Lampiran 1. Larutan-larutan untuk ekstraksi protein sarkoplasma dan miofibril

69

Lampiran 1. Larutan-larutan untuk ekstraksi protein sarkoplasma dan miofibril 1. Buffer Phospat pH 7.5, I=0.05 Sebanyak 2.201 g NaH2PO4 dan 0.4597 g KH2PO4 dilarutkan dalam 1 liter air destilata, pH ditepatkan sebesar 7.5 2. KCl buffer phospat pH 7.5, I= 0.5 Sebanyak 2.201 g NaH2PO4, 0.4597 g KH2PO4 dan 33.625 g KCl dilarutkan dalam tepat 1 liter dalam air destilata, pH diatur sebesar 7.5

70

Lampiran 2. Larutan-larutan untuk SDS PAGE Larutan Stok : 1. Larutan A (Akrilamid 30%; 0.8 bisakrilamid) 100 ml Sebanyak 30.0 g akrilamid dan 0.8 g N.N’-metilen-bisakrilamid dilarutkan dalam 100 ml akuades. Saring larutan melalui filter 0.45 µm. pada waktu penimbangan selalu harus menggunakan sarung tangan dan tutup wadah dengan parafilm selama proses pelarutan. Larutan akrilamid dapat disimpan selama beberapa bulan dalam lemari pendingin bersuhu 4°C. 2. Larutan B (4x Tris-Cl/SDS. pH 8.8) 100 ml Sebanyak 18.17 g Tris base dan 4 ml 10% SDS dilarutkan dalam 40 ml akuades. Tepatkan pada pH 8.8 dengan 1 N HCl. Tambahkan akuades hingga volume total 100 ml. saring larutan melalui filter 0.45 µm. 3. Larutan C (4x Tris-Cl/SDS. pH 6.8) 100 ml Sebanyak 6.05 g Tris base dan 4 ml 10% SDS dilarutkan dalam 40 ml akuades. Tepatkan pada pH 8.8 dengan 1 N HCl. Tambahkan akuades hingga volume total 100 ml. saring larutan melalui filter 0.45 µm. 4. 10% APS. 0.5 ml Dibuat segar setiap kali akan melakukan elektroforesis. Larutkan 0.05 g amonium persulfat dalam 0.5 ml akuades 5. 5 X SDS/buffer elektroforesis. 1 L Larutkan 15.1 g Tris base. 72.0 g glisin. Dan 5.0 g SDS dalam 800 ml akuades. Setelah larut, tepatkan volume hingga 1.0 L. untuk membuat 1x SDS/buffer elektroforesis, encerkan 1 bagian volume larutan di atas dalam 4 bagian volume akuades. 6. 2x SDS/buffer sampel. 100 ml Campurkan 30 ml 10% SDS. 10 ml gliserol (50%). 5.0 ml 2merkaptoetanol. 12.5 ml 4x Tris Cl/SDS pH 6.8 dan 5-10 mg bromphenol blue. Tepatkan volume hingga 100 ml dengan akuades. Simpan pada suhu rendah. 7. Larutan pewarna (staining) Sebanyak 1 gram coomasie briliant blue R-250. 450 ml metanol dan 100 ml asam asetat glasial dilarutkan dalam 450 ml akuades. 8. Larutan penghilang warna (destaining) Sebanyak 100 ml metanol dan 100 ml asam asetat glasial dilarutkan dalam 800 ml akuades.

71

Lampiran 3. Rumus/Formula pembuatan larutan-larutan untuk ELISA

1. Coating buffer: Carbonat-Bicarbonat buffer pH 9.6 a. 0.2 M Na2CO3 b. 0.2 M NaHCO3 Campurkan 16 ml (a) dan 34 ml (b). Tambahkan dH20 sampai dengan 200 ml pH 9.6. atau larutkan 1 kapsul carbonat-bicarbonat buffer (SIGMA) dalam 100 ml dH2O pH 9.6 2. Blocking Buffer (BSA 3%) Sebanyak 3 gr BSA dilarutkan dalam 100 ml PBS (Phospat Buffer Saline) 3. Washing Buffer (PBS Tween-20 0.05%) Sebanyak 0.5 ml Tween-20 ditambahkan ke dalam 1 Liter PBS 1x. 4. PBS (Phospat Buffer Saline) 10 x konsentrasi

Untuk 1 Liter

- 1.7 M NaCl 100 g 2.5 g - 0.034 M KCl 14.4 g - 0.1 M Na2HPO4 2.5 g - 0.018 M KH2PO4 Jadikan 1 liter dengan dH2O dan diautoclave untuk steril. Untuk membuat PBS 1X yaitu dengan mengambil 100 ml PBS 10X dan ditambahkan dH2O 900 ml. 5. Substrat TMB Dibuat segar setiap kali akan melakukan ELISA. Satu tablet TMB dilarutkan dalam 1 ml DMSO (divortex 5 menit). Tambahkan buffer substrat (citrate phospate buffer) sampai dengan 10 ml dan divortex. 6. Pengenceran serum 1:10 • Untuk penentuan total IgE serum : Sebanyak 100 µl serum ditambahkan 900 µl coating buffer, kemudian di vortex dan bisa disimpan dalam frezer. • Untuk pengujian alergenisitas sampel: Sebanyak 100 µl serum ditambahkan 900 µl PBST 0.05%, kemudian di vortex dan bisa disimpan dalam frezer. 7. Pembuatan konjugat HRP 1:6000 Sebanyak 2µL konjugat HRP ditambahkan dengan 11.998 µl PBST 0.05% kemudian divortex.

72

Lampiran 4. Rumus/Formula pembuatan larutan-larutan untuk imunoblotting 1. Buffer transfer Sebanyak 2.9 g Tris base dan 14.5 g glisin dilarutan dalam 500 ml air destilata. Kemudian ditambahkan dengan 200 ml metanol dan ditepatkan volumenya sampai dengan 1 liter. Simpan pada suhu 4 °C. 2. Larutan pewarna amido black Amido black 0.1 g. metanol 20 ml. asam asetan glasial 10 ml. dicampurkan dan di tera dengan akuades sampai dengan volumenya 100 ml. 3. Larutan substrat DAB (Roche) Sebanyak 0.5 ml DAB konsentrat ditambahkan dengan 4.5 ml DAB buffer (perbandingan 1:10).

73

Lampiran 5. Kurva protein standar (BSA) pada penetapan kadar protein ekstrak sampel (udang jerbung, ikan tongkol dan kerang hijau) Konsentrasi (mg/ml) 0.1

Absorbansi

Rata-Rata

0.1538

0.1543

0.1548 0.2

0.3029

0.3015

0.3001 0.3

0.4171

0.4145

0.4119 0.4

0.5047

0.5043

0.5039 0.5

0.6441

0.64335

0.6426 0.7

0.8319

0.8272

0.8225 0.8

0.9667

0.96405

0.9614 0.9

1.0185

1.01475

1.011 1

1.0927

1.0895

1.0863 Miofibril.udang 1:5

0.2204

0.22025

0.2201 Sarkoplasma.udang 1:5

0.3309

0.33025

0.3296 Miofibril.tongkol 1:5

0.2724

0.27255

0.2727 Sarkoplasma.tongkol 1:5

0.3564

0.3541

0.3518 Miofibril.kerang

0.2333

0.2336

0.2339 Sakoplasma.kerang 1:5

0.1649 0.1621

0.1635

74

Lampiran 6. Hasil perhitungan rendemen ekstrak dan analisis total protein dalam daging udang jerbung, ikan tongkol dan kerang hijau

- Perhitungan rendemen ekstrak Jenis protein Sarko.udang Miof.Udang Sarko.tongkol Miof.tongkol Sarko.kerang Miof.kerang

Kadar protein Bradford (mg/ml) 1.154 0.627 1.269 0.878 0.691 0.176

Volume ekstrak(ml)

gram sampel

Total protein (gram)

Rendemen (%)

390 390 390 390 390 390

20.9 20.9 19.72 19.72 20 20

0.450 0.244 0.495 0.342 0.269 0.068

2.15 1.17 2.51 1.74 1.35 0.34

- Analisis total protein

Jenis Protein

Udang jerbung Ikan Tongkol Kerang Hijau

Berat sampel (gram) 20.9 19.72 20

Total protein Kjeldahl

Total protein terekstrak (gram)

%

gram

sarkoplasma

miofibril

13.96 16.44 14.03

2.92 3.24 2.81

0.45 0.495 0.269

0.244 0.342 0.068

75

Lampiran 7. Protein alergen dari produk (International Union of Immunological Societies)

terdaftar

dalam

Berat molekul (kDa)

Archaeopotamobius sibiriensis (Crustacean species)

Arc s 8

Triosephosphate isomerase

~28

Artemia franciscana (Brine shrimp)

Art fr 5

Myosin, light chain 1

Charybdis feriatus (Crab) Crangon crangon (North Sea shrimp)

Cha f 1

Tropomyosin

34

Cra c 1

Tropomyosin

~38

Cra c 2

Arginine kinase

~45

Cra c 4

Sarcoplasmic calciumbinding protein

~25

Cra c 5


~17.5

Cra c 6

Troponin C

~21

Cra c 8

Triosephosphate isomerase

~28

Hom a 1

Tropomyosin

Hom a 3

Myosin light chain 2

~23

Hom a 6

Troponin C

~20

Lit v 1

Tropomyosin

36

Lit v 2

Arginine kinase

Lit v 3


20

Lit v 4

Sarcoplasmic calciumbinding protein

20

Metapenaeus ensis (Shrimp)

Met e 1

Tropomyosin

Pandalus borealis (Northern shrimp)

Pan b 1

Tropomyosin

37

Penaeus aztecus (Shrimp)

Pen a 1

Tropomyosin

36

Penaeus indicus (Shrimp) Penaeus monodon (Black tiger shrimp)

Pen i 1

Tropomyosin

34

Pen m 1

tropomyosin

38

Pen m 2

arginine kinase

40

Pen m 3

Myosin light chain 2

Pen m 4

Sarcoplasmic calcium binding protein

Pen m 6

Troponin C

Litopenaeus vannamei (White shrimp)

Chordata

yang

Nama biokimiawi

Sumber species

Homarus americanus (American lobster)

Molusca

(seafood)

Nama alergen

Grup Arthropoda

laut

~17.5

Haliotis midae (Abalone)

Hal m 1

49

Helix aspersa (Brown garden snail)

Hel as 1

Tropomyosin

36

Todarodes pacificus (Squid)

Tod p 1

Tropomyosin

38

Gadus callarias (Baltic cod)

Gad c 1

Beta-parvalbumin

12

Clupea harengus (Atlantic herring)

Clu h 1

Beta-parvalbumin

12

Gadus morhua (Atlantic cod) Salmo salar (Atlantic salmon)

Gad m 1

Beta-parvalbumin

13

Sal s 1

Beta-parvalbumin 1

Sal s 2

Beta-Enolase

12 47.3

Sebastes marinus (Ocean perch, redfish, snapper)

Seb m 1

Beta-parvalbumin

11

Thunnus albacares (Yellowfin tuna)

Thu a 1

Beta-parvalbumin

11

Sumber : www.allergen.org

IUIS

76

Lampiran 8. Data Rf sub unit protein Lampiran 8a. Standar marker 1

2

3

4

5

6

M: Standar marker 1: Tongkol Sarkoplasma 2: Tongkol Miofibril 3: Kerang Sarkoplasma 4: Kerang Miofibril 5: Udang Sarkoplasma 6: Udang Miofibril

Pita ke1 2 3 4 5 6 7

Jenis protein β-galactosidase BSA Ovalbumin Lactate dehydrogenase Rease Bsp981 β-lactoglobulin lysozyme Range

BM (kDa)

Log BM

116 66.2 45 35 25 18.4 14.4

2.0645 1.8209 1.6532 1.5441 1.3979 1.2648 1.1584

Jarak pergerakan (cm)

Rf

1.81 3.4 5.41 6.92 8.86 10.47 10.97 11.5

0.157 0.296 0.470 0.602 0.770 0.910 0.954 1.000

77

Lampiran 8b. Sampel Ikan Tongkol

Fraksi Sarkoplasma pita ke-


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Range

1.17 1.78 2.34 4.14 4.86 5.42 6.36 6.77 7.91 8.72 9.79 10.49 11.18 11.5

Rf

Log BM

0.102 0.155 0.203 0.360 0.423 0.471 0.553 0.589 0.688 0.758 0.851 0.912 0.972

2.068 2.013 1.963 1.801 1.736 1.685 1.600 1.563 1.461 1.388 1.291 1.228 1.166

Rf

Log BM

0.138 0.160 0.222 0.277 0.317 0.378 0.493 0.422 0.456 0.542 0.566 0.813 0.865 0.917 0.973

2.031 2.008 1.944 1.886 1.845 1.782 1.663 1.737 1.701 1.612 1.587 1.331 1.277 1.223 1.165

BM (kDa)

Ketebalan band

117.06 103.13 91.81 63.19 54.41 48.44 39.85 36.60 28.89 24.42 19.55 16.91 14.65 Total

453.435 1058.799 998.092 4289.234 3881.506 1322.678 7983.941 6205.648 4403.577 486.556 663.263 1300.678 5053.234 38100.641

BM (kDa)

Ketebalan band

107.28 101.86 87.90 76.96 69.95 60.49 45.99 54.53 50.28 40.94 38.63 21.42 18.91 16.70 14.62 Total

441.314 639.314 646.192 1363.142 1853.263 1814.506 384.728 437.849 485.971 1058.263 3086.648 1336.799 1328.435 1639.142 5570.87 16515.566

% 1.19 2.78 2.62 11.26 10.19 3.47 20.95 16.29 11.56 1.28 1.74 3.41 13.26 100.00

Fraksi Miofibril pita ke-


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Range

1.59 1.84 2.55 3.19 3.65 4.35 5.67 4.85 5.24 6.23 6.51 9.35 9.95 10.55 11.19 11.5

% 2.67 3.87 3.91 8.25 11.22 10.99 2.33 2.65 2.94 16.41 18.69 8.09 8.04 9.92 33.73 100.00

78

Lampiran 8c. Sampel Kerang Hijau

Fraksi Sarkoplasma

pita ke-


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 Range

2.31 2.62 3.12 4.43 5.18 6.39 7.14 7.95 8.85 10.76 11.22 11.5

Rf

Log BM

0.201 0.228 0.272 0.386 0.451 0.556 0.621 0.692 0.770 0.936 0.977

1.965 1.937 1.892 1.774 1.706 1.597 1.530 1.456 1.375 1.203 1.161

BM (kDa) 92.35 86.59 78.04 59.45 50.87 39.56 33.85 28.61 23.73 15.95 14.50 Total

Ketebalan band 716.678 742.678 613.435 2828.062 1516.971 1528.263 1942.627 585.678 324.899 590.435 638.314 12028.04

% 5.96 6.17 5.10 23.51 12.61 12.71 16.15 4.87 2.70 4.91 5.31 100.00

Fraksi Miofibril

pita ke-


1 2 3 4 5 Range

0.44 2.25 9.63 10.47 11 11.5

Rf

Log BM

0.038294 0.195822 0.83812 0.911227 0.957354

2.134193 1.970852 1.304853 1.229049 1.181219

BM (kDa) 136.21 93.51 20.18 16.95 15.18 Total

ketebalan band 1081.849 842.556 643.971 282.435 553.385 3404.196

% 31.78 24.75 18.92 8.30 16.26 100.00

79

Lampiran 8d. Sampel Udang Jerbung

Fraksi Sarkoplasma

Pita ke1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 Range

Jarak pergerakan (cm) 0.18 1.06 1.49 2.36 2.73 2.93 3.7 3.91 4.11 4.64 4.88 5.72 6.32 6.72 7.19 7.63 8.1 9.33 9.87 10.51 10.85 11.1 11.5

Rf

Log BM

BM (kDa)

ketebalan band

0.016 0.092 0.130 0.205 0.238 0.255 0.322 0.340 0.358 0.404 0.425 0.498 0.550 0.585 0.626 0.664 0.705 0.812 0.859 0.915 0.944 0.966

2.158 2.078 2.039 1.961 1.928 1.909 1.840 1.821 1.803 1.755 1.734 1.658 1.604 1.567 1.525 1.485 1.443 1.332 1.283 1.225 1.195 1.172

143.77 119.74 109.51 91.40 84.63 81.19 69.18 66.23 63.53 56.91 54.14 45.47 40.14 36.94 33.50 30.57 27.73 21.47 19.20 16.81 15.66 14.87 Total

169.899 237.021 629.192 3088.749 1159.021 1088.607 960.556 1293.314 618.899 2896.627 902.263 4548.648 1536.335 925.092 1217.799 941.678 839.385 578.971 4761.941 258.556 374.899 2234.849 31262.301

% 0.54 0.76 2.01 9.88 3.71 3.48 3.07 4.14 1.98 9.27 2.89 14.55 4.91 2.96 3.90 3.01 2.68 1.85 15.23 0.83 1.20 7.15 100.00

80

Lampiran 8d. (Lanjutan) Fraksi Miofibril

Pita ke-


1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 Range

1.58 1.89 2.12 2.38 2.74 3.08 5.04 6.56 6.82 7.27 7.74 8 8.82 9.55 9.86 10.17 11 11.5

Rf 0.138 0.164 0.185 0.207 0.238 0.268 0.439 0.571 0.594 0.633 0.674 0.696 0.768 0.831 0.858 0.885 0.957

Log BM 2.031 2.003 1.983 1.959 1.927 1.896 1.719 1.582 1.558 1.518 1.475 1.452 1.378 1.312 1.284 1.256 1.181

BM (kDa)

ketebalan band

107.48 213.192 100.77 3399.385 96.07 1683.435 91.02 1296.142 84.46 416.021 78.70 385.021 52.37 691.556 38.19 5910.113 36.18 1237.142 32.95 605.849 29.88 729.263 28.31 676.556 23.88 1643.213 20.52 932.728 19.24 1491.799 18.04 2608.991 15.18 3032.92 Total 26953.326

% 0.79 12.61 6.25 4.81 1.54 1.43 2.57 21.93 4.59 2.25 2.71 2.51 6.10 3.46 5.53 9.68 11.25

81

Lampiran 9. Data hasil uji ELISA penentuan total IgE serum No 1 2 3 4 5 6 7

Kode serum

Konsentrasi serum

A

1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5 1:10 1:5

B C D E F G

8

H

9

I

10

J

11

K

12

L

13

M

14

N

15

O

16

P

17

Q

18

R

19

S

20

T

Kontrol negatif 1 2 rataan 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067 0.071 0.067

0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062 0.056 0.062

0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065 0.064 0.065

SD 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004 0.011 0.004

Mean+2SD 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072 0.085 0.072

Total IgE serum uji 1 2 rataan 0.212 0.100 0.255 0.167 0.110 0.078 0.153 0.119 0.294 0.213 0.340 0.144 0.294 0.166 0.240 0.180 0.462 0.170 0.108 0.066 0.230 0.168 0.263 0.178 0.269 0.191 0.122 0.079 0.096 0.099 0.228 0.193 0.659 0.220 0.162 0.102 0.511 0.239 0.657 0.374

0.163 0.106 0.052 0.056 0.098 0.081 0.269 0.167 0.251 0.168 0.293 0.234 0.245 0.142 0.058 0.053 0.439 0.230 0.102 0.074 0.269 0.180 0.330 0.172 0.239 0.165 0.102 0.093 0.120 0.073 0.336 0.135 0.578 0.246 0.241 0.098 0.539 0.266 0.772 0.409

0.188 0.103 0.154 0.112 0.104 0.080 0.211 0.143 0.273 0.191 0.317 0.189 0.270 0.154 0.149 0.117 0.451 0.200 0.105 0.070 0.250 0.174 0.297 0.175 0.254 0.178 0.112 0.086 0.108 0.086 0.282 0.164 0.619 0.233 0.202 0.100 0.525 0.253 0.715 0.392

82

Lampiran 10. Hasil uji ELISA penentuan alergenisitas ekstrak sampel Lampiran 10a. ekstrak sampel udang jerbung

Serum

A B C D E F G H I J K L M N O P Q R S T

OD serum diuji 0.528 0.213 0.187 0.087 0.162 0.104 0.072 0.071 0.108 0.096 0.071 0.072 0.033 0.036 0.040 0.044 0.161 0.169 0.121 0.110 0.130 0.123 0.992 0.878 0.182 0.153 0.197 0.241 0.242 0.221 0.291 0.294 0.183 0.185 0.197 0.151 0.126 0.183 0.124 0.099

ratarata (y) 0.371 0.137 0.133 0.072 0.102 0.072 0.035 0.042 0.165 0.116 0.127 0.935 0.168 0.219 0.232 0.293 0.184 0.174 0.155 0.112

Udang Sarkoplasma OD ratakontrol rata SD negatif (x) 0.120 0.117 0.004 0.114 0.120 0.117 0.004 0.114 0.082 0.075 0.082 0.075 0.082 0.075 0.064 0.061 0.040 0.039 0.040 0.039 0.125 0.095 0.178 0.211 0.195 0.246 0.098 0.074 0.178 0.136 0.114 0.157 0.210 0.264 0.181 0.174 0.111 0.114 0.187 0.136 0.195 0.246 0.248 0.170

x+ 2SD

Status Alergi

0.125

Positif

0.125

Positif

0.079

0.005

0.088

Positif

0.079

0.005

0.088

Negatif

0.079

0.005

0.088

Positif

0.063

0.002

0.067

Positif

0.040

0.001

0.041

Negatif

0.040

0.001

0.041

Positif

0.110

0.021

0.152

Positif

0.195

0.023

0.241

Negatif

0.221

0.036

0.293

Negatif

0.086

0.017

0.120

Positif

0.157

0.030

0.216

Negatif

0.136

0.030

0.196

Positif

0.237

0.038

0.313

Negatif

0.178

0.005

0.187

Positif

0.113

0.002

0.117

Positif

0.162

0.036

0.234

Negatif

0.221

0.036

0.293

Negatif

0.209

0.055

0.319

Negatif

83

Lampiran 10a. (Lanjutan) Udang Miofibril Serum


OD serum diuji 0.652 0.328 0.225 0.128 .145 0.106 0.112 0.117 0.113 0.123 0.090 0.093 0.039 0.041 0.068 0.041 0.208 0.201 0.176 0.191 0.234 0.200 1.661 1.701 0.192 0.151 0.660 0.760 0.331 0.276 0.758 0.505 0.150 0.151 0.175 0.156 0.181 0.192 0.228 0.242

ratarata (y) 0.490 0.177 0.126 0.115 0.118 0.092 0.040 0.055 0.205 0.184 0.217 1.681 0.172 0.710 0.304 0.632 0.151 0.166 0.187 0.235

OD kontrol negatif 0.139 0.138 0.139 0.138 0.106 0.097 0.106 0.097 0.106 0.097 0.091 0.094 0.040 0.044 0.040 0.044 0.165 0.137 0.128 0.171 0.185 0.189 0.154 0.109 0.151 0.133 0.184 0.203 0.309 0.257 0.256 0.207 0.149 0.153 0.162 0.154 0.185 0.189 0.118 0.174

ratarata (x)

SD

x+ 2SD

Status Alergi

0.139

0.001

0.140

Positif

0.139

0.001

0.140

Positif

0.106

0.106

0.318

Negatif

0.102

0.006

0.114

Positif

0.102

0.006

0.114

Positif

0.093

0.002

0.097

Negatif

0.042

0.003

0.048

Negatif

0.042

0.003

0.048

Positif

0.151

0.020

0.191

Positif

0.150

0.030

0.210

Negatif

0.187

0.003

0.193

Positif

0.132

0.032

0.195

Positif

0.142

0.013

0.167

Positif

0.194

0.013

0.220

Positif

0.283

0.037

0.357

Negatif

0.232

0.035

0.301

Positif

0.151

0.003

0.157

Negatif

0.158

0.006

0.169

Negatif

0.187

0.003

0.193

Negatif

0.146

0.040

0.225

Positif

84

Lampiran 10b. ekstrak sampel Ikan tongkol Tongkol Sarkoplasma Serum


OD serum diuji 0.733 0.359 0.175 0.089 0.115 0.076 0.076 0.074 0.042 0.038 0.078 0.089 0.038 0.040 0.101 0.103 0.132 0.115 0.079 0.097 0.166 0.147 0.080 0.088 0.150 0.113 0.165 0.179 0.247 0.191 0.230 0.186 0.152 0.133 0.161 0.133 0.102 0.135 0.065 0.091

ratarata (y) 0.546 0.132 0.096 0.075 0.040 0.084 0.039 0.102 0.124 0.088 0.157 0.084 0.132 0.172 0.219 0.208 0.143 0.147 0.119 0.078


ratarata (x)

SD

x+ 2SD

Status Alergi

0.080

0.002

0.084

Positif

0.080

0.002

0.084

Positif

0.077

0.008

0.092

Positif

0.077

0.008

0.092

Negatif

0.044

0.005

0.053

Negatif

0.076

0.002

0.080

Positif

0.044

0.005

0.053

Negatif

0.044

0.005

0.053

Positif

0.074

0.010

0.094

Positif

0.074

0.010

0.094

Negatif

0.118

0.010

0.138

Positif

0.080

0.004

0.088

Negatif

0.139

0.013

0.165

Negatif

0.155

0.040

0.235

Negatif

0.207

0.040

0.287

Negatif

0.200

0.026

0.252

Negatif

0.152

0.007

0.166

Negatif

0.166

0.010

0.186

Negatif

0.118

0.010

0.138

Negatif

0.080

0.016

0.111

Negatif

85

Lampiran 10b. (Lanjutan) Tongkol Miofibril Serum


OD serum diuji 0.697 0.376 0.171 0.111 0.115 0.071 0.060 0.058 0.043 0.044 0.079 0.072 0.038 0.042 0.093 0.093 0.067 0.062 0.063 0.095 0.123 0.104 0.090 0.096 0.136 0.114 0.187 0.208 0.245 0.167 0.259 0.202 0.153 0.144 0.237 0.226 0.091 0.142 0.053 0.077

ratarata (y) 0.537 0.141 0.093 0.059 0.044 0.076 0.040 0.093 0.065 0.079 0.114 0.093 0.125 0.198 0.206 0.231 0.149 0.232 0.117 0.065


ratarata (x)

SD

x+ 2SD

Status Alergi

0.072

0.001

0.073

Positif

0.072

0.001

0.073

Positif

0.070

0.006

0.081

Positif

0.070

0.006

0.081

Negatif

0.042

0.001

0.045

Negatif

0.080

0.016

0.111

Negatif

0.042

0.001

0.045

Negatif

0.042

0.001

0.045

Positif

0.072

0.017

0.106

Negatif

0.072

0.017

0.106

Negatif

0.099

0.000

0.099

Positif

0.070

0.002

0.074

Positif

0.136

0.013

0.161

Negatif

0.151

0.059

0.270

Negatif

0.207

0.032

0.270

Negatif

0.210

0.027

0.264

Negatif

0.139

0.007

0.153

Negatif

0.216

0.011

0.237

Negatif

0.099

0.000

0.099

Positif

0.059

0.008

0.076

Negatif

86

Lampiran 10c. Ekstrak sampel kerang hijau

Serum


OD serum diuji 0.679 0.371 0.218 0.108 0.117 0.084 0.065 0.067 0.044 0.043 0.089 0.116 0.045 0.048 0.039 0.038 0.125 0.076 0.075 0.099 0.150 0.110 0.246 0.223 0.122 0.114 0.199 0.189 0.281 0.180 0.293 0.266 0.167 0.150 0.213 0.234 0.317 0.260 0.054 0.054

ratarata (y) 0.525 0.163 0.101 0.066 0.044 0.103 0.047 0.039 0.101 0.087 0.130 0.235 0.118 0.194 0.231 0.280 0.159 0.224 0.289 0.054

Kerang Sarkoplasma OD ratakontrol rata SD negatif (x) 0.097 0.108 0.016 0.119 0.097 0.119 0.071 0.086 0.071 0.086 0.042 0.040 0.072 0.073 0.042 0.040 0.042 0.040 0.113 0.123 0.113 0.123 0.176 0.189 0.085 0.075 0.110 0.125 0.217 0.260 0.210 0.198 0.224 0.190 0.121 0.133 0.159 0.221 0.176 0.189 0.056 0.054

x+ 2SD

Status Alergi

0.139

Positif

0.108

0.016

0.139

Positif

0.079

0.011

0.100

Positif

0.079

0.011

0.100

Negatif

0.041

0.001

0.044

Negatif

0.073

0.001

0.074

Positif

0.041

0.001

0.044

Positif

0.041

0.001

0.044

Negatif

0.118

0.007

0.132

Negatif

0.118

0.007

0.132

Negatif

0.183

0.009

0.201

Negatif

0.080

0.007

0.094

Positif

0.118

0.011

0.139

Negatif

0.239

0.030

0.299

Negatif

0.204

0.008

0.221

Positif

0.207

0.024

0.255

Positif

0.127

0.008

0.144

Positif

0.190

0.044

0.278

Negatif

0.183

0.009

0.201

Positif

0.055

0.001

0.058

Negatif

87

Lampiran 10c. (Lanjutan)

Serum


OD serum diuji 0.713 0.390 0.217 0.119 0.139 0.100 0.086 0.081 0.042 0.039 0.111 0.114 0.040 0.040 0.036 0.038 0.144 0.102 0.096 0.123 0.239 0.262 0.756 0.719 0.154 0.186 0.664 0.600 0.245 0.222 0.505 0.423 0.194 0.197 0.222 0.299 0.197 0.191 0.059 0.058

ratarata (y) 0.552 0.168 0.120 0.084 0.041 0.113 0.040 0.037 0.123 0.110 0.251 0.738 0.170 0.632 0.234 0.464 0.196 0.261 0.194 0.0585

Kerang Miofibril OD ratakontrol SD rata (x) negatif 0.079 0.087 0.011 0.094 0.079 0.094 0.118 0.161 0.118 0.161 0.039 0.041 0.112 0.103 0.039 0.041 0.039 0.041 0.103 0.115 0.093 0.095 0.175 0.189 0.088 0.083 0.176 0.199 0.206 0.234 0.266 0.233 0.277 0.349 0.244 0.207 0.197 0.249 0.175 0.189 0.101 0.082

x+ 2SD

Status Alergi

0.108

Positif

0.087

0.011

0.108

Positif

0.140

0.030

0.200

Negatif

0.140

0.030

0.200

Negatif

0.040

0.001

0.043

Negatif

0.108

0.006

0.120

Negatif

0.040

0.001

0.043

Negatif

0.040

0.001

0.043

Negatif

0.109

0.008

0.126

Negatif

0.094

0.001

0.097

Positif

0.182

0.010

0.202

Positif

0.086

0.004

0.093

Positif

0.188

0.016

0.220

Negatif

0.220

0.020

0.260

Positif

0.250

0.023

0.296

Negatif

0.313

0.051

0.415

Positif

0.226

0.026

0.278

Negatif

0.223

0.037

0.297

Negatif

0.182

0.010

0.202

Negatif

0.0915

0.013

0.118

Negatif

88

Lampiran 11. Hasil uji imunoblotting Lampiran 11a. Uji imunoblotting serum A dan B Marker standar

Pita ke1 2 3 4 5

Jenis protein Phosporilase-β albumin ovalbumin carbonic anhidrase Tripsin Inhibitor Range

Jarak pergerakan (cm) 3.78 5.59 8.22 11.91 13.94

BM (kDa) 97 66 45 30 20 15.01

RF 0.25 0.37 0.55 0.79 0.93

Log BM 1.99 1.82 1.65 1.48 1.30

89

Lampiran 11a. (Lanjutan) Serum A

Jenis protein

Pita ke-

Kerang miofibril Tongkol sarkoplasma Udang sarkoplasma Udang miofibril Range

1 1 1 1

Jarak pergerakan (cm) 3.60 7.30 7.00 9.60 15.01

RF 0.2395 0.4863 0.4663 0.6396

Log BM 1.9713 1.7358 1.7549 1.5896

BM (kDa) 93.61 54.43 56.87 38.86

Serum B

Jenis protein Udang sarkoplasma Udang miofibril Range

Pita ke1 1 2

Jarak pergerakan (cm) 7.31 7.6 9.69 15.01

RF 0.4870 0.5063 0.6456

Log BM 1.7351 1.7167 1.5838

BM (kDa) 54.34 52.08 38.36

90

Lampiran 11b. Uji imunoblotting serum H, M dan Q

Marker standar H Mk Sk Mu Su

Pita ke1 2 3 4 5 6 Range

P

L Mt St

Jenis protein β-galactosidase BSA Ovalbumin Lactate dehydrogenase Rease Bsp981 β-lactoglobulin

Mk

Sk Mu Su

Mt

St

BM (kDa)

Log BM

116 66.2 45 35 25 18.4

2.064458 1.820858 1.653213 1.544068 1.39794 1.264818

Mk Sk Mu Su

Mt

Jarak pergerakan (cm) 2.78 5.11 7.67 9.93 12.41 13.99 15.94

St

Rf 0.174404 0.320577 0.481179 0.622961 0.778545 0.877666

91

Lampiran 11b. (Lanjutan)

Serum H

Jenis protein

Pita ke-

Udang sarkoplasma

1 2 1

Udang miofibril Range

Jarak pergerakan (cm) 4.39 5.43 9.12 15.94

RF

Log BM

0.277 0.341 0.570

1.909 1.840 1.593

RF

Log BM

0.633 0.670 0.261 0.289 0.570 0.639 0.679 0.575 0.628 0.639 0.679 0.696 0.220 0.639 0.679

1.525 1.485 1.927 1.896 1.593 1.518 1.475 1.587 1.530 1.518 1.475 1.456 1.971 1.518 1.475

BM (kDa) 81.16 69.17 39.17

Serum P

Jenis protein Udang sarkoplasma Udang miofibril

Tongkol miofibril Kerang sarkoplasma

Kerang miofibril

Pita ke-


1 2 1 2 3 4 5 1 1 2 3 4 1 2 3

10.09 10.68 4.15 4.61 9.08 10.19 10.82 9.17 10.015 10.19 10.83 11.101 3.5 10.19 10.83

BM (kDa) 33.50 30.56 84.46 78.70 39.19 32.96 29.88 38.64 33.87 32.96 29.83 28.60 93.53 32.96 29.83

92

Lampiran 11b. (Lanjutan) Serum L Jenis protein Udang sarkoplasma

Udang miofibril

Tongkol sarkoplasma

Tongkol miofibril

Pita ke1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1 2 3 4 5 1 2 3

Jarak pergerakan (cm) 4.15 4.6 5.14 5.98 7.01 8.93 10.67 11.30 2.61 4.15 4.60 7.22 8.65 9.08 10.19 10.82 11.20 13.59 14.05 15.17 3.62 9.51 11.04 12.11 13.53 10.82 11.2 11.3

RF

Log BM

BM (kDa)

0.260 0.289 0.322 0.375 0.440 0.560 0.670 0.709 0.164 0.260 0.289 0.453 0.542 0.570 0.639 0.679 0.703 0.853 0.881 0.951 0.227 0.597 0.693 0.760 0.849 0.679 0.703 0.709

1.927 1.896 1.860 1.803 1.734 1.604 1.485 1.443 2.031 1.927 1.896 1.719 1.623 1.593 1.518 1.475 1.450 1.288 1.257 1.181 1.963 1.564 1.460 1.388 1.292 1.475 1.450 1.443

84.51 78.79 72.43 63.53 54.15 40.14 30.57 27.73 107.45 84.51 78.79 52.37 41.93 39.19 32.95 29.88 28.16 19.40 18.06 15.18 91.82 36.65 28.86 24.43 19.57 29.88 28.16 27.72

93

Serum L (Lanjutan)

Jenis protein Kerang sarkoplasma

Kerang miofibril

Range


Pita ke1 2 3 4 5 6 1 2 3

4.661 5.14 6.405 10.021 10.82 11.098 3.502 10.82 11.098 15.94

RF

Log BM

0.292 0.322 0.402 0.629 0.679 0.696 0.220 0.679 0.696

1.892 1.860 1.774 1.529 1.475 1.457 1.971 1.475 1.457

BM (kDa) 78.04 72.43 59.46 33.84 29.88 28.61 93.50 29.88 28.61

Lampiran 1. Larutan-larutan untuk ekstraksi protein sarkoplasma dan miofibril

Recommend Documents