Immucor Transplant Diagnostics, Inc. 550 West Avenue, Stamford, CT 06902 Spojené státy americké Tel: 001 (203) 328-9500 nebo volání bez poplatku ve Spojených státech amerických, Kanadě a Portoriku (888) 329-0255, Fax: 001 (203) 328-9599
WWW.IMMUCOR.COM
Dokumentace a jazykové verze jsou k dispozici na: www.Immucor .com
PŘÍBALOVÝ
LETÁK
LIFECODES ID I. třída: Screeningový test Luminex® pro kvalitativní detekci protilátek IgG reagujících s HLA molekulami I. třídy. LIFECODES IDv2 II. třída: Screeningový test Luminex
®
pro kvalitativní detekci protilátek IgG reagujících s HLA molekulami II. třídy.
Test pro diagnostiku in vitro. OBSAH Definice symbolů……..…………………….. Účel použití...………………………………… Souhrn a vysvětlení.................……………. Princip postupu......................…………….. Reagencie..………………………………...… A. Identifikace..............…………………… B. Varování a upozornění.............………. C. Pokyny k uskladnění.........……………. D. Purifikace a aplikace............................ E. Známky nestability...............………….. Požadavky na nástroje............……………. Odběr a příprava vzorku............................
1 1 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3
Postup........………………………………… A. Dodané materiály.............…………... B. Materiály, které nejsou dodány…..…. Návod k použití..........…………………….. Výsledky..…………………………………... Kontrola kvality......……………………….. Omezení postupu...............................…... Řešení problémů.......……………………... Zvláštní chování........................................ Bibliografie......……………………………...
3 3 3 3 4 5 5 5 5 6
DEFINICE SYMBOLŮ (Označení výrobku a doplňující dokumentace) Katalogové číslo
Číslo šarže
Před použitím naředit
DIL
Výrobek je citlivý na světlo (Chraňte před světlem)
Jméno pacienta
NAME
Identifikační číslo
Kulička
BEAD
Etnicita
Faktor úpravy pozadí
BAF
Kuličky pro negativní kontrolu
CON
I. třída
Počet kuliček s antigenem
Intenzita fluorescence (medián) Kuličky pro pozitivní kontrolu
Použitelné do
Teplotní rozsah (skladování)
Množství pro N testů
Viz návod k použití
ID#
Datum
DATE
ETHN
Dárce
DONOR
Datum odběru
BDT
PRA
Vyhodnocení
INTRP
MFI
Panel reaktivní protilátky
IgG
Antigen
CLII
Řada
Technik
TECH
AG
Vzorek
SAMPLE
ROW
Sloupec
COL
(Imunoglobulin G)
CLI
II. třída
Očekávané rozsahy
EXPECTED RANGES
Výrobce
Zplnomocněný zástupce
Varování
Strana 1 z 6
LC807IVDCZ.15 (07/16)
ÚČEL POUŽITÍ LIFECODES I. a II. třídy IDv2 jsou imunotesty na bázi kuliček, určené ke kvalitativní detekci panel reaktivních IgG protilátek HLA (PRA).
SOUHRN A VYSVĚTLENÍ Lidské leukocytární antigeny (HLA) představují systém glykoproteinů, které mají funkční roli při uvádění peptidů do imunitního systému.1,2 Jakožto vysoce polymorfní systém se však mohou molekuly HLA stát terčem reakcí protilátek u člověka během těhotenství, při transfúzi krevních produktů, nebo v případě odmítnutí transplantovaného orgánu. Obecně vede aloimunizace k produkci HLA protilátek u přibližně 33 % postižených jedinců.3 Přítomnost nebo nepřítomnost těchto HLA specifických protilátek je důležitá při určování 4 přežití aloimplantátů. Kuličky LIFECODES ID I. třídy jsou určeny k detekci IgG protilátek reagujících na HLA glykoproteiny I. třídy. LIFECODES ID I. třídy se skládá z různých kuliček Luminex, na které jsou navázány afinitně čištěné HLA glykoproteiny I. třídy pocházející od různých jedinců. Kuličky LIFECODES ID II. třídy jsou určeny k detekci IgG protilátek proti HLA glykoproteinům II. třídy. LIFECODES IDv2 II. třídy se skládá z různých kuliček Luminex, na které jsou navázány afinitně čištěné HLA glykoproteiny II. třídy pocházející od různých jedinců.
PRINCIP POSTUPU V malém množství vzorku testovacího séra inkubujeme poměrný podíl kuliček. Senzibilizované kuličky poté opláchneme, abychom odstranili nenavázané protilátky. Následně přidáme anti-lidské IgG protilátky konjugované s fykoerytrinem. Po další inkubaci je vzorek naředěn a analyzován pomocí nástroje Luminex. Intenzita signálu všech kuliček je porovnána s intenzitou signálu kuličky pro negativní kontrolu, která je součástí připravených kuliček a slouží k určení, zda je kulička pozitivní nebo negativní na navázané aloprotilátky.
REAGENCIE A. Identifikace 628200: LM1 LIFECODES ID I. třídy obsahuje pět (5) složek s dostatečným množstvím pro 24 testů. 1. LM1B Kuličky HLA I (120 µl): Směs kuliček s navázanými HLA glykoproteiny I. třídy od různých jedinců, plus čtyři (4) kontrolní 2.
3. 4. 5.
kuličky. Skladovací pufr je fosfátový pufr obsahující NaCl, Tween-20, azid sodný, hovězí sérový albumin a glycerol. VÝROBEK JE CITLIVÝ NA SVĚTLO. Zajistěte, aby byla doba vystavění světlu kratší než 3 hodiny. Uchovávejte na tmavém místě při 2 °C až 8 °C. LMCJ Koncentrát konjugátu (170 µl): Kozí anti-lidské IgG konjugované s fykoerytrinem ve fosfátovém skladovacím pufru s obsahem NaCl, Tween-20, azidu sodného a hovězího sérového albuminu. DIL Před použitím NUTNÉ NAŘEDIT promývacím pufrem v poměru 1:10. VÝROBEK JE CITLIVÝ NA SVĚTLO. Zabraňte delšímu vystavení světlu. Uchovávejte na tmavém místě při 2 °C až 8 °C. LMWB Promývací pufr (30 ml): Fosfátový pufr obsahující NaCl, Tween-20, azid sodný a hovězí sérový albumin. Skladujte při teplotě 2 °C až 8 °C a před použitím nechte ustálit na teplotu 20 °C až 24 °C. LMPC Pozitivní kontrolní sérum (80 µl): Sérum je získáváno z jedinců vykazujících aloimunitu vůči antigenům HLA (>85% PRA). Uchovávejte při teplotě 2 °C až 8 °C. LMNC Negativní kontrolní sérum (80 µl): Sérum je získáváno z jedinců, u nichž byla prokázána NEPŘÍTOMNOST protilátek proti antigenům HLA (<10% PRA). Uchovávejte při teplotě 2 °C až 8 °C.
628223: LM2Q LIFECODES IDv2 II. třídy obsahuje pět (5) složek s dostatečným množstvím pro 24 testů. 1. LM2B Kuličky HLA II (120 µl): Směs kuliček s navázanými HLA glykoproteiny II. třídy od různých jedinců, plus čtyři (4) kontrolní 2.
3. 4. 5.
kuličky. Skladovací pufr je fosfátový pufr obsahující NaCl, Tween-20, ProClin 300 a hovězí sérový albumin. VÝROBEK JE CITLIVÝ NA SVĚTLO. Zajistěte, aby byla doba vystavění světlu kratší než 3 hodiny. Uchovávejte na tmavém místě při 2 °C až 8 °C. LMCJ Koncentrát konjugátu (170 µl): Kozí anti-lidské IgG konjugované s fykoerytrinem ve fosfátovém skladovacím pufru s obsahem NaCl, Tween-20, azidu sodného a hovězího sérového albuminu. DIL Před použitím NUTNÉ NAŘEDIT promývacím pufrem v poměru 1:10. VÝROBEK JE CITLIVÝ NA SVĚTLO. Zabraňte delšímu vystavení světlu. Uchovávejte na tmavém místě při 2 °C až 8 °C. LMWB Promývací pufr (30 ml): Fosfátový pufr obsahující NaCl, Tween-20, azid sodný a hovězí sérový albumin. Skladujte při teplotě 2 °C až 8 °C a před použitím nechte ustálit na teplotu 20 °C až 24 °C. LMPC Pozitivní kontrolní sérum (80 µl): Sérum je získáváno z jedinců vykazujících aloimunitu vůči antigenům HLA (>85% PRA). Uchovávejte při teplotě 2 °C až 8 °C. LMNC Negativní kontrolní sérum (80 µl): Sérum je získáváno z jedinců, u nichž byla prokázána přítomnost protilátek proti antigenům HLA (<10% PRA). Uchovávejte při teplotě 2 °C až 8 °C.
B. Varování a upozornění 1. 2.
Určeno pro diagnostiku in vitro U lidského materiálu použitého k přípravě této sady byla prostřednictvím testovacích metod schválených FDA zjištěna negativita protilátek proti HIV, HCV a HBsAg. Žádná testovací metoda však nemůže jistě potvrdit nepřítomnost infekčních agens. Dodržujte proto při práci s těmito materiály obecná bezpečnostní opatření. 3. Nahrazení komponent tohoto systému jinými komponentami může mít za následek neplatné výsledky. 4. Reagencie obsahují 0,1% azidu sodného (konzervační látka), který může reagovat s olověným a měděným potrubím a dát vznik výbušným azidům kovů. Při vylévání materiálu do odpadu použijte velké množství vody k jeho spláchnutí. 5. Bakteriální kontaminace vzorku nebo přítomnost imunokomplexů a jiných imunoglobulinů mohou mít za následek zvýšený výskyt nespecifických vazeb a tím pádem i neplatný výsledek. 6. Tento produkt zajišťuje detekci protilátek IgG, které mohou, ale nemusí být lymfocytotoxické. 7. Tento produkt není určen k detekci protilátek třídy IgA ani IgM. 8. Výsledky obsahující několik pozitivních DQ kuliček, které nesdílejí DQ beta typy, může znamenat přítomnost DQ alfa specifické protilátky. Údaje zkontrolujte. 9. DQ-specifické protilátky poskytující pozitivní výsledky na kuličkách konjugovaných s homozygotním DQ dárcem, a které nejsou podpořeny pozitivním výsledkem získaným z odpovídajícího heterozygotního DQ dárce, mohou vykazovat slabě reaktivní protilátku. Údaje zkontrolujte. 10. Stanovení % PRA není jediným kritériem pro učinění klinického rozhodnutí o léčbě pacienta. Před provedením transplantace je běžně prováděna konečná křížová zkouška. 11. Tyto produkty jsou určeny k použití s nástrojem Luminex v souladu s doporučením výrobce. 12. Likvidace všech materiálů musí být provedena v souladu s místními nařízeními. Strana 2 z 6
LC807IVDCZ.15 (07/16)
13. Více informací naleznete v Bezpečnostním listu materiálu.
C. Pokyny k uskladnění 1. 2.
Při skladování se řiďte informacemi uvedenými na výrobku. Kuličky a konjugát jsou CITLIVÉ NA SVĚTLO. Zajistěte, aby byla doba vystavění světlu kratší než 3 hodiny.
D. Purifikace a aplikace 1. 2.
Viz „Odběr a příprava vzorku“. Konjugát musí být před použitím naředěn promývacím pufrem v poměru 1:10.
E. Známky nestability 1. 2.
Nepoužívejte komponenty ani kontroly, které jsou zakalené nebo s prošlým datem trvanlivosti. Zlikvidujte všechny nepoužité zředěné pozitivní a negativní kontroly.
POŽADAVKY NA NÁSTROJE Nástroj Luminex a platforma XY (Lifecodes, výrobní číslo 888300, 888302)
ODBĚR A PŘÍPRAVA VZORKU Odběr krevních vzorků musí být proveden bez antikoagulantů pomocí aseptické techniky, a jejich testování musí být provedeno v čerstvém stavu, aby byla šance na získání falešně pozitivních nebo falešně negativních výsledků, způsobených nevhodným skladováním či kontaminací vzorku, minimální. Sérum může být skladováno při teplotě 2 °C až 8 °C maximálně 48 hodin. V případě, že potřebujete uchovat sérum déle než 48 hodin, je třeba jej zmrazit, nebo uchovat při teplotě nižší než -20 °C, -80 °C v případě uskladnění po dobu delší než 2 roky. Laboratoř musí vytvořit a schválit metody skladování séra po dobu delší než 2 roky. Sérum musí být skladováno a přepravováno mimo dosah červených krvinek. Zabraňte opakovanému zmrazování a rozmrazování vzorků séra. Nepoužívejte mikrobiologicky kontaminovaná, hemolyzovaná ani lipemická séra, získané vzorky by mohly podat nejednotné výsledky. Před zahájením testu musí být všechny vzorky promíchány krouživým pohybem a krátce odstředěny (30 vteřin při 10 000 xg), aby byly odstraněny všechny případné hrudky. Během laboratorních testů byly vyhodnoceny následující reagencie, které nijak neovlivňují LIFECODES LifeScreen Deluxe: Remicade (Centocor), Rituxin (Genentech), Zenapax (Roche), Campath (Genzyme) a Gammaguard (Baxter). Naproti tomu bylo prokázáno, že Thymoglobulin (Genzyme) způsobuje falešně pozitivní výsledky. Vzorky s obsahem Thymoglobulinu mohou podávat neplatné výsledky.
POSTUP A. Dodané materiály (více informací viz sekce REAGENCIE) • • • •
Kuličky HLA Koncentrát konjugátu Promývací pufr Pozitivní kontrolní sérum
• • •
Negativní kontrolní sérum Záznamový list List ve formě destičky
B. Materiály, reagencie a požadované materiály, které nejsou součástí soupravy (viz seznam nebo odpovídající produkty) • • • • • • • •
Nastavitelné pipety 5 µl - 50 µl s odpovídajícími špičkami Multikanálové pipety 250 µl s odpovídajícími špičkami Mikrocentrifugační zkumavky 1,5 ml pro zředění konjugátu Testovací zkumavky pro vzorky pacienta a kontrolní vzorky Časový měřič Značkovací pero Přilnavé plastové kryty Nosná kapalina Luminex (1x nebo 20x, Lifecodes, katalog. č. 628005 nebo 628025)
• • • • •
Kalibrační kuličky Luminex (CAL 1, CAL 2, CON 1, CON 2; Lifecodes, katalogová čísla: 628006, 628007, 628008, 628009) Destilovaná voda Třepačka s deskovým adaptérem Filtrační destičky Millipore Multiscreen (Millipore, katalog. č. MSBVN1210, Lifecodes, katalog. č. 888633) Podtlaková odsávačka Multiscreen (Millipore, katalog. č. MAVM 0960R, Qiagen, katalog. č. 19504, Lifecodes, katalog. č. 888315)
NÁVOD K POUŽITÍ VAROVÁNÍ: • Zvláštní pozornost je NUTNÉ věnovat zabránění kontaminace promývacího pufru a reagencie anti-lidského IgG. Náhodná kontaminace těchto reagencií lidským sérem má za následek neutralizaci anti-lidského IgG a neplatný test. • Zvýšenou pozornost je třeba věnovat síle podtlaku. Příliš silný podtlak může způsobit přilepení kuliček k membráně a tím pádem i jejich nesprávný počet. • Během pipetování na filtrační destičku dbejte na to, aby se kuličky nepřilepily na stěny jamek destičky. Kuličky pipetujte do roztoku, který jste předem umístili do jamek, aniž by se špičky dotýkaly membrány. Kontakt membrány se špičkou pipety může mít za následek propíchnutí membrány a tím pádem i neúspěšný test. • Během inkubace je třeba zabránit tomu, aby se kuličky rozstříkly a přilepily na stěny jamek. V případě, že provádíte test poprvé, proveďte několik pozitivních a/nebo negativních kontrol, které vám umožní stanovit optimální rychlost rotační platformy nebo třepačky. Rychlost cca 200 otáček za minutu se prokázala být účinnou při použití s některými nástroji. • Přítomnost významného množství nenavázaných protilátek po dokončení promývání, způsobená příliš velkým množstvím séra nebo nedostatečným promytím, může mít za následek snížení schopnosti detekce IgG navázaných na kuličky a tím pádem i neplatný výsledek. • Každý test by měl být doprovázen vzorkem pozitivní a negativní kontroly, který umožní stanovit případný výskyt technické chyby nebo neúspěšnou reakci. Strana 3 z 6
LC807IVDCZ.15 (07/16)
1.
Ostatní komponenty odložte až do jejich použití na tmavé místo při teplotě 2 °C až 8 °C, promývací pufr nechte před použitím ustálit na pokojovou teplotu (20 °C až 24 °C). Během toho použijte list ve formě destičky a jednotlivým sérům a kontrolám připraveným k rozboru přiřaďte polohu na destičce. Kontrolní séra, která jsou součástí sady, slouží jako ukázka široce reaktivního pozitivního aloséra a negativního séra.
2.
Nevyužité jamky filtrační destičky pokryjte lepícím plastovým krytem. Poté navlhčete jamky, které budou použity, 100-300 µl destilované vody. Po uplynutí 2-5 minut odstraňte vodu lehkým odsáním pomocí podtlakové odsávačky. (Viz návod použití výrobce).
3.
HLA kuličky připravte krátkým (30 vteřin) odstředěním ampulky při 600 - 800 xg, abyste odstranili kuličky a tekutinu z víčka a stěn ampulky. Důkladně protřepejte (~1 minutu), aby se kuličky rovnoměrně rozmístily.
4.
Přidejte 40 µl promývacího pufru do každé testovací jamky filtrační destičky a poté 12,5 µl pacientova séra nebo kontrolního séra a promíchejte.
5.
Do každé přiřazené destičky přidejte 5 µL HLA kuliček. Každé 2 minuty protřepejte ampulku s HLA kuličkami, aby zůstaly kuličky v roztoku během jejich rozdělování.
UPOZORNĚNÍ: Je důležité nechat kuličky rozptýlit, aby beze zbytku obsadily jamky a usnadnily tak výpočty. V případě, že nebudou kuličky průběžně protřepávány, zůstanou na dně zkumavky. To bude mít za následek umístění různých počtů kuliček v jamkách, což může nepříznivě ovlivnit výpočty a rozbor výsledků.
6.
Pokryjte destičku přilnavým plastovým krytem a poté fólií nebo víkem, aby byla chráněna před světlem. Inkubujte po dobu 30 minut při pokojové teplotě (20 °C až 24 °C) na tmavém místě pomocí rotační platformy (200 otáček za minutu). Nevyužité dávky kontrolního séra a kuliček uchovejte pro budoucí použití na tmavém místě při teplotě 2 °C až 8 °C.
7.
Konjugát nařeďte promývacím pufrem a uložte na tmavém místě (5 µl konjugátu na 45 µl promývacího pufru na jeden vzorek). Pro případ ztrát při pipetování doporučujeme vyrobit jeden (1) objem naředěného konjugátu navíc. Pokryjte fólií a/nebo nechte na tmavém místě při pokojové teplotě až do okamžiku použití. Nevyužité dávky koncentrovaného konjugátu uchovejte pro budoucí použití na tmavém místě při teplotě 2 °C až 8 °C.
8.
Po 30 minutách inkubace sejměte plastový kryt a do každé jamky přidejte 100 µl promývacího pufru. Promíchejte poklepáním na stěnu destičky a jemně odsajte.
UPOZORNĚNÍ: Příliš vysoká podtlaková síla způsobí přilepení kuliček k membráně, což může mít za následek neplatný vzorek. Při odsávání vzorku vynakládejte co nejmenší podtlakovou sílu.
9.
Přidejte 250 µl promývacího pufru do každé jamky, odsajte a opakujte ještě dvakrát, aby bylo promývání provedeno celkem třikrát.
UPOZORNĚNÍ: Nedostatečné promytí může mít za následek snížení schopnosti konjugátu detekovat IgG vazby na senzibilizované kuličky a způsobit falešně negativní výsledky.
10. Do každé jamky přidejte 50 µl naředěného konjugátu. Destičku přikryjte fólií nebo víkem, aby byla chráněna před světlem. Umístěte na rotační platformu (nastavit na 200 otáček za minutu) nebo jemně míchejte krouživým pohybem každých 5-10 minut. Inkubujte 30 minut při pokojové teplotě (20 °C až 24 °C). 11. Pomocí čisté pipetovací špičky umístěte do každé jamky 130-150 µl promývacího pufru a promíchejte kuličky, aby se rozptýlily. 12. Pomocí nástroje Luminex proveďte sběr dat v souladu s pokyny výrobce. Po 3 hodinách se zvyšuje šance, že získáte falešně pozitivní nebo falešně negativní výsledky. Nevyužitou dávku promývacího pufru uskladněte pro budoucí použití při teplotě 2 °C až 8 °C.
VÝSLEDKY Aby bylo možné stanovit, zde je kulička pozitivní, je třeba nejprve vydělit medián MFI jednotlivých kuliček mediánem MFI kuliček pro negativní kontrolu (CON1, CON2, CON3). Ze získaných podílů odečtěte faktor nastavení pozadí BAF (Background Adjustment Factor), abyste získali odpovídající kombinaci kulička/CON. BAF je předem stanovený poměr pro jednotlivé kombinace kulička/CON, určený ke kompenzaci ruchu pozadí způsobeného odchylkami kuliček. BAF naleznete na záznamovém listě pro danou sérii, který je součástí sady. Příklad:
MFI kuličky MFI kuličky pro negativní kontrolu 1 (CON1)
- (BAF) = Nastavený poměr 1
MFI kuličky MFI kuličky pro negativní kontrolu 2 (CON2)
- (BAF) = Nastavený poměr 2
MFI kuličky MFI kuličky pro negativní kontrolu 3 (CON3)
- (BAF) = Nastavený poměr 3
Sady pro I. a II. třídu IDv2 používají také čtvrtý výpočet pro negativní kontrolu, „CalcCON“, založený na chování nereagujících kuliček obsahujících antigen. CalcCON stanovíte následovně: CalcCON = MFI kuličky s nejnižší hodnotou antigenu + 20. Čtvrtý výpočet tedy bude:
MFI kuličky CalcCON
- (BAF) = Nastavený poměr 4
Pozitivní hodnota dvou či více výpočtů ze čtyř značí pozitivní reakci kuličky. Negativní hodnota tří či více výpočtů ze čtyř značí negativní reakci kuličky.
Procento PRA (panel reaktivních protilátek) ID sady je vypočítáno následovně: I. třída ID % PRA = Počet pozitivních reakcí kuliček X 100 Počet kuliček použitých během testu (kromě kontrolních kuliček)
II. třída IDv2 % PRA = (Počet pozitivně reagujících kuliček s DR) + (Počet negativně reagujících kuliček s DR obsahujících také antigen DQ, který je pozitivní) X100
Celkový počet kuliček s DR
Strana 4 z 6
LC807IVDCZ.15 (07/16)
KONTROLA KVALITY Kontrola kvality I. třídy ID a II. třídy IDv2 je součástí testovacího systému v podobě séra pro pozitivní a negativní kontrolu. Tyto kontroly by měly být součástí každého testu, aby bylo možno stanovit případný výskyt technické chyby nebo neúspěšnou reakci. V případě sad ID budou séra pro pozitivní kontrolu reagovat s většinou nebo se všemi HLA konjugovanými kuličkami (>85 %), přičemž HLA konjugované kuličky s nejvyšší hodnotou dosáhnou mediánu fluorescenční intenzity 10 000. Sérum pro negativní kontrolu bude negativní (<10 %). Sady kuliček obsahují čtyři kontrolní kuličky určené ke sledování jednotlivých vzorků. Kulička pro pozitivní kontrolu je potažena lidským IgG a měla by dosáhnout hodnot MFI > 10 000 s kontrolním sérem. Pokud získáte hodnoty nižší než 10 000 MFI s kontrolním sérem , může to být způsobeno nedostatečným propláchnutím vzorku nebo slabým konjugátem. Vzorky pacienta vykazují širokou reaktivitu s kuličkou pro pozitivní kontrolu, ale měly by vytvářet signál > 3500 MFI. Kuličky pro negativní kontrolu by zase měly vykazovat nízké hodnoty MFI. Očekávané rozsahy hodnot kuliček pro negativní kontrolu naleznete v záznamovém listě pro danou sérii, který je součástí sady. Údaje mimo očekávaný rozsah je třeba důkladně prověřit. V případě nepřítomnosti séra bude pozitivní kontrola vykazovat silný signál, zatímco ostatní kuličky dosáhnou průměru cca 50 MFI či méně. Pokud vzorek vykazuje velmi slabé hodnoty, je možné, že byl omylem přehlédnut. Tyto vzorky zpracujte znovu. Test by měl být proveden v souladu s pokyny uvedenými v příbalovém letáku a dále v souladu s dalšími postupy kontroly kvality podle místních, státních a federálních požadavků a/nebo požadavků akreditačních úřadů.
OMEZENÍ POSTUPU Chybné výsledky mohou být způsobeny bakteriální kontaminací testovacího materiálu, nedodržením inkubačních dob, nedostatečným promýváním, usazením kuliček, vystavením konjugátu přímému světlu, nepřidáním testovacích reagencií nebo nedodržením jednotlivých kroků. Přítomnost imunokomplexů a jiných imunoglobulinů ve vzorku pacienta může mít za následek zvýšený výskyt nespecifických vazeb a tím pádem i neplatný výsledek testu. Pro sady ID jsou detekované protilátky ty, které reagují v populaci dostupných antigenů uvedených v záznamovém listu. Některé slabé příbuznosti, nižší titry, IgA, IgM a protilátky proti vzácným alelám nebudou v rámci testů LIFECODES ID detekovány. Kuličky fenotypu II. třídy vykazující přítomnost DR a DQ antigeny obsahují DR a z toho důvodu mohou kuličky vykazovat zvýšenou citlivost na protilátky DR. Naproti tomu kuličky DQ II. třídy obsahují DQ a vykazují zvýšenou citlivost na protilátky DQ. Prostřednictvím doposud provedených pokusů nebylo možné prokázat přítomnost DR na kuličkách s DQ pro lepší specifičnost protilátek DQ. Hustota antigenů DR a DQ na dvou příslušných kuličkách (s DR a s DQ) může vysvětlovat reaktivitu kuliček při rozboru séra. Přidání kuliček DQ II. třídy ke zkoušce IDv2 II. třídy pomůže určit přítomnost protilátek DQ v séru s vysokou hodnotou PRA. S ohledem na složitou povahu testování HLA by měla být interpretace dat provedena a ověřena zkušenými pracovníky. Při určení specifičnosti protilátky pomocí sad LIFECODES ID je třeba brát v potaz výsledky všech kuliček, včetně kuliček vykazujících hodnotu rovnou nebo blížící se mezní hodnotě. Povědomí o anamnéze pacienta a porozumění křížení skupin mohou pomoci při stanovení specifičnosti konkrétního séra.
ŘEŠENÍ PROBLÉMŮ PROBLÉM
MOŽNÁ PŘÍČINA Směs kuliček nebyla správně promíchána
Nízký počet kuliček
Překročen kontrolní práh Neplatná mezní hodnota pozitivní kontroly
Špatná funkce nástroje - špatná kalibrace Špatná funkce nástroje - vzorek zablokován Osvícené kuličky Příliš velká síla podtlaku/kuličky se lepí na membránu Nedostatečné promytí Špatná kvalita vzorku Osvícený konjugát Nedostatečné promytí
ŘEŠENÍ Promíchejte krouživým pohybem, aby se kuličky důkladně promísily Viz návod k použití nástroje Viz návod k použití nástroje Použijte novou sadu Snižte sílu podtlaku Opakujte a sledujte mytí Opakovat Použijte novou sadu Opakujte a kontrolujte promývání
ZVLÁŠTNÍ CHOVÁNÍ Jestliže jsou sady LIFECODES ID používány v souladu s uvedenými pokyny, prokáží výsledky přítomnost nebo nepřítomnost HLA protilátek třídy IgG. Při použití mezní hodnoty 10 % PRA vykázala sada ID I. třídy 97,1 % pozitivních výsledků (90,2-99,2 %), 86,4 % negativních výsledků (75,5-93,0 %) a 92,2 % shodu (86,3-95,7 %) na 129 vyhodnocených vzorcích na základě porovnání s výsledky získanými pomocí metod průtokové cytometrie (95% hranice spolehlivosti). Sada ID v2 II. třídy vykázala 99,7 % pozitivních výsledků (98,3-99,9 %), 72,2 % negativních výsledků (66,6-77,1 %) a 87,2 % shodu (84,3-89,6 %) na 600 vzorcích vyhodnocených na základě porovnání s výsledky získanými pomocí LIFECODES ID II. třídy. Hodnoty pro negativní výsledky a shodu jsou odrazem rozšířené detekce DQ-specifických protilátek reagujících s ID v2 II. třídy. Sada ID v2 II. třídy vykázala 100 % shodných výsledků na sedmi vzorcích testovaných šesti operátory na třech různých testovacích místech a 100 % shodných výsledků na sedmi vzorcích testovaných na třech různých sadách jedním operátorem.
Strana 5 z 6
LC807IVDCZ.15 (07/16)
BIBLIOGRAFIE 1. 2.
3. 4.
Klein, J, Sato, A. The HLA System. N. Engl. J. Med. 2000; 343:702 and 343:782. Parham, P. The Immune System. Garland Publishing, N.Y. and London. 2000; 55. nd Rodey, GE. HLA Beyond Tears (2 Edition). DeNovo, Inc. Durango, CO. 2000; 163. McKenna, RM; Takemoto, SK; Terasaki, PI. Anti-HLA Antibodies after Solid Organ Transplantation. Transplantation 2000; 69:319.
VÝROBCE A AUTORIZOVANÝ ZÁSTUPCE Vyrobeno: Pro Immucor Transplant Diagnostics, Inc., 550 West Avenue, Stamford, CT 06902 Spojené státy americké Telefon: 001-203-328-9500, nebo volání bez poplatku ve Spojených státech amerických, Kanadě a Portoriku 888-329-0255; Fax: 001-203-328-9599
Autorizovaný zástupce: Immucor Medizinische Diagnostik GmbH , Adam-Opel-Strasse 26A Rodermark 63322, Germany Phone: (+49) 6074-84 20 -0, Fax: (+49) 6074-84 20-99 Technický servis pro Evropu: +32/3 385 47 91 Vydáno: Rev. 15, 2016-07-22
Strana 6 z 6
LC807IVDCZ.15 (07/16)
