LAPORAN AKHIR PENELITIAN RISBIN IPTEKDOK. Potensi Ekstrak Etanolik Temu Kunci (Boesenbergia

1618 UMU LAPORAN AKHIR PENELITIAN RISBIN IPTEKDOK

'

Potensi Ekstrak Etanolik Temu Kunci (Boesenbergia pandurata) sebagai Agen Kemoprevensi Tumorigenesis Kulit Terinduksi UV-B

Penyusun: Shanti Listyawati, S.Si., M.Si.

Nita Etikawati, S.Si., M.Si.

Program Studi Bioteknologi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta 2012

·-""-� -w

LAPORAN AKHIR PENELITIAN RISBIN IPTEKDOK

Potensi Ekstrak Etanolik Temu Kunci (Boesenbergia pandurata) sebagai Agen Kemoprevensi Tumorigenesis Kulit Terinduksi UV-B

Penyusun: Shanti Listyawati, S.Si., M.Si. Nita Etikawati, S.Si., M.Si.

Program Studi Biote�ologi

Universitas Gadjah Mada Yogyakarta 2012

SUSUNAN TIM PENELITI

No.

Nama

Tugas Dalam Kegiatan Penelitian

Unit Kerja Lembaga

l

Shanti Listyawati, S.Si., M.Si.

Ketua peneliti

Bioteknologi UGM

2

Nita Etikawati, S.Si., M.Si.

Peneliti-1

Bioteknologi UGM

3

Sismindari, Prof, Dr, SU, Apt.

Supervisor

Fak. Farmasi UGM

4

Widi Hartanto

Administrasi

LPPTUGM

jj

SURAT KEPUTUSAN PENELITIAN

iii

KEMENTERIAN KESEHATAN

BAJ)AN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KESEHATAN .hdan P�n:d;�bn Ncgant N''- �9 .!;�kana I 0560 Kotak l'os 1126 Tclcpon: (021) 4261 Ol'X Faksimik: (021) 42439�.1

E-mail: scsb�n!a·litbang.dcpk.:,; go.id. lli4>siJe: hllp:·:www.litbang.depkc,;,go.id

KEPUTUSAN KEPALA BAOAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KESEHATAN NOMOR: HK.03.05121127312012 TENTANG PENETAPAN TIM PELAKSANA RISET PEMBINAAN ILMU PENGETAHUAN DAN TEKNOLOGI KEOOKTERAN TAHUN21 0 2 KEPALA BAOAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KESEHATAN,

Menimbang

:

a. bahwa

untuk

meningkatkan

pengembangan

bidang

di

penelitian

kapasitas kesehatan

perlu

dan

dilakukan

pembinaan kepada para peneliti muda; b. bahwa peneliti

dalam muda

rangka perlu

pembinaan dan menggali dilakukan

Riset

potensi

Pembinaan

Umu

Pengetahuan dan Teknologi Kedokteran; c.

bahwa berdasarkan pertimbangan sebagaimana dimaksud pada huruf a dan b perlu ditetapkan Keputusan Kepala Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan tentang Pembentukan

Tim

Pelaksana

Riset

Pembinaan

llmu

Pengetahuan dan Teknologi Kedokteran Tahun 2012;

Mengingat

1.

Undang-Undang Nomor 18 Tahun 2002 tentang Sistem Nasional Penelitian, Pengembangan dan

Penerapan llmu

Pengetahuan dan Teknologi (Lembaran Negara Republik Indonesia Tahun

2002 Nomor 84, Tambahan Lembaran

Negara Republik Indonesia Nomor 4219); 2.

Undang-Undang Nomor 36 Tahun 2009 tentang Kesehatan (lembaran

Negara Ta hun

2009

Nomor 144,

Tambahan

Lembaran Negara Nomor 5063); 3. Peraturan Penelittan Negara

Pemerintah dan

Republik

Tambahan

Nomor

39

Pengembangan Indonesia

1995

Tahun

Tahun

1995

tentang

(Lembaran

Kesehatan

Nomor

67,

Lembaran Negara Republik Indonesia Nomor

3609); 4. Peraturan Presiden Nomor 76 Tahun 2011 Perubahan atas Pera1uran

Presiden

Nomor

47

Tahun

2009

Tentang

Pembentukan dan Organisasi Kementerian Negara;

iv

ff£! !I§

KEMENTERIAN KESEHATAN

BADAN PENELITJAN DAN PENGEMBANGAN KESJ;HATAN JahiJl P�rccrakan Nqwra No. 29 J:�knna I 0.%<1 Kotak l'o,; I :22(i .

'li:lcpon: (0:! II -12olllSll faksimilc: (021l·C!4J93.'

F-mml. sc�ban\
5. Keputusan

Menteri

Kesehatan

791/Menkes/SKNII/1999 Penyelenggaraan

tentang

Penelitian

dan

Nomor Koordinasi

Pengembangan

Kesellatan; 6.

Peraturan

Menteri

Kesehatan

1144/Menkes/PerNIII/2010

tentang Organisasi

Nomor dan

Tata

Ke�a Kementerian Kesehatan Rl;

MEMUTUSKAN: Menetapkan

KEPUTUSAN

KEPALA

BADAN

PENELITIAN

DAN

PENGEMBANGAN KESEHATAN TENTANG TIM PELAKSANA RISET PEMBINAAN ILMU PENGETAHUAN DAN TEKNOLOGI KEDOKTERAN TAHUN 2012;

KESATU

Tim

Pelaksana

Riset

Teknologi Kedokteran lptekdok

2012)

Pembinaan

llmu

Pengetahuan dan

Tahun 2012 (selanjutnya disebut Risbin

sebagaimana

tercantum

dalam

lampiran

keputusan ini bertugas; 1. Melaksanakan penelitian sesuai kaidah ilmiah dan etika dengan waktu yang telah ditetapkan; 2. Mempertanggungjawabkan penggunaan anggaran sesuai peraturan yang berlaku; 3. Membuat dan menyampaikan laporan kemajuan dan laporan akhir penelitian; 4. Membuat ringkasan eksekutif berdasarkan hasil penelitian sebagai bahan masukan "kepada pengambilan keputusan dan pengelola program yang terkait dengan hasil penelitian;

KEDUA

Tim

Pelaksana

Risbin

lptekdok

Tahun 2012 sebagaimana

dimaksud pada diktum kesatu diberikan honor sesuai dengan ketentuan yang berlaku;

KETIGA

Dalam melaksanakan tugasnya, Tim Pelaksana Risbin lptekdok Tahun 2012 berpedoman pada peraturan perundang-undangan yang berlaku;

KEEMPAT

Dalam melaksanakan tugasnya, Tim Pelaksana Risbin lptekdok Tahun 2012 dapat berkonsultasi dan berkoordinasi dengan Tim Panel Pakar dan Tim Pengelola Administrasi Risbin lptekdok;

KELIMA

Biaya kegiatan Tim Pelaksana Risbin lptekdok Tahun 2012 dibebankan pada DIPA Sekretariat Badan Litbangkes tahun anggaran 2012 Nomor

·

0682/024-11.1.01/00/2012 Tanggal 9

Desember 2011;

v

KEMENTERIAN KESEHATAN

BAOAN PENELITIAN DAN PENGEMBANGAN KESEHATAN .labn P-:1\'..:taknn N�ga ra No. 29 hkana I 05t>Cl Kowk J'os 1226 Tdcpon: (02 I) 426Hlf(l! F11�sirnilc: (02 I) 424;191.� 1:'-mtlil: scsha11(11 litbsir": htlp:i/www.lilb
KEENAM

Dengan Baden

berlakunya Keputusan ini, maka Keputusan Kepala Penelitian dan Pengembangan

HK.03.0511/393/2011

Tanggal

19

Kesehatan

Januari

2011

Nomor

:

tentang

Penetapan Tim Pelaksana Rise! Pembinaan llmu Pengetahuan dan Teknologi Kedokteran Tahun 2011 dinyatakan tidak berlaku lagi; KETUJUH

Keputusan ini berlaku sejak tanggal ditetapkan. DHetapkan diJakarta Pada tan gal 17 FEBRUARI 2012 Kepal

vr

LAMPlRAN KEPUTUSAN KEPALA BADAN LITBANG KESEHATAN NOMOR

: HK 03.05/2/1273/2012

TANGGAL : 17 Februari 201:z SUSUNAN TIM PELAKSANA RISET PEMBiNAAN ILMU PENGETAHUAN DAN TEKNOLOG! KEDOKTERAN (RISBIN IPTEKDCK) 2012

BALAI LITBANG, BP2 GAK I, MAGELANG 1

Sri Nuryani Wahyunmgrum, SSI R. Agus Wibowo, SSi, MSc Taufiq Hidayat, dr

Catur Wijayanti, AMd

Pengaruh Suplementasi Mikroalgae

149,883,500

Spirulina terhadap Status Klinis GAKI dan Fungsi Tiroid

BALAI UTBANG, P2B2 BANJARNEGARA

2

Oyah Widiastuti , SSi, MSc FK UNIVERSITAS ANDALAS, PADANG

3

1

Desmawatl, dr

Bina lkawati, SKM, MKes

Utami Mulyaningrum, dr.

Endang Setyani, AMAK

Rony Y., dr. SpPD

Produksi AnUbodi Monoklonal Spes1fik

140.521.000

Lepiospira

MSc Yunlar Lestari. dr. MKes

Joni Herman. SE

Pengaruh Retriksl NaLium dan Ekspresf

148.780,000

Gen AGT M235T terhadap Tekanan Darah pada Penderita Hipertensl Etnik

4

2

Eka Nofila. dr

Mlnangkabau

Nora Harm1narti. dr. MBiomed

Kaisar, SSi

Lilis. SpPA

Sheella R. Bororing, dr,

Maria Magdalena Martini

1

Stefanus Lembar. dr, SpPK

ldentifikasi Subtipe B!astocystis pada

\34,514,050

lndividu dengan Diare dan Tanpa Diare dengan Menggunakan PCR

FK UN IV ERSITAS ATMAJAYA, JAKARTA 5

Frtra Mau!edi, SSos

Romanah

SpPK

Studi Protein DISulfide Isomerase Family A

104.627,000

Member 4 (PDIA4) pada Karsinoma Mammae: ldentifikasi Mutasi Gen PDIA4 sebagai lndikator pada Deteksi Oini Metastasis Kars!noma Mammae

6

FK UNIVERSITAS BAAW!JAYA, MALANG 1 Yu!ian Wlji Utami. SKp, MKes

WiwiK Agus�na. SKp. Ners

Dwi Setyorini, SKep, Ners

Ana Lutfia, SSos

Respon imun slgA mole!

138,400,000

sel
Titin Andn Wihasluti. SKp,

Satuman, SSi. MKes

Novi Kh11ia Firani, dr, MKes

MKes

Dyah Caturini, AMd

Optimalisasi dan Uji Potensi Mesenchymal

110.000,000

Stem Cei! (MSC) untuk Perbaikan Pankreas Pada Tikus Model Diabetes Mellitus yang Diinduksi Streptozotocyn

Page 1 of 6 .

·

Vfj

Hubungan Kadar Vrtamin 0 dengan Aklivasi Sel Dendritik dan Jum!ah Se! Th17 pada Pasien Lupus Eritematosus Sis;,emll<

FK UNIVERSITAS DIPONEGORO, SEMARANG

9

1

Ninung Rose Diana K. dr. SpA.

Adriyan Pramono, SGz. MSi -

MSiMed

Labbaika Maohda

Penganuh ln!ervensi Diet pada Fibrosis

Faozani

Cirrhosis Index (FC!) Penderita Non

145,228,000

Alcoholic Fatty Uver Disease (NAFLD) 10

, il 1l1i·

li II

2

Galuh Hardaningsih, dr

Suci Romadhona. MSiMed,

Adityo Agung Wibowo

SpA

Pengaruh Suplementasi Kapsul Ekstrak lkan Gabus (Ophior;ephalus striatus}

150.000.000

Dibandingkan lnfus Human Albumin pada Sindroma Nefrotik

11

3

Ratnasari Dwi Cahyanti, dr.

Putri Sekar Wiyati, dr,

MSiMed, SpOG

SpOG

Nur Za!it Aya S .. dr

Fitri Sulistyaningrum, SE

Hubungan Kadar Vitamin D dan Vascular

147,484,425

Endothelial Growth Factor (VEGF) dalam Memicu Progresifrtas dari Preeklampsia

Be rat 12

4

Eko Adhi Pangarsa, dr. SpPD

Nur Farhannah. dr, SpPD

Wiwik Lestari

Dyah Kusumaningrurn.

Kadar P Selection, ADAMTS13 dan faktor

SE

von Wilebrand, pad a gangguan hemostasis

147,9 20 ,000

penderita Leptospirosis dengan pendarahan

13

5

Awal Prasetyo, dr. MKes,

Henny Kartikawati. dr,

Vega Karlowee, dr.

Sekti BektJ Panca Putri

Perbandingan Faktor Resiko, Titer Antibodi

SpTHT-KL

MKes, SpTHT-KL

MSiMed. SpPA

Lestari, SPd

Serum Epstein Bar Virus, Ekspresi LMP-1

130,925,000

dan CD 99 antara Pen
dengan !ndividu Sehat Beresiko

14

FK UNIVERSITAS GADJAH MAOA, YOGYAKARTA 1 Hevt Wihadmadyat.ami, drh. Rizka Humardewayanti MSc Asdie, dr. SpPD-KPTl

Etty Widayanti, SSi.

Eli Supnyani

Pengembangan prototfpt kit diagnosis

150.000,000

Leptospirosis dengan menggunakan

MBiotectt

metode ELISA berbasis pada protein rekombinan Upl32 15

2

Narendra Yoga Hendarta. ST.

R. Ludhang Pradipt.a Rizl
MSiotech

dr, MBiotectl

Siti Helmyati. OCN. MKes

Sujiyanto

Pengembangan multiplex dipstik untuk

150,000,000

deteksi dini HIV-1 dan HBV berbasis kombinasi multiplex Reverse Transcript

�·�'I!·

Loop Media.ted Isothermal Ampliflcation (mRT-LAMP) dan Lateral Flow Oistick (LFD)

Page 2 of 6

vrti

I'

il l

�

'I'.'r:: • '�' ; 1S

.'; ,::•

'

' :J-'

-

3

Retno Ar•aningrum, Ora, MSi

Adam Hermawen. SFarm.

i; �-

l

•:

•' t

,j

Rirln Wldartl. SPd

MSc, Ap!

Pangembangan senyawa derivat kalkon

75,000,000

MPHKA sebagai agen ko-�emoterapi pada sel Kanker Payudara yang Resisten Doxorubicin

II

17

4

Shanti Ustyawatl. SSi, MSi

Widi Harta nto

Nita Elikawab. SSi, MSI

Potensl ekstrak etanol tsmu kunci

100.000.000

{Boesenbergia pandua r ta) sebagai agen kemoprovensi kanker kulit terinduksi UVB

111 FK UNIVERSITAS HASANUDDIN, MAKASAR 18

1

Nadirah Rasyid Ridha. dr. MKes, SpA

Sa'diyah MT, dr

Ufy Trlsnawaty,dr

Ely. AMd

19

2

Andl Yasrnin Syaul::i. dr. MSc

Anang S .. dr, MPPM

Abdul Salam. SKM, MKes

Muh. Nur Hasan Syah.

Pengaruh Pemberian Tepung Daun Kelor

SGz

kepada lbu Hamil ternadap Pencegahar1 Kerusakan DNA lbu dan Berat Lahlr Bayi

20

3

Mardiana. dr

Nur Ashari. dr

Ni Made Owi Ast1 Lestari. dr Emma. AMd

Hubungan Antar Kadar Hepcldin dan Status Besi dengan lnflamasi pada Anak Obesitas

Pengsruh pemberian kombinasi Fish Oil

95,178,000

149,090,750

145,790.000

dan kurkumin pads Perbaikan Resistensl Insulin penderita prediabetes

2i

FK UNIVERSITAS INDONESIA, JAKARTA 1 Erfi Prafiantini, dr, MKes

Nurul Ratna, dr, MGizi

RR. Dyah Purnamasari. dr,

Purwanto

SpPD

Pengaruh Pemberian Makanan Uji ±350

Kalori tarhadap Kadar Horman GLP-1 Endogen pada Subjek OM Tipe 2 dan Non

149.990,000

OM

22

2

Esthika Dewiasty. dr, SpPD

Kun\joro Harimurtl, Dr, SpPD

Siti Rizny Fltriana Saldi. Apt. Winda Maharani, SE MSc

Distribusi Serotype Streptococcus

145.309,641

pneumoniae pada Paslen HIV di RSCM Jakarta

23

3

Rahyussalim, dr. SpOT(K)

Trl Kumi awatl. SSi

Arni Diana Fitri. drh

Juwariyah, SE

ldentifikasi Marker Sei Osteoblast pada

Defek Vertebra Spondi!!tis TB Kelinci yang

149.996,566

d'rterapi Sel Punca mesenkimel sebaga1

Ianda teJjadinya diferensiasi sel menuju pemoentukan tulang baru

24

4

Nadia A'f'J Mulansari. dr, SpPD

Purwanto

Fransiska Hardi, dr

Perbandmgan antibodi anti glikaprotein

pe.rmukaan trornbosit dan anti -HLA pads

149,895.000

purpura trombositoper.ia imun primer dengan trombositopenia pada infeksi virus l'lepatitiaC

Pogo 3 of 6

. : £

b(

��� ·II

gen Manganese superoxide dismutse (Mr:SOO) pada sel punca kanker payudara : dampaknya terhadap stres oksidatif dan pluripotensi

26

6

Wulyo Rajabto. dr. SpPD

Adi Surya Komala, or

Purwa.nto

Candra Bumi, dr, MSi

Nindya Shinta, dr, MKed

Sumacii.AMd

Peran E.kstrak Buah Pare (Momordica charantla) terhadap Regeneresl Sel E ndotel Pembuluh Oarah pada Obesitas: Studi pada Tikus Wister Jantan dengan Diet Atherogen!k

149,996,100

M. Arifin, SSos

Peran Crab dalam proses Adipogenesis melaiui aktivesi P70s6ki oleh mammalian target ofR apamycin complesx 1 (mTORC1)

100,000.00 0

Yunie Satitri. SSi

Potensi Ekstrak Etanol Sat ang Dracontomelon dao sebagal Antibakteri,

150,000,000

27

FK UNIVERSITAS JEMSER, JEMBER 1 Azham Purwandhono. dr

28

FK UNIVERSITAS LAMSUNG MANGKURAT, BANJARMASIN Eko Suhartono. Drs. MSi i Triawanti. dr. MKes

29

Kaitan Ekspresi Receptor Activaior of

Lisnawati, dr, SpPA(K)

74.387,956

Nuclear Factor-k(l (RANK) dan Osteoprotegenn pada Sei-Sel Kanker Payudara Pra-Terapi serta Trombosltosis Pre-Terapi dalam kaitannya dengan Kejadian Metastasis Tulang

FK UNIVERSITAS MULAWARMAN, SAMARINDA

1

Nurul Hasanah. dr. MKes

Yuniati, dr, MKes

Antloksidan, dan lmunotimu!ator

30

FK UNIVERSITAS PADJADJARAN, BANDUNG Sumartini Dewl. dr, SpPD-KR. Lazuardr Dwipa, dr. SpPD 1 MKes

31

2

Si:Vita Fit; R•swari . di, MKes

Rift(y W Rachman, MSi

!ceu Dimas Kulsum, dr,

Resru Pudjani

Hubungan antara lndek.s Mass a Tllbuh (IMT) dan lnftamasi Kronik S istemik dengan Kepadatan Massa Tulang pada Lakl-laki usia lanjut dengan penyakit paru obstr<�ktJf kronik

136.470.000

Restu Pud1ani

Pengembengan alat uji ELISA berbasis lgM untuk mendeteksi infeksi virus Chikungunya

149,942,400

SpPD

Yovita Hartantrl, dr. SpPO

P•ge4of6

X

32

FK UNIVERSITAS SEBELAS MARET, SURAKARTA 1 Kusmadewi Eka Damayanto, dr Yuliana Hen Suselo, dr

Erma

Oamayanti. AMd

149.914,000

Analisis Genetik Matnptase-2 sebagai Usaha Mencaoi Penyebab

Ketidakberhasilan Suplementasi Besi pada lbu Hamil FK UNIVERSITAS SYlAH KUALA, ACEH 33

1

Tristia Rinanda, dr, MSi

Yunita

Artiny.

dr, Sp P.

Rima Ristianti. SSI

Analisls Motekuler Resistensi Isoniazid. Streptomicin dari isola! Mycobacterium tuberculosis patfa penderita tersangka

paru resisten ganda di Aceh FK UNIVERSITAS UDAYANA, OENPASAR I

34

35

2

Wayan Suardana, dr+o, MSi

Komang Januartha

Pulra

Pinatih, dr, MKes

Made Agus Hendrayana, or.

MKed

Zainul MuttaQin. Drs

124,011,000

Rifampisin, Pirazinamid, Etambutol, dan

MKes

Ni Luh Ketut Ayu Ratnawati, Ni Ketut Partiwi dr

TB

Pengembangan Probe Diagnostik Berbasls

Kfoning Gen untuk Oeteksi Shiga Like Toxin·

150.000.000

2 Proctucing Escherichia coli sebagai Agen Zoonosis Penyebab Gagal Ginjal

Ni Made Adi Tarini. dr. SpMK

Luh Putu Virra lndah Perdanawati, SE

Kara.kterisasi molekuler molekul adhesin

Helicobacter pylori menggunakan kultur sel

144,340, 000

lambung mencit (Mus musculus) dan sel

Caco-2 FKIK UNIVERSITAS JEND. SOEDIRMAN, PURWOKERTO 36

1

Agung Saprasetya Dwi

Laksana. Vitasari lndriani, dr

Pengaruh Polimorfisme Gen Na+/K+ ATP­ Ase o2, Reseptor Vitamin D serta 0-ALAD terhadap Kejadian Hipertensi Akibat

Sri Lestari. SSi. MSi

dr, MScPH

136.000,000

Paparan Pb pada Awak Angkutan Kota Purwokerto 37

2

Pugud Samodro, dr, SpPD

Tlen Tisnowati. SP

Joko Setyono, dr, MSc

Polimorfisme Gena Transcription Factor 7 -

140.363.34,

Like 2 (TCF7L2), Fat Mass and Obesity

Associated (FTO) dan Potassium lnwardly­ Reactifying Channel Sub Family J Member 11 (KCNJ11)

pada Pengidap OM Tipe 2

Obes 38

3

Filranto Arjado. dr. MKes

Saefuddin 'Azlz. SSi, MSi

Alii Muntafiah, dr

Titik lndrawati. AMd

Efek potimorfisme

gena nitrit oksida

sintase3 (NOS3) dan matriks

118,221.850

metaloproteinase-9 (MMP-9) terhadap peningkatan resiko aterosklerosis pada pasien dengan hipertensi

Page 5 of 5

'XI

;!_ _

LPPM UNIVERSITAS AIRLANGGA, SURABAYA 39

1

Luh Ade Wilan

Krisna. SSi.

MKed

Laksmi Wufandari, c!r,

Aldise Mareta Nasri, SKM

Zeni Ramila. SE

Moc!lammad Amin, SSI

Wltn Uta'l\1

SpP{K)

.. , . , .

,

Ekspresi CD95 dan Apoptosls pada Sel

yang Terinfeksi Virus Influenza A subtipe

124.453.500

H1N1 dan HSN1 (Studi lnvitro)

40

2

Priyo Budf

Purwono,

dr

Rendra Bramanthi, dr

Studi Analisis Molekuler Genotipe dan

144,930,000

Subnpe serta Vaccine escape Mutant virus Hepatitis B pasca Program fmunisasi anak di Sorong, Indonesia

41

LPPM UNIVERSITAS SEBELAS MARET, SURAKARTA Yulia San. SSi, MSi Suyatmi, dr, MBiomed

Lely Saptawa i t.. dr. SpMK

Sari Fi:riani, AMd

Protein Rekombinan Virus hepatitis B

(HBc) - Virus Hepatitis C-Core

Core

150,000.000

yang

berpolensi membentuk Virus hke panicle

I

1: ·

(VLP)

42

RSU KUPANG 1

Simeon

Pe nggoam, SSi

Marselinus Lege Nur. SKM

Theofilus Rengga, SSI

Dwi

Diana Sari

Penderita TB dengan MDR MTB di Kupang

149,541,000

dan distribusf berbagaJ pofimorphism pada

gen TLR2, VDR2, NRAM1, IFN,TNF.IN!'GR

da1am panel infeksi-immunologl metOde PCR Beads

'

1!t---

TRIHONO

Pag�6o!6

xii

KATA PENGANTAR Laporan

ini

disusun

sebagai

pertanggungjawaban

pelaksanaan

penelitian

RISBIN IPTEKDOK tahun anggaran 2012 yang berjudul "Potensi Ekstrak Etanolik Temu Kunci

(Boesenbergia pandurata)

sebagai Agen Kemoprevensi Tumorigenesis

Kulit Terinduksi UV-B" Dengan selesainya penyusunan laporan ini, tim peneliti mengucapkan terima kasih kepada:

1. Badan

Penelitian

dan

Pengembangan

Kesehatan

Kementrian

Republik lndonesis yang telah membiayai penelitian

Kesehatan

ini melaJui program

RISBIN IPTEKDOK 2011 dan 2012

2. Seluruh anggota tim panel pakar dan reviewer RISBIN IPTEKDOK yang telah membina dan memberikan

saran serta bimbingan

untuk keberlangsungan

penelitian ini.

3. Pengelola Program Studi Bioteknologi UGM yang telah memberikan ijin dan kemudahan mengikuti program RISBIN IPTEKDOK.

4. Pimpinan Fakutas Kedokteran UGM yang telah mengijinkan untuk berafiliasi dalam program penelitian ini.

5.

Prof. Dr. Sismindari, SU., Apt. sebagai supervisor riset.

6.

Dr.rer.nat Yosi Bayu Murti, M.Si., Apt., Prof.dr.Sofia Mubarika, M. Med.Sc. Ph.D., dan

Drh. Sitarina

Widyarini, MSc. Ph.D. yang telah memberikan

saran,

masukan, dan diskusi untuk k:elancaran penelitian ini. 7.

Staf LPPT UGM, Laboratorium Farmakologi, Patologi Anatomi FKU UGM yang telah mcmbantu sarana dan teknis penclitian.

8.

Seluruh pihak yang telah membantu pelaksanaan penelitian ini. Tim penyusun berharap laporan penelitian ini dapat menambah khasanah

penelitian dan bermanfaat terutama untuk kemajuan penelitian di bidang kesehatan. Yogyakarta,

Desember 2012

Ketua tim penyusun Shanti Listyawati

iv

ABSTRAK Rimpang temu kunci (Boesenbergia pandurata) mengan aung senyawa-senyawa aktif yang berpotensi dikembangkan sebagai agen kemoprevensi kanker. Penelitian ini bertujuan mengkaji potensi ekstrak etanolik temu kunci sebagai agen kemoprevensi karsinogenesis kulit dengan memfokuskan pada kemampuan ekstrak dalam melindungi dari inflamas� supresi imun, kerusakan DNA dan terjadinya tumorigenesis pada model kanker kulit mencit Balb/c terinduksi UV-B dengan mempelajari pada ekspresi COX-2, JL-1 0, fL-12, CPDs, dan tumorigenesis kulit. Rimpang temu kunci diekstraksi dengan metode maserasi dalam etanol 96%. Ekspresi COX-2, IL-10, fL-12, dan CPDs diamati dari hasil pewarnaan imunohistolcimia pada jaringan kulit punggung pasca diberi paparan UV-B akut. Uji tumorigenesis dilakukan selama 22 minggu, paparan UV-B dosis tunggal 0,4 J/crn2/hari (60x paparan, 5 kali per minggu) Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanolik temu kunci rnampu menurunkan ekspresi COX-2, IL-12, dan CPDs. Pada hasil uji tumorigenesis menunjukkan penurunan angka kejadian dan muJtiplasitas tumor, serta penghambatan munculnya nodul tumor.

Kata kunci: tumorigenesis.

Boesenbergia

pandurata,

kemoprevensi,

v

IL-1 0,

COX-2,

CPDs,

DAFTAR lSI Judul....................................................... ......... ........ :................ . ..... Halaman 'Pengesahan ............................................................................ Susunan Tim Penel iti........................................................................... Surat Keputusan Penelitian.................................................................... Kata Pengantar................................................................................... Abstrak Daftarlsi................................................................. ....... � ................. Daftar Tabel........................................................... .............. ............ Daftar Gambar... ... . . . .. . .. .... ........... . . . .... ...... . . . . .. .. .... ..... ...... .... . .. . ..... .. . ... Daftar Lampiran.............................................................................. . ... I. PENDAHULUAN....................................................................... .... A. Latar Belakang .......................................................................... B. Permasalahan........................................................................... .

.

............... . . . . . . . . . . . . . . . ......... . . . ...... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . ..

.

.

JJ. TINJAUAN PUSTAKA.................................................................... A. Karsinogenesis.............................................................. .............. B. Karsjnogenesis KuJit............. .............................................. .......... C. Reactive Oxygen Species (ROS) dan Kanker Kulit............................... D. Kanker Kulit............................................................................ E. Inflamasi, Supresi Imun, clan Kanker kulit........................................ F. Temu Kunci [Boesenbergiapandurata (Roxb.) Scheltr]........................

TJI.

TUJUAN DAN MANFAAT A. Tujuan B. Manfaat

XV xv

xv I 1 3 4 4 5 7

8

9 9 11 11 11

IV. METODE PENELITIAN................................................................... A. Bahan dan Alat. ......................................... ................................. 1. Bahan Penelitian........................ ... ......... ............ .... ............. .... 2. Alat penelitian... .... .. ... .... ........ ...... ..................... ... .... ........ .. ... B. Cara KeJja.............................. ......... ... ......... ............... ............... 1. Pembuatan Ekstrak Etanolik Temu Kunci (EETK)...... ....... .... ........ .. 2. Uji Paparan Akut UV-8 pada Hewan Uj i............... ......... ........ ...... a. Pengelompokan Hewan Uji...................................................... b. Perlakuan Hewan Uji........................................................ ... c. Pembuatan Preparat Histologis untuk Pengamatan Ekspresi COX-2, IL-lOdanlL-12........................................................................ d. Pembuatan Preparat Histologis untuk Pengamatan Ekspresi CPDs.............................................................................. .

3.

ii iii iv iv xii xiii

Uj i Kemoprevensi pada Tumorigenesis Kutit............... ................... a. Pengelompokan Hewan Uji................................................ ... b. Perlakuan Hewan Uji....................................................... ....

vi

12 12 12 12 12 12 12 12 12 13 14 15 15 15

HASJL

V.

17

A. Kemampuan EETK dalam Melindungi terhadap lnflamasi B. Kemampuan

EETK daJam Melindungi

dari Supresi Imun

·

17 18

C. Kemampuan EETK dalam Melindungi KerusakanDNA

20

D. Aktivitas Kemoprevensi EETK pada Tumorigenesis Kulit

21

VI. PEMBAHASAN

24

A. Kemampuan EETK dalam Proteksi terhadap lnflamasi

24

B. Kemampuan EETK dalam Melindungi dari lmunosupresi

25

C. Kemampuan EETK dalam Melindungi KerusakanDNA

25

D. Aktivitas Kemoprevensi EETK pada Tumorigenesis Kulit

26

VTJ. VIII. JX. X.

KESIMPULANDAN SARAN

28

UCAPAN TERIMA KASIH

29

DAFTAR KEPUSTAKAAN

30

LAMPIRAN

34

vii

DAFTAR TABEL Tabel 1. Distribusi COX-2 pada Jaringan Kulit.. . ...... . .. ... :. . . . . . . . . .. . . . . . ... Tabel 2. Ekspresi COX-2pada Jaringan Kulit Pasca Paparan UV-B...........

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Tabel 3. Distribusi IL-10 pada Jaringan Kulit...... .. . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . ......... Tabel4. Ekspresi IL-10 pada Jaringan Kulit Pasca Paparan UV-.8. . . . . . ......... Tabel 5. Distribusi IL- 12 pada Jaringan Ku1it..... . . . . . . . ...... ................... Tabel 6. Ekspresi lL-12 pada Jaringan Kulit Pasca Paparan UV-B............ Tabel 7. Distribusi CPDs pada Jaringan Kulit.. . . . . .. . . . . .. . . . .... ..... . . . . . . . . . . Tabel 8. Ekspresi CPDs pada Jaringan Kulit Pasca Paparan UV-B

7.

8.

17

18 18 19 19 19 19 20

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Habitus (A) dan rimpang (B) tanaman temu kunci (Boesenbergia

1.

pandurata (Roxb) Schelter)).....

2. 3. 4.

....... . . . . . . . . . . . . ....... . . . . . . . . ............... ....

Gambar 2. Desain perlakuan hewan uji..... .... . . . . . ..... . . ............... ... ...... Gambar 3. Desain perlakuan pada uji tumorigenesis. . . . . ............. . .......... Gambar4. Ekspresi COX-2 pasca paparan UV-B akut. . . ..... . . . . . . . . . . .. . . . . . . Gambar 5. Ekspresi JL-10 pasca paparan UV-B akut............... ... . . . ... ..... Gambar 6. Ekspresi 11-12 pasca paparan UV-B akut Gambar 7. Ekspresi CPDs pada kulit mencit Balb/c terinduksi UV-.8.......... 20 Gambar 8. Kulit hewan uji pasca paparan UV-B kronik...... .................... 21 Gambar 9. Perubahan histologis akibat paparan UV-B kronis........ ........... 22 Gambar 10. Pertumbuhan nodul tumor. . . . . . . . . . . . . ....... ............ . . ... . . . . . ..... 22 Gambar 11. Angka kejadian kanker pasca perlakuan dengan UV-B...... ... . . . 23 Gambar 12. Multiplasitas tumor pada hewan uji. . . . . . ... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ...... 23 ,

5.

6. 5.

6. 7.

8. 9. 10.

10 13 16 17 19 19

DAFTAR LAMPIRAN

1 . Lampiran-1. Ethical Clearance ..2. Lampiran-2. Laporan Realisasi Anggaran 3. Lembar Pengesahan

viii

.

I. PENDAHULUAN A.

Latar Belakang

Indonesia sebagai negara tropis mendapatkan paparan sinar matahari yang cukup tinggi sepanjang tahun. Sinar matahari bermanfaat pada

berJ:agai

aspek kehidupan,

namun di sisi lain juga mempunyai efek negatif. Paparan radiasi sinar ultraviolet (UV) yang mengenai kulit dapat menyebabkan terbentuknya radikal bebas dan

reactive

oxygen species (ROS) (Norins, 1962 cit Lee et al., 2007). Apabila jumlah radikal bebas dan ROS berlebihan sehingga sistem antioksidan alami dalam tubuh tidak dapat meredamnya, maka dapat mengakibatkan stres oksidatif. Manifestasi stres oksidatif ini muncul dalam bentuk gangguan pada kulit, yaitu dan

sunburn,

inflamasi, kerusakan DNA

supresi sistem imun, yang selanjutnya dapat menyebabkan tetjadinya penuaan di.ni,

basal cell carcinoma, squama cell carcinoma, dan eta/., 2007;

et al., 2007;

Lee

Timares et.al., 2008).

Insidensi kanker kulit rneningkat dalam Report

melanoma (Katiyar

menyatakan bahwa

insidensi kanker kulit

di

tahun terakhir ini.

World Cancer

radiasi UV dari matahari merupakan penyebab

USA (Timares

kulit menempati

urutan

payudara

dan kanker kulit

(11%),

10

Di Indonesia, insidensi

et al., 2008).

ketiga terbanyak setelah kanker leher rahirn (7%)

(Soehartati,

2011).

(17%) ,

90%

kanker

kanker

Meningkatnya intensitas

paparan radiasi UV ke permukaan burni salah satunya dipicu oleh semakin menipisnya lapisan ozon yang berfungsi sebagai penyaring radiasi UV, hal ini dapat berdampak cukup serius terhadap kehidupan organisme di pennukaan burni. PeiUbahan gaya hidup juga merupakan faktor yang mendukung peningkatan insidensi kanker kulit, polusi, diet yang tidak rnenyehatkan, serta kecenderungan untuk memiliki kulit putih dengan cara mengurangi melanin yang secara fisiologis juga mengurangi kulit,

barrier

paparan UV pada

rnenyebabkan peningkatan kerusakan yang ditimbukan paparan UV matahari

(Erni, 2010). Radiasi ultraviolet matahari dibagi dalam tiga kelompok yaitu: ultraviolet-A (UV-A) memiliki panjang gelombang gelombang

290--320

nm,

320- 400

run,

uJtraviolet-B (UV-B) panjang

dan ultraviolet-C (UV-C) panjang gelombang

200-290

Sinar UV-A yang mencapai permukaan bumi sebesar 94-96%, UV-B sebesar sedangkan

lN-C

run.

3-6%,

hampir tidak ada yang mencapai permukaan bwni karetla semua

diserap olch lapisan ozon (Timares

et a/., 2008).

1

Ultraviolet-B berperan penting dalam

menyebabkan karsinogenesis kulit. Radiasi UV-B dapat menyebabkan kerusakan pada molekul DNA, protein dan lipid, serta menjadi karsinogen yang berpengaruh pada inisiasi karsinogenesis (Soehnge et al., 1997). Berbagai upaya telah di.lakukan untuk mengurangi dap. mencegah timbulnya kerusakan seluler akibat radiasi diaplikasikan

UV,

diantaranya pemakaian pelindung kimiawi yang

topikal. Aklllr-akhir ini banyak dikembangkan upaya pencegahan

secara

roelalui baban atau senyawa suplemen yang dikonsurnsi melalui diet. Senyawa bahan alam atau sintetis yang diaplil
oral atau topical

untuk mencegah,

mengurangi dan menghentikan karsinogenesis ini disebut agen kemoprevensi kanker (Surh. 2003 dan Wright

et al.,

2006). Aktivitas kemoprevensi

dapat melalui

mekanisme antioksidan, penetralan dan ekskresi senyawa karsinogen, peningkatan kemampuan

DNA repair

atau melalui

(Beliveau and Gingras, 2007; Katiyar et al.,

2007, Surh andNa, 2008; Walaszek et al., 2004). Indonesia memiliki biodiversitas

tanaman

yang sangat melimpah. Dalam hal

kekayaan biodiversitas ta_naman, Indonesia menduduki peringkat nomer dua setelah Brazil, dengan demikian eksplorasi senyawa bioaktif dari

tanaman

yang berpotensi

sebagai agen kemoprevensi kanker sangat potensial untuk dikembangkan. Salah satu tanaman yang berpotensi untuk dikembangkan sebagai agen kemoprevensi kanker kulit adalah temu kunci

(Boesenbergia pandurata,

(Roxb.) Schelter). Tanaman anggota

familia Zingiberaceae ini tumbuh melimpah di

Asia termasuk Indonesia (Heyne,

1978). Rimpang temu kttnci yang dikenal dengan nama.finger root (Inggris) atau chai

kra­

(Thailand) dimanfaatkan sebagai pemberi aroma dan rasa masakan, secara empiris

juga digunakan sebagai obat tradisional untuk mengobati demam, bengkak, dan perut kembung (Hasnah et a/., 1995). Rimpang temu kunci mengandung senyawa aktif yang dapat bekerja sebagai antioksidan,

antiinflamasi,

antimuta genik,

sitotoksik,

antiproliferatif,

induktor

apoptosis, dan antiangiogenesis (Kirana et al., 2007; Morikawa et al., 2008; Shindo al. ,

2006; Tewtrakul

et a/.,

2009; Tuchinda et

al. ,

2002; Yun

et al. ,

et

2006), sehingga

temu kunci berpotensi untuk dikembangkan sebagai agen kemoprevensi kanker. Penelitian ini untuk mengkaji potensi ekstrak temu kunci sebagai agen kemoprevensi khususnya pada kanker kulit.

2

m

!t L k . 2 1. .

hI

B. Permasalahan Agen kemoprevensi kanker merupakan senyawa yang d1dapat dari bahan alam atau sintetis yang dapat mencegah,

menunda,

dan menghambat karsinogenesis

K.arsinogenesis terdiri dari tahapan inisiasi, promosi, dan progresi (Surh, 2003). Adanya .

karsinogen yang mengenai tubuh a.kan memicu timbulnya perubahan-perubahan seluler, dapat berupa meningkatnya ROS

(Reactive

oxygen species) dan radikal bebas,

timbulnya respon inflamasi, supresi imun, dan kerusakan DNA. Apabila sistem homeostasis �buh tidak dapat mengatasi kerusakan seluler akibat paparan karsinogen tersebut, maka dapat menginisiasi karsinogenesis (Browning and Horton, 2004). Agen kemoprevensi kanker diperuntukkan bagi orang normal terutama bagi yang berisiko tinggi terkena kanker (fsao et al., 2004). Populasi yang beresiko tinggi rnenderita kanker kulit adalah rnereka yang banyak menerirna paparan radiasi UV, misalnya mereka yang memilik.i ak:tivitas tinggi di luar ruangan. Pada penelitian ini ak.an dikaji potensi temu kunci sebagai agen kemoprevensi kanker kulit

dengan

memfokuskan pada:

1. Apakah ekstrak etanolik

temu kunci marnpu melindungi dari efek

inflamasi

yang disebabkan paparan radiasi UVB, dengan mempelajari pengaruhnya pada ekspresi siklooksigenase-2 (COX-2). 2. Apakah ekstrak etanolik temu kunci mampu melindungi dari efek imunosupresi yang disebabkan paparan radiasi UVB dengan mempelajari pengaruhnya pada:

3.

a.

ekspresiiL-10

b.

ekspresi IL-12.

Apakah ekstrak etanolik temu

kunci mampu melin.dungi dari kerusakan DNA

yang disebabkan paparan radiasi UVB dengan mempelajari pengaruhnya pada ekspresi cyclobutane pirimidine dimers (CPDs) 4.

Apakah ekstrak etanolik temu kunci mampu mencegah

karsinogenesis yang

disebabkan paparan radiasi UVB dengan mempelajari pada insidensi dan multiplasitas kanker kulit.

3

U.

TINJAUAN PUSTAKA A. Karsinogenesis

Karsinogenesis merupakan

proses terbentuknya

kanker.

Penyalcit kanker

ditandai oleh adanya pertumbuhan dan penyebaran sel yang tidak terkontrol akibat . terganggunya mekanisme regulasi pada proliferasi dan diferensiasi sel (Weinberg, 2007). Gangguan mekanisme regulasi ini melibatkan perubahan genomik: sehingga

terjadi mutasi yang menyebabkan rneningkatnya ekspresi dan aktivitas onkogen serta menurunnya efr...spresi dan aktivitas tumor supressor genes (Soehnge et a/., 1 997; Tsao et a/., 2004; Weinberg, 2007). Onkogen berfungsi mengatur proliferasi dan deferensiasi

sel, sedangkan tumor supressor genes merupakan regulator negatif untuk pertumbuhan (Soehnge et al., 1 997). Karsinogenesis mencakup rangkaian perubahan seluler dan molekuJer yang terdiri dari tiga tahapan yaitu inisiasi, promosi dan progresi (Surh, 2003; Tsao

et

al.,

2004; Walaszek et a!., 2004). Tahap inisiasi berlangsung cepat, mencakup paparan agen

karsinogenik, distribusi dan penyebarannya ke jaringan atau organ tempat terjadinya ak:tivasi metabolisme dan detoksifikasi, serta ke DNA target sehingga menimbulkan kerusakan genotoksik (Surh, 2003; Tsao et al., 2004). Inisiasi juga mencakup mutasi DNA sehingga dapat menyebabkan aktivasi onkogen dan inaktivasi tumor suppressor genes (Walaszek et al., 2004). Apabila tidak diil.'lrti paparan karsinogen berikutnya, sel

yang terinisiasi tidak akan berkembang menjadi kanker, tetapi perubahan selulernya bersifat irreversible karena akan menetap selama kehidupan sel (Soehnge et a/., 1997; Tsao et al., 2004; \Veinberg, 2007). Kecenderungan terjadi inisiasi meningkat seiring bertambahnya umur, intensitas paparan karsinogen, dan predeposisi genetik ( Dlugoz and Yusfa, 1993).

Tahap promosi berlangsung lebih lama dan reversible (Surb, 2003; Tsao et al., 2004; Walaszek et al., 2004). Tahap promosi melibatk.an mekanisrne epigenetik (Tsao et al., 2004) dicirikan dengan proliferasi sel preneoplastik yang sangat cepat dan

terakumulasi membentuk benign tumor, untuk mencapai pembentukan benign tumor diperlukan promoting agent yang cukup (Muhtar and Elmets, 1996

cit Vaid

and

Katiyar, 2010; Surh, 2003; Walaszek et al., 2004). Tahap terakhir karsinogenesis adalah progresi, yang mencakup kerusakan genetik yang menghasilkan perubahan benign tumors menjadi malignant neoplasms

4

yang dapat berinvasi umumnya bersifat

dan metastasis ke tempat jauh (Walaszek, 2004). Progresi

irreversible (Tsao et al., 2004) Radiasi UV khususnya UV-B

merupakan karsinogen yang dapat berperan

sebagai inisiator maupun promotor

karsinogenesis (Soehnge et al., 1 997).

B. Karsinogenesis Kulit Karsinogenesis kulit dapat dipicu oleh agen kimiawi maupun agen fisik. Radiasi UV khususnya UV-B merupakan karsinogen fisik yang dapat berperan maupun promotor karsinogenesis (Soehnge reseptor biologis (kromofor) yang

berupa

et a/., 1997). Radiasi UV diterima oleh

akan langsung mengabsorbsi energi radiasi UV dan

menimbulkan perubahan konformasi atau penanda te.Jjadinya in1siasi

sebagai inisiator

respon

struktur. Perubahan molekul

ini merupakan

kerusakan seluler. Respon seluler dapat terlihat

erythema, sunburn dan supresi imun (Katiyar et at., 2010). Molekul reseptor penerima radiasi UV berupa

dan DNA.

trans-uronic acid (trans-UCA)

Trans-UCA banyak terdapat pada stratum corneum dan mengabsorbsi

gelombang pendek UV-B untu.k mengurangi penetrasi ke lapisan k:ulit yang lebih dalam.

Radiasi

UV

mengisomerisasi

trans-UCA menjadi

berpotensi menekan sistem i.mun (Timares

cis-UCA,

isomer ini

et al. , 2008). Molekul penerima radia.'ii

cahaya selain trans-UCA adalah DNA. DNA mengandung kromofor yang dapat mengabsorbsi

UV-B

dengan

k:uat.

Kromofor

tersebut berupa

cine in

aromatik

heterosiklik pada basa nitrogen. Interaksi antara UV-B dengan DNA menghasilkan senyawa yang disebut fotoproduk. Fotoproduk tersebut adalah

cyclobutane pyrimidine

dimers (CPDs) dan pyrimidine 6-4 pyrimidones (Ravana et al., 2001). Cyclobutane pyrimidine dimmers dibentuk dari atom karbon C-4 dan C-5 pirimidin yang berdekatan, ikatan rangkap yang menghubungk:an mengalami saturasi membentuk 4 cincin siklobutil, sehingga menghasilkan mutasi C7T dan CC7TT (Ravanat

et a!., 2001). Senyawa 6,4-photoproduct bukan merupakan cyclobutane

dipyrimidine, molekul ini dibentuk dari ikatan kovalen antara dengan

C-4 pirimidin tetangganya.

Adanya dimer

C-6

dari

pirimidin

ini mengganggu proses replikasi

dan transkripsi DNA. Hasil penelitian menu.njukkan bahwa T-T

cyclobutane dimer

yang berada pada sekuen promoter mempakan inhibitor pengikatan faktor transkripsi (Tommasi

et al., 1996 cit Soehnge et a!., 1997) dan penelitian Donahue et al. 1 994

melaporkan bahwa pirimidin dimer

dalam

5

rantai DNA

yang ditranskripsi dapat

menyebabkan pema�angan pada transkripsi DNA terhenti, akibat lebih lanjut adanya CPDs dapat mempengaruhi siklus sel (Soehnge et al., 1997). Jika kerusakan DNA akibat paparan sinar UV tidak diperbaiki, maka dapat menja.di mutasi permanen pada sekuen DNA, jika terjadi p�a DNA gen-gen yang berperan dalam pcngaturan pertumbuhan dan perkembangan sel dapat menyebabkan Penelitian kanker kulit pada manusia dan

karsinogenesis (Soehnge et a!., 1 997).

mencit, menunjukkan adanya mutasi p53 khususnya pada posisi pirimidin, terjadi substitusi basa CT atau CCTT dengan frekuensi yang tinggi. Mutasi akibat paparan UV ini berupa CT dan CCTT dan ini dikenal sebagai penanda mutasi akibat paparan sinar UV ( UV

signature mutations), bentuk: mutasi ini tidak dijumpai pada mutasi yang

diinduksi karsinogen kimia. Lesi T-T juga berperan dalam pembentukan mutasi N-ras ditemukan pada tumor imbas UV pada rodensia (Ravanat et a!., 2001). Mutasi p53 merupakan respon terhadap stres seluler termasuk kerusakan DNA, hipoksia, ketidakseimbangan nukleotida, stress oksidatif dan kerusakan spindel.

Photodarnage akibat paparan UV-B dapat diperbaiki melalui proses nucleotide excision repair (NER) yang dapat cepat memperbaiki transcription-coupled untuk mengaktifkan ekspresi bagian genomik (Soehnge et a!., 1997). Gen p53 ikut dalam perbaik:an DNA melalui berbagai mekanisme termasuk kontrol checkpoint siklus sel yang mengatur komponen sistem DNA repair, sehingga

memtmgkinkan

perbaikan DNA yang rusak.

Jika kerusakan DNA sangat banyak dan tidak dapat diperbaiki, sel akan mengalami­ apoptosis.

UV-B

Radiasi

dapat

menghambat

pengikatan

p53

dan

aktivitas

transkripsional yang mengakibatkan penurunan fungsi p53 (Soehnge, 1 997). Penurunan fungsi p53 dan lambatnya perbaikan photoproduct pada kodon tertentu akan menyebabkan indulr�i dan akumulasi mutasi p53, terutama mutasi karena transisi C�T atau CC�TT. Pada paparan sinar UV yang berulang dan kronis, keratinosit yang mengandung gen p53 yang telah benuutasi menjadi resisten terhadap apoptosis. Pada kondisi normal, keratinosit yang rusak oleh paparan sinar UV-B akan dieliminasi oleh interaksi

Fas/Fas-ligand.

Pada

kanker

kulit,

regulasi

jalur

1m

terganggu

(Ana.n.thaswamy, 2004). Peningkatan ekspresi gen p53 akan menginduksi gen-gen target, diantaranya adalah GADD45. Protein GADD45

berperan dalam cell cycle,

stabilitas genomik, perbaikan nucleotide exc sion, i asesibilitas kromatin dan apoptosis (Sakamoto et a/., 2009),

6

-

-

-

---

C. Reactive Oxyge1r Species (ROS) dan Kanker KuJit Paparan radiasi UV yang mengenai kulit dapat mengakibatkan terbentuknya radikal bebas dan Radikal bebas

reactive oxygen species (ROS) (Norins, 1 962 cit Lee et al., 2007).

dan ROS merupakan metabolit yang sangat

reak?f,

terdiri dari hidrogen

peroksida (H202), radikal hidroksil (OK) dan radikal superoksida (02} Secara alami radikal bebas dan ROS juga dihasilkan tubuh dari metabolisme asam lemak oleh perolr..sidase, metabolisme senyawa xenobiotik oleh mikrosom sitokrom

450, stimulasi

fagositosis oleh patogen, metabolisme arginin, lipopolisakarida, dan aktivitas enzirn pada jaringan spesifik. Pada kondisi normal, radikal bebas dan ROS akan dibersihkan oleh

sistem

antioksidan

superoksidismutase,

alami

dalam

katalase, dan

tubuh

glutation

yaitu

dengan

peroksidase,

juga

antioksidan non enzimatik yaitu vitamin dan flavonoid (Lee, et

aktivitas

enzim

oleh penangkap

al., 2007). Apabila

kondisi keseimbangan radikal bebas dan ROS dengan sistem antioksidan terganggu dengan adanya kondisi yang l.idak normal misalnya akibat paparan polutan, radiasi UV, asap rokok, dan stres, maka dapat menimbulkan stres oksidatif sehingga menimbulkan ketusakan pada makromolekul seluler (Browning

and Horton, 2004).

Radikal bebas

dan ROS dapat berinteraksi dengan membran sel dan menyebabkan peroksidasi lipid, kerusakan protein dan routasi DNA (Lee,

et al., 2007, Rowe et al., 2008), selain itu

ROS yang berlebihan juga dapat menyebabkan ketidakstabilan genetik dan resisten terhadap apoptosis (Junkins-Hopkins,

2010).

Radikal bebas dan ROS merupakan molekul yang memiliki dan hanya

menimbulkan efek

lokal,

tetapi

ROS

mudah

half-life

pendek

berikatan dengan

polyunsaturatedfatty acids (PUFAs) pada membran sel (Browning and Horton, 2004). lkatan antara ROS den gao PUFAs akan menginisiasi oksidasi lipid. Oksidasi lipid ini dapat berlaogsung secara non enzimatis dan enzimatis. Secara non enzimatis melalui peroksidasi lipid yang menghasilkan senyawa aldehid, yaitu malondialdehid (MDA). Malondialdehid memiliki halflife yang lebih panjang daripada ROS, bersifat sitotoksik dan rnaropu berdifusi menuju molekul target intraseluler maupun ekstraseluler yang jauh

dari lokasi terbentuknya MDA, dengan cara ini MDA meniogkatkan efek stres

oksidatif

dari

ROS

(Bochkov

et al., 201 0;

Malondialdehid apabila berinteraksi dengan

Browning

and Horton, 2004).

DNA dapat membentuk DNA

adduct,

selain itu ROS dan MDA mampu menginduksi inflamasi melalui produksi sitokin

7

proinflamasi dan kemotaksis sel neutrofil (Browning

and Horton, 2004). Secara

enzimatis ROS dan radikal bebas akan mempengaruhi reaksi sintesis prostaglandin-2 (PGE-2) dari asam arakidonat yang melibatkan aktivitas enzim fosfolipase dan siklooksigenase-2 (COX-2). Prostaglandin-2 merupakan m�iator inflamasi yang terlibat dalam proses inflamasi dan karsinogenesis (Yun produksi

PGE-2

merupakan

salah satu strategi

et al., 2003). Penghambatan

yang

dapat

d.igunakan

tmtuk

mengembangkan agen antiintlamasi dan pengbambatan k:arsinogenesis (Tewtrak:ul

et

al., 2009) D. Kanker Kulit Kank.er kulit merupakan

jenis kanker yang angka insidensinya cenderung

meningkat dalam luna tahun terakhir, hal ini diakibatkan paparan radiasi UV yang semakin meningkat di permukaan bumi akibat menipisnya lapisan ozon stratosfer (Bunawas, 1999), penyebab utamanya adalah paparan sinar UV-B. Sinar UV-B merupakan karsinogen yang paling berpengaruh terhadap kanker kulit terutama kanker kulit non melanoma (Kanoko

et al., 2000).

Kanker kulit dibedakan menjadi

Cutaneous Malignant melanoma (CMM) dan dari

Malignant Non Melanoma yang terdiri

Basal Cell Carcinoma (BCC)

dan

Squamous Cell Carcinoma (SCC). Melanoma malignan merupakan kanker kulit terganas

dan penyebab kematian terbanyak. Kanker

ini berasal dari melanosit pada

epidermis kulit dan sebagian kecil berasai dari tahi lalat berubah menjadi ganas

(naeus pigmentosus) yang

dan menyebar dengan cepat. Basal Cell Carcinoma merupakan

tumor dengan pertumbuhan lambat, timbul dari lapisan sel basal kulit, sedangkan sec merupakan tumor ganas yang bisa tumbuh di kulit maupun selaput lendir dengan epitel squamosa. Tumor yang timbul bisa sangat agresif dan kadang bermetastasis (Andrianto dan Sukardi, 1988). Tipe kanker SCC timbul akibat sering terpapar UV, sedangkan CMi.\1 dan BCC lebih sering disebabkan oleh paparan UV akut (Vaid

and Katiyar,

2010). K.anker kulit akibat induksi radiasi UV pada mencit merupakan model yang dapat digunakan mempelajari mekanisme molekuler dari karsinogenesis, kcmiripan dengan proses pembeniukan kanker pada manusia (Philpott Walaszek

karena

e t al., 2007;

et a/., 2004). Pengetahuan tentang mekanisrne karsinogenesis akibat radiasi

8

...

UV sangat berguna untuk mengembangkan metode

pengobatan dan pencegahan

kanker kulit.

E. Inflamasi, Supresi Imnn dan K.anker KuJit Paparan UV dapat menginduksi respon inflamasi, efek yang mudah tampak adalah timbulnya eritema dan sunburn pada kulit (Zattra et al., 2009). Inflamasi induksi UV

melibatkan

peran COX-2 dan PGE-2.

meningkatkan produksi

Peningkatan ekspresi COX-2

PGE-2 yang berperan menginduksi

akan

karsinogenesis dan

menghambat apoptosis melalui jalur aktivasi Epidermal Growth Factor (EGF). Paparan UV dapat menimbulkan penekanan sistem imun melalui kerusakan sel­ sel Langerhans,

inflammatory macrophages yang masuk kulit, atau sekresi soluble

factors dari keratinosit yang rusak akibat UV. Soluble factors tersebut berupa sitokin­ sitokin IL-l 0, 1NF -a, dan IL-a, yang dapat menekan sistem imun dan mencegah T-cell

mediated responses (Soehnge et

al., 1997).

Swartz et a!. (2002) melaporkan bahwa

paparan. sinar UV dapat menekan supresi imun dengan mempengaruhi keseimbangan produksi sitokin IL-12 dan

IL-10. Imunosupresi yang disebabkan paparan radiasi UV­

B dapat dicegah dengan adanya peningkatan produksi lL-12, yang berperan dalam mekanisme induksi

nucleotide excision repair (NER), serta penurunan produksi IL-1 0

sehingga meningkatkan sensitifitas antigen presentation. F. Temu kunci

Temu kunci

pandurata Roxb., tergolong

[Boese11bergia pandurata (Roxb.) Schetter]

[Boesenbergia pandurata (Roxb.) Schelter, syn. K.aemforia

syn.

Boesenbergia rotunda] merupakan tanaJ.nan edible yang

familia zingiberaceae (Shindo, et al., 2006; Morikawa et al., 2008).

Tanaman ini banyak tumbuh di Asia termasuk Indonesia. Temu kunci seperti anggota Zingiberaceae lainnya, yang paling banyak dimanfaatkan dari bagian tanaman ini adalah rimpangnya (Heyne, beberapa

1978). Morfologis rimpang temu kunci menyerupai

anak ktmci yang disatukan (Gambar 1), terdiri dari rimpang induk berbentuk

membulat,

kernudian dari bagian ini keluar rimpang-rimpang kecil memanjang

menyerupai anak kunci atau jari, sehingga dalam bahasa Inggris tanaman ini disebut

finger root, di Thailand dikenal dengan nama Kra-chai.

9

51 :=r

1'"*'

Gambar 1. Habitus (A) dan rimpang (B) tanaman temu kunci (Boesenbergia pandurata (Roxb.) Schelter)

Senyawa aktif yang berhasil diisolasi dari atsiri;

pinostrobin; cardamonin;

panduratin (Pancharoen,

et a!., 2006).

alpinetin. Morikawa

5,7-d.imetok.siflavon; 1 ,8-cineol;

et al., 1978) 5-hidroksi-7 metoksiflavanon; panduratin-A; 5,7

2'6'-dihidroksi-4metoksichalchon;

dihldroksiflavanon; (Shindo

boesenbergin;

rimpang temu kunci yaitu minyak

Kiat

4-hidroksipanduratin

A

et a/. (2006), menambahkan adanya pinocembrin dan

et a/. (2008) berhasil mengidentifikasi prenylchalchone dalam

rimpang temu kunci yaitu krachaizin A dan krachaizin B, selain itu juga ditemukan

prenyljlavanone dan rotundaflavon. Senyawa-senyawa yang berhasil diisolasi dari rimpang temu kunci tersebut

B. pandurata

dilaporkan menunjukkan berbagai aktivitas biologis. Ek.strak metanol

menunjukkan efek penghambatan TNF-a. dan menginduksi sitotoksisitas pada sel L292 (Morikawa

et a/., 2008). Ekstrak temu kunci juga menunjukkan aktivitas antiproliferasi

pada sel kan.ker ovarium (CaOV3), sel kanker payudara MDA-MB-23 1 dan MCF-7, sel kanker

cerviks HeLa, set kanker colon HT-29 (Jing et a/., 2010). Aktivitas

antiproliferasi ekstrak temu kunci juga terjadi pada sel kanker (Kamkaen

laryngeal Hep2

et al., 2006). Ekstrak etanolik rimpang B. pandurata dapat memberikan efek

proteksi terhadap timbulnya kanker colon pada tikus Sprague-Dawle yang diinduksi karsinogen

azoxymethane (K.irana et al., 2006).

Kandungan senyawa fenolik dan

flavonoid rimpang tersebut juga menunjukkan aktivitas antioksidan (Jing Pinostrobin,

cardamonin,

alpinetin,

pinocembrin,

panduratin

et al., 2010).

A

dan

4-

hidroksipanduratin A dilaporkan dapat menghambat aktivitas protease pada virus

dengue (K.iat et a/., 2006).

10

Ill.TUJUAN DA!� MANFAAT

A. Tn,juan Tujuan penelitian

1.

ini adalah:

Mengkaji kemampuan proteksi ekstrak etanolik temu kunci terhadap inflamasi yang discbabkan paparan radiasi lJVB, dcngan mcmpclajari pcngaruhnya pada ekspresi sik:looksigenase-2 (COX-2).

2.

Mcngkaji kcmampuan proteksi ekstrak temu kunci terhadap imunosupresi yang disebabkan paparan radiasi UVB dengan mempelajari pengaruhnya pada:

3.

c.

ekspresi IL-l 0

d.

ekspresi IL-12.

Mengkaji kemampuan proteksi ekstrak temu kunci

terhadap kerusakan DNA

yang disebabkan paparan radiasi UVB dengan mempelajari pengaruhnya. pada ekspresi cyclobutane pirimidine dimers CPDs.

4. Mengkaji kemampuan proteksi ekstrak temu ktmci terhadap

karsinogenesis

yang disebabkan paparan radiasi UVB dengan mempelajari pada insidensi dan multiplasitas kulit.

B. MANFAAT

Penelitian ini diharapkan dapat menambah

in±ormasi ilmiah tentang potensi

tcmu kunci scbagai agcn kcmoprcvcnsi kankcr dan fotoprotcktor. Masyarakat umum dapat memanfaatkan informasi ini untuk menjadikan temu kunci sebagai bahan alterna:tif yang arnan unt:uk kemoprevensi dan fotoprotektor.

11

IV. METODE PENEI.�ITIAN A. Bahan dan Alat 1.

Bahan Penelitian Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah rimpang temu kunci (dari Kalibawang, Kulonprogo, DIY), mencit Balb/c betina umur 6 minggu (dari LPPT UGM), LSAB universal (Dako)� paraffin, xilol, etanol, hematoksilin-eosin,antibodi: COX-2, IL-1 0

2.

&

IL-12 (BioLegend), CPDs (Cosmobio).

Alat Penelitian Alat yang dibutuhkan adalah rotary evaporator, lampu

UVB� mikroto�

mikroskop.

B. Cara Kerja l.

PeJnbuatan Ekstrak Etanolik Temu Kunci (EETK) Ekstraksi menggunakan metode maserasi dalam pelarut etanol. Rimpang temu

.n kunci dibersihk:an, diiris tipis-tipis kemudian dikeringkan. Irisan ternu kunci keri..g selanjutnya dibuat serbuk, kemudian dimasera-,i selama 2X 24 jam. Sctclah direndam dalam pclarut sclama 2x24jam kcmudian dilak.ukan pcnyaringan. Filtrat yang diperoleh dikentalkan menggunakan rotary evaporator.

2. Uji Papa ran Akut UV-B pada Hewan Uji a. Pengelompokan Hewan Uji Hcwan uji yang digunakan adalah mencit Balb/c betina umur 2 1 hari dcngan berat badan 25± 0,25 g, sej umlah 75 ekor dibagi dalam lima kelompok. Kelompok A

: tanpa paparan UV-B dan tanpa pemberian EETK

Kelompok B

: diberi paparan UV-B, tanpa pemberian EETK

Kelompok C

: diberi. paparan T JV-B dan perlakuan EETK 0,4 mg/g RR/haxi.

Kelompok D

: diberi paparan UV-B dan perlakuan EETK 0,8 mglg BB!hari

Kelompok E

: diberi paparan UV�B dan perlakuan EETK 1,2 mg/g BB/hari

Sinar UV-B berupa paparan dosis tunggal sebesar 0,93 mJ/cm2.

b. Perlakuan b.ewan uji Ekstrak etanolik temu kunci diberikan setiap hari secara oral sesuai dosis kelompok perlakuan,

selama 14 hari sebelum paparan UV-B sampai terminasi.

Paparan UVB dosis tunggal 0,93 mJ/cm2 diberikan pada hari ke-14 pemberian EETK.

12

Terminasi hewan uji dilakukan pada jam ke-2, 24, 48, dan 72 pasca paparan UV-B. Pada waktu tcrminasi sctiap kclompok dikorbankan 3 hcwan uji, diambil jaringan kulit pilllggung untuk analisis ekspresi COX-2, IL-l 0, IL-12, dan CPDs. Desain perlakuan hewan uji seperti pada Gambar 2. UV-8

I

Pemberian EETK

•••••••

•

�lt�

•··················� ······························· ·······I ke-10

Hari ke-0

Hari

Jam ke-2

I

Jam ke-24

I

Jam ke-48

I

Terminasi hewan uji

Jam ke-72

I

Gambar 2. Desain perlakuan hewan uji c.

Pembuatan Preparat Histologis untuk Pengarnatan Ekspresi COX-2, IL-10, dan IL-12 Hewan. uji dikorbank:an, jal'ingan kulit punggung diambil/dieksisi

1Omm x

1 Omm. .Taringan kulit kemudian ditempelkan pada potongan kertas (agar tidak terlipat saat pemrosesan), selanjutnya dilakukan ftksasi dengan memasukkan dalam larutan

buffer formalin

selama 24 jam. Tahap selanjutnya adalah debidras4 dengan cara

memasukkan potongan kulit pada larutan etanol 70% selama satu jam, kemudian dipindahkan ke dalam larutan etanol

95% selama satu jam, selanjutnya jaringan

dimasukkan ke dalam etanol 100% selama tiga jam, dan tera.khir ke dalam xilol selama duajam. Tahap dehidrasi dilakukan pada suhu 37°C. Setelah dehidrasi, jaringan dimasukkan dalam paraffin selama empat jam pada suhu 60°C, kemudian dibuat blok paraffin dan disimpan pada subu 4°C. Blok paraffin diiris setebal 5 �m. irisan kemudian ditempelkan pada poly-1-lysine slide. dan dik:eringkan pada suhu 37°C. Pewarnaan imunohistokimia dimulai dengan dcparafinasi jaringan dalam larutan xilol, etanol 100%, 95% dan 70% kemudian dicuci dengan air mengalir. Tahap berikutnya adalah inak.tivasi

peroksidase endogen dengan cara merendam irisan

jaringan dalam metanol yang ditambahkan dengan hidrogen peroksida (0,3%) selama 30 m.cnit yang dilakukan pada suhu ruang. Sclanj utnya dilak.ukan pcncucian tiga kali dalam Phosphate Bujfor Saline (PBS), masing-masing selama 5 menit, kemudian diinkubasi dalam serum normal

tmtuk menutupi. antigen nonspesifik, selanjutnya

13

dilakukan pencucian kembali dalam PBS 3x1 0menit.

Tahap selanjutnya adalah

inkubasi dalam antibodi primer (COX�2, IL-10, atau IL-12) pada suhu 4°C selama 12 jam, kemudian dilakukan pencucian dengan PBS 3x5 menit dan dilanjutkan inkubasi dalam antibodi sek:under

Dako Envision Peroxiase (Dako K 1�91) dalam ruang gelap

selama 60 menit. Hasil reaksi antigen dan antibodi divisualisasi dengan menggunakan

DAB (Diamino Benzidine) dalam tris buffer yang telah diberi tambahan I-h02 selama 25 menit dalam gelap, kemudian diberi

counterstain hematoksilin. Setelah itu dilakukan

dehidrasi, clearing dan mounting. Eksp.resi protein diamati berdao;arkan

d:istribusi dan

frekuensi protein tersebut pada jaringan kulit. d. Pembuatan Preparat HistoJogis untuk Pengamatan Ekspresi CPDs Jaringan kulit punggung diambil/dieksisi

IOmm x l Omm. Jaringan kulit

kcmudian ditcmpclkan pada potongan kcrtas (agar tidak tcrlipat saat pcmroscsan), selanjutnya dilakuk:an flksasi dengan memasukk:an dalam lamtan buffer formalin selama 24 janL Tahap selanjutnya adalah dehidrasi, dengan cara memasukkan potongan kulit pada larutan etanol 70% selama satu jam, kemudian dipindabkan k:e dalam larutan

ctanol 95% sclama satu jam, sclanj utnya jaringan

climasukkan kc dalam etanol 100%

selama tiga jam, dan terak:hir ke dalam xilol selama dua jam. Tahap dehidrasi dilak:ukan pada suhu 37°C. Setelah dehidrasi, jaringan dimasukkan dalam paraffin selama empat jam pada suhu 60°C, kemudia.n dibuat bJok paraffin dan disimpan pada suhu 4°C. Blok paraffin

diiris setebal

5 �m,

irisan kemudian ditempelkan pada poly-1-/ysine slide, dan

dikeringkan pada suhu 37°C. Pewamaan imunohistokimia dimulai dengan deparafmasi jaringan dalam larutan xilol, etanol 100%, 95% dan 70% kemudian dicuci dengan air mengalir. Tahap berik:utnya adalah inaktivasi

peroksidase endogen dengan

cara

merendam irisan jaringan dalam

metanol yang ditambahkan dengaa.1 hidrogen peroksida (0,3%) selama 30 menit yang dilak:ukan pada suhu ruang. Selanjutnya dilakukan pencucian tiga kali dalam Phosphate

Buffer Saline (PBS), tna'>1ng-masing selama 5 menit, kemudian diinkuba-.i da]am serom normal untuk menutupi antigen nonspesiflk, selanjutnya dilakukan pencucian kembali dalam PBS 3x1 0mcnit. Tahap selanjutnya adalah denaturasi DNA

in situ. Irisan jaringan diinkubasi

da.la1"I1 50% ctanol sclama 5 mcnit, dilanjutk:an dalam 0.07 N NaOH

14

d.alarn 70% ctanol

Oarutan harus dibuat baru/freshly prepared) selama 7 menit, kemudian dicuci 3x dalam PBS masing-masing 5 mcnit, dilanjutk:an pcmbcrian protcinasc�K pada 37°C sclarna 12 menit. Setelah itu dicuci tiga kali dalam PBS masing-masing 5 menit, sclanjutnya irisan pada suhu 4°C

jaringan diinkubasi dengan antibodi CPDs (140ug/100ul

sterile water) .

selama satu malam. Hari berikutnya,

dihilangkan dengan mencuci

unbound antibodies

dalam PBS dua kali masing-masing 2 menit.Se)anj utnya jaringa.n d-iinkubasi. dengan biotiylated anti-mouse IgG (l mg/ml). Antibodi sekunder diencerkan dalam PBS yang mengandung 10% FCS (1 :250) dan diikubasi pada suhu

kamar

selama 40 menit.

Setelah 2x pencucian dengan PBS ma.c:;ing-masing 2 menit, jaringan diinkubasi dengan Vecstain peroxidase standard ABC kit (1 : 100 dalam PBS) pada suhu

kamar

seJama 30

merut. Pada tahap akhir, jaringan di beri 3,3'-daminobenzidine chromogen (Dako) selarna 6 menit pada suhu kamar, selanjutnya dicounterstaine dengan hematok.silin selama 10 detik dilanjutkan dengan dehidrasi melalui larutan etano l

bertingkat

sampai

100% dan dimounting dalam DPX. Selama periode inkubasi, jaringan ditempatkan dalam :ruang lembab (box plastik yang dialasi tisu yang dibasahi RO water) untuk menjaga dari pengeringan.

3. Uji Kemoprevensi EETK pada Tumorigenesis Kulit

a. Pengelompokan Hewan Uji

Hewan tyi

yang digunakan adalah mencit Balb/c betina umur 14 hari dengan

berat badan 20± 0,25 g, sej umla.h 60 ekor dibagi dalam enam kelompok. Kelompok A

: tanpa paparan UV-B dan tanpa pemberian EETK

Kclompok B

: dibcri paparm�, UV-B, tanpa pcmbcrian EETK

Kelompok C

: diberi paparan UV-B dan pelarnt EETK

Kelompok D

: diberi paparan UV-B dan perlakuan EETK 0,4 mg/g BB/hari

Kelompok E

: diberi paparan UV-B dan perlakuan EETK 0,8 mg/g BB!hari

Kelompok F

:

dibe.ri paparan lJV-B dan perlakuan EETK 1 ,2 mg/g BH!hari

Sinar UV-B berupa paparan dosis tunggal sebesar 0,93 mJ/cm2.

b. Perlakuan hewan uji Ekstrak etanolik temu kunci (EETK) dibexikan setiap ha.ri secara oral sesuai dosis kelompok perlakuruL Pemberian EETK dimulai sejak 5 hari sebelum paparan UV-8 yang pertarna. Pada

hari

ke�5 pemberian EETK, hewru1 u:ji diinduksi DMBA 0,5

15

ug/ul aseton secara topikal, dilanjutkan dengan paparan UV-B dosis tunggal 0,167 2 mJ/cm . Paparan UV-B diberilr.an sebanyak 60 kali (setiap hari, 5 kali per minggu) Terrninasi hewan uji dilakukan pada minggu ke-22 (gambar 3.). Selama uji, diukur kctcbalan kulit punggung (per minggu) dan dicatat waktu kc.munculan, jumlah, dan morfologi nodul tumor.

Pada waktu terminasi hewan uji dikorbankan

dan diambil

jaringan kulit punggung untuk pengamatan perubahan histologisnya. Desain perlakuan hewan uji untuk karsinogenesis seperti pada Gambar 3.

�������:.��---··········

Hari ke-0

Ha

...........•........•.•... .•.•.••..••• •••....•..•... ke-5

minggu ke-20

DMBA

minggu ke-22

Gambar 3. Desain perlakuan pada uji tumorigenesis 4.Analisis Data

Hasil pengamatan dari pewamaa:n imunohistokimia untuk melihat ekspresi COX2, IL-l 0, IL-12, dan CPDs dianalisis dengan Quantitative Scoring Methods (Donald et at., 1999). Data kuantitatif dari uji tumorigenesis dianalisis dengan ANOVA dan uji lanjut Tukey.

16

it ...., ..;

EWJ

V. Ekstraksi selama 2

BASIL

rimpang temu kunci dengan metode maserasi dalam etanol 96%

x 24 jam didapatkan ekstrak etanolik temu kunci pekat (EETK) sebesar 14%.

Ekstrak ini yang digunakan sebagai bahan uji untuk uji

in vitro dan in

vivo. Pada uji in

vivo, EETK dilarutkan dalam rninyak zaitun dan diberikan secara oral. .

A. Kemampuan EETK dalam Melindungj terhadap Jnflamasi Siklooksigenase-2 (COX-2) pada jaringan kulit hewan uji, terekspresi pada lapisan epidermis dan dermis (tabel 1 . dan gambar 1 .). Tidak ada perbedaan signifikan antar perlakuan dosis. Perbedaan signifikan terjadi antara kelompok kontrol negatif (kelompok

B) dengan kelompok perlakuan EETK (Kelompok C, 0, E). Tabel I . Distribusi COX-2 pada Jaringan Kulit Perlakuan

A

B

C

D E

Epidermis

Kontrol (normal)

UVB UVB + EETK 0,4 mg/gBB/hari UVB + EETK 0,8 mg/gBB/hari UVB + EETK 1,2 mglgBB/hari Keterangan: +++

=

+

Dermis

+

+++

+++

++

++

++

++

++ ++ positifkuat, ++ = positif sedang, - negatif.

Gambar 4. Ekspresi COX-2 pasca paparan UV -B akut, A: kontrol,

B: sel yang mengekspresikan COX-2 berwarna coklat. Perbesaran 1 OOx

17

Tabel 2. Ekspresi COX-2 pada Jaringan Kulit Pasca Papaaran UV-B Ekspresi COX-2 padajaringan kulit 24

Kontrol (nonnal) B UVB C UVB + EETK 0,4 mg!gBB/hari D UVB + EETK 0,8 mglgBB/hari E UVB + EETK I 2 mgfgBB/hari A

,

per lapang pandang

(%)

Jam ke-pascapaparan

72

5± 3,5

7,5 ± 3,5

1 2 ± 6,7

92,0 ± 8,0

93,3±32

35± 4,3

39,0 ± 3,5

70,3 ± 7,3

39,2 ± 4, 1

23,7±9 0 , 54,2±2,5

87,9±8,5

1 7,6± 2,8

79,5±4,0

1 0 ± 4,2

Kererangan: perbesaran 400x

B.

Kemampuan EETK dalam Melindungi dari Supresi Imun

Perlindungan terhadap sistern imun dalam penelitian ini dipelajari pada ekspresi IL-l 0 dan IL-12.

a. Ekspresi IL-l 0

Gambar 5.

Ekspresi IL-10 pada kulit mencit Balb/C terinduksi UV-B. (A) kontrol (B) IL-10 terwamai coklat. Perbesaran l OOx.

Dari gambar 5 dapat dilihat bahwa sel yang mengekspresikan IL- l 0 terdistribusi pada lapisan dermis maupun epidermis. Tabel 3. Distribusi IL-10 pada Jaringan Kulit A

B C

D E

Perlakuan Kontrol (normal) UVB UVB + EETK 0,4 mglgBB/bari UVB + EETK 0,8 mglgBB/hari UVB + EETK 1,2 mglgBB/hari Keterangan: +++

=

Epidermis + +++ ++ ++ ++

Dermis + +++ +++ ++ ++

positif kuat, ++ - positif sedang, - negatif.

18

Tabel 4. Ekspresi IL-10 pada Jaringan Kulit Pasca Paparan UV-B Ekspresi IL-10 pada jaringao kulit per lapaog paodang (%)

Jam ke-pascSJ.paparan 24

A Kontrol (normal) B UVB C

UVB + EETK 0,4 mgfgBB/hari

D

UVB + EETK 0,8 mglgBB/hari

E

UVB + EETK 1,2 mglgBB!hari

48

72

1 0± 3,5

t o ± 7,5

96,0 ± 2,0

67,3± 12,2

7 1 ± 5,0

79,0 ± 8,5

70,8 ± 5,4

43,3 ± 4,0

53,7± 5,0

67,9± 8,5

50,6± 7,8

54,5 ± 7,8

1 7,9 ± 8,7

18,8 ± 4,2

1 2 ± 6,7

Keterangan: perbesaran 400x

b. Ekspresi ILR12 Interleukin- 12 terdistribusi padajaringan dermis dan epidermis (Gambar 6)

Gambar 6. Ekspresi IL-12 pada kulit mencit Balb/C terinduksi UV-B. (A) kontrol (B) IL-12 tetwarnai coklat. Perbesaran 1 OOx. Dari gambar 6 dapat dilihat bahwa sel yang mengekspresikan IL-12 terdistribusi pada lapisan dermis maupun epidermis. Tabel 5. Distribusi IL-12 pada Jaringan Kulit Perlakuan

Epidermis

A

Kontrol (normal)

B

UVB UVB + EETK 0.4 mglgBB/hari UVB + EETK 0,8 mglgBB/hari UVB + EETK 1,2 mglgBB/hari

C

D E

Dermis

+

+

++

+++

++

+++

++ ++

++ ++

Keterangan: +++ - positif kuat, ++ - positif sedang, - negatif.

19

Tabel 6. Ekspresi

IL- 1 2

pada Jaringan Kulit Pasca Paparan UV-B

Ekspresi IL- 1 2 pada jaringan kulit per lapang pandang (%)

24

pascapaparanjam ke-

72

48

A

Kontrol (normal)

1 5,3± 3,9

1 7,5 ± 6,5

1 0,5 ± 3,5

B

UVB

23,0 ± 4,5

30,3± 5,5

28,0 ± 5 3

29,0 ± 9,3

25,5 ± 7,6

33,8 ± 6,7

37,3 ± 4,3

15,2 ± 2,4

14,6 ± 4,2

29,4 ± 7,2

50,7 ± 8,5

40,8 ± 8,7

UVB + EETK 0,4 mglgBB/hari UVB + EETK 0,8 mg/gBB/hari UVB + EETK 1,2 mg/gBB/hari

C

0

E

Keterangan: perbesaran 400x

C.

Kemampuan EETK dalam Melindungi dari Kerusakan DNA

Hasil pewarnaan imunohistokimia

untuk reaksi

positif sel terhadap CPDs

tampak coklat (Gambar 7.), CPDs lebih banyak terdistribusi pada lapisan epidermis daripada lapisan dermis.

Gambar 7. Ekspresi CPDs pada kulit mencit Balb/C terinduksi UV-B. (A) kontrol negative (B) CPDs terwarnai coklat. Perbesaran 400x. Tabel 7. Distribusi CPDs pada Jaringan Kulit

A

B C D

E

Epidermis Dermis Perlakuan Kontrol (normal) +++ + UVB ++ + UVB + EETK 0,4 mg!gBB/hari +++ UVB + EETK 0,8 mglgBB/hari + + UV B + EETK 1 ,2 mg!gBB/hari Keterangan: +++ positifkuat, ++ = positif sedang, - negatif. =

=

20

VI.

PEMBAHASAN

A. Kemampuan EETK dalam Prote�i terhadap Inflamasi Untulc mengkaji kemrunpuan EETK dalam melindungi dari

inflamasi akibat

paparan UV, pada penelitian ini dipelajari pada tingkat ekspresi COX-2. Dari hasil penelitian ini diperoleh basil semikuantitatif ekspresi COX-2 pada kulit mencit Balb/C terinduksi kokarsinogen UV -B dan DMBA. Sinar ultra violet memiliki sifat seperti karsinogen kimia, yaitu bisa menyebabkan inflamasi, hiperplasi epidermal, dan perubahan gen-gen yang berperan dalam prolifcrasi dan deferensiasi sel, produksi eicosanoid dan cytokine, dan sintesis growthfactor.

Radiasi 1JV-B dapat berperan sebagai inisiator atau promoter karsinogenesis karena kemampuannya menginduksi produksi prostaglandin. Peningkatan produksi asam arakidonat dan prostaglandin merupakan respon spesiflk keratinosit manusia yang terpapar UV-B akut. Prostaglandin dibentu..lt dari aktivitas fosfolipase yang melepaskan asam arak.idonat dari fosfolipid membran sel,

asarn

arakidonat ini selanjutnya diubah

menjadi prostaglandin oleh aktivitas siklooksigenase (COX). Ada dua macam siklooksigenase, yaitu

siklooksigenase-1

(COX- 1) dan

siklooksigenase-2 (COX-2). Epidermis kulit a.lctif mensintesis prostaglandin dan hasil penelitian memmjukkan bahwa prostaglandin-2 (PGE-2) mcrupakan derivat yang mampu mengatur proliferasi sel epidermal secara in vitro. Pada karsinoma skuamosa dan basalis terjadi peningkatan PGE-2. Berbagai penelitian n i vivo melaporkan bahwa, inhibitor produksi PGE-2 dapat menghambat pertumbuhan dan metastasis tumor. Dari hasil pewamaan imunohistokimia

irisan kulit, COX-2 tervisualisasi

coklat, terdistribusi pada lapisan epidermis maupun dermis. Pada kelompok yang hanya mendapatkan perlakuan UV-B, menunjukkan gambaran COX-2 positif kuat

pada

epidermis dan dermis (Gambar 4.). Pada kelompok yru.1g mendapat perlakuan UV-B dan EETK dengan dosis yang bervariasi, tidak menunjukkan perbedaan signifikan dalam dis1ribusi COX-2 (Tabel l .). Tctjadi peningkatan ekspresi COX-2 pasca paparan UV-B, ckspresi terbanyak

pada

jam ke-48 pasca paparan UV-B akut (fabel 2.). Tidak ada perbedaru1 signiflkan antar kelompok yang mendapat perlakuan EETK, namun ada perbedaan dengan kelompok kontrol negative.

24

ri O-�·..u t� ·ll1! I

B.

Kemampuan EETK dalam Melindungi dari lmunosupresi Paparan

UV-B

dapat

menyebabkan

penekanan

sistem

nnun

dengan

mempengaruhi pengaturan cytokine yang terlibat (Staniforth et al., 2006). Pada penelitian ini imunosupresi dikaji pada ti.ngkat ek�spresi cyt'!kine IL-10 dan lL-12. Interleukin-1 0 merupakan cytokine imunomodulator yang berperan penting

dalam

menurunkan aktivitas respon inflamasi yang dimcdiasi oleh sel lymphoid dan sel myeloid. oleh

Cytokin IL-l 0 marnpu mensintesis faktor inhibitor (CSIS), yang disek.resi

sel TH2 dan

berfungsi menekan

deferensiasi

dan fungsi THl.

Fungsi

penghambatan ini ditunjukkan dengan kemampuannya menekan produ�..si cytokine proinflamasi seperti IL-1 2 dan 1NF (Berg, et al., 2001). Interleukin-12 merupakan glikoprotein heterodimeri.k yang berperan penting dalarn sistem imun. Fungsi IL-12 pada sci T dan sel NK adalah ikut menstimulasi aktivitas sitotoksik, proliferasi, dan promosi perkembangan sel Th (Anonim, 2012). Schwarz et al., 2001 melaporkan bahwa lL-12 berperan dalam menghambat apoptosis yang disebabkan paparan UV dengan cara menstimulasi DNA repair. Pada penel itian ini ekspresi IL-10 meningkat pasca paparan UV-B, temtama 24 jam pasca paparan

(tabel 4). Hal ini sesuai dengan yang dilaporkan Stainforth,

et al.,

(2006) bahwa ekspresi IL-l 0 meningkat pasca paparan UV-B. Perlakuan EETK menurunkan ekspresi IL-10, efek penurunan terbesar pada per!akuan 0,8mg/g BB/hari. Pcningkatan eksprcsi IL-l 0 ini diikuti dengan mcningkatnya ckspresi cytokine proinflamasi IL-12 dan COX-2 sebagai indikator penurunan in:flamasi

C. Kemampuan EETK dalam Mclindungi dari Kcrusakan DNA DNA merupakan molekul penerima (reseptor) radiasi U"v, DNA mengandung kromofor yang dapat mengabsorbsi UV-B dengan kuat. Kromofor tersebut berupa cincin aromatik heterosiklik pada basa nitrogen. h1teraksi antara UV-B dengan DNA mcngh.asilkan

senyawa

yang

disebut

fotoproduk.

Fotoproduk

tersebut

adalah

cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs) dan pyrimidine 6-4 pyrimidones (Ravana et al.,

2001). Cyclobutane pyrimidine dimmers dibentuk dari atom karbon C-4 dan C-5

pirimidin yang berdekatan, ik:atan rangkap yang menghubungkan mengalami saturasi membentuk 4 cincin siklobutil, sehing&,"3 menghasilkan mutasi C�T dan

25

cc�·rr·

(Ravanat et al., 2001 ). Senyawa 6, 4-photoproduct bukan merupakan cyclobutane dipyrimidine, molekul ini dibentuk dari ikatan kovalen antara

dengan

C-4 dari pirimidin tetangganya.

C-6 dari suatu pirimidin

Adanya dimer ini mengganggu proses

rcplikasi dan transkripsi DNA. Hasil penelitian memmjukkan pahwa T-T cyclobutane dimer yang berada pada sekuen promoter merupakan inhibitor

pengikatan faktor

transkripsi (Tommasi et al., 1996 cit Soehnge et al., 1 997) dan penelitian Donahue et al. 1994 melaporkan bahwa pirimidin dimer

dalam rantai DNA yang ditranskripsi

dapat menyebabkan pemanjangan pada transkripsi DNA terhenti, akibat lebih lanjut adanya CPDs dapat mempengaruhi siklus sel (Soehnge et al., 1997). Pada penelitian ini menunjukkan terjadinya peningkatan ekspresi CPDs, temtama pada 24 jam pasca paparan (tabel 8). Pemberian EETK mampu menurunkan ekspresi CPDs terutama pada dosis 0,8 mg/g

BB/hari.

Penunman CPDs ini kemungkinan berhubungan terjadinya imunosupresi pasca paparan UV-B yang ditandai dengan peningkatan IL-10 (tabel 4) yang menurut al. ( 2001 ), IL- 1 0 berperan dalam meningkatkan sistem

DNA

repair. Cyclobutane

Pyrimidine Dimers _(CPDs), merupaka..n penanda spesifik kerusakan DNA paparan UV (Ravana et al., 200 J ). Apabila sistem

DNA

Berg et

akibat

repair tidak berhasil

memulihkan, kemsakan tersebut bisa mcnginisiasi karsinogenesis melalui mutasi scl-sel epidermal. D. Aktivitas Kcmoprcvcnsi EETK pada Karsinogcnc§is

Hewan uji pasca radiasi menunjukkan perubahan wama kulit punggung menjacli kemerahan. Pada minggu ke-5 perlak:uan, kulit tampak mulai kasar, keriput, dan menebal temtama pada kelompok kontrol, tetapi ketebalan lipatan kulit punggung tidak mcmmjukkan perbedaan yang signi:fikan antar kelompok perlak.uan pada setiap periode pengukuran. Radiasi UV yang mengenai kulit dapat meningkatkan terbentuknya radikal bebas sehingga menyebabkan terjadinya stres oksidatif. Stres oksidatif tampak dalam bentuk gangguan pada kulit, yaitu sunburn, inflamasi, kerusakan DNA dan supresi sistem imun, yang selanjutnya dapat menyebabkan terjadinya penuaan dini, basal cell carcinoma, squama cell carcinoma, dan me]a.noma (Katiyar et al., 2007; Lee et al.,

2007; Timares et.al., 2008).

26

Papru:an

UV-B

secara

kronis menyebabkan peningkatan proliferasi sel-sel

epidermis sehingga teijadi hiperplasi. Pertumbuhan lapisan epidermis ke arab ekstemal menyebabkan munculnya papiloma, dan hlpcrkeratinosis. Terjadinya penghambatan terbentuknya nodul tumo� dan multiplasitasnya disebabkan di dalam ekstrak temu k:unci terdapat senyawa-senyawa bioak:tif yang berpotensi sebagai antikanker. Senyawa fenolik dan flavonoid di da]am rimpang temu kunci menunjukkan aktivitas antioksidan (Jing hidroksipanduratin A dari

et al., 2010). Panduratin A dan

B. pandurata merupakan senyawa yang banyak dilaporkan

mempunyai aktivitas sebagai antikanker, selain mempunyai aktivitas sitotoksik dan antiproliferasi pada beberapa jeni.s sel kanker, juga menunjukkan aktivitas antiinflamasi pada sel RAW 264.7 melalui penghambatan pelepasan NO, PGE-2, dan TNF-a. Kcdua senyawa tersebutjuga dilaporkan dapat menghambat aktivitas COX-2 (Tewtrakul

et al.,

2009). Radiasi kronis dari sinar

UV

dapat menyebabkan keru..<)akan jaringan ikat dan

matriks ekstra seluler pada kulit sehingga mengurangi sintesis kolagen dan berakibat terjadinya photo

aging (Fisher, et al., 1997). Penelitian Shim et al. (2008) pada sel

fibroblast kulit m.anusia yang diinduksi UV, panduratin A dapat menunmkan aktivitas

matrix metallopreoteinase dengan cara mengharnbat aktivasi Activator Protein-I (Al>1 ) dan lintasan MAPKs sehingga dapat meningkatkan sintesis kolagen. Penelitian pada sel fibroblast tersebut juga menunj ukkan bal1wa aktivitas pandmatin A Iebih kuat daripada

Epigallochatechin-3-0-Gallate (EGCG) yang digunakan sebagai kontrol dan

sudah dikenal sebagai agen anti aging alami (Shim eta[., 2008).

27

VII. KESJMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan 1 . Ekstrak etanolik

temu

kunci

mampu melindungi dari inflamas i dengan

menurunkan ekspresi COX-2 pada mencit Balb/c terind�i UV-B. 2.

Ekstrak etanolik temu kunci mampu melindungi dari kerusakan DNA dengan menurunkan ekspresi CPDs pada mencit Balb/c terinduksi UV-B.

3.

Ekstrak etanolik temu kunci mampu menurunk:an angk:a kejadian, multiplasitas, serta menghambat pertumbuhan nodul tumor pada model kanker kulit, mencit Balb/c terinduksi UV -B. B. Saran

Perlu dilak:ukan kajian lebih lanjut untuk formulasi senyawa ini supaya mendapatk:an

formulasi agen kemoprevensi kanker kulit yang efektif

dikonsumsi.

28

dan aman

VID.

UCAPAN TERIMA KASffi

Terima kasih kepada: 1 . Balitbangkes Kementdan Kesehatan Republik Indonesia yang telah mendanai . dan membina penelitian ini melalui program RISBIN lPTEKDOK 2012 dengan nomer Surat Perjanjian Kerjasama: liK.06.01/ll1693/2012. 2. Prof. Dr. Sismindari, M.Sc., Apt. sebagai supervisor penelitian.

3. Prof. dr. Sofia Mubarik� M.Med.Sc., Ph.D.; Dr.rer.nat. Yosi Bayu Murti M.Si., Apt.,

dan Drh. Sitarina Widyarini, M.Sc. Ph.D. untuk diskusi dan arahannya.

4. Program Studi Bioteknologi SekoJah Pasca Sarjana UGM yang telah mendukung, menyediakan sar�

dan kemudahan terselenggaranya penelitian

illl.

5. Fakultas Kedokteran UGM yang telah mengijinkan berafiliasi dalam penelitian illl.

29

fEZ

DAFTARKEPUSTAKAAN

IX.

Andrianto, P., dan E. Sukard i. 1988. Dermotovenerologi. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta. Beliveau, R. and Gingras, D. 2007. Role of Nutrition in Preventing Cancer. Can. Fam. Physician 53: 1906- 1 9 1 1 . Berg,D.J.,Zhang,J.,Lauricella,D.M., and Moore,S.A.(200 1). IL-10 is a central regulator of cyclooxygenase- 2 expression and prostaglandin production. J Immunol. 166, 2674-2680.

Bochkov, V.N., Olga, V., Birukov, G.K., Levonen, A., Binder, C.J., and Sto, J. 2010. Generation and Biological Activities of Oxydizcd Phospholipids. Antiox. Redox. Sig. 1 2(8): 1 0 1 1 -1043. Browning, J.D and Horton, J.D. Molecular mediators of hepatic steatosis and Jjver injury J Clin. Invest. 1 14: 1 47-152. .

Bunawas. 1 999. Radiasi Ultraviolet dari Matahari dan Resiko Kanker KuJit. Cermir. Dunia Kedokteran. 122: 9-12. Cheenpracha, S., Karalai, C., Ponglimanont, C.� Subhadbirasakulb, S. and Tewtrakul, S. i pcmdurata. 2006. Anti-HIV-1 protease activity of compounds from Boesenberga Bioorg. Med Chem . 14:1710-1714. Ching, A.Y.L., Wah, T.S., Sukari, M.A., Rahmani, L.M., and Khalid, K. 2007. Characterization of flavonoid derivatives from Boesenbergia rotunda (L.) Malaysian J Anal. Sci. 1 1(1): 154�159. Cooper, S.J. and Bowden, G.T. 2007. Ultraviolet B Regulation of Transcription Factor Families: Roles of Nuclear Factor-kappa B (NF-tcB) and Activator Protein�l (AP�l) in UVB-Induced Skin Carcinogenesis. Curr. Cancer Drug Targets. 7(4): 325-334. Doyle, A., and Griffiths J.B. 2000. Cell and Tissue Culture for Medical Research, John Willey and Sons LTD. England. Erni, G. 2010. Kiat Mencegah dan Mengat:asi Penuaan Dini. Makaldh seminar Kesehatan Kulit RS. Bethesda Yogyakarta. Heyne, K. (1 987). Tumbuhan Berguna Indonesia. Jilid IV. Badan Litbang Kehutanan. Jakarta. p. 592-594. Jing, L.J., Mohamed, M., Rahmat, A. and Bakar, M.F.A. 2010. Phytochemicals, antioxidant propetties ru1d anticancer investigations of the different parts of several gingers species (Boesenbergia rotunda, Boesenbergia pulchella var. attenuata and Boese1lhergia armeniaca). J Med Plant. Res. 4(1 ): 27-32. Junkins-Hopkins, J.M. 2010. Antioxidant and chemopreventive properties in dermatology. J Am. Acad. Dermatol. 62: 663-665.

30

D

Kamkaen , N., Wilkinson, J.M. and Cavanagh, H.M.A. 2006. Cytotoxic Effect of Four Thai Edible Plants on Mammalian Cell Proliferation. J. Thai Pharma. Health Sci. 1(3):189195.

Katiyar, S., Elmets, C.A. and Katiyar, S.K. 2007. Green tea and skin cancer: Photoimmunology, angiogenesis and DNA repair. J. Nutr. Bioc_hem. l8: 287-296. Kiat, TS., Pippen, R., Yusof, R., Ibrahim, H., Khalidd, N. and Abd Rahmane, N. 2006. Inhibitory activity of cyclohexenyl chalcone derivatives and flavonoids of fingerroot, Boesenbergia rotunda (L.), towards dengue-2 virus NS3 protease. Bioorg. Med. Chem. Lett. 16 : 3337-3340.

Kirana, C., Jones, G.P., Record, J.R., Mcintosh, G.H. 2007. Anticancer properties of panduratin A isolated from Boesenbergiapandurata (Zingiberaceae). J. Nat. Med 6 1 : 1 3 1-137.

Lee, B., Lee, S.Y., Lee, HJ., Sim, G., Kim, J., Cho, Y., Lee, D., Pyo, H., Choe, T., Moon, D., Yun, Y.P. and Hong, J.T. 2007. Anti-oxidative and Photo-protective Effects of Coumarins Isolated from Fraxinus chinenss. i Arc. Phar. Res. 30(10): 1293-1 3 0 1 . Meeran, S.M., Akhtar, S., and Katiyar, S.K. 2009. Inhibition of UVB-Jnduced Skin Tumor Development by Drinking Green Tea Polyphenols is Mediated Through DNA Repair and Subsequent Inhibition of Inflamation. J. Invest. Dennatol. 129 (5): 1258-1270. Morikawa, T., Funakoshi, K., Ninomiya, K., Yasuda, D., Miyagawa, K., Matsuda, II., and Yoshikawa, M., 2008. Structure of New Prenyichalcones and Prenylflavanones with TNF-u and Aminopeptidase N Inhibitory Activities from Boesenbergi,a rotunda. Chem.Pharm.Bull. 56 (7): 956- 962. Pancharoen, 0., Kelvin, ReutrakuJ, V., Taylor, W.C., and Tuntiwachwuttikul, Constituents of Boesenbergia pandurata (syn. Kaempferia pandurata). P. Aust. J.

1987. Chem.

40: 455-462.

Philpott, M.P., Bergamaschi, D., and Storey, A. 2007. Models for Skin Cancer. 00 Ilandbook. 2 ed. John Wiley and Sons. Ltd. London. p. 4-1 2.

The Cancer

ec ts of UV radiation on Ravanat, J.L., Douki, T., and Cadet, J. 2002. Direct and indirect eff DNA and its components. J. Photoche. Photobiol. 63: 88-102. Sakamoto, A., Akieda, S., Oda, Y., Iwamoto, Y., and Tsuneyoshi, M. 2009. Mutation analysis of the Gadd45 gene at exon 4 in atypical fibroxanthoma. BMC Dermatol. 9:1 -5 Shim, J., Kwon,Y., Han., Y., and Hwang, J. 2008. Inhibitory Effect of Panduratin A on UV­ induced Activation of Mitogen-Activated Protein Kinases (MAPKS) in Dermal Fibroblast Cell. Plant. Med 74 ( 1 2): 1446-1450. Shindo, K., Kato, M., Kinoshita, A., Kobayasi, A., and Koike,Y. 2006. Analysis of antioxidant anctivitics contained in the Boesenbergia pandurata Schult. Rhizome. Biosci. Biotech. Biochem. 70 (9): 2281 -2284.

Soeharta:ti. 20 1 1 . Sixth Biggest Cancer Causes ofDeath in Indonesia. Faculty of Medicine University Physicians RSCM. Jakarta. 26 April 2011 ). ( ·

Department of Radio logy

31

-"'jfgm

Soehnge, H., Ouhtit, A., and Ananthaswamy, H.N. 1997. Mechanisms of induction of skin cancer by UV radiation. Frontier in Biosci. 2 :538-551 . Sporn, M.B. and Sult, N. 2000. Chemoprevention Cancer. Carcinogeness i 2 1 (3): 525-530. Sunarno. 2009. Profit Antioksidan Copper Zinc Superpxide Dismutase (Cu, Zn-SOD) pada Sel­ sel Ginjal Tikus Sprague Dawley melalui Pewarnaan Imunohistokimia Polimer Peroksidase.

Staniforth V., Chiu LT., and Yang, NS., Caffeic acid suppresses UVB radiation­ induced expression of interleukin-1 0 and activation of mitogen-activated protein kinases in mouse. Carcinogenesis 27(9): 1803-1 8 1 1 , 2006 Surh, Y. 2003. Cancer Chemoprevention with Dietary Phytochemicals. Nature Rev. 3 : 768 780.

Schwarz, A., Stander, S., Bemeburg, M., Bohm, M., Kulms, D., Steeg H,Grossc­ Heitmeyer K*, Jean Krutmann J, and Schwarz, T.* Interleulcin-12 suppresses ultraviolet radiation-induced apoptosis by inducing DNA repair.NATURE CELL BIOLOGY ADVANCE ONLINE PUBLICATION. http://cellbio.nature.com

Tewtrakul S., Subhadhirasakul, S., KaraJai, C., Ponglimanont, C., and Cheenpracha, S. 2009. Anti-inflammatory

effects

of

compounds

from

Kaempferia

parvi!lora

and

Boesenbergia pandurata. Food Chem. l l 5: 534-538 Timares, T.,

Katiyar, S., and EJmets, C.A. 2008. DNA Damage, Apoptosis and Langerhans

cells�Activators of 422-436.

UV

Induced Immune Tolerance. Photochem. Photobiol.

84 (2):

Tsao, A.S., Kim, E.S., and W.K. Hong. 2004. Chemoprevention of Cancer. CA Cancer J.. Clin. 54:1 50-180. Tuchinda, P., Reutrakul, V., CJaeson, P., Pongprayoon, U., Sematong, T., Santisuk, T., and Taylor,

WC .

.

2002.

Anti-inflammatory

flQe§J!1:I_QiJrg{a. JH!.!J®I.t1la Phytochem.

cyclohexenyl

chalcone

derivatives

in

59: 1 69-173.

V aid, M. and Katiyar, S.K. 20 l 0. Molecular mechanisms of inhibition of photocarcinogenesis Silybum marianum L. by silymarin., a phytochemical from milk thistle (

Oncol. 36(5): 1053-1 060.

Gaertn).

Int. J.

Walaszek, Z., Hanausek, M., and Slaga, T.J. 2004. Mechanisms of Chemoprevention. Chest .

125 : 128S- 133S.

Weinberg R.A., 2007. The Biology ofCancer. P1 cd. Garland Science.

USA.

Win, NN., Awale, S., Esumi, H., Tezuka, Y., and Kadota, S. 2007. Bioactive secondary metabolites

from Boesenber ga i panduraJa of Myanmar and

their preferential

cytotoxicity again1.1: Human Pancreatic Cancer PANC-1 Cell Line in Nutrient-Deprived Medium. J. Nat. Prod. 70 (1 0): 1 582-1587.

32

Wresdiyati T., Astawan, M., Fithriani, D., Adnyane, IKM., Novelina, S., and Aiyani, S. 2004. Pcngaruh a-Tokofcrol tcrhadap Profil Supcroksida Dismutasc dan Malondialdchida pada Jaringan Hati Tikus di Bawah Kondisi Stres. .! Vet. 8: 202-209. Wright, T.l., Spencer, JM., and Flowers, F.P. 2006. Chemoprevention of nonmelanoma skin cancer. J. Am. Acad. Dermoto/. 942-946. Yun J., Kwon, H., Hwang, J. 2003. In vitro anti-inflammatory activity of panduratin A isolated from Kaempjeria pandurata in RAW 264.7 cells. Plant. Med. 69: I I 02-1 1 08.

33

X. LAMPIRAN A. Lampiran-1. Ethical Clearance B. Lampiran-2. Realisasi Anggaran Penelitian C. l.embar Pengesahan

34

• ..

U N IVERSITAS GADJAH MADA . LABORATO RIUM PENELITIAN DAN PE NGUJIAN IERPADU KOMISI ETHICAL CLEARANCE UNTUK PENELITIAN PRAKUNIK .

-----------------J------�----------------------------------------------�-------------------------------

KETERANGAN KELAIKAN' ETI K (Ethical Clearance) Nomor: 0 1 2/KEC-LPPT/1/2011

Komisi

Ethical Clearance

Terpadu,

untuk penelitian praklinik laboratorium Penelitian dan Pengujian

Universitas Gadjah Mada, Yogya·karta, setelah mempelajari dengan seksama

rancangan penelitian yang diusulkan, dengan ini menyatakan .bahwa penelitian: Judul

: Potensi Ekstrak Temu Kunci

(Bosenbergia pandurata) sebagai

Agen Kemoprevensi Kan ker Terinduksi UVB. Peneliti Utama

: Shanti listyawati, M.Si.

Lembaga/Tempat Penelitian : Laboratorium Penelitian & Pengujian Terpadu Universitas Gadjah Mada Telah d i nyatakan memenuhi persyaratan etik untuk dilaksanakan penelitian tersebut pada lhewan uji mencit. Komisi Ethical Clearance tnempunyai hak untuk melakukan pemantauan selama penelitian berlangsung.

Yogyakarta, 31 Januari 2011

Lampiran Realisasi Anggaran Penelitian Tahun 2012 Judul Penelitian : Potensi Ekstrak Etanolik Temu Kunci (Boesenbergia pandurata)

sebagai Agen Kemoprevensi Tumorigenesis Kulit Terinduksi UV­ B Ketua Peneliti

:

Shanti Listyawati, S.Si., M.Si.

Pagu penelitian : Rp 100.000.000

No

I

Realisasi Total (Rp) 87.485.000

Honor Tetap 17. 160.000

Uraian Realisasi(Rp) Belanja Bahan Perjadin BNO 63 .290.000

550.000

1.485.000

Belanja Sewa 5.000.000

HALAMAN PENGESAHAN

1 . Judul penelitian

Potensi Ekstrak Etanol Temu Kunci

(Boesenhergia pandurata) sebagai Agen Kemoprevensi Kankcr Kulit Terinduksi UV -B

2. Fokus Penelitian

Penyakit Tidak Menular

3.

Ilmu Pengetahuan Dasar

Jenis Penelitian

4. Peneliti Utama a. Nama Lengkap b. NIP c.

Pangkat/golongan

Shanti Listyawati, S.Si., M.Si. 1 96906081997022001 Pembina/ JV a

d. Instansi Penanggungjawab

Program Studi Biotck.nologi UGM

e. Alamat

.ll. Teknika Utara, Barek Yogyakarta

f. E-mail

shant ilisty(CV,yahoo . com

5 . Jumlah Tim Peneliti a. Nama anggota- 1 6. Lokasi penelitian

2 orang Nita Etikawati, S.Si, M.Si. Laboratorium Farmakologi dan LPPT UGM

7. Masa Penel itian

6 bulan

8. Pembiayaan yang diperlukan

Rp I 00.000.000,-

9. Sumbt:r Pembiayaan

DIPA Sekretariat Badan Litbangkes TA 2012

Telah selesai dilaksanakan sesuai dengan Surat Pe1:janjian Kerjasama Pelaksanaan Riset Pembinaan Tlmu Pengetahuan dan Teknologi Kedokteran, nomer H \l. . Ob. C>

Yogyakarta,

.2..1

1/t 1 I&:I ; / c:z_o 1:2-

'Pe�e.""be-r

2012

Ketua peneliti

ii