PENDAHULUAN Latar Belakang Indonesia merupakan negara agraris yang memiliki keanekaragaman sumber kekayaan hayati, sekitar 30.000 jenis tumbuh-tumbuhan terdapat di Indonesia, dan lebih kurang 9.600 termasuk tanaman berkhasiat obat. Jumlah yang dimanfaatkan sebagai bahan obat tradisional oleh industri obat tradisional baru sekitar 300 spesies (Depkes 2007). Obat tradisional adalah bahan atau ramuan bahan yang berupa bahan tanaman, bahan hewan, bahan mineral, sediaan sarian, atau campuran dari bahan tersebut, yang secara turun menurun telah digunakan untuk pengobatan berdasarkan pengalaman (BPOM 2005). Tanaman obat sudah dikenal masyarakat secara turun temurun sejak dahulu. Penggunaan obat herbal mempunyai efek samping yang minimum jika digunakan secara tepat, yang meliputi kebenaran bahan, ketepatan dosis, ketepatan waktu penggunaan, ketepatan cara penggunaan, ketepatan telaah informasi, dan tanpa penyalahgunaan obat tradisional itu sendiri. WHO merekomendasi penggunaan obat tradisional termasuk herbal dalam pemeliharaan kesehatan masyarakat, pencegahan dan pengobatan penyakit, terutama untuk penyakit kronis, penyakit degeneratif dan kanker. WHO juga mendukung upaya-upaya dalam peningkatan keamanan dan khasiat dari obat tradisional (Sari 2006). Sesuai dengan perkembangan ilmu pengetahuan dan teknologi, tanaman obat tidak lagi sesuai apabila digunakan dalam bentuk utuh, tetapi dimanfaatkan dalam bentuk ekstrak, yaitu sari yang dibuat dengan menambahkan pelarut yang sesuai. Berdasarkan informasi empiris terdapat beberapa tanaman obat yang memiliki aktivitas diuretik antara lain alang-alang, tempuyung, alpukat, mengkudu, pepaya dan lain-lain (Ceppy 2002). Penggunaan diuretik mampu mengatasi penyakit gagal jantung kongesti, sindrom nefritis, sirosis, gagal ginjal, hipertensi, toksemia kebuntingan (Agunu et al. 2005), edema, diabetes insipidus, batu ginjal, dan hiperkalsemia (Ceppy 2002). Alpukat merupakan salah satu tanaman yang secara empiris dapat digunakan sebagai diuretikum. Bagian tanaman alpukat yang dimanfaatkan sebagai obat tradisional untuk peluruh batu ginjal dan rematik adalah bagian
2
daunnya (Prihatman 2000). Fungsi lain dari daun alpukat menurut penelitian adalah
antimikroba (Flores et al. 2009), menurunkan glukosa darah,
mempengaruhi metabolisme lipid saat hiperkolesterolemia (Brai et al. 2007), diuretik (Wientarsih et al. 2008), vasorelaksan (Owolabi et al. 2005), dan menurunkan tekanan darah (Ojewole et al. 2007). Biji buah alpukat juga dapat digunakan menurunkan tekanan darah tinggi, meningkatkan kolesterol (Imafidon et al. 2010; Anaka et al. 2009), meningkatkan glukosa darah, antihiperglikemik (Edem 2009), dan antihiperlipidemia (Asaolu et al. 2010). Bagian tanaman alpukat yang digunakan sebagai diuretik adalah daun. Menurut Adha (2009), kandungan senyawa kimia yang terdapat dalam ekstrak etanol daun alpukat adalah flavonoid, tanin, dan kuinon. Penelitian kali ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas diuretik fraksi heksan dan etil asetat ekstrak etanol daun alpukat (Persea americana Mill.) pada tikus Sprague-Dawley.
Tujuan Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas diuretik dari fraksi heksan dan etil asetat ekstrak etanol daun alpukat (Persea americana Mill.) pada tikus galur Sprague-Dawley, melalui parameter volume, pH, dan warna urin, serta melihat pada dosis fraksi heksan dan etil asetat ekstrak etanol daun alpukat berapa yang mampu memberikan aktivitas diuretik terbaik.
Manfaat Penelitian ini diharapkan dapat menjadi pertimbangan dalam pengobatan alterrnatif untuk diuretik dibidang kedokteran hewan dan dapat memberikan pengetahuan kepada masyarakat tentang khasiat daun alpukat sebagai obat diuretik.
3
TINJJAUAN PUSTAKA P A Alpukat (Persea ( ameericana Milll.) Tanaaman alpukkat merupakkan tanamaan yang berrasal dari A Amerika Tengah, yaitu Mekksiko, Peru,, hingga Veenezuela. Tanaman T inii telah mennyebar di seeluruh dunia, terrmasuk Indoonesia. Terrdapat tiga tipe alpukaat yang dikkenal, yaitu u tipe Meksiko (Persea dryymifolia), tipe t Guatem mala (Perseea guatelam mensis), dan n tipe a ) (Sunarjono o 2008). Alppukat dikennal dengan istilah i Indian barrat (Persea americana) apokat (Jaawa), alpukeet (Sunda), avocado peear (Inggris)), poire d’avvocat (Peraancis), abate (Porrtugal), dann aguacate palta p (Spany yol) (Dalim martha 2008)). Adaapun taksonoomi alpukatt dalam Prih hatman (20000) adalah ssebagai beriikut: K Kingdom : Plantae P K Kelas
: Dicotyledon D ne
O Ordo
: Laurales L
F Famili
: Lauraceae L
G Genus
: Persea P
S Spesies
: Persea P amerricana Milll.
Gambbar 1 Tanam man alpukatt.
4
Alpukat merupakan tanaman hutan yang tingginya mencapai 20 m. Pohonnya berkayu dan sosoknya seperti kubah sehingga dari jauh tampak menarik. Kayunya keras dan tidak bergetah. Daunnya panjang (lonjong) tersusun seperti pilin, terpusat pada ujung ranting (Sunarjono 2008). Menurut Dalimartha (2008), daunnya tunggal, tebal seperti kulit, bertangkai dengan panjang 1.5-5 cm, dan terletak berdekatan dengan ujung ranting. Helaian daun berbentuk bulat lonjong sampai bulat telur memanjang, mempunyai ujung dan pangkal daun runcing, bagian tepi rata tetapi kadang-kadang menggulung ke atas. Daun bertulang menyirip dengan panjang 10-20 cm dan lebar 3-10 cm. Daun muda berwarna kemerahan dan berambut rapat, sedangkan daun tua berwarna hijau dan tidak berambut. Umumnya percabangannya jarang dan arahnya horizontal. Bunga alpukat keluar pada ujung cabang atau ranting dalam tangkai panjang. Bunganya sempurna (dalam satu bunga terdapat putik dan benang sari), tetapi tidak serempak. Bunga berwarna putih (Sunarjono 2008). Kandungan kimia yang terdapat dalam buah adalah saponin, alkaloid, flavonoid, tanin, asam folat, asam pantotenat, niasin, vitamin, dan mineral. Kandungan serat dan asam lemak tak jenuh tunggal dalam buah dapat menurunkan kadar trigliserida dan kolesterol tinggi dalam darah. Bersama dengan vitamin C, vitamin E dan glutation, asam lemak tak jenuh tunggal dapat melindungi pembuluh darah arteri dari kerusakan oleh adanya timbunan LDL. Niasin
bekerja
mempengaruhi
aktivitas
enzim lipoprotein
lipase
yang
mengakibatkan penurunan produksi VLDL di hati yang berakibat penurunan kolesterol total, kolesterol LDL, dan trigliserida. Selain itu, niasin ini juga dapat meningkatkan HDL. Kandungan yang terdapat dalam daun alpukat adalah saponin, alkaloid, flavonoid, polifenol, quersetin, senyawa sterin, gula d-persit, dan gula alkohol (Dalimartha 2008). Senyawa-senyawa yang terdapat dalam daun alpukat dapat digunakan sebagai diuretik, mengobati kencing batu, darah tinggi, sakit kepala, nyeri saraf, nyeri lambung, dan pembengkakan saluran nafas (Anonim 2008). Daun alpukat juga
mempunyai
aktivitas
antibakteri
dan
menghambat
pertumbuhan
Staphylococcus aureus strain A dan B, Staphylococcus albus, Pseudomonas sp., Proteus sp., Escherichia coli, dan Bacillus subtilis (Dalimartha 2008).
5
Hewan Peercobaan Mennurut Maloole et al. (1989), heewan percoobaan adalaah hewan yang dipeliharaa atau sengaaja diternakkkan sebagaii hewan moodel untuk m mempelajarri dan mengembaangkan berrbagai bidanng ilmu dalam skala penelitian p aatau pengam matan laboratorikk. Beberapaa hewan cobba yang digu unakan untuuk penelitiaan adalah keelinci, mencit, tikkus, marmot, hamster, dan primataa.
Gam mbar 2 Tikkus putih gaalur Spraguee-Dawley. Tikuus (Rattus norvegicus) n ) telah dikeetahui sifat--sifatnya deengan semp purna, mudah dippelihara, meerupakan heewan yang relatif sehaat dan cocokk untuk berrbagai macam peenelitian. Terdapat T beeberapa galu ur tikus yaang umum digunakan yaitu galur Spraague-Dawleey, Wistar, Long-Evan ns. Ciri-ciri dari tikus Sprague-Daawley adalah beerwarna albbino putih, kepala keccil, dan meempunyai eekor yang lebih panjang dari d badannyya. Ciri-cirii dari tikus Wistar adaalah ditandaai dengan kepala k besar dan ekor lebihh pendek. Ciri-ciri C darii tikus Lonng-Evans addalah lebih kecil w hitam m pada kepaala dan tubuuh bagian depan d dari tikus putih dan memiliki warna (Malole ett al. 1989).
6
Ginjal Ginjal mempunyai fungsi utama untuk mengekskresikan produk sisa metabolisme yang sudah tidak digunakan seperti urea, asam urat, dan kreatinin. Ginjal juga berperan dalam proses homeostasis (pengaturan garam dan kandungan elektrolit serta volume cairan ekstraselular) dan juga keseimbangan asam basa (Rang
et
al.
1995).
Proses
homeostasis
dapat
dipertahankan
dengan
menyeimbangkan asupan yang masuk dalam tubuh dengan air dan elektrolit yang diekskresikan. Ginjal dapat juga berperan menyeimbangkan asam basa, bersama dengan paru dan sistem dapar cairan tubuh akan mengekskresikan asam seperti asam sulfur dan asam fosfat serta mengatur penyimpanan dapar cairan tubuh (Guyton et al. 2007). Menurut strukturnya ginjal terdiri dari kortek, medula, dan pelvis yang kosong sampai ureter. Unit terkecil dari ginjal adalah nefron (Gambar 3), berjumlah sekitar 1.3 x 106. Nefron terdiri dari glomerulus, tubulus proksimal, ansa henle, tubulus distal, dan duktus pengumpul (Rang et al. 1995). Ginjal tidak dapat membentuk nefron baru, oleh karena itu saat terjadi trauma ginjal, penyakit ginjal, atau proses penuaan yang normal akan terjadi penurunan jumlah nefron secara bertahap. Glomerulus Glomerulus tersusun dari suatu jaringan kapiler glomerulus yang bercabang dan beranastomosis, yang mempunyai tekanan hidrostatik tinggi (kira-kira 60 mm Hg) bila dibandingkan dengan kapiler lain. Kapiler glomerulus dilapisi oleh sel-sel epitel. Secara keseluruhan, glomerulus dibungkus oleh kapsula Bowman. Arteri renalis masuk ke dalam ginjal melalui hilum, kemudian bercabang menjadi arteri interlobularis, arteri arkuata, dan arteriol aferen. Ketiga arteri ini menuju ke kapiler glomerulus. Ujung distal kapiler pada setiap glomerulus begabung membentuk arteriol eferen, yang menuju ke kapiler peritubular yang mengelilingi tubulus ginjal (Guyton et al. 2007).
7
Gambar 3 Struktur neefron (Daveey 2010).
P Pembentuka an urin dim mulai dengan n filtrasi seejumlah cairran yang haampir bebas protein dari kapiler gloomerulus kee kapsula Bowman. B Seebagian besar zat yang terdapat t dallam plasmaa, kecuali prrotein, difilltrasi secaraa bebas sehingga konsenntrasi zat pada filtrat glomerulus g dalam kapsula Bowm man hampir sama dengann plasma. Cairan C akann mengalam mi perubahann ketika kelluar dari kaapsula Bowm man dan menngalir melew wati tubulus. Hal ini diisebabkan kkarena terjadinya reabsoorpsi air dann zat larut spesifik s kem mbali ke darah atau sekkresi zat-zaat lain dari kaapiler perituubulus ke daalam tubulu us (Guyton et e al. 2007). Tubullus Proksim malis T Tubulus prooksimalis merupakan m tempat reabbsorpsi zatt terlarut daan air yang mengalir m daari glomerullus. Zat terlarut dan airr direabsorppsi dalam ju umlah yang sama, s sehingga hanya sedikit s terjaadi perubahhan osmolarritas, yaitu cairan c tubuluus tetap isooosmotik teerhadap plasma. Ketikka cairan m melewati segmen descennden dari annsa Henle, air a direabso orpsi melaluui proses osm mosis dan cairan c di tubuulus mencaapai keseim mbangan den ngan cairann interstisiaalis medula yang sangatt hipertonikk (sekitar dua d sampaii empat kali osmolariitas filtrat ginjal g semulaa) (Guyton et al. 2007)). Segmeen Ascendeen Ansa Heenle B Bagian asccenden darii ansa Hen nle merupaakan lanjuttan dari tu ubulus proksimalis yangg banyak mereabsorpsii natrium, kalium, k dann klorida, namun
8
impermeabel terhadap air walaupun terdapat banyak ADH (anti diuretik hormon). Hal ini menyebabkan cairan menjadi lebih encer (hipoosmotik) ketika memasuki awal tubulus distal (Guyton et al. 2007). Tubulus Distal Ketika cairan pada bagian awal tubulus distal melewati bagian akhir tubulus kontortus distal, duktus koligentes kortikolis, dan duktus koligentes mengalami proses reabsorpsi terhadap natrium klorida. Bagian tubulus ini impermeabel terhadap air karena tidak ada ADH. Selain itu, zat-zat terlarut direabsorpsi sehingga cairan tubulus menjadi lebih encer (Guyton et al. 2007). Duktus koligentes Duktus koligentes terdiri dari dua bagian yaitu, bagian kortikal dan bagian medulla yang akan mengalirkan cairan filtrat dari kortek menuju pelvis renalis. Di duktus koligentes ini akan terjadi perubahan osmolalitas dan volume yang bergantung pada banyaknya vasopresin yang bekerja di duktus ini. Hormon antidiuretik ini berasal dari kelenjar hipofisis yang akan meningkatkan
permeabilitas
duktus
koligentes
terhadap
air
melalui
pembentukan cepat kanal air aquoporin-2 di membran luminal sel prinsipal (Ganong 2002).
Diuretik Diuretik adalah obat yang bekerja pada ginjal untuk meningkatkan ekskresi air dan natrium klorida. Diuretik dapat meningkatkan penyaringan natrium (natriuresis) yang diikuti ion (biasanya Cl-) pada penggunaan secara klinik. Natrium klorida yang berada dalam tubuh menentukan volume cairan ekstraseluler dan pada pengaplikasian klinis, secara langsung mengurangi volume cairan ekstraseluler dengan menurunkan kandungan NaCl dalam tubuh (Parial et al. 2009). Secara normal, reabsorpsi garam dan air dikendalikan masing-masing oleh aldosteron dan vasopresin (hormon antidiuretik, ADH). Umumnya diuretik bekerja dengan menurunkan reabsorbsi elektrolit oleh tubulus proksimal. Ekskresi elektrolit yang meningkat diikuti oleh peningkatan ekskresi air, penting untuk mempertahankan keseimbangan osmotik. Diuretik biasanya digunakan untuk
9
mengurangi edema pada gagal jantung kongestif, beberapa penyakit ginjal, dan sirosis hepatitis (Neal 2005). Diuretik bekerja dengan cara meningkatkan ekskresi ion-ion Na+, Cl-, atau HCO3-, yang merupakan elektrolit utama dalam cairan ekstrasel. Diuretik juga menurunkan reabsorpsi elektrolit di tubulus renalis dengan melibatkan proses pengangkutan aktif (Siswandono et al. 1995). Menurut Sunaryo (2003), fungsi utama diuretik adalah untuk mobilisasi cairan edema, yang berarti mengubah keseimbangan cairan elektrolit sehingga volume cairan ekstrasel menjadi normal. Secara umum diuretik dibagi menjadi dua kelompok besar yaitu diuretik osmotik dan penghambat mekanisme transport elektrolit dalam tubuli ginjal. Diuretik osmotik merupakan zat bukan elektrolit yang mudah dan dapat diekskresikan oleh ginjal (Sunaryo 2003), sedangkan menurut Siswandono et al. (1995) diuretik osmotik merupakan senyawa yang dapat meningkatkan ekskresi urin
dengan
mekanisme
kerja
berdasarkan perbedaan tekanan osmosa
(menghambat reabsorpsi air dan zat elektrolit). Diuretik osmotik mempunyai efek samping berupa gangguan keseimbangan elektrolit, pandangan kabur, dehidrasi, takikardia, dan nyeri kepala (Siswandono et al. 1995). Beberapa jenis obat yang menghambat transport elektrolit di tubuli ginjal dalam Sunaryo (2003) terdiri dari: a) Penghambat karbonik anhidrase Kabonik anhidrase adalah enzim yang mengatalisis reaksi antara karbondioksida dan uap air ( CO2 + H2O
H2CO3 ). Enzim ini terdapat
dalam sel korteks renalis, pankreas, mukosa lambung, mata, eritrosit, dan sistem saraf pusat, namun tidak terdapat di dalam plasma. Enzim ini dapat dihambat aktivitasnya oleh sianida, azida, dan sulfida, serta derivat sulfonamide seperti asetazolamid dan diklorofenamid (Sunaryo 2003). Kerugian dari inhibitor karbonik anhidrase dapat menyebabkan asidosis akibat hilangnya ion-ion bikarbonat yang keluar bersama urin secara berlebihan (Guyton et al. 2007). b) Benzotiadiazid Senyawa benzotiazid atau tiazid dapat berfungsi untuk meningkatkan ekskresi natrium, klorida, dan sejumlah air. Peningkatan natrium dan klorida
10
dalam urin disebabkan oleh penghambatan mekanisme reabsorpsi elektrolit pada tubuli distal (Sunaryo 2003). c) Diuretik hemat kalium Diuretik ini bekerja pada segmen yang berespon terhadap aldosteron pada tubulus distal. Aldosteron menstimulsi reabsorpsi Na+ yang mengarahkan ion K+ dan H+ ke dalam lumen. Diuretik menurunkan reabsropsi Na+ dengan mengantagonis aldostreron atau memblok kanal Na+. Hal ini menyebabkan potensial listrik epitel tubulus menurun sehingga eksresi K+ berkurang (Neal 2005).
Diuretik hemat kalium mempunyai
beberapa kelompok, diantaranya antagonis aldosteron, triamteren, dan amilorid (Sunaryo 2003). Kerugian dari diuretik ini dapat menyebabkan hiperkalemia akut, terutama pada pasien gangguan gagal ginjal (Neal 2005). d) Diuretik kuat Diuretik kuat mempunyai daya kerja yang sangat kuat daripada diuretik lainnya. Diuretik kuat disebut juga sebagai loop diuretik, karena bekerja di segmen epitel tebal ansa Henle ascenden. Beberapa contoh kelompok ini diantaranya adalah asam etakrinat, furosemid, dan bumetanin. Secara umum diuretik kuat bekerja dengan cara menghambat reabsropsi elektrolit di ansa Henle ascendens segmen epitel tebal (Sunaryo 2003).
Ekstraksi Ekstraksi adalah peristiwa pemindahan zat terlarut (solut) diantara dua pelarut yang tidak saling bercampur. Ekstraksi dapat memindahkan dua atau lebih zat berdasar perbedaan koefisian distribusi. Bila zat yang satu memiliki koefisien distribusi yang jauh lebih besar dari yang satu, sedangkan yang lainnya jauh lebih kecil dari yang satu, pemisahan yang hampir sempurna sudah dapat dicapai hanya dengan ekstraksi tunggal (Nur et al. 1989). Fraksinasi Fraksinasi adalah proses pemisahan komponen dalam suatu ekstrak menjadi kelompok-kelompok senyawa yang memiliki kemiripan karakteristik secara kimia. Beberapa metode yang digunakan untuk fraksinasi yaitu presipitasi, ekstraksi pelarut, destilasi, dialisis, elektroforesis, dan kromatografi. Penentuan
11
metode fraksinasi tergantung beberapa faktor diantaranya, adanya substansi alami yang terdapat dalam ekstrak, pemisahan fraksi seketika, manfaat, harga peralatan dan bahan yang diperlukan, serta keamanan (Houghton et al. 1998).
Pelarut Pelarut adalah cairan yang digunakan dalam proses pemecahan ikatan suatu persenyawaan untuk selanjutnya membentuk suatu larutan. Energi yang dibutuhkan untuk memecahkan ikatan ini diambil dari energi yang dilepaskan karena terbentuknya ikatan antara partikel yang dilarutkan dengan pelarut. Pemecahan ikatan persenyawaan membutuhkan energi yang cukup besar karena persenyawaan yang berikatan ion hanya larut di dalam air atau pelarut yang sangat polar lainnya. Hal itu juga terjadi pada persenyawaan kovalen polar yang hanya larut dalam pelarut polar dan persenyawaan kovalen non polar hanya larut dalam persenyawaan non polar (Winarno et al. 1973). Etil asetat Etil asetat merupakan senyawa ester dengan rumus kimia CH3COOC2H5. Etil asetat dihasilkan dari reaksi antara etanol (etil alkohol) dengan asam asetat. Pelarut ini digunakan sebagai pelarut dan obat-obatan (Basri 2005) dengan berat jenis 0.90 pada suhu 27 0C (Patil et al. 2009). Menurut Wilson et al. (1982), etil asetat, ester asetat, nafta vinegar, di dapat secara destilasi lambat campuran etil alkohol, asam asetat, dan asam sulfat. Cairan tidak berwarna, transparan, bau harum, segar dan sedikit seperti aseton dan rasa aneh, seperti aseton dan membakar. Etil asetat dapat bercampur dengan eter, alkohol dan minyak lemak dan atsiri. Etil asetat sekarang digunakan secara luas dalam industri sebagai pelarut. Etil asetat merupakan pelarut semi polar dan dapat melarutkan senyawa semipolar pada dinding sel (Harborne 1987). Heksan Heksan merupakan hidrokarbon alifatik tak jenuh dengan rumus kimia CH3(CH2)4CH3. Termasuk dalam alkana, berbentuk cairan beruap, tidak berwarna, mudah terbakar, larut dalam alkohol, eter, dan aseton namun tidak larut dalam air. Heksana didapat dari penyulingan bertingkat petroleum. Heksana digunakan sebagai pelarut dan pengencer cat (Basri 2005). Heksan
12
termasuk dalam senyawa non polar sehingga gaya tarik antara molekul lemah. Heksan memiliki berat yang lebih ringan dari air dan titik didihnya adalah 69 0
C (Brieger 1969). Berat jenis pelarut heksan adalah 0.659 pada suhu 20 0C
(Cheremisinoff et al. 2003). Pelarut heksan dapat melarutkan senyawa non polar seperti lilin, lemak, dan terpenoid (Nurmillah 2009).
