LABORATORNÍ METODY A TESTY V GASTROENTEROLOGII. MUDr.Petr Kocna CSc

LABORATORNÍ DIAGNOSTIKA V GASTROENTEROLOGII

Kocna P.

MALABSORPCE-MALDIGESCE-MALASIMILACE FUNKČNÍ DIAGNOSTIKA, STOLICE, DECHOVÉ TESTY HELICOBACTER PYLORI - ŽALUDEK PANKREATICKÁ INSUFICIENCE CELIAKIE - GLUTENOVÁ ENTEROPATIE LAKTÓZOVÁ INTOLERANCE TLUSTÉ STŘEVO - KOLOREKTÁLNÍ KARCINOM

LABORATORNÍ METODY A TESTY V GASTROENTEROLOGII MUDr.Petr Kocna CSc. http://www.lf1.cuni.cz/~kocna/pkweb1.htm

VŠCHT seminář - Praha, listopad 20143


2

Kocna P.


Kocna P.

VÝCHOZÍ STAV STIMULACE DIAGNOSTICKÝ PROCES MORFOLOGIE 80 70 60

REÁLNÝ STAV

50 40 FUNKČNÍ ODEZVA 30

FUNKČNÍ ODEZVA

METODY LABORATORNÍ 3


20 10

ZOBRAZOVACÍ METODY

0 0

4

40

60

80 100 120 140 160 180 200


Kocna P.

Kocna P.

MALABSORBCE


5

20

ČASOVĚ ZÁVISLÁ ODPOVĚĎ

6

LABORATORNÍ DIAGNOSTIKA MALABSORBCE


Kocna P.


MALABSORPCE, MALDIGESCE, MALASIMILACE

ŽALUDEČNÍ, DUODENÁLNÍ, STŘEVNÍ SONDA

¾ MALABSORPCE STAV, KDY JEDNA, NEBO VÍCE ZÁKLADNÍCH ŽIVIN NENÍ TRÁVENA A VSTŘEBÁVÁNA, NEBO NEDOSTATEČNĚ ¾ MALABSORPČNÍ SYNDROM (MS) ZAHRNUJE: 9 PORUCHU INTRALUMINÁLNÍHO TRÁVENÍ, DIGESCE 9 PORUCHU VSTŘEBÁVÁNÍ ŽIVIN, ABSORPCE 9 ABNORMÁLNÍ SEKRECE TRÁVICÍCH ŠŤAV 9 ZÁVAŽNÉ NARUŠENÍ MOTILITY TRÁVICÍ TRUBICE 9 NEDOSTATEČNÝ PŘÍJEM POTRAVY

CROSBY KAPSLE ŽALUDEČNÍ SONDA TYP LEVIN

¾ PRIMÁRNÍ MALABSORPČNÍ SYNDROM PORUCHA NA ÚROVNI ENTEROCYTU CÉLIAKIE, TROPICKÁ SPRUE, WHIPPLOVA CH..... ¾ SEKUNDÁRNÍ MALABSORPČNÍ SYNDROM ONEMOCNĚNÍ PANKREATU, ŽLUČNÍKU, JATER OBSTRUKČNÍ CHOROBY STŘEVA, INFEKCE.... 7


Kocna P.

8

Kocna P.


Kocna P.

TENKÉ STŘEVO

RTG KONTROLA ZAVEDENÍ SONDY

DUODENUM - JEJUNUM - ILEUM, DÉLKA 3 - 4 METRY POVRCH 5 x ZVĚTŠUJÍ KLKY (0,5 - 1 mm, 20 - 40 klků / mm2) MIKROKLKY - KARTÁČOVÝ LEM - ZVĚTŠUJE POVRCH 30x 100 m2

KLKY

9

ENTEROCYTY

MIKROKLKY

10


Kocna P.



VYŠETŘENÍ STOLICE ANALÝZA STOLICE UMOŽŇUJE DIAGNOSTICKÝ PROCES ONEMOCNĚNÍ ZAŽÍVACÍHO ÚSTROJÍ, JATER A PANKREATU. UJASNĚNÍ PŘÍČÍN VEDOUCÍCH K SYMPTOMŮM OVLIVŇUJÍCÍ ZAŽÍVACÍ TRAKT VČETNĚ PRŮJMU, NAUSEY, ZVRACENÍ, EDÉMU, BOLESTÍ, KŘEČÍ, HOREČKY, ZTRÁTY CHUTI APOD. ¾ DETEKCE NĚKTERÝCH ENZYMŮ VE STOLICI K URČENÍ MÍRY PANKREATICKÉ FUNKCE. ¾ DETEKCE OKULTNÍHO KRVÁCENÍ PRO SCREENING KOLOREKTÁLNÍCH TUMORŮ ¾ DETEKCE PŘÍTOMNOSTI PARASITŮ, NAPŘ. LAMBLIE ¾ DETEKCE A IDENTIFIKACE NĚKTERÝCH TYPŮ BAKTERIÍ ¾ DETEKCE NENATRÁVENÝCH ZBYTKŮ POTRAVY PŘI MALABSORPČNÍM SYNDROMU

11

Kocna P.

12


Kocna P.


Kocna P.

BIOCHEMICKÁ VYŠETŘENÍ VZORKU STOLICE

MIKROSKOPICKÉ VYŠETŘENÍ STOLICE

Anti tTG IgA

Helicobacter pylori Ag

Anti Gliadin scIgA

SVALOVÁ VLÁKNA

Amyláza

β-Defensin 2

Lipáza

Zonulin ŠKROBOVÁ ZRNKA

NATIVNÍ PREPARÁT ZBYTKY POTRAVY VLÁKNA CELULÓZY

Elastáza - 1 EDN Eosi.Deriv.Neurotoxin

13

TUKOVÉ KAPÉNKY


Kocna P.

Lysozyme

Calprotectin

BARVENÍ FRIEDIGER’S REAGENS - SVALOVÁ VLÁKNA ČERVENĚ - TUKOVÉ KAPÉNKY ŽLUTĚ - ŠKROBOVÁ ZRNKA TMAVOMODŘE Gastroenterologie für die Praxis München, 1975

Chymotrypsin

α1-antitrypsin

Albumin

Lactoferin

Myeloperoxidáza

Hemoglobin

PMN Elastáza

Haptoglobin 14

Transferin

PCR / DNA


Kocna P.

CALPROTECIN VE STOLICI - RAPID TESTY

VYŠETŘENÍ STOLICE - ODBĚR VZORKU

CalDetect CalPro CalFast

CerTest - CALPROTECTIN + LACTOFERRIN

15

16


Kocna P.


KOMBINOVANÉ RAPID-TESTY NA STOLICI

ODBĚROVÝ SYSTÉM PRO NĚKOLIK TESTŮ Analyt

Hemoglobin

IDK Extract Single Tube Analytics

Calprotectin Lactoferin E-coli toxin Transferin

17

Kocna P.

18

Stabilita 2-8 C

Calprotectin

9

Lactoferrin

9

Pancreatic elastase

7

Hemoglobin

5

Haptoglobin

7

anti-Gliadin

7

anti-transglutaminase

3

s-IgA

7

α1-antitrypsin

9

Albumin

9

Lysozyme

5

β-Defensin 2

7

EDN Eosi.Deriv.Neurotoxin

5


Kocna P.


Kocna P.

KVANTITATIVNÍ ANALÝZA TUKŮ VE STOLICI

AUTOMATICKÉ ANALYZÁTORY NA STOLICI

SBĚR STOLICE - 72 hod.

Kroma iT Linear

REFERENČNÍ METODA EXOKRINNÍ FUNKCE PANKREATU

FAT 72 hod. S-CCK TEST

NS-Prime Alfresa Pharma NS-Plus Alfresa Pharma

19


20

Kocna P.


H2 MICRO - ANALYZÁTOR PARAMETRY

H2-ppm

TEST S FRUKTÓZOU FRUKTÓZOVÁ INTOLERANCE

50

JEDNODUCHÁ OBSLUHA BATERIOVÝ TYP REAL-TIME KINETICKÝ SW ROZSAH MĚŘENÍ 0 - 500 ppm CITLIVOST 1 ppm

21

TEST S LAKTULÓZOU OCTT OROCAECAL TRANSIT TIME

40 30

APLIKACE

Kód VZP: 15140 249 bodů klinický kód, GE, odb. 105

Kocna P.

APLIKACE H2 - DECHOVÝCH TESTŮ

TEST S LAKTULÓZOU BAKTERIÁLNÍ PŘERŮSTÁNÍ TS

cut-off

20

LAKTÓZOVÁ INTOLERANCE MALABSORPCE LAKTÓZY MALABSORPCE SACHARÓZY MALABSORPCE FRUKTÓZY BAKTERIÁLNÍ PŘERŮSTÁNÍ MOTILITA GIT, TRANSIT TIME

10 0

10

40

70 100 130 160 190 220 250 280

22


Kocna P.


Kocna P.

H2 /CH4 BAKTERIÁLNÍ PRODUKCE

H2 - DECHOVÝ TEST LAKTÓZOVÉ INTOLERANCE KONCENTRACE H2 (ppm) PO PODÁNÍ 25g LAKTÓZY H2 (ppm)

20

ANAEROBNÍ HYDROLÝZA A PRODUKCE VODÍKU A METANU STŘEVNÍ MIKROFLÓROU

15 10 5 0 -5 -10 -15 -15

00

15 15

30 30

45 45

60 60

75 75

90 90 105 105 120 120 135 135 150 150 165 165 180 180 ČAS (min)

23

Hodnocení dechových testů po podání různých monosacharidů a disacharidů Bc. Jana Bartoňová, Praha 2004 http://portal.lf1.cuni.cz/formular/upload/internet/soubor_269.pdf

24

Pimentel M.,Gunsalus RP.,Rao SSC.,Zhang H.: Methanogens in Human Health and Disease. Am J Gastroenterol Suppl (2012) 1:28–33


Kocna P.


H2 /CH4 /CO2 - LACTOTEST 202

Kocna P.

H2 /CH4 /CO2 - LACTOTEST 202 KALIBRACE TŘÍ SENSORŮ HYDROGEN METAN OXID UHLIČITÝ

KOMBINACE STANOVENÍ VODÍKU a METANU ELIMINACE FAL.NEGATIVITY MODULÁRNÍ KONCEPCE SENZORY: H2 /CH4 /CO2 - VLIV ANTIBIOTIK - NÍZKÁ PRODUKCE VODÍKU

REKALKULACE KONCENTRACE H2 PODLE CO2 M. Di Stefano, G.R. Corazza Role of hydrogen and methane breath testing in gastrointestinal diseases Digestive and Liver Disease Supplements 2009/3, 40–43

25

Satish S.C. Rao - Ability of the Normal Human Small Intestine to Absorb Fructose: Evaluation by Breath Testing Clinical Gastroenterology and Hepatology 2007/5, 959-963


Kocna P.

26


Kocna P.

ANALYZÁTORY DECHOVÝCH TESTŮ 13C/12C BreathID, Exalenz IR force 600, Richen

Zkušenosti laboratoře ÚKBLD 1.LF UK a VFN 2001 - 2012 IR analytické systémy Isomax 4000 HeliFAN plus

FLIP, Humedics HeliFAN, Fischer - FAN

27


13C

28

Kocna P.

LABORATORNÍ DIAGNOSTIKA V GASTROENTEROLOGII 13C

DECHOVÉ TESTY - PDB STANDARD

PDB - Pee Dee Belemnitella americana

Standardem PDB je primární referenční materiál pro měření přirozených změn obsahu izotopu uhlíku 13C, stanoveného v uhličitanu vápenatém ze schránek křídových belemnitů rodu Belemnitella americana z geologické formace Pee Dee v Jižní Karolíně (USA)

PDB

Pee Dee Belemnitae

Mezinárodní standard 13C = 1.11237 % 29

DECHOVÉ TESTY - PDB STANDARD

30

Kocna P.


VÝSKYT IZOTOPU

13C

+ 10

1,110

PeeDee Belemnite

C4 rostliny

13C

0

13C

Atmosférický CO2 US - Dech CO2

- 10

1,070

Fosilní zdroje

13C

- glukóza

13C


Kocna P.

- urea 13C

13C

- laktóza

- bikarbonát

- mixed triglycerid

13C

- triolein

13C

- xylóza 13C

13C abundances of nutrients and the effect of variations in 13C isotopic abundances of test meals formulated for 13CO2 breath tests. Schoeller DA. et al.: Am J Clin Nutr. 1980; 33(11): 2375 - 2385

13C

- fenylalanin

- 50

1,050

- oktanoát

13C

- 40

1,060

- acetát

13C

- aminopyrin

- kofein 13C

Jap. - Dech CO2 EU - Dech CO2 - 30

13C

- methacetin

- galaktóza 13C

13C

- 20

C3 rostliny

1,080

31

Kocna P.

NABÍDKA SUBSTRÁTŮ PRO DECHOVÉ TESTY

‰ δ 13CPDB Uhličitany

1,090


V PŘÍRODĚ

% 13C 1,120

1,100

Kocna P.

- škrob - palmitát

13C

- glykocholát

32


Kocna P.

PŘIROZENÉ SUBSTRÁTY 13C PRO DECHOVÉ TESTY

PRINCIP 13C- MTG DECHOVÉHO TESTU

13C-škrob

perorální podání

stanovení poměru 13C/12C

13C-substrát

kukuřice

13CO

enzymatická hydrolytická funkce GIT

13C-laktóza

C4 rostliny

produkce CO2

krystalizace laktózy

2

eliminace

mléko 13C

kumulativní výdej CO2

13C

absorpce cPDR

33


Kocna P.

HeliView - IRMS ANALYZÁTOR DECHOVÝCH TESTŮ NA BÁZI UHLÍKU 13C

13C-enriched lactose, derived from milk of cows fed with silo corn (d= -10.885) for 5 weeks. Because it is known that it takes 14 days for cows milk to be in equilibrium with a diet, milk of seven cows was collected during the last 3 weeks of this 5-week period and pooled. Lactose was obtained by crystallization techniques.

34


IRMS ANALYZÁTOR 13CO2 - SEPARACE VZORKU SEPARACE VODY

NAFION

INJEKTOR He He REF.INJEKTOR VENTIL MS

VACUTAINER

REFERENČNÍ CO2 Kód VZP: 81701 501 bodů analytika, odb. 801, IRMS 35

Kocna P.

AUTOSAMPLER 36

SEPARACE GC


Kocna P.


IRMS ANALYZÁTOR 13CO2 - DETEKCE MAGNETICKÉ POLE

VÝSTUP Z GC

Kocna P.

ANALYZÁTOR 13CO2 - NDIRS DETEKCE 13C16O 2 2299.795 cm-1 12C16O 2 2299.642 cm-1

IONIZACE PLYNU

SEPARACE PODLE HMOTNOSTI 13C16O18O

IRMS

DETEKCE 44 - 12C16O2 45 - 13C16O2 46 - 12C16O18O

TRIPLE FARADAY COLLECTOR

ISOTOPE - RATIO MASS SPECTROMETRY 37

38


Kocna P.

ABSORBČNÍ MAXIMA ISOTOPŮ: 4348,5 nm - 4348,2 nm


ANALYZÁTOR 13CO2 - NDIRS DETEKCE

Kocna P.

ANALYZÁTOR 13CO2 - NDIRS DETEKCE OptoAkustický detektor Lehrer & Luft typ Lehrer E and Luft K F 1938 German Patent No 730478

VZOREK 13CO 2

ZDROJ IR

λ = 2 - 8 μm

REF.PLYN

- absorpce IR - změna tlaku - deformace membrány - akustický signál

12CO 2

NonDispersive Isotope-selective InfraRed Spectroscopy 39

40


Kocna P.


ANALÝZA VYDECHOVANÉHO VZDUCHU NÁDECH CO2 = 0,04 %

CO2 ÷ 2,5 - 3,5 %

CO2 = 5,20 %

NÍZKÁ KONC.CO2

NÁDECH - ZADRŽENÍ DECHU - KRÁTKÝ VÝDECH

NÍZKÁ KONC.CO2

NÁDECH - ZADRŽENÍ DECHU NA 10 sec - DLOUHÝ VÝDECH KONC.CO2 JE OK

41

Kocna P.


VÝDECH

NÁDECH - VÝDECH (BEZ ZADRŽENÍ DECHU)

An analytical model of the pneumatic non dispersive infrared detector Daniel P Lucero: Journal of Physics E: Scientific Instruments, 1973; 6: 281 - 286

42


Kocna P.


PRŮKAZ INFEKCE HELICOBACTER PYLORI

Kocna P.

DECHOVÝ TEST s 13C - MOČOVINOU (UREOU) SUBSTRÁT: 13C-MOČOVINA DÁVKA: 50 - 100 mg DOBA TESTU: 30 minut

DECHOVÝ TEST

globální test - žaludku

Hp - UREÁZA

NH2-13CO-NH2 + H2O = 2 NH3 + 13CO2 PRŮKAZEM BAKTERIE/ANTIGENU Hp RYCHLÝ UREÁZOVÝ TEST

NIKOLIV DETEKCE PROTILÁTEK K Hp 43

lokální test - biopsie

44


Kocna P.


Kocna P.

ENDOSKOPICKÝ DECHOVÝ TEST - 13C EUBT

DECHOVÝ TEST s 13C - MOČOVINOU (UREOU) Kód VZP: 15143 1661 bodů klinická část, GE, odb. 105

25 mg 13C-urea aplikace spray sondou 5 minutový test

Pylobactell a Infai UBT - Hp soupravy jsou registrovány v ČR - SUKL

45

46


Kocna P.

Five minute endoscopic urea breath test with 25 mg of (13)C-urea in the management of Helicobacter pylori infection. Isomoto H et al.: Eur J Gastroenterol Hepatol. 2002 Oct;14(10):1093-1100


HELICOBACTER PYLORI - DAKO TEST HpStAR

Kocna P.

POROVNÁNÍ Hp RAPID TESTŮ

Kód VZP: 91483 odb. 813, 761 bodů

ODBĚROVÁ NÁDOBKA

mAb - TEST MEMBRÁNA

FILTR

47

PRŮKAZ HELICOBACTER PYLORI HpStAR TEST - DAKO RAPID TEST MONOKLONÁLNÍ PROTILÁTKA INKUBAČNÍ NÁDOBKA

helicoCare negativní Hp StAR negativní

48

helicoCare pozitivní Hp StAR negativní

helicoCare pozitivní Hp StAR pozitivní

Jeřábek, J.: Stanovení antigenu Helicobacter pylori ve stolici rapid testem. Diplomová práce 1.LF UK Praha 2007


Kocna P.


HELICOBACTER PYLORI INFEKCE H.Pylori + hostitel

HCl

detekce Hp PGI/PGII, G-17b

HCl

negativní Hp, normální PGI/PGII normální G-17b

pozitivní Hp, normální PGI/PGII normální G-17b

Hp +/-, nízké PGI/PGII zvýšené G-17b

GASTRIN ↑

GASTRIN ↑ BEZ ONEMOCNĚNÍ

Normální žaludeční sliznice

ATROFIE KARCINOM

pozitivní Hp, nízké PGI/PGII nízké G-17b

Atrofická gastritída

Hp gastritída

DUODENÁLNÍ VŘED

Kocna P.

Podezření na gastritídu, Hp infekci, CA žaludku

Rizko žaludečního nebo duodenálního vředu

Rizko karcinomu žaludku

KMENY BAKTERIE - GENETICKÁ DISPOZICE - VNĚJŠÍ PROSTŘEDÍ - DIETA

49

50


Kocna P.

Eradikace Hp infekce + gastroskopie


Kocna P.

REGULACE PANKREATICKÉ SEKRECE


TVORBA ŽLUČE 0.7 l/den

SEKRETIN

CCK-PZ

ENZYMY

PANKREATICKÁ ŠŤÁVA HCO3-, VODA 2.0 l/den

51

52


Kocna P.


53

ERCP KLASIFIKACE PANKREATITID

ERCP PAPILA MINOR D.WIRSUNGI D.SANTORINI

Kocna P.

MRCP VÝPOČET OBJEMU SEKRECE FUNKČNÍ TEST PANKREATICKÉ FUNKCE

CHRONICKÁ PANKREATITIDA ZOBRAZOVACÍ METODY

SPECIFICKÁ STIMULACE HORMONY SEKRETIN CHOLECYSTOKININ, = PANKREOZYMIN

ERCP ŠŇŮRA PEREL

54

Quantitative MRCP assessment of pancreatic exocrine reserve and its correlation with faecal elastase-1 in patients with chronic pancreatitis Manfredi R. el al. Radiol med. - DOI 10.1007/s11547-011-0774-6


Kocna P.


TESTY EXOKRINNÍ FUNKCE PANKRAETU

13C

PERORÁLNÍ PODÁNÍ

NEPŘÍMÁ STIMULACE

- DECHOVÉ TESTY FUNKCE PANKREATU VOLBA SUBSTRÁTU

SUBSTITUČNÍ STIMULAČNÍ SUBSTRÁT TERAPIE POKRM KUKUŘIČNÝ CHLÉB 20g RAMA

ŽÁDNÁ STIMULACE

ANALÝZA C-MARKERU

¾ 13C - TRIOLEIN

STEATORHEA > 11 - 14 g/den

¾ 13C - HIOLEIN

INTRALUMINÁLNÍ LIPOLÝZA

¾ 13C - MIXED

SPECIFICITA K PANKREATICKÉ LIPÁZE

13

VÝDEJ LIPÁZY < 90 kU/hod

TRIGLYCERIDE ¾ 13C - CHOLESTERYL

PANKREAT. CHOLESTEROL ESTERÁZA STEATORHEA > 11 g/den

OCTANOATE ELASTÁZA VE STOLICI

250mg C-MTG

13

PANKREATICKÁ LIPÁZA

SEKREČNÍ KAPACITA GRADING CHP

SUBSTITUČNÍ LIPÁZA

DIGESTIVNÍ FUNKCE TRÁVENÍ (TUKŮ)

55

Kocna P.

¾ 13C - TRIPALMITIN

MALABSORPCE TUKŮ

¾ 13C - TRIOCTANOIN

TKÁŇOVÉ POŠKOZENÍ, FIBRÓZA > 30%

¾ 13C - STARCH

SEKRECE AMYLÁZY < 10%

¾ 13C - BzTyrAla

KORELACE s PABA testem

56


Kocna P.

LABORATORNÍ DIAGNOSTIKA V GASTROENTEROLOGII 13C-MTG

METABOLICKÉ PROCESY 13C-MTG

cPDR MTG (%) 13CO 2

V DECHU

PANKREATICKÁ LIPÁZA

O

1,3 DI - STEAROYL

CH - O -

13C

2-

(13C)

CUT-OFF FELA: 200 μg/g

100 μg/g

NORMÁLNÍ

70,0 70,0 60,0 60,0

CH2 - O - C - (CH2)16 - CH3 O

80,0 80,0

Kocna P.

- DECHOVÝ TEST & FELA VE STOLICI CHP-A CHP-B CHP-C CHP-D NON-CHP

50,0 50,0 40,0 40,0

- OCTANOYL

CUT-OFF MTG: 30 %

- (CH2)6 - CH3

30,0 30,0

O

20,0 20,0

CH2 - O - C - (CH2)16 - CH3

10,0 10,0

JATERNÍ β - OXIDACE 57

58


Kocna P.

0,0 0,0 -50 -50

226 DECHOVÝCH TESTŮ 13C-MTG 155 CHP - 71 KONTROL (NON-CHP) SHODA MTG & FELA - 80.2 % (181/226)

PATOLOGICKÝ

50 50

150 150

250 250

350 350

450 450

550 550

650 650

750 750

850 850



950 950

FELA μg/g

Kocna P.

CO JE CÉLIAKIE ?

¾ CELOŽIVOTNÍ ONEMOCNĚNÍ, PERMANENTNÍ STŘEVNÍ INTOLERANCE LEPKU OBILOVIN

¾ GENETICKÝM FAKTOREM JE HLA-B8, HLA-DR3 a HLADQ2 ¾ SPOUŠTĚCÍM FAKTOREM JSOU GLIADINOVÉ PEPTIDY ¾ IMUNOLOGICKÁ ODPOVĚĎ, AUTOIMUNITNÍ CHARAKTER ONEMOCNĚNÍ

¾ POŠKOZENÍ SLIZNICE TENKÉHO STŘEVA ¾ PROJEVY MALABSORPČNÍHO SYNDROMU ¾ ODPOVĚĎ NA BEZLEPKOVOU DIETU 59

60


Kocna P.


podle: Mowat AT, Lancet 2003, 361: 1290

33-mer PEPTID TKÁŇOVÁ TRANSGLUTAMINÁZA M.BUNĚK

ALGORITMUS LAB.METODIK PŘI PODEZŘENÍ NA CS

GLIADIN

MESENCHYMÁLNÍ BUŇKY

tTG

PŠENICE

negativní protilátky normální IgA

pozitivní protilátky

vysoké klinické podezření CÉLIAKIE ATROFIE KLKŮ

negativní histologie

HLA typizace, opakovat biopsii

CD4+ T-BUŇKA

TH1-BUŇKA

pozitivní protilátky

Biopsie TS, histologie

Vysoká pravděpodobnost celiakie

histologický obraz celiakie

Předběžná diagnóza celiakie

klinická a histologická normalizace

ZÁNĚTLIVÁ ODPOVĚĎ

Definitivní diagnóza celiakie

IL 4,5,10

B-BUŇKA

IgG atTG , IgG EmA nebo IgG AGA

Bezlepková dieta

TH2-BUŇKA

61

deficit IgA

IgA atTG / IgA EmA a celkové IgA

Nízká pravděpodobnost celiakie

ŽALUDEČNÍ, PANKREATICKÉ PEPTIDÁZY, PROLYL-ENDOPEPTIDÁZY

DEAMIDACE

Kocna P.

IL2, γIFN, TNF CÉLIAKIE HYPERPLASIE KRYPT

PROTILÁTKY


Kocna P.


ALGORITMUS LAB.METODIK PŘI ZVÝŠENÉM GENETICKÉM RIZIKU negativní HLA

C. Briani et al. / Autoimmunity Reviews 2008; 7, 644 – 650

62

Kocna P.

BIOPSIE TENKÉHO STŘEVA - KLASIFIKACE

pozitivní HLA

HLA DQ2 and/or DQ8 negativní protilátky

Není riziko CS

IgA atTG2 & total IgA

Vyloučit IgA deficienci Nízký příjem glutenu

anti TG2 < 3x normy anti TG2 > 3x normy

Marsh 0 or 1

Normální dieta Falešně pozitivní test Potenciální CS

IgA EmA

Střevní biopsie Marsh 2 or 3

EmA pozitivní

Definitivní diagnóza celiakie

EmA negativní

Tranzientně falešná pozit. anti TG2 Normální dieta Další serologické testy

Marsh 0

European Society for Pediatric Gastroenterology, Hepatology, and Nutrition Guidelines for the Diagnosis of Coeliac Disease. Husby S. at al. JPGN 2012; 54: 136–160

63

64


SOUČASNÝ PROTOKOL STANOVENÍ PROTILÁTEK (EVIDENCE - BASED) IgA atTG

+ IgA

Kocna P.

Marsh 1

Marsh 2

Marsh 3a Marsh 3b

Marsh 3c

Clinical practice - Coeliac disease. Kneepkens C. M., von Blomberg B. M. Eur J Pediatr. 2012; 171(7) : 1011 - 1021


Kocna P.

ANTIENDOMYSIÁLNÍ PROTILÁTKY - EmA

PERSPEKTIVNÍ PROTOKOL STANOVENÍ PROTILÁTEK (PRACOVNÍ HYPOTÉZA)

EmA IF - opičí jícen AGA-16, AGG-1, atTG-1.5 pacient D.K. 10/2004

IgA atTG

+ IgA EmA ZVÝŠENÍ SPECIFICITY IgA atTG

+ IgG atTG DETEKCE CELIAKIE PŘI IgA DEFICITU

+ IgA AGA

+ IgG DGP ZVÝŠENÍ SPECIFICITY IgA atTG DETEKCE CELIAKIE PŘI IgA DEFICITU DETEKCE CELIAKIE PRO DĚTI DO 2 LET

EmA IF - opičí jícen pozitivní kontrola

DETEKCE CELIAKIE PRO DĚTI DO 2 LET

65

Old and new serological tests for celiac disease screening. Volta U., Fabbri A., Parisi C. et al. Expert Rev. Gastroenterol. Hepatol. 2010, 4(1)

66

EmA IF - opičí jícen AGA-238, AGG-220, atTG-233 CSF, pacient M.P. 02/2002


Kocna P.


AKLIDES® - CytoBead CeliAK

Kocna P.

GLIADINY - SEPARACE PROTEINŮ α-gliadin ŠKROBOVÁ - GELOVÁ ELEKTROFORÉZA (SGE) SEPARACE JEDNOTLIVÝCH PROTEINŮ - GLIADINŮ KLASIFIKACE GLIADINŮ NA ČTYŘI SKUPINY

α−β−γ−ω

anti-tTG, anti-DGP, EmA Kombinace tří základních protilátek pro screening a diagnostiku celiakie imunofluorescenční technologií

ω

67

γ

β

α

68


Kocna P.


Kocna P.

STŘEVNÍ DISACHARIDÁZA - LAKTÁZA


DISACHARID - LAKTÓZA JE HYDROLYZOVÁN STŘEVNÍ DISACHARIDÁZOU LAKTÁZA

CH22OH AKTIVITA ENZYMU V KARTÁČOVÉM LEMU ENTEROCYTU

HO H

H OH H

CH22OH

O H

H 1

H

O

OH

β-D-galactose

69

H OH H

O H H

OH OH

α-D-glucose

70


Kocna P.


DIAGNOSTIKA LAKTÁZOVÉ INTOLERANCE

Kocna P.


HISTOCHEMICKÝ PRŮKAZ AKTIVITY LAKTÁZY V KARTÁČOVÉM LEMU ENTEROCYTU IMUNOHISTOCHEMICKÁ DETEKCE

MODERNÍ RAPID TEST DETEKCE AKTIVITY LAKTÁZY CHROMOGENNÍ METODOU

71

4

72


Kocna P.


INCIDENCE A MORTALITA NA KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU V ČR 80

normální sliznice

adenom

Kocna P.

progresivní lokalizovaný KRCA lymfatické KRCA jaterní adenom KRCA metastázy metastázy

na 100.000

70

INCIDENCE

60

10 - 15 let

5 leté přežití (%)

50 40 30 MORTALITA

20 10 0

KRCA stádium:

1960

1970

1980

1990

2000

2010

Epidemiologie nádorů České republiky http://www.svod.cz/

73


Dukes III

Dukes IV

Kocna P.

74


TESTY OKULNÍHO KRVÁCENÍ VE STOLICI - FOBT/TOKS

Kocna P.

SENZITIVITA TESTŮ - FOBT/TOKS senzitivita specificita

J Med Screen. 2002;9(3):99-103. Basic variables at different positivity thresholds of a quantitative immunochemical test for faecal occult blood. Castiglione G, Grazzini G, Miccinesi G, Rubeca T, Sani C, Turco P, Zappa M.

2005

Dukes I-II

Proteomics of colorectal cancer: overview of discovery studies and identification of commonly identified cancer-associated proteins and candidate CRC serum markers. Jimenez CR, Knol JC, Meijer GA, Fijneman RJ. - J Proteomics. 2010;73:1873-1895

28,7%

56,8%

83,4%

g-FOBT g-FOBT

i-FOBT i-FOBT

qi-FOBT qi-FOBT

100 100

qi-FOBT - 3.generace

80 80 60 60

1990

40 40

i-FOBT - 2.generace

20 20 0 0

1975

g-FOBT - 1.generace

Haemoccult

75

LABORATORNÍ DIAGNOSTIKA V GASTROENTEROLOGII ng Hb/ml 1600 1600

iFOBT - OC Micro - Eiken cut-off 75 ng/ml

76

Kocna P.

Kocna P.

ODBĚROVÝ SYSTÉM - OC SENSOR μ

697 - 1477 ng/ml mean 1087 ng/ml

HLINÍKOVÝ UZÁVĚR PRO PERFORACI NÁSTŘIKOVOU JEHLOU

1200 1200 1000 1000

FILTRAČNÍ VLOŽKA

315 - 654 ng/ml mean 485 ng/ml

800 800 600 600


400 400

SEPTUM DEFINUJÍCÍ MNOŽSTVÍ STOLICE


KARTÁČEK PRO ODBĚR STOLICE

00 NORMAL NORMAL

77

Ferkl M., Kocna P. et al. ČLČ 1992; Benešová A., Frič P. et al. ČLČ 1993 Dvorak M., Kocna P. et al. Z.- Facharzt, 2003; Kohout P., Granatova J. et al. GUT 2009


1400 1400

200 200

OC Sensor 100 ng/ml

ImmoCare, HemeSelect, Hemolex, Actim FB, Hexagon OBTI

Schweiz Med Wochenschr. 1976 Feb 28;106(9):297 The hemoccult test in the screening for colonic carcinoma Deyhle P, Nüesch HJ, Kobler E, Jenny S, Säuberli H.

ADENOM ADENOM

ADV.ADENOM ADV.ADENOM

IDENTIFIKAČNÍ ČÁROVÝ KÓD VZORKU

CANCER CANCER

Levi Z.,Rozen P.,Hazazi R.,Vilkin A.,Waked A.,Maoz E.,Birkenfeld S.,Leshno M.,Niv Y. Ann Intern Med. 2007;146:244-255 A Quantitative Immunochemical Fecal Occult Blood Test for Colorectal Neoplasia

78


Kocna P.


ODBĚROVÝ SYSTÉM - OC SENSOR μ VLOŽENÍ VZORKU STOLICE

i-FOBT LABORATORNÍ & POCT ANALYZÁTORY NÁSTŘIK 25 μl PRO ANALÝZU

PERFORACE HLINÍKOVÉ FÓLIE

OC-DIANA Eiken

QuikRead Orion

SmartPlus Eurolyser

79

TRANSFER EXTRAKTU PŘES FILTR DO VZORKOVACÍ JAMKY


Kocna P.

Kvantitativní stanovení Hb ve stolici analyzátorem Eiken OC-Sensor-micro Všeobecná fakultní nemocnice Praha 15 000 analýz za 5let (2008 - 2013) Data-mining analytický nástroj I-COP umožnil zkompletovat několik databází OpenLIMS, laboratorní data, FIT, Hb ve stolici s výstupem Národního onkologického registru

Hodnoty Hb ng/ml se významně neliší podle lokalizace tumoru


Kocna P.

82

Metodu FIT OC-Sensor lze spolehlivě použít pro screening KRCA v kterékoliv lokalizaci tumoru


Kocna P.

http://www1.lf1.cuni.cz/~kocna/glab/glency1.htm

LOKALIZACE TUMORU - FALEŠNÁ NEGATIVITA 1322 ng/ml (695-1580)

969 ng/ml (346-1855)

810 ng/ml (180-1646)

Kocna P., Májek O., Blaha M., Zima T., Dušek L.: Characteristics of Colorectal Cancer Detected by Quantitative Faecal Haemoglobin Test in Hospital Opportunistic Screening. Clin Chem Lab Med 2014; 52, Special Suppl, pp S416

http://gelab.zde.cz

1/8 12.5%

9.1% 810 ng/ml (180-1646)

1322 ng/ml (695-1580)

627 ng/ml (309-1422)

627 ng/ml (309-1422)

Kocna P.

LOKALIZACE TUMORU - HODNOTY FIT TESTU

prosinec 2013

1/11

NS-Plus Alfresa Pharma


KVANTITATIVNÍ ANALÝZA Hb VE STOLICI - VFN

81

i-Chroma Boditech

SENTi-FIT Sentinel

80

HM-Jack Kyowa

Kroma iT Linear

Senti FIT Sentinel ELIMINACE NADBYTKU STOLICE TRANSFER 10 mg

Kocna P.

Falešná negativita je 15,62% Senzitivita pro KRCA je 84,38%

969 ng/ml (346-1855)

3/16

5/29

18.7%

17.2% Při jednom testu a cut-off (75 ng/ml) je procento nezachycených karcinomů 17.6%

83

Kelley L, Swan N, Hughes DJ. - Colorectal Dis. 2013 Sep; 15(9): e512-21 An analysis of the duplicate testing strategy of an Irish immunochemical FOBT colorectal cancer screening programme

84

Medline on-line nejnovější publikace

Přímý link na MZČR Národní číselník


ON - LINE ZDROJE NA INTERNETU http://www1.lf1.cuni.cz/~kocna/glab/glency1.htm http://gelab.zde.cz http://www1.lf1.cuni.cz/~kocna/ginet/index.htm http://gweb.zde.cz http://www1.lf1.cuni.cz/~kocna/ge_atlas/ge_frames.htm http://geatlas.zde.cz

http://www1.lf1.cuni.cz/ukb/lectures.htm

85

Kocna P.

LABORATORNÍ METODY A TESTY V GASTROENTEROLOGII. MUDr.Petr Kocna CSc

Recommend Documents