Farmaka Volume 4 Nomor 3 1

Farmaka Volume 4 Nomor 3

1

Review: Derivatisasi Senyawa pada KCKT (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi) dengan Detektor Fluoresens Iis Karlida1, Febrina Amelia Saputri2 Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran Jl. Raya Bandung Sumedang km 21 Jatinangor 45363 [email protected] Abstrak KCKT (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi) merupakan metode analisis yang banyak digunakan karena sensitifitas dan selektifitasnya yang tinggi. Penggunaan berbagai macam detektor pada KCKT memberikan hasil analisis yang berbeda-beda. Detektor fluoresens merupakan detektor yang dapat digunakan pada KCKT dengan memberikan hasil analisis yang lebih baik daripada detektor yang lain dengan batas deteksi 10-9 -10-12. Namun tingkat kepekaan dari detektor fluoresens bergantung pada senyawa yang terlibat dalam analisis. Untuk beberapa senyawa yang tidak bisa berfluoresensi, sulit jika harus dianalisis menggunakan metode KCKT dengan detektor fluoresens. Maka dari itu diperlukan derivatisasi senyawa untuk mengubah sifat kimia maupun fisika dari senyawa tersebut sehingga memberikan hasil yang baik ketika dianalisis menggunakan KCKT dengan detektor fluoresens. Review artikel ini membahas lebih lanjut tentang derivatisasi pada metode analisis KCKT dengan detektor fluoresens. Kata kunci: KCKT (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi), derivatisasi, detektor fluoresens, senyawa penderifat, validasi KCKT. Abstract HPLC (High performance Liquid Chromatography) is an analysis method that is widely used because of the high sensitivity and selectivity. The use of various kinds of detectors in HPLC provides analytical results vary. Fluorescence detector is a detector can be use in HPLC analysis with results better thann the other detectors with detection limit of 10-9-10-12. However, the sensitivity of a fluorescence detector depending on the compound involved in the analysis. For some substance that can not fluorescence, difficult if you have analyzed using HPLC with fluorescence detector. Thus it is necessary derivatization of compounds to alter the chemical and physical properties of the compound that gives good results when analyzed using HPLC with fluorescence detector. Review this article discusses more about derivatization in HPLC analytical method with fluorescence detector. Key words: HPLC (High Performance Liquid Chromatography), derivatization, fluorescence detectors, reagents derivatized, validation HPLC. Pendahuluan Kromatografi adalah suatu teknik analisis berdasarkan proses pemisahan suatu zat atau molekul karena perbedaan

sifat. Menurut fase geraknya, kromatografi dibedakan menjadi kromatografi cair dan kromatografi gas. Salah satu kromatografi cair yang banyak digunakan didalam Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


2

analisis bidang farmasi yaitu Kromatografi

diatur sesuai kebutuhan (Gupta, et al.,

Cair Kinerja Tinggi (KCKT) atau lebih

2012).

dikenal dengan HPLC (High Performance Liquid

Chromatography).

KCKT

merupakan teknik analisis kromatografi cair yang digunakan baik dalam analisis kualitatif yaitu dalam bentuk pemisahan senyawa maupun dalam analisis kuantitatif yaitu penentuan jumlah senyawa didalam suatu larutan. Adapun prinsip dari KCKT yaitu

suatu

sampel

berupa

fase diam dan fase gerak, kemudian diberikan tekanan tinggi sehingga fase gerak dapat mengelusi sampel keluar dari kolom dan terdeteksi oleh detektor yang dihasilkan

yang digunakan didalam instrumen KCKT. Pemilihan dengan

suatu sifat

detektor kimia

disesuaikan

dari

sampel,

kemungkinan gangguan yang terjadi, batas deteksi, ketersediaan serta biaya. Adapun macam-macam

detektor

diantaranya

(Prathap, et al., 2013).

larutan

diinjeksikan kedalam kolom yang berisi

kemudian

Terdapat berbagai macam detektor

o

Detektor UV-Vis

o

Detektor fluoresens

o

Detektor indeks bias

o

Detektor elektrokimia Yang akan dibahas lebih lanjut

kromatogram

pada review artikel ini yaitu KCKT dengan

(Charde, et al., 2014). Kelebihan dari

detektor fluoresens. Kelebihan dari teknik

teknik KCKT diantaranya mempunyai

fluoresensi itu sendiri adalah waktu yang

resolusi yang tinggi, kolom yang terbuat

dibutuhkan cepat dengan biaya kecil. Pada

dari bahan gelas atau stainless steel dan

teknik spektroskopi serapan untuk senyawa

berdiameter kecil yang bisa memberikan

multikomponen yang memiliki serapan

hasil pemisahan sempurna, proses analisis

pada panjang gelombang yang berdekatan

berlangsung cepat, tekanan yang diberikan

akan menghasilkan spektrum yang tidak

oleh fase gerak relatif tinggi, laju alir dapat

dapat dipisahkan sehingga menyulitkan Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


dalam

3

analisis.

fluorosensi,

Berbeda

sinyal

dengan

dari

senyawa

2012).

Derivatisasi

kurang

(Angin, 2008).

instrumen merupakan

suatu

proses pemancaran radiasi cahaya oleh suatu zat yang tereksitasi dari keadaan dasar ke keadaan berenergi tinggi. Emisi disebabkan oleh adanya absorbsi cahaya oleh atom sehingga atom mengalami eksitasi dari keadaan dasar ke keadaan berenergi tinggi yang kemudian atom tersebut kembali ke keadaan dasar dengan mengemisikan

suatu

energi

cahaya.

Fluoresensi berlangsung selama kurang lebih 1 ns dan bisa berlangsung lebih lama yaitu sekitar 1 sampai 1000 ms (Joseph,

untuk

beberapa senyawa dengan sifat yang

multikomponen tetap dapat dipisahkan

Fluoresensi

digunakan

sesuai

dengan

yang

metode

digunakan

atau

didalam

analisis. Banyak senyawa polar yang tidak cocok untuk dianalisis dengan metode KCKT, diantaranya yaitu silil, asil, dan alkil. Selain itu, senyawa polar yang harus dilakukan

derivatisasi

untuk

dapat

dianalisis yaitu asam organik, amida, senyawa hidroksi, dan asam amino. Untuk KCKT

dengan

detektor

fluoresens

diperlukan proses derivatisasi jika sampel yang akan dianalisis tidak berfluoresensi. Fluoresensi dari sampel inilah yang dapat meningkatkan sensitifitas dari analisis. Didalam HPLC (High Performance Liquid Chromatography) yang sering digunakan

2006).

sebagai teknik analisis suatu senyawa Pada penggunaan KCKT dengan detektor

fluoresens

derivatisasi.

terdapat

Derivatisasi

proses

merupakan

metode modifikasi kimia suatu senyawa untuk

meningkatkan

sensitifitas

dan

spesifisitas pada proses analisis (Adegoke,

organik didalam suatu matriks terkadang banyak

substansi

yang

tidak

dapat

terdeteksi oleh detektor dari instrumen tersebut karena kurang cocoknya antara sifat

dari

substansi

dengan

detektor

sehingga tidak dapat menghasilkan signal Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


4

atau output yang kompatibel (Ku’Smierek,

yang lain sebagai penunjang didapat dari 3

et al., 2011).

buku.

Metode

30 jurnal

Sumber

data

yang

digunakan 23 jurnal

didalam review artikel ini diperoleh dari US National Library of Medicine Institute

20 jurnal

of Health website (www.ncbi.nlm.nih.gov › NCBI › Literature › PubMed Central (PMC)). Pencarian dilakukan dengan kata

18 jurnal

7 jurnal tidak memenuhi kriteria tahun 3 jurnal bahasannya bukan tentang derivatisasi 2 jurnal bahasannya tentang derivatisasi namun tidak menggunakan detektor fluoresens

kunci HPLC (High Performance Liquid Chromatography), fluorescence

derivatization, detectors,

reagents

derivatized, dan validation HPLC. Sebanyak 30 jurnal dan 3 buku diperoleh

untuk

kemudian

dijadikan

sumber acuan review artikel ini. Dari 30 jurnal yang didapat dilakukan skrining berdasarkan jurnal periode 2006-2016 dan bahasan mengenai derivatisasi pada KCKT yang menggunakan detektor fluorescence. Berdasarkan hasil skrining tersebut dari 30 jurnal yang termasuk kriteria inklusi yaitu ada 23 jurnal, sedangkan 7 jurnal termasuk kriteria eksklusi. Selain itu sumber data Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


5

Hasil Table 1. Derivatisasi Senyawa dengan berbagai jenis senyawa penderivat didalam KCKT dengan Detektor Fluoresens Analit

Derivator

Jenis

Matriks

T

tR (mnt)

(˚C)

Derivatisa

2-

(Nohara,

Cyanoace kolom

et

Post

Kolom

λex – λem LOD-

Fase gerak

(mL/m

si Idebenon

FR

(nm)

LOQ

358-409

0,1 / 12,5

nt) Plasma

50-

darah

75

10

al., tamide

2012).

Eluen=

ODS (inert sil Campuran

0,8

ODS-3,

etanol

Eluat=

150x4,6

mm mengandung

0,2

i.d,

60%

ukuran mmol/L

partikel 5 µm)

ng/mL

3 2-

Cyanoacetamide dan 3 mmol/L na-perklorat

PSS (Li, Guanidin

Post

Plasma

et

kolom

tikus

al., HCl

120

10-15

0,5

TSK gel 62500 0,1 M NaSO4 PWxL

250-435

250 ng/mL / 1µg/mL

2013).

Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


Memanti

OPA

6

Pre kolom

Plasma

20

4,2

2,5

Chromolith

Asetonitril:0,02

ne

performance

5

(Zarghi,

(RP-18e,

(50:50) pH 4,6

et

100x4,6 mm)

al.,

bufer

335-440

-

PO4

/ 2

ng/mL

2010). Asam

OPA

Pre kolom

-

10

25

0,5

C18

ODS Elusi gradien

240-450

amino

150x4,6 mm 5 Pelarut A: 0,05 Asp

(Perucho

µm

5,88

2015).

metanol (95:5)

dan Gly,

Pelarut metanol

Tikus

ruan

(hami, et Cl

wistar

g

al.,

jantan

2013).

albino

MPH[15].

DIB-Cl

Pre kolom

Plasma

12

2

dan 448.

C18 (ODS-3 5 Metaanol:buffer µm

taurin,

B: GABA:

ddH2O (70:30) Pre kolom

dan

M Na-asetat pH Gln : 450.

, et al.,

Glutation FMOC-

-

Glu:452 260-315

250x4,6 PO4 (40:60)

15,26/25,4 2 µM

mm)

ruan g

10,6

1

C18 mm)

(250x4,6 Asetonitril:air (73:27)

330-460

-/

1

ng/mL

Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


7

Keterangan: PSS (Propilenglikol alginat Sodium Sulfat); OPA (O-Phthaldi Aldehyde); FMOC-Cl (9-Fluorenyl Methyl Chloroformate); MPH (Methylphenidate); DIB-Cl (4-(4,5-diphenyl-1H-imidazol-2-yl)benzoyl chloride); T (Temperature); tR (time retention/waktu retensi); FR (Flow Rate/Laju alir); LOD/LOQ (Limit of Detection/Limit of Quantitation).

Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


8

produk reaksi tidak harus selalu stabil.

Pembahasan Pada dasarnya teknik derivatisasi ada dua jenis, teknik derivatisasi pra kolom dimana sampel direaksikan dengan reagen penderivat sebelum tahap pemisahan dan pendeteksian, serta teknik derivatisasi post kolom yang dilakukan setelah proses

Pada umumnya derivatisasi dilakukan terhadap senyawa amin alifatik, asam atau

alkohol

boleh memberikan respon. Pereaksi yang digunakan harus dengan volume sekecil mungkin untuk menghindari pelebaran pita (Adegoke, 2012). Menurut European Pharmacopoeia 7th Edition o-phthalaldehyde dengan reagen

pemisahan (Adegoke, 2012).

karboksilat,

Reagen yang digunakan harus stabil, tidak

yang

sulit

dideteksi pada konsentrasi rendah. Adapun beberapa kondisi yang memungkinkan dilakukannya derivatisasi pre kolom yaitu reaksi stoikiometri dan struktur senyawa hasil diketahui dengan pasti, rekasi harus berjalan cepat dan reprodusibel, senyawa derivator harus stabil dan dapat dipisahkan serta dapat dibedakan dari material awal

thiol digunakan untuk analisis senyawa dengan gugus amin primer, 9-fluorenyl methyl

chloroformate

dan

7-fluoro-4-

nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazole

dapat

digunakan untuk analisis asam amino primer maupun sekunder. Reaksi derivatisasi yang ideal yaitu reaksinya berjalan cepat dan kuantitatif, menghasilkan

dengan

signal yang lebih kompatibel dibandingkan senyawa yang tidak diderivatisasi, produk

analisis, yang

derivatif

yang dihasilkan harus stabil selama proses

(Adegoke, 2012). Kondisi

analit

memungkinkan

dilakukannya derivatisasi post kolom yaitu

derivatisasi

dan

residu

tidak

dari

mengganggu

pereaksi proses

analisis (Ibrahim, et al., 2010).

walaupun reaksi harus berjalan cepat dalam waktu 2 menit, dan reprodusibel,

Preparasi sampel Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


9

Hal yang pertama dilakukan yaitu pengumpulan sampel dari objek penelitian. Setelah sampel dikumpulkan dilakukan penambahan

beberapa

reagen

seperti

buffer untuk mempertahankan kestabilan sampel

selama

penyimpanan.

Untuk

memisahkan sampel dari matriks juga dilakukan sentrifugasi atau vortex dengan kecepatan tertentu. Plasma atau cairan beningnya

yang

digunakan

didalam

analisis. Didalam analisis dengan KCKT ini pada umumnya banyak menggunakan metode standar internal dimana sampel yang

dianalisis

ditambahkan

dengan

sejumlah larutan standar yang berbeda dengan

sampel

kemiripan sifat.

namun

mempunyai

Alasan

menggunakan

metode standar internal didalam KCKT yaitu

untuk

meminimalisir

kesalahan

pengukuran akibat variasi volume yang diinjeksikan kedalam alat KCKT.

dengan

menggunakan

pelarut

cara

(λex – λem) Terdapat dua panjang gelombang yang digunakan didalam KCKT ini yaitu panjang gelombang eksitasi dan panjang gelombnag emisi. Panjang gelombang eksitasi merupakan panjang gelombang pada saat atom menyerap energi dan berpindah dari keadaan dasar menuju keadaan

eksitasi,

sedangkan

panjang

gelombang emisi yaitu panjang gelombang pada saat atom yang telah tereksitasi kembali

ke

keadaan

dasar

dengan

mengemisikan energi. Pemilihan panjang gelombang

analisis

sangat

penting

dilakukan untuk meningkatkan sensitifitas dan selektivitas dari sampel yang akan dianalisis karena sampel tersebut akan memberikan

serapan

maksimal

pada

panjang gelombang tertentu (Harahap, dkk., 2007).

Untuk sampel serbuk, preparasinya dilakukan

Penetapan panjang gelombang analisis

Penentuan senyawa penderivat

dilarutkan

yang

kemudian disaring dan dianalisis.

seuai,

Penentuan senyawa penderivat yang akan digunakan yaitu tergantung jenis Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


sampel

10

yang

dianalisis.

sekunder, aminoglikosida, serta senyawa

Halogenitrobenzofuran seperti 4-Chloro-7-

yang mengandung gugus fungsi –OH dan –

nitrobenzofuran (NBD-Cl) didalam larutan

SH,

berair ia bereaksi dengan asam amino

diderivatisasi

primer

dan

mengandung gugus –SH dan –NH2 (Hami,

isotiosianat juga sering digunakan sebagai

et al., 2013). Didalam derivatisasi, gugus –

senyawa penderivat untuk amin primer dan

SH pada glutation mudah teroksidasi

juga digunakan untuk analisis asam amino.

menjadi disulfida (-S-S) sehingga harus

Fluorescamin merupakan reagen spesifik

ditambahkan substansi pereduksi sebelum

untuk derivatisasi senyawa dengan gugus

derivatisasi

amino primer. O-phthaldialdehyde (OPA)

(NaBH4). Selain itu penambahan EDTA

dapat

dapat menghilangkan gangguan dari ion

dan

akan

sekunder.

digunakan

Isosianat

untuk

membentuk

glutation

dengan

analit FMOC

seperti

karena

Na-borohidrida

Ca2+,

arginin, agmantin, dan histidin yang

memfasilitasi oksidasi –SH menjadi –S-S.

mengandung peptida. Jenis reaksi yang

FMOC

terjadi

derivatisasi

maupun –NH2 pada glutation, namun

menggunakan senyawa penderivat OPA

karena sifat –SH yang mudah teroksidasi,

yaitu gugus isoindol dari sampel berupa

kromatogram yang dihasilkan tidak bagus.

senyawa

Sehingga gugus –SH dihilangkan dengan

amin

proses

primer,

asam

amino,

dapat

Na+,

cocok

senyawa derivat fluoresens dari glutation,

pada

Mg2+,

sebagai

dan

bereaksi

Ca2+

dengan

–SH

penambahan

OPA, asam borat dan merkaptoetanol yang

derivatisasi hanya terjadi antara FMOC

terdapat

dan

reagen

OPA

sendiri

–NH2

yang

agar

yang

maupun amin sekunder bereaksi dengan

pada

ion

Fe2+

reaksi

menghasilkan

(Perucho, et al., 2015). FMOC-Cl (9-

kromatogram yang baik (Hami, et al.,

fluorenylmethyl chloroformate) digunakan

2013).

untuk

derivatisasi

amin

primer

dan

Penentuan jumlah senyawa derivator Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


11

Ketika akan mereaksikan senyawa penderivat dengan sampel berupa senyawa yang tidak memiliki kromofor dan tidak berfluoresensi, jumlah senyawa penderivat yang digunakan harus berlebih agar reaksi derivatisasi berjalan sempurna dan produk derivat

yang

dihasilkan

akan

dapat

dianalisis dengan baik (Harahap, dkk., 2007). Namun untuk beberapa senyawa tidak

boleh

ditambahkan

senyawa

penderivat yang terlalu banyak karena akan bentuk kromatogram menjadi tidak stabil. Penentuan suhu proses derivatisasi

diinginkan tidak sempurna (Harahap, dkk., 2007). Penentuan suhu yang digunakan pada proses derivatisasi ini disesuaikan dengan sifat sampel yang akan dianalisis, ketika sampel yang akan dianalisis tahan terhadap panas maka proses derivatisasi dilakukan pada suhu yang cukup tinggi namun tidak sampai merusak sampel. Untuk sampel yang tidak tahan panas seperti asam amino atau protein maka dilakukan derivatisasi pada suhu 10˚C (Perucho, et al., 2015). Penentuan waktu inkubasi pada proses

Suhu merupakan salah satu faktor

derivatisasi

yang berpengaruh terhadap pembentukan senyawa derivat. Pada umumnya suhu ruangan 25˚-30˚C menjadi pilihan terbaik untuk dilakukannya proses derivatisasi. Jika suhu terlalu tinggi, maka senyawa derivat yang dihasilkan akan rusak dan terhidrolisis kembali. Begitu juga ketika suhu

yang

derivatisasi pembentukkan

diberikan terlalu senyawa

pada

proses

rendah

maka

derivat

yang

Waktu

inkubasi

pada

proses

derivatisasi tidak boleh terlalu lama dan tidak boleh terlalu cepat. Karena jika terlalu

lama

dikhawatirkan

senyawa

derivat yang dihasilkan akan berubah atau terhidrolisis kembali menjadi senyawa awal. Begitu juga ketika waktu yang diberikan pada saat inkubasi terlalu cepat, dikhawatirkan

reaksi

pembentukkan

senyawa derivat belum sempurna. Untuk Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


menentukan

12

waktu

inkubasi

optimal

Fase diam yang banyak digunakan disini yaitu oktadesil silika (ODS). Pemilihan

dilakukan optimasi terlebih dahulu.

laju alir digunakan untuk menunjukkan

Penentuan kondisi analisis optimum

hasil kromatogram, laju alir yang baik Penentuan

kondisi

analisis

optimum didapatkan dari hasil optimasi. Misalnya didalam penentuan fase gerak yang

digunakan

sebelum

dilakukan

analisis, dilakukan optimasi terlebih dahulu menggunakan berbagai fase gerak dengan berbagai perbandingan komposisi. Hal ini bertujuan untuk mendapatkan fase gerak yang baik yang dapat memisahkan dan mengelusi sampel dengan sempurna.

menyebabkan

kromatograam

yang

dihasilkan pun memiliki parameter yang baik seperti HETP (Height of packing Equivalent to a Theoritical Plate) yang rendah, lempeng teoritis (N) yang besar, dan resolusi (R) yang besar. Apabila nilai HETP rendah, artinya efisiensi kolom bagus. Efisiensi kolom semakin baik jika jumlah lempeng teoritis (N) meningkat. Semakin panjang L (panjang kolom) maka

Jenis elusi yang digunakan ada dua

semakin banyak jumlah lempeng teoritis

yaitu elusi gradien dan elusi isokratik.

dan efisiensi semakin baik. Sedangkan

Elusi

dengan

untuk resolusi (R), semakin tinggi resolusi

menggunakan fase gerak yang polaritasnya

maka pemisahan yang terjadi semakin baik

berubah-rubah

(Harahap, dkk., 2007).

gradien

yaitu

elusi

digunakan

untuk

menghilangkan pengotor yang terdapat

Validasi

pada pelarut atau senyawa penderivatnya dan

memperpendek

waktu

retensi,

sedangkan elusi isokratik yaitu selama prosses elusi fase gerak yang digunakan polaritasnya tetap (Zhang, et al., 2006).

Validasi

yang

dilakukan

yaitu

pembuatan kurva kalibrasi, uji linearitas, selektifitas dan spesifisitas, limit deteksi, limit kuantitasi, akurasi dan presisi. Kurva Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


13

kalibrasi didapatkan dari hasil perhitungan

merupakan konsentrasi terkecil yang dapat

regresi

diukur secara kuantitatif (ICH, 2005).

linier

secara

statistika

yang

menghubungkan luas puncak terhadap

Penentuan akurasi dapat dilakukan

konsentrasi. Persamaan kurva baku yang

dengan 2 cara yaitu dengan metode

didapat berupa y = ax + b, dimana y

simulasi (spiked placebo recovery) dan

merupakan luas puncak, x merupakan

metode

penambahan

konsentrasi. Uji linearitas dapat dilihat dari

addition

method).

nilai koefisien korelasi (r2) yang didapat,

dilakukan dengan cara sejumlah sampel

jika nilai r2 mendekati 1 yaitu > 0,998 itu

murni ditambahkan kedalam plasebo lalu

artinya pembentukkan senyawa derivat

dianalisis

antara sampel dengan senyawa penderivat

dengan

memenuhi uji linearitas (Zhang, et al.,

Sedangkan pada metode standar adisi,

2006).

sampel dianalisis lalu dan sejumlahh

Selektifitas

dan

spesifisitas

dan

(standard

Metode

simulasi

hasilnya

dibandingkan

sampel

sebenarnya.

kadar

merupakan kemampuan yang hanya dapat

larutan

mengukur zat yang akan dianalisis secara

sampel dan dianalisis kembali. Selisih

cermat walaupun didalamnya terdapat

kedua hasil analisis dibandingkan dengan

matriks (Zhu, et al., 2007).

kadar sebenarnya (Gonzales, et al., 2009).

Limit deteksi dan limit kuantitasi

Presisi

standar

baku

ditambahkan

merupakan

derajat

kedalam

kesesuaian

didapatkan dari kurva kalibrasi, LOD = 3.3

antara hasil pengukuran yang diperoleh

σ/S dan LOQ = 10 σ/S, dimana σ standar

dari beberapa pengulangan pada sampel

deviasi dan S adalah slope atau a pada

yang homogen. Presisi dinyatakan sebagai

persamaan kurva kalibrasi (n = 4). Adapun

keterulangan dan ketertiruan (Tranfo, et

limit

al., 2008)

deteksi

itu

sendiri

merupakan

konsentrasi terkecil yang dapat terdeteksi

Simpulan

oleh instrumen. Sedangkan limit kuantitasi Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


14

Derivatisasi untuk

merupakan

meningkatkan

teknik

deteksibilitas,

liquid chromatographic analysis of pharmaceuticals

and

other

sensitifitas, selektifitas dan spesifisitas

compounds. African Journal of

untuk

Pure

beberapa

senyawa

yang

tidak

berfluoresensi agar dapat dianalisis dengan metode

KCKT

yang

menggunakan

detektor fluoresens. Hal-hal yang harus diperhatikan didalam proses derivatisasi diantaranya yaitu jenis analit, senyawa penderivat dan jumlahnya, suhu, serta waktu inkubasi pada proses derivatisasi. Ucapan Terimakasih

kepada dosen pembimbing dan dosen pengampu mata kuliah Metode Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran. Konflik Kepentingan

dengan

konflik

penelitian,

kepentingan kepenulisan

(authorship), dan atau publikasi artikel ini. Daftar Pustaka

2012;6(14);129-140. 2. Angin BA. Teknik identifikasi cepat hasil pemisahan kromatografi menggunakan detektor fluoresensi. Jurnal

Penelitian

MIPA.

2008;2(1):28-32. 3. Charde

MS,

liquid

AS

Welankiwar,

chromatographywith

validation. International Journal of Pharmaceutical

Chemistry.

2014;4(2):57-61.

AVR, Reddy KC, Sharma HK, Handa VK, Dandala R, Bindu VM. Impurity profile study of lopinavir and validation of HPLC method for the

1. Adegoke OA. An overview of applications

Chemistry.

4. Chitturi SR, Bharathi CH, Reddy

Seluruh penulis menyatakan tidak potensi

Applied

Jitendra K. Method development by

Penulis mengucapkan terimakasih

terdapat

and

of

pre-column

derivatization reactions for the

determination

substances

in

of

lopinavir

related drug

substance. J Pharmaceut Biomed Anal. 2008; 48:1430–1440. Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


15

5. European

Pharmacopoeia

7th

to Paraquat. Iranian Journal of

Edition. European Directorate for

Pharmaceutical

the Quality of Medicines and

2013;12(4):911-916.

Healthcare.

Council

Eur.

Strasbourg 1:91-94.

MI,

9. Harahap Y, Hayun, Meriska S. Analisis Senyawa Derivat Antara

6. Gonzalez O, Iriarte G, Ferreirós N, Maguregui

Research.

Alonso

RM,

Natrium Alendronat dengan Dansil Klorida Secara Kromatografi Cair

Jiménez RM. Optimization and

Kinerja

Tinggi

Validation of a SPE-HPLCPDA-

Majalah

Farmasi

Fluorescence

Method

2007;18(2):88-95.

Simultaneous

Determination

for

the

Fluoresensi. Indonesia.

of

10. Ibrahim H, Eric C, Athena K, and

Combined

Pratrice P. Interest of Fluorescence

Cardiovascular Therapy in Human

Derivatization and Fluorescence

Plasma. J Pharmaceut Biomed

Probeassisted

2009; 50:630–639

Detection

Drugs

Used

in

7. Gupta V, Ajay DKJ, NS Gill, Kapil G. Development and validation of HPLC method: a review. Int. Res. J. pharm. 2012;2(4):17-25. 8. Hami Z, Mohsen A, Amir K, and

Short

Post

of

Phospholipids:

Review.

Analytical Procedures: Text and Methodology.

International

Liquid Chromatography Coupled

IFPMA, Geneva.

of

Molecules.

11. ICH Q2 (R1) (2005). Validation of

Conference

Determination

A

2010;15:352-373.

Mahmoud GK. High Performance

with Pre Column Derivatization for

Column

12. Joseph

on

RL.

Harmonization,

Principles

Of

Oxidized

Fluorescence Spectroscopy Third

Glutathione Level in Rats Exposed

Edition. Singapore: Springer; 2006. Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157


16

13. Ku’Smierek

K,

Chwatko

G,

Glowacki R, Kubalczyk P, Bald E.

Cyanoacetamide.

Chem

Pharm

Bull. 2012;60(5):598-602.

Ultraviolet Derivatization Of Low-

16. Perucho J, R Gonzalo G, E Bazan,

Molecular-Mass Thiols For High

MJ Casarejos, A Jimenez E, MJ

Performance

Asensio, AS Herranz. Optimal

Liquid

Chromatography And Caphillary

Excitation

Electrophoresis Analysis. Journal

Wavelengths to Analyse Amino

Chromatography.

Acids

2011;B

879:1290-1307. 14. Li PL, Chun XL, Yi TX, Hai HL,

and

Emission

and

Optimize

Neurotransmitters

Quantification

using

Pre

Column

OPA

Hong BL, Xiao XH, Guang LY,

Derivatization by HPLC. Amino

and Hua SG. An HPLC Method for

Acids. 2015;47:963-973.

Microanalysis

and

Pharmacokinetics Sulfated Loaded

of

Marine

Polysaccharide Poly

PSS-

Lactic-Co-Gycolic

17. Prathap

B,

Srinivasa,

Akalanka P

Johnson,

Arthanarswaran. importance

A

of

D, and

P

review

RP-HPLC

in

Acid (PLGA) Nano Particles in Rat

analytical

Plasma. Mar Drugs. 2013;11:1113-

International Journal of Novel

1125.

Trends in Pharmaceutical Science.

15. Nohara Y, Junko S, Yoji Y, and Hiroaki

K.

Determination

of

method

GH

2013;3(1):15-23. 18. Tranfo G, Enrico P, Renata S,

Idebenon in Plasma by HPLC with

Daniela

Post

HPLC/MS/MS

Column

Derivatization

Fluorescence Using

2-

development.

P.

Validation Method

of

an with

Isotopic Dilution for Quantitative Determination of Trans, TransPrinted : 1693–1424 Online : 2089-9157


17

Muconic Acid in Urine Samples of

John

Workers Exposed to Low Benzene

Fluorescence

Concentrations. J Chromatogra B.

Quantification of Methyphenidate

2008; 867:26–30

in Human Plasma. J Chromatogr B

19. Zhang L, Tao MH, Xiao LF, Xue NL, Qing SW, Zhiwen Z, Xian YS. Determination

of

SM.

A

Novel

Methode

HPLC for

the

Analyt Technol Biomed Life Sci. 2007;858(1-2):91-95.

Glucosamine

Sulfate in Human Plasma by Precolumn High

Derivatization

Performance

using Liquid

Chromatography with Fluorescence Detection: Its Application to a Bioequivalence Study. Journal of Chromatography B. 2006;848:8-12. 20. Zarghi A, Alireza S, Seyed MF, Arash K, Babak M. Sensitive and Rapid

HPLC

Method

for

Determination of Memantine in Human

Plasma

using

OPA

Derivatization and Fluorescence Detection

and

Pharmacokinetics

Aplication Studies.

to Schi

Pharm. 2010;78:847-856. 21. Zhu HJ, Jun SW, Kennerly SP, Jennifer LD, C Lindsay D, and Printed : 1693–1424 Online : 2089-9157

Farmaka Volume 4 Nomor 3 1

Recommend Documents