Olek
TIEAI TIER TAMOJO F 25. 1160
5 9 9 2
FAKULTAS
TEKNOLOGI
INSTlTUT PERTANIAN B O G O R
PERTAM14M
BOGQR
Tien Tien Tanojo. F25.1160. Analisis protease Aspergillus oryzae dengan elektroforesis gel poliakrilamid. Di bawah bimbingan : Maggy T. Suhartono.
RINGKASAN
Penelitian ini terdiri dari 4 tahap yang meliputi isolasi kapang proteolitik, produksi, dan pemurnian protease yang dihasilkan, serta analisis berat molekul protease tersebut.
Kapang diisolasi dari tahap ke 2 dalam
fermentasi kecap Zebra, Bogor, yaitu fermentasi garam/ fase moromi.
Dari hasil identifikasi yang dilakukan, yang
dikonfirmasikan dengari Laboratorium Mikologi, Jurusan Biologi, IPB, kapang yang diisolasi adalah Aspergillus oryzae.
Isolat
A. oryzae tersebut terbukti bersifat
proteolitik baik pada media SMA ataupun media fermentasi yang dipergunakan. Protease diproduksi pada media campuran dedak dan tepung kedelai (7 : 3, w/w) yang disuplementasikan dengan KH2P04. fermentasi
Ekstrak protease kasar diperoleh dari media dengan larutan Tween 80.
Aktivitas
kasar tersebut adalah 0,2 IU/mg protein.
protease
Uji aktivitas
protease dilakukan berdasarkan hidrolisis k a s e i n (Bergmeyer, 1983).
Jumlah protein didasarkan pada
pengikatan zat pewarna (Bradford, 1976).
Pemurnian yang
dilakukan adalah berturut-turut pengendapan dengan ammonium sulfat (70%, w/v) dan pengendapan dengan 100% aseton (v/v), yang masing-masing meningkatkan aktivitas protease menjadi 0,5 IU/mg protein, dan 1,2 IU/mg protein. Pemisahan protease dengan
kromatografi filtrasi gel pada
kolom Sephadex G-100 menghasilkan 2 puncak protein dan 2 puncak protease.
Kedua jenis protease tersebut mempunyai
aktivitas 1,5 IU/mg protein dan 2,4 IU/mg protein, dengan kemurnian
7,8 dan 12,3 kali enzim kasar.
Elektroforesis dilakukan sesuai dengan metode yang dipergunakan Laemmli (1970), dengan konsentrasi akrilamid 10%.
Jumlah sampel yang diaplikasikan 30
-
40 pg.
Pada
konsentrasi tersebut protease A. oryzae dapat diwarnai dengan pewarnaan Coomassie dan pewarnaan Ag, tetapi tidak dengan pewarnaan Cu.
Berat molekul protease diestimasi
dengan SDS-PAGE, dengan pewarnaan Coomassie.
~ntuk
menentukan pita protease dilakukan pewarnaan spesifik berdasarkan hidrolisis kasein.
Hasil yang diperoleh
adalah 2 macam protease yang mempunyai BM 105.300 Da dan 27.800 Da, yang diduga adalah protease asam.
protease netral dan
ANALISIS PRWEASE Aspergillus oryzue DENGAN ELEKTROFORE'IS GEL POLIAKRILAMKD
Oleh TIEN TIEN TANOJO F 25.1160
SKRKI'SI Sehagai salah salu syarat unluk rncmperolch gclar SARJANA TEKNOLOGI PEIUANIAN pada JURIJSAN TEKNOLOGI I'ANCiAN DAN CilZI FAKULTAS TEKNOLOGI PEKI'ANIAN KNSTITOT I'EKI'ANIAN BOGOR
1992 FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR
INSTITUT PERTANIAN BOGOR IZAKIJLTAS TEKNOLOGI PERTANIAN ANALISIS PROTEASE Aspergilluv oryzue DENGAN ELEKTROFORESIS GEL 1'OLIAKIIILAMID SKRIPSI Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN pada JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR Oleh TIEN TIEN TANOJO F 25.1160
Dilahirkan pada tanggal 6 Desember 1969 di Surabaya Tiriggal lulus : 8 Desernber 1992 Disetujui, Boeor. 18 Desernber 1992
KATA
Puji, luar biasa. penulis
hormat
PENGANTAR
dan kemuliaan bagi Tuhan,
Karena hanya oleh kasih dan
dapat
menyelesaikan
Allah
yang
penyertaan-Nya,
penelitian
dan
penyusunan
hasil
penelitian
skripsi ini. Tulisan tentang
ini
berdasarkan
"~nalisisprotease Aspergillus oryzae dengan
poliakrilamid", Mikroba
disusun
dan
yang
telah dilakukan di
Lab.
~ i o k i m i a ,PAU Bioteknologi IPB,
gel
Teknologi dari
bulan
~ p r i lsampai dengan bulan Oktober 1992. ~ e n u l i smengucapkan terima kasih yang tulus 1.
Dr.
Ir.
Maggy T. Suhartono,
yang
telah
kepada :
membimbing
penulis selama penelitian dan penyusunan skripsi. 2.
Dr. yang
Ir.
Srikandi Fardiaz dan Ir.
berkenan
menjadi
dosen
Sutrisno
Koswara,
penguji
dan
membantu
Zebra,
Bogor,
menyempurnakan tu1i:;an ini. 3.
Pimpinan
Perusahaan
Kecap
yang
mengijinkan penulis mengambil sampel. 4.
Veralin, Filosa,
Witono, Eni,
Wirjanto,
Ika, dan Ujang,
Daniel, yang
Lily,
banyak
Handi, membantu
penulis selama berlangsungnya penelitian. 5.
Saudara-saudara penulis di Kopelkhu pada khususnya dan PMK
pada umumnya, serta di "MUSASHI",
doa dan bantuan yang diberikan.
atas
dukungan
Penulis sempurna,
menyadari bahwa tulisan ini masih jauh
tetapi
penulis
berharap
tulisan
ini
dimanfaatkan oleh semua pihak' yang membutuhkannya. IMMANUEL !
Bogor, 14 Desember 1992
Penulis
dari dapat
DAFTAR IS1
Halaman
....................................... i . vi Daftar Gambar .................................... Daftar Tabel ......................................... vii Daftar Lampiran ...................................... viii I . PENDAHULUAN.................................... 1 Kata Pengantar
. B. A
LATAR BELAKANG
.............................
..................................... I1 . TINJAUAN PUSTAKA ............................... A . PROTEASE................................... 1 . Definisi dan Klasifikasi ................ TUJUAN
2
B
. .
4 5
5
5
. Sumber dan Peranan......................
6
................
7
PROTEASE Aspergillus oryzae
.............................. D . PEMURNIAN PROTEASE DARI ASPERGILLUS ........ E . TEXNIK ELEKTROFORESIS DI DALAM ANALISIS ENZIM ...................................... 1 . Elektroforesis.......................... C
1
PEMURNIAN ENZIM
10 12
13 13
. Elektroforasis Gel Poliakrilamid........ 3 . PAGE dengan Sodium Dodesil Sulfat ....... 4. Faktor-Faktor yang Mempengaruhi .........
20
. Pewarnaan Protein.......................
22
..................
23
2
5
5.1.
Pewarnaaan Coomassie
5.2.
~ewarnaanCu
..........................
16
19
24
Xalaman
.......................... .................... 5.4. Pewarnaan ~pesifik 6. ~nalisisXasil Elektroforesis........... I11. METODE PENELITIAN.............................. A . BAHAN DAN ALAT ............................. 1 . Bahan ................................... 2 . Alat .................................... B . METODE PENELITIAN.......................... 1 . ISOLASI XAPANG PROTEOLITIK.............. 5.3.
2
Pewarnaan Ag
. PRODUXSI PlZOTEASE....................... a . Penyiapiin Media Fermentasi...........
. Pembuatan Inokulum dan Inokulasi..... c . Ekstraksi............................ d . Pengukuran Jumlah Protein............ e . Pengujinn Aktivitas Protease.........
b
3
. PEMURNIAN PROTEASE...................... a . Pengendapan dengan Ammonium Sulfat ... . Dialisis............................. c . Pengendapan dengan Aseton ............ d . Pemisahan dengan Sephadex G-lo0 ......
b
4
................. Pewarnaan Coomassie................... Pewarnaan cu .......................... Pewarnaan Ag ..........................
. ELEKTROFORESIS
4.1. 4.2. 4.3.
PROTEASE
25 25 27 29 29 29
30 30 30
31 31 32 32 33 33 36 36 38 38 38 39 39 40 40
Halaman IV
.
HASIL DAN PEMBAHAGAN
...........................
42
.................
42
......
49
A
.
ISOLASI KAPANG PROTEOLITIK
B
.
PEMURNIAN PROTEASE Aspergillus oryzae
C
.
ELEKTROFORESIS PROTEASE Aspergillus
..................................... 5 8 1 . Uji Metode Pewarnaan ..................... 58 2 . Uji Aktifitas Proteolitik ............... 61 3 . Estimasi Berat Molekul Protease ......... 63 oryzae
V
VI
. .
......................... A . KESIMPULAN ................................. B . SARAN .....................................
69
.................................
70
KESIMPULAN
DAN
DAFTAR PUSTAKA
SARAN
68 68
