!HU000007874T2! (19)
HU
(11) Lajstromszám:
E 007 874
(13)
T2
MAGYAR KÖZTÁRSASÁG Magyar Szabadalmi Hivatal
EURÓPAI SZABADALOM SZÖVEGÉNEK FORDÍTÁSA A23L 1/29
(21) Magyar ügyszám: E 06 799538 (22) A bejelentés napja: 2006. 10. 06. (96) Az európai bejelentés bejelentési száma: EP 20060799538 (97) Az európai bejelentés közzétételi adatai: EP 1940247 A2 2007. 04. 26. (97) Az európai szabadalom megadásának meghirdetési adatai: EP 1940247 B1 2009. 06. 03.
(51) Int. Cl.:
(30) Elsõbbségi adatok: 05023029 2005. 10. 21.
(73) Jogosult: N. V. Nutricia, 2712 HM Zoetermeer (NL)
EP
(72) Feltalálók: SCHMITT, Joachim, 63768 Hoesbach (DE); BOEHM, Gunther, 61209 Echzell (DE); BEERMANN, Christopher, 61267 Neu-Anspach (DE) (54)
(2006.01) A23L 1/201 (2006.01) A23L 1/30 (2006.01) A61K 31/202 (2006.01) A61K 31/7068 (2006.01) A61K 31/7072 (2006.01) A61K 31/7076 (2006.01) A61K 31/708 (2006.01) A61P 1/12 (2006.01) (87) A nemzetközi közzétételi adatok: WO 07046699 PCT/NL 06/050248
(74) Képviselõ: dr. Pethõ Árpád, DANUBIA Szabadalmi és Jogi Iroda Kft., Budapest
Eljárás intesztinális barrier integritásának stimulálására nem természetes születést követõen
(57) Kivonat
HU 007 874 T2
A találmány tárgyát császármetszéssel világra jött csecsemõk táplálására és terápiás kezelésére szolgáló alkalmazások képezik, melyek magukban foglalják olyan készítmények alkalmazását, melyek tartalmazzák a következõket: (i) hosszú láncú, többszörösen telítetlen
zsírsavat; és (ii) legalább egyet a következõk közül: (a) nukleotid és (b) nukleotidprekurzor, amely a következõk közül van kiválasztva: nukleozidok, purinbázisok, piridinbázisok, ribóz és dezoxiribóz.
A leírás terjedelme 12 oldal Az európai szabadalom ellen, megadásának az Európai Szabadalmi Közlönyben való meghirdetésétõl számított kilenc hónapon belül, felszólalást lehet benyújtani az Európai Szabadalmi Hivatalnál. (Európai Szabadalmi Egyezmény 99. cikk (1)) A fordítást a szabadalmas az 1995. évi XXXIII. törvény 84/H. §-a szerint nyújtotta be. A fordítás tartalmi helyességét a Magyar Szabadalmi Hivatal nem vizsgálta.
1
HU 007 874 T2
A találmány alkalmazási területe A találmány tárgyát eljárások képezik császármetszéssel világra jött csecsemõk táplálására és terápiás kezelésére. 5 A találmány mûszaki háttere Születéskor a csecsemõk bélrendszere még éretlen. A születést követõen, a neonatális gasztrointesztinális traktus gyors növekedésen és érésen megy keresztül, melynek része a nyálkaképzõdés fokozódása, valamint a szoros sejtkapcsolatok („tight juction”¹ok) érése és záródása allergénekkel, toxinokkal és patogén mikroorganizmusokkal szemben. A humán anyatejben számos olyan faktor van jelen, amelyek javítják a bélrendszer érését. Az átjárható, éretlen intesztinális barrier szerepet játszik bélgyulladás, fertõzések, hasmenés és atópiás betegségek, mint például élelmiszerallergia kialakulásában. A megfelelõen érõ bélrendszer, különösen egészséges bélflórával párosulva, fertõzések ritkább elõfordulását, az immunrendszer erõsödését, élelmiszer-allergia és/vagy más atópiás betegségek, és/vagy hasmenés, székrekedés és/vagy bélgyulladás ritkább elõfordulását eredményezi. A bél permeabilitása anyatejjel táplált csecsemõknél gyorsabban csökken, mint a tápszerrel táplált csecsemõknél. Az anyatejes táplálás azonban nem mindig oldható meg. A WO 2004112509 számú nemzetközi közzétételi iratban olyan intesztinális barrier érési mintázat indukálására alkalmas készítményt ismertetését találjuk, amely hasonló a szoptatás esetében megfigyelthez, és amely javítani képes a barrier érését, például neonatális stressz során. A WO 2005122790 számú nemzetközi közzétételi irat eljárást ismertet barrier integritás stimulálására emlõsben, amely szerint az emlõsnek az alábbiakat tartalmazó készítményt adják be: eikozapentaénsavat („eicosapentaenoic acid”, EPA), dokozahexaénsavat („docosahexaenoic acid”, DHA) és arachidonsavat („arachidonic acid”, ARA), valamint legalább két eltérõ oligoszacharidot. Az EP 1 549 158 számú európai szabadalmi bejelentés csecsemõtápszer-készítményeket ismertet, amely az alábbiakat tartalmaz: 3,2–15,4 mg/l CMP; 1,8–11,0 mg/l UMP; 1,8–8,0 mg/l GMP; 0,1–2,2 mg/l IMP és 2,5–13,2 mg/l AMP. A WO 03043445 számú nemzetközi közzétételi irat feldolgozott bébiételeket ismertet, amelyek a) olajokat, b) nukleotidokat vagy c) olajokat és nukleotidokat tartalmaznak. A Natren® állítja elõ a Life Start® probiotikus terméket, amelyet kifejezetten csecsemõk számára tervezett, és alkalmas császármetszéssel világra hozott csecsemõk táplálására. A Life Start® terméket Bifidobacterium infantis alkalmazásával állítják elõ. Mivel a Life Start® termék egyetlen Bifidobacterium speciest tartalmaz, a csecsemõ számára nyújtott elõnyök igen korlátozottak.
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60 2
2
A találmány összefoglalása Azt találtuk, hogy a császármetszéssel világra hozott csecsemõk bélflórája a hüvelyi úton született csecsemõk bélflórájától eltér. Közelebbrõl, császármetszéssel világra hozott csecsemõk bélrendszere bifidobaktériumok által kisebb mértékben kolonizált, és fajok tekintetében kevésbé változatos Bifidobacterium bélflórát tartalmaz, mint a hüvelyi úton született csecsemõké, abból elsõsorban hiányoznak a Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium infantis és Bifidobacterium bifidum fajok. Azt tapasztaltuk továbbá, hogy a császármetszéssel világra hozott csecsemõk bélflórája kisebb mennyiségû Bifidobacteriumot tartalmaz, mint a hüvelyi úton született csecsemõk bélflórája. Ráadásul, azt tapasztaltuk, hogy a császármetszéssel világra hozott csecsemõk bélflórája nagy mennyiségû (nem kívánt) Escherichia coli organizmust tartalmaz 6 héttel a megszületést követõen. A születés módjának a széklet mikroflórájára kifejtett hatását írták le Hällström és mtsai. [Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 23, 463–470 (2004)]. Az egészséges és teljesen kifejlett bélflórának fontos élettani hatásai vannak. Egy lényeges szempont, hogy az csökkenti a (gasztrointesztinális) fertõzések elõfordulását. Mivel a császármetszéssel világra hozott csecsemõkbõl az egészséges flóra hiányzik, az ilyen csecsemõk esetében különös jelentõsége van a fertõzések megelõzésének. Ezek a csecsemõk általában kórházi környezetben jönnek világra, ami nozokomiális baktériumok elõfordulása miatt patogén fertõzések fokozott kockázatával jár. Ezenfelül, az egészséges bélflóra nem megfelelõ fejlõdése patogén baktériumokkal történõ gyorsabb kolonizálódáshoz vezet, szemben azzal a helyzettel, amikor a csecsemõ béltraktusát az anya hüvelyi és bélflórából származó, anyai eredetû baktériumok kolonizálják. Annak érdekében, hogy megakadályozzuk baktériumok, valamint (nozokomiális) baktériumok (endo- vagy exo¹) toxinjainak átjutását az intesztinális barrieren, császármetszéssel világra hozott csecsemõk esetében elsõdleges fontosságú a bél érésének javítása és/vagy felgyorsítása. Ezen túlmenõen, császármetszéssel világra hozott csecsemõk esetében az intesztinális barrier érésének és/vagy a barrier integritásának javítása csökkenti a bélgyulladás, élelmiszer-allergia és/vagy más atópiás betegségek elõfordulásának gyakoriságát. Felismertük, hogy császármetszéssel világra hozott csecsemõk intesztinális barrier funkciója elégtelen, és azt találtuk, hogy ilyen csecsemõkben hosszú láncú, többszörösen telítetlen zsírsavak („long-chain polyunsaturated fatty acids”, LC¹PUFA) és/vagy nukleotidok javítják az intesztinális barrier érését és integritását, és/vagy gyulladás elleni (antiinflammatorikus) hatást fejtenek ki. Az LC¹PUFA ezenfelül elõsegíti tejsavtermelõ baktériumok nyálkahártyafelszínekhez történõ adhézióját. Ennek megfelelõen, a találmány tárgyát képezi LC¹PUFA¹t és nukleotidot tartalmazó készítmények alkalmazása, amelyek elsõdleges célja császármetszéssel világra hozott csecsemõknél a) fertõzések elõfordulási gyakoriságának csökkentése az intesztiná-
1
HU 007 874 T2
lis barrier integritásának és/vagy érésének a fokozása révén, b) (élelmiszer¹) allergia és/vagy atópiás betegségek elõfordulási gyakoriságának csökkentése az intesztinális barrier integritásának és/vagy érésének fokozása révén, c) az intesztinális barrier átjárhatóságát egyébként tovább fokozó bélgyulladásos folyamatok szuppresszálása vagy enyhítése, és/vagy d) a bélflóra javítása nyálkahártyafelszínek tejsavtermelõ baktériumokkal történõ kolonizálásának javítása révén. Egy további szempont szerint, a találmány elõnyösen gyakorlatba vehetõ a leírás szerinti aktív összetevõk adott tápszerkészítménybe történõ elegyítésével. Az ilyen készítmény adható császármetszéssel világra hozott csecsemõknek anélkül, hogy az számukra nagyobb terhelést jelentene. A találmány elõnyös megvalósítási módjainak részletes ismertetése A találmány tárgyát képezi készítmény alkalmazása, amely az alábbiakat tartalmaz: (i) hosszú láncú, többszörösen telítetlen zsírsavat (LC-PUFA); és (ii) legalább egyet a következõk közül választva: (a) nukleotidot és (b) nukleotidprekurzort, amely lehet nukleozid, purinbázis, piridinbázis, ribóz és dezoxiribóz, császármetszéssel világra hozott csecsemõnek való beadásra szolgáló készítmény elõállítására. Egy további szempont szerint, a találmány szerinti eljárás magában foglalja egy készítmény alkalmazását, amely (i) hosszú láncú, többszörösen telítetlen zsírsavat (LC-PUFA); és (ii) a következõk közül legalább egyet tartalmaz: (a) nukleotidot és (b) nukleotidprekurzort, amely nukleozid, purinbázis, piridinbázis, ribóz és dezoxiribóz közül van kiválasztva, i) császármetszéssel világra hozott csecsemõk rendellenességeinek kezelésére és/vagy megelõzésére, ii) és/vagy császármetszéssel világra hozott csecsemõk egészségének stimulálására alkalmas készítmény elõállítására. A találmány alkalmazható császármetszéssel világra hozott csecsemõ táplálására alkalmas eljárásban, amely eljárás az ilyen csecsemõnek az alábbiakat tartalmazó készítmény beadását tartalmazza: (i) hosszú láncú, többszörösen telítetlen zsírsavat (LC-PUFA); és (ii) a következõk közül legalább egyet a következõk közül választva: (a) nukleotidot és (b) nukleotidprekurzort, amely lehet nukleozid, purinbázis, piridinbázis, ribóz és dezoxiribóz. Császármetszés A császármetszés („caesarean section, c¹section”) mûtéti beavatkozás, amely során a csecsemõt az anya hasfalán, majd a méhfalon ejtett metszésen át hozzák a világra. Császármetszést általában akkor végeznek, amikor az biztonságosabb az anya vagy a magzat számára, mint a hüvelyi úton történõ szülés. Más esetekben, a szülõ nõ választhatja a császármetszést ahelyett, hogy gyermekét hüvelyi úton hozná világra. Hosszú láncú, többszörösen telítetlen zsírsavak A leírásban a találmány szerinti eljárásban alkalmazott készítményt gyakran „jelen készítménynek” nevez-
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60 3
2
zük. A jelen készítmény elõnyösen hosszú láncú, többszörösen telítetlen zsírsavakat (LC-PUFA-kat) tartalmaz. Az LC¹PUFA¹k zsírsavak, amelyekben az acillánc hossza 20–24 szénatom (elõnyösen 20 vagy 22 szénatom), és amelyek az acillánc szénatomjai között legalább két telítetlen kötést tartalmaznak. Elõnyösebben, a jelen készítmény legalább egy, a következõk közül választott LC¹PUFA¹t tartalmaz: eikozapentaénsav (EPA, 20:5 n3), dokozahexaénsav (DHA, 22:6 n3), arachidonsav (ARA, 20:4 n6) és dokozapentaénsav (DPA, 22:5 n3). Azt találtuk, hogy EPA, DHA és ARA hatékonyan csökkentik az intesztinális szoros sejtkapcsolatok (tight junction) permeabilitását (lásd 2. példa). A szoros sejtkapcsolatok alacsonyabb permeabilitás csökkenti fertõzések elõfordulási gyakoriságát és/vagy csökkenti allergének és/vagy bakteriális (endo- vagy exo¹) toxinok átjutását. Ennek megfelelõen, LC¹PUFA, elõnyösen EPA, DHA, DPA és/vagy ARA hozzáadása a jelen készítményhez javítja az intesztinális barrier integritását, amely császármetszéssel világra hozott csecsemõk esetében kiemelt jelentõségû, mivel az ilyen csecsemõk bélflórája kevésbé fejlett, és ezért intesztinális barrierük lassabban érik. Ezen túlmenõen, az LC¹PUFA gyulladásgátló hatású és elõsegíti tejsavtermelõ baktériumok tapadását a nyálkahártyafelszínekhez, ezáltal stimulálja az egészséges bélflóra kialakulását, ami császármetszéssel világra hozott csecsemõknél történõ alkalmazás esetében további elõnyöket jelent. Mivel az ARA, DHA, DPA és/vagy EPA már alacsony koncentrációban hatékonyan csökkentik a szoros sejtkapcsolatok permeabilitását, a jelen készítmény, elõnyösen tápszerkészítmény LC¹PUFA-tartalma elõnyösen nem haladja meg az összes zsírtartalom 15 tömeg%¹át, elõnyösebben 10 tömeg%¹át, még elõnyösebben 5 tömeg%¹át. A jelen készítmény, az összes zsírtartalomra vonatkoztatva, legalább 0,1 tömeg%, elõnyösen legalább 0,25 tömeg%, elõnyösebben legalább 0,5 tömeg% és még elõnyösebben legalább 0,75 tömeg% LC¹PUFA¹t tartalmaz. Ugyanezen okból, a készítményben az EPA mennyisége elõnyösen nem haladja meg az összes zsírtartalom 5 tömeg%¹át, elõnyösebben nem haladja meg annak 1 tömeg%¹át, hanem elõnyösen az összes zsír legalább 0,025 tömeg%¹át, elõnyösebben legalább 0,05 tömeg%¹át teszi ki. A DHA mennyisége elõnyösen nem haladja meg az összes zsírtartalom 5 tömeg%¹át, elõnyösebben nem haladja meg annak 1 tömeg%¹át, hanem elõnyösen az összes zsír legalább 0,1 tömeg%¹át képviseli. Mivel azt tapasztaltuk, hogy az ARA különösen hatékonyan csökkenti a szoros sejtkapcsolatok permeabilitását, a jelen készítmény abból viszonylag nagy mennyiséget tartalmaz, elõnyösen az összes zsírtartalom legalább 0,1 tömeg%¹át, elõnyösebben legalább 0,25 tömeg%¹át, még elõnyösebben legalább 0,35 tömeg%¹át. Az ARA mennyisége elõnyösen nem haladja meg az összes zsírtartalom 5 tömeg%¹át, elõnyösebben nem haladja meg annak 1 tömeg%¹át. Amennyiben a jelen enterális készítmény ARA¹t tartalmaz, elõnyösen EPA¹t és DHA¹t adunk hozzá abból a
1
HU 007 874 T2
célból, hogy kiegyensúlyozzuk az ARA hatását, például csökkentsük az ARA-metabolitok proinflammatorikus hatását. ARA-eredetû metabolitok feleslege gyulladást okozhat. Ennek megfelelõen, a jelen készítmény elõnyösen ARA¹t, EPA¹t és DHA¹t tartalmaz, ahol az ARA/DHA tömeg szerinti arány elõnyösen nagyobb, mint 0,25, elõnyösebben nagyobb, mint 0,5 és még elõnyösebben nagyobb, mint 1. Az ARA/DHA arány elõnyösen kisebb, mint 25, elõnyösebben kisebb, mint 15. Az ARA/EPA tömeg szerinti aránya elõnyösen 1–100, elõnyösebben 5–20. Annak érdekében, hogy a humán anyatejet a lehetõség szerint legjobban utánozzuk, és a nagy dózisú LC¹PUFA mellékhatásait mérsékeljük, a jelen készítményben az LC¹PUFA mennyisége elõnyösen nem haladja meg az összes zsírtartalom 3 tömeg%¹át. Az n3 (omega 3) LC¹PUFA mennyisége elõnyösen kisebb, mint az összes zsírtartalom 1 tömeg%¹a. Az n6 (omega 6) LC¹PUFA mennyisége elõnyösen kisebb, mint az összes zsírtartalom 2 tömeg%¹a. Az ARA mennyisége elõnyösen kisebb, mint az összes zsírtartalom 1 tömeg%¹a. Az EPA/DHA tömeg szerinti aránya elõnyösen nem több, mint 1. Az LC¹PUFA biztosítható szabad zsírsav, triglicerid, diglicerid, monoglicerid vagy foszfolipid formájában, vagy a fentiek közül egy vagy több elegye formájában, elõnyösen triglicerid formájában. A jelen készítmény az ARA és DHA legalább egyikét elõnyösen foszfolipid formájában tartalmazza.
5
10
15
20
25
30 Nukleotidok Egy elõnyös megvalósítási mód szerint, a jelen készítmény nukleotidot és/vagy nukleotidprekurzorokat tartalmaz, amely a következõk közül választott: nukleozid, purinbázis, piridinbázis, ribóz és dezoxiribóz. Elõnyösebben, a készítmény nukleotidot tartalmaz. A nukleotid elõnyösen monofoszfát, difoszfát vagy trifoszfát forma, elõnyösebben nukleotid-monofoszfát. A nukleotid elõnyösen ribonukleotid vagy dezoxiribonukleotid, elõnyösebben ribonukleotid. A nukleotidok lehetnek monomerek, dimerek vagy polimerek (beleértve RNS¹t és DNS¹t). A nukleotidok elõnyösen szabad sav vagy só formájában vannak jelen, elõnyösebben mononátriumsó formájában. Nukleotidok hozzáadása a jelen készítményhez javítja az intesztinális barrier integritását és/vagy érését, amely császármetszéssel világra hozott csecsemõk esetében kiemelt jelentõségû, mivel az ilyen csecsemõk bélflórája kevésbé fejlett, és ezért, intesztinális barrierük lassabban érik. Elõnyösen, a készítmény egyet vagy többet tartalmaz a következõk közül választott ágensekbõl: citidin-5’-monofoszfát (CMP), uridin-5’-monofoszfát (UMP), adenozin-5’-monofoszfát (AMP), guanozin-5’-monofoszfát (GMP) és inozin-5’-monofoszfát és/vagy azok sói, közelebbrõl azok mononátriumsói, elõnyösebben a készítmény legalább 3¹at tartalmaz a következõk közül választott ágensekbõl: CMP, UMP, AMP, GMP és IMP és/vagy azok sói, közelebbrõl azok mononátriumsói. A nukleotidok nagyobb változatossága tovább javíthatja a barrier integritását.
35
40
45
50
55
60 4
2
Elõnyösen, a készítmény 5–100 mg, elõnyösebben 5–50 mg, még elõnyösebben 10–25 mg nukleotidot tartalmaz a jelen készítmény 100 g száraz tömegére vonatkoztatva. A nukleotidok tovább stimulálják az immunrendszert, ezáltal fokozzák a védelmet olyan enterális kórokozók erõs terhelésével szemben, mint például az E. coli. A jelen készítmény elõnyösen 1–20 mg, elõnyösebben 3–12,5 mg CMP¹t tartalmaz a készítmény 100 g száraz tömegére vonatkoztatva. A jelen készítmény elõnyösen 1–20 mg, elõnyösebben 2–9 mg UMP¹t tartalmaz a készítmény 100 g száraz tömegére vonatkoztatva. A jelen készítmény elõnyösen 0,5–15 mg, elõnyösebben 1,5–8 mg AMP¹t tartalmaz a készítmény 100 g száraz tömegére vonatkoztatva. A jelen készítmény elõnyösen 0,2–10 mg, elõnyösebben 0,6–3 mg GMP¹t tartalmaz a készítmény 100 g száraz tömegére vonatkoztatva. A jelen készítmény elõnyösen 0,5–10 mg, elõnyösebben 1,3–5 mg IMP¹t tartalmaz a készítmény 100 g száraz tömegére vonatkoztatva. A jelen készítmény egyaránt tartalmaz (i) LC¹PUFA¹t és (ii) nukleotidot és/vagy nukleotidprekurzort, amely a következõk közül választott: nukleozid, purinbázis, piridinbázis, ribóz és dezoxiribóz, mivel ezen összetevõk kombinálása nem várt mértékben javítják a bélbarrier funkcióját, az immunrendszert és/vagy a bélflórát, például feltételezett szinergista hatás révén. Emészthetetlen oligoszacharidok A jelen készítmény elõnyösen tartalmaz emészthetetlen oligoszacharidokat, amelyek szerves savakká fermentálódnak (elõnyösen tejsavvá, butiráttá, propionáttá és/vagy acetáttá) és stimulálják a bél tejsavtermelõ baktériumainak szaporodását (a továbbiakban „emészthetetlen szacharidok”). Elõnyösen, a bifidobaktériumok és/vagy laktobacillusok szaporodása stimulálódik. A bifidobaktériumok és/vagy lacktobacillusok mennyiségének növekedése elõsegíti az egészséges bélflóra kialakulását. Ezen túlmenõen, a képzõdött szerves savak stimulálják a nyálkatermelést, ezáltal tovább csökkentik a bélbarrier permeabilitását császármetszéssel világra hozott csecsemõknél (lásd az alábbiakban, 3. példa). Ezenfelül, az emészthetetlen oligoszacharidok fokozzák a jelen készítményben levõ LC¹PUFA és/vagy nukleotid hatékonyságát, mivel emészthetetlen oligoszacharidok egyidejû beadása LC¹PUFA-val és/vagy nukleotidokkal az LC¹PUFA és/vagy nukleotid késleltetett felszívódását eredményezi a vékonybélben, ezáltal elnyújtja és/vagy fokozza az LC¹PUFA és/vagy nukleotid hatásait a vastagbélben. Elõnyösen, a jelen készítmény 2–250, elõnyösebben 2–100, még elõnyösebben 2–10 polimerizációfokú („degree of polymerization”, DP), emészthetetlen oligoszacharidokat tartalmaz. A jelen készítmény elõnyösen kisebb mint 60, elõnyösebben kisebb mint 40, még elõnyösebben kisebb mint 20 és legelõnyösebben kisebb mint 10 polimerizációfokú (DP) emészthetetlen oligoszacharidot tartalmaz. A rövid láncú, emészthetetlen oligoszacharidok
1
HU 007 874 T2
laktát és/vagy acetát javított termelõdését biztosítják, stimulálva a barrier integritását császármetszéssel világra hozott csecsemõkben. Az emészthetetlen oligoszacharidokat az ember felsõ emésztõtraktusában (a gyomorban és a vékonybélben) jelen levõ savak vagy emésztõenzimek nem, vagy csak részben emésztik meg, azokat a humán bélflóra fermentálja. Emészthetõnek tekinthetõk például a szacharóz, laktóz, maltóz és a maltodextrinek. A jelen készítmény elõnyösen legalább egy emészthetetlen oligoszacharidot tartalmaz, amely a következõk közül választott: frukto-oligoszacharidok (inulinokat beleértve), emészthetetlen dextrinek, galakto-oligoszacharidok (transzgalakto-oligoszacharidokat beleértve), xilooligoszacharidok, arabino-oligoszacharidok, arabinogalakto-oligoszacharidok, glüko-oligoszacharidok (ciklodextrineket és gentio-oligoszacharidokat beleértve), kito-oligoszacharidok, glükomanno-oligoszacharidok, galaktomanno-oligoszacharidok, mannán-oligoszacharidok, fuko-oligoszacharidok, galakturonsav-oligoszacharidok, guluronsav-oligoszacharidok, mannuronsav-oligoszacharidok, iduronsav-oligoszacharidok, riburonsavoligoszacharidok, glükuronsav-oligoszacharidok és azok elegyei, elõnyösebben frukto-oligoszacharidok, galakto-oligoszacharidok (transzgalakto-oligoszacharidokat beleértve), fuko-oligoszacharidok és galakturonsav-oligoszacharid és azok elegyei, még elõnyösebben galakto-oligoszacharidok és/vagy inulin, legelõnyösebben transzgalakto-oligoszacharidok. A jelen emészthetetlen oligoszacharid elõnyösen a következõk közül választott: galakto-oligoszacharidok és frukto-oligoszacharidok (például inulin). Elõnyösen, a jelen emészthetetlen oligoszacharidok legalább 50 tömeg%¹a 2–60 polimerizációfokú. Az egyik különösen elõnyös megvalósítási mód szerint, a jelen készítmény legalább galakto-oligoszacharidokat és frukto-oligoszacharidokat tartalmaz. A galakto-oligoszacharidok elõnyösen 2–10 polimerizációfokú szacharidokat tartalmaznak. A frukto-oligoszacharidok elõnyösen 2–60 polimerizációfokú szacharidokat tartalmaznak. A galakto-oligoszacharidok elõnyösen béta-kötéseket tartalmaznak, éppúgy, mint a humán anyatejben találhatók. Egy elõnyös megvalósítási mód szerint, a jelen készítmény galakturonsav-oligoszacharidokat tartalmaz. A találmány szerinti galakturonsav-oligoszacharidok elõnyösen csökkentik patogén mikroorganizmusok adhézióját a bél epitélsejtjeihez, ezáltal gátolják a vastagbél (nozokomiális) patogén baktériumok általi kolonizációját császármetszéssel világra hozott csecsemõkben. Ezen túlmenõen, a találmány szerinti galakturonsav-oligoszacharidok stimulálják az egészséges bélflóra kialakulását és fermentálódnak, ami intesztinális szerves savak termelõdését és az intesztinális pH csökkenését eredményezi, amely gátolja a (nozokomiális) patogén baktériumok szaporodását. Galakturonsav-oligoszacharidok hozzáadása ezért tovább javítja császármetszéssel világra hozott csecsemõk védettségét a fejletlen barrierfunkció és/vagy fejletlen intesztinális baktériumflóra miatt létrejövõ fertõzések ellen.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
2
A leírásban „galakturonsav-oligoszacharid” kifejezés alatt elõnyösen oligoszacharidot értünk, amelyben az oligoszacharidban jelen levõ monoszacharidegységek legalább 50%¹a galakturonsav. A jelen készítmény elõnyösen 2–250, elõnyösebben 2–50, még elõnyösebben 2–20 polimerizációfokú galakturonsav-oligoszacharidot tartalmaz. A találmányban alkalmazott galakturonsav-oligoszacharidot elõnyösen pektinbõl, pektátból és/vagy poligalakturonsavból állítjuk elõ. A galakturonsav-oligoszacharid elõnyösen pektinbõl származik. A pektineredetû oligoszacharidot elõnyösen gyümölcseredetû pektin és/vagy zöldségeredetû pektin hidrolízisével és/vagy béta-eliminálásával állítjuk elõ, elõnyösebben alma¹, citrusféle- és/vagy cukorrépaeredetû pektinbõl, még elõnyösebben, az alma¹, citrusféle- és/vagy cukorrépa-eredetû pektint legalább egy Házzal kezeltük. A pektinlizátumot és/vagy a galakturonsav-oligoszacharidot elõnyösen bakteriális termeléssel állítjuk elõ. Egy elõnyös megvalósítási mód szerint, a galakturonsav-oligoszacharid terminális hexuronsavegységeinek legalább egyike kettõs kötést hordoz, amely elõnyösen a terminális hexuronsavegység C4 és C5 pozíciója között helyezkedik el. A kettõs kötés hatékonyan véd patogén baktériumok intesztinális epitelsejtekhez történõ tapadása ellen. Ez utóbbi, császármetszéssel világra hozott csecsemõk számára elõnyös. Elõnyösen, a galakturonsav-oligoszacharid terminális hexuronsavegységeinek legalább 5%¹a, elõnyösebben legalább 10%¹a, még elõnyösebben legalább 25%¹a telítetlen hexuronsavegység. Mivel minden egyes galakturonsav-oligoszacharid elõnyösen csak egyetlen telítetlen hexuronsavegységet tartalmaz, a terminális hexuronsavegységek elõnyösen kevesebb mint 50%¹a telítetlen hexuronsavegység (azaz kettõs kötést tartalmaz). A jelen készítmény elõnyösen 0,01–10 g, elõnyösebben 0,05–6 g, még elõnyösebben 0,2–2 g, 2–250 polimerizációfokú galakturonsav-oligoszacharidot tartalmaz a készítmény 100 g száraz tömegére vonatkoztatva. A készítmény elõnyösen 0,01–10 g, elõnyösebben 0,05–6 g, még elõnyösebben 0,2–2 g, 2–25 polimerizációfokú galakturonsav-oligoszacharidot tartalmaz a tápszerkészítmény 100 g száraz tömegére vonatkoztatva. A rövid láncú galakturonsav-oligoszacharidok hatékonyabbak és/vagy alkalmasabbak a jelen készítményhez történõ hozzáadásra. Elõnyösen, a készítmény (i) galakto-oligoszacharidokat, (ii) frukto-oligoszacharidokat és (iii) galakturonsav-oligoszacharidokat tartalmaz. Ez a kombináció különösen alkalmas császármetszéssel világra hozott csecsemõk védelmére, mivel optimálisan stimulálja a bifidobaktériumokat és/vagy laktobacillusokat, csökkenti patogén organizmusok adhézióját, valamint csökkenti a potenciálisan patogén baktériumok, például E. coli kolonizációját és/vagy adhézióját.
Tejsavtermelõ baktériumok A jelen készítmény elõnyösen tejsavtermelõ bakté60 riumokat tartalmaz, élõ vagy elölt formában. Elölt bak5
1
HU 007 874 T2
tériumok elõállíthatók például élõ baktériumok inaktiválásával, hõkezeléssel és/vagy ultrahangos kezeléssel. Elõnyösen, élõ tejsavbaktériumok adhatók a készítményhez abból a célból, hogy stimulálják a csecsemõ béltraktusának gyors kolonizálását. Elõnyösen, a tejsavtermelõ baktériumokat élõ mikroorganizmusok egyetlen fajból származó, vagy kevert tenyészete formájában biztosítjuk. A jelen készítmény elõnyösen 102–103 telepképzõ egység („colony forming unit”, cfu), elõnyösebben 10 2 –10 12 cfu, még elõnyösebben 105–1010 cfu, és legelõnyösebben 104–5×109 cfu tejsavtermelõ baktériumot tartalmaz a jelen készítmény 1 g száraz tömegére vonatkoztatva. A jelen készítmény elõnyösen Lactobacillus és/vagy Bifidobacterium nemzetségbe tartozó baktériumokat tartalmaz. A készítmény elõnyösen legalább egy bifidobaktériumot tartalmaz a következõk közül: B. longum, B. breve, B. infantis, B. catenulatum, B. pseudocatenulatum, B. adolescentis, B. animalis, B. gallicum, B. lactis és B. bifidum, elõnyösebben legalább egy bifidobaktériumot tartalmaz a következõk közül: B. breve, B. infantis, B. bifidum, B. catenulatum, B. longum, még elõnyösebben legalább egy bifidobaktériumot tartalmaz a következõk közül: B. breve és B. longum, legelõnyösebben B. breve bifidobaktériumot tartalmaz. Elõnyösen, a készítmény legalább két eltérõ bifidobaktérium fajt, alfajt vagy törzset tartalmaz. Elõnyösen, a jelen készítmény legalább egy, elõnyösebben legalább kettõ, még elõnyösebben legalább három, legelõnyösebben legalább négy eltérõ bifidobaktérium fajt tartalmaz. Elõnyösen, a jelen készítmény legalább egy, elõnyösebben legalább kettõ, még elõnyösebben legalább három, legelõnyösebben legalább négy eltérõ bifidobaktérium törzset tartalmaz. A fenti kombinációk célja általában a mikroorganizmusok diverzitásának és/vagy mennyiségének növelése császármetszéssel világra hozott csecsemõk belében. Ez elõnyösen hat a csecsemõre, és egészségük szempontjából különbözõ elõnyöket biztosít. A jelen készítmény elõnyösen laktobacillust tartalmaz, amely a következõk közül választott: L. casei, L. reuteri, L. paracasei, L. rhamnosus, L. acidophilus, L. johnsonii, L. lactis, L. salivarius, L. crispatus, L. gasseri, L. zeae, L. fermentum és L. plantarum, elõnyösebben a következõk közül: L. casei, L. paracasei, L. rhamnosus, L. johnsonii, L. acidophilus, L. fermentum, és legelõnyösebben L. paracasei laktobacillust tartalmaz. Még elõnyösebben, a jelen készítmény Bifidobacterium breve és/vagy Lactobacillus paracasei baktériumokat tartalmaz, mert ezen baktériumok szaporodása császármetszéssel világra hozott csecsemõkben elégtelen. A fokozott biodiverzitás stimuláló hatású a császármetszéssel világra hozott újszülött egészségére.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55 Kiszerelés A jelen készítményt elõnyösen enterálisan adagoljuk, elõnyösebben szájon át. A jelen készítmény elõnyösen csecsemõtápszer. A jelen készítmény elõnyösen szintetikus tápszer, amelyet különbözõ összetevõk
60 6
2
elegyítésével állítunk elõ. A jelen készítmény nem természetben elõforduló (kezeletlen) emlõseredetû tej, például nem humán anyatej. A jelen készítmény elõnyösen teljes értékû táplálásként alkalmazható csecsemõk számára. A jelen készítmény elõnyösen lipidet, proteint és szénhidrátot tartalmaz, és azt elõnyösen folyékony tápszer formájában adjuk be. A leírásban „folyékony tápszer” kifejezés alatt száraz tápszert (például porokat) is értünk, amelyhez utasításokat csatolnak arra vonatkozólag, hogy a száraz tápszer keveréket miként kell megfelelõ folyadékkal (például vízzel) elegyíteni. Elõnyösen, a jelen készítmény megfelelõ táplálást biztosít a csecsemõ számára, és lipidösszetevõt, proteinösszetevõt és szénhidrát-összetevõt tartalmaz. A lipidösszetevõ elõnyösen az összes energia 5–50%¹át biztosítja, a protein-összetevõ az összes energia 5–50%¹át biztosítja, és a szénhidrát-összetevõ az összes energia 15–90%¹át biztosítja. A jelen készítményt elõnyösen csecsemõtápszerként alkalmazzuk, ahol a lipidösszetevõ az összes energia 35–50%¹át biztosítja, a protein-összetevõ az összes energia 7,5–12,5%¹át biztosítja, és a szénhidrát-összetevõ az összes energia 40–55%¹át biztosítja. Protein-összetevõ esetében, az összes energiatartalomra vonatkoztatott százalékos arány kiszámításakor figyelembe kell venni a proteinek, peptidek és aminosavak által biztosított összes energiát. Elõnyösen, a lipidösszetevõ zöldségeredetû lipidek és állati eredetû lipidek közül választott legalább egy lipid, valamint haleredetû, állati eredetû, zöldségeredetû, algaeredetû, gombaeredetû és baktériumeredetû olajok közül választott legalább egy olaj kombinációját tartalmazza. Elõnyösen, a lipid legalább 12 mg/100 kcal a¹linolénsavat (ALA) tartalmaz. Elõnyösen, a lipidösszetevõben a linolénsav (LA) és ALA tömeg szerinti aránya 5–15, elõnyösebben 5–10. A transz-zsírsavak mennyisége az összes lipidre vonatkoztatva elõnyösen kevesebb mint 4 tömeg%. A magas transz-zsírsav-tartalom káros hatású az intesztinális barrierre. A jelen készítményben alkalmazott protein-összetevõ elõnyösen legalább egyet tartalmaz a következõk közül: nem humáneredetû, állati proteinek (például tejproteinek, húsproteinek és tojásproteinek), zöldségeredetû proteinek (például szójaprotein, búzaprotein, rizsprotein, burgonyaprotein és borsóprotein), szabad aminosavak és azok elegyei. Különösen elõnyös a tehéntejbõl származó nitrogénforrás, közelebbrõl olyan tehéntejproteinek, mint például kazein- és savóproteinek. A protein-összetevõ elõnyösen intakt proteineket, elõnyösebben intakt, szarvasmarha-eredetû savóproteineket és/vagy intakt, szarvasmarha-eredetû kazeinproteineket tartalmaz. Mivel a jelen készítmény alkalmazható allergiás reakciók mérséklésére csecsemõkben, a csecsemõtápszer proteinje elõnyösen a következõk közül választott: hidrolizált tejprotein (például hidrolizált kazein és/vagy hidrolizált savóprotein), zöldségeredetû protein és/vagy aminosavak. Ilyen hidrolizált proteinek alkalmazása tovább mérsékli a csecsemõk allergiás
1
HU 007 874 T2
reakcióit. Ilyen hidrolizált proteinek alkalmazása elõnyösen javítja az étrend protein-összetevõinek felszívódását császármetszéssel világra hozott csecsemõk éretlen béltraktusában. Elõnyösen, a készítmény emészthetõ szénhidrátokat tartalmaz. A jelen készítményben alkalmazott emészthetõ szénhidrátok elõnyösen a következõk közül választottak: szacharóz, laktóz, glukóz, fruktóz, szilárd gabonaszirup, keményítõ és maltodextrinek, továbbá elegyeik, elõnyösebben az emészthetõ szénhidrát laktóz. Sok csecsemõ számára, különösen császármetszéssel világra hozott csecsemõk számára jelentenek komoly problémát a széklet-rendellenességek (például kemény széklet, elégtelen mennyiségû széklet, hasmenés). Azt tapasztaltuk, hogy a székletproblémák LC¹PUFA folyékony tápszerben történõ beadásával mérsékelhetõk. A jelen készítmény ozmolalitása elõnyösen 50–500 mOsm/kg, elõnyösebben 100–400 mOsm/kg. A fentiek tükrében fontos továbbá, hogy a folyékony tápszer energiadenzitása ne legyen túl nagy, mindazonáltal, biztosítson elegendõ energiát az egyén táplálásához. Ennek megfelelõen, a folyékony tápszer energiadenzitása elõnyösen 0,1–2,5 kcal/ml, elõnyösebben 0,5–1,5 kcal/ml, még elõnyösebben 0,6–0,8 kcal/ml. Alkalmazás A jelen találmány alkalmazható császármetszéssel világra hozott csecsemõ táplálására szolgáló eljárásban, amely eljárás tartalmazza a jelen készítmény beadását a fenti csecsemõnek, amely készítmény az alábbiakat tartalmaz: (i) LC¹PUFA¹t; és (ii) nukleotidot és/vagy vagy nukleotidprekurzort, amely a következõk közül választott: nukleozidok, purinbázisok, piridinbázisok, ribóz és dezoxiribóz. A jelen találmány alkalmazható továbbá i) császármetszéssel világra hozott csecsemõ egészségének javítására szolgáló eljárásban, és/vagy ii) császármetszéssel világra hozott csecsemõknél elõforduló rendellenesség kezelésére és/vagy megelõzésére szolgáló eljárásban, amely eljárás tartalmazza a jelen készítmény beadását a csecsemõnek. Elõnyösen, a rendellenességek intesztinális rendellenességek, amelyeket a flóra alacsony bifidobaktériumtartalma okoz. Elõnyösen, a rendellenesség fertõzés és atópiás betegség közül választott. Elõnyösen, a jelen készítményt császármetszéssel világra hozott csecsemõknek életük elsõ évében, elõnyösen a születéstõl számított 3 hónapon belül, elõnyösebben a születéstõl számított 2 héten belül, még elõnyösebben a születéstõl számított 100 órán, még elõnyösebben 72 órán, legelõnyösebben 48 órán belül adjuk. A jelen készítmény elõnyösen alkalmazható az intesztinális barrier érésének stimulálására; az intesztinális barrier permeabilitásának csökkentésére, és/vagy az immunrendszer stimulálására. Az eljárás elõnyösen az alábbi lépéseket tartalmazza: a) (i) táplálkozástanilag és gyógyászatilag elfogadható folyadék elegyítését (ii) száraz készítménnyel, amely (ii)
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60 7
2
száraz készítmény LC¹PUFA¹t és nukleotidokat tartalmaz; és b) az a) lépésben kapott készítmény beadását császármetszéssel világra hozott csecsemõnek. LC-PUFA¹t és/vagy nukleotidot tartalmazó készítmény beadása a (nozokomiális) patogén mikroorganizmusok, például Escherichia coli, egyéb Gram-negatív fajok, például Aeromonas, Klebsiella, Enterobacter, Pseudomonas, Proteus és Acinetobacter nemzetségekbe tartozó, továbbá Gram-pozitív fajok, például Enterococcus, Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus és Clostridium fajok, vírusok és/vagy gombák, elõnyösen Escherichia coli (E. coli) csökkent transzlokálódását eredményezi. Ennek megfelelõen, a jelen készítmény elõnyösen alkalmazható császármetszéssel világra hozott csecsemõkben fertõzés és/vagy hasmenés kezelésére és/vagy megelõzésére szolgáló eljárásban, amely eljárás tartalmazza a jelen készítmény beadását császármetszéssel világra hozott csecsemõnek. Egy elõnyös megvalósítási mód szerint, a jelen készítményt Escherichia coli, Aeromonas, Klebsiella, Enterobacter és/vagy Pseudomonas, elõnyösebben E. coli által okozott fertõzés kezelésére és/vagy megelõzésére alkalmazzuk. Az LC¹PUFA¹t és nukleotidokat és/vagy nukleotidprekurzorokat tartalmazó jelen készítmény beadása allergének intesztinális barrieren át történõ csökkent transzlokálódását eredményezi. Ennek megfelelõen, a jelen készítmény elõnyösen alkalmazható császármetszéssel világra hozott csecsemõkben jelentkezõ allergia, elõnyösen élelmiszer-allergia, atópiás ekcéma (például atópiás dermatitisz), asztma, allergiás orrnyálkahártya-gyulladás és/vagy allergiás kötõhártyagyulladás kezelésére és/vagy megelõzésére szolgáló eljárásban, amely eljárás tartalmazza a jelen készítmény beadását császármetszéssel világra hozott csecsemõnek. Elõnyösen, a jelen készítményt atópiás dermatitisz kezelésére és/vagy megelõzésére alkalmazzuk. Ezen túlmenõen, a jelen készítmény beadása erõsíti az immunrendszert. Ennek megfelelõen, az LC¹PUFA¹t és nukleotidokat és/vagy nukleozidprekurzorokat tartalmazó jelen készítmény elõnyösen alkalmazható császármetszéssel világra hozott csecsemõkben jelentkezõ szisztémás fertõzések és/vagy gyulladás kezelésére és/vagy megelõzésére szolgáló eljárásban. Egy elõnyös megvalósítási mód szerint, a jelen készítményt nekrotizáló enterocolitis kezelésére és/vagy megelõzésére alkalmazzuk. A leírásban és az igénypontokban a „tartalmaz” kifejezést és ragozott formáit nem korlátozó értelemben alkalmazzuk, ami azt jelenti, hogy a kifejezést követõ tételek bennefoglaltak, azonban a specifikusan nem felsorolt tételek nincsenek kizárva. Ezen túlmenõen, adott elemre az „egy” határozatlan névelõvel történõ utalás nem zárja ki egynél több elem jelenlétét, kivéve, ha a szövegkörnyezet egyértelmûen megszabja, hogy egy és csak egy elem van jelen. Ennek megfelelõen, az „egy” határozatlan névelõ jelentése általában „legalább egy”.
1
HU 007 874 T2
Példák 1. példa: Intesztinális mikroorganizmusok molekuláris jellemzése hüvelyi úton, vagy császármetszéssel világra jött csecsemõkben A jelen vizsgálatban a születés módjának (császármetszés versus hüvelyi úton történõ szülés) az intesztinális mikrobák összetételére gyakorolt hatását tanulmányoztuk, az élet harmadik napján, tíz Bifidobacterium fajra, három Ruminococcus fajra és egy Bacteroides fajra specifikus primerekkel elvégzett PCR-amplifikációs eljárással. A mikrobiális DNS extrahálását és vizsgálatát az alábbi szakirodalmi helyeken ismertetettek szerint végeztük: Favier és mtsai.: Environ. Microbiol. 68,
5
10
15
2
219–226 (2002); Satokari és mtsai.: Appl. Environ. Microbiol. 67, 504–513 (2001); és Satorkari és mtsai.: System. Appl. Microbiol. 26, 572–584 (2003). Huszonegy, császármetszéssel világra hozott újszülöttõl három napos korukban vett székletmintában detektált Bifidobacterium és más fajok eredményeit mutatja az 1. táblázat. A 2. táblázat huszonegy, hüvelyi úton világra jött, három napos korú újszülöttbõl származó székletmintában detektált Bifidobacterium és más fajok eredményeit mutatja. B. dentium, B. angulatum, B. lactis, Ruminococcus bromii, Ruminococcus callidus és Ruminococcus obeum fajokra specifikus szignált nem figyeltünk meg sem császármetszéssel világra hozott csecsemõk, sem hüvelyi úton született csecsemõk székletében.
1. táblázat Császármetszéssel világra hozott csecsemõk Újszülött
B. breve
B. infantis
B. bifidum
B. catenulatum
B. adolescentis
B. longum
B. gallicum
Bacteroides fragilis
1.
–
–
–
–
–
–
–
–
2.
–
–
–
–
–
++
–
–
3.
–
–
–
–
–
–
–
–
4.
–
–
–
–
–
–
–
–
5.
–
–
–
–
–
–
–
–
6.
–
–
–
–
–
–
–
–
7.
–
–
–
–
–
–
–
–
8.
–
–
–
–
–
–
–
–
9.
–
–
–
–
–
–
–
–
10.
–
–
–
–
–
–
++
–
11.
–
–
–
–
–
–
–
–
12.
–
–
–
–
–
–
–
–
13.
–
–
–
–
–
–
–
–
16.
–
–
–
–
–
–
–
–
17.
–
–
–
–
–
–
–
–
18.
–
–
–
–
–
–
–
–
19.
–
–
–
–
–
–
–
–
20.
–
–
–
–
–
–
–
–
21.
–
–
–
–
–
–
–
–
22.
–
–
–
–
–
–
–
–
23.
–
–
–
–
–
–
–
–
(–)=nincs amplifikáció; (+/–)=gyenge amplifikáció; (+) pozitív amplifikáció; (++)=erõs amplifikáció.
Arra következtethetünk, hogy a császármetszéssel világra hozott csecsemõk mikrobiális flórája eltér a hüvelyi úton született csecsemõkétõl. Nem csak a bifidobaktériumok és más fajok mennyisége kevesebb, ha- 55 nem fajok vonatkozásában a császármetszéssel világra hozott csecsemõk flórája kisebb diverzitást mutat. Mivel a csecsemõk flórájában a Bifidobacterium nemzetség dominál, ezekbõl az adatokból általánosságban arra következtethetünk, hogy császármetszéssel világ- 60 8
ra hozott csecsemõknél kevesebb bélbaktérium és kisebb diverzitást mutató bélbaktérium flóra van jelen, ami a béltraktust fogékonyabbá teszi (nozokomiális) patogének kolonizálásával szemben. Ezek az eredmények a találmány szerinti készítmény és eljárás elõnyös alkalmazására utalnak, például eljárás alkalmazására császármetszéssel világra hozott csecsemõk táplálására abból a célból, hogy csökkentsük intesztinális patogének hatásait és stimuláljunk egészsé-
1
HU 007 874 T2
ges intesztinális flórát, következésképp, megelõzzük a fertõzéseket, stimuláljuk az egészséges immunrendszer
2
kialakulását és stimuláljuk a béltraktus érését, különösen császármetszéssel világra hozott csecsemõknél.
2. táblázat Hüvelyi úton született csecsemõk Újszülött
B. breve
B. infantis
B. bifidum
B. catenulatum
B. adolescentis
B. longum
B. gallicum
Bacteroides fragilis
1a
–
+
–
–
–
++
–
–
2a
+/–
–
++
++
–
++
–
–
3a
–
–
–
+
–
–
–
–
4a
+/–
–
–
++
+
+
–
–
5a
+/–
–
++
++
–
++
++
–
6a
–
–
+/–
++
–
++
–
–
7a
–
–
+/–
++
++
–
–
–
8a
++
++
–
+
++
–
–
–
9a
–
–
–
+
++
+
–
–
10a
++
–
–
+
+
–
–
–
11a
++
–
++
++
–
++
–
+
12a
+
+
+
+
–
++–
–
+
13a
+/–
–
–
+
–
+
–
–
16a
–
–
–
++
–
+
–
–
17a
+/–
–
+
+
–
+
–
–
18a
+/–
–
+
+
–
+
–
–
19a
+
–
–
+
–
+
–
–
20a
–
–
–
+
–
+
–
–
21a
–
–
–
+
++
+
–
–
22a
–
+
–
++
–
+
–
–
23a
+
–
++
++
–
+
–
–
(–)=nincs amplifikáció; (+/–)=gyenge amplifikáció; (+) pozitív amplifikáció; (++)=erõs amplifikáció.
2. példa: LC¹PUFA hatása a barrier integritásra T84 intesztinális epitelsejtvonal egyrétegû tenyészetét („monolayer cells”, MC) inkubáltuk luminális kompartmentben ARA (arachidonsav; 5,8,11,14-eikozatetraénsav), DHA (cisz-4,7,10,13,16,19-dokozahexaénsav), EPA (eikozapentaénsav) többszörösen telítetlen zsírsavak vagy kontroll palmitinsav (C 16:0) (Palm) (Sigma, St. Louis, USA) 100 mmol/l koncentrációjának jelenlétében, 0, 24, 48 és 72 órán át. Az epiteliális barrierfunkciót epiteliális Volt-Ohm mérõ alkalmazásával (EVOM; World Precision Instruments, Németország) mért transzepiteliális ellenállás („transepithelial resistance”, TER Wcm2) meghatározásával, és 4 kD FITC-dextránra (paracelluláris permeabilitás marker, Sigma, USA) vonatkozó permeabilitás mérésével határoztuk meg. A 3. táblázat zsírsavak (100 mmol/l) spontán barrier-integritásra 72 órán át tartó inkubálást követõen gyakorolt hatásának eredményét mutatja. A 3. táblázat adatai szerint, hogy az ARA, EPA és DHA LC¹PUFA¹k csökkentik a molekuláris áramlást és javítják az epiteliális ellenállást. Ezzel szemben, a kontroll
40
45
palmitinsav ellenkezõ hatást fejt ki, azaz károsítja a barrier-integritást. Az eredmények az EPA, DHA és ARA, és elsõsorban az ARA elõnyös alkalmazására utalnak a találmány szerinti készítményben, valamint a találmány szerinti eljárásban való alkalmazásra, például császármetszéssel világra hozott csecsemõk barrier-integritásának javítására szolgáló eljárásban. A gamma-linolénsav (GLA) szintén pozitív hatást gyakorolt a kiindulási barrier-integritásra és molekuláris áramlásra. 3. táblázat
50 Összetevõ (LC-PUFA)
Kontroll
55
60 9
Áramlás
Ellenállás (TER)
79
1090
161
831
DHA
72
1574
ARA
28
1816
EPA
65
1493
Palmitinsav
1
HU 007 874 T2
3. példa: LC¹PUFA hatása IL–4 által közvetített barrier-szétesésre T84 intesztinális epitelsejtvonal egyrétegû tenyészetét („monolayer cells”, MC) inkubáltuk IL–4 (2 ng/ml, szerózus kompartment, Sigma, USA) jelenlétében, ARA, DHA, GLA vagy EPA többszörösen telítetlen zsírsavakkal vagy kontroll palmitinsavval, vagy azok nélkül (10 mmol/l vagy 100 mmol/l, szerózus kamra, Sigma, St. Louis, USA). Az IL–4-gyel történõ inkubálás elõtt a sejteket 48 órán át ARA-val, DHA-val, EPA-val vagy palmitinsavval elõinkubáltuk. A PUFA¹k és palmitinsav IL–4-gyel történõ együtt inkubálását további 48 órán át folytattuk, miközben a tápközeget és az adalékokat 24 óránként cseréltük. Az epiteliális barrierfunkciót transzepiteliális ellenállás („transepitelial resistance”, TER), és permeabilitás mérésével határoztuk meg, a 2. példában leírtak szerint. Az ARA, DHA, EPA és palmitinsav (100 mmol/l) IL–4 által mediáit barrier-szétesésre gyakorolt hatásának eredményeit a 4. táblázatban foglaltuk össze. A 4. táblázat adatai szerint, hogy az ARA, DHA és EPA LC¹PUFA¹k gátolták az IL–4 okozta fokozott áramlást. Ezzel szemben, a palmitinsav káros hatást mutatott és a kontrollhoz képest fokozta a barrier-szétesést. Az eredmények az ARA, DHA és EPA elõnyös alkalmazására utalnak klinikai és csecsemõtápszer-készítményekben, IL–4 által mediált barrier-szétesés megelõzésére és enyhítésére, például élelmiszer- vagy tehéntej-allergia esetén. Ezek az eredmények az EPA, DHA és ARA, és elsõsorban az ARA elõnyös alkalmazására utalnak a találmány szerinti készítményben, valamint a találmány szerinti eljárásban, közelebbrõl olyan eljárásban, amely alkalmas allergia, atópiás ekcéma, asztma, allergiás orrnyálkahártya-gyulladás és/vagy allergiás kötõhártya-gyulladás kezelésére és/vagy megelõzésére, császármetszéssel világra hozott csecsemõkben.
kos aránya 6 hét elteltével még mindig 11,8% volt (lásd az 5. táblázatot). 5. táblázat 5 Csecsemõk
Hüvelyi szülés
10
20
25
30
35
40 IL–4-áramlás
IL–4 TER
Kontroll
582
374
Palmitinsav
777
321
DHA
271
547
ARA
218
636
EPA
228
539
45
E. coli a 6. héten (%)
19,8 4,3
11,8
6. példa: Eljárás császármetszéssel világra hozott csecsemõk táplálására Császármetszéssel világra hozott csecsemõknek két napon belül olyan tápszerkészítményt adunk, amely (egy literre vonatkoztatva) az alábbiakat tartalmazza: energia 672 kcal; protein 14 g; savó:kazein arány 60:40; zsír 36 g; szénhidrát 73 g; A¹vitamin 500 mg retinolekvivalens (RE); természetes karotinoidok elegye 35 mg RE; D3¹vitamin 12 mg; E¹vitamin 12 mg; K1¹vitamin 45,0 mg; B1¹vitamin (tiamin) 400 mg; B2¹vitamin (riboflavin) 1000 mg; B6¹vitamin (piridoxin) 400 mg; B12-vitamin (cianokobalamin) 2,0 mg; niacin 4,1 mg; fólsav 120 mg; pantoténsav 2800 mcg; biotin 18 mg; C¹vitamin (aszkorbinsav) 86 mg; kolin 100 mg; inozitol 33 mg; taurin 67 mg; kalcium 510 mg; foszfor 290 mg; magnézium 50 mg; vas 7,0 mg; cink 4,9 mg; mangán 84 mg; réz 330 mg; jód 100 mg; nátrium 170 mg; kálium 740 mg; klorid 460 mg; szelén 14 mg; ahol a zsírok az összes zsírsavakra vonatkoztatva 0,65 tömeg% LC¹PUFA¹t tartalmaznak, ezen belül 0,35 tömeg% ARA¹t, 0,05 tömeg% EPA¹t és 0,2 tömeg% DHA¹t, és a készítmény tartalmaz továbbá 3,6 g, Elix’or™ (Borculo Domo Ingredients, Hollandia) eredetû transzgalakto-oligoszacharidokat és 0,4 g, RaftilineHP™ (Orafti Active Food Ingredients, Belgium) eredetû frukto-oligoszacharidokat, valamint körülbelül 20 mg nukleotidot (körülbelül 6,4 mg CMP¹t, körülbelül 4 mg UMP¹t, körülbelül 6 mg AMP¹t, körülbelül 1,4 mg GMP¹t és körülbelül 2,4 mg IMP¹t).
SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Készítmény – amely tartalmazza a következõket: (i) hosszú láncú, többszörösen telítetlen zsírsavat (LC-PUFA); és (ii) legalább egyet a következõk közül: (a) nukleotid és (b) nukleotidprekurzor, amely a következõk közül van kiválasztva: nukleozidok, purinbázisok, piridin55 bázisok, ribóz és dezoxi-ribóz; – alkalmazása császármetszéssel világra hozott csecsemõknek történõ beadásra szánt, fertõzés, hasmenés, bélgyulladás, allergia, atópiás ekcéma, asztma, aller60 giás orrnyálkahártya-gyulladás és/vagy allergiás kötõ50
4. példa: Császármetszéssel világra hozott csecsemõk flórája Meghatároztuk császármetszéssel világra hozott csecsemõk székletének bifidobaktériumtartalmát. A császármetszéssel világra hozott csecsemõkben (n=44) a Bifidobacterium nemzetség tagjainak százalékos aránya az összes baktériumra vonatkoztatva az elsõ héten 4,3% volt, szemben a hüvelyi úton született csecsemõk (n=28) 19,8%¹os értékével. Ha a csecsemõket szokásos étrenden tartották, az E. coli százalé-
Császármetszés
Bifidobaktériumok az elsõ héten (%)
Ezek az eredmények arra utalnak, hogy elõnyös a jelen LC¹PUFA¹k és/vagy nukleotidok és/vagy nukleotidprekurzorok adagolása császármetszéssel világra 15 hozott csecsemõknek.
4. táblázat Összetevõ (LC-PUFA)
2
10
1
HU 007 874 T2
hártya-gyulladás kezelésére és/vagy megelõzésére szolgáló készítmény elõállítására, amely készítmény nem humán anyatej. 2. Készítmény – amely tartalmazza a következõket: (i) hosszú láncú, többszörösen telítetlen zsírsavat (LC-PUFA); és (ii) legalább egyet a következõk közül: (a) nukleotid és (b) nukleotidprekurzor, amely a következõk közül van kiválasztva: nukleozidok, purinbázisok, piridinbázisok, ribóz és dezoxi-ribóz; – alkalmazása császármetszéssel világra hozott csecsemõknek történõ beadásra szánt, császármetszéssel világra hozott csecsemõben az intesztinális érés javítására, intesztinális permeabilitás csökkentésére és/vagy intesztinális barrierrel összefüggõ rendellenességek kezelésére szolgáló készítmény elõállítására, amely készítmény nem humán anyatej. 3. Az elõzõ igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a készítmény legalább egy nem emészthetõ oligoszacharidot is tartalmaz, amely a következõk közül van kiválasztva: fruktánok (ezen belül inulin), frukto-oligoszacharidok, nem emészthetõ dextrinek, galakto-oligoszacharidok (ezen belül transzgalakto-oligoszacharidok), xilo-oligoszacharidok, arabino-oligoszacharidok, arabino-galakto-oligoszacharidok, glükooligoszacharidok (ezen belül ciklodextrinek és gentiooligoszacharidok), kito-oligoszacharidok, glüko-mannooligoszacharidok, galakto-manno-oligoszacharidok, mannán-oligoszacharidok, fuko-oligoszacharidok, galakturon-oligoszacharidok, guluronsav-oligoszacharidok, mannuronsav-oligoszacharidok, iduronsav-oligoszacharidok, riburonsav-oligoszacharidok, glukuronsav-oligoszacharidok és ezek elegyei. 4. Az elõzõ igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a készítmény tartalmaz transzgalakto-oligoszacharidokat és/vagy frukto-oligoszacharidokat. 5. Az elõzõ igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a készítmény tartalmaz galakturonsav-oligoszacharidokat. 6. Az elõzõ igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol az LC¹PUFA a következõk közül van kiválasztva: eikozapentaénsav, dokozahexaénsav és arachidonsav. 7. Az elõzõ igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a készítmény tartalmaz 0,1–15 tömeg%
5
10
15
20
25
30
35
40
45
11
2
LC¹PUFA¹t a készítményben jelen levõ összes zsír tömegére vonatkoztatva. 8. Az elõzõ igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a készítmény 3 tömeg%-nál kevesebb LC¹PUFA¹t tartalmaz a készítményben jelen levõ összes zsír tömegére vonatkoztatva; ahol a) az omega¹3 LC¹PUFA mennyisége kevesebb, mint az összes zsírtartalom 1 tömeg%¹a; b) az omega¹6 LC¹PUFA mennyisége kevesebb, mint az összes zsírtartalom 2 tömeg%¹a; és c) az arachidonsav mennyisége kevesebb, mint az összes zsírtartalom 1 tömeg%¹a; 9. Az elõzõ igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a készítmény tartalmaz legalább egy nukleotidot, amely a következõk közül van kiválasztva: citidin-5’-monofoszfát, uridin-5’-monofoszfát, adenozin-5’monofoszfát, guanozin-5’-monofoszfát, inozin-5’-monofoszfát és a felsorolt nukleotidok bármelyikének nátriumsója. 10. Az elõzõ igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a készítmény 5–100 mg nukleotidot tartalmaz a készítmény 100 g száraz tömegére vonatkoztatva. 11. Az elõzõ igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a készítmény a Bifidobacterium vagy Lactobacillus nemzetségbe tartozó, legalább egy baktériumfajt is tartalmaz. 12. Az elõzõ igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a lipidösszetevõ az összes energia 5–50%¹át biztosítja, a protein-összetevõ az összes energiatartalom 5–50%¹át biztosítja és a szénhidrát-összetevõ az összes energiatartalom 15–90%¹át biztosítja. 13. Az elõzõ igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a készítményt úgy állítjuk elõ, hogy (I) táplálkozástanilag vagy gyógyászatilag elfogadható folyadékot; és (II) száraz készítményt elegyítünk, ahol a (II) száraz készítmény tartalmaz hosszú láncú, többszörösen telítetlen zsírsavat (LC-PUFA); és legalább egyet a következõk közül: (a) nukleotid és (b) nukleotidprekurzor, amely a következõk közül van kiválasztva: nukleozidok, purinbázisok, piridinbázisok, ribóz és dezoxiribóz, az egészséges bélflóra kialakulásának stimulálására és/vagy enterális patogének mennyiségének csökkentésére császármetszéssel világra hozott csecsemõben.
Kiadja a Magyar Szabadalmi Hivatal, Budapest Felelõs vezetõ: Szabó Richárd osztályvezetõ Windor Bt., Budapest
