PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

EFEK NEFROPROTEKTIF PEMBERIAN JANGKA PANJANG INFUSA BIJI Persea americana Mill. TERHADAP KADAR KREATININ DAN GAMBARAN HISTOLOGI GINJAL TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Diajukan oleh : Gidion Krisnadi Yoseph NIM : 108114081

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013 i


i


iii


HALAMAN PERSEMBAHAN

“Dan segala sesuatu yang kamu lakukan dengan perkataan atau perbuatan, lakukanlah semuanya itu dalam nama Tuhan Yesus, sambil mengucap syukur melalui Dia kepada Allah, Bapa kita” (Kolose 3: 17)

“I am sure that neither death nor life, nor angles nor principalities nor power nor things present nor things to come, not height nor depth nor any creature shall separate me from the love of God” (Doug Nolk & Tom Fettke dalam lagu He Loved Me)

Aku persembahkan karya ku ini untuk : Yesus Kristus yang selalu menguatkan hidup Mama, bapak, adik dan eyang tercinta Almamater tercinta Universitas Sanata Dharma

iv


v


vi


PRAKATA

Puji syukur dihaturkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas segala berkat dan rahmat karunia yang setiap hari diberikan sehingga penulis dapat menyelesaikan

skripsi

yang

berjudul

“EFEK

NEFROPROTEKTIF

PEMBERIAN JANGKA PANJANG INFUSA BIJI Persea americana Mill. TERHADAP KADAR KREATININ DAN GAMBARAN HISTOLOGI GINJAL TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA” dengan baik dan lancar. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.Farm) program studi Farmasi Universitas Sanata Dharma. Penulis menyadari bahwa dalam proses pelaksanaan dan penyusunan skripsi ini tidak lepas dari bantuan dan campur tangan dari berbagai pihak. Kesempatan ini penulis pergunakan untuk mengucapkan terima kasih kepada : 1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang telah mengijinkan penulis menjalankan pembelajaran selam masa studi. 2. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dosen Pembimbing skripsi yang telah setia membimbing, mendampingi, memberikan saran dan semangat selama proses penyusunan skripsi ini. 3. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dosen Penguji skripsi atas kritik dan masukan yang membangun demi kemajuan skripsi ini. 4. Bapak Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt. selaku Dosen Penguji skripsi atas kritik dan masukan yang membangun demi kemajuan skripsi ini.

vii


5. Bapak Yoseph Wijoyo, M.Si., Apt.; Ibu Dra. M.M. Yetty Tjandrawati, M.Si.; Bapak Jeffry Julianus, M.Si.

selaku Dosen Pembimbing Akademik yang

selalu memberikan pertimbangan akademis penulis selama masa studi di Universitas Sanata Dharma. 6. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., yang telah memberikan bantuan dalam determinasi biji Persea americana Mill. 7. Ibu Rini Dwiastuti, M.Si., Apt. selaku Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian ini. 8. Ibu drh. Sitarina Widyarini, MP., Ph.D. dan Bapak drh. Sugiyono selaku dokter hewan bagian patologis Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gajah Mada atas bantuannya dalam pembacaan preparat histologis ginjal. 9. Bapak Heru, Bapak Suparjiman, dan Bapak Kayatno selaku Laboran Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi, Bapak Wagiran selaku Laboran Laboratorium Farmakognosi Fitokimia, Bapak Otok selaku pengelola gudang kefarmasian atas segala bantuan selama pelaksanaan skripsi ini. 10. Teman-teman “Tim infusa biji Persea americana” Inneke Devi Permatasari, Lydia Setiawan, N.L.P Dian Prawita atas bantuan, kerjasama, perjuangan, pengertian, kesabaran, dan suka duka yang telah dijalani bersama selama penelitian ini. 11. Teman-teman SMA N 3 Yogyakarta Galuh, Riana, Ervina, Muthia, Yudi atas segala bentuk dukungan semangat yang selalu diberikan selama ini.

viii


ix


DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL .................................................................................................i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .......................................................ii HALAMAN PENGESAHAN .................................................................................iii HALAMAN PERSEMBAHAN ..............................................................................iv PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................... v LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ................................................................vi PRAKATA..............................................................................................................vii DAFTAR ISI............................................................................................................. x DAFTAR TABEL................................................................................................... xv DAFTAR GAMBAR .............................................................................................xvi DAFTAR LAMPIRAN........................................................................................xviii INTISARI ..............................................................................................................xix ABSTRACT.............................................................................................................. xx BAB I. PENGANTAR.............................................................................................. 1 A. Latar Belakang ..................................................................................................... 1 1. Perumusan masalah................................................................................... 5 2. Keaslian penelitian.................................................................................... 6 3. Manfaat penelitian .................................................................................... 7 B. Tujuan Penelitian.................................................................................................. 7 1. Tujuan umum ............................................................................................ 7 x


2. Tujuan khusus ........................................................................................... 7 BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ...................................................................... 8 A. Persea americana Mill......................................................................................... 8 1. Morfologi .................................................................................................. 8 2. Taksonomi................................................................................................. 9 3. Kandungan kimia & kegunaan.................................................................. 9 B. Anatomi Fisiologi Ginjal.................................................................................... 10 C. Histologis Ginjal ................................................................................................ 12 D. Ketoksikan Ginjal .............................................................................................. 14 E. Karbon Tetraklorida ........................................................................................... 15 1. Sifat karbon tetraklorida (CCl4) .............................................................. 15 2. Penggunaan karbon tetraklorida (CCl4) .................................................. 16 3. Reaksi dan metabolisme karbon tetraklorida (CCl4)............................... 16 4. Pengaruh karbon tetraklorida terhadap tubuh ......................................... 18 F. Metode Uji Nefrotoksik ...................................................................................... 18 G. Kreatinin............................................................................................................. 19 H. Infundasi............................................................................................................. 20 I. Keterangan Empiris ............................................................................................. 20 BAB III. METODE PENELITIAN ........................................................................ 21 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ......................................................................... 21 B. Variabel dan Definisi Operasional ..................................................................... 21 1. Variabel utama ........................................................................................ 21 2. Variabel pengacau................................................................................... 21 xi


3. Definisi operasional ................................................................................ 22 C. Bahan Penelitian................................................................................................. 23 1. Bahan utama............................................................................................ 23 2. Bahan kimia ............................................................................................ 23 D. Alat dan Instrumen Penelitian............................................................................ 24 E. Tata Cara Penelitian............................................................................................ 24 1. Determinasi biji alpukat (Persea americana Mill.) ................................ 24 2. Pengumpulan bahan ................................................................................ 24 3. Pembuatan serbuk ................................................................................... 25 4. Penetapan kadar air serbuk ..................................................................... 25 5. Pembuatan infusa biji alpukat ................................................................. 25 6. Pembuatan larutan CCl4 .......................................................................... 26 7. Uji pendahuluan ...................................................................................... 26 a. Penetapan dosis toksin ....................................................... 26 b. Penetapan dosis infusa biji Persea americana Mill........... 26 c. Penetapan waktu pengambilan darah ................................. 28 8. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji............................................... 28 9. Pembuatan serum .................................................................................... 29 10. Pengukuran kadar kreatinin pada serum ............................................... 29 11. Pembuatan preparat histologi ginjal...................................................... 30 F. Tata Cara Analisis Hasil ..................................................................................... 30 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................... 32 A. Determinasi Biji Persea americana Mill. ......................................................... 32 xii


B. Penetapan Kadar Air .......................................................................................... 33 C. Pembuatan Infusa Biji Pesea americana Mill.................................................... 34 D. Penentuan Dosis Infusa ...................................................................................... 34 E. Penentuan Dosis Nefrotoksik Karbon Tetraklorida............................................ 35 F. Penentuan Waktu Pengambilan Darah ............................................................... 35 G. Penetapan Lama Pemejanan Infusa Biji Pesea americana Mill. ....................... 37 H. Hasil Uji Efek Nefroprotektif Infusa Biji Pesea americana Mill. ..................... 37 I. Kontrol Olive Oil ................................................................................................. 39 J. Kontrol Karbon Tetraklorida Dosis 2 mL/kgBB................................................. 40 K. Kontrol Infusa Biji Pesea americana Mill. Dosis 1142,86 mg/kgBB .............. 41 L. Kelompok Perlakuan Infusa Biji Pesea americana Mill. Dosis 360,71 mg/kgBB; 642,06 mg/kgBB; dan 1142,86 mg/kgBB pada Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida Dosis 2 mL/kgBB ..................... 42 M. Gambaran Histologis ......................................................................................... 46 1. Kontrol karbon tetraklorida 2 mL/kgBB........................................... 46 2. Kontrol olive oil ................................................................................ 47 3. Kontrol infusa biji Pesea americana Mill. dosis 1142,86 mg/kgBB........................................................................................... 49 4. Kelompok praperlakuan infusa biji Pesea americana Mill. dosis 360,71 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB........................ 50 5. Kelompok praperlakuan infusa biji Pesea americana Mill. dosis 642,06 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB........................ 51

xiii


6. Kelompok praperlakuan infusa biji Pesea americana Mill. dosis 1142,86 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB...................... 53 N. Rangkuman Pembahasan ................................................................................... 54 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................ 56 A. Kesimpulan ........................................................................................................ 56 B. Saran................................................................................................................... 56 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................. 57 LAMPIRAN............................................................................................................ 61 BIOGRAFI PENULIS ............................................................................................ 88

xiv


DAFTAR TABEL

Tabel I.

Kandungan gizi Persea Americana Mill.

Tabel II.

Rata-rata kadar kreatinin serum tikus pasca induksi karbon

9

tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam Tabel III.

36

Hasil uji Scheffe kada kreatinin serum tikus pasca induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam

Tabel IV.

36

Rerata ± SE kadar kreatinin serum tikus praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. terinduksi karbon tetraklorida dosis 2mL/kgBB

Tabel V.

38

Hasil uji Scheffe kadar kreatinin serum tikus antar kelompok perlakuan

Tabel VI.

39

Hasil uji t-berpasangan kadar kreatinin serum tikus setelah pemberian olive oil pada selang waktu 0 dan 48 jam

Tabel VII

40

Persentase efek nefroprotektif praperlakuan infus biji Persea americana Mill.

44

Tabel VIII

Hasil penetapan kadar air serbuk biji Persea americana Mill.

80

Tabel IX.

Hasil validitas dan reabilitas

81

xv


DAFTAR GAMBAR

Gambar 1.

Struktur ginjal

11

Gambar 2.

Nefron ginjal

11

Gambar 3.

Photomicrograph bagian kapsul ginjal manusia

13

Gambar 4.

Photomicrograph korpuskel ginjal manusia

13

Gambar 5.

Gambaran histologis ginjal normal (diwarnai dengan haematoxylin dan eosin)

Gambar 6.

Mekanisme

14

biotransformasi

dan

oksidasi

karbon

tetraklorida Gambar 7.

17

Diagram batang rata-rata kadar kreatinin serum tikus pasca induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam

Gambar 8.

36

Diagram batang rata-rata kadar kreatinin serum tikus praperlakuan infusa biji Persea Americana Mill. 1x sehari selam 6 hari terinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

Gambar 9.

38

Diagram batang rata-rata kadar kreatinin serum tikus setelah pemberian olive oil pada selang waktu 0 dan 48 jam

40

Gambar 10.

Fotomikroskopik histologis ginjal normal

47

Gambar 11.

Fotomikroskopik

histologis

pemberian olive oil

ginjal

48

jam

pasca 48

xvi


Gambar 12.

Fotomikroskopik

histologis

ginjal

kelompok

praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 642,8 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB Gambar 13.

Fotomikroskopik

histologis

ginjal

51

kelompok

praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 642,8 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

xvii

52


DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1.

Foto infusa biji Persea americana Mill.

62

Lampiran 2.

Foto serbuk biji Persea americana Mill

62

Lampiran 3.

Surat Ethics Committee Approval

63

Lampiran 4.

Surat pengesahan determinasi

64

Lampiran 5.

Surat pengesahan hasil pembacaan preparat histologis ginjal

Lampiran 6.

65

Analisis statistik kadar kreatinin serum pada uji pendahuluan penentuan waktu pencuplikan darah induksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

Lampiran 7.

Analisis statistik kadar kreatinin serum pada kontrol Olive oil

Lampiran 8.

66

70

Analisis statistik kadar kreatinin serum praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. setelah induksi karbon tetraklorida dosis

2 mL/kgBB

Lampiran 9.

Perhitungan efek nefroprotektif

Lampiran 10.

Perhitungan penetapan peringkat dosis infusa biji

72 78

Persea americana Mill. kelompok perlakuan

79

Lampiran 11.

Penetapan kadar air serbuk biji Persea americana Mill.

80

Lampiran 12.

Hasil pengukuran validitas dan reabilitas

81

Lampiran 13.

Hasil foto determinasi biji Persea americana Mill.

82

xviii


INTISARI Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh nefroprotektif pemberian jangka panjang infusa biji alpukat (Persea americana Mill.) berdasarkan kadar kreatinin serum dan gambaran histologis ginjal tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida (CCl4), serta mendapatkan besar dosis efektif pemberian infusa biji alpukat (Persea americana Mill.). Jenis penelitian bersifat eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Penelitian ini menggunakan tikus jantan galur Wistar, umur 2-3 bulan, berat badan ± 150-250 gram. Tikus dibagi secara acak ke dalam enam kelompok perlakuan, masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor tikus. Kelompok I (kontrol nefrotoksin) diberi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB secara intraperitoneal. Kelompok II (kontrol negatif) diberi olive oil 2 mL/kgBB. Kelompok III (kontrol infusa) diberikan infusa biji alpukat (Persea americana Mill.) dosis 1142,86 mg/kgBB. Kelompok IV-VI (perlakuan) berturut-turut diberi infusa biji alpukat (Persea americana Mill.) dengan dosis 360,71; 642,06; dan 1142,86 mg/kgBB secara peroral sekali sehari selama enam hari berturut-turut, pada hari ke tujuh semua kelompok perlakuan diberi induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB secara intraperitoneal. Empat puluh delapan jam pasca induksi karbon tetraklorida, darah diambil melalui sinus orbitalis mata untuk diukur kadar kreatinin serum dan pengambilan ginjal untuk dilakukan pencuplikan jaringan ginjal. Kadar kreatinin serum dianalisis secara statistik dengan menggunakan One Way ANOVA dan preparat histologis dianalisis serta dideskripsikan. Berdasarkan hasil penelitan, infusa biji Persea americana Mill. memberikan efek nefroprotektif dengan menurunkan kadar kreatinin serum pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida. Gambaran histologis belum dapat dibandingkan hasilnya karena gambaran hislotogis kelompok nefrotoksin tidak mengalami perubahan yang berarti secara patologis. Jadi infusa biji Persea americana Mill. dosis 360,71; 642,06; dan 1142,86 mg/kgBB memiliki efek nefroprotektif berturut-turut 100%; 80,95%; dan 61,90% berdasarkan kadar kreatinin serum. Dosis efektif infusa biji Persea americana Mill. yang memberikan efek nefroprotektif paling efektif adalah 360,71 mg/kgBB. Kata kunci

:

Persea americana Mill., infusa, nefroprotektif, karbon tetraklorida, kreatinin serum

xix


ABSTRACT The purpose of this research is to determine the nephroprotective effect of infusion of avocado’s seeds (Persea americana Mill.) based on creatinine serum level and renal histology of male rats strained Wistar induced carbon tetrachloride (CCl4), and also to determine the effective dose of infusa of avocado’s seeds (Persea americana Mill.). This study purely using randomized experimental design, complete with its unidirectional pattern. The subject of these studies were male rats of Wistar strain, aged 2-3 months, and ± 150-250 gram for its weight. Rats were divided into six groups randomly, each group consist of five rats. Group I (nefrotoxin control) was given carbon tetrachloride 2 mL/kgBW i.p. Group II (negative control) was given olive oil 2 mL/kgBW. Group III (infusion control) was given infusion of avocado’s seeds (Persea americana Mill.) with the highest dose (1142.86 mg/kgBW). Group IV-VI were given infusion of avocado’s seeds (Persea americana Mill.), the doses were 360,71; 642.06; and 1142.86 mg/kgBW orally once a day during six days continuously and then in the seventh day all of these groups were induced carbon tetrachloride 2 mL/kgBW i.p. Fourty eight hours after induced carbon tetrachloride, the blood was collected from sinus orbitalis to measure the creatinine serum level and also made the renal histology. Creatinine serum level was analyzed statistically using ANOVA one way and the renal histology was analyzed microscopically also described. Based on these result of the research, seeds infusion of Persea americana Mill. gave nephroprotective effect for reducing creatinine level serum of rats induced carbon tetrachloride. Renal histology results cannot be compared because renal histology of control nefrotoxin group do not change pathologically. Thus dose infusion of avocado’s seeds (Persea americana Mill.) 360,71; 642.06; and 1142.86 mg/kgBW had nephroprotective 100%, 80.95%, and 61.90% based on creatinine serum level. Effective dose of infusion of avocado’s seeds (Persea americana Mill.) which gave the most effective nephroprotective effect was 360,71 mg/kgBW. Keywords

:

Persea americana Mill., infusa, nephroprotective, carbon tetrachloride, creatinine serum

xx


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Alpukat, buah bertekstur lembut yang mudah dijumpai di Indonesia. Kondisi iklim tropis yang dimiliki Indonesia mendukung untuk tumbuh dan berkembangnya buah alpukat. Keberadaanya yang lazim dan rasanya yang unik menjadikan buah alpukat digemari masyarakat luas. Selain itu alpukat diketahui mempunyai banyak manfaat karena kandungan antioksidan dan zat gizi berupa lemak yang baik untuk kesehatan (Afrianti, 2010). Umumnya masyarakat hanya memanfaatkan daging buah alpukat saja, sedangkan bijinya kurang dimanfaatkan karena keterbatasan informasi yang ada pada masyarakat akan manfaat biji alpukat. Dalam beberapa penelitian, infusa biji alpukat ternyata memiliki kemampuan untuk menurunkan kadar glukosa darah sehingga dapat dijadikan sebagai alternatif pengobatan (Anggraeni, 2006). Penelitian tersebut membuktikan bahwa kandungan tanin dalam biji alpukat mampu mempresipitasi protein selaput lendir di permukaan usus halus dan membentuk lapisan yang mampu menghambat absorbsi glukosa sehingga peningkatan glukosa darah tidak terlalu tinggi. Ginjal merupakan organ di dalam tubuh yang fungsi utamanya sebagai jalur ekskresi termasuk senyawa-senyawa toksik. Volume aliran darah pada ginjal cukup tinggi sehingga organ ini mampu mengkonsentrasikan

1


senyawa toksik pada filtrat dan membawanya kedalam tubulus-tubulus yang ada pada ginjal, bahkan beberapa senyawa toksik mungkin menjadi aktif saat perjalanan dalam tubulus. Akibatnya organ ini menjadi organ sasaran juga untuk beberapa efek toksik (Santoso dan Nurliani, 2006). Penyakit ginjal sudah menjadi perhatian dunia sebagai masalah kesehatan yang serius baik di negara maju ataupun negara berkembang. Menurut data dari Third National Health and Nutrition Examination Survey (NHANES III) menunjukkan bahwa kurang lebih 8,3 juta (4,6%) populasi dewasa (20 tahun ke atas) di Amerika menderita Penyakit Ginjal Kronis (PGK), dan 300.000 diantaranya berakhir dengan Penyakit Ginjal Tahap Akhir (PGTA). Dan pada tahun 2006 jumlah penderita gagal ginjal kronik di Amerika meningkat menjadi 19,2 juta atau 11% dari populasi dewasa. Selain itu pada tahun 2002 insidensi hemodialisis sebagai penatalaksanaan gagal ginjal di Beijing mencapai 146,4 per juta populasi, keadaan ini meningkat hampir dua kali lipat dibandingkan data tahun 1999 (Park, Zhu, Palaniappan, Heshka, Carnethon, dan Heymsfield, 2003; Zhang et al, 2007; Schoolwerth, Engelgau, Hostetter, Rufo, dan McClelan, 2006). Menurut Firmansyah (2005) insidensi PGK di Indonesia diperkirakan sebesar 100-150 orang tiap 1 juta penduduk per tahun dan prevalensinya mencapai 200-250 kasus per juta penduduk. Di Indonesia prevalensi penderita gagal ginjal hingga kini belum ada yang akurat karena belum ada data yang lengkap mengenai jumlah penderita gagal ginjal kronis di Indonesia. Tetapi diperkirakan, bahwa jumlah penderita gagal ginjal di Indonesia semakin

2


meningkat. WHO memperkirakan di Indonesia akan terjadi peningkatan penderita gagal ginjal antara tahun 1995-2025 sebesar 41,4%. Kerusakan struktural pada sel-sel ginjal akibat kondisi patologis tertentu akan berpengaruh pada kerja fungsional dari ginjal. Kerusakan struktural dapat dideteksi secara mikroskopis dengan melihat preparat histologis dari ginjal apakah terlihat secara perubahan patologis yang spesifik atau tidak. Namun menjadi mustahil dilakukan pada manusia untuk mencuplik jaringan ginjal, maka dari itu dibutuhkan parameter lain yang mampu menggambarkan kondisi fugsional ginjal. Kreatinin menjadi salah satu parameter yang mampu menggambarkan fungsional dari ginjal. Kreatinin yang notabene merupakan metabolit sisa metabolisme keratin otot seharusnya diekskresikan keluar tubuh melalui ginjal, namun ketika ginjal mengalami gangguan/ kreusakan maka ginjal tidak mampu melakukan penyaringan secara sempurna sehingga kadar kreatinin dalam tubuh akan meningkat. Peningkatan kadar kreatinin selanjutnya diapat digunakan sebagai parameter prediktif untuk menilai fungsi kerja ginjal (Laboratorium Amerind Bio-Clinic, 2010). Radikal bebas menjadi salah satu faktor yang mampu mempengaruhi struktur dan fungsi dari sel ginjal. Radikal bebas merupakan produk reaksi kimia yang

memiliki sifat sangat reaktif dan tidak stabil karena adanya

elektron yang tidak berpasangan pada orbital terluarnya. Sifatnya yang reaktif pada radikal bebas mampu menimbulkan perubahan kimiawi dan merusak beberapa komponen sel dalam tubuh seperti protein, lipid, karbohidrat dan asam nukleat (Favier, Cader, Kalynawarman, Fontcave, and Pierre, 1995).

3


Karbon tetraklorida sebagai senyawa model untuk menginduksi terjadinya stres oksidatif pada beberapa fungsi fisiologis hewan uji eksperimental (Ivor dan Schneider, 2005).

Karbon tetraklorida (CCl4)

merupakan xenobiotika yang lazim digunakan untuk menginduksi terjadinya peroksidasi lipid dan keracunan. Dalam retikulum edoplasma hati, CCl4 dimetabolisme oleh sitokrom P450 menjadi radikal bebas triklorometil (CCl3●), senyawa radikal ini yang kemudian akan beredar dalam tubuh termasuk ginjal yang akan mengekskresikan segala bentuk senyawa hasil metabolisme hati (Jeon, Hwang, Park, Shin, Choi, dan Park, 2003; Manna, Sinha, dan Sil, 2006) Antioksidan merupakan senyawa yang mampu memberikan elektron. Cara kerja antioksidan dengan mendonorkan satu elektronnya kepada senyawa yang bersifat oksidan sehingga aktifitas senyawa oksidan tersebut dapat terhambat. Secara ilustrasi, antioksidan melengkapi kekurangan elektron yang dimiliki radikal bebas sehingga mampu menghambat reaksi berantai dari reaktifitas radikal bebas (Winarsi, 2007). Malangngi, Meiske, dan Jessy (2012) memaparkan hasil penelitian mengenai kandungan tanin dan uji aktifitas antioksidan ekstrak biji buah alpukat (Persea americana Mill.), ekstrak kering biji alpukat memiliki kandungan tanin total yang tinggi yaitu 117 mg/kg serta memiliki aktifitas antioksidan yang tinggi yaitu 93,045%. Semakin banyak kandungan tanin maka semakin besar aktivitas antioksidannya karena tanin tersusun dari senyawa polifenol yang memiliki aktifitas penangkap radikal bebas. Adanya

4


kandungan antioksidan pada ekstrak kering biji alpukat, memungkinkan antioksidan yang terkandung pada biji alpukat mampu mencegah kerusakan ginjal dengan cara melengkapi elektron bebas pada senyawa radikal sehingga reaktifitas dari senyawa radikal terhadap sel-sel disekitarnya khususnya sel ginjal dapat dicegah. Bentuk sediaan yang digunakan pada penelitian ini yaitu infusa Persea americana Mill. Teknik yang cukup mudah dalam menggunakan serbuk biji alpukat yaitu dengan menyeduh serbuk biji alpukat menggunakan air panas dan air seduhannya dikonsumsi. Secara umum teknik ini hampir mirip dengan pembuatan infusa. Penelitian terkait dengan Persea americana Mill. yang pernah dilakukan untuk alternatif pengobatan diabetes mellitus. Namun penelitian tentang biji

Persea americana Mill. sebagai nefroprotektif belum pernah

dilakukan, padahal biji

Persea americana Mill. mempunyai kandungan

antioksidan. Berdasarkan hal tersebut maka perlu dilakukan penelitian untuk membuktikan kemampuan nefroprotektif infusa biji Persea Americana Mill. pada tikus terinduksi karbon tetraklorida.

1. Perumusan masalah Permasalah yang diajukan dalam penelitian ini adalah : a. Apakah pemberian jangka panjang infusa biji Alpukat (Persea americana Mill.) memiliki efek nefroprotektif pada tikus jantan galur Wistar yang

5


terinduksi CCl4 berdasarkan kadar kreatinin serum dan gambaran histologis ginjal? b. Berapakah dosis pemberian infusa biji Alpukat (Persea americana Mill.) yang mampu menimbulkan efek nefroprotektif pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi CCl4?

2. Keaslian penelitian Sebelumnya pernah dilakukan penelitian yang berhubungan dengan biji Persea americana Mill. diantaranya : 1. Malangngi dkk, (2012) melaporkan bahwa kandungan total tanin biji alpukat biasa kering yaitu 117 mg/kg. Aktivitas antioksidan tertinggi ditunjukkan oleh ekstrak biji alpukat biasa kering (93,045%). 2. Marlinda, Meiske, dan Audy, (2012) melaporkan bahwa berdasarkan skrining fitokimia, biji buah alpukat diketahui mengandung alkaloid, triterpenoid, tanin, flavonoid dan saponin. Nilai LC50 yang diperoleh berdasarkan uji toksisitas biji buah alpukat mentega segar 42,270 mg/L. 3. Anggraeni (2006) Pemberian infusa biji Persea americana Mill. 0,315 g/kgBB dapat menurunkan kadar glukosa darah. Penelitian tentang efek nefroprotektif biji Alpukat berbeda dengan penelitian-penelitian yang ada. Sejauh ini belum ada publikasi resmi mengenai efek nefroprotektif Persea americana Mill. pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida (CCl4) dilihat dari parameter kadar kreatinin dalam serum dan gambaran histologis ginjal.

6


3. Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis Penelitian ini mampu memberikan informasi yang berhubungan dengan kemampuan nefroprotektif infusa biji Persea americana Mill. b. Manfaat praktis Memberikan informasi kepada masyarakat terkait dengan dosis aplikatif dari infusa biji Persea americana Mill. sebagai salah satu pengobatan alternatif gangguan ginjal.

B. Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum Mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang infusa biji Persea americana Mill. terhadap efek nefroprotektif pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi CCl4. 2. Tujuan khusus 1. Membuktikan bahwa pemberian infusa biji Persea americana Mill. mampu memberikan efek nefroprotektif berdasarkan kadar kreatinin dan gambaran histologis ginjal tikus jantan galur Wistar yang terinduksi CCl4. 2. Mengetahui besarnya dosis infusa biji Persea americana Mill. yang mampu memberikan efek nefroprotektif pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi CCl4.

7


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA A. Persea americana Mill. Alpukat merupakan tanaman buah yang berasal dari Amerika Tengah yang diperkirakan masuk ke Indonoesia pada abad ke-18. Di Indonesia nama alpukat mempunyai beberapa nama daerah, seperti alpuket atau alpukat (Jawa Barat), alpokat (Jawa Tengahdan Jawa Timur) dan apokat atau jambu wolanda (sebutan di lain-lain daerah). Alpukat banyak tumbuh liar di hutanhutan, dan dewasa ini banyak juga ditanam di kebun, atau di pekarangan yang tanahnya subur dan gembur serta tidak digenangi air (BAPPENAS, 2000; Rukmana, 1997; Yuniarti, 2008). 1. Morfologi Alpukat memiliki ciri morfologi berbentuk pohon berukuran kecil, berakar tunggang, batangnya berkayu, bulat dan warnanya coklat kotor, batangnya bercabang dan rantingnya berambut halus. Morfologi daunnya merupakan daun tunggal, letaknya berdesakan di ujung ranting, berbentuk jorong sampai bundar telur dan memanjang, tebal seperti kulit ujung dan pangkalnya runcing. Tepi daunnya rata kadang agak menggulung ke atas, bertulang menyirip. Daun mudanya berwarna kemerahan dan berambut rapat, sedangkan daun tuanya berwarna hijau dan gundul tanpa rambut. Alpukat memiliki morfologi bunga majemuk, buahnya buah buni, berbentuk bola dan bulat telur, berwarna hijau atau hijau kekuningan, daging buahnya jika sudah masak bertekstur lunak dan berlemak dan berwarna hijau kekuningan. Alpukat

8


ini merupakan tumbuhan berbiji bulat seperti bola, keping bijinya berwarna putih kemerahan (Yuniarti, 2008). 2. Taksonomi Klasifikasi lengkap tanaman alpukat adalah sebagai berikut. Divisi

: Spermatophyta

Anak divisi

: Angiospermae

Kelas

: Dicotyledoneae

Bangsa

: Ranales

Keluarga

: Lauraceae

Marga

: Persea

Varietas

: Persea americana Mill. (BAPENAS, 2000).

3. Kandungan kimia & kegunaan Kandungan gizi pada tanaman Persea americana Mill. yang mendominasi adalah karbohidrat dan lemak seperti yang tersaji pada tabel 1. Tabel 1. Kandungan Gizi Persea americana Mill No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Kandungan Gizi Kalori Protein Lemak Karbohidrat Kalsium (Ca) Fosfor (P) Zat Besi (Fe) Vitamin A Vitamin B1 Vitamin C Air Bagian dapat dimakan (Bdd)

Jumlah 85,00 kal 0,90 g 6,50 g 7,70 g 10,00 mg 20,00 mg 0,90 mg 180,00 S.I. 0,05 mg 13,00 mg 84,30 mg 61,00%

Sumber : Rukmana, 1997.

9


Senyawa metabolit skunder yang terkandung pada biji alpukat (Persea americana Mill.) adalah alkaloid, triterpenoid, tannin, flavonoid, dan saponin (Marlinda dkk, 2012). Tanin merupakan adstringen yang memiliki rasa pahit, berfungsi mempercepat penyembuhan luka dan inflamasi pada membran mukosa (Okwu dan Okwu, 2004). Flavonoid merupakan antioksidan larut air yang sangat kuat dan merupakan penangkap radikal bebas. Flavonoid dapat mencegah kerusakan oksidatif sel, mempunyai aktifitas perlindungan dan anti kanker yang kuat melawan tahap-tahap dalam karsinogenesis (Salah, Miller, Pangauga, Bolwell, Rice, dan Evans,1995).

B. Anatomi Fisiologi Ginjal Ginjal merupakan organ dalam tubuh manusia yang berbentuk seperti kacang, terletak di sisi kolumna vertebralis. Ginjal bisa dijumpai di dalam daerah abdominal, di dekat dinding posterior. Struktur ginjal dibagi dalam beberapa ciri morfologi yang spesifik. Jika ginjal dibagi dua secara melintang, ada dua daerah yang dapat digambarkan, yaitu korteks dan medula (Gambar 1) (Stine and Brown, 1996; Guyton dan Hall, 1997). Bagian luar dari ginjal dilapisi oleh kapsul, di bawah kapsul tersebut merupakan selapis jaringan yang sering disebut korteks, dan daerah yang lebih dalam disebut dengan medulla. Darah memasuki ginjal melalui arteri ginjal (renal artery), dan meninggalkan ginjal melalui vena ginjal (renal vein). Bagian korteks akan menerima sejumlah besar aliran darah yang menuju ke

10


ginjal, dan mendapatkan lebih banyak supply oksigen daripada bagian medulla. Urin meninggalkan ginjal melalui pelvis ginjal menuju ureter.

Gambar 1. Struktur ginjal (Stine and Brown, 1996). Unit fungsional dari ginjal adalah nefron (Gambar 2), dimana setiap ginjal memiliki jutaan nefron. Masing masing nefron disusun oleh tubulustubulus ginjal serta glomerulus yang dikelilingi oleh sebuah struktur yang disebut Kapsula Bowman. Tubulus-tubulus yang dimiliki oleh ginjal antara lain tubulus proximal, Lengkung Henle, tubulus distal, dan tubulus pengumpul (collectivus).

Gambar 2. Nefron ginjal (Stine and Brown, 1996).

11


Glomerolus dialiri darah oleh sebuah kapiler yang bertekanan tinggi sehingga mampu menghasilkan ultrafiltrat dari plasma. Filtrat hasi penyaringan ini akan terkumpul pada kapsul Bowman dan mengalir melalui tubulus-tubulus menuju medulla ginjal dan akan dikeluarkan melalui ureter ke uretra sebagai urin (Lu, 1995). Fungsi utama ginjal adalah mengekskresikan sisa-sisa metabolisme yang ada di dalam darah (termasuk didalamnya xenobiotik yang larut air serta konjugat-konjugat lain) membentuk urin. Ginjal juga berperan penting dalam pertahanan homeostasis air dan elektrolit dalam tubuh. Ginjal berperan untuk mengontrol volume dan komposisi cairan tubuh, air, serta semua elektrolit dalam tubuh. Ginjal berperan untuk mengatur keseimbangan antara asupan (akibat pencernaan atau produksi metabolik) dan keluaran (akibat eksresi atau konsumsi metabolik) sebagaian besar dipertahankan oleh ginjal. Selain itu hormon dan enzim yang diproduksi oleh ginjal digunakan untuk mengatur tekanan darah, pH, metabolisme kalsium, dan produksi sel darah merah (Stine and Brown, 1996).

C. Histologis Ginjal Gambar 3 menggambarkan bahwa lapisan luar dari kapsul (OLC) terdiri dari jaringan ikat padat. Keberadaan fibroblast dibagian kapsul jumlahnya relatif sedikit, nukleus pada bagian ini

terlihat pipih dan

memanjang. Lapisan dalam dari kapsul (ILC) tersusun dari banyak

12


myofibroblast yang nukleusnya berbentuk bundar dan memanjang (Ross dan Pawlina, 2006).

Gambar 3. Photomicrograph bagian kapsul ginjal manusia (x180). Cap = Kapsul; OLC = outter layer of the capsule (lapisan luar kapsul); ILC = inner layer of the capsule (lapisan dalam kapsul) (Ross dan Pawlina, 2006)

Gambar 4. Photomicrograph korpuskel ginjal manusia (x160) (Ross dan Pawlina, 2006).

13


Pada gambar 4 terlihat korpuskel ginjal berbentuk sferis dan mempunyai diameter rata-rata 200µm. Bagian ini tersusun atas lipatan-lipatan kapiler glomerular dan dikelilingi jaringan epitel visceral dan parietal dari kapsul Bowman (Ross dan Pawlina, 2006).

Gambar 5. Gambaran histologis ginjal normal (diwarnai dengan haematoxylin dan eosin). (A). Korteks ginjal, 1: renal corpuscle; 2: proximal convoluted tubules; 3: distal convoluted tubues; 4: Bowman’s capsule space. (B) Medula ginjal, 1: thick ascending limb of the loop Henle; 2: interstitial connective tissue (Gunin, 2000) Gambar 5 menggambarkan bahwa renal corpuscle merupakan unit berstruktur spheris berukuran besar yang dikelilingi oleh tubulus distal dan tubulus proksimal. Kesatuan ini masih tergabung dalam struktur penyusun korteks ginjal. Bagian medula ginjal tersusun atas turunan lengkung Henle; tanjakan lengkung Henle; serta tubulus collectivus (Ross dan Pawlina, 2006).

D. Ketoksikan Ginjal Induksi senyawa toksik terhadap keruskan ginjal dapat bersifat ringan ataupun parah, bisa kembali seperti semula ataupun permanen, tergantung dari agen penyebab ketoksikan serta dosis yang dipejankan. Ginjal bisa sangat

14


berpotensi sebagai organ yang menjadi

target dampak senyawa toksik

alasannya karena, aliran darah yang menuju ginjal sangat tinggi artinya pasokkan dari ke ginjal besar, sehingga senyawa-senyawa toksik yang berada di dalam sirkulasi darah akan mengalir pula ke ginjal dalam jumlah yang besar (Stine and Brown, 1996; Hodgson, 2010). Alasan yang kedua, sebagaimana diketahui bahwa ginjal mengeluarkan garam, air dan senyawa-senyawa lain dari filtrat melalui proses reabsorpsi, beberapa senyawa toksik yang tidak terabsorbsi kembali akan meningkat konsentrasinya di dalam filtrat. Sehingga, sekalipun senyawa toksik tersebut nantinya diabsorpsi kembali, masih saja terdapat senyawa toksik dalam jumlah yang cukup besar dalam sel-sel tubulus, akibatnya sel-sel tubulus ini akan terpapar oleh senyawa toksik yang jauh lebih pekat konsentrasinya daripada konsentrasinya di dalam plasma. Ditambah lagi terdapat banyak sel yang memiliki aktivitas CYP P450, sehingga ketika terjadi bioaktivasi senyawa toksik, maka sel-sel tersebut juga akan terpengaruh (Stine and Brown, 1996; Hodgson, 2010).

E. Karbon Tetraklorida 1. Sifat karbon tetraklorida (CCl4) Karbon Tetraklorida merupakan senyawa golongan halogen alifatik, berbentuk cair, tidak berwarna, berbau khas, dan tidak menyala. Berat molekul 153,82; titik didih 77oC dan titik beku -23oC. Kelarutan karbon tetraklorida

15


dalam air 0,08% pada suhu 20oC, sangat mudah larut dalam alcohol, benzene, kloroform, eter, karbon disulfida, aseton (SiKerNas, 2010). 2. Penggunaan karbon tetraklorida (CCl4) Karbon Tetraklorida termasuk dalam golongan senyawa beracun dan berbahaya bagi lingkungan. Senyawa ini biasa digunakan sebagai bahan dasar chlorofluorocarbon (CFC) untuk pendingin lemari es atau AC, fumigasi atau pengasapan di pertanian, cairan pembersih, penghilang noda, dan sebagai pelarut lemak, minyak, lilin, karet, dll (WHO, 2002; SiKernas, 2010). 3. Reaksi dan metabolisme karbon tetraklorida (CCl4) Karbon tetraklorida dapat dibuat di laboratorium dengan mereaksikan gas Cl dan CH4. Reaksi CH4 dan Cl2 terjadi dengan bantuan sinar ultraviolet yang menyediakan energi yang cukup untuk menyebabkan homolytic fission pada ikatan kovalen molekul halogen. Reaksi ini menghasilkan reaksi radikal bebas seperti gambar di bawah ini : 1. Inisiasi

Cl2 bereaksi dengan sinar UV

2. Propagasi

Cl● + CH4

CH3●Cl + HCl

CH3● + Cl2

CH3Cl + Cl

Cl● + CH3Cl ●

3. Terminasi

CH2Cl + Cl2

CH● + Cl CH3● + CH3●

Cl● + Cl●

HCl + ●CH2Cl CH2Cl + Cl●, dst CH3Cl C2H6 (etana)

Oleh karena itu, CH4 dikonversikan pada CH3Cl, CH2Cl. CHCl2, dan CCl4 (Halliwell and Gutteridge, 1999).

16


Karbon tetraklorida adalah salah satu toksin yang metabolismenya dilakukan oleh sitokrom P450 yang menghasilkan produk bersifat destruktif yaitu trichloromethyl radical (CCl3●) (Gregus and Klaaseen, 2001). Didalam hati karbon tetraklorida mengalami aktivasi metabolisme oleh sitokrom P-450 khususnya CYP2E1. Sebagai enzim mikrosomal, CYP2E1 akan mempengaruhi aktivasi metabolit dari senyawa yang diproduksi, sehingga memungkinkan terjadinya peningkatan atau penurunan sifat toksik dari senyawa induk.CYP2E1 akan berperan sebagai agen pereduksi dan mengkatalis adisi elektron sehingga satu ion klorin akan hilang dan terbentuk radikal bebas triklorometil (●CCl3) yang bersifat reaktif. Keberadaan oksigen disekitar radikal bebas triklorometil akan menginduksi pembentukan triklorometilperoksi (●OOCCl3) bersifat lebih reaktif (Gambar 6) (Timbrell, 2008; Gregus dan Klaasseen, 2001).

Gambar 6. Mekansime biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida (Timbrell, 2008)

17


4. Pengaruh karbon tetraklorida terhadap tubuh Karbon tetraklorida dapat memberikan dampak buruk bagi kesehatan misalnya dapat merusak hati, ginjal dan sistem saraf, dan lain-lain. CCl4 dapat menyebabkan acute tubular necrosis dengan gambaran patologis sel epitel tubulus mengalami pembengkakan, edema intestinal dan adanya sel epithelial cost di tubulus. Sel epithelial cost tersebut akan menyebabkan obstruksi dari tubulus (ECO-USA, 2006). Bagian ginjal yang terpapar karbon tetraklorida akan mengalami nekrosis diantaranya adalah tubulus proksimal dan loop of henle, kerusakan glomerulus dan pembengkakan membrane basal dan sel epithelial parietal (ATSDR, 2005).

F. Metode Uji Nefrotoksik Pendekatan terhadap dugaan adanya keruskan ginjal dilakukan dengan anamnesis riwayat penyakit, pemeriksaan fisik serta dibantu dengan pemeriksaan laboratorium. Pemeriksaan laboratorium menjadi penting karena pemeriksaan ini menjadi penegas terhadap diagnosa yang ditetapkan. Pemeriksaan laboratorium klinis bisa berupa urinalisis kemudian bisa dilengkapi dengan pemerikasaan kimia darah berupa kadar kreatinin dan ureum (Laboratorium Amerind Bio-Clinic, 2010; Sutedjo, 2006). Yang perlu diperhatikan dalam pemeriksaan kadar ureum adalah banyak faktor yang mempengaruhi kadar ureum dalam darah seperti asupan protein, aliran darah ke ginjal, kondisi saluran cerna apakah terdapat

18


perdarahan atau tidak, adanya infeksi, penggunaan obat khususnya steroid. Hal-hal tersebut yang menjadi pertimbangan untuk menjadikan ureum sebagai parameter utama terhadap penilaian fungsi ginjal (Laboratorium Amerind BioClinic, 2010; Sutedjo, 2006). Kadar kreatinin darah bisa dijadikan parameter yang cukup terpercaya karena faktor yang mempengaruhi kadar kreatinin tidak terlalu kompleks. Beberapa hal yang perlu diperhatikan adalah kadar kreatinin tidak dipengaruhi intake makanan/ minuman, kenaikan/penurunanannya stabil maka dari itu parameter ini dianggap mudah untuk dipantau. Namun parameter ini bergantung dari masa otot subjek uji sehingga perlu adanya pengontrolan untuk kondisi ini (Laboratorium Amerind Bio-Clinic, 2010; Sutedjo, 2006). G. Kreatinin Kreatinin adalah hasil perombakan dari kreatin yang merupakan senyawa dengan unsur nitrogen dan sering dijumpai dalam otot. Kreatin ini akan difosforilasi oleh enzim kreatine fosfokinase

(CPK, creatine

phosphokinase) menjadi suatu senyawa fosfat yang kaya akan energi dan berperan dalam reaksi-reaksi yang memerlukan energi. Jadi kreatinin merupakan produk akhir metabolisme kreatin otot yang disintesis di dalam hati dan ditemukan dalam otot rangka serta aliran darah, kemudian diekskresikan dalam urine (Widmann, 1995; Sutedjo, 2006). Keberadaan

kreatinin

dalam

darah

dapat

digunakan

untuk

mendiagnosis fungsi ginjal secara kuantitatif dengan mengukur laju filtrasi glomerulus

(Glomerular

Filtration

Rate,

GFR).

Dalam

analisisnya,

19


20

peningkatan kreatinin dalam darah tidak dipengaruhi diet dan pasokan cairan, selain itu kenaikan/penurunan kreatinin dalam darah cenderung stabil/tidak banyak berubah jika dibandingkan dengan kadar ureum, sehingga layak dijadikan parameter kuantitatif fungsi ginjal. Kadar kreatinin utamanya dipengaruhi oleh massa otot, maka dari itu kadar kreatinin darah pada laki-laki lebih tinggi daripada perempuan (Laboratorium Amerind Bio-Clinic, 2010; Sutedjo, 2006). H. Infundasi Infundasi merupakan salah satu metode ektraksi yang merupakan sebuah proses penarikan kandungan kimia yang dapat larut dalam pelarut cair tertentu sehingga mampu terpisah dari bahan yang tidak larut dalam pelarut tersebut. Infundasi termasuk dalam ekstraksi dengan cara panas karena dalam prosesnya

ditambahkan panas. Infundasi secara umum dilakukan untuk

menyari kandungan senyawa aktif yang larut dalam air dari bahan-bahan nabati. Proses ini dilakukan pada suhu 90oC selama 15 menit. Hasil proses infundasi selanjutnya disebut infusa (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1986).

I. Keterangan Empiris Penelitian eksploratif untuk mengetahui adanya efek nefroprotektif pemberian jangka panjang infusa biji alpukat (Persea americana Mill.) pada ginjal berdasarkan kadar kreatinin serum darah dan gambaran histologis ginjal tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.


BAB III METODE PENELITIAN A. Jenis Rancangan Penelitian Penelitian ini merupakan penelitian ekperimental murni dengan menggunakan

rancangan

acak

lengkap

pola

searah.

Penelitian

ini

menggunakan subyek uji sebanyak 30 ekor yang dibagi acak dalam 6 kelompok yang terdiri dari 1 kelompok kontrol CCl4; 1 kelompok kontrol olive oil; 1 kelompok kontrol infusa biji Persea americana Mill.; dan 3 kelompok perlakuan dengan dosis infusa yang berbeda. Tiap kelompok terdiri dari 5 ekor hewan uji.

B. Variabel dan Definisi Operasional 1. Variabel utama a. Variabel bebas : Dosis infusa biji Persea americana Mill., merupakan volume tertentu (mL) infusa biji Persea americana Mill., tiap kg berat badan subjek uji yang digunakan. b. Variabel tergantung : Penurunan kadar kreatinin serum tikus dan gambaran histologis ginjal akibat pemberian jangka panjang infusa biji Persea americana Mill. terhadap sel ginjal

tikus jantan galur Wistar terinduksi

karbon tetraklorida. 2. Variabel pengacau a. Variable pengacau terkendali : Kondisi hewan uji , yaitu tikus jantan galur Wistar dengan berat badan 150-250 gram dan umur 2-3 bulan. Frekuensi

21


pemberian infusa biji Persea americana Mill. yaitu satu kali sehari selama enam hari berturut-turut dengan waktu pemberian yang sama. Cara pemberian senyawa pada tikus dilakukan secara peroral untuk infusa biji Persea americana Mill. dan injeksi intraperitonial untuk karbon tetraklorida. Bahan uji yang digunakan berupa biji Persea americana Mill. yang diperoleh dari Padang, Sumatra Barat. b. Variabel pengacau tak terkendali : Kondisi patologis dari tikus jantan galur Wistar yang digunakan sebagai hewan uji. 3. Definisi operasional a. Infusa biji Persea americana Mill. 100% Infusa serbuk kering biji Persea american Mill. didapatkan dengan cara menginfundasi 8 gram serbuk kering biji Persea americana Mill. dalam 100,0 ml air pada suhu 90oC selama 15 menit. b. Penurunan kadar kreatinin pada serum tikus merupakan kemampuan infusa biji Persea americana Mill. pada dosis tertentu untuk menurunkan kadar kreatinin pada serum tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida. c. Gambaran histologis ginjal merupakan hasil penglihatan dan pembacaan gambaran histologis ginjal tikus yang ditandai dengan ditemukannya infiltrasi sel radang, fibrosa, cacat seluler seperti nekrosis sel epitel pada glomerulus, dan pembengkaan sel tubulus proksimal yang menyebabkan penyempitan lumen bahkan menghilangnya lumen.

22


C. Bahan Penelitian 1. Bahan utama a. Hewan uji yang digunakan berupa tikus jantan galur Wistar dengan umur 2-3 bulan dan berat badan 150-250 g yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. b. Serbuk biji Persea americana Mill. yang diperoleh dari Padang, Sumatra Barat, Januari 2013. 2. Bahan kimia a. Bahan nefrotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogakarta. b. Air suling sebagai pelarut yang digunakan untuk pembuatan sediaan uji, yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. c. Aqua bidestilata yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Instrumental Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta digunakan sebagai blanko pada pengujian kadar kreatinin pada serum, d. Kontrol serum Kreatinin Cobas® (PreciControl ClinChem Multi 2) Roche/Hitachi analyzer e. Olive Oil merk Bertolli® f. Reagen serum kreatinin merk DiaSys®

23


D. Alat dan Instrumen Penelitian 1. Alat-alat pembuat serbuk kering biji Persea americana Mill. antara lain : oven, mesin penyerbuk, timbangan elektrik. 2. Alat-alat pembuat infusa biji Persea americana Mill. anatar lain : panci lapis aluminium, heater, thermometer, gelas ukur, stopwatch, timbangan elektrik. 3. Alat-alat uji nefroprotektif anatar lain : Seperangkat alat gelas berupa Bekker glass, gelas ukur, tabung reaksi, labu ukur, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrex Iwaki Glass®). Timbangan elektrik Mettler Toledo®, sentrifuge Centurion Scientific®, vortex Genie Wilten®, spuit per oral dan syringe 3 cc Terumo®, spuit intraperotonial dan syringe 1 cc Terumo®, pipa kapiler, tabung Eppendorf, Microlab 200 Merck®.

E. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi biji alpukat (Persea americana Mill.) Determinasi biji Persea americana Mill. dilakukan dengan cara mencocokan ciri-ciri mikroskopis biji Persea americana Mill. dengan serbuk yang diperoleh dari Padang, Sumatra Barat. Determinasi dilakukan oleh Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., Dosen Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. 2. Pengumpulan bahan Bahan uji yang digunakan adalah biji Persea americana Mill. segar, berwarna coklat, tidak busuk, didapat dari buah alpukat yang tidak terlalu

24


muda dan tidak terlalu tua. Biji yang digunakan sudah dalam bentuk serbuk yang diperoleh dari wilayah Padang, Sumatera Barat. 3. Pembuatan serbuk Biji Persea americana Mill. dicuci bersih di bawah air mengalir. Setelah bersih, biji dikering anginkan hingga biji

tidak tampak basah

kemudian dilakukan pengeringan menggunakan oven pada suhu 50° C selama 24 jam. Setelah kering biji dibuat serbuk dan diayak dengan ayakan nomor 40 supaya kandungan fitokimia yang terkandung dalam biji Persea americana Mill. lebih mudah terekstrak karena luas permukaan serbuk yang kontak dengan pelarut semakin besar. 4. Penetapan kadar air serbuk Penetapan kadar air sederhana dilakukan dengan alat moisture balance. Berdasarkan Badan Pengawasan Obat dan Makanan Republik Indonesia (1989). Sebanyak 5 g serbuk biji Persea americana Mill. kering dimasukkan kedalam alat moisture balance, dan diratakan. Serbuk ditimbang dan dicatat sebagai bobot sebelum pemanasan. Serbuk dipanaskan pada suhu 110oC selama 15 menit. Kemudian serbuk ditimbang lagi dan dicatat sebagai bobot sesudah pemanasan. Selisih bobot sebelum dan sesudah pemanasan merupakan kadar air dalam sampel yang diteliti. 5. Pembuatan infusa biji alpukat (Persea americana Mill.) Infusa biji Persea americana Mill. dibuat dengan konsentrasi 100%. Sebanyak 8 g serbuk kering biji Persea americana Mill. dibasahi terlebih dahulu dengan 16 ml aquadest kemudian ditambahkan dengan 100,0 ml

25


aquadest. Campuran ini kemudian dipanaskan diatas heater selama 15 menit dengan suhu 90oC. waktu 15 menit terhitung saat campuran mencapai suhu 90oC. Jika air hasil infusa tersebut kurang maka dapat ditambahkan air selagi panas melalui ampas rebusan hingga volume yang diinginkan tercapai. 6. Pembuatan larutan CCl4 Hasil penelitian Janakat dan Al-Merie (2002) menyatakan pembuatan larutan Karbon tetraklorida dibuat dalam konsentrasi 50%. Larutan karbon tetraklorida dalam olive oil dibuat dengan cara melarutkankan 50 ml karbon tetraklorida ke dalam olive oil sebanyak 50 ml. 7. Uji pendahuluan a. Penetapan dosis toksin Penetapan dosis nefrotoksin karbon tetraklorida. Pemilihan dosis karbon tetraklorida dilakukan untuk mengetahui pada dosis berapa karbon tetraklorida mampu menyebabkan kerusakan ginjal tikus yang ditandai dengan peningkatan kadar kreatinin dalam serum darah paling tinggi. Dosis nefrotoksik yang digunakan dalam penelitian ini mengacu pada hasil orientasi yang dilakukan dengan cara menginduksi hewan uji dengan karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB seacara i.p. b. Penetapan dosis infusa biji Persea americana Mill. Peringkat dosis didasarkan pada pengobatan yang biasa digunakan pada masyarakat yaitu ± 2 sendok makan (4 g) serbuk biji Persea americana Mill. yang direbus dengan 250ml air. Maka dosis perlakuan yang digunakan

26


adalah 4 g/70 kgBB manusia. Konversi dosis tikus (manusia 70 kg ke tikus 200g) = 0,018. Dosis untuk 200 g tikus

= 0,018 x 4g = 0,72 g/200 g BB = 360

mg/kgBB. Hasil orientasi infusa menunjukkan bahwa konsentrasi maksimal infusa biji Persea americana Mill. yang dapat dibuat adalah 8 g/ 100 ml, dengan asumsi berat badan hewan uji maksimal adalah 350 g, dan volume maksimal pemberian infusa secara p.o = 5 ml Berdasarkan perhitungan, D x 350 g = 8 g/ 100ml x 5 ml D = 1142,86 mg/kg BB, selanjutnya dosis ini disebut dosis tinggi perlakuan. Untuk mendapatkan dosis tengah perlakuan, terlebih dahulu dihitung faktor kelipatan dari doisi rendah dan dosis tinggi yang sudah diperoleh. Perhitungan faktor kelipatan adalah sebagai berikut :

N = Jumlah peringkat dosis yang digunakan. Penelitian ini menggunakan 3 peringkat dosis maka n=3, sehingga perhitungannya sebagai berikut : (Faktor kelipatan) Berdasarkan faktor kelipatan yang diperoleh maka dosis tengah dan dosis rendah perlakuan ditentukan sebagai berikut, D = 1142,86 mg/ kgBB : 1,78 = 642,06 mg/ kgBB

(dosis tengah)

D = 642,06 mg/ kgBB : 1,78 = 360,71,71 mg/ kgBB

(dosis rendah)

27


c. Penetapan waktu pengambilan darah Untuk

menentukan

waktu

pengambilan

darah

yang

mampu

menggambarkan kondisi ginjal berdasarkan parameter kreatinin pada serum, dilakukan orientasi dengan cuplikan serum dari jam 0, 24 dan 48 jam setelah pemejanan karbon tetraklorida untuk melihat kadar kreatinin pada serum tikus. Orientasi dilakukan pada satu kelompok perlakuan namun dipantau kadar kreatinin pada waktu ke-0, 24 dan 48 jam setelah pemejanan karbon tetraklorida. Digunakan 4 tikus untuk satu kelompok perlakuan orientasi. Pengambilan darah dilakukan melalui sinus orbitalis. Setelah diambil darah pada jam ke-0, 24 dan 48 jam, kemudian serum diukur kadar kreartininnya. Waktu di mana kadar kreatinin serum menunjukkan nilai paling maksimal dijadikan sebagai waktu pengambilan sampel darah. 8. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji Sejumlah tiga puluh ekor tikus dibagi secara acak ke dalam enam kelompok perlakuan masing-masing sejumlah lima ekor tikus. a. Kelompok I (kontrol hepatotoksin) diberi larutan karbon tetraklorida :

olive oil (1:1) dosis 2 ml/kgBB secara i.p. b. Kelompok II (kontrol ekstrak) diberi infusa biji Persea americana Mill.

dosis 1142,86 mg/kgBB selama enam hari berturut-turut secara per oral. c. Kelompok III (kontrol olive oil) diberi olive oil dosis 2 mL/kgBB secara

i.p. d. Kelompok IV (dosis 360,71 mg/kgBB) diberi infusa biji Persea americana

Mill. secara per oral sekali sehari selama enam hari berturut-turut.

28


e. Kelompok V (dosis 642,06 mg/kgBB) diberi infusa biji Persea americana

Mill. secara per oral sekali sehari selama enam hari berturut-turut. f.

Kelompok VI (dosis 1142,86 mg/kgBB) diberi infusa biji Persea americana Mill. secara per oral sekali sehari selama enam hari berturutturut. Pada hari ke tujuh kelompok IV-VI diberi larutan karbon tetraklorida

dosis 2 ml/kgBB secara intraperitonial. Setelah 48 jam paska induksi CCl4 tikus diambil darahnya melalui sinus orbitalis mata, dan diukur kadar kreatinin serum. Selanjutnya hewan uji yang sudah diambil sampel darahnya dikorbankan untuk diambil organ ginjalnya kemudian disimpan dalam larutan formalin 10% untuk selanjutnya dilakukan pembuatan preparat histologis ginjal. 9. Pembuatan serum Darah diambil melalui bagian sinus orbitalis mata tikus, kemudian ditampung dalam tabung Eppendorf. Darah didiamkan selama kurang lebih 15 menit. Darah disentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 5000 rpm dan bagian supernatannya diambil. 10. Pengukuran kadar kreatinin pada serum Alat yang digunakan untuk mengukur kadar kreatinin serum adalah Mikrolab 200 Merck®. Kadar kreatinin dinyatakan dengan satuan mg/dl. Pengukuran kadar kreatinin serum dilakukan di laboratorium Biokimia Fisiologi Manusia, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

29


a. Penetapan kadar kreatinin serum kontrol. Bertujuan untuk validitas dan reliabilitas alat yang digunakan. Analisis dilakukan dengan cara mencampur 1000 μL reagen I, kemudian dicampurkan 50 μL serum kontrol, didiamkan selama lima menit. Setelah itu, ditambahkan 250 μL reagen II dan dibaca resapan setelah satu menit. Pengukuran kontrol serum digunakan untuk mengetahui validasi alat yang digunakan. b. Penetapan kadar kreatinin serum. Analisis serum kreatinin dilakukan dengan cara mencampur 1000 μL reagen I, kemudian dicampurkan 50μL serum, didiamkan selama lima menit. Setelah itu, ditambahkan 250μL reagen II dan dibaca resapan setelah satu menit. 11. Pembuatan preparat histologi ginjal Tikus

dibedah

kemudian

diambil

organ

ginjalnya

dengan

menggunakan pinset dan gunting bedah, kemudian organ dicuci terlebih dahulu menggunakan NaCl 0,9% dan dimasukkan kedalam formalin 10% untuk diawetkan. Pembuatan preparat histologi dan pemeriksaan preparat histologis dilakukan di Laboratorium Patologi, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Gajah Mada Yogyakarta. Hasil pembacaan disajikan dalam bentuk fotomikroskopik sebagai data kualitatif.

F. Tata Cara Analisis Hasil Data kadar kreatinin serum diuji dengan Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui distribusi data dan analisis varian untuk melihat homogenitas varian antar kelompoknya sebagai syarat analisis parametrik.

30


Diperoleh data terdistribusi normal dan homogen maka dilanjutkan dengan analisis variansi pola searah (ANOVA one way) dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelompok. Kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk melihat perbedaan antar kelompok bermakna (signifikan) (p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan) (p>0,05). Pemeriksaan preparat histologi ginjal dilakukan secara kualitatif deskriptif dengan membandingkan kondisi histologis kelompok kontrol dengan kelompok perlakuan untuk mengetahui pengaruh pemberian infusa biji Persea americana Mill. terhadap kerusakan ginjal pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Perhitungan persen efek nefroprotektif terhadap karbon tetraklorida sebagai senyawa model penginduksi kerusakan ginjal diperoleh dengan rumus:

31


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian jangka panjang infusa biji Persea americana Mill. terhadap efek nefroprotektif pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida yang ditinjau dari kadar kreatinin serum serta gambaran histologis ginjal. Lebih spesifik, tujuan khusus penelitian ini adalah membuktikan pemberian infusa biji Persea Americana Mill. mampu memberikan efek nefroprotektif serta mengetahui besarnya dosis infusa biji Persea americana Mill. yang mampu memberikan efek nefroprotektif pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida. Hasil penelitian yang akan dibahas adalah sebagai berikut determinasi biji Persea americana Mill., penetapan kadar air serbuk biji Persea americana Mill., pemeriksaan kadar kreatinin serum, serta pemeriksaan histologis ginjal tikus.

A. Determinasi Biji Persea americana Mill. Tahap awal penelitian ini adalah melakukan pemeriksaan terhadap serbuk biji Persea americana Mill. yang diperoleh dari Padang, Sumatera Barat melalui determinasi. Determinasi ditujukan untuk memastikan bahwa serbuk biji yang digunakan pada penelitian adalah benar biji Persea americana Mill. Determinasi dilakukan dengan cara mencocokkan kesamaan ciri serbuk (Lampiran 13) yang digunakan dalam penelitian terhadap serbuk biji Persea americana Mill. yang dibuat mandiri di Laboratorium Farmakignosi Fitokimia, Fakultas Farmasi,

32


33

Universitas Sanata Dharma. Hasil determinasi membuktikan bahwa benar serbuk biji yang digunakan dalam penelitian adalah biji Persea americana Mill. (Lampiran 4)

B. Penetapan Kadar Air Penetapan kadar air ini dilakukan untuk mengetahui banyaknya air yang terkandung dalam serbuk simplisia biji Persea americana Mill.yang selanjutnya dinyatakan dalam satuan persen, sehingga memenuhi persyaratan kandungan kadar air serbuk yang baik. Menurut Direktorat Jendral Bina Kesehatan (2008) dan Keputusan Menteri Kesehatan RI No. 661/Menkes/SK./VII/1994 tentang Persyaratan Obat Tradisional, menyatakan bahwa standar kadar air maksimum simplisia adalah 10%. Proses penetapan kadar air serbuk biji Persea americana Mill. dilakukan dengan alat moisture balance menggunakan metode Gravimetri. Sejumlah serbuk dipanaskan pada suhu 110oC selama 15 menit. Pemanasan dilakukan pada hingga suhu 110oC agar kandungan air yang ada dalam serbuk simplisia menguap dan dengan estimasi waktu 15 menit dianggap bahwa kadar air dalam serbuk biji Persea americana Mill. persyaratan parameter standar. Hasil perhitungan menunjukkan serbuk biji Persea americana Mill.memiliki kadar air sebesar 7,4%. Hasil tersebut menunjukkan serbuk biji Persea americana Mill. memenuhi persyaratan serbuk yang baik.


34

C. Pembuatan Infusa Biji Persea americana Mill. Metode infusa dipilih sebagai cara ektraksi serbuk biji Persea americana Mill. karena proses pembuatan infusa memiliki prinsip yang sama dengan cara penggunaan serbuk biji Persea americana Mill. yang lazim digunakan masyarakat. Berdasarkan hasil orientasi, diperoleh konsentrasi maksimal serbuk biji Persea americana Mill. yang mampu menghasilkan infusa adalah 8 g dalam 100 mL aquadest. Hasil infundasi 8 g serbuk biji Persea americana Mill. dalam 100 mL aquadest adalah sejumlah ± 80 mL infusa serbuk biji Persea americana Mill. yang selanjutnya ditambahkan sejumlah aquadest panas melalui ampas proses infundasi sehingga menghasilkan volume total infusa sebesar 100 mL.

D. Penentuan Dosis Infusa Tujuan penetapan dosis infusa adalah untuk menentukan besar atau banyaknya pemejanan infusa sebagai bahan yang hendak dilihat pengaruhnya pada kelompok perlakuan. Ditetapkan dosis infusa sebagai dosis rendah adalah dosis penggunaan serbuk biji Persea americana Mill. di masyarakat yaitu 2 sendok makan (4 g) serbuk biji Persea americana Mill. yang direbus dengan 250 mL air, maka dianggap dosis penggunaan pada manusia adalah 4 g/70 kgBB manusia sehingga dibutuhkan konversi dosis penggunaan pada tikus, dan dihasilkan konversi dosis pada tikus yaitu 360,71mg/ kgBB tikus.Penelitian ini menggunakan 3 peringkat dosis dengan faktor pengali sebesar 1,78. Hasil


35

perhitunga diperoleh tiga peringkat dosis secara berturut yaitu 360,71; 642,06; dan 1142,86 g/kgBB.

E. Penentuan Dosis Nefrotoksik Karbon Tetraklorida Dosis nefrotoksikn ditentukan untuk menentukan jumlah dosis karbon tetraklorida yang dapat menyebabkan terjadinya kerusakan ginjal yang ditandai dengan terjadinya peningkatan kadar kreatinin serum serta didukung dengan hasil gambaran histologis ginjal. Dosis yang digunakan berdasarkan hasil orientasi yang telah dilakukan pada empat ekor hewan uji yang diinduksikan senyawa model penginduksi kerusakan ginjal yaitu karbon tetraklorida sebesar 2mL/kgBB. Hasil orientasi menunjukkan bahwa 2mL/kgBB karbon tetraklorida sudah menimbulkan efek nefrotoksik yang ditandai dengan peningkatan kadar kreatinin serum.

F. Penentuan Waktu Pengambilan Darah Waktu pencuplikan darah perlu ditetapkan dengan tujuan untuk mengetahui jangka waktu karbon teraklorida dosis 2mL/kgBB dapat memberikan efek kerusakan ginjal (nefrotoksik) yang maksimal berdasarkan kenaikkan kadar kreatinin serum. Karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB diinduksikan pada tikus kemudian tikus diambil darahnya dengan selang waktu pencuplikan darah 0, 24, 48, dan 72 jam.


36

Tabel II. Rata-rata kadar kreatinin serum tikus pasca induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam (n = 4) Selang waktu (jam) 0 24 48 72

Rerata kadar kreatinin serum ± SE (mg/dL) 0,35 ± 0,03 0,53 ± 0,05 1,00 ± 0,07 0,45 ± 0,03

Gambar 7. Diagram batang rata-rata kadar kreatinin serum tikus pasca induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam Berdasarkan tabel II dan gambar 7, hasil analisis variansi satu arah data kadar kreatinin serum tikus menunjukkan nilai signifikansi 0,000 (<0,05) artinya data keempat kelompok tersebut memiliki perbedaan. Kebermaknaan perbedaan antar kelompok tersebut selanjutnya diuji dengan uji Scheffe. Hasil analisis uji Scheffe tersaji pada tabel III. Tabel III. Hasil uji Scheffe kada kreatinin serum tikus pasca induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam. Selang waktu (jam) 0 24 48 72 0 TB B TB 24 TB B TB 48 B B B 72 TB TB B Keterangan : B = Berbeda bermakna (p≤0,05) ; TB = Berbeda tidak bermakna (p>0,05)


37

Verweij, Fronius, Stuurman, Triet, Hattum, Vries, dan Pinedo (1988) melaporkan bahwa kadar normal kreatinin serum adalah 0,43 – 0,70 mg/dL. Pada tabel I, terlihat bahwa kadar kreatinin serum yang paling tinggi terjadi pada jam ke 48 (1, 000 ± 0,071 mg/dL) dan menurut hasil uji Scheffe peningkatan kadar kreatinin serum yang terjadi adalah signifikan dan berbeda bermakna dibandingkan dengan data kadar kreatinin jam ke 0, 24 dan jam ke 72. Pada selang waktu pencuplikan jam ke 72 terjadi penurunan kadar kreatinin serum (0,581 ± 0,068) yang secara statistik berbeda tidak bermakna terhadap jam ke 0, artinya kadar kreatinin pada jam ke 72 sudah kembali normal. Berdasarkan analisa tersebut ditetapkan kadar puncak kreatinin pasca induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada jam ke 48 dan dijadikan sebagai waktu pencuplikan darah.

G. Penetapan Lama Pemejanan Infusa Biji Persea americana Mill. Penetapan lama pemejanan infusa biji Persea americana Mill. berdasarkan penelitian Windrawati (2012) efek proteksi ekstrak air daun Macaranga tanarius L. pada tikus terinduksi karbon tetraklorida, diberikan praperlakuan pemejanan ekstrak selama 6 hari berturut-turut dan pada hari ke 7, hewan uji diberi senyawa toksin, karbon tetraklorida 2 mL/kgBB, untuk mengkondisikan kerusakan hepar.

H. Hasil Uji Efek Nefroprotektif Infusa Biji Persea americana Mill. Penelitian ini meninjau kadar kreatinin serum tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB yang sebelumnya dipejankan infusa biji Persea americana Mill. satu kali sehari selama enam hari berturut-turut untuk


38

melihat efek nefroprotektif infusa biji Persea americana Mill. Berdasarkan data kadar kreatinin serum yang dianalisis dengan analisis variansi satu arah menunjukkan bahwa antar kelompok terdapat perbedaan dengan signifikansi 0,000 (<0,05). Kebermaknaan perbedaan antar kelompok dibuktikan dengan uji Scheffe (tabel IV). Data kadar kreatinin serum tersaji dalam bentuk rerata ± SE pada tabel IV serta gambar 8. Tabel IV. Rerata ± SE kadar kreatinin serum tikus praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. terinduksi karbon tetraklorida dosis 2mL/kgBB (n = 5)

Kelompok I II III IV V VI

Perlakuan Kontrol karbon tetraklorida dosis 2mL/kgBB Kontrol negative olive oil Kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB Infusa 360,71 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB Infusa 642,06 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB Infusa 1142,86 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

Rerata kadar kreatinin serum ± SE (mg/dL) 1,00 ± 0,06 0,58 ± 0,02 0,58 ± 0,02 0,58 ± 0,02 0,66 ± 0,03 0,74 ± 0,09

Keterangan : Dosis 1 = 360,71 mg/kgBB Dosis 2 = 642,06 mg/kgBB Dosis 3 = 1142,86 mg/kgBB

Gambar 8. Diagram batang rata-rata kadar kreatinin serum tikus praperlakuan infusa biji Persea Americana Mill. 1x sehari selam 6 hari terinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB


39

Tabel V. Hasil uji Scheffe kadar kreatinin serum tikus antar kelompok perlakuan

Kelompok Perlakuan

Kontrol karbon tetraklorida dosis 2mL/kgBB Kontrol negative olive oil Kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB Infusa 360,71 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB Infusa 642,06 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB Infusa 1142,86 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

Kontrol karbon tetraklorida dosis 2mL/kgBB

Kontrol negatif olive oil

Kontrol infusa 1142,86 mg/kgBB

Infusa 360,71 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB



B

B

B

B

B

TB

TB

TB

TB

TB

TB

TB

TB

TB

B B

TB

B

TB

TB

B

TB

TB

TB

B

TB

TB

TB

Keterangan : B = Berbeda bermakna (p ≤ 0,05)

TB

TB

TB = Berbeda tidak bermakna (p > 0,05)

I. Kontrol Olive Oil Kontrol olive oil digunakan sebagai pembuktian bahwa olive oil yang dipakai sebagai pelarut dari karbon tetraklorida tidak berpotensi menimbulkan efek toksik sehingga induksi kerusakan ginjal murni diakibatkan oleh karbon tetraklorida. Kadar kreatinin serum kontrol olive oil pada jam ke 48 adalah 0,58 ± 0,02 mg/dL dan kadar kreatinin serum kontrol olive oil jam ke 0 adalah 0,46 ± 0,03 mg/dL. Kedua kelompok ini dibandingkan dan diperoleh hasil bahwa


40

perbedaan antar kedua kelompok ini bermakna 0,033 (p<0,05) (Gambar 9 dan Tabel VI), meskipun terdapat perbedaan yang bermakna namun kadar kreatinin serum kontrol olive oil masih dalam kisar normal menurut Verwij dkk (1988) yang menyebutkan kadar kreatinin normal tikus adalah 0,43 - 0,70 mg/dL, sehingga olive oil dalam penelitian ini tidak memicu terjadinya ketoksikan ginjal.

Gambar 9. Diagram batang rata-rata kadar kreatinin serum tikus setelah pemberian olive oil pada selang waktu 0 dan 48 jam Tabel VI. Hasil uji t-berpasangan kadar kreatinin serum tikus setelah pemberian olive oil pada selang waktu 0 dan 48 jam Selang waktu (jam)

0

0

48 B

48 B Keterangan : B = Berbeda bermakna (p≤ 0,05)

J. Kontrol Karbon Tetraklorida Dosis 2 mL/kgBB Kadar kreatinin serum pada kelompok kontrol toksin diukur untuk mengetahui pengaruh pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB sebagai


41

senyawa model penginduksi kerusakan ginjal. Kontrol toksin bisa dijadikan patokan dalam menganalisis efek nefroprotektif infusa biji Persea americana Mill. jika pasca induksi toksin, kadar kreatinin serum tidak meningkat dibandingkan dengan kontrol kelompok toksin. Kadar kreatinin serum tikus kelompok kontrol toksin adalah sebesar 1,00 ± 0,06 mg/dL, bila dibandingkan dengan kelompok kontrol olive oil (0,58 ± 0,02 mg/dL) terdapat perbedaan yang bermakna secara statistik (Tabel IV). Sebagai parameter utama terjadinya kerusakan ginjal, kadar kreatinin serum pada kelompok kontrol karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB menunjukkan peningkatan yang artinya terjadinya gangguan pada ginjal. Hal ini menunjukkan bahwa karbon tetraklorida mampu menginduksi kerusakan ginjal (nefrotoksik). Menurut Bashandy dan AlWasel (2011), kadar kreatinin serum tikus dengan gangguan pada ginjal akibat induksi karbon tetraklorida 1 mL/kgBB meningkat 1,65 kali lipat dibandingkan dengan nilai normal.

K. Kontrol Infusa Biji Persea americana Mill. Dosis 1142,86 mg/kgBB Kontrol infusa biji Persea americana Mill. perlu dibuktikan untuk melihat pengaruh infusa biji Persea americana Mill. terhadap kondisi ginjal berdasarkan tanda biokimia

namun tanpa adanya induksi karbon tetraklorida dosis 2

mL/kgBB. Pemilihan dosis kontrol infusa biji Persea americana Mill. didasarkan karena dosis ini merupakan dosis terbesar dalam perlakuan sehingga diharapkan hasilnya mampu menggambarkan keseluruhan dosis preperlakuan infusa baik itu dosis tengah ataupun dosis rendah.


42

Kadar kreatinin serum tikus kelompok kontrol infusa biji Persea americana Mill. adalah 0,58 ± 0,02 mg/dL. Data kadar kreatinin serum kelompok kontrol infusa dibandingkan dengan data kadar kreatinin serum kontrol olive oil (0,58 ± 0,02 mg/dL) maka terlihat data yang sama. Berdasarkan hasil uji statistik kedua kelompok kontrol

memiliki perbedaan yang tidak bermakna, jika

dibandingkan lagi dengan kelompok karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB terdapat perbedaan yang bermakna secara statistik seperti yang ditunjukkan pada tabel V. Hal ini membuktikan bahwa infusa biji Persea americana Mill. tidak memberikan pengaruh toksik pada ginjal tikus.

L. Kelompok Perlakuan Infusa Biji Persea americana Mill. Dosis 360,71 mg/kgBB; 642,06 mg/kgBB; dan 1142,86 mg/kgBB pada Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorisa Dosis 2 mL/kgBB Pasca praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dan induksi karbon tetraklorida dilakukan evaluasi efek nefroprotektif dari praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. Evaluasi tersebut berdasarkan ada atau tidaknya penurunan kadar kreatinin serum pasca pemberian infusa biji Persea americana Mill. selama enam hari berturut-turut dibandingkan dengan kadar kreatinin serum kelompok kontrol karbon tetraklorida 2 mL/kgBB. Pada tabel IV terlihat bahwa semakin besar dosis praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. maka efek nefroprotektif yang ditimbulkan semakin kecil. Hal ini dibuktikan dari kelompok praperlakuan infusa dosis tinggi memiliki rerata kadar kreatinin serum yang lebih besar daripada kelompok praperlakuan infusa dosis rendah dan dosis sedang. Hal ini menunjukkan bahwa dosis pemberian infusa yang tinggi tidak selalu


43

memberikan efek yang lebih besar juga, sehingga tidak ada kekerabatan antara dosis infus biji Persea americana Mill.

terhadap efek nefroprotektif yang

ditimbulkan. Kelompok praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 360,71 mg/kgBB memiliki kadar kreatinin serum sebesar 0,58 ± 0,02 mg/dL, bila dibandingkan dengan kelompok kontrol karbon tetraklorida 2 mL/kgBB didapati perbedaan yang bermakna (Tabel V). Kadar kreatinin kelompok infusa dosis 360,71 mg/kgBB memberikan perbedaan

yang tidak bermakna terhadap

kelompok kontrol olive oil. Hal ini menunjukkan bahwa infusa biji Persea americana Mill. dosis 360,71 mg/kgBB memiliki kemampuan proteksi ginjal yang besar hingga mengembalikan kadar kreatinin serum pada keadaan normal. Hal ini mungkin terjadi karena kandungan antioksidan pada dosis rendah efektif menurunkan kadar kreatinin serum akibat induksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB. Kelompok praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 642,06 mg/kgBB memiliki nilai kadar kreatinin serum sebesar 0,66 ± 0,03 mg/dL, bila dibandingkan dengan kelompok kontrol karbon tetraklorida 2 mL/kgBB terdapat perbedaan bermakna seperti yang ditunjukkan dalam tabel V. Hasil perbandingan kelompok praperlakuan infusa dosis 642,06 mg/kgBB terhadap kelompok kontrol olive oil memberikan hasil perbedaan yang tidak bermakna secara statistik (tabel IV). Hal ini berarti infusa biji Persea americana Mill. memiliki efek nefroprotektif hingga mengembalikan kadar kreatinin serum kembali seperti keadaan normal.


44

Kelompok praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 1142,86 mg/kgBB memiliki kadar kreatinin serum sebesar 0,74 ± 0,09 mg/dL, bila dibandingkan dengan kelompok kontrol karbon tetraklorida 2 mL/kgBB terdapat perbedaan bermakna seperti yang ditunjukkan pada tabel IV. Hasil perbandingan kelompok praperlakuan infusa dosis 1142,86 mg/kgBB terhadap kontrol olive oil memberikan hasil yang berbeda tidak bermakna secara statistik (tabel IV). Hal ini berarti infusa biji Persea americana Mill. dosis 1142,86 mg/kgBB mempunyai kemampuan proteksi ginjal terhadap kerusakan yang disebabkan oleh senyawa model karbon tetraklorida hingga kembali seperti keadaan normal. Dari ketiga peringkat dosis infusa biji Persea americana Mill. yang diberikan, ternyata ketiga peringkat dosis infusa memberikan efek penurunan kadar kreatinin serum terhadap kontrol karbon tetraklorida 2 mL/kgBB sehingga dapat dikatakan ketiga peringkat dosis memiliki efek nefroprotektif terhadap ginjal hewan uji. Penurunan kadar kreatinin serum pada masing masing kelompok selanjutnya disajikan dalam persen efek nefroprotektif (Tabel VII). Tabel VII. Persentase efek nefroprotektif praperlakuan infus biji Persea americana Mill. Dosis Infusa Infusa dosis 360,71 mg/kgBB Infusa dosis 642,06 mg/kgBB Infusa dosis 1142,86 mg/kgBB

Efek nefroprotektif (%) 100 80,95 61,90

Berdasarkan persentase efek nefroprotektif infusa biji Persea americana Mill. yang dapat menghambat kenaikan kadar kreatinin serum terhadap kerusakan ginjal akibat induksi karbon tetralorida 2 mL/kgBB adalah semua dosis praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. Hal ini didukung dengan hasil uji


45

statistik bahwa kadar kreatinin serum dari ketiga peringkat dosis praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. memiliki perbedaan yang bermakna terhadap kontrol karbon tetraklorida 2 mL/kgBB. Berdasarkan praperlakuan

infusa

perhitungan dosis

efek

360,71

nefroprotektif

mg/kgBB

terlihat

memiliki

kelompok

persentase

efek

nefroprotektif yang paling besar (Tabel VII). Bila dikonversikan untuk pemberian dosis infusa pada manusia dengan berat badan 70 kg maka diperoleh dosis sebesar 4g/70 kg. Sebagai saran untuk penelitian lebih lanjut bisa diteliti pengaruh infusa dengan rentang dosis dibawah 360,71mg/kgBB pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Mekanisme

nefrotoksik

dari

karbon

tetraklorida

sehingga

dapat

mengakibatkan gangguan ginjal adalah karbon tetraklorida akan mengalami metabolisme terlebih dahulu oleh sitokrom P450 khususnya CYP2E1 sehingga membentuk produk-produk radikal yang sifatnya destruktif, yaitu ●CCl3, selain itu keberadaan oksigen disekitar senyawa radikal tersebut akan menginduksi terjadinya reaksi lebih lanjut dan membentuk senyawa ●OOCCl3 yang sifatnya lebih reaktif. Senyawa-senyawa radikal yang terbentuk akan masuk kedalam sirkulasi darah. Ginjal yang merupakan organ penting dalam filtrasi darah akan terkena dampak akibat pembentukan senyawa radikal tersebut. Aliran darah yang tinggi menuju ginjal akan menyebabkan senyawa-senyawa radikal yang sudah terbentuk terkonsentrasi pada ginjal. Selama proses penyaringan darah di ginjal senyawa radikal akan mempengaruhi keadaan sekitar dimana radikal bebas yang


46

reaktif akan bereaksi dengan membran-membran sekitar dan menyebabkan kerusakan baik ditingkat seluler maupun jaringan. Kemungkinan mekanisme kandungan antioksidan biji Persea americana Mill. hingga mampu memberikan efek nefroprotektif adalah melengkapi elektron bebas yang dimiliki senyawa radikal hasil metabolisme CCl4, yaitu radikal bebas triklorometil (*CCl3) yang bersifat reaktif. Untuk lebih meyakinkan mekanisme proteksi infusa biji Persea americana Mill. bisa dilakukan penelitian khusus mengenai mekanisme aksi infusa biji Persea americana Mill. dalam memproteksi ginjal.

M. Gambaran Histopatologis 1. Kontrol karbon tetraklorida 2 mL/kgBB Hasil pembacaan gambaran histologis tiga sampel preparat untuk kontrol karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB memberikan gambaran bahwa 48 jam pasca induksi tidak dijumpai kerusakan yang berarti pada struktur jaringan ginjal, artinya kondisi jaringan ginjal yang dicuplik pada preparat tidak mengalami perubahan patologis yang spesifik dibandingkan dengan kondisi ginjal normal pada umumnya. Fotomikroskopik tersaji pada gambar 10. Hasil pembacaan histologis ginjal untuk kelompok kontrol karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB menyatakan tidak ada perubahan yang spesifik pada ginjal, padahal tanda biokimiawi kerusakan ginjal (kreatinin) sudah meningkat diatas normal.Kemungkinan karbon tetraklorida hanya sebatas menginduksi peningkatan tanda biokimia sedangkan kerusakan histologis/struktural ginjal


47

belum terjadi sehingga tidak ditemukan kerusakan pada preparat histologis kelompok kontrol karbon tetraklorida 2mL/kgBB. Kemungkinan lain yang dapat terjadi yaitu preparat histologis, yang dibuat dari cuplikan bagian ginjal, diambil dari daerah yang belum mengalami kerusakan sehingga perubahan secara struktural tidak teramati. Ginjal juga bukan organ target utama dari senyawa toksin karbon tetraklorida, ginjal merupakan organ target kedua yang kemungkinan akan rusak jika mengalami paparan toksin karbon tetraklorida.

B A

Gambar 10. Fotomikroskopik histologis ginjal normal (400x). A = glomerulus ginjal; B = lumen tubulus ginjal.

Menurut Makni, Chtourou, dan Garoul (2011) berdasarkan hasil penelitannya induksi karbon tetraklorida dosis 1 mL/kgBB mampu menginduksi terjadinya kerusakan ginjal dan dibuktikan dengan pembacaan preparat histologis yang ditemukan adanya kerusakan pada struktur ginjal bagian glomerulus dan tubulus.


48

2. Kontrol olive oil Hasil pembacaan gambaran histologis tiga sampel preparat untuk kontrol olive oil memberikan gambaran bahwa 48 jam pasca pemberian olive oil dijumpai perubahan struktur jaringan ginjal, artinya kondisi jaringan ginjal yang dicuplik pada preparat mengalami perubahan patologis yang spesifik dibandingkan dengan kondisi ginjal normal pada umumnya. Fotomikroskopik tersaji pada gambar 11. Berdasarkan pembacaan histologis ginjal kelompok kontrol Olive oil ditemukan perubahan struktur jaringan ginjal. Terdapat 2 macam perubahan yang terjadi yaitu Degenerasi Hidropik Epithel Tubulus (DHET) yang merupakan perubahan struktur sel tubulus ginjal sehingga tampak lebih besar karena adanya vakuola berbatas kurang jelas dalam sitoplasma.

Perubahan yang terjadi

dimungkinkan bersifat individual karena pada sampel preparat histologis yang lain tidak dijumpai tipe perubahan DHET.

A

B

Gambar 11. Fotomikroskopik histologis ginjal 48 jam pasca pemberian olive oil (400x). A = Degenerasi Hidropik Epithel Tubulus (DHET); B = Intratubular Hialin Cast (ITC) Tipe perubahan yang lain adalah Intratubular Hialin Cast (ITC), tipe perubahan ini ditandai dengan adanya masa homogen eosinofilik dalam lumen tubulus. Secara normal lumen tubulus tidak akan berwarna sekalipun diberi


49

pewarnaan, namun dalam sampel preparat ini ditemukan gambaran lumen dengan warna

yang homogen didalamnya sehingga mengindikasikan terjadinya

perubahan struktur terutama pada bagian tubulus. Hal ini dimungkinkan karena subyek uji mengalami gangguan filtrasi pada ginjal dan gangguan ini cenderung bersifat individual tergantung kondisi patologis hewan uji. Berdasarkan hasil pembacaan histologis tersebut olive oil memiliki pengaruh terhadap gangguan pada ginjal padahal berdasarkan tanda biokimia berupa kadar kreatinin tidak ditemukan kenaikan kadar kreatinin serum hingga melebihi batas normal (0,43 - 0,70 mg/dL), jadi dimungkinkan hasil pembacaan preparat histologis cenderung individual pada hewan uji tertentu saja yang memang memiliki kondisi patologis ginjal yang spesifik. 3. Kontrol infusa biji Persea americana Mill. dosis 1142,86 mg/kgBB Hasil pembacaan gambaran histologis tiga sampel preparat untuk kontrol infusa biji Persea americana Mill. dosis 1142,86 mg/kgBB memberikan gambaran bahwa 48 jam pasca pemberian infusa biji Persea americana Mill. dosis 1142,86 mg/kgBB tidak

dijumpai perubahan struktur jaringan ginjal,

artinya kondisi jaringan ginjal yang dicuplik pada preparat tidak mengalami perubahan patologis yang spesifik dibandingkan dengan kondisi ginjal normal pada umumnya. Fotomikroskopik diwakilkan pada gambar 10. Berdasarkan hasil pembacaan preparat histologis untuk kelompok kontrol infusa biji Persea americana Mill. secara umum tidak ditemukan perubahan struktur histologis ginjal yang spesifik. Kondisi preparat histologis memiliki kondisi yang secara umum sama dengan kondisi ginjal normal tanpa perlakuan.


50

Hal ini menunjukkan bahwa infusa biji Persea americana Mill. dengan dosis tinggi tidak memberikan pengaruh perubahan struktural jaringan ginjal sehingga bisa disimpulkan infusa biji Persea americana Mill. tidak menginduksi terjadinya gangguan pada ginjal. Hal ini sesuai dengan hasil pengukuran kadar kreatinin serum kelompok kontrol infusa biji Persea americana Mill. yang tidak mengalami peningkatan signifikan jika dibandingkan dengan kadar kraetinin sebelum pemberian infusa. 4. Kelompok praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 360,71 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB Hasil pembacaan gambaran histologis

tiga sampel preparat untuk

praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 360,71 mg/kgBB yang kemudian diinduksi karbon tetraklorida memberikan gambaran bahwa 48 jam pasca induksi karbon tetraklorida tidak dijumpai perubahan struktur jaringan ginjal, artinya kondisi jaringan ginjal yang dicuplik pada preparat tidak mengalami perubahan patologis yang spesifik dibandingkan dengan kondisi ginjal normal pada umumnya. Fotomikroskopik tersaji pada gambar 10. Berdasarkan hasil pembacaan preparat histologis untuk kelompok praperlakuan infus biji Persea americana Mill. dosis 360,71 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB tidak dijumpai perubahan patologi yang spesifik pada preparat histologis ginjal, artinya kondisi ginjal sama seperti kondisi ginjal normal pada umumnya yang tidak diberi perlakuan. Secara histologis, belum bisa dipastikan kemampuan infusa mencegah kerusakan strukural jaringan ginjal karena kondisi histologis kelompok kontrol karbon tetraklorida juga tidak


51

mengalami perubahan, namun berdasarkan tanda biokimiawi (kadar kreatinin serum) mengalami reduksi dibandingkan kelompok kontrol karbon tetraklorida sehingga infusa bisa dikatakan memiliki pengaruh terhadap kadar kreatinin serum tikus yang terinduksi karbon tetraklorida. 5. Kelompok praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 642,06 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB Hasil pembacaan gambaran histologis


praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 642,4 mg/kgBB yang kemudian diinduksi karbon tetraklorida memberikan gambaran bahwa 48 jam pasca induksi karbon tetraklorida dijumpai perubahan struktur jaringan ginjal, artinya kondisi jaringan ginjal yang dicuplik pada preparat mengalami perubahan patologis yang spesifik dibandingkan dengan kondisi ginjal normal pada umumnya. Fotomikroskopik tersaji pada gambar 12.

A

Gambar 12. Fotomikroskopik histologis ginjal kelompok praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 642,06 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB(400x). A = Intratubular Hialin Cast (ITC)


52

Berdasarkan hasil pembacaan preparat histologis, ditemukan tipe perubahan pada struktur jaringan berupa Intratubular Hialin Cast (ITC) yang ditandai dengan adanya masa homogen eosinofil dalam lumen tubulus. Hal ini dimungkinkan karena hewan uji mengalami ganguan filtrasi pada ginjal. Secara histologis, belum bisa dipastikan kemampuan infusa dosis 642,06 mg/kgBB mencegah kerusakan strukural jaringan ginjal karena kondisi histologis kelompok kontrol karbon tetraklorida juga tidak mengalami perubahan, namun terjadi perubahan tanda biokimiawi (kadar kreatinin serum) berupa penurunan dibandingkan kelompok kontrol karbon tetraklorida. Berdasarkan hal tersebut dapat dikatakan infusa memiliki pengaruh terhadap kadar kreatinin serum tikus yang terinduksi karbon tetraklorida.

A

B

Gambar 13. Fotomikroskopik histologis ginjal kelompok praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 642,06 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB(400x). A = Degenerasi Hidropik Epithel Tubulus (DHET); B = Nefritis Interstitialis (NI) Dari salah satu preparat histologis kelompok praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 642,06 mg/kgBB + karrbon tetraklorida 2mL/kgBB


53

ditemukan tipe kerusakan Nefritis Interstitialis (NI) dan Degenerasi Hidropik Epithel Tubulus (DHET) (Gambar 13) pada hewan uji yang sama. Tipe kerusakan ini tidak dijumpai pada hewan uji yang lain pada kelompok yang sama artinya tipe kerusakan yang dialami bersifat individual dan tidak terkait dengan perlakuan infusa biji Persea americana Mill. yang diberikan. 6. Kelompok praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 1142,86 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB Hasil pembacaan gambaran histologis


praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dosis 1142,86 mg/kgBB yang kemudian diinduksi karbon tetraklorida memberikan gambaran bahwa 48 jam pasca induksi karbon tetraklorida tidak dijumpai perubahan struktur jaringan ginjal, artinya kondisi jaringan ginjal yang dicuplik pada preparat

tidak

mengalami perubahan patologis yang spesifik dibandingkan dengan kondisi ginjal normal pada umumnya. Fotomikroskopik diwakili oleh gambar 10. Berdasarkan hasil pembacaan preparat histologis untuk kelompok praperlakuan infus biji Persea americana Mill. dosis 1142,86 mg/kgBB + karbon tetraklorida 2 mL/kgBB tidak dijumpai perubahan patologi yang spesifik pada preparat histologis ginjal, artinya kondisi ginjal sama seperti kondisi ginjal normal pada umumnya yang tidak diberi perlakuan. Secara histologis, belum bisa dipastikan kemampuan infusa mencegah kerusakan strukural jaringan ginjal karena kondisi histologis kelompok kontrol karbon tetraklorida juga tidak mengalami perubahan, namun berdasarkan tanda biokimiawi (kadar kreatinin serum) dengan praperlakuan infusa dosis 1142,86 mg/kgBB mengalami reduksi


54

dibandingkan kelompok kontrol karbon tetraklorida sehingga infusa dosis 1142,86 mg/kgBB juga memiliki pengaruh terhadap kadar kreatinin serum tikus yang terinduksi karbon tetraklorida.

N. Rangkuman Pembahasan Hasil penelitian menunjukkan praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. pada ketiga peringkat dosis mampu menurunkan kadar kreatinin serum dibandingkan dengan kelompok kontrol karbon tetraklorida 2 mL/kgBB, artinya infusa biji Persea americana Mill. mampu memberikan pengaruh perubahan biokimiawi terhadap kerusakan ginjal yang diakibatkan oleh induksi senyawa model karbon tetraklorida. Berdasarkan gambaran histologis tiap-tiap kelompok perlakuan belum bisa didapatkan kesimpulan bahwa infusa memberikan efek nefroprotektif terhadap kerusakan ginjal akibat induksi karbon tetraklorida karena pada kelompok kontrol karbon tetraklorida 2 mL/kgBB tidak ditemukan perubahan struktural jaringan ginjal yang mengindikasikan kerusakan sehingga gambaran histologis tidak dapat dibandingkan karena dimungkinkan karbon tetraklorida belum menginduksi kerusakan secara struktural hanya sebatas peningkatan tanda biokimiawi. Data kadar kreatinin serum yang diperoleh menggambarkan bahwa dosis rendah infusa biji Persea americana Mill. lebih besar efek penurunan kadar kreatinin serumnya dibandingkan dengan dosis tinggi infusa biji Persea americana Mill., artinya tidak ada kekerabatan dosis praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. dengan efek nefrotoksik yang dihasilkan. Hal ini


55

dibuktikan dari perolehan hasil rerata ± SE kadar kreatinin serum untuk praperlakuan dosis rendah hingga tinggi berturut-turut sebesar 0,58 ± 0,02; 0,66 ± 0,03; dan 0,74 ± 0,09 mg/dL. Hasil ini menjawab permasalah pertama dalam penelitian ini bahwa pemberian infusa biji Persea americana Mill. memiliki pengaruh pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida berdasarkan penurunan kadar kreatinin serum serta gambaran histologis ginjal. Dosis infusa biji Persea americana Mill. yang paling efektif memberikan efek nefrotoksik

adalah dosis 360,71 mg/kgBB. Dosis 360,71 mg/kgBB

merupakan dosis terendah dalam penelitian ini namun efek nefroprotektif yang diberikan paling besar hal ini dapat dilihat dari persentase efek nefroprotektif infusa biji Persea americana Mill. dosis 360,71 mg/kgBB yaitu sebesar 100 %. Kemungkinan adanya kandungan antioksidan biji Persea americana Mill. mampu memberikan efek nefroprotektif dengan cara melengkapi elektron bebas yang dimiliki senyawa radikal hasil metabolisme CCl4 yaitu radikal bebas triklorometil (*CCl3) yang bersifat reaktif, sehingga serangkaian reaksi destruktif dari radikal bebas mampu dihambat dan terhenti. Informasi terkait mekanisme proteksi infusa biji Persea americana Mill. secara mendalam bisa diketahui melalui penelitian khusus tentang mekanisme aksi infusa biji Persea americana Mill. dalam memproteksi ginjal. Berdasarkan uraian di atas tentang adanya pengaruh pemberian infusa biji Persea americana Mill. maka dapat dikembangkan penelitian terkait formulasi sediaan biji Persea americana Mill. sebagai salah satu alternatif pengobatan/ pencegahan penyakit ginjal.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan Berdasarkan hasil dan analisis statistik yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan : 1. Pemberian infusa biji Persea americana Mill. memberikan pengaruh nefroprotektif pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida yang dilihat berdasarkan penurunan kadar kreatinin serum serta gambaran histologis ginjal. 2. Semua variasi dosis infusa biji Persea americana Mill. yaitu 360,71; 642,06; 1142,86 mg/kgBB mampu memberikan efek nefroprotektif berdasarkan kadar kreatinin serum dan gambaran histologis ginjal pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi CCl4. B. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang : 1. Mekanisme aksi infusa biji Persea americana Mill. dalam memberikan proteksi pada ginjal. 2. Formulasi sediaan biji Persea americana Mill. sebagai alternatif pengobatan/ pencegahan penyakit kerusakan/ ganguan ginjal, 3. Penelitian efek nefroprotektif infusa biji Persea americana Mill. dengan rentang dosis dipersempit antara 360,71 – 642,06 mg/kgBB.

56


DAFTAR PUSTAKA Afrianti, L., 2010, Bandung, hal. 33.

Macam Buah-Buahan untuk Kesehatan, Alfabeta,

Anggraeni, A., 2006, Pengaruh Pemberian Infusa Biji Alpukat (Persea americana Mill.) terhadap Kadar Glukosa Darah Tikus Wistar yang Diberi Beban Glukosa, Skripsi, Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang. ATSDR, 2005, Carbon Tetrachloride (Tetracloruro de Carbono), www.atsdr.gov.8080/ToxProfile/phs8905.html, diakses tanggal 24 April 2013. BAPPENAS, 2000, Alpukat/ Avokad (Persea americana Mill / Persea gratissima Gaerth), Deputi Menegristek Bidang Pendayagunaan dan Pemasyarakatan Ilmu Pengetahuan dan Teknologi, Jakarta, hal. 1-2. Baron, D. N., 1990, Kapita Selekta Patologi Klinik, Edisi 4, EGC, Jakarta, hal. 113-231. Bashandy, S.A., dan AlWasel, S.H., 2011, Carbon Tetrachloride-induced Hepatotoxicity and Nephrotoxicity in Rats: Protective Role of Vitamin C, Journal of Pharmacology and Toxicology, 6(3), 283 – 292. Direktorat Jenderal Bina Kesehatan, 2008, Farmakope Herbal Indonesia, Edisi I, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1986, Sediaan Galenik, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. ECO-USA, 2006, Carbon Tetrachloride, www.eco-usa.net/Aoxcis/ccl4.shtml, diakses tanggal 25 April 2013. Favier, A. E., Cader, J., Kalynawarman, B., Fontcave, M., and Pierre, J. L., 1995, Analysis of Free Radicals in Biologycal System, Berkhauser-Verleg, Bassel-Boston Berli, pp. 83-84. Firmansyah, A. M., 2010, Usaha Memperlambat Perburukan Penyakit Ginjal Kronik ke Penyakit Ginjal Stadium Akhir. Cermin Dunia Kedokteran, ISSN: 0125-913 C/ 176/ 37(3). Gregus and Klaaseen, C. D., 2001, Mechanism of Toxicity, in Klaaseen, C. D., Cassaret and Doull’s Toxocology : the Basic Science Poison, 6th edition, McGraw-Hill, New York, pp. 57-64.

57

57


Gunin, A., 2000, Histology Images: Urinary http://www.histol.chuvashia.com/atlas-en/urinary-01-en.htm, tanggal 20 Juli 2013.

System, diakses

Guyton, A. C., and Hall, J. E., 1997, Textbook of Medical physiology, 9th edition, pp. 287-294, diterjemahkan oleh Irawati Setiawan, Alex Santoso, Ken Ariata, Tengadi, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Halliwell, B., and Gutteridge, JMC., 1999, Free Radicals in Biology and Medicine, 3rd edition, Oxford University Press, New York. Hodgson, E., 2010, A Textbook of Modern Toxicology, Fourth Edition, A John Wiley&Sons, Inc., North Carolina State University, United States of America, pp. 291-302. Ivor., and Schneider., 2005, Learning from failure : congestive heart failure in postgenomic age.review series introduction. J Clin Invest; 495-499. Janakat, S., dan Al-Merie, H., 2002, Optimization of the dose and route of injection, and characterization of the time course of carbon tetrachlorideinduced hepatotoxicity in the rat, J. Pharm. Tox. Methods, 48, pp.41-44. Jeon T. I., Hwang S. G., Park N.G., Shin S. I., Choi S. D., Park D. K., 2003, Antioxidative effect of chitosan on chronic carbon tetrachloride induced hepatic injury in rat, Toxicology, 187: 67-73. Laboratorium Amerind Bio-Clinic, 2010, Uji Fungsi Ginjal, http://www.abclab.co.id/?p=944, diakses tanggal 27 November 2012. Lu, F. C., 1995, Basic Toxicology Fundamental Target Organ, and Risk Assesment, Edisi 2, alih bahasa oleh : Nugroho Edi., hal. 85-97, UI Press, Jakarta. Makni, M., Chtourou, Y., Garoul, E.M., Boudawara, T., Fetoul, H., 2011, Carbon Tetrachloride Nephrotoxicity and DNA Damage in Rats: Protective Role of Vanillin, Hum & Exper Tox, 1-9. Malangngi, L., Meiske, S., dan Jessy, J., 2012, Penentuan Kandungan Tanin dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat (Persea americana Mill), Jurnal MIPA UNSRAT , 1(1) 5-10. Manna, P. M., Sinha., P.C, and Sil., 2006, Aqueous extract of Terminalia arjuna prevents carbon tetrachloride induced hepatic and renal disorder, BMC Complementary Alternative Med, 6-33.

58


Marlinda, M., Meiske, S., dan Audy, D., 2012, Analisis Senyawa Metabolit Sekunder dan Uji Toksisitas Ektrak Etanol Biji Buah Alpukat (Persea americana Mill,), Jurnal MIPA UNSRAT, 1 (1), pp. 24-28. Okwu,D.E., Okwu,M.E., 2004, Chemical composition of Spondiasmombia Linn plant parts, J.Sustain Agric.Environ, 6, 140-147. Park Y. W., Zhu S., Palaniappan L., Heshka S., Carnethon M. R.,and Heymsfield S. B., 2003, The Metabolic Syndrome Prevalence and Associated Risk Factor Findings in the US Population from the Third National Health and Nutrition Examination Survey 1988-1999, Arch Intern Med, 163, pp. 36-427. Ross, M.H., dan Pawlina, W., 2006, Histology : A Text and Atlas, 5th edition, Lippincott Williams & Wilkins, United States of America, pp. 666-674. Rukmana, 1997, Budidaya Alpukat, Kanisius, Yogyakarta. Salah, W., Miller, N.J.,Pangauga, T., Bolwell, G.P., Rice, E., and Evans, C., 1995, Polyphenolic flavonols as scavengers of aqueous phase radicals as chainbreaking antioxidant, Arch. Biochem. Biorh, pp. 2, 339-346. Santoso, H., dan Nurliani, A., 2006, Efek Doksisiklin Selama Masa Organogenesis pada Struktur Histologi Organ Hati dan Ginjal Fetus Mencit, Jurnal Penelitian Bioscientiae, 3 (1) , 15-27. Schoolwerth, A.C., Engelgau, M.M., Hostetter, T.H., Rufo, K.H., McClelan, W.M., 2006. Chronic Kidney Disease a Publik Health Problem that Needs a Public Health Action Plan, Prevention Chronic Disease, 3(2), 1-5. SiKerNas, 2010, Karbon Tetraklorida, Pusat Informasi Obat dan Makanan, Badan POM RI, Jakarta, hal. 1-3. Stine, K. B., dan Brown, T. M., 1996, Principles of Toxicology, Lewis Publisher, CRC Press. Inc, USA, pp. 74-80. Sutedjo, A. Y., 2006, Mengenal Penyakit Melalui Hasil Pemeriksaan Laboratorium, Amara Books, Yogyakarta, hal. 75-82. Timbrell, J. A., 2008, Principles of Biochemical Toxicology, 4th Edition, Informa Healthcare, New York, pp.308-311. Verwij, J., Fronius, S.K., Stuurman, M., Triet, A.J.V., Hattum, L.V., Vries, J.D., dan Pinedo, H.M., 1988, Mitomycin C-induced organ toxicity in Wistar rats: a study with special focus on the kidney, J. Cancer Res. Clin. Oncol., 144, 137-141.

59


WHO, 2002, Summary Carbon Tetrachloride, www.who.int/pcs/ehc/summaries/ ehc208.html, diakses tanggal 24 April 2013. Widmann, F. K., 1995, Tinjauan Klinis atas Hasil Pemerikasaan Laboratorium, Edisi 9, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, hal. 254257. Winarsi, H., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas, Kanisius, Yogyakarta. Windrawati, T.G., 2013, Efek Hepatoprotektif Ektrak Metanol:Air (50:50) Daun Macaranga tanarius L. terhadap Kadar ALT-AST Serum pada TIkus Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, 33, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Xu, J.Y., Su, Y.Y., Cheng, J.S., Li, S.X., Liu, R., Li, W.X., Su, G.T., Li, Q.N., 2010, Protective Efects of Fullerenol on Carbon Tetrachloride-Induced Acute Hepatotoxicity and Nephrotoxicity in rats, Carbon 48, 1388-1396. Yuniarti, T., 2008, Ensiklopedia Tanaman Obat Tradisional, Cetakan Pertama, Penerbit Media Pressindo, Yogyakarta. Zhang, L., Zuo, L., Wang, F., Wang, M., Wang, S., Liu L., Wang H., 2007, Metabolic Syndrome and Chronic Kidney Disease in a Chinese Population Aged 40 Years and Older, Mayo Clin Proc, 82(7), 7-822.

60


61

LAMPIRAN


Lampiran 1. Foto infusa biji Persea americana Mill.

Lampiran 2. Foto serbuk biji Persea americana Mill.

62


Lampiran 3. Surat Ethics Committee Approval

63


Lampiran 4. Surat Pengesahan Determinasi

64


Lampiran 5. Surat pengesahan hasil pembacaan preparat histologis ginjal

65


66

Lampiran 6. Analisis statistik kadar kreatinin serum pada uji pendahuluan penentuan waktu pencuplikan darah induksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

NPar Tests Descriptive Statistics N

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

Kreatinin_0

4

.3500

.05774

.30

.40

Kreatinin_24

4

.5250

.09574

.40

.60

Kreatinin_48

4

1.0000

.14142

.90

1.20

Kreatinin_72

4

.4500

.05774

.40

.50

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Kreatinin_0 Kreatinin_24 Kreatinin_48 Kreatinin_72 N Normal Parameters

a

Mean Std. Deviation

4

4

4

4

.3500

.5250

1.0000

.4500

.05774

.09574

.14142

.05774

Most Extreme

Absolute

.307

.283

.260

.307

Differences

Positive

.307

.217

.260

.307

Negative

-.307

-.283

-.240

-.307

Kolmogorov-Smirnov Z

.614

.567

.520

.614

Asymp. Sig. (2-tailed)

.846

.905

.949

.846

a. Test distribution is Normal.


67

Oneway Descriptives Kreatinin 95% Confidence Interval for Mean

N Orientasi CCl4 jam ke-0 Orientasi CCl4 jam ke-24 Orientasi CCl4 jam ke-48 Orientasi CCl4 jam ke-72 Total

Mean

Std.

Std.

Lower

Upper

Deviation

Error

Bound

Bound

4

.3500

.05774 .02887

.2581

.4419

.30

.40

4

.5250

.09574 .04787

.3727

.6773

.40

.60

4 1.0000

.14142 .07071

.7750

1.2250

.90

1.20

4

.4500

.05774 .02887

.3581

.5419

.40

.50

16

.5812

.27134 .06783

.4367

.7258

.30

1.20

Test of Homogeneity of Variances Kreatinin Levene Statistic 1.100

df1

df2 3

Sig.

12

.387

ANOVA Kreatinin Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

Minimum Maximum

Mean df

Square

.997

3

.108

12

1.104

15

F

.332 37.093

.009

Sig. .000


68

Post Hoc Tests Multiple Comparisons Kreatinin Scheffe 95% Confidence Interval

Mean

(I) Kelompok

(J) Kelompok

Orientasi CCl4 jam

Orientasi CCl4 jam

ke-0

ke-24 Orientasi CCl4 jam ke-48 Orientasi CCl4 jam ke-72

Orientasi CCl4 jam

Orientasi CCl4 jam

ke-24


Orientasi CCl4 jam

Orientasi CCl4 jam

ke-48


Orientasi CCl4 jam

Orientasi CCl4 jam

ke-72


Difference

Std.

(I-J)

Error

Sig.

Lower

Upper

Bound

Bound

-.17500

.06693

.132

-.3916

.0416

*

.06693

.000

-.8666

-.4334

-.10000

.06693

.546

-.3166

.1166

.17500

.06693

.132

-.0416

.3916

*

.06693

.000

-.6916

-.2584

.07500

.06693

.743

-.1416

.2916

.65000

*

.06693

.000

.4334

.8666

.47500

*

.06693

.000

.2584

.6916

.55000

*

.06693

.000

.3334

.7666

.10000

.06693

.546

-.1166

.3166

-.07500

.06693

.743

-.2916

.1416

*

.06693

.000

-.7666

-.3334

-.65000

-.47500

-.55000


Homogeneous Subsets Kreatinin Scheffe Subset for alpha = 0.05 Kelompok

N

1

2

Orientasi CCl4 jam ke-0

4

.3500


4

.4500


4

.5250


4

Sig.

1.0000 .132

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

1.000

69


Lampiran 7. Analisis statistik kadar kreatinin serum pada kontrol Olive oil


Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

Kreatinin_0

5

.4600

.05477

.40

.50

Kreatinin_48

5

.5800

.04472

.50

.60

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Kreatinin_0 N

Kreatinin_48 5

5

.4600

.5800

.05477

.04472

Absolute

.367

.473

Positive

.263

.327

Negative

-.367

-.473


.822

1.057


.510

.214

Normal Parameters

a

Mean Std. Deviation

Most Extreme Differences


T-Test Paired Samples Statistics Mean Pair 1

N

Std. Deviation

Std. Error Mean

Olive_jam_ke0

.4600

5

.05477

.02449

Olive_jam_ke48

.5800

5

.04472

.02000

Paired Samples Correlations N Pair 1

Olive_jam_ke0 & Olive_jam_ke48

Correlation 5

-.408

Sig. .495

70


71

Paired Samples Test Paired Differences 95% Confidence Interval of

Mean Pair Olive_jam_ke0 1

Olive_jam_ke48

.12000

Std.

Std. Error

Deviation

Mean

.08367

.03742

the Difference Lower -.22389

Diagram batang rata-rata kadar kreatinin serum tikus setelah pemberian olive oil pada selang waktu 0 dan 48 jam

Sig. (2-

Upper -.01611

t

df -

3.207

4

tailed) .033


72

Lampiran 8. Analisis statistic kadar kreatinin serum praperlakuan infusa biji Persea americana Mill. setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB


Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

Kontrol_CCl4

5

1.0000

.12247

.90

1.20

Kontrol_Olive

5

.5800

.04472

.50

.60

Kontrol_Infusa

5

.5800

.04472

.50

.60

Perlakuan_Dosis1

5

.5800

.04472

.50

.60

Perlakuan_Dosis2

5

.6600

.05477

.60

.70

Perlakuan_Dosis3

5

.7400

.08944

.60

.80

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Kontrol_ Kontrol_Olive Kontrol_Infusa Perlakuan_Dosis1

Perlakuan_Dosis2

Perlakuan_Dosis3

CCl4

5

5

5

5

5

5

Mean

1.0000

.5800

.5800

.5800

.6600

.7400

Std. Deviation

.12247

.04472

.04472

.04472

.05477

.08944

N Normal Parameters

a

Most

Absolute

.300

.473

.473

.473

.367

.349

Extreme

Positive

.300

.327

.327

.327

.263

.251

Negative

-.207

-.473

-.473

-.473

-.367

-.349


.671

1.057

1.057

1.057

.822

.780


.759

.214

.214

.214

.510

.577

Differences



73

Oneway Descriptives Kreatinin 95% Confidence Interval for Mean

N Kontrol CCl4 2mL/kgBB Kontrol Olive Oil Kontrol Infusa dosis 1142,86 mg/kgBB

Mean

Std.

Std.

Lower

Upper

Deviation

Error

Bound

Bound

Minimum Maximum

5 1.0000

.12247 .05477

.8479

1.1521

.90

1.20

5

.5800

.04472 .02000

.5245

.6355

.50

.60

5

.5800

.04472 .02000

.5245

.6355

.50

.60

5

.5800

.04472 .02000

.5245

.6355

.50

.60

5

.6600

.05477 .02449

.5920

.7280

.60

.70

5

.7400

.08944 .04000

.6289

.8511

.60

.80

30

.6900

.16682 .03046

.6277

.7523

.50

1.20

Praperlakuan Infusa dosis 360,71 mg/kgBB Praperlakuan Infusa dosis 642,06 mg/kgBB Praperlakuan Infusa dosis 1142,86 mg/kgBB Total

Test of Homogeneity of Variances Kreatinin Levene Statistic 1.310

df1

df2 5

24

Sig. .293


74

ANOVA Kreatinin Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

Mean df

Square

.679

5

.128

24

.807

29

F

Sig.

.136 25.463

.000

.005

Post Hoc Tests Multiple Comparisons Kreatinin Scheffe 95% Confidence Interval

Mean

(I) Kelompok

(J) Kelompok

Kontrol CCl4

Kontrol Olive Oil

2mL/kgBB

Kontrol Infusa dosis 1142,86 mg/kgBB

Difference

Std.

(I-J)

Error

Sig.

Lower

Upper

Bound

Bound

.42000

*

.04619

.000

.2528

.5872

.42000

*

.04619

.000

.2528

.5872

.42000

*

.04619

.000

.2528

.5872

.34000

*

.04619

.000

.1728

.5072

Praperlakuan Infusa dosis 360,71 mg/kgBB Praperlakuan Infusa dosis 642,06 mg/kgBB


75

Praperlakuan Infusa dosis 1142,86

.26000

*

.04619

.001

.0928

.4272

-.42000

*

.04619

.000

-.5872

-.2528

.00000

.04619

1.000

-.1672

.1672

.00000

.04619

1.000

-.1672

.1672

-.08000

.04619

.700

-.2472

.0872

-.16000

.04619

.067

-.3272

.0072

*

.04619

.000

-.5872

-.2528

.00000

.04619

1.000

-.1672

.1672

.00000

.04619

1.000

-.1672

.1672

-.08000

.04619

.700

-.2472

.0872

-.16000

.04619

.067

-.3272

.0072

*

.04619

.000

-.5872

-.2528

.00000

.04619

1.000

-.1672

.1672

.00000

.04619

1.000

-.1672

.1672

mg/kgBB Kontrol Olive Oil

Kontrol CCl4 2mL/kgBB Kontrol Infusa dosis 1142,86 mg/kgBB Praperlakuan Infusa dosis 360,71 mg/kgBB Praperlakuan Infusa dosis 642,06 mg/kgBB Praperlakuan Infusa dosis 1142,86 mg/kgBB

Kontrol Infusa dosis

Kontrol CCl4

1142,86 mg/kgBB

2mL/kgBB Kontrol Olive Oil

-.42000

Praperlakuan Infusa dosis 360,71 mg/kgBB Praperlakuan Infusa dosis 642,06 mg/kgBB Praperlakuan Infusa dosis 1142,86 mg/kgBB Praperlakuan Infusa

Kontrol CCl4

dosis 360,71

2mL/kgBB

mg/kgBB

Kontrol Olive Oil Kontrol Infusa dosis 1142,86 mg/kgBB

-.42000


76

Praperlakuan Infusa dosis 642,06

-.08000

.04619

.700

-.2472

.0872

-.16000

.04619

.067

-.3272

.0072

*

.04619

.000

-.5072

-.1728

.08000

.04619

.700

-.0872

.2472

.08000

.04619

.700

-.0872

.2472

.08000

.04619

.700

-.0872

.2472

-.08000

.04619

.700

-.2472

.0872

*

.04619

.001

-.4272

-.0928

.16000

.04619

.067

-.0072

.3272

.16000

.04619

.067

-.0072

.3272

.16000

.04619

.067

-.0072

.3272

.08000

.04619

.700

-.0872

.2472

mg/kgBB Praperlakuan Infusa dosis 1142,86 mg/kgBB Praperlakuan Infusa

Kontrol CCl4

dosis 642,06

2mL/kgBB

mg/kgBB


-.34000

Praperlakuan Infusa dosis 360,71 mg/kgBB Praperlakuan Infusa dosis 1142,86 mg/kgBB Praperlakuan Infusa

Kontrol CCl4

dosis 1142,86

2mL/kgBB

mg/kgBB


-.26000

Praperlakuan Infusa dosis 360,71 mg/kgBB Praperlakuan Infusa dosis 642,06 mg/kgBB *. The mean difference is significant at the 0.05 level.


77

Homogeneous Subsets Kreatinin Scheffe Subset for alpha = 0.05 Kelompok

N

1

2

Kontrol Olive Oil

5

.5800

Praperlakuan Infusa dosis 360,71 mg/kgBB

5

.5800

Kontrol Infusa dosis 1142,86 mg/kgBB

5

.5800


5

.6600


5

.7400

Kontrol CCl4 2mL/kgBB

5

Sig.

1.0000 .067

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

Gambar 8. Diagram batang rata-rata kadar kreatinin serum tikus praperlakuan infusa biji Persea Americana Mill. 1x sehari selam 6 hari terinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB

1.000


Lampiran 9. Perhitungan efek nefroprotektif Rumus perhitungan efek nefroprotektif :

Maka perhitungan efek nefroprotektif adalah sebagai berikut : 

Kelompok praperlakuan infusa dosis 360,71 mg/kgBB (po) + induksi CCl4 2 mL/kgBB : (1,00 − 0,58) − (0,58 − 0,58) (1,00 − 0,58)



100 % = 100 %

Kelompok praperlakuan infusa dosis 642,8 mg/kgBB (po) + induksi CCl4 2 mL/kgBB :



(1,00 − 0,58) − (0,66 − 0,58) (1,00 − 0,58)

100 % = 80,95 %

(1,00 − 0,58) − (0,74 − 0,58) (1,00 − 0,58)

100 % = 61,90 %

Kelompok praperlakuan infusa dosis 1142,86 mg/kgBB (po) + induksi CCl4 2 mL/kgBB :

78


79

Lampiran 10. Perhitungan penetapan peringkat dosis infusa biji Persea americana Mill. kelompok perlakuan Dasar penetapan peringkat dosis : 

Berat tertinggi tikus = 350 g



Penggunaan serbuk biji Persea Americana Mill. di masyarakat = 2 sendok makan (4 g) maka diasumsikan dosis penggunaan = 4g/ 70kgBB



Pemberian cairan maksimal secara per oral untuk hewan uji tikus = 5 mL



Konsentrasi maksimal infusa biji Persea Americana Mill. yang dapat dibuat adalah 8 g/ 100mL Deengan dasar tersebut maka ditetapkan dosis tertinggi D x BB = C x V (Dosis) x (Berat Badan) = (Konsentrasi) x (Volume Pemberian) D x 350 g BB = 8 g/ 100 mL x 5 mL D = 1142,86 mg/kgBB (dosis tertinggi)



Dosis penggunaan di masyarakat dikonversikan untuk pemberian pada hewan uji tikus dan dijadikan dosis rendah kelompok perlakuan. Faktor konversi dosis dari manusia ke tikus = 0,018 (BB hewan uji 200 g) Dosis rendah = 0,018 x 4 g = 0,72g/ 200 gBB = 360 mg/kgBB



Perhitungan faktor kelipatan dosis adalah sebagai berikut :

ℎ

n = Jumlah peringkat dosis yang digunakan dalam perlakuan, maka :


80

1142,86 = 1,78 360



Perhitungan dosis rendah dan dosis tengah ditentukan sebagai berikut ; D = 1142,86 mg/kgBB : 1,78 = 642,06 mg/kgBB D = 642,06 mg/kgBB : 1,78 =360,71 mg/kgBB Lampiran 11. Penetapan kadar air serbuk biji Persea americana Mill. Penetapan kadar air dilakukan dengan menggunakan alat moisture balance

dengan metode Gravimetri. Pemanasan serbuk dilakukan pada suhu 110oC selama 15 menit. Tabel VIII. Hasil penetapan kadar air serbuk biji Persea americana Mill. Bobot Sebelum pemanasan Sesudah pemanasan Kadar air Rata-rata kadar air

Replikasi I

Replikasi II

Replikasi III

5,000 g

5,000 g

5,000 g

4,624 g

4,636 g

4,630 g

7,52 %

7,28 % 7,4 %

7,4 %

Kadar air = −





Replikasi I : 5,000 − 4,624 5,000

Replikasi II :

5,000 − 4,636 5,000

100 % = 7,52 %

100 % = 7,28 %

ℎ

100 %




81

Replikasi III : 5,000 − 4,630 5,000

100 % = 7,4 %

Syarat serbuk yang baik memiliki kadar air kurang dari 10 %. Kadar air serbuk biji Persea americana Mill. adalah 7,4 % sehingga memenuhi syarat.

Lampiran 12. Hasil pengukuran validitas dan reabilitas Tabel IX. Hasil validitas dan reabilitas x (mg/dL) x’ x – x’ (x – x’)2 1,7 0,01 0,0001 1,7 0,01 0,0001 1,7 0,01 0,0001 1,7 0,01 0,0001 1,7 0,01 0,0001 1,69 1,6 - 0,09 0,0081 1,7 0,01 0,0001 1,7 0,01 0,0001 1,7 0,01 0,0001 1,7 0,01 0,0001 Σ = 0,009

(

SD =

SD =

,

(

`) )

= 0,0316 ~ 0,03

Range = x’ ± SD

CV

= (SD/x’) x 100%

= 1,69 ± 0,03

= (0,03/1,69) x 100%

= 1,66 – 1,72

= 1,77 % Syarat CV yang baik ≤ 2%


Lampiran 13. Hasil Foto Determinasi biji Persea americana Mill.

82


83


84


85


86


87


88

BIOGRAFI PENULIS Penulis skripsi berjudul “Efek Nefroprotektif Pemberian Jangka Panjang Infusa Biji Persea americana Mill. terhadap Kadar Kreatinin dan Gambaran Histologi Ginjal Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida” memiliki nama lengkap Gidion Krisnadi Yoseph. Penulis dilahirkan di Yogyakarta pada tanggal 07 Desember 1992, merupakan putra pertama dari dua bersaudara dalam keluarga pasangan R. Khrysna Hariatmo dan Hari Isdyahati. Penulis mengawali masa pendidikannya di TK Indriyasana Baciro (1996-1999) kemudian melanjutkan pendidikan tingkat Sekolah Dasar di SD Kanisius Baciro Yogyakarta (1999-2005). Pendidikan Sekolah Menengah Pertama ditempuh oleh penulis di SMP Negeri 2 Yogyakarta (2005-2008), kemudian melanjutkan pendidikan Sekolah Menengah Atas di SMA Negeri 3 Yogyakarta (2008-2010). Penulis kemudian melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2010. Semasa menempuh kuliah, penulis aktif dalam berbagai kepanitian baik dalam fakultas maupun di luar fakultas. Penulis pernah menjadi anggota divisi Humas Pharmacy Performance dan Event Cup (2010),

anggota

divisi

Konsumsi

TITRASI

(2011),

koordinator

divisi

Dokumentasi PSM “Cantus Firmus” periode 2012-2013, sebagai anggota dalam Program Kreatifitas Mahasiswa Bidang Pengabdian Masyarakat yang lolos PIMNAS (2012), sebagai ketua kelompok dalam Program Kreatifitas Mahasiswa Bidang Penelitian yang lolos didanai oleh DIKTI (2013). Penulis juga pernah menjadi Asisten Praktikum Kimia Dasar (2011), Biokimia (2012).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents