SKRIPSI
MEMPELAJARI PENGARUH EKSTRAK DAUN DAN RIMPANG KUNYIT (Curcuma domestica Val.) TERHADAP AKTIVITAS SITOLITIK SEL Natural Killer (NK) DALAr0 MELISIS SEL K-562 SECARA IN VITRO
I !
'J
Oleh:
DIAN MURDIANTI
I
:F 31. 1742
•
e--. . -,-
~~
•
.
..
1998 JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGaR BOGaR
"fni tennasukj?,grunia 7'ufian-Jtu untuJtmenco6a aJtu apa/?gJi aJtu 6ersyuJtur atau mengingRgri aRgn niJtmat-'J{ya (Q;. .J/.n-'J{am[: 40) II
Katya kBCil ini untuk ~atnua yang ku~ayangi dan
•
kuka~ihi
Dian Murdianti, F 31.1742. MEMPELAJARI PENGARUH EKSTRAK DAUN DAN RIMPANG KUNYIT (Curcuma domestica Va!.) TERHADAP AKTIVITAS SITOLITIK SEL Natural Killer (NK) DALAM MELISIS SEL K-562 SECARA INVITRO. Dibawah bimbingan Dr. Ir Sedamawati Yasni, M.Agr dan Dr. Ir. Fransisca R Zakaria, MSc.
RINGKASAN
Kunyit (Curcuma domestica VaL) merupakan tanaman yang banyak digunakan sebagai bumbu masakan. disamping sebagai obat. Tanaman ini juga mengandung komponen aktif yang mempunyai aktivitas biologis. Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari pengaruh ekstrak daun dan rim pang kunyit terhadap aktivitas sito!itik sel natural kil/ler (NK) dalam proses me!isis sel K-562. S21 NK merupakan subset sel limfosit yang berfungsi untuk menghancurkan sel kanker dan sel yang terinfeksi oleh virus secara langsung. Pengujian pengaruh ekstrak terhadap aktivitas sel NK ditentukan dengan cara mengkultur sel efektor (SE) dengan sel target (ST) yaitu alur sel K-562 yang telah dilabel dengan timidin-H 3 \MS1!. Jenis ekstrak yang diuji adalah ekstrak air daun kunyit deogan cara dingin (DAD), ekstrak air daun kunyit dengan cara panas (DAP). ekstrak etanol 70% daun kunyft (DE) dan ekstrak air rimpang kunyit dengan cara panas (RAP). Keempat jenis ekstrak ini diuji pada berbagai tingkat pengenceran yaitu 0,15, 30, 45 dan 60. Perbandingan antara sel efektor (SE) dan sel target (ST) yang digunakan adalah 50 : 1 dan 100 : 1. Pengujian ini didasarkan pada banyaknya sel K-562 yang lisis, dihitung berdasarkan pancaran sinar fl oleh inti sel K-562 yang tidak !isis, yang dinyatakan dalam cpm (count per minute). Aktivitas sel NK dalam melisis sel K-562 dinyatakan dalam % !isis dan pengaruh ekstrak terhadap aktivitas sel NK dinyatakan cjalam indeks lisis. Ekstrak RAP dapat meningkatkan aktivitas sel NK pad a 2 jenis perbandingan sel efektor dan sel target juga pada semua tingkat pengenceran, % !isisnya berkisar antara 71.3 -80.2 % dengan indeks !isis berkisar antara 1.8 - 2.3, lebih tinggi dan berbeda nyata dengan kontrol (39.4 % dan 41.0%) pada p=0.05. Ekstrak DAD mempunyai kecenderungan dapat meningkatkan aktivitas sel N K pada perbandingan SE : ST = 50 : 1, sedangkan ekstrak DAP dan DE pada perbandingan SE : ST = 100: 1. Ekstrak DAD pada tingkat pengenceran 0, 15, 30 dan 45 dapat meningkatkan aktivitas sel NK dengan masing-masing % !isis sebesar 48.7 %, 60.8%, 59.8% dan 56.8% lebih tinggi walaupun tidak berbeda nyata dengan kontrol (P = 0.05). Ekstrak DAP pada tingkat pengenceran 15, 30, 45 dan 60 dapat meningkatkan aktivitas sel NK dengan masing-masing % !isis dan indeks !isis berkisar antara 53.7 - 57.2 % dan 1.2 - 1.3. Ekstrak DE pada tingkat pengenceran 45 dan 60 menunjukan indeks !isis masing-masing sebesar 1.6 dan 1.8 serta % !isis masing-masing sebesar 79.9% dan 77.4%. Penganuh ekstrak DAD pada perbandingan SE : ST = 50 : 1 terhadap aktivitas sel NK tidak berbeda nyata dengan ekstrak RAP (p=0.05) pada tingkat pengenceran 15, 30 dan 45. Ekstrak .DAP dan DE pada tingkat pengenceran 30, 45 dan 60 dengan perbandingan SE : ST = 100 : 1 juga tidak berbeda nyata (p= 0.05)
dengan ekstrak RAP. Keempat jenis ekstrak secara in vitro dapat meningkatkan aktivitas sel NK dalam me lis is sel K-562 tetapi aktivitasnya tergantung pada jumlah sel efektor dan tingkat pengenceran esktrak.
MEMPELAJARI PENGARUH EKSTRAK DAUN DAN RIMPANG KUNYIT (Curcuma domestica Val.) TERHADAP AKTIVITAS SITOLITIK SEL Natural Killer (NK) DALAM MELISIS SEL K-562 SECARA IN VITRO
Oleh: DIAN MURDIANTI F 31.1742
SKRIPSI Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN Pada Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi Fakultas Teknologi Pertanian Institut Pertanian Bogor
1998 JURUSAN TEKNOLOGI PANGAN DAN GIZI FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR
IN!"TITUT PERTANIAN BOGOR FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN
MEMPELAJARI PENGARUH EKSTRAK DAUN DAN RIMPANG KUNYIT
(Curcuma domestica Va!.) TERHADAP AKTIVITAS SITOLITIK SEL Natural Killer (NK) DALAM MELISIS SEL K-562 SECARA IN VITRO
Oleh: DIAN MURDIANTI F 31.1742
SKRIPSI Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN Pad a Jurusan Teknologi Pangan dan Gizi Fakultas Teknologi Pertanian Institut Pertanian Bogor
Dilahirkan pada tanggal 15 April 1976 Di Bogor
Tanggallulus : ;!.\? September 1998
Menyetujui : Bogor, ?fJ Oktober 1998
\ I')):4--
1f@JcV~
Dr. Ir. Fransisca R Zakaria, MSc Dosen Pembimbing II
Dr. Ir. Sedarnawati Yasni. M.Agr Dosen Pembimbing I
KATA PENGANTAR
Alhamdulillahirobbilalamiin Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang melimpahkan Rahmat dan Hidayah-Nya sehingga skripsi ini dapat terselesaikan. Shalawat serta salam semoga tercurah kepada Rosululloh SAW, keluarga, sahabat dan para pengikutnya sampai ke akhir zaman. Penulis menghaturkan banyak terima kasih kepada : 1.
Kedua orang tua, Umi dan Bapak; atas segala do'a dan jerih payahnya selama ini, juga kedua adikku Heru dan Nit-Nit yang telah memberikan dorongan dan semangat sehingga Ceu-mu dapat-menyelesaikan tugas ini.
2.
Dr. Ir. Sedarnawati Yasni, M.Agr dan Dr. Ir. Fransisca R Zakaria, MSc, atas segala bantuan, waktu, kesabaran. bimbingan dan pengarahannya selama penulis menimba ilmu di TPG.
3.
Ir. Hanifah Nuryani Lioe, yang berkenan menguji pada saat ujian sarjana, juga untuk para staf dosen TPG lainnya.
4. Pusat Studi Satwa Primata - Bogar dan US Namru-2 Jakarta beserta segenaf staf yang' telah memberikan keleluasaan untuk menggunakan fasilitas yang diperlukan selama penelitian; untuk Ibu Atie, Mbak Silmi dan Mbak Anis terima kasih atas bantuannya yang tulus kepada penulis. 5.
Ibu Tejasari, Ibu Endang P, Pak Alfi dan Pak Arif atas bantuannya kepada penulis; dan rekan - rekan di Lab. Biokimia : EI. You, Jul, lal, Hari, Bambang dan Pak Nur atas bantuan dan kerjasamanya selama penelitian.
6. Teman - temanku : Ani, Siti, Elfi, Susi, Desi, Uni, teman - teman TPG lainnya serta teman - teman selama penulis kuliah di IPB atas bantuan, kebersamaan dan persahabatan yang terjalin selama ini (disinilah penulis belajar dan mencoba memahami makna hidup). 7. Mbak - Mbakku : Anna, Retno dan Tri serta ade-ku Lucia dan seluruh warga "Poetri 26" atas bantuan dan kebersamaannya. Juga terima kasih kepada pihak lain yang tidak tersebutkan. penulis berharap karya ini berarti dan bermanfaat.
Akhirnya
Bogar, Oktober 1998
Penulis
DAFTARISI
Halaman KATA PENGANTAR ........................................................................................ . DAFTAR lSI ...................................................................................................... iii DAFTAR GAM BAR ........................................................................................... vi DAFTAR TABEL ............................................................................................... vii DAFTAR LAMPIRAN .......................... ::........................................................... viii I.
PENDAHULUAN ....................................................................................... 1 A. LA T AR BELAKANG ..... ..... .................................. ......... ........... ............. 1 B. TUJUAN PENELITIAN ......................................................................... 3
II.
TINJAUAN PUSTAKA .............................................................................. 4
A. KUNYIT ................................................................................................. 4 1. Botani ............................................................................................... 4 2. Komponen Bioaktif pada Kunyit .......... ....... .... .... ............. .... .............. 6
B. KANKER ............................................................................................... 9 C. SEL Natural Killer (NK) ......................................................................... 11 D. KULTUR SEL ........................................................................................ 13 E. ALUR SEL (CELL LINE) ....................................................................... 15 III.
BAHAN DAN METODE .............................................................................. 16 A. BAHAN DAN ALAT ............................................................................... 16 B. METODE PENELITIAN ...................................................................... 17 1. Persia pan Ekstrak Daun dan Rimpang Kunyit (Curcuma domestica Val) ................................................................. 17 a. Ekstraksi air cara dingin ............................................................... 17 b. Ekstraksi air cara panas ............................................................... 18 c. Ekstraksi etanol 70 % ................................................................... 18 2. Analisa Total Fenol Ekstrak (AOAC, 1984) ....................................... 19 3. Pengujian Pengaruh Ekstrak Terhadap Aktivitas
iii
Sel Natural Killer (NK) ....................................................................... 19 a. Persiapan media .......................................................................... 19 b. Pemeliharaan sel K-562 .............................................................. 20 c. Perhitungan sel ............................................................................ 21 d. Sterilisasi dan pengenceran ekstrak ............................................ 22 e. Isolasi sel limfosit ......................................................................... 22 f. Pelabelan sel target ..................................................................... 23
g. Pengujian pengaruh ekstrak terhadap aktivitas sitolitik sel natural killer (NK) ................................................................................... 24 h. Perhitungan % lisis dan indeks lisis .............................................. 25 C. RANCANGAN PERCOBAAN ............................................................... 26 IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................... .
. .... 27
A. PERSIAPAN DAN ANALISA TOTAL FENOL EKSTRAK .
27
B. PENGARUH BERBAGAI EKSTRAK DAUN DAN RIMPANG KUNYIT
(Curcuma domestica Val) TERHADAP AKTIVITAS SEL Natural Killer (NK)
................................................................................................ 30
1. Pengaruh Tingkat Pengenceran pad a Berbagai Ekstrak Daun dan Rimpang Kunyit (Curcuma domestica Val) Terhadap Aktivitas Sel
Natural Killer (NK) .............................................................................. 33 a.
Ekstrak air daun kunyit cara dingin (DAD) .................................... 34
b.
Ekstrak air daun kunyit cara panas (DAP) .................................... 36
c.
Ekstrak etanol 70 % daun kunyit (DE) .......................................... 38
d.
Ekstrak air rimpang kunyit cara panas (RAP) ............................... 40
2. Pengaruh Ekstrak Daun dan Rimpang Kunyit (Curcuma domestica Val) Terhadap Aktivitas Sel Natural Killer (NK) Pad a Berbagai Tingkat Pengenceran ..... '" ................................................................................. 42 a.
Pengaruh ekstrak daun dan rimpang kunyit terhadap aktivitas sel
natural killer (NK) pada penambahan ekstrak tanpa pengenceran (0) ......................................................: ......................................... 42
b.
Pengaruh ekstrak daun dan rimpang kunyit terhadap aktivitas sel
natural killer (NK) pada tingkat pengenceran 15 .......................... 43 c.
Pengaruh ekstrak daun dan rimpang kunyit terhadap aktivitas sel
iv
natural killer (NK) pada tingkat pengenceran 30 .......................... 45 d.
Pengaruh ekstrak daun dan rimpang kUllyit terhadap aktivitas sel natural killer (NK) pad a tingkat pengenceran 45 ........................... 46
e.
Pengaruh ekstrak daun dan rimpang kunyit terhadap aktivitas sel natural killer (NK) pad a tingkat pengenceran 60 .......................... 47
V. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................................ 52
A.
KESIMPULAN ....................................................................................... 52
B.
SARAN ................................................................................................. 53
DAFTAR PUSTAKA ............................................................ . LAMPIRAN
....................... 55
................................................................................................. 59
v
