550 West Avenue, Stamford, Connecticut 06902 USA Spojené státy americké Tel: 001 (203) 328-9500 nebo volání bez poplatku ve Spojených státech amerických, Kanadě a Portoriku (888) 329-0255, Fax: 001 (203) 328-9599
WWW.IMMUCOR.COM
Dokumentace a jazykové verze jsou k dispozici na: http://www.Immucor.com
PŘÍBALOVÝ LIFECODES LifeScreen Deluxe (LMX)
LETÁK
je screeningový test Luminex® pro detekci protilátek IgG reagujících s lidskými molekulami HLA I. a II.
třídy.
Te st pro dia gnostiku in vitro. OBSAH Vysvětlivky k symbolům…………………….… 1 Postup........……………………………….…………. Účel použití...…………………………………….. 2 A. Dod a né m a teriá ly.............……………….… Souhrn a vysvětlení.................…………………. 2 B. Ma teriá ly, které nejsou d od á ny…………... Princip postupu......................………………….. 2 Ná vod k použití..........………………………….….. Rea gencie……………………………………….. 2 Kontrola kva lity......………………………………… A. Id entifika c e..............……………………… 2 Výsledky..………………………………………........ B. Va rová ní a up ozornění.............………… 2 Omezení postupu...............................…………… C. Pokyny k uskla d nění.........………………. 2 Řešení problémů.......………………………………. D. Dop oruč ené p oužití…………….……….. 2 Zvlá štní chová ní.................................................... E. Zná m ky nesta b ility...............……………… 2 Bibliogra fie......…………………………………....... Poža da vky na ná stroje............………….…….. 3 Odběr a př ípra va vzorku................................. 3
3 3 3 3 4 4 5 5 5 6
DEFINICE SYMBOLŮ (Ozna čení výrob ku a d op lňujíc í d o kumenta c e) Číslo šarže
Katalogové číslo
Použitelné do
Teplotní rozsah (skladování)
Výrobek je citlivý na světlo
Množství pro N testů
Viz návod k použití
Před použitím naředit
DIL
Jméno pacienta
NAME
Identifikační číslo
ID#
Datum
DATE
Technik
TECH
Kulička
BEAD
Etnicita
ETHN
Dárce
DONOR
Faktor úpravy pozadí
BAF
Intenzita fluorescence (medián)
MFI
Score (viz oddíl Výsledky)
SCORE
Vyhodnocení
INTRP
Kuličky pro negativní kontrolu
CO N
IgG
I. třída
CLI
II. třída
CLII
Vzorek
SAMPLE
BDT
Počet kuliček s antigenem
Kuličky pro pozitivní kontrolu
(Chraňte před světlem)
(Imunoglobulin G)
Datum odběru
Očekávané rozsahy Číslo směsi kuliček
Observed Ranges
Bead Mix Lot #
Kontroly
Controls
Výrobce
Zplnomocněný zástupce
Biologické nebezpečí
Varování! Viz doprovodná dokumentace
Varování
Strana 1 z 6
LC1003IVDCS.14 (05/15)
ÚČEL POUŽITÍ LIFECODES LifeScreen Deluxe je kvalitativní imunotest na bázi kuliček určený k detekci protilátek IgG reagujících na HLA molekuly I. a II. třídy.
SOUHRN A VYSVĚTLENÍ Lidské leukocytární antigeny (HLA) představují systém glykoproteinů, které mají funkční roli při uvádění peptidů do imunitního systému.1,2 Jakožto vysoce polymorfní systém se však mohou molekuly HLA stát terčem reakcí protilátek u člověka během těhotenství, při transfúzi krevních produktů, nebo v případě odmítnutí transplantovaného orgánu. Obecně vede aloimunizace k produkci HLA 3 protilátek u přibližně 33 % postižených jedinců. Přítomnost nebo nepřítomnost těchto HLA specifických protilátek je důležitá při určování 4 přežití aloimplantátů. Kuličky LIFECODES LifeScreen Deluxe slouží k detekci protilátek IgG reagujících na antigeny HLA I. a II. třídy. LifeScreen Deluxe obsahuje speciální kuličky Luminex, na něž jsou navázány afinitně čištěné HLA glykoproteiny I. a II. třídy.
PRINCIP POSTUPU V malém množství vzorku testovacího séra inkubujeme poměrný podíl kuliček. Senzibilizované kuličky poté opláchneme, abychom odstranili nenavázané protilátky. Následně přidáme anti-lidské IgG protilátky konjugované s fykoerytrinem. Po další inkubaci je testovací vzorek naředěn a analyzován pomocí nástroje Luminex. Intenzita signálu jednotlivých kuliček je porovnána s intenzitou signálu kuliček pro negativní kontrolu, které jsou součástí připravených kuliček a slouží k určení, zda je kulička pozitivní nebo negativní na navázanou aloprotilátku.
REAGENCIE A. Identifikace 628215: LMX LIFECODES LifeScreen Deluxe obsahuje pět (5) složek. Následující produkty jsou dodávány v množství dostatečném pro 96 testů. 1. LMXB Kuličky LifeScreen Deluxe (480 µl): Směs kuliček konjugovaných s glykoproteiny HLA I. nebo II. třídy plus čtyři (4)
2.
3.
kontrolní kuličky. Skladovací pufr je fosfátový pufr obsahující NaCl, Tween-20, ProClin300 a hovězí sérový albumin. VÝROBEK JE CITLIVÝ NA SVĚTLO. Zajistěte, aby byla doba vystavění světlu kratší než 3 hodiny. Připraveno k použití. Uchovávejte na tmavém místě při 2 °C až 8 °C. MCJS Koncentrát konjugátu (550 µl): 10 dávek kozích anti-lidských IgG konjugovaných s fykoerytrinem ve fosfátovém skladovacím pufru s obsahem NaCl, Tween-20, azidu sodného a hovězího sérového albuminu. DIL Před použitím NUTNÉ NAŘEDIT promývacím pufrem v poměru 1:10. VÝROBEK JE CITLIVÝ NA SVĚTLO. Zajistěte, aby byla doba vystavění světlu kratší než 3 hodiny. Uchovávejte na tmavém místě při 2 °C až 8 °C. LMWB Promývací pufr (150 ml): Fosfátový pufr obsahující NaCl, Tween-20, azid sodný a hovězí sérový albumin. Připraveno k použití. Skladujte při teplotě 2 °C až 8 °C a před použitím nechte ustálit na pokojovou teplotu 20 °C až 24 °C.
Následující produkty jsou dodávány v množství dostatečném pro šest (6) rozborů. 4. LMPC Pozitivní kontrolní sérum (80 µl): Sérum je získáváno z jedinců vykazujících aloimunitu vůči antigenům HLA. Obsahuje 5.
azid sodný. Připraveno k použití. Uchovávejte při teplotě 2 °C až 8 °C. LMNC Negativní kontrolní sérum (80 µl): Sérum je získáváno z jedinců, u nichž byla prokázána NEPŘÍTOMNOST protilátek proti antigenům HLA. Obsahuje azid sodný. Připraveno k použití. Uchovávejte při teplotě 2 °C až 8 °C.
B. VAROVÁNÍ A UPOZORNĚNÍ Určeno pro diagnostiku in vitro U lidského materiálu použitého k přípravě této sady byla prostřednictvím testovacích metod schválených FDA zjištěna negativita protilátek proti HIV, HCV a HBsAg. Žádná testovací metoda však nemůže jistě potvrdit nepřítomnost infekčních agens. Dodržujte proto při práci s těmito materiály obecná bezpečnostní opatření. 3. Nahrazení komponent tohoto systému jinými komponentami může mít za následek neplatné výsledky. 4. Reagencie obsahují 0,1 % azidu sodného (konzervační látka), který může reagovat s olověným a měděným potrubím a dát vznik výbušným azidům kovů. Při vylévání materiálu do odpadu použijte velké množství vody k jeho spláchnutí. 5. Bakteriální kontaminace vzorku nebo přítomnost imunokomplexů a jiných imunoglobulinů mohou mít za následek zvýšený výskyt nespecifických vazeb a tím pádem i neplatný výsledek. 6. Tento produkt zajišťuje detekci protilátek IgG, které mohou, ale nemusí být lymfocytotoxické. 7. Tento produkt není určen k detekci protilátek třídy IgA ani IgM. 8. Tyto produkty jsou určeny k použití s nástrojem Luminex v souladu s doporučením výrobce. 9. Likvidace všech materiálů musí být provedena v souladu s místními nařízeními. 10. Více informací naleznete v Bezpečnostním listu materiálu. 1. 2.
C. Pokyny k uskladnění 1. 2.
Při skladování se řiďte informacemi uvedenými na výrobku. Kuličky LifeScreen Deluxe a koncentrát konjugátu jsou CITLIVÉ NA SVĚTLO. Zajistěte, aby byla doba vystavění světlu kratší než 3 hodiny.
D. Doporučené použití 1.
2.
LMCJS Koncentrát konjugátu: DIL Před použitím NUTNÉ NAŘEDIT promývacím pufrem v poměru 1 dávka na 9 dávek pufru. Pro každou testovací jamku připravte naředěný konjugát přidáním 5 μl LMCJS do 45 μl promývacího pufru. Pokryjte fólií a/nebo uložte až do použití na tmavé místo při pokojové teplotě (20 °C až 23 °C). Nevyužité dávky LMCJS uložte pro budoucí použití na tmavé místo při teplotě 2 °C až 8 °C. LMWB Promývací pufr: Před použitím nechte ustálit na pokojovou teplotu 20 °C až 24 °C.
E. Známky nestability 1. 2.
Nepoužívejte komponenty ani kontroly, které jsou zakalené nebo s prošlým datem trvanlivosti. Zlikvidujte všechny nepoužité zředěné pozitivní a negativní kontroly a konjugáty. Strana 2 z 6
LC1003IVDCS.14 (05/15)
POŽADAVKY NA NÁSTROJE Nástroj Luminex a platforma XY (Lifecodes, výrobní číslo 888300)
ODBĚR A PŘÍPRAVA VZORKU Odběr krevních vzorků musí být proveden bez antikoagulantů pomocí aseptické techniky, a jejich testování musí být provedeno v čerstvém stavu, aby byla šance na získání falešně pozitivních nebo falešně negativních výsledků, způsobených nevhodným skladováním či kontaminací vzorku, minimální. Sérum může být skladováno při teplotě 2 °C až 8 °C maximálně 48 hodin. V případě, že potřebujete uchovat sérum déle než 48 hodin, je třeba jej zmrazit, nebo uchovat při teplotě nižší než -20 °C, -80 °C v případě uskladnění po dobu delší než 2 roky. Laboratoř musí vytvořit a schválit metody skladování séra po dobu delší než 2 roky. Sérum musí být skladováno a přepravováno mimo dosah červených krvinek. Zabraňte opakovanému zmrazování a rozmrazování vzorků séra. Nepoužívejte mikrobiologicky kontaminovaná, hemolyzovaná ani lipemická séra, získané vzorky by mohly podat nejednotné výsledky. Před zahájením testu je třeba všechny vzorky krátce protřepat (30 vteřin) a odstředit (4-5 minut při 8 000-12 000 rcf), aby se z případných částeček vytvořily kuličky.
POSTUP A. Dodané materiály (více informací viz stránka s REAGENCIE, str. 2) • • • •
Kuličky HLA Koncentrát konjugátu Promývací pufr Pozitivní kontrolní sérum
• • •
Negativní kontrolní sérum Záznamový list List ve formě destičky
B. Materiály, reagencie a požadované materiály, které nejsou součástí soupravy (viz seznam nebo odpovídající produkty) •
Nastavitelné pipety 5 µl - 50 µl s odpovídajícími špičkami
•
Multikanálové pipety 250 µl s odpovídajícími špičkami
•
Mikrocentrifugační zkumavky 1,5 - 2 ml
•
Testovací zkumavky pro vzorky pacienta a kontrolní vzorky
•
Časový měřič
•
Značkovací pero
•
Destilovaná voda
•
Třepačka s deskovým adaptérem
•
Filtrační destičky Millipore Multiscreen (katalog. č. MSBVN1210, Lifecodes, katalog. č. 888633)
•
Lepící těsnění pro destičku (Lifecodes, č. 888631)
•
Podtlaková odsávačka Multiscreen (Millipore, katalog. č. MAVM 0960R nebo Qiagen, katalog. č. 19504, Lifecodes, katalog. č. 888315) Nosná kapalina Luminex (1x nebo 20x, Lifecodes, č. 628005 nebo 628025) Kalibrační kuličky Luminex (CAL 1, CAL 2, CON 1, CON 2; Lifecodes 628006, 628007, 628008, 628009)
• • •
Mikrocetrifuga
NÁVOD K POUŽITÍ VAROVÁNÍ: • Zvláštní pozornost je NUTNÉ věnovat zabránění kontaminace promývacího pufru a reagencie koncentrátu konjugátu (antilidský IgG). Náhodná kontaminace těchto reagencií lidským sérem má za následek neutralizaci anti-lidského IgG a neúspěšný test. • Zvýšenou pozornost je třeba věnovat síle podtlaku. Příliš silný podtlak může způsobit přilepení kuliček k membráně a tím pádem i jejich nesprávný počet. • Zvýšené opatrnosti je třeba dbát během pipetování do filtrační destičky. Dejte pozor, aby se špička pipety nedotkla membrány. Kontakt membrány se špičkou pipety může mít za následek propíchnutí membrány a tím pádem i neúspěšný test. • Během inkubace je třeba zabránit tomu, aby se kuličky rozstříkly a přilepily na stěny jamek. V případě, že provádíte test poprvé, proveďte několik pozitivních a/nebo negativních kontrol, které vám umožní stanovit optimální rychlost rotační platformy nebo třepačky. Rychlost cca 200 otáček za minutu se prokázala být účinnou při použití s některými nástroji. • Přítomnost významného množství nenavázaných protilátek způsobená příliš velkým množstvím séra nebo nedostatečným promytím, může mít za následek snížení schopnosti detekce IgG navázaných na kuličky a tím pádem i neplatný výsledek. • Každý test by měl být doprovázen vzorkem pozitivní a negativní kontroly, který umožní stanovit případný výskyt technické chyby nebo neúspěšnou reakci. • Nemíchejte komponenty z různých sad.
Testova cí postup: 1.
Ostatní komponenty odložte až do jejich použití na tmavé místo při teplotě 2 °C až 8 °C, promývací pufr nechte před použitím ustálit na pokojovou teplotu (20 °C až 24 °C). Během toho použijte list ve formě destičky a jednotlivým sérům a kontrolám připraveným k rozboru přiřaďte polohu na destičce. Kontrolní séra, která jsou součástí sady, slouží jako ukázka široce reaktivního pozitivního aloséra a negativního séra.
2.
Nevyužité jamky filtrační destičky pokryjte lepícím plastovým krytem. Poté navlhčete jamky, které budou použity, 100-300 µl destilované vody. Po uplynutí 2-5 minut odstraňte vodu lehkým odsáním pomocí podtlakové odsávačky. (Viz návod použití výrobce)
3.
HLA kuličky připravte krátkým (30 vteřin) odstředěním ampulky při 600 - 800 xg, abyste odstranili kuličky a tekutinu z víčka a stěn ampulky. Důkladně protřepejte (~1 minutu), aby se kuličky rovnoměrně rozmístily.
4.
Přidejte 40 µl promývacího pufru do každé testovací jamky filtrační destičky a poté 12,5 µl pacientova séra nebo kontrolního séra a promíchejte. Strana 3 z 6
LC1003IVDCS.14 (05/15)
5.
Do každé přiřazené destičky přidejte 5 µL HLA kuliček. Každé 2 minuty protřepejte ampulku s HLA kuličkami, aby zůstaly kuličky v roztoku během jejich rozdělování. UPOZORNĚNÍ: Je důležité nechat kuličky rozptýlit, aby beze zbytku obsadily jamky a usnadnily tak výpočty. V případě, že nebudou kuličky průběžně protřepávány, zůstanou na dně zkumavky. To bude mít za následek umístění různých počtů kuliček v jamkách, což může nepříznivě ovlivnit výpočty a rozbor výsledků.
6. 7.
8.
Pokryjte destičku přilnavým plastovým krytem a poté fólií nebo víkem, aby byla chráněna před světlem. Inkubujte po dobu 30 minut při pokojové teplotě (20 °C až 24 °C) na tmavém místě pomocí rotační platformy (200 otáček za minutu). Nevyužité dávky kontrolního séra a kuliček uchovejte pro budoucí použití na tmavém místě při teplotě 2 °C až 8 °C. Konjugát nařeďte promývacím pufrem a uložte na tmavém místě (5 µl konjugátu na 45 µl promývacího pufru na jeden vzorek). Pro případ ztrát při pipetování doporučujeme vyrobit jeden (1) objem naředěného konjugátu navíc. Pokryjte fólií a/nebo nechte na tmavém místě při pokojové teplotě až do okamžiku použití. Nevyužité dávky koncentrovaného konjugátu uchovejte pro budoucí použití na tmavém místě při teplotě 2 °C až 8 °C. Po 30 minutách inkubace sejměte plastový kryt a do každé jamky přidejte 100 µl promývacího pufru. Promíchejte poklepáním na stěnu destičky a jemně odsajte. UPOZORNĚNÍ: Příliš vysoká podtlaková síla způsobí přilepení kuliček k membráně, což může mít za následek neplatný vzorek. Při odsávání vzorku vynakládejte co nejmenší podtlakovou sílu.
9.
Přidejte 250 µl promývacího pufru do každé jamky, odsajte a opakujte ještě dvakrát, aby bylo promývání provedeno celkem třikrát. UPOZORNĚNÍ: Nedostatečné promytí může mít za následek snížení schopnosti konjugátu detekovat IgG vazby na senzibilizované kuličky a způsobit falešně negativní výsledky.
10. Do každé jamky přidejte 50 µl naředěného konjugátu. Destičku přikryjte fólií nebo víkem, aby byla chráněna před světlem. Umístěte na rotační platformu (nastavit na 200 otáček za minutu) nebo jemně míchejte krouživým pohybem každých 5-10 minut. Inkubujte 30 minut při pokojové teplotě (20 °C až 24 °C). 11. Pomocí čisté pipetovací špičky umístěte do každé jamky 150 µl promývacího pufru a promíchejte kuličky, aby se rozptýlily. 12. Pomocí nástroje Luminex proveďte sběr dat v souladu s pokyny výrobce. Po 3 hodinách se zvyšuje šance, že získáte falešně pozitivní nebo falešně negativní výsledky. Nevyužitou dávku promývacího pufru uskladněte pro budoucí použití při teplotě 2 °C až 8 °C.
KONTROLA KVALITY Kontrola kvality LMX je součástí testovací sady ve formě čtyř kontrolních kuliček (jedné kuličky pro pozitivní kontrolu a tří kuliček pro negativní kontrolu). Kuličky pro negativní kontrolu (CON) měří pozadí testu a slouží k normalizování signálu HLA kuliček. Tyto kuličky by měly vykazovat nízké hodnoty MFI. Očekávané rozsahy hodnot kuliček pro negativní kontrolu naleznete v příslušném záznamovém listě. Údaje mimo očekávaný rozsah je třeba důkladně prověřit. Kulička pro pozitivní kontrolu (Probe 77) je pokryta lidským IgG a musí vykazovat hodnoty MFI ≥10,000 při testu s pozitivním kontrolním sérem či negativním kontrolním sérem. Pokud budou při kontrole získány hodnoty <10,000 MFI, může to být způsobeno nedostatečným propláchnutím vzorku nebo špatným konjugátem. Vzorky pacienta mohou vykazovat širokou reaktivitu s kuličkou pozitivní kontroly (Probe 77), musejí však vykazovat signál ≥ 3500 MFI. V případě nepřítomnosti séra bude Probe 77 vykazovat silný signál, zatímco ostatní kuličky dosáhnout průměru cca 50 MFI či méně. Pokud vzorek vykazuje podobné hodnoty, je možné, že byl omylem přehlédnut. Takové vzorky je nutné znovu zpracovat. Pozitivní a negativní kontrolní séra jsou dodávána s jednotlivými sadami jako externí kontrola a musejí být použita při každém testu. Pozitivní kontrolní sérum musí vykazovat pozitivní výsledek pro Probe I-01 a Probe II-01. Negativní kontrolní sérum musí vykazovat negativní výsledek pro všechny kuličky. Test by měl být proveden v souladu s pokyny uvedenými v příbalovém letáku a dále v souladu s dalšími postupy kontroly kvality podle místních, státních a federálních požadavků a/nebo požadavků akreditačních úřadů.
VÝSLEDKY Aby mohlo být stanoveno, zda je testovaný vzorek pozitivní na HLA specifické protilátky I. nebo II. třídy, musejí být jednotlivé kuličky nejprve vyhodnoceny a získán závěr, zda jsou pozitivní nebo negativní na IgG protilátky. Aby bylo možné stanovit, zde je kulička pozitivní, je třeba nejprve vydělit medián MFI jednotlivých kuliček mediánem MFI kuliček pro negativní kontrolu (CON1, CON2, CON3). Ze získaných podílů odečtěte faktor nastavení pozadí BAF (Background Adjustment Factor), abyste získali odpovídající kombinaci kulička/CON. BAF je předem stanovený poměr MFI pro jednotlivé kombinace kulička/CON, určený ke kompenzaci ruchu pozadí způsobeného odchylkami kuliček. BAF naleznete na záznamovém listě pro danou sérii, který je součástí sady. Příklad:
MFI kuličky MFI kuličky pro negativní kontrolu 1 (CON1)
- (BAF) = Nastavený poměr 1
MFI kuličky MFI kuličky pro negativní kontrolu 2 (CON2)
- (BAF) = Nastavený poměr 2
Strana 4 z 6
LC1003IVDCS.14 (05/15)
MFI kuličky MFI kuličky pro negativní kontrolu 3 (CON3)
- (BAF) = Nastavený poměr 3
V případě PROBE I-01 a PROBE II-01 značí pozitivní hodnota kteréhokoliv z výpočtů pozitivní reakci kuličky. V případě všech ostatních kuliček značí pozitivní hodnota libovolných dvou výpočtů pozitivní reakci kuličky. Negativní hodnota všech tří výpočtů značí negativní reakci kuličky.
Vyhodnocení testovaného vzorku Vzorek je hodnocen jako pozitivní na HLA-specifické protilátky I. třídy, pokud je alespoň jedna ze sedmi (7) HLA kuliček I. třídy pozitivní. Vzorek je hodnocen jako pozitivní na HLA-specifické protilátky II. třídy, pokud je alespoň jedna z pěti (5) HLA kuliček II. třídy pozitivní. Vzorek je hodnocen jako negativní na HLA-specifické protilátky IgG, pokud jsou všechny kuličky HLA vyhodnoceny jako negativní.
OMEZENÍ POSTUPU Výsledky tohoto testu nemohou být použity jako jediný základ pro učinění klinického závěru. Chybné výsledky mohou být způsobeny bakteriální kontaminací testovacího materiálu, nedodržením inkubačních dob, nedostatečným promýváním, vystavením konjugátu přímému světlu, nepřidáním testovacích reagencií nebo nedodržením jednotlivých kroků. Přítomnost imunokomplexů a jiných imunoglobulinů ve vzorku pacienta může mít za následek zvýšený výskyt nespecifických vazeb a tím pádem i chybný výsledek testu. Tento produkt zajišťuje detekci protilátek IgG, které mohou, ale nemusí být lymfocytotoxické. Detekované protilátky jsou ty, které reagují v populaci dostupných antigenů uvedených v záznamovém listě pro danou sérii. LifeScreen Deluxe obsahuje kuličky Luminex, s kterými konjugují afinitně čištěné HLA glykoproteiny I. a II. třídy. V případě PROBE I-01 jsou afinitně čištěné HLA glykoproteiny I. třídy získávány z destiček 100 dárců krve kavkazské rasy, 100 afro-američanů a 100 hispánců. HLA afinitně čištěné glykoproteiny I. třídy z EBV-transformovaných B lymfocytů připojených k PROBE I-02 prostřednictvím I-07, jsou uvedeny v záznamovém listu konkrétní sady. V případě PROBE II-01 jsou afinitně čištěné HLA glykoproteiny II. třídy, používané při výrobě tohoto produktu, odvozeny z EBV transformovaných B lymfocytů představujících následující HLA antigeny II. třídy: DR1, DR4, DR7, DR8, DR9, DR10, DR11, DR12, DR13, DR14, DR15, DR16, DR17, DR18, DR103, DR51, DR52 a DR53. HLA afinitně čištěné glykoproteiny II. třídy z EBV-transformovaných B lymfocytů připojených k PROBE II-02 prostřednictvím II-05, jsou uvedeny v záznamovém listu konkrétní sady. Některé slabé příbuznosti, nižší titry, IgA, IgM a protilátky proti vzácným alelám nebudou v rámci testů LIFECODES LifeScreen Deluxe detekovány. S ohledem na složitou povahu testování HLA by měla být interpretace dat provedena a ověřena zkušenými pracovníky. Při určení specifičnosti protilátky pomocí kitů LIFECODES LifeScreen Deluxe je třeba brát v potaz výsledky všech kuliček, včetně kuliček vykazujících hodnotu rovnou nebo blížící se mezní hodnotě. Povědomí o anamnéze pacienta a porozumění křížení skupin mohou pomoci při stanovení reaktivity protilátek na konkrétní sérum.
ŘEŠENÍ PROBLÉMŮ PROBLÉM Nízký počet kuliček
Překročen kontrolní práh
Neplatná mezní hodnota pozitivní kontroly
MOŽNÁ PŘÍČINA Směs kuliček nebyla správně promíchána Špatná funkce nástroje - špatná kalibrace Špatná funkce nástroje - vzorek zablokován Osvícené kuličky Příliš velká síla podtlaku/kuličky se lepí na membránu Nedostatečné promytí Špatná kvalita vzorku Osvícený konjugát Nedostatečné promytí
ŘEŠENÍ Promíchejte krouživým pohybem, aby se kuličky důkladně promísily Viz návod použití nástroje Viz návod použití nástroje Použijte nový kit Snižte sílu podtlaku Opakujte a kontrolujte promývání Opakovat Použijte nový kit Opakujte a kontrolujte promývání
ZVLÁŠTNÍ CHOVÁNÍ Jestliže jsou sady LIFECODES LifeScreen Deluxe používány v souladu s uvedenými pokyny, prokáží výsledky přítomnost nebo nepřítomnost HLA protilátek třídy IgG. Během detekce HLA-specifických protilátek prokázaly kity LifeScreen Deluxe 100% pozitivních (97,6-100 %), 91 % negativních (87,3-94,1 %) a 95 % shodných výsledků na 417 vzorků séra vyhodnocených na základě porovnání výsledků získaných pomocí metody LifeScreen (95% hranice spolehlivosti). Během detekce HLA-specifických protilátek prokázaly sady LifeScreen Deluxe 100% pozitivních (97,8-100 %), 93 % negativních (89,5-95,8 %) a 96 % shodných výsledků na 424 vzorků séra vyhodnocených na základě porovnání výsledků získaných pomocí metody LifeScreen (95% hranice spolehlivosti). Během laboratorních testů byly vyhodnoceny následující reagencie, které nijak neovlivňují LIFECODES LifeScreen Deluxe: Remicade (Centocor), Rituxin (Genentech), Zenapax (Roche), Campath (Genzyme) a Gammaguard (Baxter). Naproti tomu bylo prokázáno, že Thymoglobulin (Genzyme) způsobuje falešně pozitivní výsledky. Vzorky s obsahem Thymoglobulin mohou podávat chybné výsledky.
Strana 5 z 6
LC1003IVDCS.14 (05/15)
BIBLIOGRAFIE 1. 2.
Klein, J, Sato, A. The HLA System. N. Engl. J. Med. 2000; 343:702 and 343:782. Parham, P. The Immune System. Garland Publishing, N.Y. and London. 2000; 55.
3. 4.
nd
Rodey, GE. HLA Beyond Tears (2 Edition). DeNovo, Inc. Durango, CO. 2000; 163. McKenna, RM; Takemoto, SK; Terasaki, PI. Anti-HLA Antibodies after Solid Organ Transplantation. Transplantation 2000; 69:319.
VÝROBCE A AUTORIZOVANÝ ZÁSTUPCE Výrobce: Pro Immucor Transplant Diagnostics, Inc., 550 West Avenue, Stamford, CT 06902 USA Spojené státy americké Telefon: 001-203-328-9500, nebo volání bez poplatku ve Spojených státech amerických, Kanadě a Portoriku 888-329-0255; Fax: 001-203-328-9599
Autorizovaný zástupce: Immucor Medizinische Diagnostik GmbH , Adam-Opel-Strasse 26A Rodermark 63322, Germany Phone: (+49) 6074-84 20 -0, Fax: (+49) 6074-84 20-99 Technický servis pro Evropu: +32/3 385 47 91 Vydáno: Rev. 14, 2015-05-15
Strana 6 z 6
LC1003IVDCS.14 (05/15)
