!HU000003110T2! (19)
HU
(11) Lajstromszám:
E 003 110
(13)
T2
MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal
EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA C07D 205/08
(21) Magyar ügyszám: E 04 720854 (22) A bejelentés napja: 2004. 03. 16. (96) Az európai bejelentés bejelentési száma: EP 20040720854 (97) Az európai bejelentés közzétételi adatai: EP 1613589 A1 2004. 10. 14. (97) Az európai szabadalom megadásának meghirdetési adatai: EP 1613589 B1 2008. 02. 13.
(51) Int. Cl.:
(30) Elsõbbségi adatok: 20031014610 2003. 04. 01.
(73) Jogosult: Sanofi-Aventis Deutschland GmbH, Frankfurt am Main (DE)
DE
(72) Feltalálók: Jaehne, Gerhard, Frankfurt (DE); Frick, Wendelin, Hünstetten-Beuerbach (DE); Lindenschmidt, Andreas, Bad Soden (DE); Flohr, Stefanie, Reinach (CH); dr. Heuer, Hubert, Schwabenheim (DE); Schaefer, Hans-Ludwig, Hochheim (DE); Kramer, Werner, Mainz-Laubenheim (DE); Galia, Eric, Frankfurt am Main (DE); Glombik, Heiner, Hofheim (DE) (54)
(2006.01) A61K 31/397 (2006.01) A61P 3/06 (2006.01) (87) A nemzetközi közzétételi adatok: WO 04087655 PCT/EP 04/02690
(74) Képviselõ: Molnár Imre, DANUBIA Szabadalmi és Jogi Iroda Kft., Budapest
Új, javított fiziológiai tulajdonságokkal rendelkezõ difenil-azetidinon-származék, eljárás elõállítására, ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények és ezek alkalmazása
(57) Kivonat A találmány az új I képletû vegyületre,
HU 003 110 T2
I
valamint ennek gyógyászatilag elfogadható sóira vonatkozik. A találmány szerinti vegyületek elsõsorban hiperlipidémia, arterioszklerózis és hiperkoleszteriné-
mia kezelésére alkalmasak, továbbá a felsõ vékonybélben mutatott javított oldhatóságukkal tûnnek ki.
A leírás terjedelme 16 oldal Az európai szabadalom ellen, megadásának az Európai Szabadalmi Közlönyben való meghirdetésétõl számított kilenc hónapon belül, felszólalást lehet benyújtani az Európai Szabadalmi Hivatalnál. (Európai Szabadalmi Egyezmény 99. cikk (1)) A fordítást a szabadalmas az 1995. évi XXXIII. törvény 84/H. §-a szerint nyújtotta be. A fordítás tartalmi helyességét a Magyar Szabadalmi Hivatal nem vizsgálta.
1
HU 003 110 T2
A találmány egy szubsztituált difenil-azetidinon-származékra, ennek fiziológiailag elfogadható sóira és fiziológiailag hatásos származékaira vonatkozik. A WO 02/50027 számú nemzetközi közrebocsátási iratban már ismertettek difenil-azetidinon-származékokat, valamint ezek alkalmazását hiperlipidémia, továbbá arterioszklerózis és hiperkoleszterinémia kezelésére. A jelen találmány azon a feladaton alapul, hogy egy olyan vegyületet bocsássunk rendelkezésre, amely a WO 02/50027 számú nemzetközi közrebocsátási iratban ismertetett vegyületekhez képest lényegesen jobban oldódik a felsõ vékonybélben étkezés elõtti, illetve utáni állapotban. A vegyület jobb oldékonyságára tekintettel nagyobb mértékben áll a hatás helyén oldott anyag rendelkezésre, és ezáltal jobb hatás érhetõ el. Ennek a jobb oldékonyságnak a vizsgálata céljából úgynevezett FaSSIF (Fasted State Simulating Intestinal
2
Fluid) és FeSSIF (Fed State Simulating Intestinal Fluid) közegeket alkalmaztunk, amelyek a felsõ vékonybélben étkezés elõtti, illetve étkezés utáni állapotban a pH¹ és a szolubilizálási viszonyokat megmutatják. 5 A találmány továbbá azon a feladaton alapul, hogy egy olyan vegyületet bocsássunk rendelkezésre, amely a WO 02/50027 számú nemzetközi közrebocsátási iratban ismertetett vegyületekhez képest megnövelt stabilitással rendelkezik mind savas tartományban 10 (gyomor), mind enyhén alkalikus tartományban (vékonybél). Ez a tulajdonság ahhoz vezet, hogy kevesebb melléktermék/bomlási termék képzõdik, amelyek a maguk részérõl nemkívánatos mellékhatásokat fejthetnek ki. A savas tartományban mutatott megnövelt 15 stabilitás azonban a gyógyszerkészítmények elõállításánál is nagy elõnnyel jár, mivel nincs szükség savval szemben ellenálló kapszulára/tablettára. Így a találmány az I képletû vegyületre,
I
valamint ennek gyógyászatilag elfogadható sóira vonatkozik. Gyógyászati alkalmazás céljából a gyógyászatilag elfogadható sók a kiindulási, illetve alapvegyületekhez képest mutatott megnövelt vízoldhatóságukra tekintettel különösen célszerûen alkalmazhatók. Az ilyen sóknak egy gyógyászatilag elfogadható aniont vagy kationt kell tartalmazniuk. A találmány szerinti vegyület alkalmas, gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sói közé tartoznak szervetlen savakkal, így például sósavval, hidrogén-bromiddal, foszforsavval, metafoszforsavval, salétromsavval és kénsavval, valamint szerves savakkal, így például ecetsavval, benzolszulfonsavval, benzoesavval, citromsavval, etánszulfonsavval, fumársavval, glükonsavval, glikolsavval, izetionsavval, tejsavval, laktobionsavval, maleinsavval, almasavval, metánszulfonsavval, borostyánkõsavval, p¹toluolszulfonsavval és borkõsavval képzett sók. Alkalmas gyógyászatilag elfogadható bázikus sók például az ammóniumsók, alkálifémsók (így például a nátrium- és káliumsók), alkáliföldfémsók (így például a magnéziumés kalciumsók), valamint a trometamollal (2¹amino-2hidroxi-metil-1,3-propándiol), dietanol-aminnal, lizinnel vagy etilén-diaminnal képzett sók. A találmány oltalmi körébe tartoznak továbbá egy gyógyászatilag nem elfogadható anionnal, például trifluor-acetáttal képzett sók, mint hasznos köztitermékek gyógyászatilag elfogadható sók elõállítására vagy tisztítására és/vagy nem terápiás, például in vitro felhasználások során történõ alkalmazásra. Az itt használt „fiziológiailag hatásos származék” alatt a találmány szerinti I képletû vegyület olyan fizio-
lógiailag elfogadható származékait, például észtereit 30 értjük, amelyek egy emlõsnek, így például az embernek történõ beadás során képesek (közvetve vagy közvetlenül) egy I képletû vegyületet vagy ennek egy aktív metabolitját képezni. A fiziológiailag hatásos származékok közé tartoz35 nak a találmány szerinti vegyület prodrugjai is, például Okada, H. és munkatársai által a Chem. Pharm. Bull., 42, 57–61 (1994) szakirodalmi helyen ismertetett prodrugok. Az ilyen prodrugok in vivo valamely találmány szerinti vegyületté metabolizálhatók. Az ilyen prodru40 gok maguk is hatásosak lehetnek, vagy nem. A találmány szerinti vegyület különbözõ polimorf formákban is lehet, így például amorf és kristályos polimorf formában. A találmány szerinti vegyület összes polimorf formája a találmány oltalmi körébe tartozik, így 45 a találmány egy további aspektusát képezi. A következõkben az „I képletû vegyület(ek)” kifejezés alatt a korábbiakban ismertetett I képletû vegyületet, valamint ennek sóit, szolvátjait és a korábbiakban ismertetett, fiziológiailag hatásos származékait értjük. 50 Egy arilrész alatt egy fenil¹, naftil¹, bifenil¹, tetrahidronaftil¹, alfa- vagy béta-tetralon¹, indanil- vagy indán1-on-il-részt értünk. Az I képletû vegyület(ek) más hatóanyagokkal együtt adható, illetve adhatók be. 55 Az I képletû vegyületbõl a kívánt biológiai hatás eléréséhez szükséges mennyiség számos tényezõtõl, így például a választott specifikus vegyülettõl, a tervezett alkalmazástól, a beadás módjától és a beteg klinikai állapotától függ. Általában a napi dózis 1 testtömeg60 kg¹ra vonatkoztatva 0,01 mg és 100 mg (tipikusan 2
1
HU 003 110 T2
0,05 mg és 50 mg), például 0,1 mg és 10 mg közötti lehet. Az orálisan beadható, egyszeres dózist tartalmazó készítmények, így például a tabletták vagy kapszulák például 1,0 mg és 1000 mg, jellegzetesen 10 mg és 600 mg közötti hatóanyagot tartalmazhatnak. A korábbiakban említett kóros állapotok terápiájánál az I képletû vegyületek önmagukban is hasznosíthatók, elõnyösen azonban alkalmas hordozóanyagokkal alkotott gyógyászati készítmények formájában kerülnek hasznosításra. A hordozóanyag természetesen összeférhetõ kell legyen abban az értelemben, hogy a készítmény más alkotórészeivel kompatibilis, és a betegeknek egészségüket illetõen károsodást nem okoz. A hordozóanyag lehet szilárd vagy folyékony halmazállapotú vagy mindkétféle, és a hatóanyaggal együtt elõnyösen egyszeres dózis, például tabletta formájában kerül alkalmazásra, éspedig a hatóanyag mennyiségére vonatkoztatva 0,05 tömeg% és 95 tömeg% közötti mennyiségben. A készítmények tartalmazhatnak további gyógyászatilag aktív anyagokat, beleértve további I képletû vegyületeket. A találmány szerinti gyógyászati készítmények szokásos gyógyszergyártási módszerekkel állíthatók elõ, amelyek lényegében abban állnak, hogy az alkotóelemeket gyógyászatilag elfogadható hordozó- és/vagy egyéb segédanyagokkal összekeverjük. A találmány szerinti gyógyászati készítmények olyan készítmények, amelyek orális és perorális (például szublingvális, azaz nyelv alatti) beadásra alkalmasak, bár minden egyes esetben a leginkább alkalmas beadási forma a kezelendõ állapot típusától és súlyosságától, továbbá a konkrét esetben alkalmazott I képletû vegyülettõl függ. A találmány oltalmi körébe tartoznak drazsírozott készítmények és drazsírozott retard készítmények. Elõnyösek a savval és gyomornedvvel szemben ellenálló készítmények. A gyomorsavval szemben ellenálló alkalmas bevonóanyagok közé tartoznak a következõk: cellulóz-acetát-ftalát, poilvinilacetát-ftalát, hidroxi-propil-metil-cellulóz-ftalát, valamint metakrilsav és metakrilsav-metil-észter anionos polimerjei. Az orális beadásra alkalmas gyógyászati készítmények különbözõ egységek formájában, így például kapszulák, ostyatokok, szopogatós tabletták vagy tabletták formájában lehetnek, amelyek mindegyike az I képletû vegyületbõl meghatározott mennyiséget tartalmaz; alkalmazhatók továbbá porok vagy granulátumok; vizes vagy nemvizes oldószerrel képzett oldatok vagy szuszpenziók; vagy „olaj a vízben” vagy „víz az olajban” típusú emulziók. Miként említettük, ezek a készítmények elõállíthatók a gyógyszergyártásból e célra jól ismert módszerekkel, amelyek során az egyik mûveletben a hatóanyagot és a hordozóanyagot (amely egy vagy több járulékos további komponenst tartalmazhat) egymással érintkeztetjük. Általában az ilyen készítmények a hatóanyagnak folyékony és/vagy finomra aprított szilárd hordozóanyaggal való egyenletes és homogén elkeverése útján kerülnek elõállításra, majd ezt követõen kívánt esetben a terméket formázzuk. Így például egy
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60 3
2
tabletta állítható elõ úgy, hogy a hatóanyag porát vagy granulátumát sajtoljuk vagy más módon formázzuk, adott esetben egy vagy több járulékos komponenssel. Sajtolt tabletták elõállíthatók szabadon folyó vegyület tablettázása útján, például a vegyületet tartalmazó por vagy granulátum tablettázása útján, adott esetben kötõanyaggal, csúsztatóanyaggal, közömbös hígítóval és/vagy egy vagy több felületaktív anyaggal vagy diszpergálószerrel egy alkalmas berendezésben. Formázott tabletták elõállíthatók alkalmas berendezésben por alakú, egy közömbös folyékony hígítószerrel megnedvesített hatóanyag formázása útján is. A perorálisan (szublingválisan) beadható gyógyászati készítmények közé tartoznak szopogatós tabletták (ezek egy I képletû vegyületet egy ízesítõanyaggal együtt tartalmazzák, rendszerint szacharózzal és gumiarábikummal vagy tragakantgyantával) és pasztillák (ezek a hatóanyagot közömbös bázisban, például zselatinban és glicerinben vagy szacharózban és gumiarábikumban tartalmazzák). A kombinációs készítményekhez további hatóanyagokként a következõk alkalmasak: Az összes olyan antidiabetikum, amely az úgynevezett „Rote Liste” 2003. évi kiadásának 12. fejezetében megnevezésre került. Ezek a találmány szerinti I képletû vegyületekkel együtt különösen szinergista hatásfokozás céljából kombinálhatók. A hatóanyag-kombináció beadása történhet a betegeknek a hatóanyagok külön-külön történõ beadásával vagy olyan kombinációs készítmények formájában, ahol több hatóanyag egyetlen gyógyászati készítményben van jelen. A következõkben ismertetésre kerülõ hatóanyagok közül a legtöbb felsorolásra kerül az USAN USP Dictionary címû könyvében és a Rockville-ben 2001-ben kiadott amerikai egyesült államokbeli gyógyszerkönyv „International Drug Names” címû részében. Az antidiabetikumok közé tartoznak továbbá az inzulin és származékai, így például a Lantus márkanevû anyag (lásd: www.lantus.com) vagy a HMR 1964, gyorsan ható inzulinok (lásd a 6 221 633 számú amerikai egyesült államokbeli leírást), GLP–1-származékok, így például a Novo Nordisk A/S dán cég által a WO 98/08871 számú nemzetközi közrebocsátási iratban ismertetettek, Zealand által a WO 01/04156 nemzetközi közrebocsátási iratban ismertettek vagy a Beaufour-Ipsen által a WO 00/34331 számú nemzetközi közrebocsátási iratban ismertetettek, valamint orálisan hatékony hipoglikémiás hatóanyagok. Az orálisan hatékony hipoglikémiás hatóanyagok közé tartoznak elõnyösen szulfonil-karbamid-származékok, biguanidinszármazékok, meglitinid, oxadiazolidindionszármazékok, tiazolidindionszármazékok, glükozidázinhibitorok, a glikogénfoszforilázt gátló anyagok, glukagonantagonisták, GLP–1-agonisták, káliumcsatorna megnyitására képes anyagok, így például a Novo Nordisk A/S dán cég által a WO 97/26265 és WO 99/03861 számú nemzetközi közrebocsátási iratban ismertetett anyagok, inzulinszenzitizáló anyagok, májenzimek inhibitorai, amelyek részt vesznek a glükoneogenéz és/vagy glikogenoliz stimulációjában, továbbá a glükózfelvétel, a glükóztranszport és glükóz-
1
HU 003 110 T2
visszareszorpció modulátorai, a zsíranyagcserét megváltoztató anyagok, így például antihiperlipidémiás és antilipidémiás hatóanyagok, a táplálékfelvételt csökkentõ vegyületek, PPAR- és PXR-agonisták és olyan hatóanyagok, amelyek a béta-sejtek ATP-függõ káliumcsatornájára hatnak. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy HMGCoA-reduktáz-inhibitorral, így például simvastatinnal, fluvastatinnal, pravastatinnal, lovastatinnal, atorvastatinnal, cerivastatinnal vagy rosuvastatinnal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy koleszterinreszorpció-inhibitorral, így például ezetimibe, tiqueside vagy pamaqueside nevû anyagokkal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy PPAR-gamma-agonistával, például rosiglitazon, pioglitazon, JTT–501 vagy GI–262570 nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy PPAR-alfa-agonistával, így például GW 9578 vagy GW 7647 nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy vegyes PPAR-alfa/gamma agonistával, így például GW 1536, AVE 8042, AVE 8134 vagy AVE 0847 nevû anyaggal vagy például a PCT/US 11833, PCT/US 11490 vagy DE10142734.4 számú publikált szabadalmi bejelentésekben ismertetett vegyületekkel kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy fibráttal, így például fenofibráttal, klofibráttal vagy bezafibráttal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy MTP-inhibitorral, így például implitapide, BMS–201038 vagy R–103757 nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy epesav-reszorpciós inhibitorral (lásd például a 6 245 744 vagy 6 221 897 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást), így például HMR1741 nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy CETP-inhibitorral, így például JTT–705 nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy polimer epesavadszorberrel, így például kolesztiramin vagy colesevelam nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy LDL-receptort serkentõvel (lásd például a 6 342 512 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást), így például HMR1171 vagy HMR1586 nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy ACAT-inhibitorral, így például
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60 4
2
Avasimibe nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy antioxidánssal, így például OPC–14117 nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy lipoprotein-lipáz-inhibitorral, így például NO–1886 nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy ATP-citrát-liáz-inhibitorral, így például SB–204990 nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy szkvalén-szintetáz-inhibitorral, így például BMS–188494 nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy lipoproteinantagonistával, így például Cl–1027 nevû anyaggal vagy nikotinsavval kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy lipázinhibitorral, így például Orlistat nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek inzulinnal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy szulfonil-karbamid-származékkal, így például tolbutamid, glibenklamid, glipizid vagy glimepirid nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy biguanidszármazékkal, így például metforminnal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy meglitinidszármazékkal, így például repaglinid nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy tiazolidindionszármazékkal, így például troglitazon, ciglitazon, pioglitazon vagy rosiglitazon nevû anyaggal vagy a Dr. Reddy’s Research Foundation által a WO 97/41097 számú nemzetközi közrebocsátási iratban kinyilvánított vegyületekkel, különösen 5¹[[4¹[(3,4-dihidro-3-metil-4-oxo-2-kinazolinilmetoxi]-fenil]-metil]-2,4-tiazolidindionnal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy a¹glükozidázinhibitorral, így például miglitol vagy acarbose nevû anyaggal kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek egy, béta-sejtek ATP-függõ káliumcsatornájára ható hatóanyaggal, így például tolbutamid, glibenclamid, glipizid, glimepirid vagy repaglinid nevû vegyülettel kombinációban kerülnek beadásra. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek az elõzõekben ismertetett vegyületek kö-
1
HU 003 110 T2
zül egynél többel kombinációban, így például egy szulfonil-karbamid-származék és metformin, egy szulfonil-karbamid-származék és acarbose, repaglinid és metformin, inzulin és egy szulfonil-karbamid-származék, inzulin és metformin, inszulin és troglitazon vagy inzulin és lovastatin által alkotott kombinációkban kerülnek beadásra. A találmány egy további kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek a következõkben felsorolt vegyületek valamelyikével kombinálva kerülnek beadásra: CART-modulátorok [lásd a „Cocaine-amfetamine-regulated transcript influences energy metabolism, anxiety and gastric emptying in mice” címû cikket, amely megjelent Asakawa, A. és munkatársai cikkeként a Hormone and Metabolic Research, 33(9), 554–558 (2001) szakirodalmi helyen], NPY-antagonisták, így például naftalin-1-szulfonsav-{4¹[(4¹amino-kinazolin-2-il-amino)-metil]-ciklohexil-metil}-amid-hidroklorid (CGP 71683A), kannabinoid receptor 1 antagonisták (lásd például az EP 0656354 számú európai, valamint a WO 00/15609 vagy WO 02/076949 számú nemzetközi közrebocsátási iratot), MC4-agonisták {például 1¹amino-1,2,3,4-tetrahidronaftalin-2-karbonsav-[2¹(3a-benzil-2-metil-3-oxo2,3,3a,4,6,7-hexahidropirazolo[4,3¹c]piridin-5¹il)-1(4¹klór-fenil)-2-oxo-etil]-amid (lásd a WO 01/91752 számú nemzetközi közrebocsátási iratot)}, orexinantagonisták {például 1¹(2¹metil-benzoxazol-6¹il)-3¹[1,5]naftiridin-4-il-karbamid-hidroklorid (SB–334867–A)}, H3¹agonisták {(3¹ciklohexil-1¹(4,4-dimetil-1,4,6,7-tetrahidroimidazo[4,5¹c]piridin-5¹il)-propán-1-on-oxalát (WO 00/63208 számú nemzetközi közrebocsátási irat)}; TNF-agonisták, CRF-antagonisták {például [2¹metil9¹(2,4,6-trimetil-fenil)-9H-1,3,9-triaza-fluorén-4¹il]-dipropil-amin (WO 00/66585 számú nemzetközi közrebocsátási irat)}, CRF-BP-antagonisták (így például urocortin), urocortinagonisták, b3-agonisták {például 1¹(4¹klór-3metánszulfonil-metil-fenil)-2-[2¹(2,3-dimetil-1H-indol-6il-oxi)-etil-amino]-etanol-hidroklorid (WO 01/83451 számú nemzetközi közrebocsátási irat)}, MSH (melanocitastimuláló hormon)-agonisták, MCH (melanint koncentráló hormon) receptor antagonisták (lásd például: WO 03/15769 számú nemzetközi közrebocsátási irat), CCK-A-agonisták (például {2¹[4¹(4¹klór-2,5-dimetoxi-fenil)-5-(2¹ciklohexil-etil)-tiazol-2-il-karbamoil]-5,7-dimetilindol-1¹il}-ecetsav-trifluor-acetátsót (WO 99/15525 számú nemzetközi közrebocsátási irat) vagy SR–146131 (WO 0244150 számú nemzetközi közrebocsátási irat) vagy SSR–125180), szerotonin újrafelvételét gátló anyagok (például dexfenfluramin), vegyes szerotoninés noradrenerg vegyületek (lásd például a WO 00/71549 számú nemzetközi közrebocsátási iratot), 5HT-agonisták, így például 1¹(3¹etil-benzo-furán7¹il)-piperazin-oxalát (WO 01/09111 számú nemzetközi közrebocsátási irat), bombezinagonisták, galaninantagonisták, növekedési hormonok (így például humán növekedési hormon), növekedési hormont felszabadító vegyületek [például 6¹benzil-oxi-1-(2¹diizopropil-aminoetil-karbamoil)-3,4-dihidro-1H-izokinolin-2-karbonsavterc-butil-észter (WO 01/85695 számú nemzetközi közrebocsátási irat)], TRH-agonisták (lásd például a EP 0 462 884 számú európai közrebocsátási iratot), kö-
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60 5
2
tésfelszabadításra alkalmas protein¹2- vagy 3¹modulátorok, leptinagonisták [lásd például Lee, Daniel W., Leinung, Matthew C., Rozhavskaya-Arena, Marina és Grasso, Patricia „Leptin agonists as a potential approach to the treatment of obesity” címû cikkét a Drugs of the Future, 26(9), 873–881 (2001) szakirodalmi helyen], DA¹agonisták (brómkriptin, doprexin), lipáz/amiláz inhibitorok (például WO 00/40569 számú nemzetközi közrebocsátási irat), PPAR-modulátorok (például WO 00/78312 számú nemzetközi közrebocsátási irat), 11b-HSD1 (11-béta-hidroxiszteroid-dehidrogenáz 1. típusa) gátló anyagai [lásd például WO 01/90094 számú nemzetközi közrebocsátási iratot vagy Barf, T. és munkatársai által a J. Med. Chem., 45, 3813–3815 (2002) szakirodalmi helyen publikáltakat], az acetil-CoA karboxiláz gátló anyagai (ACC gátló anyagai, lásd például a WO 99/46262 számú nemzetközi közrebocsátási iratot), a dipeptidilpeptidáz IV (DPP¹IV) gátló anyagai (lásd például az 1 259 246 számú európai szabadalmi leírást), RXR-modulátorok vagy TR¹b-agonisták. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében a további hatóanyag a leptin; ilyen vonatkozásban lásd Salvador, Javier, Gomez-Ambrosi, Javier, és Fruhbeck, Gema „Perspectives in the therapeutic use of leptin” címû cikkét az Expert Opinion on Pharmacotherapy 2(10), 1615–1622 (2001) szakirodalmi helyen. A találmány egy további kiviteli alakja értelmében a további hatóanyag dexamfetamin vagy amfetamin. A találmány egy további kiviteli alakja értelmében a további hatóanyag fenfluramin vagy dexfenfluramin. A találmány egy további kiviteli alakja értelmében a további hatóanyag sibutramin. A találmány egy további kiviteli alakja értelmében a további hatóanyag orlistat. A találmány egy további kiviteli alakja értelmében a további hatóanyag mazindol vagy fentermin. A találmány egyik kiviteli alakja értelmében az I képletû vegyületek ballasztanyagokkal, elõnyösen oldhatatlan ballasztanyagokkal kombinálva kerülnek beadásra. A ballasztanyagok vonatkozásában utalunk például a Carob és a Caromax márkanevû anyagok kombinációjára [lásd Zunft, H. J. és munkatársai „Carob pulp preparation for treatment of hypercholesterolemia” címû cikkét az Advances in Therapy, 18(5), 230–236 (2001. szeptember–október) szakirodalmi helyen]. A Caromax márkanevû anyag a Nutrinova cég (Nutrition Specialties & Food Ingredients GmbH, Industriepark Höchst, 65926 Frankfurt am Main) carobtartalmú terméke. A Caromax márkanevû anyaggal alkotott kombináció egyetlen készítményben adható be, de beadható külön-külön egy I képletû vegyület és a Caromax márkanevû anyag. A Caromax ilyenkor beadható élelmiszerek, így például sütõipari termékek vagy müzligyûrûk formájában. Szakember számára érthetõ, hogy a találmány szerinti vegyületeknek az elõzõekben ismertetett vegyületek közül eggyel vagy többel és adott esetben egy vagy több további, farmakológiailag hatékony anyaggal alkotott kombinációban való alkalmazása a jelen találmány oltalmi körébe tartozik.
1
HU 003 110 T2
2
OPC-14117
JTT-705
SB-204990
NO-1886
CI-1027
BMS-188494
GI-262570
JTT-501
A találmány továbbá az I képletû vegyület elõállítási eljárására vonatkozik.
45
A) eljárás
II
III
6
1
HU 003 110 T2
2
IV
I
Az I képletû vegyület elõállítására szolgáló A) eljárást az jellemzi, hogy a II képletû, a WO 02/50027 számú nemzetközi közrebocsátási iratból ismert aminvegyületet 1,12-dodekándikarbonsav III képletû monoglükamidjával egy peptidkapcsolás értelmében egy IV képletû vegyületté alakítunk, mimellett a III képletû vegyület glükaminrészében a hidroxifunkciókat például acilcsoportokkal, így például acetilcsoportokkal, vagy étercsoportokkal, így például benzil-éter-csoportokkal megvédjük. Ennél a reagáltatásnál dolgozhatunk például N¹hidroxi-benztriazollal (HOBt) és N¹etil-N’(3¹dimetil-amino-propil)-karbodiimiddel (EDC) szobahõmérsékleten, oldószerként például dimetil-forma-
midot (DMF) használva. Használhatunk azonban más, 25 peptidkapcsolásra alkalmas reagensekkel, illetve oldószerrel vagy oldószerelegyekkel [lásd például Speicher, A. és munkatársai cikkét a Journal für Praktische Chemie, Chemiker-Zeitung, 340, 581–583 (1998) szakirodalmi helyen; továbbá a következõ publikációkat: 30 Klausner, Y. S. és Bodansky, M.: Synthesis, (1972), 453. oldaltól; Ishihara, K. és munkatársai: J. Org. Chem., 61, 4196 (1996); Kunishima, M. és munkatársai: Tetrahedron, 55, 13 159–13 170 (1999) vagy Larock, R. C.: Comprehensive Organic Transformations, 35 981. oldaltól, a könyv a VCH kiadó gondozásában New Yorkban 1989-ben jelent meg].
B) eljárás
V II
VI
7
1
HU 003 110 T2
2
I dõcsoportok vagy benzilvédõcsoportok), amikor az I képEgy további találmány szerinti eljárás, azaz a B) eljáletû vegyületet vagy egy megfelelõ védõcsoporttal ellátott rás értelmében a II képletû amint az V képletû 1,12-doIa képletû vegyületet kapunk. Egy további lépésben a védekándikarbonsavval reagáltatjuk peptidkapcsolás körüldõcsoportok eltávolíthatók enyhén alkalikus körülmények ményei között, majd a képzõdött VI képletû terméket ismét csak a peptidkapcsolás körülményei között olyan VII 25 között, így például híg vizes ammónium-hidroxid-oldattal, vagy hidrogenolízis (benzil-éter-védõcsoportok alkalmaképletû glükaminnal reagáltatjuk, amelynek hidroxifunkzása esetén) útján, amikor az I képletû vegyületet kapjuk. cióihoz védõcsoportok kapcsolódnak (például acetil-véC) eljárás
II
VIII
I
8
1
HU 003 110 T2
Egy további találmány szerinti eljárásban, azaz a C) eljárásban a II képletû amint a VIII képletû 11¹((4R,6R)4,5,6-trihidroxi-3¹(R)-hidroxi-2¹(S)-hidroxi-hexil-karbamoil)-undekánsav egy savhalogenidjével, például kloridjával reagáltatjuk például piridinben vagy diklór-metánban, adott esetben egy aminbázis adagolása mellett szobahõmérsékleten. A glükaminrész hidroxifunkcióit elõnyösen a korábbiakban említett védõcsoportokkal látjuk el, és a peptidkapcsolás után átalakítjuk Ia képletû amiddá. A találmány továbbá a III, IV és VIII képletû köztitermékekre vonatkozik. Ezekben a képletekben R jelentése acilcsoport, például acetilcsoport vagy benzoilcsoport vagy pedig R jelentése aralkil¹, alkil- vagy arilcsoport, így például benzilcsoport.
5
10
15
1. példa A1. eljárás 1. Dodekándikarbonsav-monometil-észter 20
25 Melegítés közben 40 ml vízmentes THF-ben feloldunk 4,6 g (20 mmol) dodekándikarbonsavat, majd az oldathoz lassan hozzáadunk 0,73 ml (10 mmol) tionilkloridot, és szobahõmérsékleten 30 percen át keverést végzünk. Ezután a reakcióelegyhez lassan hozzáadunk 0,8 ml (20 mmol) vízmentes metanolt, majd szobahõmérsékleten négy órán át keverést végzünk. Ezt követõen a reakcióelegyet szobahõmérsékleten négy napon
3. 11¹((4R,6R)-4,5,6-Trihidroxi-3¹(R)-hidroxi-2¹(S)hidroxi-hexil-karbamoil)-undekánsav (III képletû vegyület; R=H) elõállítása
75 ml vízmentes etanolban szobahõmérsékleten 4,45 g (10,9 mmol) 11¹((4R,6R)-4,5,6-trihidroxi-3¹(R)hidroxi-2¹(S)-hidroxi-hexil-karbamoil)-undekánsavmetil-észtert szuszpendálunk, majd a szuszpenzióhoz 25 ml vizet és 2,2 g 85 tömeg%¹os kálium-hidroxidot (33 mmol) adunk. Két órán át 80 °C hõmérsékleten végzett keverés után a DC¹vizsgálat teljes átalakulást mutat. A reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot vízben feloldjuk és tömény sósavval megsavanyítjuk. A kicsapódott nyerstermékrõl
30
2
át állni hagyjuk. A DC¹vizsgálat ezután már nem mutat további átalakulást; a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a maradékot vízben elkeverjük (ultrahangos fürdõ), a csapadékról a folyadékot leszívatjuk, majd a csapadékot vízzel mossuk, és ismét leszívatjuk. A nedves maradékot diklór-metánban keverjük (ultrahangos fürdõ), egy redõs szûrõn szûrjük, diklór-metánnal mossuk, és a szûrletet vákuumban bepároljuk. Így 63%¹os hozammal 3,09 g mennyiségben dodekándikarbonsavmonometil-észtert kapunk. Molekulatömeg (továbbiakban: MG) 244,34; tömegspektrum (továbbiakban: MS) 245,4 (M+H+). 2. 11¹((4R,6R)-4,5,6-Trihidroxi-3¹(R)-hidroxi-2¹(S)hidroxi-hexil-karbamoil)-undekánsav-metil-észter szintézise Szobahõmérsékleten 30 ml vízmentes DMF-ben feloldunk 3,07 g (12,6 mmol) dodekándikarbonsavmonometil-észtert, majd a kapott oldathoz hozzáadunk 2,2 g (12,1 mmol) glükamint, 1,9 g (12,4 mmol) HOBt¹t és 2,4 g (12,5 mmol) EDC¹t. Az így kapott reakcióelegyet szobahõmérsékleten 6 órán át keverjük, majd ugyanezen a hõmérsékleten egy éjszakán át állni hagyjuk. A következõ napon a DC teljes átalakulást mutat. A reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd nagyvákuumban megszárítjuk. A maradékot vízben keverjük (ultrahangos fürdõ), a folyadékot leszívatjuk, vízzel mosást végzünk, és ismét leszívatást hajtunk végre. A nedves nyersterméket diklór-metánban keverjük, a folyadékot leszívatjuk, a maradékot diklór-metánnal mossuk és szárítjuk. Így 90%¹os hozammal 4,45 g mennyiségben 11¹((4R,6R)-4,5,6-trihidroxi-3¹(R)-hidroxi-2¹(S)-hidroxi-hexil-karbamoil)-undekánsav-metilésztert kapunk. MG: 407,51; MS: 408,20 (M+H+).
40
a folyadékot leszívatjuk, majd a csapadékot mossuk, és a folyadékot ismét leszívatjuk. A nedves nyersterméket körülbelül 100 ml etanolból átkristályosítjuk, forrón szûrjük és jeges fürdõben kicsapatjuk. A csa55 padékról a folyadékot leszívatjuk, majd a csapadékot etanollal mossuk és szárítjuk. Így 2,2 g (51%) mennyiségben 11¹((4R,6R)-4,5,6-trihidroxi-3¹(R)-hidroxi-2¹(S)-hidroxi-hexil-karbamoil)-undekánsavat kapunk. 60 MG: 393,48; MS: 394,28 (M+H+). 9
1
HU 003 110 T2
4. Dodekándikarbonsav-4-[(2S,3R)-3-[(S)-3(4¹fluor-fenil)-3-hidroxi-propil]-2-(4¹metoxi-fenil)-4oxo-azetidin-1¹il]-benzil-amid-((2S,3R,4R,5R)2,3,4,5,6-pentahidroxi-hexil)-amid (I képletû vegyület) elõállítása
2
5
15 ml vízmentes DMF-ben enyhe melegítés köz- 15 roljuk, majd a maradékot nagyvákuumban szárítjuk. A maradékot ezután vízben keverjük (ultrahangos fürben feloldunk 0,63 g (1,45 mmol) II képletû benzildõ), leszívatjuk, a csapadékot vízzel mossuk, és ismét amint (elõállítását illetõen lásd a DE 10 064 398 leszívatjuk. A nyersterméket izopropanolból átkristászámú német közrebocsátási iratot) és 0,65 g lyosítjuk. A kristályos terméket még vízzel keverjük, (1,65 mmol), a fentiekben ismertetett dikarbonsav-monoamidot, majd az így kapott oldathoz hozzáadunk 20 majd a vizet leszívatjuk, és szárítást végzünk. Így 0,38 g (32%) mennyiségben az I képletû dodekándi0,25 g (1,63 mmol) HOBt¹t és 0,31 g (1,67 mmol) karbonsav-4-[(2S,3R)-3-[(S)-3-(4¹fluor-fenil)-3-hidroxiEDC¹t. Az adagolás befejezése után szobahõmérsékpropil]-2-(4¹metoxi-fenil)-4-oxo-azetidin-1¹il]-benzilleten négy órán át keverést végzünk, majd a reakcióamid-((2S;3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentahidroxi-hexil)elegyet ugyanezen a hõmérsékleten egy éjszakán át állni hagyjuk. A következõ reggel a DC¹vizsgálat teljes 25 amidot kapjuk. MG: 809,97; MS: 810,49 (M+H+). átalakulást mutat. A reakcióelegyet vákuumban bepáA2. eljárás 1. 11¹((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-Pentaacetoxi-hexilkarbamoil)-undekánkarbonsav (III képletû vegyület; R=acetil)
Szobahõmérsékleten 0,4 g 11¹((4R,6R)-4,5,6-trihidroxi-3¹(R)-hidroxi-2¹(S)-hidroxi-hexil-karbamoil)-undekánkarbonsavhoz (III képletû vegyület; R=hidrogénatom) hozzáadunk 3 ml vízmentes piridint és 3 ml ecetsavanhidridet, majd szobahõmérsékleten négy órán át keverést végzünk. A reakció befejezõdése után a reakcióelegyhez vizet adunk, majd vákuumban bepárlást 2. Ecetsav-(2R,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetraacetoxi-6(11-{4¹[(2S,3R)-3-[(S)-3-(4¹fluor-fenil)-3-hidroxipropil]-2-(4¹metoxi-fenil)-4-oxo-azetidin-1¹il]-benzilkarbamoil}-undekanoil-amino)-hexil-észter (IV képletû vegyület; R=acetil)
30
40 végzünk. A maradékot kevés vízzel elkeverjük, majd szûrjük. A szûrõn maradt terméket vízzel mossuk, majd vákuumban szárítjuk. Így 0,56 g mennyiségben 11¹((2S,3R,4R,5R)-2,3,4,5,6-pentaacetoxi-hexil-karbamoil)-undekánkarbonsavat kapunk. 45 MG: 603,66; MS: 604,22 (M+H+).
50
10
1
HU 003 110 T2
3 ml vízmentes dimetil-formamidban feloldunk 87 mg II képletû amint, majd a kapott oldathoz hozzáadunk 120 mg, a fenti 1. lépésben ismertetett módon elõállított karbonsavat, 31 mg N¹hidroxi-benztriazolt és 39 mg N¹etil-N’-(3¹dimetil-amino-propil)-karbodiimidet. A reakcióelegyet szobahõmérsékleten egy éjszakán át keverjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot etil-acetáttal felvesszük, majd a szerves fázist vízzel 3. Dodekándikarbonsav-4-[(2S,3R)-3-[(S)-3(4¹fluor-fenil)-3-hidroxi-propil]-2-(4¹metoxi-fenil)-4oxo-azetidin-9¹il]-benzil-amid-((2S,3R,4R,5R)2,3,4,5,6-pentahidroxi-hexil)-amid (I képletû vegyület)
5
371 mg dodekándikarbonsav, 63 ml diizopropil-karbodiimid és 55 mg hidroxi-benztriazol 2 ml dimetilformamiddal készült oldatához hozzáadjuk 70 mg I amin és 23 ml trietil-amin 1 ml dimetil-formamiddal készült oldatát, majd az így kapott reakcióelegyet szobahõmérsékleten 12 órán át keverjük. A reakcióelegyet ezután bepároljuk, majd nagy felbontóképességû folya2. Dodekándikarbonsav-4-[(2S,3R)-3-[(S)-3(4¹fluor-fenil)-3-hidroxi-propil]-2-(4¹metoxi-fenil)-4oxo-azetidin-1¹il]-benzil-amid-((2S,3R,4R,5R)2,3,4,5,6-pentahidroxi-hexil)-amid (I képletû vegyület)
mossuk és magnézium-szulfát fölött szárítjuk. Ezután szûrést végzünk, majd a szûrletet vákuumban bepároljuk. Így 90 mg mennyiségben ecetsav-(2R,3R,4R,5S)2,3,4,5-tetraacetoxi-6-(11-{4¹[(2S,3R)-3-[(S)-3-(4¹fluorfenil)-3-hidroxi-propil]-2-(4¹metoxi-fenil)-4-oxo-azetidin1¹il]-benzil-karbamoil}-undekanoil-amino)-hexil-észtert kapunk. MG: 1020,16.
10
klór-metán elegyében, amikor az I képletû glükaminszármazékot kapjuk, amelynek molekulatömege 809,97.
A fenti 2. lépésben ismertetett módon elõállított vegyületbõl 90 mg¹ot guanidinnel kezelünk etanol és diB) eljárás 1. 11¹{4¹[(2S,3R)-3-[(S)-3-(4¹Fluor-fenil)-3-hidroxipropil]-2-(4¹metoxi-fenil)-4-oxo-azetidin-1¹il]-benzilkarbamoil}-undekánkarbonsav (VI képletû vegyület)
2
30
dékkromatografálásnak (HPLC) vetjük alá (Knauer Eurospher-100–10–C18 oszlopon, eluálószerként 0,1 térfogat% trifluor-ecetsavat tartalmazó víz és 0,1 térfogat% trifluor-ecetsavat tartalmazó acetonitril 80:20 és 45 10:90 közötti térfogatarányú elegyeit használva). Így 646,81 molekulatömegû terméket (C38H47F1N2O6) kapunk; MS (ESI) 647,5 (M+H+).
50
11
1
HU 003 110 T2
Mint más peptidkapcsolási reakcióknál ismertettük, ha a VI képletû savat a VII képletû glükaminnal (R=hidrogén) reagáltatjuk HOBt és EDC jelenlétében DMFben, akkor az I képletû vegyületet (R=hidrogén) kapjuk.
2
Ha glükamin helyett egy védett glükaminszármazékot, így például a VII képletû vegyületet (R=acetil) használjuk, akkor R helyén acetilcsoportot hordozó Ia képletû vegyületet kapunk. 5
C) eljárás 1. Ecetsav-(2R,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetraacetoxi-6(11-klór-karbonil-undekanoil-amino)-hexil-észter (VIII képletû vegyület; R=acetil)
után szobahõmérsékleten egy órán át keverést végzünk. Tetrahidrofuránban feloldjuk az R helyén acetilcsoportot hordozó III képletû vegyületet, majd az oldathoz 20 Ezután a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, majd a kapott nyersterméket a következõ lépésnél felhasználjuk. lassan tionil-kloridot adunk, és az adagolás befejezése 2. Ecetsav-(2R,3R,4R,5S)-2,3,4,5-tetraacetoxi-6(11-{4¹[(2S,3R)-3-[(S)-3-(4¹fluor-fenil)-3-hidroxipropil]-2-(4¹metoxi-fenil)-4-oxo-azetidin-1¹il]-benzilkarbamoil}-undekanoil-amino)-hexil-észter (IV képletû vegyület; R=acetil)
Az elõzõ lépésben kapott savkloridot piridin és diklór-metán elegyében szobahõmérsékleten a fenti I aminnal reagáltatjuk, szobahõmérsékleten egy éjszakán át keverést végezve. A reakcióelegy feldolgozásakor R helyén acetilcsoportot hordozó IV képletû amidot kapunk. A találmány szerinti I képletû vegyület hatását illetõen a következõ módszerrel került vizsgálatra. A koleszterinabszorpció és a 3H-taurokolsavkiválasztás befolyásolása egérnél, patkánynál vagy hörcsögnél a bélsárkiválasztás útján NMRI-egereket, Wistar-patkányokat vagy szíriai aranyhörcsögöket (4–6 egyedbõl álló csoportokban) úgynevezett anyagcsereketrecekben tartunk szabványosított táplálék [Altromin, Lage (Lippe)] adása mellett. A radioaktív jelzõanyag (14C-koleszterin) beadása elõtti délután az állatokat ébren tartjuk és rácshoz szoktatjuk. Járulékosan az állatokat a kísérleti táplálék (14C-koleszterin Intralipid 20 márkanevû tápban, Pharmacia-
25
40 Upjohn) perorális beadása elõtt 24 órával 3H-TCA (taurokolsav) szubkután beadása útján megjelöljük (például 1 mCi/egér és 5 mCi/patkány). Koleszterinabszorpciós teszt: 0,25 ml/egér Intralipid 20 márkanevû táp (Pharmacia-Upjohn) (a táp 0,25 mCi 45 14C-koleszterint tartalmaz 0,1 mg koleszterinben) kerül perorálisan beadásra nyelõcsõszonda segítségével. A kísérleti anyagokat külön 0,5%¹os metil-cellulózt (Sigma) tartalmazó 5%¹os Solutolban (BASF, Ludwigshafen) vagy más alkalmas hordozóanyagban adjuk be. 50 A kísérleti anyagok beadási térfogata 0,5 ml/egér. A kísérleti anyag közvetlenül a kísérleti táplálék (14C-koleszterinnel jelzett Intralipid) elõtt kerül beadásra a koleszterinabszorpciós tesztben. A bélsárt 24 órán át gyûjtjük: a 14C-koleszterin és a 3 55 H-taurokolsav (TCA) bélsárral távozó mennyiségét 24 óra elteltével határozzuk meg. A májakat eltávolítjuk, homogenizáljuk és az aliquotokat Oximat-készülékekben (307. modell, Packard) elégetjük a 14 C-koleszterin felvett/reszorbeálódott 60 mennyiségének meghatározására. 12
1
HU 003 110 T2
Kiértékelés Bélsárminták Meghatározzuk az össztömeget, vízzel a próbát meghatározott térfogatra feltöltjük, majd homogenizálunk, az aliquotot bepároljuk és Oximat-berendezésben (a Packard cég 307. számú, radioaktív jelzéssel ellátott minták elégetésére szolgáló berendezése) elégetjük. A radioaktív 3H–H2O és 14C–CO2 mennyiségét a 3Htaurokolsav, illetve 14C-koleszterin kiválasztott mennyiségére átszámítjuk (úgynevezett duális izotópos módszer). Az ED200-értékeket egy dózis-hatás görbébõl olyan dózisként interpoláljuk, amely az egyidejûleg kezelt kontrollcsoportra vonatkoztatva a TCA, illetve a koleszterin kiválasztásának szintjét megkétszerezi. Májminták A 14C-koleszterinnek a májba felvett mennyiségét az alkalmazott dózis függvényében vizsgáljuk. Az
2
ED50-értékeket egy dózis-hatás görbébõl olyan dózisként interpoláljuk, amely az egyidejûleg kezelt kontrollcsoportra vonatkoztatva a 14C-koleszterinnek a májba felvett mennyiségét megfelezi (50%). 5 A következõ ED50-érték igazolja a találmány szerinti I képletû vegyület aktivitását: Példa sorszáma ED50(máj) [mg/egér] 1. 0,005 A táblázatból látható, hogy az I képletû vegyületnek 10 igen jó a koleszterinszintet csökkentõ hatása. Az I képletû vegyület, valamint az összehasonlító V1 vegyület oldhatóságát a következõképpen vizsgáljuk. Összehasonlító vegyületként a WO 02/50027 szá15 mú nemzetközi közrebocsátási iratból ismert vegyületek közül a szerkezetileg legközelebb álló
V1
vegyületet választjuk ki. Eppendorf-süvegbe bemérünk pontosan 0,5 mg vizsgálandó vegyületet, és beadagolunk az alkalmazott oldószerbõl (vizes puffer) 0,5 ml¹t. Az Eppendorf-süveget ezután egy termomixer típusú berendezésben elhelyezzük, majd 25 °C hõmérsékleten 4 órán át 1400 fordulat/perc sebességgel rázatjuk. Ezután az Eppendorf-süveget egy centrifugában helyezzük el, majd a centrifugálást követõen a felülúszóból vett aliquotot az oldott anyagmennyiség meghatározására HLPC/UV elemzésnek vetjük alá. A következõ táblázat tartalmazza az itt kapott eredményeket.
30
35
40
pH-viszonyok
Víz (pH)
1. példa
V1
Oldhatóság mg/ml-ben
Oldhatóság mg/ml-ben
3,(6,8)
<1
pH 1,2
3
<1
pH 4,5
4
<1
pH 6,8
2
<1
pH 8,0
2
<1
FaSSIF
28
5
FeSSIF
454
18
Az FaSSIF és FeSSIF fiziológiás oldószerekben [összetételüket és elõállítási eljárásukat illetõen lásd a „Physiologically based dissolution tests – Experiences with poorly soluble drugs” (Oldási kísérletek fiziológiai alapokon – Tapasztalatok rosszul oldódó gyógyszerekkel) címû, a Shaker kiadó gondozásában 2000 január-
45
50
55
60 13
jában megjelent könyvet; ISBN: 3–8265–6962–8] az 1. példa szerinti vegyület oldhatósága 28 mg/ml, illetve 454 mg/ml, míg a V1 vegyület esetében a megfelelõ értékek 5 mg/ml, illetve 18 mg/ml. Ez a szignifikánsan eltérõ oldhatóság a kísérletek megismétlésével is igazolható volt (43/290 mg/ml 6/20 mg/ml értékkel szemben). A találmány szerinti I képletû vegyület így tehát 6–16szorosan jobban oldódik, mint a V1 képletû összehasonlító vegyület. A találmány szerinti I képletû vegyület ezáltal nagyobb mértékben áll oldott formában rendelkezésre a hatás helyén. Továbbá adott esetben magasabb dózisok is megfelelõ transzportrendszerekkel eljuttatva az interakcióhoz még teljesebben rendelkezésre képesek állni, a rosszabbul oldódó anyagoktól eltérõen. 250 ml¹es rendelkezésre álló térfogatból kiindulva (Biopharmaceutical Classification System) az I képletû vegyületbõl legfeljebb mintegy 100 mg¹os dózis oldható, ezzel szemben a V1 képletû vegyületbõl legjobb esetben 5 mg lenne oldható (legrosszabb esetben akár csak 1,25 mg). Az I képletû vegyület, valamint a V1 képletû összehasonlító vegyület stabilitását oldatban a következõképpen vizsgáljuk. Az oldott I képletû vegyület, valamint az oldott V1 képletû összehasonlító vegyület stabilitását vizes pufferekben 1,2 és 8,0 közötti pH¹értéken határozzuk meg. Az egyes vegyületekbõl 1–1 mg¹ot feloldunk 5 ml¹es mérõhengerben. Az anyag oldására kis mennyiségû acetonitrilt használunk. Ezt követõen vizes pufferrel jelig feltöltünk. A kicsapódott vegyület centrifugálása után a tiszta felülúszót 24 órán át 37 °C hõmérsékleten az oldat stabilitására vizsgáljuk. A minták kiértékelését HPLC/UV alkalmazásával végezzük. Az 1. példa szerinti és a V1 képletû vegyülettel kapott eredményeket a következõ táblázatban adjuk meg.
1
HU 003 110 T2
1. példa szerinti
V1
pH-viszonyok
A szennyezések mértékének százalékos növekedése
A szennyezések mértékének százalékos növekedése
pH 1,2
4,9
pH 6,8
0
0,5
pH 8,0
0,2
4,6
5
13,3
2
A találmány szerinti I képletû vegyület a pH¹értéktõl függõen legalább 2,7-szeresen stabilabb, mint a V1 képletû vegyület, és kevesebb mellékterméket képez, mint a V1 képletû vegyület. A szisztemikusan ható melléktermékek esetében a kisebb mennyiségek a nemkívánatos mellékhatások vonatkozásában kisebb potenciált jelentenek.
10
SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. I képletû vegyület,
I
valamint ennek gyógyászatilag elfogadható sói. 2. Gyógyászati készítmény, amely hatóanyagként 1. igénypont szerinti vegyületet tartalmaz. 3. Gyógyászati készítmény, amely hatóanyagként 1. igénypont szerinti vegyületet és legalább egy további hatóanyagot tartalmaz. 4. A 3. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, amely további hatóanyagként egy vagy több, a lipidanyagcserét normalizáló vegyületet tartalmaz. 5. A 3. vagy 4. igénypont szerinti gyógyászati készítmény, amely további hatóanyagként egy vagy több antidiabetikumot, hipoglikémiás hatóanyagot, antiadipozitumot, anorektikumot, HMGCoA-reduktáz-inhibitort, koleszterinreszorpció-inhibitort, PPAR-gammaagonistát, PPAR-alfa-agonistát, PPAR-alfa/gamma agonistát, fibrátot, MTP-inhibitort, epesav-reszorpciós inhibitort, CETP-inhibitort, polimer epesavadszorbert, LDL-receptor-serkentõt, ACAT-inhibitort, antioxidánst, lipoprotein-lipáz-inhibitort, ATP-citrát-liáz-inhibitort, szkvalén-szintetáz-inhibitort, lipoproteinantagonistát, lipázinhibitort, inzulint, szulfonil-karbamidot, biguanidet, meglitinidet, tiazolidindiont, a¹glükozidázinhibitort, a béta-sejtek ATP-függõ káliumcsatornájára ható anyagot, CART-agonistát, NPY-agonistát, kannabinoid receptor 1 antagonistát, MCH receptor antagonistát, MC4-agonistát, orexinagonistát, H3¹agonistát, TNFagonistát, CRF-agonistát, CRF-BP-antagonistát, GLP–1-származékot, urokortinagonistát, b3-agonistát, MSH (melanocitastimuláló hormon)-agonistát, CCK-Aagonistát, szerotonin újrafelvételét gátló anyagot, ve-
35
40
45
50
55
60 14
gyes szerotonin- és noradrenerg vegyületet, 5HT-agonistát, bombezinagonistát, galaninantagonistát, növekedési hormont, növekedési hormont felszabadító vegyületet, TRH-agonistát, kötésfelszabadításra alkalmas protein¹2- vagy 3¹modulátort, leptinagonistát, DA¹agonistát (brómkriptin, doprexin), lipáz/amiláz inhibitort, 11b-HSD1¹et gátló anyagot, ACC¹t gátló anyagot, DPP-IV¹t gátló anyagot, PPAR-modulátort, RXRmodulátort, TR¹b-agonistát vagy amfetamint tartalmaz. 6. Az 1. igénypont szerinti vegyület lipidanyagcsere-zavarok kezelésére szolgáló gyógyszerhatóanyagként történõ alkalmazásra. 7. Eljárás egy 1. igénypont szerinti vegyületet tartalmazó gyógyászati készítmény elõállítására, azzal jellemezve, hogy a hatóanyagot egy gyógyászatilag elfogadható hordozóanyaggal összekeverjük, és az így kapott keveréket beadásra alkalmas formájúra hozzuk. 8. Az 1. igénypont szerinti vegyület alkalmazása hiperlipidémia kezelésére szolgáló gyógyászati készítmény elõállítására. 9. Az 1. igénypont szerinti vegyület alkalmazása a vérszérum koleszterinszintjének csökkentésére szolgáló gyógyászati készítmény elõállítására. 10. Az 1. igénypont szerinti vegyület alkalmazása arterioszklerotikus tünetek kezelésére szolgáló gyógyászati készítmény elõállítására. 11. Az 1. igénypont szerinti vegyület alkalmazása inzulinrezisztencia kezelésére szolgáló gyógyászati készítmény elõállítására.
1
HU 003 110 T2
2
12. III képletû köztitermékek
III
– ahol a képletben R jelentése acetil¹, benzoil¹, aril¹, (1–12 szénatomos)alkil-aril- vagy 1–12 szénatomos alkilcsoport. 13. IV képletû köztitermékek
10
IV
– ahol a képletben R jelentése acetil¹, benzoil¹, aril¹, 25 (1–12 szénatomos)alkil-aril- vagy 1–12 szénatomos alkilcsoport. 14. VIII képletû köztitermékek
VIII
– ahol a képletben R jelentése acetil¹, benzoil¹, aril¹, (1–12 szénatomos)alkil-aril- vagy 1–12 szénato40 mos alkilcsoport.
15
Kiadja a Magyar Szabadalmi Hivatal, Budapest A kiadásért felel: Törõcsik Zsuzsanna fõosztályvezetõ-helyettes Windor Bt., Budapest
