANOVA, jika terdapat perbedaan bermakna (p<0,05) lanjutkan dengan uji Tukey. Hasil penelitian menunjukkan pemberian madu kelengkeng tidak memiliki pengaruh berupa peningkatan respon hipersensitivitas tipe lambat (Delayed-Type Hypersensitivity/DTH) pada tikus putih jantan galur Wistar. Kata kunci : Madu kelengkeng, imunomodulator, respon DTH

xv


ABSTRACT The body's immune system to respond when it recognizes foreign molecules (antigens) exposed. This activity is to eliminate the antigen, but can cause tissue damage called Delayed-Type Hypersensitivity response (DTH). Many natural ingredients that can affect the immune system (immunomodulators), one honey. Honey has many types, such as longan honey. The purpose of this study to determine the effect of longan honey on the DTH response in Wistar white male rats. The research design used was a randomized experimental design purely unidirectional pattern. A total of 20 mice were divided into 4 groups, 1 negative control group and 3 treatment groups by administering a dose of longan honey 0,60;1.20; 2.30 ml/200gBB per-orally for 8 days. Mice injected on day 0 with antigen (suspension Sheep Red Blood Cells (SRBC) 1%) in peritoneal and on day 8 mice subcutaneously in the leg with a swollen foot with a previous measure digital calipers as the data pre-DTH and after 24 hours since the injected antigen II, again measured as DTH and Data Post-difference of the two is used in measuring the DTH response. Data were evaluated with the Kolmogorov-Smirnov method, followed by one-way ANOVA test, if there is a significant difference (p <0.05) proceed with the Tukey test. The results showed longan honey treatment has no effect in the form of an increase in Delayed-Type Hipersensitivity/ DTH in Wistar white male rats. Keywords: Honey Longan, immunomodulatory, DTH response

xvi


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Tubuh manusia memiliki sistem imun yang memberikan respon dan melindungi tubuh terhadap unsur - unsur patogen. Respon imun sangat tergantung pada kemampuan sistem imun untuk mengenali molekul asing (antigen) yang terdapat pada patogen potensial dan kemudian membangkitkan reaksi yang tepat untuk menyingkirkan sumber antigen bersangkutan (Kresno, 2010). Antigen yang terpajan pertama kali dalam tubuh segera dikenal oleh sistem imun dan menimbulkan sensitasi, yaitu ketika sistem imun dibangkitkan maka akan mempunyai memori atau daya ingat dan akan melakukan respon yang lebih spesifik serta lebih aktif jika antigen tersebut masuk ke dalam tubuh untuk kedua kalinya (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Sistem imun tubuh akan mengaktivasi sel efektor yang diperantarai oleh sel T sebagai respon antigen yang masuk. Sel T yang teraktivasi akan menghasilkan IFN-γ (Interferon) yang selanjutnya mengaktivasi makrofag dan kemudian akan menghasilkan sitokin yang dapat merangsang terjadinya reaksi inflamasi ke tempat yang terpajan. Aktivasi ini dimaksudkan untuk melokalisir dan mengeliminasi patogen, namun dapat menimbulkan kerusakan jaringan, dan reaksi ini dinamakan hipersensitifitas tipe lambat atau Delayed-Type Hypersensitivity (DTH). Gejalanya baru tampak sesudah 24 jam kontak dengan antigen kedua (Abbas, Litchman, dan Pillai, 2010). Reaksi DTH adalah salah satu jenis dari reaksi hipersensitivitas yang merupakan peningkatan reaktivitas atau sensitivitas terhadap antigen yang pernah dipejankan

1


2

sebelumnya. Walaupun demikian, komponen sistem imun yang bekerja pada proteksi sistem imun adalah sama dengan yang menimbulkan reaksi hipersentitivitas (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Karena alasan inilah respon DTH dapat digunakan untuk mengetahui teraktivasinya sel T yang terlibat di respon imun spesifik dalam mengeliminasi patogen antigen dan sebagai salah satu indikator terjadinya respon imun seluler. Hal ini dipertegas pada pernyataan Ballal, Bhat, Sumalatha dan Acharya (2012) yang menyatakan respon DTH banyak digunakan sebagai salah satu parameter untuk mengukur respon cell mediated immune pada hewan. Sistem imun tubuh mampu membangkitkan respon imun yang tepat bila dipacu oleh suatu senyawa yang dapat mempengaruhinya, hal ini digolongkan sebagai imunomodulator (Sari, 2008). Imunomodulator merupakan senyawa yang mampu menormalkan kembali sistem kekebalan pada keadaan tertentu dimana tubuh tidak berhasil menormalkan sistem kekebalannya (Abbas, Litchman, dan Pillai, 2010). Imunomodulator dapat berasal dari senyawa alam dan salah satu produk alam yang bermanfaat sebagai imunomodulator adalah madu (Mangan, 2009). Madu adalah cairan manis yang berasal dari nektar tanaman yang diproses oleh lebah dan tersimpan dalam sel-sel sarang lebah (Suranto, 2007). Menurut Tonks, dkk. (2007), berbagai jenis madu dapat merangsang sel manusia untuk menghasilkan sitokin inflamasi (misalnya TNF-α), yang merupakan parameter untuk mengukur peningkatan respon DTH. Madu memiliki banyak ragam dan jenis, sesuai dengan bunga yang menjadi sumbernya, salah satunya madu monoflora. Madu monoflora merupakan


3

madu yang berasal dari satu tumbuhan utama, contohnya adalah madu kelengkeng. Dari survey pasaran yang dilakukan peneliti, masyarakat menyukai madu kelengkeng karena rasanya lebih manis dan legit, selain itu salah satu khasiat madu kelengkeng yang diketahui adalah meningkatkan daya tahan tubuh (Aden, 2010) sehingga dipilihlah madu kelengkeng sebagai senyawa yang ingin diuji peneliti. Madu sendiri mengandung beberapa senyawa organik yang kemungkinan berperan dalam sistem imun, salah satunya flavonoid. Penelitian Siddiqa (2008) menunjukkan bahwa ditemukan flavonoid di dalam kandungan madu kelengkeng dan menurut Kusmardi, Kumala, dan Triana (cit., Kasih, 2012), flavonoid dalam tubuh manusia berfungsi sebagai antioksidan untuk melindungi sel. Penelitian yang diacu Saifulhaq (cit. Senas, 2012) membuktikan bahwa senyawa antioksidan yaitu flavonoid dapat dipercaya sebagai imunomodulator karena dapat meningkatkan sistem kekebalan tubuh. Oleh karena itu, diduga flavonoid dari madu kelengkeng inilah yang mungkin nantinya akan mempengaruhi sistem imun dan peningkatan terhadap respon DTH nantinya dapat mengindikasikan bahwa bahan alam yang digunakan peneliti ini, yaitu madu kelengkeng, memiliki efek stimulan terhadap limfosit dan berbagai sel-sel lain yang berperan menimbulkan respon tersebut (Singh, CPS, dan Noolvi, 2012). Mengingat sejauh ini belum banyak publikasi yang menyebutkan tentang pengaruh pemberian madu kelengkeng dengan melihat respon DTH di Indonesia, maka dipandang perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui pengaruh pemberian madu kelengkeng (Nephelium longata L.) pada sistem imun dengan melihat respon DTH yang ditunjukkan dengan peningkatan volume bengkak kaki


4

kiri tikus putih jantan galur Wistar setelah diinduksi dengan antigen dan diukur menggunakan plethysmometrically atau jangka sorong digital berdasarkan metode Puri, dkk. (cit. Chakraborthy, 2009), sehingga dapat diperoleh informasi mengenai pengaruh penggunaan madu kelengkeng yang banyak digunakan oleh masyarakat. 1. Permasalahan Apakah pemberian madu kelengkeng (Nephelium longata L.) memiliki pengaruh berupa peningkatan respon hipersensitivitas tipe lambat (Delayed-Type Hipersensitivity/DTH) pada tikus putih jantan galur Wistar? 2. Keaslian penelitian Sejauh yang diketahui peneliti dan penelusuran pustaka yang sudah dilakukan, penelitian yang telah ada sebelumnya yaitu: a. Aktivitas Antiradikal Bebas serta Kadar Beta Karoten pada Madu Randu (Ceiba pentandra) dan Madu Kelengkeng (Nephelium longata L.), diperoleh bahwa pada aktivitas antiradikal bebas pada madu kelengkeng lebih besar yaitu 82,10% dibandingkan dengan madu randu yaitu 69,37% (Parwata, Ratnayani, dan Listya, 2010). b. Penelitian tentang Aktivitas Imunomodulator Ekstrak Air dari Heracleum persicum Desf. pada Mencit, diperoleh bahwa respon DTH mengalami peningkatan pada dosis maksimum dan senyawa yang berperan adalah furanokumarin,

flavonoid

dan

beberapa

alkaloid

(Sharififar,

Pournourmohammadi, Arabnejad, Rastegarianzadeh, Ranjbaran, and Purhemmaty, 2009).


5

c. Penelitian mengenai Evaluasi Aktivitas Imunomodulator Antosianin dari Dua Formula dari Brassica oleracea, diperoleh bahwa efek imunostimulan yang diuji selama delapan hari dimediasi oleh aktivasi sel T dan B, peningkatan jumlah sel darah putih dan peningkatan fagositosis (Gomathi, Prameela, Kumar, Dan Rajendra, 2012). d.

Penelitian mengenai Aktivitas Imunomodulator dari Fraksi Gentiana Olivieri Griseb. pada Mencit Balb/C, diperoleh bahwa efek meningkatkan pada tanamanin ini aktif melalui imunitas selular (respon DTH dan fagositosis) dan humoral (titer antibodi hemoglutinasi) (Singh, CPS, Noolvi, 2012).

e.

Penelitian mengenai Evaluasi Aktivitas Imunomodulator dari Aesculus indica, diperoleh bahwa tanaman ini berpotensi pada imunitas selular dengan memfasilitasi respon hipersensititas tipe lambat pada peningkatan volume kaki dan tidak berefek pada imunitas humoral (Chakraborthy, 2009). Dengan demikian, dapat dipastikan bahwa penelitian mengenai “Pengaruh

Pemberian Madu Kelengkeng (Nephelium longata L.) Terhadap Respon Hipersensitivitas Tipe Lambat (Delayed-Type Hypersensitivy/ DTH) Pada Tikus Jantan Putih Galur Wistar” belum pernah dilakukan sebelumnya.


6

3. Manfaat penelitian a. Manfaat Teoretis. Memberikan sumbangan ilmiah bagi ilmu pengetahuan, khususnya mengenai manfaat madu kelengkeng sebagai immunomodulator untuk kesehatan. b. Manfaat Praktis. Memberikan informasi dan menambah wawasan bagi masyarakat mengenai manfaat madu kelengkeng sebagai salah satu cara untuk meningkatkan kesehatan.

B. Tujuan penelitian 1. Tujuan umum Memperoleh informasi mengenai pengaruh pemberian madu kelengkeng (Nephelium longata L.) pada tikus jantan putih galur Wistar. 2. Tujuan khusus Memperoleh informasi mengenai pengaruh pemberian madu kelengkeng (Nephelium longata L.) berupa peningkatan respon Hipersensitivitas Tipe Lambat (Delayed-Type Hypersensitivy/ DTH) pada tikus jantan putih galur Wistar.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Madu Produk lebah sangat bermanfaat untuk meningkatkan daya tahan dan kekebalan tubuh (imunomodulator) (Mangan, 2009). Madu adalah cairan manis yang berasal nektar tanaman yang diproses oleh lebah dan tersimpan dalam sel-sel sarang lebah (Hariyati, 2010). Berbagai kelebihan madu sebagai makanan bernutrient tinggi sudah diketahui sejak zaman dahulu (Parwata dan Ratnayani, 2010). 1. Jenis madu Madu memiliki banyak ragam dan jenis, sesuai dengan bunga yang menjadi sumbernya. Lebah terkadang mengumpulkan cairan bunga dari ribuan kuntum bunga yang jenisnya berbeda-beda, namun madu monoflora merupakan madu yang diperoleh dari satu tumbuhan utama, seperti madu kelengkeng, madu rambutan, dan madu randu, sedangkan madu poliflora adalah madu yang berasal dari nektar berbagai jenis tumbuhan bunga, contoh dari madu ini adalah madu hutan (Aden, 2010). Madu monoflora mempunyai wangi, warna dan rasa yang spesifik sesuai dengan sumbernya (Hariyati, 2010). Madu kelengkeng diproduksi secara kontinyu di Indonesia (Asih dan Ratnayani, 2012). Madu bunga kelengkeng berkhasiat: meningkatkan daya tahan tubuh, memperlancar urine atau berkemih, memperkuat fungsi ginjal, mengobati sakit pinggang, mempercepat penyembuhan luka operasi, memperlancar fungsi otak, mengobati luka bakar (diolesi pada bagian yang luka) (Aden, 2010).

7


8

2. Komposisi madu Madu merupakan sumber makanan utama, mengandung berbagai jenis gula, seperti fruktorsa dan glukosa serta berbagai jenis mineral, seperti magnesium, potasium, kalsium, klorid, sodium, belerang, zat besi, dan juga fosfor. Kejernihan madu tergantung pada komposi kadar nektar dan putik yang dikandungnya (Sulaiman, 2010). Selain itu, mengandung pula vitamin A, B 1 , B 2 , B 3 , B 5 , B 6 , C, D, E, K, beta karoten, flavonoid, asam fenolik, asam urat dan asam nikotinat. Mineralnya diperlukan tubuh agar tetap segar, vitaminnya berperan dalam metabolisme protein dan mencegah penyakit kulit seperti eksim dan herpes. Kandungan fruktosa madu berperan dalam mempercepat proses oksidasi alkohol pada hati, sehingga dapat membantu menanggulangi kerusakan hati pada peminum minuman beralkohol (Parwata dan Ratnayani, 2010). Beberapa senyawa organik yang telah terindentifikasi di dalam madu antara lain seperti polifenol, flavonoid, dan glikosida. Madu juga mengandung berbagai jenis enzim, antara lain enzim glukosa oksidase dan enzim invertase (Aljady, Kamaruddin, Jamal, dan Yassim, 2000). Menurut Kusmardi, Kumala, dan Triana (cit., Kasih, 2012), flavonoid dalam tubuh manusia berfungsi sebagai antioksidan untuk mencegah kanker dan melindungi sel. Hal inilah yang menyebabkan flavonoid sebagai zat yang sangat kuat menetralisir radikal bebas, mendukung sistem kekebalan tubuh alami manusia pada tingkat seluler dan membantu regenerasi sel. Berdasarkan penelitian Siddiqa (2008), madu kelengkeng memiliki pH 4,48; kadar gula 35,36%; kadar air sebesar 17%, mengandung flavonoid dan asam butirat.


9

Madu juga mengandung dekstrosa (gula yang ditemukan dalam tumbuhan), lilin, gen pembiakan, dan asam formik (Hariyati, 2010). Jenis gula yang dominan dalam hampir semua madu adalah levulosa dan hanya sebagian kecil madu yang kandungan dekstrosanya lebih tinggi dari levulosa, yaitu mencakup 85 – 90 persen dari karbohidrat yang terdapat dalam madu dan sebagian kecil oligosakharida dan polisakarida (Sihombing, 2005). Kadar gula yang tinggi inilah yang memberikan rasa manis pada madu (Sulaiman, 2010). 3. Manfaat madu Madu memiliki berbagai manfaat yang telah diketahui manusia sejak dahulu. Madu telah menjadi makanan yang istimewa bagi setiap orang di sepanjang masa (Hamad, 2007). Madu bermanfaat sebagai makanan kesehatan yang dapat meningkatkan stamina tubuh sebagai energi seketika. Selain itu, madu juga dapat digunakan sebagai pengganti gula atau suplementasi nutrisi (Hariyati, 2010). Madu merupakan obat terbaik karena ia adalah sumber nutrisi alami yang memiliki dekstrosa dan tidak seperti umumnya obat yang menyebabkan efek samping berbahaya (Sulaiman, 2010). Riset-riset ilmiah mengisyaratkan bahwa khasiat-khasiat secara fisika dan kimia madu (seperti kadar asam dan efek-efek osmosis) memainkan peranan penting dalam keefektifannya membunuh kuman. Di samping itu madu juga memiliki khasiat anti-infeksi dan mendorong respon - respon sistem imun di dalam luka. Khasiat madu yang mengandung antiinfeksi dapat meringankan rasa sakit luka dengan cepat, sebagaimana ia juga dapat mengurangi penumpukan cairan yang terdapat di sekitar luka dan keluarnya


10

cairan dari luka (exudates) serta mengurangi munculnya bekas sesudah luka itu sembuh (Al-‘Id, 2010). Konsumsi madu untuk pencegahan penyakit pada manusia adalah 1-2 kali/hari satu sendok makan, sedangkan untuk menyembuhkan suatu penyakit, dianjurkan untuk minum lebih banyak, yaitu 3-4 kali/hari satu sendok makan (Suranto, 2007).

B. Sistem Imun Sistem imun merupakan suatu bentuk pertahanan tubuh melawan infeksi menular dari mikroba maupun zat asing yang mampu memicu respon imun atau respon kekebalan tubuh. Respon imun merupakan reaksi terhadap komponen mikroba serta makromolekul atau bahan kimia kecil lainnya yang dianggap suatu benda asing oleh tubuh (Abbas, Litchman, dan Pillai, 2010). Imunitas adalah resistensi terhadap penyakit terutama infeksi. Gabungan sel, molekul dan jaringan yang berperan dalam resistensi terhadap infeksi disebut sistem imun. Reaksi yang dikoordinasi sel-sel molekul-molekul dan bahan lainnya terhadap mikroba disebut respon imun (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Bila sistem imun terpapar pada zat yang dianggap asing, maka ada dua jenis respon imun yang mungkin terjadi, yaitu: 1) respon imun nonspesifik dan 2) respon imun spesifik (Kresno, 2010).


11

Gambar 1. Gambaran Umum Sistem Imun (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010)

1. Sistem imun nonspesifik (innate immune system) Imunitas nonspesifik berupa komponen normal tubuh, selalu ditemukan pada individu sehat dan siap mencegah mikroba masuk tubuh dan dengan cepat menyingkirkannya. Disebut nonspesifik karena tidak ditujukan terhadap mikroba tertentu, telah ada dan siap berfungsi sejak lahir. Mekanismenya tidak menunjukkan spesifisitas terhadap benda asing dan mampu melindungi tubuh terhadap banyak patogen potensial. Sistem tersebut merupakan pertahanan terdepan dalam menghadapi serangan berbagai mikroba dan dapat memberikan respon langsung (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). 2. Sistem imun spesifik (adaptive immune system) Berbeda dengan sistem imun nonspesifik, sistem imun spesifik mempunyai kemampuan untuk mengenal benda yang dianggap asing bagi dirinya. Benda asing yang pertama kali terpajan dengan tubuh segera dikenal oleh sistem imun spesifik dan menimbulkan sensitasi, sehingga ketika antigen yang sama


12

dipajankan kedua kalinya maka akan dikenal lebih cepat dan kemudian dihancurkan (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Sistem

kekebalan

tubuh

menghadapi

berbagai

tantangan

untuk

menghasilkan tanggapan pelindung efektif terhadap infeksi patogen. Respon imun adaptive (spesifik) dibagi ke dalam tiga fase yaitu pengenalan antigen, aktivasi limfosit, dan fase efektor. Pertama, sistem harus mampu merespon sejumlah kecil antigen yang berbeda yang dapat diperkenalkan pada setiap jaringan dalam tubuh. Pengenalan antigen diikuti dengan dua respon imun spesifik yang utama yaitu imunotas humoral dan seluler. Sel T bertanggung jawab terhadap imunitas seluler, sedangkan sel B bertanggung jawab terhadap imunitas humoral (Putri, 2012). Kedua, limfosit akan teraktivasi dan mengenali serta menanggapi antigen yang masuk. Ketiga, mekanisme efektor sistem kekebalan tubuh (antibodi dan sel T efektor) akan menemukan dan menghancurkan antigen di lokasi yang jauh dari tempat infeksi awal. Sel limfosit T memiliki spesifikasi terhadap antigen. Sel ini mengenali peptida dari protein asing yang berikatan dengan protein inang yang disebut molekul MHC kemudian diekspresikan pada permukaannya. Sel T mengenali dan memberikan respon terhadap sel permukaan dan bukan antigen yg terlarut (Abbas, Litchman, dan Pillai, 2010). Sel T diklasifikasikan menjadi sel CD 4 dan CD 8 . CD 4 akan mengenali antigen spesifik dan berasosiasi dengan molekul MHC kelas II, CD 8 mengenali antigen yang bergabung dengan molekul MHC kelas I. Berdasarkan sitokin yang diproduksinya, sel CD 4 terbagi menjadi dua subset fungsional yaitu Th 2 yg membantu sel B dalam memproduksi antibodi


13

dan sel Th 1 yang berperan dalam respon inflamasi terhadap benda asing (Putri, 2012). Sistem imum spesifik terdiri atas sistem humoral dan sistem selular (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). a. Sistem imun spesifik humoral Pemeran utama dalam sistem imun spesifik humoral adalah limposit B atau sel B. Humor berarti cairan tubuh. Sel B berasal dari sel asal multipoten di sumsum tulang (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Sel B yang dirangsang oleh benda asing akan berproliferasi, berdiferensiasi dan berkembang menjadi sel plasma yang memproduksi antibodi. Antibodi yang dilepas dapat ditemukan dalam serum. Fungsi utama antibodi ialah pertahanan terhadap infeksi ekstraselular, virus dan bakteri serta menetralkan toksinnya (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). b. Sistem imun spesifik selular Pemeran utamanya adalah limfosit T atau sel T. Sel ini juga berasal dari sel yang sama seperti sel B. Fungsi utama sistem imun spesifik selular ialah pertahanan terhadap bakteri yang intraselular, virus, jamur, parasit dan keganasan. Berbeda dengan sel B, sel T terdiri atas beberapa subset sel dengan fungsi yang berlainan yaitu sel CD 4+ (Th 1 , Th 2 ), CD 8+ atau CTL atau Tc dan Ts atau sel Tr atau TH 3 . Sel CD 4+ mengaktifkan sel Th 1 yang selanjutnya mengaktifkan makrofag untuk menghancurkan mikroba. Sel CD 8+ memusnahkan sel terinfeksi (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010).


14

C. Hipersensitivitas Tipe Lambat Respon imun, baik nonspesifik maupun spesifik pada umumnya menguntungkan bagi tubuh, biasanya berfungsi sebagai protektif terhadap infeksi atau pertumbuhan kanker, tetapi dapat pula menimbulkan hal yang tidak menguntungkan bagi tubuh, berupa penyakit yang disebut reaksi hipersensitivitas. Komponen sistem imun yang bekerja pada proteksi adalah sama dengan yang menimbulkan reaksi hipersentitivitas. Hipersensitivitas adalah peningkatan reaktivitas atau sensitivitas terhadap antigen yang pernah dipajankan atau dikenal sebelumnya (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Reaksi hipersensitivitas oleh Robert Coombs dan Philip HH Gel (1963) dibagi dalam empat tipe reaksi dan hipersensitivitas tipe lambat atau DelayedType Hypersensitivity/DTH termasuk hipersensitivitas tipe IV (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Reaksi tipe IV berbeda dengan ketiga reaksi lainnya karena reaksi ini tidak melibatkan antibodi tetapi melibatkan sel-sel dari limfosit T (Kresno, 2010). Dalam mekanisme yang diaktivasi sel T, respon DTH termasuk hipersensitivitas tipe IV A karena CD 4+ sel T merespon antigen yang masuk dengan menghasilkan sitokin yang dapat menstimulasi terjadinya inflamasi dan mengaktifkan fagositosis, yang menyebabkan kerusakan jaringan (Abbas, Litchman, dan Pillai, 2010).


15

Gambar 2. Reaksi Hipersensitivitas Tipe I, II, III, dan IV menurut Gell dan Coombs (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010)

Reaksi khas DTH mempunyai dua fase yang dapat dibedakan yaitu fase sensitasi dan fase efektor. Pada fase sensitasi sel T diaktifkan oleh APC (AntigenPresenting Cell) melalui MHC-II dan membutuhkan 1-2 minggu setelah kontak primer dengan antigen. Berbagai APC seperti sel Langerhans dan makrofag akan menangkap antigen dan membawanya ke kelenjar limfoid untuk dipresentasikan ke sel T. Sel T yang aktif, umumnya CD 4+ terutama Th1. Pajanan berulang dengan antigen ini dapat menginduksi sel efektor. Pada fase efektor, sel Th 1 melepas berbagai sitokin (IFN-γ dan TNF) yang mengerahkan dan mengaktifkan makrofag dan sel inflamasi lainnya ke tempat infeksi. Fungsi dari produk-produk tersebut adalah sebagai mediator inflamasi (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Reaksi DTH dapat terjadi sebagai kerusakan tambahan selama proses dari respon perlindungan sel Th 1 terhadap benda asing dapat dideteksi sekitar 18 jam setelah


16

injeksi antigen dan maksimal pada 24 sampai 48 jam (Abbas, Lichtman, and Pillai, 2010). D. Inflamasi Reaksi radang atau inflamasi adalah reaksi tubuh terhadap infeksi, antigen lain atau kerusakan jaringan (Wahab dan Julia, 2002). Reaksi inflamasi termasuk dalam karakteristik reaksi DTH. TNF dan IL1 yang merupakan sitokin dari sel Th 1 yang biasanya berperan pada peristiwa ini (Murphy et aL., 2008; Abbas, Litchman, dan Pillai, 2010; Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Pada inflamasi terjadi peningkatan aliran darah karena vasodilatasi di tempat terjadinya infeksi atau kerusakan jaringan sehingga pembuluh kapiler menjadi permeabel dan membuat cairan dapat keluar dari pembuluh kapiler ke jaringan dan bergerak ke tepat sasaran akibat khemotaksis tadi. Akibat proses di atas maka gambaran klinis dari inflamasi adalah: kemerahan (rubor), panas (kalor), pembengkakan (tumor) dan rasa sakit (dolor) (Kresno, 2010) dan functio laesa (kehilangan fungsi) (Pratiwi, 2011). Setelah terjadi cedera jaringan, ditemukan vasodilatasi yang menghasilkan peningkatan volume darah di jaringan tempat terkena sehingga menimbulkan perdarahan. Permeabilitas vaskular yang meningkat menimbulkan kebocoran cairan pembuluh darah yang menimbulkan edema (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Proses inflamasi diperlukan sebagai pertahanan pejamu terhadap mikroorganisme yang masuk tubuh serta penyembuhan luka yang membutuhkan komponen selular untuk membersihkan debris lokasi cedera serta meningkatkan


17

perbaikan jaringan. Reaksi inflamasi dapat berhenti sendiri atau responsif terhadap terapi (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010).

E. Imunomodulator Imunomodulator merupakan senyawa yang mampu mempengaruhi sistem imun atau sistem kekebalan tubuh. Berdasarkan efek yang ditimbulkannya, imunomodulator terbagi menjadi imunostimulan dan imunosupresan (Sari, 2008). Imunostimulasi atau imunopotensiasi adalah cara memperbaiki fungsi sistem imun dengan menggunakan imunostimulan, yaitu bahan yang merangsang imun (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Imunostimulan dikategorikan dalam dua bagian, yaitu imunostimulan spesifik dan imunostimulan nonspesifik. Imunostimulan spesifik adalah suatu bahan yang bersifat antigenik spesifik dalam memberikan respon imun, seperti vaksin dan beberapa antigen, sedangkan imunostimulan nonspesifik adalah zat yang beraksi tidak hanya pada satu antigenik spesifik untuk menambah respon imun dari antigen lain atau dapat meningkatkan komponen dari sistem imun tanpa sifat antigenik spesifik, seperti adjuvan (Sari, 2008). Imunosupresi adalah suatu tindakan untuk menekan respons imun dengan imunosupresan. Bahan obat yang mengandung imunosupresi digunakan pada pasien yang akan menjalani transplantasi dan penyakit autoimun karena kemampuannya dalam menekan respon imun (Baratawidjaja dan Rengganis, 2010). Sangat berguna dalam klinik terutama pada translpantasi dalam usaha mencegah reaksi penolakan dan pada berbagai penyakit inflamasi yang


18

menimbulkan kerusakan atau gejala sistemik, seperti autoimun dan autoinflamasi. Pengaruh senyawa tertentu untuk menaikkan maupun menekan respon imun dapat tergantung pada dosis, rute pemberian atau waktu pemberian. Tipe aktivitas dari senyawa-senyawa tersebut tergantung pula pada mekanisme aksi ataupun tempat aksinya (Bellanti, 1993).

F. Landasan Teori Madu kelengkeng adalah madu jenis monoflora, yang diperoleh dari satu tumbuhan utama saja. Produk alam dari lebah ini sangat bermanfaat untuk meningkatkan daya tahan dan kekebalan tubuh (imunomodulator). Madu sendiri mengandung berbagai senyawa organik dan senyawa yang diduga dapat meningkatkan sistem imun adalah flavonoid. Flavonoid bersifat antioksidan, yang di dalam tubuh manusia menjadi zat yang sangat kuat untuk mendukung sistem kekebalan tubuh alami manusia pada tingkat seluler, oleh karena itu diduga flavonoid dari madu kelengkeng inilah yang nantinya akan mempengaruhi sistem imun. Bila ada antigen yang masuk, sistem imun tubuh akan mengaktivasi sel efektor yang diperantarai oleh sel T, sel T melepas berbagai sitokin yang mengerahkan dan mengaktifkan makrofag dan sel inflamasi lainnya ke tempat infeksi. Inflamasi ini bertujuan untuk memusatkan agen pertahanan tubuh ke lokasi yang terinfeksi dan mengeliminasi antigen tersebut, namun di sisi lain dapat menimbulkan kerusakan jaringan, dan reaksi ini dinamakan hipersensitifitas tipe lambat atau Delayed-Type Hypersensitivity (DTH). Peningkatan terhadap respon DTH nantinya dapat mengindikasikan bahwa bahan alam yang digunakan peneliti,


19

yaitu madu kelengkeng, memiliki efek stimulan terhadap limfosit dan berbagai sel-sel lain yang berperan menimbulkan respon tersebut, khususnya respon hipersensitivitas tipe lambat yang menimbulkan inflamasi.

G. Hipotesis Pemberian madu kelengkeng (Nephelium longata L.) memiliki pengaruh berupa

peningkatan

respon

hipersensitivitas

tipe

lambat

Hipersensitivity/DTH) pada tikus putih jantan galur Wistar.

(Delayed-Type


BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Jenis penelitian ini adalah eksperimental murni dengan rancangan acak pola searah. Eksperimental murni adalah penelitian dengan memberikan percobaan terhadap kelompok perlakuan dan dibandingkan dengan kelompok kontrol yang tidak dikenai perlakuan. Rancangan acak merupakan cara menetapkan sampel yang digunakan dalam penelitian dengan pengacakan agar setiap sampel memperoleh kesempatan yang sama untuk dapat masuk ke dalam kelompok perlakuan dan kelompok kontrol. Pola searah ditunjukkan dengan diberikannya perlakuan yang sama pada kelompok perlakuan, yaitu pemberian larutan madu kelengkeng. Penelitian ini menggunakan subjek uji tikus putih jantan galur Wistar yang diperoleh dari Laboratorium Imono Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Kriteria inklusi yaitu tikus putih jantan, berat badan lebih kurang 200-300g, berumur 2-3 bulan, sehat, bergalur Wistar. Kriteria eksklusi adalah tikus mati selama perlakuan. Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakologi-Toksikologi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

20


21

B. Variabel dan Definisi Operasional A. Variabel penelitian a. Variabel utama 1) Variabel bebas

: dosis madu kelengkeng

2) Variabel tergantung

: peningkatan volume bengkak pada telapak kaki kiri tikus

b. Variabel pengacau 1) Variabel yang dikendalikan

: jenis makanan, variasi genetik, jenis kelamin, berat badan, umur dan galur tikus.

2) Variabel yang tidak terkendali

: kondisi psikologis dan patofisiologis tikus

B. Definisi operasional a. Madu kelengkeng. Madu kelengkeng (Nephelium longata L.) atau madu monoflora merupakan madu yang diperoleh dari satu tumbuhan utama. b. Hipersensitivitas tipe lambat. Hipersensitivitas adalah peningkatan reaktivitas atau sensitivitas terhadap antigen yang pernah dipejankan atau dikenal sebelumnya. Reaksi lambat terlihat sampai sekitar 48 jam setelah terjadi pajanan dengan antigen yang terjadi oleh aktivasi sel Th. Pada DTH, sitokin yang dilepas sel T mengaktifkan sel efektor makrofag yang menimbulkan kerusakan jaringan dan menyebabkan inflamasi. c. Inflamasi. Inflamasi didefinisikan sebagai reaksi lokal jaringan terhadap infeksi atau cedera dan reaksi inflamasi termasuk dalam karakteristik


22

reaksi DTH. Inflamasi merupakan respons fisiologis terhadap berbagai rangsangan seperti infeksi dan cedera jaringan.

C. Bahan Penelitian 1. Madu kelengkeng (Nephelium longata L.) Madu yang digunakan adalah madu kelengkeng yang diperoleh dari salah satu distributor madu di Yogyakarta, yaitu PT. Madu Pramuka. 2. Hewan uji Tikus putih jantan galur Wistar umur 2-3 bulan berat 200-300 g yang diperoleh dari Laboratorium Imono Hayati Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 3. Antigen Sel Darah Merah Domba (SDMD) sebagai antigen yang dibuat dalam bentuk suspensi dengan konsentrasi 1% dengan pelarut Phosphate Buffer Saline (PBS) steril pH 7,2. 4. Bahan uji respon Delayed-Type Hypersensitivity (DTH) Suspensi SDMD 1% sebagai antigen.

D. Alat penelitian Alat yang digunakan dari preparasi sampel sampai pengujian respon Delayed-Type Hypersensitivity (DTH) adalah gelas beker, mikropipet (Gilson), pipet ukur, effendorf tube, Laminar Air Flow (Nuraire), sentrifuge (Primo R), tabung sentrifus 50 mL (Falcon), yellow dan blue tip, spuit injeksi 3 ml dan 1 ml


23

(Terumo), alat timbang hewan uji, pletismometer atau jangka sorong (Digital Caliper “Wipro” 0-150mm).

E. Tata Cara Penelitian 1. Pengumpulan sampel Madu kelengkeng yang digunakan diperoleh dari salah satu distributor madu di Yogyakarta, yaitu PT. Madu Pramuka. 2. Tahap penentuan dosis madu kelengkeng Menurut penelitian Kasih (2012) yang diacu dari (Suranto, 2007), penggunaan madu untuk pencegahan penyakit pada manusia adalah 1-2 kali sehari. Satu sendok makan berarti 15 mL dan disini peneliti mengambil dosis penggunaan madu yang maksimum, yaitu dua sendok makan (30 mL) dan bila dikonversikan dari manusia 70 kg ke tikus 200 g dengan faktor konversi 0,018 (Laurence & Bacarach, 1964) maka akan ditemukan dosis yang sesuai untuk tikus adalah sebagai berikut: Dosis madu kelengkeng untuk tikus 20 g adalah: = 0,018 x 30 mL = 0,54 mL/200 g BB tikus ≈ 0,60 mL/200 g BB Mengambil secukupnya madu kelengkeng dari wadahnya dan masukkan dalam gelas beker. Suntikkan secara oral pada tikus selama delapan hari disesuaikan dengan peringkat dosis yang diinginkan.


24

3. Penyiapan antigen Antigen yang digunakan adalah suspensi Sel Darah Domba Merah (SDMD) 1% yang SDMD nya diperoleh dari Balai Kesehatan (Balkes) Yogyakarta dan pembuatannya menjadi supsensi SDMD 1% dilakukan di Lembaga Pengembangan Penelitian Terpadu (LPPT) Unit III Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Berdasarkan penelitian Kumala (2012) dan Achyat (2008), darah domba segar yang telah diberi antikoagulan disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit untuk memisahkan plasma dari sel darah merah. Lapisan bagian atas yang berupa plasma dibuang dengan pipet ukur maupun mikropipet dan lapisan bagian bawah yang berupa endapan sel darah merah ditambahkan larutan Phosphate Buffer Saline (PBS) steril pH 7,2 sebanyak tiga kali volume SDMD yang tersisa. Tabung yang sudah berisi campuran endapan SDMD dan PBS dibolak-balik dengan perlahan-lahan sampai SDMD tersuspensi secara homogen dan disentrifugasi kembali dengan kecepatan 3000 rpm. Prosedur ini diulang sampai lapisan atas benar-benar jernih. Lapisan atas yang jernih dibuang dan lapisan bawah yang digunakan dan merupakan suspensi SDMD 100%. Jika akan digunakan ambil 0,5 ml suspensi SDMD 100% lalu tambahkan PBS dengan volume yang sama sehingga didapat suspensi SDMD 50%. Untuk mendapatkan suspensi SDMD 1% maka dari 1 ml suspensi SDMD 50% ditambahkan PBS 50 ml.


25

4. Tahap pra perlakuan hewan uji Sebelum penelitian dilaksanakan semua hewan uji ditimbang beratnya dengan tujuan hewan uji yang digunakan memang sudah masuk kriteria inklusi. Kemudian, hewan uji diadaptasi selama satu minggu di Laboratorium

Farmakologi-Toksikologi

Universitas

Sanata

Dharma

Yogyakarta untuk penyesuaian diri terhadap lingkungannya. 5. Tahap orientasi dosis madu kelengkeng Tikus dibagi secara random menjadi empat kelompok, yaitu satu kelompok kontrol negatif dan tiga kelompok perlakuan, dengan masingmasing kelompok berjumlah tiga ekor, sehingga total tikus yang digunakan ada 12 ekor. Kelompok-kelompok tersebut antara lain: Kelompok kontrol negatif : kelompok tikus yang tidak diberi perlakuan apapun, hanya diberi makan AD II dan minum aquadest. Kelompok perlakuan 1 : kelompok tikus yang diberi larutan madu kelengkeng dengan dosis 0,60 mL/200 g BB tikus. Kelompok perlakuan 2 : kelompok tikus yang diberi larutan madu kelengkeng dengan dosis 1,20 mL/200 g BB tikus. Kelompok perlakuan 3 : kelompok tikus yang diberi larutan madu kelengkeng dengan dosis 2,30 mL/200 g BB tikus. Semua hewan uji, kecuali kelompok kontrol negatif, diperlakukan dengan diberi larutan madu kelengkeng secara per oral selama delapan hari. Hari ke-0, semua hewan uji terlebih dahulu diinjeksi dengan antigen I berupa suspensi SDMD 1% 2 mL secara peritoneal sebelum diberi larutan


26

madu kelengkeng dan hari ke-8 dilakukan injeksi antigen II sebanyak 0,5 mL pada telapak kaki sebelah kiri secara subkutan, namun sebelum diinjeksi antigen dan diberi larutan madu kelengkeng, telapak kaki kiri hewan uji diukur dahulu secara plethysmometrically atau menggunakan jangka sorong digital sebagai data pre-DTH. Setelah 24 jam sejak antigen II dinjeksikan, telapak kaki kiri hewan uji diukur menggunakan jangka sorong digital sebagai data post-DTH. Hasil percobaan dari tahap orientasi dosis ini akan digunakan pada tahap percobaan berikutnya. 6. Tahap percobaan Tikus dibagi secara random menjadi empat kelompok, yaitu satu kelompok kontrol dan tiga kelompok perlakuan, dengan masing-masing kelompok berjumlah lima ekor, sehingga total jumlah tikus yang digunakan sebanyak 20 ekor. Kelompok-kelompok tersebut antara lain: Kelompok kontrol negatif : kelompok tikus yang tidak diberi perlakuan apapun, hanya diberi makan AD II dan minum aquadest. Kelompok perlakuan 1 : kelompok tikus yang diberi larutan madu kelengkeng dengan dosis 0,60 mL/200 g BB tikus. Kelompok perlakuan 2 : kelompok tikus yang diberi larutan madu kelengkeng dengan dosis 1,20 mL/200 g BB tikus. Kelompok perlakuan 3 : kelompok tikus yang diberi larutan madu kelengkeng dengan dosis 2,30 mL/200 g BB tikus. Semua hewan uji, kecuali kelompok kontrol negatif, diperlakukan dengan diberi larutan madu kelengkeng secara per oral selama delapan hari.


27

Hari ke-0, semua hewan uji terlebih dahulu diinjeksi dengan antigen I berupa suspensi SDMD 1% 2 mL secara peritoneal sebelum diberi larutan madu kelengkeng dan hari ke-8 dilakukan pula injeksi antigen II sebanyak 0,5 mL pada telapak kaki sebelah kiri secara subkutan, namun sebelum diinjeksi antigen dan diberi larutan madu kelengkeng, telapak kaki kiri hewan uji diukur dahulu secara plethysmometrically atau menggunakan jangka sorong digital sebagai data pre-DTH. Setelah 24 jam sejak antigen II dinjeksikan, telapak kaki kiri hewan uji diukur menggunakan jangka sorong digital sebagai data post-DTH. 7.

Pengukuran respon hipersensitivitas tipe lambat (Delayed-Type Hypersensitivity/ DTH) Pada hari ke-8 telapak kaki kiri tikus secara plethysmometrically atau menggunakan jangka sorong digital sebagai data pre-DTH. Pada hari ke-9, tepat 24 jam sejak antigen II diinjeksikan, telapak kaki kiri tikus diukur lagi secara plethysmometrically atau menggunakan jangka sorong digital sebagai data post-DTH dengan melihat seberapa peningkatan volume bengkak telapak kaki kiri tikus. Selisih dari peningkatan volume bengkak telapak kaki kiri tikus berdasarkan data pre dan post ini lah yang digunakan dalam mengukur seberapa besar respon DTH yang terjadi.


28

F. Analisis Hasil Data yang diperoleh selanjutnya dievaluasi secara statistik dengan melakukan uji normalitas dengan metode Kolmogorov-Smirnov dan Levene test untuk melakukan uji homogenitas data. Data yang terdistribusi normal dan bervarian homogen (p >0,05) dilanjutkan dengan uji one way ANOVA dengan taraf kepercayaan 95%, selanjutnya jika terdapat perbedaan yang bermakna pada data (p <0,05) akan dilanjutkan dengan uji Tukey.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian madu kelengkeng terhadap respon hipersensitivitas tipe lambat atau Delayed-Type Hypersensitivity (DTH). Respon DTH dapat dilihat dari selisih peningkatan volume bengkak telapak kaki kiri tikus putih jantan galur Wistar yang merupakan gejala klinis dari inflamasi dan hasil pengukurannya dianalisis secara statistik menggunakan uji Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui apakah distribusi normal data, dilanjutkan dengan Levene test untuk mengetahui homogenitas data, untuk selanjutnya diuji dengan one way ANOVA dengan taraf kepercayaan 95%. Jika terdapat perbedaan bermakna pada data dapat dilanjutkan dengan uji post hoc Tukey.

A. Identifikasi Senyawa Uji Senyawa uji yang digunakan adalah madu kelengkeng yang diperoleh dari salah satu distributor madu di Yogyakarta, yaitu PT. Madu Pramuka (lampiran 3). Tujuan dilakukan identifikasi senyawa uji adalah untuk mengetahui kebenaran dan keaslian dari madu kelengkeng yang digunakan peneliti, apakah merupakan madu murni atau madu palsu.

29


30

Ada beberapa cara sederhana untuk mengidentifikasi keaslian madu, yaitu: 1) Menguji keaslian madu menurut Ihsan (2011), dengan menuangkan madu ke segelas air, madu murni langsung mengendap dan tidak bercampur dengan air, jadi air tetap jernih. 2) Menurut Sulaiman (2010), dengan mencairkannya di dalam air yang massanya lima kali lipat. Biarkan sampai keesokan hari, jika didalamnya terdapat zat-zat aneh yang mengendap di dasar wadah, berarti madu tersebut bukan madu yang bagus. 3) Menurut Al-‘Id (2010), bila madu ditumpahkan dalam sebuah bejana atau wadah dan tetesannya menjadi seperti benang dan tidak terputus, maka madu yang diuji bukan madu palsu. 4) Cara paling gampang untuk menguji madu adalah dengan mencium bau madunya, jika tercium aroma madu bercampur dengan aroma tumbuhan yang madunya dihisap oleh lebah – di mana aroma akan tercium seperti aroma tumbuhan tersebut – berarti madu itu asli (Sulaiman, 2010). Hasil yang dilakukan peneliti dengan menggunakan keempat cara di atas menunjukkan madu kelengkeng yang diuji penguji adalah madu asli, dengan menunjukkan cairan madu tetap jernih dan langsung mengendap tanpa bercampur dengan air, tidak terdapat zat-zat asing yang mengendap di dasar wadar ketika dibiarkan sampai keesokan hari, tetesan madu ketika ditumpahkan ke wadah membentuk seperti benang tanpa terputus serta madu kelengkeng yang digunakan


31

peneliti tercium aroma buah kelengkeng sehingga semakin menegaskan madu yang digunakan peneliti adalah benar dan asli (Lampiran 4).

B. Penyiapan Antigen Sistem imun tubuh memiliki kemampuan mengenali molekul asing (antigen) dan membangkitkan respon imun untuk memberikan reaksi yang tepat dan digunakanlah suspensi Sel Darah Domba Merah (SDMD) 1% sebagai antigen untuk membangkitkan respon imun tersebut. SDMD merupakan imunogen, yaitu antigen yang berasal dari gen spesies lain. Suspensi SDMD 1% dipilih untuk imunisasi karena sifat antigeniknya yang tinggi dan mudah diperoleh. SDMD juga mudah diukur dan ketika terjadi lisis maka bisa dibuat lagi dengan mudah serta lebih aman bila dibandingkan dengan bakteri bila digunakan sebagai antigen. Pada pembuatan SDMD menjadi supsensi SDMD 1%, dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit dengan tujuan untuk mengendapkan sel darah merah dan memisahkannya dengan bagian plasma. Lapisan bagian atas yang berupa plasma dibuang dan lapisan bagian bawah yang berupa endapan sel darah merah ditambahkan larutan Phosphate Buffer Saline (PBS) steril pH 7,2 sebanyak 3 kali volume SDMD yang tersisa untuk dilakukan pencucian supaya memastikan semua komponen sel penyusun darah yang dibutuhkan telah mengendap pada dasar tabung dan menggunakan PBS dengan pH 7,2 supaya antara darah dan larutan pencuci tetap isotonis dan tidak terjadi hemolisis. Tabung yang sudah berisi campuran endapan SDMD dan PBS dibolak-


32

balik sampai SDMD tersuspensi secara homogen dan disentrifugasi kembali. Prosedur ini diulang sampai lapisan atas benar-benar jenih pada lapisan atasnya. SDMD ini dapat disimpan selama 30 hari dalam kulkas atau es (4oC) (Mulyaningsih, 2007).

C. Tahap Orientasi Dosis Madu Kelengkeng Tahap orientasi dosis bertujuan untuk mengetahui dosis yang dapat mempengaruhi respon DTH, yang selanjutnya akan digunakan pada tahap percobaan. Pada penelitian ini, kontrol negatif dibandingkan dengan kelompok perlakuan dengan tujuan untuk melihat kemampuan tikus dalam merespon reaksi DTH tanpa dan dengan adanya pengaruh suatu senyawa yang dapat meningkatkan respon imun. Penyuntikan perlakuan yaitu pemberian madu kelengkeng secara oral dengan 3 peringkat dosis, yang dilakukan selama delapan hari berturut-turut sebagai masa penyesuaian tubuh tikus terhadap pemberian madu kelengkeng yang diharapkan dapat menimbulkan pengaruh, yaitu berupa peningkatan ataukah penurunan volume bengkak kaki yang muncul pada telapak kaki kiri tikus ketika diberikan antigen I pada hari ke-1 dan antigen II pada hari ke-8. Menurut Subowo (cit., Sasmito, 2006), induksi antigen dilakukan bertujuan untuk membangkitkan imunitas yang efektif sehingga terbentuk sel-sel memori yang nantinya akan mengaktifkan sel T dan dilakukan berulang supaya


33

sel-sel memori yang terbentuk akan semakin banyak dan semakin cepat menimbulkan respon imun yang tepat. Dalam penelitian ini, induksi SDMD 1% dilakukan sebanyak dua kali dengan tujuan menurut Hia (2007), induksi pertama akan menghasilkan respon imun primer yang bertujuan untuk mengenalkan antigen dan mampu membentuk sel memori yang dapat hidup lama yang berfungsi untuk mengingat antigen ketika antigen yang sama dipaparkan kedua kalinya. Induksi antigen I secara peritoneal yang diberikan pada hari ke-0 dan menurut penelitian dilakukan Zurmiati (2008), pengenalan antigen dilakukan pada hari pertama bertujuan agar proses pengenalan antigen oleh sel T lebih cepat dan membentuk sel memori untuk mengingat antigen yang sama ketika dipajankan untuk kedua kalinya. Diinduksi dengan metode penyuntikan secara peritoneal dikarenakan metode ini paling sering dipakai dan rongga peritoneal yang relatif besar sehingga volume antigen yang diinjeksikan dapat lebih banyak dibanding teknik lainnya. Jika disuntikkan secara intravena dikhawatirkan akan menyumbat pembuluh darah dan jika disuntikkan secara intramuskular dikhawatirkan dapat menimbulkan kerusakan lokal jaringan atau otot karena otot yang relatif lebih kecil areanya. Fase ini disebut fase sensitasi, dimana sel T diaktifkan oleh APC (Antigen-Presenting Cell) melalui MHC-II dan kemudian mengaktfikan CD 4+ terutama Th1. Th1 kadangkala dikenal sebagai limfosit peradangan (Subowo, 2009). Membutuhkan 1-2 minggu setelah kontak primer dengan antigen dan pajanan berulang dengan antigen yang sama dapat menginduksi fase efektor.


34

Pada fase efektor, pemberian antigen kedua atau induksi kedua akan menghasilkan respon sekunder yang akan mengaktifkan sel-sel memori pada respon imun primer sebelumnya sehingga menghasilkan respon imun yang lebih cepat dan lebih spesifik. Induksi antigen II diberikan pada hari ke-8 secara subkutan di kaki kiri tikus dengan tujuan mempercepat respon DTH pada lokasi pengukuran bengkak telapak kaki tikus dan hari ke-8 dianggap tepat untuk diinduksi antigen kedua, karena pada fase efekctor, sel Th1 melepas berbagai sitokin dan sel-sel imun yang berperan dalam respon DTH dikerahkan menuju lokasi yang telah diinduksi. Sebelum disuntik antigen II, kaki kiri tikus diukur dengan jangka sorong digital sebagai data pre-DTH. setelah disuntik antigen II dan gejalanya baru tampak sesudah 24 jam, maka diukur lagi sebagai data post-DTH. Tujuan adanya data pre-DTH adalah berguna sebagai kontrol seberapa besar pembentukan sel memori dalam pengenalan antigen I dan dibandingkan dengan data post-DTH setelah penyuntikan antigen II yang dapat menimbulkan respon imun lebih cepat (dengan membuat bengkak di telapak kaki kiri tikus yang pada penelitian ini merupakan gambaran klinis dari inflamasi yang diukur) akibat sel memori sebelumnya yang menjadi aktif. Selisih antara data pre dan post ini lah yang digunakan dalam pengukuran respon DTH yang nantinya akan menunjukkan seberapa besar respon DTH yang terjadi. Bila ada antigen (agen infeksi) yang masuk, maka akan melakukan invasi disertai proses inflamasi pada tempat infeksi (Basuki, 2005). Reaksi inflamasi termasuk dalam karakteristik reaksi DTH. Semakin bengkak kaki tikus, semakin meningkat respon DTH yang terjadi dan


35

respon DTH dapat digunakan sebagai salah satu parameter untuk mengukur terjadinya respon imun seluler. Berdasarkan hasil uji Kolmogorov-Smirnov data aktivitas selisih peningkatan bengkak kaki kiri tikus sebagai respon DTH menunjukkan bahwa data terdistribusi normal dengan nilai signifikan p= 0,58 (p>0,05) dan dilanjutkan dengan hasil Levene test menunjukkan varian data yang homogen dengan nilai p= 0,25 (p>0,05) (Lampiran 8). Tabel I. Rata-rata±SD Hasil Selisih Peningkatan Volume Bengkak Kaki sebagai Respon DTH pada Tahap Orientasi

Kelompok Kontrol negatif Perlakuan I Perlakuan II Perlakuan III

N 3 3 3 3

Rata-rata ± SD 0,84±0,63 0,84±0,84 1,52±0,52 1,06±0,55

Ket. Kontrol negatif : tanpa perlakuan Perlakuan I : madu kelengkeng dosis 0,60 mL/200 g BB Perlakuan II : madu kelengkeng dosis 1,20 mL/200 g BB Perlaukan III : madu kelengkeng dosis 2,30 mL/ 200 g BB (BTB) : berbeda tidak bermakna

p 0,35(BTB)


36

2.5

Rata-rata± SD

2

1.5

1

0.5

0 Kontrol Negatif

Perlakuan I Perlakuan II Kelompok

Perlakuan III

Gambar 3. Grafik Rata-rata±SD Hasil Selisih Peningkatan Volume Bengkak Kaki sebagai Respon DTH pada Tahap Orientasi Ket. Kontrol negatif Perlakuan I Perlakuan II Perlaukan III

: tanpa perlakuan : madu kelengkeng dosis 0,60 mL/200 g BB : madu kelengkeng dosis 1,20 mL/200 g BB : madu kelengkeng dosis 2,30 mL/ 200 g BB

Hasil pengujian statisik menggunakan one way ANOVA (Tabel 1) menunjukkan perbedaan tidak bermakna p=0,35 (p>0,05) antara kelompok perlakuan madu kelengkeng dengan kelompok kontrol negatif. Dilihat pada tabel I dan gambar 3, dosis pemberian madu kelengkeng 1,20 mL/200 g BB menunjukkan peningkatan, yang berarti pada pemberian madu kelengkeng dosis tersebut sudah bisa meningkatkan respon DTH walaupun pada kelompok perlakuan I madu kelengkeng dosis 0,60 mL/200 g BB dan perlakuan III madu kelengkeng dosis 2,30 mL/ 200 g BB menunjukkan penurunan nilai rata-rata dibandingkan kelompok kontrol negatif, namun hasil dari tahap orientasi ini bisa mendasari untuk dilakukan ke tahap percobaan.


Pertimbangan

tetap

melanjutkan

ke

tahap

percobaan

37

dengan

mempertahankan dosis pemberian madu kelengkeng yang sudah diteliti di tahap orientasi dikarenakan beberapa hal, yaitu 1) pemberian madu kelengkeng dosis III 2,30 mL/ 200 gBB menunjukkan penurunan nilai rata-rata (Tabel I) yang berarti terjadi penurunan respon DTH dan apabila dosis pemberian madu kelengkeng ditingkatkan dimungkinkan akan semakin menurunkan respon DTH, selain itu bila dinaikkan dosisnya satu kali lagi menjadi 4,60 mL/200 g BB maka akan mencapai volume maksimum pemberian oral pada tikus, yaitu 5,00 mL dan membuat larutan madu kelengkeng akan semakin susah dikeluarkan melalui squit serta ditakutkan bisa memicu terjadinya stres dan kematian di hewan uji; 2) pemberian madu kelengkeng dosis I 0,60 mL/200 g BB menunjukkan nilai ratarata yang sama dengan nilai rata-rata kontrol negatif (Tabel I) yang berarti pada dosis I belum bisa memicu terjadinya peningkatan respon DTH yang signifikan dan apabila dosis diturunkan, dikhawatirkan akan semakin tidak menunjukkan hasil peningkatan respon DTH.

D. Pengaruh Pemberian Madu Kelengkeng Dosis 0,60 ml/ 200 g BB; 1,20 ml/ 200 g BB; dan 2,30 ml/ 200 g BB Pada Tahap Percobaan Berdasarkan hasil uji Kolmogorov-Smirnov data aktivitas selisih peningkatan bengkak kaki kiri tikus sebagai respon DTH menunjukkan bahwa data terdistribusi normal dengan nilai signifikan p=0,503 (p>0,05) dan hasil Levene test menunjukkan varian data sudah homogen dengan nilai signifikan p= 0,60 (p>0,05) (Lampiran 9).


38

Tabel II. Rata-rata±SD Hasil Selisih Peningkatan Volume Bengkak Kaki sebagai Respon DTH Terhadap Pengaruh Pemberian Madu Kelengkeng

Kelompok Kontrol negatif Perlakuan I Perlakuan II Perlakuan III

n 5 5 5 5

Rata-rata±SD 1,28±0,36 1,40±0,24 1,52±0,49 1,35±0,43

P 0,60(BTB)

Ket. Kontrol negatif : tanpa perlakuan Perlakuan I : madu kelengkeng dosis 0,60 mL/200 g BB Perlakuan II : madu kelengkeng dosis 1,20 mL/200 g BB Perlaukan III : madu kelengkeng dosis 2,30 mL/ 200 g BB (BTB) : berbeda tidak bermakna

2 1.75

Rata-rata ± SD

1.5 1.25 1 0.75 0.5 0.25 0 Kontrol Negatif

Perlakuan I Perlakuan II Kelompok

Perlakuan III

Gambar 4. Grafik Rata-rata ±SD Hasil Selisih Peningkatan Volume Bengkak Kaki Sebagai Respon DTH Terhadap Pengaruh Pemberian Madu Kelengkeng Ket. Kontrol negatif Perlakuan I Perlakuan II Perlaukan III

: tanpa perlakuan : madu kelengkeng dosis 0,60 mL/200 g BB : madu kelengkeng dosis 1,20 mL/200 g BB : madu kelengkeng dosis 2,30 mL/ 200 g BB

Hasil selisih peningkatan volume bengkak kaki kiri tikus sebagai tanda respon DTH terhadap pengaruh pemberian madu kelengkeng menggunakan statistik one way ANOVA (Tabel II) menunjukkan nilai p = 0,60 (p>0,05), yang berarti antara kelompok kontrol negatif dengan kelompok perlakuan pemberian madu kelengkeng terdapat perbedaan tidak bermakna. Dilihat pada


39

tabel II dan gambar 4, terlihat adanya peningkatan yang lebih tinggi terhadap respon DTH pada pemberian dosis madu kelengkeng 1,20 mL/200 gBB dibandingkan dosis pemberian madu kelengkeng 0,60 mL/ 200 gBB dan mengalami penurunan terhadap respon DTH pada dosis pemberian madu kelengkeng 2,30 mL/ 200g BB, walaupun masih bisa dikatakan meningkat bila dibandingkan kelompok kontrol negatif. Hal ini kemungkinan terjadi karena pengaruh pemberian madu kelengkeng dalam meningkatkan respon imun dalam tubuh (imunostimulan) hanya sampai batas tertentu saja, yang apabila batas tersebut sudah tercapai maka efeknya akan menurun (imunosupressan). Hal ini didukung oleh pernyataan Sriningsih (2006) yang menjabarkan beberapa contoh penelitian efek imunitas dari ekstrak ataupun tanaman herbal yang menunjukkan bahwa efek

yang muncul sangat tergantung dari dosis uji, dimana efek

imunosupressan (menekan sistem imun) akan muncul ketika pengujian dilakukan pada dosis tinggi dan efek imunostimulan (menstimulasi sistem imun) akan muncul pada dosis rendah. Dikuatkan pula dengan pendapat Sakai (cit., Ermantianingrum, et al., 2013) bahwa pemberian imunostimulan dengan dosis tinggi mungkin tidak dapat menaikkan respon sistem pertahanan tubuh, namun menghambatnya dan menurut Radiati, dkk. (2008), dosis senyawa uji, teknik pemberian dosis senyawa uji ke dalam tubuh hewan maupun waktu pemberian antigen yang dapat menentukan kekuatan respon imun yang dihasilkan.


40

Penyebab madu kelengkeng bisa menimbulkan 2 pengaruh yang berbeda dalam waktu yang bersamaan dimungkinkan karena kandungan senyawa golongan flavonoid yang berdasarkan penelitian Siddia (2008), memang ditemukan flavonoid dalam kandungan madu kelengkeng. Menurut Chiang, Ng, Chiang, Chang, dan Lin (2003), salah satu senyawa yang digunakan sebagai imunomodulator antara lain flavonoid dan Middleton et all (2000) juga melaporkan bahwa flavonoid dapat berefek pada sel-sel imun seperti sel T, sel B, makrofag, sel NK, basofil, sel mast, neutrofil, eosinofil, dan platelet. Flavonoid dapat mempengaruhi respon imun spesifik secara kompleks karena memiliki aksi bifase, yaitu flavonoid dapat menstimulasi proliferasi limfosit pada konsentrasi rendah, namun pada konsentrasi tinggi justru menghambat (Putri, 2012) dan menurut pendekatan yang dilakukan pada penelitian Arsani (2010) dalam beberapa kasus, terjadi perbedaan aktivitas dari masing-masing senyawa, khususnya flavonoid, dalam suatu ekstrak tanaman. Dosis yang berbeda terkadang juga dapat memberikan efek yang berbeda, misalnya Scutellaria baicalensis yang mengandung wogonin (salah satu jenis flavonoid) yang pada konsentrasi rendah dapat meningkatkan produksi nitric oxide sedangkan pada konsentrasi tinggi dapat menghambbat produksinya. Hal ini yang mungkin menjelaskan mengapa madu kelengkeng yang mengandung flavonoid pada dosis 1,20 mL/200 gBB dapat meningkatkan respon DTH, sedangkan pada dosis yang lebih tinggi tidak mampu meningkatkan respon DTH.


41

Secara keseluruhan, hewan uji yang diberi perlakuan madu kelengkeng pada berbagai dosis tidak menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna. Hal ini berarti bahwa pemberian madu kelengkeng tidak memiliki pengaruh berupa peningkatan

respon

hipersensitivitas

tipe

lambat

(Delayed-Type

Hipersensitivity/DTH) pada tikus putih jantan galur Wistar. Akan tetapi, hasil penelitian ini tidak dapat menunjukkan bahwa pemberian madu kelengkeng tidak mampu mempengaruhi sistem imun karena penelitian ini hanya melihat salah satu respon imun saja, sehingga perlu dilakukan penelitian lebih lanjut terhadap parameter imunitas lain. Adapun kelemahan atau kekurangan dari penelitian ini adalah tidak dilakukannya standardisasi cara pengukuran, baik itu pada alat ukur yang digunakan maupun pada pemeriksa atau orang yang melakukan pengukuran sehingga pada penelitian selanjutnya bisa dilakukan pelatihan terhadap pengukur maupun pemeriksa yang melakukan pengukuran supaya cakap dan tepat untuk melakukan pengukuran dan kalibrasi pada alat yang bertujuan untuk menghindari terjadinya bias pengukuran pada metode yang digunakan, baik itu bias pemeriksa atau pengukur maupun bias alat ukur. Selain itu, dalam penelitian ini hewan uji digunakan secara bersama dalam dua penelitian sekaligus, sehingga dikhawatirkan hasil penelitian yang diperoleh saling mempengaruhi, sehingga hal ini menjadi saran dalam penelitian selanjutnya akan lebih baik jika tidak digunakan hewan uji secara bersama jika dilakukan dua penelitian sekaligus agar hasil penelitian yang diperoleh bisa memberikan hasil yang lebih baik.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan Pemberian peningkatan

madu

respon

kelengkeng

tidak

hipersensitivitas

tipe

memiliki lambat

pengaruh

berupa

(Delayed-Type

Hipersensitivity/DTH) pada tikus putih jantan galur Wistar.

B. Saran 1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut terhadap parameter imunitas lain yang

tidak diamati pada penelitian ini, seperti melakukan uji pengukuran titer antibodi dan proliferasi limfosit. 2. Perlu dilakukan standardisasi cara pengukuran, baik itu pada alat ukur yang digunakan maupun pada pemeriksa atau orang yang melakukan pengukuran. 3. Pada penelitian imun selanjutnya, akan lebih baik menggunakan hewan uji yang terpisah atau tidak menggunakan hewan uji secara bersama dalam melakukan dua metode penelitian yang berbeda pada satu hewan uji.

42

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI 43

DAFTAR PUSTAKA Abbas, A.K., Litchman,A. H., dan Pillai, S. 2010. Cellular and Molecular Immunology, 6th Ed. Philadelphia: Saunders Elsevier Achyat, S.R., Sadikin, M., Jusman,S.W.A., dan Rusdi, 2008, Pengaruh Pemberian Minyak Buah Merah (Pandanus conoideus Lam.) Terhadap Imunitas Humoral Tikus (Rattus norvegicus L.) Galur Wistar Melalui Pengamatan Titer Antibodi Anti-SDMD, ISSN, 6 (4), 145-148 Aden, 2010, Manfaat dan Khasiat Madu, Hanggar Kreator, Yogyakarta, pp. 4951, 71, 75-76, 104. Aljady, A.M., Kamaruddin, M.Y., Jamal, A.M., dan Yassim, M.Y. Mohd., 2000, Biochemical Study on The Efficacy of Malaysian Honey on Inflicted Wounds: An Animal Model, MJIAS, 13 (3),125-132. Al-‘Id, M.S., 2010, Pengobatan Dengan Madu, Pustaka Al-Kautsar, Jakarta, pp. 55. Arsani, R.B., 2010, Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanolik Daun Kersen (Muntingia calabura L.) terhadap Peningkatan Titer Imunoglobulin G (Ig G) dan Fagositosis Makrofag pada Tikus yang Diinduksi Vaksin Hepatitis B, Skripsi, Fakultas Farmasi, Universitas Gajah Mada, Yogyakarta. Asih, I.A.R.A. dan Ratnayani K., 2012, Isolasi dan Identifikasi Senyawa Golongan Flavonoid Dari Madu Kelengkeng (Nephelium longata L.), 6(1), pp. 73. Ballal, S.R., baht, R., Sumalatha and Acharya, S., 2012, Studies on Immunostimulatory Effect of Pajanelia longifolia (wild.) Schumann on Albino Rats, ISSN, 3(4), 2229-3701. Basuki, P.S., 2005, Infeksi Bakteri Intraseluler pada Anak, Fakultas Kedoketeran Universitas Airlangga, Surabaya. Baratawidjaja, K.G dan Rengganis I., 2010 Imunologi Dasar, Ed.IX, FKUI, Jakarta, pp. 29, 32, 39–40, 259-260, 371, 389-393, 524, 528. Bellanti, A.J., 1993, Imunologi III, , Gadjah Mada University Press, Yogyakarta. pp. 97, 128-131 Chakraborthy, 2009, Evaluation of Immunomodulatory activity of Aesculus indica, IJPRIF, 1(2), 133. Chiang, L.C., Ng, L.T., Chiang, W., Chang, M.Y., & Lin, C.C., 2003, Immunomodulatory activities of flavonoids, monoterpenoids, triterpenoids, iridoid glycosides and phenolic compounds of Plantago spesies, Planta Med, 69: 600-604. Gomathi, P., Prameela, R., Kumar, A.S., and Rajendra, Y., 2012, Evalution of Immunomodulator Activity of Anthocyanins from Two Forms of Brassica oleracea, Journal of Research, 5(3), 1665-1668. Hamad, S., 2007, Terapi Madu, Pustaka IlMaN, Depok, pp. 30. 225. Hariyati, L.F., 2010, Aktivitas Antibakteri Berbagai Jenis Madu Terhadap Mikroba Pembusuk (Pseudomonas fluorescens FNCC 0071 dan Pseudomonas putida FNCC 0070). Skripsi. Universitas Sebelas Maret, Surakarta.


Hia, K.A., 2007, Pengaruh Pemberian Ekstrak Air Buah Mengkudu (Morinda citrifolia L.) terhadap Titer Imunoglobulin G (Ig G) dan Proliferasi Sel Limfosit pada Mencit yang diinduksi Vaksin Hepatitis B, Skripsi, Fakultas Farmasi, Universitas Gajah Mada, Yogyakarta. Ihsan, A.A., 2011, Terapi Madu, Javalitera, Yogyakarta, pp. 90. Kumala S., Dewi, A.T., dan Nugroho Y.A., 2012, Efek Imunostimulan Ekstrak Etanol Herba Pegagan (Centel asiatica (L.) Urban) Terhadap IgG Mencit Jantan Yang diinduksi Sel Darah Merah Domba, http://jifi.ffup.org/wpcontent/uploads/2012/03/efek-shirly.pdf, diakses tanggal 28 April 2013 cit. Kasih, P.M., 2012, Pengaruh Pemberian Madu Hutan Terhadap Aktivitas dan Kapasitas Fagositosis Makrofag Pada Hewan Uji Tikus Jantan Galur Wistar, Skrispi, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta Kresno, S.B., 2010, Imunologi: Diagnosis dan Prosedur Laboratorium, FKUI, Jakarta, pp. 5, 178, 213-214. Mangan, Y., 2009, Solusi Sehat Mencegah Dan Mengatasi Kanker, ArgoMedia Pustaka, Jakarta Selatan, pp. 114 Middleton, E., Kandaswami C., dan Theoharides T., C., 2000, The Effect of Plant Flavonoid on Mammalian Cells: Implications for Inflammation, Heart Disease, and Cancer, Pharmacological Review, 52(4), 673-751 Mulyaningsih, S., 2007, Aktivitas Imunostimulan Ekstrak Etanol Daun Rambutan (Nephelium Lappaceum L.) pada Mencit, ISSN, 4(1), 1410-2315 Murphy, K., Travers P., dan Walport, M., 2008, Janeway’s Immunobiology, 7th Ed., Garland Science, Taylor&Francis Group, United States of America, pp.585-588. Parwata, I.M.O.A., Ratnayani, K., Listya, A., 2010, Aktivitas Antiradikal Bebas Serta Kadar Beta Karoten Pada Madu Randu (Ceiba pentandra) Dan Madu Kelengkeng (Nephelium longata L.), 4 (1), 55. Pratiwi, D.K., 2011, Dinamika Sel Darah Putih Pada Domba Lokal Yang Diimplantasi Material Tulang Hidroksiapatit-Trikalsium Fosfat (HATKF) Dan Hidroksiapatit-Kitosan (HA-KITOSAN), Skripsi, Institut Pertanian Bogor, Bogor Putri, R.K., 2012, Pengaruh Ekstrak Etanolik Songgolangit (Tridax Procumbens Linn.) Sebagai Imunomodulator Terhadap Titer Antibodi Dan Proliferasi Sel TCD4+ Dan TCD8+ Tikus Sprague Dawley, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Radiati, L.E., Awwaly K.U.A., Kalsum U., dan Jaya, F., 2008, Pengaruh Pemberian Ekstrak Propolis terhadap Sistem Kekebalan Seluler pada Tikus Putih (Rattus novergocus) Strain Wistar, Jurnal Teknologi Pertanian, 9(1), 1-9. Saifulhaq, 2006, Pengaruh Pemberian Ekstrak Buah Mahkota Dewa Dosis Bertingkat Terhadap Proliferasi Limfosit Lien Pada Mencit BALB/C, Skripsi, 4, Universitas Diponegoro, Semarang cit. Senas, K.S., 2012, Pengaruh Pemberian Madu Hutan Terhadap Proliferasi Limfosit pada Hewwan Uji Tikus Jantan Galur Wistar, Skripsi, 4, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.


Sari, L.P., 2008, Kajian Histopatologi Efek Imunomodulator dari Daun Torbangun (Coleus Amboinicus Lour) pada Organ Sistem Limforetikular Tikus (MusMusculus) pada Masa Laktasi, Skripsi, Departemen Klinik Reproduksi Dan Patologi Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor, Bogor. Sasmito, E., Mulyaningsih, S., Untari E.K., Dan Widyaningrum R., 2006, Aktivitas Imunostimulan Susu Kedelai Terhadap Imunoglobulin (Igg, Iga) Dan Proliferasi Sel Limfosit Pada Mencit Balb/C Yang Diinduksi Hepatitis A, Majalah Farmasi Indonesia, 17(3), 156– 161 Sharififar, F., Pournourmohammadi, S., Arabnejad, M., Rastegarianzadeh R., Ranjbaran O. and Purhemmaty A., 2009, Immunomodulatory Activity of Aqueous Extract of Heracleum persicum Desf. in Mice, IJPR, 8(4), 287292 Siddiqa, I.M., 2008, Potensi Madu Kelengkeng Perhutani Dan Madu Randu Perhutani Dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri MRSA (MethicillinResistant Staphylococcus Aureus) Yang Diisolasi Dari Spesimen Apus Luka Di Laboratorium Patologi Klinik Rumah Sakit Dr.Hasan Sadikin Bandung, Skripsi. Fakultas Mikrobiologi Institut Teknologi Bandung, Bandung Sihombing, D.T.H., 2005, IlmuTernak Lebah Madu, UGM Press, Yogyakarta, pp. 30, 102 Singh, S., CPS, Y., Noolvi, M.N., 2012, Immunomodulatory Activity of Butanol Fraction of Gentiana olivieri Griseb. On Balb/C mice, Asian Pacific Journal of Topical Biomedicine, 4333-437. Sriningsih dan Wibowo, A.E., 2006, Efek Protektif Pemberian Ekstrak Etanol Herba Meniran (Phyllanthus niruri L.) Terhadap Aktivitas Dan Kapasitas Fagositosis Makrofag Peritoneum Tikus, Artocarpus, 6 (2), 91-96. Subowo, 2009, Imunobiologi, Ed. 2, Sagung Seto, Jakarta, pp. 19-21,42-45,126134 Sulaiman, S., 2010, Terapi Dengan Madu, Thibbia, Surakarta, pp. 12, 14, 29-31, 43. Suranto A, 2007, Terapi Lebah, Penebar Swadaya, Jakarta, pp.27-28, 30-34. Tonks, A.J., Dudley, E., Porter, N.G., Parton, J., Brazier, J., Smith, E.L., et al., 2007, 5,8-kDa Component of Manuka Honey Stimulates Immune Cells via TLR4, JLeukBio, 82, 1147-1155. Wahab, A.S. dan Julia, M., 2002, Sistem Imun, Imunitas, dan Penyakit Imun, Widya Medika, Jakarta, pp. 1, 3, 84. Zurmiati, Yufri Aldi, dan Dian Handayani, 2008, Aktivitas Penghambatan Degranulasi Mastosit yang Tersensitisasi oleh Ekstrak Metanol Spon Laut Acathodendrilla sp., Laporan Penelitian, Jurusan Farmasi FMIPA Universitas Andalas, Padan


LAMPIRAN


Lampiran 1. Surat Kelaikan Etik


Lampiran 2. Surat Keterangan Ijin Penelitian/ Penggunaan Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma


Lampiran 3. Surat Keterangan Ijin Penelitian/ Penggunaan Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu Universitas Gadjah Mada


Lampiran 4. Foto Madu Kelengkeng PT. Madu Pramuka

Lampiran 5. Foto Pengujian Identifikasi Madu Kelengkeng

(a)

(b)

(c)

(d)

Keterangan: (a) Tetesan madu yang seperti benang dan tidak putus (b) Madu langsung mengendap dan tidak bercampur dengan air (c) Cairan madu di dalam air yang dibiarkan sampai keesokan harinya; terlihat jernih tanpa ada zat-zat aneh yang mengendap di dasar wadah (d) Cairan madu di dalam air yang telah dibiarkan selama semalam; terlihat sedikit keruh namun tidak ada zat-zat aneh yang mengendap di dasar wadah


Lampiran 6. Foto Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah (SDMD) 1%

(a) Melakukan sentrifugasi

(b) Melakukan pencampuran di Luminar Air Flow


Lampiran 7. Perhitungan Dosis Madu Kelengkeng Tahap Orientasi Dosis dan Percobaan Madu kelengkeng dikonsumsi manusia 1-2 sendok = 15 – 30 mL Faktor konversi manusia (70 kg) ke tikus (200 g) = 0,018 Dosis madu kelengkeng untuk tikus 200 g

= 0,018 x 30 mL = 0,54 mL ≈ 0,60 ml

Ditingkatkan 2 kalinya = 0,54 mL x 2 = 1,08 mL ≈ 1,20 ml Ditingkatkan lagi 2 kalinya = 1,08 mL x 2 = 2,16 mL ≈ 2,30 ml Kelompok perlakuan I pemberian madu kelengkeng dosis : 0,60 mL/ 200 g BB Kelompok perlakuan II pemberian madu kelengkeng dosis : 1,20 mL/ 200 g BB Kelompok perlakuan III pemberian madu kelengkeng dosis : 2,30 mL/ 200 g BB


Lampiran 8. Pengujian Statistik Respon DTH Tahap Orientasi Descriptive Statistics N selisih_pre_post

Mean 12

Std. Deviation

1.0575

Minimum

.50942

Maximum

.36

1.98

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test selisih_pre_post N

12 a,,b

Normal Parameters

Most Extreme Differences

Mean

1.0575

Std. Deviation

.50942

Absolute

.167

Positive

.159

Negative

-.167

Kolmogorov-Smirnov Z

.577

Asymp. Sig. (2-tailed)

.893

Test distribution is Normal. One way ANOVA Descriptives

N

Mean

Std. Deviation

95% Confidence Interval for Mean Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimum

Maximum

kontrol

3

.8433

.62565

.36122

-.7109

2.3975

.36

1.55

dosis 1

3

.8367

.11015

.06360

.5630

1.1103

.73

.95

dosis 2

3

1.5167

.51637

.29812

.2339

2.7994

.96

1.98

dosis 3

3

1.0333

.54592

.31519

-.3228

2.3895

.47

1.56

12

1.0575

.50942

.14706

.7338

1.3812

.36

1.98

Total

Test of Homogeneity of Variances

Levene Statistic 1.692

df1

df2 3

Sig. 8

.245

ANOVA

Sum of Squares Between Groups

.918

df

Mean Square 3

.306 .242

Within Groups

1.936

8

Total

2.855

11

F

Sig. 1.264

.350


Lampiran 9. Pengujian Statistik Respon DTH Tahap Percobaan Descriptive Statistics N

Mean

selisih_DTH

20

Std. Deviation

1.3915

Minimum

.37058

Maximum

.65

2.10

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test selisih_DTH N

20 a,,b

Normal Parameters

Most Extreme Differences

Mean

1.3915

Std. Deviation

.37058

Absolute

.112

Positive

.112

Negative

-.074

Kolmogorov-Smirnov Z

.503

Asymp. Sig. (2-tailed)

.962

Test distribution is Normal. One way ANOVA Descriptives

N

Mean

Std. Deviation

95% Confidence Interval for Mean

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimum

Maximum

kontrol madu

5

1.2880

.36424

.16289

.8357

1.7403

.83

1.82

madu dosis 1

5

1.4000

.23717

.10607

1.1055

1.6945

1.15

1.70

madu dosis 2

5

1.5240

.49242

.22022

.9126

2.1354

.96

2.10

madu dosis 3

5

1.3540

.42864

.19169

.8218

1.8862

.65

1.75

20

1.3915

.37058

.08286

1.2181

1.5649

.65

2.10

Total

Test of Homogeneity of Variances

Levene Statistic .646

df1

df2 3

Sig. 16

.597 ANOVA

Sum of Squares Between Groups

df

Mean Square

.149

3

.050

Within Groups

2.461

16

.154

Total

2.609

19

F

Sig. .322

.809


BIOGRAFI PENULIS

Skripsi yang berjudul “Pengaruh Pemberian Madu Kelengkeng (Nephelium Longata) Terhadap Respon Hipersensitivitas Tipe Lambat (Delayed-Type Hipersensitivity / DTH) Pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar” ini ditulis oleh Chrissa Hygianna. Penulis merupakan anak ketiga dari Drs.Kalpendi M.Djanu dan Megawati H.Lambung, yang lahir di Palangkaraya, Kalimantan Tengah, pada tanggal 7 April 1992. Pada tahun 1996-1997 penulis menempuh pendidikan di TK Kristen 2, Palangkaraya. Kemudian, pada tahun 1998, penulis melanjutkan studi ke SD Palangka 8, Palangkaraya, hingga tahun 2003. Pada tahun 2004-2006 penulis duduk di bangku SMPK St. Paulus, Palangkaraya. Selepas dari pendidikan SMP, penulis melanjutkan pendidikan di SMAN 2 Palangkaraya, Palangkaraya pada tahun 2007-2009. Selanjutnya mulai tahun 2009 penulis duduk di bangku kuliah, yaitu di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Penulis pernah menjadi Volunteer dalam kegiatan Kampanye Informasi Obat Tahun 2009. Pada tahun 2010, penulis pernah mengikuti kepanitiaan Kampanye Informasi Obat sebagai CO Sie. Konsumsi. Penulis juga aktif dalam kepengurusan Persekutuan Mahasiswa Kristen “Apostolos” Periode 2011-2012 sebagai Sie DDU. Pada tahun 2012, penulis menjabat sebagai Sie DDU dalam Acara Retreat Persekutuan Mahasiswa Kristen “Apostolos”. Pada tahun yang sama, penulis juga berperan serta sebagai peserta Program Kreativitas Mahasiswa yang lolos seleksi dan didanai Hibah DIKTI Tahun 2012 dan mendapat predikat Mahasiswa Berprestasi di Bidang Akademi sebagai Peserta Program Kreativitas Mahasiswa Pendanaan Tahun 2012.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents