Wiwin Maruni Diarti, Nurhidayati, Zaeniati Lely

POTENSI ANTIMIKROBIA SIMPLISIA TERIPANG PASIR (Holothuria scabra) TERHADAP PENGHAMBATAN PERTUMBUHAN DAN PERUBAHAN PROFIL DNA GENE cagA HELICOBACTER PYLORI

Wiwin Maruni Diarti, Nurhidayati, Zaeniati Lely

Abstract: Infection of H. pylori bacteria can cause peptic ulcers, malt lymphoma and even lead to stomach cancer. The prevalence of H.pylori infection in Mataram, West Nusa Tenggara (NTB) is quite high among adalah54, 3% - 64.1%. With the cost of treatment against infection H. pylori is more expensive now, it must consider alternative ways to find new treatments to control growth and bacterial infection caused by H. pylori as a traditional medicine that has an effect on the cagA gene is a gene that determines the virulence and pathogenicity of H. pylori. One of the natural materials suspected to contain active ingredients that can heal the ulcer is a sand sea cucumber (Holothuria scabra), the active ingredient in the sea cucumber lectin in particular, may also act as antibacterial compounds. In this research, the use of sand dried sea cucumber (Holothuria scabra) and tested antmikrobianya potential to inhibit the growth and profile materials cagA gene from the bacterium H. pylori causes ulcers. Method of testing done in this research is a method of agar diffusion and dilution tubes, whereas further to determine the effect of sand on the sea cucumber bulbs cagA gene is a gene encoding the virulence characteristics and pathogenicity of H. DNA integrity were observed pylori cagA gene by PCR method. The results of this study showed a significant effect of the addition of crude sand sea cucumber (Holothuria scabra) to inhibit the growth and profile materials cagA gene from the bacterium H. pylori, inhibition zone diameter produced potential in nature - average inhibition zone between 8.5 mm - 18.5 mm and there are changes in the integrity of the DNA profile of H. pylori cagA gene with no formation of DNA bands on konsenterasi 100 ug / ml, 95 ug / ml and 90 ug / ml. Needs further research on H. pylori testing the endurance of the integrity of RNA, decreased gene activity ure, and mRNA from the effects of crude urease sand sea cucumber against H. pylori DNA as well as clinical trials and toxicity testing of bioactive substances contained in crude sand sea cucumber. Kata Kunci: Potensi antimikrobia, Simplisia teripang pasir, Perubahan profil integritas DNA, gene caga Helicobacter pylori. radang lambung kronis dengan transfomasi maligna

LATAR BELAKANG Helicobacter

pylori

adalah

pada jaringan radang. Helicobacter pylori

bakteri

telah

pleomorfik yang dapat berbentuk “S” atau spiral,

diidentifikasi sebagai faktor etiologi kanker lambung.

kurva,

dan bentuk kokoid bersifat Gram negatif.

Suatu studi epidemiologik multisenter dari “ The

Pertama kali ditemukan pada tahun 1983 oleh

Eurogast Study Group “ menyimpulkan bahwa

Warren dan Marshall pada sediaan histologi lambung

resiko terkena kanker lambung pada populasi dengan

pada penderita gastritis kronik aktif, selanjutnya

infeksi Helicobacter pylori 100% adalah 6 kali lipat

bakteri ini mendapat pengakuan sebagai penyebab

dibanding

dari ulkus peptikum, ulkus duodenum, dan kanker

Helicobacter pylori (Forman et. al., 1991; Coussens

lambung (Marshall dan Warren, 1984; Rathbone dan

dan Werb, 2002; Leite et. al., 2005).

dengan

populasi

tanpa

infeksi

Heatley, 1989; Logan dan Walker, 2001). Data

Dari hasil penelitian Maruni pada tahun

epidemiologi menunjukkan ada hubungan antara

2008, proporsi hasil positif PCR dari 82 sampel blok

__________________________________________________________________________________________ Wiwin Maruni Diarti, Nurhidayati, Zaeniati Lely: Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Mataram, Jl.Prabu Rangkasari Dasan Cermen Matram

696

JURNAL KESEHATAN PRIMA VOL. 5 NO.1, FEBRUARI 2011

parafin biopsi lambung penderita dispepsia dengan

pengembangan obat-obat tradisional. Salah satu

hasil pemeriksaan histopatologi Helicobacter pylori

bahan dari alam yang diduga mengandung bahan

negatif adalah 47,6% dengan taksiran interval

aktif bersifat antibakteri adalah teripang. Teripang

proporsi hasil PCR Helicobacter pylori positif pada

telah lama digunakan sebagai sumber obat tradisional

populasi antara 36,75% – 58,37% dan penelitian

di Malaysia dan Cina. Menurut sejarah, para nelayan

yang dilakukan Soewignjo et. al., 2007 pada 198

menggunakan teripang sebagai obat luka. Obat ini

sampel

mereka

biopsi

didapat dengan

jaringan cara

lambung

gamat,

spesies

teripang

yang

dimanfaatkan, terutama Holothuria atra, Stichopus

dispepsia di Mataram yang diperiksa dengan PCR

hermanii, dan Stichopus horrens. Penelitian modern

mendapatkan

positif

telah memperlihatkan bahwa selain menyembuhkan

sebanyak 85 sampel (42,9%), ini menunjukkan

luka, senyawa dalam teripang juga mengandung

bahwa Helicobacter pylori merupakan salah satu

senyawa

penyebab penting dispepsia di Mataram dan perlu

antitrombotik, menurunkan kadar kolesterol dan

penanganan yang serius (Soewignjo et. al., 2007;

lemak darah, antikanker dan antitumor, antibakteri,

Maruni, 2008).

imunostimulan, antijamur, antivirus, antirematik, dan

Penggunaan

dari

sebut

penderita

hasil

endoskopi

segar yang

Helicobacter

antibiotik

pylori

dalam

eradikasi

yang

bersifat

antikoagulan

dan

radang sendi lainnya (Farouk et al., 2007).

Helicobacter pylori memiliki efek yang dapat

Khasiat yang dikandung teripang demikian

menyebabkan tubuh menjadi resisten terhadap

banyak karena memiliki kandungan gizi yang

antibiotika dan adanya krisis global menyebabkan

lengkap. Kandungannya antara lain: lektin (HSL),

biaya pengobatan semakin mahal saat ini. Oleh sebab

sterol,

itu,

holothurin A, holothurin B, holotoxin A, holotoxin

perlu

dipikirkan

cara

mencari

alternatif

saponin/triperten

pengobatan baru untuk mengkontrol pertumbuhan

B,

dan

telenotosid,

infeksi

yang

disebabkan

oleh

bakteri

holotoxin

A1,

glikosid

holotoxin

cucumariosid;

(echinosid,

B1,

stikoposid,

philinopgenin

A,

Helicobacter pylori seperti obat-obat tradisional yang

philinopgenin B, philinopgenin C, philinopside E,

potensial dan memiliki efek pengrusakan pada gene

synallactosid,

cagA yaitu gene yang menentukan

calcigerosid, kerosid, DS-penaustrosid), kolagen,

virulensi dan

patogenitas Helicobacter pylori.

hemoiedemosid,

liouvillosid,

mukopolisakarida, glikosaminoglikan,

kondroitin

Departemen Kesehatan telah mencanangkan

sulfat E, kondrotin sulfat fukosilat, asam amino

program pengembangan obat tradisional ke arah obat

(aspartat, glutamat, histidin, treonin, alanin, arginin,

kelompok fitoterapi, sebagai pelaksanaan amanat

prolin, tirosin, valin, serin, glisin, sistein, isoleusin,

GBHN 1988 yang intinya menyatakan bahwa dalam

leusin, fenilalanin dan lisin), asam lemak (miristat,

rangka meningkatkan pelayanan kesehatan secara

palmitat,

lebih luas dan merata, sekaligus memelihara dan

araksidat, eicosapentaenat (EPA), behenat, erusat,

mengembangkan warisan budaya bangsa, perlu terus

dan docosahexesaenat (DHA), vitamin (tiamin,

dilakukan penggalian, penelitian, pengujian, dan

riboflavin, niacin, C, E), karotenoid (β-Carotene, β-

697

palmitoleat,

stearat,

oleat,

linoleat,

Diarti, Potensi Antimikrobia Simplisia Teripang Pasir (Holothuria scabra)

echinenone, canthaxanthin, phoenicoxanthin dan

Indonesia merupakan penghasil teripang

astaxanthin, cucumariasantin A, cucumariasantin B

terbesar di dunia, setidaknya terdapat 26 spesies

dan cucumariasantin C), mineral (besi, magnesium,

teripang. Di NTB, sebagai salah satu penghasil

kalsium, zinc, kromium), polifenol, dan flavonoid,

teripang di Indonesia, jenis teripang yang paling

SOD (Hawa et. al., 1999). Penelitian modern telah

banyak ditemukan adalah teripang pasir (Holothuria

membuktikan potensi dan kemungkinan mekanisme

scabra). Namun, walaupun Indonesia merupakan

antibakteri dari phylum echinodermata, yaitu lektin.

penghasil

Lektin adalah suatu senyawa yang memiliki aktivitas

dieksport sebagai teripang segar dan teripang yang

antibakteri yang luas untuk bakteri Gram positif dan

telah diawetkan, belum ada upaya pemanfaatan zat

Gram negatif. CEL-III, suatu peptida berasal dari

aktif

bagian

Kelautan dan Perikanan, 2006).

C-terminal

dari

hemolitik

lektin

dari

yang

teripang

terbesar,

terkandung

sayangnya

dalamnya

semua

(Departemen

Curcumaria echinata memiliki aktivitas antibakteri,

Berdasarkan sangat patogeniknya infeksi

yang mekanisme kerjanya diduga memicu hemolisis

Helicobacter pylori dan perlunya menggali potensi

membran sel bakteri (Hatakeyama, et. al., 2004).

alam kelautan sebagai obat alternatif yang selama ini

Penelitian lain yang membuktikan bahwa Holothuria

kurang mendapat perhatian, sedangkan potensi

scabra, Holothuria atra, dan Actinopyga miliaris

antimikroba teripang pasir (Holothuria scabra)

mampu

mikroba

terhadap penghambatan pertumbuhan Helicobacter

Aeromonas hydrophila, enterococcus sp, Klebsiella

pylori belum ada yang melaporkan, maka perlu

pneumonia,

dilakukan penelitian tentang ” Potensi antimikrobia

typhi,

menghambat

pertumbuhan

Pseudomas aeroginosa,

Vibrio

harveyi,

dan

Salmonella

Aspergiluus

sp.

simplisia teripang pasir (Holothuria scabra) terhadap

Konsentrasi teripang pasir (Holothuria scabra) yang

penghambatan pertumbuhan dan perubahan profil

mampu menghambat pertumbuhan adalah 85 µg/ml

DNA gene cagA Helicobacter pylori”.

(Abraham et. al., 2002). Penelitian oleh Gowda, et.

rumusan permasalahan dalam penelitian ini adalah

al., 2008, menduga bahwa salah satu peranan

apakah simplisia teripang pasir (Holothuria scabra)

senyawa lecitin, yaitu T-antigen binding lectin dari

memiliki

teripang pasir (Holothuria scabra) pada aktivitas

penghambatan pertumbuhan dan perubahan profil

antibakteri dari teripang pasir adalah berperan dalam

DNA gene cagA Helicobacter pylori? Sedangkan

pengenalan bakteri yang menginvasi ke dalam tubuh

tujuan Penelitian ini adalah untuk mengetahui

organisme. Mekanisme lain yang secara tidak

potensi simplisia teripang pasir (Holothuria scabra)

langsung berperan pada aktivitas antibakteri dari

sebagai obat yang dapat menghambat pertumbuhan

teripang adalah efek immunostimulan. Senyawa yang

dan perubahan profil DNA gene cagA Helicobacter

berperan pada efek immunostimulan ini adalah

pylori menggunakan metode PCR.

frondoside, suatu triperten glikosida (Aminin et. al., 2008).

698

potensi

antimikrobia

Adapun

terhadap


tubuh sehingga permukaan tubuh dapat menjadi

METODE PENELITIAN penelitian

kasar dan licin bila disentuh. Habitat teripang pasir

menggunakan

pada perairan laut tipe dasar atau dangkal yang

rancangan non randomized the post test only control

bervariasi antara lumpur halus sampai pasir kasar.

group design .

Tripang pasir mempunyai kebiasaan membenamkan

Penelitian eksperimental

di

ini

merupakan

laboratorium,

diri dalam pasir atau melapisi tubuhnya dengan Bahan Penelitian

selapis pasir, warna tubuhnya hitam dan berbintik–

a. Isolat klinik Helicobacter pylori didapatkan dari

bintik seperti pasir sehingga disebut dengan tripang

koleksi isolat bakteri Unit Riset

pasir (Gambar 4.1).

Biomedik Insthalasi Litbang RSU Provinsi NTB yang diisolasi dari biopsi lambung

penderita

dispepsia. b. Simplisia teripang pasir (Holothuria scabra). Variabel Penelitian Variabel bebas

:

Simplisia

teripang

pasir

(Holothuria scabra) Variabel terikat :Pertumbuhan Helicobacter pylori dan perubahan profil DNA

Gambar 4.1. Teripang pasir (Holothuria scabra)

gene

cagA Helicobacter pylori. 2. Cara Pengumpulan Data 1.

Simplisia teripang pasir pasir (Holothuria

Identifikasi Teripang Pasir (Holothuria scabra) yang Berasal dari Dinas Perikanan Masyarakat Kabupaten Dombu NTB dan Perairan Pantai Sekotong Lombok Barat Teripang

pasir

dapat

scabra)

diperoleh

dengan

cara

mengeringkan

teripang pasir segar dengan suhu pengeringan di bawah 40C. Selanjutnya sediaan dibuat menjadi

diidentifikasi

serbuk halus dengan mesin penggiling. Serbuk halus

berdasarkan karakteristik morfologi dan habitatnya. Berdasarkan Aznam azis (1995),

Pembuatan Simplisia Teripang Pasir Pasir (Holothuria scabra)

simplisia teripang pasir (Holothuria scabra) dibuat

teripang pasir

konsentrasi 100 ug/ml, 95 ug/ml, 90 ug/ml, 85 ug/ml,

(Holothuria scabra) memiliki ciri–ciri tubuh bulat

80 ug/ml, 75 ug/ml, 70 ug/ml. Pemilihan konsentrasi

memanjang seperti buah ketimun, tentakel pendek

teripang pasir ini berdasarkan hasil penelitian

berbentuk perisai (peltate) berjumlah 15 sampai 30,

Abraham et. al., 2002 yang mendapatkan hasil

kaki tabung trsusun dalam dua jalur memanjang pada

konsentrasi teripang pasir (Holothuria scabra) yang

bagian perut (ventral) biasanya disebut “soil”, atau

mampu

tereduksi dalam bentuk papila atau duri kecil, atau

menghambat

pertumbuhan

mikroba


berbentuk bitil yang tersebar di seluruh permukaan

pneumonia,

tubuh atau tereduksi sama sekali pada permukaan


Salmonella

typhi, Vibrio harveyi, dan Aspergiluus sp adalah 85

699


µg/ml,

dari

dasar

konsentrasi

tersebut

maka

4.

dilakukan pemilihan konsentrasi dengan level naik

Pengujian Perubahan Profil DNA Gene Caga Helicobacter Pylori Menggunakan Metode PCR.

tiga tingkatan konsentrasi dan level turun tiga

Pengujian perubahan profil DNA gene cagA

tingkatan konsentrasi dengan selisih konsentrasi 0,05

Helicobacter pylori menggunakan metode PCR

ug/ml. 3.

dengan primer gen cagA1 dan cagA2. Untuk mengetahui keadaan tebal tipisnya DNA, dan

Uji Potensi Antimikrobia Simplisia Teripang Pasir Pasir (Holothuria scabra) terhadap Penghambatan Pertumbuhan Helicobacter pylori

degradasi (smear) yang mungkin terjadi, yang menunjukkan bahwa DNA telah terpotong yang mengakibatkan tidak terbentuknya unsur penting

Uji potensi antimikrobia dilakukan dengan menggunakan metode difusi agar plate

untuk pertumbuhan sel bakteri. Hasil integritas DNA

dengan

muncul

mengukur diameter zona hambatan yang terjadi.

menggunakan

Pengujian dilakukan pada media Muller Hinton Agar

suplement

vitox

untuk

reagen Trizol. b. Tahap Amplifikasi DNA

0,3 x 109 sel/ml. Pada media MHA Blood atau TSA

Amplifikasi DNA dilakukan pada mesin

Blood yang ditambahkan suplement Vitox dibuatkan

Thermocycle BIO-RAD PCR dan bahan untuk PCR

sumur (well) dengan diameter 5 mm untuk

integritas DNA Helicobacter pylori menggunakan

menempatkan masing–masing konsentrasi simplisia

primer gen cagA1 dan cagA2: PCR core system

teripang pasir yang di uji potensi penghambatannya

(Promega) dengan komposisi campuran adalah:

terhadap perumbuhan Helicobacter pylori sebanyak

ddH20

masing–masing

30,75 ul, Buffer (-) Mg 5 ul, MgCl2 3 ul,

dNTP 1 ul, cagA1Forward Primer 2,5 ul, cagA2

konsentrasi perlakuan). Inkubasi dilakukan pada

Reverse Primer 2,5 ul, Taq Polimerase 0,25 ul,

suasana Mikroaerofilik pada incubator CO2 10%. .Pengukuran

electrophoresis

Pemurnian DNA dengan menggunakan

diperkirakan setara dengan jumlah bakteri sebanyak

volume

gel

dengan

Helicobacter pylori

unit Mc Farland Nephelometer Standards atau

(homogenitas

agarose

didapatkan

a. Tahap Ekstraksi DNA untuk pemurnian DNA

Helicobacter pylori yang diinokulasikan sebanyak 1

μL

yang

adalah sebagai berikut:

memacu

pertumbuhan bakteri Helicobacter pylori. Bakteri

50

pita

horizontal. Adapun tahapan metode pengujiannya

Blood atau Trypticase Soy Agar Blood yang ditambahkan

dalam

Templete 5 ul dengan Total

zone hambatan (clear zone) yang

volume

50

ul.

Pelaksanaan pencampuran bahan–bahan tersebut

terbentuk dilakukan dengan mengukur diameter zone

dilakukan dalam box pendingin supaya DNA dan

hambatan, dan menghitung luas zone hambatan

enzim yang digunakan tidak rusak.

(Djaafar,1996 ).

c. Amplifikasi pada mesin PCR BIO-RAD Campuran tersebut di atas di centrifuge cepat dan selanjutnya dimasukkan dalam mesin PCR

700


dengan total siklus 38 siklus, dengan kondisi amplifikasi: Temperatur pre denaturasi

94

Analisis Data

o

C

Data

selama 4 Menit, Setiap siklus terdiri dari:

zona

hambatan

untuk

mengetahui potensi atau efek dari simplisia teripang

o

Denaturasi ( pemisahan DNA ) 94 C selama 1 menit, Annealing ( penempelan primer), 55

diameter

pasir (Holothuria scabra) terhadap penghambatan

o

C

pertumbuhan Helicobacter pylori dianalisa dengan

selama 1 menit, Elongasi/Ekstensi (pemanjangan

analisa statistik anova, sedangkan data mengenai

o

DNA) 72 C selama 1 menit, (Berlangsung sampai 38

perubahan profil DNA gene cagA dari Helicobacter

siklus).Tahap terakhir siklus diperpanjang 1 step

pylori setelah perlakuan dianalisa secara deskriptif.

elongasi 72 oC selama 4 menit untuk memberi kesempatan

proses

elongasi

sempurna dan 1 step 20

o

berjalan

HASIL DAN PEMBAHASAN PENELITIAN

dengan

1.

C overwait menjaga

amplikon tetap stabil walaupun ditinggal 24 jam. d. Deteksi Produk PCR Dilakukan dengan elektroforesis agarose 2%

Data dan Pembahasan Hasil Penelitian Potensi Antimikrobia Simplisia Teripang Pasir (Holothuria Scabra) terhadap Penghambatan Pertumbuhan Helicobacter Pylori Metode Difusi agar Plate dan Dilusi Tabung

ditambah zat pewarna Ethidium bromide 5 ul.10 ul

Hasil

pengujian

potensi

antimikrobia

amplikon (hasil amplifikasi) ditambahkan dengan 5

simplisia teripang pasir (holothuria scabra) terhadap

ul loading buffer, dicampur di atas parafilm dengan

penghambatan pertumbuhan Helicobacter pylori

baik dan selanjutnya dimasukkan dalam sumuran

dengan mengunakan metode difusi agar plate adalah

dari gel agarose 2% yang ditambahkan zat pewarna

positip. Hal ini dibuktikan dengan hasil penelitian

ethidium bromida 5 ul. Sedangkan untuk standart

terdapat zona hambatan di sekitar sumuran pada uji

digunakan DNA Marker G 316 A sebanyak 5 ul dan

penghambatan metode difusi agar plate. Zona

ditambahkan 3 ul loading buffer. Elektroforesis

hambatan

dilakukan dengan kuat arus 100 V selama 1 jam

simplisia teripang pasir 100 ug/ml yaitu rata–rata

dengan running buffer TBE 1 X. Hasil diperiksa

diameter zona hambatannya 18,5 mm dan zona

dengan radiasi sinar ultraviolet pada alat Bio-rad Gel

hambatan tersempit pada konsentrasi simplisia

tipe 170 – 8170 dilengkapi komputer

teripang pasir 70 ug/ml yaitu rata–rata diameter zona

software YP dengan Dell optiplex GX 520. Produk

hambatannya 8,5 mm. Hasil uji menggunakan

PCR + gene cagA bila terbentuk pita dengan jumlah

metode difusi sumuran agar pada kontrol negatif

pasangan basa 296 bp (base pair ).DNA dengan

(PZ) tidak menghasilkan diameter zona hambatan (0

derajad integritas tinggi akan membentuk satu pita

mm)

yang kompak dan tebal, sedangkan DNA yang

antibiotika ciproflocaxin menghasilkan diameter

derajad integritas rendah akan terbentuk pita tipis dan

zona hambatan (30 mm). Walaupun hasil diameter

mengalami degradasi (smear).

zona

DOC XR

dan

terluas

didapatkan

kontrol

hambatan

dibandingkan

positif

pada

yang

konsentrasi

menggunakan

yang dihasilkan lebih sempit

kontrol

positif,

namun

menurut

ketentuan sensitivitas klinik dari Ahn dkk., 1994

701


dalam Greenwood, 1995 bahwa zat bioaktif yang

antivirus, antirematik, dan radang sendi lainnya

terdapat pada simplisia teripang pasir dengan

(Farouk et. al., 2007).

konsentrasi 100 ug/ml menunjukkan zona hambatan

Penelitian

modern

telah

membuktikan

rata–rata 18,5 mm dan konsentrasi 95 ug/ml

potensi dan kemungkinan mekanisme

menunjukkan zona hambatan rata–rata diameternya

dari phylum echinodermata ini, yaitu lektin. Lektin

17,5 mm menunjukkan respon hambatan yang kuat

adalah suatu senyawa yang memiliki aktivitas

atau bersifat sensitif, konsentrasi simplisia teripang

antibakteri yang luas untuk bakteri Gram positif dan

pasir 90 ug/ml dengan diameter zona hambatan rata–

Gram negatif. CEL-III, suatu peptida berasal dari

rata 15,5 ug/ml, 85 ug/ml dengan diameter zona

bagian

hambatan rata–rata 14,5 mm, 80 ug,ml dengan

Curcumaria echinata memiliki aktivitas antibakteri,

diameter zona hambatan rata-rata 12,5 mm dan

yang mekanisme kerjanya diduga memicu hemolisis

konsenterasi simplisia teripang pasir 75 ug/ ml

membran sel

dengan diameter zona hambatan rata–rata 10,7

Penelitian lain yang membuktikan bahwa Holothuria

menunjukkan

scabra, Holothuria atra, dan Actinopyga miliaris

respon

hambatan

yang

lemah.

C-terminal

dari

hemolitik

antibakteri

lektin

dari

bakteri (Hatakeyama, et al, 2004).

Sedangkan konsenterasi simplisia teripang pasir 70

mampu

ug/ml dengan diameter zona hambatan 8,5 mm


termasuk

pneumonia,

dalam

penghambatan.

tidak

Adanya

memiliki potensi

respon

antimikrobia

typhi,

menghambat

pertumbuhan


Vibrio

harveyi,

dan

mikroba

Salmonella

Aspergiluus

sp.

simplisia teripang pasir (holothuria scabra) terhadap

Konsentrasi teripang pasir (Holothuria scabra) yang


mampu menghambat pertumbuhan adalah 85 µg/ml

disebabkan

diduga

(Abraham et. al., 2002). Penelitian oleh Gowda, et al,

antibakteri.

2008, menduga bahwa salah satu peranan senyawa

Teripang telah lama digunakan sebagai sumber obat

lecitin, yaitu T-antigen binding lectin dari teripang

tradisional di Malaysia dan Cina. Menurut sejarah,

pasir (Holothuria scabra) pada aktivitas antibakteri

para nelayan menggunakan teripang sebagai obat

dari teripang pasir adalah berperan dalam pengenalan

luka. Obat ini mereka sebut gamat, spesies teripang

bakteri yang menginvasi ke dalam tubuh organisme.

yang dimanfaatkan,

atra,

Mekanisme lain yang secara tidak langsung berperan

horrens.

pada aktivitas antibakteri dari teripang adalah efek

Penelitian modern telah memperlihatkan bahwa

immunostimulan. Senyawa yang berperan pada efek

selain menyembuhkan luka, senyawa dalam teripang

immunostimulan

juga

triperten glikosida (Aminin et. al., 2008).

dalam

mengandung

Stichopus

bahan

simplisia aktif

mengandung

bersifat

terutama

hermanii,

dan

teripang

Holothuria

Stichopus

senyawa

yang

bersifat

antikoagulan dan antitrombotik, menurunkan kadar kolesterol

dan

lemak

darah,

antikanker

ini

adalah

frondoside,

suatu

Adanya aktivitas penghambatan senyawa

dan

bioaktif terutama lektin yang dikandung oleh

antitumor, antibakteri, imunostimulan, antijamur,

implisia teripang pasir tersebut mempunyai aktivitas seperti antibiotika lain yang dapat menghambat

702


sintesis materi–materi penting dari bakteri seperti

pylori (perubahan morfologi). Uji difusi tabung cair

merusak dinding sel bakteri sehingga dinding kurang

menggunakan 28 tabung yang berisi masing–masing

sempurna dan tidak tahan terhadap tekanan osmose

tabung 1 ml media TSB yang ditambahkan serum

plasma, akibatnya dinding sel pecah. Penghambatan

domba 10% dan suplement isovitalex/vitox. Masing–

sintesis asam nukleat dan protein bakteri dapat

masing tabung di sub kultur dengan bakteri

menyebabkan kerusakan total pada sel karena DNA,

Helicobacter pylori dengan kepekatan bakteri 109

RNA dan protein memegang peranan amat penting di

CFU/ml. Selanjutnya 28 tabung tersebut dibagi

dalam proses kehidupan sel normal sehingga

menjadi 7 kelompok perlakuan dengan masing –

gangguan apapun yang terjadi pada pembentukan

masing

atau

dapat

kelompok perlakuan ditambahkan 100 ul larutan

perubahan

simplisia teripang pasir sesuai dengan konsentrasi

pada

fungsi

mengakibatkan

zat–zat

kerusakan

tersebut sel,

perlakuan

4

replikasi.

permeabilitas se,l atau kerusakan pada membrane

masing–masing

juga mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan sel

ug/ml,85 ug/ml,80 ug/ml,75 ug/ml, dan 70 ug/ml,

atau matinya sel karena membrane sitoplasma

untuk

mempertahankan bahan–bahan tertentu di dalam sel,

Ciprofloxacin

mengatur keluar masuknya bahan–bahan lain serta

menggunakan media tanpa penambahan simplisia

memelihara integritas komponen–komponen selular

teripang pasir. Inkubasi dilakukan dalam suasana

dan perubahan molekul protein dan asam nukleat

mikroaerofilik dan dilakukan pewarnaan Giemsa dan

dapat merusak sel tanpa dapat diperbaiki kembali

sub kultur setiap hari dengan waktu pengamatan

karena

pada

selama 20 hari. Waktu pembentukan kokoid, persen

terpeliharanya molekul–molekul protein dan asam

jumlah kokoid dan hasil sub kultur Helicobacter

nukleat. Adanya potensi antimikrobia simplisia

pylori pada uji penghambatan simplisia teripang

teripang

pasir metode difusi tabung pada masing–masing

hidupnya

pasir

suatu

sel

(holothuria

bergantung

scabra)

terhadap

kontrol

yaitu

100

Masing–masing

positif

ug/ml,95

ditambahkan

dan

kontrol

antibiotika

negatif

konsenterasi

dengan mengunakan metode difusi agar yang

kokoid

dibuktikan dengan hasil penelitian terdapat zona

simplisia teripang pasir 100 ug/ml mencapai 100%

hambatan disekitar sumuran pada uji penghambatan

pada hari ke 15 dan setelah di sub kultur

metode difusi agar plate menunjukkan zat bioaktif

menunjukkan tidak terdapat pertumbuhan, sedangkan

yang terkandung di dalam simplisia teripang pasir

yang konsentrasi 95 ug/ml pembentukan bentuk

potensial digunakan sebagai obat alam alternatif

kokoid 100% terjadi pada hari ke 18 dengan hasil sub

dalam pengobatan infeksi Helicobacter pylori.

kultur negatif dan konsenterasi 90 ug/ml perubahan

Berdasarkan hasil uji penghambatan metode difusi

bentuk kokoid 100% terjadi pada hari ke 20 dengan

agar plate selanjutnya dilakukan uji difusi tabung cair

hasil sub kultur negatif. Hasil penelitian ini

dengan tujuan untuk menghitung presentase dan

menunjukkan bahwa perubahan bentuk kokoid ini

waktu pembentukan kokoid bakteri Helicobacter

merupakan bentuk kokoid dari Helicobacter pylori

Helicobacter

berbeda.

hanya


703

perlakuan

ug/ml,90

pylori

pada

Pembentukan konsenterasi


yang secara mikroskopis cahaya berbentuk bulat

bagian tengah merupakan larutan yang mengandung

serta tidak dapat ditumbuhkan kembali menjadi

DNA. Sedangkan larutan bagian bawah adalah

spiral atau disebut bentuk kokoid hidup tidak dapat

larutan yang mengandung protein. Larutan bagian

dikultur/ Viable non culturable (VNC). Sedangkan

tengah di pipet secara perlahan dengan menggunakan

pada konsenterasi 85 ug/ml – 70 ug/ml perubahan

dispenser 100 ml ke ependrof steril. Pada larutan

bentuk kokoid baru terlihat pada hari ke 20 dengan

tersebut ditambahkan 300 ul isopropil alkohol dan

persentase secara berurutan 34%, 24%, 20%, dan

tabng di bolak balik 10 kali.Larutan diinkubasi 3

14%, dengan hasil sub kultur positif. Ini berarti ada

menit pada suhu ruangan atau semalam pada suhu –

dua faktor terjadinya pertumbuhan Helicobacter

80 0C. Larutan diputar 5000 rpm selama 5 menit.

pylori setelah sub kultur yaitu bentuk spiral yang

Supernatan

masih ada masih bisa tumbuh dan bentuk kokoid

merupakan DNA murni

yang terbentuk adalah bentuk kokoid yang bila

dilarutkan dalam 100 ul etanol 75% yang didiamkan

dilihat dengan mikroskop cahaya berbentuk bulat dan

20 menit dengan dibolak balik tiap 5 menit. Larutan

masih dapat ditumbuhkan kembali atau bentuk

diputar selama 5 menit pada 5000 rpm, dan

kokoid Viable Culturable (VC).

supernatan dibuang. Pellet DNA dikering anginkan.

dipisahkan.

Pellet

yang

tersisa

Helicobacter pylori

DNA dilarutkan dengan 50 ul aquabidest steril atau 2.

Data dan Pembahasan Hasil Penelitian Potensi Antimikrobia Simplisia Teripang Pasir (Holothuria Scabra) terhadap Perubahan Profil DNA Gene Caga Helicobacter Pylori

dengan NaOH (Sigma). Hasil dari ekstraksi DNA dilakukan agarose gel electroforesis horizontal 2% dan ethidium bromide. Hasil electroforesis dibaca dengan menggunakan alat Bio-rad Gel DOC XR tipe

Integritas DNA merupakan keadaan tebal

170–8170 dilengkapi komputer software YP dengan

tipisnya DNA, dan degradasi (smear) yang mungkin

Dell optiplex GX 520. DNA dengan derajat integritas

terjadi yang menunjukkan bahwa DNA telah

tinggi akan membentuk satu pita yang kompak dan

terpotong yang mengakibatkan tidak terbentuknya

tebal, sedangkan DNA yang derajat integritas rendah

unsur penting yang diperlukan untuk pertumbuhan

akan terbentuk pita tipis dan mengalami degradasi

sel bakteri. Hasil integritas DNA muncul dalam

(smear). Selanjutnya untuk memastikan potensi

bentuk pita yang didapatkan dengan menggunakan

simplisia teripang pasir terhadap perubahan profil

agarose gel electroforesis horizontal. Kegiatan awal

integritas DNA Helicobacter pylori memang benar

yang dilakukan adalah melakukan ekstraksi DNA.

adalah DNA gene cagA pengujian dilanjutkan

Kegiatan ini dilakukan dengan memutar sampel

dengan metode PCR menggunakan primer gen

setelah supernatan dibuang pellet ditambahkan Trizol (Gibco

BRL)

dan

dikocok

dan

cagA1 dan cagA2.

ditambahkan

chloroform (Merk), dikocok dan diputar hingga terbentuk 3 lapisan. Larutan bagian atas bening merupakan larutan yang mengandung RNA. Larutan

704


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10 11 12 13

diberikan tanda +1 menunjukkan derajat integritas

14 15

yang kurang baik dan yang tidak muncul pita diberi tanda – menunjukkan tidak adanya DNA atau tidak terdentifikasi. Produk PCR menunjukkan

hasil

penelitian potensi antimikrobia simplisia teripang pasir (holothuria scabra) terhadap perubahan profil DNA gene cagA Helicobacter pylori membentuk pita yang Keterangan:

Gambar

hasil

dalam

ketebalannya.

Tidak

potensi

terbentuknya pita (-) menunjukkan tidak adanya

antimikrobia simplisia teripang pasir (holothuria

DNA atau tidak teridentifikasinya DNA ini di

scabra) terhadap perubahan profil DNA gene cagA

dapatkan pada perlakuan dilusi tabung cair pada

Helicobacter pylori. Lanes 1: Standart low DNA

kontrol +, pada tabung konsentrasi simplisia teripang

mass ladder, Lanes 2: Loading buffer, Lanes 3:

pasir 100 ug/ml, 95 ug/ml, dan 90 ug/ml. Hasil ini

Konsentrasi simplisia teripang pasir 80 ug/ml (+2),

menunjukkan bahwa bentuk kokoid Helicobacter

Lanes 4: Kontrol + antibiotika Ciprofloxacin (-),

pylori pada konsentrasi simplisia teripang pasir

Lanes 5: Kontrol + antibiotika Ciprofloxacin (-),

tersebut mengalami kerusakan integritas DNAnya

Lanes 6 : Kontrol – (media + Spiral Helicobacter

dan terbukti dengan tidak tumbuhnya bakteri

pylori) ( +3), Lanes 7

simplisia

Helicobacter pylori pada saat disubkultur kembali,

teripang pasir 100 ug/ml (-), Lanes 8: Konsentrasi

hal ini disebabkan zat bioaktif yang terdapat pada

simplisia teripang pasir 100 ug/ml (-), Lanes 9:

simplisia teripang pasir dengan konsentrasi antara

Konsentrasi simplisia teripang pasir 70 ug/ml (+3),

100 ug/ml – 90 ug/ml dapat menghambat sintesis

Lanes 10: Konsentrasi simplisia teripang pasir 95

peptidoglikan pada dinding sel bakteri dalam jumlah

ug/ml (-), Lanes 11: Konsentrasi simplisia teripang

yang banyak pada saat sel melakukan pembelahan

pasir 95 ug/ml (-), Lanes 12: Konsentrasi simplisia

dan menyebabkan lisisnya sel bakteri. Hasil PCR gen

teripang pasir 75 ug/ml (+3), Lanes 13: Konsentrasi

cagA, menunjukkan adanya keutuhan gen cagA pada

simplisia teripang pasir 85 ug/ml (+1), Lanes 14:

konsentrasi simplisia teripang pasir antara 70 ug/ml –

Konsentrasi simplisia teripang pasir 90 ug/ml (-),

85 ug/ml, data ini mengindikasikan bahwa zat

Lanes 15: Konsentrasi simplisia teripang pasir 90

bioaktif yang terkandung dalam simplisia teripang

ug/ml (-). Kriteria pembacaan integritas DNA dipetik

pasir dengan konsenterasi 70 ug/ml – 85 ug/ml masih

dari penelitian Jekti, 2004 yaitu pita yang muncul

memberikan potensi kokoid untuk tumbuh kembali

paling tebal tanpa smear diberi tanda +3 yang

atau berbentuk kokoid yang bila dilihat dengan

menunjukkan derajat integritas DNA yang tinggi.

mikroskop cahaya berbentuk bulat dan masih dapat

Pita jelas tapi kurang tebal dengan smear diberikan

ditumbuhkan kembali atau bentuk kokoid Viable

tanda +2 menunjukkan derajat integritas DNA yang

Culturable (VC). Bentuk kokoid dari Helicobacter

cukup baik. Pita jelas tapi tipis dengan smear

pylori merupakan bentuk adaptasi agar kuman tetap

:

penelitian

bervariasi

Konsentrasi

705


hidup

dalam

menghadapi

stres.

Adaptasi

ini

dikultur/Viable

non

culturable

(VNC),

namun

dilakukan dengan menghilangkan motilitas pada

kelemahan dari penelitian ini adalah belum bisa

kuman bentuk spiral menjadi bentuk kokoid yang

membuktikan apakah zat bioaktif dalam simplisia

melepaskan flagellanya, sehingga terjadi penurunan

teripang pasir dapat dikatakan sebagai zat yang

aktifitas sel serta metabolisme. Semakin lanjut usia

bakterisidal

kokoid menyebabkan jumlah DNA dan integritas

Helicobacter pylori, karena ada beberapa faktor yang

DNA menurun sampai mencapai kadar minimal pada

merupakan karakteristik untuk menentukan daya

saat kokoid tersebut mati (non viable). Pembntukan

tahan Helicobacter pylori terhadap suatu zat letal

kokoid pada keadaan stress karena panjangnya waktu

yaitu integritas DNA, integritas RNA, penurunan

inkubasi dalm suasana mikroaerofilik diawali dengan

aktivitas gen ure, dan mRNA urease) tidak diujikan

melengkungnya sel bakteri seperti bentuk U,

pada penelitian ini.

atau

zat

yang

dapat

membunuh

selanjutnya dua ujung sel saling menempel sehingga KESIMPULAN

berbentuk seperti donat dengan lubang ada di

Terdapat zona hambatan dari simplisia

tengahnya. Saat pembentukan seperti donat ukuran teripang

menjadi lebih pendek dan masih terdapat flagella

pasir

(Holothuria

scabra)

terhadap


pada ujung sel, tetapi saat berbentuk kokoid flagella telah lepas dengan pangkal yang masih melekat.

yaitu pada konsenterasi 100 ug/ml diameter rata–rata

Selanjutnya dari pangkal flagella mulai terbentuk

zona hambatan 18,5 mm, konsentrasi 95 ug/ml

rongga

periplasmik

yang

didahului

diameter

dengan

zona

hambatan

17,5

mm,

konsentrasi 90 ug/ml diameter rata–rata zona

terlepasnya membran luar dari membran dalam dinding sel. Proses pembentukan kokoid

rata–rata

hambatan 15,5 mm, konsenterasi 85 ug/ml diameter

berbeda

rata–rata zona hambatan 14,5 ug/ml, konsenterasi 80

apabila stress yang dialami karena suasana aerobiosis

ug/ml diameter rata–rata zona hambatan 12n5 mm,

dan antibiotika atau stress karena efek zat bioaktif

konsentrasi 75 ug/ml diameter rata–rata zona

lain yang terdapat dalam suatu simplisia, dimana

hambatan 10,5 mm dan konsentrasi 70 ug/ml

proses perubahan ke bentuk kokoid adalah langsung

diameter rata–rata zona hambatan 8,5 mm. Terdapat

dengan memendekkan badan sel dan menghilangkan

perubahan

flagella dan langsung mengkerut. Meskipun hasil

profil

integritas

DNA

gene

cagA

Helicobacter pylori karena efek dari simplisia

penelitian ini menunjukkan bahwa zat bioaktif yang terkandung dalam simplisia teripang pasir pada

teripang pasir (Holothuria scabra) yaitu dengan tidak

konsenterasi antara 90 ug/ml – 100 ug/ml terbukti

terbentuknya pita DNA pada konsenterasi 100

berpotensi

sebagai

antimikrobia

ug/ml,95 ug/ml dan 90 ug/ml.

terhadap

penghambatan pertumbuhan dan perubahan profil DNA gene cagA Helicobacter pylori dengan merubah morfologi Helicobacter pylori dari bentuk spiral menjadi bentuk kokoid hidup yang tidak dapat

706


Terminal Region Of A Haemolytic Lectin, Cel III, from The Marine Intervertebrate Cucumaria Echinata (Abstract). J. Biochem, 2004, Vol.135, No. 1:65-75.

DAFTAR PUSTAKA Abraham TJ., Nagarajan J., Shanmugam SA. Antimicrobial Substances of Potential Biomedical Importance from Holothurian Species. Indian Journal of Marine Sciences, 2002, Vol 31 (2):161-164.

Hawa I, Zulaikah M, Jamaluddin M, Zainal Abidin AA, Kaswandi MA, Ridzwan BH. The Potential of The Coelomic Fluid Insea Cucumber as an Antioxidant. Mal J Nutr, 1999, 5: 55-59.

Aminin D.L., Agafonova I.G., Berdyshev E.V., Isachenko E.G., Avilov S.A., Stonik V.A. Immunomodulatory Properties of Cucumariosides from the Edible Far-Eastern Holothurian Cucumaria Japonica. Journal of Medicinal Food 4, 2001, (3): 127-135.

Leite KMR, Darini E, Canavez FC, Carvalho CM, Miteldorf CATS, Lopes LHC. Helicobacter pylori and Caga Gene Detected by Polymerase Chain Reaction in Gastric Biopsi: Correlation with Histological Findings, Proliferation and Apoptosis. Sao Paulo Med J., 2005,123(3):113-8.

Aznam Azis. Beberapa Catatan tentang Teripang Bangsa Aspidochirotida. Oseana,1995, Volume XX. Nomor 4,Hal 11-23. Coussens LM,and Werb Z. Inflammation and Cancer.Nature, 2000, 420: 860-867.

Logan RPH, and Walker MM. A B C of The Upper Gastrointestinal Tract: Epidemiology and Diagnosis of Helicobacter Pylori Infection. BMJ, 2002, 323: 920-922.

Departemen Kelautan dan Perikanan. Teripang Geliat Potensi dari Timur Laut. 2006. www.dpk.go.id

Marshall BJ,and Warren JR.United Curved Bacilli in The Stomach of Patiens Withgastritis and Peptic Ulceration. Lancet,1984, 1: 13111315.

Djaafar,T.F., E.S.Rahayu, D.Wibowo dan S.Sudarmadji. Antimicrobial Substance Produce by Lactobacillus.1996.

Maruni WD. Deteksi Helicobacter Pylori dari Specimen Blok Parafin Biopsy Lambung Penderita Dispepsia Dengan Hasil Histopatologi Negative Menggunakan Metode Polymerase Chain Reaction dengan Primer Gen Urec (Glmm) Di Provinsi NTB. Tesis Universitas Airlangga Surabaya, 2008.

Farouk A.E., Ghouse F.A.H., Ridzwan B.H. New Bacterial Species Isolated from Malaysian Sea Cucumbers with Optimized Secreted Antibacterial Activity. American Journal of Biochemistry and Biotechnology 3, 2007, (2): 60-65 Forman

D, Newel DG, Fullerton F,Yarnell JWG.Association between Infection with Helicobacter pylori and Risk of Gastric Cancer ( Evidence from a Prospective Investigation). Br. Med. J, 1991, 302: 13021305.

Rathbone B.J, Heatley RV. Immunology of C.Pylori Infection in Blaser MJ(Ed).Campylobacter Pylori In Gastritis and Peptic Ulcer.New York: I Gaku Zhoin,1989, pp 135-146. Soewignjo S, Palgunadi IG, Gunawan S, Muttaqin Z, Widita H, dan Wenny A. Deteksi Helicobacter Pylori pada Specimen Biopsi Mukosa Lambung Menggunakan Pcr Dengan Primer Berasal dari Gen Urec pada Penderita dengan Dispepsia. Laporan penelitian yang disampaikan pada kongres PPHI-PGI-PEGI di Surabaya, Juli 2007.

Gowda, NM., GoswamiU., Khan MI. T-Antigen Binding Lectin with Antibacterial Activity from Marine Invertebrate, Sea Cucumber (Holothuria Scabra): Possible Involvement in Differential Recognition of Bacteria (Abstract).Journal of Intervertebrate Phatology, 2008, Vol. 99, issue 2: 141-145. Hatakeyama, T., Suegnaga, T, etl al. Atibaterial Activity of Peptides Derived from The C-

707

Wiwin Maruni Diarti, Nurhidayati, Zaeniati Lely

Recommend Documents