PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

PENGARUH PEMBERIAN JANGKA PENDEK DEKOK KULIT BUAH Persea americana Mill. TERHADAP KADAR ALBUMIN PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) Program Studi Farmasi

Diajukan oleh: Asih Putriati NIM : 118114162

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2014

i




HALAMAN PERSEMBAHAN

“Per Aspera Ad Astra . Jalan Yang Sulit Akan Membawamu Menuju Bintang”

Peribahasa Latin

Kupersembahkan karya ini untuk Tuhan Yesus Kristus dan Bunda Maria sumber kekuatanku Kedua orang tuaku tercinta, Mba Ajeng my lovely super sister, dan Ridho partner tercinta dalam hidupku yang selalu mendoakanku, memberiku semangat dan motivasi Teman-temanku tercinta yang selalu membantuku Almamaterku tercinta Universitas Sanata Dharma Yogyakarta

iv




PRAKATA Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala perlindungan dan berkat yang telah diberikan sehingga skripsi berjudul “Efek Hepatoprotektif Ekstrak Dekok Kulit Persea Americana Mill. terhadap Kadar Albumin Ginjal pada Tikus Pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida” yang disusun untuk memenuhi persyaratan memperoleh gelar Sarjana Strata Satu Program Studi Farmasi (S. Farm.) dapat dikerjakan dengan baik dan lancar. Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini tidak terlepas dari berbagai pihak. Kesempatan ini penulis pergunakan untuk mengungkapkan rasa terimaksih kepada : 1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah mengijinkan penulis menjalankan pembelajaran selama masa studi. 2. Ibu Phebe Hendra, M. Si., Ph. D., Apt. selaku Dosen Pembimbing Skripsi yang telah membimbing, selalu mendampingi, dan memberikan saran selama penyusunan skripsi. 3. Yunita Linawati, M.Sc., Apt selaku Dosen Penguji yang telah memberikan kritik dan saran selama penyusunan skripsi. 4. Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt selaku Dosen Penguji yang telah memberikan kritik dan saran selama penyusunan skripsi. 5. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si. yang telah menyediakan waktu untuk memberikan bantuan dalam determinasi tanaman Persea americana Mill.

vii


6. Pak Kayat, Pak Heru, Pak Parjiman, Pak Wagiran, Pak Parlan, Pak Kunto, dan Pak Bimo selaku laboran laboratorium Fakultas Farmasi yang telah membantu penulis dalam proses pelaksanaan penelitian di laboratorium. 7. Keluargaku tercinta Ibu, Bapak, Mba Ajeng yang selalu memberi motivasi, perhatian dan doa demi kelancaran studi dan penyusunan naskah skripsi. 8. Partner tercinta dalam hidupku Hironimus Bagas Ridho Yurianto yang selalu memberi motivasi, perhatian, dan doa demi kelancaran studi dan penyusunan naskah skripsi 9. Teman-teman seperjuangan alpukat Angel, Novel, Rysa, Berle, Gemah, Wina, Jolin, Vivo, Mita, Sita, Ester, Uci dan teman-teman dekok jangka pendek (Evi dan Sisca) atas segala kerjasama, bantuan dan semangat yang selalu bergelora dalam penyusunan skripsi ini dari awal hingga akhir. 10. Teman-teman FST-B 2011 dan seluruh angkatan 2011, serta seluruh teman baik di Fakultas Farmasi maupun teman-teman lain, terima kasih atas kebersamaan yang kita bangun. 11. Semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas akhir ini dengan baik. Penulis menyadari bahwa tugas akhir ini belum sempurna dan masih banyak kekurangan sehingga penulis berharap kritik dan saran dari semua pihak. Akhir kata, penulis berharap semoga tugas akhir ini dapat bermanfaat bagi semua pihak terutama di bidang ilmu Farmasi. Penulis Asih Putriati

viii


DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL........................................................................................

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..............................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN ..........................................................................

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN.......................................................................

iv

PERNYATAAN KEASLIAN PENULIS ........................................................

v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ...........

vi

PRAKATA .......................................................................................................

vii

DAFTAR ISI ....................................................................................................

ix

DAFTAR TABEL ............................................................................................

xiv

DAFTAR GAMBAR .......................................................................................

xv

DAFTAR LAMPIRAN ....................................................................................

xvi

INTISARI......................................................................................................... xvii ABSTRACT ....................................................................................................... xviii BAB I PENGANTAR ......................................................................................

1

A. Latar Belakang ............................................................................................

1

1. Permasalahan .........................................................................................

5

2. Keaslian Penelitian ................................................................................

5

3. Manfaat Penelitian.................................................................................

6

B. Tujuan Penelitian.........................................................................................

7

1. Tujuan Umum........................................................................................

7

BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ..............................................................

8

A. Anatomi dan Fisiologi Hati .........................................................................

8

ix


B. Fungsi Metabolik Hati .................................................................................

10

C. Jenis Kerusakan Hati ...................................................................................

11

1. Perlemakan Hati (Steatosis) ..................................................................

11

2. Nekrosis Hati .........................................................................................

13

3. Kolestasis...............................................................................................

14

4. Sirosis ....................................................................................................

14

5. Karsinoma .............................................................................................

15

D. Hepatotoksin ................................................................................................

15

1. Hepatotoksin Teramalkan......................................................................

15

2. Hepatotoksin Tak Teramalkan ..............................................................

15

E. Albumin .......................................................................................................

16

1. Definisi Albumin..................................................................................

16

2. Sintesa Albumin ...................................................................................

17

3. Fungsi Albumin....................................................................................

19

F. Metode Pemeriksaan Albumin ....................................................................

20

G. Dekok ..........................................................................................................

21

H. Karbon Tetraklorida. ..................................................................................

22

I. Antioksidan .................................................................................................

23

J. Persea americana Mill ................................................................................

25

1. Taksonomi ............................................................................................

25

2. Sinonim .................................................................................................

26

3. Nama Lain .............................................................................................

26

4. Morfologi...............................................................................................

26

x


5. Kandungan Kimia..................................................................................

27

6. Khasiat dan Kegunaan ...........................................................................

28

K. Landasan Teori ............................................................................................

28

L. Hipotesis .....................................................................................................

30

BAB III METODE PENELITIAN...................................................................

31

A. Jenis dan Rancangan Penelitian ..................................................................

31

B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional .............................................

31

1. Variabel Utama......................................................................................

31

2. Variabel Pengacau .................................................................................

32

3. Definisi Operasional ..............................................................................

32

C. Bahan Penelitian ..........................................................................................

32

1. Bahan Utama .........................................................................................

33

2. Bahan Kimia ..........................................................................................

33

D. Alat Penelitian .............................................................................................

34

E. Tata Cara Penelitian ....................................................................................

34

1. Determinasi Serbuk Biji Persea americana Mill ..................................

34

2. Pengumpulan Bahan ..............................................................................

35

3. Pembuatan Serbuk .................................................................................

35

4. Penetapan Kadar Air Serbuk Kulit Persea americana Mill. ................

35

5. Pembuatan Dekok Serbuk Kulit ............................................................

35

6. Pembuatan Larutan Karbon Tetraklorida ..............................................

36

7. Uji Pendahuluan ....................................................................................

36

8. Pengelompokan dan Perlakuan Hewan Uji ...........................................

38

xi


9. Pembuatan Serum ..................................................................................

39

10. Pengukuran Kadar Albumin ..................................................................

39

F. Tata Cara Analisis Hasil ..............................................................................

40

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .........................................................

41

A. Penyiapan Bahan .........................................................................................

41

1. Hasil Determinasi Serbuk Biji Persea americana Mill.........................

41

2. Penetapan Kadar Air Serbuk Biji Persea americana Mill ....................

41

B. Uji Pendahuluan .........................................................................................

42

1. Penentuan Dosis Nefrotoksik Karbon Tetraklorida ..............................

42

2. Penentuan Waktu Pencuplikan Darah ...................................................

43

3. Penetapan dosis dekok kulit Persea americana Mill ............................

46

C. Hasil Uji Hepatoprotektif Jangka Pendek Dekok Kulit Persea americana Mill pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida .....................................................

46

1. Kontrol Negatif Olive Oil 2 ml/kgBB ...................................................

49

2. Kontrol Hepatotoksin Karbon Tetraklorida Dosis 2 ml/kgBB ..............

50

3. Kontrol Sediaan Dekok Kulit Persea americana Mill dosis 1600 mg/kgBB ......................................................................................

51

4. Kelompok perlakuan sediaan dekok jangka pendek kulit Persea americana Mill. dosis 363; 762; dan 1600 mg/kgBB ...........................

51

D. Rangkuman Pembahasan ............................................................................

54

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ..........................................................

56

A. Kesimpulan ..................................................................................................

56

B. Saran ...........................................................................................................

56

xii


DAFTAR PUSTAKA .....................................................................................

57

LAMPIRAN .....................................................................................................

63

BIOGRAFI PENULIS .....................................................................................

78

xiii


DAFTAR TABEL

Tabel I

Kandungan senyawa aktif pada Persea americana Mill ..........

27

Tabel II

Komposisi dan konsentrasi reagen Albumin ...........................

40

Tabel III

Purata kadar ALT tikus pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB ......................................................................

Tabel IV

Hasil uji Scheffe kadar ALT setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2mg/kgBB ...................................................

Tabel V

45

Purata kadar serum albumin tikus pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB ..................................................

Tabel VI

44

48

Hasil uji Scheffe kadar albumin setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB dan dekok pada dosis 363 mg/kg BB, 762 mg/kg BB, dan 1600 mg/kg BB .....

xiv

49


DAFTAR GAMBAR Gambar 1

Penampang Mikroskopik Hati .................................................

9

Gambar 2

Struktur Mikroskopik hati yang Mengalami Steatosis .............

12

Gambar 3

Struktur Molekul Karbon Tetraklorida .....................................

22

Gambar 4

Mekanisme

Biotransformasi

dan

Oksidasi

Karbon

Tetraklorida .............................................................................. Gambar 5

Diagram batang rata-rata kadar ALT tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB. ........................................

Gambar 6

23

44

Diagram batang rata-rata kadar albumin tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB dan dekok pada dosis 363 mg/kg BB, 762 mg/kg BB, dan 1600 mg/kg BB ..................................................................

xv

48


DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1

Foto Buah dan Serbuk Kulit Persea americana Mill .......... .. 63

Lampiran 2

Foto Proses Pembuatan Dekok Kulit Buah Persea americana Mill.. .................................................................. ...63

Lampiran 3

Foto Larutan Dekok Kulit Buah Persea americana Mill .... .. 63

Lampiran 4

Surat Pengesahan Determinasi Serbuk Kulit Persea americana Mill .................................................................... .. 64

Lampiran 5

Surat Penetapan Kadar Air .................................................. .. 65

Lampiran 6

Surat Pengesahan Medical and Health Research Ethics Commitee (MHREC) ........................................................... .. 66

Lampiran 7

Analisis Statistik Kadar Serum ALT-AST pada Uji Penentuan Waktu Pencuplikan Darah Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida Dosis 2 ml/kg BB ............................... .. 67

Lampiran 8

Analisis Statistik Kadar Serum Albumin 6 Kelompok Perlakuan Dekok Kulit Buah Persea americana Mill. Setelah Terinduksi Kabon Tetraklorida 2 ml/kg BB ........... .. 70

xvi


INTISARI Penelitian bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian jangka pendek dekok kulit buah Persea americana Mill. pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida dengan melihat peningkatan kadar albumin serta untuk mengetahui adanya kekerabatan antara dosis pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill. pada penggunaan jangka pendek dengan peningkatan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Penelitian menggunakan tikus sehat, jantan galur Wistar, berumur 2-3 bulan, dan berat 150-250 gram. Tikus dibagi secara acak ke dalam enam kelompok perlakuan. Kelompok I diberikan larutan karbon tetraklorida-olive oil (1:1) dosis 2 mL/kgBB secara i.p. Kelompok II diberikan olive oil dosis 2 mL/kg BB secara i.p. Kelompok III adalah kontrol dekok yang diberikan dekok kulit Persea americana Mill. dosis 1600 mg/kgBB secara peroral dan setelah 6 jam dilakukan pengambilan darah. Kelompok IV-VII merupakan kelompok perlakuan yang diberikan dekok kulit buah Persea americana Mill. dosis 363; 762; 1600 mg/kgBB, kemudian 6 jam setelah pemberian dekok, diberikan dosis karbon tetraklorida 2 mL/kg BB. Pada jam ke24 setelah pemberian karbon tetraklorida, seluruh kelompok dilakukan pengambilan darah melalui sinus orbitalis mata untuk dilakukan penetapan kadar serum albumin Analisis kadar albumin dilakukan dengan menggunakan ANOVA pola satu arah dan dilanjutkan dengan uji Scheffe. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian jangka pendek dekok kulit buah Persea americana Mill mempengaruhi kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida dan tidak adanya kekerabatan antara dosis dekok kulit buah Persea americana Mill dengan peningkatan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida Kata kunci : Persea americana Mill., dekok, albumin, karbon tetraklorida

xvii


ABSTRACT

This study investigated the short-term influence of the decoction of Persea americana Mill.’s peel against carbon tetrachloride induced hepatotoxicity in rats. The albumin level in serum were measured for the evaluation of hepar function. This study also determined the relationship between the dose administration of decoction Persea americana Mill’s peel on the use of short term with increased level of albumin serum in rat induced by carbon tetrachloride . This research was done with purely experimental with a completely randomized design pattern undirectional .This study was carried out in healthy, male Wistar rats, 2-3 month old, and weighing 150-250 grams. The rats were divided into six groups of five each. Group I were treated with carbon tetrachloride-olive oil (1:1) 2 mL/kgBW i.p. The second group were additionally treated with olive oil 2mL/kgBW i.p. The third group (decoction control) received the decoction of Persea americana Mill.’s peel (1600 mg/kgBW, p.o.). The forth until sixth group were given decoction of Persea americana Mill’s peel (363; 762; 1600 mg/kgBW, p.o.), and after six hour all rats in each group were given carbon tetrachloride 2 mL/kgBW intaperitonially. Twenty four hours later, the blood was collected from sinus orbital eye to be measured of albumin level from each group. Analysis of albumin level used one-way ANOVA and then Scheffe test. The result showed that extended of decoction Persea americana Mill’peel influence albumin serum level in rats which induced carbon tetrachloride and there wasn’t relationship between the three doses of decoction Persea americana Mill’s peel dose with increased levels of albumin in rats induced by carbon tetrachloride. Keyword : Persea amricana Mill.’s peel, decoction, albumin, carbon tetrachloride

xviii


BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Hati memiliki fungsi utama sebagai pusat metabolisme dan juga berfungsi sebagai organ yang mampu mendetoksifikasi obat dan zat berbahaya (Guyton dan Hall, 2006). Sel-sel hepar mendapat suplai darah yang kaya makanan, tidak mengandung oksigen dan kadang-kadang bersifat toksik melalui vena portae hepatis. Adanya sistem peredaran darah dengan keadaan yang tidak biasa ini dapat menjelaskan mengapa sel hepar lebih rentan terhadap kerusakan penyakit (Wibowo dan Paryana, 2009). Hati juga dapat rusak karena adanya induksi senyawa kimia, infeksi virus, maupun obat-obat yang merusak hati, seperti parasetamol (Chandrasoma dan Taylor, 1995). Karbon tetraklorida (CCl4) adalah salah satu dari bahan-bahan kimia beracun yang menyebabkan kerusakan hati atau bersifat hepatotoksik (Nirmala, Girija, Lakshman, dan Divya 2012). Pada penelitian ini, CCl4 digunakan sebagai induktor kerusakan hati dan kerusakan hati yang ditimbulkan oleh CCl4 ini sebagai model kerusakan hati. Dalam endoplasmik retikulum hati CCl4 dimetabolisme oleh sitokrom P450 2E1 (CYP2E1) menjadi radikal bebas. Senyawa radikal bebas tersebut adalah triklorometil (CCl3*) dan CCl3O2*. CCl3* dapat berikatan kovalen dengan protein, lemak, DNA yang pada akhirnya dapat memicu kerusakan hepatosit. CCl3O2* dapat menyebabkan terjadinya peroksidasi lemak yang mengganggu homeostasis Ca2+ dan menimbulkan disfungsi membran sel dan membran organel sel serta membentuk senyawa reaktif aldehid yang juga 1


2

dapat menyebabkan kerusakan hepar dan akhirnya menyebabkan kematian sel (Panjaitan, Handharyani, Chairul, Masriani, Zakiah, Manalu, 2007). Karbon tetraklorida juga dapat mengaktivasi sel kupffer. Kerusakan sel hepar sendiri juga memicu aktivasi sel kupffer. Sel kupffer yang teraktivasi dapat melepaskan berbagai mediator pro inflamasi yang dapat memperberat kerusakan hepatosit dan mediator antiinflamasi yang bersifat hepatoprotektor. Selain itu, sel kupffer juga dapat melepaskan reactive oxygen species (ROS) yang juga memperberat kerusakan hepatosit. Bila hepatosit mengalami kerusakan, maka enzim-enzim yang terdapat didalam hepatosit tersebut akan terlepas ke dalam sirkulasi sistemik. Enzim-enzim yang banyak ditemukan dalam hepatosit antara lain serum glutamic oxaloacetic transaminase (SGOT), serum glutamic piruvic transaminase (SGPT), glutamil transferase (𝛾 - GT) (Panjaitan dkk., 2007). Adanya karbon teraklorida dapat menyebabkan kerusakan hepar yang ditandai dengan peningkatan kadar alanine transaminase (ALT) yang diikuti dengan penurunan kadar albumin (Nirmala, et al., 2012). Hal ini disebabkkan karena adanya CCl3* akan menyebabkan keluarnya berbagai isi sitoplasma seperti ALT sehingga sintesis lipoprotein terhambat dan menyebabkan steatosis. Pada keadaan steatosis ini, struktur retikulum endoplasma mengalami kerusakan, sehingga sintesa albumin menjadi menurun. Salah satu parameter adanya kerusakan pada hepar akibat adanya suatu hepatotoksik adalah penurunan kadar albumin. Senyawa-senyawa antioksidan dapat digunakan sebagai hepatoprotektor yang dapat mencegah radikal bebas yang terbentuk dari proses metabolisme CCl4. Hal itu disebabkan karena senyawa tersebut dapat memberikan satu elektronnya


3

pada senyawa radikal bebas sehingga tidak lagi membentuk radikal (Winarsi, 2007). Saat ini banyak tumbuhan yang dapat digunakan sebagai salah satu pengobatan alternatif untuk mengobati berbagai penyakit kronis seperti kanker, gangguan ginjal, maupun gangguan hepar. Salah satunya adalah Persea americana Mill. yang diketahui memiliki aktivitas sebagai antioksidan yang memiliki kemampuan untuk menangkap radikal bebas (Malangngi, Meyke, dan Jessy, 2012) karena Persea americana Mill. memiliki kandungan flavonoid yang larut air dan dapat menangkap radikal bebas (Arukwe, Amadi, Duru, Agomuo, Adindu, Odika, Lele, Egejuru, dan Anudike, 2012). Adanya senyawa metabolit sekunder atau senyawa bioaktif pada kulit buah Persea americana Mill yang berkaitan dengan aktivitasnya sebagai antioksidan, salah satunya adalah flavonoid seperti yang terdapat pada biji Persea americana Mill (Vinha, Moreira, Barreira, 2013), sehingga pada penelitian ini digunakan kulit buah Persea americana Mill yang diharapkan dapat memberikan pengaruh pada hepar setelah injeksi hepatotoksin. Mengacu pada penelitian Rosari (2013) penelitian ini menggunakan pelarut air dengan harapan dapat memperoleh antioksidan lebih banyak. Adapun bentuk sediaan yang diuji adalah dekok karena cara pembuatan dekok yang mudah diaplikasikan dalam kehidupan masyarakat sehari-hari, yaitu dengan merebus sediaan herbal dengan pemanasan hingga mencapai suhu tertentu dan dalam waktu yang relatif lama.


4

Menurut Badan Pengawasan Obat dan Makanan (2010) dekok merupakan sediaan cair yang dibuat dengan cara mengekstraksi sediaan herbal dengan air pada suhu 90ºC selama 30 menit. Pada penelitian ini digunakan dekok dosis 363; 762; 1600 mg/kgBB untuk melihat kekerabatan antara dosis dekok kulit buah Persea americana Mil. dengan peningkatan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Penentuan dosis tersebut didasarkan pada penelitian Rosari (2013) dimana pengobatan yang biasa digunakan pada masyarakat yaitu ± 2 sendok makan (4 g) serbuk kulit buah Persea americana Mill. yang direbus dengan 250 ml air. Penelitian pengaruh pemberian jangka pendek dekok kulit Persea americana Mill. terhadap tikus yang terinduksi karbon tetraklorida dilakukan untuk mengetahui pengaruh pemberian dan adanya kekerabatan antara dosis dekok kulit Persea americana Mill tersebut dengan peningkatan kadar albumin yang mengarah pada proteksi hepar yang optimal dari sediaan dekok kulit buah Persea americana Mill tersebut. Penelitian ini menggunakan waktu perlakuan jangka pendek untuk mengetahui efek pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill. terhadap kadar serum albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Penelitian serupa menggunakan waktu jangka panjang juga dilakukan bersamaan dengan penelitian tersebut. Oleh karena itu, penelitian pengaruh jangka pendek dekok kulit buah Persea americana Mill. pada tikus galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida menarik untuk diteliti dan belum pernah dilakukan sebelumnya.


5

1. Perumusan Masalah a.

Apakah pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill. dalam penggunaan jangka pendek dapat memberikan pengaruh terhadap kadar serum albumin pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida?

b.

Apakah ada kekerabatan antara dosis pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill. pada penggunaan jangka pendek dengan peningkatan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida?

2. Keaslian Penelitian Penelitian yang menggunakan kulit Persea americana Mill yang pernah dilakukan yaitu oleh Anggraeni (2006) tentang efek dari pemberian infusa biji Persea americana Mill tehadap kadar glukosa darah tikus yang diberi beban glukosa. Allhasan, Sule, Atiku, Wudil, Abubakar, dan Mohammed (2012) melakukan penelitian tentang efek ekstrak biji Persea americana Mill terhadap tikus yang mengalami diabetes akibat induksi alloxan. Rosari (2013) melakukan penelitian mengenai ektrak dekok biji Persea americana Mill. sebagai efek hepatoprotektif akibat induksi karbon tetraklorida. Nirmala, et al., (2012) melakukan penelitian tentang efek hepatoprotektif Musa paradisiaca terhadap tikus terinduksi karbon tetraklorida. Leite, Erita, Rosana, Raimundo, Jose, dan Lusiana (2009) melakukan penelitian tentang komposisi kimia, toksisitas, dan aktifitas biji Persea americana Mill sebagai larvasidal dan antifungi. Arukwe, Amadi, Duru, Agomuo, Adindu, Odika, Lele, Egejuru, dan Anudike (2012) melakukan penelitian tentang komposisi kimia dari daun, biji, dan buah Persea


6

americana Mill. Yasir dan Kharya (2010) melakukan penelitian tentang profil aktifitas fitokimia dan farmakologi Persea americana Mill. Rao dan Adinew (2011) melakukan penelitian tentang potensi ekstrak buah Persea americana Mill sebagai antioksidatif dan menstimulasi pembentukan sel B pada tikus hiperglikemik yang terinduksi streptozotocin. Sejauh penelusuran pustaka yang dilakukan penulis, penelitian tentang pengaruh pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill. terhadap kadar serum albumin tikus terinduksi karbon tetraklorida belum pernah dipublikasikan. 3. Manfaat Penelitian a. Manfaat Teoritis Penelitian ini diharapkan dapat mendukung perkembangan ilmu pengetahuan dalam bidang kefarmasian khususnya mengenai pengaruh pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill. yang mengarah pada proteksi hepar. b. Manfaat Praktis Penelitian ini diharapkan mampu memberikan informasi kepada masyarakat mengenai pengaruh pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill. terhadap peningkatan kadar albumin.


7

B. Tujuan Penelitian 1.

Tujuan umum a. Mengetahui adanya pengaruh pemberian jangka pendek dekok kulit buah Persea americana Mill pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida dengan indikator penurunan kadar albumin. b. Mengetahui adanya kekerabatan antara dosis dekok kulit buah Persea americana Mill dalam penggunaan jangka pendek dengan peningkatan kadar albumin pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A.

Anatomi dan Fisiologi Hati

Hepar atau hati merupakan organ terbesar dari tubuh yang mensekresi empedu dan dapat mengeluarkan hasil produksi dari makanan, organ ini berfungsi sebagai pusat metabolisme (Wibowo dan Paryana, 2009). Pada bagian atas hati memiliki bentuk cembung dan terletak di bagian kanan bawah diafragma dan sebagian terletak di sebelah kiri bawah. Bagian bawah hati memiliki bentuk berupa cekung dan melindungi organ lain seperti ginjal kanan, lambung, usus, dan pankreas (Price dan Wilson, 1984). Hati menerima sekitar 1500 mL darah per menit melalui arteri hepatica dan vena portae (Ganong dan McPhee, 2011). Hati terbagi dalam dua belahan utama yaitu kanan dan kiri. Hati terletak di bawah diafragma dengan permukaan atas berbentuk cembung, sedangkan permukaan bawah tidak rata dan memperlihatkan lekukan, fasiura transversus (Pearce, 2009). Hati tersusun dari dua lobus yaitu lobus kanan dan lobus kiri. Belahan kanan dan kiri dipermukaan bawah dipisahkan oleh fasiura longitudinal, sedangkan dipermukaan atas dipisahkan oleh ligamen falsiformis. Dari setiap lobus terdiri dari lobulus. Lobulus merupakan struktur-struktur pada setiap lobus di hati, lobulus terdiri dari lempeng-lempeng sel hati yang berbentuk seperti kubus dan tersusun mengelilingi vena sentralis (Pearce, 2009). Lempeng-lempeng sel hati dibatasi oleh ruang vaskular yaitu sinusoid. Sinusoid merupakan cabang vena portae dan arteri hepatica sehingga darah akan bercampur meuju ke vena-vena

8


9

sentral (Ganong dan McPhee, 2011). Di dalam septum terdapat venula porta kecil yang menerima darah terutama dari vena saluran pencernaan melalui vena porta. Dari venula ini darah mengalir ke sinusinoid hati gepeng dan bercabang yang terletak di antara lempeng-lempeng hati dan kemudian ke vena sentralis. Dengan demikian, sel hepar terus-menerus terpapar dengan darah ke vena porta (Guyton dan Hall, 2006). Hepar terdiri dari unit-unit fungsional (Gambar 1.) yang biasa disebut lobulus yang berupa susunan jaringan berbentuk heksagonal yang mengelilingi vena sentral. Darah dari cabang arteri hepatika dan vena porta mengalir dari perifer lobulus menuju sinusoid. Sinusoid adalah kapiler luas yang berjalan diantara jejeran sel hati ke vena sentral. Di bagian dalam sinusoid ini terdapat sel yang berfungsi untuk menghancurkan sel darah merah dan bakteri yang melewatinya dalam darah. Sel ini disebut sel Kupffer (Sherwood, 2007), dan tidak jarang disebut sebagai sel fagositik (Price dan Wilson, 2005).

Gambar 1. Penampang mikroskopik hati (Ganong dan McPhee, 2011)


10

B. Fungsi Metabolik Hati Hati memiliki tiga fungsi utama dalam tubuh yaitu untuk sintesis, ekskresi, dan metabolisme (Chandrasoma dan Taylor, 1995). Sebagai tempat sintesis hati mampu memproduksi albumin, faktor-faktor pembekuan darah, dan juga plasma globulin (Fox, 2004). Selain itu hati, hati juga mengekskresikan bermacammacam bahan ke dalam empedu, antara lain bilirubin (Chandrasoma dan Taylor, 1995). Fungsi metabolik hati, antara lain: a. Metabolisme karbohidrat b. Metabolisme lemak c. Metabolisme protein d. Hati mengeluarkan atau mengekskresikan obat-obatan, hormon, dan zat lain e. Hati merupakan tempat penyimpanan vitamin f. Bersama ginjal mengaktifkan vitamin D (Sherwood, 2007). Hepar memiliki struktur seragam yang memiliki kelompok sel yang dipersatukan oleh sinusoid. Sel-sel hepar mendapat suplai darah dari vena portae hepatis yang kaya akan makanan dan tidak mengandung oksigen, namun terkadang bersifat toksik; serta dari arteria hepatika yang mengandung oksigen. Karena sistem peredaran darah yang tidak biasa ini, sel-sel hepar mendapatkan suplai darah yang relatif kurang oksigen yang mengakibatkan hepar memiliki potensi besar untuk mengalami kerusakan dan juga penyakit (Wibowo dan Paryana, 2009).


11

Ketika hati mengalami kehilangan jaringannya, hati akan melakukan regenerasi atau mengembalikan dirinya sendiri. Proses regenerasi ini berlangsung selama 5 hingga 7 hari pada tikus dimana pada saat ini hepatosit diperkirakan mengalami replikasi sebanyak satu atau dua kali, dan setelah mencapai ukuran yang sebenarnya, hepatosit akan kembali lagi pada keadaan semula (Guyton dan Hall, 2006). C. Jenis Kerusakan Hati Sebagian besar toksikan memasuki tubuh melalui sistem gastrointestinal, dan setelah diserap, toksikan dibawa oleh vena porta hati ke hati. Kadar enzim yang memetabolisme xenobiotik dalam hati juga tinggi (terutama sitokrom P-450); ini membuat sebagian besar toksikan menjadi kurang toksik dan lebih mudah larut dalam air, dan karenanya lebih mudah diekskresikan. Pada beberapa kasus, toksikan diaktifkan sehingga dapat menginduksi lesi (Lu, 1995). Toksikan dapat menyebabkan berbagai jenis efek toksik pada berbagai organel sel hati, antara lain: 1. Perlemakan Hati (Steatosis) Perlemakan hati (Gambar 2.) adalah hati yang mengandung berat lipid lebih dari 5 persen. Adanya kelebihan lemak dalam hati dapat dibuktikan secara histokimia. Lesi dapat bersifat akut, seperti disebabkan oleh etionin, fosfor, atau tetrasiklin. Etanol dan metotreksat dapat menyebabkan lesi akut atau lesi kronik. Beberapa toksikan, seperti tetrasiklin, menyebabkan butiran lemak kecil dalam


12

suatu sel sementara toksikan lainnya, seperti etanol, menyebabkan butiran lemak besar yang menggantikan inti (Lu, 1995).

Gambar 2. Struktur mikroskopik hepar yang mengalami steatosis (Mercer University School of Medicine, 2012)

Steatosis merupakan respon umum akibat paparan akut hepatotoksin kecuali parasetamol. Pada umumnya steatosis yang diinduksi oleh zat beracun bersifat reversibel dan tidak menyebabkan kematian (Treinen dan Moslem, 2001). Mekanisme yang paling sering terjadi adalah akibat pelepasan trigliserida hati ke dalam plasma karena trigliserida hanya diekskresi dalam keadaan bergabung dengan lipoprotein (membentuk lipoprotein berdensitas sangat rendah atau very low density lipoprotein/VLDL). Adanya kerusakan pelepasan trigliserida ke plasma akan menyebabkan penimbunan lipid pada hati. Penimbunan lipid dapat terjadi melalui beberapa mekanisme, antara lain: a. Penghambatan sintesis satuan protein dari lipoprotein (misalnya karbon tetraklorida, etionin) b. Penekanan konjugasi trigliserid dengan lipoprotein (misalnya karbon tetraklorida)


13

c. Hilangnya kalium dari hepatosit, mengakibatkan gangguan transfer VLDL melalui membran sel (misalnya etionin). d. Rusaknya oksidasi lipid oleh mitokondria (misalnya etanol). e. Penghambatan sintesis fosfolipid, bagian penting dari VLDL (misalnya kekurangan kolin, asam orotat) (Lu, 1995). 2. Nekrosis Hati Nekrosis hati adalah kematian hepatosit. Nekrosis hati merupakan suatu manifestasi toksik yang berbahaya tetapi tidak selalu kritis karena hati mempunyai kapasitas pertumbuhan kembali (Lu, 1995). Perubahan morfologik awal antara lain berupa edema sitoplasma, dilatasi retikulum endoplasma dan disagregasi polisom. Terjadi akumulasi trigliserid sebagai butiran lemak dalam sel (Lu, 1995). Perubahan

biokimia

bersifat

kompleks,

dan

tampaknya

berbagai

hepatotoksikan bekerja melalui berbagai mekanisme. Karbon tetraklorida (CCl4) merupakan hepatotoksikan yang telah dipelajari secara luas. CCl4 terutama bekerja melalui metabolit reaktifnya, radikal triklorometil yang secara kovalen mengikat protein dan lipid tidak jenuh dan menyebabkan peroksidasi lipid. Membran subsel kaya akan lipid semacam itu dan karenanya, bersifat rentan. Perubahan kimia dalam membran dapat menyebabkan pecahnya membran itu (Lu, 1995). Menurut Recknagel, dkk (cit., Lu 1995) peroksidasi lipid mikrosom mungkin menyebabkan penekanan pada pompa Ca2+ mikrosom yang mengakibatkan


14

gangguan awal homeostasis Ca2+ sel hati; keadaan ini kemudian dapat menyebabkan kematian sel. 3. Kolestasis Jenis kerusakan hati yang biasanya bersifat akut ini, lebih jarang ditemukan dibandingkan dengan perlemakan hati dan nekrosis; jenis kerusakan hati ini juga lebih sulit diinduksi pada hewan, kecuali mungkin steroid. Tampaknya zat kolestatik bekerja melalui beberapa mekanisme. Sebagai contoh, 𝛼-naftilil-sosianant (ANIT) dapat menyebabkan kolestasis, hiperbilirubinemia, dan penghambatan oksigenase fungsi campur mikosom. Berkurangnya aktivitas

ekskresi empedu pada membran kanalikulus tampaknya merupakan mekanisme utama kolestasis. Selain itu, kelihatannya ANIT mengubah permeabilitas sel duktulus (Lu, 1995). 4. Sirosis Sirosis ditandai oleh adanya septa kolagen yang tersebar di sebagian besar hati. Kumpulan hepatosit muncul sebagai nodul yang dipisahkan oleh lapisan berserat ini (Lu, 1995). Patogenesisnya tidak sepenuhnya dimengerti, tetapi dalam sebagian besar kasus, tampaknya sirosis berasal dari nekrosis sel tunggal karena kurangnya mekanisme perbaikan. Keadaan ini menyebabkan aktifitas fibroblastik dan pembentukan jaringan parut. Tidak cukupnya aliran darah dalam hati mungkin menjadi faktor pendukung (Lu, 1995). Beberapa karsinogen kimia, seperti benzoapyrene, aflatoksin dan pemberian CCl4 jangka panjang dapat menyebabkan sirosis pada hewan. Pada manusia, penyebab sirosis yang paling penting adalah konsumsi kronis minuman


15

beralkohol. Keadaan patologik ini dapat diinduksi pada hewan hanya apabila hewan diberi etanol serta diet yang kekurangan kolin, protein, metionin, vitamin B12, dan asam folat. Kekurangan zat makanan ini sering dijumpai pada alkoholisme, maka kekurangan zat gizi ini merupakan penyebab utama sirosis (Lu, 1995). 5. Karsinoma Karsinoma hepatoseluler kolangiokarsinoma adalah jenis neoplasma ganas yang paling umum pada hati. Jenis karsinoma lainnya antara lain angiosarkoma, karsinoma kelenjar, karsinoma trabekular, dan karsinoma sel hati yang tidak berdiferensiasi (Lu, 1995). D. Hepatotoksin Hepatotoksin diklasifikasi menjadi dua, yaitu: 1. Hepatotoksin teramalkan (Tipe A) Hepatotoksin ini merupakan senyawa yang dapat merusak hepar jika diberikan dalam jumlah yang cukup untuk menimbulkan efek toksik. Jadi jenis hepatotoksin ini bergantung dari jumlah dosis pemberian senyawa. Karbon tetraklorida merupakan contoh hepatotoksin teramalkan (Forrest, 2006). 2. Hepatotoksin tak teramalkan (Tipe B) Hepatotoksin tersebut tidak bersifat toksik, dan hanya memberikan efek toksik pada orang-orang tertentu, sehingga hepatotoksin jenis ini tidak bergantung pada dosis pemberian. Contoh senyawa yang termasuk jenis ini adalah isoniazid dan clorpromazine (Forrest, 2006).


16

E. Albumin 1. Definisi Albumin Albumin merupakan protein terbanyak dalam plasma yang berperan dalam proses penyembuhan penyakit dan atau recovery atau pemulihan setelah tindakan pembedahan (operasi) (Supriyanta, 2012). Serum albumin manusia adalah satu molekul unik yang merupakan protein utama dalam plasma manusia (3,4 – 4,7 g/dl) dan membentuk kira-kira 60% dari protein plasma total. Kira-kira 40% albumin dapat dijumpai di dalam plasma dan 60% yang lain dijumpai di ruang ekstraseluler. Hati menghasilkan kira-kira 12 g albumin per hari yang merupakan kira-kira 25% dari total sintesa protein hati. Masa molekul albumin yang relatif rendah (kurang lebih 69 kDa) dan konsentrasinya yang tinggi, albumin diperkirakan bertanggung jawab atas 75-80% dari tekanan osmotik plasma (Supriyanta, 2012). Albumin mempertahankan tekanan osmotik koloid dalam pembuluh darah dan mempunyai sejumlah fungsi penting lain. Albumin melarutkan dan menghantarkan banyak molekul-molekul kecil dalam darah (contohnya obatobatan), sebagai tempat penyimpanan protein, dan merupakan partikel utama yang menentukan tekanan onkotik plasma agar cairan tidak dapat secara bebas melintas antara ruang intra dan extravascular (Bangun, 2008). Albumin merupakan protein utama pada manusia, meliputi 2/3 protein total dengan berat molekul 65.000 dalton. Rendahnya kadar albumin dalam serum darah disebabkan karena gangguan sintesa (malnutrisi, disfungsi hepar) atau kehilangan (asites, protein hilang karena nefropati atau enteropati) sehingga menyebabkan gangguan yang


serius

pada

tekanan

onkotik

intravaskuler,

kehilangan

albumin

17

dapat

bermanifestasi edema (Hutchison, Reilly, dan Mac, 1998). 2. Sintesa Albumin Sintesis albumin membutuhkan mRNA untuk translasi. Suplai asam amino yang cukup akan diaktivasi dan berikatan dengan tRNA. Ribosom untuk pembentukan dan energi dalam bentuk ATP. Sintesa albumin dimulai di dalam nukleus, dimana gen ditranskripsikan ke dalam messenger ribonukleic acid (mRNA). mRNA disekresikan ke dalam sitoplasma, dimana albumin berikatan dengan ribosom, membentuk polysome yang mensintesa preproalbumin. Preproalbumin adalah molekul albumin dengan asam amino yang disambung pada terminal N. Sambungan asam amino memberi isyarat penempatan preproalbumin ke dalam membran retikulum endoplasma. Ketika berada di dalam lumen retikulum endoplasma, asam amino akan memecah, menyisakan albumin (albumin dengan

asam amino yang tersisa). Proalbumin merupakan bentuk

intraseluler yang utama dari albumin. Proalbumin kemudian dikirim ke aparatus golgi, dimana 6 sambungan asam amino dipindahkan sebelum albumin disekresi oleh hepatosit (Bangun, 2008). Albumin pada plasma sekitar 55-56% dari protein total. Albumin disintesis pada hati dengan kecepatan yang tergantung pada protein intake subjek terhadap feedback regulation oleh level plasma. Albumin difiltrasi melalui glomerulus ginjal dan sebagian besar di reabsorbsi oleh sel tubulus proksimal dan didegradasi oleh enzim liposomal menjadi fragment yang akan kembali ke sirkulasi.


18

Penurunan kadar albumin akibat adanya senyawa kimia, seperti karbon tetraklorida mengindikasikan terjadinya penurunan fungsi hati dalam hal sintesis protein sehingga menyebabkan berkurangnya jumlah protein intake dan berkurangnya absorbsi asam amino (Fartosi, Majid, Auda, dan Husein, 2012). Menurunnya level protein total dan albumin akibat karbon tetraklorida akan menyebabkan kerusakan produksi pada hati dan terjadinya lokalisasi pada retikulum endoplasma yang menyebabkan hilangnya P-450 yang mengarah pada fatty liver (Rajendran, Hamalata, Akasakalai, Mandhukhrisna, Sohil, dan Sundaram, 2009). Adanya peningkatan kadar albumin kembali ke normal setelah pemberian senyawa yang mengarah pada proteksi hepar menunjukkan adanya stabilisasi retikulum endoplasma yang mengarah pada sintesis protein (Nasir, Abubakar, Shehu, Aliyu, dan Toge, 2013). Penurunan konsentrasi albumin serum dapat terjadi melalui dua cara: albumin hilang dari tubuh dalam jumlah besar seperti perdarahan, eksudasi kulit yang berat, atau terjadi penurunan produksi albumin (hepatic insufficiensy, malnutrisi). Penyebab

lain

rendahnya

albumin

termasuk

hypoadrenocorticism

dan

hyperglobulinemia (karena multiple myeloma). Hypoalbuminemia yang bermakna dapat disebabkan oleh tiga penyebab utama yaitu: hepatic insufficiensy, real loss (protein-losing

nephropaty),

dan

gastrointestinal

loss

(protein-losing

enteropathy). Rentang nilai rujukan bervariasi pada manusia albumin serum kurang dari 2,5 mg/dL disebut abnormal, dan konsentrasi kurang dari 1,5 mg/dL dapat menyebabkan tanda klinis yang bermakna seperti pembentukan asites dan edema (Bangun, 2008).


19

3. Fungsi Albumin Menurut Riani (2001) beberapa fungsi albumin yaitu: 1. Memobilisasi asam amino dari hepar, untuk disintesa ke jaringan lain menjadi asam amino bentuk lain. 2. Transpor umum atau pembawa protein (thyroxin, bilirubin, penicillin, cortisol dan estrogen, asam lemak bebas, warfarin, calsium dan magnesium. Albumin sangat larut dalam plasma pada konsentrasi yang normal antara 35 dan 50 g/dL. Albumin memiliki beberapa fungsi fisiologis dan farmakologis penting. Albumin mampu mengangkut logam, asam lemak, kolesterol, pigmen empedu, dan obat-obatan. Albumin merupakan elemen kunci dalam regulasi tekanan osmotik dan distribusi cairan antara kompartemen yang berbeda. Konsentrasi plasma albumin mewakili keseimbangan antara sintesis dalam hati dan katabolisme. Fungsi penting albumin yang lainnya adalah kemampuan untuk mengikat berbagai macam ligan. Ligan ini mencakup asam lemak bebas (FFA), kalsium, hormon staroid tertentu, bilirubin dan sebagian triptofan plasma (Hutchison et al., 1998). Sejumlah obat, termasuk sulfonamida, penisilin G, dikumarol dan aspirin terikat dengan albumin. Albumin juga sebagai sumber utama dari kelompok sulfidril, pengikat radikal bebas (jenis nitrogen dan oksigen). Efek albumin sebagai antikoagulan dan antitrombotik diperkirakan ada karena albumin mengikat nitric oxide (NO), menghambat, mangaktivasi dan memperpanjang efek antiagregator (Erinda, 2009). Dalam serum darah, albumin merupakan protein


20

yang memegang tekanan osmotik terbesar untuk mempertahankan cairan biovaskuler,

membantu

metabolisme

dan

transportasi

obat-obatan,

anti

peradangan, antioksidan, dan keseimbangan asam basa sehingga mencegah kuman masuk dari usus ke pembuluh darah dan efek anti koagulasi. Kekurangan albumin dalam serum dapat mempengaruhi pengikatan dan pengangkutan senyawasenyawa endogen dan eksogen, termasuk obat-obatan, karena seperti diperkirakan distribusi obat keseluruh tubuh itu pengikatannya melalui fraksi albumin (Hutchison et al., 1998). Pada kadar albumin serum berada dibawah nilai normal, maka fraksi obat yang terikat protein tersebut berkurang, dengan kata lain fraksi obat bebas banyak sehingga keadaan ini dapat menimbulkan pengaruh obat yang tidak diinginkan (Sherlock, 1979). Penurunan kadar albumin dalam darah (hipoalbuminemia) mengakibatkan cairan keluar dari pembuluh darah, keluar ke dalam jaringan menyebabkan terjadinya “oedema”. Kadar albumin dalam serum tergantung pada tiga proses yang dinamik yaitu sintesa, degradasi dan distribusi. Beberapa faktor dapat mempengaruhi sintesis albumin antara lain gizi, lingkungan, hormon dan adanya suatu penyakit (Sherlock, 1979). F. Metode Pemeriksaan Albumin Analisa kadar albumin yang terlarut dalam cairan darah dapat dilakukan 2 macam metode biuret yang sering digunakan, yaitu : 1. Metode Brom Cresol Green (BCG) Prinsip : Brom Cresol Green dengan albumin di dalam buffer sitrat akan memberi warna komplek dan dapat dibaca absorbannya dengan spektrofotometer.


2.

21

Metode Brom Cresol Purple (BCP)

Prinsip : albumin dalam serum berikatan dengan komplek zat warna BCP sehingga terjadi pergeseran spektrum absorbsi dari pada larutan yang sebanding dengan kadar albumin dalam serum dibaca pada gelombang 570-620 nm. (Poedjiadji, 1994).

G. Dekok Dekok adalah perebusan simplisia dicampur dengan air bersuhu 90ºC sambil diaduk berulang-ulang dalam pemanasan air selama 30 menit (Voight, 1995). Dekok adalah infus yang lebih lama ≥ 30 menit dan temperatur sampai titik didih

air (Dirjen POM, 2000). Ada berbagai macam metode ekstraksi, antara lain : 1. Maserasi

Maserasi adalah proses ekstraksi simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengadukan pada temperatur ruangan. 2. Perkolasi Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru dan sempurna (Exhaustiva extraction) yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan. 3. Infundasi Infus adalah sediaan cair yang dibuat dengan menyari simplisia nabati dengan air pada suhu 90°C selama 15 menit. (Dirjen POM, 2000).


22

H. Karbon Tetraklorida

Gambar 3. Struktur molekul karbon tetraklorida (Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan RI., 1995) Karbon tetraklorida (Gambar 3.) adalah senyawa kimia dengan rumus molekul CCl4. Karbon tetraklorida berupa cairan bening yang tidak mudah terbakar dan memiliki bau yang khas, larut dalam etanol, aseton, benzen, karbon 29 disulfida dan memiliki kelarutan rendah dalam air (Oehha, 2000). Karbon tetraklorida merupakan cairan yang mudah menguap dan senyawa kimia yang dikhawatirkan menyebabkan karsinogen dan dibuktikan melalui penelitian terhadap hewan uji. Karbon tetraklorida pada masa lalu sering digunakan sebagai cairan pembersih dan bahan pemadam kebakaran (Departement of Health and Human Services, 2011). Karbon tetraklorida merupakan senyawa yang bersifat toksik. Karbon tetraklorida diabsorpsi dengan baik di saluran pencernan dan pernafasan, didistribusi ke seluruh tubuh dengan konsentrasi tinggi terdapat di hepar, otak, ginjal, otot, jaringan lemak, dan darah (McCance dan Grey, 2006). Karbon tetraklorida di dalam tubuh akan mengalami proses biotransformasi oleh enzim CYP2E1 membentuk radikal bebas yaitu radikal triklormetil (CCl3*). Radikal ini kemudian akan bereaksi dengan oksigen dan membentuk radikal triklorometil peroksi (OOCCl3*) yang lebih reaktif (Gambar 4.) (Hippeli and Elstner, 1999).


23

Radikal triklorometil dapat menyebabkan terjadinya kerusakan sitokrom P-450. Radikal triklorometil akan berikatan secara kovalen dengan lemak mikrosomal dan protein, dan akan bereaksi secara langsung dengan membran fosfolipid dan kolesterol. Reaksi ini juga menghasilkan kloroform, yang merupakan salah satu metabolit dari karbon tetraklorida (Gambar 4.). Selain itu pula radikal triklorometil dapat menginisiasi terjadinya radikal lipid yang menyebabkan terbentuknya lipid hidroperoksidase (LOOH) dan radikal lipid alkoksil (LO*). Peroksida lipid ini bersifat merusak membran sel dan membran rough endoplasmic reticulum (RER) (McCance dan Grey, 206). Kerusakan membran sel akan meningkatkan permeabiltas, yang akhirnya akan menyebabkan kematian sel. Kerusakan membran RER akan menyebabkan ganguan sintesis protein. Apoprotein lipid yang tidak terbentuk menyebabkan lipid yang dihasilkan oleh sel tidak dapat dikeluarkan, sehinga terjadi degenerasi lemak (fatty liver) (McCance dan Grey, 2006). Pada proses fragmentasi, radikal lipid alkoksi tersebut akan diubah menjadi malondialdehid (Greguz and Klaaseen, 2001). Senyawa aldehid inilah yang akan menyebabkan kerusakan pada membran plasma dan meningkatkan permeabilitas membran (Bruckner dan Warren, 2001).

Gambar 4. Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida (Timbrell,2008)


24

Senyawa radikal ini diketahui menyebabkan terjadinya hepatotoksisitas dan juga merupakan suatu nefrotoksin. Tubuh sebenarnya mempunyai sistem pertahanan untuk mengatasi radikal bebas, salah satunya yaitu enzim glutation-Stransferase (GST) sebagai enzim yang berperan dalam proses penangkapan radikal bebas (Timbrell, 2008).

I.

Antioksidan

Antioksidan dalam pengertian kimia, merupakan senyawa pemberi elektron. Antioksidan adalah molekul yang dapat memperlambat atau mencegah oksidasi dari molekul lain. Oksidasi sendiri adalah reaksi kimia dimana terjadi pemindahan elektron dari suatu substansi menjadi agen oksida. Reaksi oksidasi ini menghasilkan radikal bebas yang memulai reaksi berantai untuk menghancurkan sel. Dalam hal ini, antioksidan menghentikan reaksi berantai ini dengan menghilangkan radikal bebas dan menghambat reaksi oksidasi lain (Cotran, 1995). Antioksidan bekerja dengan cara mendonorkan satu elektronnya kepada senyawa yang bersifat oksidan sehingga aktivitas senyawa oksidan tersebut bisa terhambat.

Antioksidan

menstabilkan radikal

bebas dengan

melengkapi

kekurangan elektron yang dimiliki radikal bebas dan menghambat terjadinya reaksi berantai dari pembentukan radikal bebas (Winarsi, 2007). Salah satu contoh antioksidan adalah senyawa flavonoid. Flavonoid adalah antioksidan eksogen yang telah dibuktikan bermanfaat dalam mencegah kerusakan sel akibat stres oksidatif. Mekanisme kerja dari flavonoid sebagai antioksidan dengan


25

mendonorkan ion hidrogen sehingga dapat menetralisir efek toksik dari radikal bebas (Jawi, Sumardika, 2012). Adanya kandungan berbagai zat yang bersifat antioksidan diharapkan dapat memberikan efek perlindungan pada sel – sel hepar terhadap radikal bebas dengan menekan sel– sel hepar yang mengalami kerusakan, yang ditandai dengan penurunan kadar albumin dalam plasma darah.

J.

Persea americana Mill.

1. Taksonomi Kerajaan

: Plantae (Tumbuhan)

Subkerajaan

: Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh)

Super Divisi

: Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisi

: Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas

: Magnoliopsida (berkeping dua / dikotil)

Sub Kelas

: Magnoliidae

Ordo

: Laurales

Famili

: Lauraceae

Genus

: Persea

Spesies

: Persea americana Mill.

(United States Departemen of Agriculture, 2014).


26

2. Sinonim Laurus persea L., Persea americana var. angustifolia Miranda, Persea americana var. drymifolia (Schldtl &Cham) S. F. Blake, Persea americana var. nubigena (L. O. Williams) L.E. Kopp, Persea drymifolia Schldtl. & Cham., Persea edulis Raf., Persea floccosa Mez, Persea gigantea L. O. Williams, Persea gratissima C. F. Gaertn., Persea gratissima var. drimyfolia (Schldtl. & Cham.) Mez, Persea gratissima var. macrophylla Meisn., Persea gratissima var. oblonga Meisn., Persea gratissima var. praecox Nees, Persea gratissima var. vulgaris Meisn., Persea pleiogyna Blake, Persea nubigena L. O. Williams, Persea paucitriplinervia Lundell, Persea persea (L.) Cockerell, Persea streyermarkii C. K. Allen. (Lim, 2012). 3. Nama lain Alligator pear, avocado, avocado-per, butter fruit (Inggris), avocado (Filipina), avocat, avocatier, zabelbok, zaboka (Prancis), alligatorbirne, avocadobirne (Jerman), adpukat, avokad (Indonesia), apukado, avokado (Malaysia), Aguacate, Pagua (Spanyol), awokado (Thailand) (Yasir, Das, Kharya, 2010). 4. Morfologi Tanaman Persea americana berupa pohon yang selalu hijau, yang tingginya mencapai 20 m. Pohon terdiri dari daun tunggal, tersusun spiral, tepi daun rata; panjang tangkai daun 1,5-5 cm; daun berbentuk elips hingga lanset, bulat telur hingga bulat telur sungsang, panjang daun 5-40 cm dan lebar 3-15 cm, permukaan atas daun diselaputi lilin. Perbungaan berupa tongkol majemuk (malai)


27

yang muncul di ujung cabang; bunga banci tersusun atas 3 daun mahkota, memiliki bau harum; perhiasan bunga tersusun atas dua lingkaran; benang sari 9 di dalam 3 lingkaran; kumpulan benang sari di bagian dalam mengeluarkan 2 nektar di bagian dasarnya; putik terdiri atas satu ruang bakal buah, tangkai kepala putik ramping dengan kepala putik tunggal (simple papillate stigma). Buah besar berdaging dan berair (berry), berbiji tunggal, permukaan buah halus, panjang 7-20 cm. Buah besar dan bulat, dilapisi dua lapisan dan dua kotiledon besar yang melindungi embrio kecil (Proseanet, 2012). Pada umumnya tanaman alpukat dapat tumbuh di dataran rendah sampai dataran tinggi, yaitu 5-1500 m dpl. Namun tanaman akan tumbuh baik pada ketinggian 200-1000 m dpl (Kemal, 2001). 5. Kandungan kimia Kulit Persea americana Mill. memiliki kandungan metabolit yang berbeda-beda kadarnya. Kandungan metabolit sekunder pada kulit Persea americana, meliputi flavonoid, vitamin C, vitamin E dan karotenoid (Vinha, Moreira, Sergio, dan Barreira, 2013). Perbandingan kandungan senyawa bioaktif pada Persea americana Mill. adalah sebagai berikut (tabel I) Tabel I. Kandungan senyawa bioaktif pada Persea americana Mill (Vinha et al., 2013).


28

6. Khasiat dan kegunaan Kandungan metabolit atau senyawa bioaktif pada kulit buah Persea americana Mill yang berkaitan dengan aktivitasnya sebagai antioksidan, salah satunya adalah flavonoid terdapat dalam jumlah yang hampir sama dengan biji Persea americana Mill (Vinha et al., 2013). Adanya kandungan flavonoid dapat mencegah kerusakan oksidatif sel, mempunyai aktifitas perlindungan dan anti kanker yang kuat melawan tahaptahap dalam karsinogenesis (Salah, dkk., 1995).

K. Landasan Teori Hati merupakan salah satu organ terpenting dalam tubuh manusia. Hati memiliki peran metabolisme dan netralisasi racun dalam tubuh. Akan tetapi hati rentan terhadap berbagai gangguan metabolik dan toksik (Kumar, 2009). Karbon tetraklorida merupakan senyawa model yang bersifat hepatotoksik. Senyawa ini akan dimetabolisme oleh enzim sitokrom P450 sehingga terbentuk radikal bebas triklorometil (•CCl3) dan triklorometil peroksi (•CCl3O2) yang bersifat lebih reaktif (Makni, dkk., 2011). Radikal bebas triklorometil berikatan secara kovalen dengan lemak mikrosomal dan protein, dan akan bereaksi secara langsung dengan membran fosfolipid dan kolesterol yang bersifat toksik. Hasil lain dari reaksi ini adalah radikal lipid yang akan mengaktifkan senyawa oksigen reaktif selanjutnya mengakibatkan peroksidasi lipid (Timbrell, 2008). Albumin merupakan protein terbanyak pada plasma (Supriyanta, 2012). Albumin memegang peranan penting dalam metabolisme dan transportasi obat-


29

obatan (Hutchison et al., 1998). Apabila kadar albumin berada dibawah normal, maka fraksi obat bebas banyak sehingga akan menimbulkan pengaruh yang tidak diinginkan. Adanya induksi senyawa kimia, seperti karbon tetraklorida akan menyebabkan penurunan fungsi hati dalam hal sintesis protein sehingga menyebabkan menurunnya protein uptake. Adanya antioksidan yang berasal dari dekok kulit Persea americana Mill. dapat melindungi jaringan dari efek radikal bebas, reactive oxygen species (ROS), dan peroksidasi lipid dan memperlambat proses perjalanan penyakit kronis (Makni, dkk., 2011). Dengan penangkapan radikal bebas diharapkan dapat mencegah terjadinya kerusakan pada hepar. Persea americana Mill. diketahui memiliki aktivitas sebagai antioksidan yang memiliki kemampuan untuk menangkap radikal bebas (Malangngi, dkk., 2012). Persea americana Mill. juga memiliki kandungan flavonoid yang larut air dan dapat menangkap radikal bebas (Arukwe, et al., 2012). Kulit buah Persea americana Mill. memiliki kandungan flavonoid yang hampir sama dengan biji Persea americana Mill. (Vinha et al., 2013). Mengacu pada penelitian mengenai efek hepatoprotektif jangka pendek pemberian dekok biji Persea americana Mill. terhadap kadar ALT-AST (Rosari, 2013), maka pada penelitian ini digunakan dosis dekok yang mengacu pada penelitian tersebut sehingga diharapkan dapat menurunkan kadar ALT dan dapat meningkatkan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida pada penelitian ini.


30

L. Hipotesis Pemberian jangka pendek dekok kulit buah Persea americana Mill. pada tikus terinduksi karbon tetraklorida memiliki pengaruh terhadap peningkatan kadar serum albumin.


BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah.

B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional Variabel- variabel yang digunakan adalah sebagai berikut : 1. Variabel utama a. Variabel bebas Variabel bebas dalam penelitian ini adalah variasi dosis pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill. b. Variabel tergantung Variabel tergantung penelitian ini adalah kadar serum albumin 2. Variabel pengacau a. Variabel pengacau terkendali Variabel pengacau terkendali dalam penelitian ini adalah kondisi hewan uji, yaitu tikus jantan galur Wistar dengan berat badan 150-250 g dan umur 2-3 bulan. Cara pemberian senyawa pada tikus dilakukan secara peroral untuk dekok kulit buah Persea americana Mill dan injeksi intraperitonial untuk karbon tetraklorida. Bahan uji yang digunakan berupa kulit buah Persea americana Mill. yang diperoleh dari depot es di Yogyakarta. 31


32

b. Variabel pengacau tak terkendali Kondisi patologis tikus jantan galur Wistar yang digunakan sebagai hewan uji. 3.

Definisi Operasional

a. Dekok Persea americana Mill. Dekok Persea americana Mill. diperoleh dengan menimbang 8,0 g serbuk kering kulit buah Persea americana Mill. dan ditambahkan sebanyak 16,0 mL aquadest untuk membasahi serbuk kemudian ditambahkan aquades hingga 100,0 ml setelah itu dipanaskan pada suhu 900C selama 30 menit sehingga diperoleh dekok kulit buah Persea americana Mill. b.

Peningkatan kadar albumin Peningkatan kadar albumin adalah kemampuan dekok kulit buah Persea americana Mill. meningkatkan kadar albumin tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tertraklorida setelah pemberian Persea americana Mill. secara jangka pendek.

c.

Jangka pendek Yang dimaksud penelitian jangka pendek adalah penelitian tersebut dilakukan dengan memberikan dekok kulit buah Persea americana Mill. kepada hewan uji 6 jam sebelum pemberian dilakukan induksi karbon tetraklorida.


33

d. Kulit buah Persea americana Mill. Kulit buah Persea americana Mill. yang digunakan pada penelitian ini adalah kulit buah yang memiliki kriteria matang, kulitnya berwarna hijau, serta tidak busuk. C. Bahan Penelitian

1. Bahan utama

a. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus jantan galur Wistar yang berumur 2-3 bulan dengan berat badan 150-250 g yang diperoleh dari Laboratorium Imuno Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

b. Bahan uji yang digunakan adalah kulit buah Persea americana Mill. yang diperoleh dari depot es di Yogyakarta dengan waktu pengambilan sekitar bulan Juni-Juli.

2. Bahan kimia

a. Bahan hepatotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Faramasi Universitas Sanata Dharma

b. Kontrol negatif yang digunakan adalah olive oil (Bertolli®)


34

c. Pelarut untuk dekok digunakan aquadest yang diperoleh dari Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia

Fakultas

Farmasi

Universitas

Sanata

Dharma

Yogyakarta.

d. Pelarut hepatotoksin digunakan olive oil (Bertolli®)

e. Blanko pengukuran kadar albumin menggunakan aquades yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Instrumental Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

D. Alat Penelitian Alat-alat yang digunakan di dalam penelitian ini antara lain oven, mesin penyerbuk, ayakan, panci enamel, termometer, stopwatch, beaker glass, gelas ukur, cawan porselen, penangas air, kain flannel, tabung reaksi, labu ukur, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®), timbangan analitik Mettler Toledo®, sentrifuge Centurion Scientific®, vortex Genie Wilten®, spuit injeksi per oral dan syringe 1 cc Terumo®, pipa kapiler, tabung Eppendorf, Microlab 200 Merck®, moisture balance, dan stopwatch.

E. Tata Cara Penelitian

1. Determinasi buah Persea americana Mill. Determinasi dilakukan dengan mencocokkan buah Persea americana Mill. yang diperoleh dari salah satu depot es yang ada di Yogyakarta dengan mencocokkan buah Persea americana Mill. sesuai dengan buku acuan dari (Agrilink, 2001).


35

2. Pengumpulan bahan uji Bahan uji yang digunakan adalah kulit buah Persea americana Mill. yang matang, kulitnya berwarna hijau, masih segar dan tidak busuk. 3. Pembuatan serbuk kulit buah Persea americana Mill. Kulit buah Persea americana Mill. dicuci bersih dan dipisahkan dari biji dan dagingnya. Setelah itu, kulit dirajang tipis lalu dikeringkan dalam oven pada suhu 500C. Setelah kulit benar-benar kering kulit dihaluskan dan diayak dengan ayakan ukuran 40. 4. Penetapan kadar air pada serbuk kering kulit buah Persea americana Mill. Serbuk kering kulit buah Persea americana Mill. yang sudah diayak, dimasukkan ke dalam alat moisture balance sebanyak ± 5 g kemudian diratakan. Bobot serbuk kering kulit tersebut ditetapkan sebagai bobot sebelum pemanasan (bobot A), setelah itu dipanaskan pada suhu 1050C. Serbuk kering kulit buah Persea americana Mill. yang sudah dipanaskan ditimbang kembali sampai diperoleh bobot yang konstan setelah pemanasan (bobot B). Kemudian dilakukan perhitungan terhadap selisih bobot A terhadap bobot B yang merupakan kadar air serbuk kulit buah Persea americana Mill. 5. Pembuatan dekok serbuk kulit buah Persea americana Mill Serbuk kering kulit buah Persea americana Mill. ditimbang 8,0 g dan ditambahkan 16,0 mL pelarut aquadest untuk membasahi serbuk, kemudian ditambahkan lagi aquadest hingga 100,0 mL, kemudian dipanaskan pada suhu 900C dan dijaga tetap dalam suhu tersebut selama 30 menit. Waktu 30 menit dihitung ketika suhu campuran mencapai 900C. Setelah 30 menit, campuran


36

tersebut diambil dan diperas menggunakan kain flanel kemudian tambahkan air panas secukupnya melalui ampas hingga diperoleh volume dekok kulit Persea americana Mill. yang dikehendaki, yaitu 100,0 mL 6. Pembuatan larutan karbon tetraklorida konsentrasi 50% Menurut Janakat dan Al-Merie, 2002 (cit., Rahmamurti, 2009) larutan karbon tetraklorida dibuat dengan perbandingan karbon tetraklorida : pelarut adalah 1 : 1, sehingga konsentrasi larutan karbon tetraklorida yang digunakan adalah 50%. Pelarut yang digunakan dalam pembuatan larutan ini adalah olive oil. 7. Uji Pendahuluan

a. Penetapan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida

Menurut Janakat dan Merie (cit., Rahmamurti, 2009), dosis karbon tetraklorida yang digunakan untuk menginduksi kerusakan hepar pada tikus jantan galur Wistar adalah 2 mL/kgBB. Dosis ini mampu merusak sel-sel hepar pada tikus jantan yang ditunjukkan melalui penurunan albumin tetapi tidak menimbulkan kematian pada hewan uji.

b. Penetapan waktu pencuplikan darah

Penetapan waktu pencuplikan darah ditentukan melalui orientasi dengan tiga kelompok perlakuan waktu, yaitu pada jam ke–0, 24, dan 48 setelah pemejanan karbon tetraklorida. Setiap kelompok perlakuan terdiri dari 5 hewan


37

uji yang pengambilan darahnya dilakukan melalui pembuluh sinus orbitalis mata. Setelah itu kadar albumin tikus yang telah diinduksi karbon tetraklorida diukur.

c. Penetapan dosis dekok kulit buah Persea americana Mill.

Peringkat dosis didasarkan pada penelitian Rosari (2013) pengobatan yang biasa digunakan pada masyarakat yaitu ± 2 sendok makan (4 g) serbuk kulit buah Persea americana Mill. yang direbus dengan 250 mL air. Maka dosis perlakuan yang digunakan adalah 4 g / 70 kgBB manusia. Konversi dosis tikus (manusia 70 kg ke stikus 200 g) = 0,018. Dosis untuk 200 g tikus = 0,018 x 4 g = 0,72 g/200 g BB = 360 mg/kgBB. Hasil orientasi infusa menunjukkan bahwa konsentrasi maksimal dekok kulit buah Persea americana Mill. yang dapat dibuat adalah 8 g/ 100 mL, dengan asumsi berat badan hewan uji maksimal adalah 200 g, dan volume maksimal pemberian dekok secara p.o = 4 mL. Berdasarkan perhitungan, D x BB

=

C

x

V

D x 200 g

= 8 g/ 100 ml x 4 ml

D

= 1600 mg/kg BB, selanjutnya dosis ini disebut dosis

tinggi perlakuan Untuk mendapatkan dosis tengah perlakuan, terlebih dahulu dihitung faktor kelipatan dari dosis rendah dan dosis tinggi yang sudah diperoleh. Perhitungan faktor kelipatan adalah sebagai berikut :


𝑁−1

�

38

𝑑𝑑𝑑𝑑𝑑 𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡 𝑑𝑑𝑑𝑑𝑑 𝑟𝑟𝑟𝑟𝑟ℎ

N = Jumlah peringkat dosis yang digunakan. Penelitian ini menggunakan 3 peringkat dosis maka n=3, sehingga perhitungannya sebagai berikut :

�

1600 = 2,1 360

Berdasarkan faktor kelipatan yang diperoleh maka dosis tengah dan dosis rendah perlakuan ditentukan sebagai berikut, D = 1600 mg/ kgBB : 2,1 = 762 mg/ kgBB (dosis tengah) D = 762 mg/ kgBB : 2,1 = 363 mg/ kgBB (dosis rendah) 8. Pengelompokkan dan perlakuan hewan uji Hewan uji yang dibutuhkan sebanyak 30 ekor tikus jantan galur Wistar yang dibagi secara acak dalam 6 kelompok sama banyak. a.

Kelompok I (kelompok kontrol hepatotoksin) diberi karbon tertraklorida yang dilarutkan dalam olive oil (1:1) dengan dosis 2 ml/kgBB secara intraperitonial 24 jam sebelum dilakukan pengambilan darah.

b.

Kelompok II (kelompok kontrol negatif) diberi olive oil dosis 2 ml/kgBB secara intraperitonial 24 jam sebelum dilakukan pengambilan darah.

c.

Kelompok III (kelompok kontrol dekok) diberi dekok kulit Persea americana Mill. dosis 1600 mg/kgBB 6 jam sebelum diambil darahnya.


d.

39

Kelompok IV, V, dan VI (kelompok perlakuan) diberi dekok kulit Persea americana Mill. pada tiga tingkatan dosis yaitu 363; 762; dan 1600 mg/kgBB 6 jam sebelum dilakukan pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB. Pada jam ke-24 setelah pemberian karbon tetraklorida, semua kelompok diambil darahnya pada daerah sinus orbitalis mata untuk penetapan kadar albumin.

9. Pembuatan serum Darah diambil melalui sinus orbitalis mata hewan uji dan ditampung dalam tabung eppendrof dan didiamkan selama 15 menit, lalu disentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm, lalu dipisahkan bagian supernatannya. Serum yang telah diperoleh selanjutnya dilakukan pengukuran kadar albumin. 10. Pengukuran kadar albumin Pengukuran kadar serum albumin tikus pada penelitian ini dilakukan di Laboratorium Parahita Yogyakarta. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode Borm Cresol Green (BCG). Prinsip pengukuran kadar albumin dengan metode BCG ini adalah penambahkan serum dengan reagen albumin yang kemudian akan menghasilkan pembentukan komplek warna dan dibaca absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 628 nm.


40

Tabel II. Komposisi dan konsentrasi reagen Albumin Komposisi

Konsentrasi

Bromcresol Green

0,27 mmol/L

TRIS

55 mmol/L

Thimerosal

0,250 g/L

Succinic acid

100 mmol/L

F. Tata Cara Analisis Hasil Data kadar serum albumin dianalisis dengan Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui normalitas data pada masing-masing kelompok perlakuan. Nilai normal suatu data ditunjukkan dengan nilai p>0,05. Apabila hasil analisis statistik Kolmogorov-Smirnov kadar serum albumin menunjukkan distribusi data normal (p>0,05), dilanjutkan dengan analisis One Way Anova dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelompok. Apabila hasil tersebut menunjukkan nilai signifikansi (p>0,05), berarti data tersebut homogen. Kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk mengetahui kebermaknaan perbedaan antar kelompok. Jika diperoleh distribusi data yang tidak normal maka dilakukan

analisis

data

menggunakan

Kruskal-Wallis

untuk

melihat

homogenitasnya, dan dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney untuk melihat kebermaknaan perbedaan antar kelompok.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Penyiapan Bahan 1. Hasil Determinasi Buah Persea americana Mill Pada penelitian ini digunakan serbuk kulit buah Persea americana Mill sebagai bahan uji. Buah Persea americana Mill yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari depot es yang ada di Yogyakarta. Determinasi buah Persea americana Mill ini dilakukan sebelum penelitian untuk membuktikan bahwa bagian dari buah yang digunakan benar-benar berasal dari buah Persea americana Mill, sehingga tidak terjadi kesalahan dalam preparasi bahan yang akan digunakan. Determinasi buah Persea americana Mill dilakukan di Laboratorium Kebun Tanaman Obat, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. Determinasi dilakukan dengan mencocokkan bagian dari buah Persea americana Mill sesuai dengan buku acuan dari (Agrilink, 2001). Hasil determinasi membuktikan bahwa benar buah yang digunakan dalam penelitian adalah Persea americana Mill. 2. Penetapan Kadar Air Serbuk Kulit Buah Persea americana Miill Penetapan kadar air serbuk kulit buah Persea americana Mill bertujuan untuk mengetahui kadar air dalam serbuk yang selanjutnya dinyatakan dalam persen dan untuk memenuhi salah satu persyaratan serbuk yang baik, yaitu kurang dari 10% (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995). Penetapan kadar air serbuk kulit buah Persea americana Mill dilakukan dengan metode susut bobot pengeringan. Serbuk dipanaskan pada suhu 105 ˚C

41


42

selama 15 menit. Pemanasan dilakukan pada hingga suhu 105℃ agar kandungan air yang ada dalam serbuk simplisia menguap dengan estimasi waktu 15 menit dianggap bahwa kadar air dalam serbuk kulit buah Persea americana Mill. memenuhi persyaratan parameter standar. Hasil perhitungan menunjukkan serbuk kulit buah Persea americana Mill memiliki kadar air sebesar 7,10 % (lampiran 5). Hal ini menunjukkan serbuk kulit buah Persea americana Mill telah memenuhi persyaratan serbuk yang telah ditetapkan. B. Uji Pendahuluan 1. Penetapan Dosis Hepatotoksin Karbon Tetraklorida Pada penelitian ini dilakukan penetapan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida untuk mengetahui pada dosis berapa karbon tetraklorida tersebut dapat menyebabkan kerusakan hepar. Parameter yang dipakai adalah peningkatan aktivitas ALT sebesar 3 kali lipat yang adapun peningkatan aktivitas ALT dapat disertai penurunan kadar albumin (hipoalbumenia) dimana pada kondisi ini terjadi penurunan kadar albumin dibawah nilai normal (Ahmed, Alam, Varshney, and Khan, 2002). Pemejanan karbon tetraklorida dapat menyebabkan peningkatan aktivitas ALT

sebesar 100% yang disertai penurunan kadar albumin sebesar 28,5%

terhadap kontrol (Ahmed, dkk., 2002). Peningkatan aktivitas ALT akibat induksi karbon tetraklorida diikuti dengan peningkatan bilirubin pada hepar (Yilmaz, Ozbek, Citoglu, Ugras, Bayram, Erdogan, 2006). Berdasarkan penelitian Panjaitan, Handaryani, Chairul, Masriani, Zaikiah, Manalu, (2007) pemberian karbon tetraklorida dapat meningkatkan ALT disertai dengan penurunan protein


43

total, dimana albumin merupakan bagian dari protein total yang ada di hepar. Menurut Janakat dan Merie (cit., Rahmamurti, 2009) dosis karbon tetraklorida sebesar 2 mL/kgBB yang diberikan secara per oral dapat menyebabkan kenaikan aktivitas ALT. Berdasarkan keempat acuan yang telah disebutkan dapat dijadikan sebagai dasar dosis karbon tetraklorida dapat menyebabkan toksik pada hepar, sehingga pada penelitian ini digunakan dosis toksik karbon tetraklorida sebesar 2 mL/kgBB. Pembuatan larutan hepatotoksin karbon tetraklorida dibuat pada konsentrasi 50% dengan perbandingan karbon tetraklorida : olive oil adalah 1:1. Pada dosis 2 mL/kg BB sudah dapat menimbulkan efek hepatotoksik yang ditandai dengan menurunnya kadar albumin. 2. Penetapan waktu pencuplikan darah Tujuan dilakukannya penetapan waktu pencuplikan darah adalah untuk mengetahui selang waktu dimana karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB dapat memberikan efek hepatotoksik maksimal yang ditandai dengan dengan peningkatan aktivitas ALT sebesar 3 kali lipat yang disertai dengan penurunan kadar albumin. Pengambilan cuplikan darah dilakukan pada jam ke-24 setelah hepatotoksin diinjeksikan. Hal tersebut disebabkan karena berdasarkan hasil orientasi pada jam ke-24 kadar karbon tetraklorida dalam darah mencapai puncaknya sehingga menyebabkan kerusakan hepar yang ditandai dengan peningkatan aktivitas enzim ALT. Hal tersebut dapat dilihat pada tabel III dan gambar 5.


44

Tabel III. Purata aktivitas ALT tikus pemberian karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB Selang Waktu (Jam) 0 24 48

Purata aktivitas ALT ± SE (U/I) 72,3 ± 5,8

217,0 ± 2,7 90, 3 ± 3,7

Data aktivitas ALT diatas dianalisis dengan uji Kolmogorov Smirnov dan diperoleh signifikansi untuk masing-masing kelompok yaitu 0,999 (p>0,05); 0,944 (p>0,05); 1,000 (p>0,05). Hal ini menunjukkan bahwa data yang diperoleh memiliki distribusi normal, sehingga dilanjutkan dengan uji Scheffe. Hasil uji Scheffe dapat dilihat pada tabel III.

Gambar 5. Diagram batang rata-rata kadar ALT tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2ml/kgBB.


45

Tabel IV. Hasil uji Scheffe aktivitas ALT setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mg/kgBB Perlakuan

0 jam

0 jam 24 jam

BB

48 jam

BTB

24 jam

48 jam

BB

BTB BB

BB

Keterangan : BB = berbeda bermakna (p < 0,05) BTB = Berbeda tidak bermakna (p> 0,05)

Pada tabel III terlihat aktivitas ALT tertinggi terjadi pada jam ke-24, yaitu 217,0± 2,7 U/I. Hal ini menunjukkan terjadinya peningkatan aktivitas ALT yang signifikan dan berbeda bermakna dengan aktivitas ALT pada jam ke-0 dan ke-24

(Tabel IV). Pengamatan yang dilakukan pada jam ke-24 setelah diinduksi dengan karbon tetraklorida menunjukkan telah terjadi peningkatan aktivitas ALT. Pada jam ke-0 dan jam ke-48 terlihat adanya ketidakbermaknaan yang menunjukkan perbedaan tidak signifikan yang berarti dari penelitian tersebut menunjukkan hasil yang sama antara aktivitas ALT pada tikus sebelum diinjeksi karbon tetraklorida dengan aktivitas ALT pada tikus 48 jam setelah diinjeksi karbon tetraklorida telah kembali normal setara dengan aktivitas ALT tikus pada jam ke-0 (Gambar 5). Hal ini disebabkan karena pada jam ke-48 CCl4 telah di ekskresi keluar tubuh lewat urin, air liur, keringat, dan feses. Purata aktivitas ALT pada jam ke-0 sebesar 72,3 ± 5,8 U/I dan purata aktivitas ALT pada jam ke 48 sebesar 90,3 ± 3,7 U/I. Dari


46

hasil orientasi tersebut, maka pencuplikan darah pada penelitian ini dilakukan pada jam ke-24 setelah injeksi karbon tetraklorida. 3. Penetapan dosis dekok kulit buah Persea americana Mill Pada penelitian ini dilakukan penetapan dosis dekok kulit buah Persea americana Mill. dalam tiga tingkatan dosis yaitu dosis rendah sebesar 363 mg/kgBB, dosis sedang sebesar 762 mg/kgBB, dan dosis tertinggi sebesar 1600 mg/kgBB. Peringkat dosis tersebut mengacu pada penelitian Rosari (2013) dimana penggunaan dosis tersebut didasarkan pada pengobatan yang biasa digunakan pada masyarakat yaitu ± 2 sendok makan (4 g) serbuk kulit buah

Persea americana Mill. yang direbus dengan 250 ml air. Penetapan peringkat dosis tersebut dilakukan untuk mengetahui adanya kekerabatan antara dosis sediaan dekok kulit buah Persea americana Mill. yang diberikan pada tikus terinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB yang diukur melalui kenaikan kadar albumin. C. Hasil Uji Hepatoprotektif Jangka Pendek Dekok Kulit Buah Persea americana Mill. pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui adanya pengaruh pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill. praperlakuan jangka pendek dengan indikator terjadinya peningkatan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Jangka pendek diartikan bahwa pemberian hepatotoksin karbon tetraklorida dilakukan dalam selang waktu 1 hingga 6 jam setelah pemberian sediaan dekok kulit buah Persea americana Mill. Peneliti membatasi waktu yang digunakan pada penelitian ini yaitu 6 jam setelah pemberian sediaan dekok kulit buah Persea americana Mill. Hal ini mengacu pada penelitian Rosari (2013)


47

dimana telah dilakukan optimasi pada jam ke 1, 4, dan 6, dimana pada hasil penelitian tersebut menunjukkan pada jam ke 6 terdapat perubahan yang signifikan

terhadap

aktivitas ALT

sehingga

pada

penelitian dilakukan

pengambilan darah setelah 6 jam pemberian dekok kulit Persea americana Mill. Pada penelitian ini digunakan tiga variasi dosis sediaan dekok kulit buah Persea americana Mill. untuk melihat adanya kekerabatan antara dosis dengan peningkatan kadar albumin. Dosis yang digunakan pada penelitian ini adalah dosis rendah sebesar 363 mg/kgBB, dosis sedang sebesar 762 mg/kgBB, dan dosis tertinggi sebesar 1600 mg/kgBB. Pemilihan dosis ini berdasarkan pada penggunaan sediaan dekok di masyarakat. Pada penelitian jangka pendek dekok kulit buah Persea americana Mill. ini, dilakukan pencuplikan darah pada jam ke24 setelah induksi karbon tetraklorida. Data kadar albumin dianalisis dengan menggunakan uji KolmogorovSmirnov untuk mengetahui distribusi data. Hasil uji menunjukkan sebaran data normal sehingga analisa dilanjutkan dengan menggunakan uji Scheffe untuk mengetahui perbedaan kebermaknaan antar kelompok (Tabel VI). Kadar albumin disajikan dalam bentuk purata ± SE yang disajikan pada tabel VI dan gambar 6.


48

Tabel V. Purata kadar serum albumin tikus pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Kelompok Purata kadar serum albumin±SE (mg/dL) Kontrol CCl4

2,91 ± 0,07

Kontrol Olive Oil

3,62 ± 0,06

Kontrol Sediaan

3,57 ± 0,01

Dosis dekok 363 mg/kgBB + CCl4

3,45 ± 0,03


3,31 ± 0,08


3,52 ± 0,12

Data kadar albumin diatas dianalisis dengan uji Kolmogorov Smirnov dan diperoleh signifikansi untuk masing-masing kelompok yaitu 0,99 (p>0,05); 0,09 (p>0,05); 0,95 (p>0,05); 0,74 (p>0,05); 0,80 (p>0,05); dan 1,00 (p>0,05). Hal ini menunjukkan bahwa data yang diperoleh memiliki distribusi normal, sehingga dilanjutkan dengan uji Scheffe. Hasil uji Scheffe dapat dilihat pada Tabel VI.

Gambar 6. Diagram batang rata-rata kadar albumin tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB dan dekok pada dosis 363, 762, dan 1600 mg/kg BB


49

Tabel VI. Hasil uji Scheffe kadar albumin setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB dan dekok pada dosis 363, 762, dan 1600 mg/kg BB Kontrol Dosis Dosis Dosis Sediaan dekok dekok dekok dekok 363 762 1600 dosis mg/kg mg/kg mg/kg Kontrol Kontrol 1600 BB+ BB+ BB+ Perlakuan CCL4 Oive Oil mg/kgBB CCl4 CCl4 CCl4 Kontrol CCL4 BB BB BB BB BB Kontrol Olive Oil BB BTB BTB BTB BTB Kontrol Sediaan dekok dosis 1600 mg/kgBB BB BTB BTB BTB BTB Dosis dekok 363mg/kg BB + CCL4 BB BTB BTB BTB BTB Dosis dekok 762 mg/kg BB + CCL4 BB BTB BTB BTB BTB Dosis dekok 1600 mg/kg BB + CCL4 BB BTB BTB BTB BTB Keterangan : B = Berbeda bermakna ( p ≤ 0,05) BTB = Berbeda tidak bermakna (p > 0,05) 1. Kontrol negative olive oil dosis 2 mL/kg BB

Kontrol olive oil (Kelompok II) dibuat dengan tujuan memastikan bahwa olive oil sebagai pelarut dari karbon tetraklorida tidak memiliki potensi menimbulkan efek toksik sehingga tidak mengaburkan hasil yang diperoleh. Pemilihan dosis olive oil sebesar 2 mL/kgBB disesuaikan dengan dosis pemberian karbon tetraklorida sehingga benar-benar dapat dipastikan bahwa peningkatan


50

kadar albumin tikus akibat pemberian karbon tetraklorida dan bukan akibat pemberian olive oil. Kadar albumin kontrol negatif olive oil yaitu 3, 62 ± 0,06 mg/dL. Berdasarkan penelitian Rahmamurti (2009) menunjukkan bahwa kontrol negatif (olive oil) tidak meningkatkan aktivitas ALT-AST. Hal ini menunjukkan bahwa olive oil tidak mempengaruhi hepar. Pada penelitian ini menunjukkan bahwa olive oil sebagai pelarut karbon tetraklorida tidak meningkatkan kadar albumin. Kelompok kontrol negatif olive oil nantinya akan dipakai sebagai dasar nilai kadar albumin normal pada penelitian ini. 2. Kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB

Kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida dibuat dengan tujuan mengetahui pengaruh pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kg BB (Kelompok 1) terhadap sel hepar tikus. Kontrol karbon tetraklorida juga digunakan sebagai acuan menganalisis adanya pengaruh pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill. terhadap tikus terinduksi karbon tetraklorida. Menurut Janakat dan Merie (cit., Rahmamurti, 2009) uji dilakukan pada penelitian ini dengan memberikan karbon tetraklorida : olive oil (1:1) dengan dosis 2 mL/kgBB secara i.p. Dua puluh empat jam setelah penyuntikan, dilakukan pengambilan darah untuk dilakukan pengukuran kadar albumin. Hasil pengukuran kadar albumin pada kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB yaitu 2,91 ± 0,07 mg/dL. Secara statistik, apabila dibandingkan dengan kontrol negatif olive oil dosis 2 mL/kgBB (Kelompok II) menunjukkan perbedaan bermakna antara kedua


51

kelompok tersebut (Tabel VI). Hal ini menunjukkan karbon tetraklorida dapat menurunkan kadar albumin pada tikus yang berdampak pada terjadinya kerusakan hepar. 3. Kontrol sediaan dekok kulit buah Persea americana Mill dosis 1600mg/kgBB Tujuan pembuatan kontrol sediaan dekok kulit buah Persea americana Mill. (kelompok III) ini adalah untuk melihat pengaruh dekok kulit buah Persea americana Mill. dosis tertinggi. Dosis dekok yang diberikan pada tikus perlakuan yaitu 1600 mg/kgBB yang merupakan dosis tertinggi yang digunakan dalam penelitian ini. Uji dilakukan dengan memberikan dekok kulit buah Persea americana Mill. pada tikus secara oral, dan 6 jam kemudian setelah pemberian sediaan dekok tersebut dilakukan pengambilan cuplikan darah kemudian dilakukan pengukuran kadar albumin. Pada tabel V kontrol sediaan dekok kulit buah Persea americana Mill. dosis 1600 mg/kgBB memberikan nilai kadar albumin 3,57

± 0,01 mg/dL yang

memiliki perbedaan tidak bermakna (p>0,05) terhadap kontrol negatif olive oil dengan nilai kadar albumin 3,62 ± 0,06 mg/dL. Berdasarkan hasil ini dapat dinyatakan bahwa pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill. dosis 1600 mg/kgBB selama enam jam tidak memberikan pengaruh terhadap kadar albumin. 4. Kelompok perlakuan sediaan dekok jangka pendek kulit buah Persea americana Mill. dosis 363; 762; dan 1600 mg/kgBB Pada penelitian ini dilakukan pengujian jangka pendek yaitu dimana dalam jangka waktu 6 jam setelah pemberian sediaan dekok kulit buah Persea


52

americana Mill. secara oral dengan tiga tingkatan dosis yaitu dosis rendah (363 mg/kgBB, dosis sedang (762 mg/kgBB), dosis tinggi (1600 mg/kgBB), dilakukan pemejanan

hepatotoksin

karbon

tetraklorida

dosis

2

mL/kgBB

secara

intraperitonial pada tikus. Hasil purata kadar albumin pada kelompok perlakuan dosis I (363 mg/kgBB) bila dibandingkan dengan kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida pada tabel V adalah 3,45 ±0,03 mg/dL dan 2,91 ± 0,07 mg/dL.

Analisis secara statistik dekok dosis I (363 mg/kgBB) dibandingkan dengan kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida menunjukkan hasil berbeda bermakna (p<0,05) (Tabel VI). Hal ini menunjukkan bahwa dekok kulit buah Persea americana Mill. dosis I (363 mg/kgBB) mempunyai pengaruh terhadap peningkatan kadar albumin pada tikus setelah diinduksi karbon tertraklorida. Hasil perbandingan sediaan dekok dosis I (363 mg/kgBB) dibandingkan dengan kelompok kontrol olive oil menunjukkan hasil berbeda tidak bermakna (p<0,05) (Tabel VI). Hal tersebut menunjukkan adanya kenaikan kadar albumin sudah setara dengan keadaan normal olive oil. Demikian juga halnya dengan dekok kulit buah Persea americana Mill. pada dosis II (762 mg/kgBB) dibandingkan dengan kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida menunjukkan hasil berbeda bermakna (p<0,05) (Tabel VI). Hal ini menunjukkan bahwa dekok kulit buah Persea americana Mill. dosis II (762 mg/kgBB) mempunyai pengaruh terhadap peningkatan kadar albumin pada tikus setelah diinduksi karbon tertraklorida. Hasil perbandingan sediaan dekok dosis II (762 mg/kgBB) dibandingkan dengan kelompok kontrol olive oil


53

menunjukkan hasil berbeda tidak bermakna (p<0,05) (Tabel VI). Hal tersebut menunjukkan adanya kenaikan kadar albumin sudah setara dengan keadaan normal olive oil. Pada dosis III (1600 mg/kgBB) dibandingkan dengan kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida menunjukkan hasil berbeda bermakna (p<0,05) (Tabel VI). Hal ini menunjukkan bahwa dekok kulit buah Persea americana Mill. dosis III (1600 mg/kgBB) mempunyai pengaruh terhadap peningkatan kadar albumin pada tikus setelah diinduksi karbon tertraklorida. Hasil perbandingan sediaan dekok dosis III (1600 mg/kgBB) dibandingkan dengan kelompok kontrol olive oil menunjukkan hasil berbeda tidak bermakna (p<0,05) (Tabel VI). Hal tersebut menunjukkan adanya kenaikan kadar albumin sudah setara dengan keadaan normal olive oil. Berdasarkan hasil analisis statistik tersebut dosis I (363 mg/kgBB) merupakan dosis terkecil yang bisa memberikan pengaruh terhadap peningkatan kadar albumin tikus terinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB karena bila dibandingkan dengan hasil kontrol karbon tetraklorida dan olive oil, pada dosis tersebut sudah bisa memberikan pengaruh terhadap kadar albumin. Analisis secara statistik antara dosis I (363 mg/kgBB) dengan dosis II (762 mg/kgBB) menunjukkan hasil ketidakbermaknaan (p > 0,005) (Tabel VI). Hal ini menunjukkan antara dosis I (363 mg/kgBB) dengan dosis II (762 mg/kgBB) ada perbedaan tidak signifikan. Demikian juga halnya analisis secara statistik antara dosis I (363 mg/kgBB) dengan dosis III (1600 mg/kgBB) menunjukkan hasil ketidakbermaknaan (p > 0,005) (Tabel VI). Hal ini menunjukkan antara dosis I


54

(363 mg/kgBB) dengan dosis III (1600 mg/kgBB) ada perbedaan tidak signifikan. Analisis statistik antara dosis II (762 mg/kgBB) dengan dosis III (1600 mg/kgBB) menunjukkan hasil ketidakbermaknaan (p > 0,005) (Tabel VI). Hal ini menunjukkan antara dosis II (762 mg/kgBB) dengan dosis III (1600 mg/kgBB) ada perbedaan tidak signifikan. Pada ketiga dosis tersebut menunjukkan hasil ketidakbermaknaan satu sama lain yang berarti adanya perbedaan tidak signifikan antara dosis I (363 mg/kgBB), dosis II (762 mg/kgBB), dan dosis III (1600 mg/kgBB), sehingga hal ini menunjukkan tidak adanya kekerabatan antara dosis pemberian sediaan dekok kulit buah Persea americana Mill dengan peningkatan kadar albumin terhadap tikus terinduksi karbon tetraklorida. D. Rangkuman Pembahasan Penelitian pemberian jangka pendek dekok kulit buah Persea americana Mill dengan tiga tingkatan dosis yaitu dosis rendah (363 mg/kgBB), dosis sedang (762 mg/kgBB), dan dosis tinggi (1600 mg/kgBB) mampu meningkatkan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB. Hal ini menunjukkan adanya pengaruh pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill terhadap peningkatan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Hasil pemeriksaan kadar albumin pada tikus kelompok kontrol sediaan dekok kulit buah Persea americana Mill dosis 1600 mg/kgBB menunjukkan hasil berbeda tidak bermakna bila dibandingkan dengan kelompok kontrol olive oil. Hal ini dapat diartikan bahwa dekok kulit buah Persea americana Mill tidak memberikan pengaruh terhadap kadar albumin.


55

Purata kadar albumin secara berturut-turut pada dosis I (363 mg/kgBB), dosis II (762 mg/kgBB), dan dosis III (1600 mg/kgBB) yaitu 3,45 ± 0.03; 3,31 ± 0,08; 3,57 ± 0,01 mg/dL. Hasil uji Scheffe menunjukkan ketiga dosis memiliki perbedaan tidak signifikan satu sama lain. Hal ini menunjukkan tidak adanya kekerabatan antara dosis dekok kulit buah Persea americana Mill dengan kadar albumin pada tikus. Mekanisme kerja antioksidan dalam melindungi sel hepar ditunjukkan dengan peningkatan kadar albumin pada tikus kelompok perlakuan dekok kulit buah Persea americana Mill dimana peningkatan kadar albumin tersebut setara dengan kadar albumin normal pada tikus kelompok kontrol olive oil yaitu penangkapan radikal bebas triklorometil menjadi produk non toksik. Peningkatan kadar albumin tersebut kemungkinan berpengaruh terhadap kadar bilirubin yang ada di hepar karena albumin merupakan suatu protein yang berfungsi untuk mengikat bilirubin. Apabila kadar albumin pada hepar mengalami penurunan, maka jumlah bilirubin yang diikat akan lebih sedikit sehingga menyebabkan terjadi penumpukan bilirubin pada hepar, sehingga sebagai penegasan hasil perlu dilakukan uji toksisitas untuk mengetahui efek hepatotoksik karbon tetraklorida dengan parameter pengujian kadar bilirubin. Dimungkinkan sediaan dekok kulit buah Persea americana Mill juga dapat menurunkan kadar bilirubin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Untuk mengetahui kondisi fisiologis hepar akibat induksi karbon tetraklorida, maka penting untuk dilakukan pemeriksaan histopatologi hepar.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan Berdasarkan hasil yang diperoleh dan analisis statistik yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan: 1. Pemberian dekok kulit buah Persea americana Mill pada tiga tingkatan dosis tersebut yaitu dosis rendah (363 mg/kgBB), dosis sedang (762 mg/kgBB), dan dosis tinggi (1600 mg/kgBB) mampu memberikan pengaruh terhadap peningkatan kadar albumin pada tikus terinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB dengan hasil purata kadar albumin 3,45 ± 0.03; 3,31 ± 0,08; 3,57 ± 0,01 mg/dL. 2. Tidak adanya kekerabatan antara dosis dengan peningkatan kadar albumin. Hal tersebut dapat dilihat dari hasil uji Scheffe yang menunjukkan ada perbedaan tidak signifikan antara dosis I (363 mg/kgBB), dosis II (762 mg/kgBB), dan dosis III (1600 mg/kgBB). B. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai : 1.

Perlu dilakukan pengujian pendukung seperti pemeriksaan kadar bilirubin.

2.

Gambaran histologis hepar hewan uji akibat pemberian karbon tetraklorida untuk mengetahui kerusakan struktural yang terjadi.

56


57

DAFTAR PUSTAKA

Agrilink, 2001, Suplement to Avocado Kit, Queensland Horticulture Institute, Department of Primary Industry , Queensland Alhassan, A.J., Sule, M.S., Atiku, M.K., Wudil, A.M., Abubakar, H., dan Mohammed, S.A., 2012, Effect of Aqueous Avocado Pear (Persea americana) Seed Extract on Alloxan Induced Diabetes Rats, Greener Journal of Medical Sciences, Vol. 2 (1), pp. 005-011. Anggraeni., 2006, Pengaruh Pemberian Infusa Biji Alpukat (P.americana.) Terhadap Kadar Glukosa Darah Tikus Wistar Yang Diberi Beban Glukosa, Skripsi, Universitas Diponegoro, Semarang, pp. 35-40. Armansyah, dkk., 2010, Aktivitas Hepatoprotektif Ekstrak Etanol Daun KucingKucingan (Acalypha indica L.) Pada Tikus Putih (Rattus Novergicus) Yang Diinduksi Parasetamol, Jurnal Ilmiah Ilmu Peternakan, (6), p.243. Arukwe, U., Amadi, B., Duru, M., Agomuo,E., Adindu, E., Odika, P., Lele,K.C., Egejuru, L., Anudike,J., 2012, Chemical Composition of Persea americana Leaf, Fruit and Seed, IJRRAS 11(2), p. 347. Bangun, R., 2008, Hubungan Kadar Albumin Serum dan Outcome Fungsional Penderita Stroke Iskemik dengan Diabetes, Jurnal Penelitian, Bagian Ilmu Penyakit Syaraf FK USU/RSUP H.Adam Malik, Medan, pp. 8-12 Bruckner, J.V., dan Warren, O.A., 2001, Toxic Effect of Solvent and Vapors, Mc Graw Hill, New York, p. 887. Cotran R.S., 1995, Buku Ajar Patologi I, Edisi 4, Jakarta, EGC, p.8 – 9. Chandrasuma, P., dan Taylor, C.R.., 1995, Concise Pathology, 2nd edition, FRC Path Prentice Hall Internasional Inc., USA, pp. 621-625 Donatus, I.A., 1992, Fitofarmaka Penyakit Hati, Kumpulan Naskah Lengkap Simposium Nasional Hepatitis, Jakarta, p. 23 Donatus, I.A., 2001, Toksikologi Dasar, Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Universitas Gajah Mada, Yogyakarta, p. 121. Departement of Health and Human Services, 2011, National Toxicology Program, Public Health Statement: Carbon Tetracloride, Edisi 12, http://ntp.niehs.nih.gov/go/roc12, diakses tanggal 15 Juli 2014


58

Ding, H., Young W.C., A. Douglas K., Steven M.D., 2007, Chemopreventive Characteristics of Avocado Fruit, Seminar in Cancer Biology, 17(2007), pp.386-394. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi V, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, pp.46 Fontana, R.J., 2014, Reviews In Basic and Clinical Gastroenterology, Journal of Gastroenterology, Vol 2, (146), pp. 914-928 Forrest, E., 2006, Hepatic Disorders, Edisi Kedua, Pharmaceutical Press, London, pp. 193, 201,202. Ganong, W.F., dan McPhee, S.J., 2011, Patofisiologi Penyakit: Pengantar Menuju Kedokteran Klinis, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 421-422. Guyton dan Hall., 2006, Buku Ajar Fisiologi Kedokteran, Edisi 11, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 902-903, 904-906. Greguz, E., dan Klaaseen, C.D., 2001, Mechanism of Toxicity, in Klaaseen, C.D., Cassarett dan Doull’s Toxicology:The Basic Science Poisons, Edisi 6, Mc Graw Hill, New York, pp.57-64. Goldfrank, L.R., Neal E.F., Neal A.L., Mary A.H., Robert S.H., Lewis S.N., 2002, Toxicologic Emergencies, 7th Edition, Vol. 1, McGraw-Hill Companies, New York, pp. 211-212, 354. McCance K.L and Grey T.G., 2006, Altered Celular and Tisue Biology, 5th Edition, Elsevier Mosby, St.Louis, pp 52 – 57. Harborne J.B., 1987, Metode Fitokimia, Bandung, Institut Teknologi Bandung, pp 95-97. Horne, M.M., and Swearingen, P.L., 2000, Fluid, Electrolyte, and Acid-Base Balance, diterjemahkan oleh Dewi, I. N., dan Ester, M., hal. 46, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta Hippeli, S., Elstner, E.F., 1999, Mechanism of Carbon Tetrachloride-Induced Hepatotoxicity, hepatocellular Damage by Reactive Carbon Tetrachloride Metabolites, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles /PMC2933147/, diakses tanggal 17 Juli 2014 Hutchison A.S, Reilly D.S, and Mac A.C., 1988, Albumin Excretion Rate, Albumin Concentration, and Albumin Creatinine Ratio Compare for Screening Diabetics for Slight Albuminuria, Journal of Clinical Chemistry, vol (34), pp. 10-14


59

Jerz, R., and Maria D.L., 2007, Phytochemical Analysis of Avocado Seed, http://www.cuvillier.de/flycms/de/html/30/UickI3zKPS,2cU0=/Buchdetails. html, diakses tanggal 17 Juli 2014 Kemal, 2001, Alpukat/ Avokad, http://www.warintek.ristek.go.id, diakses tanggal 2 Juli 2014 Klassen,C.D. and Watkins, J.B., 2003, Cassaret and Doull’s Toxicology “The Basic Science of Piosons, Fifth Edition, The Mc Graww-Hill Companies,Inc. United States of America, pp 132-137. Konsinska, A., Magdalena K., Isabel E., Teresa H., Begona B., and Gary A.D., 2012, Phenolic Compound Profiles and Antioxidant Capacity of Persea americana Mill. Peels and Seeds of Two Varieties, Journal of Agricultural and Food Chemistry, pp. 4613-4619. Kumar, 2009, Dasar Patologi Penyakit, Penerbit EGC, Jakarta, hal. 902-938. Kumar, V., Abbas, A.K., Fausto, N., dan Mitvhell, R.N., 2007, Robbins&Cartan Basic Pathology, Edisi 7, Philadelpia, USA, p. 900. Dabas, D., Shegog R.M., Ziegler G.R., and Lambert J.D., 2013, Avocado (Persea americana) Seed As A Source Of Bioactive Phytochemicals, Current Pharmaceutical Desaign, 19(34), pp. 6133-6135. Leite, J.J.G., Erika H.S.B ., Rossana A.C., Raimundo S.N.B, Jose J.C.S., Lusiana M.B., Selene M.D.M, and Marcos F.G.R., 2009,Chemical Composition, Toxicity, and Larvacidal and Antifungal Activities of Persea americana (Avocado) Seed Extracts, Revista da Sociedade Brasileira de Medicana Tropical 42(2), pp.110-113. Lim, T.K., 2012, Edible Medical and Non-Medical Plants, Books 3, Spingers Dordrecht Heidelbergh, London, New York, pp.78-100. Linda A., et al., 2005, Herbal Medicines, Pharmaceutical Press, pp. 205-207. Lu, F. C., 1995, Toksikologi Dasar: Asas, Organ Sasaran, dan Penilaian Resiko, Edisi kedua, UI Press, Jakarta, pp. 208-212. Makni, M., Chtourou, Y., Garoui, EM., Boudawara, Fetoui, H., 2011, Carbon Tetrachloride-Induced Nephrotoxicity and DNA damage in rats: Protective role of vanilin,Human and Experimental Toxicology, pp. 1-2. McPhee, S.J., 2010, Patofisiologi Penyakit, Pengantar Fungsi Kedokteran Klinis, Penerbit EGC, Jakarta, pp. 419-461.


60

Malangngi, L., Meiske, S., dan Jessy, J., 2012, Penentuan Kandungan Tanin dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat (Persea americana Mill), Jurnal MIPA UNSRAT , 1 (1) 5-10. Mercer University School of Medicine, 2012, Hepatic Pathology, http://library.med.utah.edu/WebPath/webpath.html, diakses tanggal 15 Juli 2014. Nasir A., Abubakar G.M., Shehu A.R., Aliyu U., dan Toge K.B., 2013, Hepatoprotective Effect of the Aqueous Leaf Extract of Andrographis paniculata Nees Against Carbon Tetrachloride – Induced Hepatotoxicity in Rats, Journal of Natural Produc, 21(1), pp.45-54 Nirmala M., Girija K., Lakshman K., dan Divya, 2012, Hepatoprotective activity of Musa paradisiaca on experimental animal models, Journal of Tropical Biomedicine, (11), 11-15. Nugraha, A. W., dan Hendra, P., 2011, Pengaruh Pemberian Secara Jangka pendek Infusa Macaranga tanarius L. Terhadap Kadar ALT Tikus Jantan Terinduksi Parasetamol, Workshop & Seminar Nasional, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Nwaoguikpe, R. N., and Braide, W., 2011, The Effect of Aqueous Seed Extract of Persea americana (Avocado pear) on Serum Lipid and Cholesterol Levels in Rabbits, African Journal of Pharmacy and Pharmacology Research, Vol. 1(2), pp. 023-029 Oehha, 2000, Chronic Toxicity Summary Carbon Tetrachloride, http://www.oehha.ca.gov/air/chronic_rels/pdf/56235.pdf, diakses tanggal 17 Juli 2014 Page. D.S., 1997, Prinsip Prinsip Biokimia, Jakarta, Erlangga, pp 53-57. Panjaitan G., Handharyani E., Chairul, Masriani, Zakiah Z., Manalu W., 2007, Pengaruh Pemberian Karbon Tetraklorida Terhadap Fungsi Hati dan Ginjal Tikus, Makalah Kesehatan, Vol 11, (1), pp.11-16 Pearce, E. C., 2009, Anatomi dan Fisiologi untuk Paramedis, PT Gramedia, Jakarta, pp. 243 – 249. Poedjiadi A., 1994, Dasar Dasar Biokimia, Jakarta, Universitas Indonesia Press, pp. 32-35. Price, S.A., dan Wilson, L.M., 1984, Patofisiologi : Konsep Klinis Proses-Proses Penyakit, Edisi 6, Vol 1, Penerbit EGC, Jakarta, pp. 473-476.


61

Proseanet, 2012, Persea americana http:/ www.proseanet.org/prohati4/ broeser.php? keywords = persea +americana & do _ search = Search + Now & pcategory = 0, diakses tanggal 14 Juli 2014 Punitha dan Rajasekaran, 2011, Antioxidant Mediated Defense Role of Wedeliacalendulacea Herbal Extract Against CCl4 Induced Toxic Hepatitis, Journal of Applied Pharmaceutical Science, (09);. pp.111-115. Rahmamurti. A. B., 2009, Efek Hepatoprootektif Ekstrak Etanol-Air Daun Macaranga tanirius L. Pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida:Kajian Terhadap Praperlakuan Jangka Panjang, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, pp.24-18 Rajendran R., Hamalata S., Akasakalai K., Mandhukhrisna C.H., Sohil B., Vital dan Sundaram M.R., 2009, Hepatoprotective activity of Mimosa pudica leaves against Carbontetrachloride induced toxicity, Journal of Natural Product, 2(26), pp.117-122 Rao. M., and Adinew B., 2011, Remnant B-Cell-Stimulative and Anti-Oxidative Effects of Persea AmericanaFruit Extract Studied in Rats Introduced into Streptozotocin - Induced Hyperglycaemic State, Journal of Tarditional, Complementary, dan Alternative Medicine, 8(3), pp.210-217 Rosari, A., 2013, Efek Hepatoprotektif Jangka Pendek Dekok Biji Persea americana Mill. Terhadap Aktivitas ALT-AST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, pp.28-30. Riani, T., 2001, Pengaruh Penggunaan Ginjal Buatan (Dialiser) Baru dan Berulang Terhadap Kadar Albumin Serum, Tesis, Universitas Diponegoro, Semarang, pp. 6-7. Sherlock S., 1979, Penyakit Hati dan Sistem Saluran Empedu, Jakarta, Widya Medika, pp. 29 – 35. . Sherwood, 2007, Fisiologi Manusia: Dari Sel ke Sistem, Edisi Keenam, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 669-671. Sudarmaji, S., Haryono, B., dan Suhardi, 1989, Prosedur Analisis untuk Bahan Makanan dan Pertanian, Libery, Yogyakarta Sudjadi. A, dan Rohman., 2004, Analisis Obat dan Makanan, Cetakan I, Yogyakarta, Yayasan Farmasi Indonesia, pp. 73-80 Supriyanta, 2012, Pengaruh Suplementasi Modisco Putih Telur Terhadap Perubahan Kadar Albumin Dalam Darah Pasien Bedah dengan Hipoalbumin


62

di IRNA Bedah RSUP Rd kariadi Semarang, Jurnal Ilmiah, volume 1(2), pp 130-133. Timbrell, A.J., 2008, Principles of Biochemical Toxicology, Edisi 4, Informa Healthcare, USA, Inc, USA, pp.195, 308, 309 Treinen, M., dan Moslen, 2001, Toxic Responses of The Liver, in Klassen C.D.,Cassaret and Doul’s Toxicology: The Basic Science Poisons, 6th ed., McGraw-Hill, New York, pp. 471-487. United States Departemen of Agriculture, 2014, Persea americana Mill. last modified, https://plants.usda.gov/core/profile?symbol=SWMA2, diakses tanggal 20 Agustus 2014. Vinha, F.A., Moreira, J., dan Barreira, V.P., 2013, Physicochemical Parameters, Phytochemical Composition and Antioxidant Activity of the Algarvian Avocado (Persea americana Mill.), Journal of Agricultural Science, 5(12), pp.2-10 Voigt, R., 1995, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi, Edisi Kelima, Yogyakarta: Gadjah Mada University Press, pp.399- 400 Wibowo, D.S., dan Paryana, 2009, Anatomi Tubuh Manusia, Graha Ilmu, Indonesia, pp. 347,348,351, 352 Winarsi, H., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas, Kanisius, Yogyakarta, pp. 53, 216. World Agroforestry Centre, 2002, Botanic Nomenclature to Agroforestry trees: Persea americana, http://www.worldagroforestry.org /sea products/ afdbases/af/asp/SpeciesInfo.asp?SpID=1274, diakses tanggal 14 Juli 2014 Yasir, M., Das S., and Kharya D.M., 2010, The phytochemical and pharmacological profile of Persea americana Mill, Pharmacognosy Reviews, 4(7), pp.77-84 Yilmaz, S.B., Ozbek, H., Citoglu, S.G., Ugras, S., Bayram, I., and Erdogan, E., 2006, Analgesic and Hepatotoxic Effect of Ononis spinosa L., Phytotherapy Research, (20), pp 500-503


LAMPIRAN

63


Lampiran I. Foto buah dan serbuk kulit Persea americana Mill.

Lampiran 2. Foto proses pembuatan dekok kulit Persea americana Mill.

Lampiran 3. Foto larutan dekok kulit Persea americana Mill.

64


65

Lampiran 4. Surat pengesahan determinasi serbuk kulit Persea americana Mill


66

Lampiran 5. Surat penetapan kadar air serbuk kulit Persea americana Mill


Lampiran 6. Surat pengesahan Medical and Health Research Ethics Commitee (MHREC)

67


68

Lampiran 7. Analisis statistik kadar serum ALT-AST pada uji penentuan waktu pencuplikan darah tikus terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kg BB


69


70


71

Lampiran 8. Analisis statistik kadar serum albumin kelompok perlakuan dekok kulit P. americana setelah terinduksi kabon tetraklorida 2 ml/kg BB


72


73


74


75


76


77


78

BIOGRAFI PENULIS

Penulis

skripsi

dengan

judul

“

Pengaruh

Pemberian Jangka Pendek Dekok Kulit Persea americana Mill. Terhadap Kadar Albumin Pada Tikus

Terinduksi

Karbon

Tetraklorida”

memiliki nama lengkap Asih Putriati, merupakan anak

kedua

Harminie

dari

dan

pasangan

Antonius

Angela

Meniek

Wahono.

Penulis

dilahirkan di Surakarta 22 Oktober 1992. Pendidikan formal yang telah ditempuh yaitu TK Marsudirini (1998-1999), kemudian melanjutkan pendidikan di SD Marsudirini Surakarta (2000-2005). Pendidikan Sekolah Menengah Pertama ditempuh di SMP Regina Pacis Surakarta (2005-2008), kemudian melanjutkan pendidikan di SMA Negeri 3 Surakarta (2008-2011). Penulis kemudian melanjutkan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2011. Semasa kuliah penulis aktif dalam berbagai macam kegiatan kepanitiaan di fakultas. Penulis pernah menjadi anggota sie keamanan KPU (2012). Pelepasan Wisuda Fakultas Farmasi (2013), dan Sumpahan Apoteker (2013). Penulis juga pernah menjadi asisten Botani Farmasi (2014).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents