PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

VALIDASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI PADA PENETAPAN KADAR CAMPURAN DEKSAMETASON DAN DEKSKLORFENIRAMIN MALEAT DALAM KAPLET

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Metri Setyadhiani Karunawati NIM : 098114103

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013


VALIDASI METODE KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS DENSITOMETRI PADA PENETAPAN KADAR CAMPURAN DEKSAMETASON DAN DEKSKLORFENIRAMIN MALEAT DALAM KAPLET Halaman judul

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Metri Setyadhiani Karunawati NIM : 098114103

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013

i


Persetujuan Pembimbing

ii


Pengesahan Skripsi Berjudul

iii


HALAMAN PERSEMBAHAN

z

Kupersembahkan karya ini untuk: Kedua orangtuaku, Kakakku, adikku dan almamaterku

iv


PERNYATAAN KEASLIAN KARYA

v


LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS

vi


PRAKATA Puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala berkat, anugerah dan penyertaan yang telah diberikan-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul Validasi Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT)-Densitometri pada Penetapan Kadar Campuran Deksametason dan Deksklorfeniramin Maleat dalam Kaplet. Dimana skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm). Penyusunan skripsi ini telah mendapatkan dukungan dari berbagai pihak baik bimbingan, semangat, kritik, dan saran yang membangun. Oleh karena itu, pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan ucapan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada: 1.

Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

2.

Prof. Dr. Sudibyo Martono, M.S., Apt., selaku dosen pembimbing atas segala bimbingan, perhatian, kesabaran, semangat, kritik, dan saran selama penelitian dan penyusunan naskah.

3.

Ibu Dra. M.M. Yetty Tjandrawati, M.Si., selaku dosen pendamping pembimbing skripsi dan selaku dosen pembimbing akademik (DPA) atas segala pendampingannya baik dari semester satu hingga penyusunan skripsi.

4.

Jeffry Julianus, M.Si., selaku dosen penguji atas segala arahan, masukan, kritik, dan saran yang telah diberikan kepada penulis.

5.

Lucia Wiwid Wijayanti M.Si., selaku dosen penguji atas segala arahan, masukan, kritik, dan saran yang telah diberikan kepada penulis. vii


6.

Ibu Rini Dwiastuti, M.Sc., Apt., selaku Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma atas ijin yang diberikan untuk melakukan penelitian di laboratorium Kimia Analisis Instrumental.

7.

Segenap dosen dan karyawan atas ilmu dan pengalaman yang diberikan, sehingga berguna dalam penyusunan skripsi ini.

8.

Pihak PT Konimex atas pemberian baku deksametason sebagai bahan penelitian.

9.

Pihak

PT

Ifars

Pharmaceutical

Laboratories

atas

pemberian

baku

deksklorfeniramin maleat sebagai bahan penelitian. 10. Mas Bimo, Mas Parlan, Mas Kunto, selaku laboran yang telah banyak membantu penulis selama penelitian di laboratorium. 11. Pak Otok, atas bantuannya dalam pengadaan bahan-bahan yang diperlukan selama penelitian. 12. Shinta dan Sashya sebagai teman seperjuangan satu judul dalam penyelesaian penelitian ini, atas kebersamaan, semangat, keceriaan, nasehat, dan dukungannya selama penelitian di laboratorium dan kuliah. 13. Marimar, Novia, Chen2, Nindy, Is sumitro, Mike, Bahok, Anta, Adel, Lia susanti untuk kebersamaan, keceriaan, semangat, dan dukungan selama kuliah semester satu hingga saat ini 14. Mbah Rina, tante kekar, kutil, john, ci ana, berta, mayke, gendut, sefi, ita, esty, eni, double dewi, geka, seruni, intan, deby, dan sesepuh amakusa sebagai teman satu kost, atas segala kebersamaan, keceriaan, kenyamanan selama ini. viii


15. Ci lele, Ci sasa untuk kebersamaan, keceriaan dan semangat yang diberikan selama ini. 16. Teman-teman kelas FST B 2009 dan teman-teman angkatan 2009 atas semangat, kerja sama, dan kebersamaannya selama ini. 17. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu oleh penulis, terima kasih atas segala bantuan yang telah diberikan selama ini, sehingga penulis dapat menyelesaikan skrispi ini. Penulis menyadari masih banyak kekurangan di dalam penulisan skripsi ini. Oleh karena itu, penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun untuk perkembangan selanjutnya.

Penulis

ix


DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL .............................................................................................. i PERSETUJUAN PEMBIMBING ....................................................................... ii PENGESAHAN SKRIPSI BERJUDUL ............................................................ iii HALAMAN PERSEMBAHAN .......................................................................... iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .............................................................. v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ........................................... v PRAKATA ........................................................................................................... vi DAFTAR ISI.......................................................................................................... x DAFTAR TABEL .............................................................................................. xiv DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xv DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xvii INTISARI ....................................................................................................... xviii ABSTRACT ........................................................................................................ xix

BAB I PENGANTAR .......................................................................................... 1 A. Latar Belakang .................................................................................................. 1 1. Permasalahan ................................................................................................ 3 2. Keaslian penelitian ....................................................................................... 3 3. Manfaat penelitian ........................................................................................ 4 x


B. Tujuan ............................................................................................................... 4

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA .................................................................. 5 A. Deksametason ................................................................................................... 5 B. Deksklorfeniramin Maleat ................................................................................ 6 C. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) ...................................................................... 7 D. Fase Diam ......................................................................................................... 7 E. Densitometri ...................................................................................................... 9 F. Analisis Kualitatif ........................................................................................... 10 G. Validasi Metode .............................................................................................. 11 1. Akurasi. ...................................................................................................... 11 2. Presisi. ........................................................................................................ 12 3. Selektivitas ................................................................................................. 13 4. Linearitas .................................................................................................... 13 5. Range .......................................................................................................... 13 H. Landasan Teori ................................................................................................ 14 I. Hipotesis ......................................................................................................... 14

BAB III METODE PENELITIAN .................................................................... 15 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ...................................................................... 15 B. Variabel Penelitian .......................................................................................... 15 1. Variabel bebas ............................................................................................ 15 2. Variabel tergantung .................................................................................... 15 3. Variabel pengacau terkendali ..................................................................... 15 xi


C. Definisi Operasional ....................................................................................... 16 D. Bahan Penelitian ............................................................................................. 16 E. Alat Penelitian ................................................................................................. 16 F. Tata Cara Penelitian ........................................................................................ 17 1. Pembuatan fase gerak ................................................................................. 17 2. Pembuatan larutan baku ............................................................................. 17 3. Penentuan panjang gelombang pengamatan ............................................... 18 4. Pembuatan kurva baku ............................................................................... 19 5. Penentuan recovery dan Koefisien Variasi (KV) baku campuran.............. 19 6. Penentuan recovery dan Koefisien Variasi (KV) dengan adisi baku ........ 20 G. Analisis Hasil .................................................................................................. 22 1. Selektivitas ................................................................................................. 22 2. Linearitas .................................................................................................... 22 3. Akurasi ....................................................................................................... 23 4. Akurasi adisi baku dalam matriks sampel .................................................. 23 5. Presisi ......................................................................................................... 23 6. Range .......................................................................................................... 24

BAB IV PEMBAHASAN ................................................................................... 25 A. Pembuatan Fase Gerak .................................................................................... 25 B. Pembuatan Larutan Baku ................................................................................ 26 C. Penetapan Panjang Gelombang Pengamatan .................................................. 27 D. Analisis Kualitatif ........................................................................................... 29 E. Penetapan kurva baku ..................................................................................... 33 xii


F. Validasi Metode Analisis ................................................................................ 37 1. Selektivitas ................................................................................................. 37 2. Linearitas .................................................................................................... 38 3. Akurasi ....................................................................................................... 39 4. Presisi ......................................................................................................... 41 5. Range .......................................................................................................... 42 6. Penentuan akurasi dan presisi adisi baku dalam sampel ............................ 43

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................. 45 A. Kesimpulan ..................................................................................................... 45 B. Saran ............................................................................................................... 45

DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 46 LAMPIRAN ......................................................................................................... 49 BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................ 85

xiii


DAFTAR TABEL

Tabel I.

Parameter analisis dalam validasi metode analisis ............................ 11

Tabel II.

Kriteria rentang recovery yang dapat diterima .................................. 12

Tabel III.

Kriteria Penerimaan %RSD dari ketentuan Horwitz dan ketentuan AOAC Peer Verified Methods (PVM) berdasarkan kadar analit ........................................................................................ 12

Tabel IV.

Data Penentuan Kurva Baku Deksametason ..................................... 34

Tabel V.

Data Penentuan Kurva Baku Deksklorfeniramin Maleat .................. 35

Tabel VI.

Data nilai resolusi baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat .................................................................. 38

Tabel VII. Data nilai resolusi sampel .................................................................. 38 Tabel VIII. Data % recovery baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat periode ke-1 dan 2 ................................... 40 Tabel IX.

Data

%KV

baku

campuran

deksametason

dan

deksklorfeniramin maleat periode ke-1 dan 2 ................................... 42 Tabel X.

% Recovery dan %KV baku adisi ...................................................... 43

xiv


DAFTAR GAMBAR

Gambar 1.

Struktur Deksametason ...................................................................... 5

Gambar 2.

Struktur Deksklorfeniramin Maleat ................................................... 6

Gambar 3.

Struktur Silika Gel ............................................................................. 8

Gambar 4.

Densitometer dan Autosampler .......................................................... 9

Gambar 5.

Diagram skematis densitometer ...................................................... 10

Gambar 6.

Perpotongan

Spektra

Deksametason

(A)

dan

Deksklorfeniramin maleat (B) dalam pelarut etanol ........................ 28 Gambar 7.

Bagian kromofor deksametason ....................................................... 29

Gambar 8.

Bagian kromofor dan auksokrom deksklorfeniramin maleat ........... 29

Gambar 9.

Densitogram baku tunggal deksametason ........................................ 30

Gambar 10. Densitogram baku tunggal deksklorfeniramin maleat ..................... 30 Gambar 11. Densitogram sampel tanpa penambahan baku ................................. 30 Gambar 12. Densitogram sampel dengan penambahan baku .............................. 31 Gambar 13. Pola Spektra baku tunggal deksametason ........................................ 32 Gambar 14. Pola Spektra baku tunggal deksklorfeniramin maleat...................... 32 Gambar 15. Pola Spektra sampel tanpa penambahan baku ................................. 33 Gambar 16. Pola Spektra Sampel dengan penambahan baku .............................. 33 Gambar 17. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksametason 3 replikasi ............................................................................................ 34

xv


Gambar 18. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksklorfeniramin maleat 3 replikasi ............................................................................. 35 Gambar 19. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksametason ................... 36 Gambar 20. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksklorfeniramin maleat ............................................................................................... 37

xvi


DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1.

COA (Certificate of Analysis) Deksametason .............................. 50

Lampiran 2.

COA (Certificate Of Analysis) Deksklorfeniramin Maleat .......... 51

Lampiran 3.

Data penimbangan bahan .............................................................. 52

Lampiran 4.

Spektra deksametason (0,03 ; 0,06 ; 0,09 mg/mL) dan deksklorfeniramin maleat (0,1 ; 0,3 ; 0,5 mg/mL) ........................ 54

Lampiran 5.

Penentuan

kurva

baku

deksametason

dan

deksklorfeniramin maleat.............................................................. 54 Lampiran 6.

Contoh perhitungan nilai resolusi ................................................. 60

Lampiran 7.

Densitogram

presisi

dan

akurasi

baku

campuran

deksametason : deksklorfeniramin maleat periode ke-1 ............... 60 Lampiran 8.

Presisi dan akurasi baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat periode ke-1......................................... 63

Lampiran 9.

Densitogram

presisi

dan

akurasi

baku

campuran

deksametason : deksklorfeniramin maleat periode ke-2 ............... 68 Lampiran 10. Presisi dan akurasi baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat periode ke-2......................................... 71 Lampiran 11. Densitogram sampel tanpa penambahan ....................................... 73 Lampiran12. Densitogram

sampel

dengan

penambahan

baku

deksametason : deksklorfeniramin maleat .................................... 76 Lampiran 13. Presisi akurasi adisi baku deksametason dalam sampel ............... 79 Lampiran 14. Presisi akurasi adisi baku deksklorfeniramin maleat dalam sampel ........................................................................................... 82 xvii


INTISARI

Penjaminan mutu suatu obat sangatlah penting, karena berkaitan dengan penggunaan obat secara tepat, lengkap dan obyektif. Salah satu penjaminan mutu obat yaitu kesesuaian antara klaim label dengan kadar obat sebenarnya. Untuk menetapkan kadar obat diperlukan suatu metode yang sudah tervalidasi. Tujuan penelitian ini adalah membuktikan metode KLT Densitometri yang akan digunakan untuk melakukan penetapan kadar campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat dalam kaplet memenuhi parameter-parameter validasi. Metode yang digunakan yaitu Kromatografi Lapis Tipis (KLT)densitometri dengan fase diam silika gel 60 F254 dan fase gerak etil asetat : metanol : amonia 25% dengan perbandingan (25 : 4 : 1), dengan jarak pengembangan 5 cm dan panjang gelombang (λ) 262 nm. Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan, metode ini memenuhi parameter selektivitas, linearitas, akurasi, presisi dan range. Nilai Rs > 1,5 menunjukan metode memenuhi parameter selektivitas. Lineritas deksametason memiliki nilai r2=0,999 dan 0,999 untuk linearitas deksklorfeniramin maleat. Akurasi dan presisi campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat pada konsentrasi rendah (30 : 100 ppm), sedang (90 : 300 ppm) dan tinggi (150 : 500 ppm) yang dilakukan selama 2 periode memenuhi persyaratan presisi inter-day, dimana semua konsentrasi memiliki % recovery dan % KV yang memenuhi parameter akurasi dan presisi. Kata kunci: Deksametason, Deksklorfeniramin maleat, KLT-densitometri, Validasi metode, Penjaminan mutu

xviii


ABSTRACT

Quality assurance of a drug is important, for it is related to complete and objective drug usage. One of the drug quality assurance is correspondence between label claims and actual drug levels. To determine drug levels, a validated method is required. The aim of this study is to show that TLC-densitometry method meets the validation parameters and can be used to perform the assay mixture of dexamethasone and dexchlorpheramine maleate in kaplet. The method that is used is Thin Layer Chromatography (TLC)densitometry with silica gel 60 F254 as the stationary phase, ethyl acetate: methanol: ammonia 25% (25: 4: 1) as the mobile phase, 5 cm development distance and UV detector at wavelength (λ) 262 nm. Based on the results of research, this method meets the parameters selectivity, linearity, accuracy, precision and range. Rs value > 1.5 indicates that the method meets the selectivity parameter. Dexamethasone linearity has r2 value 0.999 and 0.999 for dexchlorpheniramin maleate linearity. Accuracy and precision of dexamethasone and deksklorfeniramine maleate mixture at low concentrations (30: 100 ppm), medium (90: 300 ppm) and high (150: 500 ppm) that were performed in 2 periods meet the requirements of inter-day precision, where all concentrations have % recovery and % KV that meets the accuracy and precision parameters. Keyword: Dexamethasone, Dexchlorpheniramin maleate, KLT-densitometry, Validation method, Quality assurance

xix


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Berdasarkan data dari World Allergy Organization (WAO) 2011 menunjukkan bahwa prevalensi alergi terus meningkat dengan angka 30-40 persen dari total populasi dunia. Data tersebut sejalan dengan data dari Center for Disease Control and Prevention (CDC) yang mencatat bahwa angka kejadian alergi meningkat tiga kali lipat sejak 1993 hingga 2006. Di Indonesia, beberapa peneliti juga memperkirakan bahwa peningkatan kasus alergi mencapai 30 persen per tahunnya (Pdpersi, 2012). Campuran deksklorfeniramin maleat dan deksametason merupakan salah satu obat yang telah beredar untuk mengatasi berbagai menifestasi reaksi alergi. Dengan beredarnya suatu obat ke masyarakat luas, maka penjaminan mutu obat sangatlah penting. Salah satu penilaian mutu obat adalah kesesuaian antara klaim label, yang dalam hal ini kadar zat aktif obat yang tertera pada label, dengan kadar sebenarnya. Hal ini berguna untuk memastikan bahwa informasi yang tercantum pada label obat (etiket/brosur/kemasan) adalah informasi yang lengkap dan obyektif, yang dapat menjamin penggunaan obat secara tepat, rasional dan aman. Menurut Keputusan Kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia nomor hk.04.1.23.11.11.09219 tahun 2011 tentang penerapan sistem manajemen

mutu

(quality

management

1

system),

manual

mutu


2

pada pengawasan post market salah satunya yaitu pengawasan promosi dan penandaan/label obat dan makanan. Pengawasan ini meliputi pengambilan sampel (sampling) dan pengujian terkait kesesuaian terhadap kadar obat dan monitoring konsistensi informasi dalam label/penandaan obat (BPOM, 2011). Untuk menguji kesesuaian kadar sebenarnya dengan klaim label, diperlukan suatu metode untuk menetapkan kadar. Dalam sediaan yang akan diuji terdapat dua senyawa yang akan ditetapkan kadarnya yaitu deksametason dan deksklorfeniramin maleat. Kromatografi lapis tipis (KLT)-densitometri dapat digunakan untuk menetapkan kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat, dimana metode KLT-densitometri dapat memisahkan kedua senyawa dan dapat digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif. Metode KLT-densitometri dapat digunakan untuk analisis obat di laboratorium farmasi, karena metodenya cepat, dapat digunakan untuk analisis preparatif, kualitatif serta kuantitatif dan hanya memerlukan jumlah cuplikan yang sedikit. Metode analisis KLT-densitometri ini dapat digunakan untuk analisis preparatif, kualitatif dan kuantitatif, secara preparatif metode ini akan memisahkan senyawa campuran, sedangkan secara kualitatif dapat digunakan untuk menentukan nilai Rf (retardation factor), dimana nilai Rf tersebut dapat digunakan sebagai pembanding nilai bercak pada baku dan bercak sampel. Selain itu, secara kuantitatif metode ini dapat menentukan kadar masing-masing komponen campuran, nilai resolusi, nilai CV dan recovery yang menggambarkan akurasi dan presisi metode (Khopkar, 1990).


3

Sebelum digunakan untuk penetapan kadar, metode yang dipilih harus divalidasi terlebih dahulu. Parameter validasi berdasarkan prosedur analisis kategori 1 meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi dan range. Validasi dilakukan agar hasil yang didapat merupakan hasil yang valid atau dapat dipercaya, karena validasi merupakan kebutuhan dasar untuk menjamin kualitas dan reliabel hasil dalam aplikasi analitis (Ermer dan Miller, 2005).

1.

Permasalahan Apakah metode KLT-densitometri untuk penetapan kadar deksametason

dan deksklorfeniramin maleat dalam campuran memenuhi parameter-parameter validasi kategori 1 yang meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range?

2.

Keaslian penelitian Beberapa penetapan kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat

dalam campuran yang pernah dilakukan yaitu penetapan kadar deksklorfeniramin maleat dan deksametason dalam tablet dengan metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) sudah pernah dilakukan oleh Syarif (2009). Penetapan kadar deksametason secara tunggal dengan metode Kromatografi Lapis Tipis dan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) telah dilakukan oleh Huetos dan Ramos (1999). Penetapan kadar deksametason dalam ointment dengan metode kromatografi lapis tipis densitometri oleh Krzek, Maslanka dan Lipner (2005). Penelitian yang dilakukan oleh penulis adalah melakukan validasi metode KLT-densitometri untuk menetapkan kadar deksametason dan deksklorfeniramin


4

maleat dalam kaplet yang belum pernah dilakukan pada penelitian sebelumnya, dimana KLT-densitometri memiliki metode yang cepat, dapat digunakan untuk analisis preparatif, kualitatif serta kuantitatif dan hanya memerlukan jumlah cuplikan yang sedikit.

3.

Manfaat penelitian a. Manfaat metodologis. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan

sumbangan ilmiah tentang penggunaan metode KLT-densitometri pada penetapan kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat dalam kaplet. b. Manfaat praktis. Hasil penelitian diharapkan dapat memberikan informasi mengenai selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range metode KLT-densitometri

untuk

penetapan

kadar

campuran

deksametason

dan

deksklorfeniramin maleat dalam sampel kaplet X®.

B. Tujuan Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan bahwa metode KLTdensitometri telah memenuhi parameter-parameter validasi kategori 1 yaitu selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range, sehingga dapat digunakan untuk penetapan kadar campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat dalam sampel kaplet X®.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Deksametason Deksametason memiliki pemerian yaitu serbuk hablur, putih sampai praktis putih, tidak berbau, stabil di udara, melebur pada suhu lebih kurang 250oC disertai peruraian. Kelarutan deksametason yaitu: praktis tidak larut dalam air, agak sukar larut dalam aseton, dalam etanol, dalam dioksan dan dalam metanol, sukar larut dalam kloroform, sangat sukar larut dalam eter (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995).

Gambar 1. Struktur Deksametason

Deksametason

merupakan

salah

satu

kortikosteroid

sintetis.

Kemampuannya dalam menanggulangi peradangan dan alergi kurang lebih sepuluh kali lebih hebat dari pada yang dimiliki prednison (Katzung, 1998). Penggunaan deksametason antara lain pada terapi artritis reumatoid, sistemik lupus eritematosus, rinitis alergika, asma, leukemia, limpoma, anemia hemolitik atau autoimun, selain itu deksametason dapat digunakan untuk menegakkan

diagnosis

sindroma

cushing.

5

Efek

samping

pemberian


6

deksametason antara lain terjadinya insomnia, osteoporosis, retensi cairan tubuh, glaukoma dan lain-lain (Suherman, 2007).

B. Deksklorfeniramin Maleat Pemerian pada deksklorfeniramin maleat yaitu serbuk hablur, putih, tidak berbau sedangkan kelarutannya diketahui mudah larut dalam air, larut dalam etanol dan dalam kloroform, sukar larut dalam benzen dan dalam eter (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995).

Gambar 2. Struktur Deksklorfeniramin Maleat

Mekanisme kerja dari deksklorfeniramin maleat yaitu memblokir reseptor-H1 dan bersaing dengan histamin pada reseptornya di otot polos dinding pembuluh dan dengan demikian menghindarkan timbulnya reaksi alergi. Khasiat lainnya menyempitkan bronchi, saluran cerna, kandung kemih dan rahim (Tjay dan Rahardja, 2002). Deksklorfeniramin maleat merupakan obat yang menentang kerja histamin pada H1 reseptor histamin berguna dalam menekan alergi yang disebabkan oleh timbulnya simptom karena histamin (ISO, 2007).


7

C. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) Prinsip kromatogarfi lapis tipis yaitu memisahkan komponen-komponen campuran atas dasar perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fase diam di bawah gerakan pelarut pengembang (Mulja dan Suharman, 1995). Fase gerak yang digunakan harus mempunyai kemurnian yang sangat tinggi karena KLT merupakan teknik yang sensitif. Daya elusi fase gerak harus diatur sedemikian rupa, sehingga nilai Rf terletak antara 0,2-0,8 untuk memaksimalkan pemisahan (Gandjar dan Rohman, 2007). Selama pemisahan dalam sistem kromatografi terjadi proses sorpsi dan desorpi. Sorpsi merupakan proses pemindahan solut dari fase gerak ke fase diam, sementara itu proses sebaliknya (pemindahan solut dari fase diam ke fase gerak) disebut dengan desorpsi. Ada 4 jenis mekanisme sorpsi dasar dan umumnya 2 atau lebih mekanisme ini terlibat dalam satu jenis kromatografi. Keempat jenis tersebut yaitu adsorpsi, partisi, pertukaran ion, dan eksklusi ukuran. Pada sistem kromatografi lapis tipis mekanisme yang terjadi yaitu adsorpsi (Gandjar dan Rohman, 2007).

D. Fase Diam Sejauh ini silika gel merupakan fase diam KLT paling penting dimana pembuatannya menggunakan presipitasi asam dari larutan natrium silika (Na2SiO3). Karakteristik sorpsi dari silika gel yaitu terletak pada permukaan gugus silanol (SiOH) yang mana bersifat asam lemah. Silika gel dapat mengikat tiga lapisan molekul air, dimana 2 lapisan atas dapat dihilangkan secara reversible


8

dengan pemanasan 120oC, sedangkan pada suhu di atas 200oC air dapat hilang secara irreversible dan ketika dipanaskan lebih dari 1000oC akan menghilangkan aktivitas karena gugus silanol menghilang. Untuk itu disarankan pemanasan silika gel tidak lebih dari 180oC (Spangenberg, 2010).

Gambar 3. Struktur Silika Gel (Habtemariam, 2013)

Lapisan Silika gel sering diresapi berbagai senyawa kimia dengan cara dicelupkan, disemprot atau ditambahkan dalam fase gerak namun yang sering dilakukan yaitu dengan ditambahkan pada fase gerak. Gugus silanol yang terletak pada permukaan silika merupakan gugus yang reaktif yang mampu bereaksi dengan reagen organosilane sehingga terjadi modifikasi yang mampu memperluas cakupan aplikasi. Polimer organik yang digunakan sebagai pengikat (binder) dapat menstabilkan lapisan. Untuk meningkatkan stabilitas, gugus NH2, CN dan diol diikatkan ke matrik silika gel melalui gugus n-propyl (-CH2-CH2-CH2-) (Spangenberg, 2010).


9

E. Densitometri

Teknik kuantitasi dapat didasarkan atas pengukuran intensitas sinar yang diserap (absorbsi), intensitas sinar yang dipantulkan (reflektansi), atau intensitas sinar yang difluoresensikan (fluoresensi). Disini biasanya dipilih sinar pada panjang gelombang yang diserap atau dipantulkan paling banyak oleh noda yang diteliti. Banyaknya sinar yang direfleksikan akan ditangkap paling banyak oleh suatu alat yang disebut reflection photomultiplier yang akan diteruskan ke pencatat atau rekorder untuk diubah menjadi suatu puncak atau kromatogram (Mintarsih, 1990).

Gambar 4. Densitometer dan Autosampler (Wall, 2005)

Monokromator digunakan untuk memilih panjang gelombang yang cocok, sistem untuk memfokuskan sinar pada lempeng, pengganda foton, dan rekorder. Densitometer dapat bekerja secara serapan atau fluoresensi, dalam sistem serapan terdapat dua model yaitu pantulan dan transmisi. Cara pantulan dapat digunakan untuk sinar tampak maupun ultraviolet sedangkan transmisi hanya dapat digunakan untuk sinar tampak (Gandjar dan Rohman, 2007).


10

Gambar 5. Diagram skematis densitometer (Scott, 2009)

F. Analisis Kualitatif Analisis kualitatif dapat dilakukan melalui 3 pendekatan : 1) Perbandingan antara retensi solut yang tidak diketahui dengan retensi baku yang sesuai pada kondisi yang sama. 2) Dengan cara spiking, dilakukan dengan menambah sampel yang mengandung senyawa tertentu yang akan diselidiki dengan senyawa baku pada kondisi kromatogram yang sama, maka akan terjadi perbedaan tinggi atau luas peak antara sampel dengan sampel yang telah ditambah baku. 3) Menggabungkan alat kromatografi dengan spektrometer massa Identifikasi dengan hanya menggunakan data retensi pada satu kondisi kromatografi tidak selalu menghasilkan data yang reliabel (Gandjar dan Rohman, 2007).


11

G. Validasi Metode Tujuan utama validasi metode adalah menjamin bahwa metode analisis yang digunakan dapat memberikan hasil analisis yang baik (Adamovics, 1997). Prosedur analisis terbagi menjadi 4 kategori, dimana masing-masing kategori membutuhkan parameter analisis yang berbeda-beda seperti terlihat pada Tabel I. Kategori I merupakan prosedur analisis untuk kuantifikasi komponen utama zat obat atau bahan aktif dalam produk jadi farmasi. Kategori II merupakan prosedur analisis untuk penentuan impurities dalam bahan obat atau senyawa degradasi dalam produk jadi farmasi, prosedur ini meliputi tes kuantitatif dan tes batas. Kategori III merupakan prosedur analisis untuk menentukan karakteristik kinerja (disolusi, pelepasan obat). Kategori IV yaitu uji identifikasi (United States Pharmacopeial Convention, 2007). Tabel I. Parameter analisis yang dibutuhkan dalam validasi metode analisis (United States Pharmacopeial Convention, 2007)

Karakteristik Akurasi Presisi Selektivitas Batas Deteksi Batas Kuantifikasi Linearitas Range

Kategori I Yes Yes Yes No No Yes Yes

Kategori II Kuantitatif Batas Uji Yes * Yes No Yes Yes No Yes Yes No Yes No Yes *

Kategori Kategori III IV * No Yes No * Yes * No * No * No * No *Mungkin dibutuhkan

1. Akurasi. Akurasi merupakan kedekatan antara nilai terukur (nilai rata-rata hasil analisis) dengan nilai yang diterima sebagai nilai sebenarnya, kemudian


12

dinyatakan sebagai persen perolehan kembali/recovery (Gandjar dan Rohman, 2007). Tabel II. Kriteria rentang recovery yang dapat diterima (Horwitz cit.,Gonzales and Herador, 2007)

Konsentrasi analit (%) 100 ≥10 ≥1 ≥0,1 0,01 0,001 0,0001 0,00001 0,000001 0,0000001

Fraksi Analit

Unit

Akurasi (%)

1 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8 10-9

100% 10% 1% 0,1% 100 ppm 10 ppm 1 ppm 100 ppb 10 ppb 1 ppb

98-102 98-102 97-103 95-105 90-107 80-110 80-110 80-110 60-115 40-120

2. Presisi. Presisi atau keseksamaan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian antara hasil uji individual yang diukur melalui penyebaran hasil individual dari rata-rata, jika prosedur diterapkan secara berulang pada sampelsampel yang diambil dari campuran yang homogen (Snyder dkk., 1997). Tabel III. Kriteria Penerimaan %RSD dari ketentuan Horwitz dan ketentuan AOAC Peer Verified Methods (PVM) berdasarkan kadar analit

(Horwitz cit.,Gonzales and Herador, 2007)


13

3. Selektivitas Selektivitas suatu metode adalah kemampuan suatu metode untuk dapat mengukur zat tertentu secara cermat dan seksama dengan adanya komponen lain yang mungkin ada dalam matrik sampel (Harmita, 2004). Selektivitas ditentukan melalui perhitungan nilai Rs. Nilai Rs = 1,5 disebut baseline resolution, yaitu pemisahan sempurna dari dua puncak dengan ukuran yang sama (Pecsok dkk., 1976).

4. Linearitas Linearitas prosedur analisis merupakan kemampuan mendapatkan hasil respon (absorbansi dan AUC) yang secara langsung proporsional dengan konsentrasi analit di dalam sampel. Respon yang dapat dikuantifikasikan adalah peak area, peak heights atau ratio of peak area dari analit ke peak eksternal standar. Pada linearitas digunakan setidaknya lima tingkat konsentrasi, seperti direkomendasikan oleh ICH. Dalam keadaan normal, linearitas dicapai bila koefisian determinasi r2 ≥ 0,997 (Chan, Lam, Lee dan Zhang, 2004). 5. Range Range dalam metode analisis adalah interval antara konsentrasi paling atas dan konsentrasi paling bawah analit yang sudah memenuhi prosedur analisis yang meliputi akurasi, presisi, dan linearitas (The British Pharmacopoeia Commission, 2011).


14

H. Landasan Teori Deksametason dan deksklorfeniramin maleat merupakan dua zat aktif yang terdapat pada obat anti alergi, kedua zat aktif ini memiliki sifat kepolaran yang berbeda sehingga dengan mengunakan sistem kromatografi lapis tipis kedua senyawa ini dapat dipisahkan. Jika dilihat dari sifat fisikokimia deksametason lebih bersifat non polar dibandingkan dengan deksklorfeniramin maleat yang cenderung lebih larut pada air dan sukar larut pada benzen. Metode yang digunakan yaitu KLT densitometri dimana metode ini dapat memisahkan antara dua senyawa dan dapat untuk melakukan analisis kuantitatif. Pemisahan terjadi karena adanya perbedaan afinitas dan interaksi senyawa terhadap fase diam dan fase gerak. Bercak yang muncul setelah dilakukan elusi dapat dianalisis kuantitatif menggunakan densitometer, sehingga dapat diperoleh nilai Rf dan AUC. Suatu metode yang akan digunakan untuk menetapkan kadar suatu obat harus memiliki parameter validitas yang baik agar data yang diperoleh dapat dipercaya. Parameter validasi untuk prosedur analisis kategori 1 meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range. Suatu metode analisis dikatakan memiliki validitas yang baik apabila memenuhi parameter-parameter validasi tersebut. I. Metode

KLT-densitometri

Hipotesis untuk

penetapan

kadar

campuran

deksametason dan deksklorfeniramin maleat memenuhi parameter-parameter validasi yang meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range.


BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Jenis penelitian yang dilakukan bersifat non-eksperimental dengan rancangan penelitian deskriptif. Non-eksperimental karena tidak terdapat manipulasi dan perlakuan terhadap subjek uji, sedangkan deskriptif karena peneliti hanya mendeskripsikan keadaan yang ada.

B. Variabel Penelitian 1. Variabel bebas Variabel bebas pada penelitian ini yaitu sistem KLT yang telah dioptimasi, yaitu jenis dan komposisi fase gerak. 2. Variabel tergantung Variabel tergantung pada penelitian ini yaitu parameter-parameter validasi meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range. 3. Variabel pengacau terkendali Variabel pengacau terkendali pada penelitian ini yaitu digunakan pelarut pro analisis yang memiliki kemurnian tinggi, bahan baku yang digunakan yaitu bahan baku yang memiliki Certificate of Analysis (CoA), dan penjenuhan bejana kromatografi menggunakan kertas saring sebagai indikator kejenuhan bejana kromatografi.

15


16

C. Definisi Operasional 1.

Sistem KLT yang digunakan yaitu fase normal dengan fase diam silika gel 60 F254 dan fase gerak kombinasi etil asetat : metanol : amonia 25% (25 : 4 : 1).

2.

Kadar deksametason dan deksklorfeniramin maleat dinyatakan dalam satuan mg/mL dalam pelarut etanol.

3.

Parameter validasi yang digunakan adalah selektivitas, linearitas, akurasi, presisi dan range.

D. Bahan Penelitian Bahan-bahan yang digunakan adalah baku deksametason (Tianjin Tianyao Pharmaceuticals CO., LTD), baku deksklorfeniramin maleat (Siegfried Ltd 4800 Zofingen Switzerland), lempeng KLT silika gel 60 F254 20x20cm (E. Merck), etanol p.a (E. Merck), etil asetat p.a (E. Merck), amonia p.a (E. Merck), metanol p.a (E. Merck), dan obat kaplet X® yang berisi campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat .

E. Alat Penelitian Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah seperangkat alat densitometer (Camag TLC Scanner 3 CAT. No. 027.6485 SER. No.160602), autosampler (Linomat 5 No.170610), neraca analitik (OHAOUS Carat Series PAJ 1003, max 60/120 g, min 0,0001 g, d = 0,01/0,1 mg), neraca analitik (Scaltec SBC 22 max 60/210 g; min 0,001 g; d = 0,01/0,1mg), bejana kromatografi (Camag), alat-alat gelas yang lazim digunakan (Pyrex), kertas saring.


F.

17

Tata Cara Penelitian

1. Pembuatan fase gerak Fase gerak yang digunakan adalah fase gerak yang telah didapat dari hasil optimasi pada penelitian sebelumnya yaitu etil asetat, metanol, dan amonia 25% (25:4:1). 2. Pembuatan larutan baku a. Pembuatan stok larutan baku deksametason 0,3 mg/mL. Baku deksametason ditimbang seksama lebih kurang 37,5 mg, dimasukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan dilarutkan dengan 5,0 mL etanol, sonifikasi selama 2 menit dan dilanjutkan pengojogan menggunakan vortex selama 2 menit, kemudian encerkan dengan etanol hingga batas tanda. Setelah itu, larutan tersebut diambil 2 mL, dimasukan ke dalam labu takar 25,0 mL dan diencerkan dengan etanol sampai batas tanda sehingga diperoleh larutan baku deksametason dengan konsentrasi 0,3 mg/mL. b. Pembuatan larutan baku tunggal deksametason. Larutan baku deksametason 0,3 mg/mL dipipet 3 mL kemudian masing-masing dimasukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan diencerkan dengan etanol sampai batas tanda, sehingga diperoleh seri larutan baku deksametason dengan konsentrasi 0,09 mg/mL. c. Pembuatan stok larutan baku deksklorfeniramin maleat 1 mg/mL. Baku deksklorfeniramin maleat ditimbang seksama lebih kurang 50 mg, dimasukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan dilarutkan dengan 5,0 mL etanol, sonifikasi selama 2 menit dan dilanjutkan penggojogan menggunakan vortex


18

selama 2 menit, kemudian encerkan dengan etanol hingga batas tanda. Setelah itu, larutan tersebut diambil 5 mL, dimasukan ke dalam labu takar 25,0 mL dan diencerkan dengan etanol sampai batas tanda sehingga diperoleh larutan baku deksklorfeniramin maleat dengan konsentrasi 1 mg/mL. d. Pembuatan larutan baku tunggal deksklorfeniramin maleat. Larutan baku deksklorfeniramin maleat 1 mg/mL dipipet 3 mL kemudian masing-masing dimasukan ke dalam labu takar 10,0 mL dan diencerkan dengan etanol sampai batas tanda, sehingga diperoleh seri larutan baku deksklorfeniramin maleat dengan konsentrasi 0,3 mg/mL. e. Pembuatan

seri

larutan

baku

campuran

deksametason

dan

deksklorfeniramin maleat. Larutan baku deksametason 0,3 mg/mL dan larutan baku deksklorfeniramin maleat 1 mg/mL masing-masing dipipet 1; 2; 3; 4 dan 5 mL dan masing-masing dimasukan ke dalam labu takar 10,0 mL kemudian diencerkan dengan etanol sampai tanda batas dan digojog, sehingga diperoleh seri konsentrasi campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat 0,03 : 0,1 mg/mL; 0,06 : 0,2 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL; 0,12 : 0,4 mg/mL dan 0,15 : 0,5 mg/mL. 3. Penentuan panjang gelombang pengamatan Seri larutan baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat 0,03 : 0,1 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL dan 0,15 : 0,5 mg/mL masing-masing ditotolkan 1 µL dengan menggunakan linomat pada pelat silika gel dengan jarak antar totolan 0,9 cm. Kemudian pelat dikembangkan didalam bejana kromatografi (Camag®) yang telah dijenuhkan. Pengembangan dilakukan setinggi 5 cm. Pelat


19

dikeluarkan dan dikeringkan selama ± 5 menit dan diukur AUC tiap masingmasing senyawa kemudian dilakukan pembacaan panjang gelombang 200-450 nm sehingga diperoleh panjang gelombang overlapping spektra deksametason dan deksklorfeniramin maleat. 4. Pembuatan kurva baku Seri larutan baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat 0,03 : 100 mg/mL; 0,06 : 0,2 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL; 0,12 : 0,4 mg/mL dan 0,15 : 0,5 mg/mL ditotolkan 1 µL dengan menggunakan linomat pada pelat silika gel dengan jarak antar totolan 0,9 cm. Kemudian pelat dikembangkan di dalam bejana kromatografi (Camag®) yang telah dijenuhkan. Pengembangan dilakukan setinggi 5 cm. Pelat dikeluarkan dan dikeringkan selama ± 5 menit dan diukur AUC tiap masing-masing senyawa (deksametason dan deksklorfeniramin maleat akan memisah) menggunakan densitometer pada panjang gelombang pengamatan. Replikasi dilakukan sebanyak 3 kali. Dipilih persamaan kurva baku dengan nilai r2 ≥ 0.997 untuk kurva baku deksametason dan kurva baku deksklorfeniramin maleat. 5. Penentuan recovery dan Koefisien Variasi (KV) baku campuran Seri larutan baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat 0,03 : 0,1 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL dan 0,15 : 0,5 mg/mL ditotolkan sebanyak 1 µL dengan menggunakan linomat pada pelat silika gel dengan jarak antar totolan 0,9 cm. Kemudian pelat dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah dijenuhkan oleh fase gerak. Pengembangan dilakukan setinggi 5 cm. Pelat dikeluarkan dan dikeringkan selama ± 5 menit dan dilakukan scanning


20

menggunakan densitometer pada panjang gelombang pengamatan. Nilai AUC yang didapat dimasukkan ke dalam persamaan kurva baku yang telah dibuat sebelumnya, sehingga didapatkan jumlah deksametason dan deksklorfeniramin maleat yang kemudian dapat digunakan untuk menghitung %recovery dan %KV. Penelitian dilakukan selama 2 periode, dimana tiap periode dilakukan paling lama 4 hari dan di replikasi sebanyak 3 kali. 6. Penentuan recovery dan Koefisien Variasi (KV) dengan adisi baku dalam sampel a. Preparasi sampel kaplet. 20 kaplet yang setara dengan 0,5 mg deksametason dan 2 mg deksklorfeniramin maleat digerus dalam mortir hingga homogen. b. Pembuatan larutan stok baku adisi. Timbang dengan seksama lebih kurang 10 mg baku deksametason dan 40 mg baku deksklorfeniramin maleat masukan ke dalam labu takar 10,0 mL dan larutkan dengan 5,0 mL etanol, sonifikasi larutan selama 2 menit dan dilanjutkan penggojogan menggunakan vortex selama 2 menit, kemudian encerkan dengan etanol hingga batas tanda dan vortex, sehingga diperoleh larutan stok baku campuran deksametason konsentrasi 1 mg/mL atau setara dengan 1000 ppm dan deksklorfeniramin maleat konsentrasi 4 mg/mL atau setara dengan 4000 ppm. c. Pembuatan larutan intermediet baku adisi (LA). Pipet 1,0 mL larutan stok baku campuran deksametason (1 mg/mL) : deksklorfeniramin maleat (4 mg/mL), masukan ke dalam labu takar 10,0 mL dan diencerkan dengan etanol hingga batas tanda dan dilakukan penggojogan menggunakan vortex, sehingga di


21

peroleh larutan intermediet baku campuran deksametason dengan konsentrasi 0,1 mg/mL atau setara dengan 100 ppm dan deksklorfeniramin maleat konsentrasi 0,4 mg/mL atau setara dengan 400 ppm. d. Pembuatan larutan sampel tanpa penambahan baku deksametason dan deksklorfeniramin maleat (LB). Timbang dengan seksama lebih kurang 90 mg sampel yang telah dihomogenkan, masukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan larutkan dengan 5,0 mL etanol, sonifikasi larutan selama 2 menit dilanjutkan dengan penggojogan menggunakan vortex selama 15 menit, kemudian larutan diencerkan dengan etanol hingga batas tanda, gojog dengan vortex dan saring menggunakan kertas saring. Replikasi dilakukan sebanyak 9 kali. e. Pembuatan larutan sampel dengan penambahan baku deksametason dan deksklorfeniramin maleat (LC). Timbang dengan seksama lebih kurang 90 mg sampel yang telah dihomogenkan, masukkan ke dalam labu takar 10,0 mL dan tambahkan dengan 1,0 ; 2,0 dan 3,0 mL larutan baku intermediet adisi (LA) pada masing-masing labu takar, sonifikasi larutan selama 2 menit dilanjutkan dengan penggojogan menggunakan vortex selama 15 menit, kemudian larutan diencerkan dengan etanol hingga batas tanda, gojog dengan vortex dan saring menggunakan kertas saring, sehingga didapat konsentrasi baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat yang ditambahkan yaitu 0,01 : 0,04 mg/mL; 0,02 : 0,08 mg/mL dan 0,03 : 0,12 mg/mL. Replikasi dilakukan sebanyak 3 kali pada tiap konsentrasi. f. Pengembangan dan pengukuran. LB, dan LC ditotolkan sebanyak 1 µL pada pelat silika gel dengan jarak antar totolan 0,9 cm. Setelah totolan kering


22

kemudian pelat dikembangkan dalam bejana kromatografi yang telah jenuh oleh fase gerak. Pengembangan dilakukan setinggi 5 cm. Pelat dikeluarkan dan dikeringkan selama ± 5 menit dan scanning menggunakan densitometer pada panjang gelombang pengamatan. Nilai AUC yang didapat dimasukkan ke dalam persamaan kurva baku yang telah dibuat sebelumnya, sehingga didapatkan jumlah deksametason dan deksklorfeniramin maleat yang ditambahkan, sehingga dapat digunakan untuk menghitung %recovery dan %KV. G. Analisis Hasil 1. Selektivitas Kriteria selektivitas yang baik ditunjukkan dengan nilai resolusi > 1,5. Resolusi dapat dihitung dengan cara berikut:

(Watson, 2009) Keterangan : Rf1 dan Rf2

= nilai Rf dari peak 1 dan 2

w1 dan w2

= lebar peak 1 dan 2

2. Linearitas Jumlah baku deksametason dan deksklorfeniramin maleat (mg/mL) masing-masing diplotkan dengan AUC yang diperoleh, sehingga didapatkan persamaan kurva baku y = bx + a dan nilai koefisien korelasi (r). Suatu metode dapat dikatakan memiliki linearitas yang baik jika r2 > 0,997 (Chan, Lam, Lee dan Zhang, 2004).


23

3. Akurasi Akurasi metode analisis dinyatakan dengan recovery yang dapat dihitung dengan cara berikut: (Harmita, 2004). Metode dapat dikatakan memenuhi parameter akurasi jika memiliki persen perolehan kembali 80-110 % untuk konsentrasi 10 ppm dan 90-107% untuk konsentrasi 100 ppm. (Horwitz cit.,Gonzales and Herador, 2007). 4. Akurasi adisi baku dalam matriks sampel Nilai recovery adisi baku dalam matriks sampel dapat dihitung dengan cara berikut:

(Harmita, 2004). 5. Presisi Presisi metode analisis dinyatakan dengan KV (koefisien variasi) yang dapat dihitung dengan cara berikut: (Harmita, 2004). Kriteria penerimaan untuk parameter presisi yaitu jika metode memiliki %KV tidak lebih dari 11,3% untuk konsentrasi 10 ppm dan 8% untuk konsentrasi 100 ppm (Horwitz cit.,Gonzales and Herador, 2007).


24

6. Range Range merupakan interval jumlah analit yang memenuhi persyaratan linearitas, akurasi, dan presisi (The British Pharmacopoeia Commission, 2011).


BAB IV PEMBAHASAN

A. Pembuatan Fase Gerak Komposisi fase gerak yang digunakan dalam penelitian ini yaitu etil asetat : metanol : amonia 25% (25 : 4 : 1). Fase gerak ini didapat dari hasil optimasi dari penelitian sebelumnya (Ratnaningtyas, 2013), dimana pada penelitian sebelumnya fase gerak dengan komposisi etil asetat, metanol, dan amonia mampu memisahkan senyawa deksametason dan deksklorfeniramin secara optimal. Pembuatan fase gerak dilakukan dengan mencampur etil asetat, metanol dan amonia dengan komposisi 25:4:1. Penggunaan etil asetat pada komposisi fase gerak yaitu untuk menurunkan kepolaran komposisi fase gerak. Amonia digunakan untuk melindungi senyawa deksklorfeniramin maleat yang merupakan garam basa dari sifat asam lemah gugus silanol dalam silika gel, amonia bersifat basa, memiliki pka 9,25. Amonia dapat berikatan dengan fase diam (masking), sehingga deksklorfeniramin maleat tidak berikatan kuat dengan fase diam dan mampu terelusi. Metanol digunakan agar etil asetat dan amonia yang memiliki perbedaan kepolaran dapat bercampur, selain itu metanol juga menyumbang kepolaran fase gerak sehingga didapat fase gerak yang optimal.

25


26

B. Pembuatan Larutan Baku Larutan baku yang dibuat dalam penelitian ini yaitu larutan baku tunggal deksametason, larutan baku tunggal deksklorfeniramin maleat dan larutan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat. Larutan baku tunggal deksametason dibuat dengan melarutkan baku deksametason dengan etanol, begitu pula dalam pembuatan larutan baku deksklorfeniramin maleat yaitu dengan melarutkan baku deksklorfeniramin maleat dengan etanol. Pembuatan larutan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat dilakukan dengan cara membuat larutan baku tunggal masing-masing baku terlebih dahulu kemudian diambil masing-masing sesuai konsentrasi yang diharapkan dan dicampur dalam bentuk larutan ditambahkan pelarut hingga batas, sehingga di dapat konsentrasi baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat 0,03 : 0,1 mg/mL; 0,06 : 0,2 mg/mL; 0,09 : 0,3 mg/mL; 0,12 : 0,4 mg/mL dan 0,15 : 0,5 mg/mL. Pemilihan konsentrasi ini berdasarkan kadar obat dalam kaplet yang akan ditetapkan yaitu deksametason:deksklorfeniramin maleat (1 : 4) dan berdasarkan hasil optimasi. Konsentrasi yang terlalu kecil dapat menghasilkan respon yang kecil pula dan respon ini dapat terganggu oleh adanya noise yang dihasilkan oleh alat sehingga dapat mengganggu pengamatan, untuk itu perlu adanya optimasi pemilihan konsentrasi agar konsentrasi yang digunakan dapat terbaca baik pada instrumen. Pemilihan pelarut etanol dilakukan berdasarkan sifat kelarutan senyawa deksametason dan deksklorfeniramin maleat. Menurut Farmakope Indonesia edisi


27

IV tahun 1995, deksklorfeniramin maleat larut dalam etanol dan deksametason agak sukar larut dalam etanol, dimana pernyataan agak sukar larut berarti 30-100 mL pelarut mampu melarutkan 1 gram senyawa. Untuk itu, dapat diketahui bahwa kedua senyawa mampu terlarut di dalam pelarut etanol. Secara keseluruhan, pembuatan larutan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat dijaga agar terhindar dari cahaya dan dilakukan secara cepat dan tepat agar proses penotolan dapat segera dilakukan. Hal ini dilakukan untuk menjaga kestabilan senyawa di dalam pelarut.

C. Penetapan Panjang Gelombang Pengamatan Penetapan panjang gelombang pengamatan diperlukan untuk mengetahui panjang gelombang optimal pada pengukuran bersama antara deksametason dan deksklorfeniramin maleat, sehingga perubahan kecil kadar mampu meningkatkan respon. Hal ini diperlukan agar pada saat pengukuran mampu dikuantifikasikan dan untuk meminimalkan kesalahan. Larutan yang digunakan merupakan larutan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat dengan konsentrasi 0,03 : 0,1 mg/mL (rendah), 0,09 : 0,3 mg/mL (sedang) ; 0,15 : 0,5 mg/mL (tinggi). Pemilihan 3 konsentrasi ini digunakan untuk memastikan bahwa spektrum yang dihasilkan dari tiap konsentrasi memiliki pola spektrum yang sama sehingga mampu mewakili seluruh konsentrasi kurva baku. Hasil

scanning

menunjukan

panjang

gelombang

pengamatan

deksametason dan deksklorfeniramin maleat yaitu 245 nm untuk deksametason dan 261 nm untuk deksklorfeniramin maleat. Untuk analisis multikomponen penentuan panjang gelombang pengamatan dilakukan dengan menumpang


28

tindihkan spektra masing-masing senyawa dan memilih λ perpotongan kedua spektra. Pembacaan serapan dilakukan pada λ 200 nm–450 nm menggunakan detektor UV pada densitometer. Pada gambar 6 menunjukan kedua spektra saling tumpang tindih, dimana perpotongan dari kedua spektra yaitu pada panjang gelombang 262 nm. Untuk itu, panjang gelombang pengamatan yang digunakan selanjutnya yaitu 262 nm.

A

B

Gambar 6. Perpotongan Spektra Deksametason (A) dan Deksklorfeniramin maleat (B) dalam pelarut etanol

Detektor UV digunakan pada pembacaan panjang gelombang dikarenakan senyawa yang diuji yaitu deksametason dan deksklorfeniramin maleat memiliki kromofor dan auksokrom. Kromofor merupakan gugus tak jenuh kovalen yang dapat menyerap radiasi dalam daerah-daerah ultraviolet dan visibel, sedangkan auksokrom adalah heteroatom yang terikat pada kromofor dan dapat mengubah panjang gelombang dan intensitas serapan maksimum. Dengan adanya kromofor dan auksokrom pada deksametason dan deksklorfeniramin maleat maka senyawa ini dapat di uji menggunakan detektor UV.


29

Gambar 7. Bagian kromofor deksametason (warna merah: kromofor)

Gambar 8. Bagian kromofor dan auksokrom deksklorfeniramin maleat (warna merah: kromofor, warna biru: auksokrom)

D. Analisis Kualitatif Analisis kualitatif deksametason dan deksklorfeniramin maleat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu dengan cara spiking. Menurut Gandjar dan Rohman, 2007 salah satu pendekatan untuk analisis kualitatif yaitu dengan menggunakan cara spiking. Spiking yang dilakukan yaitu dengan menambahkan sejumlah baku dari senyawa yang diselidiki kedalam sampel yang mengandung senyawa yang diselidiki tersebut lalu dibandingkan tinggi puncak/luas puncak dengan sampel tanpa penambahan baku. Pada penelitian ini digunakan konsentrasi baku adisi deksametason dan deksklorfeniramin maleat (0,01 : 0,04 mg/mL) dilakukan replikasi sebanyak 3 kali.

Baku adisi yang ditambahkan merupakan larutan baku campuran

deksametason dan deksklorfeniramin maleat, untuk itu dilakukan pengujian larutan baku tunggal deksametason dan deksklorfeniramin maleat sebelum


30

dilakukannya analisis kualitatif dengan cara spiking. Hal ini dilakukan untuk mengetahui letak Rf deksametason dan deksklorfeniramin maleat.

Gambar 9. Densitogram baku tunggal deksametason

Gambar 10. Densitogram baku tunggal deksklorfeniramin maleat

Gambar 11. Densitogram sampel tanpa penambahan baku replikasi 1


31

Gambar 12. Densitogram sampel dengan penambahan baku replikasi 1

Pada gambar 11 dan 12 terlihat adanya peningkatan AUC (Area Under Cover) deksametason dan deksklorfeniramin maleat. Pada sampel tanpa penambahan baku AUC deksametason 383,2 dan setelah penambahan baku deksametason dengan konsentrasi 0,01 mg/mL, AUC deksametason meningkat menjadi 482,5. Begitupula dengan deksklorfeniramin maleat, pada sampel tanpa penambahan baku AUC deksklorfeniramin maleat 685,0 dan setelah penambahan baku dengan konsentrasi 0,04 mg/mL, AUC deksklorfeniramin maleat meningkat menjadi 860,9. Pada penelitian ini juga dilakukan pembacaan panjang gelombang, dengan melihat pola spektra dari masing-masing senyawa dapat dipastikan kebenaran senyawa deksametason dan deksklorfeniramin maleat.


32

Gambar 13. Pola Spektra baku tunggal deksametason dalam pelarut etanol pada konsentrasi 0,09mg/mL atau setara 90 ppm

Gambar 14. Pola Spektra baku tunggal deksklorfeniramin maleat dalam pelarut etanol pada konsentrasi 0,3 mg/mL atau setara 300 ppm

Pada sampel tanpa penambahan baku dan sampel dengan penambahan baku (gambar 15 dan 16) terlihat memiliki pola spektra yang sama dengan pola spektra dari senyawa deksametason dan deksklorfeniramin maleat tunggal (gambar 13 dan 14). Adanya peningkatan AUC pada sampel dengan penambahan baku dan pola spektra yang sama antara baku tunggal dengan sampel maka dapat disimpulkan bahwa didalam sampel terdapat senyawa deksametason dan deksklorfeniramin maleat.


33

Gambar 15. Pola Spektra sampel tanpa penambahan baku replikasi 1

Gambar 16. Pola Spektra Sampel dengan penambahan baku replikasi 1

E. Penetapan kurva baku Penetapan kurva baku bertujuan untuk memperoleh persamaan garis yang kemudian dapat digunakan untuk analisis kuantitatif suatu senyawa. Pada penelitian ini digunakan 5 konsentrasi larutan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat dan dilakukan replikasi sebanyak 3 kali. Persamaan kurva baku menunjukan hubungan yang linear antara konsentrasi dengan respon pengukuran dalam hal ini dinyatakan sebagai Area Under Curve (AUC) dan diperoleh nilai koefisien kolerasi (r). Koefisien


34

determinasi r2 ≥ 0,997 (Chan, Lam, Lee dan Zhang, 2004) dapat diterima dan menunjukan korelasi antara konsentrasi dan AUC yang akurat. Untuk itu, pada pemilihan persamaan kurva baku dipilih koefisien determinasi (r2) yang mendekati 1. Tabel IV. Data Penentuan Kurva Baku Deksametason

Replikasi 1 Konsentrasi AUC 0,02952 411,1 0,05904 667,2 0,08856 995,6 0,11808 1205 0,1476 1482,6 a = 148,06 b = 9081,3 r2 = 0,997

Replikasi 2 Konsentrasi AUC 0,028944 305,1 0,057888 591,9 0,086832 907,1 0,115776 1206,3 0,14472 1549,5 a = 18,98 b = 10721 r2 = 0,999

,

,

,


,

Gambar 17. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC pada replikasi 1, 2 dan 3 Deksametason

Pada data tabel IV dan V dapat dilihat bahwa deksametason dan deksklorfeniramin maleat pada semua replikasi memenuhi kriteria koefisien determinasi r2 ≥ 0,997 (Chan, Lam, Lee dan Zhang, 2004). Untuk pemilihan persamaan kurva baku yang akan digunakan yaitu menggunakan persamaan kurva


35

baku replikasi 2, karena pada replikasi 2 terlihat nilai (r2) yang paling mendekati 1 jika dibandingkan dengan replikasi 1 dan 3. Nilai (r2) yang mendekati 1 menunjukan bahwa dengan adanya perubahan konsentrasi akan memberikan perubahan nilai AUC secara proporsional. Tabel V. Data Penentuan Kurva Baku Deksklorfeniramin Maleat

Replikasi 1 Konsentrasi AUC 0,1015 791,5 0,203 1276,5 0,3045 1839,5 0,406 2260,9 0,5075 2677,6 a = 342,22 b = 4686,3 r2 = 0,997


,

,


,

Gambar 18. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC pada replikasi 1, 2 dan 3 Deksklorfeniramin maleat

Kurva hubungan konsentrasi dan AUC pada replikasi 1, 2 dan 3 deksametason dan deksklorfeniramin maleat memiliki kemiringan yang mirip antar replikasinya, hal ini menunjukan bahwa persamaan kurva baku yang


36

diperoleh memiliki keterulangan yang baik dan perolehan persamaan ini bukan merupakan suatu kebetulan. Persamaan kurva baku deksametason yang digunakan untuk analisis kuantitaif

yaitu

y=10721x-18,98

dan

untuk

deksklorfeniramin

maleat

y=4669,1x+107,49. Pada gambar 19 dan 20 menunjukan bahwa peningkatan konsentrasi akan memberikan peningkatan respon pengukuran dalam hal ini nilai AUC.

,

,

,

,

,

Gambar 19. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksametason


,

,

,

,

,

37

,

Gambar 20. Kurva hubungan konsentrasi dan AUC Deksklorfeniramin maleat

F. Validasi Metode Analisis Validasi metode analisis digunakan untuk menunjukkan bahwa metode analisis yang akan digunakan layak dan diharapkan dapat memperoleh hasil analisis yang dapat dipercaya. Suatu metode analisis dapat dikatakan valid jika memenuhi parameter-parameter validasi yang ditentukan. Pada penelitian ini digunakan larutan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat dengan konsentrasi rendah (0,03 ; 0,1 mg/mL), sedang (0,09 ; 0,3 mg/mL) dan tinggi (0,15 ; 0,5 mg/mL). Parameter validasi metode analisis yang digunakan yaitu selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, dan range. 1. Selektivitas Parameter selektivitas digunakan untuk menunjukan bahwa metode yang digunakan dapat membedakan senyawa yang akan diuji dengan komponen senyawa lainnya secara selektif. Untuk itu penentuan parameter selektivitas dapat diamati dari pemisahan peak deksametason dan deksklorfeniramin maleat yang


38

dinyatakan sebagai nilai resolusi (Rs). Parameter selektifitas yang baik yaitu memiliki nilai resolusi > 1,5. Nilai Rs = 1,5 disebut baseline resolution, yaitu pemisahan sempurna dari dua puncak dengan ukuran yang sama (Pecsok dkk., 1976). Pada penelitian ini digunakan sampel dan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat yang direplikasi sebanyak 3 kali. Tabel VI. Data nilai resolusi baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat Replikasi

Rf Deksametason

1 2 3

0,68 0,64 0,66

Rf Deksklorfeniramin Maleat 0,48 0,47 0,45

Nilai Resolusi (Rs) 3,08 1,89 2,63

Tabel VII. Data nilai resolusi sampel Replikasi

Rf Deksametason

1 2 3

0,62 0,60 0,65

Rf Deksklorfeniramin Maleat 0,43 0,48 0,40

Nilai Resolusi (Rs) 2,92 1,85 3,33

Hasil yang diperoleh menunjukan bahwa nilai Rf yang didapat tidaklah konstan, namun dari semua replikasi dapat terlihat bahwa nilai resolusi yang didapat > 1,5. Hal ini menunjukan bahwa metode dapat memisahkan kedua senyawa yang berbeda dalam suatu campuran. Rentang Rf deksametason dan deksklorfeniramin maleat yang didapat yaitu 0,60-0,68 untuk deksametason dan 0,40-0,48 untuk deksklorfeniramin maleat, dimana rentang ini memenuhi parameter selektivitas. 2. Linearitas Linearitas merupakan kemampuan suatu metode memiliki hubungan yang proporsional antara konsentrasi dengan respon pengukuran. Linearitas dapat


39

dilihat dari nilai koefisien determinasi (r2) kurva baku. Metode dapat dikatakan memiliki nilai lineraitas yang baik jika koefisien determinasi r2 ≥ 0,997 (Chan, Lam, Lee dan Zhang, 2004). Dalam penelitian ini didapat nilai r2 deksametason 0,999 dan deksklorfeniramin maleat 0,999. Keduanya memenuhi parameter linearitas. 3. Akurasi Suatu metode dikatakan akurat jika kadar yang terukur memiliki kedekatan dengan kadar sebenarnya, dalam hal ini dinyatakan sebagai % recovery atau persen perolehan kembali. Untuk mengetahui akurasi dapat digunakan larutan baku atau dengan spiked placebo (metode standar adisi). Akurasi dengan larutan baku digunakan untuk mengetahui akurasi instrumen sedangkan akurasi dengan spiked placebo (metode standar adisi) digunakan untuk mengetahui akurasi metode analisis. Larutan baku yang digunakan yaitu larutan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat dengan konsentrasi rendah (0,03 ; 0,1 mg/mL), sedang (0,09 ; 0,3 mg/mL) dan tinggi (0,15 ; 0,5 mg/mL), dilakukan selama 2 periode, dimana masing-masing periode dilakukan selama 4 hari dan di replikasi sebanyak 3 kali. Pengukuran selama 2 periode bertujuan untuk menjamin keterulangan akurasi penelitian pada periode yang berbeda. Menurut USP tahun 2007, penetapan akurasi dilakukan dengan menggunakan minimal 3 konsentrasi dengan 3 kali replikasi, pemilihan konsentrasi pada penelitian ini yaitu untuk mengcover konsentrasi analit yang akan diuji. Konsentrasi rendah campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat yaitu 0,03 ; 0,1 mg/mL atau setara dengan 30 ; 100 ppm. Untuk konsentrasi


40

sedang 0,09 ; 0,3 mg/mL setara dengan 90 ; 300 ppm dan untuk konsentrasi tinggi 0,15 ; 0,5 mg/mL atau setara dengan 150 ; 500 ppm. Menurut USP tahun 2007 kriteria penerimaan untuk konsentrasi 1000 ppm yaitu 95-105% 100 ppm yaitu 90-107% dan untuk 10 ppm 80-110% untuk itu dapat diasumsikan konsentrasi 30 ppm memiliki persyaratan % recovery 82,2-109,2%, konsentrasi 90 ppm memiliki persyaratan % recovery 88,8-107,3%, konsentrasi 150 ppm memiliki persyaratan % recovery 90,3-106,9%, konsentrasi 300 ppm 91,12-106,2% dan 500 ppm memiliki kriteria penerimaan 92,24 – 106,2%. Pada penelitian ini didapat % recovery konsentrasi rendah, sedang dan tinggi larutan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat pada 2 periode dan dilakukan sebanyak 3 kali replikasi seluruhnya memenuhi kriteria penerimaan (lihat tabel VIII). Tabel VIII. Data % recovery baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat periode ke-1 dan 2 Periode Analit Level Kons. % recovery KP* analit replikasi replikasi replikasi (%) (ppm) 1 2 3 Deksametason 30 108,19 104,11 103,89 82,2 - 109,2 1 Deksklorfeniramin rendah 100 102,50 106,05 100,02 90 - 107 maleat Deksametason 90 102,16 101,51 96,49 88,8 - 107,3 Deksklorfeniramin sedang 300 101,81 100,99 97,45 91,12 - 106,2 maleat Deksametason 150 96,13 102,87 94,10 90,3 - 106,9 Deksklorfeniramin tinggi 500 96,11 104,12 94,16 92,24 - 106,2 maleat Deksametason 30 101,61 107,00 90,01 82,2 - 109,2 2 Deksklorfeniramin rendah 100 97,30 100,99 96,97 90 - 107 maleat Deksametason 90 99,09 90,85 98,86 88,8 - 107,3 sedang Deksklorfeniramin 300 99,77 103,54 94,46 91,12 - 106,2 maleat Deksametason 150 92,49 95,94 101,74 90,3 - 106,9 Deksklorfeniramin tinggi 500 94,15 100,13 99,16 92,24 - 106,2 maleat


4.

41

Presisi Parameter presisi digunakan untuk melihat kedekatan hasil-hasil

pengukuran dalam kondisi yang sama, dalam hal ini dinyatakan sebagai %KV. Pada penelitian ini digunakan larutan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat pada konsentrasi rendah (0,03 ; 0,1 mg/mL), sedang (0,09 ; 0,3 mg/mL) dan tinggi (0,15 ; 0,5 mg/mL). penelitian dilakukan dalam 2 periode, masing-masing periode direplikasi sebanyak 3 kali. Dilakukannya penelitian selama 2 periode untuk mengetahui presisi antara (inter day precision), dimana setiap periode berjangka waktu maksimal 4 hari pengukuran. Presisi antara merupakan variabilitas jangka panjang suatu proses pengukuran dan ditentukan dengan membandingkan hasil-hasil suatu metode yang dikerjakan dalam satu laboratorium selama beberapa minggu (International Conference on Harmonisation, 1995). Konsentrasi yang digunakan pada penelitian ini yaitu konsentrasi rendah campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat (0,03; 0,1 mg/mL atau setara dengan 30 ; 100 ppm), konsentrasi sedang (0,09 ; 0,3 mg/mL setara dengan 90 ; 300 ppm) dan konsentrasi tinggi (0,15 ; 0,5 mg/mL atau setara dengan 150 ; 500 ppm). Menurut Horwitz (cit., Gonzales and Herrador, 2007), pada konsentrasi 1000 ppm %KV yang dapat diterima yaitu sebesar 5,7%, konsentrasi 100 ppm sebesar 8%. Dalam penelitian ini % KV konsentrasi rendah, sedang dan tinggi larutan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat pada 2 periode dan yang dilakukan sebanyak 3 kali replikasi tiap periodenya


42

menunjukkan bahwa seluruh konsentrasi memenuhi kriteria penerimaan %KV seperti terlihat pada tabel IX. Tabel IX. Data %KV baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat periode ke-1 dan 2 Periode

Analit

1

Deksametason Deksklorfeniramin maleat

Level

rendah


sedang


tinggi

Deksametason

2

Deksklorfeniramin maleat

rendah


sedang


tinggi

Konsentrasi analit (ppm)

% KV

KP* (%)

30

4,92

9,58

100

4,15

8

90

3,46

8,12

300

0,68

6,78

150

1,32

7,53

500

4,66

6,28

30

7,75

9,58

100

1,68

8

90

6,19

8,12

300

4,46

6,78

150

1,62

7,53

500

3,05

6,28

*KP = Kriteria penerimaan %KV menurut Horwitz (cit., Gonzales and Herrador, 2007).

5. Range Range merupakan interval konsentrasi analit dari konsentrasi rendah hingga konsentrasi atas dalam kurva baku yang memenuhi kriteria akurasi, presisi dan linearitas. Pada penelitian ini digunakan larutan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat konsentrasi rendah (0,03 ; 0,1 mg/mL atau setara dengan 30 ; 100 ppm), konsentrasi sedang (0,09 ; 0,3 mg/mL setara dengan 90 ; 300 ppm) dan untuk konsentrasi tinggi (0,15 ; 0,5 mg/mL atau setara dengan 150 ; 500 ppm). Hasil yang diperoleh menyatakan bahwa konsentrasi deksametason 0,03 ; 0,09 dan 0,15 mg/mL memenuhi parameter presisi, akurasi dan linearitas, sehingga diperoleh range deksametason pada konsentrasi 0,03-0,15 mg/mL dan untuk deksklorfeniramin maleat pada konsentrasi 0,1 ; 0,3 dan 0,5 mg/mL


43

memenuhi parameter presisi, akurasi dan linearitas, sehingga diperoleh range untuk deksklorfeniramin maleat pada konsentrasi 0,1-0,5 mg/mL. 6. Penentuan akurasi dan presisi adisi baku dalam sampel Akurasi dan presisi metode analisis dapat ditentukan dengan menambahkan sejumlah baku yang telah diketahui jumlahnya ke dalam sampel dan ditetapkan konsentrasi sebenarnya dari baku tersebut sehingga dapat diketahui % recovery dan % KV. Selain itu, penambahan baku dapat digunakan sebagai analisis kualitatif, dimana dapat terlihat perbedaan dari tinggi peak dan besar AUC pada sampel sebelum dan setelah penambahan baku. Pada penelitian ini dilakukan penambahan baku campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat dengan 3 konsentrasi yaitu konsentrasi rendah (0,01 ; 0,04 mg/mL atau setara dengan 10 ; 40 ppm), konsentrasi sedang (0,02 ; 0,08 mg/mL atau setara dengan 20 ; 80 ppm) dan konsentrasi tinggi (0,03 ; 0,12 mg/mL atau setara dengan 30 ; 120 ppm) kedalam sampel dengan asumsi konsentrasi deksametason dan deksklorfeniramin maleat dalam sampel 0,03 ; 0,12 mg/mL atau setara dengan 30 ; 120 ppm. Tabel X. % Recovery dan %KV baku adisi Analit

Level

Kons. Analit (ppm) 10

% recovery Rep 1

Rep 2

Rep 3

KP* (%)

% KV

KP** (%)

91,89 95,95 81,05 80-110 7,10 11,3 Deksametason rendah Deksklorfenirami 40 94,00 100,34 98,42 83,3-109,1 6,43 9,18 n maleat 20 95,22 86,80 97,81 81,1-109,7 5,80 10,19 Deksametason Deksklorfenirami sedang 80 93,17 100,94 97,73 87,7-107,3 4,07 8,27 n maleat 30 100,89 92,43 82,62 82,2-109,2 9,94 9,58 Deksametason tinggi Deksklorfenirami 120 94,54 90,84 96,01 90,5-106,78 2,84 7,78 n maleat * Kriteria penerimaan % recovery menurut Horwitz (cit., Gonzales and Herrador, 2007) ** Kriteria penerimaan %KV menurut Horwitz (cit., Gonzales and Herrador, 2007)


44

Menurut USP tahun 2007 kriteria penerimaan akurasi, konsentrasi 100 ppm yaitu 90-107% dan untuk 10 ppm 80-110%. Untuk itu, dapat diasumsikan konsentrasi 20 ppm memiliki persyaratan % recovery 81,1-109,7% , konsentrasi 30

ppm memiliki persyaratan % recovery 82,2 - 109,2%, konsentrasi 40 ppm memiliki persyaratan % recovery 83,3-109,1% dan konsentrasi 80 ppm memiliki kriteria penerimaan 87,7-107,3%. Untuk kriteria penerimaan presisi, Menurut Horwitz (cit., Gonzales and

Herrador, 2007), pada konsentrasi 100 ppm sebesar 8% dan pada konsentrasi 10 ppm sebesar 11,3%. Dalam penelitian ini dapat terlihat bahwa seluruh larutan baku campuran yang ditambahkan kedalam sampel memenuhi parameter akurasi dan presisi.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan Metode KLT-densitometri dengan fase diam silika gel 60 F254, fase gerak etil asetat : metanol : amonia 25% (25:4:1), dengan volume penotolan 1,0 μl dan jarak pengembangan 5 cm memenuhi parameter selektivitas, linearitas, akurasi, dan presisi pada range konsentrasi deksametason 0,03-0,15 mg/mL dan 0,1-0,5 mg/mL untuk deksklorfeniramin maleat. Berdasarkan hasil tersebut menunjukan bahwa metode KLT-densitometri ini mempunyai validitas yang baik dan dapat digunakan

untuk

menetapkan

kadar

campuran

deksametason

dan

kadar

deksametason

dan

larutan

deksametason

dan

deksklorfeniramin maleat dalam kaplet. B. Saran 1.

Perlu

diaplikasikan

pada

penetapan

deksklorfeniramin maleat dalam kaplet. 2.

Perlu

dilakukan

pengujian

stabilitas

desklorfeniramin maleat dalam pelarut etanol. 3.

Perlu dilakukan pengujian pengaruh lama waktu antara penotolan hingga pengembangan (elusi) dan pengaruh lama waktu antara pengembangan (elusi) hingga scanning.

45


DAFTAR PUSTAKA Adamovics, 1997, Chromatographic Analysis of Pharmaceuticals, 2nd Edition, Marcel Dekker, New York. Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI, 2011, Keputusan Kepala Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia nomor HK. 04.1.23.11.11.09219 tentang Penerapan sistem manajemen mutu (Quality Management System), Kepala BPOM RI. Chan, C.C., Lam, H., Lee, Y.C., and Zhang, X., 2004, Analytical Method Validation and Instrument Performance Verification, 16, John Wiley & Sons, Inc., USA. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995, Farmakope Indonesia, jilid IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp.286, 293. Ermer, J. and Miller, J.H., 2005, Method Validation in Pharmaceutical Analysis, Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim, pp. 3. Gandjar, G.I., dan Rohman, A, 2007, Kimia Farmasi Analisis, Pustaka Pelajar, Yogyakarta, pp. 360-367. Gonzales, A.G. and Herrador, M.A., 2007, A Practical Guide to Analytical Method Validation, Including Measurement Uncertainty and Accuracy Profiles, Trends Anal.Chem, pp. 232-234. Habtemariam, 2013, herbal analysis services, http://www.herbalanalysis.co.uk/ Adsorption.html, diakses 17 juli 2013. Harmita, 2004, Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya, Majalah Ilmu Kefarmasian, Vol I, No. 3, pp. 5-25 Huetos, O., Ramos, M., Martin de Pozuelo, M., San Andres, M., Reuverss, T.B., 1999, Determination of dexamethasone in feed by TLC and HPLC, PubMed US National Library of Medicine National Institutes of Health. International Conference on Harmonisation, 1995, Text on Validation of Analytical Procedures (ICH Q2A), ICH, Rockville, pp.8 ISO, 2007, Informasi Spesialite Obat, Volume 42, Jakarta, Ikatan Sarjana Farmasi Indonesia. Katzung, B.G., 1998, Basic and Clinical Pharmacology, 7th Edition, Cholinoceptor Activating Drugs, Prentice Hall International, pp. 92.

46


47

Khopkar, 1990, Concepts of Analytical Chemistry, diterjemahkan oleh Sapto Raharjo, Universitas Indonsia Press, Jakarta, pp 189. Krzek, J., Maslanka, A., and Lipner, P., 2005, Identification and quantification of polymyxin B, framycetin, and dexamethasone in and ointment by using thin layer chromatography with densitometri, PubMed US National Library of Medicine National Institutes of Health. Mintarsih, 1990, Penetapan Kadar Alkaloid Kinninda dalam Akar, Batang, dan Daun Chinchona Succrirubra Pavon et Klotzsch dari Daerah KAliurang Secara Spektrodensitometri (TLC-Scanner), Skripsi, Universitas Gadjah Mada,Yogyakarta. Mulja, M., dan Hanwar, D., 2003, Prinsip-Prinsip Cara Berlaboratorium yang Baik (Good Laboratory Practice), Majalah Farmasi Airlangga, Vol. III, No. 2, pp. 72. Mulja, M., Suharman, 1995, Analisis Instrumental, Airlangga University Press, Surabaya, pp. 225. Pdpersi, 2012, Setiap Tahun, Penderita Alergi di Indonesia Bertambah 30 Persen, http://www.pdpersi.co.id/content/news.php?catid=23&mid=5&nid= 707, diakses tanggal 25 April 2012. Pecsok, R. L., Shield, L.D., Cairns, T., and McWilliam, I.G., 1976, Modern Methods of Chemical Analysis, 2nd Edition, John Wiley & Sons, Inc., Canada, pp. 51. Ratnaningtyas, L.S., 2013, Optimasi komposisi fase gerak pada pemisahan campuran deksametason dan deksklorfeniramin maleat secara kromatografi lapis tipis densitometri. Scott, R., 2009, Scanning Densitometry from Thin Layer Chromatography, http:// www.chromatography-online.org, diakses tanggal 17 Juli 2013. Snyder, L.R., Kirkland, J.J., and Glajch, J.L., 1997, Practical HPLC Method nd

Development, 2 ed., Wiley & Sons, Inc., New York, pp. 252. Spangenberg, B., Poole, C.F., and Weins, C.h., 2010, Quantitative Thin-Layer Chromatography A Pratical Survey, Springer, New York, pp. 63-67. Suherman, K.S.,2007, Adrenokortikotropin, Adrenokortikosteroid, AnalogSintetik dan Antagonisnya, Dalam Farmakologi dan Terapi, Edisi kelima, FKUI, Jakarta, pp. 486. Syarif, S., 2009, Penerapan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) pada Penetapan Kadar Deksametason dalam Kaplet Campuran dengan Deksklorfeniramin Maleat, Skripsi, Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara Medan, pp. 15.


48

United States Pharmacopeial Convention, 2007, United State Pharmacopeial, Edisi 30 [monograph on CD-ROM], United States Pharmacopoeial Convention, Inc. The British Pharmacopoeia Commission, 2011, The British Pharmacopeia 2011, The British Pharmacopoeia Commission Inc., London, pp. A608-A610, 465, 1302-1303. Tjay, T.H., dan Rahardja, K., 2002, Obat-Obat Penting, Edisi IV, Cetakan ke 2, PT. Gramedia, Jakarta, pp. 685,777. Wall, Peter E., 2005, Thin-layer Chromatography A Modern Practical Approach, The Royal Society of Chemistry, UK, pp. 79, 157. Watson, D.G., 2009, Analisis Farmasi : buku ajar untuk mahasiswa farmasi dan praktisi kimia farmasi, edisi 2, 367-377, Penerbit buku kedokteran EGC, Jakarta.


LAMPIRAN

LAMPIRAN

49


Lampiran 1. COA (Certificate of Analysis) Deksametason

50


Lampiran 2. COA (Certificate Of Analysis) Deksklorfeniramin Maleat

51


52

Lampiran 3. Data penimbangan bahan A. Baku Deksametason Deksametason Replikasi 1 (g) Berat kertas 0,0727 Berat kertas + zat 0,10992 Berat kertas + sisa 0,07302 Berat zat 0,03690 B. Baku Deksklorfeniramin Maleat Deksklorfeniramin Replikasi 1 maleat (g) Berat kertas 0,0783 Berat kertas + zat 0,12923 Berat kertas + sisa 0,07848 Berat zat 0,05075

Replikasi 2 (g) 0,0826 0,11952 0,08334 0,03618

Replikasi 3 (g) 0,0565 0,09302 0,05676 0,03626

Replikasi 2 (g) 0,0574 0,10749 0,05782 0,04967

Replikasi 3 (g) 0,0560 0,10661 0,05589 0,05072

C. Validasi Metode a. Presisi akurasi baku periode 1 i. Deksametason Replikasi 1 Replikasi 2 Deksametason (g) (g) Berat kertas 0,0546 0,0826 Berat kertas + zat 0,08506 0,11952 Berat kertas + sisa 0,0548 0,08334 Berat zat 0,03026 0,03618

Replikasi 3 (g) 0,0628 0,09245 0,06347 0,02898

Replikasi 4 (g) 0,0474 0,07822 0,04819 0,03003

ii. Deksklorfeniramin Maleat Deksklorfeniramin Replikasi 1 Replikasi 2 maleat (g) (g) Berat kertas 0,0481 0,0574 Berat kertas + zat 0,09815 0,10749 Berat kertas + sisa 0,04840 0,05782 Berat zat 0,04975 0,04967

Replikasi 3 (g) 0,0631 0,11407 0,06560 0,04847

Replikasi 4 (g) 0,0515 0,10376 0,05163 0,05213


53

b. Presisi akurasi baku periode 2 i. Deksametason Replikasi 1 Deksametason (g) Berat kertas 0,0671 Berat kertas + zat 0,09831 Berat kertas + sisa 0,06744 Berat zat 0,03087

Replikasi 2 (g) 0,0764 0,10662 0,07646 0,03016

Replikasi 3 (g) 0,0831 0,12183 0,08321 0,03862

Replikasi 4 (g) 0,0699 0,10169 0,07059 0,03110

Replikasi 2 (g) 0,0487 0,09905 0,04810 0,05095

Replikasi 3 (g) 0,0781 0,12948 0,07817 0,05131

Replikasi 4 (g) 0,0534 0,10499 0,05349 0,05150

ii. Deksklorfeniramin Maleat Deksklorfeniramin Replikasi 1 maleat (g) Berat kertas 0,0555 Berat kertas + zat 0,10797 Berat kertas + sisa 0,05589 Berat zat 0,05208

c. Presisi akurasi adisi baku dalam sampel i. Deksametason Deksametason Berat kertas Berat kertas + zat Berat kertas + sisa Berat zat

Replikasi 1 (g) 0,920 0,10207 0,09199 0,01008

Replikasi 2 (g) 0,0789 0,08897 0,07882 0,01015

Replikasi 3 (g) 0,0554 0,06571 0,05579 0,00992

Replikasi 4 (g) 0,0588 0,06877 0,05899 0,00978

Replikasi 5 (g) 0,0809 0,09107 0,08109 0,00998

Replikasi 3 (g) 0,0587 0,10154 0,05885 0,04269

Replikasi 4 (g) 0,0660 0,10875 0,06590 0,04285

Replikasi 5 (g) 0,0680 0,10834 0,06795 0,04039

ii. Deksklorfeniramin Maleat Deksklorfeniramin maleat Berat kertas Berat kertas + zat Berat kertas + sisa Berat zat

Replikasi 1 (g) 0,0972 0,13738 0,09730 0,04008

Replikasi 2 (g) 0,0667 0,10730 0,06665 0,04065


54

Lampiran 4. Spektra deksametason (0,03 ; 0,06 ; 0,09 mg/mL) dan deksklorfeniramin maleat (0,1 ; 0,3 ; 0,5 mg/mL)

Lampiran 5. Penentuan kurva baku deksametason dan deksklorfeniramin maleat A. Contoh perhitungan konsentrasi deksametason dan deksklorfeniramin maleat a. Skema pembuatan baku Timbang seksama lebih kurang 37,5 mg deksametason dan 50 mg deksklorfeniramin maleat ↓ Larutkan deksametason dan deksklorfeniramin maleat masing-masing pada labu takar 10,0 mL ↓ Buat stok larutan baku deksametason, dengan mempipet 2,0 mL deksametason dan encerkan dengan etanol p.a hingga 25,0 mL ↓ Buat stok larutan baku deksklorfeniramin maleat, dengan mempipet 5,0 mL deksklorfeniramin maleat dan encerkan dengan etanol p.a hingga 25,0 mL ↓ Pipet 1,0 mL deksametason dan 1,0 mL deksklorfeniramin maleat dari masing-masing larutan stok. Campurkan dalam labu takar 10,0 mL tambahkan etanol hingga batas tanda, sehingga didapat konsentrasi ke1 kurvabaku (0,03 mg/mL deksametason dan 0,1 mg/mL deksklorfeniramin maleat)


55

↓ Buatlah konsentrasi 2, 3, 4, dan 5 kurva baku dengan mempipet 2,0 ; 3,0 ; 4,0 dan 5,0 mL masing-masing larutan stok deksametason dan deksklorfeniramin maleat. b. Perhitungan seri konsentrasi deksametason - Bobot penimbangan deksametason = 0,0375 g = 37,5 mg - Konsentrasi deksametason = 37,5mg/10mL = 3,75 mg/mL - Konsentrasi stok larutan baku deksametason : C1 . V1 = C2 . V2 3,75 mg/mL x 2,0 mL = C2 x 25,0 mL C2= 0,3 mg/mL

-

Konsentrasi larutan baku deksametason : C1 . V1 = C2 . V2 0,3 mg/mL x 1,0 mL = C2 x 10,0 mL C2= 0,03 mg/mL

c. Perhitungan seri konsentrasi deksklorfeniramin maleat - Bobot penimbangan deksklorfeniramin maleat = 0,050 g = 50,0 mg - Konsentrasi dekklorfeniramin maleat= 50mg/10mL = 5mg/mL - Konsentrasi stok larutan baku deksklorfeniramin maleat: C1 . V1 = C2 . V2 5mg/mL x 5,0 mL = C2 x 25,0 mL C2= 1mg/mL - Konsentrasi larutan baku deksametason : C1 . V1 = C2 . V2 1mg/mL x 1,0 mL = C2 x 10,0 mL C2= 0,1 mg/mL B. Densitogram seri larutan baku deksametason : deksklorfeniramin maleat replikasi 2 a. Blanko (plat kosong)


b. Fase gerak

c. Konsentrasi ke-1 (0,03 ; 0,1 mg/mL)

d. Konsentrasi ke-2 (0,06 ; 0,2 mg/mL)

56


e. Konsentrasi ke-3 kurva (0,09 ; 0,3 mg/mL)

f. Konsentrasi ke-4 (0,12 ; 0,4 mg/mL)

g. Konsentrasi ke-5 (0,15 ; 0,5 mg/mL)

57


58

C. Data penentuan kurva baku deksametason Replikasi 1 Konsentrasi AUC 0,02952 411,1 0,05904 667,2 0,08856 995,6 0,11808 1205 0,1476 1482,6 a = 148,06 b = 9081,3 r2 = 0,997

Replikasi 2 Konsentrasi AUC 0,028944 305,1 0,057888 591,9 0,086832 907,1 0,115776 1206,3 0,14472 1549,5 a = 18,98 b = 10721 r2 = 0,999


D. Persamaan kurva baku dan gambar kurva baku deksametason a. Persamaan kurva baku deksametason yang digunakan adalah : Replikasi 2 : y = 10721x + 18,98 b. Gambar kurva baku deksametason

,

,

,

,


59

E. Data penentuan kurva baku deksklorfeniramin maleat Replikasi 1 Konsentrasi AUC 0,1015 791,5 0,203 1276,5 0,3045 1839,5 0,406 2260,9 0,5075 2677,6 a = 342,22 b = 4686,3 r2 = 0,997



F. Persamaan kurva baku dan gambar kurva baku deksklorfeniramin maleat a. Persamaan kurva baku deksklorfeniramin maleat yang digunakan adalah : Replikasi 2 : y = 4669,1x + 107,49 b. Gambar kurva baku deksklorfeniramin maleat

,

,

,


60

Lampiran 6. Contoh perhitungan nilai resolusi

Lampiran 7. Densitogram presisi dan akurasi baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat periode ke-1 A. Konsentrasi rendah (0,03 ; 0,1 mg/mL) a. Replikasi 1


b. Replikasi 2

c. Replikasi 3

B. Konsentrasi sedang (0,09 ; 0,3 mg/mL) a. Replikasi 1

61


b. Replikasi 2

c. Replikasi 3

C. Konsentrasi tinggi (0,15 ; 0,5 mg/mL) a. Replikasi 1

62


b. Replikasi 2

c. Replikasi 3

Lampiran 8. Presisi dan akurasi baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat periode ke-1 A. Deksametason a. Contoh perhitungan konsentrasi teoritis (replikasi 1) Penimbangan baku deksametason = 30,26 mg Konsentrasi stok deksametason = Konsentrasi intermediet baku deksametason C1 . V1 = C2 . V2 3,026 mg/mL x 1,0 mL = C2 x 10,0 mL C2= 0,3026 mg/mL

63


Konsentrasi baku deksametason C1 . V1 = C2 . V2 0,3026 mg/mL x 1,0 mL = C2 x 10,0 mL C2= 0,03026 mg/mL Rendah  0,03026 mg/mL Sedang  0,09078 mg/mL Tinggi  0,1513 mg/mL b. Contoh perhitungan konsentrasi sebenarnya (replikasi 1) Rendah  y = 10721x + 18,98 332 = 10721x + 18,98 X = 0,03274 Sedang  y = 10721x + 18,98 975,3 = 10721x + 18,98 X = 0,09274 Tinggi  y = 10721x + 18,98 1540,4 = 10721x + 18,98 X = 0,03274 c. Perhitungan %KV Rendah  KV

Sedang  KV Tinggi  KV

d. Contoh perhitungan % recovery (replikasi 1) Rendah  Recovery

Sedang  Recovery Tinggi  Recovery

64


65

e. Tabel perolehan % KV dan % recovery i. Konsentrasi rendah (0,03 mg/mL) Konsentrasi Konsentrasi teoritis Replikasi AUC sebenarnya %Recovery SD %KV (mg/mL) (mg/mL) 1 332 0,03274 0,03026 108,19% 2 303,6 0,03009 0,0289 104,11% 0,00152 4,92% 3 303,8 0,03011 0,02898 103,89% 0,03098 ii. Konsentrasi sedang (0,09 mg/mL) Konsentrasi Konsentrasi sebenarnya teoritis %Recovery SD %KV (mg/mL) (mg/mL) 975,3 0,09274 0,09078 102,16% 924,6 0,08801 0,0867 101,51% 0,00309 3,46% 913 0,08693 0,09009 96,49% 0,08923

Replikasi AUC 1 2 3

iii. Konsentrasi tinggi (0,15 mg/mL) Konsentrasi Konsentrasi teoritis Replikasi AUC sebenarnya %Recovery SD %KV (mg/mL) (mg/mL) 1 1540,4 0,14545 0,1513 96,13% 2 1574,7 0,14865 0,1445 102,87% 0,00161 1,10% 3 1561,5 0,14742 0,1449 101,74% 0,14717 B. Deksklorfeniramin maleat a. Contoh perhitungan konsentrasi teoritis (replikasi 1) Penimbangan baku deksklorfeniramin maleat = 49,75 mg Konsentrasi stok deksklorfeniramin maleat =

Konsentrasi intermediet baku deksklorfeniramin maleat C1 . V1 = C2 . V2 4,975 mg/mL x 2,0 mL = C2 x 10,0 mL C2= 0,995 mg/mL Konsentrasi baku deksklorfeniramin maleat C1 . V1 = C2 . V2


0,995 mg/mL x 1,0 mL = C2 x 10,0 mL C2= 0,0995 mg/mL Rendah  0,0995 mg/mL Sedang  0,2985 mg/mL Tinggi  0,4975 mg/mL b. Contoh perhitungan konsentrasi sebenarnya (replikasi 1) Rendah  y = 4669,1x + 107,49 562,1 = 4669,1x + 107,49 X = 0,09737 Sedang  y = 4669,1x + 107,49 1526,5 = 4669,1x + 107,49 X = 0,30392 Tinggi  y = 4669,1x + 107,49 2340,1 = 4669,1x + 107,49 X = 0,47817 c. Perhitungan %KV Rendah  KV

Sedang  KV Tinggi  KV d. Contoh perhitungan % recovery (replikasi 1) Rendah  Recovery

Sedang  Recovery Tinggi  Recovery

66


67

e. Tabel perolehan % KV dan % recovery i. Konsentrasi rendah (0,1 mg/mL) Replikasi AUC 1 2 3

583,7 599,2 560,2

Konsentrasi Konsentrasi sebenarnya teoritis %Recovery SD %KV (mg/mL) (mg/mL) 0,10199 0,0995 102,50% 0,10531 0,0993 106,05% 0,00421 4,15% 0,09696 0,09694 100,02% 0,09988

ii. Konsentrasi sedang (0,3 mg/mL) Replikasi 1 2 3

Konsentrasi Konsentrasi sebenarnya teoritis %Recovery SD %KV (mg/mL) (mg/mL) 1526,5 0,30392 0,2985 101,81% 1512,2 0,30085 0,2979 100,99% 0,00207 0,68% 1530,6 0,30479 0,31278 97,45% 0,30319 AUC

iii. Konsentrasi tinggi (0,5 mg/mL) Konsentrasi Konsentrasi teoritis Replikasi AUC sebenarnya %Recovery SD %KV (mg/mL) (mg/mL) 1 2340,1 0,47817 0,4975 96,11% 2 2521,2 0,51695 0,4965 104,12% 0,02171 4,41% 3 2351,7 0,48065 0,4847 99,16% 0,49192


68

Lampiran 9. Densitogram presisi dan akurasi baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat periode ke-2 A. Konsentrasi rendah (0,03 ; 0,1 mg/mL) a. Replikasi 1

b. Replikasi 2

c. Replikasi 3



b. Replikasi 2

c. Replikasi 3

69



b. Replikasi 2

c. Replikasi 3

70


71

Lampiran 10. Presisi dan akurasi baku campuran deksametason : deksklorfeniramin maleat periode ke-2 A. Deksametason a. Tabel perolehan % KV dan % recovery i. Konsentrasi rendah (0,03 mg/mL) Konsentrasi Konsentrasi teoritis Replikasi AUC sebenarnya %Recovery SD %KV (mg/mL) (mg/mL) 1 317,3 0,03137 0,03087 101,61% 2 327 0,03227 0,03016 107,00% 0,00236 7,75% 3 279,1 0,02780 0,03089 90,01% 0,03048

ii. Konsentrasi sedang (0,09 mg/mL) Replikasi AUC 1 2 3

964,9 862,3 963,2

Konsentrasi Konsentrasi sebenarnya teoritis %Recovery SD %KV (mg/mL) (mg/mL) 0,09177 0,09261 99,09% 0,08220 0,09048 90,85% 0,00548 6,19% 0,09161 0,09267 98,86% 0,08853

iii. Konsentrasi tinggi (0,15 mg/mL) Konsentrasi Konsentrasi teoritis Replikasi AUC sebenarnya %Recovery SD %KV (mg/mL) (mg/mL) 1 1511,5 0,14276 0,15435 92,49% 2 1532,1 0,14468 0,1508 95,94% 0,00139 0,96% 3 1540,4 0,14545 0,1555 93,54% 0,14429


72

B. Deksklorfeniramin maleat a. Tabel perolehan % KV dan % recovery i. Konsentrasi rendah (0,1 mg/mL) Replikasi 1 2 3

Konsentrasi Konsentrasi sebenarnya teoritis %Recovery SD %KV (mg/mL) (mg/mL) 580,7 0,10135 0,10416 97,30% 588 0,10291 0,1019 100,99% 0,00170 1,68% 572,1 0,09951 0,10262 96,97% 0,10126 AUC

ii. Konsentrasi sedang (0,3 mg/mL) Replikasi 1 2 3


iii. Konsentrasi tinggi (0,5 mg/mL) Replikasi 1 2 3



Lampiran 11. Densitogram sampel tanpa penambahan A. Replikasi 1

B. Replikasi 2

C. Replikasi 3

73


D. Replikasi 4

E. Replikasi 5

F. Replikasi 6

74


G. Replikasi 7

H. Replikasi 8

I. Replikasi 9

75


76

Lampiran 12. Densitogram sampel dengan penambahan baku deksametason : deksklorfeniramin maleat A. Konsentrasi rendah (0,01 ; 0,04 mg/mL) a. Replikasi 1

b. Replikasi 2

c. Replikasi 3



b. Replikasi 2

c. Replikasi 3

77



b. Replikasi 2

c. Replikasi 3

78


79

Lampiran 13. Presisi akurasi adisi baku deksametason dalam sampel A. Tabel perolehan % KV dan % recovery a. Konsentrasi rendah

Replikasi

AUC sampel

kadar sampel (mg/mL)

AUC sampel + adisi

kadar sampel +adisi (mg/mL)

kadar baku adisi sebenarnya (mg/mL)

jumlah baku adisi teoritis (mg/mL)

% recovery

SD

% KV

1 2 3

383,2 362,7 254,4

0,03751 0,03560 0,02550

482,5 463,3 342,6

0,04678 0,04498 0,03373

0,00926 0,00938 0,00823 0,00896

0,01008 0,00978 0,01015

91,89 95,95 81,05

0,00064

7,10

AUC sampel + adisi 451,7 461,7 599,9

kadar sampel +adisi (mg/mL) 0,04390 0,04484 0,05773

kadar baku adisi sebenarnya (mg/mL) 0,019195971 0,017498368 0,019522433 0,018738924

jumlah baku adisi teoritis (mg/mL) 0,02016 0,02016 0,01996

% recovery

SD

% KV

95,22 86,80 97,81

0,00109

5,80

b. Konsentrasi sedang Replikasi

AUC sampel


1 2 3

245,9 274,1 390,6

0,02471 0,02734 0,03820


80

c. Konsentrasi tinggi Replikasi

AUC sampel


AUC sampel + adisi

kadar sampel +adisi (mg/mL)

kadar baku adisi sebenarnya (mg/mL)

jumlah baku adisi teoritis (mg/mL)

% recovery

SD

% KV

1 2 3

330,2 433,1 538,8

0,03257 0,04217 0,05203

625,4 728 802,4

0,06010 0,06967 0,07661

0,027534745 0,027506762 0,024587259 0,027373068

0,02976 0,02976 0,02976

92,52 92,43 82,62

0,00169

6,38

B. Contoh perhitungan jumlah sampel (konsentrasi rendah replikasi 1) y = 10721x + 18,98 383,2 = 10721x + 18,98 x = 0,03751

C. Contoh perhitungan jumlah sampel + adisi baku deksametason (konsentrasi rendah replikasi 1) y = 10721x + 18,98 482,5 = 10721x + 18,98 x = 0,04678


81

D. Contoh perhitungan jumlah adisi baku deksametason dan sampel (konsentrasi rendah replikasi 1) Jumlah baku adisi = (jumlah sampel+adisi) – jumlah sampel = 0,04678 - 0,03751 = 0,00926 mg/mL E. Contoh perhitungan jumlah baku adisi teoritis (konsentrasi rendah replikasi 1) Penimbangan baku deksametason = 0,01008 g = 10,08 mg Konsentrasi stok deksametason = Konsentrasi intermediet baku deksametason C1 . V1 = C2 . V2 1,008 mg/mL x 1,0 mL = C2 x 10,0 mL C2 = 0,1008 mg/mL Konsentrasi baku deksametason yang ditambahkan C1 . V1 = C2 . V2 0,1008 mg/mL x 1,0 mL = C2 x 10,0 mL C2 = 0,01008 mg/mL F. Contoh perhitungan % recovery (konsentrasi rendah replikasi 1) Recovery

G. Contoh perhitungan % KV (konsentrasi rendah) KV


82

Lampiran 14. Presisi akurasi adisi baku deksklorfeniramin maleat dalam sampel A. Tabel perolehan % KV dan % recovery a. Konsentrasi rendah

Replikasi

AUC sampel

kadar sampel

1 2 3

685 661,1 513,5

0,12369 0,11857 0,08696

AUC sampel + adisi

kadar sampel + adisi

860,9 861,1 700,3

0,16136 0,16140 0,12696

kadar baku adisi sebenarnya

jumlah baku adisi teoritis

% recovery

SD

% KV

0,03767 0,04283 0,04001 0,04017

0,04008 0,04269 0,04065

94,00 100,34 98,42

0,00258

6,43

kadar baku adisi sebenarnya 0,074682487 0,080914951 0,07894455 0,078180663

jumlah baku adisi teoritis 0,08016 0,08016 0,08078

% recovery

SD

% KV

93,17 100,94 97,73

0,00319

4,07

b. Konsentrasi sedang Replikasi

AUC sampel

kadar sampel

1 2 3

621 441,5 558,3

0,10998 0,07154 0,09655

AUC sampel + adisi 969,7 819,3 926,9

kadar sampel + adisi 0,18466 0,15245 0,17550


83

c. Konsentrasi tinggi Replikasi 1 2 3

AUC sampel kadar sampel 574,9 640,9 741,6

0,10011 0,11424 0,13581

AUC sampel kadar sampel + + adisi adisi 1169,4 0,22743 1184,1 0,23058 1315,7 0,25877

kadar baku

jumlah baku

adisi sebenarnya 0,127326465 0,116339337 0,122957315 0,120123079

adisi teoritis 0,12807 0,12807 0,12807

% recovery

B. Contoh perhitungan jumlah sampel y = 4669,1x + 107,49 685 = 4669,1x + 107,49 x = 0,12369 C. Contoh perhitungan jumlah sampel + adisi baku deksklorfeniramin maleat y = 4669,1x + 107,49 860,9 = 4669,1x + 107,49 x = 0,16136

99,42 90,84 96,01

SD

0,00553

% KV

4,53


84

D. Contoh perhitungan jumlah adisi baku deksklorfeniramin maleat dan sampel Jumlah baku adisi = (jumlah sampel+adisi) – jumlah sampel = 0,12369 - 0,16136 = 0,03767 mg/mL E. Contoh perhitungan jumlah baku adisi teoritis Penimbangan baku deksklorfeniramin maleat = 0,04008 g = 40,08 mg Konsentrasi stok deksklorfeniramin maleat = Konsentrasi intermediet baku deksklorfeniramin maleat : C1 . V1 = C2 . V2 4,008 mg/mL x 1,0 mL = C2 x 10,0 mL C2 = 0,4008 mg/mL Konsentrasi baku deksklorfeniramin maleat yang ditambahkan : C1 . V1 = C2 . V2 0,4008 mg/mL x 1,0 mL = C2 x 10,0 mL C2 = 0,04008 mg/mL F. Contoh perhitungan % recovery (konsentrasi rendah replikasi 1) Recovery

G. Perhitungan % KV KV


BIOGRAFI PENULIS Penulis skripsi yang berjudul ‘Validasi Metode Kromatografi Lapis Tipis Densitometri Pada Penetapan Kadar Campuran Deksametason Dan Deksklorfeniramin Maleat Dalam Kaplet’ memiliki nama lengkap Metri Setyadhiani Karunawati. Penulis lahir di Banjarnegara tanggal 10 Juni 1991 dari pasangan Singgih Prastyawan dan Winawati Budi Pratiwi sebagai anak kedua dari tiga bersaudara. Penulis telah menempuh pendidikan formal di TK Pertiwi Banjarnegara (1997-), SD N 1 Krandegan Banjarnegara (1997-2002), SMP N 1 Banjarnegara (2003-), SMA Regina Pacis Surakarta (2006-2009) dan pada tahun 2009 penulis melanjutkan study di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. Selama perkuliahan penulis aktif dalam berbagai kegiatan dan organisasi. Pada tahun 2011 penulis mengikuti Program Kreatifitas Mahasiswa bidang Kewirausahaan dengan judul “Pemanfaatan Ampas Seduhan Kopi dan Serbuk Lidah Buaya Sebagai Lulur Mandi” yang mendapatkan Juara II kategori Poster dalam PIMNAS XIV di Makassar. Juara II Basket Putri jurusan kesehatan se-DIY pada Farmasi UGM Cup tahun 2012. Juara I Badminton Chemistry Open yang di adakan Univeritas Negeri Yogyakarta pada tahun 2011 dan 2012. Pada tahun 2011 mendapatkan piagam penghargaan mahasiswa berprestasi bidang olahraga dan bidang akademik imiah oleh Universitas Sanata Dharma. Pada tahun 2012 penulis mendapatkan juara II Writing Article Competition pada acara ‘Go Natural, Go Larissa’ yang diadakan oleh Larissa Aesthetic center dan pada tahun 2013 penulis menjadi finalis Bussines Plan Competition Seize Your Future. Berbagai kegiatan yang pernah diikuti penulis antara lain pada tahun 2009 menjadi Bendahara Seminar Ilmiah Dies Natalis USD ke-54 dengan tema “Music For Education”, sebagai Divisi Unit Kegiatan Fakultas Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas (BEMF periode 2010/2011), Bendahara Inisiasi Universitas Sanata Dharma (INSADHA 2010), Sekretaris pada acara Kampanye Informasi Obat 2010, pada tahun 2011 sebagai Koordinator Hubungan Masyarakat Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas (BEMF periode 2011/2012), Koordinator Unit Kegiatan Basket Putri periode 2011/2012 Fakultas Farmasi. Steering Committee pada acara Paingan Festival 2011. Selain itu Penulis pernah menjadi Asisten Praktikum untuk matakuliah Bioanalisis pada tahun 2012, Kimia Organik pada tahun 2010 dan 2013. 85

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents