72
Lampiran 1. Total BAL kecap ikan lemuru selama fermentasi (cfu/ml) Ulangan
Lama Fermentasi
Rata-rata
(Bulan)
I
II
0
1,27 x 105
1,88 x 10 5
1,58 x 105
1
2,64 x 106
2,68 x 10 6
2,66 x 106
2
6,2 x 104
9,8 x 10 4
8,0 x 104
3
6,2 x 103
7,0 x 10 3
6,6 x 103
Lampiran 2. Data jumlah masing-masing strain BAL selama fermentasi (cfu/ml). Lama Fermentasi
Strain BAL T. halophilus KI03
T. halophilus KI29
A. viridans KI11
0 bulan
1,58 x 10 5
0
0
1 bulan
0
2,66 x 105
2,66 x 10 5
2 bulan
0
1,36 x 104
0
3 bulan
0
0
0
Total
1,58 x 10 5
2,796 x 10 5
2,66 x 10 5
Lama Fermentasi
Strain BAL T. halophilus KI13
T. halophilus KI31
A. viridans KI18
0 bulan
0
0
0
1 bulan
7,98 x 10 5
1,064 x 10 6
2,66 x 10 5
2 bulan
0
6,64 x 104
0
3 bulan
0
6,6 x 103
0
Total
7,98 x 10 5
1,137 x 10 6
2,66 x 10 5
73
Lampiran 3. Total khamir kecap ikan lemuru selama fermentasi (cfu/ml) Ulangan
Lama Fermentasi
Rata-rata
(Bulan)
I
II
0
9,7 x 103
8,9 x 10 3
9,3 x 103
1
1,14 x 104
1,20 x 10 4
1,17 x 104
2
6,1 x 103
7,0 x 10 3
6,55 x 103
3
2,5 x 103
3,1 x 10 3
2,8 x 103
Lampiran 4. Nilai total asam (%) kecap ikan lemuru selama fermentasi Ulangan
Lama Fermentasi
Rata-rata
(Bulan)
I
II
0
0,3656
0,2904
0,3280
1
0, 8234
0,7233
0,7734
2
0,9835
0,9450
0,9643
3
1,1055
0,9198
1,0127
Lampiran 5. Derajat keasaman (pH) kecap ikan lemuru selama fermentasi Ulangan
Lama Fermentasi
Rata-rata
(Bulan)
I
II
0
6,29
5,90
6,10
1
5,75
5,83
5,79
2
5,64
5,59
5,62
3
4,91
5,13
5,02
74
Lampiran 6.
Kadar Protein Terlarut (%) kecap ikan lemuru selama fermentasi Ulangan
Lama Fermentasi
Rata-rata
(Bulan)
I
II
0
0,3778
0,3057
0,3418
1
0,9354
0,9060
0,9207
2
1,3381
1,6462
1,4922
3
1,5869
1,7320
1,6595
75
Lampiran 7. Hasil Pengamatan Identifikasi Bakteri Asam Laktat Indigenous dengan Kit API 50 CH dan API 50 CHL Medium Tabel 1.
Tube 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38
Uji Gula (API 50 CH) Kontrol negatif Glycerol (1,64 mg) Erythritol (1,44 mg) D-arabinosa (1,4 mg) L-arabinosa (1,4 mg) D-ribosa (1,4 mg) D-xylosa (1,4 mg) L-xylosa (1,4 mg) D-adonitol (1,36 mg) Methyl-β-D-xylopyranoside (1,28 mg) D-galaktose (1,4 mg) D-glukose (1,56 mg) D-fruktose (1,4 mg) D-mannose (1,4 mg) L-sorbose (1,4 mg) L-rhamnose (1,36 mg) Dulcitol (1,35 mg) Inositol (1,4 mg) D-mannitol (1,36 mg) D-sorbitol (1,36 mg) Methyl-α-D-mannopyranoside (1,28 mg) Methyl-α-D-glucopyranoside (1,28 mg) N-acetylglucosamine (1,28 mg) Amygdaline (1,08 mg) Arbutin (1,08 mg) Esculine(1,16 mg), ferric sitrat (0,152 mg) Salicin (1,04 mg) D-cellobiose (1,32 mg) D-maltose (1,4 mg) D-lactose (1,4 mg) D-mellibiose (1,32 mg) D-saccharose (1,32 mg) D-trehalose (1,32 mg) Inulin (1,28 mg) D-melezitose (1,32 mg) D-raffinose (1,56 mg) Amidon (1,28 mg) Glycogen (1,28 mg) Xylitol (1,4 mg)
Spesies Bakteri Asam Laktat A B C D 24 48 24 48 24 48 24 48 ± ± + + + ± -
+ ± + + + ± ± ± ± + + -
± ± + + ± ± ± + + -
+ ± + + + + ± ± ± ± + + + -
- - ± - - - - - - - - ± ± + + + + - - - - ± ± - - - - - - - ± - - ± ± - ± - ± + - - - - - - - -
± ± + + + ± + ± -
± + + + + ± ± ± ± ± ± + + + + -
76
39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49
Gentiobiose (0,5 mg) D-turanose (1,32 mg) D-lyxose (1,4 mg) D-tagatose (1,4 mg) D-fucose (1,28 mg) L-fucose (1,28 mg) D-arabitol (1,4 mg) L-arabitol (1,4 mg) Potassium glukonate (1,84 mg) Potassium 2-ketoglukonate (2,12 mg) Potassium 5-ketoglukonate (1,8 mg)
± -
+ ± -
± -
+ ± -
-
-
Keterangan : 24 = Inkubasi 24 jam 48 = Inkubasi 48 jam (+) = Hasil positif/pertumbuhan bagus (warna pada mikrotube kuning, kecuali mikrotube no. 25 menjadi hitam). ± = Hasil positif namun pertumbuhan isolat relatif lambat (warna pada mikrotube hijau keunguan). - = Hasil negatif/tidak ada pertumbuhan (warna mikrotube ungu). Isolat A = Tetragenococcus halophilus KI03, kategori identifikasi baik (98.9%) Isolat B = Tetragenococcus halophilus KI29, kategori identifikasi baik ( 92,0%) Isolat C = Aerococcus viridans KI11, kategori identifikasi baik (99,4%) Isolat D = Tetragenococcus halophilus KI13, kategori identifikasi baik (91,7%)
-
± ± -
77
Lampiran 7. Hasil Pengamatan Identifikasi Bakteri Asam Laktat Indigenous dengan Kit API 50 CH dan API 50 CHL Medium Tabel 2.
Tube 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37
Uji Gula (API 50 CH) Kontrol negatif Glycerol (1,64 mg) Erythritol (1,44 mg) D-arabinosa (1,4 mg) L-arabinosa (1,4 mg) D-ribosa (1,4 mg) D-xylosa (1,4 mg) L-xylosa (1,4 mg) D-adonitol (1,36 mg) Methyl-β-D-xylopyranoside (1,28 mg) D-galaktose (1,4 mg) D-glukose (1,56 mg) D-fruktose (1,4 mg) D-mannose (1,4 mg) L-sorbose (1,4 mg) L-rhamnose (1,36 mg) Dulcitol (1,35 mg) Inositol (1,4 mg) D-mannitol (1,36 mg) D-sorbitol (1,36 mg) Methyl-α-D-mannopyranoside (1,28 mg) Methyl-α-D-glucopyranoside (1,28 mg) N-acetylglucosamine (1,28 mg) Amygdaline (1,08 mg) Arbutin (1,08 mg) Esculine(1,16 mg), ferric sitrat (0,152 mg) Salicin (1,04 mg) D-cellobiose (1,32 mg) D-maltose (1,4 mg) D-lactose (1,4 mg) D-mellibiose (1,32 mg) D-saccharose (1,32 mg) D-trehalose (1,32 mg) Inulin (1,28 mg) D-melezitose (1,32 mg) D-raffinose (1,56 mg) Amidon (1,28 mg) Glycogen (1,28 mg)
Spesies Bakteri Asam Laktat E F 24 48 24 48 ± + + + + ± + + -
± ± + + + + ± ± ± ± + + + -
± + + + ± ± + + + + -
+ + + + ± ± + + + + -
78
38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49
Xylitol (1,4 mg) Gentiobiose (0,5 mg) D-turanose (1,32 mg) D-lyxose (1,4 mg) D-tagatose (1,4 mg) D-fucose (1,28 mg) L-fucose (1,28 mg) D-arabitol (1,4 mg) L-arabitol (1,4 mg) Potassium glukonate (1,84 mg) Potassium 2-ketoglukonate (2,12 mg) Potassium 5-ketoglukonate (1,8 mg)
± ± ± -
+ ± + -
-
-
Keterangan : 24 = Inkubasi 24 jam 48 = Inkubasi 48 jam (+) = Hasil positif/pertumbuhan bagus (warna pada mikrotube kuning, kecuali mikrotube no. 25 menjadi hitam). ± = Hasil positif namun pertumbuhan isolat relatif lambat (warna pada mikrotube hijau keunguan). - = Hasil negatif/tidak ada pertumbuhan (warna mikrotube ungu). Isolat E = Tetragenococcus halophilus KI31., kategori identifikasi baik (99.9%) Isolat F = Aerococcus viridans KI18, kategori identifikasi baik (99,9%)
79
Lampiran 8. Pembuatan Media 1. Media MRS Agar Formula :
gr/liter
Pepton Lab lemco powder Yeast ekstrak Glukosa Sorbitan mono-oleat Dipotassium hydrogen phosphat Sodium asetat 3H2O Triamonium sitrat Magnesium sulfat 7 H2O Mangan sulfat 4 H2O Agar pH 6,2 ± 0,2
10,0 8,0 4,0 20,0 1,0 2,0 5,0 2,0 0,2 0,05 10,0
Pembuatan : Ditimbang 62 gr media MRS agar dan 6,2 gr NaCl kemudian dilarutkan dalam 1000 ml aquades dengan ditambahkan larutan Bromo Cresol Purple (BCP) sampai berwarna ungu sebagai indikator pertumbuhan BAL (berwarna
kuning)
kemudian
dihomogenkan.
Media
selanjutnya
diseterilisasi pada suhu 121 oC selama 15 menit, dituang 15 ml kedalam cawan petri steril dan dibiarkan memadat.
2. Media MRS Broth Formula: MRS broth sama dengan MRSA hanya tidak ditambahkan “agar” Ditimbang sebanyak 52 gr media MRS broth dan 5,2 gr NaCl kemudian dilarutkan dalam 1000 ml aquades sampai homogen, selanjutnya media dimasukkan masing-masing 5 ml kedalam tabung dan disterilkan pada suhu 121 oC selama 15 menit.
80
3. Media Malt Extract Agar (MEA) Formula : Malt ekstrak Mycological pepton Agar pH 5,4 ±0,2
gr/liter 30,0 5,0 15,0
Ditimbang sebanyak 33,6 gr media MEA dan 3,36 NaCl kemudian dilarutkan kedalam 1000 ml aquades sampai homogen. Selanjutnya disterilkan pada suhu 121 oC selama 15 menit. Media kemudian dituang sebanyak 15 ml kedalam cawan petri steril dan dibiarkan memadat.
4. Media Sulphide Indole Motility (SIM) Formula: Trypton Pepton Ferous Ammonium sulfat Sodium tiosulfat Agar pH 7,3±0,2
gr/liter 20,0 6,1 0,2 0,2 3,5
Ditimbang sebanyak 30 gr media SIM kemudian dilarutkan kedalam 1000 ml aquades dan dihomogenkan, selanjutnya dimasukkan masing-masing 5 ml kedalam tabung dan disterilkan pada suhu 121 oC selama 15 menit.
81
5. Larutan garam fisiologis (Saline 0,85% NaCl). Ditimbang sebanyak 0,85 gr NaCl kemudian dilarutkan dalam 100 ml aquades sampai homogen. Selanjutnya larutan disterilisasi. Larutan ini dapat dipergunakan Sebagai pengencer dan pencuci sel.
82
Lampiran 9. Standar Mutu Kecap Ikan Parameter Biokimiawi pH Kadar garam Kadar air Protein Karbohidrat TVB TMA-N Asam organik: -Asam laktat -Asam asetat Mikrobiologi : -BAL -Kapang -Khamir Halofilik
Komposisi 5,2 - 5,8 22 - 30% 55 - 76% 6 - 12% 0 - 8% 60 - 500 mg/100g 2 - 7 mg/100 g 75 - 100 mg% 16 - 800 mg% 102 - 105 (+ 10% NaCl)/g <10 - 104 / g <10 - 104 / g 102 - 104 / g
Sumber: Gram (2003).
Lampiran 10. Karakteristik Kecap Ikan Lemuru Setelah 3 bulan Fermentasi Parameter Biokimiawi pH Kadar garam Kadar air Total protein Kadar protein terlarut Total asam Total kapang Total khamir Total BAL
Komposisi 5,02 23,44% 73,34% 11,21% 1,66% 1,01% <10 1 cfu/ml 2,8 x 10 3 cfu/ml 6,6 x 10 3 cfu/ml
