Új könnyűlánc diagnosztika Dr. Németh Julianna Országos Gyógyintézeti Központ Immundiagnosztikai Osztály MLDT-MIT Továbbképzés 2006
• • • • • • • • •
1845 Bence Jones Protein vizelet fehérje 1922 BJP I-II típus 1956 BJP kappa és lambda . . . 2001 FLC immunassay szérum és vizelet
Könnyűláncok sajátosságai • plazmasejtek 5-féle nehézláncot és 2-féle könnyűláncot termelnek (intakt immunglobulin) • termelés helye: csontvelő és nyirokcsomó • 40%-kal több könnyűlánc termelődik, mint ami nehézlánchoz kapcsolódik= szabad könnyűlánc • napi termelés kb. 500 mg • intakt immunglobulinok felezési ideje: – IgG: 20-25 nap – IgM: 7 nap – IgA: 6 nap – IgD: 3 nap – IgE: 2 nap • szérum szabad könnyűlánc: 2-6 óra • kappa lánc monomer, lambda lánc dimer, polimer
Könnyűlánc metabolizmusa a vesében • monomer szabad κ könnyűlánc a glomerulusban filtrálódik (2-4 óra alatt 40%) • dimer szabad λ könnyűlánc a glomerulusban lassabban filtrálódik (3-6 óra alatt 20%, polimerek még lassabban) • beszűkült vesefunkció mellett ugyanez 2-3 nap is lehet • a tubulusokban a filtrált szabad könnyűlánc abszorbeálodik ( napi 10-30 g) és lebomlik, extrém mennyiségnél lerakódik • fiziológiás körülmények között a vizeletben 1-10 mg/nap jelenik meg • életkorral a szérum szint nő (vesefunkció)
Könnyűlánc metodikák választéka VIZELET • fehérje elektroforézis: • kimutathatóság határa: ≈30 mg/l • agaróz elfo • koncentrált vizelet • nem kvantitatív • vizelet IFE : ≈ 5-30 mg/l • koncentrált vizelet • nem kvantitatív • vizelet κ, λ koncentráció lézer nefelometriás mérése: ≈ 500mg/l
SZÉRUM • fehérje elektroforézis 5002000 mg/l – kapilláris elfo: 400 mg/l
• szérum IFE : ≈150 mg/l
• szérum κ, λ koncentráció lézer nefelometriás mérése: ≈1000 mg/l
Új metodikai lehetőség: immunassay • monoklonális, latex szemcsére felvitt ellenanyag • lézer nefelometriás, turbidimetriás mérés • metodika jellemzői: – szenzitivitás: 98% – specificitása: 95%-97% • elvárás: ne legyen keresztreakció az intakt immunglobulin könnyűláncával – PPV: 78% – NPV: 100% • FLC metodikák összehasonlítása: • IFE (szérum): 69% • IFE ( vizelet): 83% • FLC nefelometria: 91% • IFE+FLC: 99%
1
Kappa
Lambda
K/L arány
Interpretáció
=
=
=
normál szérum
=
csontvelő szupresszió, MG nélkül
↑
csontvelő szupresszió, MG-val
2
↓
3
↓
4 5
↓ = ↑
7
↓
9
=
11 12
= ↑
13
↓
14 15
=
19
= ↑
MG csontvelő szupresszióval normál szérum / csontvelő szupresszió MG csontvelő szupresszióval
↓ =
poliklonális Ig vagy vesefunkciós zavar
↓
MG csontvelő szupresszió nélkül
↑
MG csontvelő szupresszióval MG csontvelő szupresszió nélkül
↑ =
↑
poliklonális Ig vagy vesefunkciós zavar
=
17 18
↓ ↑
8
16
normál szérum / csontvelő szupresszió
↓
6
10
=
↑
↑ ↓
MG vesefunkciós zavarral
Kvantitatív szérum szabad könnyűlánc mérés szerepe a betegségek diagnosztikájában és a therápia követésben
.
• Nem szekretoros myeloma – egyetlen pozitív biokémiai fehérje marker • dimer, polimer formák miatt multiantigén target • immunprecipitációs tesztben felülmérés – dimereknél:1.5x, – polimereknél: 1.5-3.5x – a betegség követésére alkalmas • csontvelő biopszia helyett • csont scan helyett – relapszust ill. terápiás választ korábban jelzi
Kvantitatív szérum szabad könnyűlánc mérés szerepe a betegségek diagnosztikájában és a therápia követésben • könnyűlánc myeloma – kvantitatívvá teszi az IFE kvalitatív eredményét – szérum FLC mindig emelkedett, a betegség aktivitásával párhuzamosan – monitorizálásra alkalmas paraméter – feleslegessé teszi a vizelet könnyűlánc mérést – jobb indikátora a reziduális betegségnek, mint a vizelet könnyűlánc koncentráció mérése
Kvantitatív szabad könnyűlánc mérés szerepe a betegségek diagnosztikájában és a therápia követésben • myeloma multiplex – a betegek 96%-ban emelkedett FLC – terápiás válasz gyorsabban követhető, mint intakt immunglobulinnal – betegség progressziójának első megjelenése, az FLC koncentráció növekedése – reziduális betegség kimutatása (oligoszekretoros betegek) – használható a csontfájdalmak / törések ill. ismeretlen etiológiájú vesebetegségek differenciálásában
Kezelt myelomás betegek követése
Kvantitatív szabad könnyűlánc mérés szerepe a betegségek diagnosztikájában és a therápia követésben • Transzplantált betegek követése IgG és Free κ változása a transzplantáció után IgG-total (g/l)
IgG-paraprotein (g/l)
Free k (mg/l)
60
120 100
Free κ
IgG (g/l)
40
80
30
60
IgG-total
20
40
IgG-paraprotein
10
20
0
0 0
4
11
18
25
33
idő (nap)
40
47
61
68
Free κ (mg/l)
50
Kvantitatív szabad könnyűlánc mérés szerepe a betegségek diagnosztikájában és a therápia követésben
• MGUS (monoclonal gammopathy undetermined significance) – FLC mérésnek prognosztikai szerepe lehet – MGUS emelkedett FLC-vel progrediálhat könnyűlánc myelomába, AL amyloidosisba vagy más plazma sejt dyscrasiába
MGUS progresszió rizikója (Mayo Klinika 2002, 1148 beteg) rizikó tényező
betegszám
progresszió rizikója 20. évben
M komp.<15g/l Ig típusa FLC ratio: 0.26-1.65
449
2%
alacsony / közepes 1 tényező kóros kockázat
420
10%
közepes kockázat
2 tényező kóros
226
18%
magas kockázat
3 tényező kóros
53
27%
alacsony kockázat
Kvantitatív szabad könnyűlánc mérés szerepe a betegségek diagnosztikájában és a therápia követésben
• primer szisztémás amyloidosis – a betegek 95%-ban emelkedett FLC – magas FLC érték a betegség többszervi manifesztációját jelenti – a therápiára adott korai válasz markere – PBSCT monitorizálásának lehetősége normális vesefunkció mellett (szervi válasz / komplett remisszió) – diagnózis felállítása, therápia követése
