Botanické pesticidy a jejich bezpečnost pro lidské zdraví na příkladu esenciálního oleje Citrus sinensis a Oulema melanopus v laboratorních podmínkách Lenka Zarubova1, Lenka Kourimska1,*, Pavel Novy1, Miloslav Zouhar 2, Ondrej Douda3, Jiri Skuhrovec4, Josef Pulkrabek5
Abstrakt Rostlinné bio - pesticidy nedávno zaznamenaly rostoucí zájem jako alternativa na místo konvenčních chemikálií v integrované ochraně rostlin a ekologickém zemědělství. V této studii by testován esenciální olej Citrus sinensis (Osbeck) jako možnost ochrany pšenice před Oulema melanopus (L.). Chemické složení silice bylo analyzováno plynovou chromatografií s hmotnostní spektrometrií (GC - MS). V oleji bylo identifikováno dvacet pět sloučenin, kde převládající složku tvořil d - limonen (89,49 %), následoval myrcen, α - pinen, linalool, sabinene, dekanal a další. Test přímé toxicity se ukázal účinným proti larvám O. melanopus s 85 % úmrtností během 48 hodin. Dále studie odhalila vysokou míru perzistence oleje z ošetřených rostlin. Byla zjištěna koncentrace nižší než 0,01 g / kg, která byla detekována pomocí GC -MS 5 minut po aplikaci oleje, což naznačuje jeho šetrnost k životnímu prostředí a tím i bezpečnosti potravin. Tyto výsledky, společně s uvedenými literárními údaji v této studii, ukazují na velký potenciál esenciálního oleje C. sinensis pro budoucí možné využití v ochraně rostlin před hmyzími škůdci. Klíčová slova: ochrana rostlin, bio – pesticidy, d- limonene, larvální, ekologické zemědělství, Triticum aestivum Úvod Syntetické pesticidy jsou široce používány v zemědělství po celá desetiletí k ochraně rostlin před škůdci a jako prevence proti chorobám. Jejich příliš časté využívání způsobilo v minulosti vážná zdravotní a environmentální rizika. Ačkoli nová legislativa EU a USA vedla k dramatickému poklesu počtu schválených výrobků a k výraznému zlepšení bezpečnosti aplikace syntetických pesticidů, jsou tyto přípravky stále považovány za potenciální hrozbu pro lidské zdraví, bezpečnost potravin a životní prostředí (Damalas a Eleftherohorinos, 2011). V tomto ohledu přípravky na rostlinné bázi představují malé riziko, vzhledem k jejich přírodnímu původu, který je ekologicky šetrnou alternativou k chemickým přípravkům na ochranu rostlin (Rozwałka et al., 2008), vhodných pro implementaci do integrovaných systémů ochrany rostlin (Ribeiro et al., 2010), a to zejména v ekologickém zemědělství, kde je použití synteticky chemických látek zakázáno (Isman 2006). Značně velkou skupinu potenciálních biopesticidů představují éterické oleje. Je známo, že mohou vyvinout široké spektrum biologických aktivit, včetně antifídantních a repelentních účinků (Regnault - Roger et al. 2012). Některé z olejů vykazují určitý stupeň fytotoxicity, obvykle inhibují klíčení semen, kořene a růst sazenic, což naznačuje jejich možného využití proti plevelům. Na druhé straně existuje mnoho jiných olejů s žádnou nebo velmi nízkou fytotoxicitou (Singh a Upadhyay 1993), což naznačuje potenciál pro přímé použití proti škůdcům a chorobám.
1
Pravděpodobně mezi nejznámější škůdce obilovin z čeledě mandelikovitých patří Oulema melanopus L. a O. galleciana Heyden (Coleoptera:Chrysomelidae). Oba tyto druhy se nachází v mnoha druzích kulturních a plevelných travách, avšak mezi jejich nejvhodnější hostitelskou rostlinu patří Triticum aestivum L. ale mohou také způsobit hospodářsky významné škody na ječmeni (Hordeum vulgare L.). Brouci přilétají koncem dubna a začátkem května. Po úživném žíru na travách se stěhují v první dekádě května do polí, kde na listech obilí vyžírají podlouhlé otvory. Po páření kladou samičky do poloviny května svá oválná leskle žlutá vajíčka jednotlivě nebo v krátkých řadách na horní stranu nejvýše postavených listů. Mimořádně teplé a suché jarní a letní počasí vybízí k rozmnožení tohoto škodlivého organismu, přičemž každá larva zničí 2,5-3,5 cm2 listové plochy, což tvoří asi 10 % z praporkového listu. Škody způsobené dospělci nejsou ekonomicky významné, ale pesticidní opatření je nutné učinit proti larvám (Buntin et al. 2004). Běžné pesticidy hrají velmi důležitou roli v ochraně rostlin, ale jejich negativní dopad na životní prostředí a lidské zdraví, vede k přehodnocení systémů ochrany rostlin. Jedním z důvodů je výskyt rezistentních populací škůdců široce používané účinné látky, jako v případě brouka O. oryzae Kuwayama, významného škůdce rýže, jež zapříčinil rozvoj resistence fipronilu v Japonsku ( Nakao et al. 2012). V tomto ohledu, je vhodné hledat nové postupy, které snižují vznik této skutečnosti. Rozšíření rozsahu použitelných metod ochrany rostlin je také základním předpokladem pro uplatňování zásad integrované ochrany před škůdci. Několik alternativ pro ochranu před O. melanopus byly popsány již dříve, například použití entomopatogeních hlístic (Laznik et al. 2012), výběr vhodných odrůd podle parametrů přirozené rezistence (Papp, 1992), nebo použití induktorů rezistence ( Delaney et al. 2013). Zatím existuje jen málo esenciálních olejů v souvislosti s povolenými přípravky na ochranu rostlin v EU: citronella, hřebíček, máta peprná, tea tree ( Evropská komise 2008) a nejnověji schválená první insekticidní silice z oranžového oleje extrahovaná z Citrus sinensis (L.) Osbeck, (Evropská komise 2013), povolená ve Francii jako ochrana proti molici na dýně a rajčata ( Regnault - Roger et al. 2012). Esenciální olej z C. sinensis byl zkoumán jako účinný pesticid na různých rostlinách. Jeho účinek byl již dříve popsán jako ochrana proti Sternechus subsignatus Fabricius a Rhyssomatus subtilis (Fiedler Zunino et al. 2012), Tribolium castaneum, Sitophilus granarius Herbst L. a Callosobruchus maculatus (Fabricius Mahmoudvand et al. 2011), Bemisia tabaci Gennadius (Ribeiro et al. 2010) a Tetranychus urticae Koch ( Araujo et al. 2010). Dále byl pozorován účinek C. sinensis proti mouše domácí (Palacios et al 2009; Kumar et al 2012) a několika druhů komárů ( Traboulsi et al 2002; Phasomkusolsil et al 2011; Bilal et al 2012; Giatropoulos et al. 2012, Murugan et al 2012). Mezi hlavní složky esenciálního oleje C. sinensis popsané v literatuře patří d - limonen, aplha - pinen, myrcen a linalool (Singh et al 1993; Sharma a Tripanthi 2008; Araujo et al, 2010; Kumar et al 2012; Zunino et al. 2012). Majoritní složku tvoří d – limonen, který je i odpovědný za většinu insekticidního účinku. Stejně jako u esenciálního oleje C. sinensis, tak i u d - limonenu bylo zjištěno, že je účinný proti různým rostlinným škůdcům (Coats et al, 1991; Ibrahim et al, 2001; Ibrahim et al, 2005; Kiran et al 2007; Kordali et al 2007; Tomova et al 2005; Zunino et al 2012) škůdcům skladovaných produktů (Prates et al, 1998; Fang et al 2
2010; Liu et al 2012) a některým dalším hmyzím druhům (Tarelli et al. 2009; Giatropoulos et al. 2012; Alzogaray et al. 2013). Díky vysokým koncentracím d - limonenu může být fytotoxická cukrová řepa, zelí, mrkev a sazenice jahod (Ibrahim 2001), pro životní prostředí to je však neškodné, protože d – limonene je biologicky degradabilní a velmi volatilní a tedy se jedná pravděpodobně o sloučeninu s nízkou perzistencí. Běžně se d - limonen používá jako potravinářské aditivum, a jeho minimální denní příjem by měl činit 1,5 mg / kg tělesné hmotnosti (WHO, 1993). Cílem této práce bylo sledovat vliv esenciálního oleje z C. sinensis na O. melanopus v korelaci s jeho odpařováním z listů pšenice (var. Bohemia). Tyto zjištěné poznatky nám umožnily získat informace o bezpečnosti potravin a krmiv z rostlin, na které byly aplikovány tyto bio - pesticidy a zaměřily se na úroveň bezpečnosti aplikace. Kromě reziduální analýzy byl také testován pokles koncentrace C. sinensis v průběhu doby působení esenciálních olejů na larvy a dospělce O. melanopus.
Materiál a metody chemikálie C. sinensis silice, limonen a Tween 20 % byly zakoupeny od firmy Sigma - Aldrich (Praha, CZ). Jako extrakční rozpouštědlo byl použit Hexan (Merck, Praha). Kontaktní test toxicity Exempláře O. melanopus použité pro experiment byly získány z polních kultur pšenice z lokality Semice (N 50,157709, 14,871727 W). Silice C. sinensis byla zředěna vodou na koncentraci 1 %, 0,5 % Tween 20 a následně použita pro experiment. Pokusní jedinci O. melanopus larev a dospělých byly umístěny jednotlivě do Petriho misky (90 mm). 1 ul zředěné silice byl lokálně pipetou aplikován na těla hmyzu. Úmrtnost larev a dospělých byla hodnocena vizuálně v časových intervalech 1, 24, a 48 hodin ve čtyřech nezávislých pozorováních a 10 opakování bylo zahrnuto do vyhodnocení. Larvy a dospělci, na které byl aplikován 0,5 % roztok Tween 20 byly označeny jako negativní kontrolní vzorky. Studie perzistence Rostliny pšenice (var. Bohemia) byly kultivovány v laboratorních podmínkách až do aplikace esence. Byla připravena směs 1 % esenciálního oleje C. sinensis a 0,5 % Tween 20 % v H2O a listy každé rostliny byly stříkány až do smyvu, aby bylo dosaženo maximálního aplikovaného pokrytí listů připravenou esencí. Vzorky o hmotnosti 0,5 g pak byly zmraženy kapalným dusíkem až do práškové formy v časových intervalech 1, 5, 10, 20, 30 a 60 min. Dále byly extrahovány do 0,5 ml hexanu, třepány po dobu 5 min a následně odstředěny. Supernatant byl převeden do vialek a uložen do ledničky až do chemické analýzy.
3
Analýza GC -MS Vzorky byly analyzovány pomocí GC / MS za použití Agilent 7890A GC s Agilent 5975C jedním - kvadrupólovým hmotnostním detektorem s HP - 5MS kolonou (30m x 0,25 mm, 0,25 um) od Agilent (Santa Clara, CA, USA). U každého vzorku byl proveden nástřik o objemu 1 ul. Teplota injektoru byla 250° C a elektron ionizační energie byla nastavena na 70 eV. Počínající teplota pece činila 60 ° C po dobu 3 min a byla naprogramována tak, aby bylo dosaženo hodnoty 250° C rychlostí 3° C / min a dále udržováno konstantně po dobu 10 minut. Průtok byl nastaven 1 ml / min, jako nosný plyn bylo použito helium. Analýza složení esenciálního oleje byla provedena v plném režimu skenování. Při zjišťování obsahu reziduí byl jako převládající složka detekován limonen (89,49 %) ve zvoleném režimu ion monitorování (m / z 68, 93, 136). Identifikace složek proběhlo na základě srovnání jejich hmotnostních spekter a relativních retenčních indexů s Národním standardizačním institutem a technickou knihovnou (NIST, USA). Výsledky Složení esenciální oleje Těkavé složky silice C. sinensis (získané extrakcí za studena a analýzou GC-MS), jsou uvedeny v tabulce 1. Bylo izolováno celkem 25 různých sloučenin s 99,19 % z celkového počtu, a identifikováno pomocí spektroskopických (hmotnostní spektrum) kritérií. Nejvíce převládající složkou oleje byl d - limonen (89,49 %), následně myrcen (3,55 %), a - pinen (1,26 %), linalool (1,04 %), sabinenen (0,62 %) a ostatní složky (0,62 %). Persistence esenciálního oleje Citrus sinensis z listů pšenice Koncentrace silice C. sinensis byly zjišťovány v časových intervalech (tabulka 2), po aplikaci 1 % (v / v) suspenze ve vodě. Majoritní složkou v silici byl d - limonen (89,49 %) a byl tedy použit pro detekci reziduí. Analýza GC-MS poukázala na klesající koncentraci oleje v závislosti na čase. Byla zjištěna koncentrace 0,01038 ul / g 5 min po aplikaci (obr. 2), což je nižší hodnota než minimální limit reziduí (0,01 mg / kg) pro stanovené látky, které jsou zahrnuty v přílohách nařízení EU. Vliv na silice Oulema melanopus V testu toxicity se silice C. sinensis ukázala být velmi účinné opatření proti larvám O. melanopus, ale nebyl pozorován žádný insekticidní účinek u dospělců po 48 hodinách (tabulka 3). 10% úmrtnost larev byl pozorována i pouhou jednu hodinu po expozici. V průběhu 24 až 48 hodin po expozici se úmrtnost dále zvýšila na 42,5% a 85%. Nulová úmrtnost byla pozorována u kontrolní skupiny v průběhu 48 hodin.
4
Diskuse S cílem sledovat nové strategie integrované ochrany rostlin, směřující k šetrnějšímu životnímu prostředí, zemědělství a tím související kvalitou a bezpečností potravin, jsme se zabývali studií esenciálního oleje C. sinensis, jakožto potenciálního možného opatření před jedním z nejzávažnějších hmyzím škůdcem pšenice O. melanopus v laboratorních podmínkách. Přímý kontaktní test toxicity neprokázal žádný účinek oleje na dospělce O. melanopus. Oproti tomu se ukázal jeho významně larvicidní účinek. Úmrtnost larev 42,5% a 85 % byla pozorována 24 a 48 hodin po lokální aplikaci (tabulka 3). Podobné počty úmrtností byly popsány ve studiích Mahmoudvand et al. (2011) a Zunino et al. (2012) u některých brouků z řádu Coleoptera. Nicméně tyto výsledky nejsou zcela srovnatelné, z důvodu odlišných aplikovaných koncentrací. V naší studii byla použita dávka (1ul 1% roztoku) cca 8.45 ug / vzorku (hustota 0,845 g / ml, dodavatel (Sigma, 2014)). Obsah směsi esenciálního oleje naměřený metodou GC / SMS (tabulka 1) je v souladu s literárními údaji, které také poukazují na d - limonen, myrcen, alfa pinen, linalool a sabinenen jakožto na hlavní složky. Také obsah d - limonen o 89,49 %, je v rozmezí dříve popisovaného množství (73,24-94,8 %) (Singh et al., 1993, Sharma a Tripanthi 2008; Araujo et al., 2010, Kumar et al., 2012; Zunino et al., 2012). Podrobný rozbor účinku esenciálního oleje C. sinensis na O. melanopus nebyl předmětem této studie. Můžeme však předpokládat, že larvicidní účinnost může být částečně způsobena tím, že larvy byly podrobeny dehydrataci a povrchové deformaci, jak bylo pozorováno u rastrovací elektronové mikroskopie na larvách Mouchy domácí (Kumar et al. 2012). I když nebyl pozorován žádný přímý insekticidní účinek v našem testu kontaktní toxicity proti dospělcům O. melanopus, některé předchozí studie poukazují na to, že olej z C. sinensis může mít i jiné insekticidní vlastnosti např. repelentní či antiovariální, jako je popsáno např. v případě Costelotrycha zealandica White (Osborne a Boyd 1974) a Bemisia tabaci Gennadius (Ribeiro et al., 2010). Dále je možné využití oleje jako plynné složky proti dospělcům ve fumingantu Mahmoudvand et al. (2011) proti třem druhům brouků z řádu Coleoptera, z nichž Callosobruchus maculatus patří do stejné čeledě jako O. melanopus. Důležitým faktorem z hlediska bezpečnosti potravin a účinnosti před škůdci plodin, je perzistence pesticidů v rostlinách. Výsledky naší studie, zabývající se rezidui d – limonenu ukázaly, že éterický olej C. sinensis se velmi rychle odpařuje z ošetřených rostlin (tabulka 2). Koncentrace 0,01038 ul / g byla detekována pomocí GC- MS 5 minut po aplikaci (obr. 2), což je hodnota nižší než je minimální přípustný limit reziduí (0,01 mg / kg) stanovený v příloze nařízení EU (Evropská komise 2005). To také znamená, že silice C. sinensis představuje jen minimální zdravotní riziko a není zapotřebí ochranné doby po aplikaci. Vzhledem ke své nízké stálosti je také neškodná pro životní prostředí a je bezpečný pro necílové organismy.
5
Ačkoliv nízká koncentrace může představovat určité nevýhody, pokud jde na účinnost pesticidů, výsledky našeho testu toxicity naznačují, že larvicidní účinek je nevratný, jakmile je vzorek vystaven expozici olejem. Dále také může mít olej mortalitní účinek na kukly jako v případě Musca domestica (Kumar et al., 2012). Jak již bylo uvedeno výskyt tohoto škůdce je vázán příhodným rokem. Škodlivost dospělců obvykle není hospodářsky významná a ochranné opatření se proto nedoporučuje. Významné výnosové ztráty jsou způsobeny larvami v poslední fázi vývoje (75 % z celkového množství poškození v průběhu vývoje larev). Larvy o hustotě 22 až 26 larev na 100 stonků ozimé pšenice může způsobit výnosové ztráty až do 4 % ( Rouag et al., 2012). Závěrem lze konstatovat, že se jedná o první studii esenciálního oleje jako možné ochrany před významným škůdcem obilnin O. melanopus. Přestože, silice nebyla účinná proti dospělcům, byl pozorován larvicidní účinek. Vzhledem k jeho velmi nízké perzistenci v ošetřených rostlinách, nízké toxicitě a tím tedy negativnímu dopadu na životní prostředí, je C. sinensis velmi slibná alternativa na místo syntetických pesticidů v integrovaném a ekologickém zemědělství.
Poděkování NAZV (Projekt MZe QJ1310226) "Vývoj nových metod ochrany obilnin a zeleniny proti významným patogenům a škůdcům pomocí botanických pesticidů využitelných v ekologickém i integrovaném zemědělství", který rozšiřuje a řeší aspekty projektem neřešené.
6
Literatura Alzogaray RA, Sfara V, Moretti AN, Zerba EN (2013) Behavioural and toxicological responses of Blattella germanica (Dictyoptera: Blattellidae) to monoterpenes. Eur J Entomol 110:247-252. doi:10.14411/eje.2013.037 Araujo CP, da Camara CAG, Neves IA, Ribeiro ND, Gomes CA,de Moraes MM, Botelho PD (2010) Acaricidal activity against Tetranychus urticae and chemical composition of peel essential oils of three citrus species cultivated in NE Brazil. Nat Prod Commun 5:471-476. doi: 10.1590/S1519-566X2011000300011 Bilal H, Akram W, Khan HAA,Hassan SA, Khan IA (2012) Toxicity of selected indigenous plant extracts against Aedes albopictus (Diptera: Culicidae): a potential dengue vector in dengue positive areas. Pakistan J Zool 44:371-375. doi: 10.1016/j.biortech.2009.02.075 Buntin GD, Flanders KL, Slaughter RW, DeLamar ZD (2004) Damage loss assessment and control of the cereal leaf beetle (Coleoptera:chrysomelidae) in winter wheat. J Econ Entomol 97:374-382. doi: 10.1603/0022-0493-97.2.374 Coats JR, Karr LL, Drewes CD (1991) Toxicity and neurotoxic effects of monoterpenoids: in insects and earthworms. ACS Symposium Series 449:305-316. doi: 10.1021/bk-19910449.ch020 Damalas CA, Eleftherohorinos IG (2011) Pesticide exposure, safety issues, and risk assessment indicators. Int J Environ Res Public Health 8:1402-1419. doi: 10.3390/ijerph8051402 Delaney KJ, Wawrzyniak M, Lemańczyk G, Wrzesińska D, Piesik D (2013) Synthetic cisjasmone exposure induces wheat and barley volatiles that repel the pest cereal leaf beetle, Oulema melanopus L. J Chem Ecol. 39:620-629. doi: 10.1007/s10886-013-0281-4 European Commission (2005) Regulation (EC) NO 396/2005 of the European Parliament and of the Council of 23 February 2005 on maximum residue levels of pesticides in or on food and feed of plant and animal origin and amending Council Directive 91/414/EEC. Off J Eur Union 48: L 70/1-16 7
European Commission (2008) Commission Directive 2008/127/EC of 18 December 2008 amending Council Directive 91/414/EEC to include several active substances. Off J Eur Union 51: L 344/89-111 European Commission (2013) Commission Implementing Regulation (EU) No 1165/2013 of 18 November 2013 approving the active substance orange oil, in accordance with Regulation (EC) No 1107/2009 of the European Parliament and of the Council concerning the placing of plant protection products on the market, and amending the Annex to Commission Implementing Regulation (EU) No 540/2011. Off J Eur Union 56:L309/17-21 Fang R, Jiang CH, Wang XY, Zhang HM, Liu ZL, Zhou LG, Du SS, Deng ZW (2010) Insecticidal activity of essential oil of Carum carvi fruits from China and its main components against two grain storage insects. Molecules 15:9391-9402. doi: 10.3390/molecules15129391 Giatropoulos, A, Papachristos DP, Kimbaris A, Koliopoulos G, Polissiou MG, Emmanouel N, Michaelakis A (2012) Evaluation of bioefficacy of three Citrus essential oils against the dengue vector Aedes albopictus (Diptera: Culicidae) in correlation to their components enantiomeric distribution. Parasitol Res 111:2253-2263. doi: 10.1007/s00436-012-3074-8 Ibrahim MA, Kainulainen P, Aflatuni A, Tiilikala K, Holopainen JK (2001) Insecticidal, repelnt, antimicrobial activity and phytotoxicity of essential oils: with specials reference to limonene and its suitability for control of insect pests. Agr Food Sci Finland 10:243–259. doi: 10.1603/029.102.0422 Ibrahim MA, Nissinen A, Holopainen JK (2005) Response of Plutella xylostella and its parasitoid Cotesia plutellae to volatile compounds. J Chem Ecol 31:1969-1984. doi: 10.1007/s10886-005-6071-x Isman MB (2006) Botanical insecticides, deterrents, and repellents in modern agriculture and an increasingly regulated world. Annu Rev Entomol 51:45–66. doi: dx.doi.org/10.1603/029.102.0422 Kiran SR, Devi PS, Reddy KJ (2007) Bioactivity of essential oils and sesquiterpenes of Chloroxylon swietenia DC against Helicoverpa armigera. Curr Sci 93:544-548. Kordali S, Kesdek M, Cakir A (2007) Toxicity of monoterpenes against larvae and adults of Colorado potato beetle, Leptinotarsa decemlineata Say (Coleoptera:Chrysomelidae). Ind Crop Prod 26:278-297. doi: 10.1016/j.indcrop.2007.03.009 Kumar P, Mishra S, Malik A, Satya S (2012) Insecticidal evaluation of essential oils of Citrus sinensis L. (Myrtales: Myrtaceae) against housefly, Musca domestica L. (Diptera: Muscidae). Parasitol Res 110:1929-1936. doi: 10.1007/s00436-011-2719-3 Laznik Ž, Vidrih M, Vučajnk F, Trdan S (2012) Is foliar application of entomopathogenic nematodes (Rhabditida) an effective alternative to thiametoxam in controlling cereal leaf beetle (Oulema melanopus L.) on winter wheat? J Food Agr Environ, 10:716-719
8
Liu P, Liu XC, Dong HW, Liu ZL, Du SS, Deng ZW (2012) Chemical composition and insecticidal activity of the essential oil of Illicium pachyphyllum fruits against two grain storage insects. Molecules 17:14870-14881. doi: 10.3390/molecules171214870 Mahmoudvand M, Abbasipour H, Basij M, Hosseinpour MH, Rastegar F, Nasiri MB (2011) Fumigant toxicity of some essential oils on adults of some stored – product pests. Chilean J Agric Res 71:83-89 Murugan K, Kumar PM, Kovendan K, Amerasan D, Subrmaniam J, Hwang JS (2012) Larvicidal, pupicidal, repellent and adulticidal activity of Citrus sinensis orange peel extract against Anopheles stephensi, Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae). Parasitol Res 111:1757-1769. doi: 10.1007/s00436-012-3021-8 Nakao T, Naoi A, Hama M, Kawahara N, Hirase K (2012) Concentration-dependent effects of GABA on insensitivity to fipronil in the A2'S mutant RDL GABA receptor from fipronilresistant Oulema oryzae (Coleoptera: Chrysomelidae). J Econ Entomol 105: 1781-1788. doi: 10.1603/EC12073 Osborne GO, Boyd JF (1974) Chemical attractants for larvae of Costelytra zealandica (Coleoptera: Scarabaeidae). New Zeal J Zool 1:371-374. doi: 10.1080/03014223.1974.9517844 Palacios SM, Bertoni A, Rossi Y, Santander R, Urzua A, (2009) Efficacy of essential oils from edible plants as insecticides against the house fly, Musca domestica L. Molecules 14:1938-1947. doi: 10.3390/molecules14051938 Papp M (1992) Resistance mechanism of wheat to cereal leaf beetles (Oulema spp.). Növénytermelés 41:455-461 Phasomkusolsil S, Soonwera M (2011) Efficacy of herbal essential oils as insecticide against Aedes aegypti (Linn.), Culex quinquefasciatus (Say) and Anopheles dirus (Peyton and Harrison) Southeast Asian. J Trop Med Public Health 42:1083-1092 Prates HT, Santos JP, Waquil JM, Fabris JD, Oliveira AB, Foster JE (1998) Insecticidal activity of monoterpenes against Rhyzopertha dominica (F.) and Tribolium castaneum (Herbst) J Stored Prod Res 34:243-249. doi: 10.1016/S0022-474X(98)00005-8 Regnault-Roger C, Vincent C, Arnason JT (2012) Essential oils in insect control: low-risk products in a high-stakes world. Annu Rev Entomol 57:405–424. doi: 10.1146/annurev-ento120710-100554 Ribeiro ND, da Camara CAG, Born FD, de Siqueira HAA (2010) Insecticidal activity against Bemisia tabaci biotype B of peel essential oil of Citrus sinensis var. pear and Citrus aurantium Cultivated in Northeast Brazil. Nat Prod Commun 5:1819-1822 Rouag N, Mekhlouf A, Makhlouf M (2012) Evaluation of infestation by cereal leaf beetles (Oulema spp.) on six varieties of durum wheat (Triticum dirum, Desf.) seedlings in arid
9
conditions of Setif, Algeria. doi:10.5251/abjna.2012.3.12.525.528
Agric.
Biol
J
N
Am
3:525-528.
Rozwalka LC, Rosa Zaksevskas Da Costa Lima ML, May de Mio LL (2008) Extracts, decoctions and essential oils of medicinal and aromatic plants in the inhibition of Colletotrichum gloeosporioides and Glomerella cingulata isolates from guava fruits. Cienc Rural 38:301–307. doi: 10.1590/S0103-84782008000200001 Sharma N, Tripathi A (2008) Effects of Citrus sinensis (L.) Osbeck epicarp essential oil on growth and morphogenesis of Aspergillus niger (L.) Van Tieghem. Microbiol Res 163:337344. doi: 10.1016/j.micres.2006.06.009 Singh G, Upadhyay RK, Narayanan CS, Padmkumari KP, Rao GP (1993) Chemical and fungitoxic investigations on the essential oil of Citrus sinensis (L.) Pers. Z Pflanzenk Pflanzen 100:69-74 Singh, G, Upadhyay RK (1993) Essential oils - a potent source of natural pesticides. J Sci Ind Res India 52:676-683 Tarelli G, Zerba EN, Alzogaray RA (2009) Toxicity to vapor exposure and topical application of essential oils and monoterpenes on Musca domestica (Diptera: Muscidae). J Econ Entomol 102:1383-1388 Tomova BS,Waterhouse JS, Doberski J (2005) The effect of fractionated Tagetes oil volatiles on aphid reproduction. Entomol Exp Appl 115:153-159. doi: 10.1111/j.15707458.2005.00291.x Traboulsi AF, Taoubi K, El-Haj S, Bessiere JM, Rammal S (2002) Insecticidal properties of essential plant oils against the mosquito Culex pipiens molestus (Diptera: Culicidae). Pest Manag Sci 58:491-495. doi: 10.1002/ps.486 WHO (1993) Limonene. Toxicological evaluation of certain food additives and naturally occurring toxicants. WHO Food Additive Series 30:750. www.inchem.org/documents/jecfa/jecmono/v30je05.htm. Accessed 26 September 2013 Zunino MP, Areco VA, Zygadlo JA (2012) Insecticidal activity of three essential oils against two new important soybean pests: Sternechus pinguis (Fabricius) and Rhyssomatus subtilis Fiedler (Coleoptera: Curculionidae). Bol Latinoam Caribe Plant Med Aroma 11:269-277
10
