PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

EFEK HEPATOPROTEKTIF INFUSA BIJI Persea americana Mill. TERHADAP AKTIVITAS ALT-AST SERUM PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Diajukan oleh: Ni Luh Putu Dian Prawita Putri NIM: 108114079

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013

i


ii


iii


HALAMAN PERSEMBAHAN

"Lakukan apa yang menjadi kewajibanmu dan jangan pikirkan hasilnya" ---Bhagawadgita---

“Happiness and sadness, this too, will pass…” ---Pesan dari seorang pengajar yang luar biasa---

“ “The greatest prayer is a patience” ---Buddha---

Ku persembahkan karya kecil ini untuk… Ida Sang Hyang Widhi Wasa yang senantiasa memampukanku untuk melewati segala proses kehidupan dan menjadi sandaran terakhirku bila aku terlalu letih dan bahagia, Terimakasih untuk Bapak dan Ibu yang sejak awal membawa namaku dalam doa dan mengijinkanku pergi untuk menemukan jalan pulang, Setiap orang yang telah hadir membawa makna dan warna dalam hidupku, Almamaterku

iv


PERNYATAAN KEASLIAN KARYA Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi yang berjudul EFEK HEPATOPROTEKTIF INFUSA BIJI Persea americana Mill. TERHADAP AKTIVITAS ALT-AST SERUM PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA, tidak memuat karya atau bagian karya orang lain, kecuali yang telah disebutkan dalam kutipan dan daftar pustaka, sebagaimana layaknya karya ilmiah. Apabila di kemudian hari ditemukan indikasi plagiarism dalam naskah ini, maka saya bersedia menanggung segala sanksi sesuai peraturan perundangundangan yang berlaku. Yogyakarta, 30 September 2013 Penulis

(Ni Luh Putu Dian Prawita Putri)

v


LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS Yang bertanda tangan dibawah ini, saya mahasiswa Universitas Sanata Dharma: Nama

: Ni Luh Putu Dian Prawita Putri

Nomor Mahasiswa

: 108114079

Demi pengembangan ilmu pengetahuan, saya memberikan kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma karya ilmiah saya yang berjudul: EFEK HEPATOPROTEKTIF INFUSA BIJI Persea americana Mill. TERHADAP AKTIVITAS ALT-AST SERUM PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA Beserta perangkat yang diperlukan (bila ada). Demikian saya memberikan kepada Perpustakaan Universitas Sana Dharma hak untuk menyimpan, mengalihkan dalam bentuk media lain, mengelolanya dalam bentuk pangkalan data, mendistribusikan secara terbatas, dan mempublikasikannya di Internet atau media lain untuk kepentingan akademis tanpa perlu meminta ijin dari saya maupun memberikan royalty kepada saya selama tetap mencantumkan nama saya sebagai penulis. Demikian pernyataan ini yang saya buat dengan sebenarnya, Dibuat di Yogyakarta Pada tanggal: 30 September 2013

Yang menyatakan

(Ni Luh Putu Dian Prawita Putri)

vi


PRAKATA Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Kasih atas berkat yang tiada henti, sehingga penulis dapat

menyelesaikan skripsi

berjudul

“EFEK

HEPATOPROTEKTIF INFUSA BIJI Persea americana Mill. TERHADAP AKTIVITAS ALT-AST SERUM PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA” dengan baik. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) program studi Farmasi Universitas Sanata Dharma. Penulis menyadari bahwa dalam pelaksanaan dan penyusunan skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan dan campur tangan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis mengucapkan terimakasih kepada: 1.

Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

2.

Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. sebagai Dosen Pembimbing skripsi atas waktu dan segala kesabaran dalam membimbing, memberi masukan dan motivasi kepada penulis selama penelitian dan penyusunan skripsi ini.

3.

Bapak Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt. sebagai Dosen Penguji skripsi atas bantuan dan masukan demi kemajuan skripsi ini.

4.

Bapak Ipang Djunarko, M.Sc.,Apt. sebagai Dosen Penguji skripsi atas bantuan dan masukan demi kemajuan skripsi ini

5.

Ibu Rini Dwiastuti, M.Si., Apt. sebagai Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian ini.

vii


6.

Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., yang telah memberikan bantuan dalam determinasi tanaman P. americana Mill.

7.

Bapak Heru Purwanto dan Bapak Suparjiman selaku laboran Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi, Bapak Kayatno selaku laboran Laboratorium Biokimia dan Fisiologi Manusia, Bapak Wagiran selaku laboran Laboratorium Farmakognosi Fitokimia dan Bapak Otok selaku pengelola gudang farmasi.

8.

Teman-teman “Tim Persea americana Ceria” Lydia Setiawan, Inneke Devi Permatasari, Gidion Krisnadi Yoseph, Irene, Ike Kumalasari, Angelia Rosari, Yudytha Anggarhaeni, Liana Risha, Robert Dwijantara Putra, Priscilla Diana Vivi Vionita, Maria Malida Vernandes Sasadara, Rotua Winata Nopelia Silitonga, Komang Ayu Nopitasari dan Adrienne Roma atas kerja sama, bantuan, suka duka dan perjuangan dalam menyelesaikan skripsi ini sampai akhir.

9.

Teman-teman FSM B 2010, FKK A 2010 dan seluruh angkatan 2010 atas kebersamaan kita.

10. Teman-teman relawan di Pos Kesehatan St. Antonius Kota Baru yang senantiasa mengingatkan saya akan cinta kasih dan berbagi tidak akan mengurangi apa yang kita miliki. 11. Teman-teman PKMP PO-TA-TO 2013 Gidion Krisnadi Yoseph, Christiana Destia Anggraeni dan Abednego Dwi Yoga P atas kerjasamanya dan kekompakannya.

viii


12. Sahabat-sahabat terbaik sejak SMA hingga kini Ayu Tyas Febiyanti Wangsa, Yully Trisna Dewi dan Desak Putu Siska Dewi yang senantiasa menghapus tetesan air mata yang mengalir disela derai tawa kita dan berjalan bersama meraih mimpi dari tempat yang berbeda. 13. Kakak Asti, Oswaldine Heraolia Pramesthi, dan segenap anak kos 99999, terimakasih atas kebersamaan suka dan duka sebagai anak rantauan yang meraih mimpi dan cita-cita. 14. Semua pihak yang penulis tidak dapat sebutkan satu per satu yang turut membantu selama penyusunan skripsi ini berlangsung. Penulis menyadari bahwa setiap manusia tidak ada yang sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharapkan adanya kritik dan saran yang membangun demi kemajuan di masa yang akan datang. Akhir kata, penulis berharap bahwa skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak, mahasiswa, lingkungan akademis, masyarakat serta memberikan sumbangan kecil bagi perkembangan ilmu pengetahuan khususnya di bidang kefarmasian. Yogyakarta, 30 September 2013

Penulis

ix


DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL .......................................................................................... i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................................ii HALAMAN PENGESAHAN ...........................................................................iii HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................................iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................. v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ...........................................vi PRAKATA ......................................................................................................vii DAFTAR ISI....................................................................................................... x DAFTAR TABEL............................................................................................xiv DAFTAR GAMBAR .......................................................................................xvi DAFTAR LAMPIRAN...................................................................................xvii INTISARI ........................................................................................................xix ABSTRACT........................................................................................................ xx BAB I. PENGANTAR........................................................................................ 1 A. Latar Belakanng ...................................................................................... 1 1. Perumusan masalah........................................................................... 4 2. Keaslian penelitian............................................................................ 4 3. Manfaat penelitian ............................................................................ 5 B. Tujuan Penelitian .................................................................................... 6 BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ................................................................ 7

x


A. Hati.......................................................................................................... 7 1. Anatomi dan fisiologi hati ................................................................ 7 2. Kerusakan sel-sel hati ..................................................................... 10 3. Hepatotoksin ................................................................................... 11 4. Alanin transaminase (ALT) dan Aspartat transaminase (AST)…...12 B. Karbon Tetraklorida.............................................................................. 13 C. Curliv® .................................................................................................. 14 D. Tanaman Persea americana Mill.......................................................... 15 1. Sinonim ........................................................................................... 15 2. Nama daerah ................................................................................... 15 3. Taksonomi....................................................................................... 16 4. Penyebaran ...................................................................................... 16 5. Morfologi ........................................................................................ 17 6. Kandungan dan kegunaan ............................................................... 17 E. Infusa..................................................................................................... 18 F. Keterangan Empiris .............................................................................. 19 BAB III. METODE PENELITIAN .................................................................. 20 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ............................................................ 20 B. Variabel dan Definisi Operasional ........................................................ 20 1. Variabel utama ................................................................................ 20 2. Variabel pengacau........................................................................... 20 3. Definisi operasional ........................................................................ 21 C. Bahan Penelitian ................................................................................... 21

xi


D. Alat dan Instrumen Penelitian............................................................... 23 1. Alat pembuatan infusa biji P. americana........................................ 23 2. Alat uji kadar ALT-AST ................................................................. 23 E. Tata Cara Penelitian .............................................................................. 23 1. Determinasi serbuk biji P. americana ............................................ 23 2. Pengumpulan bahan ........................................................................ 24 3. Penetapan kadar air serbuk kering biji P. americana ..................... 24 4. Pembuatan infusa biji P. americana 8%......................................... 24 5. Penetapan dosis infusa biji P. americana ....................................... 24 6. Pembuatan larutan karbon tetraklorida konsentrasi 50%................ 25 7. Penetapan dosis kontrol positif Curliv® .......................................... 25 8. Uji pendahuluan .............................................................................. 26 9. Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji..................................... 27 10. Pembuatan serum ............................................................................ 27 11. Penetapan aktivitas serum kontrol, serum ALT dan serum AST.... 28 F. Tata Cara Analisis Hasil ....................................................................... 28 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ......................................................... 30 A. Penyiapan Bahan................................................................................... 30 1. Hasil determinasi serbuk................................................................. 30 2. Penetapan kadar air serbuk biji P. americana................................. 30 B. Uji Pendahuluan.................................................................................... 31 1. Penentuan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida.......................... 31 2. Penentuan waktu pencuplikan darah............................................... 31

xii


3. Penetapan lama pemejanan infusa biji P. americana ..................... 35 4. Penetapan dosis infusa biji P. americana ....................................... 35 C. Hasil Uji Efek Hepatoprotektif Infusa Biji P. americana..................... 36 1. Kontrol negatif olive oil dosis 2 mL/kgBB..................................... 39 2. Kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB .......... 42 3. Kontrol infusa biji P. americana dosis 1142,86 mg/kgBB............. 43 4. Kontrol positif Curliv® dosis 4,05 mL/kgBB ................................. 44 5. Kelompok perlakuan infusa biji P. americana dosis 360,71; 642,06; 1142,86 mg/kgBB pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/KgBB…………………45 D. Rangkuman Pembahasan ...................................................................... 49 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN .......................................................... 53 A. Kesimpulan ........................................................................................... 53 B. Saran ..................................................................................................... 53 DAFTAR PUSTAKA ....................................................................................... 54 LAMPIRAN...................................................................................................... 58 BIOGRAFI PENULIS ................................................................................... 116

xiii


DAFTAR TABEL Tabel I.

Komposisi dan konsentrasi reagen serum ALT ……………..

22

Tabel II.

Komposisi dan konsentrasi reagen serum AST ……………... 23

Tabel III.

Purata ± SE aktivitas serum ALT dan AST tikus pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB ……………………………….

Tabel IV.

32

Hasil uji Scheffe aktivitas serum ALT tikus pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB……………………………….

Tabel V.

33

Hasil uji Scheffe aktivitas serum AST tikus pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB………………………………

Tabel VI.

34

Purata ± SE aktvitas serum ALT dan AST tikus praperlakuan infusa biji P. americana terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB…………………………………………………

Tabel VII.

37

Hasil uji Mann-Whitney aktivitas serum ALT tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada kelompok perlakuan………………………………………….

Tabel VIII.

38

Hasil uji Mann-Whitney aktivitas serum AST tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada kelompok perlakuan………………………………………….

Tabel IX.

Purata ± SE aktvitas serum ALT dan AST tikus setelah pemberian olive oil dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0

xiv

39


dan 24 jam …………………………………………………... Tabel X.

41

Hasil uji T berpasangan aktivitas serum ALT dan AST tikus setelah pemberian olive oil dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0 dan 24 jam…………………………………………..

xv

41


DAFTAR GAMBAR Gambar 1. Anatomi hati ……………………………………………………

7

Gambar 2. Struktur mikroskopik hati……………………………………….. 9 Gambar 3. Struktur karbon tetraklorida……………………………………..

13

Gambar 4. Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida….. 14 Gambar 5. Buah Persea americana Mill……………………………………

15

Gambar 6. Diagram batang rata-rata aktivitas serum ALT tikus pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB………………………………………………

32

Gambar 7. Diagram batang rata-rata aktivitas serum AST tikus pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB……………………………………………… Gambar 8. Diagram

batang

rata-rata

aktivitas

serum

ALT

33

tikus

praperlakuan infusa biji P. americana satu kali sehari selama enam hari berturut-turut terinduksi karbon tetraklorida………… Gambar 9. Diagram

batang

rata-rata

aktivitas

serum

AST

37

tikus

praperlakuan infusa biji P. americana satu kali sehari selama enam hari berturut-turut terinduksi karbon tetraklorida…………

38

Gambar 10. Diagram batang rata-rata aktivitas serum ALT tikus setelah pemberian olive oil dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0 dan 24 jam…………………………………………………………..

41

Gambar 11. Diagram batang rata-rata aktivitas serum AST tikus setelah pemberian olive oil dosis 2 mL/kgBB pada 0 dan 24 jam………

xvi

41


DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Foto biji P. americana …..………………………………........

59

Lampiran 2.

Foto serbuk biji P. americana………………………………………

59

Lampiran 3.

Foto infusa biji P. americana ……………………………………… 59

Lampiran 4.

Foto hasil determinasi organoleptis dan mikroskopik serbuk biji P. americana…………………………………………….

60

Lampiran 5.

Surat pengesahan determinasi tanaman P. americana ………..

61

Lampiran 6.

Surat pengesahan Medical and Health Research Ethics Committee (MHREC)………………………………………….. 62

Lampiran 7.

Analisis statistik aktivitas serum ALT pada uji pendahuluan penentuan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

Lampiran 8.

Analisis statistik aktivitas serum AST pada uji pendahuluan penentuan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

Lampiran 9.

63

66

Analisis statistik aktivitas serum ALT perlakuan infusa biji P. americana setelah induksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

69

Lampiran 10. Analisis statistik aktivitas serum AST perlakuan infusa biji P. americana setelah induksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

86

Lampiran 11. Analisis statistik aktivitas serum ALT dan AST perlakuan kontrol negatif olive oil 2 mL/kgBB…………………………… 104 Lampiran 12. Perhitungan penetapan peringkat dosis infusa biji P. americana pada kelompok perlakuan……………………………………… 111 Lampiran 13. Perhitungan Konversi Dosis untuk Manusia…………………...

112

Lampiran 14 Perhitungan Dosis Curliv®…………………………………….

112

xvii


Lampiran 15 Perhitungan Efek Hepatoprotektif…………………………….. Lampiran 16.

113

Perbandingan daya hepatoprotektif dosis IBPA perlakuan dengan Curliv®………………………………………………..

113

Lampiran 17.

Penetapan kadar air serbuk biji P. americana…………………..

114

Lampiran 18.

Hasil pengukuran validitas dan reabilitas…………………….

115

xviii


INTISARI Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek hepatoprotektif infusa biji Persea americana Mill. pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida dengan melihat penurunan aktivitas serum ALT dan AST, serta mendapatkan dosis efektifnya. Penelitian ini termasuk eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Tikus yang digunakan memiliki kisaran bobot 150-250 g sebanyak 35 ekor dan dibagi menjadi tujuh kelompok perlakuan. Kelompok I (kontrol hepatotoksin) diinduksikan karbon tetraklorida 2 mL/kgBB secara ip. Kelompok II (kontrol negatif) diberikan olive oil 2 mL/kgBB secara ip. Kelompok III (kontrol infusa) diberikan infusa biji P. americana dosis 1142,86 mg/kgBB secara po. Kelompok IV (kontrol positif) diberikan Curliv® 4,05 mL/kgBB secara po selama enam hari berturut-turut dan hari ketujuh diinduksikan CCl4 2 mL/kgBB. Kelompok V, VI dan VII diberikan preperlakuan infusa berturut-turut dengan dosis 360,71; 640,06; dan 1142,86 mg/kgBB selama enam hari dan pada hari ketujuh diinduksikan CCl4 2 mL/kgBB. Dua puluh empat jam setelah perlakuan tersebut dilakukan pencuplikan darah melalui sinus orbitalis mata. Efek hepatoprotektif dari ketiga kelompok peringkat dosis dievaluasi melalui penurunan aktivitas serum ALT dan AST yang dihasilkan dan dianalisis menggunakan statistik Kruskal Wallis dan Mann-Whitney. Hasil yang diperoleh menggambarkan bahwa hubungan dosis dengan respon yang dihasilkan tidak berbanding lurus dan ketiga dosis infusa biji P. americana memiliki efek hepatoprotektif. Jadi, efek hepatoprotektif yang paling tinggi ditunjukkan oleh infusa biji P. americana dosis 360,71 mg/kgBB sebesar 98,82%, yang diikuti dengan dosis 1142,86 mg/kgBB sebesar 87,02% dan dosis 642,06 mg/kgBB sebesar 61,50%. Kata kunci: Persea americana, infusa, karbon tetraklorida, aktivitas serum ALT dan AST, efek hepatoprotektif

xix


ABSTRACT The infusion of seed of Persea americana Mill. at dose 360.71; 642.06; and 1142.86 mg/kg body weight per oral was studied for the hepatoprotective effect using Carbon tetrachloride 2 mL/kg body weight induced liver damaged in rats. Male Wistar rats 150-250 g were divided in to seven groups. Group I was given carbontetrachloride 2 mL/kg BW i.p. Group II was given olive oil 2 mL/kgBW i.p. The rats in the group III were given infusion of P. americana seed 1142.86 mg/kgBW p.o for six days. In the group IV, the rats were given Curliv® 4.05 mL/kgBW p.o for six days. Then, group V, VI and VII were given 360.71; 642.06; and 1142.86 mg/kg BW doses of infusion of Persea americana seed for six days p.o and on 7th day, the rats were given carbon tetrachloride 2 mL/kg BW. The hepatoprotective effect from dose 360.71; 642.06; and 1142.86 mg/kg body weight was evaluated by measuring activity of alanine transaminase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) from blood which taken from sinus orbitalis on 8th day. The three doses of infusion P.americana seed showed significant (p<0,05) hepatoprotective effect by lowering the serum levels of ALT and AST. Based of the result, aqueous extract P. americana seed has not showed a linier relationship between doses and responses. Dose 360.71 mg/kg body weight has given the highest hepatoprotective effect 98.82%, and followed by dose 1142.86 and 642.06 mg/kg body weight (87.02% dan 61.50%). Keywords: Persea americana, infusion, carbon tetrachloride, ALT-AST serum activities, hepatoprotective effect

xx


BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Metabolisme adalah segala proses kimia yang terjadi di dalam tubuh organisme hidup yang meliputi pemanfaatan bahan makanan untuk kebutuhan energi, pertumbuhan dan perbaikan sel. Selain itu, metabolisme juga menyangkut proses pembongkaran (katabolisme) dan proses penyusunan (anabolisme) suatu senyawa seperti karbohidrat, protein dan lemak (Sumardjo, 2009). Organ yang berperan penting dalam proses metabolisme ini adalah hati. Hati memiliki kapasitas cadangan yang membantu

fungsi jaringan. Bila organ hati telah

mengalami kerusakan melebihi 80%, maka kerusakan hati akan tampak. Ada banyak penyebab kerusakan hati diantaranya infeksi virus, imunologi, dan induksi suatu senyawa atau obat (Williamson, David, dan Fred, 1996). Data dari Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) Departemen Kesehatan RI tahun 2007 menjelaskan bahwa penyakit gangguan fungsi hati dengan golongan umur 15 – 44 tahun menduduki urutan pertama sebagai penyebab kematian di daerah pedesaan, sedangkan untuk daerah perkotaan penyakit ini menduduki urutan ketiga. Perlemakan hati merupakan salah satu gangguan fungsi hati yang sering terjadi selain hepatitis, dimana pada kondisi ini terjadi penumpukan zat lemak di dalam sel hati, terutama trigliserida. Dilihat dari penyebabnya, perlemakan hati ada dua macam yaitu disebabkan oleh konsumsi alkohol berlebih dan non alkoholik (sindrom metabolik). Dari data epidemiologi, angka kejadian ynn

1


2

perlemakan hati non alkoholik mencapai 30-100% pada obesitas di dunia (Angulo, 2002). Perlemakan hati merupakan penyakit dengan penyebab yang multi faktorial, sehingga faktor risiko perlu dipertimbangkan dalam upaya pencegahan. Faktor risiko yang memiliki hubungan erat dengan perlemakan hati adalah umur, hiperlipidemia, diabetes melitus dan kegemukan. Kontribusi faktor risiko menunjukkan bila kegemukan dapat dihilangkan pada populasi tersebut maka perlemakan hati akan turun 30,6% menjadi 11,7% (Machmud, 2000). Pengobatan kerusakan hati hingga kini belum ada yang bersifat spesifik. Namun, hingga saat ini obat komplementer maupun alternatif untuk gangguan fungsi hati masih terus dikembangkan guna memperoleh hasil yang lebih memuaskan ditinjau dari manfaat pengobatan maupun efek sampingnya. Pengobatan penyakit hati dapat dilakukan dengan terapi suportif seperti diet dan pengeluaran racun. Pengobatan dilanjutkan dengan terapi aktif baik dengan menggunakan obat konvensional maupun obat tradisional dari bahan alam yang dapat memberikan efek yang menguntungkan untuk perbaikan hati (Williamson, et al., 1996). Di tengah pengembangan dunia kesehatan, back to nature merupakan isu yang tengah mendunia dan berdampak besar pada peningkatan penggunaan bahan alam sebagai obat. Di Indonesia, obat bahan alam dibagi menjadi tiga kategori yaitu jamu merupakan ramuan tradisional yang belum teruji secara klinis, obat herbal terstandar yaitu obat tradisional yang sudah melewati tahap uji pra klinis dengan hewan uji, dan fitofarmaka yaitu obat tradisional yang sudah melewati uji


3

praklinis dan klinis (Herdiani, 2012). Beragam flora yang tumbuh di Indonesia mendorong untuk terus melakukan eksplorasi tanaman terkait dengan manfaat bagi dunia kesehatan. Penggunaan bahan alam dalam dunia pengobatan bersifat empirik yang telah diwariskan secara turun temurun dan telah menjadi bagian penting dari kehidupan masyarakat. Alpukat (Persea americana Mill) merupakan tumbuhan tropis, dimana bagian buahnya sangat umum untuk dikonsumsi menjadi aneka minuman segar dan makanan di Indonesia. Beberapa keterangan empiris menyebutkan bahwa biji alpukat dapat digunakan dalam pengobatan tradisional sebagai antidiabetik dengan cara dikeringkan dan dihaluskan, kemudian air seduhannya dapat diminum. Berdasarkan penelitian Malangngi, Sangi, dan Paendong (2012), dilaporkan bahwa kandungan total tanin dan tanin terkondesasi tertinggi dihasilkan pada ekstrak etanol biji alpukat biasa kering yaitu berturut-turut sebesar 117 mg/kg dan 20,855 mg/kg, dibandingkan dengan biji alpukat biasa segar, biji alpukat mentega kering dan biji alpukat mentega segar. Selain itu, biji alpukat kering juga memiliki aktivitas antioksidan tertinggi yang diukur dengan metode DPPH yaitu sebesar 93,045%. Adanya aktivitas antioksidan yang tinggi, biji alpukat kering diduga memiliki kemampuan hepatoprotektif terhadap kerusakan hati yang disebabkan oleh senyawa-senyawa model seperti karbon tetraklorida (CCl4). Mekanisme hepatotoksik dari senyawa CCl4 dengan terbentuknya radikal bebas triklorometil (CCl3*̇) dan triklorometil peroksil (CCl3O2*) yang merupakan hasil biotransformasi di hati oleh enzim sitokrom P450 reduktase dan kofaktor NADPH. Radikal bebas yang terbentuk akan berikatan dengan membran hepatosit


4

dan organel sel sehingga terjadi peroksidasi lipid serta ketidakseimbangan kalsium yang memicu kematian sel (Timbrell, 2008). Informasi mengenai kemampuan hepatoprotektif dari infusa biji P. americana belum banyak tersedia, apalagi cara pembuatan rebusan biji P. americana di masyarakat mirip dengan pembuatan sediaan infusa. Dengan demikian penelitian lebih lanjut mengenai efek hepatoprotektif infusa biji P. americana pada tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida dengan melihat perubahan kadar serum AST dan ALT dalam darah akan sangat menarik untuk dilakukan. 1. Perumusan masalah a. Apakah pemberian infusa biji P. americana mempunyai pengaruh hepatoprotektif dengan menurunkan kadar ALT dan AST serum pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida? b. Berapa besar nilai dosis infusa biji P. americana yang memiliki efek hepatoprotektif yang paling besar pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida ? 2. Keaslian penelitian Penelitian dengan menggunakan biji P. americana pernah dilakukan oleh Malangngi et al. (2012) yang melaporkan mengenai kandungan total tanin dan tanin terkondesasi tertinggi dihasilkan pada ekstrak etanol biji P. americana kering yaitu berturut-turut sebesar 117 dan 20,855 mg/kg. Pada penelitian tersebut juga melaporkan bahwa biji P. americana juga memiliki aktivitas antioksidan tertinggi yang diukur dengan metode DPPH yaitu sebesar 93,045%.


5

Kandungan senyawa kimia pada biji P. americana juga pernah diteliti oleh Leite, et al. (2009). Dari penelitian tersebut dilaporkan bahwa ekstrak heksan dan methanol dari biji P. americana menghasilkan LC50 berturut-turut 2,37 dan 24,13 mg mL-1 dari uji toksisitas dengan menggunakan Artemia salina. Selain itu, pada ekstrak heksan biji P. americana menunjukkan kandungan dari asam palmitat (21,3%), asam palmitoleat (1,6%), asam stearat (2,2%), asam oleat (24,1%) dan asam linoleat (27,6%) yang diidentifikasi sebagai 1,2,4-trihidroksinonadekana dan β-sitosterol. Ding, Chin, Kinghorn, dan Ambrosio (2007) mengidentifikasi kandungan metabolit sekunder yang ada pada buah alpukat diantaranya flavonoid, tanin, kumarin, dan alkanol. Flavonoid merupakan antioksidan larut air yang sangat kuat dan merupakan penangkap radikal bebas. Sejauh penelusuran pustaka, penelitian yang dilakukan penulis berbeda dengan penelitian-penelitian sebelumnya, karena pada penelitian ini melihat dari aspek lain yaitu pengaruh pemberian infusa biji P. americana jangka panjang terhadap kadar AST dan ALT pada tikus jantan yang terinduksi CCl4. 3. Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis. Penelitian efek hepatoprotektif jangka panjang dari infusa biji P. americana diharapkan mampu membantu pengembangan eksplorasi tanaman yang bersifat hepatoprotektor. b. Manfaat praktis. Penelitian efek hepatoprotektif jangka panjang dari infusa biji P. americana diharapkan mampu memberikan informasi kepada masyarakat mengenai dosis efektif infusa biji P. americana yang memberikan proteksi terhadap hati.


6

B. Tujuan Penelitian Penelitian yang dilakukan ini bertujuan untuk : 1. Membuktikan bahwa infusa biji P. americana memiliki kemampuan hepatoprotektif pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida dengan menurunkan aktivitas AST dan ALT. 2. Mengetahui dosis infusa biji P. americana yang memiliki kemampuan hepatoprotektif yang paling besar pada tikus galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Hati 1. Anatomi dan fisiologi hati Organ adalah kumpulan dari beberapa jaringan untuk melakukan fungsi tertentu di dalam tubuh. Organ terbesar yang ada di dalam tubuh manusia adalah hati dengan berat sekitar 2 – 3% dari rata-rata berat badan manusia. Organ ini terletak pada kuadran kanan atas abdomen, dan dilindungi oleh cartilage costalis. Posisi hati dapat dipertahankan akibat memperoleh tekanan dari organ lain di dalam abdomen dan tekanan dari ligamentum peritoneum. Hati memiliki dua lobus, dimana lobus kanan memiliki ukuran yang lebih besar dari pada lobus kiri (Gambar 1). Kedua lobus tersebut dipisahkan oleh ligamentum falsiformis pada bagian anterior, lekukan ligamentum teres pada bagian inferior dan lekukan untuk ligamentum venosum di bagian posterior (Misih dan Bloomston, 2010).

Gambar 1. Anatomi hati (Misih dan Bloomston, 2010).

7


8

Pembuluh yang berperan dalam menyuplai darah untuk hati yaitu arteri hepatika dan vena porta. Arteri hepatika membawa darah yang kaya akan oksigen (kejenuhan oksigen 95-100%) dengan kecepatan aliran ±500 mL/menit. Vena porta membawa darah yang mengandung oksigen (kejenuhan oksigen 70%), lebih banyak nutrient dan sisa bakteri atau zat toksin dari saluan pencernaan (lambung, usus, pankreas dan limpa) dengan kecepatan aliran darah ±1000 mL/menit. Kedua pembuluh darah tersebut selanjutnya mengalirkan darah menuju kapiler hati yang disebut sinusoid, diteruskan ke vena sentralis pada tiap lobulus (Tso dan McGill, 2003). Struktur mikroskopik hati menggambarkan suatu sistem yang komplek yang terdiri dari beberapa sel dan pembuluh darah (Gambar 2). Sel hati berbentuk polihedral dan diameternya kira-kira 20-30 µm. Sebagian besar sel hati memiliki satu nukleus, namun ditemui juga yang memiliki nukleus ganda yang membagi diri dengan cara mitosis. Usia sel hati diperkirakan 150 hari dan memiliki daya regenerasi yang tinggi (North-Lewis, 2008). Kerusakan hati yang mengakibatkan hanya 10-20% jaringan hati yang masih berfungsi sudah cukup untuk mempertahankan hidup individu. Dalam tiap milligram jaringan hati ditemukan kira-kira 202.000 sel yang terdiri atas 171.000 sel parenkim hati dan 31.000 selsel lain termasuk sel Kupffer (Price and Wilson, 2005). Hepatosit atau sel parenkim hati berperan dalam proses metabolisme yang merupakan fungsi hati yang utama. Hepatosit terletak diantara sinusoid yang terdiri atas darah dan saluran empedu. Sel Kupffer adalah sel makrofag pada hati yang terletak di lumen sinusoid dan berperan penting dalam sistem kekebalan tubuh (Tso dan McGill,


9

2003). Makrofag akan teraktivasi oleh bakteri atau antigen asing yang masuk ke dalam hati atau sitokin yang dihasilkan oleh sel T helper. Kupffer sel akan mensekresikan sitokin yang dapat memicu sel proinflamatori ke hati dan melepaskan interferon-γ, yang berfungsi sebagai proteksi antiviral pada sel lokal (North-Lewis, 2008).

Gambar 2. Struktur mikroskopik hati (Chandrasoma dan Taylor, 1995) Hati berperan dalam memelihara keseimbangan metabolik di dalam tubuh, seperti metabolisme protein, karbohidrat, lipid, vitamin, sintesis serum, sekresi empedu, serta detoksifikasi. Fungsi detoksifikasi dilakukan oleh enzim hati dengan cara oksidasi, hidrolisis, reduksi atau konjugasi senyawa-senyawa berbahaya bagi tubuh yang selanjutnya diubah menjadi bentuk tidak aktifnya. Kapasitas hati untuk mengubah obat induk menjadi metabolitnya sangat dipengaruhi oleh aktivitas enzim pemetabolisme yang terdapat pada retikulum endoplasma halus dan sitosol pada hepatosit. Selain itu, jumLah protein pengikat


10

obat di dalam darah dan aliran darah di hati juga mempengaruhi jumLah obat bebas yang akan di bawa ke hepatosit (DiPiro, Robert, Gary, Gary, Barbara, Michael, 2008). 2. Kerusakan sel-sel hati Kerusakan hati disebabkan karena adanya kerusakan yang parah pada sel-sel hepatosit atau kerusakan berulang sel parenkim. Hati memiliki kapasitas cadangan, sehingga manifestasi klinis dari kerusakan hati baru akan muncul ketika telah terjadi kerusakan hati yang mencapai 80%-90%. Kerusakan hati dibagi menjadi tiga kategori, yaitu kerusakan hati akut, kerusakan hati kronis dan disfungsi hati tanpa nekrosis yang tampak (Crawford dan Liu, 2010). Kerusakan hati akut disebabkan karena nekrosis hati yang parah dan umumnya disebabkan karena virus (hepatitis), obat (parasetamol), dan senyawa kimia (karbon tetraklorida). Kerusakan hati akut dapat digolongkan menjadi jaundice (kuning), hepatik enselopati, kegagalan sintesis protein yang berperan dalam pembekuan darah, dan kenaikan serum enzim yang berhubungan dengan kasus nekrosis sel hati (Crawford dan Liu, 2010). Penderita umumnya mengalami sakit selama 2-3 minggu. Kerusakan hati banyak diderita pada usia muda dan menunjukkan peningkatan morbiditas dan mortalitas (Polson dan Lee, 2005). Kerusakan hati kronis disebabkan karena terjadinya nekrosis sel hati yang parah, fibrosis, regenerasi nobular dan kerusakan yang terakhir yaitu sirosis. Sirosis ditandai dengan akumulasi sejumLah jaringan fibrosa yang luas, khususnya serabut kolagen, sebagai respon terhadap kerusakan atau peradangan (Crawford dan Liu, 2010). Sirosis masuk ke dalam sepuluh besar penyakit yang


11

menyebabkan kematian di negara barat. Sirosis bersifat irreversible dan pada umumnya memiliki harapan hidup yang kecil. Faktor yang memicu terjadinya sirosis meliputi penggunaan minuman beralkohol, infeksi kronis, hepatitis autoimun, dan gangguan empedu (Kumar, Abbas, Fausto, Mitchel, 2007). Kerusakan hati tanpa nekrosis yang tampak disebabkan karena hepatosit yang normal, namun tidak dapat menjalankan fungsi metaboliknya. Hal tersebut dapat disebabkan oleh pengaruh dari toksisitas tetrasiklin, steatosis saat kehamilan dan sindrom Reye (Kumar, et al., 2007). 3. Hepatotoksin Hepatotoksin adalah senyawa kimia atau obat yang menyebabkan kerusakan sel hati akibat sifat toksik yang dimiliki atau mengalami perubahan struktur menjadi metabolit toksik. Obat dan senyawa yang dapat menyebabkan kerusakan hati dapat dibedakan menjadi dua, yaitu hepatotoksin teramalkan (tipe A) atau hepatotoksin tak teramalkan (tipe B) (Forrest, 2006). Hepatotoksin teramalkan adalah senyawa kimia atau obat yang dapat menimbulkan efek toksik pada hati bila diberikan dalam jumLah yang besar. Hepatotoksin tipe ini sangat dipengaruhi oleh dosis pemberian. Contoh dari hepatotoksin teramalkan adalah parasetamol, karbon tetraklorida dan kloroform (Forrest, 2006). Hepatotoksin tak teramalkan adalah senyawa kimia yang tidak menimbulkan efek toksik pada hati, namun bila diberikan pada orang tertentu dapat menimbulkan efek toksik. Frekuensi terjadinya sangat jarang pada 1 : 1000 orang dan hepatotoksin tipe ini tidak bergantung pada dosis pemberian. Contoh


12

dari hepatotoksin tak teramalkan adalah isoniazid, halothane, dan chlorpromazine (Forrest, 2006). 4. Alanin transaminase (ALT) dan Aspartat transaminase (AST) Sel hepatosit mengandung beberapa enzim yang dapat dilepaskan ke sistem sirkulasi apabila sel hepatosit mengalami kerusakan. Alanin transaminase atau alanin aminotransferase (ALT) dan aspartat transaminase atau aspartat aminotransferase (AST) merupakan dua enzim yang banyak digunakan untuk menguatkan diagnosis adanya kerusakan hati. Enzim ALT lebih spesifik menggambarkan fungsi kerja hati dibandingkan AST (Waldmann, Soni, dan Rhodes, 2008). AST terdapat dalam konsentrasi tinggi pada hati, pankreas, ginjal, paru paru, otot dan sel darah merah. ALT juga ditemukan pada jaringan lain, namun jumlah yang dihasilkan di hati lebih banyak, sehingga dapat secara spesifik menggambarkan fungsi hati. Kadar normal ALT dan AST pada orang dewasa berkisar antara 0-40 IU/L (North-Lewis, 2008). Beberapa enzim lainnya yang dapat digunakan sebagai penanda untuk mengetahui adanya kerusakan hati adalah enzim-enzim golongan hidrogenase seperti

laktat

dehidrogenase

(LDH),

glutamate

dehidrogenase,

isositrat

dehidrogenase, dan malat dehidrogenase. Namun, enzim tersebut jarang digunakan untuk mendeteksi adanya kerusakan hati dan sifatnya kurang sensitif dan spesifik dibandingkan dengan kombinasi ALT dan AST (Hodgson dan Levi, 2000).


13

B. Karbon Tetraklorida Organoleptis dari karbon tetraklorida berupa cairan jernih yang mudah menguap, tidak berwarna dan memiliki bau yang khas. Struktur karbon tetraklorida terdiri dari satu atom C yang mengikat tiga atom Cl (Gambar 3). Berat molekul senyawa ini 153,82 dan bersifat sangat sukar larut dalam air (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995).

Gambar 3. Struktur karbon tetraklorida (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995). Karbon tetraklorida adalah molekul sederhana yang dapat menyebabkan nekrosis hepatik sentrilobular dan perlemakan hati (steatosis). Senyawa ini banyak digunakan dalam penelitian kerusakan hati. Sifat karbon tetraklorida yaitu mudah larut dalam lemak sehingga efek toksik karbon tetraklorida sangat mudah terdistribusi ke seluruh tubuh. Hati menjadi target utama ketoksikan dari karbon tetraklorida dikarenakan enzim P450 paling banyak terdapat pada organ ini, terutama pada bagian sentrilobular. Mayoritas efek hepatotoksik dari karbon tetraklorida berasal dari metabolitnya (Gambar 4). Metabolit selanjutnya diaktivasi oleh sitokrom P450, khususnya sitokrom P450 2E1, sehingga menghasilkan radikal triklorometil yang bersifat toksik (Johnston dan Kroening, 1998). Radikal bebas ini selanjutnya menghasilkan metabolit kloroform akibat penambahan satu atom hidrogen. Produk lainnya yaitu radikal lipid atau radikal


14

thiol, bergantung pada sumber atom hidrogen. Radikal triklorometil dapat juga bereaksi dengan oksigen menyebabkan terjadinya lipid peroksidasi yang menghasilkan ketoksikan terhadap sel hati (Timbrell, 2008).

Gambar 4. Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida (Timbrell, 2008). Peroksidasi lipid dapat menyebabkan kerusakan membran sel dan mitokondria yang menyebabkan keluarnya substansi-substansi yang terdapat pada sitoplasma sel seperti enzim ALT dan AST. Selain itu, gangguan keluarnya lipid juga mengakibatkan penghambatan produksi protein dan sekresi lipoprotein. Hal tersebut berkaitan dengan adanya hambatan pada sintesis dan sekresi lipoprotein yang berfungsi membawa trigliserida meninggalkan hati. Hal inilah yang akhirnya menyebabkan hati mengalami perlemakan (Poli, Gravela, Albano dan Dianzani, 1979). C. Curliv® Produk Curliv® (Soho Industri Pharmacy) memiliki khasiat dan kegunaan sebagai suplemen makanan untuk memelihara kesehatan fungsi hati. Setiap 5 mL Curliv® mengandung ekstrak Silymarin 8,75 mg, Schisandrae


15

Fructus 33,75 mg, Curcuma xanth. Rhizoma 37,5 mg, Liquiritiae Radix 33,75 mg dan vitamin B6 sebesar 0,5 mg. Sediaan Curliv® tersedia dalam bentuk sirup 120 mL per botol. Aturan pakai untuk dewasa yaitu tiga kali sehari, dimana tiap pemakaiannya sebanyak tiga sendok teh (15 mL), sehingga dalam satu hari Curliv® diminum sebanyak 45 mL. Pemberian pada anak-anak yaitu tiga kali sehari, dimana tiap pemberiannya yaitu dua sendok teh (10 mL). Jadi total pemberian pada anak-anak yaitu 30 mL per hari. D. Tanaman Persea americana Mill. 1. Sinonim Persea gratissima Gaertn. f. (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 1978), Laurus persea L, Persea drymifolia Schlecht. and cham, Persea edulis Raf., Persea nubigena, Persea steyermarkii C.K. Allen (Lim, 2012). 2. Nama daerah Avokat, advokat, apokat (Sumatra), adpokat (Melayu), apuket, alpuket (Sunda), apokat, avokat (Jawa) (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 1978).

Gambar 5. Buah Persea americana Mill.


16

3. Taksonomi Kingdom

: Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom

: Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi

: Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisi

: Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas

: Magnoliopsida (berkeping dua / dikotil)

Sub Kelas

: Magnoliidae

Ordo

: Laurales

Famili

: Lauraceae

Genus

: Persea

Spesies

: Persea americana Mill. (Proseanet, 2012)

4. Penyebaran Tanaman P. americana berasal dari Amerika Tengah, tumbuh di daerah tropik dan subtropik dengan curah hujan antara 1.800 mm sampai 4.500 mm tiap tahun. Pada umumnya, tumbuhan ini cocok dengan iklim yang sejuk dan basah. Tumbuhan tidak tahan terhadap suhu rendah maupun tinggi, kelembaban rendah pada saat berbunga dan pada saat pembentukan buah serta angin yang keras. Di Indonesia, tanaman ini tumbuh pada tempat dengan ketinggian antara 1- 1.000 m di atas permukaan laut (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 1978).


17

5. Morfologi Tanaman

P.

americana

merupakan

tanaman

periodik

yang

pertumbuhannya dipengaruhi oleh kondisi lokal tempat tumbuh. Tanaman ini berukuran sedang sampai besar, dengan tinggi mencapai 20 m. Karakteristik daun berupa daun tunggal, tersusun spiral, dengan tepi daun rata. Daun berbentuk elips hingga lanset, bulat telur hingga bulat telur sungsang, panjang daun 5-40 cm dan lebar 3-15 cm, permukaan atas daun diselaputi lilin. Panjang tangkai daun 1.5-5 cm (Proseanet, 2012). Tanaman P. americana memiliki ribuan bunga per tanaman. Kelopak bunganya akan terbuka dalam kurun waktu mingguan atau bulanan. Bentuk bunga berupa tongkol majemuk (malai) yang muncul di ujung cabang. Bunga banci tersusun atas 3 daun mahkota. Perhiasan bunga tersusun atas dua lingkaran, benang sari 9 di dalam 3 lingkaran, kumpulan benang sari di bagian dalam mengeluarkan 2 nektar di bagian dasarnya. Putik terdiri atas satu ruang bakal buah, tangkai kepala putik ramping dengan kepala putik tunggal (simple papillate stigma) (Ospina, 2004). Pada Gambar 5, menggambarkan buah alpukat berukuran besar berdaging dan berair, berbiji tunggal, permukaan buah halus, panjang 7-20 cm. Buah besar dan bulat, dilapisi dua lapisan dan dua kotiledon besar yang melindungi embrio kecil (Proseanet, 2012). 6. Kandungan dan kegunaan Kandungan fitokimia pada P. americana sangat beragam, diantaranya alkanol atau asetogenin alifatik, glikosida terpenoid, turunan cincin furan, flavonoid, dan kumarin. Senyawa alkanol berfungsi sebagai anti-inflamasi.


18

Senyawa turunan cincin furan memiliki aktivitas antibakterial, antifungal dan insektisidal. Beberapa senyawa flavonoid yang terkandung dalam tanaman ini diisolasi dari biji dan daun, memiliki aktivitas antiviral (Ding, et al, 2007). Flavonoid merupakan antioksidan larut air yang sangat kuat dan merupakan penangkap radikal bebas. Flavonoid dapat mencegah kerusakan oksidatif sel, mempunyai aktifitas perlindungan dan anti kanker yang kuat melawan tahaptahap dalam karsinogenesis (Salah, Miller, Pangauga, Bolwell, Rice, dan Evans, 1995). Prinsip fungsi antioksidan adalah menghambat inisiasi atau propagasi dari rantai reaksi oksidasi oleh radikal bebas, sehingga mengurangi terjadinya kerusakan oksidatif (Frankel dan Meyer, 2000). Penelitian Alhassan, et al. (2012) menunjukkan adanya indikasi potensi antidiabetes pada biji alpukat. Selain itu, biji alpukat juga berpotensi sebagai antioksidan berdasarkan penelitian dari Malangngi, dkk (2012). Di Nigeria, ekstrak biji P. americana digunakan untuk mengobati hipertensi. Hal ini kemudian diteliti oleh Anaka, Raymond, dan Stephen (2009) dan diperoleh kesimpulan bahwa ekstrak biji P. americana dapat menurunkan tekanan darah sedangkan ekstrak kulit kayunya digunakan secara tradisional sebagai pengobatan penyakit kulit yang disebabkan oleh parasit di Nigeria (Owolabi, Jaja, dan Coker, 2005). E. Infusa Infusa didefinisikan sebagai sediaan cair yang dibuat dengan mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90°C selama 15 menit (Badan Pengawas Obat dan Makanan, 2010). Infusa dapat dibuat dengan cara


19

mencampur simplisia dengan derajat halus yang sesuai dalam panci dengan air secukupnya. Pemanasan dilakukan di atas penangas air selama 15 menit terhitung sejak mencapai suhu 90°C yang disertai dengan pengadukan. Penyerkaian dilakukan menggunakan kain flannel yang disertai dengan menambahkan air panas secukupnya melalui ampas hingga diperoleh volume infus yang dikehendaki (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995). F. Keterangan Empiris Penelitian ini merupakan penelitian eksploratif untuk mengetahui adanya efek hepatoprotektif dari pemberian jangka panjang infusa biji P. americana pada hati berdasarkan aktivitas serum ALT-AST darah tikus terinduksi karbon tetraklorida.


BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. B. Variabel dan Definisi Operasional 1. Variabel utama a. Variabel bebas. Variabel bebas penelitian ini adalah variasi dosis dalam pemberian infusa biji P. americana. b. Variabel tergantung. Variabel tergantung penelitian ini adalah efek hepatoprotekif infusa biji P. americana. 2. Variabel pengacau a. Variabel pengacau terkendali. Vaiabel pengacau terkendali dalam penelitian ini adalah kondisi hewan uji, yaitu tikus jantan galur Wistar dengan berat badan 150-250 g dan umur 2-3 bulan, frekuensi pemberian infusa biji P. americana Mill satu kali sehari selama enam hari berturut-turut dengan waktu pemberian yang sama, cara pemberian senyawa pada tikus dilakukan secara per oral (infusa P. americana) dan intraperitoneal (karbon tetraklorida), dan bahan uji yang digunakan berupa biji P. americana yang diperoleh dari Padang, Sumatera Barat yang diambil pada bulan Januari 2013. b. Variabel pengacau tak terkendali. Variabel pengacau tak terkendali dalam penelitian ini adalah kondisi patologis dari tikus jantan galur Wistar yang digunakan.

20


21

3. Definisi operasional a. Dosis infusa biji P. americana. Didefinisikan sebagai volume (mL) infusa biji P. americana tiap kg berat badan subjek uji yang digunakan. b. Infusa biji P. americana 8%. Infusa serbuk kering biji P. americana Mill 8% didapatkan dari dengan menginfundasi 8,0 g serbuk kering biji P. americana Mill dalam 100,0 mL air pada suhu 90°C selama 15 menit. c. Efek hepatoprotektif infusa biji P. americana. Didefinisikan sebagai kemampuan infusa biji P. americana Mill untuk melindungi hepar dari hepatotoksin berupa penurunan ALT dan AST. C. Bahan Penelitian Penelitian ini menggunakan bahan uji sebagai berikut: 1. Hewan uji yang digunakan berupa tikus jantan galur Wistar dengan umur 2-3 bulan dan berat badan 150 hingga 250 g yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2. Serbuk biji P. americana Mill. yang diperoleh dari Padang, Sumatera Barat pada bulan Januari 2013. 3. Bahan hepatotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida (Merck®) yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 4. Kontrol negatif berupa olive oil (Bertoli®) yang diperoleh dari Supermarket Mirota Kampus, Yogyakarta. 5. Kontrol serum Cobas (PreciKontrol ClimChem Multi 1) Roche/ Hitachi Analyzer


22

6. Pelarut untuk infusa dengan aquadest yang diperoleh dari Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 7. Blanko pengujian ALT dan AST menggunakan aqua bidestilata yang diproduksi dari Laboratorium Kimia Analisis dan Instrumental Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 8. Reagen ALT Reagen serum yang digunakan adalah reagen ALT Dyasis. Komposisi dan konsentrasi dari reagen ALT adalah sebagai berikut. Tabel I. Komposisi dan konsentrasi reagen serum ALT Komposisi R1 :

R2 :

TRIS

pH 7,15

Konsentrasi 140 mmol/L

L-Alanine

700 mmol/L

LDH (lactate dehydrogenase)

≥2300 U/L

2-Oxoglutarate

NADH Pyridoxal-5 phosphate FS : Good’s buffer Pyridoxal-5-phosphate

85 mmol/L 1 mmol/L pH 9,6

100 mmol/L 13 mmol/L

9. Reagen AST Reagen serum yang digunakan adalah reagen AST Dyasis. Komposisi dan konsentrasi dari reagen AST adalah sebagai berikut.


23

Tabel II. Komposisi dan konsentrasi reagen serum AST Komposisi TRIS L-Aspartate MDH (malate dehydrogenase) LDH (lactate dehydrogenase) R2 : 2-Oxoglutarate NADH Pyridoxal-5 phosphate FS : Good’s buffer Pyridoxal-5-phosphate

pH 7,65

R1 :

Konsentrasi 140 mmol/L 320 mmol/L ≥800 U/L ≥ 1200 U/L 65 mmol/L 1 mmol/L

pH 9,6

100 mmol/L 13 mmol/L

D. Alat dan Instrumen Penelitian 1. Alat pembuatan infusa biji P. americana Panci lapis enamel, termometer, stopwatch, Beker glass, gelas ukur, cawan porselen, batang pengaduk, kompor listrik, timbangan analitik, dan kain flannel. 2. Alat uji aktivitas ALT-AST Peralatan gelas, seperti Beker glass, labu ukur, batang pengaduk, gelas ukur, tabung reaksi, timbangan analitik, spuit injeksi intraperitoneal, pipa kapiler, mikro-vitalab 200, stopwatch, vortex, sentrifuge, Eppendorf. E. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi serbuk biji P. americana Determinasi biji P. americana dilakukan dengan cara mencocokkan karakteristik organoleptis dan mikroskopis serbuk biji yang akan digunakan dengan serbuk biji P. americana Mill. yang telah diidentifikasi sebelumnya (standar). Determinasi dilakukan oleh Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si, dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.


24

2. Pengumpulan bahan Bahan uji yang digunakan adalah biji P. americana yang sudah dalam bentuk serbuk berwarna kecoklatan, diperoleh dari wilayah Padang, Sumatera Barat pada bulan Januari 2013. 3. Penetapan kadar air serbuk kering biji P. americana Serbuk kering biji P. americana yang sudah diayak dengan ayakan no. 40, selanjutnya dimasukkan ke dalam alat moisture balance ± 5 g dan diratakan. Bobot serbuk kering biji P. americana tersebut ditimbang sebagai bobot serbuk sebelum dilakukan pemanasan (bobot I). Serbuk dipanaskan pada suhu 105°C selama 15 menit, kemudian dilakukan penimbangan kembali bobot serbuk biji P. americana sebagai bobot serbuk setelah pemanasan (bobot II). Selisih bobot I dan bobot II yang diperoleh merupakan kadar air serbuk biji P. americana. 4. Pembuatan infusa biji P. americana 8% Serbuk kering biji P. americana ditimbang sebanyak 8 g dan dibasahi dengan aquadest sebanyak dua kali berat serbuk yaitu 16 mL. Sebanyak 100 mL pelarut aquadest ditambahkan ke dalam panci enamel berisi serbuk yang telah dibasahi tersebut. Pemanasan dilakukan pada suhu 90°C dan dijaga tetap dalam suhu tersebut selama 15 menit. Campuran kemudian diambil, diperas menggunakan kain flannel dan ditambahkan aquadest hingga didapatkan volume perasan 100,0 mL infusa biji P. americana. 5. Penetapan dosis infusa biji P. americana Dasar penetapan peringkat dosis adalah bobot tertinggi tikus dan pemberian cairan secara intraperitonial yaitu 5 mL. Maksimal pemberian


25

intraperitonial untuk tikus 5 mL (Nebendahl, 2000). Penetapan dosis tertinggi infusa biji P. americana adalah sebagai berikut. D x BB = C x V D x 350 gBB = 8 g/100 mL x 5 mL D = 1142,86 mg/kgBB Penentuan dosis rendah infusa biji P. americana didasarkan pada keterangan empiris penggunaan rebusan serbuk biji P. americana di masyarakat, dan untuk dosis tengah berdasarkan faktor kelipatan dari dua dosis tersebut. Adapun faktor kelipatan yang digunakan sebesar 1,78. Dengan demikian, dosis yang digunakan dalam penelitian ini yaitu 360,71; 642,06; 1142,86 mg/kgBB. 6. Pembuatan larutan karbon tetraklorida konsentrasi 50% Pembuatan larutan tetraklorida dengan konsentrasi 50% berdasarkan penelitian Janakat dan Al-Merie (2002), dilakukan dengan mencampurkan olive oil dan karbon tetraklorida masing-masing sebanyak 12,5 mL dengan perbandingan 1:1. 7. Penetapan dosis kontrol positif Curliv® Penetapan dosis Curliv® berdasarkan informasi cara penggunaan di masyarakat yang tertera pada kemasan. Dosis untuk manusia 70 kgBB/hari sebesar 45 mL. Dosis untuk tikus setelah dikonversi dari dosis manusia menjadi 4,05 mL/kgBB. Dosis Curliv® untuk manusia 70 kgBB

= 45 ml

Dosis untuk tikus 200 gBB

= 45 ml/70 kgBB x 0,018 = 0,81 ml/200gBB = 4,05 ml/kgBB


26

8. Uji pendahuluan a. Penetapan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida. Penetapan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida ini mengacu pada penelitian yang dilakukan oleh Janakat dan Al-Merie (2002) yaitu sebesar 2 mL/kgBB yang diberikan secara intraperitoneal (i.p). Pada dosis ini dilaporkan telah dapat menyebabkan kerusakan sel-sel hati pada tikus jantan galur Wistar yang ditandai dengan peningkatan ALT dan AST, namun belum menyebabkan kematian. Windrawati (2013) melaporkan induksi CCl4 2 mL/kgBB mampu meningkatkan ALT dan AST tiga kali dari kadar awalnya. Penelitian Rajendran, et al (2009) menginformasikan peningkatan kadar ALT dan AST akibat induksi CCl4 sebesar 2 kali dari kadar awalnya juga menandakan telah terjadinya kerusakan sel hati tikus. b. Penetapan waktu pencuplikan darah. Berdasarkan hasil penelitian Janakat dan Al-Merie (2002) dan Windrawati (2013) kenaikan serum ALT dan AST akan terjadi pada waktu 24 jam dan terjadi penurunan pada waktu 48 jam setelah pemejanan karbon tetraklorida. Pada penelitian ini dilakukan orientasi yang bertujuan untuk melihat profil kenaikan ALT dan AST serum. Orientasi dilakukan dengan tiga kelompok perlakuan waktu, dimana kelompok I-III masingmasing menggunakan cuplikan darah yang diambil pada 0, 24, dan 48 jam setelah pemejanan karbon tetraklorida. Setiap kelompok terdiri dari 5 ekor tikus dan darah diambil melalui sinus orbitalis mata. Darah yang telah diambil, kemudian diukur aktivitas serum ALT dan AST pada setiap kelompok perlakuan waktu tersebut.


27

9. Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji Hewan uji yang dibutuhkan sebanyak tiga puluh lima ekor tikus jantan yang dibagi secara acak dalam tujuh kelompok perlakuan masing-masing sejumLah lima ekor tikus. Kelompok I merupakan kelompok hepatotoksin, diberikan campuran karbon tetraklorida dan olive oil dengan perbandingan volume 1:1 dan dosis 2,0 mL/kg BB secara intraperitonial. Kelompok II merupakan kelompok kontrol negatif, diberikan olive oil dengan dosis 2 mL/kgBB secara intraperitonial. Kelompok III merupakan kontrol infusa, diberi infusa biji P. americana dosis 1142,86 mg/kgBB selama enam hari berturut-turut secara per oral. Kelompok IV merupakan kontrol positif (Curliv®) dosis 4,05 mL/kgBB selama enam hari berturut-turut secara per oral dan pada hari ketujuh diberikan larutan karbon tetraklorida 2 mL/kgBB secara intraperitonial. Kelompok V, VI dan VII merupakan kelompok perlakuan yang diberi infusa biji P. americana dengan tiga peringkat dosis yaitu 360,71; 642,06; 1142,86 mg/kgBB selama enam hari berturut-turut. Pada hari ketujuh kelompok V-VII diberi larutan karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB secara intraperitonial. Dua puluh empat jam kemudian diambil darahnya melalui sinus orbitalis mata, lalu diukur kadar serum ALT dan AST. 10. Pembuatan serum Darah diambil melalui bagian sinus orbitalis mata tikus, kemudian ditampung dalam tabung Eppendorf. Darah didiamkan selama ±15 menit, selanjutnya disentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 10.000 rpm. Lapisan yang diambil yaitu lapisan supernatan yang terletak pada bagian atas.


28

11. Penetapan aktivitas serum kontrol, serum ALT dan serum AST Alat yang digunakan untuk menganalisis aktivitas serum ALT dan AST adalah Mikrolab 200 Merck®. Aktivitas enzim dinyatakan dengan satuan U/L. pengukuran aktivitas serum ALT dan AST dilakukan di Laboratorium Biokimia Fisiologi Manusia, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. a. Penetapan aktivitas serum kontrol. Penetapan ini bertujuan untuk validitas dan reliabilitas alat yang digunakan.. Analisis serum kontrol dilakukan dengan cara mencampur 100 µL serum kontrol dengan 1000 µL reagen I, kemudian divortex selama 5 detik dan didiamkan selama 2 menit. Reagen II dicampurkan sebanyak 250 µL, kemudian divortex selama 5 detik dan dibaca serapannya setelah 1 menit (rentang nilai ALT = 26,2-41,8 U/L dan AST = 35,456,6 U/L). b. Penetapan aktivitas serum ALT dan AST. Analisis serum ALT dilakukan dengan cara mencampur 100 µL serum dengan 1000 µL reagen I, kemudian divortex selama 5 detik dan didiamkan selama 2 menit. Reagen II dicampurkan sebanyak 250 µL, kemudian divortex selama 5 detik dan dibaca serapannya setelah 1 menit. Analisis serum AST dilakukan dengan cara mencampur 100 µL serum dengan 1000 µL reagen I, kemudian divortex selama 5 detik dan didiamkan selama 2 menit. Reagen II dicampurkan sebanyak 250 µL, kemudian divortex selama 5 detik dan dibaca serapannya setelah 1 menit. F. Tata Cara Analisis Hasil Pengujian data aktivitas serum ALT-AST untuk lebih dari dua kelompok dilakukan menggunakan Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui distribusi data


29

dan analisis varian untuk melihat homogenitas varian antar kelompoknya sebagai syarat analisis parametrik. Jika data terdistribusi normal dan variansi data homogen, maka dilanjutkan dengan analisis variansi pola searah (ANOVA one way) dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelmpok. Pengujian dilanjutkan menggunakan uji Scheffe untuk melihat perbedaan antar kelompok bermakna (signifikan) (p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan) (p>0,05). Jika data memiliki distribusi tidak normal dilakukan analisis dengan Kruskal Wallis untuk mengetahui perbedaan aktivitas serum ALTAST antar kelompok. Pengujian dilanjutkan menggunkaan uji Mann Whitney untuk melihat kebermaknaan perbedaan tiap kelompok. Pengujian data aktivitas serum ALT-AST untuk dua kelompok berpasangan dilakukan menggunakan Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui distribusi data dan analisis varian untuk melihat homogenitas variansi data antar kelompoknya sebagai syarat analisis parametrik. Jika data terdistribusi normal maka dilanjutkan dengan uji T berpasangan untuk melihat kebermaknaan dari perbedaan yang dihasilkan. Perhitungan persen hepatoprotektif terhadap hepatotoksin karbon tetraklorida diperoleh dengan rumus: (Aktivitas ALT CCl − aktivitas kontrol olive oil) − (Aktivitas ALT perlakuan − aktivitas kontrol olive oil) x 100% (Aktivitas ALT kontrol CCl − aktivitas kontrol olive oil)

Daya hepatoprotektif kelompok perlakuan infusa biji P. americana terhadap kontrol positif Curliv® diperoleh dengan rumus: (Aktivitas ALT CCl − aktivitas kontrol ®) − (Aktivitas ALT perlakuan − aktivitas kontrol (Aktivitas ALT kontrol CCl − aktivitas kontrol ®)

®)

x 100


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui pengaruh pemberian dan besar dosis efektif hepatoprotektif infusa biji P. americana pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida dengan melihat aktivitas serum ALT dan AST. Serangkaian pengujian dilakukan untuk mencapai tujuan tersebut. A. Penyiapan Bahan 1. Hasil determinasi serbuk Determinasi serbuk bertujuan untuk memastikan bahwa serbuk yang digunakan dalam penelitian ini adalah serbuk biji P. americana, sehingga tidak terjadi kesalahan dalam penyiapan bahan yang akan digunakan. Determinasi dilakukan

di

Laboratorium

Farmakognosi-Fitokimia,

Fakultas

Farmasi,

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Proses determinasi ini dilakukan dengan cara mencocokkan kesamaan organoleptis dan mikroskopis dari serbuk yang digunakan dalam penelitian ini dengan serbuk standar biji P. americana (Lampiran 4). Hasil determinasi membuktikan bahwa memang benar serbuk yang digunakan dalam penelitian ini adalah serbuk biji P. americana. 2. Penetapan kadar air serbuk biji P. americana Serbuk yang baik dapat terpenuhi bila kadar airnya masuk dalam persyaratan yang telah ditentukan Farmakope Indonesia IV yaitu kurang dari 10%. Penetapan kadar air serbuk biji P. americana menggunakan metode Gravimetri dengan alat moisture balance. Serbuk yang akan diukur kadar airnya dimasukkan

30


31

ke dalam alat moisture balance dan dipanaskan pada suhu 105°C. Pencatatan bobot serbuk dilakuan tiap lima menit hingga menit ke-15, dimana pada menit ini bobot serbuk dianggap sudah tetap. Dari hasil pengukuran tersebut, serbuk biji P. americana memiliki kadar air sebesar 7,4% sehingga dapat dikatakan telah memenuhi syarat serbuk yang baik. B. Uji Pendahuluan 1. Penentuan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida Dosis hepatotoksik karbon tetraklorida merupakan dosis dimana senyawa model karbon tetraklorida mampu menyebabkan kerusakan hati ringan berupa steatosis pada tikus. Adanya kerusakan hati ditandai dengan meningkatnya aktivitas ALT dan AST tikus akibat induksi karbon tetraklorida. Menurut Ziemmerman (1999) dan Windrawati (2013) menyebutkan bahwa karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB telah mampu meningkatkan aktivitas ALT kurang lebih sebesar tiga kali dan AST tikus empat kali lipat dari semula. Penelitian Janakat dan Al-Merie (2002) serta Windrawati (2013) menyebutkan bahwa karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB telah mampu menginduksi terjadinya hepatotoksik. Berdasarkan hasil studi pustaka yang dilakukan, dosis senyawa karbon tetraklorida yang digunakan sebesar 2 mL/kgBB. 2. Penentuan waktu pencuplikan darah Penentuan waktu pencuplikan darah dilakukan untuk mengetahui waktu yang menunjukkan efek hepatotoksik yang maksimal dari senyawa model karbon tetraklorida (CCl4). Efek hepatotoksik ditandai dengan peningkatan aktivitas serum ALT dan AST tikus pada selang waktu tertentu setelah penginduksian


32

senyawa model CCl4 secara intraperitonial. Senyawa CCl4 dosis 2 mL/kgBB diinduksikan dengan selang waktu pencuplikan darah pada 0, 24 dan 48 jam. Data aktivitas serum ALT dan AST tikus pada tiap selang waktu pencuplikan darah dapat dilihat pada Tabel III. Tabel III. Purata ± SE aktivitas serum ALT dan AST tikus pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB (n=3) Selang Waktu (jam) 0 24 48

Purata Aktivitas serum ALT ± SE (U/L) 68,0 ± 9,6 203,3 ± 15,9 54,7 ± 5,5

Purata Aktivitas serum AST ± SE (U/L) 88,3 ± 3,8 446,3 ± 19,3 147,3 ± 7,5

Gambar 6. Diagram batang rata-rata aktivitas serum ALT tikus pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB

Hasil analisis statistik serum ALT menunjukkan distribusi data normal dan variansi data homogen sehingga dapat dianalisis menggunakan analisis variansi satu arah. Hasil analisis variansi satu arah dari data serum ALT yang diperoleh menunjukkan nilai signifikansi sebesar 0,000 (p<0,05). Hal ini menunjukkan terdapat perbedaan pada ketiga kelompok waktu pencuplikan darah.


33

Kebermaknaan perbedaan antar kelompok tersebut selanjutnya dapat diketahui dengan uji Scheffe, dimana hasil analisisnya dapat dilihat pada Tabel IV. Tabel IV. Hasil uji Scheffe aktivitas serum ALT tikus pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Selang Waktu (jam) 0 24 Jam ke 0 BB Jam ke 24 BB Jam ke 48 BTB BB Keterangan: BB = Berbeda bermakna (p < 0,005) BTB = Berbeda tidak bermakna (p > 0,05)

48 BTB BB

Gambar 7. Diagram batang rata-rata aktivitas serum AST tikus pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB

Hasil analisis statistik data serum AST memiliki distribusi data normal dan variansi data homogen. Data selanjutnya dianalisis dengan analisis variansi satu arah dan diperoleh signifikansinya sebesar 0,000 (p<0,05). Hasil ini menunjukkan bahwa terdapat perbedaan pada ketiga kelompok pada selang waktu pencuplikan. Tahap berikutnya dilakukan analisis menggunakan uji Scheffe untuk mengetahui kebermaknaan dari perbedaan antar kelompok tersebut.


34

Tabel V. Hasil uji Scheffe aktivitas serum AST tikus pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Selang Waktu (jam) Jam ke 0 Jam ke 0 Jam ke 24 BB Jam ke 48 BB Keterangan: BB = Berbeda bermakna (p < 0,005)

Jam ke 24 BB

Jam ke 48 BB BB

BB BTB = Berbeda tidak bermakna (p > 0,05)

Tabel III menunjukkan aktivitas serum ALT yang paling tinggi terdapat pada jam ke-24 setelah pemberian CCl4, dimana aktivitasnya mencapai 203,3 ± 15,9 U/L. Aktivitas serum AST juga meningkat pada jam ke-24 sebesar 446,3 ± 19,3 U/L (Tabel III). Dari Gambar 6 dan Gambar 7 menunjukkan peningkatan aktivitas serum ALT dan AST yang paling signifikan terjadi pada jam ke-24, dan pada jam ke-48 telah terjadi penurunan aktivitas kedua serum tersebut. Aktivitas serum ALT dan AST tikus pada jam ke-24 memiliki perbedaan yang bermakna terhadap waktu jam ke-0 dan jam ke-48 yang ditunjukkan oleh Tabel IV dan Tabel V. Aktivitas serum ALT pada jam ke-0 memiliki perbedaan yang tidak bermakna terhadap jam ke-48. Artinya, aktivitas ALT pada jam ke-48 telah kembali normal seperti pada jam ke-0. Aktivitas serum AST pada jam ke-0 memiliki perbedaan yang bermakna terhadap jam ke-48, dimana hal ini menunjukkan bahwa telah terjadi penurunan aktivitas serum AST namun aktivitasnya belum mencapai keadaan semula. Berdasarkan aktivitas serum ALT dan AST dari hasil penelitian ini, CCl4 memiliki efek hepatotoksik yang paling tinggi pada jam ke-24, sehingga waktu pencuplikan darah yang digunakan dalam penelitian ini adalah jam ke-24 setelah pemberian senyawa CCl4.


35

3. Penetapan lama pemejanan infusa biji P. americana Penelitian Windrawati (2013) mengenai efek hepatoprotektif ekstrak metanol:air (50:50) daun Macaranga tanarius L. dan Manuel (2010) mengenai efek hepatoprotektif jus buah papaya menjelaskan pemberian praperlakuan ekstrak metanol:air Macaranga tanarius L. dan jus buah papaya dilakukan selama enam hari berturut-turut, dan pada hari ketujuh diinduksikan senyawa model hepatotoksin. Maka dari itu, penelitian ini menggunakan metode lama pemberian senyawa uji yang sama dengan pustaka tersebut agar hasil penelitian yang diperoleh dapat dibandingkan dengan penelitian hepatoprotektif yang telah dilakukan sebelumnya. 4. Penetapan dosis infusa biji P. americana Dosis infusa P. americana yang digunakan dalam penelitian ini ditetapkan berdasarkan konsentrasi maksimal infusa yang dapat dibuat serta volume maksimal yang mampu diberikan pada hewan uji secara peroral. Dosis yang diperoleh berdasarkan konsentrasi maksimal tersebut selanjutnya ditetapkan sebagai dosis tinggi infusa P. americana. Berdasarkan orientasi yang dilakukan, didapatkan dosis tinggi infusa P. americana sebesar 1142,86 mg/kgBB. Dosis terendah didasarkan pada keterangan empiris jumlah penggunaan rebusan serbuk biji P. americana di masyarakat, dimana dosis rendah infusa P. americana yang diperoleh sebesar 360,71 mg/kgBB. Penetuan dosis tengah infusa merupakan faktor kelipatan dari dosis tinggi dan dosis rendah infusa P. americana, dimana dosis tengah yang diperoleh sebesar 642,06 mg/kgBB.


36

C. Hasil Uji Efek Hepatoprotektif Infusa Biji P. americana Parameter

utama

yang

digunakan

untuk

mengevaluasi

efek

hepatoprotektif infusa biji P. americana yaitu penurunan aktivitas ALT akibat praperlakuan infusa biji P. americana. Aktivitas serum AST digunakan sebagai data pendukung dalam mengevaluasi efek hepatoprotektif yang dihasilkan. Aktivitas serum ALT dan AST dinyatakan dalam satuan U/L yang disajikan dalam bentuk purata ± SE (Tabel VI, Gambar 8 dan Gambar 9). Data aktivitas serum ALT dianalisis uji Kolmogorov-Smirnov menunjukkan bahwa distribusi data normal namun variansi data tidak homogen yang ditunjukkan oleh signifikansi pada uji Levene test 0,007 (p<0,05). Data tidak memenuhi syarat untuk dianalisis dengan analisis variansi satu arah sehingga dilakukan analisis menggunakan uji Kruskal Wallis untuk mengetahui perbedaan antar kelompok perlakuan. Hasil signifikansi dari uji tersebut sebesar 0,000 (p<0,05) yang menandakan adanya perbedaan antar kelompok perlakuan. Kebermaknaan perbedaan antar kelompok tersebut selanjutnya dapat diketahui dengan uji MannWhitney pada Tabel VII. Uji Kolmogorov-Smirnov menunjukkan bahwa distribusi data AST normal, namun memiliki variansi data tidak homogen yang ditunjukkan oleh nilai signifikansi pada uji Levene’s sebesar 0,010 (p<0,05). Data selanjutnya dapat dianalisis dengan analisis nonparametrik Kruskal Wallis untuk mengetahui adanya perbedaan antar kelompok perlakuan. Nilai signifikansi yang diperoleh dari uji tersebut sebesar 0,000 (p<0,05), dimana menunjukkan adanya perbedaan antar


37

kelompok perlakuan. Kebermaknaan perbedaan antar kelompok tersebut selanjutnya dapat diketahui dengan uji Mann-Whitney pada Tabel VIII. Tabel VI. Purata ± SE aktvitas serum ALT dan AST tikus praperlakuan infusa biji P. americana terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB (n=5)

Kelompok

I II III

Perlakuan Kontrol hepatotoksin CCl4 2 mL/kgBB Kontrol negatif olive oil 2 mL/ kgBB IBPA 1142,86 mg/kgBB

Purata aktivitas serum ALT ± SE (U/L)

Purata aktivitas serum AST ± SE (U/L)

Efek Hepatoprotektif (%)a)

Daya Hepatoprotektif (%)b)

183,2 ± 5,1

476,8 ± 14,3

0

-

47,6 ± 2,0

60,2 ± 2,4

100,0

-

46,6 ± 0,8

62,8 ± 1,9

-

-

®

Kontrol positif Curliv 4,05 377,0 ± 105,4 ± 7,4 57,4 100 mL/kgBB + CCl4 2 mL/kgBB 15,3 IBPA 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 V 49,2 ± 3,5 100,4 ± 5,3 98,8 172,2 mL/kgBB IBPA 642,06 mg/kgBB + CCl4 2 VI 99,8 ± 1,8 185,8 ± 14,2 61,5 107,2 mL/kgBB IBPA 1142,86 mg/kgBB + CCl4 2 VII 65,2 ± 3,9 148,2 ± 9,9 87,2 151,7 mL/kgBB Keterangan: IBPA = Infusa biji P. americana a) Efek hepatoprotektif diperoleh dari penurunan aktivitas ALT pada kelompok perlakuan b) Daya hepatoprotektif diperoleh dari penurunan aktivitas ALT pada kelompok perlakuan IBPA dibandingkan dengan penurunan aktivitas ALT pada kontrol Curliv® IV

Gambar 8. Diagram batang rata-rata aktivitas serum ALT tikus praperlakuan infusa biji P. americana satu kali sehari selama enam hari berturut-turut terinduksi karbon tetraklorida


38

Tabel VII. Hasil uji Mann-Whitney aktivitas serum ALT tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada kelompok perlakuan

Kelompok Perlakuan

Kontrol hepatotok sin CCl4 2 mL/kgBB

Kontrol hepatotoksin CCl4 2 mL/kgBB Kontrol negatif olive oil 2 mL/ BB kgBB IBPA 1142,86 BB mg/kgBB Kontrol positif Curliv® 4,05 BB mL/kgBB CCl4 + 2 mL/kgBB IBPA 360,71 mg/kgBB + CCl4 BB 2 mL/kgBB IBPA 642,06 mg/kgBB + CCl4 BB 2 mL/kgBB IBPA 1142,86 mg/kgBB + CCl4 BB 2 mL/kgBB Keterangan: BB = Berbeda bermakna (p<0,05) IBPA = Infusa biji P. americana

Kontrol negatif olive oil 2 mL/ kgBB

BB

IBPA 1142,86 mg/kgBB

Kontrol positif Curliv® 4,05 mL/kgBB + CCl4 2 mL/kgBB

IBPA 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 mL/kgBB



BB

BB

BB

BB

BB

BTB

BB

BTB

BB

BB

BB

BTB

BB

BB

BB

BTB

BB

BB

BB

BTB

BB

BB

BTB

BTB

BB

BB

BB

BTB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BTB = Berbeda tidak bermakna (p>0,05)

Gambar 9. Diagram batang rata-rata aktivitas serum AST tikus praperlakuan infusa biji P. americana satu kali sehari selama enam hari berturut-turut terinduksi karbon tetraklorida


39

Tabel. VIII. Hasil uji Mann-Whitney aktivitas serum AST tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada kelompok perlakuan

Kelompok Perlakuan

Kontrol hepatotoksi n CCl4 2 mL/kgBB

Kontrol negative olive oil 2 mL/ kgBB

Kontrol hepatotoksin BB CCl4 2 mL/kgBB Kontrol negative olive BB oil 2 mL/ kgBB IBPA 1142,86 BB BTB mg/kgBB Kontrol positif Curliv® 4,05 mL/kgBB + BB BB CCl4 2 mL/kgBB IBPA 360,71 mg/kgBB + BB BB CCl4 2 mL/kgBB IBPA 642,06 mg/kgBB + BB BB CCl4 2 mL/kgBB IBPA 1142,86 mg/kgBB + BB BB CCl4 2 mL/kgBB Keterangan: BB = Berbeda bermakna (p<0,05) IBPA = Infusa biji P. americana

IBPA 1142,86 mg/kgB B

Kontrol positif Curliv® 4,05 mL/kgBB + CCl4 2 mL/kgBB




BB

BB

BB

BB

BB

BTB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BTB

BTB

BTB = Berbeda tidak bermakna (p>0,05)

1. Kontrol negatif olive oil dosis 2 mL/kgBB Pengukuran kadar ALT dan AST pada kontrol negatif olive oil bertujuan untuk memastikan bahwa olive oil sebagai pelarut dari karbon tetraklorida (CCl4) tidak memberikan pengaruh terhadap serum ALT dan AST tikus. Dosis olive oil yang digunakan yaitu 2 mL/kgBB sesuai dengan dosis CCl4. Hal ini bertujuan untuk memastikan bahwa peningkatan aktivitas serum ALT dan AST murni


40

disebabkan oleh hepatotoksin CCl4 dan bukan olive oil. Aktivitas serum ALT dan AST pada jam ke-0 selanjutnya dibandingkan dengan aktivitas kedua serum tersebut pada jam ke-24. Aktivitas serum ALT dan serum AST kontrol negatif olive oil pada jam ke-0 berturut-turut sebesar 41,6 ± 1,1 U/L dan 50,2 ± 2,2 U/L (Tabel IX). Aktivitas serum ALT dan AST pada jam ke-24 berturut-turut sebesar 47,6 ± 2,0 dan 60,2 ± 2,4 (Tabel IX). Data aktivitas serum ALT dan AST pada jam ke-0 dianalisis menggunakan analisis variansi satu arah yang dilanjutkan dengan uji T Berpasangan untuk mengetahui kebermaknaan dari perbedaan yang dimiliki. Tabel X menunjukkan kedua kelompok memiliki perbedaan yang bermakna (p<0,05). Analisis statistik menyatakan bahwa olive oil sebagai pelarut CCl4 memberikan pengaruh terhadap aktivitas serum ALT dan AST. Namun, aktivitas kedua serum pada kelompok kontrol negatif olive oil masih termasuk ke dalam range normal serum ALT dan AST tikus. Menurut Pilichos, dkk (cit., Hastuti, 2008) kadar normal serum AST dan ALT pada tikus putih berkisar antara 19,368,9 U/L dan 29,8-77,0 U/L. Girindra, dkk (cit., Hastuti, 2008), menyatakan bahwa kadar normal AST dan ALT tikus putih berturut-turut 45,7-80,8 U/L dan 17-30,2 U/L. Berdasarkan hal tersebut, olive oil sebagai pelarut CCl4 tidak memberikan pengaruh menimbulkan hepatotoksik pada hewan uji. Kelompok kontrol olive oil 2 mL/kgBB selanjutnya dijadikan dasar nilai aktivitas serum ALT dan AST normal dalam penelitian ini.


41

Tabel IX. Purata ± SE aktvitas serum ALT dan AST tikus setelah pemberian olive oil dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0 dan 24 jam (n=5) Selang waktu (jam) 0 24

Purata aktivitas serum ALT ± SE (U/L) 41,6 ± 1,1 47,6 ± 2,0

Purata aktivitas serum AST ± SE (U/L) 50,2 ± 2,2 60,2 ± 2,4

Tabel X. Hasil uji T berpasangan aktivitas serum ALT dan AST tikus setelah pemberian olive oil dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0 dan 24 jam Selang Waktu (jam) Jam ke-0 Jam ke-24

Aktivitas serum ALT Jam ke-0 Jam ke-24 BB BB

Aktivitas serum AST Jam ke-0 Jam ke-24 BB BB

Gambar 10. Diagram batang rata-rata aktivitas serum ALT tikus setelah pemberian olive oil dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0 dan 24 jam

Gambar 11. Diagram batang rata-rata aktivitas serum AST tikus setelah pemberian olive oil dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0 dan 24 jam


42

2. Kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Karbon tetraklorida (CCl4) pada dosis tertentu mampu menginduksi terjadinya hepatotoksik. Penelitian Janakat dan Al-Merie (2002) melaporkan bahwa CCl4 dosis 2 mL/kgBB secara intraperitonial pada tikus mampu menginduksi terjadinya kerusakan hati. Pengukuran aktivitas ALT dan AST pada kontrol hepatotoksin CCl4 bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian senyawa CCl4 dosis 2 mL/kgBB pada sel hati tikus. Pengukuran dilakukan dua puluh empat jam setelah pemberian hepatotoksin. Aktivitas serum ALT kontrol hepatotoksin CCl4 dosis 2 mL/kgBB sebesar 183,2 ± 5,1 U/L. Pada kelompok kontrol olive oil 2 mL/kgBB memiliki aktivitas serum ALT sebesar 47,6 ± 2,0 U/L. Kedua kelompok tersebut selanjutnya dianalisis menggunakan uji Mann-Whitney dan menunjukkan perbedaan yang bermakna (Tabel VII). Nilai aktivitas serum AST kontrol hepatotoksin CCl4 dosis 2 mL/kgBB sebesar 476,8 ± 14,3 U/L dan kontrol negatif olive oil sebesar 60,2 ± 2,4 U/L (Tabel VI). Kedua kelompok tersebut memiliki perbedaan yang bermakna setelah dilakukan analisa menggunakan uji MannWhitney pada Tabel VIII. Menurut Ziemmerman (1999), peningkatan aktivitas serum ALT yang mencapai tiga kali lipat dan serum AST mencapai empat kali lipat terhadap nilai normal mengindikasikan terjadinya kerusakan hati ringan steatosis. Aktivitas serum ALT dilaporkan meningkat kurang lebih sebanyak tiga kali lipat dan AST empat kali lipat akibat pemberian CCl4 dosis 2 mL/kgBB pada penelitian Windrawati (2013).


43

Hasil pengukuran aktivitas serum ALT dan AST dalam penelitian ini juga telah menunjukkan terjadinya kerusakan hati akibat pemberian CCl4 dosis 2 mL/kgBB. Hal tersebut ditandai dengan meningkatnya aktivitas serum ALT kontrol hepatotoksin CCl4 dosis 2 mL/kgBB kurang lebih sebesar tiga kali lipat terhadap kontrol negatif olive oil 2 mL/kgBB (Tabel VI dan Gambar 8). Peningkatan aktivitas serum ALT merupakan parameter utama yang menandakan terjadinya kerusakan hati. Begitu pula dengan aktivitas serum AST yang merupakan parameter pendukung terjadinya kerusakan hati, juga mengalami peningkatan kurang lebih sebesar tujuh kali lipat terhadap kelompok kontrol negatif (Tabel VI dan Gambar 9).

3. Kontrol infusa biji P. americana dosis 1142,86 mg/kgBB Pengujian kontrol infusa P. americana dilakukan untuk memastikan apakah pemberian infusa P. americana memiliki pengaruh terhadap aktivitas serum ALT dan AST hewan uji tanpa pemberian hepatotoksin CCl4 dosis 2 mL/kgBB. Dosis yang digunakan untuk kelompok kontrol infusa P. americana adalah peringkat dosis infusa tertinggi yang digunakan dalam penelitian ini yaitu sebesar 1142,86 mg/kgBB. Penggunaan dosis tertinggi diharapkan mampu mewakili kelompok praperlakuan infusa biji P. americana dari dosis terendah 360,71 mg/kgBB hingga dosis tertinggi 1142,86 mg/kgBB. Pada kelompok ini diperoleh aktivitas serum ALT dan AST masing-masing sebesar 46,6 ± 0,8 U/L dan 62,8 ± 1,9 U/L (Tabel VI). Data aktivitas serum ALT dan AST kontrol infusa biji P. americana diuji menggunakan analisis variasi satu arah yang dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney (Tabel VII dan Tabel VIII).


44

Aktivitas serum ALT kontrol infusa biji P. americana 1142,86 mg/kgBB (46,6 ± 0,8 U/L) dibandingkan dengan kontrol negatif olive oil 2 mL/kgBB (47,6 ± 2,0 U/L) memiliki perbedaan yang tidak bermakna. Begitu juga dengan kadar AST kontrol infusa biji P. americana 1142,86 mg/kgBB (62,8 ± 1,9 U/L) dengan kontrol negatif olive oil 2 mL/kgBB (60,2 ± 2,4 U/L). Hal ini menggambarkan bahwa aktivitas serum ALT dan AST pada kedua kelompok tersebut berada dalam range tikus normal. Dengan demikian, pemberian infusa biji P. americana 1142,86 mg/kgBB tidak memberikan pengaruh hepatotoksik terhadap sel hati tikus. 4. Kontrol positif Curliv® dosis 4,05 mL/kgBB Uji kontrol positif Curliv® bertujuan untuk memastikan bahwa Curliv® dosis 4,05 mL/kgBB memiliki kemampuan proteksi pada hati terhadap karbon tetraklorida (CCl4). Aktivitas serum ALT (Tabel VII dan Gambar 8) dan AST (Tabel VIII dan Gambar 9) kelompok kontrol Curliv® 4,05 mL/kgBB memiliki perbedaan yang bermakna terhadap aktivitas serum ALT dan AST kelompok kontrol olive oil 2 mL/kgBB dan kelompok kontrol infusa P. americana 1142,86 mg/kgBB. Pada Tabel VII menunjukkan aktivitas serum ALT kelompok kontrol Curliv® (105,4 ± 7,4 U/L) memiliki perbedaan yang bermakna dengan kelompok kontrol hepatotoksin CCl4 2 mL/kgBB (183,2 ± 5,1 U/L). Tabel VIII menunjukkan aktivitas serum AST sebagai data pendukung juga memberikan perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol hepatotoksin CCl4 2 mL/kgBB (476,8 ± 14,3 U/L) dan kelompok kontrol Curliv® 4,05 mL/kgBB (377 ± 15,3 U/L). Hal tersebut menandakan bahwa praperlakuan Curliv® selama enam


45

hari mampu menurunkan aktivitas serum ALT dan AST hewan uji. Dengan demikian, Curliv® terbukti memiliki kemampuan hepatoprotektif terhadap CCl4 2 mL/kgBB, namun belum mencapai aktivitas normal. 5. Kelompok perlakuan infusa biji P. americana dosis 360,71; 642,06; 1142,86 mg/kgBB pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Adanya penurunan aktivitas serum ALT akibat praperlakuan infusa biji P.

americana

merupakan

parameter

utama

untuk

mengevaluasi

efek

hepatoprotektif dari infusa biji P. americana terhadap tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida (CCl4). Hal tersebut didukung dengan adanya penurunan aktivitas serum AST akibat praperlakuan infusa biji P. americana. Kelompok praperlakuan infusa biji P. americana dosis 360,71 mg/kgBB (IBPA 360,71 mg/kgBB) dengan aktivitas serum ALT dan AST masing masing sebesar 49,2 ± 3,5 U/L dan 100,4 ± 5,3 U/L (Tabel VI). Aktivitas serum ALT kelompok IBPA 360,71 mg/kgBB memiliki perbedaan yang bermakna dengan kelompok kontrol CCl4 2 mL/kgBB, namun memiliki perbedaan yang tidak bermakna dengan kelompok kontrol negatif olive oil 2 mL/kgBB dan kelompok kontrol infusa biji P. americana 1142,86 mg/kgBB. Dari hasil tersebut mengindikasikan bahwa aktivitas ALT akibat preperlakuan IBPA 360,71 mg/kgBB sebanding dengan kadar ALT normal yang ditunjukkan oleh kontrol negatif olive oil 2 mL/kgBB dan kelompok kontrol infusa biji P. americana 1142,86 mg/kgBB. Aktivitas serum AST kelompok IBPA 360,71 mg/kgBB memiliki perbedaan yang bermakna terhadap kelompok kontrol CCl4 2 mL/kgBB, kontrol olive oil 2 mL/kgBB, kontrol infusa biji P. americana 1142,86 mg/kgBB. Hasil penelitian yang diperoleh mengindikasikan bahwa kelompok infusa biji P. americana dosis


46

360,71 mg/kgBB mampu melindungi hati dari induksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB dengan efek hepatoprotektif sebesar 98,8 %. Kelompok perlakuan infusa biji P. americana dosis 642,06 mg/kgBB (IBPA 642,06 mg/kgBB) memiliki aktivitas serum ALT dan AST berturut-turut sebesar 99,8 ± 1,8 U/L dan 185,8 ± 14,2 U/L (Tabel VI). Hasil uji Mann-Whitney yang disajikan dalam Tabel VII menunjukkan bahwa aktivitas serum ALT kelompok perlakuan IBPA 642,06 mg/kgBB memiliki perbedaan yang bermakna terhadap kelompok kontrol CCl4 2 mL/kgBB, kontrol olive oil 2 mL/kgBB dan kontrol infusa P. americana 1142,86 mg/kgBB. Analisis statistik tersebut menunjukkan adanya penurunan aktivitas serum ALT akibat praperlakuan IBPA 642,06 mg/kgBB dibandingkan dengan kelompok kontrol hepatotoksin CCl4 2 mL/kgBB, namun belum kembali pada kondisi normal seperti yang ditunjukkan oleh kelompok kontrol olive oil 2 mL/kgBB. Hal ini didukung juga dengan data aktivitas serum AST kelompok perlakuan IBPA 642,06 mg/kgBB memiliki perbedaan yang bermakna terhadap kelompok kontrol CCl4 2 mL/kgBB, kontrol olive oil 2 mL/kgBB dan kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB. Berdasarkan data aktivitas serum ALT dan didukung dengan aktivitas serum AST yang dihasilkan, kelompok IBPA 642,06 mg/kgBB memiliki efek hepatoprotektif terhadap CCl4 2 mL/kgBB, namun belum dapat mengembalikan hepar pada kondisi normal dari kerusakan yang ditimbulkan. Efek hepatoprotektif perlakuan IBPA 642,06 mg/kgBB sebesar 61,5 %. Perlakuan infusa biji P. americana dosis 1142,86 mg/kgBB (IBPA 1142,86 mg/kgBB) memiliki aktivitas serum ALT dan AST sebesar 65,2 ± 3,9


47

U/L dan 148,2 ± 9,9 U/L (Tabel VI). Hasil uji Mann-Whitney yang disajikan dalam Tabel VII dan Tabel VIII menunjukkan bahwa aktivitas serum ALT dan AST kelompok VII memiliki perbedaan yang bermakna terhadap kelompok kontrol CCl4 2 mL/kgBB, kontrol olive oil 2 mL/kgBB, kontrol infusa biji P. americana 1142,86 mg/kgBB. Analisis statistik tersebut menunjukkan penurunan aktivitas serum ALT akibat praperlakuan IBPA 642,06 mg/kgBB dibandingkan dengan kelompok kontrol hepatotoksin CCl4 2 mL/kgBB, namun belum kembali pada kondisi normal seperti yang ditunjukkan oleh kelompok kontrol olive oil 2 mL/kgBB. Berdasarkan aktivitas serum ALT yang didukung dengan aktivitas serum AST yang dihasilkan, menunjukkan bahwa perlakuan IBPA 1142,86 mg/kgBB memiliki efek hepatoprotektif terhadap CCl4 2 mL/kgBB sebesar 87,0%. Ketiga dosis perlakuan IBPA menunjukkan tidak adanya kekerabatan antara dosis dengan respon yang dihasilkan. Seiring meningkatnya dosis yang diberikan, respon yang dihasilkan tidak berbanding lurus. Data aktivitas serum ALT dari kelompok perlakuan IBPA dosis 360,71; 642,06; 1142,86 mg/kgBB memiliki perbedaan yang bermakna antar kelompok (Tabel VII). Hal tersebut menandakan bahwa ketiga peringkat dosis infusa tersebut memiliki kemampuan penurunan aktivitas ALT yang berbeda. Data aktivitas serum AST kelompok perlakuan IBPA 360,71 mg/ kgBB menunjukan perbedaan yang bermakna terhadap kelompok perlakuan IBPA 642,06 dan 1142,86 mg/kgBB, sedangkan antara kelompok perlakuan IBPA 642,06 dan 1142,86 mg/kgBB memiliki perbedaan aktivitas serum AST yang tidak bermakna (Tabel VIII). Hal tersebut


48

menunjukkan bahwa kemampuan yang sebanding dimiliki oleh kelompok perlakuan IBPA 642,06 dan 1142,86 mg/kgBB dalam menurunkan aktivitas serum AST. Dengan demikian, kelompok perlakuan IBPA 360,71 mg/kgBB menghasilkan tingkat kerusakan hati yang paling rendah berdasarkan aktivitas serum ALT dan didukung dengan aktivita serum AST yang dihasilkan. Aktivitas serum ALT kelompok IBPA 360,71 dan 1142,86 mg/kgBB menunjukan perbedaan yang bermakna dengan kelompok kontrol Curliv® 4,05 mL/kgBB. Pada Tabel VI dan Gambar 8 menunjukkan bahwa purata aktivitas serum ALT kelompok perlakuan IBPA 360,71 mg/kgBB (49,2 ± 3,5 U/L) dan kelompok IBPA 1142,86 mg/kgBB (65,2 ±3,9 U/L) lebih rendah bila dibandingkan dengan kelompok kontrol Curliv® (105,4 ± 7,4 U/L). Hal ini juga didukung dengan purata aktivitas serum AST kelompok perlakuan IBPA 360,71 mg/kgBB (100,4 ± 5,3 U/L) dan IBPA 1142,86 mg/kgBB (148,2 ± 9,9 U/L) lebih rendah dibandingkan kelompok kontrol Curliv® (377,0 ± 15,3 U/L) (Tabel VI dan Gambar 9). Dengan demikian, kelompok perlakuan IBPA 360,71 mg/kgBB dan IBPA 1142,86 mg/kgBB memiliki efek hepatoprotektif yang lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol Curliv®. Kelompok perlakuan IBPA 642,06 mg/kgBB menunjukkan perbedaan aktivitas serum ALT yang tidak bermakna dengan kelompok kontrol Curliv® 4,05 mL/kgBB, sedangkan kedua kelompok tersebut menunjukkan perbedaan aktivitas serum AST yang bermakna. Purata aktivitas serum ALT (99,8 ± 1,8 U/L) dan AST (185,8 ±14,2 U/L) kelompok IBPA 642,06 mg/kgBB lebih rendah dibandingkan kelompok kontrol Curliv® 4,05 mL/kgBB (Tabel VI, Gambar 8 dan


49

9). Dengan demikian, kelompok perlakuan IBPA 642,06 mg/kgBB memiliki efek hepatoprotektif yang sebanding dengan kontrol Curliv®. Apabila dibandingkan dengan kontrol positif Curliv® yang diasumsikan memiliki daya hepatoprotektif sebesar 100%, maka dosis 360,71; 642,06 dan 1142,86 mg/kgBB memiliki daya hepatoprotektif berturut-turut sebesar 172,2%, 107,2% dan 151,7%. D. Rangkuman Pembahasan Penelitian ini menggunakan tiga variasi dosis infusa P. americana yakni kelompok dosis 360,71; 642,06 dan 1142,86 mg/kgBB. Hasil yang diperoleh berupa efek hepatoprotektif yang didasarkan pada kemampuan menurunkan aktivitas serum ALT tikus. Kelompok perlakuan infusa P. americana yakni kelompok dosis 360,71 menghasilkan efek hepatoprotektif paling besar yaitu 98,8%, diikuti oleh IBPA dosis 1142,86 dan 642,06 mg /kgBB yang memiliki efek hepatoprotektif masing masing sebesar 87,0% dan 61,5%. Pada pengukuran aktivitas serum ALT dan AST pada kelompok kontrol infusa P. americana dosis 1142,86 mg/kgBB diperoleh hasil yang berbeda tidak bermakna dengan kelompok kontrol negatif olive oil 2 mL/kgBB. Hal ini menunjukkan bahwa pemberian infusa biji P. americana tidak menaikkan aktivitas serum ALT maupun AST, sehingga kenaikan kedua serum tersebut murni disebabkan oleh induksi hepatotoksin karbon tetraklorida. Berdasarkan efek hepatoprotektif yang dihasilkan, kelompok perlakuan IBPA 360,71 mg/kgBB menunjukkan efek yang paling baik. Pengujian dan analisa aktivitas serum ALT menggunakan statistik, IBPA dosis 360,71 mg/kgBB


50

memberikan hasil yang berbeda tidak bermakna terhadap kontrol negatif olive oil 2 mL/kgBB dan kontrol infusa biji P. americana 1142,86 mg/kgBB. Aktivitas serum AST sebagai data pendukung memberikan hasil yang berbeda bermakna terhadap kontrol negatif olive oil 2 mL/kgBB dan kontrol infusa biji P. americana 1142,86 mg/kgBB. Hal ini menandakan bahwa pemberian infusa biji P. americana mampu menurunkan aktivitas serum ALT dalam batas normal. Apabila dibandingkan potensi hepatoprotektif kontrol positif Curliv® (100%), ketiga peringkat dosis IBPA memiliki potensi yang lebih besar dilihat dari penurunan aktivitas ALT yang dihasilkan. Daya hepatoprotektif dosis 360,71; 642,06 dan 1142,86 mg/kgBB berturut-turut sebesar 172,2%, 107,2% dan 151,7%. Kemungkinan adanya pengaruh penurunan ALT dan AST dapat ditinjau dari mekanisme perusakan sel hati oleh karbon tetraklorida dan aktivitas antioksidan yang terkandung dalam infusa biji P. americana. Mekanisme hepatotoksik dari karbon tetraklorida menginduksi terjadinya perlemakan hati akibat terbentuknya radikal bebas triklorometil (·CCl3) yang merupakan metabolit reaktif. Radikal bebas ini terbentuk karena enzim sitokrom P-450 (CYP2E1) berperan sebagai agen pereduksi dan mengkatalis adisi elektron yang mengakibatkan hilangnya satu ion klorin. Radikal triklorometil yang dihasilkan berikatan secara kovalen dengan lemak mikrosomal dan protein, serta dapat bereaksi secara langsung dengan membran fosfolipid dan kolesterol. Hasil lain dari reaksi ini yaitu radikal lipid yang akan mengaktifkan senyawa oksigen reaktif yang akhirnya memicu terjadinya peroksidasi lipid. Trigliserida menumpuk di


51

hepatosit dan terlihat sebagai droplet lipid satu sampai tiga jam setelah pemejanan karbon tetraklorida. Lipid yang terbentuk dapat menghambat sintesis protein yang mempengaruhi penurunan produksi lipoprotein. Lipoprotein adalah suatu protein yang bertanggungjawab dalam transportasi lipid untuk keluar dari hepatosit. Menumpuknya lipid pada hepatosit menyebabkan kerusakan hati berupa steatosis. Pada keadaan ini, retikulum endoplasma mengalami distorsi, sintesa protein menjadi lambat selanjutnya akan terjadi penyimpangan aktivitas enzim yang berada pada retikulum endoplasma. Kemungkinan mekanisme kerja kandungan antioksidan dalam biji P. americana memberikan efek hepatoprotektif dengan menangkap radikal triklorometil yang merupakan metabolit aktif. Dengan demikian, rangkaian peristiwa yang menimbulkan steatosis bisa diminimalisisasi atau bahkan dihentikan. Selain sebagai antioksidan, diduga senyawa tersebut mampu meningkatkan sintesis enzim GSH di hati yang bertanggungjawab dalam menetralisir metabolit reaktif yang ada. Dengan adanya kemungkinan mekanisme efek hepatoprotektif antioksidan dalam biji P. americana, maka dapat dilakukan penelitian untuk mengisolasi senyawa antioksidan yang terdapat pada infusa biji P. americana. Pengembangan selanjutnya dapat diarahkan pada pembuatan formulasi sediaan untuk pengembangan obat herbal. Tipe kerusakan hati yang dihasilkan oleh hepatotoksin karbon tetraklorida yaitu berupa perlemakan hati (steatosis). Perlu dilakukan penelitian mengenai efek hepatoprotektif infusa biji P. americana dengan mengunakan hepatotoksin lainnya seperti galaktosamin yang menyebabkan hepatitis akut pada


52

hewan uji. Toksisitas galaktosamin berkaitan dengan insufisiensi UDP-glukosa dan UDP-galaktosa serta terganggunya homeostasis sel. Perubahan ini juga mengganggu sintesis protein dan asam nukleat (Keppler dan Decker, cit Ferencikova, Cervinkova, dan Drahota, 2013). Dari hasil penelitian tersebut selanjutnya dapat dibandingkan besarnya efek hepatoprotektif yang dihasilkan. Hal ini merupakan langkah awal dalam mengeksplorasi kemampuan dari biji P. americana sebagai hepatoprotektor.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan Berdasarkan hasil yang diperoleh dan analisis statistik yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan: 1. Pemberian infusa biji P. americana memiliki efek hepatoprotektif pada tikus terinduksi karbon tetraklorida berupa penurunan aktivitas serum ALT dan AST. 2. Pemberian infusa biji P. americana dosis 360,71 mg/kgBB menimbulkan efek hepatoprotektif yang paling besar yaitu 98,8% pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB B. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang: 1. Uji efek hepatoprotektif infusa biji P. americana pada tikus terinduksi CCl4 dengan dosis yang lebih kecil dari 360,71 mg/kgBB. 2. Uji efek hepatoprotektif infusa biji P. americana pada tikus jantan terinduksi galaktosamin. 3. Penelitian mengenai senyawa yang berperan sebagai antioksidan yang terdapat pada biji P. americana. 4. Formulasi sediaan biji P. americana sebagai alternatif pengobatan penyakit hati.

53


54

DAFTAR PUSTAKA Alhassan, A.J., Sule, M.S., Atiku, M.K., Wudil, A.M., Abubakar, H., and Mohammed, S.A., 2012, Effects of Aqueous Avocado Pear (Persea americana) Seed Extract on Alloxan induced Diabetes Rats, Greener Journal of Medical Sciences, Vol. 2 (1), 5-11. Anaka, O., Raymond, I., Stephen O., 2009, Effect of the Aqueous Seed Extract of Persea americana Mill (Lauraceae) on the Blood Pressure of Spraguedawley Rats, African Journal of Pharmacy and Pharmacology , 3(10), 485-490. Angulo, P., 2002, Nonalcoholic Fatty Liver Disease, N Eng J Med, Vol. 346, No. 16. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Departemen Kesehatan, Republik Indonesia., 2007, Riset Kesehatan Dasar 2007, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, pp. 107 Badan Pengawas Obat dan Makanan RI., 2010, Acuan Sediaan Herbal, 5 (1), Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, hal. 6. Chandrasoma, P., and Taylor, C.R., 1995, Concise Pathology, 2nd edition, FRC Path Prentice Hall International, USA, pp. 621-628. Crawford, J.M., and dan Liu, C., 2010, Chapter 18 Pathologic Basis of Disease, 8th Edition, Saunder Elsevier, Philadelphia, pp. 835-836. Ding, H., Chin, Y.W., Kinghorn, A.D., and Ambrosio, S.M., 2007, Chemopreventive Characteristics of Avocado Fruit, Seminars in Cancer Biology, 17, 386-394. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia., 1978, Materia Medika Indonesia, Jilid II, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, pp. 70-73. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia., 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, pp. 46. DiPiro, J.T., Talbert, R.L., Yee, G.C., Matzke, G.R., Wells, B.G., Posey, L.M., 2008, Pharmacoterapy : A Pathophysiologic Approach, 7th Edition., Mc Graw Hill, New York, pp. 651-656. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 46. Ferencikova, R., Cervinkova, Z., dan Drahota, Z., 2003, Hepatotoxic Effect of DGalactosamine and Protective Role of Lipid Emulsion, Physol. Res. 52: 73-78.


55

Forrest, E., 2006, Hepatic Disorders, in L, Anne., (Eds), Adverse Drug Reaction, 2nd Edition, Pharmaceutical Press, London, pp. 193, 201, 202. Frankel, E.N., and Meyer, A.S., 2000, The Problems of Using One Dimensional Methods to Evaluate Multifunctional Food and Biological Antioxidants, Food Agriculture. pp. 80, 1925–1941 Hastuti, T., 2008, Aktivitas Enzim Transaminase dan Gambaran Histopatologi Tikus yang Diberikan Kelapa Kopyor Pasca Induksi Parasetamol, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Skripsi, Institut Pertanian Bogor. Herdiani, E., 2012, Potensi Tanaman Obat Indonesia, http://www.bbpplembang.info/index. php /en/arsip/artikel/artikel-pertanian/585-potensitanaman-obat-indonesia, diakses tanggal 12 Februari 2013. Hodgson, E., and Levi, P.E., 2000, A Textbook of Modern Toxicology, 2nd Edition, Singapore, Mc Graw-Hill. Janakat, S., and Al-Merie, H., 2002, Optimization of The Dose and Route of Injection, and Characterization of The Time Course of Carbon Tetrachloride-induced Hepatotoxicity in The Rat, J. Pharm. Tox. Methods, 48, 41-44. Johnston., D.E., and Kroening, C., 1998, Mechanism of Early Carbon Tetrachloride Toxicity in Cultured Rat Hepatocytes, Pharmacology & Toxicology, 83, 231-239. Kumar,V., Abbas, A.K., Fausto, N., Mitchel, R.N., 2007, Robbins Basic Pathology, 8th Edition, Saunder Elsevier, Philadelphia, pp. 634-635. Leite, J.J.G., Brito, E.H.S., Cordeiro, R.A., Brilhante, R.S.N., Sidrin, J.J.C., Bertini, L.M., Morais, S.M., Rocha, M.F.G., 2009, Chemichal Composition, Toxicity and Larvacidal and Antifungal Activities of Persea americana (Avocado) Seed Extracts, Revista da Socledade Brasileira de Medicina Tropical., 42 (2):110-113. Lim, T.K., 2012, Edible Medical and Non-Medical Plants, Books 3, Spingers Dordrecht Heidelbergh, London, New York, pp.79-101 Machmud, R., 2000, Pencegahan Penyakit dan Promosi Kesehatan untuk enyakit Perlemakan Hati melalui Penanganan Kegemukan, Majalah Kedokteran Andalas, Vol. 24, No. 2. Malangngi, L.P., Sangi, M.S., dan Paendong, J.J.E., 2012, Penentuan Kandungan Tanin dan Uji Aktivitas antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat (Persea americana Mill.), Jurnal MIPA UNSRAT ONLINE., 1 (1) 5-10.


56

Manuel, F., 2010, Efek Hepatoprotektif Jus Buah Pepaya (Carica papaya L.) pada Tikus Jantan Terinduksi Parasetamol, Skripsi, Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Misih, S.R.Z.A.M and Bloomston, M., 2010, Liver Anatomy, http://surgery.uc.edu /content/Education/PDF-hold/LiverAnatomy.pdf, diakses tanggal 25 April 2013. Nwaoguikpe, R.N, dan Braide, W., 2011, The Effect of Aqueous Seed Extract of Persea americana (Avocado Pear) on Serum Lipid and Cholesterol Levels in Rabbits, African Journal of Pharmacy Research, Vol. 1(2), 23-29. Nebendahl, K., 2000, Routes of Administration, http://webcache.google usercontent.com/search?q=cache:oHNNAmAHdZ8J:www.usp.br/bioterio/ Artigos/Procedimentos%2520experimentais/Administration_The_Laborat ory_Rat-By_George_J_Krinke-2.pdf+&cd=4&hl=en&ct=clnk&client= firefox-a, diakses tanggal 29 April 2013. North-Lewis, P., 2008, Drugs and The Liver, A Guide to Drug Handling in Liver Dysfunction, Pharmaceutical Press, London, 12, 17,18. Nurman, A. dan Huang M.A., 2007, Perlemakan Hati Non-alkoholik, Universa Medicina, Vol. 26 (4), 205-215. Ospina, J.A., 2004, Persea americana Mill., International Centre of Tropical Agriculture, http://www.rngr.net/publications/ttsm/species/PDF.2004-0315.0306/at_download/file, diakses tanggal 25 April 2013. Owolabi, M.A., Jaja, S.I., Coker, H. A., 2005, Vasorelaxant action of aqueous extract of the leaves of Persea americana on isolated thoracic rat aorta, Fitoterapia, 76, 567–573. Poli, G., Gravela, E., Albano, E. dan Dianzani, M.U., 1979, Studies on Fatty Liver with Isolated Hepatocytes II, The Action of Carbon Tetrachloride on Lipid Peroxidation, Protein and Triglyceride Synthesis and Secretion, Experimental and Molecular Pathology, 30, 116-127. Polson, J., and Lee, W. M., 2005, AASLD Position Paper: The Management of Acute Liver Failure, Hepatology, 5, 1179-1197. Price, S.A., and Wilson, L. M., 2005, Patofisiologi: Konsep Klinis Proses Proses Penyakit, Edisi 6, Vol I, EGC, Jakarta, hal. 473-476. Proseanet, 2012, Persea americana, http://www.proseanet.org/prohati 4/browser.php?keywords=persea+americana&do_search=Search+Now&p category=0, diakses tanggal 3 Maret 2013. Rajendran, R., Hemalatha, S., Akasakalai, K., MadhuKrishna, C.H., Sohil, B.,Vittal., dan Sundaram, R.M., 2009, Hepatoprotective activity of


57

Mimosa pudica leaves against Carbontetrachloride induced toxicity, I J. Nat.Prod., 2, pp. 116-122. Salah, W., Miller, N. J., Pangauga, T., Bolwell, G. P., Rice, E., and Evans, C., 1995, Polyphenolic Flavonols as Scavengers of Aqueous Phase Radicals as Chainbreaking Antioxidant, Arch. Biochem. Biorh, pp. 2, 339-346. Sumardjo, D., 2009, Pengantar Kimia, Buku Panduan Kuliah Mahasiswa Kedokteran dan Program Strata I Fakultas Bioeksata, EGC, Jakarta, hal 23-24. Timbrell, J.A., 2008, Principles of Biochemical Toxicology, 4th Edition, Iinforma Health Care, USA, pp. 309-311. Tso, P., and McGill, J., 2003, Chapter 28 The Physiology of The Liver, http://faculty.ksu.edu.sa/15218/Medical%20Books/Medical%20Physiolog y%202nd%202003%20Rhoades/Medical%20Physiology%202nd%202003 %20Rhoades/smch28.pdf, diakses tanggal 25 April 2013. Wahyuni, S., 2005, Pengaruh Daun Sambiloto (Andrographis paniculata, Ness.) terhadap Kadar SGPT dan SGOT Tikus Putih, GAMMA, 1 (1), 45-53. Waldmann, C., Soni, N., Rhodes, A., 2008, Oxford Desk Reference Critical Care, Oxford University Press Inc., New York, pp. 356. Williamson, E.M., David, T.O., dan Fred, J.E., 1996, Pharmacological Methods on Phytoterpy Research: Selection, Separation, Preparation, and Pharmacological Evaluation of Plant Material, Vol. I, John Wiley & Sons Cichester, England, pp. 47-49. Windrawati, T.G., 2013, Efek Hepatoprotektif Ekstrak Metanol:Air (50:50) Daun Macaranga tanarius L. terhadap Kadar ALT-AST Serum pada Tikus terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi,33&39, Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Ziemmerman, H.J., 1999, Hepatotoxicity, 2nd edition, Lipincott Williams and Wilkins, Philadelphia, pp. 195-210.


58

LAMPIRAN


LAMPIRAN

Lampiran 1. Foto biji P. americana

Lampiran 2. Foto serbuk biji P. americana

Lampiran 3. Foto infusa biji P. americana

59


60

Lampiran 4. Foto hasil determinasi organoleptis dan mikroskopik serbuk biji P. americana


Lampiran 5. Surat pengesahan determinasi tanaman P. americana

61


Lampiran 6. Surat pengesahan Medical and Health Research Ethics Committee (MHREC)

62


63

Lampiran 7. Analisis statistik aktivitas serum ALT pada uji pendahuluan penentuan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB Descriptive Statistics N

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

jam_0

3

68.0000

16.70329

50.00

83.00

jam_24

3

2.0333E2

27.53785

185.00

235.00

jam_48

3

54.6667

9.45163

44.00

62.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test jam_0 N Normal Parameters

a

Mean Std. Deviation

Most Extreme Differences

jam_24

jam_48

3

3

3

68.0000

2.0333E2

54.6667

1.67033E1 2.75379E1

9.45163

Absolute

.238

.353

.304

Positive

.193

.353

.219

Negative

-.238

-.253

-.304

Kolmogorov-Smirnov Z

.412

.611

.527

Asymp. Sig. (2-tailed)

.996

.850

.944

a. Test distribution is Normal. ANOVA

Descriptives ALT 95% Confidence Interval for Mean

Std. N

Mean

Deviation

Std. Error

Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum

Jam ke 0

3

68.0000

16.70329

9.64365

26.5067

109.4933

50.00

83.00

Jam ke 24

3

2.0333E2

27.53785

15.89899

134.9255

271.7412

185.00

235.00

Jam ke 48

3

54.6667

9.45163

5.45690

31.1875

78.1458

44.00

62.00

Total

9

1.0867E2

73.18470

24.39490

52.4119

164.9214

44.00

235.00


64

Test of Homogeneity of Variances ALT Levene Statistic

df1

2.732

df2 2

Sig. 6

.143 ANOVA

ALT Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

Df

Mean Square

F

40594.667

2

20297.333

2253.333

6

375.556

42848.000

8

Sig.

54.046

.000

Post Hoc Tests Multiple Comparisons ALT Scheffe (I)

(J)

95% Confidence Interval

kelompok_ori kelompok_ori Mean Difference entasi_CCl4

entasi_CCl4

Jam ke 0

Jam ke 24

-135.33333

*

15.82310

.000

-186.0821

-84.5846

Jam ke 48

13.33333

15.82310

.715

-37.4154

64.0821

Jam ke 24

Jam ke 48

(I-J)

Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

Jam ke 0

135.33333

*

15.82310

.000

84.5846

186.0821

Jam ke 48

148.66667

*

15.82310

.000

97.9179

199.4154

-13.33333

15.82310

.715

-64.0821

37.4154

*

15.82310

.000

-199.4154

-97.9179

Jam ke 0 Jam ke 24

-148.66667

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.


Homogeneous Subsets ALT Scheffe Subset for alpha = 0.05

kelompok_ori entasi_CCl4

N

1

2

Jam ke 48

3

54.6667

Jam ke 0

3

68.0000

Jam ke 24

3

Sig.

203.3333 .715

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

1.000

65


66

Lampiran 8. Analisis statistik aktivitas serum AST pada uji pendahuluan penentuan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida 2ml/kgBB Descriptive Statistics N

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

jam_0

3

88.3333

6.50641

82.00

95.00

jam_24

3

4.4633E2

33.50124

410.00

476.00

jam_48

3

1.4733E2

13.01281

134.00

160.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test jam_0 N Normal Parameters

a


jam_24

jam_48

3

3

3

Mean

88.3333

4.4633E2

1.4733E2

Std. Deviation

6.50641 3.35012E1 1.30128E1

Absolute

.187

.246

.187

Positive

.187

.194

.181

Negative

-.181

-.246

-.187

.324

.425

.324

1.000

.994

1.000

Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) a. Test distribution is Normal.

Oneway Descriptives AST 95% Confidence Interval for Mean N

Mean

Std. Deviation

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimum Maximum

Jam ke 0

3

88.3333

6.50641

3.75648

72.1705

104.4961

82.00

95.00

Jam ke 24

3

4.4633E2

33.50124

19.34195

363.1116

529.5550

410.00

476.00

Jam ke 48

3

1.4733E2

13.01281

7.51295

115.0077

179.6590

134.00

160.00

Total

9

2.2733E2

167.22515

55.74172

98.7927

355.8740

82.00

476.00


67

Test of Homogeneity of Variances AST Levene Statistic

df1

df2

3.169

Sig.

2

6

.115

ANOVA AST Sum of Squares Between Groups

Mean Square

F

221046.000

2

110523.000

2668.000

6

444.667

223714.000

8

Within Groups Total

Df

Sig.

248.552

.000

Post Hoc Tests Multiple Comparisons AST Scheffe 95% Confidence Interval

Mean Difference (I) kelompok (J) kelompok Jam ke 0

Jam ke 24

Jam ke 48

(I-J)

Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

Jam ke 24

-358.00000

*

17.21756

.000

-413.2212

-302.7788

Jam ke 48

-59.00000

*

17.21756

.039

-114.2212

-3.7788

Jam ke 0

358.00000

*

17.21756

.000

302.7788

413.2212

Jam ke 48

299.00000

*

17.21756

.000

243.7788

354.2212

Jam ke 0

59.00000

*

17.21756

.039

3.7788

114.2212

-299.00000

*

17.21756

.000

-354.2212

-243.7788

Jam ke 24

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.


Homogeneous Subsets AST Scheffe Subset for alpha = 0.05 kelompok

N

1

Jam ke 0

3

Jam ke 48

3

Jam ke 24

3

Sig.

2

3

88.3333 1.4733E2 4.4633E2 1.000

1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

1.000

68


69

Lampiran 9. Analisis statistik aktivitas serum ALT perlakuan infusa biji P. americana setelah induksi karbon tetraklorida 2ml/kgBB Descriptive Statistics N ALT_KTRL_CCl

Mean 5

1.8320E2

Std. Deviation

Minimum

11.43241

168.00

Maximum 197.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT_KTRL_CCl 4 N

5

Normal Parameters

a


Mean

183.2000

Std. Deviation

11.43241

Absolute

.163

Positive

.136

Negative

-.163


.363


.999

a. Test distribution is Normal.

Descriptive Statistics N ALT_KTRL_OLIVE

Mean 5

47.6000

Std. Deviation

Minimum

4.39318

43.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT_KTRL_OLI VE N Normal Parameters

5 a


Mean

47.6000

Std. Deviation

4.39318

Absolute

.242

Positive

.242

Negative

-.148


.541


.931


Maximum 54.00


Descriptive Statistics N ALT_KTRL_INFUSA

Mean 5

Std. Deviation

46.6000

Minimum

1.81659

44.00

Maximum 49.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT_KTRL_INF USA N

5

Normal Parameters

a


Mean

46.6000

Std. Deviation

1.81659

Absolute

.213

Positive

.213

Negative

-.187


.476


.977


Descriptive Statistics N ALT_KTRL_CURLIV

Mean 5

1.0540E2

Std. Deviation

Minimum

16.53179

89.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT_KTRL_CU RLIV N Normal Parameters

5 a


Mean

105.4000

Std. Deviation

16.53179

Absolute

.273

Positive

.273

Negative

-.161


.610


.851


Maximum 131.00

70


Descriptive Statistics N ALT_DOS_RENDAH

Mean 5

Std. Deviation

49.2000

Minimum

7.75887

43.00

Maximum 62.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT_DOS_REN DAH N

5

Normal Parameters

a


Mean

49.2000

Std. Deviation

7.75887

Absolute

.306

Positive

.306

Negative

-.212


.684


.738


Descriptive Statistics N ALT_DOS_TENGAH

Mean 5

99.8000

Std. Deviation

Minimum

3.96232

94.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT_DOS_TEN GAH N Normal Parameters

5 a


Mean

99.8000

Std. Deviation

3.96232

Absolute

.220

Positive

.181

Negative

-.220


.492


.969


Maximum 105.00

71


72

Descriptive Statistics N ALT_DOS_TINGGI

Mean 5

Std. Deviation

65.2000

Minimum

8.64292

Maximum

53.00

76.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT_DOS_TING GI N Normal Parameters

5 a


Mean

65.2000

Std. Deviation

8.64292

Absolute

.227

Positive

.173

Negative

-.227


.508


.959


Oneway Descriptives ALT_PERLAKUAN 95% Confidence Interval for Mean

N

Mean

Std. Deviation

Std. Error

Lower

Upper

Bound

Bound

kontrol CCl4

5

1.8320E2

11.43241

5.11273 169.0048 197.3952

kontrol olive

5

47.6000

4.39318

1.96469

42.1452

kontrol infusa 1,142 g/kgBB

5

46.6000

1.81659

.81240

44.3444

kontrol curliv

5

1.0540E2

16.53179

5

49.2000

5

Minimum Maximum 168.00

197.00

53.0548

43.00

54.00

48.8556

44.00

49.00

7.39324

84.8731 125.9269

89.00

131.00

7.75887

3.46987

39.5661

58.8339

43.00

62.00

99.8000

3.96232

1.77200

94.8801 104.7199

94.00

105.00

5

65.2000

8.64292

3.86523

54.4684

75.9316

53.00

76.00

35

85.2857

47.41343

8.01433

68.9986 101.5728

43.00

197.00

dosis infusa 0,360 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 0,642 g/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 1,142 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total


Test of Homogeneity of Variances

ALT_PERLAKUAN Levene Statistic

df1

3.820

df2 6

Sig. 28

.007

ANOVA ALT_PERLAKUAN Sum of Squares Between Groups

Mean Square

74124.343

6

12354.057

2308.800

28

82.457

76433.143

34

Within Groups Total

df

F

Sig.

149.824

.00 0

Descriptive Statistics N

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

ALT_PERLAKUAN

35

85.2857

47.41343

43.00

197.00

kelompok

35

4.0000

2.02920

1.00

7.00

Kruskal-Wallis Test Ranks Kelompok ALT_PERLAKUAN

N

Mean Rank

kontrol CCl4 2 ml/kgBB

5

33.00

kontrol olive 2 ml/kgBB

5

8.20

kontrol infusa 1,142 g/kgBB

5

8.10

kontrol curliv 4,05 ml/kgBB

5

25.40

5

8.30

5

25.60

5

17.40

dosis infusa 0,360 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 0,642 g/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 1,142 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total

35

73


Test Statistics

a,b

ALT_PERLAKU AN Chi-Square

29.844

Df

6

Asymp. Sig.

.000

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: kelompok

Mann-Whitney Test Ranks Kelompok ALT_PERLAKUAN

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10

Test Statistics

b

ALT_PERLAKU AN Mann-Whitney U

.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611

Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: kelompok

.009 .008

a

74


75


N

kontrol CCl4 2 ml/kgBB kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.008

a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: kelompok


N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611

Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.009 .008

a


76



N

kontrol CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009


.008

a



kontrol CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB Total

N

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10


Test Statistics

77

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009


.008

a



N


Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009


.008

a



kontrol olive 2 ml/kgBB kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB

N

Mean Rank

Sum of Ranks

5

5.50

27.50

5

5.50

27.50


78

Ranks Kelompok ALT_PERLAKUAN

N

kontrol olive 2 ml/kgBB kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

5.50

27.50

5

5.50

27.50

10

Test Statistics

b


12.500

Wilcoxon W

27.500

Z

.000


1.000


1.000

a



N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008

a


79


N

kontrol olive 2 ml/kgBB dosis infusa 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

5.50

27.50

5

5.50

27.50

10

Test Statistics

b


12.500

Wilcoxon W

27.500

Z

.000


1.000


1.000

a



N

kontrol olive 2 ml/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB Total b

ALT_PERLAKU AN .000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008

a

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank


80

Ranks Kelompok ALT_PERLAKUAN

N

kontrol olive 2 ml/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00


N

kontrol olive 2 ml/kgBB dosis infusa 1142,86 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.20

16.00

5

7.80

39.00

10

Test Statistics

b


1.000

Wilcoxon W

16.000

Z

-2.410


.016


.016

a



kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB kontrol curliv 4,05 ml/kgBB Total

N

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10


Test Statistics

81

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009


.008

a



N

kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB dosis infusa 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank 5

5.60

28.00

5

5.40

27.00

10

Test Statistics

b


12.000

Wilcoxon W

27.000

Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: kelompok

-.105 .916 1.000

a

Sum of Ranks


82


N

kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009


.008

a


N

kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB dosis infusa 1142,86 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total b

ALT_PERLAKU AN .000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.627


.009 .008

a

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank


83


N

kontrol curliv 4,05 ml/kgBB dosis infusa 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10 b

Test Statistics


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009


.008

a



N

kontrol curliv 4,05 ml/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB Total b


12.000

Wilcoxon W

27.000


-.104 .917 1.000

a

Sum of Ranks

5

5.40

27.00

5

5.60

28.00

10

Test Statistics

Z

Mean Rank


84


N


Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009


.008

a


N

dosis infusa 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB Total b

ALT_PERLAKU AN .000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619

Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties.

.009 .008

a

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank


85


N

dosis infusa 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 1142,86 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.40

17.00

5

7.60

38.00

10

Test Statistics

b


2.000

Wilcoxon W

17.000

Z

-2.207


.027


.032

a


N

dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 1142,86 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total b

ALT_PERLAKU AN .000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009 .008

a

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank


86

Lampiran 10. Analisis statistik aktivitas serum AST perlakuan infusa biji P. americana setelah induksi karbon tetraklorida 2ml/kgBB Descriptive Statistics N AST_KTRL_CCl4

Mean 5

4.7680E2

Std. Deviation

Minimum

31.87789

441.00

Maximum 521.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST_KTRL_CCl 4 N Normal Parameters

5 a


Mean

476.8000

Std. Deviation

31.87789

Absolute

.172

Positive

.172

Negative

-.131


.385


.998 Descriptive Statistics N

AST_KTRL_OLIVE

Mean 5

60.2000

Std. Deviation 5.26308

Minimum 55.00

Maximum 69.00


One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST_KTRL_OLI VE N

5

Normal Parameters

a


Mean

60.2000

Std. Deviation

5.26308

Absolute

.315

Positive

.315

Negative

-.162


.705


.703


Descriptive Statistics N AST_KTRL_INFUSA

Mean 5

Std. Deviation

62.8000

Minimum

4.32435

57.00

Maximum 68.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST_KTRL_INF USA N Normal Parameters

5 a


Mean

62.8000

Std. Deviation

4.32435

Absolute

.173

Positive

.173

Negative

-.170


.388


.998


Descriptive Statistics N AST_KTRL_CURLIV

Mean 5

3.7700E2


Minimum 344.00

Maximum 419.00

87


One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST_KTRL_CU RLIV N

5

Normal Parameters

a


Mean

377.0000

Std. Deviation

34.22718

Absolute

.225

Positive

.225

Negative

-.193


.503


.962


Descriptive Statistics N AST_DOS_RENDAH

Mean 5

1.0040E2

Std. Deviation

Minimum

11.92896

81.00

Maximum 112.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST_DOS_REN DAH N Normal Parameters

5 a


Mean

100.4000

Std. Deviation

11.92896

Absolute

.287

Positive

.165

Negative

-.287


.641


.806


Descriptive Statistics N AST_DOS_TENGAH

Mean 5

1.8580E2


Minimum 137.00

Maximum 221.00

88


One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST_DOS_TEN GAH N

5 Descriptives

Normal Parameters

a


Mean

185.8000

Std. Deviation

31.71277

Absolute

.227

Positive

.138

Negative

-.227


.509


.958

a. Test distribution is Normal. Descriptive Statistics N AST_DOS_TINGGI

Mean 5

1.4820E2

Std. Deviation

Minimum

22.15175

123.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST_DOS_TING GI N Normal Parameters

5 a


Mean

148.2000

Std. Deviation

22.15175

Absolute

.244

Positive

.244

Negative

-.176


.546


.926


Maximum 177.00

89


90

AST_PERLAKUAN 95% Confidence Interval for Mean N

Mean

Std. Deviation

Std. Error

Lower Bound

Upper Bound

Minimum Maximum


5

4.7680E2

31.87789

14.25623

437.2184

516.3816

441.00

521.00


5

60.2000

5.26308

2.35372

53.6650

66.7350

55.00

69.00

5

62.8000

4.32435

1.93391

57.4306

68.1694

57.00

68.00

5

3.7700E2

34.22718

15.30686

334.5013

419.4987

344.00

419.00

5

1.0040E2

11.92896

5.33479

85.5882

115.2118

81.00

112.00

5

1.8580E2

31.71277

14.18238

146.4234

225.1766

137.00

221.00

5

1.4820E2

22.15175

9.90656

120.6950

175.7050

123.00

177.00

35

2.0160E2

154.44420

26.10584

148.5466

254.6534

55.00

521.00

kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB kontrol curliv 4,05 ml/kgBB dosis infusa 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 1142,86 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total

Test of Homogeneity of Variances AST_PERLAKUAN Levene Statistic 3.507

df1

df2 6

Sig. 28

.010 ANOVA

AST_PERLAKUAN Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

Mean Square

795511.200

6

132585.200

15491.200

28

553.257

811002.400

34

F 239.645

Sig. .000


Kruskal-Wallis Test Ranks Kelompok AST_PERLAKUAN

5

33.00


5

4.60

5

6.40

5

28.00

5

13.00

5

22.40

5

18.60

mg/kgBB kontrol curliv 4,05 ml/kgBB dosis infusa 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 1142,86 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total Test Statistics

35

a,b

AST_PERLAKU AN

Df Asymp. Sig.

Mean Rank


kontrol infusa 1142,86

Chi-Square

N

32.564 6 .000

91


92

Mann-Whitney Test Ranks Kelompok AST_PERLAKUAN

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10

Test Statistics

b

AST_PERLAKU AN Mann-Whitney U

.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009


.008

a



N

kontrol CCl4 2 ml/kgBB kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB Total b

AST_PERLAKU AN .000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008

a

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank


93


N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009


.008

a



N


Test Statistics

AST_PERLAKU AN .000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008

a

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10 b

Mann-Whitney U

Mean Rank


94



N

kontrol CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank 5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008

a

Sum of Ranks


95


N


Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009


.008

a



N

kontrol olive 2 ml/kgBB kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB Total b

AST_PERLAKU AN

Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed)

8.000 23.000 -.940 .347

Sum of Ranks

5

4.60

23.00

5

6.40

32.00

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank



.421

96

a



N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009


.008

a


N

kontrol olive 2 ml/kgBB dosis infusa 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total b

AST_PERLAKU AN .000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008

a

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank


97


N

kontrol olive 2 ml/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009


.008

a



N

kontrol olive 2 ml/kgBB dosis infusa 1142,86 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total b

AST_PERLAKU AN .000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008

a

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank


98

Ranks Kelompok AST_PERLAKUAN

N

kontrol olive 2 ml/kgBB dosis infusa 1142,86 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

b. Grouping Variable: kelompok


N

kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB kontrol curliv 4,05 ml/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10 b

Test Statistics


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009


.008

a




N

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10


Test Statistics

99

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009


.008

a



N

kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank 5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008

a

Sum of Ranks


100


N


Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009


.008

a


N

kontrol curliv 4,05 ml/kgBB dosis infusa 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total b

AST_PERLAKU AN .000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008

a

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank


101


N

kontrol curliv 4,05 ml/kgBB dosis infusa 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00



N

kontrol curliv 4,05 ml/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009


.008

a




N

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10


Test Statistics

102

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009


.008

a



N

dosis infusa 360.71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank 5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10 b

Test Statistics


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008

a

Sum of Ranks


103


N

dosis infusa 360,71 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 1142,86 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

Test Statistics

b


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009


.008

a


N

dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 1142,86 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB Total b

AST_PERLAKU AN 3.000

Wilcoxon W

18.000

Z

-1.984


.047 .056

a

Sum of Ranks

5

7.40

37.00

5

3.60

18.00

10

Test Statistics

Mann-Whitney U

Mean Rank


104


N

dosis infusa 642,06 mg/kgBB+CCl4 2 ml/kgBB dosis infusa 1142,86 mg/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB

Mean Rank

Sum of Ranks

5

7.40

37.00

5

3.60

18.00


Lampiran 11. Analisis statistik aktivitas serum ALT dan AST perlakuan kontrol negatif olive oil 2 ml/kgBB Descriptive Statistics N kontrol_olive_ALT_jam_ke_0

Mean 5

41.6000


Minimum 40.00

Maximum 46.00


105

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test kontrol_olive_AL T_jam_ke_0 N

5

Normal Parameters

a


Mean

41.6000

Std. Deviation

2.50998

Absolute

.394

Positive

.394

Negative

-.262


.882


.418


Descriptive Statistics N kontrol_olive_ALT_jam_ke_24

Mean 5

Std. Deviation

47.6000

Minimum

4.39318

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test kontrol_olive_AL T_jam_ke_24 N Normal Parameters

5 a


Mean

47.6000

Std. Deviation

4.39318

Absolute

.242

Positive

.242

Negative

-.148


.541


.931


43.00

Maximum 54.00


106

T-Test Paired Samples Statistics Std.

Mean Pair 1

kontrol_olive_ALT _jam_ke_0 kontrol_olive_ALT _jam_ke_24

N

Std.

Error

Deviation

Mean

41.6000

5

2.50998

47.6000

5

4.39318

1.1225 0 1.9646 9

Paired Samples Correlations Correlatio N Pair 1

n

Sig.

kontrol_olive_ALT _jam_ke_0 &

5

kontrol_olive_ALT

.866

.058

_jam_ke_24 Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Interval of the

Mean

Std.

Std. Error

Deviation

Mean

Difference Lower

Upper

Sig. (2t

df

tailed)

Pair 1 kontrol_olive_AL T_jam_ke_0 kontrol_olive_AL T_jam_ke_24

-6.00000

2.54951

1.14018

9.16563

-2.83437

-5.262

4

.006


107


Mean

kontrol_olive_AST_jam_ke_0

5

Std. Deviation

50.2000

Minimum

4.96991

43.00

Maximum 54.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test kontrol_olive_AS T_jam_ke_0 N Normal Parameters

5 a


Mean

50.2000

Std. Deviation

4.96991

Absolute

.313

Positive

.222

Negative

-.313


.701


.710


Descriptive Statistics N kontrol_olive_AST_jam_ke_2 4

Mean 5

60.2000


Minimum 55.00

Maximum 69.00


108

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test kontrol_olive_AS T_jam_ke_24 N

5

Normal Parameters

a


Mean

60.2000

Std. Deviation

5.26308

Absolute

.315

Positive

.315

Negative

-.162


.705


.703


T-Test Paired Samples Statistics Mean Pair 1

kontrol_olive_AST_jam_ke_ 0 kontrol_olive_AST_jam_ke_ 24

N

Std. Deviation

Std. Error Mean

50.2000

5

4.96991

2.22261

60.2000

5

5.26308

2.35372

Paired Samples Correlations N Pair 1

Correlation

Sig.

kontrol_olive_AST_jam_ke_ 0&

5

kontrol_olive_AST_jam_ke_

.543

.344

24

Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Interval of

Mean

Std.

Std. Error

Deviation

Mean

the Difference Lower

Upper

Sig. (2t

df

tailed)


109

Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Interval of

Mean

Std.

Std. Error

Deviation

Mean

the Difference Lower

Upper

Sig. (2t

df

tailed)

Pair 1 kontrol_olive_AST_ja m_ke_0 kontrol_olive_AST_ja m_ke_24

-1.00000E1

4.89898

2.19089

-16.08289

-3.91711 -4.564

4

.010


110


Mean

selisih_ALT_jam_ke_0_dan_

5

24

Std. Deviation

7.4000

Minimum

3.78153

3.00

Maximum 12.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test selisih_ALT_jam _ke_0_dan_24 N

5

Normal Parameters

a

Mean

7.4000

Std. Deviation Most Extreme Differences

3.78153

Absolute

.264

Positive

.216

Negative

-.264


.590


.877

a. Test distribution is Normal. Descriptive Statistics N selisih_AST_jam_ke_0_dan_

Mean 5

24

Std. Deviation

10.0000

Minimum

4.89898

4.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test selisih_AST_jam _ke_0_dan_24 N Normal Parameters

5 a


Mean

10.0000

Std. Deviation

4.89898

Absolute

.258

Positive

.193

Negative

-.258


.578


.892


Maximum 16.00


111

Lampiran 12. Perhitungan penetapan peringkat dosis infusa biji P. americana pada kelompok perlakuan Dasar penetapan peringkat 

Bobot tertinggi tikus = 350 g



Konsentrasi infusa biji P. americana = 8%



Pemberian infusa menggunakan volume maksimal pemberian per oral pada tikus yaitu 5 ml

Dengan dasar tersebut, maka ditetapkan dosis tertinggi infusa biji P. americana D x BB = C x V Dosis x Berat badan tikus = Konsentrasi infusa x Volume pemberian Dosis x 350 gBB = 8 g/100 ml x 5 ml Dosis = 1142,86 mg/kgBB (dosis tinggi) Penentuan dosis rendah infusa biji P. americana didasarkan pada keterangan empiris penggunaan rebusan serbuk biji P. americana di masyarakat yaitu 4 g/hari. Dosis manusia 70 kgBB = 4 g Angka konversi manusia 70 kgBB ke tikus 200 g = 0,018 Dosis tikus 200 gBB = 4 g x 0,018 = 0,072 g/200gBB

= 360 mg/kgBB

Penentuan dosis tengah dilakukan berdasarkan faktor kelipatan dari kedua dosis tersebut. Faktor kelipatan =

=

,

/

/

= 1,78

Dosis tengah = 1142,86 mg/kgBB / 1,78 = 642,06 mg/kgBB


112

Dosis rendah = 642,06 mg/kgBB / 1,78 = 360,71 mg/kgBB

Lampiran 13. Perhitungan Konversi Dosis untuk Manusia  Angka konversi tikus 200 g ke manusia 70 kgBB = 56,0  Dosis untuk manusia = dosis tikus 200gBB x angka konversi ke manusia Berdasarkan data tersebut, maka dosis infusa biji P. americana untuk manusia: 1. Infusa biji P. americana 1142,86 mg/kgBB tikus: 1142,86 mg/kgBB = 1142,86 mg/1000gBB = 228,572 mg/200 gBB tikus 228,572 mg/200 gBB x 56,0 = 12,80 g/70 kgBB manusia 2. Infusa biji P. americana 642,06 mg/kgBB tikus: 642,06 mg/kgBB = 642,06 mg/ 1000 gBB = 128,412 mg/200 gBB tikus 128,412 mg/200 gBB x 56,0 = 7,20 g/70 kgBB manusia 3. Infusa biji P. americana 360,71 mg/kgBB tikus: 360,71 mg/kgBB = 360,71 mg/ 1000 gBB = 72,142 mg/200 gBB tikus 72,142 mg/200 gBB x 56,0 = 4,04 g/ 70 kgBB manusia

Lampiran 14. Perhitungan Dosis Curliv® Dosis Curliv® untuk manusia 70 kgBB = 45 ml Dosis untuk tikus 200 gBB = 45 ml/70 kgBB x 0,018 = 0,81 ml/200gBB = 4,05 ml/kgBB


113

Lampiran 15. Perhitungan Efek Hepatoprotektif Rumus perhitungan efek hepatoprotektif bila olive oil diasumsikan memiliki efek hepatoprotektif sebesar 100%: (Aktivitas ALT CCl − aktivitas ALT kontrol olive oil) − (Aktivitas ALT perlakuan − aktivitas ALT kontrol olive oil) x 100% (Aktivitas ALT kontrol CCl − aktivitas ALT kontrol olive oil)

Berdasarkan rumus tersebut, maka perhitungan efek hepatoprotektif setiap kelompok perlakuan adalah sebagai berikut: 

Kelompok perlakuan infusa biji P. americana dosis 360,71 mg/kgBB + induksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB:



(183,2 − 47,6) − (49,20 − 47,6) (183,2 − 47,6)

100% = 98,8%




(183,2 − 47,6) − (99,80 − 47,6) (183,2 − 47,6)

100% = 61,5%




(183,2 − 47,6) − (65,20 − 47,6) (183,2 − 47,6)

100% = 87,0%

Kelompok kontrol Curliv® + induksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB: (183,2 − 47,6) − (105,4 − 47,6) (183,2 − 47,6)

100% = 57,4%

Lampiran 16. Perbandingan daya hepatoprotektif dosis IBPA perlakuan dengan Curliv® Bila diasumsikan Curliv® memiliki efek hepatoprotektif 100%, maka untuk mengetahui daya hepatoprotektif ketiga peringkat dosis bila dibandingkan dengan Curliv® menggunakan rumus sebagai berikut.


(Aktivitas ALT CCl − aktivitas ALT ®) − (Aktivitas ALT perlakuan − aktivitas ALT (Aktivitas ALT kontrol CCl − aktivitas ALT ®)

®)

114

x 100%

Berdasarkan rumus tersebut, maka daya hepatoprotektif setiap kelompok perlakuan dibandingkan dengan kontrol positif Curliv® adalah sebagai berikut: 




(183,2 − 105,4) − (49,20 − 105,4) (183,2 − 105,4)

100% = 172,24%




(183,2 − 105,4) − (99,80 − 105,4) (183,2 − 105,4)

100% = 107,20%

Kelompok perlakuan infusa biji P. americana dosis 1142,86 mg/kgBB + induksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB: (183,2 − 105,46) − (65,20 − 105,4) (183,2 − 105,46)

100% = 151,67%

Lampiran 17. Penetapan kadar air serbuk biji P. americana Penentuan kadar air dilakukan dengan Gravimetri dengan menggunakan alat moisture balance. Pemanasan sampel dilakukan pada suhi 105°C selama 15 menit. Hasil penetapan kadar air sebagai berikut: Tabel XI. Hasil Penetapan kadar air serbuk biji P. americana Bobot sebelum

Replikasi I

Replikasi II

Replikasi III

pemanasan

5,000 gram

5,000 gram

5,000 gram

Kadar air

7,52%

7,28%

7,40% Rata-rata kadar air = 7,4%

Persyaratan kadar air serbuk yang baik yaitu kurang dari 10%, sehingga dari hasil yang diperoleh menyatakan bahwa kadar air serbuk biji P. americana memenuhi persyaratan tersebut.


Lampiran 18. Hasil pengukuran validitas dan reabilitas Tabel XII. Hasil validitas dan reabilitas Dilihat dari serum kontrol (ALT range 26,2-41,8 U/L)

35

0,4

(x - x ¯ )

34

-0,6

0,36

0,4

0,16

34

-0,6

0,36

35

0,4

0,16

x (U/L)

35

34,60

0,16

1,2

=

∑

=

,

CV =

Range = ¯x ± SD = 34,6 ± 0,55 = 34,05 – 35,15

,

,

=0,55 100% = 1,58%

Syarat CV yang baik ≤ 2%

115


116

BIOGRAFI PENULIS Penulis

skripsi

dengan

judul

“Efek

Hepatoprotektif Infusa Biji Persea americana Mill. terhadap Aktivitas ALT-AST Serum pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida” memiliki nama lengkap Ni Luh Putu Dian Prawita Putri. Penulis lahir di Denpasar pada tanggal 28 April 1992, merupakan putri tunggal dalam keluarga pasangan I Made Wita dan Gusti Ayu Rai. Penulis mengawali masa pendidikannya di TK Kumara Santhi Sanur (1997-1998), kemudian melanjutkan pendidikan tingkat Sekolah Dasar di SD No. 1 Sanur (1998-2004). Pendidikan Sekolah Menengah Pertama ditempuh oleh penulis di SMP Negeri 3 Denpasar (2004-2007) dan melanjutkan ke SMA Negeri 4 Denpasar (2007-2010). Demi mewujudkan cita-cita sebagai seorang apoteker, penulis melanjutkan pendidikan tingkat Strata I di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2010. Semasa kuliah, penulis aktif dalam berbagai kepanitiaan dan unit kegiatan mahasiswa. Penulis menyalurkan hobi menari dengan mengikuti UKM Grisadha (2010) dan Sekar Jepun (2013). Penulis pernah menjabat sebagai Bendahara Donor Darah JMKI USD (2011), Wakil Komisaris eksternal JMKI USD (2012), anggota divisi konsumsi pada acara Sumpahan Apoteker XXV Fakultas Farmasi USD (2013). Penulis pernah menjadi asisten praktikum Kimia Dasar (2011), Komunikasi Farmasi (2013) dan Farmasi Komunitas (2013). Selain itu, penulis merupakan salah satu peserta PIMNAS XXV 2012 di Yogyakarta, Juara III Patient Counseling Competion di Universitas Indonesia (2013) dan Juara I CIET-C Universitas Brawijaya Malang (2013).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents