SPEKTROFOTOMETRI PENENTUAN NITRIT ( ) DI DALAM AIR. Maruni Wiwin Diarti, I Gusti Ayu Nyoman Danuyanti, I Gede Billy Sumantri

SENYAWA PENGKUPLING α-NAFTHILAMIN UNTUK VALIDASI METODE SPEKTROFOTOMETRI PENENTUAN NITRIT ( ) DI DALAM AIR

Maruni Wiwin Diarti, I Gusti Ayu Nyoman Danuyanti, I Gede Billy Sumantri

Abstract: Validation of analytical methods need to be conducted to determine the feasibility of the method when the method is newly developed or modified. Determination of nitrite in water-based Cupling diazotized reaction has been developed in various fields. Many modifications have been carried out primarily in the selection of the source of the diazonium salt compound or compounds that can cupling. The this study was to determine the validity of the determination of nitrite in water by spectrophotometric method cupling compound α-nafthilamin. This study is a pre-experiments with experimental units and large units based guidelines experimental validation of analytical methods. The results show the value of 0.995 linearity, limit of detection (LOD) 0.039 ppm, 0.882 sensitivity, precision 1.38%, and 100.37% accuracy rate. The conclusion of this study is the method of spectrophotometric determination of nitrite in water using compound α-nafthilamin cupling valid for determining the concentration of nitrite in the water with a minimum detection limit of 0.039 ppm. Kata Kunci : Validation method, Determination of nitrite, α-nafthilamin. diamine

PENDAHULUAN

fenol dengan sumber garam diazonium anilin akan

primer dalam suasana asam akan membentuk garam

membentuk

diazonium. Beberapa senyawa yang memiliki amin

orange

Berbagai metode baik dalam

kupling diantaranya mendeteksi nitrit sebagai reduksi

Garam diazonium dapat bereaksi dengan senyawa

nitrat oleh bakteri, penetapan kadar Furosamide,

lain yang memiliki gugus fenil terbuka, disebut

penetapan kadar nitrit dalam air, dan lain-lain

sebagai senyawa pengkupling, akan menghasilkan

(Metwally dan Belal,1992; Shah, 2005). Senyawa α-

senyawa azo. Kombinasi garam diazonium dengan

nafthilamin pertama kali digunakan oleh Peter Griess

berbeda-beda

pada tahun 1879 sebagai senyawa pengkupling

menghasilkan senyawa azo dengan karakteristik yang

dengan sumber garam diazonium Asam sulfanilat

berbeda-beda, misalnya, senyawa pengkupling β-

untuk mendeteksi adanya nitrit dalam suatu larutan

naftol dengan sumber garam diazonium 3-nitroanilin

atau campuran. Senyawa

akan membentuk senyawa azo berwarna merah, N-(1-naphthyl)

berwarna

dikembangkan berdasarkan pada reaksi diazotasi-

sulfanilat, atau ρ-nitro anilin (Fesenden, 1991).

pengkupling

azo

bidang farmasi, kimia, bahkan bakteriologi telah

sumber garam diazonium adalah Anilin, Asam

senyawa

senyawa

(Fessenden, 1991).

aromatik primer yang umum digunakan sebagai

yang

garam

azo berwarna merah keunguan, senyawa pengkupling

dengan senyawa yang memiliki amin aromatik

pengkupling

sumber

diazonium asam sulfanilat akan membentuk senyawa

Reaksi diazotasi adalah reaksi antara nitrit

senyawa

dihydrochloridedengan

azo yang terbentuk

memiliki karakteristik berwarna merah keunguan.

ethylene

___________________________________________________________________________ Maruni Wiwin Diarti, IGAN Danuyanti, I Gede Billy Sumantri : Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Mataram, Jl. Prabu Rangkasari Dasan Cermen Sandubaya Mataram

1457

JURNAL KESEHATAN PRIMA VOL. 9 NO. 1, PEBRUARI 2015

Saat ini α-nafthilamine umumnya digunakan dalam

penelitian ini menggunakan larutan standar nitrit

bidang bakteriologi untuk mendeteksi adanya nitrit

(NO2-N) dengan kadar0,1 ppm, 0,2 ppm, 0,3 ppm,

sebagai reduksi nitrat oleh bakteri. Di Indonesia

0,4 ppm, dan 0,5 ppm dan sampel dengan konsentrasi

sesuai

Nasional

nitrit 0,1 ppm, 0,3 ppm, dan 0,5 ppm. Standar dan

penetapan kadar nitrit dalam air menggunakan

Sampel dibuat dari natrium nitrit (NaNO2) yang

Sulfanilamid sebagai sumber garam diazonium dan

dilarutkan dengan akubidest

N-(1-naphthyl)

kemampuan menghatar listriknya hampir nol untuk

ketetapan

Badan

Standarisasi

ethylene

dihydrochloridesebagai

senyawa

diamine pengkupling

meminimalkan

adanya

yang telah diuji

pengganggu.

Penentuan

(Badan Standarisasi Nasional, 2004; Buxton, 2012).

linearitas, batas deteksi (LoD), sensitifitas dan

Berdasarkan penelitian pendahuluan menggunakan

presisidalam pedoman validasi metode analisis

α-nafthilaminsebagai senyawa pengkupling dengan

menggunakan satu seri larutan standar yang berbeda

sumber garam diazonium Asam sulfanilat dapat

konsentrasinyadan

membentuk senyawa azo dengan karakteristik warna

pembacaan minimal direplikasi sebanyak 6 kali

yang hampir sama dengan senyawa azo yang

sehinggadalam penelitian ini menggunakan 5 larutan

terbentuk

N-(1-

standar sebagai unit eksperimen dengan konsentrasi

naphthyl) ethylene diamine dihydrochloridedengan

0,1 ppm; 0,2 ppm; 0,3 ppm; 0,4 ppm; dan 0,5 ppm

sumber garam diazonium sulfanilamid. Oleh karena

masing-masing direplikasi sebanyak 6 kali. Jadi

itu, dalam penelitian ini peneliti ingin mencoba

dalam penentuan linearitas, batas deteksi (LoD),

menggunakan

sebagai

sensitifitas, dan presisi menggunakan 30 unit

senyawa pengkupling pada penentuan nitrit dalam air

eksperimen (Harmita, 2004). Penentuan akurasi

metode spektrofotometri. Metode yang dimodifikasi

menggunakan suatu sampel dengan konsentrasi yang

tersebut akan diuji validitasnya dengan menentukan

telah diketahui, dalam pedoman validasi tidak

parameter validasi metode analisis. Hasil pengujian

dijelaskan berapa minimal unit eksperimen yang

tersebut akan menentukan apakah metode yang

harus digunakan tapi dalam penelitian ini digunakan

dimodifikasi tersebut layak atau tidak digunakan

konsentrasi sampel dengan konsentrasi 0,1 ppm; 0,3

untuk menentukan konsentrasi nitrit di dalam air

ppm; dan 0,5 ppm dengan pembacaan masing-

secara spektrofotometri.

masing diulang sebanyak 5 kali.

dengan

senyawa

senyawa

pengkupling

α-nafthilamin

untuk

menentukan

presisi

Instrumentasi

penelitian : Spektrofotometer, Neraca analitik, Labu METODE PENELITIAN

Ukur1000 ml, 500 ml, dan 50 ml, Becker glass 1000

Jenis penelitian ini merupakan penelitian

ml, 500 ml,dan 200 ml, Labu erlenmeyer 100 ml,

pre-experiment. Penelitian pre-experiment memenuhi

Pipet volume 1 ml, 2ml, 3 ml, 4 ml, 5 ml, dan 50 ml,

2 dari 3 syarattrue-experiment yaitu replikasi dan

Pipet ukur 1 ml, Pipet tetes. Reagensia semua

kontrol sedangkan randomisasi tidak terpenuhi

reagensia yang digunakan dalam penelitian ini dibuat

(Notoatmodjo,

dari bahan kimia dengan derajat kemurnianpro analis

2005).

Unit

eksperimen

dalam

1458

Maruni Wiwin Diarti, Senyawa Pengkupling α-Nafhilamin

(pa),

Larutan

induk

nitrit

(NO2-N)

dengan

nilai pemipetan dalam pembuatan larutan

konsentrasi 250 ppm, Larutan intermediet nitrit

standar nitrit sehingga mengurangi faktor

(NO2-N) dengan konsentrasi 50 ppm, Larutan standar

kesalahan)

nitrit (NO2-N)konsentrasi 0,1 ppm;0,2 ppm;0,3

c. Pembuatan larutan standar nitrit (NO2-N)0,1

ppm;0,4 ppm; dan 0,5 ppm, Larutan pereaksi

ppm; 0,2 ppm; 0,3 ppm; 0,4 ppm; dan 0,5 ppm

sulfanilamid

1%b/v,

Larutan

pereaksi

α-

masing-masing sebanyak 500 ml

naphtylamine0,6 %b/v dalam etanol.

1) Dipastikan alat-alat yang akan digunakan telah bersih dan dikalibrasi

Metoder kerja :

2) Dibilas alat-alat gelas yang akan digunakan a. Pembuatan larutan induk nitrit (NO2-N)250 ppm

dengan aquabidest

sebanyak 1000 ml

3) Dipipet dengan pipet volume masing-masing:

1) Dipastikan alat-alat yang akan digunakan

a)

telah bersih dan dikalibrasi

1,0 ml larutan intermediet nitrit (NO2N)untuk pembuatan larutan standard 0,1

2) Dibilas alat-alat gelas yang akan digunakan

ppm

dengan aquabidest

b)

3) Ditimbang Natrium nitrit 1,232 gram

2,0 ml larutan intermediet nitrit(NO2-N) untuk pembuatan larutan standard 0,2

4) Dimasukkan dalam becker glass

ppm

5) Ditambahkan aquabidest sedikit demi sedikit

c)

hingga larut


6) Dipindahkan dalam labu ukur 1000ml

ppm

7) Ditepatkan sampai tanda dengan pipet tetes

d)

b. Pembuatan larutan intermedietnitrit (NO2-N)50


ppm sebanyak 50 ml

ppm

1) Dipastikan alat-alat yang akan digunakan

e)

telah bersih dan dikalibrasi

5,0 ml larutan intermediet nitrit(NO2-N) untuk pembuatan larutan standard 0.5


ppm

dengan aquabidest

4) Dimasukkan dalam labu ukur 500 ml

3) Dipipet dengan pipet volume 10,0 ml larutan


induk nitrit.

sambil dikocok

4) Dimasukkan dalam labu ukur 50 ml

6) Ditepatkan sampai tanda dengan pipet tetes.


d. Pembuatan larutan pereaksi sulfanilamid 1%b/v

sambil dikocok

1) Dipastikan

6) Ditepatkan sampai tanda dengan pipet tetes.

alat-alat

gelas

digunakan dalam keadaan bersih

(Tujuan pembuatan larutan intermediet nitrit (NO2-N) 50 ppm adalah untuk memperbesar

1459

yang

akan



4) Ditambahkan 1 ml larutan sulfanilamid,

dengan aquabidest

dikocok, dan didiamkan 2-8 menit. 5) Ditambahkan 1 ml larutan α-nafthilamin,

3) Ditimbang 1 gramSulfanilamid 4) Dimasukkan dalam becker glass yang telah

dikocok dan didiamkan selama 15menit dan

disiapkan

segera

lakukan

pengukuran

absorbansi

5) Ditambahkan 20 ml aquabidest

(pengukuran tidak boleh dilakukan lebih dari

6) Ditambahkan 10 ml HCl pekat

1 jam).

7) Diaduk sampai sulfanilamid larut, bila sudah

6) Diukur

larut ditambahkan aquabidest sampai 100 ml. 8) Dipindahkan

dalam

botol

yang

dengan

spektrofotometer pada panjang gelombang

telah

543 nm.

disiapkan. e. Pembuatan

absorbansinya

7) Dilakukan replikasi masing-masing 6 kali. larutan

pereaksi

α-nafthilamin

g. Menentukan konsentrasi sampel nitrit untuk

0,6%b/v dalam etanol 95%. 1) Dipastikan

alat-alat

menentukan persen recovery. gelas

yang

akan

1) Dipastikan alat-alat gelas yang digunakan

digunakan dalam keadaan bersih

telah


2) Dioptimalkan

3) Ditimbang 600 mg α-nafthilamin

telah

dibilas

dengan

spektrofotometer

sesuai

petunjuk penggunaan alat.

4) Dimasukkan dalam becker glass

3) Dipipet 50,0 ml sampel yang akan diukur

5) Ditambahkan etanol 95% sedikit demi sedikit

konsentrasinya,

hingga larut

dimasukkan

dalam

labu

erlenmeyer yang telah disiapkan.

6) Ditambahkan etanol 95% sampai 100 ml

4) Ditambahkan 1 ml larutan Sulfanilamid,

7) Dipindahkan dalam botol gelap yang telah

dikocok, dan didiamkan 2-8 menit. 5) Ditambahkan 1 ml larutan α-nafthilamin,

disiapkan. f. Pengukuranabsorbansi larutan standar nitrit alat-alat

gelas

yang

dikocok,didiamkan selama 15 menit, dan akan

segera

digunakan telah bersih dan telah dibilas

spektrofotometer

lakukan

pengukuran

absorbansi

(pembacaan jangan ditunda lebih dari 1 jam)

dengan aquabidest. 2) Dioptimalkan

dan

aquabidest.

dengan aquabidest

1) Dipastikan

bersih

6) Ditentukan sesuai

konsentrasi

dengan

spektrofotometer pada panjang gelombang

petunjuk penggunaan alat.

543 nm.

3) Dipipet 50,0 ml larutan standaryang akan

7) Perlakuan direplikasi 5 kali.

diukur absorbansinya, dimasukkan dalam labu

(Penentuan pembacaan setelah 15 menit

erlenmeyer yang telah disiapkan.

penambahan α-nafthilamin dan penundaan tidak lebih 1 jam didasarkan atas percobaan

1460


́

sederhana pengukuran absorbansi dengan

= nilai absorbansi hitung, yaitu

interval waktu dimana dalam waktu 15 menit

nilai y yang didapat dengan

sampai

subtitusi masing-masing nilai x

1

jam

tidak

terjadi

perubahan

absorbansi)

ke dalam persamaan garis linear

Data yang didapat dipergunakan untuk menentukan

y = bx + a

nilai parameter validasi sebagai berikut:

= nilai absorban pengukuran, yaitu

a. Penentuan linearitas Linearitas

diperoleh

nilai dari

pembuatan

kurva

y

masing-masing

konsentrasi (x).

standar antara konsentrasi terhadap absorbansi.

n

= jumlah

Dimana yang digunakan sebagai sumbu x adalah

standar

nitrit

yang

digunakan.

konsentrasi larutan standar dan yang digunakan

Dicari nilai LoD dengan persamaan:

sebagai sumbu y adalah absorbansi. Dari kurva

LoD =

tersebut dicari persamaan regresinya, sehingga

Keterangan:

diperoleh persamaan berikut: y = bx + a

LoD

= Batas Deteksi

b

= nilai slope (b) pada persamaan

Keterangan:

regresi garis lineary = bx + a.

b = Slope

c. Penentuan sensitifitas

a = Intercept

Sensitifitas ditentukan dari harga slope (b) yang

y = Nilai absorban pada sumbu y

berasal dari regresi linier kurva standar y = bx +

x = Kadar larutan standar pada sumbu x

a.

Berdasarkan kurva tersebut didapatkan nilai koefisien

d. Penentuan presisi

korelasi (r).

Berdasarkan data diatas dapat dicari nilai standar

b. Penentuan batas deteksi (LoD)

deviasi (SD) dengan cara:

Untuk menentukan nilai LoD pertama-tama kita ̅

harus menghitung nilai absorbansi hitung ( ́ )

SD = √

yang didapat dari subtitusi nilai x pada persamaan

Keterangan: n

regresi garis linear y = bx + a. Selanjutnya dicari

Selanjutnya

nilai

simpangan baku relative (RSD) atau koefisien

(Simpangan baku terhadap blanko)

dengan persamaan:

= jumlah replikasi presisi

dihitung

variasi (KV), ditentukan dengan cara: KV =

=√

̅

X 100%

e. Penentuan Akurasi Keterangan: = Simpangan baku terhadap blanko

1461

sebagai


Untuk menentukan nilai akurasi metode yang

% recovery =

dinyatakan sebagai persen recovery ditentukan dengan rumus:

HASIL PENELITIAN 1. Hasil Pengukuran Absorbansi Larutan Standar Nitrit Tabel 1. Hasil Pembacaan Absorbansi Standar Nitrit No

Konst. (ppm)

1 2 3 4 5

0,1 0,2 0,3 0,4 0,5

̅

Absorbansi 0,106 0,176 0,255 0,372 0,444

0,103 0,173 0,257 0,372 0,447

0,105 0,175 0,259 0,362 0,446

0,104 0,179 0,264 0,372 0,445

0,107 0,180 0,264 0,375 0,459

0,103 0,177 0,260 0,371 0,450

0,105 0,177 0,260 0,371 0,449

Hasil pembacaan konsentrasi sampel nitrit yang digunakan untuk menentukan akurasi dapat dilihat pada tabel 2. Tabel 2. Hasil Pembacaan Konsentrasi Sampel Nitrit No 1 2 3

Sampel (ppm) 1 0,103 0,300 0,502

0,1 0,3 0,5

2 0,101 0,298 0,500

Konsentrasi (ppm) 3 4 0,103 0,096 0,303 0,298 0,499 0,506

Rata-rata (ppm)

5 0,102 0,299 0,500

0,1010 0,2996 0,5010

Berdasarkan data tersebut dapat ditentukan nilai

dengan sumbu x adalah konsentrasi dan sumbu y

linearitas metode, batas deteksi metode (LoD),

adalah absorbansi. Dari kurva tersebut dapat

Sensitifitas metode, presisi dan akurasi metode.

ditentukan

1.

Penentuan Linearitas Metode

merupakan acuan linearitas.

Linearitas metode ditentukan dengan membaca

Absorbansi rata-rata larutan standar seperti yang

absorbansi larutan standar dengan berbagai

ditunjukkan pada tabel 4.1. kemudian dibuat

variasi

kurva standar sebagai berikut:

konsentrasi.

Berdasarkan

hasil

pembacaan tersebut dibuat kurva kalibrasi

1462

nilai

koefisien

korelasi

yang

KURVA STANDAR 0.5

ABSORBANSI

0.4 0.3 y = 0.882x + 0.0078 R² = 0.995

0.2 0.1 0 0

0.1

0.2

0.3 0.4 KONSENTRASI

0.5

0.6

Gambar 1. Kurva Standar Pada gambar 1.

2.

dapat dilihat nilai koefisien

nilai x pada persamaan regresi garis linear y =

korelasi (r) yang didapat adalah 0,995.

bx + a. Berdasarkan kurva standar pada gambar

Penentuan Batas Deteksi (LoD)

1 didapat persamaan regresi linear y = 0,882x +

Untuk menentukan nilai batas deteksi (LoD)

0,0078. Data hasil penghitungan nilai absorbansi

pertama-tama

hitung ( ́ ) dapat dilihat pada tabel 3.

kita harus

menghitung nilai

absorbansi hitung ( ́ ) yang didapat dari subtitusi Tabel 3. Data Hasil Penghitungan Absorbansi Hitung ( ́ ) No 1 2 3 4 5

Selanjutnya

Konsentrasi (x) dalam ppm 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5

dicari

nilai

simpangan

baku

= √

,

terhadap blangko dengan rumus nilai

́

Perhitungan 0,882 X 0,1 + 0,0078 0,882 X 0,2 + 0,0078 0,882 X 0,3 + 0,0078 0,882 X 0,4 + 0,0078 0,882 X 0,5 + 0,0078

Absorbansi hitung ( ́ ) 0,096 0,1842 0,2724 0,3606 0,4488

merupakan nilai absorbansi pengukuran konsentrasi standar nitrit sesuai tabel 4.

dapat dilihat pada tabel 3 Nilai

___________________________________________________________________________ Maruni Wiwin Diarti, IGAN Danuyanti, I Gede Billy Sumantri : Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Kemenkes Mataram, Jl. Prabu Rangkasari Dasan Cermen Sandubaya Mataram

1463


́

Tabel 4. Data Hasil Perhitungan Nilai No

Konsentrasi standar 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5

1 2 3 4 5

Absorbansi ukur ( )

Absorbansi hitung ( ́ )

0,105 0,177 0,260 0,371 0,449

0,096 0,1842 0,2724 0,3606 0,4488

́ 0,000081 0,00005184 0,00015376 0,00010816 0,00000004 0,0003948

́

Perhitungan nilai simpangan baku terhadap blangko (

3.

Penentuan Nilai Sensitifitas Sensitifitas ditentukan dari nilai slope (b) pada

adalah sebagai berikut:

persamaan regresi garis linear y = bx + a.

=√

Berdasarkan kurva standar yang terlihat pada gambar 4.1didapatkan persamaan regresi garis

=√

linear adalah y = 0,882x + 0,0078. Jadi nilai =√

sensitifitas adalah 0,882.

= 0,011471704

4.

Penentuan Presisi

Perhitungan nilai batas deteksi (LoD) adalah

Data hasil penentuan presisi diperoleh dari

sebagai berikut:

pengukuran absorbansi larutan standar. Sesuai dengan data yang ditunjukkan pada tabel 5 dapat

LoD =

dihitung nilai standar deviasi (SD) dan koefisien LoD =

variasi (KV). Tabel hasil penghitungan presisi

LoD = 0,039

dapat dilihat pada tabel 5.

Berdasarkan perhitungan didapatkan nilai batas deteksi (LoD) adalah 0,039 ppm. Tabel 5. Tabel Penghitungan Presisi No 1 2 3 4 5

standar 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5

̅ 0,000014 0,000034 0,000067 0,0001 0,000155 Rerata

Standar Deviasi 0,00167332 0,002607681 0,003660601 0,004472136 0,005567764

Koefisien Variasi (%) 1,59 1,47 1,41 1,20 1,24 1,38

Berdasarkan penghitungan presisi pada tabel 6

Untuk

menentukan

didapatkan nilai presisi yang dinyatakan sebagai

pengukuran

nilai koefisien variasi adalah 1,38 %.

divalidasi dimana konsentrasi sampel yang

sampel

akurasi dengan

dilakukan

metode

yang

sebenarnya telah diketahui. Akurasi dinyatakan sebagai persen recoveryyang didapat dengan 5.

rumus:

Penentuan Akurasi

1464


Persen recovery =

Data hasil perhitungan persen recovery dapat

X 100%

dilihat pada tabel 6 Tabel 6. Data Hasil Perhitungan Persen Recovery No

Konsentrasi sebenarnya (ppm) 0,1 0,3 0,5

1 2 3

Konsentrasi pembacaan (ppm) 0,1010 0,2996 0,5010

% recovery 101,0 99,9 100,2 100,37

Rerata (%)

Berdasarkan penghitungan nilai akurasi pada

nafthilamin

metode

tersebut

tetap

mampu

tabel 6 didapatkan nilai akurasi yang dinyatakan

memberikan respon proporsional terhadap berbagai

sebagai persen recoverysebesar 100,37%.

perubahan konsentrasi nitrit dalam sampel.

Batas

deteksi (LoD) untuk metode yang dimodifikasi PEMBAHASAN

menggunakan senyawa pengkupling α-nafthilamin berdasarkan hasil perhitungan didapatkan nilai 0,039

Validasi metode analisis adalah adalah suatu tindakan

penilaian

berdasarkan

terhadap

percobaan

suatu

ppm. Nilai ini mengindikasikan bahwa batas minimal

metode,

laboratorium,

nitrit dalam sampel yang dapat diperiksa dengan

untuk

metode yang dimodifikasi menggunakan senyawa

memastikan atau mengkonfirmasi bahwa metode

pengkupling α-nafthilamin dan masih memberikan

tersebut sesuai untuk penggunaannya. Penentuan

respon signifikan dan memenuhi kriteria teliti atau

berbagai parameter validasi metode analisis perlu

seksama adalah 0,039 ppm. Dibandingkan dengan

dilakukan untuk metode yang baru dikembangkan

metode baku menurut SNI 06-6989.9-2004tentang

atau metode yang dimodifikasi untuk mengetahui kelayakannya.

Dalam

penelitian

ini

cara uji nitrit secara spektrofotometri dalam air dan

parameter

air limbah, metode yang dimodifikasi menggunakan

validasi yang ditentukan adalah linearitas, batas deteksi,

sensitifitas,

presisi,

dan

senyawa

akurasi.

air dan air limbah kisaran konsentrasi nitrit minimal

0,3 ppm; 0,4 ppm; dan 0,5 ppm didapatkan kurva

yang diharapkan dapat ditentukan adalah 0,01 ppm.

standar dengan koefisien korelasi atau linearitas

Nilai sensitifitas metode yang didapatkan dari

0,995. Nilai ini telah sesuai dengan standar baku SNI uji

nitrit


secara

pengkupling α-nafthilamin adalah 0,882. Nilai ini

spektrofotometri dalam air dan air limbah untuk

mengindikasikan bahwa setiap peningkatan 1 ppm

pengendalian mutu dimana linearitas tidak boleh

nitrit dalam sampel terjadi peningkatan absorbansi

lebih rendah dari 0,99. Tercapainya nilai linearitas diatas

0,99

menandakan

bahwa

mengalami

tentang cara uji nitrit secara spektrofotometri dalam

konsentrasi standar nitrit (NO2-N) 0,1 ppm; 0,2 ppm;

cara

α-nafthilamin

penurunan kemampuan deteksi dimana dalam SNI

Berdasarkan hasil pengukuran absorbansi pada

06-6989.9-2004

pengkupling

sekitar 0,882. Semakin tinggi nilai sensitifitas

walaupun

mengindikasikan semakin pekanya suatu metode.

dimodifikasi menggunakan senyawa pengkupling α-

1465


Dalam pedoman baku SNI tentang cara uji nitrit

persen recovery. Berdasarkan hasil pengujian yang

secara spektrofotometri dalam air dan air limbah

telah dilakukan didapatkan nilai persen recovery dari

tidak terdapat penjelasan tentang sensitifitas metode


yang harus dipenuhi.

Nilai presisi dinyatakan

pengkupling α-nafthilamin adalah 100,37%. Menurut

dengan nilai Koefisien variasi. Nilai presisi atau

pedoman baku penentuan kadar nitrit dalam SNI 06-

koefisien variasi yang didapatkan dari metode yang

6989.9-2004


spektrofotometri dalam air dan air limbah sebagai

nafthilamin adalah 1,38%. Presisi adalah ukuran

kontrol akurasi nilai persen recoveryharus berada

yang

atau

pada kisaran 90% sampai dengan 110% dengan kata

perbedaan hasil pengukuran sampel yang sama dan

lain 100% ±10%. Menurut Harmita dalam petunjuk

dilakukan berulang-ulang. Presisi dapat dikatakan

pelaksanaan validasi metode (2004)persen recovery

sebagai ukuran ketelitian suatu metode. Dalam SNI

yang diperbolehkan adalah 100% ±5%. Dengan nilai

06-6989.9-2004 tentang cara

secara

persen recovery 100,37% yang sama artinya dengan

spektrofotometri dalam air dan air limbah untuk

100% +0,37% maka metode yang dimodifikasi ini

mengendalikan mutu pemeriksaan, perbedaan hasil

telah memenuhi standar baik menurut SNI maupun

analisis yang dilakukan berulang tidak boleh lebih

menurut pedoman validasi metode. Berdasarkan nilai

besar dari 5%. Berdasarkan petunjuk pelaksanaan

berbagai parameter validasi tersebut metode yang

validasi metode yang dijelaskan oleh Harmita (2004)


dikatakan

teliti

nafthilamin telah memenuhi ketentuan dari Badan

diberikan jika metode memberikan nilai koefisien

Standarisasi Nasional sesuai dengan SNI 06-6989.9-

variasi 2% atau kurang akan tetapi persyaratan ini

2004 tentang cara uji nitrit secara spektrofotometri

sangat fleksibel tergantung pada konsentrasi analit

dalam air dan air limbah dalam hal jaminan mutu,

yang

kondisi

pengendalian mutu, dan kontrol ketelitian. Hal

laboratorium. Nilai maksimalkoefisien variasi atau

tersebut membuktikan metode penentuan nitrit yang

presisi untuk pengukuran konsentrasi dalam satuan

dimodifikasi

satu per sejuta (ppm) adalah 16%. Dengan nilai

pengkupling α-nafthilamin valid digunakan untuk

presisi atau koefisien variasi 1,38% maka metode

menentukan konsentrasi nitrit dalam air sepanjang

yang

senyawa

konsentrasi minimal nitrit dalam sampel tidak

pengkupling α-nafthilamintelah memenuhi standar

dibawah 0,039 ppm. Kelemahan dari metode yang

baik menurut SNI 06-6989.9-2004 maupun menurut


pedoman validasi metode.

Nilai akurasi metode

nafthilamin jika ditinjau dari ketentuan Badan

adalah nilai yang menunjukkan kedekatan hasil

Standarisasi Nasional sesuai SNI 06-6989.9-2004

analisis dengan konsentrasi sebenarnya dari sampel

tentang cara uji nitrit secara spektrofotometri dalam

yang diperiksa. Nilai akurasi dinyatakan sebagai

air dan air limbah adalah nilai batas deteksi (LoD)

menunjukkan

bahwa

diperiksa,

besarnya

kriteria

jumlah

dimodifikasi

kesesuaian

uji nitrit

seksama

sampel

atau

dan

menggunakan

1466

tentangcara

dengan

uji

nitrit

menggunakan

secara

senyawa


yang berada diatas 0,01 ppm. Hal ini dapat

optimal senyawa pengkupling untuk meminimalkan

disebabkan oleh berbagai hal yang memerlukan

terbentuknya warna pengganggu akibat adanya sisa

penelitian lebih lanjut yang berkaitan dengan

senyawa pengkupling yang berlebih. Pengurangan

optimalisasi pembacaan absorbansi dan pembentukan

nilai blangko dapat meningkatkan nilai absorbansi

warna.

Hal-hal yang mungkin dapat diteliti lebih

pembacaan yang kemungkinan dapat menurunkan

lanjut untuk meningkatkan kemampuan batas deteksi

nilai hasil penghitungan batas deteksi (LoD). Hal

metode ini adalah panjang gelombang maksimum,

lain yang penting untuk diteliti adalah pengaruh suhu

suasana pH reaksi, dan konsentrasi optimal dari α-

terhadap reaksi diazotasi. Menurut beberapa ahli

nafthilamin.

maksimum

garam diazonium yang terbentuk dalam reaksi

pembacaan absorbansi dapat meningkatkan nilai

diazotasi tidak stabil pada suhu diatas 15°C, tapi

absorbansi yang didapatkan. Walaupun warna yang

menurut beberapa jurnal penelitian yang berkaitan

terbentuk hampir sama dengan warna yang terbentuk

dengan

dengan menggunakan metode baku namun tetap

tergantung dari sumber garam diazonium dan

perlu

senyawa

Panjang

dilakukan

panjang

gelombang

pengujian

gelombang

untuk

yang

diazotasi-kupling

digunakan,

reaksi

diazotasi-kupling ada yang bereaksi optimal pada

pembacaan

suhu kamar dan ada juga yang optimal pada suhu di

tertinggi.Peningkatan nilai absorbansi pengukuran

bawah 15°C. Penelitian terhadap pengaruh suhu ini

dapat memperkecil selisih antara absorbansi ukur

kemungkinan akan dapat mempercepat laju reaksi

) dan absorbansi hitung ( ́ . Nilai selisih yang

sehingga waktu penentuan nitrit dapat lebih cepat

semakin kecil akan menurunkan hasil penghitungan

(Metwally dan Belal, 1992; Shah, 2005; Deb, 2007;

penentuan batas deteksi menjadi lebih rendah.

Khan, 2007; Narayana, 2009; Fessenden, 1991).

(

nilai

absorbansi

sehingga

pengkupling

reaksi

bisa

didapatkan

maksimum

menentukan

penerapan

Suasana pH kemungkinan dapat mempengaruhi KESIMPULAN

kualitas garam diazonium yang terbentuk dalam reaksi diazotasi, dimana kualitas garam diazonium ini

akan

mempengaruhi

kualitas

warna

Kesimpulan dari penelitian ini adalah:

yang

1.

terbentuk,ideal yang diharapkanadalah terbentuknya

yang

kemungkinan

metode

spektrofotometri

dalam air dengan senyawa

pengkupling α-nafthilamin adalah 0,995. Nilai

Kualitas warna yang lebih bagus akan meningkatkan absorbansi

linearitas

penentuan nitrit

warna maksimal dengan konsentrasi nitrit minimal.

nilai

Nilai

ini

dapat

dapat

memenuhi

standar

dari

Badan

Standarisasi Nasional yang mensyaratkan nilai

menurunkan nilai batas deteksi setelah penghitungan.

linearitas minimal 0,99.

Konsentrasi optimal α-nafthilamin kemungkinan

2.

berpengaruh pada nilai blangko, untuk mengurangi

Batas

deteksi

penentuan nitrit

terbentuknya warna yang tidak perlu dan tidak

metode

spektrofotometri

dalam air dengan senyawa

pengkupling α-nafthilamin adalah 0,039 ppm.

diinginkan perlu diadakan penelitian konsentrasi

Nilai ini berada diluar batas deteksi yang

1467


3.

disarankan oleh Badan Standarisasi Nasional

suasana pH optimal reaksi, konsentrasi optimal

dalam SNI 06.6989-9.2004 yaitu 0,01 ppm.

α-nafthilamin yang dapat digunakan, dan suhu

Nilai

optimal reaksi diazotasi-kupling

sensitifitas

penentuan nitrit

metode

spektrofotometri

dalam air dengan senyawa DAFTAR PUSTAKA

pengkupling α-nafthilamin adalah 0,882. 4.

Nilai Presisi metode spektrofotometri penentuan

Badan Standarisasi Nasional, 2004, SNI 06-6989.92004, Air dan Air Limbah – bagian 9 : Cara Uji Nitrit (NO2-N) secara Spektrofotometri, Jakarta.

nitrit dalam air dengan senyawa pengkupling αnafthilaminadalah 1,38%. Nilai ini memenuhi Standar Nasional Indonesia tentang cara uji nitrit

Basset, J., Denny, R. C., Jeffrey, G. H., Mendham, J., 1994. Buku Ajar VogelKimia Analisis Kuantitatif AnorganikEdisi ke-4. Jakarta : EGC

secara spektrofotometri dalam air dan air limbahyang mensyaratkan nilai presisi tidak boleh lebih dari 5%. 5.

Buxton, R, 2012, Nitrate and Nitrate Reduction Test Protocol, American Society for Microbiology, http://www.microbelibrary.org

Akurasi metode spektrofotometri penentuan nitrit dalam air dengan senyawa pengkupling αnafthilamin dinyatakan dengan nilai persen

Deb, M. K., Thakur, M., Khande, P., 2007, Determination of Nitrite, Nitrate and Total Nitrogen Ni Vegetable Sampel, Bull. Chem. Soc. Ethiop., 21(3), 445-450, School of Studies Ni Chemistry, Pt. Ravisangkar Shukla University Rajpur, India

recovery 100,37%. Nilai ini sesuai dengan Standar Nasional Indonesia 06.6989-9.2004yang mensyaratkan

nilai

persen

recovery

harus

berkisar antara 90%-110%. 6.

Penentuan kadar nitrit

dalam air metode

Fessenden, R. J., Fessenden J. S., 1991, Kimia Organik, Edisi Ketiga, Jilid 1, Alih Bahasa Aloysius Hadyana Pudjaatmaka PhD, Penerbit Erlangga, Jakarta

spektrofotometri dengan senyawa pengkupling α-nafthilamin

valid

untuk

menentukan

konsentrasi nitrit dalam air dengan batas deteksi

Saran

Fluke Analytical, 2010, Nitrate Reagent A (1Naphthylamine Solution) and B (Sulfanilic Acid Solution), Sigma-Aldrich Chemie GmBH – Industriase, Switzerland

Berdasarkan penelitian ini dapat disarankan:

Harmita,

minimal 0,039 ppm.

1.

Penggunaan α-nafthilamin sebagai senyawa pengkupling

alternatif

konsentrasi

nitrit

dalam dalam

menentukan air

metode

Khan, M. A., Karim, M. M., Wabaidur, S. M., 2007, Spectrophotometric Methode for The Detremination of Nimesulide in Bulk and Various Dosage Form, Applied Chemistry Vol. 11 No. 2, November, 453-456, Department of Chemistry, Kyungpook

spektrofotometri dengan perkiraan konsentrasi minimal nitrit dalam sampel tidak kurang dari 0,039 ppm. 2.

Penelitian

lebih

lanjut

untuk

2004, Petunjuk Pelaksanaan validasi Metode dan Cara perhitungannya, Majalah Ilmu Kefarmasian, Vol. I, No. 3, Desember 2004, 117-135, ISSN:16939883, Departemen Farmasi FMIPA-UI

menentukan

panjang gelombang maksimum pembacaan,

1468


National Korea.

University,

Taegu,

702-701,

Shah, J., Jan, M. R., Khan, M. A., 2005, Determination of Furosamide Bay Simple Diazotation Methode in Pharmaceutical Preparation, Journal of The Chinese Chemical Society, 52, 347-352, Department of Chemistry, University of Peshawar, N. W. F. P., Pakistan.

Khopkar SM., 2003, Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta: UI Press. Kurniawan, D., Regresi Linear (Linear Regresssion), 2008, R Development Core Team (2008). R: Foundation for statistical Computing, Vienna, Austria. ISBN 3-900051-07-0, URL.http://www.R-project.org Metwally,

Sigma-Aldrich, 2012, Material Safety Data Sheet Version 5.1 Sulfanilamide, Sigma-Aldrich Corporation, USA

ME., Belal F., 1992, Primaquine Phosphate as a Promissing Subtitute for N(1-Naphtyl)ethylenediamine I. Determination of Nitrite in Natural Waters in Egypt, Analitycal Sciences February 1992, Vol. 8, Departement of Analycal Chemistry, Faculty of Pharmacy, University of Mansoura, Mansoura, 35516, Egypt.

Suharman, dan Mulja, HM., 1995, Analisis Instrumental, Surabaya, Airlangga University Press Suirta, I W., 2010, Sintesis Senyawa orto-fenilazo-2naftol Sebagai Indikator Dalam Titrasi, Jurnal Kimia 4 (1), Januari-2010:27-34, ISSN 1907-9850, Jurusan Kimia FMIPA Universitas Udayana, Bukit Jimbaran, Denpasar, Bali, Indonesia.

Narayana, B., Sunil, K., A Spectrophptometric Methode for Determination of Nitrite and Nitrate, 2009, Eurasian J. Anal. Chem. 4(2): 201-214, Department of P. G. Studies and Research in Chemistry, Mangalore University, Mangalangotri574199, India.

Sunivo, 2012, Material Safety Data Sheet (MSDS) 1Naphthylamine, Shanghai Sunivo Supplay Chain Management Co., Ltd, http://www.sunivo.com/MSDS Tebbutt, P., Sulfanilamide, 1998, Molecule of the Mounth: Februari 1998, Cherwell Scientific Publishing, USA

Notoatmojo, S., 2005, Metodologi Penelitian Kesehatan, Jakarta: Rineka Cipta.

Wade Jr, L. G., 2006, organic Chemistry,Sixth Edition, Person Education, USA

Rahway N. J., 2010, Chemical and Reagent The Merck Index,ed 12th, berlin, Merck and Co. Riyadi, W., 2009, Validasi Metode Analisis, Situs Kimia indonesia, http:/www.chem-istry.org/artikel_kimia/kimia_analisis/valida si-metode-analisis.

1469

SPEKTROFOTOMETRI PENENTUAN NITRIT ( ) DI DALAM AIR. Maruni Wiwin Diarti, I Gusti Ayu Nyoman Danuyanti, I Gede Billy Sumantri

Recommend Documents