EFEK HEPATOPROTEKTIF PEMBERIAN JANGKA PENDEK. EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH Persea americana Mill. TERHADAP AKTIVITAS ALT-AST PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

EFEK HEPATOPROTEKTIF PEMBERIAN JANGKA PENDEK EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH Persea americana Mill. TERHADAP AKTIVITAS ALT-AST PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Diajukan oleh : MM. Risa Puspitasari NIM : 118114044

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2015 i


ii


iii


HALAMAN PERSEMBAHAN

1 Kor 15:58 Karena itu, saudara-saudaraku yang terkasih, berdirilah teguh, jangan goyah, dan giatlah selalu dalam pekerjaan Tuhan! Sebab kamu tahu, bahwa dalam persekutuan dengan Tuhan jerih payahmu tidak sia-sia. Yesaya 41:10 Janganlah takut, sebab Aku menyertai engkau, janganlah bimbang, sebab Aku ini Allahmu; Aku akan meneguhkan, bahkan akan menolong engkau; Aku akan memegang engkau dengan tangan kanan-Ku yang membawa kemenangan.

Kupersembahkan karya kecilku, Untuk segala keajaiban indah dan rahmat Tuhanku Untuk cinta, tanggung jawab, ispirasi kerja keras dan kegigihan, Bapakku Untuk kasih sayang dan ketulusan, Ibuku Untuk semangat dan harapan, kakakku dan sahabatku Untuk kebanggaan, Almamaterku

iv


v


vi


PRAKATA Puji syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Esa atas berkat rahmat-Nya skripsi dengan judul “Efek Hepatoprotektif

Pemberian Jangka

Pendek Ekstrak Etanol Kulit Buah Persea americana Mill. Terhadap Aktivitas ALT-AST Pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida” dapat penulis selesaikan tepat pada waktunya. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Skripsi ini dapat penulis susun tidak terlepas dari bimbingan, semangat, dan bantuan berbagai pihak. Untuk itu penulis mengucapkan terima kasih kepada: 1.

Ibu Aris Widayati, M.Si., Ph,D., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma.

2.

Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.d., Apt., selaku Dosen Pembimbing skripsi ini atas segala kesabaran untuk selalu membimbing, memberi motivasi, dan memberi masukan kepada penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.

3.

Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. dan Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt. selaku dosen penguji atas kritik dan saran yang telah diberikan, serta kesediaannya dalam meluangkan waktu untuk menguji.

4.

Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., atas bantuan dalam determinasi buah Persea americana Mill.

5.

Pak Parjiman selaku laboran Laboratorium Farmakologi-Toksikologi, Pak Heru selaku laboran Laboratorium Biofarmasetika-Farmakokinetik, Pak Kayatno selaku laboran Laboratorium Biokimia, Pak Suparlan selaku laboran Laboratorium Kimia Organik, atas segala bantuan dan kerjasama selama di laboratorium.

6.

Keluarga

yang

selalu

mengirim

doa,

menyalakan

semangat,

memberikan dukungan dalam menyusun skripsi ini (Ayah penulis Albertus Suyadi, Ibu penulis Margareta Sainah, Kakak penulis Fransiska Eni Susilowati dan Novianti. 7.

Teman-teman seperjuangan “Tim kulit buah Persea americana Mill.” Ester, Berna, Ucy, Novel, Vivo, Jolina, Sita, Anggel, Siska, Evi, Puput, vii


viii


DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL .............................................................................................. i HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ................................................... ii HALAMAN PENGESAHAN .............................................................................. iii HALAMAN PERSEMBAHAN .......................................................................... iv PERYATAAN KEASLIAN KARYA .................................................................... v LEMBAR PERSYARATAN PERSETUJUAN .................................................. vi PRAKATA .......................................................................................................... vii DAFTAR ISI ........................................................................................................ ix DAFTAR TABEL .............................................................................................. xiii DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xiv DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xv INTISARI ........................................................................................................... xvi ABSTRACT ......................................................................................................... xvii BAB I. PENGANTAR ........................................................................................... 1 A. Latar Belakang ............................................................................................ 1 1. Rumusan masalah ................................................................................. 4 2. Keaslian penelitian ............................................................................... 5 3. Manfaat penelitian ................................................................................ 6 B. Tujuan Penelitian ....................................................................................... 6 1. Tujuan umum ........................................................................................ 6 2. Tujuan khusus ....................................................................................... 6

ix


BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA .................................................................... 7 A. Tanaman P. americana Mill. ..................................................................... 7 1. Nama lain ............................................................................................. 7 2. Sinonim ................................................................................................ 7 3. Taksonomi ............................................................................................ 7 4. Kandungan ........................................................................................... 8 5. Khasiat dan kegunaan .......................................................................... 8 B. Anatomi dan Fisiologi Hati ........................................................................ 8 C. Kerusakan Hati ......................................................................................... 10 1. Sirosis hati .......................................................................................... 10 2. Perlemakan hati .................................................................................. 10 3. Kolestasis ........................................................................................... 11 D. Karbon Tetraklorida ................................................................................. 11 E. Alanin Aminotransferase (ALT) dan Aspartat Aminotransferase (AST) . 13 F. Landasan Teori ......................................................................................... 14 G. Hipotesis ................................................................................................... 17 BAB III. METODE PENELITIAN .................................................................... 18 A. Jenis dan Rancangan Penelitian ............................................................... 18 B. Variabel dan Definisi Operasional ........................................................... 18 1. Variabel utama ................................................................................... 18 2. Variabel pengacau .............................................................................. 18 3. Definisi operasional ........................................................................... 19 C. Bahan Penelitian ....................................................................................... 20

x


1. Bahan utama ....................................................................................... 20 2. Bahan kimia ....................................................................................... 20 D. Alat Penelitian .......................................................................................... 21 1. Alat ekstraksi ...................................................................................... 21 2. Alat uji hepatoprotektif ...................................................................... 22 E. Tata Cara Penelitian ................................................................................. 22 1. Determinasi buah P. americana ......................................................... 22 2. Pengumpulan bahan uji ...................................................................... 22 3. Pembuatan serbuk kulit buah P. americana ....................................... 22 4. Penetapan kadar air dalam serbuk kering kulit buah P. americana .... 23 5. Pembuatan sediaan etanol kulit buah P.americana............................. 23 6. Pembuatan CMC-Na 1 % ................................................................... 24 7. Penetapan konsentrasi ekstrak ........................................................... 24 8. Penetapan dosis ekstrak etanol kulit buah P. americana ................... 25 9. Pembuatan larutan karbon tetraklorida dalam olive oil ...................... 25 10. Uji pendahuluan ................................................................................. 25 11. Pengelompokan hewan uji ................................................................. 26 12. Pembuatan serum ............................................................................... 27 13. Pengukuran aktivitas ALT–AST pada serum .................................... 27 F. Tata Cara Analisis Hasil ........................................................................... 28 BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................ 29 A. Penyiapan Bahan ...................................................................................... 29 1. Hasil determinasi tanaman ................................................................. 29

xi


2. Penetapan kadar air serbuk kering kulit buah P. americana ...............30 3. Pembuatan serbuk kulit buah P. americana........................................ 31 4. Pembuatan ekstrak etanol kulit buah P. americana ........................... 32 B. Uji Pendahuluan ....................................................................................... 34 1. Penentuan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida ............................. 34 2. Penentuan waktu pencuplikan darah hewan uji ................................. 36 3. Penetapan lama pemejanan ekstrak etanol kulit buah P. americana . 38 4. Penetapan dosis ekstrak etanol kulit buah P. americana ................... 39 C. Efek Hepatoprotektif Ekstrak Etanol Kulit Buah P. americana terhadap Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida ..................................................... 39 1. Kontrol negatif ................................................................................... 42 2. Kontrol hepatotoksik (karbon tetraklorida 2 mL/kgBB ...................... 43 3. Kontrol ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 1400 mg/kgBB 43 4. Kelompok perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350, 700, dan 1400 mg/kgBB pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB ...................................................................... 46 D. Rangkuman Pembahasan ......................................................................... 53 BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN .............................................................. 55 A. Kesimpulan .............................................................................................. 55 B. Saran ..........................................................................................................55 DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 57 LAMPIRAN ......................................................................................................... 62 BIOGRAFI PENULIS ......................................................................................... 93

xii


DAFTAR TABEL

Tabel I.

Komposisi dan Konsentrasi reagen ALT ............................................. 21

Tabel II. Komposisi dan Konsentrasi reagen AST ............................................. 21 Tabel III. Purata aktivitas serum ALT ± SE (U/I) tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam .. 36 Tabel IV. Hasil uji statistik aktivitas ALT setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada waktu pencuplikan darah ke-0, ke-24 dan ke-48 jam ....................................................................................................... 38 Tabel V. Purata ± SE aktivitas serum ALT dan AST, serta % efek hepatoprotektif tikus perlakuaan ekstrak etanol kulit buah P.americana terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB ................................................. 40 Tabel VI. Hasil uji Mann-Whitney aktivitas serum ALT tikus perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB ............................................................................................. 42 Tabel VII. Hasil uji Mann-Whitney aktivitas serum AST tikus perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB ............................................................................................. 42 Tabel VIII. Data purata dan Standar Eror aktivitas ALT pada jam ke-0, 24, dan 48 ......................................................................................................... 68

xiii


DAFTAR GAMBAR

Gambar 1.

Gambar hati ....................................................................................... 9

Gambar 2.

Mekanisme toksisitas karbon tetraklorida ........................................ 13

Gambar 3. Diagram batang rata-rata aktivitas ALT sel hati tikus, setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam .............................................................................. 37 Gambar 4. Diagram batang rata-rata aktivitas serum AST tikus perlakuaan pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana ......................... 41 Gambar 5. Diagram batang rata-rata aktivitas serum ALT tikus perlakuaan pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana ........................ 41

xiv


DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Foto bagian kulit buah P. americana Mill. .................................... 63 Lampiran 2. Foto serbuk kulit buah P. americana Mill. .................................... 63 Lampiran 3. Foto ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. .......................... 63 Lampiran 4. Foto larutan ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. ............. 63 Lampiran 5. Surat pengesahan determinasi buah P. americana Mill. ................ 64 Lampiran 6. Determinasi buah P. americana Mill. ............................................ 65 Lampiran 7. Perhitungan persen rendemen ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. ................................................................................................. 65 Lampiran 8. Surat keterangan kadar air kulit buah P. americana Mill. .............. 66 Lampiran 9. Surat pengesahan Medical and Health Research Ethics Committe (MHREC) ........................................................................................ 67 Lampiran10. Hasil uji statistik orientasi pencuplikan darah ................................ 68 Lampiran 11. Analisis statistik aktivitas serum ALT perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB ........................................................................................ 71 Lampiran 12. Analisis statistik aktivitas serum AST perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB ........................................................................................ 81 Lampiran 13. Perhitungan konversi dosis untuk manusia ................................... 91 Lampiran 14. Perhitungan efek hepatoprotektif ................................................... 92 Lampiran 15. Konversi waktu tikus ke manusia ...................................................92

xv


INTISARI Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan informasi efek hepatoprotektif pemberian ekstrak etanol jangka pendek kulit buah P. americana pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida dengan melihat penurunan aktivitas alanin transaminase (ALT) dan aspartat transaminase (AST) serta untuk mengetahui dosis efektif pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan acak lengkap pola searah. Tiga puluh ekor tikus dibagi ke dalam enam kelompok perlakuan secara acak dengan masing-masing sebanyak 5 ekor tikus. Kelompok I sebagai kontrol hepatotoksin diberikan larutan karbon tetrakolrida 2 mL/kgBB. Kelompok II sebagai kontrol negatif diberikan olive oil 2 mL/kgBB. Kelompok III sebagai kontrol ekstrak diberikan ekstrak etanol kulit buah P. americana 1.400 mg/kgBB. Kelompok IV, V, dan IV diberi ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350, 700 dan 1.400 mg/kgBB. Jam ke-6 setelah pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana, maka kelompok IV-VI dipejani dengan karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB secara intraperitonial, lalu setelah 24 jam diambil darah melalui sinus orbitalis mata, kemudian dilakukan pengujian aktivitas ALT-AST. Penurunan nilai aktivitas ALT dan AST merupakan gambaran efek hepatoprotektif dari ekstrak etanol kulit buah P. americana, dimana aktiviatas ALT dan AST merupakan indikator kerusakan hepar. Berdasarkan hasil penelitian, ekstrak etanol kulit buah P. americana memberikan efek hepatoprotektif yang ditunjukkan dengan penurunan nilai aktivitas serum ALT-AST pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida. Hasil penelitian yang diperoleh ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350, 700 dan 1.400 mg/kgBB memiliki persen efek hepatoprotektif berturut-turut sebesar 83,1; 17,9 dan 73,8 %. Dosis efektif yang diperoleh dari hasil penelitian ini adalah dosis 350 mg/kgBB. Kata kunci : Persea americana Mill., hepatoprotektif, karbon tetraklorida, ALT, AST

xvi


ABSTRACT This research is aimed at getting information about hepatoprotective effect of ethanol extract Persea americana Mill. skin for reducing activity of ALT and AST serum in rats induced by carbon tetrachloride and to know effective dose of ethanol extract fruit peel P. americana. This research was an experimental research with direct randomized design. Thirty Wistar male rats were divided into six treatment groups were randomized to each of as many as 5 rats. The first group (hepatotoxin control) was given carbon tetrachloride 2 mL/kgBW. Then, the second group (negative control) was given olive oil 2 mL/kgBW. Third group (extract control) was given ethanol extract fruit peel Persea americana Mill. 1.4 g/kgBW. Groups IV, V, and IV was given ethanol extract of P. americana fruit peel doses of 0.35, 0.70, and 1.4 g / kgBW. Six hours after the administration of ethanol extract of P.americana fruit peel, the group IV-VI was given carbon tetrachloride dose of 2 mL/kg in intraperitonial, blood was collected from the orbital sinus eye to be measured ALT and AST serum activity. Impairment of activities of ALT and AST is a picture hepatoprotective effect of the ethanol extract of P.americana fruit peel, where activity ALT and AST is an indicator of liver damage. Based of the result of the research, ethanol extract fruit peel Persea americana Mill. skin gave hepatoprotective effects for reducing activity of ALT and AST serum in rats induced by carbon tetrachloride. The results obtained bark ethanol extract of P. americana fruit peel doses of 0.35, 0.70, and 1.4 g / kg has a percent hepatoprotective effect respectively 83.1; 17.9; and 73.8%. Effective dose obtained from this study is that the dose of 0.35 g / kgBB. Keywords : Persea americana Mill. skin, hepatoprotective, carbon tetrachlorde, ALT, AST

xvii


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Hepar merupakan kelenjar paling besar dari tubuh. Tiga fungsi utama hepar adalah (1) produksi dan sekresi empedu ke dalam saluran cerna, (2) berperan pada metabolisme lemak, karbohidrat, dan protein, dan (3) sebagai filter dari darah terhadap kuman maupun zat-zat toksik (Widjaja, 2008). Hepar memiliki fungsi dalam detoksifikasi dan inaktivasi zat kimia yang masuk dalam tubuh sehingga zat kimia tersebut menjadi tidak berbahaya bagi tubuh, akibatnya kerusakan fungsi pada organ hepar sehingga kemampuan regenerasi sel hepar menghilang dan hepar mengalami kerusakan yang permanen. Kerusakan hepar tersebut dapat menimbulkan kematian (Elya, Juheini, dan Emiyanah, 2010). Menurut data yang diambil dari rekam medis pasien pada periode 20102011 diketahui bahwa sebanyak 50 pasien (96% ) menggunakan obat penginduksi kerusakan hati. Obat-obat yang banyak digunakan yaitu ranitidin (31,3%), seftriakson (23,1 %), dan paracetamol (16,4%) (Cinthya, Ivan dan Rizky, 2012). Menurut Elya dkk. (2010) bahwa untuk melihat fungsi organ hepar dapat dilakukan dengan pengukuran aktivitas enzim aminotransferase, yaitu AST (Aspartat aminotransferase) dan ALT (Alanin aminotransferase) yang terdapat dalam plasma darah. Menurut Panjaitan, Ekowati, Chairul, Masriani, Zulfa, dan Wasmen (2007), bahwa kerusakan hati ditandai dengan peningkatan kadar enzim ALT, AST, alkali fosfatase (ALP), bilirubin total, dan protein total dalam serum.

1

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 2

Karbon tetraklorida (CCL4) digunakan dalam penelitian ini sebagai senyawa model yang dapat merusak fungsi hepar. Karbon tetraklorida (CCl4) digunakan sebagai pemicu radikal bebas sebagai penyebab gangguan integritas membran hepatosit sehingga menyebabkan keluarnya berbagai enzim dari hepatosit. Enzim yang keluar dari hepatosit akan meningkat kadarnya dalam serum sehingga dapat menjadi indikator kerusakan hepar (Handoko, 2005). Karbon tetraklorida dapat menyebabkan degenerasi hidrofik, degenerasi melemak dan zona nekrosis yang dilihat dari histopatologi jaringan hati (Kardena dan Ida, 2011). Penelitian Nopitasari (2013) menyatakan bahwa karbon tetraklorida terbukti dapat meningkatkan aktivitas serum ALT dan AST yang tinggi dengan dosis pemberian 2 mL/kg BB secara intraperitonial (i.p). Pemanfaatan tanaman obat memainkan peran penting sebagai solusi dalam menjaga kesehatan, mengatasi masalah kesehatan dan meningkatkan kulitas hidup manusia, sehingga perlu dipertanggungjawabkan tentang khasiat tanaman yang akan dipergunakan. P. americana Mill. merupakan salah satu jenis buah alpukat yang berpotensi di Indonesia (Alfansuri, 2012). Vinha, Joana dan Sergio (2013) menyebutkan bahwa di dalam kulit buah alpukat terdapat flavonoid, karotenoid, fenolik, vitamin C dan vitamin E. Flavonoid, atau bioflavonoid, adalah kelompok senyawa polifenol yang terkandung dalam kebanyakan tanaman, dimana berpusat di biji, kulit buah, kulit kayu, dan bunga. Sejumlah besar tanaman obat-obatan mengandung flavonoid, yang memiliki aktivitas antibakteri, anti-inflamasi, anti alergi, antimutagenik, antivirus, antineoplastik, anti-trombotik, dan tindakan vasodilatasi. Selain itu,


flavonoid dibeberapa penelitian juga memberikan aktivitas antioksidan (Miller, 1996). Flavonoid diduga berpengaruh dalam menghambat kerusakan hepar dengan cara mengikat radikal bebas sehingga dampaknya terhadap kerusakan hepar berkurang (Handoko, 2005). Pada penelitian ini digunakan ekstrak etanol kulit buah P. americana dengan dasar penelitian Carpena, David, Maria, Petri, dan Mario (2011) menyatakan bahwa dalam biji P. americana dapat diperoleh senyawa fenolik dan aktivitas antioksidan dari hasil isolasi dengan pelarut organik bersifat polar. Penggunaaan pelarut etanol diharapkan mampu menarik senyawa fenolik dan aktivitas antioksidan dari biji P. americana, sehingga dilakukan cara yang sama pada kulit buah P. americana untuk menarik senyawa fenolik dan aktivitas antioksidan yang terkandung di dalam kulit buah P. americana. Waktu pemejanan ekstrak etanol kulit buah P.americana dipilih rentang 6 jam sebelum induksi karbon tetraklorida dengan tujuan untuk melihat aktivitas dari ekstrak etanol kulit buah P.americana dalam mengatasi kerusakan hati akibat kerusakan yang ditimbulkan dari induksi karbon tetraklorida. Hal tersebut berdasarkan penelitian Sasadara (2013) yang menyatakan waktu paling efektif dalam memperoleh efek hepatoprotektif sebesar 101% pada perlakuan jam ke-6 pemberian ekstrak metanol biji P. americana. Nopitasari (2013) menyatakan bahwa efek hepatoprotektif yang dihasilkan dari ekstrak etanol biji P.americana dengan dosis 350; 700 dan 1.400 mg/kgBB berturut-turut sebesar 76,8; 76,5 dan 72,4 %.


Penelitian ini menggunakan hewan uji tikus jantan sebab penelitian ini merupakan penelitian lanjutan sehingga jenis kelamin hewan uji juga disamakan dengan penelitian sebelumnya. Menurut penelitian Nopitasari (2013) bahwa ekstrak atanol biji Persea americana Mill. dipejankan pada hewan uji tikus jantan. Berdasarkan hal tersebut peneliti memiliki dasar yang kuat untuk dilakukannya penelitian tentang pengaruh pemberian jangka pendek ekstrak etanol kulit buah P. americana terhadap aktivitas ALT dan AST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Penelitian ini dilakukan dalam jangka pendek untuk mengetahui dosis pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. yang paling efektif dalam mengatasi efek hepatoprotektif.

1.

Rumusan masalah a. Apakah pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. jangka pendek memberikan pengaruh hepatoprotektif terhadap penurunan aktivitas ALT-AST pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida? b. Berapakah dosis efektif pemberian jangka pendek ekstrak etanol kulit buah

P.

americana

Mill.

yang

dapat

memberikan

pengaruh

hepatoprotektif pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida ? 2.

Keaslian penelitian Vinha dkk. (2013), melaporkan bahwa di dalam kulit alpukat

mengandung flavonoid, karotenoid, fenolik, vitamin C dan vitamin E. Malanggi, meiske dan Jessi (2012) melaporkan bahwa ekstrak etanol biji P. americana Mill.


memiliki persen aktivitas antioksidan yang tinggi

(93,045%) sehingga dapat

dipertimbangkan sebagai salah satu sumber antioksidan alami. Imafidon dan Amaechina (2010) melaporkan bahwa ekstrak biji P.americana Mill. efektif dalam pengobatan hipertensi. Zuhrotun (2007) melaporkan bahwa ekstrak etanol biji buah alpukat dapat meningkatkan aktivitas antidiabetes pada tikus yang dibuat hiperglikemik. simplisia dan ekstrak etanol biji buah alpukat bentuk bulat mengandung senyawa polifenol, tannin, flavonoid, triterpenoid, kuinon, monoterpenoid dan seskuiterpenoid, sedangkan saponin hanya terdeteksi dalam ekstrak. Arukwe, Amadi, Duru, Agomuo, Adindu, dan Odika (2012) melaporkan P. americana pada daun, buah, dan biji mengandung senyawa kimia seperti tanin, flavonoid, dan fenol. Penelitian yang dilakukan oleh Panjaitan et al. (2007) melaporkan bahwa kerusakan hati ditandai dengan peningkatan kadar enzim alanin transaminase (ALT), aspartat transaminase (AST), alkali fosfatase (ALP), bilirubin total, dan protein total dalam serum. Elya et al. (2010) mengukur

aktivitas enzim

aminotransferase (AST dan ALT) sebagai parameter untuk melihat apakah pemberian ekstrak etanol daun gandarusa pada mencit menimbulkan efek toksik pada hati mencit. Penelitian Nopitasari (2013) melaporkan bahwa ekstrak biji P. americana Mill. memiliki pengaruh hepatoprotektif terhadap aktivitas ALT dan AST serum pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Sejauh penelusuran pustaka yang dilakukan, penelitian efek hepatoprotektif jangka pendek ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. terhadap aktivitas ALT-AST tikus jantan galus Wistar terinduksi karbon tetraklorida belum pernah dilakukan.


3.

Manfaat penelitian a. Manfaat teoritis. Penelitian ini di harapkan dapat bermanfaat bagi

perkembangan ilmu pengetahuan dalam pengobatan alternatif dengan kulit buah P. americana Mill. sebagai hepatoprotektif. b. Manfaat praktis. Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi bagi masyarakat mengenai dosis efektif ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. sebagai hepatoprotektif.

B. Tujuan Penelitian 1.

Tujuan umum Membuktikan adanya pengaruh hepatoprotektif ekstrak etanol kulit buah

P. americana Mill. jangka pendek tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida. 2.

Tujuan khusus Mengetahui dosis efektif ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill.

jangka pendek dapat memberikan efek hepatoprotektif tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Tanaman P. americana Mill. 1.

Nama lain Buah

Apukado, Avocado, Buah Mentega (malaysia), Alligatorbirne,

Avocadobirne (Jerman), Avocado (Filipina), Adpukat, Avokad, Buah Apokat (Indonesia), avocado (Italia), Abokado, Peruse (jepang) (Lim, 2012). 2.

Sinonim Laurus persea.L, Persea drymifolia Schlecht. And cham, Persea

gratissima Gaertn.f, Persea nubigena (Yasir, Das dan Kharya, 2010). 3.

Taksonomi Kingdom

: Plantae

Subkingdom

: Tracheobionta

Super Divisi

: Spermatophyta

Divisi

: Magnoliophyta

Kelas

: Magnoliopsida

Sub Kelas

: Magnoliidae

Ordo

: Laurales

Famili

: Lauraceae

Genus

: Persea

Spesies

: P. americana Mill. (Yasir et al., 2010)

7


4.

Kandungan Penelitian Kumala, Hesty, dan Wahyu (2013) menyebutkan hasil

skrining fitokimia daun P.americana memiliki kandungan flavonoid, saponin dan coumarin. Vinha dkk. (2013) menyebutkan bahwa di dalam kulit alpukat mengandung senyawa fenolik, flavonoid, karotenoid, vitamin C dan vitamin E. Penelitian lain mengandung

Arukwe dkk. (2012) menyebutkan pada biji P.americana tanin, flavonoid dan fenol. Biji alpukat kering yang berwarna

kecoklatan memiliki kandungan tanin (117 mg/kg) dan aktivitas antioksidan yang tinggi (93,045%) sehingga dapat dipertimbangkan sebagai salah satu sumber antioksidan alami (Malanggi et al., 2012). 5.

Khasiat dan kegunaan Penelitian Kumala dkk. (2013) menyebutkan kandungan metabolit daun

P.americana Mill, memiliki khasiat yang efektif sebagai antitumor, anti-inflamasi, antibakteri, antivirus dan antihepatotoksik. Kulit alpukat mengandung senyawa kimia (flavonoid) yang diduga dapat bekerja sebagai bahan aktif tabir surya (Mokodompit, Hosea, dan Weny, 2013). B. Anatomi dan Fisiologi Hati Hepar adalah kelenjar yang paling besar dalam tubuh manusia dengan berat 1500 gram atau 1,5 kg. Bagian superior dari hepar cembung dan terletak di bawah kubah kanan diafragma. Bagian inferior hepar cekung dan dibawahnya terdapat ginjal kanan, gaster, pankreas, dan usus. Hepar dibagi menjadi dua lobus, yaitu lobus kiri dan kanan. (Baradero, Marry, dan Yakobus, 2008). Hati memiliki


bentuk umum prisma, dengan basisnya ke kanan dan puncaknya ke kiri, pernyataan ini dapat dilihat pada gambar dibawah ini:

Gambar 1. Gambar hati (Medscape, 2013). Hepar menerima dua macam darah yaitu darah yang kaya dengan oksigen melalui arteria hepatika dan darah yang mengandung lebih banyak karbon dioksida melalui vena porta. Salah satu fungsi utama hepar sebagai alat pencernaan adalah menyekresi empedu. Empedu adalah cairan yang basa, mengandung natrium bikarbonat, garam-garam empedu, pigmen empedu, kolesterol, dan bilirubin. Hepar melaksanakan fungsi yang vital, sehingga manusia tidak dapat hidup tanpa hepar. Hepar mempunyai peranan penting dalam metabolisme karbohidrat, protein, dan lemak, yang dibawa ke hepar melalui vena porta setelah absorpsi oleh vili usus halus (Baradero et al., 2008). Hepar mendapat darah dari arteriae hepaticae 30% dan dari vena porta hepatis 70%. Arteriae hepatica kanan dan kiri membawa darah yang kaya akan oksigen. Sebaliknya darah dari vena porta hepatis miskin akan oksigen tetapi kaya


akan hasil absorbsi makanan dari saluran pencernaan makanan. Darah vena dari hepar dialirkan ke vena hepatica yang selanjutnya masuk ke dalam vena cava inferior (Widjaja, 2008). C. Kerusakan Hati Kerusakan hati dapat dibagi dalam beberapa jenis sebagai akibat dari efek toksik yang disebabkan oleh toksisitas, antara lain adalah : 1.

Sirosis hati Setelah terjadi peradangan dan bengkak, hati mencoba memperbaiki

dengan membentuk bekas luka atau parut kecit. Parut ini disebut “fibrosis” yang membuat hati lebih sulit melakukan fungsinya. Sewaktu kerusakkan berjalan, semakin banyak parut terbentuk dan mulai menyatu, dalam tahap selanjutnya disebut “sirosis”. Pada sirosis, area hati yang rusak dapat menjadi sikatriks. Darah tidak padat mengalir dengan baik pada jaringan hati yang rusak dan hati mulai menciut, serta menjadi keras. Sirosis hati dapat terjadi karena virus Hepatitis B dan C yang berkelanjutan, alkohol, perlemakan hati atau penyakit lain yang menyebabkan sumbatan saluran empedu. Sirosis tidak dapat disembuhkan, pengobatan dilakukan untuk mengobati komplikasi yang terjadi seperti muntah dan keluar darah pada feses. Pemeriksaan yang dilakukan untuk deteksi adanya sirosis hati adalah pemeriksaan enzim SGOT-SGPT, waktu protombin dan protein (Albumin-Globulin) Elektroforesis (rasio Albumin-Globulin terbalik). 2.

Perlemakan hati Perlemakan hati terjadi bila penimbunan lemak melebihi 5% dari berat

hati atau mengenai lebih dari sepuluh jaringan sel hati. Perlemakan hati ini sering


berpotensi menjadi penyebab kerusakan hati dan sirosis hati. Kelainan ini dapat timbul karena mengkonsumsi alkohol berlebih, disebut Alcoholic Steatohepatitis (ASH), maupun bukan karena alkohol, disebut Non Alcoholic Steatohepatitis (NASH). 3.

Kolestasis Kolestasis merupakan keadaan akibat kegagalan produksi dan/atau

pengeluaran empedu. Lamanya menderita kolestasis dapat menyebabkan gagalnya penyerapan lemak dan vitamin A, D, E, K oleh usus, juga adanya penumpukan asam empedu, bilirubin dan kelosterol di hati (Direktorat Bina Farmasi Komunitas dan Klinik, DITJEN Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan, 2007). D. Karbon Tetraklorida Karbon tetraklorida merupakan molekul sederhana yang biasanya digunakan dalam berbagai spesies, menyebabkan nekrosis dan perlemakan pada hepar. Hati merupakan target utama dari toksisitas karbon tetraklorida yang bergantung pada aktivitas metabolisme dari CYP2E1. Hati mengandung konsentrasi sitokrom P-450, terutama di daerah centrilobular. Destruksi sitokrom P-450 terjadi di daerah centrilobular dan mid-zonal di hepar (Timbrell, 2009). Karbon tetraklorida mengakibatkan kerusakan pada semua organ, khususnya pada ginjal (edema dan degenerasi lemak yang nyata pada tubuli) dan hepar (nekrosis sentrilobular dan degenerasi lemak). Manisfestasinya adalah berupa oliguria, ekterus, dan koma. Perbaikan fungsi yang menyeluruh pada hepar dan ginjal masih dimungkinkan, tetapi secara perlahan (lambat) ( Staf Pengajar Departemen Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijaya, 2008).


Karbon tetraklorida merupakan senyawa yang lazim digunakan dalam penelitian sebagai penginduksi kerusakan hati sehingga sering digunakan dalam pengujian aktivitas hepatoprotektor suatu zat. Karbon tetraklorida (CCL4) akan diubah oleh enzim Cytochorm P 450 yang ada di dalam hati menjadi CCL4 suatu radikal bebas yang menyebabkan autolisis asam lemak yang terdapat pada fosfolipid membran sel sehingga terjadi peningkatan permeabilitas membran sel dan kerusakan membran sel. Tampak sel radang kronik. Adanya perdarahan dimungkinkan radikal bebas merusak endotel pembuluh darah pada hati (Chodidjah, Eni, dan Utari, 2007). Nugraha, Ninisita, dan Sri (2008) dalam penelitian pemeriksaan histopatologi bahwa induksi CCl4 mengakibatkan degenarasi sel dan nekrosis, ditandai dengan perubahan bentuk hepatosit dari simetris menjadi lebih besar dan tidak simetris. Hepatosit normal nampak lengkap dengan inti dan bentuk yang simetris. Hepatosit dengan degenerasi sel dan nekrosis nampak adanya perubahan bentuk dan keberadan inti sel. Induksi CCl4 menimbulkan radikal bebas yang memicu terjadinya fibrosis hati. Dalam penelitian yang dilakukan, ketika ada perlakuan dengan CCl4, hati menunjukkan perubahan drastis, perubahan lemak yang luas, hepatosit membesar, compressed sinusoids, degenerasi lemak, nekrosis dan infiltrasi oleh sel-sel inflamasi (Arhoghro, Ekpo, dan Ibeh, 2009). Buku McPhee dan William (2006) memperkirakan mekanisme penyakit hati akibat karbon tetraklorida memiliki efek radikal bebas yang menyebabkan peroksidasi lipid, selain itu juga terjadi perubahan utama morfologi hati yang ditimbulkan adalah toksik (nekrosis). Karbon tetraklorida dengan adanya enzim


sitokrom P-450 mengalami reduksi membentuk radikal bebas trichloromethyl (●CCl3) kemudian diubah menjadi radikal triklorometilperoksi (CCl3O2●) yang memiliki sifat lebih reaktif (Gambar 2). Paparan dari karbon tetraklorida dapat meyebabkan sirosis hati, tumor hati, dan juga dapat meyebabkan kerusakan ginjal (Timbrell, 2009).

Gambar 2 . Mekanisme toksisitas karbon tetraklorida (Timbrell, 2009).

E. Alanin Aminotransferase (ALT) dan Aspartat Aminotransferase (AST) Alanin aminotransferase (ALT) dan aspartat aminotransferase (AST) merupakan serum yang sering digunakan untuk melihat kerusakan sel hati (Dipiro, Robert, Gary, Gry, Barbara, dan Michael, 2008). AST dan ALT serum sering disebut uji fungsi hati, merupakan pengukuran kadar enzim-enzim yang normalnya terletak di dalam hapatosit. Keberadaan keduanya dalam serum adalah tanda nekrosis sel hati dan bukan merupakan indikasi sejati fungsi hati (McPhee


dkk., 2006). Peningkatan aktivitas ALT dalam serum merupakan indikator adanya kerusakan yang terjadi dalam sel hati, terutama kerusakan yang bersifat akut (Sari, Azizahwati, dan Retno, 2008). Penelitian yang dilakukan oleh Elya, et al., (2010) mengukur aktivitas enzim aminotransferase (AST dan ALT) sebagai parameter untuk melihat apakah pemberian ekstrak etanol daun gandarusa pada mencit menimbulkan efek toksik pada hati mencit. Alasannya adalah peningkatan kadar AST dan ALT dalam darah dapat terjadi apabila ada pelepasan enzim secara intraseluler ke dalam darah yang disebabkan oleh nekrosis sel-sel hati atau adanya kerusakan hati secara akut, misalnya nekrosis hepatoselular atau infark miokard akut. F. Landasan Teori Hepar merupakan kelenjar paling besar dari tubuh. Tiga fungsi utama hepar adalah (1) produksi dan sekresi empedu kedalam saluran cerna, (2) berperan pada metabolisme lemak, karbohidrat, dan protein, dan (3) sebagai filter dari darah terhadap kuman maupun zat-zat toksik (Widjaja, 2008). Fungsi normal hati antara lain metabolisme energi dan interkonversi substrat, membentuk protein, melarutkan, mengangkut dan menyimpan beragam zat yang tanpa peran hati akan sulit diperoleh atau diserap dan dikeluarkan oleh jaringan (McPhee dkk., 2006). Karbon tetraklorida merupakan senyawa yang lazim digunakan dalam penelitian sebagai penginduksi kerusakan hati sehingga sering digunakan dalam pengujian aktivitas hepatoprotektor suatu zat. Karbon tetraklorida (CCL4) akan diubah oleh enzim Sitokrom P 450 yang ada di dalam hati menjadi CCL4 suatu radikal bebas yang menyebabkan autolisis asam lemak yang terdapat pada


fosfolipid membran sel sehingga terjadi peningkatan permeabilitas membran sel dan kerusakan membran sel. Tampak sel radang kronik. Adanya perdarahan dimungkinkan radikal bebas merusak endotel pembuluh darah pada hati (Chodidjah et al., 2007). Penelitian Kumala dkk. (2013) menyebutkan hasil skrining fitokimia daun P.americana memiliki kandungan flavonoid, saponin dan coumarin. Malanggi dkk. (2012) menyebutkan bahwa di dalam biji alpukat memiliki persen aktivitas antioksidan yang tinggi (93,045%) sehingga dapat dipertimbangkan sebagai salah satu sumber antioksidan alami. Berdasarkan penelitian Carpena dkk. (2011), bahwa biji P. americana mengandung senyawa fenolik dari hasil isolasi dengan pelarut organik yang bersifat polar. Penelitian Nopitasari (2013) menduga kandungan dalam biji buah P.americana yaitu senyawa flavonoid dan fenol yang dapat tersari oleh pelarut yang bersifat polar yaitu etanol mampu melindungi sel hati yang ditunjukkan dengan penurunan aktivitas ALT dan AST. Pernyataan Nopitasari didukung dengan perolehan persen hepatoprotektif ekstrak etanol biji buah P. americana dengan dosis 0,35; 0,70 dan 1,40 g/kgBB berturu-turut sebesar 76,8; 76,5 dan 72,4 %. Antioksidan biji buah P.americana berfungsi menghambat radikal bebas dengan menginisiasi rantai reaksi oksidasi atau propagasi pada rantai reaksi oksidasi, sehingga kerusakan oksidatif dapat berkurang. Pemberian ekstrak metanol-air biji buah P.americana pada jam ke-1, 4, dan 6 memberikan efek hepatoprotektif yang berbeda signifikan antar kelompok dengan persen hepatoprotektif secara berturut-turut sebesar 67,7; 92,5 dan 101% (Sasadara, 2013). Kulit alpukat terkandung beberapa senyawa kimia (flavonoid) yang diduga


dapat bekerja sebagai bahan aktif tabir surya (Mokodompit et al., 2013). Vinha dkk. (2013) menyebutkan bahwa di dalam kulit buah alpukat mengandung senyawa flavonoid sebesar 44,3±3,1 mg/100g, sedangkan dalam penelitian Arukwe et al., 2012 menyebutkan bahwa dalam biji buah P. americana mengandung flavonoid 1,90±0,07 mg/100g. Menurut Wijayanti, Syarifuddin, dan Soesanto, (2003) bahwa flavonoid rutin 100 mg dalam 0,5 mL aquades mampu menjaga konsentrasi protein mikrosomal hati atau mimiliki daya antioksidan dalam melindungi molekul protein dari radikal bebas CCl4. Penelitian Redha, (2010) menyatakan bahwa flavonoid sebagai salah satu kelompok senyawa fenolik yang banyak terdapat pada jaringan tanaman dapat berperan sebagai antioksidan. Aktivitas antioksidan flavonoid bersumber pada kemampuan mendonasikan atom hidrogennya atau melalui kemampuan mengkelat logam. Penelitian Carpena dkk . (2011) berpendapat bahwa dalam biji P. americana dapat diperoleh senyawa fenolik dan aktivitas antioksidan dari hasil isolasi dengan pelarut organik bersifat polar. Penelitian Andriani, (2014) menyebutkan bahwa hasil isolasi yang diperoleh menggunakan pelarut metanol dengan nilai Rf 0,286 diduga merupakan senyawa flavonoid. Menurut Purwanti (cit., Nopitasari, 2013) etanol dan metanol merupakan pelarut yang termasuk golongan alkohol yang pada umumnya bersifat polar. Namun kedua pelarut tersebut memiliki tingkat kepolaran yang berbeda, dimana metanol memiliki tingkat kepolaran yang lebih polar bila dibandingkan dengan pelarut etanol karena memiliki jumlah atom C yang lebih sedikit.


G. Hipotesis Pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. jangka pendek memiliki efek hepatotoprotektif pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida.


BAB III METODE PENELITIAN

A.

Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah. B. 1.

Variabel dan Definisi Operasional

Variabel utama a. Variabel bebas. Variabel bebas yang dipakai dalam penelitian ini adalah variasi dosis ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill.. b. Variabel tergantung. Variabel tergantung yang dipakai dalam penelitian ini adalah efek hepatoprotektif ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. yang dilihat dari aktivitas ALT - AST tikus jantan galur Wistar.

2.

Variabel pengacau a. Variabel pengacau terkendali. Kondisi hewan uji, yaitu tikus galur Wistar berjenis kelamin jantan, umur 2-3 bulan dan mempunyai berat badan 150-250 g, frekuensi pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana selama 6 jam dan pemberiannya secara per oral, cara pemberian hepatotoksin secara intraperitonial, bahan uji yang digunakan berupa kulit buah P. americana. b. Variabel pengacau tak terkendali Kondisi patologis dari hewan uji.

18


3.

Definisi operasional a. Kulit buah P. americana. Kulit buah P. americana diambil dari buah P. americana Mill. yang telah matang, memiliki warna kulit yang hijau tua, kulit buah tidak busuk dan masih segar, diperoleh dari satu depot Es Teler yaitu Es Teler 77 dan diambil selama periode juni-juli 2014. b. Ekstrak etanol kulit buah P. american Mill.. Ektrak etanol kulit buah P. americana merupakan ekstrak kental dari serbuk kering kulit buah P. americana seberat 40,0 g yang dilarutkan dalam 200 mL pelarut etanol 70% secara maserasi selama 5x24 jam, hasil maserasi kemudian disaring menggunakan corong Buchner yang dilapisi kertas saring, sehingga diperoleh filtrat. Serbuk sisa perendaman diremaserasi kembali dengan pelarut etanol 70% selama 2 hari dengan sesekali penggojogan. Setelah dilakukan penggojogan disaring, dievaporasi, diuapkan di atas waterbath pada suhu 800C hingga bobot tetap. c. Efek hepatoprotektif. Kemampuan ekstrak etanol kulit buah P. americana terhadap penurunan ALT-AST tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida yang sebelumnya telah diberikan ekstrak etanol kulit buah P. americana dalam jangka pendek d. Pemberian jangka pendek. Pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana kepada hewan uji dengan waktu 6 jam sebelum pemberian karbon tetraklorida. e. Dosis efektif. Pemilihan dosis terkecil yang mampu memberikan penurunan aktivitas serum ALT dan AST.


C. Bahan Penelitian 1. Bahan utama a. Hewan uji yang digunakan adalah tikus jantan galur Wistar berumur 2-3 bulan dengan berat badan 150-250 g yang diperoleh dari Laboratorium Imunologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. b. Bahan uji yang digunakan adalah serbuk kering kulit buah P. americana yang diperoleh dari sebuah depot Es Teler 77 di Yogyakarta bulan JuniJuli 2014. 2.

Bahan kimia a. Karbon tetraklorida yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta b. Etanol (pelarut ekstrak) diperoleh dari General Labora Yogyakarta c. Pelarut yang digunakan untuk melarutkan ekstrak etanol kulit buah P. americana adalah larutan 1% CMC-Na yang diperoleh dari Laboratorium Biofarmasetika Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta d. Kontrol negatif yang digunakan adalah olive oil merk Bertoli yang dibeli dari Superindo Yogyakarta. e. Pelarut ekstrak etanol kulit buah P. americana yang digunakan adalah CMC-Na dalam bentuk serbuk yang diperoleh dari Laboratorium Biofarmasetika Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. f. Reagen ALT Reagen serum yang digunakan adalah reagen ALT Diasys. Komposisi dan Konsentrasi dari reagen ALT adalah sebagai berikut :


Tabel I. Komposisi dan Konsentrasi reagen ALT Komposisi R1 : TRIS L-Alanine LDH (Lactate dehydrogenase) R2 : 2-Oxoglutarate NADH Pyridoxal-5phosphate FS : Good’s buffer Pyridoxal-5- phosphate

pH

Konsentrasi

7.15

140 mmol/L 700 mmol/L ≥ 2300 U/L 85 mmol/L 1 mmol/L

9,6

100 mmol/L 13 mmol/L

g. Reagen AST Reagen serum yang digunakan adalah reagen AST Diasys. Komposisi dan Konsentrasi dari reagen AST adalah sebagai berikut : Tabel II. Komposisi dan Konsentrasi reagen AST Komposisi R1 : TRIS L-Aspartate MDH (malate dehydrogenase) LDH (lactate dehydrogenase) R2 : 2-Oxoglutarate NADH Pyridoxal-5phosphate FS : Good’s buffer Pyridoxal-5- phosphate

pH

Konsentrasi

7.15

110 mmol/L 320 mmol/L ≥ 800 U/L ≥ 1200 mmol/L 65 mmol/L 1 mmol/L

9,6

100 mmol/L 13 mmol/L

D. Alat Penelitian 1.

Alat ektraksi Alat-alat gelas yang meliputi gelas ukur, labu ukur, cawan porselen, Erlenmeyer, Bekker glass, corong Buchner, batang pengaduk, Mesin penyerbuk, pipet tetes, ayakan No. 40 Electric Sieve Shaker, timbangan


analitik Mettler, moisture balance, orbital shaker , rotary vacuum evaporator, oven, dan waterbath. 2.

Alat uji hepatoprotektif Alat-alat gelas yang meliputi Bekker glass, tabung reaksi, batang pengaduk, gelas ukur, pipet tetes. Timbangan elektrik, vortex Genie, sentrifuge Centurion, spuit per oral, spuit inta vena, syringe 3 cc Terumo®, pipa kapiler, dan tabung Eppendorf.

E. Tata Cara Penelitian 1.

Determinasi buah P. americana Determinasi dilakukan dengan mencocokkan buah P. americana yang diperoleh dari depot Es Teler 77 di Yogyakarta dengan buah P. americana berdasarkan acuan determinasi tanaman P. americana (Agrilink, 2001).

2.

Pengumpulan bahan uji Bahan uji yang digunakan adalah kulit buah P. americana. Pemilihan kulit buah P. americana yang digunakan adalah buah P. americana yang sudah matang, kulit buah yang masih segar, warna kulit hijau tua dan kulit buah tidak membusuk. Kulit buah P. americana diperoleh dari depot Es Teler 77 di Yogyakarta periode Juni –Juli 2014.

3.

Pembuatan serbuk kulit buah P. americana Kulit buah P.americana dicuci bersih di bawah air mengalir. Setelah bersih kulit dipotong kecil-kecil dan diangin-anginkan hingga kulit tidak tampak basah kemudian dilakukan pengeringan menggunakan oven pada


suhu 50˚C selama 24 jam. Setelah kering kulit dibuat serbuk dan diayak dengan ayakan nomor 40 karena jika serbuk terlalu halus akan mengendap pada saat maserasi sehingga mempengaruhi proses ekstraksi. Pernyataan tersebut berdasarkan teori bahwa pada saat melakukan ekstrak suatu simplisia, tidak jarang terjadi bagian (potongan) yang sangat halus dari simplisia melewati penyaring sehingga dapat membentuk endapan (Agoes, 2009) 4.

Penetapan kadar air dalam serbuk kering kulit buah P. americana Penetapan kadar air serbuk kulit buah P. americana bertujuan untuk mengetahui kadar air dalam serbuk dan untuk memenuhi persyaratan serbuk yang baik, yaitu kurang dari 10% (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995). Penetapan kadar air serbuk kulit buah P. americana dilakukan di Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu Universitas Gadjah Mada Yogyakarta menggunakan metode gravimetri.

5.

Pembuatan sediaan etanol kulit buah P. americana Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi. Sebanyak 40 g serbuk kulit buah P. americana direndam dalam 200 ml pelarut etanol 70% pada suhu kamar selama 5 x 24 jam. Setelah dilakukan perendaman, hasil maserasi kemudian disaring menggunakan corong Buchner yang dilapisi kertas saring sehingga diperoleh filtrat. Serbuk sisa perendaman dimaserasi kembali dengan 200 mL etanol 70 % selama 2 x 24 jam. Filtrat hasil saringan dipindahan ke labu alas bulat untuk dievaporasi untuk menguapkan cairan penyari pada proses maserasi. Hasil evaporasi dituangkan dalam cawan


porselen yang telah ditimbang sebelumnya karena hasil ekstrak merupakan ekstrak kental yang memiliki sifat lengket. Cawan porselen yang berisi larutan hasil evaporasi diuapkan di atas waterbath dengan suhu 800C untuk mendapatkan ekstrak etanol kulit buah P. amerciana dengan bobot pengeringan ekstrak yang tetap, kemudian dilakukan perhitungan rata-rata rendemen dari replikasi ekstrak etanol kulit buah P. americana kental yang telah dibuat. Persen rendemen ekstrak kental kulit buah P. americana diperoleh berdasarkan perhitungan : % Rendemen

6.

=

total ekstrak kulit buah 𝑃𝑃.𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎 Mill . total serbuk kulit buah 𝑃𝑃.𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎 Mill .

X 100%

Pembuatan CMC-Na 1% Ditimbang sebanyak 1,0 gram CMC-Na kemudian dilarutkan menggunakan aquadest 50 mL, didiamkan selama 24 jam hingga CMC-Na mengembang setelah itu di add dengan aquadest hingga 100 mL pada labu ukur 100 mL.

7.

Penetapan konsentrasi ekstrak Konsentrasi yang dapat digunakan yaitu konsentrasi pekat yang dapat dibuat dimana pada konsentrasi tersebut ekstrak dapat dimasukkan serta dikeluarkan dari spuit oral. Cara pembuatannya dengan melarutkan Sebanyak 3,5 gram ekstrak dalam labu ukur 50 mL dengan pelarut yang sesuai yaitu CMC-Na 1% sehingga konsentrasi ekstrak dapat ditetapkan sebesar 7% b/v atau 0,07 gram/mL atau 70 mg/mL. Penetapan konsentrasi ekstrak kulit buah P.americana ini mengacu pada penelitian Sasadara (2013).


8.

Penetapan dosis ekstrak etanol kulit buah P. amerciana Penetapan peringkat dosis didasarkan pada perhitungan dengan bobot tikus terbesar 250 mg, konsentrasi ektrak kulit buah P. americana yang dapat dimasukkan dan dikeluarkan melalui spuit oral yaitu 7% atau 70 mg/mL, serta volume maksimal pemberian oral yaitu 5 mL, maka dosis tertinggi dapat ditentukan sebagai berikut: BB x D = C x V 0,250 kg x D = 70 mg/mL x 5 mL  D= 1400 mg/kg BB Dosis tengah dan dosis rendah ditentukan dengan menurunkan dua kelipatan dari dosis tertinggi, sehingga diperoleh dosis 700 dan 350 mg/Kg BB. Dosis yang digunakan 350, 700, dan 1400 mg/kg BB. Penetapan dosis ekstrak etanol kulit buah P.americana ini mengacu pada penelitian Nopitasari (2013).

9.

Pembuatan larutan karbon tetraklorida dalam olive oil Larutan karbon tetraklorida dalam olive oil dibuat dengan cara mengambil volume karbon tetraklorida secara seksama, kemudian dilarutkan dengan olive oil dengan perbandingan 1 : 1.

10. Uji pendahuluan a.

Penetapan dosis hepatotoksik karbon tetraklorida Pemilihan dosis karbon tetraklorida dilakukan untuk mengetahui dosis karbon tetraklorida yang mampu menyebabkan kerusakan pada organ hati tikus dengan melihat peningkatan aktivitas serum ALT dan AST paling tinggi tetapi tidak menimbulkan kematian. Berdasarkan


penelitian Wijaya (2013) dosis 2 mL/KgBB karbon tetraklorida secara intraperitoneal mampu memberikan efek hepatotoksik. b.

Penetapan waktu cuplikan darah Aktivitas peningkatan ALT dan AST pada tikus teriduksi karbon tetraklorida dengan dosis 2 mL/KgBB secara intraperitoneal diukur pada jam ke-24, 48 dan72 setelah pemejanan. Hasil yang diperoleh dilihat kenaikan yang paling tinggi dari kedua serum tersebut. Waktu peningkatan serum ALT dan AST yang paling tinggi akan dijadikan sebagai waktu pencuplikan darah dalam penelitian antihepatotoksik.

c.

Penetapan waktu pemberian ekstrak kulit buah P. americana Pemberian ekstrak metanol biji P. americana pada rentang waktu 6 jam sebelum induksi karbon tetraklorida merupakan waktu yang paling efektif diberikan dengan nilai persen hepatoprotektif sebesar 101 % dengan dosis pemberian ekstrak metanol biji P. americana 350 mg/kgBB (Sasadara, 2013).

11. Pengelompokkan hewan uji Tiga puluh ekor tikus dibagi ke dalam enam kelompok perlakuan secara acak dengan masing-masing sebanyak 5 ekor tikus. a.

Kelompok I (kontrol hepatotoksin) larutan campuran karbon tetraklorida : olive oil (1:1) dosis 2 mL/kgBB secara intraperitoneal.

b.

Kelompok II (kontrol negatif) diberi olive oil dosis 2 mL/kgBB secara intraperitoneal.


c.

Kelompok III (kontrol ekstrak) diberi ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 1,4 g/kg BB secara peroral.

d.

Kelompok IV (dosis rendah) diberi ekstrak etanol kulit buah P. americana dengan dosis 0,35 g/kg BB secara peroral.

e.

Kelompok V (dosis tengah) diberi ekstrak etanol kulit buah P. americana dengan dosis 0,70 g/kg BB secara peroral.

f.

Kelompok VI (dosis tinggi) diberi ekstrak etanol kulit buah P. americana dengan dosis 1,4 g/kg BB secara peroral. Enam jam setelah pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana,

maka kelompok IV-VI dipejani dengan karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB secara intraperitoneal, lalu setelah 24 jam diambil darahnya melalui sinus orbitalis mata, kemudian dilakukan pengujian aktivitas ALT-AST. 12. Pembuatan serum Pengambilan darah dilakukan pada bagian sinus orbitalis mata tikus lalu ditampung dalam tabung Eppendorf. Darah didiamkan selama ± 15 menit, kemudian disentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 8000 rpm dan bagian supernatannya diambil. Kemudian dilakukan resentrifugasi dengan kecepatan 8000 rpm selama 10 menit. 13. Pengukuran aktivitas ALT-AST pada serum Aktivitas ALT dan AST dinyatakan dalam U/L. aktivitas enzim diukur pada panjang gelombang 340 nm, pada suhu 370C dengan faktor koreksi 1745. Pengukuran aktivitas ALT dan AST ini dilakukan di Laboratorium Parahita Yogyakarta.


F. Tata Cara Analisis Hasil Data aktivitas ALT-AST dianalisis dengan Kolmogorov-Smirnov untuk mengetahui normalitas data pada masing-masing kelompok perlakuan. Nilai normal suatu data ditunjukkan dengan nilai p>0,05. Apabila hasil analisis statistik Kolmogorov-Smirnov aktivitas ALT-AST menunjukkan distribusi data normal, dilanjutkan dengan analisis One Way Anova dengan tingkat kepercayaan 95%. Analisis ini digunakan untuk melihat homogenitas data. Apabila hasil tersebut menunjukkan nilai signifikansi (p>0,05), berarti data tersebut homogen. Tahap selanjutnya dengan uji Scheffe untuk mengetahui kebermaknaan perbedaan antar kelompok, jika diperoleh distribusi data yang tidak normal maka dilakukan analisis data menggunakan Kruskal-Wallis untuk melihat homogenitasnya, dan dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney untuk melihat kebermaknaan perbedaan antar kelompok. Menurut hepatoprotektif

penelitian

Wijaya

(2014)

perhitungan

persen

efek

terhadap hepatotoksin parasetamol diperoleh dengan rumus

sebagai berikut :

[1 −

(𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 −𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴 𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘 𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛 )

𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴 𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘 𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘 𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡 −𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴 𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘 𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛

] x 100%


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN Penelitian ini memiliki tujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian dan besar dosis efektif hepatoprotektif ekstrak etanol kulit buah P. americana jangka pendek pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida. Penelitian ini merupakan pengembangan dari penelitian sebelumnya yang sudah menguji mengenai efek hepatoprotektif ekstrak etanol biji P. americana jangka panjang terhadap tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida (Nopitasari, 2013). Pengukuran efek hepatoprotektif ekstrak etanol kulit buah P. americana dengan melihat hasil aktivitas serum ALT dan AST. Efek hepatoprotektif ditunjukkan berdasarkan penurunan aktivitas dari serum ALT dan AST setelah pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida. Aktivitas serum ALT dan AST yang diukur dalam penelitian ini karena berdasarkan penelitian-penelitian terdahulu pada umumnya kerusakan hati dapat dilihat dengan pengukuran aktivitas serum ALT dan AST. Menurut Sihombing dan Raflizar (2010), bahwa untuk menilai fungsi hepar dipilih uji serum transaminase yaitu ALT dan AST yang merupakan indikator sensitif pada kerusakan sel-sel hepar. A. Penyiapan Bahan 1.

Hasil determinasi tanaman Penelitian efek hepatoprotektif menggunakan kulit buah P. americana

sebagai bagian tanaman yang digunakan dalam uji aktivitas antihepatotoksik. Determinasi digunakan untuk memastikan kebenaran bagian tanaman yang

29


digunakan dalam penelitian. Proses deteminasi dilakukan di Laboratorium Farmakognosi

Fitokimia,

Fakultas

Farmasi

Universitas

Sanata

Dharma

Yogyakarta. Bagian tanaman yang digunakan dalam determinasi ini adalah buah P. americana yang dicocokkan dengan beberapa jenis P. americana yang terdapat diacuan determinasi tanaman P. americana (Agrilink, 2001). Pencocokan yang dilakukan antara lain bentuk, warna kulit, ketebalan kulit, permukaan kulit, ketebalan daging buah, dan berat buah. Berdasarkan hasil dari determinasi tersebut bahwa buah P. americana yang diperoleh dari salah satu depot Es Teler 77 di Yogyakarta paling mirip dengan P. americana jenis Endranol. 2.

Penetapan kadar air serbuk kering kulit buah P. americana Tujuan penetapan kadar air dari serbuk kulit P. americana adalah untuk

mengetahui serbuk yang digunakan telah memenuhi persyaratan serbuk yang baik, yaitu kurang dari 10 % (Direktrat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan, 1995), selain itu digunakan juga sebagai standarisasi serbuk yang digunakan dalam penelitian. Penetapan kadar air serbuk kulit buah P. americana di lakukan di LPPT Universitas Gadjah Mada Yogyakarta dengan hasil kadar air sebesar 7,1 % (terlampir) dengan metode gravimetri. Hasil ini menunjukkan bahwa kadar air dari serbuk kulit buah P. americana memenuhi syarat serbuk yang baik. Menurut Azizah dan Nina (2013), bahwa ekstrak sebagai bahan dan produk kefarmasian yang berasal dari simplisia harus memenuhi persyaratan yang telah ditetapkan untuk dapat menjadi obat herbal terstandar atau obat fitofarmaka. Salah satu parameter mutu ekstrak secara kimia adalah kandungan senyawa aktif simplisia tersebut. Selain itu, parameter non spesifik juga diperlukan untuk


mengetahui mutu ekstrak. Contoh parameter non spesifik yaitu penetapan kadar air, kadar abu, dan kadar abu tidak larut asam. Penelitian ini tidak melakukan penetapan kadar air ekstrak sebab hasil ekstrak yang didapatkan dalam penelitian ini tidak dijadikan sebagai obat herbal terstandar atau obat fitofarmaka, sehingga peneliti tidak melakukan uji mutu ekstrak yang digunakan. Selain itu, penelitian ini hanya melihat apakah dugaan flavonoid yang terkandung dalam ekstrak kulit buah P.americana mampu memberikan aktifitas antioksidan yang ditunjukkan dengan penurunan aktivitas ALT-AST, sehingga peneliti menganggap bahwa penetapan kadar air ekstrak etanol kulit buah P.americana tidak perlu dilakukan. penelitian ini merupakan penelitian payung, untuk menghemat biaya maka hanya dilakukan penetapan kadar air serbuk yang mewakili pemenuhan persyaratan serbuk yang baik, karena dalam penelitian payung yang dilakukan, semua penelitian menggunakan serbuk kulit buah P.americana. Pembeda penelitian payung ini salah satunya adalah bentuk sediaan. Penelitian lebih lanjut dapat dilakukan penetapan kandungan flavonoid ekstrak etanol kulit buah P.americana. Penetapan kandungan flavonoid bertujuan untuk mengetahui adanya kandungan flavonoid dan penentuan besar kadar flavonoid dalam ekstrak. Penetapan kandungan flavonoid dapat digunakan sebagai dasar bahwa benar dalam ekstrak yang digunakan dalam penelitian benar memiliki senyawa flavonoid yang diduga sebagai antioksidan. 3.

Pembuatan serbuk kulit buah P. americana Pembuatan serbuk kulit buah P. americana diawali dengan pengumpulan

kulit buah P. americana yang diambil dari salah satu Depot Es Teler 77 di


Yogyakarta. Proses selanjutnya adalah pencucian dan pensortiran kulit P. americana yang sesuai dengan langkah-langkah pembuatan simplisia. Tujuan dari pencucian adalah supaya kulit P. americana bersih dari daging buah serta terbebas dari kotoran dan debu yang menenpel. Penyortiran bertujuan untuk mendapatkan kulit yang sesuai dengan ketentuan kulit yang bagus yaitu kulit yang masih segar dan tidak busuk. Kulit buah P. americana yang telah terkumpul kemudian dipotong kecil dan diangin-anginkan terlebih dahulu. Kulit buah P. americana kemudian dikeringkan dalam oven pada suhu suhu 50˚C selama 24 jam. Setelah kering kulit dibuat serbuk dan diayak dengan ayakan nomor 40. Pemilihan ayakan nomor 40 karena partikel serbuk kulit buah P. americana yang halus akan mengendap pada saat maserasi sehingga akan mempengaruhi hasil ekstrak. Pernyataan tersebut berdasarkan teori bahwa pada saat melakukan ekstrak suatu simplisia, tidak jarang terjadi bagian (potongan) yang sangat halus dari simplisia melewati penyaring sehingga dapat membentuk endapan (Agoes, 2009) 4.

Pembuatan ekstrak etanol kulit buah P. americana Pembuatan ekstrak etanol kulit buah P. americana dilakukan dengan

metode maserasi. Metode maserasi yang dilakukan peneliti dengan cara memasukkan serbuk simplisia sebesar 40 g ke dalam labu erlenmeyer, yang kemudian dilakukan penambahan cairan penyari 200 mL berupa etanol 70% kemudian ditutup dan didiamkan selama 5 x 24 jam pada suhu ruang, jangan lupa dilakukan pengojokan sesekali. Setelah itu remaserasi selama 2 x 24 jam dengan etanol 70 % jangan lupa dilakukan penggojokan. Filtrat hasil saringan dipindahan ke labu alas bulat untuk dievaporasi untuk menguapkan cairan penyari pada


proses maserasi. Hasil evaporasi dituangkan dalam cawan porselen yang telah ditimbang sebelumnya karena hasil ekstrak merupakan ekstrak kental yang memiliki sifat lengket. Cawan porselen yang berisi larutan hasil evaporasi diuapkan di atas waterbath dengan suhu 800C untuk mendapatkan ekstrak etanol kulit buah P. amerciana dengan bobot pengeringan ekstrak yang tetap, kemudian dilakukan perhitungan rata-rata rendemen dari replikasi ekstrak etanol kulit buah P. americana kental yang telah dibuat. Metode maserasi dipilih dalam penelitian ini sebagai penyari simplisia kulit buah P. americana untuk mengambil zat aktif yang terkandung di dalam kulit buah P. americana. Alasan peneliti menggunakan metode maserasi adalah proses pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana. Berdasarkan teori bahwa prosedur ekstraksi dengan metode maserasi merupakan prosedur yang sederhana dan merupakan metode yang sesuai untuk skala kecil dan skala industri (Agoes, 2010). Kulit buah P. americana diketahui menggandung senyawa golongan flavonoid (Vinha dkk., 2013). Flavonoid yang merupakan golongan terbesar dari senyawa golongan fenol bersifat polar sehingga akan banyak terdapat pada ekstrak etanol (Hardiana, 2012). Pemilihan pelarut didasarkan pada kecocokan antara zat aktif dengan larutan penyari sehingga zat aktif akan larut dan bercampur dengan cairan penyari (Sasadara, 2013). Berdasarkan hal tersebut maka peneliti menggunakan cairan penyari etanol 70%, sebab diketahui bahwa cairan penyari etanol merupakan pelarut polar yang mampu menyari senyawa flavonoid, selain itu pada ekstrak etanol biji P. americana diperoleh persen


protektif dari efek hepatoprotektif sebesar 76,8; 76,5; dan 72,4% (Nopitasari, 2013). Berdasarkan penelitian Carpena dkk. (2011), bahwa biji P. americana mengandung senyawa fenolik dari hasil isolasi dengan pelarut organik yang bersifat polar. Parameter standarisasi ekstrak etanol kulit buah P. americana dilihat dari pencapaian bobot tetap dengan tujuan untuk menghitung sisa zat yang diperoleh dengan bobot tetap setelah dilakukan penguapan di atas waterbath. Ekstrak dalam cawan porselen di timbang setiap dua jam hingga bobot tetap. Hasil dari proses penguapan didapatkan hasil ekstrak etanol kulit buah P. americana tidak mengalami perubahan bobot ekstrak etanol, sehingga peneliti menganggap bahwa ekstrak yang dihasilkan tidak mengandung pelarut penyari. Total ekstrak etanol kulit buah P. americana yang diperoleh adalah 44,8 gram dari 8 kali replikasi, sehingga diperoleh rata-rata ekstrak etanol kulit buah P. americana sebesar 5,6 gram. Persen rendemen ekstrak etanol kulit buah P. americana dalam penelitian ini sebesar 14 %.

Menurut Tensiska, Marsetio, dan Silvia, (2007) bahwa

perhitungan rendemen untuk mengukur efektivitas jenis pelarut untuk mengekstrak komponen yang terkandung. Hasil rendemen yang didapatkan 14 % artinya bahwa efektivitas pelarut etanol 70 % mampu mengekstrak kandungan kulit buah P.americana sebesar 14 % B. Uji Pendahuluan 1.

Penentuan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida Senyawa yang digunakan dalam penentuan hepatotoksin dalam penelitian

ini adalah karbon tetraklorida. Penentuan dosis karbon tetraklorida bertujuan


untuk mengetahui pada dosis berapa dapat menyebabkan hepatotoksik yang ditunjukkan dengan peningkatan aktivitas serum ALT dan AST pada tikus jantan galur Wistar. Berdasarkan penelitian Novitasari (2013) dan Avista (2013) bahwa dosis 2 mL/kgBB karbon tetraklorida mampu memberikan efek hepatotoksik, maka dalam penelitian ini peneliti memakai dosis hepatotoksik karbon tetraklorida 2 mL/kgBB, sehingga diharapkan dapat menjadi pembanding dalam efek hepatoprotektif yang paling efektif dari ekstrak yang berbeda. Karbon tetraklorida digunakan sebagai hepatotoksin yang dapat menyebabkan kerusakan hati. Peningkatan aktivitas serum ALT dan AST akibat induksi karbon tetraklorida 2 kali dibandingkan dengan kontrol, secara signifikan mampu meyebabkan kerusakan sel hati (Rajendran, 2009). Karbon tetraklorida 2 mL/kgBB mampu menyebabkan kerusakan hati yang ditunjukkan dengan peningkatan aktivitas serum ALT 2,99 kali dan serum AST 5,03 kali dibandingkan dengan kontrol (Febrianti, 2013). Pada penelitian ini dilakukan orientasi aktivitas serum ALT pada pemberian dosis karbon tetraklorida 2 mL/kgBB. Hasil yang diperoleh terjadi peningkatan 3,0 kali pada jam ke-24 dibandingkan dengan aktivitas serum ALT pada jam ke-0 sebelum diberi perlakuan. Hasil orientasi aktivitas serum ALT terjadi peningkatan yang signifikan, membuat peneliti menyimpulkan bahwa dengan induksi 2 mL/kgBB karbon tetraklorida mampu merusak hati tikus atau memberikan efek hepatotoksik pada tikus jantan galur Wistar. Peneliti hanya memakai orientasi aktivitas serum ALT sebagai pedoman bahwa dosis 2 mL/kgBB karbon tetraklorida telah menyebabkan kerusakan hati pada tikus


karena pemeriksaan yang sering dilakukan untuk menilai kerusakan hati salah satunya dengan pemeriksaan laboratorium dengan melihat enzim alanin aminotransferase (ALT). Enzim ALT dalam keadaan normal berada di dalam jaringan tubuh terutama hati, sementara enzim AST berada pada serum dan jaringan terutama hati dan jantung (Sutedjo, 2006). 2.

Penentuan waktu pencuplikan darah hewan uji Penentuan waktu pencuplikan darah hewan uji bertujuan untuk

mengetahui pencapaian waktu maksimal karbon tetraklorida dengan dosis 2 mL/kgBB memberikan efek hepatotoksik, yang dapat diketahui dengan peningkatan aktivitas serum ALT dan AST tertinggi pada jam tertentu. Pencuplikan darah dilakukan melalui sinus orbitalis mata dengan selang waktu tertentu yaitu jam ke 0, 24, dan 48 setelah karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB diberikan pada tikus jantan galur Wistar. Orientasi pencuplikan darah hewan uji untuk aktivitas serum ALT dapat dilihat pada Tabel III dan Gambar 3. Tabel III. Purata aktivitas serum ALT ± SE (U/I) tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24, dan 48 jam Selang waktu (jam) 0 24 48

Purata aktivitas serum ALT ± SE (U/I) 72,3±4,5 217,3±2,1 90,3±2,9 Keterangan : SE= Standard Error


U/L

Gambar 3. Diagram batang rata-rata aktivitas ALT sel hati tikus, setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada selang waktu 0, 24 dan 48 jam Tampilan Tabel III dan Gambar diagram batang 3 aktivitas serum ALT ± SE (U/I), diketahui bahwa aktivitas serum ALT pada jam ke-0 sebelum perlakuan, jam ke-24, dan 48 berturut-turut adalah sebesar 72,3±4,5; 217,3±2,1; dan 90,3±2,9 U/L.

Berdasarkan data tersebut, diketahui bahwa aktivitas serum ALT pada

pencuplikan darah jam ke-24 dengan pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB lebih tinggi dibandingkan dengan pencuplikan darah pada jam ke-0 dan jam ke-48. Pada pencuplikan darah jam ke-24 didapatkan peningkatan aktivitas serum ALT 3,0 kali dari nilai aktivitas ALT jam ke-0, sedangkan pada jam ke-48 aktivitas ALT mengalami penurunan. Berdasarkan data tersebut maka peneliti menggunakan waktu pencuplikan darah hewan uji pada jam ke-24 karena pada jam tersebut terjadi peningkatan aktivitas serum ALT tertinggi dan memenuhi kriteria terjadinya hepatotoksik. Menurut Febrianti (2013) bahwa karbon tetraklorida 2 mL/kgBB mampu menyebabkan kerusakan hati yang ditunjukkan dengan peningkatan ALT 2,99 dibandingkan dengan kontrol. Hasil uji statistik yang dilakukan bahwa kenaikan aktivitas serum ALT pada jam ke-24, menunjukkan berbedaan bermakna bila dibandingkan dengan


aktivitas serum ALT pada jam ke-0 dan 48, artinya bahwa pada jam ke-24 aktivitas peningkatan enzim ALT lebih tinggi dibanding pada jam ke-0 dan 48. Jam ke-0 dibandingkan dengan jam ke-48 berdasarkan uji statistik berbeda tidak bermakna, artinya bahwa pada jam ke-48 aktivitas serum ALT mengalami penurunan yang hampir sama dengan keadaan normal, sebab jam ke-0 adalah keadaan normal tikus karena belum diinduksi karbon tetraklorida. Tabel IV. Hasil uji statistik aktivitas ALT setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB pada waktu pencuplikan darah ke-0, ke-24 dan ke-48 jam Perlakuan Jam ke-0 Jam ke-24 Jam ke-48 Jam ke-0 BB TB Jam ke-24 BB BB Jam ke-48 TB BB BB= berbeda bermakna (p<0.05) TB= berbeda tidak bermakna (p>0,05) Hasil tersebut menjadi pedoman untuk peneliti dalam menentukan waktu pencuplikan darah hewan uji pada jam ke-24 setelah pemberian karbon tetraklorida dengan dosis 2 mL/kgBB. Penelitian lain menyebutkan bahwa karbon tetraklorida merupakan toksikan akut yang dapat merusak fungsi hati dalam waktu 24 jam (Hasti, Husni, dan Amri, 2012). 3.

Penetapan lama pemejanan ekstrak etanol kulit buah P. americana Berdasarkan penelitian Sasadara (2013) perlakuan pemberian ekstrak

metanol biji P. americana pada rentang waktu 6 jam sebelum induksi karbon tetraklorida merupakan waktu yang paling efektif diberikan dengan nilai % hepatoprotektif sebesar 101 % dengan dosis pemberian ekstrak metanol biji P. americana 350 mg/kgBB. Berdasarkan penelitian tersebut peneliti menggunakan rentang waktu 6 jam dalam efek hepatoprotektif pemberian jangka pendek ekstrak


etanol kulit buah P. americana terhadap aktivitas serum ALT-AST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Melihat adanya kemiripan penelitian yang dilakukan, diharapkan penelitian ini dapat memperoleh efek hepatoprotektif dari ekstrak yang berbeda. 4.

Penetapan dosis ekstrak etanol kulit buah P. americana Penentuan dosis ekstrak etanol kulit buah P. americana bertujuan untuk

menentukan tingkatan dosis dari ekstrak etanol kulit buah P. americana yang akan digunakan dalam penelitian ini. Berdasarkan penelitian Nopitasari (2013) menyatakan bahwa hasil orientasi yang dilakukan menggunakan konsentrasi tertinggi ekstrak etanol biji P. americana sebesar 70 mg/mL, dengan pertimbangan bahwa pada konsentrasi tertinggi yang digunakan adalah konsentrasi pekat yang dapat dibuat dan pada konsentrasi ekstrak tersebut dapat dimasukkan dan dikeluarkan dari spuit oral. Hasil perhitungan dari konsentrasi 70 mg/mL diperoleh dosis maksimal 1,40 g/kgBB, kemudian ditentukan tingkatan dosis ekstrak etanol biji P. americana, yaitu 0,35; 0,70; dan 1,40 g/kgBB. Berdasarkan penelitian tersebut peneliti memilih dosis ekstrak etanol kulit buah P. americana adalah 350; 700; dan 1.400 mg/kgBB, sehingga harapannya dapat dibandingkan efek hepatoprotektif yang efektif dari ekstrak yang berbeda.

C. Efek Hepatoprotektif Ekstrak Etanol Kulit Buah P. americana Terhadap Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida Tujuan penelitian ini adalah membuktikan adanya efek hepatoprotektif dan dosis efektif ekstrak etanol kulit buah P. americana jangka pendek terhadap aktivitas serum ALT-AST pada tikus terinduksi karbon tetraklorida. Jangka


pendek pada penelitian ini dilakukan dalam rentang waktu tertentu, yaitu pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana pada jam ke-6 sebelum induksi karbon tetraklorida. Dosis ekstrak kulit buah P. americana yang digunakan dalam penelitian ini adalah 350; 700; dan 1.400 mg/kgBB diberikan secara per oral, sedangkan dosis karbon tetraklorida dengan pelarut olive oil adalah 2 mL/kgBB diberikan secara intraperitonial. Tahap selanjutnya dilakukan pencuplikan darah hewan uji pada jam ke-24 setelah pemberian hepatotoksin karbon tetraklorida. Hasil yang diperoleh ditampilkan pada tabel V. Pada tabel V juga terlampir % efek hepatoprotektif ekstrak etanol kulit buah P. americana pada aktivitas ALT dosis 350, 700, dan 1400 mg/kgBB berturut-turut sebesar 83,1; 17,9; dan 73,8 %. Tabel V. Purata±SE aktivitas serum ALT dan AST, serta % efek hepatoprotektif tikus perlakuan ekstrak etanol kulit buah P.americana terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Kelompok Purata Purata Efek aktivitas aktivitas hepatoprotektif ALT±SE (U/L) AST±SE (U/L) ALT (%) I 246,8±10,2 762,2±43,1 II 81,6±3,0 127,8±7,3 III 254,3±4,6 152,6±5,8 IV 109,5±13,0 221,9±34,8 83,1% V 217,1±29,1 788,7±72,2 17,9% VI 124,8±13,2 122,7±9,9 73,8% Keterangan : I. kelompok kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida 2 mL/kgBB II. kelompok kontrol negatif olive oil 2 mL/kgBB III. kelompok kontrol ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 1400 mg/kgBB IV. kelompok ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350 mg/kgBB + CCl4 2 mL/kgBB V. kelompok ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 700 mg/kgBB + CCl4 2 mL/kgBB VI. kelompok ekstrak etanol kulit buah P .americana dosis 1400 mg/kgBB + CCl4 2 mL/kgBB SE : Standard Error


U/L

Gambar 4. Diagram batang rata-rata aktivitas serum AST tikus perlakuan pemberian ekstrak etanol kulit buah P.americana

U/L

Keterangan : EEKPA = Ekstrak Etanol Kulit buah P. americana Gambar 5. Diagram batang rata-rata aktivitas serum ALT tikus perlakuan pemberian ekstrak etanol kulit buah P.americana


Tabel VI. Hasil uji Mann-Whitney aktivitas serum ALT tikus perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Kelompok

I

II

III

IV

V

VI

I II III IV V VI

BB TB BB TB BB

BB BB TB BB BB

TB BB BB TB BB

BB TB BB BB TB

TB BB TB BB BB

BB BB BB TB BB -

Tabel VII. Hasil uji Mann-Whitney aktivitas serum AST tikus perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Kelompok I II III IV V VI I BB BB BB TB BB II BB BB TB BB TB III BB BB TB BB TB IV BB BB TB BB BB V TB BB BB BB BB VI BB TB TB BB BB Keterangan BB = Berbeda bermakna (p<0,05) TB = Berbeda tidak bermakna (p>0,05) I. kelompok kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida 2 mL/kgBB II. kelompok kontrol negatif olive oil 2 mL/kgBB III. kelompok kontrol ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 1400 mg/kgBB IV. kelompok ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350 mg/kgBB + CCl4 2 mL/kgBB V. kelompok ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 700 mg/kgBB + CCl4 2 mL/kgBB VI. kelompok ekstrak etanol kulit buah P .americana dosis 1400 mg/kgBB + CCl4 2 mL/kgBB 1.

Kontrol negatif Pada penelitian ini digunakan kontrol negatif berupa olive oil dengan

dosis 2 mL/kgBB secara intraperitonial. Kontrol negatif adalah kontrol pelarut hepatotoksin karbon tetraklorida, sehingga digunakan dosis yang sama. Tujuan dilakukan pengujian kontrol negatif adalah untuk melihat pelarut olive oil


memiliki efek hepatotoksik atau tidak, dengan melihat aktivitas serum ALT dan aktivitas serum AST pada jam ke-24 sesuai waktu pencuplikan darah hewan uji. Penelitian Nopitasari (2013) menyatakan bahwa apabila terjadi kenaikan aktivitas serum ALT dan AST pada kelompok kontrol hepatoksin maupun kelompok perlakuan dipastikan bukan karena penggunaan olive oil sebagai pelarut. Kumar, Sivaraj, Elumalai dan Kumar (2009) melaporkan bahwa pemperian olive oil pada hewan uji tidak menimbulkan perubahan patologis yang signifikan bila dibandingkan dengan kelompok normal yang diberikan perlakuan air suling. Berdasarkan hal tersebut maka peneliti memakai kontrol negatif (olive oil) sebagai dasar nilai aktivitas serum ALT dan AST normal dalam penelitian ini. 2.

Kontrol hepatotoksik (karbon tetraklorida 2 mL/kgBB) Kontrol hepatotoksik bertujuan untuk mengetahui pengaruh induksi

karbon tetraklorida 2 mL/kgBB terhadap kerusakan sel hati dan digunakan sebagai patokan dalam menganalisis efek hepatoprotektif ekstrak etanol kulit buah P. americana yang ditunjukkan dengan aktivitas ALT dan AST. Berdasarkan hasil yang dilakukan peneliti, aktivitas serum ALT kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida 2 mL/kgBB sebesar 246,8±10,2 U/L sedangkan kontrol olive oil aktivitas serum ALT sebesar 81,6±3,0 U/L. Bila dibandingkan hasilnya maka terjadi peningkatan 3,0 kali dari kontrol olive oil. Aktivitas AST kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida 2 mL/kgBB sebesar 762,2±43,1 U/L sedangkan untuk kontrol olive oil sebesar 127,8±7,3 U/L. Bila dibandingkan maka terjadi peningkatan 5,9 kali dari kontrol olive oil.


Hasil analisis statistik aktivitas serum ALT dan AST kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida berbeda bermakna (p<0,05) dengan kontrol olive oil, artinya bahwa kontrol kanbon tetraklorida memberikan efek hepatotoksik (merusak hati). Aktivitas serum ALT dibandingkan aktivitas serum AST menunjukkan kenaikan yang lebih rendah (ALT 3,0 kali < AST 5,9 kali), karena hasil yang diperoleh pada aktivitas AST tidak spesifik berada di dalam hati, melaikan dalam berada pada serum dan jaringan terutama hati dan jantung (Sutedjo, 2006). Kenaikan aktivitas serum ALT dan aktivitas serum AST yang cukup signifikan tersebut, maka dosis karbon tetraklorida 2 mL/kgBB memberikan efek hepatotoksik pada tikus jantan galur Wistar. 3.

Kontrol ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 1400 mg/kgBB Pengujian kontrol ekstrak etanol kulit buah

P. americana bertujuan

untuk melihat pengaruh pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana terhadap aktivitas serum ALT dan AST

tanpa diberikan induksi karbon

tetraklorida memberikan efek hepatotoksik atau tidak. Penggunaan dosis kontrol ekstrak etanol kulit buah P. americana sebesar 1400 mg/kgBB karena dosis tersebut merupakan peringkat dosis tertinggi dalam penelitian ini. Harapannya dengan pemakaian dosis 1400 mg/kgBB mampu mempresentasikan kelompok perlakuan peringkat dosis kecil (350 mg/kgBB), sedang (700 mg/kgBB), dan dosis tertinggi (1400 mg/kgBB). Hasil statistik aktivitas serum ALT antara kontrol ekstrak etanol kulit buah P. americana dengan kontrol olive oil adalah berbeda bermakna. Hal yang sama juga ditunjukkan oleh aktivitas serum AST untuk kontrol ekstrak etanol


kulit buah P. americana yang dibandingkan dengan kontrol olive oil. Hal ini menggambarkan bahwa ekstrak etanol kulit buah P. americana dapat menaikkan aktivitas serum ALT dan AST pada tikus. Kontrol ekstrak etanol kulit buah P. americana dibandingkan dengan kontrol hepatotoksik (karbon tetraklorida) menunjukkan nilai aktivitas serum ALT berturut-turut 254,3±4,6 dan 246,8±10,2 U/L. Berdasarkan analisis statistik perbandingan keduanya adalah berbeda tidak bermakna, artinya bahwa kontrol ekstrak etanol kulit buah P. americana memberikan peningkatan nilai aktivitas serum ALT dan hasilnya setara dengan aktivitas serum ALT pada kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida. Sementara untuk aktivitas serum AST untuk perbandingan kontrol ekstrak etanol kulit buah P. americana dengan kontrol hepatotoksik (karbon tetraklorida)

menunjukkan nilai berturut-turut adalah

152,6±5,8 dan 762,2±43,1 U/L memberikan perbedaan bermakna, artinya bahwa kontrol ekstrak etanol kulit buah P. americana memberikan kenaikan AST namun kenaikannya tidak setara dengan aktivitas serum AST kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida. Kesimpulan peneliti adalah bahwa kontrol ekstrak etanol kulit buah P. americana untuk aktivitas serum ALT memiliki peningkatan nilai aktivitas serum ALT dan peningkatannya hampir setara dengan nilai aktivitas ALT kontrol karbon tetraklorida. Sementara untuk aktivitas serum AST memiliki peningkatan aktivitas serum AST dan peningkatannya tidak setara dengan nilai aktifitas AST pada kontrol karbon tetraklorida.


4.

Kelompok perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350, 700, dan 1400 mg/kgBB pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida 2 mL/kgBB Parameter yang digunakan untuk melihat efek hepatotoksik dari ekstrak

etanol kulit buah P. americana terhadap tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida didasarkan pada ada tidaknya penurunan aktivitas serum ALT dan AST. Kelompok IV adalah kelompok perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350 mg/kgBB memiliki aktivitas serum ALT sebesar 109,5±13,0 U/L bila dibandingkan dengan aktivitas serum ALT kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida yang memilki nilai aktivitas sebesar 246,8±10,2 U/L. Secara uji analisis statistik penurunan aktivitas serum ALT tersebut menunjukkan berbeda bermakna, yang ditunjukkan dengan nilai signifikansi 0,008 (p<0,05), artinya bahwa perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350 mg/kgBB memiliki efek hepatoprotektif (Tabel VI). Aktivitas serum ALT pada kelompok ini juga dibandingkan dengan kontrol negatif olive oil yang memiliki aktivitas serum ALT sebesar 81,6±3,0 U/L, secara statistik menunjukkan berbeda tidak bermakna dengan nilai signifikansi 0,095 (p>0,05), artinya bahwa ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350 mg/kgBB mampu menurunkan aktivitas serum ALT dan telah setara dengan keadaan normal ( kontrol negatif olive oil) (Tabel VI). Pada aktivitas serum AST ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350 mg/kgBB memiliki nilai sebesar 221,9±34,8 U/L dibandingkan dengan aktivitas serum AST kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida yang memiliki aktivitas


sebesar 762,2±43,1 U/L. Secara statistik penurunan aktivitas serum AST tersebut menunjukkan berbeda bermakna, yang ditunjukkan dengan nilai signifikansi 0,008 (p<0,05), artinya bahwa ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350 mg/kgBB mampu menurunkan nilai aktivitas serum AST dan memiliki efek hepatoprotektif (Tabel VII). Aktivitas serum AST kelompok ini dibandingkan pula dengan kontrol negatif olive oil yang memiliki aktivitas serum AST sebesar 127,8±7,3 U/L, secara statistik menunjukkan berbeda tidak bermakna dengan nilai signifikansi 0,056 (p>0,05), artinya bahwa ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350 mg/kgBB mampu menurunkan aktivitas serum AST dan telah setara dengan keadaan normal ( kontrol negatif olive oil) (Tabel VII). Pengukuran aktivitas serum ALT dan AST tersebut menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350 mg/kgBB pada tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB memiliki efek hepatoprotektif yang dapat dilihat dari penurunan aktivitas serum ALT-AST dan penurunan yang terjadi sudah setara dengan keadaan normal. Kelompok V adalah kelompok perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 700 mg/kgBB memiliki aktivitas serum ALT sebesar 217,1±29,1 U/L bila dibandingkan dengan aktivitas serum ALT kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida yang memilki nilai aktivitas sebesar 246,8±10,2 U/L. Secara uji analisis statistik penurunan aktivitas serum ALT tersebut menunjukkan berbeda tidak bermakna, yang ditunjukkan dengan nilai signifikansi 0,548 (p>0,05), artinya bahwa perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 700 mg/kgBB mempunyai aktivitas serum ALT yang hampir setara dengan kondisi


kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida (Tabel VI). Aktivitas serum ALT pada kelompok ini juga dibandingkan dengan kontrol negatif olive oil yang memiliki aktivitas serum ALT sebesar 81,6±3,0 U/L, secara statistik menunjukkan berbeda bermakna dengan nilai signifikansi 0,008 (p<0,05), artinya bahwa ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 700 mg/kgBB menunjukkan penurunan aktivitas serum ALT yang belum sampai ke keadaan normal ( kontrol negatif olive oil) (Tabel VI). Pada aktivitas serum AST ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 700 mg/kgBB memiliki nilai sebesar 788,7±72,2 U/L dibandingkan dengan aktivitas serum AST kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida yang memiliki aktivitas sebesar 762,2±43,1 U/L. Secara statistik aktivitas serum AST tersebut menunjukkan berbeda tidak bermakna, yang ditunjukkan dengan nilai signifikansi 0,841 (p>0,05), artinya bahwa ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 700 mg/kgBB tidak menurunkan aktivitas serum AST dan nilai aktivitas serum AST setara dengan keadaan kontrol hepatotoksis karbon tetraklorida. Aktivitas serum AST kelompok ini dibandingkan pula dengan kontrol negatif olive oil yang memiliki aktivitas serum AST sebesar 127,8±7,3 U/L, secara statistik menunjukkan berbeda bermakna dengan nilai signifikansi 0,008 (p<0,05), artinya bahwa ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 700 mg/kgBB tidak mampu menurunkan aktivitas serum AST, namun menyebabkan peningkatan aktivitas AST (Tabel VII). Pengukuran aktivitas serum ALT dan AST tersebut menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 700 mg/kgBB pada tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB memiliki efek hepatotoksik yang dapat dilihat dari peningkatan aktivitas serum


ALT dan AST. Hasil tersebut merupakan hasil dari penelitian, sehingga bagaimanapun hasil dari sebuah penelitian menunjukkan hepatotoksisitas atau hepatoprotektik tidak dipermasalahkan sebabnya. Seharusnya dengan perolehan hasil pada dosis 2 (700 mg/kgBB) menyebabkan hepatotoksisitas pada aktivitas ALT dan AST dilakukan penelitian kembali pada dosis tersebut, sehingga bisa diketahui apakah pada dosis 2 memang bermasalah atau terdapat kesalahan dalam penelitian yang dimungkinkan mempengaruhi hasil penelitian. Kelompok VI adalah kelompok perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 1400 mg/kgBB memiliki aktivitas serum ALT sebesar 124,8±13,2 U/L bila dibandingkan dengan aktivitas serum ALT kontrol hepatotoksik karbon tetraklorida yang memilki nilai aktivitas sebesar 246,8±10,2 U/L. Secara uji analisis statistik penurunan aktivitas serum ALT tersebut menunjukkan berbeda bermakna, yang ditunjukkan dengan nilai signifikansi 0,008 (p<0,05), artinya bahwa perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana mampu menurunkan aktivitas serum ALT (Tabel VI). Aktivitas serum ALT pada kelompok ini juga dibandingkan dengan kontrol negatif olive oil yang memiliki aktivitas ALT sebesar 81,6±3,0 U/L, secara statistik menunjukkan berbeda bermakna dengan nilai signifikansi 0,008 (p>0,05), artinya bahwa ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 1400 mg/kgBB mampu menurunkan aktivitas serum ALT dan penurunannya belum setara dengan keadaan normal (kontrol negatif olive oil) (Tabel VI). Pada aktivitas serum AST ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 1400 mg/kgBB memiliki nilai sebesar 122,7±9,9 U/L dibandingkan dengan aktivitas serum AST kontrol hepatotoksik karbon


tetraklorida yang memiliki aktivitas sebesar 762,2±43,1 U/L. Secara statistik aktivitas serum AST tersebut menunjukkan berbeda bermakna, yang ditunjukkan dengan nilai signifikansi 0,008 (p<0,05), artinya bahwa ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 1400 mg/kgBB menurunkan aktivitas serum AST. Aktivitas serum AST kelompok ini dibandingkan pula dengan kontrol negatif olive oil yang memiliki aktivitas serum AST sebesar 127,8±7,3 U/L, secara statistik menunjukkan berbeda tidak bermakna dengan nilai signifikansi 0, 841(p>0,05), artinya bahwa ekstrak etanol kulit buah P. americana mampu menurunkan aktivitas serum AST dan penurunan yang terjadi setara dengan keadaan normal (Tabel VII). Pengukuran aktivitas serum ALT dan AST tersebut menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 1400 mg/kgBB pada tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB memiliki efek hepatoprotektif yang ditunjukkan dengan penurunan aktivitas serum ALT dan AST. Ketiga peringkat dosis ekstrak etanol kulit buah P. americana aktivitas serum ALT dibandingkan masing-masing peringkat dosisnya. Dosis 1 (350 mg/kgBB) dibandingkan dengan dosis 2 (700 mg/kgBB), secara statistik menunjukkan berbeda bermakna yang berarti dosis 350 mg/kgBB ekstrak etanol kulit buah P. americana memiliki aktivitas penurunan ALT yang cukup efektif bila dibandingkan dengan aktivitas penerunan ALT pada dosis 700 mg/kgBB. Dosis 1 (350 mg/kgBB) dibandingkan dengan dosis 3 (1400 mg/kgBB), secara statistik menunjukkan berbeda tidak bermakna yang berarti bahwa dosis 350 mg/kgBB ekstrak etanol kulit buah P. americana memiliki aktivitas penurunan


ALT setara dengan aktivitas penerunan ALT pada dosis 1400 mg/kgBB. Dosis 2 (700 mg/kgBB) dibandingkan dengan dosis 3 (1400 mg/kgBB), secara statistik menunjukkan berbeda bermakna untuk aktivitas serum ALT yang berati bahwa dosis 2 (700 mg/kgBB) memiliki aktivitas penurunan yang berbeda dengan aktivitas penurunan ALT pada dosis 1400 mg/kgBB. Penurunan yang paling efektif dari perbandingan dosis 700 mg/kgBB dengan dosis 1400 mg/kgBB adalah dosis 1400 mg/kgBB. Berdasarkan rata-rata aktivitas serum ALT dari ketiga peringkat dosis tersebut, peneliti mengurutkan dosis efektif yang menunjukkan efek hepatoprotektif adalah dosis 350 mg/kgBB, dosis 1400 mg/kgBB dan dosis 700 mg/kgBB. Ketiga peringkat dosis untuk aktivitas serum AST juga dibandingkan masing-masing kelompok dosis. Dosis 1 (350 mg/kgBB) dibandingkan dengan dosis 2 (700 mg/kgBB), secara statistik menunjukkan berbeda bermakna yang berarti bahwa dosis 350 mg/kgBB ekstrak etanol kulit buah P. americana memiliki aktivitas penurunan AST yang cukup efektif bila dibandingkan dengan aktivitas penerunan AST pada dosis 700 mg/kgBB. Dosis 1 (350 mg/kgBB) dibandingkan dengan dosis 3 (1400 mg/kgBB), secara statistik menunjukkan berbeda bermakna yang berarti bahwa dosis 350 mg/kgBB ekstrak etanol kulit buah P. americana memiliki aktivitas penurunan AST yang berbeda dengan dosis 3 (1400 mg/kgBB). Dosis 2 (700 mg/kgBB) dibandingkan dengan dosis 3 (1400 mg/kgBB), secara statistik menunjukkan berbeda bermakna yang berati bahwa dosis 2 (700 mg/kgBB) memiliki aktivitas penurunan yang berbeda dengan aktivitas penurunan AST pada dosis 1400 mg/kgBB. Berdasarkan rata-rata


aktivitas serum AST dari ketiga peringkat dosis tersebut, peneliti mengurutkan dosis efektif yang menunjukkan efek hepatoprotektif adalah dosis 1400 mg/kgBB, dosis 350 mg/kgBB dan dosis 700 mg/kgBB Kesimpulan yang diambil oleh peneliti berdasarkan penurunan nilai aktivitas serum ALT dan AST yang didapatkan dari ketiga peringkat dosis (350, 700, 1400 mg/kgBB) adalah bahwa dosis efektif yang mampu memberikan efek hepatoprotektif adalah dosis 1 (350 mg/kgBB). Kesimpulan ini didukung dengan perolehan % hepatoprotektif untuk masing-masing peringkat dosis 350, 700, dan 1400 mg/kgBB diperoleh berturut-turut adalah 83; 18; dan 74 % aktivitas serum ALT dan 85; 4; 100,8 % aktivitas serum AST. Berdasarkan % hepatoprotektif yang diperoleh dosis 1 (350 mg/kgBB) memiliki perbandingan % hepatoprotektif aktivitas serum ALT dan AST yang relevan. Dosis 2 (700 mg/kgBB) memiliki aktivitas serum ALT dan AST % hepatoprotektif yang kecil atau dapat diartikan tidak signifikan memiliki efek hepatoprotektif. Dosis 3 (1400 mg/kgBB) memiliki aktivitas serum ALT dan AST % hepatoprotektif yang berbeda atau perbandingan % hepatoprotektif antara aktivitas serum ALT dan AST tidak relevan. Efek hepatoprotektif juga dapat dilihat dengan melakukan uji histopatologi hati hewan uji. Tujuan dari perlakukuan ini adalah untuk memperkuat hipotesis dalam penelitian ekstrak etanol kulit buah P. americana jangka pendek pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida. Namun karena keterbatasan peneliti maka uji histopatologi hati hewan uji tidak dilakukan, untuk menegakkan efek hepatoprotektif ekstrak etanol kulit buah P. americana peneliti hanya melakukan uji aktivitas serum ALT dan AST. Uji


aktivitas ALT dan AST juga sudah dapat mewakili penelitian dalam melihat kondisi hati. Karbon tetraklorida yang digunakan sebagai indikator kerusakan hati dapat diganti dengan parasetamol. Penelitian James, Philip dan Jack (2003) menggunakan parasetamol sebagai senyawa induksi hepatotoksisitas. Berdasarkan penelitian tersebut maka peneliti menyarankan parasetamol dapat digunakan sebagai senyawa induksi untuk hepatotoksisitas dalam penelitian lanjutan dengan ekstrak etanol kulit buah P. americana sebagai senyawa hepatoprotektif. Ekstrak etanol kulit buah buah P. americana pada dosis sedang (700 mg/kgBB) menunjukkan peningkatan pada aktivitas ALT dan AST atau dapat dikatakan bahwa pada dosis 700 mg/kg BB mampu memberikan efek hepatotoksik, sehingga perlu dilakukan uji toksisitas akut yang dapat dinilai dari LD50. Pengukuran ini bertujuan mencari dosis tunggal yang dapat menyebabkan kematian 50% sekelompok hewan uji (Elya dkk., 2010). D. Rangkuman Pembahasan Tiga peringkat dosis ekstrak etanol kulit buah P.americana yaitu 350, 700, dan 1400 mg/kgBB dalam penelitian mampu memberikan efek hepatoprotektif terhadap tikus yang terinduksi karbon tetraklorida yang dilihat dari aktivitas serum ALT dan AST. Perolehan purata±SE aktivitas serum ALT dan AST secara berturut-turut dari dosis 350, 700, dan 1400 mg/kgBB adalah aktivitas serum ALT 109,5; 217,1; dan 124,8 U/L dan aktivitas serum AST 221,9; 788,7; dan 122,7 U/L. Hasil tersebut dapat menjawab rumusan masalah dalam penelitian ini bahwa pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill.


jangka pendek memberikan pengaruh hepatoprotektif terhadap penurunan aktivitas serum AST-ALT pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida. Dosis efektif pemberian jangka pendek ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. yang dapat memberikan pengaruh hepatoprotektif pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida dari hasil penelitian ini adalah dosis 1 (350 mg/kgBB). Pemilihan dosis 350 mg/kgBB sebagai dosis efektif karena berdasarkan definisi operasional penelitian ini bahwa dosis efektif yang dimaksud adalah dosis terkecil yang mampu memberikan penurunan aktivitas ALT dan AST atau memberikan efek maksimal hepatoprotektif. Hasil penelitian diperoleh bahwa % hepatoprotektif dari masing-masing ketiga peringkat dosis 350, 700, dan 1400 mg/kgBB adalah 83,1; 17,9 dan 73,8% untuk aktivitas ALT.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan Berdasarkan hasil yang diperoleh dan analisis statistik yang dilakukan, maka dapat disimpulkan : 1.

Pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. jangka pendek memberikan pengaruh hepatoprotektif pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida berupa penurunan aktivitas AST-ALT.

2.

Dosis efektif hepatoprotektif ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. pada tikus terinduksi karbon tetraklorida adalah sebesar 350 mg/kgBB. B. Saran Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai :

1.

Pengujian histopatologi hati hewan uji sebagai data pengaruh hepatoprotektif pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana selain ditunjukkan dengan penurunan aktivitas ALT-AST.

2.

Efek hepatoprotektif pemberian ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. jangka pendek terhadap aktivitas ALT dan AST pada tikus yang terinduksi parasetamol.

3.

Pengujian toksisitas akut yang dinilai dari LD50 untuk ekstrak etanol kulit buah P. americana.

55


4.

Pengujian kembali pada dosis 700 dan 1400 mg/kgBB untuk mengetahui kebenaran hasil penelitian, karena pada dosis 700 mg/kgBB hasil penelitian ini menunjukkan hepatotoksisitas.

5.

Pengujian kandungan flavonoid kulit buah P.americana yang digunakan dalam sebuah penelitian.


DAFTAR PUSTAKA Agrilink, 2001, Suplement to Avocado Information Kit, Queensland Horticulture Institute, Departement of Primary Industry, Queensland. Agoes, G., 2009, Seri Farmasi Industri-2: Teknologi Bahan Alam, ITB, Bandung, 54 . Alfansuri, A. F., 2012, Identifikasi Chilling Injury Buah Alpukat (P. americana Mill.) Dengan Gelombang Ultrasonik, Skipsi, 21, Institut Pertanian Bogor, Bogor Andriani, T., 2014, Isolasi Flavonoid dari Ekstrak n-Heksan Biji Alpukat (Persea americana Mill.) dan Uji Aktivitasnya Sebagai Antioksidan, Skripsi, Universitas Negeri Malang, Malang Arhoghro, E.M., K.E. Ekpo, dan G.O. Ibeh, 2009, Effect of aqueous extract of scent leaf (Ocimum gratissimum) on carbon tetrachoride (CCl4) induced liver damage in albino Wistar rats, Afr. J. Pharm. Pharmacol., 3 (11), 3. Arukwe, U., Amadi, B.A., Duru, M. K.C., Agomuo, E.N., Adindu, E. A., dan Odika, P. C., et al., 2012, Chemical Composition of P. americana Leaf, Fruit and Seed, IJRRAS, 346-349. Avista, A.D., 2013, Efek Hepatoprotektif Infusa Daun Swietenia mahagoni (L.) Jacq. Pada Tikus Jantan Terinduksi Karbon Tertraklorida, Skripsi, 43, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Azizah, B., dan Nina, S., 2013, Standarisasi Parameter Non Spesifik dan Perbandingan Kadar Kurkumin Ekstrak Etanol dan Ekstrak Terpurifikasi Rimpang Kunyit, Jurnal Ilmiah Kefarmasian, 3 (01), 22-23. Boradero, M., Mary, W.D., dan Yakobus, S., 2008, Klien Gangguan Hati : Seri Asuhan Keperawatan, EGC, Jakarta, hal. 1-6. Carpena, J. G.R., David, M., Maria, J. A., Petri, K., and Mario, E., 2011, Avocado (Persea americana Mill.) Phenolics, In Vitro Antioxidant and Antimicrobial Activities, and Inhibition of Lipid and Protein Oxidation in Porcine Patties, JAFC, 5630. Chodidjah, Eni, W., dan Utari, 2007, Pengeruh Pemberian Air Rebusan Meniran (Phyllanthm ninuriLinn) terhadap Gambaran Histopatologi Hepar Tikus Wistar yang Terinduksi CCL4, Jurnal Anatomi Indonesia, 2 (01), 10.


Cinthya, S.E., Ivan, S.P., Rizky, A., 2012, Penggunaan Obat Penginduksi Kerusakan Hati pada Pasien Rawat Inap Penyakit Hati, Jurnal Farmasi Klinik Indonesia, 1 (2), 43. Dipiro,J.T., Robert, L.T., Gary, C.Y., Gary, R.M., Barbara, G.W., dan Michael, P., 2008, Pharmacotherapy A Pathophisiologic Approach, Edisi Ketujuh, McGrraw Hill, USA, pp. 636. Direktorat Bima Farmasi Komunitas dan Klinik, Direktorat Jendral Bima Kefarmasian dan Alat Kesehatan, 2007, Pharmaceutical Care Untuk Penyakit Hati, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, hal. 9. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1995, Farmakope Indonesia, jilid IV, Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta. Elya, B., Juheini, A., dan Emiyanah, 2010, Toksikologi Akut Daun Justicia gendarussa Burm., MAKARA, 14 (2), 132. Febrianti, C.H., 2013, Efek Hepatoprotektif Jangka Waktu Enam Jam Ekstrak Etanol Daun Macaranga tanarius L. Terhadap Aktivitas ALT-AST pada Tikus Jantan Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, 41, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Handoko, L., 2005, Pengaruh ekstrak daun Apium graviolens terhadap perubahan SGOT/SGPT tikus wistar jantan yang dipapar karbon tetraklorida, Skripsi, 13, Universitas Diponegoro, Semarang Hardiana, R., Rudiyansyah, dan Titin, A.Z., 2012, Aktivitas Antioksidan Senyawa Golongan Fenol Dari Beberapa Jenis Tumbuhan Famili Malvaceae, JKK, 1 (1), 8-13. Hasti, S., Husni, M., dan Amri, B., 2012, Uji Aktivitas Hepatoproteksi dan Toksisitas Akut dari Ekstrak Gambir Terstandarisasi, Jurnal Penelitian Farmasi Indonesia, 1 (1), 37. Imafidon, K. E., and Amaechina, F. C., 2010, Effects of Aqueous Seed Extract of P. americana Mill. (Avocado) on Blood Pressure and Lipid Profile in Hypertensive Rats, IDOSI Publications, 4 (2), 116. James, L., Philip, R.M., and Jack, A. H., 2003, Acetaminophen-Induced Hepatotoxicity, American Society for Pharmacology and Experimental Therapeutics, 31 (12), 1499. Kardena, I. M., dan Ida, B.O.W., 2011, Kadar Perasan Kunyit yang Efektif Memperbaiki Kerusakan Hati Mencit yang Dipicu Karbon Tetrachlorida, Jurnal Veteriner, 12 (1), 37.


Kumala, S., Hesty, U., and Wahyu, K. S., 2013, The Effect of Avocado (P. americana Mill.) Leaves Extract Towords the Mouse’s Blood Glucose Decrease With the Glucose Tolerance Method, IJPSR, 4 (2), 663. Kumar, P.V., Sivaraj, A., Elumalai EK., dan Kumar, B.S., 2009, Carbon Tertrachloride-Induced Hepatotoxicity in Rats- Protective Role of Aqueous Leaf Extracts of Coccinia Grandis, Int.J. PharmTech Res, 1 (4), 1613-1614. Lim, T. K., 2012, Edible Medical and Non-Medical Plants, Volume 3, Spingers Dordrecht Heidelbergh, London New York, pp.78. Makodompit, A.N., Hosea, J.E., dan Weny, W., 2013, Penentuan Nilai Sun Protective Factor (SPF) Secara In Vitro Krim Tabir Surya Ekstrak Etanol Kulit Alpukat, Pharmacon, 2 (03), 83-85. Malangngi, L.P., Meiske, S. S., dan Jessy, J. E. P., 2012, Penetapan Kandungan Tanin dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat (Persea amerocana Mill.), FMIPA UNSRAT, 1 (1), 5-10. McPhee, S.J., dan William, F.G., 2006, Pathophysiology of Disease: an Introductin to Clinical Medicine, diterjemahkan oleh Brahm, U., hal. 425, 439, 446, EGC, Jakarta. Medscape, 2013, Liver Anatomy, http://emedicine.medscape.com/article/1900159overview, diakses tanggal 17 Oktober 2014. Miller, A.L., 1996, Antioxidant Flavonoids: Structure, Function and Clinical Usage, Alternative Medicine Review, 1 (2), 103. Nopitasari, K.Y., 2013, Efek Hepatoprotektif Pemberian Jangka Panjang Ektrak Etanol Biji P. americana Mill. terhadap Aktivitas ALT dan AST Serum pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, 61, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta Nugraha, A.S., Ninisita, S.H., dan Sri, U.S., 2008, Efek Hepatoprotektif Ekstrak Buah Merah (Pandanus conoideus Lam.) pada Hati Mencit Jantan Galur Swiss Induksi dengan CCl4, Jurnal Natur Indonesia, 11 (1), 28. Panjaitan, R. G. P., Ekowati, H., Chairul, Masriani, Zulfa, Z., dan Wasmen, M., 2007, Pengaruh Pemberian Karbon Tetraklorida Terhadap Fungsi Hati dan Ginjal Tikus, MAKARA KESEHATAN, 11 (1), 11-16. Rajendran, R., Hemalatha, S., Akasakalai, K., Madhukrishna, C.H., Bavan, S., Vittal, dan Sundaram, R.M., 2009, Hepatoprotective Activity of Mimosa


pudica Leaves Against Carbontetrachoride Induced Toxicity, Journal of Natural Products, 2, 120-121. Redha, A., 2010, Flavonoid: Struktur, Sifat Antioksidatif dan Perannya Dalam Sistem Biologis, Jurnal Belian, 09 (2), 196. Sasadara, M. M. V., 2013, Efek Hepatoprotektif Jangka Pendek Ekstrak Metanol Biji P. americana Mill. terhadap Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skripsi, 61-62, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta Sari, S.P., Azizahwati, dan Retno, A., 2008, Efek Hepatoprotektif Rebusan Akar Tapak Liman pada Tikus Putih yang Diinduksi dengan Karbom Tetraklorida, Jurnal Farmasi Indonesia, 4 (2), 75-81. Sihombing, M., dan Raflizar, 2010, Status Gizi dan Fungsi Hati Mencit (Galur CBS-Swiss) dan Tikus Putih (Galur Wistar) di Laboratorium Hewan Percobaan Puslitbang Biomedis dan Farmasi, Media Litbang Kesehatan, 20 (1), 34. Staf Pengajar Departemen Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Sriwijaya, 2008, Kumpulan Kuliah Farmakologi, edisi 2, EGC, Jakarta, hal.742 Sutedjo, AY., 2006, Buku Saku Mengenal Penyakit Melalui Hasil Pemeriksaan Laboratorium, Amara Books, Yogyakarta, 73-74. Tensiska, Marsetio, dan Silvia, O.N.Y., 2007, Pengaruh Jenis Pelarut Terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar Isoflavon dari Ampas Tahu, Hasil Penelitian, Universitas Padjajaran, Bandung. Timbrell, J.A., 2009, Principles of Biochemical Toxicology, 4th Edition, Informa Healthcare USA, New York, hal. 308 Tindall, B., 1995, Anatomy and Physiology for Nurses, diterjemahkan oleh Syabariyah, S., hal. 347, EGC, Jakarta. Vinha, A.F., Joana, M., and Sergio, V.P.B., 2013, Physicochemical Parameters, Phytochemical Composition and Antioxidant Activity of the Algarvian Avocado (P. americana Mill.), Canadian Center of Science and Education, 5 (12), 100-106. Widjaja, I. H., 2008, Anatomi Abdomen, EGC, Jakarta, hal. 67, 72. Wijaya, L.S., 2013, Efek Antihepatotoksik Infusa Herba Mimosa pigra L. Terhadap Tikus Putih Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida, Skrisi, 38, 43, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.


Wijayanti, A.D., Syarifuddin, T., dan Soesanto, M., 2003, Effect of Antioxidant Flavonoid on Microsomal Protein Concertration of Rat’s Liver Induced by Carbontetrachoride, J.Sain Vet., XXI (2), 18. Yasir, M., Das,S., and Kharya, M.D., 2010, The Phytochemical and Pharmacological Profile of P. americana Mill., NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3249906/, diakses pada 14 Maret 2014. Zuhrotun, A., 2007, Aktivitas Antidiabetes Ekstrak Etanol Biji Buah Alpukat (P. americana Mill. ) Bentuk Bulat, Karya Ilmiah, Universitas Padjadjaran Fakultas Farmasi, Jatinangor.


LAMPIRAN


Lampiran 1. Foto bagian kulit buah P. americana Mill.

Lampiran 2. Foto serbuk kulit buah P.americana Mill.

Lampiran 3. Foto ekstrak etanol kulit buah P.americana Mill.

Lampiran 4. Larutan ekstrak etanol kulit buah P.americana Mill.


Lampiran 5. Surat pengesahan determinasi buah P. americana Mill.


Lampiran 6. Determinasi buah P. americana Mill.

Lampiran 7. Perhitungan persen rendemen ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill.

% Rendemen

= =

total ekstrak kulit 𝑃𝑃.𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎 Mill .

total serbuk kulit 𝑃𝑃.𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎 Mill . 44,8 𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔 320 𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔𝑔

= 14 %

X 100%

X 100%


Lampiran 8. Surat keterangan kadar air kulit buah P. americana Mill.


Lampiran 9. Surat pengesahan Medical and Health Research Ethics Committee (MHREC)


Lampiran 10. Hasil Uji Statistik Orientasi Pencuplikan Darah Tabel VIII. Data Purata dan Standar Eror Aktivitas ALT pada jam ke-0, 24, dan 48 Selang waktu (jam) 0 24 48

Purata aktivitas serum ALT ± SE (U/I) 72.3±4.50 217.3±2.11 90.3±2.91 Keterangan : SE = Standar Eror

AKTIVITAS ALT ORIENTASI Descriptive Statistics N Jam_0 Jam_24 Jam_48

Mean 3 3 3

Std. Deviation

72.3333 2.1733E2 90.3333

10.06645 4.72582 6.50641

Minimum

Maximum

63.00 212.00 84.00

83.00 221.00 97.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Jam_0 N Normal Parametersa

Most Extreme Differences

Mean Std. Deviation Absolute Positive Negative

Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) a. Test distribution is Normal.

Jam_24

Jam_48

3 3 3 72.3333 2.1733E2 90.3333 1.00664E 4.72582 6.50641 1 .219 .304 .187 .219 .219 .187 -.189 -.304 -.181 .380 .527 .324 .999 .944 1.000

Hasil uji normalitas One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test aktivitas ALT menunjukkan distribusi data normal (p>0,05). Selanjutnya homogenitas data diuji dengan Levene test.


Oneway Descriptives ALT

N 1 2 3 Total

Std. Deviation

Mean 3 72.3333 3 2.1733E2 3 90.3333 9 1.2667E2

95% Confidence Interval for Mean Std. Error Lower Bound Upper Bound

10.06645 5.81187 4.72582 2.72845 6.50641 3.75648 68.74773 22.91591

47.3269 205.5938 74.1705 73.8225

Minimum

97.3398 229.0729 106.4961 179.5108

Maximum

63.00 212.00 84.00 63.00

83.00 221.00 97.00 221.00

Test of Homogeneity of Variances ALT Levene Statistic .742

df1

df2 2

Sig. 6

.515

Levene Statistic menunjukkan nilai p = 0,515 (p>0,05) yang menunjukkan varians data yang sama sehingga uji hipotesis dapat dilakukan dengan One Way ANOVA dengan uji post hoc dengan menggunakan Scheffe ANOVA ALT Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

Mean Square

37478.000

2

332.000 37810.000

6 8

F

18739.000 338.657 55.333

Sig. .000


Multiple Comparisons ALT

scheffe (I) perlakuan

(J) perlakuan

Mean Difference (IJ)

95% Confidence Interval Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

*

6.07362

.000

-164.4797

-125.5203

-18.00000

6.07362

.067

-37.4797

1.4797

145.00000

*

6.07362

.000

125.5203

164.4797

127.00000

*

6.07362

.000

107.5203

146.4797

18.00000

6.07362

.067

-1.4797

37.4797

Jam 24 -127.00000 6.07362 *. The mean difference is significant at the 0.05 level.

.000

-146.4797

-107.5203

Jam 0

Jam 24 Jam 48

Jam 24

Jam 0 Jam 48

Jam 48

Jam 0

-145.00000

*

Homogeneous Subsets ALT Scheffe Subset for alpha = 0.05 Jam

N

1

2

1 3 72.3333 3 3 90.3333 2 3 217.3333 Sig. .067 1.000 Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

Nilai signifikansi yang diperoleh adalah : -

Jam ke-0 dan 24 p = 0,000 (p<0,05) menunjukkan bahwa ada perbedaan bermakna antara ke-2 kelompok.

-

Jam ke-0 dan 48 p = 0,067 (p>0,05) menunjukkan bahwa ada perbedaan tidak bermakna antara ke-2 kelompok.

-

Jam ke-24 dan 48 p = 0,000 (p<0,05) menunjukkan bahwa ada perbedaan bermakna antara ke-2 kelompok


Lampiran 11. Analisis statistik aktivitas serum ALT perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Descriptive Statistics N Kontrol_CCl4 Kontrol_Oliveoil Kontrol_Ekstrak Dosis_1 Dosis_2 Dosis_3

Mean 5 5 5 5 5 5

Std. Deviation

2.4684E2 81.6000 2.5450E2 1.0950E2 2.1712E2 1.2270E2

Minimum

22.87855 6.87750 10.14446 29.15450 65.22160 22.31401

Maximum

221.00 70.00 247.70 71.80 135.60 100.20

270.00 88.00 272.20 144.50 298.50 150.50

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Kontrol ekstrak 1400 Kontrol_CCl4 Kontrol_Oliveoil mg/kgBB N Normal Mean Parametersa Std. Deviation Most Absolute Extreme Positive Differences Negative Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed)

Dosis_1

Dosis_2

Dosis_3

5 1.0950E2

5 2.1712E2

5 1.2270E2

5 246.8400

5 5 81.6000 254.5000

22.87855

6.87750 10.14446 2.91545E1 6.52216E1 2.23140E1

.241 .241 -.239 .539 .934

.323 .176 -.323 .723 .673

.343 .343 -.251 .767 .598

.196 .196 -.185 .439 .991

.243 .178 -.243 .544 .928

.220 .220 -.178 .491 .969

a. Test distribution is Normal.



Descriptives ALT 95% Confidence Interval for Mean N 1 2 3 4 5 6 Total

Mean 5 5 5 5 5 5 30

Std. Deviation Std. Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum

2.4684E2 81.6000 2.5430E2 1.0950E2 2.1712E2 1.2484E2 1.7237E2

22.87855 6.87750 10.32037 29.15450 65.22160 29.68523 76.61101

10.23160 3.07571 4.61541 13.03829 29.16799 13.27564 13.98719

218.4325 73.0605 241.4856 73.2999 136.1367 87.9809 143.7596

275.2475 90.1395 267.1144 145.7001 298.1033 161.6991 200.9737

221.00 70.00 246.70 71.80 135.60 88.60 70.00

270.00 88.00 272.20 144.50 298.50 157.60 298.50

Test of Homogeneity of Variances ALT Levene Statistic

df1

7.218

df2 5

Sig. 24

.000

Levene test menunjukkan nilai p= 0,000 (p<0,05) yang menunjukkan varians data yang tidak sama sehingga uji hipotesis dilakukan Kruskall-Wallis dengan uji post hoc dengan menggunakan Mann-Whitney. Descriptive Statistics N ALT Perlakuan

Mean 30 30

Std. Deviation

1.7237E2 3.5000

Kruskal-Wallis Test Ranks Perlakua n ALT

N

Mean Rank

1

5

23.60

2

5

3.80

3

5

24.60

4

5

9.00

5

5

20.20

6

5

11.80

Total

30 Test Statisticsa,b ALT

Chi-Square Df Asymp. Sig. a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Perlakuan

23.441 5 .000

76.61101 1.73702

Minimum 70.00 1.00

Maximum 298.50 6.00


Dengan uji Kruskall- Wallis, diperoleh nilai p= 0,000 (p <0,005) yang menunjukkan bahwa paling tidak terdapat perbedaan aktivitas ALT antar kelompok. Analisis Pos Hoc dilakukan dengan uji Mann-Whitney. •

Mann-Whitney Test Ranks Perlakua n

ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

Kontrol CCl4

5

8.00

40.00

Kontrol olive oil

5

3.00

15.00

Total

10

Test Statisticsb ALT Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.000 15.000 -2.611 .009 .008a

a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan

Nilai signifikansi yang diperoleh 0,008 (p<0,05) yang menunjukkan bahwa berbeda bermakna antara kedua kelompok. •

Mann-Whitney Test Ranks Perlakuan

ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

Kontrol CCl4 2 ml/kgBB

5

5.40

27.00

Kontrol ekstrak etanol kulit buah P.americana 1400 mg/kgBB

5

5.60

28.00

Total

10

Test Statisticsb ALT Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: Perlakuan

12.000 27.000 -.104 .917 1.000a


Nilai signifikansi yang diperoleh 1,000 (p>0,05) yang menunjukkan bahwa berbeda tidak bermakna antara kedua kelompok. •


ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00

Ekstrak etanol kulit buah P.americana 350 mg/kgBB +CCl4 2 ml/kgBB

5

3.00

15.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a




ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

6.20

31.00


5

4.80

24.00

Total

10 b

Test Statistics

ALT Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

9.000 24.000 -.731 .465 .548a


Nilai signifikansi yang diperoleh 0,548 (p>0,05) yang menunjukkan bahwa berbeda tidak bermakna antara kedua kelompok.


•


ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a




ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

Kontrol olive oil 2 ml/kgBB

5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a


Nilai signifikansi yang diperoleh 0,008 (p<0,05) yang menunjukkan bahwa berbeda bermakna antara kedua kelompok.


•


ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.80

19.00


5

7.20

36.00

Total

10


4.000 19.000 -1.776 .076 .095a




ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10 Test Statisticsb ALT

Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.000 15.000 -2.611 .009 .008a




•


ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a




ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

Kontrol ekstrak etanol kulit buah1400 mg/kgBB

5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a




•


ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

Kontrol ekstrak etanol kulit buah 1400 mg/kgBB

5

7.00

35.00


5

4.00

20.00

Total

10


5.000 20.000 -1.567 .117 .151a




ALT

N

Mean Rank Sum of Ranks

Kontrol ekstrak etanol kulit buah1400 mg/kgBB

5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a




•


ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks

Ekstrak etanol kulit buah 350 mg/kgBB +CCl4 2 ml/kgBB

5

3.20

16.00


5

7.80

39.00

Total

10


1.000 16.000 -2.402 .016 .016a


Nilai signifikansi yang diperoleh 0,016 (p<0,05) yang menunjukkan bahwa berbeda bermakna antara kedua kelompok. • Mann-Whitney Test Ranks Perlakuan ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

4.60

23.00


5

6.40

32.00

Total

10


8.000 23.000 -.940 .347 .421a




•


ALT

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

7.60

38.00


5

3.40

17.00

Total

10


2.000 17.000 -2.193 .028 .032a



Keterangan : EEKPA = ekstrak etanol kulit buah P. americana


Lampiran 12. Analisis statistik aktivitas serum AST perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana Mill. setelah induksi karbon tetraklorida dosis 2 mL/kgBB Descriptive Statistics N Kontrol_CCl4 Kontrol_Oliveoil Kontrol_Sediaan Dosis_1 Dosis_2 Dosis_3

Mean 5 5 5 5 5 5

Std. Deviation

7.6222E2 1.2782E2 1.5260E2 2.2190E2 7.8872E2 1.2270E2

Minimum

96.48493 16.34494 13.03438 77.88219 161.45444 22.31401

Maximum

666.00 106.10 137.20 129.60 626.10 100.20

867.60 147.00 168.20 321.70 1059.00 150.50

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

N Normal Mean Parametersa Std. Deviation Most Absolute Extreme Positive Differences Negative Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed)

Kontrol_CCl4

Kontrol_Olive Kontrol_S oil ediaan

5 762.2200

5 5 127.8200 152.6000

96.48493

16.34494 13.03438

.302 .302 -.257 .676 .751

.229 .156 -.229 .512 .956

.185 .169 -.185 .414 .995

Dosis_1

Dosis_2

Dosis_3

5 5 5 2.2190E2 7.8872E2 1.2270E2 1.61454E 2.23140E 7.78822E1 2 1 .168 .354 .220 .168 .354 .220 -.163 -.157 -.178 .376 .790 .491 .999 .560 .969

a. Test distribution is Normal.


Descriptives AST 95% Confidence Interval for Mean N 1 2 3 4 5 6 Total

Mean 5 5 5 5 5 5 30

7.6222E2 1.2782E2 1.5260E2 2.2190E2 7.8872E2 1.2270E2 3.6266E2

Std. Deviation Std. Error Lower Bound Upper Bound Minimum Maximum 96.48493 16.34494 13.03438 77.88219 161.45444 22.31401 308.42942

43.14937 7.30968 5.82915 34.82997 72.20462 9.97913 56.31125

642.4181 107.5251 136.4157 125.1965 588.2478 94.9935 247.4906

882.0219 148.1149 168.7843 318.6035 989.1922 150.4065 477.8294

666.00 106.10 137.20 129.60 626.10 100.20 100.20

867.60 147.00 168.20 321.70 1059.00 150.50 1059.00


Test of Homogeneity of Variances AST Levene Statistic

df1

df2

3.813

5

Sig. 24

.011

Levene test menunjukkan nilai p= 0,011 (p<0,05) yang menunjukkan varians data yang tidak sama sehingga uji hipotesis dilakukan Kruskall-Wallis dengan uji post hoc dengan menggunakan Mann-Whitney. Descriptive Statistics N AST Perlakuan

Mean 30 30

Std. Deviation

3.6266E2 3.5000

308.42942 1.73702

Minimum 100.20 1.00

Maximum 1059.00 6.00

Kruskal-Wallis Test Ranks Perlakua n AST

N

Mean Rank

1

5

2

5

6.80

3

5

13.00

4

5

16.00

5

5

25.80

6

5

6.20

Total

25.20

30

Test Statisticsa,b AST Chi-Square Df Asymp. Sig.

23.797 5 .000

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: Perlakuan

Dengan uji Kruskall- Wallis, diperoleh nilai p= 0,000 (p <0,005) yang menunjukkan bahwa paling tidak terdapat perbedaan aktivitas ALT antar kelompok. Analisis Pos Hoc dilakukan dengan uji Mann-Whitney.


•

Mann-Whitney Test Ranks Perlakua n

AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks

Kontrol CCl4

5

8.00

40.00

Kontrol olive oil

5

3.00

15.00

Total

10

Test Statisticsb AST Mann-Whitney U Wilcoxon W Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)]

.000 15.000 -2.611 .009 .008a




AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a




•


AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00

Ekstrak etanol kulit buah P.americana 350 mg/kgBB

5

3.00

15.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a




AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

5.20

26.00


5

5.80

29.00

Total

10


11.000 26.000 -.313 .754 .841a




•


AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a




AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.40

17.00


5

7.60

38.00

Total

10


2.000 17.000 -2.193 .028 .032a




•


AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.60

18.00


5

7.40

37.00

Total

10


3.000 18.000 -1.984 .047 .056a




AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a




•


AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

5.80

29.00


5

5.20

26.00

Total

10


11.000 26.000 -.313 .754 .841a




AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

4.00

20.00


5

7.00

35.00

Total

10


5.000 20.000 -1.567 .117 .151a




•


AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a




AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

7.40

37.00


5

3.60

18.00

Total

10


3.000 18.000 -1.984 .047 .056a




•


AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

3.00

15.00


5

8.00

40.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a




AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

7.60

38.00


5

3.40

17.00

Total

10


2.000 17.000 -2.193 .028 .032a




•


AST

N

Mean Rank

Sum of Ranks


5

8.00

40.00


5

3.00

15.00

Total

10


.000 15.000 -2.611 .009 .008a



Keterangan : EEKPA = ekstrak etanol kulit buah P. americana


Lampiran 13. Perhitungan konversi dosis untuk manusia • Angka konversi tikus 200 g manusia 70 kg = 56,0 •

Total ekstrak kulit buah P.americana 44,8 gram dari total serbuk yang digunakan 320 gram. Sedangkan

dosis ekstrak etanol kulit buah

P.americana 350 mg/kgBB. Persamaan dosis ekstrak yang digunakan dengan dosis kulit buah P.americana adalah : Total ekstrak kulit buah 𝑃𝑃.𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎 Total serbuk kulit buah 𝑃𝑃.𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎 44,8 gram

320 gram

= =

Dosis ekstrak kulit buah 𝑃𝑃.𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎 Dosis serbuk kulit buah 𝑃𝑃.𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎𝑎

3,5 gram /kgBB x gram /kgBB

X = 25 gram/kgBB

•

Dosis untuk manusia = dosis untuk tikus 200 g x angka konversi ke manusia.

Maka ditetapkan dosis ekstrak etanol kulit buah P. americana •

Ekstrak etanol kulit buah P.americana dosis 350 mg/kgBB tikus : 0,35 g/kg BB = 0,35 g/1000g BB = 0,07g/200g BB 0,07 g/200g BB x 56,0 = 3,92 g/ 70 kg BB manusia = 2,8 g/50 kg BB manusia

Maka ditetapkan dosis serbuk kulit buah P. americana •

Ekstrak etanol kulit buah P.americana dosis 25 g/kgBB tikus : 25 g/kg BB = 25 g/1000g BB = 5 g/200g BB 5 g/200g BB x 56,0 = 280 g/ 70 kg BB manusia = 200 g/50 kg BB manusia


Lampiran 14. Perhitungan Efek Hepatoprotektif

•

• •

[1 −

(𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴 𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 −𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴 𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘 𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛 )

𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴 𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘 𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘 𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡𝑡 −𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝𝑝 𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴𝐴 𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘𝑘 𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛𝑛

] x 100%

Perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350 mg/kgBB (109,5−81,6) [1 − ] x 100% = 83,1 % 246,8−81,6

Perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 700 mg/kgBB (217,1−81,6) [1 − ] x 100% = 17,9% 246,8−81,6

Perlakuan ekstrak etanol kulit buah P. americana dosis 350 mg/kgBB (124,8−81,6) [1 − ] x 100% = 73,8 % 246,8−81,6

Lampiran 15. Konversi waktu tikus ke manusia 1 hari tikus = 1,2 bulan manusia 1 jam tikus = 1,5 hari manusia 4 jam tikus = 6 hari manusia 6 jam tikus = 9 hari manusia (Sasadara, 2013)

.


BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi dengan judul “Efek Hepatoprotektif Pemberian Jangka Pendek Ekstrak Etanol Kulit Persea americana Mill. Terhadap Aktivitas ALT- AST Pada Tikus Terinduksi Karbon Tetraklorida” memiliki nama lengkab MM. Risa Puspitasari. Penulis lahir di Adiluwih pada tanggal 22 Mei 1993, merupakan putri ketiga dari tiga bersaudara dalam keluarga pasangan AL. Suyadi dan M. Sainah. Penulis mengawali masa pendidikannya di TK Darma Wanita Adiluwih (1997 - 1999) kemudian melanjutkan pendidikan tingkat Sekolah Dasar di SD Negeri 1 Adiluwih (1999 – 2005). Pendidikan Sekolah Menengah Pertama ditempuh oleh penulis di SMP Negeri 1 Adiluwih (2005 – 2008) dan melanjutkan pendidikan Sekolah Menengah Atas di SMA Xaverius Pringsewu (2008 – 2011). Penulis melanjutkan pendidikan sarjana di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2011. Selama menempuh pendidikan sarjana, penulis aktif dalam berbagai kepanitiaan. Penulis pernah menjadi panitia Sie. Keamanan dan Transportasi Keluarga Mahasiswa/i & Pelajar Katolik Sumatera Bagian Selatan (KMPKS) (2011), peserta dalam Pelatihan Pembuatan Produk Farmasi “Pharmacy (Re) Action” (2011), panitia Sie. Konsumsi acara Makrab KMPKS (2012), sebagai anggota Divisi Sosial KMPKS (2011-2012), panitia Sarasehan Spiritualitas Ignasian (2014), panitia Sie Konsumsi Acara Komisi Pemilihan Umum Gubernur BEMF & Ketua DPMF Farmasi (2013). Penulis pernah mengikuti Program Kreativitas Mahasiswa dengan judul “ Makan Bakpia Madiun Mengembangkan Kebiasaan Berprilaku Hidup Bersih, Sehat dan Nyaman dengan Media Panggung Boneka di Bawah Jembatan Bersama Anak-anak RW. 13 Jogoyudan, Kelurahan Gowongan , Kecamatan Jetis, Yogyakarta” (2014).

EFEK HEPATOPROTEKTIF PEMBERIAN JANGKA PENDEK. EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH Persea americana Mill. TERHADAP AKTIVITAS ALT-AST PADA TIKUS TERINDUKSI KARBON

Recommend Documents