PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

EFEK ANTIHEPATOTOKSIK INFUSA HERBA Mimosa pigra L. TERHADAP TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm) Program Studi Ilmu Farmasi

Diajukan Oleh: Lukas Surya Wijaya NIM : 108114128

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013


EFEK ANTIHEPATOTOKSIK INFUSA HERBA Mimosa pigra L. TERHADAP TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm) Program Studi Ilmu Farmasi

Diajukan Oleh: Lukas Surya Wijaya NIM : 108114128

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013

i


ii


iii


PERSEMBAHAN

“i know that i am intelligent, because i know that i know nothing”

Socrates

“The root of education is bitter, but the fruit is sweet”

Aristoteles

Kupersembahkan skripsi ini untuk…… Tuhan Yesus Kristus yang selalu menjaga dan memberiku kekuatan, berkat dan jalan keluar dari segala persoalan, Papa Mamaku, dan keluarga besarku, Sahabat-sahabat dan teman-temanku tersayang, Almamaterku tercinta.

iv


v


vi


PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Esa atas berkat dan rahmat-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Efek Antihepatotoksik Infusa Herba Mimosa pigra L. Terhadap Tikus Putih Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida” ini dengan baik. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Penyelesaian skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan dari berbagai pihak, baik secara langsung maupun secara tidak langsung. Oleh karena itu penulis hendak mengucapkan terima kasih kepada : 1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. 2. Bapak Ipang Djunarko M.Sc., Apt., selaku Dosen Pembimbing skripsi ini atas segala kesabaran untuk selalu membimbing, memberi motivasi, dan memberi masukan kepada penulis dalam menyusun skripsi ini. 3. Ibu Phebe Hendra, Ph.D., Apt., selaku Dosen Penguji skripsi atas bantuan dan masukkan kepada penulis demi kemajuan skripsi ini. 4. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., selaku Dosen Penguji skripsi atas bantuan dan masukkan, kepada penulis demi kemajuan skripsi ini. 5. Ibu Rini Dwiastuti, M.Si., Apt., sebagai Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi terdahulu dan Ibu Dr. Sri Hartati Yuliani, M.Si., Apt., selaku Kepala Laboratorium Fakultas Farmasi saat ini yang telah memberi izin dalam

penggunaan

fasilitas

laboratorium

vii

Farmakologi-Toksikologi,


Farmakognosi-Fitokimia dan Kimia Analisis demi terselesaikannya skripsi ini. 6. Pak Supardjiman selaku laboran Laboratorium Farmakologi-Toksikologi, Pak Heru selaku laboran Laboratorium Biofarmasetika-Farmakokinetika, Pak Kayatno selaku laboran Laboratorium Biokimia, dan Pak Wagiran selaku laboran Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia, serta Pak Andri selaku laboran di kebun obat, atas segala bantuan dan kerja sama selama di laboratorium. 7. Kedua orang tua penulis yang mendanai sebagian besar penelitian untuk menyelesaikan skripsi ini. 8. Cornelia Melinda dan Kelvin Nugroho sebagai rekan tim Mimosa pigra dalam menjalankan penelitian yang dengan rela membantu kegiatan penelitian penulis. 9. Teman-teman penulis, Brigitta Lynda Rakasiwi, Juana Merianti, Maria Malida Vernandes Sasadara, Hans Gani, Angelia Rosari, Trifonia Rosa Kurniasih, Ibu Maria Dwibudi Djumpowati, S.Si., Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., Mbak M.R. Biri Koni Tiala, S.Farm., dan Mas Ignatius Kuncarli, S.Farm., teman-teman FKK B, dan teman-teman Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma 2010 yang selalu memberikan dukungan dan masukan terhadap baik penelitian maupun penyusunan skripsi kepada penulis. 10. Pihak-Pihak lain yang turut membantu penulis namun tidak dapat disebutkan satu persatu.

viii


Penulis menyadari bahwa setiap manusia tidak ada yang sempurna. Oleh karena itu, penulis mengharapkan adanya kritik, saran dan masukan demi kemajuan di masa yang akan datang. Semoga tulisan ini dapat memiliki manfaat sekecil apapun bagi perkembangan ilmu pengetahuan khususnya di bidang kefarmasian, serta semua pihak, baik mahasiswa, lingkungan akademis, maupun masyarakat.

Yogyakarta, 16 Oktober 2013

Penulis

ix


DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL...................................................................................

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .........................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN.....................................................................

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................

iv

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH ..................................................................................................................... .....................................................................................................................

v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .....................................................

vi

PRAKATA ..................................................................................................

vii

DAFTAR ISI ...............................................................................................

x

DAFTAR TABEL .......................................................................................

xiv

DAFTAR GAMBAR ..................................................................................

xvi

DAFTAR LAMPIRAN ...............................................................................

xviii

INTISARI....................................................................................................

xix

ABSTRACT ................................................................................................

xx

BAB I. PENGANTAR ................................................................................

1

A. Latar Belakang ..............................................................................

1

1. Perumusan masalah ....................................................................

4

2. Keaslian penelitian .....................................................................

4

3. Manfaat penelitian ......................................................................

5

B. Tujuan penelitian ..........................................................................

5

x


1. Tujuan umum .........................................................................

5

2. Tujuan khusus ........................................................................

5

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA.........................................................

6

A. Tanaman Mimosa pigra L. (Putri Malu) .......................................

6

1. Deskripsi tanaman .....................................................................

6

2. Klasifikasi..... ............................................................................

7

3. Nama lain... ...............................................................................

7

4. Nama daerah .............................................................................

7

5. Kandungan Kimia .....................................................................

7

6. Kegunaan ..................................................................................

9

B. Hati ................................................................................................

10

1. Anatomi dan fisiologi hati ........................................................

10

2. Kerusakan hati ..........................................................................

16

3. Perlemakan hati .........................................................................

19

C. Hepatotoksin .................................................................................

20

D. Karbon Tetraklorida ......................................................................

21

E. Infusa .............................................................................................

24

F. Pengukuran Alanine Transaminase dan Aspartate Transaminase

25

G. Silimarin........................................................................................

27

H. Landasan Teori .............................................................................

28

I. Hipotesis ........................................................................................

29

BAB III. METODE PENELITIAN.............................................................

30

A. Jenis dan Rancangan Penelitian ....................................................

30

xi


B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional ...............................

30

1. Variabel penelitian ....................................................................

30

2. Definisi operasional ..................................................................

31

C. Bahan Penelitian ...........................................................................

32

1. Bahan utama..............................................................................

32

2. Bahan kimia ..............................................................................

32

D. Alat Penelitian...............................................................................

34

E. Tata Cara Penelitian ......................................................................

34

1. Determinasi tanaman Mimosa pigra L. ....................................

34

2. Pengumpulan bahan ..................................................................

34

3. Pembuatan infusa herba Mimosa pigra L. ...............................

34

4. Penetapan dosis infusa herba Mimosa pigra L. .......................

35

5. Pembuatan larutan karbon tetraklorida dalam minyak zaitun...

35

6. Pembuatan suspensi ekstrak silimarin ......................................

35

7. Uji pendahuluan ........................................................................

36

8. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji.................................

36

9. Penetapan aktivitas ALT dan AST serum .................................

37

F. Tata Cara Analisis Hasil ................................................................

38

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ...................................................

40

A. Penyiapan Bahan ...........................................................................

40

1. Hasil determinasi tanaman .......................................................

40

2. Pembuatan infusa herba Mimosa pigra L. ...............................

41

B. Uji Pendahuluan ............................................................................

43

xii


1. Penetapan dosis hepatotoksin ...................................................

43

2. Penentuan dosis infusa herba Mimosa pigra L. .......................

44

3. Penentuan dosis kontrol positif silimarin .................................

44

4. Penentuan waktu pencuplikan darah ........................................

45

C. Efek Antihepatotoksik Infusa Herba Mimosa pigra L Terhadap Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida .................

52

1. Kontrol negatif .........................................................................

54

2. Kontrol hepatotoksin ................................................................

56

3.

Kontrol perlakuan (infusa herba Mimosa pigra L. dosis 2,835 g/KgBB) ................................................................................. ...............................................................................................

4.

57

Hasil Perhitungan %antihepatotoksik dan daya antihepatotoksik serta penentuan dosis optimum antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. terhadap tikus putih jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida ............................................................................. ...............................................................................................

58

D. Rangkuman Pembahasan ..............................................................

75

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN .....................................................

77

A. Kesimpulan ...................................................................................

77

B. Saran .............................................................................................

77

DAFTAR PUSTAKA .................................................................................

78

LAMPIRAN ................................................................................................

83

BIOGRAFI PENULIS ................................................................................

122

xiii


DAFTAR TABEL

Tabel I. Aktivitas serum ALT setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam ...................

46

Tabel II. Perbedaan kenaikan aktivitas serum ALT setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24, 48, dan 72 ............................................................................. ....................................................................................................

48

Tabel III. Aktivitas serum AST setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam ...................

49

Tabel IV. Perbedaan kenaikan aktivitas serum AST setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24, 48, dan 72 ............................................................................. ....................................................................................................

51

Tabel V. Efek antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis 1,26; 1,89; 2,835 g/KgBB terhadap aktivitas serum ALT dan AST pada tikus putih terinduksi karbon tetraklorida ...........................................

54

Tabel VI. Perbandingan aktivitas serum ALT jam ke-0 dengan perlakuan kontrol negatif ......................................................................................... ....................................................................................................

55

Tabel VII. Perbandingan aktivitas serum AST jam ke-0 dengan perlakuan kontrol negatif ......................................................................................... ....................................................................................................

xiv

55


Tabel VIII. Perbandingan hasil antara seluruh kelompok kontrol terhadap perlakuan pemberian infusa herba Mimosa pigra L. berdasarkan serum ALT pada variasi dosis tertentu ..................................................

62

Tabel IX. Perbandingan hasil antara seluruh kelompok kontrol terhadap perlakuan pemberian infusa herba Mimosa pigra L. berdasarkan serum AST pada variasi dosis tertentu ...................................................................

xv

63


DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Tanaman Mimosa pigra L .........................................................

6

Gambar 2. Struktur Kandungan Ekstrak Metanolik Mimosa pigra L. .......

8

Gambar 3. Pembagian Zona Lobulus Hati ..................................................

11

Gambar 4. Penampang Sel Penyusun Lobulus Hati....................................

12

Gambar 5. Proses Metabolisme Karbon Tetraklorida .................................

22

Gambar 6. Mekanisme Pembentukan Radikal Lipid oleh Radikal CCl3 .......

23

Gambar 7. Struktur Flavonolignan pada Silimarin .....................................

27

Gambar 8. Diagram batang rata-tata aktivitas serum ALT sel hati tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam .................................................................... ..................................................................................................

47

Gambar 9. Diagram batang rata-tata aktivitas serum AST sel hati tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam .................................................................... ..................................................................................................

49

Gambar 10. Diagram batang rata-rata pengaruh pengaruh dosis pemberian infusa herba Mimosa pigra L. terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat dari aktivitas serum ALT ............................................

61

Gambar 11. Diagram batang rata-rata pengaruh pengaruh dosis pemberian infusa herba Mimosa pigra L. terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat dari aktivitas serum AST ............................................

xvi

62


Gambar 12. Diagram batang %antihepatotoksik antara kontrol minyak zaitun, kontrol CCl4, kontrol silimarin, dan perlakuan berdasarkan aktivitas serum ALT dan AST.............................................................. ...............................................................................................

xvii

63


DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Foto infusa herba Mimosa pigra L. ........................................

84

Lampiran 2. Foto suspensi silimarin dalam CMC-Na 1% ..........................

84

Lampiran 3. Surat determinasi tanaman Mimosa pigra L. .........................

85

Lampiran 4. Surat ethical clearence ...........................................................

86

Lampiran 5. Certified of analysis silimarin ................................................

87

Lampiran 6. Hasil analisis statistik data ALT dan AST pada uji pendahuluan waktu pencuplikan darah hewan uji setelah induksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB ......................................................... ...............................................................................................

88

Lampiran 7. Hasil analisis statistik data ALT dan AST pada kelompok kontrol olive oil dosis 2 mL/kgBB .....................................................

95

Lampiran 8. Hasil analisis statistik data kontrol minyak zaitun, kontrol CCl4, kontrol ekstrak, kontrol silimarin, dan perlakuan pemberian infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,26; 1,89 ; dan 2,835 g/KgBB

98

Lampiran 9. Perhitungan %antihepatotoksik ..............................................

119

Lampiran 10. Perhitungan daya antihepatotoksik .......................................

120

Lampiran 11. Perhitungan konversi dosis untuk manusia ..........................

120

xviii


INTISARI Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. dan dosis optimumnya terhadap tikus putih jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida. Penelitian ini bersifat eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Penelitian ini menggunakan 35 tikus jantan galur Wistar, umur 2-3 bulan, dan berat 120-200 gram. Kelompok I merupakan kontrol minyak zaitun dengan pemberian sebanyak 2,0 ml/kg BB secara intraperitoneal. Kelompok II merupakan kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida dosis 2,0 ml/kgBB secara intraperitonial. Kelompok III merupakan kontrol perlakuan yaitu pemberian infusa herba Mimosa pigra L. dosis 2,835 g/kg BB secara per oral. Kelompok IV merupakan kontrol positif silimarin dosis 25 mg/KgBB secara per oral. Kelompok V-VII merupakan kelompok perlakuan infusa herba Mimosa pigra L. dengan dosis 1,26; 1,89; dan 2,835 g/KgBB melalui rute oral. Hewan uji diberikan induksi karbon tetraklorida 2 ml/KgBB i.p. terlebih dahulu, diikuti pemberian silimarin pada kelompok kontrol positif dan infusa herba Mimosa pigra L. 6 jam kemudian pada kelompok perlakuan. Pada jam ke-24 setelah pemberian CCl4, semua kelompok diambil darahnya pada daerah sinus orbitalis di mata tikus. Data ALT dan AST serum yang didapat, dianalisis dengan uji Kolmogorov-Smirnov untuk melihat distribusi datanya kemudian dilanjutkan analisis dengan uji MannWhitney untuk mengetahui perbedaan aktivitas ALT dan AST serum antar kelompok. Hasil penelitian menunjukkan adanya efek antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. dengan %antihepatotoksik dari peringkat dosis 1 hingga 3 secara berurutan adalah 62,5; 71,7; dan 39,9% berdsarkan serum ALT, dan berdasarkan serum AST sebesar 97,6; 98,1; dan 35,7%. Dari data pengukuran aktivitas serum ALT dan AST yang diperoleh, dosis optimum infusa herba Mimosa pigra L. adalah 1,26 g/KgBB.

Kata kunci : Mimosa pigra L., antihepatotoksik, karbon tetraklorida, infusa, ALT, AST

xix


ABSTRACT The aim of study research were to prove the antihepatotoxic effect of Mimosa pigra L. herb infusion and the optimum dose in male Wistar rats induced carbon tetrachloride. This research was purely experimental research with randomized complete direct sampling design. This research use 35 male Wistar rats, attain the age 2-3 month, and 120-200 gram weight. Group I was olive oil control by giving as much as 2 ml/KgBW intraperitoneally. Group II was carbon tetrachloride hepatotoxin control dose 2 ml/KgBW intraperitoneally. Group III was control treatment given 2.835 g/KgBW infusion of Mimosa pigra L. herb orally. Group IV was silimarin positive control given 25 mg/KgBW orally. Group V-VII were the treatment group for infusion of Mimosa pigra L. herb with dose 1.26; 1.89, and 2.835 g/KgBW orally. All animals were given carbon tetrachloride 2 ml/KgBW intraperitoneally first, followed by administration of the silymarin in the positive control group and Mimosa pigra L. herb infusion in the treatment group. At the 24th hour after administration of CCl4, all groups had blood drawn at the orbital sinus region. Data of ALT and AST serum which were obtained were analyzed using Kolmogorov-Smirnov test to look at the data distribution. After that, the data were analyzed using Mann-Whitney test to determine the differences in ALT activities and AST serum in each group. The results showed there were antihepatotoxic effects of infusion of Mimosa pigra L. herb with %antihepatotoxic from smalest dose to largest dose was 62.5; 71.7, and 39.9% based from ALT serum and 97.6; 98.1, and 35.7% based from AST serum. From the data measurement of activities ALT and AST serum which were obtained, the most effective dose from infusion of Mimosa pigra L. herb was 1.26 g/KgBW.

Keywords : Mimosa pigra L., antihepatotoxic, carbon tetrachlorida, infusion, ALT, AST

xx


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Hati atau hepar merupakan salah satu organ yang memiliki peranan penting dalam mendukung kelangsungan hidup manusia. Hati yang merupakan organ terbesar dari manusia memiliki fungsi untuk memetabolisme senyawasenyawa yang masuk ke dalam tubuh. Selain itu, hati juga memiliki kemampuan mendetoksifikasi senyawa-senyawa racun yang masuk ke dalam tubuh. Akan tetapi, saat ini banyak kelainan yang dapat mengganggu kerja hati. Salah satu kelainan yang banyak dijumpai pada organ hati adalah perlemakan hati (steatosis). Perlemakan hati merupakan kondisi dimana terjadi penumpukan lemak pada hati (Fransiskus, 2011). Perlemakan hati dibagi menjadi dua yaitu perlemakan hati diperantarai alkohol dan perlemakan hati tidak diperantarai alkohol. Perlemakan hati tidak diperantarai alkohol (NAFLD) merupakan kondisi perlemakan hati yang banyak dijumpai di kalangan masyarakat pada negara maju. Kondisi kronis dari NAFLD (Non-Alcoholic Fatty Liver Disease) akan berujung pada keadaan Non-Alcoholic Steato Hepatitis (NASH) (Chalrton, 2004). Data epidemiologi menyatakan bahwa di negara bagian barat, prevalensi NAFLD berkisar antara 15-20%, dan 20-30% di antaranya berada pada fase NASH. Pada penderita obesitas di negara maju, didapatkan 60% mengalami perlemakan hati sederhana, 20-25% mengalami NASH, dan 2-3% mengalami sirosis. Pada

1


2

penderita diabetes melitus tipe 2, terdapat 70% pasien mengalami NAFLD dan 60% mengalami NAFLD pada penderita dislipidemia. Di Indonesia sendiri, prevalensi NAFLD mencapai 30,6% (Sofia, Nurdjanah, dan Ratnasari, 2009). Dari penelitian tersebut terlihat bahwa angka prevalensi perlemakan hati pada masyarakat dunia cukup tinggi, terutama pada penderita sindrom metabolit seperti hipertensi, diabetes, dislipidemia, dan obesitas. Pengobatan yang cukup sering dilakukan adalah menggunakan obat-obatan herbal baik untuk mencegah maupun menyembuhkan perlemakan hati tersebut. Data World Health Organizaton (WHO) pada tahun 2008 menunjukkan bahwa 80% penduduk Asia dan Afrika kerap menggunakan tanaman sebagai obat herbal dalam mengatasi berbagai macam penyakit. Salah satu tanaman yang memiliki potensi sebagai obat untuk kelainan pada organ hati adalah Mimosa pigra L. Tanaman ini merupakan tanaman sejenis putri malu yang tumbuh di beberapa tempat di Indonesia. Mimosa pigra L. memiliki ciri khusus yaitu ukurannya yang lebih besar dari kerabatnya Mimosa pudica L. Penelitan yang telah dilakukan menunjukkan bahwa infusa herba Mimosa pigra L. memiliki potensi sebagai hepatoprotektif pada tikus putih yang terinduksi parasetamol (Apriyanto, Susanti, Wijayanti, Linawati, 2000). Selain itu, telah dilakukan penelitian yang menyatakan bahwa ekstrak metanol daun Mimosa pigra L. mengandung senyawa yang memiliki potensi sebagai antioksidan (Lee, 2004). Penelitian terbaru juga menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun Mimosa pigra L. memiliki kandungan flavonoid seperti quercetin dan myricitrin yang mempunyai aktvitas antioksidan terhadap radikal Diphenyl Picrylhydrazyl


3

(DPPH) dan Poly Aromatic Hydrocarbon (Rakotomalala, Agard, Tonnerre, Tesse, Derbre, Michalet, et al., 2013). Senyawa antioksidan merupakan senyawa yang dapat digunakan untuk menetralkan senyawa radikal yang merupakan penyebab perlemakan hati. Berdasarkan penelitian yang pernah dilakukan oleh Apriyanto, dkk (2000), peneliti ingin melihat kemampuan infusa herba Mimosa pigra L. sebagai hepatokuratif dengan model antihepatotoksik. Selain itu, peneliti juga ingin melihat kemampuan infusa herba Mimosa pigra L. dalam menyembuhkan perlemakan hati dengan senyawa model yang digunakan adalah karbon tetraklorida. Senyawa karbon tetraklorida merupakan senyawa model yang biasa digunakan untuk membentuk perlemakan hati sehingga hasil dari penelitian ini dapat digunakan sebagai dasar pengobatan perlemakan hati yang terjadi pada manusia dengan menggunakan infusa herba Mimosa pigra L. Karbon tetraklorida akan membentuk senyawa CCl3 radikal yang dapat menginisiasi pembentukan radikal lipid sehingga terjadi penimbunan lemak pada hati. Pada penelitian ini digunakan bentuk ekstrak berupa infusa. Hal ini didasarkan dari penggunaan pada masyarakat yang umumnya menggunakan metode perebusan, sehingga digunakan metode ekstraksi yang paling mendekati dengan metode perebusan yaitu metode infundasi. Selain itu, metode infundasi digunakan dengan pertimbangan jenis senyawa yang dituju berupa senyawa fenolik yaitu quercetin dan myricitrin. Senyawa tersebut dapat terekstrak dari daun Mimosa pigra L. menggunakan pelarut metanol. Metode infundasi juga dapat digunakan untuk mengekstrak senyawa fenolik tersebut dari herba Mimosa


4

pigra L. karena senyawa fenolik juga dapat terlarut dalam air panas (Xu, Chen, Xhang, Jiang,Ye, 2008). 1. Perumusan masalah a.

Apakah infusa herba Mimosa pigra L. memiliki efek antihepatotoksik terhadap tikus putih jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida?

b.

Berapakah dosis efektif infusa herba Mimosa pigra L. yang memberikan efek paling optimum dalam menyembuhkan perlemakan hati pada tikus putih jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida?

2. Keaslian penelitian Penelitian menggunakan infusa herba Mimosa pigra L. pernah dilakukan oleh Apriyanto, dkk. (2000) Hasil penelitian melaporkan bahwa infusa herba Mimosa pigra L. memiliki efek hepatoprotektif pada tikus putih jantan galur Wistar terinduksi parasetamol. Selain itu, ekstrak metanol dari daun dan batang Mimosa pigra L. memiliki potensi sebagai antihiperglikemi dan antinociceptive (Toma, Rahman, Jahan, Haque, Agarwala, Shelley, et al., 2012). Kemampuan antibakteri dari Mimosa pigra L. juga pernah diuji. Hasil dari penelitian menyatakan bahwa terdapat aktivitas antibakteri dari tanaman tersebut (Mbatchou, Ayebila, dan Apea, 2011). Ekstrak metanol daun Mimosa pigra L. pernah juga pernah diteliti dan terbutkti memiliki aktivitas antioksidan, antiinflamasi, dan antihipertensi pulmonar (Rakotomalala, et al., 2013). Sepanjang

penelusuran

penulis,

penelitian

mengenai

efek

antihepatotoksik Mimosa pigra L. pada tikus putih jantan terinduksi CCl4 belum pernah dilakukan.


5

3. Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis Penelitian ini diharapkan memberi manfaat pada pengembangan ilmu pengetahuan

khususnya

di

bidang

kefarmasian

mengenai

potensi

antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. b. Manfaat praktis Penelitian ini diharapkan memberi informasi pada masyarakat mengenai dosis optimum infusa herba Mimosa pigra L. dalam pengobatan perlemakan yang terjadi pada hati.

B. Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum Secara umum, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. terhadap tikus putih jantan terinduksi CCl4 berdasarkan aktivitas enzim ALT dan AST dalam darah. 2. Tujuan khusus Secara khusus penelitian ini bertujuan untuk mengetahui dosis antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. yang optimum dalam dalam mengobati perlemakan hati yang terjadi pada tikus putih jantan galur Wistar terinduksi CCl4.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Tanaman Mimosa pigra L. (Putri Malu) 1. Deskripsi tanaman

Gambar 1. Tanaman Mimosa pigra L.

Mimosa pigra L. (gambar 1) merupakan tanaman semak, dengan banyak tangkai berduri, menyebar dengan ukuran dua hingga enam meter. Mimosa pigra L. dapat hidup hingga lima tahun. Tanaman ini dapat hidup sepanjang musim dan memiliki tipe percabangan bipinatus. Ciri khas dari Mimosa pigra L. adalah memiliki daun yang sensitif. Ibu batang daun dapat tumbuh hingga 18 cm, memiliki duri sepanjang 7 mm yang terletak di sisi bawah petioles dan batang. Tanaman ini dapat berbunga hingga mencapai seratus buah. Bunga berbentuk bulat dengan diameter 1 cm berwarna merah muda. Mimosa pigra L. merupakan jenis androdioseus baik bunga jantan maupun hermaprodit delapan tangkai sari panjang dan pendek. Polong dari Mimosa pigra L. memiliki panjang 15 cm,

6


7

berbulu, dan berkerumun hingga 7 polong. Setiap polong berisi 8-24 biji. Biji Mimosa pigra L. berukuran 5 x 2,4 mm dengan berat 0,09 mg. Buah masak dalam kurun waktu 3 bulan (Binggeli, 2005). 2. Klasifikasi Kingdom

:

Plantae

Filum / Divisi

:

Magnoliophyta

Kelas

:

Eudicots

Ordo

:

Fabales

Famili

:

Fabaceae

Genus

:

Mimosa

Spesies

:

Mimosa pigra L. (Chong, 2009).

3. Nama lain Mimosa pigra var. pigra (A.Gray ex Torr.); B.L.Turner, Mimosa asperata L., Mimosa asperata (Willd.) Humb. et Bonpl., Mimosa polyacantha Willd., Mimosa hispida Willd., Mimosa pallida Humb. & Bonpl. ex Willd. (Binggeli, 2005). 4. Nama daerah Klampis air, Putri main hitam, Adiputri malu raksasa, Jerujut, Gehgeran, Cucuk Buset, Rondo kaget, Pis kucing (Tjitrosoedirdjo, 1989). 5. Kandungan kimia Kandungan Mimosa pigra L. yang telah diteliti antara lain alkaloid (metode Wakama), asam amino, antrakinon (metode Bonstrater), flavonoid


8

(metode Fehling), glikosida (metode Willistatter), saponin (uji busa), steroid (metode Liebermann-Burchard), tanin (metode FeCl3), dan terpenoid (metode Liebermann-Burchard) (Mbatchou, et al., 2011). Hasil ini hampir sama bila dibandingkan dengan kerabat dekatnya Mimosa pudica L. Dalam sebuah penelitian, skrining fitokimia dari Mimosa pudica L. menunjukkan kandungan alkaloid dengan uji Mayer, Dragendroff, dan Wagner. Selain itu ada pula kandungan saponin yang terdeteksi dengan uji busa. Menggunakan uji Salkowski terlihat kandungan phytosterol, serta adanya kandungan flavonoid dengan uji gelatin dan timbal asetat (Kaur, Kumar, Shivananda, dan Kaur, 2011). Kandungan yang terdeteksi dari ekstrak metanolik Mimosa pigra L. antara lain : triptophan, myricitrin, dan quercetin dengan 4 jenis substituen sakarida (gambar 2) (Rakotomalala, et al., 2013).

Gambar 2. Struktur Kandungan Ekstrak Metanolik Mimosa pigra L. (1. Triptofan, 2. Myricitrin, 3. Quercetin 3-O-hexosa, 4. Quercetin 3-O-hexosa, 5. Quercetin 3-O-pentosa, 6. Quercitrin, 7. Kampferol 3-O-deosxyhexosa) (Rakotomalala, et al., 2013)


9

6. Kegunaan Belum banyak peneliti yang melakukan penelitian mengenai kegunaan dari Mimosa pigra L. secara rasional. Apriyanto, dkk. (2000) pernah meneliti efek hepatoprotektif dari infusa herba Mimosa pigra L. terhadap tikus terinduksi parasetamol dan menyatakan adanya potensi hepatoprotektif. Secara empiris, Mimosa pigra L. digunakan di Afrika sebagai tonik, untuk diare, gonorhea, dan keracunan. Di Tanzania, serbuk daun dicampur air untuk meredakan bengkak. Negara Zambia menggunakan abu dari akar Mimosa pigra L. untuk obat lepra, selain itu rebusan akar dapat bermanfaat sebagai afrodisia serta penenang. Biji Mimosa pigra L. dapat digunakan sebagai emetik dan ekspektoran serta masalah pada gigi (World Agroforestry Centre, 2013). Selain itu beberapa penelitian menyatakan bahwa ekstrak dari daun Mimosa pigra L. memiliki efek antomikroba untuk beberapa bakteri patogen. Ekstrak metanol daun Mimosa pigra L. juga memiliki potensi sebagai antioksidan berdasarkan penelitian yang pernah dilakukan oleh Lee (2008). Ekstrak metanol daun Mimosa pigra L. juga memliki aktivitas sebagai antihipertensi pulmonar, antiinflamasi, dan antioksidan (Rakotomalala, et al., 2013). Mimosa pigra L. memiliki kandungan antioksidan seperti kaempferol, quercetin, dan myricitrin yang dapat menangkal radikal bebas. Penelitian terbaru menyatakan, ekstrak metanol daun Mimosa pigra L. dapat menangkal radikal Polycyclic Aromatic Hydrocarbon (PAH) yang merupakan penyebab utama hipoksia pada arteri pulmonaris. Selain itu, ekstrak metanol daun Mimosa pigra L. memiliki kemampuan mengaktifasi NO sintetase yang berperan dalam dilatasi


10

pembuluh darah. Triptofan yang terkandung dalam ekstrak metanol daun Mimosa pigra L. dapat meningkatkan proliferasi sel dari jaringan yang rusak akibat inflamasi (Rakotomalala, et al., 2013).

B. Hati 1. Anatomi dan fisiologi hati Hati atau hepar merupakan organ terbesar dan merupakan organ paling serbaguna yang ada dalam tubuh manusia. Sebagian besar massanya terletak pada daerah sebelah kanan hipokondriak dan epigastrik, tetapi juga meluas pada daerah sebelah kiri hipokondriak dan umbilikus. Hati memiliki berat rata-rata 1,5 kg. Organ yang besar dan berwarna kemerahan ini memiliki kemampuan dalam memetabolisme zat asing dan mensintesis berbagai substansi dalam tubuh (Martini, 2004). Hati menerima hampir 25% curah jantung, sekitar 1500 ml darah per menit melalui dua sumber yaitu aliran vena dari vena porta, yang sangat penting bagi kinerja fungsi hati dalam tubuh, dan darah arteri dari arteri hepatika yang penting untuk oksigenasi hati dan mensuplai darah pada sistem empedu. Pembuluh-pembuluh ini menyatu dalam hati dan aliran darah gabungan keluar melalui vena-vena sentral (vena terminal) yang bermuara ke dalam vena hepatika dan akhirknya ke vena kava inferior. Vena porta kemudian membawa darah vena dari usus halus yang kaya nutrien, serta obat dan racun langsung ke hati. Vena porta membentuk jalinan kapiler khusus yang memungkinkan setiap hepatosit (sel hati) dialiri oleh darah porta (McPhee, 2010).


11

Gambar 3. Pembagian Zona Lobulus Hati (McPhee, 2010)

Hati terdiri dari empat lobus dan setiap lobus terdiri dari 100.000 lobulus, yang merupakan dasar unit fungsional dari hati. Setiap lobulus memiliki diameter kurang lebih 1 mm. Setiap lobulus dipisahkan oleh septum interlobuler. Setiap lobulus tersusun atas hepatosit. Hepatosit tersusun seperti jari-jari pada roda (Martini, 2004). Secara fisiologis, lobulus hati terbagi menjadi tiga zona (gambar 3), yaitu zona 1, zona 2 , dan zona 3. Pembagian zona ini berdasarkan dari urutan aliran darah yang memasuki hepatosit pada zona tersebut. Darah yang memasuki sinusoid dari venula porta, mula-mula melalui hepatosit yang terdekat dari pembuluh tersebut (hepatosit zona 1) dan kemudian mengalir melalui hepatosit zona 2. Pada zona 3, merupakan daerah dimana hepatosit tersebut mengalami aliran darah terakhir sebelum memsuki vena sentral. Hepatosit pada zona 1


12

merupakan hepatosit dengan paparan oksigen terbanyak dari arteri porta sehingga heptosit tersebut merupakan tempat dalam proses glukoneogenesis dan metabolisme oksidatif yang lain. Sedangkan pada zona 3, hepatosit akan terpapar sedikit oksigen sehingga mengalai perubahan fungsional dan efektif untuk proses metabolisme seperti glikolisis dan lipogensis. Hepatosit pada zona 2 merupakan zona peralihan dengan fungsi yang berada di antara zona 1 dan 3 (McPhee, 2010).

Gambar 4. Penampang Sel Penyusun Lobulus Hati (McPhee, 2010)

Substansi parenkim hati (gambar 4) tersusun membentuk lempenglempeng hepatosit yang terletak dalam suatu kerangka sel penunjang yang dinamai sel retikuloendotelial. Lempeng hepatosit tadi umumnya hanya memiliki ketebalan satu sel, dan setiap sel dipisahkan satu sama lain oleh ruang vaskular yang dinamai sinusoid. Daerah sinusioid ini merupakan daerah dimana darah dari vena hepatika bercampur dengan darah dari vena-vena sentral. Pada jaringan sel retikuloendotelial tempat hepatosit berada, terdapat berbagai macam sel dan yang terpenting adalah sel endotel yang membentuk dinding sinusoid, sel kupfer yang merupakan makrofag khusus dan melekat pada pada ruang sinusoid, dan sel


13

stelata atau liposit yag berberan dalam penyimpanan lemak, metabolisme vitamin A, terletak antara hepatosit dan sel endotel. Semua permukaan hepatosit tidaklah sama. Salah satu sisi, permukaan apikal, membentuk dinding kanalikulis biliaris sementra permukaan baslolateral berkontak dengan aliran darah melalui sinusoid. Daerah antar hepatosit dipisahkan oleh tight junction yang berfungsi mempertahankan pemisahan domain membran plasma apikal dan basolateral. Proses-proses yang berkaitan dengan transpor dan ekskresi empedu bekerja di membran plasma apikal. Penyerapan dan sekresi ke dalam aliran darah adalah aktivitas yang berlangsung di membran basolateral (McPhee, 2010). Hati memiliki kemampuan dalam mengembalikan keutuhan organya setelah kehilangan jaringan hati yang bermakna akibat terjadi kerusakan hati. Proses regenerasi hati akibat hepatektomi parsial memakan waktu kurang lebih 5 sampai 7 hari pada tikus. Selama regenerasi ini, hepatosit mengalami pembelahan sebanyak satu atau dua kali, dan setelah tercapai ukuran dan volume hati sebelumnya, hepatosit kembali kepada keadaan semula. Pembelahan sel hati ini belum diketahui mekanismenya secara jelas. Beberapa faktor yang mempengaruhi pembelahan sel hati antara lain hepatocyte growth factor, epidermal growth factor, dan beberapa sitokin seperti tumor necrosis factor dan interleukin-6 (Guyton, 2008). Hati memiliki beberapa fungsi penting dalam tubuh, antara lain : a.

Metabolisme karbohidrat

Hati akan menstabilkan kadar gula darah berkisar 90 mg/dl. Apabila terjadi penurunan, maka hepatosit akan memecah glikogen hati dan melepaskanya dalam


14

aliran darah. Hati juga mensintesis glukosa dari karbohidrat dan asam amino (glukoneogensis). Apabila gula darah berlebih, hati akan mengubah gula tersebut menjadi glikogen maupun lipid yang kemudian disimpan dalam sel (Martini, 2004). b.

Metabolisme lipid

Beberapa lipid yang dimetabolisme oleh hati adalah trigliserida, asam lemak, dan kolesterol. Ketika kadar lipid dalam darah menurun, hati akan memecah lipid dari tempat penyimpananya dan melepaskan produk pecahan lipid ke aliran darah. Sedangkan ketika lipid dalam darah berlebih, lipid akan dibuang dari tempat penyimpanan (Martini, 2004). Pada proses pengaturan kadar kolesterol dan trigliserida pada tubuh, hati menyusun, mensekresikan, dan menyerap berbagai partikel lipoprotein. Partikel VLDL (Very Low Density Lipoprotein) akan mendistribusikan lipid ke jaringan adiposa untuk disimpan sebagai lemak atau ke jaringan lain untuk langsung digunakan. Modifikasi terjadi pada VLDL melalui pengurangan komponen lipid dan protein. Partikel low-density lipoproteins (LDL) yang terbentuk kemudian dikembalikan ke sel hati akibat adanya afinitas dari reseptor LDL. Partikel lipoprotein yang lain yaitu high-density lipoprotein (HDL) dibentuk dan disekresikan dari hati. Partikel ini dapat membersihkan kelebihan kolesterol dan trigliserida dari jaringan (McPhee, 2010). c.

Metabolisme asam amino

Hati dapat membuang kelebihan asam amino dari pembuluh darah. Asam amino dapat diubah oleh hati menjadi glukosa, lipid, maupun protein (Martini, 2004). Pada dasarnya 90% dari seluruh protein plasma, kecuali bagian dari gama


15

globulin, dibentuk oleh sel hati. Hati dapat membentuk protein plasma dengan kecepatan 15-50 gram/hari. Kehilangan banyak protein plasma dapat digantikan dalam waktu 1 atau 2 minggu. Selain itu, hati dapat membentuk berbagai asam amino tertentu yang secara umum disebut sebagai asam amino nonesensial. Pemecahan protein menjadi asama amino juga dapat dilakukan oleh hati untuk memenuhi kebutuhan energi. Proses pemecahan protein akan melewati mekanisme deaminasi dimana terbentuk senyawa racun yaitu amonia. Hati memiliki kemampuan mengubah amonia menjadi ureum yang kemudia disekresikan lewat urin (Guyton, 2008). d.

Penyimpanan vitamin

Vitamin larut lemak seperti A, D, E, K, dan vitamin B12 yang diabsorbsi oleh darah disimpan oleh hati. Ketika terjadi kekurangan vitamin-vitamin tersebut, dilakukan pembongkaran tempat penyimpanan untuk memenuhi kebutuhan vitamin tersebut (Martini, 2004). e.

Penyimpanan mineral

Hati mengubah besi menjadi feritin kecuali besi dalam hemoglobin. Dalam organ hati, terdapat protein yang disebut apoferitin yang dapat bergabung dengan besi baik pada konsentrasi tinggi maupun rendah. Kompleks besi dengan apoferitin inilah yang disebut dengan feritin. Apoferitin dapat menyangga jumlah besi dalam darah dengan melakukan proses pemecahan maupun pembentukan kembali (Guyton, 2008).


f.

16

Inaktivasi obat

Hati dapat membuang dan memecah molekul obat yang berada dalam sirkulasi darah. Hal ini akan mengakibatkan perubahan efek dan durasi pada obat tersebut. Hal ini menjadi pertimbangan penting dalam pemberian obat kepada pasien (Martini, 2004). Dalam memetabolisme obat, hati akan memebentuk senyawa lipofilik dari obat menjadi senyawa yang lebih hidrofilik agar mudah diekskresikan. Metabolisme obat atau disebut biotransformasi ini umumnya terdiri dari dua fase, yaitu reaksi fase I dan reaksi fase II. Reaksi fase I melibatkan oksidasi-reduksi dengan penambahan gugus-gugus fungsional yang mengandung oksigen pada substrat yang akan diekskresikan. Reaksi fase II biasanya berupa konjugasi secara kovalen obat pada suatu molekul pembawa larut air seperti asam glukouronat atau glutation (McPhee, 2010). g.

Membentuk faktor koagulasi

Proses pembekuan darah bergantung pada faktor-faktor koagulasi. Sebagian besar dari faktor koagulasi tersebut disintesis oleh hati, antara lain : fibrinogen, protrombin, globulin akselerator, faktor VII, dan beberapa faktor yang lain (Guyton, 2008). 2. Kerusakan hati Hati rentan terhdap berbagai gangguan metabolik, toksik, mikroba, sirkulatorik, dan neoplastik. Penyakit primer utama pada hati adalah hepatitis virus, penyakit hati alkoholik, dan karsinoma hepatoselular. Umumnya kerusakan hati bersifat sekuder dari penyakit-penyakit yang umum terjadi pada manusia.


17

Namun besarnya cadangan hati dapat menutupi dampak klinis dari kerusakan hati dini (Kumar, 2009). Akibat yang ditimbulkan dari kerusakan hati dapat bersifat reversibel maupun ireversibel. Penyebab yang berasal langsung dari kerusakan akut sel fungsional hati, terutama hepatosit, tanpa gangguan kemampuan hati untuk melakukan regenerasi umumnya reversibel. Hati memiliki kapasitas cadangan untuk berbagai reaksi kimia yang terjadi di dalamnya serta memiliki kemampuan dalam melakukan regenerasi dan deferensiasi sel. Sedangkan sirosis merupakan kerusakan hati yang irreversibel (McPhee, 2010). Terdapat lima respon umum yang terjadi pada cedera hati. Respon umum tersebut antara lain : a. Degenerasi dan Akumulasi Intraseluler Kerusakan hati akibat suatu toksin maupun peristiwa imunologis dapat menyebabkan terjadinya pembengkakan sel-sel hati. Pembengkakan pada derajad sedang masih bersifat reversibel. Untuk kerusakan yang lebih parah atau disebut degenerasi balon, sel-sel hati mulai membesar dan membentuk ruang-ruang jernih disertai menggumpalnya sitoplasma. Berbagai macam hal yang menyebabkan inflamasi hepatosit adalah penimunan besi dan tembaga pada sel hati, perlemakan hati, dan hepatitis C. b. Nekrosis dan Apoptosis Nekrosis merupakan kerusakan sel hati yang lebih parah. Pada peristiwa nekrosis, terlihat inti sel yang lisis. Berbeda halnya dengan apoptosis, peristiwa ini meninggalkan bentuk sel yang menciut, piknotik, dan sangat eusinofilik dengan


18

inti sel yang terfragmentasi. Nekrosis litik yang merupakan akhir dari degenerasi balon memiliki ciri khas dimana terdapat debris sel pada daerah sekitar sel yang rusak. Nekrosis sering terdistribusi pada daerah parenkim hati, yang mencolok pada daerah sekitar vena hepatika terminal disebut nekrosis sentrilobulus. Berdasarkan penyebarannya, nekrosis dibedakan menjadi dua yaitu nekrosis submasif bila hanya terdapat seluruh sel pada lobulus hati yang mengalami nekrosis dan nekrosis masif bila sebagian besar hati mengalami peristiwa nekrosis. c. Inflamasi Kerusakan sel-sel hati dapat memicu peradangan dikarenakan adanya influks dari sel-sel radang akut maupun kronis pada daerah tersebut hepatosit yang telah mati tidak memicu peradangan, akan tetapi adanya sel kupfer yang menelan sel-sel tersebut akan membentuk gumpalan sel radang. d. Regenerasi Hepatosit memiliki rentang usia yang panjang dan dapat berproliferasi sebagai respon terhadapt reaksi jaringan atau kematian sel. Proliferasi sel hati ditandai dengan menebalnya kordahepatosit dan juga disorganisasi struktur parenkim. Unit kanalis Hering-duktulus empedu merupakan suatu kompartemen cadangan pengganti pada cedera parenkim yang parah. e. Fibrosis Fibrosis merupakan peristiwa terbentuknya jaringan fibrosa akibat kerusakan toksik langsung pada hati maupun akibat peristiwa peradangan yang tidak


19

terbalikan. Dengan terbentuknya fibrosis hati akan terbagi-bagi menjadi nodulnodul hepatosit yang dikelilingi oleh jaringan parut. (Kumar, 2009). 3. Perlemakan hati Perlemakan hati menggambarkan ketidaknormalan penumpukan lipid pada sel-sel hati, biasanya berupa trigliserida. Hal ini dikarenakan adanya kelebihan

senyawa

tersebut

dari

asupan

makanan

sehingga

terjadinya

ketidakseimbangan dalam proses katabolisme senyawa trigliserida.

Beberapa

toksin juga dapat menyebabkan perlemakan hati dengan berbagai mekanise baik ketika perombakanya maupun ketika terjadi sintesis lipid. Perlemakan hati ditandai dengan meningkatnya enzim-enzim biokimia dalam darah seperti AST (Aspartate Transaminase)dan ALT (Alanine Transaminase) (Hodgson, 2010). Perlemakan hati dapat disebabkan oleh alkohol maupun bukan oleh alkohol (Non-Alchoholic Fatty Liver Disease). Perlemakan hati tidak bergantung alkohol (NAFLD) dapat disebabkan oleh berbagai macam hal salah satunya stres oksidatif akibat radikal bebas. Radikal bebas dapat membentuk senyawa oksigen reaktif yang dapat merusak sel-sel hati. Senyawa oksigen reaktif (ROS) dapat meningkatkan permeabilitas membran mitokondria sehingga terjadi kebocoran dari organela tersebut. Selain itu, ROS dapat menyebabkan kerusakan DNA pada sel hati. Pada kasus perlemakan hati, ROS maupun senyawa radikal bebas lain dapat memicu peroksidasi asam lemak tak jenuh menghasilkan malonilaldehid dan senyawa lain yang dapat menyebabkan penumpukan lipid pada hati. Selain


20

itu, senyawa tersebut dapat berperan sebagai chemoatractan sel-sel imun sehingga memicu terjadinya inflamasi bahkan apoptosis (Chalrton, 2004). Perlemakan hati dapat pula dikatakan sebagai penumpukan vesikelvesikel lemak pada sel-sel hati. Berdasarkan ukuran vesikelnya, perlemakan hati dibedakan menjadi mikrovesikel dan makrovesikel (Kumar, 2009).

C. Hepatotoksin Hepatotoksin

dibedakan

menjadi

dua

jenis,

yaitu

hepatotoksin

teramalkan (intrinsik) dan tak teramalkan (idiosinkratik). Hepatotoksin teramalkan merupakan senyawa toksik pada hati yang sudah jelas akan menyebabkan kerusakan bila ada kondisi tertentu dalam penggunaanya. Kerusakan hati akibat hepatotoksin teramalkan terjadi pada seluruh individu yang terpapar dan memiliki hubungan dengan dosis pemberian. Pada setiap kasus keracunan senyawa tersebut, pola yang ditemukan hampir sama pada tiap-tiap individu seperti pada keracunan parasetamol (Hodgson, 2011). Hepatotoksin tak teramalkan merupakan senyawa toksik pada hati yang berdampak bagi sebagian kecil individu. Kejadian toksisitasnya tidak sama pada tiap-tiap individu, selain itu tidak seperti hepatotoksin teramalkan, jenis ini tidak dipengaruhi oleh dosis. Beberapa contoh senyawa hepatotoksin tak teramalkan antara lain alopurinol, metildopa, dan fenitoin (Kaplowitz, 2005).


21

D. Karbon Tetraklorida Karbon tetraklorida merupakan senyawa yang cukup sering digunakan sebagai senyawa model untuk melakukan perusakan pada organ hati. Karbon tetraklorida (CCl4) akan dimetabolisme oleh sitokrom P450 menjadi senyawa toksik pada hati yaitu radikal bebas triklorometil (∙CCl3). Radikal bebas ini akan bereaksi dengan gugus sulfohidril seperti glutation dan gugus tiol pada protein yang kemudian akan mengawali peroksidasi lemak tak jenuh pada membran dan mengasilkan Reactive Oxygen Species (ROS) yang akan menyebabkan nekrosis sel. Senyawa radikal bebas ini akan menyebabkan stres oksidatif yang akan menurunkan jumlah enzim glutation S transferase (GST) dan enzim antioksidan lainya. Hasil dari reaksi radikal bebas ini adalah penumpukan senyawa peroksida lipid seperti hidroperoksida (LOOH) dan malonilaldehid. Senyawa intermediate reaktif yang terbentuk selama proses metabolisme juga dapat berikatan secara kovalen pada makromolekul jaringan sehingga menyebabkan kerusakan jaringan tersebut (Bashandy dan AlWasel, 2011). Karbon tetraklorida akan dimetabolisme menjadi senyawa radikal oleh beberapa enzim sitokrom seperti CYP2E1, CYP2B1, atau CYP2B2 dan kemungkinan CYP3A menjadi radikal triklorometil. Radikal ini dapat mengikat molekul seluler seperti asam nukleat, protein, dan lipid. Pengikatan radikal triklorometil dengan DNA akan mengawali terjadinya kanker hati. Radikal ini dapat berekasi dengan oksigen membentuk radikal triklorometilperoksi (∙OOCCl3) yang sangat reaktif. Radikal ini dapat mengawali reaksi peroksidasi lipid berantai, dimana menyerang dan menghancurkan asam lemak tak jenuh membentuk radikal


22

lipid (LO∙) yang akhirnya akan menyebabkan kerusakan pada sel-sel hati. (Boll, Lutz, Becker, Stampfl, 2001).

Cl Cl

Cl

Cl Cl

C

CYP2E1 e-

Cl

Cl

O2

C

Cl

Karbon tetra klorida

O

Cl

Cl

Cl-

O C

Triklorometil radikal

Triklorometil peroksi radikal GSH

RH GSSG CCl3OH

R Cl

Protein atau lipid

Cl CH

O2

Cl

Cl

O C

Chloroform Peroksidasi lipid Toksik

Cl

Phosegene Toksik

Toksik

Gambar 5. Proses Metabolisme Karbon Tetraklorida (Timbrell, 2008)

Segera setelah terpapar oleh tubuh, CCl4 akan termetabolisme (gambar 5) dan metabolit radikalnya akan segera berikatan secara kovalen dengan jaringan sekitar seperti pada jaringan lemak sampai pada protein subseluler. Ikatan yang sering terjadi adalah dengan triasilgliserol dan fosfolipid khususnya dengan bagian kepala berjenis kolin. Senyawa radikal ini kemudian dapat melakukan peroksidasi pada lipid sehingga mengawali terjadinya steatosis. Beberapa antioksidan seperti vitamin E dapat menghambat peroksidasi tersebut tetapi tidak


23

dengan ikatan kovalen yang terjadi. Beberapa radical scavenger dapat menginhibisi kedua mekanisme tersebut (Weber, Boll, Stampfl, 2003). Karbon tetraklorida akan menyebabkan efek toksik dengan mekanisme luka ekstraseluler. Pembentukan peroksida lipid terjadi dengan mekanisme inisiasi, propagnasi, dan terminasi (gambar 6) sehingga menghasilkan radikal asam lemak (Donatus, 2001).

Inisiasi

LH

CCl3

L

O2

L

CHCl3

LOO

Propagnasi LH

LOOH

Terminasi

L

L

L

LOO

LOO

LOO

LH = Lipid tidak jenuh L = Radikal lipid

Gambar 6. Mekanisme Pembentukan Radikal Lipid oleh Radikal CCl3 (Donatus, 2001)

Kerusakan hati dimulai antara enam jam setelah pemaparan CCl4 pada dosis kecil. Nekrosis hati dengan sel-sel yang membengkak mulai terlihat. Pada jam ke-6 ini sudah terjadi pula nekrosis sentrilobuler. Pada jam ke-6 ini pula


24

mulai terjadi perlemakan hati (steatosis) dikarenakan pada jam ke-6 ini terjadi penumpukan CCl4 pada lemak dengan konsentrasi paling tinggi. Kerusakan terus berlanjut hingga jam ke-12, dan setelahnya, terjadi perbaikan sel-sel hati secara progresif dikarenakan sudah adanya regenrasi sel-sel hati yang baru (Mumtaz, 2010). Karbon tetraklorida dapat meningkatkan kerusakan hati dengan jenis perlemakan hati. Kerusakan hati yang dikarenakan karbon tetraklorida dapat dilihat dari kenaikan aktivitas serum ALT dan AST yang terukur. Karbon tetraklorida dapat meningkatkan aktivitas serum ALT sebesar 3 kali normal dan aktivitas serum AST sebesar 4 kali normal (Zimmerman, 1999).

E. Infusa Infusa adalah sediaan cair yang dibuat dengan mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90oC selama 15 menit. Pembuatan infusa dilakukan dengan mencampur simplisia dengan derajat halus yang sesuai dalam panci dengan air secukupnya, kemudian dipanaskan di atas tangas air selama 15 menit terhitung mulai suhu 90oC sambil sekali-sekali diaduk. Serkai selagi panas melalui kain flanel, tambahkan air panas secukupnya melalui ampas hingga volume infus yang dikehendaki (Departemen Kesehatan RI, 1995). Secara umum, metode infundasi menggunakan air panas sebagai media pengekstrak metabolit sekunder pada tanaman. Beberapa senyawa antioksidan terutama senyawa polifenol dapat terekstrak menggunakan air panas. Kemampuan air panas dalam mengekstraksi antioksidan terutama dengan komponen fenol


25

hampir sama dengan kemampuan metanol. Selain antioksidan fenolik, beberapa mineral juga dapat terekstrak dengan menggunakan air panas (Xu, et al., 2008).

F. Pengukuran Alanin Transaminase dan Aspartate Transaminase Hati merupakan organ yang berperan dalam sintesis biokimia dan ekskresi beberapa senyawa asing yang masuk dalam tubuh. Banyak senyawasenyawa kimia baik berupa enzim, protein, maupun pigmen disintesis oleh organ ini. Senyawa-senyawa inilah yang kemudian banyak digunakan sebagai indikator kondisi organ hati. Beberapa senyawa yang biasa digunakan adalah bilirubin, SGOT (Serum Glutamate Oksaloacetate Transmaminase), SGPT (Serum Glutamate Piruvate Transaminase), ALP (Alkaline Phosphatase), GGT (GamaGlutamil Transamidase), dan albumin (Thapa, 2007). Kondisi stres oksidatif akibat radikal bebas akan meningkatkan permeabilitas membran dan nekrosis sel hati (Pujar, Kashinakunti, Kalaganad, Dambala, Doddamani, 2010). Keadaan ini akan menyebabkan enzim-enzim intraseluler seperti SGOT dan SGPT dapat menembus membran plasma menuju pembuluh darah dan masuk ke aliran darah. Hal ini akan menyebabkan kenaikan jumlah enzim tersebut di dalam aliran darah sehingga dapat menandakan adanya kerusakan pada sel-sel hati (Amacher, 1997). Aminotransferase merupakan enzim yang paling sering digunakan sebagai indikator spesifik kerusakan hati. Enzim ini terdiri dari dua jenis yaitu Serum Glutamate Pyruvate Transaminase (SGPT / ALT) dan Serum Glutamate OksaloacetateTtransaminase (SGOT / AST). Fungsi dari enzim-enzim ini adalah


26

mengkatalisis pemindahan alanin dan aspartat menjadi bagian dari gugus keton pada asam ketoglutarat kemudian membentuk piruvat dan oksaloasetat (Thapa dan Walia, 2007). Enzim ALT terdapat pada sitosol dan mitokondria dalam sel hati, ginjal, otot rangka, dan otot jantung. Jumlah ALT pada mitokondria hanya memegang peranan kecil dalam otot dan tidak muncul pada serum darah dalam keadaan normal. Enzim ini terutama terletak dalam sitosol sel parekim hati. Dalam laboratorium klinis, adanya ALT dalam serum menjadi penanda yang spesifik adanya kerusakan pada sel hati. Enzim AST juga terdapat dalam sitosol dan mitokondiria dari sel hati, akan tetapi jumlahnya juga tinggi pada sel-sel organ lain seperti jantung, otot, ginjal, otak, dan pankreas (Amacher, 1997). Pada kondisi normal, jumlah baik SGOT maupun SGPT dalam darah kurang dari 30 U/L (tergantung jenis kelamin, usia, dan ras) (Fancher, 2007). Kenaikan 1-3 kali batas normal terjadi akibat beberapa kondisi seperti sepsis neonatal hepatitis, artesia ekstrahepatik bilier, perlemakan hati, sirosis, NASH, keracunan obat, adanya gangguan pada otot. Kenaikan 3-20 kali batas normal biasanya dikarenakan hepatitis akut, hepatitis kronik, hepatitis autoimun, obstruksi empedu akut, dan penggunaan alkohol yang berlebihan. Sedangkan kenaikan lebih dari 20 kali batas normal (1000 U/L) dapat dikarenakan oleh kebanyakan hepatitis kronis, dan nekrosis hati kronis yang sudah menyebar (Thapa dan Walia, 2007).


27

G. Silimarin Silybum marianum L. merupakan tanaman keluarga Asteraceae yang sudah dikenal lama memiliki kemampuan untuk mengatasi berbagai kelainan hati dan empedu seperti sirosis, hepatitis, jaundice, serta beberapa hepatotoksin. Silimarin merupakan komponen aktif yang merupakan ekstrak terstandar terdiri dari 70-80% silimarin flavonolignan (silybum A dan B, isosilibin A dan B, silidianin, dan silichristin) serta flavonoid (taxifolin dan quercetin), dan 20-30% sisanya adalah fraksi yang belum diketahui (Javed, Kohli, Ali, 2011). Silimarin merupakan campuran dari 4 flavonolignan yaitu silibin, isosilibin, silidianin, dan silichristin (gambar 7) dengan rumus empiris C23H22O10. Struktur silimarin memiliki kemiripan dengan hormon steroid yang memiliki kemampuan dalam memfasilitasi sintesis protein. Silimarin tersusun dari 60-70% silibin, 20% silichristin, 10% silidianin, dan 5% isosilibin. Silimarin juga mengandung silipide yang merupakan silibin terkonjugasi pospatidilkolin yang diyakini meningkatkan ketersediaan hayati dari silibin (Pradhan, Girish, 2006).

Gambar 7. Struktur Flavonolignan pada Silimarin (Pradhan, 2006)


28

Silimarin memiliki aktifitas biologi dan farmakologi sebagai antioksidan, regenerasi sel, dan antikanker. Silimarin juga memiliki aktifitas antidiabetik, kardioprotektif,

antiinflamasi,

antifibrotik,

hipolipidemia,

neutropik,

neuroprotektif, dan imunomodulator. Dosis silimarin pada penggunaan orang dewasa adalah 240 – 800 mg/hari dengan 3 dosis terbagi (Javed, et al., 2011).

H. Landasan Teori Hati merupakan salah satu organ terpenting dalam tubuh manusia. Hati memiliki peran metabolisme dan netralisasi racun dalam tubuh. Akan tetapi hati rentan terhadap berbagai gangguan metabolik, toksik, mikroba, sirkulatorik, dan neoplastik (Kumar, 2009). Kerusakan yang biasa muncul ketika ada gangguan pada hati adalah nekrosis sel-sel hati. Nekrosis ini menyebabkan permeabilitas dinding sel menjadi berubah dan menyebabkan kebocoran enzim-enzim transaminase menuju aliran darah (Amacher, 1997). Infusa herba Mimosa pigra L. memiliki potensi hepatoprotektif pada tikus putih terinduksi parasetamol (Apriyanto, dkk., 2000). Berdasarkan penelitian tersebut, akan dilakukan penelitian hepatokuratif dengan model antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. dengan senyawa model karbon tetraklorida. Digunakan infusa karena metode infundasi mendekati metode yang sering digunakan oleh masyarakat yaitu perebusan, selain itu senyawa fenolik yang diduga sebagai senyawa antioksidan dalam herba Mimosa pigra L. juga dapat larut dan terekstrak menggunakan air panas.


29

Karbon tetraklorida merupakan senyawa yang cukup sering digunakan sebagai senyawa model untuk melakukan perusakan pada organ hati. Karbon tetraklorida (CCl4) akan dimetabolisme oleh sitokrom p450 menjadi senyawa toksik pada hati yaitu radikal bebas triklorometil (∙CCl3). Senyawa radikal ini kemudian dapat mengalami reaksi lebih lanjut dengan lipid pada hati menyebabkan

terbentuknya

radikal

lipid

seperti

malonilaldehid

dan

hidroperoksida yang menumpuk pada sel hati dan menyebabkan kerusakan sel tersebut (Bashandy, et al., 2011). Pengobatan perlemakan hati akibat radikal bebas dapat dilakukan menggunakan antioksidan. Ekstrak metanol daun Mimosa pigra L. memiliki potensi sebagai antioksidan secara in vitro (Lee, 2008). Ekstrak metanol daun Mimosa pigra L. juga memiliki aktivitas antihipertensi pulmonar, serta mengandung berbagai macam flavonoid seperti quercetin dan myricitrin sebagai senyawa antioksidan dan triptophan sebagai agen proliferasi sel (Rakotomalala, et al., 2013). Efek

antihepatotoksik

adalah

efek

dari

suatu

senyawa

dalam

menyembuhkan dan mencegah kerusakan lebih lanjut dari organ hati yang sudah terpapar senyawa radikal bebas dalam jangka waktu tertentu.

I. Hipotesis Infusa herba Mimosa pigra L. memiliki potensi antihepatotoksik pada tikus putih jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.


BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian mengenai efek antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. terhadap tikus putih jantan galur Wistar merupakan jenis penelitian eksperimental murni dengan diberikan pelakuan terhadap sejumlah variabel penelitian. Rancangan penelitian ini termasuk rancangan acak lengkap dengan menggunakan pola searah.

B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional Variabel-variabel yang digunakan pada percobaan ini ialah: 1.

Variabel penelitian a. Variabel utama. 1) Variabel bebas Variasi dosis infusa herba Mimosa pigra. L. 2) Variabel tergantung Efek antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. terhadap tikus putih jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida dengan tolok ukur kuantitatif berdasarkan peningkatan aktivitas serum ALT dan AST (U/l) dalam darah.

30


31

b. Variabel pengacau. 1) Variabel pengacau terkendali Kondisi hewan uji yaitu tikus putih galur Wistar, jenis kelamin jantan, berat badan 120-200 gram, dan usia 2-3 bulan. Pemberian infusa herba Mimosa pigra L. dilakukan secara per oral. Bahan herba Mimosa pigra L. didapat dari tanah lapang sekitar Dusun Krodan, Yogyakarta. 2) Variabel pengacau tidak terkendali Kondisi patologis dan fisiologis hewan uji, kondisi herba Mimosa pigra L. yang digunakan. 2.

Definisi operasional a. Herba Mimosa pigra L. Herba Mimosa pigra L. adalah bagian tumbuhan di atas tanah, tidak termasuk batang utama dan merupakan percabangan muda berwarna hijau pada tanaman yang masih terdapat daun, polong, dan (atau) bunga. b. Infusa herba Mimosa pigra L. Infusa herba Mimosa pigra L. adalah infusa yang diperoleh dengan mengekstraksi herba segar Mimosa pigra L. seberat 11,34 gram yang direbus dalam 50 ml aquadest selama 15 menit pada suhu 90oC. c. Efek antihepatotoksik Efek antihepatotoksik adalah efek Infusa Herba Mimosa pigra L pada dosis tertentu (dosis I : 1,26 g/KgBB, dosis II : 1,89 g/KgBB, dan dosis III : 2,835 g/KgBB) dalam menyembuhkan kerusakan sel-sel hati pada jangka waktu 6 jam setelah pemberian senyawa model karbon tetraklorida.


32

C. Bahan Penelitian 1. Bahan utama a.

Hewan uji

Hewan uji yang digunakan berupa tikus putih jantan galur Wistar, umur 2-3 bulan dengan berat badan berkisar antara 120-200 gram yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. b.

Bahan uji

Bahan uji berupa infusa herba Mimosa pigra L. yang didapat di tanah lapang sekitar Dusun Krodan, Yogyakarta yang diambil pada pagi hari sekitar pukul 07.00 WIB. c.

Silimarin (Naturex France, distributor PT Megasetia Agung Kimia) sebagai kontrol positif

2. Bahan kimia a.

Aquades sebagai pelarut infusa diperoleh dari Laboratorium Farmakognosi

Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. b.

Bahan hepatotoksin yang digunakan yaitu karbon tetraklorida (Merck),

berupa cairan, tidak berwarna, berbau khas yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. c.

Bahan pelarut karbon tetraklorida dan kontrol negatif adalah minyak zaitun

(Filippo Berio) yang berupa cairan yang dibeli dari swalayan (Indogrosir, Jalan Parangtritis, Yogyakarta).


d.

33

CMC-Na sebagai pensuspensi silimarin, berupa serbuk berwarna putih yang

diperoleh

dari

laboratorium

Farmakologi-Toksikologi

Fakultas

Farmasi

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. e.

Blangko pengujian ALT dan AST menggunakan aqua bidestilata (PT.

Ikapharmindo Putramas, Jakarta) yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Instrumental Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.. f.

Bahan untuk mengukur aktivitas serum ALT dan AST berupa reagen ALT

dan AST merk DiaSys. A. Serum ALT Reagen serum yang digunakan adalah reagen serum ALT DiaSys. Komposisi dan konsentrasi dari reagen serum ALT adalah sebagai berikut: R1:

R2:

FS:

TRIS pH 7,15 140 mmol/L L-Alanine 700 mmol/L LDH (lactatedehydrogenase) 2300 U/L 2-Oxoglutarate 85 mmol/L NADH 1 mmol/L Pyridoxal-5-phosphate Good’s buffer pH 9,6 100 mmol/L Pyridoxal-5-phosphate 13 mmol/L

B. Serum AST Reagen serum yang digunakan adalah reagen serum AST DiaSys. Komposisi dan konsentrasi dari reagen serum AST adalah sebagai berikut: R1:

TRIS pH 7,65 110 mmol/L L-Aspartate 320 mmol/L MDH(malatedehydrogenase) 800 U/L LDH(lactatedehydrogenase) 1200 U/L


R2:

FS:

34

2-Oxoglutarate 65 mmol/L NADH 1mmol/L Pyridoxal-5-phosphate Good’s buffer pH 9,6 100 mmol/L Pyridoxal-5-phosphate 13mmol/L

D. Alat Penelitian Alat Infundasi yang digunakan adalah seperangkat alat gelas berupa Beakker glass, gelas ukur, labu takar, pipet tetes, batang pengaduk (Pyrek Iwaki Glass), panci, termometer, gelas stainless steel dan timbangan analitik. Sedangkan alat untuk uji antihepatotoksik adalah seperangkat alat gelas (Pyrex), tabung Eppendorf, timbangan elektrik, sentrifuge, vortex, spuit peroral dan syringe 5 cc (Terumo), pipa kapiler, dan vitalab mikro (Microlab 200, Merck).

E. Tata Cara Penelitian 1.

Determinasi tanaman Mimosa pigra L. Determinasi tanaman Mimosa pigra L. dilakukan dengan mencocokan

ciri-ciri tanaman Mimosa pigra L. dengan buku acuan (Backer, 1963). 2.

Pengumpulan bahan Bahan uji yang digunakan adalah herba Mimosa pigra L. yang masih

segar dengan batang berwarna hijau dan terdapat daun, bunga, serta polong. 3.

Pembuatan infusa herba Mimosa pigra L. Sebanyak 11,34 gram herba Mimosa pigra L dibasahi dengan 50 ml

aquades di dalam gelas stainless steel. Kemudian gelas direndam dalam aqudes pada panci dan dipanaskan hingga suhu 90oC. Pemanasan dilakukan selama 15 menit sesudah suhu infusa di dalam gelas mencapai 90 oC. Setelah 15 menit hasil


35

rebusan disaring dengan kertas saring dan kemudian ditambahkan aquades panas melalui ampas hingga 50 ml untuk mengganti pelarut yang hilang selama proses infundasi. 4.

Penetapan dosis infusa herba Mimosa pigra L. Dasar penetapan peringkat dosis adalah bobot tertinggi tikus dan

pemberian cairan secara peroral separuh volume maksimum yaitu 2,5 ml. Penetapan dosis tertinggi infusa herba Mimosa pigra L. adalah : D x BB = C x V D x BB tertinggi tikus ( KgBB) = C ekstrak (mg/ml) x 2,5 ml D = (C ekstrak x 2,5 ml) / BB Dosis yang didapat adalah dosis pemberian maksimum. Dua dosis lainnya diperoleh dengan membagi 1,5 nilai dosis maksimum yang didapat sebagai peringkat dosis II dan membagi 2,25 nilai dosis maksimum yang didapat sebagai peringkat dosis I. 5.

Pembuatan larutan karbon tetraklorida dalam minyak zaitun Larutan karbon tetraklorida dalam minyak zaitun dibuat dengan cara

mengambil volume karbon tetraklorida secara seksama, kemudian dilarutkan dengan minyak zaitun dengan perbandingan 1 : 1. 6.

Pembuatan suspensi ekstrak silimarin Sebanyak 100 mg ekstrak kering silimarin disuspensikan dalam 50 ml

CMC-Na 1%. Suspensi serbuk silimarin kemudian digojok hingga terdispersi sempurna.


7.

Uji pendahuluan

a.

Penetapan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida.

36

Pemilihan dosis karbon tetraklorida dilakukan untuk mengetahui dosis karbon tetraklorida yang mampu menyebabkan kerusakan hati tikus dengan indikasi peningkatan aktivitas serum ALT dan AST paling tinggi tetapi tidak menimbulkan kematian. Dosis hepatotoksik yang digunakan dalam penelitian ini adalah 2,0 ml/kg BB karbon tetraklorida dalam minyak zaitun dengan perbandingan 1 : 1 dan diberikan secara intraperitoneal (Murugesan, Sathiskumar, Jayabalan, Binupriya, Swaminantan, dan Yun, 2009). b.

Penetapan waktu pencuplikan darah.

Aktivitas serum ALT dan AST tikus terinduksi karbon tetraklorida dosis 2,0 ml/KgBB secara intraperitoneal diukur pada jam ke-0, 24, 48, dan 72 setelah pemejanan kemudian ditetapkan kenaikan paling tinggi dari kedua serum tersebut. Waktu peningkatan serum ALT dan AST yang paling tinggi akan dijadikan sebagai waktu pencuplikan darah untuk penelitian antihepatotoksik. c.

Penetapan waktu pemberian infusa herba Mimosa pigra L.

Pemberian infusa herba Mimosa pigra L. dilakukan 6 jam setelah pemejanan karbon tetraklorida. Kerusakan sel-sel hati akan terjadi setelah 6 jam terpapar karbon tetraklorida (Mumtaz, 2010). Pengukuran aktivitas ALT dan AST dilakukan berdasarkan waktu hasil orientasi. 8. Pengelompokan dan perlakuan hewan uji Hewan percobaan yang dibutuhkan sebanyak 35 ekor tikus putih jantan galur Wistar dibagi secara acak dalam tujuh kelompok sama banyak. Kelompok I


37

merupakan kontrol negatif yaitu pemberian minyak zaitun secara intraperitoneal. Kelompok II merupakan kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida dengan dosis 2,0 ml/KgBB dalam minyak zaitun dengan perbandingan 1 : 1 secara intraperitoneal. Kelompok III merupakan kontrol perlakuan yaitu pemberian infusa herba Mimosa pigra L. dosis tertinggi 2,835 g/kg BB secara per oral. Kelompok IV adalah kelompok kontrol positif, dimana pemberian karbon tetraklorida dosis 2,0 ml/KgBB secara intraperitoneal diikuti dengan suspensi ekstrak silimarin dengan dosis 25 mg/KgBB setelah 6 jam. Kelompok V merupakan perlakuan dosis I dengan pemberian karbon tetraklorida pada dosis 2,0 ml/KgBB secara intraperitoneal dan diikuti dengan pemberian infusa dosis 1,26 g/KgBB setelah 6 jam. Kelompok VI merupakan perlakuan dosis II dengan pemberian karbon tetraklorida secara intraperitoneal pada dosis 2,0 ml/KgBB dan diikuti dengan pemberian infusa dosis 1,89 g/KgBB setelah 6 jam. Kelompok VII merupakan perlakuan dosis III dengan pemberian karbon tetraklorida secara intraperitoneal pada dosis 2,0 ml/KgBB dan diikuti dengan pemberian infusa dosis 2,835 g/KgBB setelah 6 jam. Pada jam ke-24 setelah diberi karbon tetraklorida semua kelompok diambil darahnya pada daerah vena orbitalis, kemudian ditampung dalam tabung Eppendorf untuk penetapan aktivitas serum ALT dan AST. Darah disentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan 5000 rpm dan bagian supernatannya diambil. 9. Penetapan aktivitas ALT-AST serum Alat yang digunakan untuk menganalisis aktivitas ALT dan AST serum adalah Mikro vitalab 200. Aktivitas enzim diukur pada panjang gelombang 340


38

nm, suhu 37oC, dengan faktor koreksi, dan dinyatakan dengan satuan U/L. Pengukuran aktivitas serum ALT dan AST dilakukan di Laboratorium Biokimia Fisiologi Manusia, Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Analisis serum ALT dilakukan dengan cara mencampur 100 μL serum dengan 1000 μL reagen I, kemudian dicampurkan 250 μL reagen II dan dibaca resapan setelah satu menit. Untuk analisis serum AST serum dilakukan dengan cara mencampur 100 μL serum dengan 1000 μL reagen I, kemudian dicampurkan 250 μL reagen II dan dibaca serapan setelah satu menit. Perhitungan % antihepatotoksik diperoleh dengan rumus: 1−

(purata ALT perlakuan − purata ALT kontrol negatif) × 100% (purata ALT kontrol hepatotoksin − purata ALT kontrol negatif)

1−

(purata AST perlakuan − purata AST kontrol negatif) × 100% (purata AST kontrol hepatotoksin − purata AST kontrol negatif) (Wakchaure, Jain, Singhai, Somani, 2013). Perhitungan daya antihepatotoksik terhadap kontrol positif silimarin

diperoleh dengan menggunakan rumus : %antihepatotoksik ALT perlakuan x 100% %antihepatotoksik ALT silimarin

F. Tata Cara Analisis Hasil Data aktivitas ALT-AST diuji dengan metode Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui distribusi data dan analisis varian untuk melihat homogenitas varian antar kelompoknya sabagai syarat analisis parametrik. Jika data terdistribusi normal maka dilanjutkan dengan analisis variansi pola searah


39

(ANOVA one way) dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan masing-masing kelompok. Kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe untuk melihat perbedaan antar kelompok bermakna (signifikan) (p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan) (p>0,05). Tetapi bila distribusi tidak normal dilakukan analisis dengan Kruskal Wallis untuk mengetahui perbedaan aktivitas ALT-AST serum antar kelompok. Kemudian dilanjutkan uji dengan MannWhitney untuk melihat perbedaan tiap kelompok.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini memiliki tujuan untuk mengetahui efek antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. terhadap tikus putih jantan terinduksi karbon tetraklorida (CCl4) berdasarkan aktivitas enzim ALT dan AST dalam darah. Penelitian ini merupakan pengembangan dari penelitian sebelumnya yang sudah menguji mengenai efek hepatoprotektif herba Mimosa pigra L. terhadap tikus putih jantan galur Wistar terinduksi parasetamol. Pada penelitian ini digunakan indikator berupa aktivitas ALT dan AST pada serum darah tikus yang diamati secara kuantitatif yang dapat menunjukkan kerusakan hati yang terjadi.

A. Penyiapan Bahan 1.

Hasil determinasi tanaman Penelitian mengenai efek antihepatotoksik ini menggunakan herba

Mimosa pigra L. sebagai tanaman yang diuji aktivitasnya. Herba Mimosa pigra L. didapat dari tanah lapang sekitar dusun Krodan. Untuk menjamin kebenaran tanaman yang digunakan, dilakukan determinasi tanaman Mimosa pigra L. (lampiran 3). Proses determinasi dilakukan di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Determinasi tanaman Mimosa pigra L. menggunakan buku acuan karangan Backer (1963). Bagian tanaman yang dideterminasi antara lain batang, daun, polong, dan bunga. Proses

40


41

determinasi dilakukan hingga ke tingkat spesies. Dari hasil determinasi, dipastikan bahwa batang, daun, polong, dan bunga adalah benar dari tanaman Mimosa pigra L. 2.

Pembuatan infusa herba Mimosa pigra L. Pembuatan infusa herba Mimosa pigra L. dilakukan dengan metode

infundasi. Infundasi dilakukan dengan cara menimbang herba Mimosa pigra L. sebanyak 11,34 gram kemudian dilakukan perajangan. Potongan herba Mimosa pigra L. kemudian dimasukan ke dalam gelas stainless steel kemudian ditambahkan 50 ml aquades. Harus dipastikan bahwa seluruh potongan herba terendam dalam air supaya ketika proses pemanansan, molekul air dapat mengekstrak senyawa-senyawa metabolit sekunder dari seluruh permukaan potongan herba. Dalam proses infundasi, digunakan bahan stainless steel bukan aluminium supaya kandungan Mimosa pigra L. terutama flavonoidnya tidak rusak akibat bereaksi dengan logam aluminium. Peneliti menggunakan herba Mimosa pigra L. segar sesuai dengan penelitian sebelumnya. Pemilihan bahan segar ini juga dilandasi dengan kemudahan aplikasi pada masyarakat karena tidak perlu melakukan pengeringan bahkan penyerbukan. Herba segar memiliki kandungan metabolit sekunder yang masih utuh karena tidak mengalami proses pengeringan yang dapat mendegradasi senyawa-senyawa tersebut. Bagian tanaman yang digunakan berupa herba dikarenakan senyawa antioksidan yang dituju diharapkan berasal dari seluruh bagian tanaman di atas tanah, bukan hanya dari daun, batang, bunga, atau polong saja, sehingga senyawa antioksidan yang didapat menjadi lebih banyak baik jenis maupun jumlahnya.


42

Proses infundasi dilakukan selama 15 menit setelah suhu infusa tepat menunjukkan 90oC. Setelah 15 menit, panci infusa diangkat dari penangas dan kemudian gelas stainless steel ditiriskan. Air dalam gelas kemudian disaring dengan kertas saring saat itu juga ke dalam labu takar 50 ml. Untuk mengganti kehilangan air akibat penguapan, dilakukan penambahan air panas melalui ampas herba Mimosa pigra L. dalam kertas saring hingga batas tanda. Hal ini bertujuan agar air panas yang melewati ampas dapat mengekstrak kandungan dalam ampas yang masih tersisa. Dipilih metode infundasi dengan pertimbangan bahwa penelitian sebelumnya juga menggunakan infusa herba Mimosa pigra L. sebagai agen hepatoprotektif. Selain itu, infusa merupakan bentuk esktrak cair yang paling mudah diaplikasikan oleh orang awam sekalipun. Infusa merupakan metode ekstraksi yang biasa dilakukan oleh orang awam untuk membuat obat herbal. Pemakaian secara empiris dari herba Mimosa pigra L. juga dengan cara direbus sehingga dipilih metode infundasi sebagai metode yang palin mendekati dengan perebusan. Selain itu, infusa menggunakan pelarut air juga sesuai dengan pelarut senyawa sasaran pada herba Mimosa pigra L. yaitu flavonoid dan senyawa fenolik lain. Senyawa-senyawa fenolik merupakan senyawa yang dapat larut dalam air panas sehingga dapat terekstrak dengan metode infundasi (Xu, et al., 2008). Akan tetapi, kekurangan dari metode ini adalah infusa yang didapat tidak bisa digunakan lebih dari hari (24 jam), dikarenakan kandungan air yang cukup tinggi dapat memicu pertumbuhan mikroorganisme terutama kapang dan khamir. Oleh


43

karena itu, setiap pemejanan infusa, peneliti selalu melakukan infundasi herba Mimosa pigra L.

B. Uji Pendahuluan 1.

Penetapan dosis hepatotoksin Penelitian kali ini menggunakan senyawa model hepatotoksin berupa

karbon tetraklorida. Hepatotoksin karbon tetraklorida pada dosis tertentu dapat menyababkan kerusakan hati berupa perlemakan hati. Terjadinya perlemakan hati ini ditandai dengan kenaikan serum ALT dan AST sekitar 3-4 kali normal (Thapa dan Walia, 2007). Berbeda dengan penelitian sebelumnya yang menggunakan parasetamol sebagai hepatotoksin. Parasetamol dapat menyebabkan nekrosis hati yang ditandai dengan kenaikan serum ALT dan AST mencapai 10-20 kali dari normal. Dosis karbon tetraklorida yang digunakan pada penelitian ini yaitu 2 ml/KgBB, dengan

menggunakan pelarut minyak zaitun. Perbandingan yang

digunakan yaitu 1 : 1. Penetapan dosis ini dilakukan berdasarkan penelitian dari Yadav, Pal, Shanker, Bawankule, Gupta, Darokar, et al., (2008) menggunakan karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB dengan pemberian secara intraperitoneal. Dengan pemberian secara intraperitoneal diharapkan hepatotoksin akan langsung terlarut dalam cairan intraperitoneal dan terabsorbsi pada pembuluh darah di dalam rongga perut, sehingga tidak melalui saluran pencernaan dan rusak akibat enzim pencernaan. Dengan kondisi tersebut, diharapkan efek hepatotoksik dari


44

karbon tetraklorida dapat terjadi lebih cepat dan menimbulkan keparahan lebih besar. 2.

Penentuan dosis infusa herba Mimosa pigra L. Dosis infusa herba Mimosa pigra L. yang digunakan didapat dari

penelitian Apriyanto, dkk (2000). Pada penelitian dari Apriyanto, dkk (2000), digunakan infusa herba Mimosa pigra L. dengan 4 peringkat dosis. Dosis terkecil yang digunakan adalah 0,84 g/KgBB dan dosis tertinggi yang digunakan adalah 2,835 g/KgBB dengan kelipatan 1,5 tiap peringkat dosisnya. Pada penelitian ini, peneliti melakukan modifikasi peringkat dosis. Peneliti menggunakan 3 peringkat dosis dengan mengeliminasi peringkat dosis pertama dari penelitian Apriyanto, dkk (2000). Hal ini dikarenakan pada penelitian Apriyanto, dkk (2000) menyatakan bahwa dosis 0,84 g/KgBB potensi aktivitas hepatoprotektifnya tidak sebaik pada dosis 1,26 g/KgBB. Atas pertimbangan tersebut, peneliti menggunakan 3 peringkat dosis dengan dosis rendah 1,26 g/KgBB, dosis tengah 1,89 g/KgBB, dan dosis tinggi 2,835 g/KgBB. 3.

Penentuan dosis kontrol positif silimarin Pada penelitian ini, peneliti menggunakan kontrol positif berupa silimarin

dengan kemurnian 80% produksi Naturex (lampiran 5). Pemilihan kontrol positif silimarin ini didasari dari kemampuan silimarin dalam mengobati penyakit hati. Silimarin memiliki kemampuan sebagai hepatoprotektor dan antioksidan dengan kandungannya berupa senyawa flavonolignan seperti silidianin, silibin, isosilibin, dan silichristin (Javed, et al., 2011). Tujuan penggunaan kontrol positif silimarin ini adalah untuk membandingkan efek antihepatotoksik infusa herba Mimosa


45

pigra L. terhadap efek antihepatotoksik dari silimarin yang memang sudah terbukti mampu menangkal radikal bebas penyebab penyakit pada hati. Penelitian efek hepatokuratif dengan model antihepatotoksik memang belum pernah dilakukan dengan menggunakan kontrol positif silimarin, sehingga untuk penggunaan dosis silimarin dilakukan penyesuaian dengan dosis terapi harian silimarin pada manusia. Dosis terapi harian silimarin pada manusia berkisar antara 240-800 mg/hari (Javed, et al., 2011). Pada dosis 240 mg/hari tersebut, dilakukan konversi dosis tikus dan didapatkan dosis pada tikus yaitu 21,6 mg/KgBB. Dari dosis tersebut, peneliti memilih dosis 25 mg/KgBB selain itu, pemilihan dosis juga dilakukan dengan pendekatan dari penelitian yang dilakukan Surendran, Eswaran, Vijayakumar, dan Rao (2011) mengenai efek hepatoprotektif Cissampelos pariera melawan kerusakan hati terinduksi karbon tetraklorida menggunakan silimarin dosis 25 mg/KgBB sebagai kontrol positif. Pembuatan

silimarin

dilakukan

menggunakan

CMC-Na

dengan

konsentrasi 1% sebagai pendispersinya. Hal ini dikarenakan silimarin sangat sulit larut dalam air. Kelarutan silimarin hanya 0,04 mg/ml dalam air (Javed, et al., 2011). Silimarin yang telah ditimbang kemudian didipesrsikan dalam sejumlah CMC-Na 1% hingga terbentuk suspensi silimarin dengan konsentrasi konsentrasi 2 mg/ml. 4.

Penentuan waktu pencuplikan darah Pada penentuan dosis antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L.

dilakukan juga penentuan waktu pencuplikan darah pada rentang waktu tertentu, yaitu 24, 48, dan 72 jam setelah pemejanan hepatotoksin. Tujuan pencuplikan ini


46

adalah untuk melihat waktu ketika hepatotoksin karbon tetraklorida pada dosis 2 ml/KgBB memberikan kerusakan yang paling besar pada organ hati. Dari pengujian ini kemudian didapat waktu terjadinyna peningkatan ALT dan AST paling besar. Waktu inilah yang kemudian dijadikan pedoman pengambilan darah tikus dalam melakukan penelitian lebih lanjut. Karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB dipejankan pada tikus yang kemudian pada jam 24, 48, dan 72 diambil darah untuk dilihat aktivitas ALT dan ASTnya. Sebelum dipejan karbon tetraklorida, tikus diambil darah pada jam ke-0 untuk melihat aktivitas ALT dan AST pada keadaan normal dan juga untuk melihat kenaikan aktivitas serum ALT dan AST pada waktu pencuplikan yang sudah ditentukan. Hasil pengujian aktivitas serum ALT dapat dilihat pada tabel I dan gambar 8.

Tabel I. Aktivitas serum ALT setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam Selang waktu (jam) Purata Aktivitas serum ALT ± SE (U/l) 0

43,8 ± 1,4

24

141,6 ± 12,4

48

56,0 ± 8,3

72

40,6 ± 5,1 Keterangan : SE = Standard Error


47

Gambar 8. Diagram batang rata-tata aktivitas serum ALT sel hati tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam

Dari tabel I dan gambar 8 tersebut, terlihat bahwa aktivitas serum ALT yang paling besar terlihat pada jam ke-24 (141,6 ± 12,35 U/l). Dibandingkan dengan jam ke-0 (43,8 ± 1,39 U/l), aktivitas serum ALT mengalami kenaikan 3-4 kali. Pada pencuplikan darah jam ke-48 (56,0 ± 8,26 U/l), aktivitas serum ALT kembali normal (hampir sama dengan jam ke-0). Peneliti juga melakukan pencuplikan darah pada jam ke-72 untuk memastikan aktivitas ALT benar-benar dalam keadaan normal dan tidak ada kenaikan aktivitas lagi setelah lebih dari 24 jam pemejanan karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB. Pada jam ke-72 (40,6 ± 5,14 U/l) aktivitas serum ALT menunjukkan hasil yang juga mendekati jam ke-0. Hasil uji statistik aktivitas serum ALT menyatakan bahwa terdapat perbedaan yang


48

bermakna antara aktivitas serum ALT pada jam ke-24 dengan jam ke-0, 48, dan 72 (p=0,009), akan tetapi terdapat perbedaan yang tidak bermakna antara aktivitas ALT pada jam ke-0 dengan jam ke-48 (p=0,295), dan jam ke-72 (p=0,116). Hal ini menunjukkan bahwa pada jam ke-48 dan 72, aktivitas serum ALT sudah normal kembali seperti pada aktivitas serum ALT jam ke-0. Dari hasil ini dapat dinyatakan bahwa pada jam ke-24, karbon tetraklorida akan menyebabkan kerusakan hati paling parah. Akan tetapi pada jam ke-48 dan jam ke-72, metabolit karbon tetraklorida sudah mulai diekskresikan sehingga kerusakan yang disebabkan oleh senyawa tersebut mulai terhenti. Selain itu hati mulai melakukan regenerasi sel-sel hati yang merupakan mekanisme fisiologis hati untuk menggantikan sel yang rusak sehingga kondisi organ hati kembali membaik dan aktivitas serum ALT dapat kembali normal. Hasil uji statistik aktivitas serum ALT pada berbagai jam pencuplikan dapat dilihat di tabel II.

Tabel II. Perbedaan kenaikan aktivitas serum ALT setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24, 48, dan 72 Jam 0 Jam 24 Jam 48 Jam 72 Jam 0

BB

Jam 24

BB

Jam 48

TB

BB

Jam 72

TB

BB

TB

TB

BB

BB TB

TB

BB = Berbeda bermakna (p<0,05) ; TB = Berbeda tidak bermakna (p>0,05)

Sama halnya dengan aktivitas serum ALT, aktivitas serum AST juga diukur pada waktu pencuplikan yang sudah ditentukan yaitu 24, 48, dan 72 jam


49

setelah pemejanan hepatotoksin. Tujuan dari pencuplikan ini adalah untuk melihat waktu ketika karbon tetraklorida menyebabkan kerusakan hati yang ditandai dengan kenaikan aktivitas serum AST palin tinggi. Hasil yang didapatkan dari pengujian ini dapat dilihat dari tabel III dan gambar 9.

Tabel III. Aktivitas serum AST setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam Selang waktu Purata Aktivitas serum ALT ± SE (U/l) (jam) 0 116,2 ± 2,2 24

489,8 ± 41,2

48

179 ± 22,7

72

95,4 ± 3,8 Keterangan : SE = Standar Error

Gambar 9. Diagram batang rata-tata aktivitas serum AST sel hati tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB pada selang waktu 0, 24, 48, dan 72 jam


50

Dari hasil tersebut, menunjukkan bahwa kenaikan serum AST paling tinggi terjadi pada jam ke-24 (489,8 ± 41,2 U/l). Sama seperti aktivitas serum ALT, hal ini menunjukkan kerusakan hati paling parah terjadi pada jam ke-24. Kenaikan aktivitas serum AST pada jam ke-24 dibandingkan jam ke-0 (116,2 ± 2,2 U/l) sebesar 4-5 kali lipat. Pada jam ke-48 (179 ± 22,7 U/l) dan jam ke-72 (95,4 ± 3,83 U/l), aktivitas serum AST sudah mulai mengalami penurunan. Secara statistik, seluruh aktivitas serum AST pada pencuplikan ke-0, 48, dan 72 memiliki perbedaan yang bermakna terhadap aktivitas serum AST pada pencuplikan jam ke-24 (p=0,009), akan tetapi, pada jam ke-48 (p=0,016) dan jam ke-72 (p=0,009) juga terdapat perbedaan bermakna terhadap aktivitas serum AST jam ke-0. Hal ini dikarenakan pada jam ke-48, aktivitas serum AST belum benar-benar berada dalam kondisi normal (mendekati jam ke-0). Serum AST tidak hanya disekresikan oleh sel-sel hati. Beberapa organ vital seperti otot rangka dan jantung juga dapat mensekresikan enzim AST (Fancher, Kamboj, Onate, 2007). Apabila sel-sel dari organ tersebut mengalami stres oksidatif, maka enzim AST dalam sel akan masuk ke aliran darah dan meningkatkan aktivitas serum AST dalam darah (Amacher, 1998). Karbon tetraklorida yang dipejankan secara i.p. tidak hanya menyebabkan stres oksidatif pada hati melainkan pada organ-organ yang lain karena terbawa aliran sistemik, sehingga dimungkinkan kerusakan yang terjadi tidak hanya pada hati namun juga terjadi cidera otot rangka maupun otot jantung. Oleh karena itu, aktivitas serum AST akan kembali normal dengan proses yang lebih lama dari serum ALT karena organ selain hati tidak memiliki kapasitas regenerasi secepat hati, sehingga walaupun kondisi hati sudah normal, aktivitas serum AST tetap


51

dalam kondisi di atas normal. Pada jam ke-72, aktivitas serum AST sudah kembali dalam batas normal. Walaupun secara statistik dinyatakan berbeda bermakna dengan aktivitas serum AST pada jam ke-0 (p=0,009), kondisi ini tetap dapat menyatakan bahwa sudah tidak terjadi kenaikan aktivitas serum AST pada setelah lebih dari 24 jam pemejanan karbon tetraklorida. Hasil pengujian statistik dapat dilihat pada tabel IV.

Tabel IV. Perbedaan kenaikan aktivitas serum AST setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/KgBB pada waktu pencuplikan darah jam ke-0, 24, 48, dan 72 Jam 0 Jam 24 Jam 48 Jam 72 Jam 0

BB

Jam 24

BB

Jam 48

BB

BB

Jam 72

BB

BB

BB

BB

BB

BB BB

BB


Dari data tersebut, terlihat bahwa aktivitas serum ALT dan AST menunjukkan perbedaan yang bermakna pada pencuplikan darah ke-24 (p<0,05) dibandingkan dengan pencuplikan darah pada jam ke-0, 24, dan 72 setelah pemejanan hepatotoksin. Berdasarkan kondisi ini, pada penelitian efek antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. dipilih waktu pencuplikan darah hewan uji pada jam ke-24 setelah pemejanan karbon tetraklorida dengan dosis 2 ml/KgBB secara intraperitoneal. Pada penelitian ini, selain aktivitas serum ALT peneliti juga melihat aktivitas serum AST walaupun aktivitas serum AST tidak spesifik terhadap kerusakan hati. Hal ini dikarenakan enzim AST juga diproduksi di organ selain


52

hati terutama otot dan jantung, sehingga kenaikan aktivitas serum AST juga dapat disebabkan kerusakan organ-organ tersebut. Akan tetapi, pengamatan terhadap aktivitas serum AST juga dapat digunakan sebagai data pendukung adanya kerusakan pada hati.

C.

Efek Antihepatotoksik Infusa Herba Mimosa pigra L Terhadap Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida

Penelitian ini dilakukan untuk melihat efek antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. pada 3 tingkatan dosis yang berbeda. Pemberian infusa herba Mimosa pigra L. diberikan secara per oral dengan peringkat dosis terkecil sebesar 1,26 g/KgBB, peringkat dosis tengah sebesar 1,89 g/KgBB, dan peringkat dosis paling tinggi yaitu 2,835 g/KgBB. Perlakuan antihepatotoksik dilakukan dengan pemberian infusa 6 jam setelah pemejanan hepatotoksin karbon tetraklorida. Pada jam ke-6 setelah pemejanan karbon tetraklorida i.p., hepatotoksin ini akan mulai menyebabkan nekrosis sel-sel hati. Selain itu, pada jam ke-6 karbon tetraklorida i.p. terjadi steatosis yang ditandai dengan pembentukan sel-sel balon pada hati. Hal ini dikarenakan 6 jam setelah pemejanan karbon tetraklorida, senyawa ini sudah dimetabolisme oleh enzim-enzim mikrosomal hati membentuk radikal lipid peroksida. Sel-sel hati juga melakukan regenerasi dan perbaikan struktur dimulai dari jam ke-6 setelah karbon tetraklorida dipejankan secara intraperitoneal (Mumtaz, 2010). Pemberian infusa herba Mimosa pigra L. pada jam ke-6 setelah pemejanan hepatotoksin dilakukan untuk melihat kemampuan infusa herba Mimosa pigra L. dalam membantu


53

pemulihan sel-sel hati akibat pemejanan karbon tetraklorida. Selain itu, dilihat pula kemampuan infusa herba Mimosa pigra L. dalam melawan radikal-radikal bebas (diakibatkan dari radika lipid dan radikal CCl3) yang telah lebih dulu berada pada organ hati dan melakukan perusakan pada organ tersebut. Pada penelitian ini hanya dilakukan pemberian infusa herba Mimosa pigra L. satu kali. Hal ini dikarenakan pemulihan kerusakan hati akibat pemberian CCl4 berlangsung cepat (kurang dari 48 jam) sehingga bila diberikan secara berulang dalam beberapa hari, efek penyembuhan yang terjadi juga dapat dipengaruhi oleh kapasitas regenerasi hati. Oleh karena itu dapat dilakukan penggunaan hepatotoksin jenis lain seperti parasetamol dan galaktosamin yang dapat menyebabkan nekrosis hati dengan kondisi kerusakan lebih lama dari CCl4 sehingga dapat dilakuakan penelitian efek antihepatotoksik dengan perlakuan pemberian infusa herba Mimosa pigra L. secara berulang pada hari yang berbeda serta untuk melihat penyembuhan sel-sel hati yang mengalami nekrosis. Parasetamol akan dimetabolisme membentuk metabolit antara berupa N-acetyl-pbenzo-quinone imine (NAPQI) yang dalam kondisi berlebih dapat menjenuhkan glutation sehingga NAPQI yang tersisa pada hati dapat menyebabkan nekrosis hepatosit (Olson, 2006). Selain itu, galaktosamin dapat membentuk metabolit galaktosamin-1-pospat

yang

dapat

menghambat

pembentukan

glikogen,

polisakarida, dan glukouronat sehingga dapat menyebabkan nekrosis hati (Keppler dan Decker, 1969). Pencuplikan darah dilakukan pada jam ke-24 setelah pemberian hepatotoksin karbon tetraklorida. Hasil orientasi yang dilakukan peneliti


54

menunjukkan bahwa aktivitas serum ALT dan AST akan mencapai keadaan paling tinggi pada jam ke-24 setelah pemberian karbon tetraklorida.

Tabel V. Efek antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis 1,26; 1,89; 2,835 g/KgBB terhadap aktivitas serum ALT dan AST pada tikus putih terinduksi karbon tetraklorida Aktivitas Aktivitas Daya serum %antihepatotoksik %antihepatotoksik Kelompok serum antihepatotoksik ALT (serum ALT) (serum AST) AST (U/l) (ALT) (U/l) I 41,4 ± 113,0 ± 100% 100% 3,0 4,6 II 141,6 ± 489,8 ± 0% 0% 12,4BB 41,2BB III 39,6 ± 105,8 ± 3,3TB 2,2TB IV 82,8 ± 431,0 ± 58,7% 15,6% 7,0BB 27,3TB V 79,0 ± 122,2 ± 62,5% 97,6% 106,5% 5,7BB 9,7TB VI 69,8 ± 120,0 ± 71,7% 98,1% 122,1% 4,3BB 4,4TB VII 101,6 ± 355,2 ± 39,9% 35,7% 68,0% 5,4BB 17,1BB BB : berbeda bermakna dibanding kontrol negatif (p<0,05) ; TB : Tidak berbeda bermakna dibanding kontrol negatif (p>0,05) I : Kelompok kontrol negatif (minyak zaitun 2 ml/KgBB) II : Kelompok kontrol hepatotoksin CCl4 dosis 2 ml/Kg BB III : Kelompok kontrol perlakuan (infusa herba Mimosa pigra L. dosis 2,835 g/KgBB) IV : Kelompok kontrol positif silimarin 25 mg/KgBB + CCl4 2 ml /KgBB V : Kelompok perlakuan infusa herba Mimosa pigra L. 1,26 g/kgBB + CCl4 2 ml /KgBB VI : Kelompok perlakuan infusa herba Mimosa pigra L. 1,89 g/kgBB + CCl4 2 ml /KgBB VII : Kelompok perlakuan infusa herba Mimosa pigra L. 2,835 g/kgBB + CCl4 2 ml /KgBB

1.

Kontrol negatif Pada penelitian ini digunakan kontrol negatif berupa minyak zaitun

dengan dosis 2 ml/KgBB seara intraperitoneal. Kontrol negatif merupakan kontrol pelarut hepatotoksin karbon tetraklorida dengan dosis yang sama untuk melihat pengaruh pelarut hepatotoksin tersebut terhadap kenaikan aktivitas serum ALT dan AST pada jam ke-24 sesuai waktu pencuplikan darah tikus.


55

Hasil pengukuran aktivitas serum ALT kontrol negatif pada jam ke-24 yaitu 41,40 ± 3,0 U/l. Hasil ini kemudian dibandingkan dengan kondisi awal tikus sebelum menerima perlakuan apapun (pengambilan darah jam ke-0). Hasil statistik dengan uji t berpasangan menyatakan bahwa terdapat perbedaan yang tidak bermakna dari aktivitas serum ALT perlakuan kontrol negatif jam ke-0 dan jam ke-24 (p=0,312), seperti yang ditunjukkan gambar VI

Tabel VI. Perbandingan aktivitas serum ALT jam ke-0 dengan perlakuan kontrol negatif Jam 0 Jam 24 Jam 0 Jam 24

TB TB


Hasil pengukuran aktivitas serum AST jam ke-24 pada kontrol negatif sebesar 113 ± 4,6 U/l. Hasil ini juga dibandingkan dengan keadaan serum AST hewan uji awal yaitu pada jam ke-0. Hasil statistik menggunakan uji t berpasangan menyatakan pada tabel VII bahwa ada perbedaan yang tidak bermakna antara aktivitas serum AST pada jam ke-0 dengan jam ke-24 (p=0,096).

Tabel VII. Perbandingan aktivitas serum AST jam ke-0 dengan perlakuan kontrol negatif Jam 0 Jam 24 Jam 0 Jam 24

TB TB



56

Dari hasil olah data statisik tersebut, dinyatakan bahwa ada perbedaan yang tidak bermakna antara aktivitas serum ALT dan AST pada hewan uji sebelum dan sesudah menerima pemejanan minyak zaitun dosis 2 ml/KgBB secara intraperitoneal. Dari hasil ini pula disimpulkan bahwa minyak zaitun sebagai pelarut hepatotoksin karbon tetraklorida tidak memberikan pengaruh terhadap kenaikan serum ALT dan AST hewan uji. 2.

Kontrol hepatotoksin Kontrol hepatotoksin dilakukan untuk melihat kerusakan hati yang dapat

ditimbulkan oleh hepatotoksin karbon tetraklorida pada dosis 2 ml/KgBB yang dipejankan secara intraperitoneal. Kerusakan hati yang diamati adalah kerusakan hati yang terjadi pada jam ke-24 dengan indikasi aktivitas serum ALT dan AST. Pengukuran aktivitas serum ALT dan AST pada jam ke-24 setelah pemejanan hepatotoksin sebesar 141,6 ± 12,4 U/l dan 489,8 ± 41,2 U/l. Dari hasil ini terlihat bahwa terjadi kenaikan aktivitas serum ALT sebesar lebih dari 3 kali dari kontrol negatif (41,4 ± 3,0 U/l) dan pada aktivitas serum AST sebesar lebih dari 4 kali aktivitas serum AST pada kontrol negatif (113,0 ± 4,6 U/l). Peningkatan aktivitas serum ALT dan AST sebesar 3 kali normal (kontrol negatif) menunjukkan adanya kerusakan akut pada organ hati. Salah satu kerusakan hati yang ditandai dengan kenaikan aktivitas serum ALT dan AST sebesar 3 kali dari normal yaitu perlemakan hati (Thapa dan Walia, 2007). Hal ini sesuai dengan mekanisme perusakan oleh karbon tetraklorida yaitu steatosis. Dari hasil ini diindikasikan bahwa hewan uji pada jam ke-24 setelah pemejanan karbon


57

tetraklorida 2 ml/KgBB secara intraperitoneal mengalami kerusakan hati akut berupa perlemakan hati. Hasil pengolahan statistik yang terlihat pada tabel VIII (ALT) dan IX (AST) menunjukkan bahwa aktivitas serum ALT dan AST kontrol hepatotoksin berbeda signifikan dengan aktivitas ALT dan AST pada kontrol negatif (p=0,009) dan kontrol ekstrak. Dari hasil ini, kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida dengan dosis 2 ml/KgBB akan dijadikan sebagai dasar untuk melihat besarnya efek antihepatotoksik yang dimiliki oleh infusa herba Mimosa pigra L. dengan variasi 3 tingkatan dosis yang berbeda. 3.

Kontrol perlakuan (infusa herba Mimosa pigra L. dosis 2,835 g/KgBB) Kontrol perlakuan infusa herba Mimosa pigra L. dilakukan untuk melihat

pengaruh infusa herba Mimosa pigra L. terhadap aktivitas serum ALT dan AST pada jam ke-24. Dosis yang digunakan yaitu dosis 2,835 g/KgBB p.o. yang merupakan peringkat dosis tertinggi dalam perlakuan. Dosis ini dipilih karena dianggap mewakili efek yang ditimbulkan oleh infusa herba Mimosa pigra L. pada peringkat dosis I dan II. Penggunaan dosis terbesar didasarkan karena bila tidak terjadi kenaikan aktivitas serum ALT dan AST pada jam ke-24 maka pada dosis I dan II juga tidak memberikan pengaruh terhadap kenaikan aktivitas serum ALT dan AST. Akan tetapi bila digunakan dosis I atau II sebagai kontrol ekstrak dan tidak terjadi kenaikan aktivitas serum ALT dan AST pada dosis tersebut, tidak menjamin pada dosis III akan memberikan kondisi yang sama karena pada dosis III kandungan senyawa dalam infusa yang diberikan pada hewan uji jelas lebih banyak dari dosis I dan II.


58

Hasil pengukuran aktivitas serum ALT pada kontrol ekstrak sebesar 39,6 ± 3,3 U/l. Secara statistik (tabel VIII) terdapat perbedaan yang tidak bermakna antara aktivitas serum ALT pada kontrol ekstrak dan aktivitas ALT pada kontrol minyak (p=0,675). Hasil pengukuran aktivitas serum AST pada kontrol infusa sebesar 105,8 ± 2,2. Secara statistik (tabel IX) terdapat perbedaan yang tidak bermakna antara aktivitas serum AST pada kontrol ekstrak dan AST pada kontrol minyak (p=0,209). Dari hasil tersebut menyatakan bahwa tidak ada perbedaan antara aktivitas serum ALT dan AST pada kontrol infusa dengan kontrol negatif. Hal ini menunjukkan bahwa infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis 2,835 g/KgBB p.o. tidak memberikan efek peningkatan aktivitas serum baik ALT maupun AST pada jam ke-24. 4.

Hasil Perhitungan %antihepatotoksik dan daya antihepatotoksik serta penentuan dosis optimum antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. terhadap tikus putih jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida Perhitungan %antihepatotoksik yang dilakukan oleh peneliti dengan cara

menghitung %kerusakan dari hepatotoksin terlebih dahulu. Perhitungan %kerusakan didapat dengan membandingkan hasil penurunan purata aktivitas serum transaminase perlakuan terhadap kontrol negatif dengan penurunan aktivitas serum transaminase kontrol hepatotoksin terhadap kontrol negatif. Kemudian %antihepatotoksik didapat dengan mengurangkan 100%

sebagai


59

representasi hati dalam kondisi sehat dengan %kerusakan yang terhitung. Secara matematis dinyatakan sebagai berikut :

1−

(purata ALT perlakuan − purata ALT kontrol negatif) × 100% (purata ALT kontrol karbon tetraklorida − purata ALT kontrol negatif)

1−

(purata AST perlakuan − purata AST kontrol negatif) × 100% (purata AST kontrol karbon tetraklorida − purata AST kontrol negatif)

(Wakchaure, Jain, Singhai, Somani, 2013). Pada formula tersebut, digunakan pengurang berupa aktivitas serum transaminase tikus pada kontrol negatif. Penggunaan aktivitas serum transaminase kontrol negatif sebagai pengurang dikarenakan aktivitas serum transaminase kontrol negatif merupakan aktivitas normal pada kondisi normal. Pada hakikatnya aktivitas serum transaminase kontrol negatif adalah aktivitas serum transaminase pada tikus yang diberikan pelarut senyawa uji, sehingga pada penelitian ini seharusnya kontrol negatif dari perlakuan silimarin adalah CMC-Na 1% pada dosis yang sama (25 mg/KgBB) dan kontrol negatif perlakuan adalah aquades dengan volume pemberian maksimum yaitu 2,5 ml. Akan tetapi pada penelitian kali ini, peneliti tidak melakukan pengukuran aktivitas serum transaminase dengan senyawa tersebut karena CMC-Na 1% dan aquades tidak memiliki potensi meningkatkan aktivitas serum transaminase. Hal ini didukung dari penelitian Surendran, Eswaran, Vijayakumar, Rao (2011) yang juga menggunakan CMC-Na 1% sebagai kontrol negatif dan memperlihatkan tidak adanya peningkatan aktivitas serum transaminase pada tikus. Selain itu, penelitian yang dilakukan oleh


60

Sujono dan Widiatmoko, 2012 juga menggunakan aquades sebagai kontrol negatif dan menunjukkan tidak adanya kenaikan aktivitas serum transaminase pada tikus. Dari penelitian-penelitian tersebut, lebih diyakini bahwa aktivitas serum transaminase tidak mengalami peningkatan dengan pemberian CMC-Na 1% dan aquades sehingga untuk menggantikan kedua kontrol tersebut, peneliti menggunakan kontrol negatif dalam penelitian berupa kontrol minyak yang merupakan pelarut karbon tetraklorida. Hasil pengolahan data secara statistik menyatakan bahwa aktivitas serum transaminase kontrol negatif berupa minyak zaitun juga tidak berbeda bermakna dengan aktivitas transaminase tikus pada jam ke-0, sehingga bisa dikatakan bahwa aktivitas serum transaminase pada kontrol negatif minyak zaitun merupakan aktivitas serum transaminase tikus normal dan digunakan dalam perhitungan %antihepatotoksik baik perlakuan infusa herba Mimosa pigra L. maupun kontrol positif silimarin. Perhitungan daya antihepatotoksik dilakukan dengan menggunakan rumus : %antihepatotoksik ALT perlakuan x 100% %antihepatotoksik ALT silimarin

Tujuan perhitungan daya antihepatotoksik adalah untuk melihat efek antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. dibandingkan dengan efek antihepatotoksik dari silimarin dosis 25 mg/KgBB. Pada penelitian ini dilakukan pengamatan efek antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. dan juga dosis optimum dari efek antihepatotoksik tersebut dalam mengobati perlemakan hati akibat karbon tetraklorida. Dosis yang


61

diuji dibagi menjadi 3 peringkat dosis. Peringkat dosis paling rendah yaitu 1,26 g/KgBB, peringkat dosis kedua yaitu 1,89 g/KgBB, dan peringkat dosis tertinggi sebesar 2,835 g/KgBB. Dosis ini didapat dari penelitian Apriyanto, dkk (2000) yang juga menggunakan dosis yang sama untuk menguji efek hepatoprotektif infusa herba Mimosa pigra L. terhadap tikus terinduksi parasetamol. Hasil pengolahan data aktivitas serum ALT dan AST secara statistik menggunakan analisis non-parametrik Mann-Whitney dapat dilihat dari tabel VIII dan IX, serta perbandingan aktivitas serum masing-masing dapat dilihat pada gambar 10 dan 11. Hasil perbandingan %antihepatotoksik antara kontrol positif silimarin dan perlakuan pemberian infusa herba Mimosa pigra L. dapat dilihat pada gambar 12.

Gambar 10. Diagram batang rata-rata pengaruh pengaruh dosis pemberian infusa herba Mimosa pigra L. terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat dari aktivitas serum ALT


62

Tabel VIII. Perbandingan hasil antara seluruh kelompok kontrol terhadap perlakuan pemberian infusa herba Mimosa pigra L. berdasarkan serum ALT pada variasi dosis tertentu Kontrol minyak zaitun Kontrol minyak zaitun Kontrol CCl4 Kontrol ekstrak Kontrol Silimarin Dosis I (1,26 g/KgBB) Dosis II (1,89 g/KgBB) Dosis III (2,835 g/KgBB)

Kontrol CCl4

Kontrol ekstrak

Kontrol silimarin

Dosis I (1,26 g/KgBB)

Dosis II (1,89 g/KgBB)

Dosis III (2,835 g/KgBB)

BB

TB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

TB

TB

TB

TB

BB

BB TB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

TB

BB

BB

BB

TB

TB

BB

BB

BB

TB

BB

BB

BB


Gambar 11. Diagram batang rata-rata pengaruh pengaruh dosis pemberian infusa herba Mimosa pigra L. terhadap hepatotoksisitas karbon tetraklorida dilihat dari aktivitas serum AST


63

Tabel IX. Perbandingan hasil antara seluruh kelompok kontrol terhadap perlakuan pemberian infusa herba Mimosa pigra L. berdasarkan serum AST pada variasi dosis tertentu Kontrol minyak zaitun Kontrol minyak zaitun Kontrol CCl4 Kontrol ekstrak Kontrol Silimarin Dosis I (1,26 g/KgBB) Dosis II (1,89 g/KgBB) Dosis III (2,835 g/KgBB)

Kontrol CCl4

Kontrol ekstrak

Kontrol silimarin

Dosis I (1,26 g/KgBB)

Dosis II (1,89 g/KgBB)

Dosis III (2,835 g/KgBB)

BB

TB

BB

TB

TB

BB

BB

TB

BB

BB

BB

BB

TB

BB

BB

BB

BB

TB

TB

BB

BB TB

BB

BB

TB

BB

TB

BB

TB

BB

TB

BB

BB

BB

TB

BB

BB

BB

TB

BB

BB

BB


120,00 %antihepatotoksik serum ALT

%anthepatotoksik(%)

100,00

%antihepatotoksik serum AST

80,00

60,00

40,00

20,00

0,00 Kontrol Kontrol kontrol dosis I dosis II dosis III minyak CCl4 silimarin (1,26 (1,89 (2,835 zaitun g/KgBB) g/KgBB) g/KgBB)

Gambar 12. Diagram batang %antihepatotoksik antara kontrol minyak zaitun, kontrol CCl4, kontrol silimarin, dan perlakuan berdasarkan aktivitas serum ALT dan AST


64

Pada pemberian silimarin dosis 25 mg/KgBB, didapatkan aktivitas serum ALT sebesar 82,8 ± 7,0 U/l dan akivitas serum AST sebesar 431,0 ± 27,3 U/l. Dari hasil aktivitas serum ALT yang didapat, %antihepatotoksik yang terhitung adalah 58,7%. Bila dibandingkan dengan kontrol CCl4, terlihat perbedaan yang bermakna (p=0,009) sehingga dapat disimpulkan bahwa silimarin dosis 25 mg/KgBB dapat menurunkan aktivitas serum ALT. Bila dibandingkan dengan kontrol minyak, aktivitas serum ALT pemberian silimarin juga memberikan hasil yang berbeda bermakna (p=0,009) sehingga nilai aktivitas serum ALT belum berada pada batas normal. Dari hasil ini disimpulkan bahwa silimarin dosis 25 mg/KgBB p.o. mampu menurukan aktivitas serum ALT namun belum dapat menormalkan aktivitasnya pada perlakuan antihepatotoksik. Aktivitas serum AST yang terukur pada pemberian silimarin dosis 25 mg/KgBB p.o. menunjukkan %antihepatotoksik sebesar 15,6%. Perbandingan aktivitas

serum

AST pada pemberian silimarin dengan kontrol

CCl4

meununjukkan perbedaan yang tidak bermakna (p=0,251) sehingga dikatakan bahwa silimarin dosis 25 mg/KgBB p.o. tidak mampu menurunkan aktivitas serum AST pada perlakuan antihepatotoksik. Hal ini dikarenakan kenaikan aktivitas serum AST tidak hanya disebabkan oleh kerusakan hati melainkan juga akibat cidera otot, jantung, serta organ vital lain seperti paru-paru. Selain merusak hati, karbon tetraklorida juga menyebabkan kerusakan pada organ-organ tersebut, sedangkan kemampuan utama silimarin pada dosis 25 mg/KgBB spesifik pada kerusakan hati bukan kerusakan organ yang lain. Hal ini menyebabkan tingginya aktivitas serum AST walaupun dengan pemberian silimarin sekalipun.


65

Dari hasil yang didapat, ditemukan perbedaan dari penelitian yang selama ini dilakukan menggunakan kontrol positif silimarin dengan dosis 25 mg/KgBB dimana kebanyakan menunjukkan penurunan aktivitas serum baik ALT maupun AST. Penelitian yang dilakukan oleh Surendran, et al., 2011 menunjukkan bahwa pemberian silimarin dosis 25 mg/KgBB p.o. memberikan aktivitas serum ALT dan AST yang mendekati dengan kontrol negatif, sedangkan secara statistik, pemberian silimarin memberikan perbedaan yang signifikan pada aktivitas serum ALT dan AST dibandingkan kontrol CCl4. Hal ini dikarenakan pada penelitian Surendran, et al., 2011 digunakan model hepatoprotektif di mana terjadi penambahan antioksidan terlebih dahulu sebelum terjadi perusakan hati sehingga organ hati sudah terlindungi oleh antioksidan dari silimarin (flavonolignan). Ketika ada radikal bebas yang masuk dan meracuni sel-sel hati, hati sudah memiliki perlindungan ganda baik dari enzim antioksidan hati sendiri serta dari antioksidan silimarin sehingga radikal bebas yang akan merusak hati dapat dinetralkan terlebih dahulu dan kerusakan hati dapat diminimalisir. Selain itu, antioksidan yang diberikan guna melindungi hati dari radikal bebas juga memicu pembentukan enzim hati seperti NADPH-chytochrom c reductase dan cytochrome b5. Antioksidan juga dapat mereduksi efek toksik dari senyawa tergantung metabolisme seperti karbon tetraklorida dengan cara menghambat aktivitas dari sitokrom P450. Karbon tetraklorida akan membentuk radikal bebas setelah melalui metabolisme fase I oleh enzim sitokrom P450. Inhibisi enzim ini oleh antioksidan dapat memperlambat metabolsime CCl4 dan mereduksi pembentukan radikal bebas dari senyawa tersebut (Sheweita, El-Gabar, Bastawy,


66

2001). Berbeda dengan perlakuan antihepatotoksik, hati yang belum mendapatkan perlindungan apapun dipaparkan oleh radikal bebas dari karbon tetraklorida. Satusatunya perlindungan yang dimiliki oleh sel hati adalah dari enzim antioksidan hati itu sendiri (peroksidase, katalase, dll.). Pada perlakuan antihepatotoksik, hati dipaparkan dengan karbon tetraklorida terlebih dahulu sehingga terjadi perusakan oleh radikal bebas akibat CCl4. Radikal bebas ini akan merusak hati terutama pada zona III di mana terdapat paling banyak aktivitas enzim mikrosomal dan enzim antioksidan (Bowman, Rand, 1980). Perusakan hati tersebut akan menyebabkan penurunan aktivitas eznim antioksidan sebelum terjadinya regenerasi sel-sel hati, sehingga antioksidan dari silimarin bekerja sendiri dalam menetralkan radikal bebas tanpa bantuan enzim antioksidan hati. Pada pemberian silimarin dosis 25 mg/KgBB ditemukan aktivitas antihepatotoksik berdasarkan aktivitas serum ALT dengan %antihepatotoksik sebesar 58,7%. Berdasarkan aktivitas serum ALT, silimarin pada dosis 25 mg/KgBB sudah memiliki kemampuan sebagai antihepatotoksik. Oleh karena itu silimarin dosis 25 mg/KgBB dapat berpotensi sebagai kontrol positif dari penelitian dan dapat dijadikan sebagai pembanding daya antihepatotoksik terhadap perlakuan menggunakan infusa herba Mimosa pigra L. Perhitungan daya antihepatotoksik pada penelitian ini hanya berdasarkan aktivitas serum ALT yang merupakan indikator spesifik kerusakan hati. Hal ini dikarenakan perhitungan daya antihepatotoksik diharapkan menunjukkan perbandingan kemampuan antihepatotoksik yang spesifik dengan kontrol positif silimarin.


67

Pada pemberian dosis infusa herba Mimosa pigra L. sebesar 1,26 g/KgBB menunjukkan aktivitas serum ALT pada jam ke-24 sebesar 79,0 ± 5,7 U/l dan aktivitas serum AST sebesar 122,2 ± 9,7 U/l. Dari aktivitas serum ALT, didapatkan %antihepatotoksik sebesar 62,5%. Apabila dibandingkan dengan kontrol CCl4, terlihat adanya perbedaan yang bermakna (p=0,009) sehingga infusa herba Mimosa pigra L. dapat menurunkan aktivitas serum ALT, akan tetapi jika dibandingkan dengan kontrol minyak, terlihat perbedaan yang bermakna (p=0,009) juga sehingga penurunan aktivitas serum ALT yang terjadi belum mencapai batas normal. Aktivitas serum ALT pada pemberian dosis 1,26 g/KgBB juga memiliki perbedaan yang tidak bermakna (p=0,834) dengan kontrol positif. Hal ini menunjukkan bahwa berdasarkan aktivitas serum ALT, efek antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,26 g/KgBB memiliki efek antihepatotoksik yang sama dengan silimarin dosis 25 mg/KgBB. Dari hasil perhitungan daya antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. menunjukkan nilai sebesar 106,5%. Hal ini menunjukkan bahwa infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,26 g/KgBB memiliki efek antihepatotoksik yang lebih besar dari silimarin akan tetapi secara statistik tidak signifikan perbedaannya. Berdasarkan aktivitas serum AST pada jam ke-24, didapatkan %antihepatotoksik sebesar 97,6%. Secara statistik, aktivitas serum AST pada pemberian infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,26 g/KgBB memiliki perbedaan yang bermakna (p=0,009) bila dibandingkan dengan kontrol CCl4 dan memiliki perbedaan yang tidak bermakna (p=0,346) dibandingkan kontrol minyak. Dari hasil ini dikatakan bahwa pemberian infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis


68

1,26 g/KgBB secara oral dapat menurunkan aktivitas serum AST hingga batas normal. Aktivitas serum AST pada perlakuan dosis infusa herba Mimosa pigra L. sebesar 1,26 g/KgBB memberikan penurunan aktivitas serum AST yang lebih besar serta memiliki perbedaan yang signifikan (p=0,009) dengan aktivitas serum AST pada pemberian silimarin dosis 25 mg/KgBB. Dari hasil yang didapat %antihepatotoksik serum ALT yang didapat sebesar 62,5%, dinyatakan bahwa pada dosis 1,26 g/KgBB, infusa herba Mimosa pigra L. memiliki aktivitas antihepatotoksik yang cukup besar. Prosentase antihepatotoksik 62,5% ini menunjukkan bahwa dengan pemberian infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,26 g/KgBB sudah memiliki aktivitas antihepatotoksik. Dari hasil %antihepatotoksik AST terhadap karbon tetraklorida yang didapat sebesar 97,6%, dapat dinyatakan bahwa pada dosis 1,26 g/KgBB, infusa herba Mimosa pigra L. memiliki kemampuan yang cukup besar dalam menurunkan aktivitas AST. Akan tetapi penurunan yang terjadi dapat dikarenakan adanya penyembuhan dari organ-organ lain selain hati yang juga rusak akibat pemejanan karbon tetraklorida seperti otot, ginjal, jantung, dan paru-paru. Ekstrak metanol daun Mimosa pigra L. memiliki kemampuan sebagai anti hipertensi pulmonar. Selain itu, ekstrak metanol dari daun Mimosa pigra L. memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi (Rakotomalala, et al., 2013). Berdasarkan penelitian ini dapat dimungkinkan infusa herba Mimosa pigra L. memiliki aktivitas dalam membantu penyembuhan dari sel-sel otot rangka dan sel-sel otot jantung yang rusak akibat karbon tetraklorida.


69

Pada pemberian dosis infusa herba Mimosa pigra L. sebesar 1,89 g/KgBB menunjukkan aktivitas serum ALT pada jam ke-24 sebesar 69,8 ± 4,3 U/l dan aktivitas serum AST sebesar 120,0 ± 4,4 U/l. Dari aktivitas serum ALT, didapatkan %antihepatotoksik sebesar 71,7%. Apabila dibandingkan dengan kontrol CCl4, terlihat adanya perbedaan yang bermakna (p=0,009) sehingga infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis 1,89 g/KgBB juga dapat menurunkan aktivitas serum ALT, akan tetapi jika dibandingkan dengan kontrol minyak, terlihat perbedaan yang bermakna (p=0,009) juga sehingga penurunan aktivitas serum ALT yang terjadi belum mencapai batas normal. Aktivitas serum ALT pada pemberian dosis 1,89 g/KgBB juga memiliki perbedaan yang tidak bermakna (p=0,173) dengan kontrol positif. Hal ini menunjukkan bahwa berdasarkan aktivitas serum ALT, efek antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,89 g/KgBB memiliki kesamaan dengan efek antihepatotoksik dari silimarin dosis 25 mg/KgBB. Dilihat dari hasil perhitungan daya antihepatotoksik, infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,89 g/KgBB memiliki daya antihepatotoksik sebesar 122,1%. Dari hasil ini menunjukkan bahwa infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,89 g/KgBB memiliki efek antihepatotoksik yang lebih besar dari silimarin akan tetapi memiliki perbedaan yang tidak signifikan secara statistik. Ditinjau

aktivitas

serum

AST

pada

jam

ke-24,

didapatkan

%antihepatotoksik sebesar 98,1%. Secara statistik, aktivitas serum AST pada pemberian infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,89 g/KgBB memiliki perbedaan yang bermakna (p=0,009) bila dibandingkan dengan kontrol CCl4 dan memiliki perbedaan yang tidak bermakna (p=0,251) dibandingkan kontrol minyak. Dari


70

hasil ini dikatakan bahwa pemberian infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis 1,89 g/KgBB secara oral dapat menurunkan aktivitas serum AST hingga batas normal. Aktivitas serum AST pada perlakuan dosis infusa herba Mimosa pigra L. sebesar 1,89 g/KgBB menunjukkan penurunan yang lebih besar dan memiliki perbedaan yang signifikan (p=0,009) dengan aktivitas serum AST pada pemberian silimarin dosis 25 mg/KgBB. Berdasarkan %antihepatotoksik ALT terhadap karbon tetraklorida yang didapat sebesar 71,7%, dinyatakan bahwa pada dosis 1,89 g/KgBB, infusa herba Mimosa pigra L. memiliki aktivitas antihepatotoksik yang cukup besar. Berdasarkan %antihepatotoksik dari serum AST yang didapat sebesar 98,1%. Hal ini dikarenakan adanya aktivitas penyembuhan pada organ lain yang lebih besar daripada aktivitas penyembuhan pada hati. Hasil pengolahan data secara statistik menunjukkan bahwa terdapat perbedaan aktivitas serum transaminase (ALT dan AST) yang tidak bermakna antara pemberian infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,26 g/KgBB dengan 1,89 g/KgBB sehingga kedua dosis tersebut memiliki efek antihepatotoksik yang sama. Pada pemberian dosis infusa herba Mimosa pigra L. sebesar 2,835 g/KgBB menunjukkan aktivitas serum ALT pada jam ke-24 sebesar 101,60 ± 5,41 U/l dan aktivitas serum AST sebesar 355,2 ± 17,1 U/l. Dari aktivitas serum ALT, didapatkan %antihepatotoksik sebesar 39,9%. Apabila dibandingkan dengan kontrol CCl4, terlihat adanya perbedaan yang bermakna (p=0,009) sehingga infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis 2,835 g/Kg BB dapat menurunkan aktivitas serum ALT, akan tetapi jika dibandingkan dengan kontrol minyak, terlihat


71

perbedaan yang bermakna (p=0,009) juga sehingga penurunan aktivitas serum ALT yang terjadi belum mencapai batas normal. Aktivitas serum ALT pada pemberian dosis 2,835 g/KgBB juga memiliki perbedaan yang tidak bermakna (p=0,075) dengan kontrol positif. Daya antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. dosis 2,835 g/KgBB sebesar 68,0%. Hal ini menunjukkan bahwa berdasarkan aktivitas serum ALT, efek antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. dosis 2,835 g/KgBB tidak lebih besar dari silimarin dosis 25 mg/KgBB akan tetapi berbeda tidak bermakna secara statistik. Berdasarkan hal ini, dikatakan bahwa infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis 2,835 g/KgBB yang diberikan secara oral mampu menurunkan aktivitas serum ALT pada tikus terinduksi karbon tetraklorida namun belum bisa menormalkan aktivitas serum ALT tersebut. Berdasarkan aktivitas serum AST pada jam ke-24, didapatkan %antihepatotoksik sebesar 35,7%. Secara statistik, aktivitas serum AST pada pemberian infusa herba Mimosa pigra L. dosis 2,835 g/KgBB memiliki perbedaan yang bermakna (p=0,016) bila dibandingkan dengan kontrol CCl4 dan memiliki perbedaan yang juga bermakna (p=0,009) dibandingkan kontrol minyak. Dari hasil ini dikatakan bahwa pemberian infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis 2,836 g/KgBB secara oral dapat menurunkan aktivitas serum AST akan tetapi tidak mencapai batas normal. Aktivitas serum AST pada perlakuan dosis infusa herba Mimosa pigra L. sebesar 2,835 g/KgBB memiliki perbedaan yang tidak bermakna (p=0,076) dengan aktivitas serum AST pada pemberian silimarin dosis 25 mg/KgBB.


72

Hasil perhitungan %antihepatotoksik baik dari aktivitas serum ALT maupun AST menunjukkan bahwa pada dosis 2,835 g/KgBB infusa herba Mimosa pigra L. mengalami penurunan. Secara statistik aktivitas serum transaminase dosis 2,835 g/KgBB memiliki perbedaan yang bermakna dengan dosis 1,26 g/KgBB dan 1,89 g/KgBB baik pada aktivitas serum ALT (p=0,028; p=0,016) maupun aktivitas serum AST (p=0,009). Hal ini menunjukkan bahwa terdapat perbedaan efek antihepatotoksik dari dosis 2,835 g/KgBB terhadap kedua peringkat dosis yang lain. Hal ini diduga karena adanya kejenuhan aktivitas antioksidan dalam menetralkan radikal bebas sehingga kecepatan reaksi penetralan menjadi tetap dan bahkan melambat. Kerusakan hati akan menyebabkan berkurangnya enzim glutation S-transferase (GSH) sebagai salah satu enzim penetral senyawa radikal bebas dan senyawa kimia yang berlebih termasuk antioksidan itu sendiri dengan menggunakan konjugasi glutation. Hal ini akan

berdampak

pada

kerusakan

hati

yang

semakin

parah

karena

ketidakseimbangan dari mekanisme penetralan senyawa kimia yang memasuki hati terhadap kecepatan senyawa tersebut meracuni hati, sehingga memicu terjadinya stres oksidatif (Rang, Dale, Ritter, Moore, 2003). Kelebihan senyawa antioksidan seperti senyawa fenolik juga dapat menyebabkan kerusakan pada sel. Penelitian secara in vitro menunjukkan bahwa senyawa fenolik yang berlebih pada kultur sel PC21 dan Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) menunjukkan terjadinya proses oksidasi pada antioksidan itu sendiri. Proses self oxidation ini menyebabkan terbentuknya hidrogen peroksida (H2O2), quinone dan semiquinone yang dapat meracuni sel (Halliwell, 2006). Selain itu, dugaan lain


73

yang mungkin terjadi adalah kandungan senyawa alkaloid yang bersifat toksik pada sel. Mimosa pigra L. merupakan tanaman genus Mimosa. Genus Mimosa memiliki kandungan alkaloid yang bersifat toksik bernama mimosin. Mimosin memiliki kemampuan menghambat pembelahan sel terutama pada fase S yaitu fase sintesis DNA (Hughes dan Cook, 1996). Efek dari mimosin dapat menyebabkan proses regenerasi sel-sel terutama sel hati yang mengalami kerusakan menjadi lebih lama karena proses sintesis DNA menjadi terhambat sehingga penyembuhan hati juga menjadi lebih lama. Untuk saran penelitian selanjutnya, dapat digunakan ekstrak lain dari Mimosa pigra L. seperti ekstrak metanol sehingga diharapkan alkaloid mimosin tidak ikut terekstrak. Dari penelitian ini dinyatakan bahwa ditemukan efek antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis 1,26 g/KgBB dan 1,89 g/KgBB sedangkan pada dosis 2,835 g/KgBB terjadi penurunan efek antihepatotoksik. Berdasarkan aktivitas serum ALT, didapatkan %antihepatotoksik berturut-turut sebesar 62,5; 71,7; dan 39,9%. Berdasarkan aktivitas AST, didapatkan %antihepatotoksik berturut-turut sebesar 97,6; 98,1; dan 35,7%. Dari hasil ini dapat dinyatakan bahwa efek antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. tidak tergantung dosis. Bila dilihat lebih lanjut pada dosis 1,26 g/KgBB dan dosis 1,89 g/KgBB memiliki efek antihepatotoksik yang berbeda tidak bermakna. Namun bila dibandingkan dengan dosis 2,835 g/KgBB, aktivitas anthepatotoksinnya memiliki perbedaan bermakna dan pada dosis 2,835 g/KgBB menunjukkan penurunan. Berdasarkan hal ini, dapat dikatakan bahwa pada dosis 1,26 g/KgBB dan dosis


74

1,89 g/KgBB, infusa herba Mimosa pigra L. memiliki efek antihepatotoksik paling besar dengan dosis optimum 1,26 g/KgBB. Berdasarkan hal ini, perlu dilakukan penelitian dengan peringkat dosis di bawah 1,26 g/KgBB untuk mendapatkan dosis efektif yang lebih kecil dan digunakan untuk perhitungan ED50. Berdasarkan hasil yang didapat, hipotesis yang disusun oleh peneliti diterima bahwa infusa herba Mimosa pigra L. memiliki efek antihepatotoksik. Hal ini didukung dari temuan efek antihepatotoksik pada salah dosis yang sudah ditetapkan yaitu 1,26; 1,89; dan 2,835 g/KgBB dengan dosis antihepatotoksik optimum pada 1,26 g/KgBB. Kemampuan antihepatotoksik ini diduga karena kandungan beberapa senyawa yang ada pada infusa herba Mimosa pigra L. beberapa senyawa tersebut antara lain quercetin dan myricitrin yang memiliki aktivitas antioksida. Antioksidan dapat menghambat reaksi pembentukan radikal lipid dengan cara mencegah propagnasi dan radical scavenging. Senyawa lain yang terlibat adalah triptophan yang merupakan asam amino esensial untuk proses regenerasi sel. Berdasarkan hal ini, dapat digunakan ekstrak lain dari Mimosa pigra L. seperti ekstrak etanol dan metanol sehingga diharapkan senyawa antioksidan yang berupa quercetin dan myricitrin serta asam amino triptophan yang terekstrak menjadi lebih banyak dan tidak terkontaminasi metabolit sekunder yang lain.


75

D. Rangkuman Pembahasan Penelitian ini bertujuan untuk melihat efek antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. terhadap tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbin tetraklorida. Dosis infusa herba Mimosa pigra L. yang digunakan adalah 1,26; 1,89; dan 2,835 g/KgBB. Indikator kerusakan hati yang digunakan untuk mengkaji efek antihepatotoksik adalah aktivitas serum ALT dengan data pendukung menggunakan aktivitas serum AST yang diambil pada jam ke-24 setelah pemejanan hepatotoksin karbon tetraklorida. Hasil penelitian menyatakan bahwa pemberian infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis 2,835 g/KgBB p.o. tanpa disertai pemberian hepatotoksin tidak meningkatkan aktivitas serum ALT maupun AST. Dari hal ini dapat dinyatakan bahwa kenaikan aktivitas serum ALT dan AST yang terukur merupakan hasil dari kemampuan karbon tetraklorida merusak sel-sel hati dan menyebabkan perlemakan hati. Begitu pula pada pemberian minyak zaitun i.p. sebagai pelarut karbon tetraklorida menunjukkan kesamaan aktivitas serum ALT dan AST pada tikus sebelum diberi perlakuan apapun (jam ke-0). Sehingga dapat disimpulkan bahwa minyak zaitun tidak memberikan efek apapun terhadap aktiitas serum ALT dan AST. Penggunaan

silimarin

dosis

25

mg/KgBB

menunjukkan

efek

antihepatotoksik yang cukup baik berdasarkan aktivitas serum ALT akan tetapi tidak menurunkan aktivitas serum AST. Hasil perhitungan %antihepatotoksik berdasarkan aktivitas serum ALT sebesar 58,7% dan %antihepatotoksik berdasarkan aktivitas AST sebesar 15,6%. Berdasarkan nilai %antihepatotoksik


76

dari aktivitas serum ALT dapat dinyatakan bahwa dosis 25 mg/KgBB sudah memiliki efek antihepatotoksik sehingga bisa digunakan sebagai pembanding untuk menghitung daya antihepatotoksik. Berdasarkan analisis hasil secara statistik menunjukkan bahwa aktivitas serum ALT pada perlakuan infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,26; 1,89; dan 2,835 g/KgBB menunjukkan perbedaan yang signifikan dengan aktivitas serum ALT pada kontrol hepatotoksin namun juga menunjukkan perbedaan yang signifikan dengan kontrol negatif, sehingga infusa herba Mimosa pigra L. dikatakan mampu menurunkan aktivitas serum ALT namun belum sampai pada batas normal. Hasil pengukuran ALT dan AST setelah diberi perlakuan infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis 1,26; 1,89; dan 2,835 g/KgBB berdasarkan aktivitas serum ALT, didapatkan %antihepatotoksik dan daya antihepatotoksik berturutturut sebesar 62,5; 71,7; 39,92% dan 106,5; 122,1; 68,0%. Berdasarkan aktivitas AST, didapatkan %antihepatotoksik berturut-turut sebesar 97,6; 98,1; dan 35,7% dan.

Beberapa

hal

yang

dimungkinkan

menyebabkan

penurunan

efek

antihepatotoksik pada dosis 2,835 g/KgBB adalah berkurangnya enzim GST yang dapat menetralkan senyawa yang memasuki hati, kejenuhan antioksidan yang menyebabkan peristiwa self oxidation, dan adanya alkaloid mimosin yang bersifat sitotoksik. Dari hasil ini dapat dinyatakan bahwa efek antihepatotoksik dari infusa herba Mimosa pigra L. tidak tergantung dosis. Hasil penelitian menyatakan adanya efek antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. pada dosis optimum sebesar 1,26 g/KgBB.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan Berdasarkan hasil yang diperoleh dari hasil penelitian berdasarkan dan analisis statistik yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan: 1. Infusa herba Mimosa pigra L. memiliki efek antihepatotoksik pada tikus putih jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida. 2. Dosis optimum antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. adalah 1,26 g/KgBB.

B. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai : 1. Efek antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. dengan senyawa model yang dapat menimbulkan kerusakan hati lebih lama seperti parasetamol dan galaktosamin sehingga dapat dilakukan pemberian ekstrak secara berulang. 2. Efek antihepatotoksik infusa herba Mimosa pigra L. dengan peringkat dosis di bawah 1,26 g/KgBB untuk mengetahui dosis efektif antihepatotoksik terkecil. 3. Efek antihepatotoksik tanaman Mimosa pigra L. dengan jenis ekstrak yang berbeda sehingga kandungan antioksidan yang terdapat pada ekstrak menjadi lebih spesifik dan tidak terkontaminasi dengan senyawa lain seperti alkaloid mimosin.

77


78

Daftar Pustaka Amacher, D.E., 1997, Serum Transaminase Elevation as Indicators of Hepatic Injury Following the Administration of Drugs, Regulatory Toxicology and Pharmacology , 27, 119-130. Apriyanto, A., Susanti, E., Wijayanti, I., Linawati, Y., 2000, Efek Hepatoprotektif Rebusan Herba Putri Malu (Mimosa pigra L.) Pada Tikus Terangsang Parasetamol, Laporan Penelitian, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta Backer, C.A., 1963, Flora of Java, vol 1, N.V.P., Noordhoff, Groningen, the Netherland, pp. 547-564. Bashandy, S.A., Al Wasel, S.H., 2011, Carbon Tetrachloride-Induced Hepatotoxicity and Nephrotoxicity in Rats : Protective Role of Vitamin C, Journal of Pharmacology and Toxicology, 6 (3), 283-292. Binggeli, P., P.,2005, Crop Protection Compendium–Mimosa pigra L., http://members.multimania.co.uk/woodyplantecology/docs/CPCMimosa_pigra.pdf, diakses tanggal : 20 Februari 2013. Boll, M., Lutz, W.D., Becker, E., Stampfl, A., 2001, Mechanism of Carbon Tetrachloride-Induced Hepatotoxicity. Hepatocelullar Damage by Reactive Carbon Tetrachloride Metabolites, Journal of Bioscience, 56, 78, 649-659. Bowman, V.W.C., Rand, M.J., 1980, Textbook of Pharmacology, 2nd edition, Blackwell Scientific Publication, Oxford University, Edinburgh, p. 26.35. Chalrton, M., 2004, Nonalcoholic Fatty Hati Disease : A Review of Current Understanding and Future, Clinical Gastroenterolgy and Hepatology, 2 (12), 1048-1058. Chong, K.Y., 2009, A Checklist of the Total Vascular Plant Flora of Singapore: Native, Naturalised and Cultivated Species, Raffles Museum of Biodiversity Research, National University of Singapore, Singapore, p. 273.


79

Keppler, D., Decker,K., 1969, Studies of the Mechanism of Galactosamine Hepatitis : Accumulation of Galactosamine-1-Phosphate and its Inhibition of UDP-Glucose Pyrophosporylase, European J. Biochem, 10(1969), 219-225. Departemen Kesehatan RI, 1995, Farmakope Indonesia, Jilid IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 6. Donatus, I.A., 2001, Toksikologi Dasar, Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi, Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta, hal. 153. Fancher, T.L., Kamboj, A., Onate, J., 2007, Interpreting Liver Function Tests, Current Psychiatry, 6 (5), 61-68. Fransiskus, A., 2011, Disease Progression : Steatosis, Hepatitis C Support Project,version3,http://www.hcvadvocate.org/hepatitis/factsheets_pdf/ste atosis.pdf, diakses tanggal : 15 Februari 2013. Guyton, A.C., 2008, Buku Ajar Fisiologi Kedokteran, Penerbit EGC, Jakarta, hal. 903-907. Halliwell, B., 2006, Dietary Polyphenol : Good, Bad, or Indifferent for Your Health?, Cardiovascular Research, 73 (2007), 341-347. Hodgson, E., 2009, A Text Book of Modern Toxicology Method, John Wiley & Sons, Canada, pp. 277-289. Hughes, T.A., Cook, P.R., 1996, Mimosine Arrest the Cell Cycle After Cells Enter S Phase, Experimnetal Cell Research, 222 (35), 275-280. Javed, S., Kohli, K., Ali, M., 2011, Reassessing Bioavailability of Silymarin, Alternative Medicine Review, 16 (3), 239-249. Kaplowitz, N., 2005, Idiosyncratic Drug Hepatotoxicity, Nature Publishing Group, 4, 489-499. Kaur, P., Kumar, N., Shivananda, T.N., Kaur, G., 2011, Phytochemical Screening and Antomicrobial Activity of The Plant Extract of Mimosa pudica L. Againts Selected Micorba, Journal of Medicinal Plants Research, 5 (22), 5356-5359.


80

Kumar, 2009, Dasar Patologi Penyakit, Penerbit EGC, Jakarta, hal. 902-938. Lee, 2004, Bioactivity Guided Fractionation And Antioxidant Evaluation, School of Biological Science, Research Report, Universitas Sains Malaysia, Kuching, Sarawak Martini, F.H., 2004, Fundamentals of Anatomy and Physiology, 8th edition, Pearson Education inc, San Fransisco, pp. 903-907. Mbatchou, V.C., Ayebila, A.J., Apea, O.B., 2011, Antibacterial Activity of Phytochemicals from Acacia nilotica, Entada africana, and Mimosa pigra L. on Salmonella typhi, Journal of Animal & Plant Science, 10 (1), 1248-1258. McPhee, S.J., 2010, Patofisiologi Penyakit, Pengantar Fungsi Kedokteran Klinis, Penerbit EGC, Jakarta, hal. 419-461. Mumtaz, 2010, Principle and Practice of Mixture Toxicology,WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KgaA, Weinheim, pp. 41-47. Murugesan, G.S., Sathiskumar, M., Jayabalan,R., Binupriya, A.R., Swaminantan, K., Yun, S.E., 2009, Hepatoprotective and Curative Properties of Kombucha Tea Against Carbon Tetrachloride-Induced Toxicity, J of Microbiology and Biotechnology, 19 (4), 397-402. Olson, K.R., 2006, Poisoning & Drug Overdose, 5th edition, McGraw Hill, San Fransisco, California, p. 105. Pradhan, S.C., Girish, C., 2006, Hepatoprotective Herbal Drug Silymarin from Experimental Pharmacology to Clinical Medicine, Indian J Med Res, 124, 491-504. Pujar,S., Kashinakunti, S.V., Kalaganad, G.S., Dambala, A., Doddamani, G.B., 2010, Evaluation of Deritis In Alcoholic and Non-Alcoholic Hati Disease- A Case Control Study, Journal of Clinical and Diagnostic Research, (4), 2463-2466.


81

Rakotomalala, G., Agard, C., Tonnerre, P., Tesse, A., Derbre, S,, Michalet, S., Hamzaoui, J., Rio, M., Cari-Toumaniantz, C., Richomme, P., Charreau, B., Loirand, G., 2013, Extract from Mimosa pigra Attenuates Chronic Experimental Pulmonary Hypertension, Journal of Ethnopharmacology, 148 (2013), 106-116. Rang, H.P., Dale, M.M., Ritter, J.M., Moore, P.K., 2003, Pharmacology, 5th edition, Churchill Livingstone, New York, p. 427. Sheweita, S.A., El-Gabar, M.A., Bastwy, M., 2001, Carbon Tetrachloride Changes the Activity of Cytochrome P450 System in the Liver of Male Rats : Role of Antioxidant, Toxicology, 169 (2001), 83-92. Sofia, N.A., Nurdjanah, S., Ratnasari, N., 2009, Kadar Leptin Pada Populasi non Diabetes dengan dan tanpa Non-Alcoholic Fatty Hati, Berkala Kesehatan Klinik, 15 (1), 49-55. Sujono, T.A., Widiatmoko, Y.W., 2012, Infulence Dried Flower of Hibiscus sabdariffa Linn. Infusion on Serum Glutamate Pyruvate Transaminase (SGPT) Level Againts Paracetamol Induced Liver Injury in Rats, Research and Application on Traditional Complementary and Alternative Medicine in Health Care, International Conference, Surakarta, Indonesia. Surendran, S., Eswaran, M.B., Vijayakumar, M., Rao, Ch.V., 2011, In vitro and In vivo Hepatoprotective Activity of Cissampelos pariera Againts CarbonTetrachlorida Induced Hepatic Damage, Idian Jurnal of Experimental Biology, 49, 939-945. Timbrell, A.J., 2008, Principles of Biochemcal Technology, Edisi 4, Informa Healthcare, USA Inc, USA, p. 195. Thapa, B.R., Walia, A., 2007, Hati Function Tests and Their Interpretation, Indian Journal of Pediatrics, 74 (7), 663-671. Tjitrosoedirdjo, 1989, The Distribution and Potential Problems of Mimosa pigra L. In Indonesia, Biotroipia (2), 18-24.


82

Toma, T.T., Rahman, S., Jahan, S., Haque, M., Agarwala, B., Shelley, M.R., Sophia, H., Mahal, M.J., Hossain, S., Rahmatullah, M., 2012, Antihyperglycemic and Antinociceptive Activity of Fabaceae Family Plants – an Evaluation of Mimosa pigra L. leaves, Advances in Natural and Applied Sciences, 6 (8), 1552-1557. Wakchaure, D., Jain, D., Singhai, A.K., Somani, R., 2013, Hepatoprotective Activity of Symplocos racemosa Bark on Tetrachloride-Induced Hepatic Damage in Rats, Journal of Ayurveda & Integrative Medicine, 2 (3), 137143. Weber, L.W.D., Boll, M., Stampfl,A., 2003, Hepatotoxicity and Mechanism of Action of Haloalkanes : Carbon Tetrachloride as a Toxicological Model, Critical Reviews in Toxicology, 2 (33), 105-136. World

Agroforestry Centre, 2013, Mimosa pigra L, http://www.worldagroforestrycentre.org/sea/products/afdbases/af/asp/Spe ciesInfasp?SpID=672#Uses, diakses tanggal : 20 Februari 2013.

Xu, G.H., Chen, D.H., Xhang, Y.H., Jiang, P., Ye, X.Q., 2008, Minerals, Phenolic Compounds, and Antioxidant Capacity of Citrus Peel Extract by Hot Water, Journal of Food Science, 73 (1), c11-c18. Yadav, N.P., Pal, A., Shanker, K., Bawankule, D.U., Gupta, A.K., Darokar, M.P., Kanunja, S.P., 2008, Synergistic Effect of Silymarin and Standarized Extract of Phyllanthus amarus Againts CCl4-Induced Hepatotoxicity in Rattus norvegicus, Phytomedicine, 15 (2008), 1053-1061. Zimmerman, H. J., 1999, Hepatotoxicity, Appleton Century Crofts, New York, pp. 210.


LAMPIRAN

83


LAMPIRAN

Lampiran 1. Foto infusa herba Mimosa pigra L.

Lampiran 2. Foto suspensi silimarin dalam CMC-Na 1%

84


Lampiran 3. Surat determinasi tanaman Mimosa pigra L.

85


Lampiran 4. Surat ethical clearence

86


Lampiran 5. Certified of Analysis Silimarin

87


88

Lampiran 6. Hasil analisis statistik data ALT dan AST pada uji pendahuluan waktu pencuplikan darah hewan uji setelah induksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB Descriptives Waktu aktivitas_SGPT

0

Statistic Mean

43.8000

95% Confidence Interval for Mean Lower Bound

39.9329

Upper Bound

47.6671

5% Trimmed Mean

43.8889

Median

44.0000

Variance

3.11448

Minimum

39.00

Maximum

47.00

Range

8.00

Interquartile Range

5.50

Skewness

-.933

Kurtosis Mean

.913

.762

2.000

1.4160E2

12.34747


1.0732E2

Upper Bound

1.7588E2

5% Trimmed Mean

1.4078E2

Median

1.2600E2

Variance

762.300

Std. Deviation

2.76098E1

Minimum

117.00

Maximum

181.00

Range

64.00

Interquartile Range

50.00

Skewness

.856

Kurtosis 48

1.39284

9.700

Std. Deviation

24

Std. Error

.913

-1.448

2.000

Mean

56.0000

8.26438


33.0544

Upper Bound

78.9456

5% Trimmed Mean

55.6667

Median

51.0000

Variance

341.500

Std. Deviation

1.84797E1

Minimum

36.00

Maximum

82.00

Range

46.00

Interquartile Range

34.50

Skewness Kurtosis

.598

.913

-1.001

2.000


72

Mean

40.6000


26.3182

Upper Bound

54.8818

5% Trimmed Mean

39.8333

Median

35.0000

Variance

89

5.14393

132.300

Std. Deviation

1.15022E1

Minimum

34.00

Maximum

61.00

Range

27.00

Interquartile Range

15.00

Skewness

2.145

.913

Kurtosis

4.648

2.000

Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova waktu aktivitas_SGPT

Statistic

df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

5

.670

5

.120

.861

5

.230

5

.200*

.955

5

.775

5

.013

.659

5

.003

5

24

.314

48

.207

72

.389

a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance.

Kruskal-Wallis Test Test Statisticsa,b aktivitas_SGPT 13.274

df

3

Asymp. Sig.

.004

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: waktu

Mann-Whitney Test

Ranks waktu aktivitas_SGPT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

0

5

3.00

15.00

24

5

8.00

40.00

Total

10

Test Statisticsb aktivitas_SGPT Mann-Whitney U

.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611

Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: waktu

Sig.

.941

.199

Chi-Square

df

.200*

0

.009 .008a



N

0 48 Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

4.50

22.50

5

6.50

32.50

10


7.500

Wilcoxon W

22.500

Z

-1.048

Asymp. Sig. (2-tailed)

.295 .310a

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: waktu Ranks waktu aktivitas_SGPT

N

0 72 Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

7.00

35.00

5

4.00

20.00

10


5.000

Wilcoxon W

20.000

Z

-1.571


.116 .151a


24 48 Total

N

Mean Rank 8.00

40.00

5

3.00

15.00

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


Sum of Ranks

5

.009 .008a

90



N

Mean Rank

Sum of Ranks

24

5

8.00

40.00

72

5

3.00

15.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009 .008a


N

Mean Rank

Sum of Ranks

48

5

7.20

36.00

72

5

3.80

19.00

Total

10


4.000

Wilcoxon W

19.000

Z

-1.781


.075 .095a

91


92

Descriptives waktu aktivitas_SGOT

0

Statistic Mean 95% Confidence Interval for Mean

1.1620E2 Lower Bound

1.1016E2

Upper Bound

1.2224E2

5% Trimmed Mean

1.1628E2

Median

1.1900E2

Variance

4.86826

Minimum

110.00

Maximum

121.00

Range

11.00

Interquartile Range

9.00

Skewness Kurtosis Mean 95% Confidence Interval for Mean

.913

-2.564

2.000

4.8980E2

41.19757

3.7542E2

Upper Bound

6.0418E2

5% Trimmed Mean

4.8683E2

Median

4.7000E2 8.486E3

Std. Deviation

9.21206E1

Minimum

400.00

Maximum

633.00

Range

233.00

Interquartile Range

163.50


1.051

.913

.732

2.000

1.7900E2

22.71343

Lower Bound

1.1594E2

Upper Bound

2.4206E2

5% Trimmed Mean

1.7861E2

Median

1.6000E2

Variance

2.580E3

Std. Deviation

5.07888E1

Minimum

120.00

Maximum

245.00

Range

125.00

Interquartile Range

94.50

Skewness Kurtosis 72

-.570

Lower Bound

Variance

48

Mean 95% Confidence Interval for Mean

.358

.913

-1.657

2.000

95.4000

3.82884

Lower Bound

84.7694

Upper Bound

1.0603E2

5% Trimmed Mean

95.2778

Median

92.0000

Variance Std. Deviation

73.300 8.56154

Minimum

87.00

Maximum

106.00

Range

19.00

Interquartile Range

16.50

Skewness Kurtosis

2.17715

23.700

Std. Deviation

24

Std. Error

.489

.913

-2.707

2.000


Kruskal-Wallis Test Test Statisticsa,b aktivitas_SGOT Chi-Square

17.596

df

3

Asymp. Sig.

.001

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: waktu

Mann-Whitney Test Ranks waktu aktivitas_SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

0

5

3.00

15.00

24

5

8.00

40.00

Total

10

Test Statisticsb aktivitas_SGOT Mann-Whitney U

.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009 .008a

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: waktu Ranks waktu aktivitas_SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

0

5

3.20

16.00

48

5

7.80

39.00

Total

10


1.000

Wilcoxon W

16.000

Z

-2.410


.016 .016a

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: waktu

Ranks waktu aktivitas_SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

0

5

8.00

40.00

72

5

3.00

15.00

Total

10

93



.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009 .008a


N

24 48 Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a


N

Mean Rank

Sum of Ranks

24

5

8.00

40.00

72

5

3.00

15.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: waktu

Ranks waktu aktivitas_SGOT

48 72 Total

N

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

94


95


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611

Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.009 .008a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: waktu

Lampiran 7. Hasil analisis statistik data ALT dan AST pada kelompok kontrol olive oil dosis 2 mL/kgBB Descriptives Statistic SGPTminyak0


46.6000 Lower Bound

41.1452

Upper Bound

52.0548

5% Trimmed Mean

46.5000

Median

45.0000


4.39318 42.00

Maximum

53.00

Range

11.00

Skewness Kurtosis

1.96469

19.300

Minimum

Interquartile Range

Std. Error

8.00 .771

.913

-.581

2.000


96

Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Statistic SGPTminyak0

df

Shapiro-Wilk Sig.

.242

Statistic *

5

.200

df

Sig.

.940

5

.665

a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Descriptives Statistic SGPTminyak24

Mean

Std. Error

41.4000

95% Confidence Interval for Mean

Lower Bound

33.0892

Upper Bound

49.7108

5% Trimmed Mean

41.5000

Median

42.0000

Variance

2.99333

44.800

Std. Deviation

6.69328

Minimum

32.00

Maximum

49.00

Range

17.00

Interquartile Range

12.50

Skewness

-.463

.913

-.697

2.000

Kurtosis Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Statistic SGPTminyak24

df

Shapiro-Wilk Sig.

.154

Statistic

.200*

5

df

Sig.

.977

5

.916

a. Lilliefors Significance Correction *. This is a lower bound of the true significance. Paired Samples Statistics Mean Pair 1

N

Std. Deviation

Std. Error Mean

SGPTminyak0

46.6000

5

4.39318

1.96469

SGPTminyak24

41.4000

5

6.69328

2.99333

Paired Samples Correlations N Pair 1

SGPTminyak0 & SGPTminyak24

Correlation 5

Sig.

-.631

.254

Paired Samples Test Paired Differences

Mean Pair 1

SGPTminy ak0 SGPTminy ak24

5.20000

Std. Deviation

10.05982

Std. Error Mean

4.49889

95% Confidence Interval of the Difference Lower

-7.29092

Upper

17.69092

t

1.156

Sig. (2df tailed)

4

.312


97

Descriptives Statistic SGOTminyak0

Mean

Std. Error

1.3260E2


Lower Bound

1.1134E2

Upper Bound

1.5386E2

5% Trimmed Mean

1.3183E2

Median

1.2800E2

Variance

7.65898

293.300

Std. Deviation

1.71260E1

Minimum

117.00

Maximum

162.00

Range

45.00

Interquartile Range

23.50

Skewness

1.767

.913

Kurtosis

3.740

2.000

Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Statistic SGOTminyak0

df

Shapiro-Wilk Sig.

.383

5

Statistic .016

df

Sig.

.787

5

.064

a. Lilliefors Significance Correction

Descriptives Statistic SGOTminyak24

Mean

Std. Error

1.1300E2


Lower Bound

1.0013E2

Upper Bound

1.2587E2

5% Trimmed Mean

1.1261E2

Median

1.1100E2

Variance

4.63681

107.500

Std. Deviation

1.03682E1

Minimum

103.00

Maximum

130.00

Range

27.00

Interquartile Range

17.00

Skewness

1.379

.913

Kurtosis

2.258

2.000


.262

a. Lilliefors Significance Correction

df

Shapiro-Wilk Sig.

5

.200*

Statistic .897

df

Sig. 5

.391


98


Shapiro-Wilk

df

Sig.

.262

Statistic *

5

.200

df

Sig.

.897

5

.391

*. This is a lower bound of the true significance.

Paired Samples Statistics Mean Pair 1

N

Std. Deviation

Std. Error Mean

SGOTminyak0

1.3260E2

5

17.12600

7.65898

SGOTminyak24

1.1300E2

5

10.36822

4.63681

Paired Samples Correlations N Pair 1

Correlation

SGOTminyak0 & SGOTminyak24

5

Sig.

-.018

.977

Paired Samples Test Paired Differences

Mean Pair 1

SGOT minyak 01.96000E1 SGOT minyak 24

Std. Deviation

Std. Error Mean

95% Confidence Interval of the Difference

20.18167 9.02552

Lower

Upper

t

-5.45886

44.65886

2.172

Sig. (2tailed)

df

4

.096

Lampiran 8. Hasil analisis statistik data kontrol minyak zaitun, kontrol CCl4, kontrol ekstrak, kontrol silimarin, dan perlakuan pemberian infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,26 g/KgBB; 1,89 g/KgBB; dan 2,835 g/KgBB

Descriptives Kategori SGPT

kontrol minyak


41.4000 Lower

33.0892

Upper

49.7108

5% Trimmed Mean

41.5000

Median

42.0000


Std. Error 2.99333

44.800 6.69328

Minimum

32.00

Maximum

49.00

Range

17.00

Interquartile Range

12.50

Skewness

-.463

.913

Kurtosis

-.697

2.000


kontrol ccl4


1.4160E2 Lower

1.0732E2

Upper

1.7588E2

5% Trimmed Mean

1.4078E2

Median

1.2600E2

Variance

2.76098E1

Minimum

117.00

Maximum

181.00

Range

64.00

Interquartile Range

50.00


.856

.913

-1.448

2.000

39.6000

3.28024

Lower

30.4926

Upper

48.7074

5% Trimmed Mean

39.8333

Median

43.0000

Variance

53.800

Std. Deviation

7.33485

Minimum

29.00

Maximum

46.00

Range

17.00

Interquartile Range

13.50

Skewness

-.876

Kurtosis kontrol silimarin


-1.205

2.000 7.02424

Lower

63.2976

Upper

1.0230E2 82.3333

Median

75.0000

Variance

.913

82.8000

5% Trimmed Mean

246.700

Std. Deviation

1.57067E1

Minimum

70.00

Maximum

104.00

Range

34.00

Interquartile Range

29.50

Skewness

.718

Kurtosis perlakuan dosis I (1,26 g/KgBB) Mean 95% Confidence Interval for Mean

12.34747

762.300

Std. Deviation

kontrol ekstrak

99

.913

-2.218

2.000

79.0000

5.74456

Lower

63.0505

Upper

94.9495

5% Trimmed Mean

79.0556

Median

76.0000

Variance

165.000


Std. Deviation

1.28452E1

Minimum

62.00

Maximum

95.00

Range

33.00

Interquartile Range

23.50

Skewness

-.047

.913

Kurtosis

-.823

2.000

69.8000

4.31741

perlakuan dosis II (1,89 g/KgBB) Mean 95% Confidence Interval for Mean

Lower

57.8130

Upper

81.7870

5% Trimmed Mean

69.6111

Median

68.0000

Variance

93.200

Std. Deviation

9.65401

Minimum

60.00

Maximum

83.00

Range

23.00

Interquartile Range

18.50

Skewness

.517

.913

-1.557

2.000

1.0160E2

5.40925

Kurtosis perlakuan dosis III (2,835 g/KgBB)


Lower

86.5815

Upper

1.1662E2

5% Trimmed Mean

1.0206E2

Median

1.0200E2

Variance

146.300

Std. Deviation

1.20955E1

Minimum

82.00

Maximum

113.00

Range

31.00

Interquartile Range

20.00

Skewness Kurtosis

-1.285

.913

1.896

2.000

Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Kategori SGPT

100

Statistic

df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

df

Sig.

.200*

.977

5

.916

5

.120

.861

5

.230

5

.200*

.874

5

.282

5

.195

.831

5

.141

5

.200*

.971

5

.880

*

kontrol minyak

.154

5

kontrol ccl4

.314

kontrol ekstrak

.279

kontrol silimarin

.290

perlakuan dosis I (1,26 g/KgBB)

.192

perlakuan dosis II (1,89 g/KgBB)

.190

5

.200

.935

5

.628

perlakuan dosis III (2,835 g/KgBB)

.280

5

.200*

.886

5

.340



Oneway Test of Homogeneity of Variances SGPT Levene Statistic

df1

5.151

df2 6

Sig. 28

.001

ANOVA SGPT Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

Mean Square

37468.000

6

6048.400

28

43516.400

34

F

6244.667 28.909 216.014

Kruskal-Wallis Test Test Statisticsa,b SGPT Chi-Square

29.716

df

6

Asymp. Sig.

.000

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Kategori Mann-Whitney Test Ranks Kategori SGPT

N

kontrol minyak kontrol ccl4 Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10

Test Statisticsb SGPT Mann-Whitney U

.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kategori

Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

kontrol minyak kontrol ekstrak Total

5.90

29.50

5

5.10

25.50

10


10.500

Wilcoxon W

25.500

Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kategori

Sum of Ranks

5

-.419 .675 .690a

Sig. .000

101


Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

kontrol minyak kontrol silimarin Total

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009 .008a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kategori Ranks Kategori SGPT

N

kontrol minyak perlakuan dosis I (1,26 g/KgBB) Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a


N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol minyak

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611

Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kategori

.009 .008a

102


Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol minyak

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a


Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol ccl4

5

8.00

40.00

kontrol ekstrak

5

3.00

15.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a


Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol ccl4

5

8.00

40.00

kontrol silimarin

5

3.00

15.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009 .008a


N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol ccl4

5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10

103



.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a


N

kontrol ccl4 perlakuan dosis II (1,89 g/KgBB) Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kategori

Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol ccl4

5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a

104


Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

kontrol ekstrak kontrol silimarin Total

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009 .008a


Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol ekstrak

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a


Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol ekstrak

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a

105


Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol ekstrak

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a


Ranks Kategori SGPT

N

kontrol silimarin perlakuan dosis I (1,26 g/KgBB) Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

5.70

28.50

5

5.30

26.50

10


11.500

Wilcoxon W

26.500

Z

-.210


.834 .841a


Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol silimarin

5

6.80

34.00


5

4.20

21.00

Total

10


6.000

Wilcoxon W

21.000

Z

-1.362


.173 .222a

106


Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol silimarin

5

3.80

19.00


5

7.20

36.00

Total

10


4.000

Wilcoxon W

19.000

Z

-1.781


.075 .095a


Ranks Kategori SGPT

N

perlakuan dosis I (1,26 g/KgBB) perlakuan dosis II (1,89 g/KgBB) Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

6.60

33.00

5

4.40

22.00

10


7.000

Wilcoxon W

22.000

Z

-1.156


.248 .310a


N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.40

17.00


5

7.60

38.00

Total

10


2.000

Wilcoxon W

17.000

Z

-2.193


.028 .032a

107


Ranks Kategori SGPT

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.20

16.00


5

7.80

39.00

Total

10


1.000

Wilcoxon W

16.000

Z

-2.402


.016 .016a


N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.40

17.00


5

7.60

38.00

Total

10


2.000

Wilcoxon W

17.000

Z

-2.193


.028 .032a

108


109

Descriptives Kategori SGOT

kontrol minyak


1.1300E2 Lower

1.0013E2

Upper

1.2587E2

5% Trimmed Mean

1.1261E2

Median

1.1100E2

Variance

1.03682E1

Minimum

103.00

Maximum

130.00

Range

27.00

Interquartile Range

17.00

Skewness

1.379

.913

Kurtosis

2.258

2.000

4.8980E2

41.19757


Lower

3.7542E2

Upper

6.0418E2

5% Trimmed Mean

4.8683E2

Median

4.7000E2

Variance

8.486E3

Std. Deviation

9.21206E1

Minimum

400.00

Maximum

633.00

Range

233.00

Interquartile Range

163.50

Skewness Kurtosis kontrol ekstrak


1.051

.913

.732

2.000

1.0580E2

2.22261

Lower

99.6290

Upper

1.1197E2

5% Trimmed Mean

1.0594E2

Median

1.0600E2

Variance

24.700

Std. Deviation

4.96991

Minimum

98.00

Maximum

111.00

Range

13.00

Interquartile Range

8.50

Skewness Kurtosis kontrol silimarin

4.63681

107.500

Std. Deviation

kontrol ccl4

Std. Error

Mean 95% Confidence Interval for Mean 5% Trimmed Mean

-1.024

.913

1.298

2.000

4.3100E2

27.25619

Lower

3.5532E2

Upper

5.0668E2 4.3128E2


Median

4.4300E2

Variance

3.714E3

Std. Deviation

6.09467E1

Minimum

351.00

Maximum

506.00

Range

155.00

Interquartile Range

114.00

Skewness Kurtosis perlakuan dosis I (1,26 g/KgBB)


-.214

.913

-1.081

2.000

1.2220E2

9.73345

Lower

95.1756

Upper

1.4922E2

5% Trimmed Mean

1.2272E2

Median

1.2900E2

Variance

473.700

Std. Deviation

2.17647E1

Minimum

88.00

Maximum

147.00

Range

59.00

Interquartile Range

35.00

Skewness

-.978

.913

Kurtosis

1.754

2.000

1.2000E2

4.43847

perlakuan dosis II (1,89 g/KgBB) Mean 95% Confidence Interval for Mean

Lower

1.0768E2

Upper

1.3232E2

5% Trimmed Mean

1.2011E2

Median

1.2200E2

Variance

98.500

Std. Deviation


110

9.92472

Minimum

106.00

Maximum

132.00

Range

26.00

Interquartile Range

18.00

Skewness

-.430

.913

Kurtosis

-.216

2.000

3.5520E2

17.05403


Lower

3.0785E2

Upper

4.0255E2

5% Trimmed Mean

3.5461E2

Median

3.5500E2


1.454E3 3.81340E1

Minimum

317.00

Maximum

404.00

Range

87.00


Interquartile Range

111

74.50

Skewness Kurtosis

.227

.913

-2.112

2.000

Tests of Normality Kolmogorov-Smirnova Kategori SGOT

Statistic

df

Shapiro-Wilk Sig.

Statistic *

df

Sig.

kontrol minyak

.262

5

.200

.897

5

.391

kontrol ccl4

.185

5

.200*

.929

5

.587

*

kontrol ekstrak

.236

5

.200

.934

5

.623

kontrol silimarin

.178

5

.200*

.980

5

.932

*


.223

5

.200

.925

5

.564


.180

5

.200*

.984

5

.957


.229

5

.200*

.911

5

.473


Oneway Test of Homogeneity of Variances SGOT Levene Statistic

df1

5.515

df2 6

Sig. 28

.001 ANOVA

SGOT Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

Mean Square

870517.086

6

145086.181

57437.200

28

2051.329

927954.286

34

Kruskal-Wallis Test Test Statisticsa,b SGOT Chi-Square

28.146

df

6

Asymp. Sig.

.000

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Kategori

Mann-Whitney Test Ranks Kategori SGOT

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol minyak

5

3.00

15.00

kontrol ccl4

5

8.00

40.00

Total \

N

10

F 70.728

Sig. .000


Test Statisticsb SGOT Mann-Whitney U

.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a


Mann-Whitney Test Ranks Kategori SGOT

N

Mean Rank

kontrol minyak kontrol ccl4 Total

Sum of Ranks

5

3.00

15.00

5

8.00

40.00

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a


Ranks Kategori SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol minyak

5

3.00

15.00

kontrol silimarin

5

8.00

40.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a

112


Ranks Kategori SGOT

N

kontrol minyak perlakuan dosis I (1,26 g/KgBB) Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

4.60

23.00

5

6.40

32.00

10

Test Statisticsb SGOT Mann-Whitney U Wilcoxon W

8.000 23.000

Z

-.943


.346 .421a


Ranks Kategori SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol minyak

5

4.40

22.00


5

6.60

33.00

Total

10


7.000

Wilcoxon W

22.000

Z

-1.149


.251 .310a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Kategori Ranks Kategori SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol minyak

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a

113


Ranks Kategori SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol minyak

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a


Ranks Kategori SGOT

N

Mean Rank

kontrol ccl4 kontrol silimarin Total

Sum of Ranks

5

6.60

33.00

5

4.40

22.00

10


7.000

Wilcoxon W

22.000

Z

-1.149


.251 .310a


N

kontrol ccl4 perlakuan dosis I (1,26 g/KgBB) Total

SGOT .000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009 .008a

Sum of Ranks

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10

Test Statisticsb

Mann-Whitney U

Mean Rank 5

114


Ranks Kategori SGOT

N

kontrol ccl4 perlakuan dosis II (1,89 g/KgBB) Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a


Ranks Kategori SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol ccl4

5

7.80

39.00


5

3.20

16.00

Total

10


1.000

Wilcoxon W

16.000

Z

-2.402


.016 .016a


Ranks Kategori SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol ekstrak

5

3.00

15.00

kontrol silimarin

5

8.00

40.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a

115


Ranks Kategori SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol ekstrak

5

4.00

20.00


5

7.00

35.00

Total

10


5.000

Wilcoxon W

20.000

Z

-1.571


.116 .151a


Ranks Kategori SGOT

N

kontrol ekstrak perlakuan dosis II (1,89 g/KgBB) Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

3.50

17.50

5

7.50

37.50

10


2.500

Wilcoxon W

17.500

Z

-2.095


.036 .032a


N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol ekstrak

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a

116


Ranks Kategori SGOT

N

kontrol silimarin perlakuan dosis I (1,26 g/KgBB) Total

Mean Rank

Sum of Ranks

5

8.00

40.00

5

3.00

15.00

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009 .008a


Ranks Kategori SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol silimarin

5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a


N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol silimarin

5

7.20

36.00


5

3.80

19.00

Total

10


4.000

Wilcoxon W

19.000

Z

-1.776


.076 .095a

117


Ranks Kategori SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

kontrol silimarin

5

7.20

36.00


5

3.80

19.00

Total

10


4.000

Wilcoxon W

19.000

Z

-1.776


.076 .095a


Ranks Kategori SGOT

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.619


.009 .008a


N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000

Wilcoxon W

15.000

Z

-2.611


.009 .008a

118


119

Lampiran 9. Perhitungan %antihepatotoksik 1−

(purata ALT perlakuan − purata ALT kontrol negatif) × 100% (purata ALT kontrol hepatotoksin − purata ALT kontrol negatif)

Kelompok kontrol positif silimarin dosis 25 mg/KgBB ( , , ) = 1−( , × 100% , ) = 58,68% Kelompok infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,26 g/KgBB ( , , ) = 1−( , × 100% , ) = 62,48% Kelompok infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,89 g/KgBB ( , , ) = 1−( , × 100% , ) = 71,66% Kelompok infusa herba Mimosa pigra L. dosis 2,835 g/KgBB ( , , ) = 1−( , × 100% , ) = 39,92%

1−

(purata AST perlakuan − purata AST kontrol negatif) × 100% (purata AST kontrol hepatotoksin − purata AST kontrol negatif)

Kelompok kontrol positif silimarin dosis 25 mg/KgBB ( , , ) = 1−( , × 100% , ) = 15,61% Kelompok infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,26 g/KgBB


(

= 1−(

,

,

)

,

,

)

120

× 100%

= 97,56% Kelompok infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,89 g/KgBB ( , , ) = 1−( , × 100% , ) = 98,14% Kelompok infusa herba Mimosa pigra L. dosis 2,835 g/KgBB ( , , ) = 1−( , × 100% , ) = 35,72%

Lampiran 10. Perhitungan daya antihepatotoksik %antihepatotoksik ALT perlakuan x 100% %antihepatotoksik ALT silimarin Kelompok infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,26 g/KgBB , % = , % x 100% = 106,48% Kelompok infusa herba Mimosa pigra L. dosis 1,89 g/KgBB , % = , % x 100% = 122,12% Kelompok infusa herba Mimosa pigra L. dosis 2,835 g/KgBB , % = , % x 100% = 68,03%

Lampiran 11. Perhitungan konversi dosis untuk manusia Nilai konversi tikus 200 g ke manusia = 56,0 Dosis untuk manusia = dosis untuk tikus 200 g x nilai konversi tikus 200 g ke manusia Maka dapat ditetapkan dosis infusa biji P. americana untuk manusia adalah sebagai berikut : Infusa herba Mimosa pigra L. 1,26 g/kgBB tikus 1,26 g/kgBB = 1,26 g/1000 gBB = 0,252g/200 gBB 0,252g/200 gBB x 56,0 = 14,112g/70 kgBB manusia


Infusa herba Mimosa pigra L. 1,89 g/kgBB tikus 1,89 g/kgBB = 1,89 g/1000 gBB =0,378g/200 gBB 0,378g/200 gBB x 56,0 = 21,168g/70 kgBB manusia Infusa herba Mimosa pigra L. 2,835 g/kgBB tikus 2,835 g/kgBB = 2,835 g/1000 gBB = 0,567g/200 gBB 0,567g/200 gBB x 56,0 = 31,752g/70 kgBB manusia

121


122

BIOGRAFI PENULIS

Penulis Skripsi dengan Judul “Efek Infusa Herba Mimosa pigra L. Terhadap Tikus Putih Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida” dengan nama lengkap Lukas Surya Wijaya, merupakan putra bungsu dari pasangan Hartanto Wijaya dan Widyasari Wijaya. Penulis dilahirkan di Sleman, pada tanggal 19 Oktober 1992. Pendidikan formal yang telah ditempuh penulis yaitu TK Mater Dei (1996-1998), tingkat Sekolah Dasar di SD Marsudirini Yogyakarta (1998-2004), tingkat Sekolah Menengah Pertama di SMP Stella Duce I Yogyakarta (2004-2007), tingkat Sekolah Menengah Atas di Kolese De Britto Yogyakarta (2007-2010). Pada tahun 2010, penulis melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Semasa menempuh pendidikan sarjana, penulis aktif dalam kegiatan kepanitiaan seperti Pharmacy Performance and Event Cup 2010 sebagai seksi konsumsi, Student Exchange Program sebagai divisi akomodasi, dan TITRASI 2012 sebagai pendamping kelompok. Penulis juga pernah terlibat dalam kejuaraan kimia tingkat DIY yang diadakan oleh Dinas Pendidikan Pemuda dan Olah Raga (2012) sebagai juara I dan juga Program Kreativitas Mahasiswa yang dibiayai oleh Dinas Pendidikan Tinggi (2013). Penulis juga aktif berperan sebagai asisten dosen di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada laboratorium kimia dasar (2011,2012), Farmasi Fisika (2011), Kimia Organik (2011), Kimia Analisis (2012, 2013), dan Biokimia (2013).

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

Recommend Documents