Lampiran 1. Gambar Alat KCKT dan Syringe 50 µl. Alat KCKT. Syringe 50 µl. Universitas Sumatera Utara

Lampiran 1. Gambar Alat KCKT dan Syringe 50 µl

Alat KCKT

Syringe 50 µl

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 2. Gambar Perangkat Penelitian Lainnya

Ultrasonic cleaner

Pompa vakum dan seperangkat penyaring fase gerak


Lampiran 2. (Lanjutan)

Alat vortex

Sentrifuge


Lampiran 2. (Lanjutan)

Neraca analitik


Lampiran 3. Plasma Kosong


Lampiran 4. Fase gerak


Lampiran 5.

Kromatogram dari Larutan Rifampisin ARS, Fase Gerak Buffer Posfat pH 2,6: Acetonitril (55 : 45)


Lampiran 6. Kromatogram dari Larutan Vitamin C, Fase Gerak Buffer Posfat pH 2,6: Acetonitril (55 : 45)


Lampiran 7.

Kromatogram dari Plasma Kosong


Lampiran 8. Kromatogram dari Penyuntikan Sampel Darah Pasien TB


Lampiran 9. Kromatogram dari larutan Larutan Rifampisin ARS Konsentrasi 0,486 mM (400 mcg/ml)










Lampiran 14. Perhitungan Persamaan Regresi dan Kurva Kalibrasi Rifampisin ARS yang Diperoleh Secara KCKT pada λ 254 nm Tabel 1. Data Kalibrasi Rifanpisin (RIF) ARS Konsentrasi (x) terhadap Rasio Luas Area Puncak (y)

No. 1. 2. 3. 4. 5. Σ Ratarata a=

0,486 0,6075 0,729 1,0936 1,4581 4,3742

Rasio Luas Area Puncak RIF (y) 146527 179080 238574 644956 849372 2058509

0,87484

411701,800

Konsentrasi RIF (mM) (x)

x.y 71212,122 108791,100 173920,446 705323,882 1238469,313 2297716,863

x2

y2

0,236196 21470161729 0,36905625 32069646400 0,531441 56917553476 1,19596096 415968241936 2,12605561 721432794384 4,45870982 1247858397925

 xy   x  y / n  x   x  / n 2

2

=

2297716,863  (4,3742)(2058509) / 5 4,45871  (4,3742) 2 / 5

=

2297716,863  1800866,014 4,45871  3,826725128

=

496850,8 0,631985

= 786175,4494 Y = aX + b b = Y – aX = 411701,800 – (786175,4494)( 0,87484) = 411701,800 – 687777,7301 = -276075,9301 Sehingga, diperoleh persamaan regresi Y = 786175,4494 X - 276075,9301


Untuk mencari hubungan kadar (X) dengan perbandingan luas area (Y) digunakan pengujian koefisien kolerasi (r). r=

 xy   x  y / n  x   x  / n  y   y 2

2

r=

r=

r=

r=

r=

2

2

/n



(2297716,863)  (4,3742).(2058509) / 5

4,45870982  (4,3742) / 51247858397925  (2058509) / 5 2

2

2297716,86 3  1800866,0136

4,45870982  3,8267251281247858397925  847491860616,2 496850,8492

0,631984692400366537308,8 496850,8492 253025522768,2080 496850,8492 503016,4240

r = 0,987742796


Lampiran 15. Perhitungan Konsentrasi Obat Rifampisin

Luas Puncak Rifampisin (sampel) = 792583 Dari persamaan regresi Y = 786175,4494 X - 276075,9301, maka 792583

= 786175,4494 X - 276075,9301

786175,4494 X

= 792583 + 276075,9301

786175,4494 X

= 1068658,9301

X =

1068658,9301 786175,4494

X = 1,3593 mM = 0,0013593 M = 0,0013593 x 822,95 = 1,1186 gr/L = 1,1186 mg/ml = 1118,6 mcg/ml (ppm)


Lampiran 16. Perhitungan Limit of Detection (LOD) dan Limit of Quantitation (LOQ) Rifampisin

Persamaan garis regresi Rifampisin: Y = aX + b Y = 786175,4494 X - 276075,9301 No 1 2 3 4 5



SD

=

X 0,486 0,6075 0,729 1,0936 1,4581

 (y - yi)2 n2

Y 146527 179080 238574 644956 849372

=

Yi 658157,1985 753677,5156 849197,8327 1135837,402 1422398,353

1534112981718,9100 = 52

(y-yi)2 261765460064,6070 330162304987,8530 372861465119,7100 240964550431,9400 328359201114,8040 1534112981718,9100

767056490859,4570

= 875817,6128

LOD =

3 x 875817,6128 3 x SD = slope 786175,4494

LOQ =

10 x SD 10 x 875817,6128 = = 11,14023 mM slope 786175,4494

= 3,342069 mM


Lampiran 17. Data Pasien

Nama

: Muhammad Nur

Umur

: 28 tahun

Jenis Kelamin : Laki-laki Berat Badan

: 55 kg

Telah memakan Obat TB selama ±1 bulan.


Lampiran 18. Spesifikasi Baku Rifampisin


Lampiran 19. Surat Komite Etik


Lampiran 20. Pembuatan Plasma

Donatur (dewasa dan sehat) Diambil darahnya sebanyak 5 ml Dimasukkan ke dalam venoject yang telah berisi 0,5 ml heparin Darah + heparin didalam venoject

Disentrifugasi dengan kecepatan 4000 putaran per menit selama 5 menit Dipisahkan supernatan dari endapan

Supernatan

Endapan

Plasma


Lampiran 21. Pembuatan Kromatogram dari Plasma Kosong

Plasma Dipipet sebanyak 300 µl Dimasukkan ke dalam politube Ditambahkan 600 µl methanol, lalu divortex Disentrifugasi dengan kecepatan 4000 putaran per menit selama 5 menit Supernatan

Endapan Dipisahkan menggunakan spuit Disaring menggunakan PTFE ø 0,2 µm Diinjeksikan ke dalam sistem KCKT sebanyak 20 µL

Kromatogram plasma


Lampiran 22. Pembuatan Kurva Kalibrasi Rifanpisin ARS

Vitamin C Ditimbang seksama sejumlah 5 mg Dimasukkan ke dalam vial yang telah dikalibrasi 1 ml Diencerkan dengan fase gerak sampai garis tanda Larutan mengandung vitamin C Ditimbang seksama sejumlah 4 mg, 5 mg, 6 mg, 9 mg, 12 mg Rifampisin ARS Dilarutkan kedalam fase gerak yang mengandung vitamin C 5 mg Rifampisin ARS 4,8605 mM (4.000 mcg/ml), 6,0757 mM (5.000 mcg/ml), 7,2908 mM (6.000 mcg/ml), 10,9362 mM (9000 mcg/ml), 14,5816 mM (12000 mcg/ml). Dipipet 10 μl larutan Rifampisin ARS Dimasukkan kedalam vial yang telah dikalibrasi 2 ml Dimasukkan 2 ml plasma kedalam vial Dihomogen dengan vortex Dibiarkan selama 5 menit Rifampisin ARS 0,4860 mM (400 mvg/ml) ), 0,6075 mM (500 mcg/ml), 0,7290 mM (600 mcg/ml), 1,0936 mM (900 mcg/ml), 1,4581 mM (1200 mcg/ml). Dipipet 300 µl ditambahkan 600 µl acetonitril untuk mengendapkan protein lalu di vortex. Disentrifugasi dengan kecepatan 4000 putaran per menit selama 5 menit Dipisahkan supernatan dari endapan

Supernatan

Endapan


Lanjutan : Supernatan Dipisahkan menggunakan spuit Disaring menggunakan PTFE ø 0,2 µm Diinjeksikan ke dalam sistem KCKT sebanyak 20 µl Kromatogram Diperoleh Rt dan luas area Dihitung persamaan regresi Hasil


Lampiran 23. Pembuatan Plasma dari Sampel Darah Pasien

Pasien TB Diambil darahnya sebanyak 5 ml Dimasukkan ke dalam venoject yang telah berisi 0,5 ml heparin Darah + heparin didalam venoject Di masukkan vitamin C 5 mg Disentrifugasi dengan kecepatan 4000 putaran per menit selama 5 menit Dipisahkan supernatan dari endapan Supernatan

Endapan

Plasma


Lampiran 24. Pembuatan Kromatogram dari Sampel Plasma Pasien

Plasma Pasien Dipipet sebanyak 300 µl Dimasukkan ke dalam politube Ditambahkan 600 µl acetonitril Disentrifugasi dengan kecepatan 4000 putaran per menit selama 5 menit

Supernatan

Endapan Dipisahkan menggunakan spuit Disaring menggunakan PTFE ø 0,2 µm Diinjeksikan ke dalam sitem KCKT

Kromatogram plasma Diperoleh Rt dan luas area Dihitung konsentrasi yang didapat

Hasil


Lampiran 1. Gambar Alat KCKT dan Syringe 50 µl. Alat KCKT. Syringe 50 µl. Universitas Sumatera Utara

Recommend Documents