Lampiran 1 Sertifikat Kelaikan Etik

Lampiran 1

Sertifikat Kelaikan Etik

Universitas Sumatera Utara

Lampiran 2.1

Surat Izin Melakukan Penelitian Pendahuluan


Lampiran 2.2

Surat Izin Melakukan Penelitian Pendahuluan


Lampiran 3.1

Surat Izin Melakukan Penelitian


Lampiran 3.2



Lampiran 3.3



Lampiran 4.1

Sertifikat Pengujian


Lampiran 4.2

Perhitungan Kadar Curcumin dalam Sampel vs Curcumin dalam Standar dan Perhitungan Kadar Curcuminoid dalam Sampel vs Curcuminoid dalam Standar


Lampiran 4.3

Hasil Pemeriksaan KLT




Lampiran 5.1

Laporan Hasil Pengujian/Standarisasi Alat Stresor Bising




Lampiran 5.2

Spesifikasi Alat Stresor Bising



Lampiran 6 Konversi

Perhitungan

Dosis

pada

Hewan

Coba

(Laurence & Bacharach, 1964)

Mencit

Mencit

Tikus

20 g

200 g

Marmot Kelinci Kucing Kera Anjing Manusia 400 g

1.5 kg

2 kg

4 kg

12 kg

70 kg

1.0

7.0

12.25

27.8

29.7

64.1

124.2

387.9

0.14

1.0

1.74

3.9

4.2

9.2

17.8

56.0

0.08

0.57

1.0

2.25

2.4

5.2

10.2

31.5

0.04

0.25

0.44

1.0

1.08

2.4

4.5

14.2

0.03

0.23

0.41

0.92

1.0

2.2

4.1

13.0

0.016

0.11

0.19

0.42

0.45

1.0

1.9

6.1

0.008

0.06

0.10

0.22

0.24

0.52

1.0

3.1

Manusia 0.0026

0.018

0.031

0.07

0.076

0.16

0.32

1.0

20 g Tikus 200 g Marmut 400 g Kelinci 1.5 kg Kucing 2 kg Kera 4 kg Anjing 12 kg

70 kg


Lampiran 7 Volume Maksimum Larutan Sediaan Uji yang Dapat Diberikan pada Hewan Coba (Ritchel, 1974)

Jenis Hewan Coba Volume Maksimum (ml) Sesuai Jalur Pemberian i.v

i.m

i.p

s.c

p.o

Mencit (20-30 g)

0,5

0,05

1,0

0,5-1,0

1,0

Tikus (200 g)

1,0

0,1

2-5

2-5

5,0

Hamster (50 g)

-

0,1

1-2

2,5

2,5

Marmut (300 g)

-

0,25

2-5

5.0

10,0

Kelinci (2.5 kg)

5-10

0.5

10-20

5-10

20,0

Kucing (3 kg)

5-10

1,0

10-20

5-10

50,0

Anjing (5 kg)

10-20

5,0

20-50

10,0

100,0


Lampiran 8

Kelompok Perlakuan pada Hewan Coba

Mulai

Kelompok 1

Kelompok 2

Kelompok 3

Kelompok 4

Kelompok 5

29/10/2012

CMC (+)

Bising (+)

Bising (+)

Bising (+)

Curcuminoid (+)

CMC (+)

Curcuminoid (+)

Curcuminoid (+)

CMC (+)

CMC (+)

CMC (+)

Terminasi 1 12/11/2012

†

†

†

Mulai 12/11/2012

Mulai 12/11/2012

Tikus tidak diberi perlakuan apapun

Bising (+) Curcuminoid (+) CMC (+)

Terminasi 2 26/11/2012

CATATAN - Bising yang diberikan: 100 dB selama 2 jam perhari - Curcuminoid diberikan: 50 mg/ekor perhari 100 mg/ekor perhari

†

†

- CMC yang diberikan (0.5%) = 0.5 gr/100cc larutan - Setiap kelompok perlakuan diberikan bising terlebih dahulu lalu diikuti pemberian curcuminoid


Lampiran 9.1

Skema Pembuatan Preparat dengan Metode Parafin

Deparafinisasi: 2-3 kali direndam dengan xylol 3 menit: 2-3 kali direndam dalam alkohol absolut dua kali selama 3 menit

2-3 kali direndam dalam alkohol 95% dua kali selama 3 menit



Direndam dalam air

Dikeringkan dengan tissue, diberi tanda dengan pena parafin

Direndam dalam PBS selama 5 menit

Diteteskan tripsin 0.025% selama 6 menit dalam 37oC

Dicuci dengan PBS 2-3 menit

Diteteskan H2O2 selama 2 menit, dicuci dengan PBS 3 kali 2-3 menit

Pemotongan dengan mikrotom, kemudian obyek diberi poliolesin


Lampiran 9.2

Pewarnaan Imunohistokimia

Deparafinisasi: direndam dengan xylol 3 kali; direndam dalam alkohol

Direndam dalam alkohol 95% tiga kali Direndam dalam alkohol 80% tiga kali Direndam dalam alkohol 70% tiga kali

Preparat dicuci 2 kali dengan PBS Dilakukan bloking dengan BSA 3% selama 10 menit Preparat direaksikan dengan anti mouse sesuai variabel Diinkubasi selama 24 jam pada suhu 4oC dalam humidity chamber Preparat direaksikan dengan biotylized secondary Ab (anti rabbit) selama 1 jam Preparat dicuci dengan PBS 3 kali masing-masing 5 menit Ditambahkan streptavidin berlabel peroksidase dan diinkubasi selama 1 jam, kemudian dicuci dengan PBS 3 kali Direaksikan dengan substrat DAB yang dibuat baru dan diinkubasi 30 menit pada suhu kamar sambil digoyang-goyang Preparat dicuci akuades, kemudian ditambahkan pewarna meyer-HE selama 10 menit Dicuci dengan air kran, kemudian dengan akuades Preparat diangin-anginkan, kemudian dengan akuades Preparat diangin-anginkan, kemudian diteteskan entelan dan ditutup cover glass Lampiran 9.3 Skema Cara Penghitungan Sel


Hewan coba diambil sampel jaringan, difiksasi dengan 10% formalin

Sampel jaringan dibuat sediaan irisan setebal 2-4 µm, kemudian dilakukan pewarnaan

Semua slide yang sudah berkode, ditutup nomer kodenya dan diberi nomor baru secara acak

Pemeriksa terdiri dari 3 orang dan dilakukan terpisah

Pemeriksaan dan penghitungan sel-sel dilakukan terhadap masing-masing slide pada bidang pandang di dinding lateral sediaan, yaitu daerah yang ditandai dengan adanya makrofag, dengan pembesaran 400, 1 lapangan pandang menggunakan gratikuli

Hasil penghitungan sel-sel untuk setiap lapangan pandang sesuai dengan slide yang diperiksa ditulis di lembar kerja pada kotak yang sesuai dan hasil akhirnya dijumlah pada kotak kanan bawah


Lampiran 10.1

Gambar Alat Stresor Bising

B

A

D

C Keterangan:

A. Kotak perlakuan terbuat dari gabus dilapis oleh busa, speaker diletakkan menempel pada atap penutup kotak dan pada dasar kotak dibuat lubang untuk mengukur intensitas B. CD Player dan Amplifier untuk mengatur intensitas (dB) sesuai tombol volume dan dipastikan suara yang dihasilkan yang diukur dengan sound level meter C. Kotak perlakuan, CD Player dan Amplifier D. Sound level meter digital


Lampiran 10.2

Gambar Prosedur Penelitian

A B

C

D

Keterangan: A. B. C. D.

Penimbangan berat badan tikus sebelum dan sesudah perlakuan Kandang tempat pemeliharaan tikus Curcuminoid yang sudah disuspensikan dengan CMC 0.5% Pemberian larutan curcuminoid pada tikus personde


A

B

C

D

Keterangan: A. B. C. D.

Tikus yang sedang berada dalam kandang perlakuan Proses pengambilan tulang Temporal tikus Tulang Temporal tikus Tulang Temporal tikus dalam buffer Formalin 10%


Lampiran 11

Data Sampel Penelitian

No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40

Kel. 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 3a 3a 3a 3a 3a 3b 3b 3b 3b 3b 4a 4a 4a 4a 4a 4b 4b 4b 4b 4b 5a 5a 5a 5a 5a 5b 5b 5b 5b 5b

HSP-70 MMP-9 3 0 2 2 3 3 2 3 4 0 18 23 21 20 23 21 19 18 15 17 13 18 12 16 10 19 9 20 8 21 11 10 13 9 14 8 13 9 10 8 3 11 4 13 6 10 3 13 6 9 1 6 1 8 2 8 1 8 1 6 6 11 8 12 6 8 7 8 6 8 2 3 4 2 3 1 2 3 2 1

Imunohistokimia TLR-2 TLR-4 NFκB 2 3 2 4 2 3 3 0 3 2 3 2 3 4 3 15 20 16 13 23 18 12 20 21 17 18 24 14 24 23 15 19 18 16 20 17 14 21 20 14 20 18 15 18 19 9 13 11 12 10 13 10 12 15 13 9 11 15 13 17 8 6 11 6 4 18 11 3 15 13 2 17 14 2 10 3 2 2 4 3 4 5 3 3 3 3 2 4 3 3 11 13 13 10 12 15 13 11 10 12 13 11 8 12 15 4 5 3 4 3 5 5 5 3 3 5 5 4 3 6

Kolagen Tipe IV 12 16 10 13 15 3 4 6 6 3 11 13 14 12 14 18 23 20 23 20 16 23 20 18 23 23 24 25 23 24 13 12 14 11 13 31 34 30 32 34


Lampiran 10.3

Gambar prosedur pemeriksaan Imunohistokimia

1. Prestaining

A

Keterangan: A. Preparasi sampel dan memanaskan pada inkubator 370C selama 24 jam


2. Deparafinisasi

C

B

Keterangan: B. Menggunakan xylol dan alkohol berseri. Simpan pada suhu 40C sampai dilakukan immunostaining C. Bilas dengan dH 2 O selama 5 menit dan lakukan pencucian dengan PBS pH 7.4 satu kali selama 5 menit dan tiriskan


D

Keterangan: D. Blocking endogenous peroksida menggunakan 3% H 2 O 2 selama 20 menit. Cuci menggunakan PBS pH 7.4 tiga kali selama 5 menit. Blocking unspecific protein menggunakan 5% FBS yang mengandung 0.25% Triton X-100 dan cuci menggunakan PBS pH 7.4 tiga kali selama 5 menit

E

Keterangan: E. Inkubasi menggunakan monoklonal anti (antibodi primer) selama 24 jam pada 40C


F

Keterangan: F. Cuci menggunakan PBS pH 7.4 tiga kali selama 5 menit. Kemudian inkubasi menggunakan anti mouse biotin conjugated selama 2 jam.

G

Keterangan: G. Cuci menggunakan PBS pH 7.4 tiga kali selama 5 menit dan inkubasi menggunakan SA-HRP selama 40 menit pada temperatur ruangan


H

Keterangan: H. Cuci menggunakan PBS pH 7.4 tiga kali selama 5 menit dan tetesi dengan DAB (Diamino Benzidine) dan inkubasi selama 10 menit


J I

Keterangan: I.

Cuci menggunakan PBS pH 7.4 tiga kali selama 5 menit dan dH 2 O 2 selama 5 menit, kemudian counterstaining menggunakan Mayer Hematoxilen yang diinkubasi selama 10 menit dan cuci dengan tap water

J.

Bilas menggunakan dH 2 O dan kering anginkan. Mounting menggunakan entelan dan tutup dengan cover glass. Amati pada mikroskop cahaya


Lampiran 12

Hasil Analisis Statistik Data Amatan

1

01:31 Saturday, March 2, 2013

The GLM Procedure Class Level Information Class Perlakuan

Levels 8

Values K1 K2 K3A K3B K4A K4B K5A K5B

Number of observations

40

Data Amatan

2


The GLM Procedure Dependent Variable: HSP70 Source

DF

Sum of Squares

Model Error Corrected Total

7 32 39

1317.775000 84.000000 1401.775000

R-Square 0.940076 Source

Coeff Var 21.82068

Mean Square

F Value

Pr > F

188.253571 2.625000

71.72

<.0001

Root MSE 1.620185

HSP70 Mean 7.425000

DF

Type I SS

Mean Square

F Value

Pr > F

Perlakuan

7

1317.775000

188.253571

71.72

<.0001

Source Perlakuan

DF 7

Type III SS 1317.775000

Mean Square 188.253571

F Value 71.72

Pr > F <.0001

Contrast Value K1 VS K2 & K3A & K3B & K4A & K4B & K5A & K5B 46.56 K2 VS K3 79.25 K2 VS K4 341.54 K2 VS K5 270.68 K3A VS K3B 3.09 K4A VS K4B 9.75 K5A VS K5B 15.24

DF

Contrast SS

Mean Square

1

122.2321429

122.2321429

1

208.0333333

208.0333333

1

896.5333333

896.5333333

1

710.5333333

710.5333333

1

8.1000000

8.1000000

1

25.6000000

25.6000000

1

40.0000000

40.0000000

Contrast

Pr > F

K1 VS K2 & K3A & K3B & K4A & K4B & K5A & K5B K2 VS K3 K2 VS K4 K2 VS K5 K3A VS K3B K4A VS K4B K5A VS K5B

<.0001 <.0001 <.0001 <.0001 0.0885 0.0038 0.0005

F


Data Amatan

3


The GLM Procedure

Dependent Variable: MMP9 Source

DF

Sum of Squares

Model Error Corrected Total

7 32 39

1594.700000 86.400000 1681.100000

R-Square 0.948605

Coeff Var 16.68191

Mean Square

F Value

Pr > F

227.814286 2.700000

84.38

<.0001

Root MSE 1.643168

MMP9 Mean 9.850000

Source Perlakuan

DF 7

Type I SS 1594.700000


F Value 84.38

Pr > F <.0001

Source Perlakuan

DF 7

Type III SS 1594.700000


F Value 84.38

Pr > F <.0001


DF

Contrast SS

Mean Square

1

388.9285714

388.9285714

1

120.0000000

120.0000000

1

374.5333333

374.5333333

1

662.7000000

662.7000000

1

250.0000000

250.0000000

1

40.0000000

40.0000000

1

136.9000000

136.9000000

Contrast

Pr > F


<.0001 <.0001 <.0001 <.0001 <.0001 0.0005 <.0001

F


Data Amatan

4


The GLM Procedure

Dependent Variable: TLR2 Source Model

DF 7

Sum of Squares 820.7750000

Error Corrected Total

32 39

108.0000000 928.7750000

R-Square 0.883718 Source Perlakuan Source Perlakuan

Coeff Var 20.24372 DF 7 DF 7


K1 VS K2 & K3A & K3B & K4A & K4B & K5A & K5B 66.67 K2 VS K3 0.80 K2 VS K4 49.79 K2 VS K5 45.67 K3A VS K3B 6.67 K4A VS K4B 32.27 K5A VS K5B 34.25

Pr > F <.0001

3.3750000

Root MSE 1.837117

Type I SS 820.7750000 Type III SS 820.7750000

Contrast Value

F Value 34.74

TLR2 Mean 9.075000

Mean Square 117.2535714 Mean Square 117.2535714

F Value 34.74 F Value 34.74

Pr > F <.0001 Pr > F <.0001

DF

Contrast SS

Mean Square

1

225.0035714

225.0035714

1

2.7000000

2.7000000

1

168.0333333

168.0333333

1

154.1333333

154.1333333

1

22.5000000

22.5000000

1

108.9000000

108.9000000

1

115.6000000

115.6000000

Contrast

Pr > F


<.0001 0.3778 <.0001 <.0001 0.0146 <.0001 <.0001

F


Data Amatan

5


The GLM Procedure

Dependent Variable: TLR4 Source Model Error Corrected Total

Sum of Squares 2028.175000 71.200000 2099.375000

DF 7 32 39 R-Square 0.966085

Coeff Var 15.49759

Mean Square 289.739286 2.225000

Root MSE 1.491643

F Value 130.22

Pr > F <.0001

TLR4 Mean 9.625000

Source Perlakuan

DF 7

Type I SS 2028.175000


F Value 130.22

Pr > F <.0001

Source Perlakuan

DF 7

Type III SS 2028.175000


F Value 130.22

Pr > F <.0001


DF

Contrast SS

Mean Square

1

298.289286

298.289286

1

100.833333

100.833333

1

1068.033333

1068.033333

1

546.133333

546.133333

1

168.100000

168.100000

1

0.900000

0.900000

1

160.000000

160.000000

Contrast

Pr > F


<.0001 <.0001 <.0001 <.0001 <.0001 0.5293 <.0001

F


Data Amatan

6


The GLM Procedure

Dependent Variable: NFkBp65 Source Model Error Corrected Total

DF 7 32 39 R-Square 0.914607

Sum of Squares 1717.975000 160.400000 1878.375000

Coeff Var 20.12460

Mean Square 245.425000 5.012500

Root MSE 2.238861

F Value 48.96

Pr > F <.0001

NFkBp65 Mean 11.12500

Source Perlakuan

DF 7

Type I SS 1717.975000


F Value 48.96

Pr > F <.0001

Source Perlakuan

DF 7

Type III SS 1717.975000


F Value 48.96

Pr > F <.0001


DF

Contrast SS

Mean Square

1

415.2892857

415.2892857

1

67.5000000

67.5000000

1

472.0333333

472.0333333

1

464.1333333

464.1333333

1

62.5000000

62.5000000

1

324.9000000

324.9000000

1

176.4000000

176.4000000

Contrast

Pr > F


<.0001 0.0009 <.0001 <.0001 0.0013 <.0001 <.0001

F


Data Amatan

7


The GLM Procedure

Dependent Variable: Kolagen4 Source Model Error Corrected Total

DF 7 32 39 R-Square 0.956273

Sum of Squares 2545.575000 116.400000 2661.975000

Coeff Var 10.91401

Mean Square 363.653571 3.637500

Root MSE 1.907223

F Value 99.97

Pr > F <.0001

Kolagen4 Mean 17.47500

Source Perlakuan

DF 7

Type I SS 2545.575000


F Value 99.97

Pr > F <.0001

Source Perlakuan

DF 7

Type III SS 2545.575000


F Value 99.97

Pr > F <.0001


DF

Contrast SS

Mean Square

1

104.432143

104.432143

1

512.533333

512.533333

1

1020.833333

1020.833333

1

1080.000000

1080.000000

1

160.000000

160.000000

1

36.100000

36.100000

1

960.400000

960.400000

Contrast

Pr > F


<.0001 <.0001 <.0001 <.0001 <.0001 0.0035 <.0001

F


Lampiran 1 Sertifikat Kelaikan Etik

Recommend Documents