EFEK HEPATOPROTEKTIF INFUSA DAUN Macaranga tanarius L. PADA TIKUS JANTAN GALUR WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA SKRIPSI

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

EFEK HEPATOPROTEKTIF INFUSA DAUN Macaranga tanarius L. PADA TIKUS JANTAN GALUR WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Nanda Chris Nurcahyanti NIM : 098114079

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013 i


ii


iii


HALAMAN PERSEMBAHAN

“ Sebab TUHAN, Dia sendiri akan berjalan di depanmu, Dia sendiri akan menyertai engkau, Dia tidak akan membiarkan engkau dan tidak akan meninggalkan engkau; janganlah takut dan janganlah patah hati.” (Ulangan 31 : 8) Karya ini kupersembahan kepada : Yesus Kristus, Juruselamat dan tempatku berseru Papa Mamaku tercinta,dan Cyntia adikku,serta keluarga besarku yang selalu mendukungku dalam doa Sahabat-sahabatku yang selalu mengisi keceriaan dan semangat Mas, Mbak, dan Kawan sepelayanku yang tersayang Serta Almamterku tercinta

iv


v


vi


PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Tuhan Yang Maha Kasih atas berkat dan rahmat-Nya yang melimpah, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul “Efek Hepatoprotektif Infusa Daun Macaranga Tanarius L. Pada Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida” ini dengan baik. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.) Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Penulis menyadari bahwa dalam penyelesaian skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan dan campur tangan dari berbagai pihak, baik secara langsung maupun tidak langsung. Oleh karena itu, penulis hendak mengucapkan terimakasih kepada: 1.

Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

2.

Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. selaku Dosen Pembimbing dan Dosen Penguji pada skripsi ini atas segala kesabaran, bantuan, bimbingan, serta motivasi dan masukan kepada penulis dalam pengerjaaan skripsi ini.

3.

Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dosen Penguji skripsi yang telah banyak member perhatian, masukkan dan saran kepada penulis.

4.

Bapak Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt. selaku Dosen Penguji skripsi yang telah banyak memberi perhatian, masukkan dan saran kepada penulis.

vii


5. Ibu

Rini

Dwiastuti,

M.Si.,

Apt

selaku

Kepala

Penanggungjawab

Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberikan ijin dalam penggunaan semua fasilitas laboratorium untuk kepentingan penelitian skripsi ini 6. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., yang telah memberikan bantuan dalam determinasi tanaman M. tanarius 7. Bapak Heru, Bapak Parjiman, Bapak Kayat, Bapak Wagiran selaku laboran laboratorium Fakultas Farmasi dan Ibu Hartini serta Bapak Arzan selaku pengurus taman Universitas Sanata Dharma Kampus III yang telah banyak memberikan bantuan selama proses pelaksanaan penelitian. 8. Rekan-rekan tim Macaranga 2012, Theresia Garri W., M.R. Biri Kony Tiala, Fransisca Devita R.W., Christine Herdyana F., Bernadetta Amilia R., A.M. Inggrid Silli, dan Luluk Rahendra M. atas segala kerjasama, bantuan dan dukungan dalam pengerjaan skripsi. 9. Sahabat-sahabatku Veronika Dita A., Niken Ambar S., Novia Sarwoningtyas, Nugroho Kristanto dan Hanung Dwi N., atas motivasi, doa, kebersamaan dan persahabatannya. 10. Seluruh dosen dan teman-teman FSM B 09, FKK B 09 serta seluruh angkatan 2009 Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. 11. Semua pihak yang penulis tidak dapat menyebutkan satu-persatu yang telah ikut membantu selama penyusunan skripsi ini. Penulis menyadari bahwa setiap manusia tidak ada yang sempurna. Oleh karena itu, penulis membuka dan mengharapkan kritik, saran dan masukan yang viii


ix


DAFTAR ISI Halaman HALAMAN JUDUL ...............................................................................

i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ........................................

ii

HALAMAN PENGESAHAN ..................................................................

iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ...............................................................

iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ...................................................

v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ...................................

vi

PRAKATA ..............................................................................................

vii

DAFTAR ISI ...........................................................................................

x

DAFTAR TABEL ...................................................................................

xv

DAFTAR GAMBAR ...............................................................................

xvii

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................

xix

INTISARI ................................................................................................

xx

ABSTRACT ..............................................................................................

xxi

BAB I. PENGANTAR .............................................................................

1

A. Latar Belakang ..................................................................................

1

1. Perumusan masalah ......................................................................

3

2. Keaslian penelitian .......................................................................

3

3. Manfaat penelitian ........................................................................

4

B. Tujuan Penelitian ..............................................................................

4

1. Tujuan umum ...............................................................................

4

x


2. Tujuan khusus ..............................................................................

5

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ......................................................

6

A. Hati ...................................................................................................

6

B. Kerusakan Hati .................................................................................

8

1. Steatosis (Perlemakan hati) ...........................................................

8

2. Nekrosis .......................................................................................

9

3. Sirosis .........................................................................................

9

C. Hepatotoksin .....................................................................................

10

1. Hepatotoksin tipe A (teramalkan) .................................................

10

2. Hepatotoksin tipe B (tak teramalkan) ............................................

10

D. Karbon Tetraklorida (CCl4) ...............................................................

10

E. Metode Pengujian Hepatoprotektif ....................................................

14

1. Tes enzim serum...........................................................................

14

2. Tes eskretori hepatik .....................................................................

15

3. Perubahan kandungan kimia hati ..................................................

15

4. Analisis histologik kerusakan hati.................................................

16

F. ALT dan AST ...................................................................................

16

G. Macaranga tanarius L. .....................................................................

17

1. Sinonim ........................................................................................

17

2. Nama lain .....................................................................................

17

3. Taksonomi....................................................................................

18

4. Penyebaran ...................................................................................

18

5. Morfologi .....................................................................................

18

xi


6. Kandungan kimia .........................................................................

19

7. Khasiat dan kegunaan ...................................................................

20

H. Infusa ...............................................................................................

20

1. Definisi ........................................................................................

20

2. Cara pembuatan ............................................................................

20

I.

Landasan Teori .................................................................................

21

J.

Hipotesis ..........................................................................................

22

BAB III. METODE PENELITIAN ..........................................................

23

A. Jenis dan Rancangan Penelitian .........................................................

23

B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional ....................................

23

1. Variabel penelitian .......................................................................

23

2. Definisi operasional ......................................................................

24

C. Bahan Penelitian ...............................................................................

25

1. Bahan utama .................................................................................

25

2. Bahan kimia .................................................................................

25

D. Alat Penelitian ..................................................................................

27

1. Alat pembuatan serbuk daun M. tanarius ......................................

27

2. Alat pembuatan infusa daun M. tanarius .......................................

27

3. Alat pengukuran kadar ALT-AST serum ......................................

27

E. Tata Cara Penelitian ..........................................................................

28

1. Determinasi tanaman ....................................................................

28

2. Pengumpulan bahan uji.................................................................

28

3. Pembuatan serbuk.........................................................................

28

xii


4. Penetapan kadar air simplisia serbuk kering daun M. tanarius ......

28

5. Pembuatan infusa daun M. tanarius ..............................................

29

6. Pembuatan larutan karbon tetraklorida 50% ..................................

29

7. Uji pendahuluan ...........................................................................

29

8. Pengelompokan hewan uji ............................................................

30

9. Pembuatan serum .........................................................................

31

10. Pengukuran aktivitas ALT-AST serum .......................................

31

F. Tata Cara Analisis Hasil ....................................................................

32

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .................................................

33

A. Penyiapan Bahan Uji ........................................................................

33

1. Hasil determinasi tanaman ............................................................

33

2. Penetapan kadar air serbuk kering M. tanarius .............................

33

B. Uji Pendahuluan ................................................................................

34

1. Penetapan dosis infusa daun M. tanarius ......................................

34

2. Penetapan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida .........................

35

3. Penetapan waktu pencuplikan darah .............................................

35

4. Penetapan lama praperlakuan infusa daun M. tanarius .................

38

C. Hasil Efek Hepatoprotektif Infusa daun M. tanarius dengan Kajian kadar ALT-AST serum......................................................................

39

1. Kontrol negatif (olive oil 2 ml/kgBB) ...........................................

42

2. Kontrol hepatotoksin CCl4 2 ml/kgBB ..........................................

44

3. Kontrol negatif infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB ............

46

4. Kelompok perlakuan infusa daun M. tanarius dosis 2,5; 5 dan xiii


10 g/kgBB pada tikus jantan galur Wistar terinduksi CCl4 2 ml/kgBB ...........................................................................

47

D. Rangkuman Pembahasan ...................................................................

53

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................

55

A. Kesimpulan .......................................................................................

55

B. Saran.................................................................................................

55

DAFTAR PUSTAKA ..............................................................................

56

LAMPIRAN ............................................................................................

58

BIOGRAFI PENULIS .............................................................................

84

xiv


DAFTAR TABEL Halaman Tabel I.

Peningkatan kadar beberapa enzim serum pada pemejanan beberapa senyawa toksik ........................................................... 17

Tabel II.

Komposisi reagen serum ALT diasys ........................................ 26

Tabel III. Komposisi reagen serum AST diasys ........................................ 26 Tabel IV. Purata aktivitas ALT-AST serum tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada penetapan waktu pencuplikan darah (n=5) ........................................................... 36 Tabel V.

Hasil uji Scheff aktivitas ALT-serum tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada penetapan waktu pencuplikan darah .......................................... 37

Tabel VI. Hasil uji Mann-Whitney aktivitas AST-serum tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada penetapan waktu pencuplikan darah .......................................... 37 Tabel VII. Purata

+

aktivitas

ALT-AST

serum

tikus

setelah

praperlakuan pemberian infusa daun M. tanarius selama 6 hari dan pada hari ke-7diberi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB ................................................................................... 39 Tabel VIII. Hasil uji Tamhane aktivitas ALT-serum tikus setelah praperlakuan pemberian infusa daun M. tanarius selama 6 hari dan pada hari ke-7diberi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB ................................................................................... 41 xv


Tabel IX. Hasil uji Scheff

aktivitas AST-serum tikus setelah

praperlakuan pemberian infusa daun M. tanarius selama 6 hari dan pada hari ke-7diberi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB ................................................................................... 41 Tabel X.

Purata + aktivitas ALT- serum tikus sebelum dan sesudah pemberian olive oil dosis 2 ml/kgBB......................................... 42

Tabel XI. Purata + aktivitas AST- serum tikus sebelum dan sesudah pemberian olive oil dosis 2 ml/kgBB......................................... 42

xvi


DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 1. Struktur mikroskopik hati ......................................................... 7 Gambar 2. Struktur molekul karbon tetraklorida (CCl4).............................. 10 Gambar 3. Mekanisme

biotransformasi

dan

oksidasi

karbon

tetraklorida ............................................................................... 12 Gambar 4. Senyawa yang terkandung pada daun M. tanarius ..................... 19 Gambar 5. Diagram batang purata aktivitas ALT-serum tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada penetapan waktu pencuplikan darah .......................................... 36 Gambar 6. Diagram batang purata aktivitas AST-serum tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada penetapan waktu pencuplikan darah .......................................... 36 Gambar 7. Diagram batang purata aktivitas ALT-serum tikus setelah praperlakuan pemberian infusa daun M. tanarius selama 6 hari dan pada hari ke-7diberi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB ................................................................................... 40 Gambar 8. Diagram batang purata aktivitas AST-serum tikus setelah praperlakuan pemberian infusa daun M. tanarius selama 6 hari dan pada hari ke-7diberi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB ................................................................................... 40 Gambar 9. Diagram batang purata aktivitas ALT-serum tikus sebelum dan sesudah pemberian olive oil dosis 2 ml/kgBB ..................... 43 xvii


Gambar 10.Diagram batang purata aktivitas AST-serum tikus sebelum dan sesudah pemberian olive oil dosis 2 ml/kgBB ..................... 43

xviii


DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1.

Foto daun M. tanarius .......................................................... 59

Lampiran 2.

Foto infusa daun M. tanarius ................................................ 59

Lampiran 3.

Hasil uji Anova waktu cuplikan darah .................................. 60

Lampiran 4.

Hasil uji Kolmogorov Smirnov, ANOVA oneway, ALTserum tikus jantan setelah praperlakuan infusa daun M. tanarius selama 6 hari .......................................................... 64

Lampiran 5.

Hasil uji Kolmogorov Smirnov, ANOVA oneway, ASTserum tikus jantan setelah praperlakuan infusa daun M. tanarius selama 6 hari .......................................................... 67

Lampiran 6.

Hasil uji kontrol negatif olive oil .......................................... 71

Lampiran 7.

Perhitungan efek hepatoprotektif .......................................... 78

Lampiran 8.

Perhitungan penetapan peringkat dosis infusa daun M. tanarius pada kelompok perlakuan ....................................... 78

Lampiran 9.

Perhitungan konversi dosis untuk manusia ........................... 79

Lampiran 10. Penetapan kadar air serbuk daun M. tanarius........................ 80 Lampiran 11. Hasil

validitas

dan

reabilitas

pengukuran

alat

Mikrovitalab ........................................................................ 80 Lampiran 12. Surat determinasi tanaman M. tanarius................................. 82 Lampiran 13. Surat Ethical Clearence Penelitian ....................................... 83

xix


INTISARI

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian infusa daun M. tanarius pada penurunan aktivitas ALT-AST serum pada tikus terinduksi CCl4, sehingga dapat digunakan sebagai hepatoprotektor. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni rancangan acak pola searah yang menggunakan 30 ekor tikus jantan galur Wistar, umur 2-3 bulan, dan berat badan + 150-250 gram. Tikus dibagi menjadi enam kelompok. Kelompok I (kontrol negatif) diberi olive oil dengan dosis 2 ml/kgBB. Kelompok II (kontrol hepatotoksin) diberi larutan CCl4 50% 2 ml/kgBB. Kelompok III (kontrol infusa) diberi infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB selama enam hari berturut-turut. Kelompok IV-VI tikus diberi infusa daun M. tanarius berturut-turut dengan dosis 2,5 g/kgBB; 5 g/kgBB; dan 10 g/kgBB sekali sehari selama 6 hari. Pada hari ke-7 semua perlakuan diberi larutan CCl4 50% 2 ml/kgBB. Sesuai waktu cuplikan darah yang ditentukan darah diambil dari sinus orbitalis mata tikus untuk diukur aktivitas ALT-AST serumnya. Kadar ALT-AST dianalisis dengan metode Kolmogorov Smirnov untuk melihat distribusi data tiap kelompok. Jika didapatkan distribusi data yang normal maka dilanjutkan dengan analisis pola searah (One Way ANOVA) dengan taraf kepercayaan 95% dan dilanjutkan dengan uji Scheffe atau Tamhane untuk melihat perbedaan antar kelompok bermakna (signifikan) (p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan) (p>0,05). Berdasarkan hasil penelitian dari data ALT serum yang diperoleh, dari tatacara analisis hasil yang digunakan, infusa daun M. tanarius memberikan efek hepatoprotektif pada dosis 2,5 g/kgBB; 5 g/kgBB; dan 10 g/kgBB secara berturutturut sebesar 44,1%, 39,6%, dan 58,1%. Kata kunci : Macaranga tanarius, hepatoprotektif, infusa, ALT, AST, karbon tetraklorida

xx


ABSTRACT

The research has purpose to get information about effect the aqueous extract of M. tanarius leaf’s for decreased activity of serum ALT-AST in rats induced by CCl4, so it can be used as hepatoprotector. The research was pure experimental with direct sampling design using 30 male Wistar strain rats, age 2-3 month, and the weight + 150-250 grams. The rats were divided into six groups. Rats in group I (negative control) were given 2 ml/kgBB doses of olive oil continually in 6 days. Group II (hepatotoxin control) rats were given 2 ml/kgBB doses of CCl4 solution 50%. Group III (control of aqueous extract) rats were given 10 g/kgBB doses of M. tanarius leaf’s aqueous extract in 6 days as a negative. In group IV- VI, the rats were given 2,5 g/kgBB; 5 g/kgBB; 10 g/kgBB doses of M. tanarius leaf’s aqueous extract continually in 6 days and on the 7th day, the rats were given 2 ml/kgBB doses of CCl4. The level of ALT-AST serum was analyzed with Kolmogorov Smirnov to see distribution of each group. If got normal distribution then continue analyzed with One Way ANOVA with trust level 95% and continue with Scheffe or Tamhane test to see difference among each group, significant (p<0,05) or not significant (p>0,05). Based of the result of the research from level of ALT serum, from the analyzer that used, the aqueous extract of M. tanarius leaf’s give hepatoprotective effect in 2,5 g/kgBB; 5 g/kgBB; dan 10 g/kgBB doses continues 44,1%, 39,6%, and 58,1%.

Keywords : Macaranga tanarius, hepatoprotective, the aqueous extract, ALT, AST, carbon tetracloride

xxi


BAB I PENGANTAR

A. Latar Belakang Hati merupakan organ yang mempunyai peranan penting bagi manusia, karena hati berperan dalam metabolisme dan mengeluarkan hasil produksi dari makanan (Wibowo dan Paryana, 2009). Jika hati mengalami kerusakan maka dapat mengganggu proses-proses di dalam tubuh dan dapat berakibat fatal. Kerusakan hati dapat disebabkan karena induksi suatu senyawa kimia dan infeksi virus. Telah dilaporkan kasus kerusakan hati terutama perlemakan hati terjadi 29 per 1000 orang per tahun, sedangkan di Jepang angka kejadiannya mencapai 3186 per 1000 orang per tahun (Kalbe Medical Dept., 2012). Penelitian obat baru untuk mengatasi kerusakan hati di Indonesia sampai saat ini masih sangat terbatas, oleh sebab itu perlu dilakukan penelitian mengenai obat baru dari kekayaan alam Indonesia. Macaranga tanarius L. (M. tanarius) merupakan salah satu tanaman yang dikembangkan di daerah tropis dan salah satunya merupakan tanaman asli Indonesia (World Agroforestry Centre, 2002). Pada penelitian Matsunami, Takamori, Shinzato, Aramoto, Kondo, Otsuka, dan Takeda (2006), M. tanarius dilaporkan mempunyai kandungan glikosida diantaranya

macarangiosida

A,

macarangiosida

B,

macarangiosida

C,

macarangiosida D, dan malofenol B. Pada penelitian Matsunami, Otsuka, Kondo, Shinzato, Kawahata, Yamaguchi, dan Takeda (2009) melaporkan adanya senyawa glikosida yaitu (macarangiosida A-C dan malofenol B) yang diisolasi dari ekstrak 1

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI 2

methanol M. tanarius menunjukkan aktivitas penangkapan radikal terhadap DPPH. Pada penelitian Mahendra dan Hendra (2011); Nugraha dan Hendra (2011) serta Kurniawati, Adrianto, dan Hendra (2011) dilaporkan bahwa ekstrak metanolair daun M. tanarius mempunyai efek antiinflamasi, selain itu infusa dan ekstrak metanol-air daun M. tanarius mempunyai efek hepatoprotektif pada tikus jantan terinduksi parasetamol. Oleh sebab itu, pada penelitian ini akan dilihat pengaruh pemberian infusa daun M. tanarius pada tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida (CCl4) Karbon tetraklorida (CCl4) merupakan cairan jernih yang mudah menguap dan mudah larut dalam eter. Senyawa ini biasanya digunakan untuk sintesis senyawa kimia. Telah diketahui bahwa karbon tetraklorida merupakan salah satu senyawa hepatotoksin. Senyawa ini akan menghasil radikal bebas triklorometil dengan katalis enzim sitokrom P-450 yang dapat menimbulkan peroksidasi lipid. Hasil ini dapat menyebabkan kerusakan sel berupa perlemakan hati (steatosis) (Timbrell, 2008). Spektrum efek toksik karbon tetraklorida pada hati inilah sehingga karbon tetraklorida digunakan sebagai model dalam menggambarkan kerusakan hati yang terjadi pada penelitian ini. Pada penelitian ini digunakan bentuk sediaan infusa didasarkan pada penelitian Matsunami, dkk (2009) dilaporkan bahwa dengan pelarut yang bersifat polar dapat menarik senyawa antioksidan dari daun M. tanarius. Oleh sebab itu, diharapkan dengan pelarut air senyawa antioksidan dapat tertarik juga. Selain itu, pemilihan infusa sebagai sediaan pada penelitian ini adalah karena pembuatan


infusa sesuai standart pembuatan sediaan herbal relatif mudah sehingga dalam aplikasi di masyarakat dapat diterapkan. 1. Perumusan masalah a. Apakah

pemberian

infusa

daun

M.

tanarius

mempunyai

efek

hepatoprotektif dengan menurunkan kadar ALT-AST serum pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida? b. Berapakah dosis efektif infusa daun M. tanarius yang memberikan pengaruh penurunan kadar ALT-AST serum pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida? 2. Keaslian penelitian Penelitian

yang

menggunakan

M.

tanarius

sebelumnya

adalah

Matsunami, dkk (2006, 2009) dan Phommart, Pakawade, Nitirat, Somsak, dan Somyote

(2005).

Matsunami

dkk,

(2006,

2009)

melaporkan

adanya

macarangiosida A, macarangiosida B, macarangiosida C, dan malofenol B pada tanaman M. tanarius yang mempunyai aktivitas antioksidan. Phommart dkk (2005) melaporkan kandungan tanaman M. tanarius berupa tanariflavanon B, tanariflavanon C, tanariflavanon D, nymphaeol A, nymphaeol B, nymphaeol C, blumenol A dan blumenol B. Penelitian lain yang menggunakan M. tanarius adalah penelitian Puteri dan Kawabata (2010), yang melaporkan bahwa terdapat 5 senyawa baru yang dapat diisolasi dan diidentifikasi dari ekstrak EtOAc daun M. tanarius, yaitu mallotinic acid, corilagin, chebulagic acid, macatannin A dan macatannin B. Senyawa-senyawa tersebut diidentifikasi dapat menghambat enzim α-glucosidase (α-glucosidase inhibitor, AGIs).


Selain itu Mahendra dan Hendra (2011) serta Nugraha dan Hendra (2011) telah melakukan penelitian tentang efek hepatoprotektif infusa daun M. tanarius pada tikus jantan terinduksi parasatamol. Selain kedua penelitian itu juga telah ada penelitian mengenai efek inflamasi dan efek hepatoprotektif ekstrak metanol-air daun M. tanarius pada tikus jantan terinduksi parasetamol (Kurniawati, Andrianto, dan Hendra 2011). Berdasarkan penelitian tentang M. tanarius yang telah dilakukan, maka penelitian mengenai pengaruh infusa daun M. tanarius pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida belum pernah dilakukan. 3. Manfaat penelitian a.

Manfaat teoritis Penelitian ini diharapkan bermanfaatkan bagi perkembangan ilmu

pengetahuan dalam bidang farmasi mengenai pengaruh infusa daun M. tanarius pada kadar ALT-AST serum. b.

Manfaat praktis Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi mengenai

pengobatan alternatif pada kerusakan hati.

B. Tujuan Penelitian 1. Tujuan umum Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan bahwa pemberian infusa daun M. tanarius mempunyai efek hepatoprotektif dengan menurunkan kadar ALT-AST serum pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida.


2. Tujuan khusus Penelitian ini khususnya bertujuan untuk mengetahui dosis paling efektif dari infusa daun M. tanarius untuk berpengaruh menurunkan kadar ALT-AST serum.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Hati Hati merupakan organ atau kelenjar terbesar dalam tubuh. Hati disebut kelenjar karena menghasilkan empedu dan mengeluarkan hasil produksi dari makanan. Selain itu hati juga berperan dalam metabolisme. Hati mempunyai dua facies yaitu facies diaphragmatica dan facies visceralis. Facies diafragmatica letaknya di sebelah atas dengan bentuk sesuai lengkung diapfragma dengan permukaan yang halus. Permukaan ini terdiri dari bagian anterior dan posterior. Sedangkan facies visceralis menghadap ke bawah dan ke belakang sehingga permukaannya ireguler (Wibowo dan Paryana, 2009). Hati terbagi menjadi dua lobus (lobus kanan dan lobus kiri). Lobus kanan terbagi menjadi daerah superior dan posterior dibatasi oleh fisura segmentalis. Lobus kiri dibagi menjadi segmen medial dan lateral oleh ligamentum falsiformis. Setiap lobus hati terdapat struktur yang disebut lobulus. Lobulus terdiri dari lempeng-lempeng sel hati yang berbentuk kubus dan mengelilingi vena sentralis (Gambar 1). Di antara lempeng-lempeng sel hati tersebut terdapat kapiler-kapiler yang disebut sinusoid yang merupakan cabang dari vena porta dan arteri hepatica. Antar sinusoid dibatasi oleh sel Kupffer yang mempunyai fungsi untuk memfagosit bakteri dan benda asing lain dalam saluran darah (Price dan Wilson, 2005).

6


Gambar 1. Struktur mikroskopik hati (Ganong dan McPhee, 2011).

Hati menerima darah dari vena portae hepatis (70%) dan arteri hepatica (30%). Arteri hepatica membawa darah yang berisi oksigen yang berasal arteria hepatica communis , di sebelah kiri ductus choledocus dan di depan vena portae (Wibowo dan Paryana, 2009). Vena porta membawa darah vena dari usus halus yang kaya akan nutrien yang baru diserap, obat, dan racun langsung ke hati. Vena porta membentuk jalinan khusus yang memungkinkan setiap hepatosit terbasahi langsung oleh darah yang terbawa dalam vena porta (Ganong dan McPhee, 2011). Sel-sel hati mendapat suplai darah dari vena portae hepatis yang kaya nutrisi, tidak membawa oksigen, dan kadang bersifat toksik. Selain itu juga mendapat suplai darah dari arteria hepatica yang mengandung oksigen. Peredaran darah yang tidak biasa ini menyebabkan sel hati relatif kekurangan oksigen, sehingga mengakibatkan sel hati lebih rentan terhadap kerusakan dan penyakit (Wibowo dan Paryana, 2009).


B. Kerusakan Hati Kerusakan hati yang dapat timbul dari berbagai jenis senyawa toksik adalah sebagai berikut. 1. Steatosis (Perlemakan hati) Perlemakan hati atau steatosis merupakan suatu kondisi dimana terjadi peningkatan kandungan lipid di dalam hati. Peningkatan kandungan lipid ini dapat mencapai 5%. Perlemakan hati dapat terjadi dari beberapa peristiwa yaitu kelebihan asam lemak bebas di dalam hati, adanya gangguan siklus trigliserida, peningkatan pola sintesis atau esterifikasi dari asam lemak, penurunan oksidasi asam lemak, penurunan sintesis apoprotein dan penurunan sintesis atau sekresi dari VLDL (Gregus dan Klaaseen, 2001). Mekanisme yang paling umum mendasari adanya perlemakan hati adalah rusaknya pelepasan trigliserid hati ke dalam plasma. Karena trigliserid hati hanya disekresi bila dalam keadaan tergabung dengan lipoprotein (Lu, 1995). Perlemakan hati biasanya merupakan suatu respon pemejanan dari beberapa hepatotoksin. Beberapa senyawa hepatotoksin yang menyebabkan steatosis adalah karbon tetraklorida, etanol, fialuridini, dan asam valproat (Gregus dan Klaaseen, 2001). Beberapa senyawa lain yang dapat menimbulkan lesi akut adalah etionin, fosfor, dan tetrasiklin dengan menyebabkan banyak butiran lemak kecil, sedangkan lesi kronik dapat disebabkan oleh etanol dan metotreksat dengan menyebabkan butiran lemak besar menggantikan inti. (Lu, 1995).


2. Nekrosis Nekrosis ditandai dengan pembengkakan sel, kebocoran, disintegrasi nukleus, dan adanya sel-sel inflamasi. Sel-sel yang telah mati dapat bertahan selama berhari-hari ketika sejumlah besar sel sel mati. Ketika terjadi nekrosis pada hepatosit, terkait adanya kebocoran membran, nekrosis dapat dideteksi dengan pengujian biokimia plasma (atau serum) untuk enzim yang dihasilkan di sitosol.

Informasi

utamanya

adalah

aktivitas

tingkat

enzim

alanin

aminotransferase (ALT) yang mendominasi enzim di hepatosit, selain itu juga dapat dideteksi dengan laktat dehidrogenase (LDH), yang ditemukan dalam banyak jaringan (Gregus dan Klaaseen, 2001). 3. Sirosis Sirosis merupakan bentuk kerusakan yang terakhir, dan merupakan tahap kerusakan hati yang kronis. Sirosis ditandai dengan akumulasi sejumlah jaringan fibrosa yang luas, khususnya serabut-serabut kolagen, sebagai respon terhadap kerusakan atau terhadap peradangan. Akibat peradangan zat kimia berulang kali, sel-sel hepatik yang hancur digantikan dengan jaringan parut fibrotik. Akibat endapan kolagen yang terus-menerus, anatomi hati terganggu oleh jaringan parut fibrotik yang saling berhubungan. Ketika jaringan parut fibrotik membagi-bagi massa hati yang masih baik menjadi nodul-nodul dengan hepatosit yang masih beregenerasi, fibrosis telah berkembang menjadi sirosis dan hati memiliki kapasitas cadangan fungsional yang sangat kecil untuk menjalankan fungsi hati. Sirosis bersifat irreversibel, memiliki harapan hidup yang kecil, dan biasanya merupakan hasil paparan berulang zat kimia beracun (Treinen dan Moslen, 2001).


C. Hepatotoksin Senyawa atau obat yang dapat menyebabkan kerusakan hati terbagi menjadi dua macam sebagai berikut. 1. Hepatotoksin tipe A (teramalkan) Merupakan suatu senyawa atau obat jika diberikan dapat menimbulkan kerusakan hati pada sebagian besar orang yang mengkonsumsi senyawa tersebut pada dosis pemberian yang mencukupi untuk menimbulkan efek toksik. Jadi untuk menimbulkan ketoksikan hepatotoksin tipe A bergantung pada dosis. Contoh obat dari hepatotoksin tipe A adalah tetrasiklin, parasetamol, karbon tetraklorida, dan salisilat (Forrest, 2006). 2. Hepatotoksin tipe B (tak teramalkan) Merupakan senyawa atau obat yang sebenarnya tidak menimbulkan efek pada hati namun jika diberikan kepada orang tertentu akan menimbulkan efek toksik. Hepatotoksin tipe B ini tidak bergantung dengan dosis pemberian senyawa. Kejadian adanya toksisitas pada hepatotoksin jenis ini sangat jarang, terjadi pada 1 : 1000 orang. Contoh obat yang termasuk tipe B adalah isoniazid, halothane, dan chlorpromazine (Forrest, 2006). D. Karbon tetraklorida (CCl4)

Gambar 2. Struktur molekul karbon tetraklorida (CCl4) (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan 1995)


Karbon tetraklorida (CCl4) (Gambar 2) adalah suatu cairan jernih yang mudah menguap, tidak berwarna, dan dengan bau khas. Senyawa ini memiliki BM 153,82 dan sangat sukar larut dalam air (Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, 1995). Efek hepatotoksik dari karbon tetraklorida telah banyak dipelajari daripada hepatotoksin lain. Karbon tetraklorida merupakan molekul sederhana, yang jika diberikan kepada berbagai spesies, menyebabkan perlemakan hati (steatosis) dan nekrosis sentrilobular hepatik. Pemberian atau pemejanan secara kronis menyebabkan sirosis hati, tumor hati dan juga kerusakan ginjal. Hati menjadi target utama dari ketoksikan karbon tetraklorida karena ketoksikan senyawa ini bergantung pada aktivasi metabolisme oleh sitokrom P-450 (CYP2E1). Dosis rendah karbon tetraklorida hanya menyebabkan perlemakan hati dan destruksi sitokrom P-450 (Timbrell, 2008). Destruksi sitokrom P-450 terjadi terutama di sentrilobular dan daerah tengah hati. Senyawa ini selektif untuk isoenzim tertentu, pada tikus diketahui selektif untuk CYP2E1, sedangkan pada isoenzim lain seperti CYP1A1 tidak mempengaruhi. Destruksi CYP2E1 tampaknya dipengaruhi oleh jumlah oksigen yang tersedia (Timbrell, 2008). Sebagai enzim mikrosomal CYP2E1 akan mempengaruhi aktivasi metabolit yang terbentuk, hal ini dapat meningkatkan atau mengurangi sifat toksik dari senyawa induk. Dalam metabolisme karbon tetraklorida, CYP2E1 berfungsi sebagai agen pereduksi dan mengkatalis adisi elekron yang mengakibatkan hilangnya satu ion klorin sehingga membentuk radikal bebas triklorometil (•CCl3) yang merupakan metabolit reaktif (Gambar 3). Jika ada O 2 (oksigen), radikal


bebas triklorometil ini akan berubah menjadi radikal bebas triklorometilperoksi (•OOCCl3) yang lebih reaksif (Gregus dan Klaaseen, 2001).

Gambar 3. Mekanisme biotransformasi dan oksidasi karbon tetraklorida (Timbrell, 2008)

Radikal triklorometil yang dihasilkan dapat mengalami suatu reaksi. Atom hidrogen yang berasal dari metilen dapat menjembatani reaksi dengan asam lemak tak jenuh atau protein yang akan menghasilkan ikatan kovalen dengan lemak mikrosomal dan protein, dan akan beraksi secara langsung dengan fosfolipid dan kolesterol yang bersifat toksik. Reaksi ini juga akan menghasilkan kloroform, yang merupakan salah satu metabolit dari karbon tetraklorida. Hasil lain dari reaksi ini adalah radikal lipid yang tidak stabil selanjutnya akan


mengakibatkan peroksidasi lipid. Pembentukan peroksidasi lipid hasil dari pemecahan lemak tak jenuh dapat memberikan senyawa karbonil seperti 4hydroxyalkenal dan hydroxynonenal lainnya. Senyawa-senyawa tersebut diketahui memiliki efek biokimia seperti menghambat sintesis protein dan menghambat enzim glukosa-6-fosfat (Timbrell, 2008). Setelah pemejanan karbon tetraklorida selama satu sampai tiga jam, trigliserida menumpuk di hepatosit dan terlihat sebagai droplet lipid. Lipid dalam hati yang terbentuk ini dapat menghambat sintesis protein sehingga menurunkan produksi lipoprotein, yang merupakan senyawa yang bertanggung jawab dalam transport lipid untuk keluar dari hepatosit. Akibat menurunnya produksi lipoprotein maka transport lipid akan terhambat sehingga menyebabkan steatosis (Timbrell, 2008). Peroksidasi lipid juga dapat menyebabkan kerusakan membran sel dan kerusakan mitokondria. Kerusakan ini berupa gangguan integritas membran yang menyebabkan keluarnya berbagai isi sitoplasma, antara lain enzim ALT. Enzim ALT yang ada di dalam sel akan keluar dan masuk ke dalam peredaran darah sehingga jumlah enzim ALT meningkat (Wahyuni, 2005). Penggunaan karbon tetraklorida sebagai senyawa model hepatotoksin telah banyak dilakukan. Pada penelitian Hogade, Patil, Wadkar, Mathapati, Dhumal (2010) melaporkan bahwa aktivitas ALT dan AST serum pada tikus yang terinduksi karbon tetraklorida mencapai tiga dan empat kali nilai normal. Selain itu, Iniaghe, Malomo, dan Adebayo (2008) juga melaporkan bahwa aktivitas ALT serum pada tikus yang terrinduksi karbon tetraklorida melampaui tiga kali nilai


normal. Hal ini menegaskan bahwa dengan adanya induksi karbon tetraklorida dapat meningkatkan aktivitas ALT-AST serum. Tubuh sebenarnya mempunyai sistem pertahanan untuk mengatasi radikal bebas, salah satunya adalah glutation-S-transferase (GSH) sebagai antioksidan endogen. Jika terdapat radikal bebas di dalam tubuh, GSH akan menangkap radikal bebas tersebut (Timbrell, 2008).

E. Metode Pengujian Hepatoprotektif Pemeriksaan kondisi kerusakan hati dapat dilakukan dengan beberapa uji di laboratorium. Pemeriksaan tersebut meliputi tes enzim serum, tes ekstkretori hepatik, perubahan kandungan kimia hati dan analisis histologik kerusakan hati (Plaa dan Charbonneau, 2001). 1. Tes enzim serum Dalam mengidentifikasi kerusakan hati, terdapat beberapa kategori enzim serum yang didasarkan pada spesifikasi dan sensitivitas berbagai tipe kerusakan hati. Kategori pertama adalah alkalinfosfatase, 5’-nukleotidase (5’NT), dan gamma-glutamiltranspeptidase ( -GT). Kenaikan aktivitas enzim-enzim serum tersebut memperlihatkan ada kerusakan kolestatik. Kategori kedua spesifik untuk kerusakan hati sitotoksik. Kategori kedua ini dibagi lagi menjadi beberapa kategori. Enzim yang tidak spesifik dan dapat menunjukkan kerusakan jaringan ekstrahepatik misalnya aspartat aminotransferase (AST) dan laktat dehidrogenase (LDH). Pengukuran aktivitas enzim tersebut lebih hepatospesifik, terutama penggunaan untuk penelitian senyawa-senyawa yang belum diketahui potensi


kehepatoksikannya (Plaa dan Charbonneau, 2001). Enzim yang paling spesifik untuk mengukur kerusakan yang terjadi di hati adalah Alanin aminotransferase (ALT) (Timbrell, 2008). 2. Tes ekskretori hepatik Beberapa senyawa kimia yang berada di sirkulasi sistemik diekskresikan oleh hati dalam bentuk tidak berubah atau diubah didalam hepatosit. Senyawa itu seperti bilirubin dan xenobiotika lainnya dapat digunakan untuk mendeteksi dan menentukan kerusakan hepatik karena berasal dari dalam hati. Apabila terjadi perubahan jumlah senyawa-senyawa tersebut di dalam sirkulasi sistemik, dapat diindikasikan terdapat kelainan di hati (Plaa dan Charbonneau, 2001). 3.

Perubahan kandungan kimia hati Senyawa hepatotoksin dapat menyebabkan perubahan struktur dan

fungsional hepatik. Hal ini berguna untuk mendeteksi dan menetapkan tingkat kerusakan hati yang terjadi. Perubahan ini dapat mempengaruhi metabolisme suatu obat sehingga merubah efek farmakologis obat tersebut. Hal ini dapat digunakan untuk mendeteksi dan menentukan disfungsi hati, seperti pada terjadinya perpanjangan durasi efek dari pentobarbital dapat digunakan untuk menentukan hepatotoksisitas relatif haloalkana. Panjang durasi pentobarbital tergantung pada kemampuan hati memetabolisme barbiturat. Adanya kerusakan sel hati dapat menurunkan enzim pemetabolisme obat di hati, yang menyebabkan perpanjangan waktu tidur pentobarbital (Plaa dan Charbonneau, 2001).


4. Analisis histologik kerusakan hati Analisis potensi hepatotoksik terhadap zat kimia di hati dapat dilengkapi dengan deskripsi histologi kerusakan yang dihasilkan. Ciri-ciri kerusakan hati ditentukan dengan pengamatan mikroskopik cahaya dari sel hati (Plaa dan Charbonneau, 2001).

F. ALT dan AST Dua enzim yang berkaitan dengan kerusakan hati adalah enzim aminotrasnferase yang mengkatalisis pemindahan reversibel suatu gugus amino di antara sebuah asam amino dan sebuah asam alfa-keto. Fungsi kedua enzim ini penting untuk pembentukan asam-asam amino yang dibutuhkan untuk menyusun protein hati. Aspartat aminotransferase (AST) atau juga disebut glutamateoksaloasetat transminase (GOT) adalah enzim yang memperantai reaksi antara asam aspartat dan alfa-ketoglutamat. Alanin aminotransferase (ALT) yang disebut juga sebagai glutamate-piruvat transaminase (GPT) berperan dalam memindahkan satu gugus amino di antara alanin dan asam ketoglutamat. Enzim AST dan ALT dianggap enzim hati karena konsentrasinya tinggi di hati, namun dari keduanya yang spesifik untuk hati adalah ALT, AST terdapat juga di miokardium, otot rangka, otak, dan ginjal (Sacher dan Mc Pherson, 2002). Pada gangguan hati kadar ALT dan AST akan mengalami peningkatan atau penurunan bersamaan. Apabila sel hati mengalami cedera, enzim yang normal berada di intrasel ini akan masuk ke dalam aliran darah dan terjadi peningkatan kadar kedua enzim ini di dalam darah. Peningkatan kadar


aminotransferase setara dengan luas kerusakan hepatoselular (Sacher dan Mc Pherson, 2002). Peningkatan kadar ALT-AST serum pada kerusakan hati tergantung pada senyawa toksik yang terpapar (Tabel I.) (Zimmerman, 1999).

Tabel I. Peningkatan kadar beberapa enzim serum pada pemejanan beberapa senyawa toksik

Senyawa toksik CCl4 Thioacetamide Tetrasiklin Ethionine Phosphorous

Lesi yang ditimbulkan Nekrosis Steatosis + + + + + + +

Peningkatan kadar enzim serum AST ALT OCT,SDH 4+ 3+ 4+ 4+ 3+ 4+ 2 + 1+ + + 1-2+ 1-2+ 1-2+

Keterangan : ALT, alanin aminotransferase; AST, aspartate aminotransferase; CCl4, karbon tetraklorida; OCT, ornithine carbamoyl transferase; SDH, sorbitol dehydrogenase

(Zimmerman, 1999).

G. Macaranga tanarius L. 1. Sinonim Macaranga molliuscula Kurz., Macaranga tomentosa Druce, dan Mappa tanarius Blume (World Agroforestry Centre. 2002). 2. Nama lain a. Inggris

: hairy mahang

b. Filipina

: binunga, himindan, kuyonon

c. Indonesia

: hanuwa, mapu, mara, tutup ancur

d. Malaysia

: ka-lo, kundoh, mahang puteh, tampu

e. Thailand

: hu chang lek, ka-lo, lo khao, mek, paang


f. Vietnam

: hach dâu nam (World Agroforestry Centre. 2002).

3. Taksonomi Kingdom

: Plantae

Subkingdom

: Tracheobionta (tumbuhan berpembuluh)

Divisio

: Spermatophyta (menghasilkan biji)

Sub-Divisi

: Magnoliophyta (tumbuhan berbunga)

Classis

: Magnoliopsida (berkeping dua/dikotil)

Sub-classis

: Rosidae

Ordo

: Euphorbiales

Familia

: Euphorbiaceae

Genus

: Macaranga

Spesies

: Macaranga tanarius L. (Plantamor, 2008).

4. Penyebaran Tanaman M. tanarius banyak ditemukan tumbuh di daerah tropis tertutama di daerah hutan hujan tropis. Tanaman ini banyak ditemukan di banyak Negara antara lain : Australia, Brunei, Kamboja, China, Indonesia, Vietnam, Jepang, Laos, Malaysia, Myanmar, Papua Nugini, Filipina, Taiwan, dan Thailand (World Agroforestry Centre. 2002). 5. Morfologi M. tanarius merupakan tanaman pohon yang tingginya dapat mencapai 20 meter. Cabang pohon agak tebal dan berwarna hijau keabu-abuan. Daun


berwarna hijau dengan bentuk jantung dan pangkalnya berbentuk bulat, ukuran daun berkisar 8-32 x 5-28 cm. Panjang tangkai daun 6-27 cm, perbungaan terjadi di ketiak daun, bunga jantan dapat terdiri dari benang sari, sedangkan bunga betina dapat terdiri dari dua sel ovari. Buah berbentuk kapsul biccocus dengan panjang 1 cm, berwarna kekuningan, terletak di luar kelenjar. Biji berbentuk bulat dengan ukuran 5 mm, dan berkerut (World Agroforestry Centre. 2002). 6. Kandungan kimia Matsunami dkk., (2006, 2009) telah melaporkan bahwa dalam daun M. tanarius terdapat kandungan kimia seperti pada Gambar 4. berikut ini :

Gambar 4. Senyawa yang terkandung pada daun M. tanarius (Matsunami dkk, 2006).

Matsunami, dkk (2009) melaporkan adanya senyawa glikosida yaitu macarangiosida A-D dan malofenol B yang diisolasi dari ekstrak metanol M. tanarius

menunjukkan

aktivitas

penangkapan

radikal

terhadap

DPPH.

Macarangiosida A-D dan malofenol B memiliki ikatan α-β unsaturated. Kemungkinan pada atom C-β inilah radikal bebas terikat karena sifat ikatan α-β unsaturated yang khas. Selain itu, Phommart dkk (2005) melaporkan kandungan


lain dari tanaman M. tanarius berupa tanariflavanon B, tanariflavanon C, tanariflavanon D, nymphaeol A, nymphaeol B, nymphaeol C, blumenol A dan blumenol B. 7. Khasiat dan kegunaan Tanaman M. tanarius di Thailand digunakan telah banyak dimanfaatkan untuk kesehatan. Bagian daun segar digunakan sebagai antiinflamasi, dekok dari akarnya digunakan sebagai antipireutik dan antitusif, bagian akar segar digunakan sebagai antiemetik (Phommart dkk, 2005). Puteri dan Kawabata (2010) melaporkan bahwa daun M. tanarius dapat digunakan sebagai kandidat antidiabetes.

H. Infusa 1. Definisi Infus merupakan sediaan cair yang dibuat dengan cara mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90 o C selama 15 menit. Pembuatan infus merupakan cara yang paling sederhana untuk membuat sediaan herbal dari bahan lunak seperti daun dan bunga. Dapat diminum panas atau dingin. Sediaan herbal yang mengandung minyak atsiri akan berkurang khasiatnya apabila tidak menggunakan penutup pada pembuatan infus (Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2010). 2. Cara pembuatan Infusa dibuat dengan cara mencampur serbuk simplisia derajat halus yang sesuai dengan sejumlah air pada panci, dipanaskan di atas penangas air


selama 15 menit terhitung setelah suhu mencapai 90 oC sambil sesekali diaduk. Serkai selagi panas dengan kain flanel, tambahkan air panas secukupnya melalui ampas hingga diperoleh volume yang dikehendaki (Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2010).

I. Landasan Teori Kerusakan hati dapat berwujud nekrosis dan sirosis. Adanya kerusakan pada sel hati ini dapat diindentifikasi dengan mengukur aktifitas pelepasan enzim tertentu dari sel hati menuju plasma. Enzim yang dapat digunakan sebagai tolok ukur

tersebut

seperti

Aspartat

aminotransferase

(AST)

dan

Alanin

aminotransferase (ALT). Bila terjadi kerusakan seperti steatosis pada sel hati maka nilai aktifitas dari kedua enzim ini dapat meningkat menjadi 3 dan 4 kali lipat nilai normal (Zimmerman, 1999). Karbon tetraklorida (CCl4) diketahui sebagai salah satu senyawa model hepatotoksin yang dapat menyebabkan perlemakan pada sel hati. Senyawa ini akan menghasil radikal bebas triklorometil dengan katalis enzim sitokrom P-450 yang dapat menimbulkan peroksidasi lipid serta dapat berikatan secara kovalen dengan protein dan lipid sehingga mengakibatkan steatosis dan tertimbunnya lipid ini dapat mengganggu integritas membrane sel hati (Timbrell, 2008). Pada penelitian dari Matsunami dkk., (2006) melaporkan kandungan dari M. tanarius, yaitu macarangiosida A, macarangiosida B, macarangiosida C, dan malofenol B yang diisolasi dari ekstrak metanol daun M. tanarius mempunyai aktivitas penangkapan radikal terhadap DPPH yang dapat berpotensi sebagai zat


.antioksidan. Senyawa-senyawa glikosida yang terlarut dalam pelarut polar ini diharapkan dapat menghambat pembentukan peroksidasi lipid sehingga dapat mengurangi efek toksik yang ditimbulkan oleh karbon tetraklorida. Mahendra dan Hendra (2011) serta Nugraha dan Hendra (2011) melaporkan bahwa infusa daun M. tanarius mempunyai pengaruh berupa penurunan kadar ALT dan AST serum tikus jantan yang terinduksi parasetamol.

J. Hipotesis Pemberian infusa daun M. tanarius mempunyai efek hepatoprotektif dengan menurunkan kadar ALT-AST serum pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida (CCl4).


BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah.

B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional 1. Variabel penelitian Variabel-variabel yang terdapat pada penelitian ini antara lain : a. Variabel bebas : Variabel bebas dalam penelitian ini adalah dosis infusa daun M. tanarius yang dibuat dalam tiga peringkat dosis. Dosis infusa daun M. tanarius adalah volume (ml) infusa daun M. tanarius tiap satuan kg berat badan hewan uji yang bersangkutan. b. Variabel tergantung : Variabel tergantung pada penelitian ini adalah kadar ALT-AST serum pada tikus jantan galur Wistar yang terinduksi karbon tetraklorida (CCl4) setelah pemberian infusa daun M. tanarius. c. Variabel pengacau terkendali : 1) Kondisi hewan uji, yaitu menggunakan tikus berjenis kelamin jantan, dengan galur Wistar, berat badan 150-250, umur 2-3 bulan

23


2) Frekuensi pemberian infusa daun M. tanarius, diberikan 1x selama 6 hari berturut-turut pada waktu pemberian yang sama. 3) Cara pemberian senyawa uji dilakukan secara peroral dan pemberian hepatotoksin karbon tetraklorida diberikan secara intraperitonial. 4) Bahan uji yang digunakan berupa daun M. tanarius yang diambil di kebun obat Universitas Sanata Dharma dan diambil pada bulan Mei 2012. d. Variabel pengacau tidak terkendali : Variabel pengacau yang tidak terkendali pada penelitian ini adalah kondisi patofisiologis hewan uji. 2. Definisi operasional a. Infusa daun M. tanarius, merupakan hasil infudasi 50,0 g sebuk kering daun M. tanarius dalam 200,0 ml air pada suhu 900C selama 15 menit. Serkai selagi panas dengan kain flannel, kemudian diuapkan dengan waterbath hingga bobot infusa mencapai bobot yang sama dengan bobot serbuk kering daun M. tanarius yang sebelumnya diinfudasi sehingga diperoleh infusa daun M. tanarius 100%. b. Efek hepatoprotektif infusa daun M. tanarius, merupakan kemampuan infusa daun M. tanarius untuk dapat melindungi hati dari adanya induksi suatu hepatotoksin.


C. Bahan Penelitian 1. Bahan utama a. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus jantan galur Wistar dengan range berat badan 150-250 g dan umur 2-3 bulan yang diperoleh dari Laboratorium Imono Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. b. Bahan uji yang digunakan adalah daun tanaman M. tanarius yang diambil dari Kebun Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada bulan Mei 2012. 2. Bahan kimia a. Bahan hepatotoksin yang digunakan adalah karbon tetraklorida yang diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma dalam pelarut olive oil (Bertolli). b. Pelarut untuk sediaan uji (infusa) adalah aquadest yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi-Toksikologi Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. c. Reagen serum ALT yang digunakan adalah reagen serum ALT diasys, dengan komposisi sebagai berikut .


Tabel II. Komposisi reagen serum ALT diasys

Komposisi

R1

Jumlah

TRIS pH 7.15

140 mmol/L

L-Alanine

700 mmol/L

LDH (lactate

> 2300 U/L

dehydrogenase) 2-Oxoglutarate

R2

85 mmol/L

NADH

Pyridoxal-5-phosphate FS :

Good’s buffer

1 mmol/L pH

100 mmol/L

9.6 Pyridoxal-5-phosphate

13 mmol/L

d. Reagen serum AST yang digunakan adalah reagen serum AST diasys, dengan komposisi sebagai berikut . Tabel III. Komposisi reagen serum AST diasys

Komposisi

R1

Jumlah

TRIS pH 7.65

110 mmol/L

L-Aspartate

320 mmol/L

MDH (malate

> 800 U/L

dehydrogenase) LDH (lactate

> 1200 U/L

dehydrogenase) R2 Pyridoxal-5-phosphate FS :

2-Oxoglutarate

65 mmol/L

NADH Good’s buffer

1 mmol/L pH

9.6 Pyridoxal-5-phosphate

100 mmol/L 13 mmol/L


e. Kontrol serum Cobas (PreciControl ClinChem Multi 1) Roche/Hitachi analyzer digunakan sebagai kontrol serum dalam validasi pengujian kadar ALT-AST serum. f. Aqua bidestilata yang digunakan sebagai blanko dalam pengukuran kadar ALT-AST serum diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Instrumental Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. g. Olive oil (Bertolli) sebagai kontrol negatif. D. Alat Penelitian 1. Alat pembuatan serbuk daun M. tanarius Alat yang digunakan untuk pembuatan serbuk daun M. tanarius meliputi oven, mesin penyerbuk, dan timbangan analitik (Mettler Toledo). 2. Alat pembuatan infusa daun M. tanarius Alat yang digunakan untuk pembuatan infusa M. tanarius meliputi seperangkat alat gelas (Bekker glass (Iwaki Pyrex), gelas ukur (Iwaki Pyrex), dan batang pengaduk), cawan porselin, panci lapis alumunium, penangas air (Memert), termometer, timbangan analitik (Mettler Toledo), stopwatch, dan kain flanel. 3. Alat pengukuran kadar ALT-AST serum Alat yang digunakan dalam pengukuran meliputi seperangkat alat gelas (Bekker glass (Iwaki Pyrex), gelas ukur (Iwaki Pyrex), tabung reaksi dan batang pengaduk), timbangan analitik (Mettler Toledo), spuit injeksi intraperitonial dan peroral untuk tikus (Terumo), pipa kapiler, Eppendrof, vortex (Genie Wilten), sentrifuge (Centurium Scientific), stopwatch dan Microlab 200 Merck.


E. Tata Cara Penelitian 1. Determinasi tanaman Determinasi tanaman M. tanarius dilakukan dengan mencocokan ciri-ciri tanaman M. tanarius dengan buku acuan (Backer dan Bakhuizen, 1963). Determinasi dilakukan oleh Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., dosen Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2. Pengumpulan bahan uji Bahan uji yang digunakan adalah daun M. tanarius yang masih segar dan berwarna hijau, dipetik dari Kebun Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada bulan Mei 2012. 3. Pembuatan serbuk Daun segar M. tanarius yang telah dipetik dicuci bersih dan dikering anginkan. Setelah kering daun dimasukkan ke dalam oven dengan suhu 50oC, dan disimpan selama 24 jam. Setelah daun benar-benar kering (jika diremas timbul bunyi renyah), daun kemudian diserbuk dan diayak dengan ayakan no.40 (Direktorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan, 1989) untuk memperkecil luas permukaan agar mempermudah mengeluarkan kandungan fitokimianya. 4. Penetapan kadar air simplisia serbuk kering daun M. tanarius Penetapan kadar air dilakukan termopan, yaitu dengan menguji susut penguapan dari simplisia serbuk daun M.tanarius (Direktorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan, 1989). Alat yang digunakan pada uji ini adalah Moisture Balance yang terdapat di Laboratorium Kimia Analisis, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma. Pengujian dilakukan dengan cara memasukkan


sampel + 5 g sampel dan menimbang bobot simplisia sebagai bobot sebelum pemanasan (bobot a). Kemudian alat dipanaskan pada suhu 110 0C selama 15 menit, dan setelah menimbang bobot simplisia setelah pemanasan (bobot b). Selisih bobot a dan b merupakan kadar air dari simplisia yang diselidiki. 5. Pembuatan infusa daun M. tanarius Untuk membuat infusa daun M. tanarius dengan konsentrasi 100% dimulai dengan mengambil 50,0 g serbuk kering daun M. tanarius ditambahkan 200,0 ml air. Campuran kemudian dipanaskan di atas heater dengan suhu 90 0C selama 15 menit. Waktu 15 menit dihitung ketika suhu telah mencapai 90 0C, lalu disaring menggunakan kain flanel untuk memisahkan infusa dan ampasnya. Kemudian infusa diuapkan di atas waterbath sampai diperoleh bobot infusa sama dengan bobot serbuk kering daun M. tanarius yang digunakan untuk membuat infus. 6. Pembuatan larutan karbon tetraklorida 50% Berdasarkan penelitian Janakat dan Al-Merie (2002), larutan karbon tetraklorida dibuat dalam konsentrasi 50% dalam pelarut olive oil. Larutan karbon tetraklorida dalam olive oil dibuat dengan cara mencampurkan karbon tetraklorida dan olive oil dengan perbandingan volume 1:1. 7. Uji pendahuluan a.

Penetapan dosis infusa daun M. tanarius Penetapan dosis pemberian infusa daun M. tanarius mengacu pada

penelitian Mahendra dan Hendra (2011) yang menyatakan dosis M. tanarius yang diberikan adalah 2,5; 5; dan 10 g/kg.


b.

Penetapan dosis hepatotoksin CCl4 Penetapan dosis karbon tetraklorida dilakukan untuk mengetahui pada

dosis berapa karbon tetraklorida mampu menyebabkan kerusakan hati tikus yang ditandai dengan peningkatan aktivitas ALT dan AST-serum paling tinggi. Dosis hepatotoksik yang digunakan dalam penelitian ini mengacu pada penelitian Janakat dan Al-Merie (2002), bahwa dosis 2 ml/kg BB pada konsentrasi 50% telah terbukti mampu meningkatkan aktivitas ALT-AST serum pada tikus bila diberikan secara intraperitonial (i.p). c.

Penetapan waktu cuplikan darah Penelitian Janakat dan Al-Merie (2002) mengenai optimasi dosis, rute

pemberian, dan karakteristik waktu pemberian karbon tetraklorida sebagai hepatotoksin menunjukkan bahwa aktivitas ALT-AST serum tikus terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB mencapai maksimal pada jam ke-24 setelah pemberiannya, kemudian pada jam ke-48 berangsur-angsur menurun. Untuk mendapatkan waktu cuplikan darah paling optimum dilakukan orientasi dengan cara membagi tikus dalam tiga kelompok (masing-masing lima ekor) dengan waktu cuplikan 0, 24 dan 48 jam setelah pemejanan karbon tetraklorida kemudian diukur aktivitas ALT-AST serumnya. 8. Pengelompokan hewan uji Sebanyak tiga puluh ekor tikus dibagi secara acak ke dalam enam kelompok perlakuan masing-masing kelompok lima ekor tikus. Kelompok I (kontrol negatif) diberi olive oil dengan dosis 2 ml/kgBB secara intraperitonial (i.p). Kelompok II (kontrol hepatotoksin) diberi larutan karbon tetraklorida 50% 2


ml/kgBB secara i.p. Kelompok III (kontrol infusa) diberi infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB secara peroral. Kelompok IV-VI berturut-turut diberi infusa daun M. tanarius secara oral dengan dosis berturut-turut 2,5; 5; dan 10 g/kgBB sekali sehari selama enam hari berturut-turut kemudian pada hari ke tujuh diberi larutan karbon tetraklorida 50% dosis 2 ml/kgBB secara i.p. Kemudian kelompok I-VI diambil darahnya melalui sinus orbitalis mata sesuai hasil orientasi waktu penetapan pencuplikan darah, lalu diukur aktivitas ALT dan AST-nya. 9. Pembuatan serum Darah diambil dari sinus orbitalis mata tikus kemudian ditampung pada tabung Eppendrof dan didiamkan selama 15 menit. Setelah itu darah disentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan 3500 ppm. Bagian supernatan bening diambil. 10. Pengukuran aktivitas ALT-AST serum Alat yang digunakan untuk menganalisis aktivitas ALT dan AST serum adalah Mikrolab 200 Merck di Laboratorium Biokimia-Fisiologi Manusia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma, dan hasil dinyatakan dengan satuan U/L.

Sebelum

melakukan

pengukuran

sampel

dilakukan

validasi

alat

menggunakan kontrol serum dengan range 33,9-48,9 U/L. Analisis dilakukan dengan cara mencampur 100 µL serum dengan 800 µL reagen I, kemudian dicampurkan 200 µL reagen II dan dibaca serapannya setelah satu menit. Pengukuran aktivitas serum ALT dan AST dilakukan di laboratorium BiokimiaFisiologi Manusia, Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Adanya hasil pengukuran aktivitas ALT-AST serum maka dapat ditentukan


pengaruh infusa daun M. tanarius dalam melindungi hati dengan menghitung efek hepatoprotektifnya menggunakan rumus sebagai berikut :

Aktivitas ALT - serum kontrol hepatotoksin CCl 4   Aktivitas ALT - serum perlakuan  x100% Aktivitas ALT - serum kontrol hepatotoksin CCl 4  F. Tata Cara Analisis Hasil Data aktivitas serum ALT dan AST dianalisis dengan metode Kolmogorov Smirnov untuk melihat distribusi data tiap kelompok. Jika didapatkan distribusi data yang normal maka dilanjutkan dengan analisis pola searah (One Way ANOVA) dengan taraf kepercayaan 95% dan dilanjutkan dengan uji Scheffe atau Tamhane untuk melihat perbedaan antar kelompok bermakna (signifikan) (p<0,05) atau tidak bermakna (tidak signifikan) (p>0,05). Akan tetapi bila didapatkan distribusi tidak normal, maka dilakukan analisis dengan uji Kruskal Wallis untuk mengetahui perbedaan aktivitas serum ALT dan AST antar kelompok. Setelah itu, dilanjutkan uji dengan Mann Whitney untuk melihat perbedaan tiap kelompok.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Penyiapan Bahan Uji 1. Hasil determinasi tanaman Penelitian ini menggunakan serbuk kering daun M. tanarius . Sebelum melakukan penelitian lebih lanjut perlu dilakukan determinasi terlebih dahulu untuk memastikan bahwa bagian tanaman yang digunakan benar berasal dari tanaman M. tanarius sehingga tidak terjadi kesalahan dalam penyiapan bahan uji penelitian. Determinasi dilakukan di Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. Determinasi ini dilakukan dengna mencocokan ciri tanaman dengan buku acuan yang tersedia (Backer dan Bakhuizen, 1963) sampai ke tingkat spesies. Hasil determinasi menunjukan bahwa tanaman yang diambil memang benar tanaman Macaranga tanarius L. 2. Penetapan kadar air serbuk kering M. tanarius Penetapan kadar air perlu dilakukan dengan tujuan untuk memastikan bahwa serbuk kering yang digunakan memiliki kandungan air sesuai persyaratan serbuk simplisia yang baik, yaitu kurang dari 10% (Direktorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan, 1995). Penetapan kadar air serbuk kering daun M. tanarius dilakukan dengan menghitung susut penguapan menggunakan terrmopan dengan alat Moisture Balance yang terdapat di Laboratorium Kimia Analisis Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 33


Penetapan kadar air dilakukan dengan cara memanaskan serbuk pada suhu 1100C selama 15 menit. Digunakan suhu 110 0C dimaksudkan kandungan air dalam serbuk telah menguap dan waktu 15 menit dianggap bahwa kadar air telah memenuhi parameter standarisasi non spesifik. Hasil pengujian didapatkan bahwa kandungan air dari serbuk kering daun M. tanarius

sebesar 7,59%. Hasil

pengujian ini menunjukkan bahwa serbuk kering daun M. tanarius

telah

memenuhi persyaratan serbuk simplisia yang baik.

B. Uji Pendahuluan 1. Penetapan dosis infusa daun M. tanarius Penetapan dosis infusa daun M. tanarius dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui dosis infusa daun M. tanarius yang digunakan dalam penelitian ini. Penentuan dosis infusa daun M. tanarius didasarkan pada konsentrasi maksimal yang dapat dibuat dan volume maksimal infusa daun M. tanarius yang dapat dipejankan pada tikus secara peroral. Mahendra dan Hendra (2011) melaporkan bahwa dosis maksimal yang dapat dibuat dan dapat dipejankan secara peroral adalah 10 g/kgBB. Terdapat tiga peringkat dosis infusa M. tanarius yang dapat mempunyai pengaruh untuk menurunkan aktivitas serum ALT-AST pada tikus yang telah dilaporkan Mahendra dan Hendra (2011), yaitu 2,5; 5; dan 10 g/kgBB. Oleh sebab itu, pada penelitian ini dosis infusa M. tanarius yang digunakan mengacu pada penelitian tersebut.


2. Penetapan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida Tujuan dari penetapan dosis hepatotoksin karbon tetraklorida adalah untuk menentukan dosis karbon tetraklorida yang dapat menyebabkan kerusakan hati (steatosis) pada tikus. Pada kerusakan ringan berupa steatosis kadar ALTserum mencapai tiga kali nilai normal dan AST-serum meningkat sampai empat kali nilai normal (Zimmerman, 1999). Pada penelitian ini dosis karbon tetraklorida yang digunakan diperoleh dari hasil penelitian Janakat dan Al-Merie (2002) mengenai optimasi dosis, rute pemberian dan karakteristik waktu pemberian karbon tetraklorida untuk menginduksi hepatotoksisitas pada tikus. Dari hasil penelitian tersebut didapat dosis karbon tetraklorida yang paling optimum dalam menaikan aktivitas ALT dan AST adalah 2 ml/kgBB tikus. 3. Penetapan waktu pencuplikan darah Tujuan dari penetapan waktu cuplikan darah ini adalah untuk mengetahui waktu dimana kehepatotoksikan dari karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB mencapai efek mekasimal. Hal ini ditunjukan oleh aktivitas ALT-AST serum tertinggi pada selang waktu tertentu. Pada penelitian ini karbon tetraklorida dengan dosis 2 ml/kgB diujikan pada selang waktu pengambilan sampel darah pada selang waktu jam ke-0, 24, dan 48. Hasil penetapan berupa aktivitas ALTAST serum dapat dilihat pada tabel IV dan gambar 5 serta gambar 6 di bawah ini.


Tabel IV. Purata aktivitas ALT-AST serum tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada penetapan waktu pencuplikan darah (n=5) Selang Waktu Purata Aktivitas ALT-serum + SE Purata Aktivitas AST-serum + SE (jam) (U/L) (U/L)

0 72,2 + 12,9 24 246,4 + 17,0 48 102,0 + 14,6 Ket : SE= Standar error of mean

151,2 + 14,3 596,2 + 25,3 188,6 + 3,3

Gambar 5. Diagram batang purata aktivitas ALT-serum tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada penetapan waktu pencuplikan darah

Gambar 6. Diagram batang purata aktivitas AST-serum tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada penetapan waktu pencuplikan darah


Hasil analisis variansi satu arah dari data ALT-serum yang diperoleh, didapat nilai probabilitasnya 0,000 (< 0,005). Hasil ini menunjukan bahwa di antara

ketiga

kelompok

terdapat

perbedaan

hasil.

Untuk

mengetahui

kebermaknaan dari perbedaan antar ketiga kelompok tersebut, maka dilanjutkan dengan uji Scheffe. Hasil analisisnya dapat dilihat di tabel V.

Tabel V. Hasil uji Scheff aktivitas ALT-serum tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada penetapan waktu pencuplikan darah

Selang Waktu (jam) 0 24 48 Keterangan : B = Berbeda bermakna (p < 0,05)

0 B TB

24 B B

48 TB B -

TB = Berbeda tidak bermakna (p > 0,05)

Data nilai AST-serum yang didapat dianalisis menggunakan uji Kolmogorov-Smirnov ternyata diketahui bahwa distribusinya tidak normal (p<0,05), oleh karena itu analisis dilanjutkan menggunakan uji Kruskal-Wallis untuk mengatahui ada tidaknya perbedaan antar ketiga kelompok. Hasil analisis didapat nilai p adalah 0,03 (<0,05) berarti antar ketiga kelompok terdapat perbedaan. Untuk mengetahui kebermaknaan perbedaan antar kelompok maka kemudian data dianalisis dengan uji Mann-Whitney. Hasil dari keberbedaan antar kelompok dapat dilihat di tabel VI berikut ini. Tabel VI. Hasil uji Mann-Whitney aktivitas AST-serum tikus setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada penetapan waktu pencuplikan darah

Selang Waktu (jam) 0 24 48 Keterangan : B = Berbeda bermakna (p < 0,05)

0 B B

24 B B

48 B B -



Hastuti (cit. Pilichoe, dkk, 2004) melaporkan bahwa nilai ALT-serum dan AST-serum normal pada tikus putih adalah 29,8-77,0 U/L dan 19,3-68,9 U/L. Pada tabel IV terlihat bahwa aktivitas ALT paling tinggi mencapai 246,4 + 17,0 U/L pada selang waktu 24 jam. Hal ini juga diikuti dengan adanya aktivitas AST tertinggi pada selang waktu 24 jam dengan nilai AST-serum 596,2 + 25,3. Nilai ALT-AST serum pada selang waktu ke-24 jam ini menunjukkan nilai yang lebih tinggi jika dibandingkan dengan nilai normal dari kedua enzim tersebut. Hal ini berarti pada selang waktu ke-24 telah terjadi gangguan pada hati. Hasil ini pun didukung pada gambar 5 dan 6, terlihat bahwa terjadi peningkatan aktivitas ALT dan AST pada selang waktu 24 jam secara signifkan. Pada tabel V. dan VI. juga menunjukkan keberbedaan antara aktivitas ALT-AST serum antara selang waktu 24 jam terhadap selang ke 0 jam dan 48 jam menunjukkan hasil yang bermakna. Dari hasil uji tersebut, di penelitian ini menggunakan waktu pencuplikan darah pada jam ke-24 setelah pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB. 4. Penetapan lama praperlakuan infusa daun M. tanarius Pada penelitiannya, Mahendra dan Hendra (2011) dan Kurniawati dkk (2011) melaporkan bahwa praperlakuan pemberian infusa dan ekstrak metanol-air daun M. tanarius kepada kelompok hewan uji selama enam hari dan pada hari yang ke-7 diberikan parasetamol sebagai hepatotoksin. Pada penelitian ini mengacu kedua penelitian di atas yang menggunakan model praperlakuan pemberian infusa daun M. tanarius

selama 6 hari dan

diberikan larutan karbon tetraklorida 50% dosis 2 ml/kgBB pada hari yang ke-7. Hal ini dikarenakan karena penelitian ini merupakan penelitian lanjutan dari efek


hepatoprotektif daun M. tanarius

dengan menggunakan senyawa model

hepatotoksin yang berbeda, sehingga dapat dibandingkan dengan penelitian efek hepatoprotektif daun M. tanarius yang sudah ada.

C. Hasil Uji Efek Hepatoprotektif Infusa Daun M. tanarius dengan Kajian Kadar ALT-AST Serum Pengaruh infusa daun M. tanarius

terhadap kadar ALT-AST serum

dinilai dari ada tidaknya penurunan aktivitas ALT-serum dan AST-serumnya akibat praperlakuan pemberian infusa daun M. tanarius terhadap aktivitas ALTserum dan AST- serum kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida. Aktivitas ALTAST serum yang dinyatakan dalam satuan U/L disajikan dalam bentuk purata + SE pada tabel VII. serta gambar 7 dan 8 di bawah ini. Tabel VII. Purata + aktivitas ALT-AST serum tikus setelah praperlakuan pemberian infusa daun M. tanarius selama 6 hari dan pada hari ke-7diberi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB

Kel.

Perlakuan

Purata + SE aktivitas ALTAST serum (U/L)

Efek hepatoprotektif (%)

ALT-serum

AST-serum

ALTserum

ASTserum

I

Kontrol Negatif Olive oil 2ml/kgBB

82,2 + 2,7

118,6 + 5,1

-

-

II

Kontrol Hepatotoksin CCl4 2 ml/kgBB

246,4 + 17,0

596,2 + 25,3

0

0

III

Kontrol Infusa Daun M. tanarius 10 g/kgBB

90,0 + 2,4

172,4 + 14,8

-

-

IV

Infusa Daun M. tanarius 2,5 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB

137,6 + 2,2

348,4 + 19,5

44,1

41,6

V

Infusa Daun M. tanarius 5 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB

148,8 + 3,1

416,6 + 19,9

39,6

30,1

VI

Infusa Daun M. tanarius 10 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB

103, 2 + 3,5

250,6 + 15,8

58,1

58,0


Gambar 7. Diagram batang purata aktivitas ALT-serum tikus setelah praperlakuan pemberian infusa daun M. tanarius selama 6 hari dan pada hari ke7diberi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB

Gambar 8. Diagram batang purata aktivitas AST-serum tikus setelah praperlakuan pemberian infusa daun M. tanarius selama 6 hari dan pada hari ke-7diberi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB


Tabel VIII. Hasil uji Tamhane aktivitas ALT-serum tikus setelah praperlakuan pemberian infusa daun M. tanarius selama 6 hari dan pada hari ke7diberi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB Kelompok Perlakuan I II III IV V

VI

I

-

B

TB

B

B

B

II

B

-

B

B

TB

B

III

TB

B

-

B

B

TB

IV

B

B

B

-

TB

B

V

B

TB

B

TB

-

B

VI

B

B

TB

B

B

-

Keterangan : I = Kontrol Negatif Olive oil 2ml/kgBB II III IV V VI

= Kontrol Hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB = Kontrol Infusa Daun M. tanarius 10 ml/kgBB = Infusa Daun M. tanarius 2,5 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB = Infusa Daun M. tanarius 5 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB = Infusa Daun M. tanarius 10 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB

B = Berbeda bermakna (p < 0,05)


Tabel IX. Hasil uji Scheff aktivitas AST-serum tikus setelah praperlakuan pemberian infusa daun M. tanarius selama 6 hari dan pada hari ke-7diberi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB Kelompok Perlakuan I II III IV V VI I

-

B

TB

B

B

B

II

B

-

B

B

B

B

III

TB

B

-

B

B

TB

IV

B

B

B

-

TB

B

V

B

B

B

TB

-

B

VI

B

B

TB

B

B

-

Keterangan : I = Kontrol Negatif Olive oil 2ml/kgBB II III IV V VI

= Kontrol Hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB = Kontrol Infusa Daun M. tanarius 10 ml/kgBB = Infusa Daun M. tanarius 2,5 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB = Infusa Daun M. tanarius 5 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB = Infusa Daun M. tanarius 10 g/kgBB + CCl4 2 ml/kgBB

B = Berbeda bermakna (p < 0,05)



1. Kontrol negatif (olive oil 2 ml/kgBB) Pengujian terhadap kelompok kontrol negatif olive oil bertujuan untuk mengetahui pengaruh olive oil sebagai pelarut hepatotoksin dalam meningkatkan aktivitas ALT-AST serum. Dosis olive oil yang digunakan dalam pengujian ini adalah 2 ml/kgBB disesuaikan dengan dosis karbon tetraklorida yang digunakan yaitu 2 ml/kgBB. Hasil aktivitas ALT-serum dan AST-serum kelompok kontrol negatif olive oil adalah 82,2 + 2,7 U/L dan 118,6 + 5,1 U/L. Untuk mengetahui pengaruh pemberian olive oil terhadap peningkatan aktivitas ALT-AST serum maka hasil pengukuran di atas dianalisis secara statistik dan dibandingkan dengan aktivitas ALT-AST serum tikus sebelum diberi olive oil. Hasil perbandingan tersebut dapat dilihat pada tabel X dan XI serta gambar 9 dan 10 berikut ini.

Tabel X. Purata + aktivitas ALT- serum tikus sebelum dan sesudah pemberian olive oil dosis 2 ml/kgBB Perbedaan terrhadap Purata + SE aktivitas Kel Perlakuan ALT-serum Kel. I Kel. II Jam ke-0 sebelum pemberian I 90,2 + 4,9 TB olive oil II Jam ke-24 setelah olive oil 82,2 + 2,7 TB -

Keterangan : B = Berbeda bermakna (p < 0,05)


Tabel XI. Purata + aktivitas AST- serum tikus sebelum dan sesudah pemberian olive oil dosis 2 ml/kgBB Perbedaan terrhadap Purata + SE aktivitas Kel Perlakuan AST-serum Kel. I Kel. II Jam ke-0 sebelum pemberian I 122,8 + 5,7 TB olive oil II Jam ke-24 setelah olive oil 118,6 + 5,1 TB -

Keterangan : B = Berbeda bermakna (p < 0,05)



Gambar 9. Diagram batang purata aktivitas ALT-serum tikus sebelum dan sesudah pemberian olive oil dosis 2 ml/kgBB

Gambar 10. Diagram batang purata aktivitas AST-serum tikus sebelum dan sesudah pemberian olive oil dosis 2 ml/kgBB

Pada tabel IX dan gambar 9 terlihat bahwa hasil aktivitas ALT-serum kontrol olive oil sebesar 82,2 + 2,7 U/L jika dibandingkan dengan aktivitas ALTserum sebelum pemberian olive oil sebesar 90,2 + 4,9 U/L menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna secara statistik. Hal serupa juga telihat pada hasil


aktivitas AST-serum pada tabel IX dan gambar 10 dari kedua perlakuan. Dengan adanya hasil ini maka dapat disimpulkan bahwa adanya pemberian olive oil sebagai pelarut dari hepatotoksin karbon tetraklorida tidak memberikan pengaruh dalam menaikkan aktivitas ALT-AST serum. Ini menunjukkan bahwa olive oil tidak menimbulkan kerusakan pada hati dan hati masih dalam keadaan normal. Sehingga nilai aktivitas ALT-AST serum kelompok olive oil dapat dijadikan acuan nilai normal aktivitas ALT-AST serum pada penelitian selanjutnya. 2. Kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB Karbon tetraklorida digunakan sebagai senyawa model hepatotoksin karena telah diketahui bahwa karbon tetraklorida dapat menyebabkan perlemakan hati. Selain itu penggunaan karbon tetraklorida pada penelitian ini adalah merupakan penelitian lanjutan dari saran pada penelitian efek hepatoprotektif infusa daun M. tanarius

menggunakan senyawa hepatotoksin parasetamol

(Mahendra dan Hendra, 2011). Kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida ini dilakukan untuk mengetahui adanya pengaruh induksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada hati tikus jantan. Selain itu hasil dari uji ini juga akan digunakan untuk mengetahui pengaruh pemberian infusa daun M. tanarius . Uji ini dilakukan dengan cara memberikan karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB secara intraperitorial dan diambil sampel darahnya pada selang waktu 24 jam melalui sinus orbitalis mata. Hasil pengujian pada tabel VII menunjukkan bahwa aktivitas ALT-serum setelah pemberian karbon tetraklorida meningkat mencapai 246,4 + 17,0 U/L. Pada tabel VIII. terlihat adanya perbedaan yang bermakna antara kelompok


kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida terhadap kelompok kontrol negatif olive oil yang (aktivitas ALT-serum sebesar 82,2 + 2,7 U/L). Menurut Zimmerman (1999) bahwa aktivitas ALT-serum dengan adanya kerusakan hati berupa steatosis mencapai tiga kali lipat dari nilai normal, dari hasil pengujian ini terlihat bahwa peningkatan aktivitas ALT-serum dengan adanya pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB telah mencapai 3 kali lipat dari nilai normal (dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif olive oil). Hasil ini dapat menunjukkan bahwa pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB telah menyebabkan kerusakan hati ringan seperti steatosis. Hasil pengujian terhadap aktivitas AST-serum didapatkan hasil 596,2 + 25,3 U/L. Pada tabel IX terlihat adanya perbedaan yang bermakna antara kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida terhadap kelompok kontrol negatif olive oil (aktivitas AST-serum sebesar 118,6

+ 5,1 U/L). Menurut

Zimmerman (1999) bahwa aktivitas AST-serum dengan adanya kerusakan hati berupa steatosis mencapai empat kali lipat dari nilai normal, dari hasil pengujian ini terlihat bahwa peningkatan aktivitas ALT-serum dengan adanya pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB telah mencapai empat kali lipat dari nilai normal (dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif olive oil). Hasil ini mendukung bahwa dengan adanya pemberian karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB pada tikus menyebabkan kerusakan hati. Adanya keberbedaan bermakna aktivitas ALT-AST serum kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida terhadap kelompok kontrol negatif olive oil,

menunjukkan pemberian karbon tetraklorida

memberikan pengaruh


meningkatkan aktivitas ALT-AST serum tikus jantan galur Wistar yang berarti menimbulkan kerusakan hari akibat karbon tetraklorida. Hasil dari pengujian kelompok hepatotoksin karbon tetraklorida ini digunakan untuk menghitung efek hepatoprotektif dari infusa daun M. tanarius . 3. Kontrol negatif infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB Pengujian terhadap kelompok kontrol negatif infusa M. tanarius bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian infusa daun M. tanarius terhadap aktivitas ALT-AST serum tanpa adanya pemberian karbon tetraklorida. Digunakan dosis infusa daun M. tanarius

sebesar 10 g/kgBB karena untuk

mengetahui apakah pada dosis pemberian infusa daun M. tanarius tertinggi menyebabkan kerusakan pada hati atau tidak. Pengujian dilakukan dengan cara memberikan infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB secara peroral selama enam hari berturut-turut kemudian 24 jam setelah pemberian pada hari yang terakhir pengambilan sampel darah dilakukan. Pada tabel V terlihat hasil aktivitas ALT-serum pada kelompok kontrol negatif infusa daun M. tanarius adalah 90,0 + 2,4 U/L. Data aktivitas ALT-serum ini kemudian diuji statistik menggunakan analisis variasi satu arah kemudian dilanjutkan dengan uji Tamhane pada tabel VIII ternyata menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna terhadap kelompok kontrol negatif olive oil dan berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida. Aktivitas AST-serum pada tabel V sebesar 172,4 + 14,8 U/L. Setelah dilakukan pengujian statistik dengan analisis variasi satu arah dan dilanjutkan dengan uji Scheffe pada tabel VII menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna antara kelompok kontrol


negatif infusa daun M. tanarius dengan kelompok kontrol negatif olive oil dan berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida. Walaupun hasil dari aktivitas ALT-AST serum kelompok kontrol negatif infusa daun M. tanarius 10g/kgBB yang ditunjukkan lebih tinggi daripada kelompok kontrol negatif olive oil namun setelah dilakukan uji statistik didapatkan hasil perbedaan yang tidak bermakna di antara keduanya maka dapat disimpulkan bahwa pemberian infusa daun M. tanarius tidak berpengaruh dalam peningkatan aktivitas ALT-AST serum pada tikus. Perbedaan aktivitas ALT-AST serum yang bermakna antara kelompok kontrol infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB terhadap kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida menunjukkan bahwa pemberian infusa dosis tertinggi pada penelitian ini tidak menyebabkan kerusakan hati. 4. Kelompok perlakuan infusa daun M. tanarius dosis 2,5; 5 dan 10 g/kgBB pada tikus jantan galur Wistar terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB Evaluasi terhadap pengaruh dari infusa daun M. tanarius adalah dengan melihat ada tidaknya penurunan aktivitas ALT-AST serum pada tikus jantan yang diinduksi karbon tetraklorida. Kelompok IV merupakan kelompok praperlakuan infusa daun M. tanarius dosis 2,5 g/kgBB mempunyai aktivitas ALT-serum 137,6 + 2,2 U/L mempunyai keberbedaan yang bermakna terhadap kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB (tabel VIII). Aktivitas ALT-serum ini menunjukkan keberbedaan bermakna terhadap kelompok kontrol olive oil 2 ml/kgBB. Hal serupa juga terlihat pada aktivitas AST-serum (348,4 + 19,5) dari kelompok IV pada perbandingan terhadap kelompok kontrol olive oil 2 ml/kgBB.


Aktivitas AST-serum kelompok IV mempunyai keberbedaan yang bermakna terhadap kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB. Hasil analisa ini dapat menunjukkan bahwa pemberian infusa daun M. tanarius dosis 2,5 g/kgBB mempunyai efek hepatoprotektif dengan menurunkan aktivitas ALT dan AST serum tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida, namun belum dapat mencapai kondisi normal. Efek hepatoprotektif dari kelompok praperlakuan infusa daun M. tanarius sebesar 44,1 %. Kelompok V merupakan kelompok praperlakuan infusa daun M. tanarius dosis 5 g/kgBB mempunyai aktivitas ALT-serum 148,8 + 3,1 U/L mempunyai keberbedaan yang tidak bermakna terhadap kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB (tabel VIII). Aktivitas ALT-serum ini menunjukkan keberbedaan bermakna terhadap kelompok kontrol olive oil 2 ml/kgBB. Hal serupa juga terlihat pada aktivitas AST-serum (416,6 + 19,9) dari kelompok V pada perbandingan terhadap kelompok kontrol olive oil 2 ml/kgBB. Aktivitas AST-serum kelompok V mempunyai keberbedaan yang bermakna terhadap kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB. Keberbedaan antara aktivitas ALT dan AST serum terhadap kontrol hepatotoksin menunjukkan hasil yang berbeda dapat disebabkan karena enzim AST juga terdapat di miokardium, otot rangka, dan ginjal sehingga dapat mempengaruhi hasil. Sehingga aktivitas ALT-serum lebih dijadikan patokan dalam menentukan efek hepatoprotektif pada pemberian infusa daun M. tanarius dosis 5 g/kgBB. Hasil analisa ini dapat menunjukkan bahwa pemberian infusa daun M. tanarius belum mampu memberikan efek hepatoprotektif yang dapat mengatasi kerusakan


hati akibat induksi karbon tetraklorida. Efek hepatoprotektif dari kelompok praperlakuan infusa daun M. tanarius hanya sebesar 39,6 %. Kelompok VI merupakan kelompok praperlakuan infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB mempunyai aktivitas ALT-serum 103,2 + 3,5 U/L mempunyai keberbedaan yang bermakna terhadap kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB (tabel VI). Aktivitas ALT-serum ini menunjukkan keberbedaan bermakna terhadap kelompok kontrol olive oil 2 ml/kgBB. Hal serupa juga terlihat pada aktivitas AST-serum (250,6 + 15,8) dari kelompok VI pada perbandingan terhadap kelompok kontrol olive oil 2 ml/kgBB. Aktivitas AST-serum kelompok V mempunyai keberbedaan yang bermakna terhadap kelompok kontrol hepatotoksin karbon tetraklorida 2 ml/kgBB. Hasil analisa ini dapat menunjukkan bahwa pemberian infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB mempunyai efek hepatoprotektif dengan menurunkan aktivitas ALT dan AST serum tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida, namun belum dapat mencapai kondisi normal. Efek hepatoprotektif dari kelompok praperlakuan infusa daun M. tanarius sebesar 58,1 %. Hal ini mungkin disebabkan pada dosis 10 g/kgBB telah lebih banyak senyawa antioksidan yang terlarut sehingga dapat lebih baik menurunkan aktivitas ALT dan AST serum tikus terinduksi karbon tetraklorida. Hasil analisis keberbedaan secara statistik dari aktivitas ALT-AST serum ketiga kelompok praperlakuan infusa di atas adalah sebagai yang diuraikan berikut ini. Kelompok IV (dosis 2,5 g/kgBB) terhadap Kelompok V (dosis 5 g/kgBB) menunjukkan perbedaan yang tidak bermakna. Kelompok VI (dosis 10


g/kgBB) menunjukkan perbedaan yang bermakna terhadap kelompok IV maupun kelompok V. Urutan efek hepatoprotektif dari ketiga dosis infusa daun M. tanarius

dilihat dari aktivitas ALT-serum yang dari yang terkecil adalah

kelompok praperlakuan infusa daun M. tanarius 5 g/kgBB (39,6%); kelompok praperlakuan infusa daun M. tanarius

2,5 g/kgBB (44,1%); dan kelompok

praperlakuan infusa daun M. tanarius 10 g/kgBB (58,1%). Perhitungan efek hepatoprotektif menggunakan hasil AST-serum memiliki profil yang sama dengan perhitungan menggunakan ALT-serum. Hasil ini dapat terjadi mungkin karena kandungan senyawa yang tersari pada setiap dosis berbeda. Hasil efek hepatoprotektif ini menunjukkan bahwa kelompok yang mempunyai efek hepatoprotektif paling tinggi adalah kelompok praperlakuan infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB. Hasil ini juga didukung dengan hasil analisis statistik yang menunjukkan keberbedaan antara kelompok ini dengan dua kelompok lainnya tersebut adalah bermakna. Hasil efek hepatoprotektif yang didapatkan juga tidak dapat dihitung ED50 dari infusa daun M. tanarius yaitu besarnya dosis infusa daun M. tanarius yang dapat menghambat naiknya aktivitas ALT-AST serum yang disebabkan induksi karbon tetraklorida sebesar 50%. Hal ini dikarenakan respon yang didapat tidak mencapai respon maksimal yaitu 20-80% dan tidak dapat ditarik garis linier dari efek hepatoprotektif ketiga dosis, sehingga disarankan penelitian mengenai pengaruh pemberian infusa daun M. tanarius terhadap kadar ALT-AST serum menggunakan dosis di bawah 2,5 g/kgBB.


Dosis infusa daun M. tanarius yang mempunyai efek hepatoprotektif paling tinggi pada penelitian ini ternyata berbeda dengan hasil penelitian Mahendra dan Hendra (2011). Pada penelitian yang lalu tersebut dosis infusa daun M. tanarius yang mempunyai efek hepatoprotektif yang paling tinggi adalah infusa daun M. tanarius dengan dosis 5 g/kgBB. Hasil yang berbeda ini mungkin dikarenakan cara pembuatan infusa yang berbeda antara penelitian ini dengan penelitian yang lalu. Dari hasil yang berbeda ini sebaiknya dapat dilakukan penelitian mengenai efek hepatoprotektif infusa daun M. tanarius dengan senyawa model hepatotoksin yang berbeda seperti galaktosamin dengan cara pembuatan infusa yang sama. Karbon tetraklorida dapat menaikkan aktivitas ALT-AST serum dikarenakan dengan adanya enzim sitokrom P-450 di dalam hati maka karbon tetraklorida akan diubah menjadi metabolit reaktif triklorometil. Radikal triklorometil mengalami suatu reaksi, atom hidrogen yang berasal dari metilen dapat menjembatani reaksi dengan asam lemak tak jenuh atau protein dan menghasilkan ikatan kovalen dengan lemak mikrosomal dan protein, dan akan beraksi secara langsung dengan fosfolipid dan kolesterol yang bersifat toksik. Hasil lain dari reaksi ini adalah radikal lipid yang tidak stabil selanjutnya akan mengakibatkan peroksidasi lipid. Pembentukan peroksidasi lipid hasil dari pemecahan lemak tak jenuh dapat menghasilkan senyawa karbonil seperti 4hydroxyalkenal dan hydroxynonenal lainnya. Senyawa-senyawa tersebut diketahui memiliki efek biokimia seperti menghambat sintesis protein dan menghambat enzim glukosa-6-fosfat (Timbrell, 2008).


Setelah pemejanan karbon tetraklorida selama satu sampai tiga jam, trigliserida menumpuk di hepatosit dan terlihat sebagai droplet lipid. Lipid dalam hati yang terbentuk ini dapat menghambat sintesis protein sehingga menurunkan produksi lipoprotein, yang merupakan senyawa yang bertanggung jawab dalam transport lipid untuk keluar dari hepatosit. Akibat menurunnya produksi lipoprotein maka transport lipid akan terhambat sehingga menyebabkan steatosis (Timbrell, 2008). Peroksidasi lipid juga dapat menyebabkan kerusakan membran sel dan kerusakan mitokondria. Kerusakan ini berupa gangguan integritas membran yang menyebabkan keluarnya berbagai isi sitoplasma, antara lain enzim ALT. Enzim ALT yang ada di dalam sel akan keluar dan masuk ke dalam peredaran darah sehingga jumlah enzim ALT di dalam darah meningkat (Wahyuni, 2005). Pemberian infusa daun M. tanarius dapat menurunkan aktivitas ALTAST serum kemungkinan dapat melalui dua mekanisme. Mekanisme pertama yang mengakibatkan turunnya aktivitas ALT-AST serum adalah adanya beberapa senyawa glikosida di dalam daun M. tanarius

seperti macarangiosida A,

macarangiosida B, macarangiosida C, macarangiosida D dan malofenol B sebagai antioksidan. Senyawa-senyawa glikosida ini diketahui larut dalam pelarut polar maka dimungkinkan dengan membuatnya dalam sediaan infusa senyawa-senyawa tersebut dapat tersari. Senyawa glikosida yang berperan sebagai antioksidan ini dapat mempunyai efek melindungi hati yang terinduksi karbon tetraklorida adalah dengan berikatan dengan radikal bebas yang terbentuk (triklorometil) sehingga senyawa radikal tersebut tidak menimbulkan efek toksik. Mekanisme kedua yang


memungkinkan infusa daun M. tanarius dalam melindungi hati adalah dengan pemberian infusa daun M. tanarius selama enam hari dapat meningkatkan sintesis enzim glutation S-transferase yang berfungsi melindungi hati dari senyawa radikal dengan menetralisirkannya.

D. Rangkuman Pembahasan Penelitian ini menggunakan tiga variasi dosis infusa daun M. tanarius yaitu 2,5; 5 dan 10 g/kgBB. Pengujian terhadap ketiga dosis tersebut menunjukkan efek hepatoprotektif berturut-turut adalah 44,1; 39,65; dan 58,1%. Hal ini menunjukkan bahwa praperlakuan infusa daun M. tanarius pada ketiga dosis tersebut dapat berpengaruh menurunkan aktivitas ALT-AST serum akibat induksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB sehingga hasil pengujian sesuai dengan hipotesis pada penelitian ini. Perbandingan antara kelompok kontrol negatif olive oil dan kelompok kontrol negatif infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB menunjukkan perbedaan yang tidak berbakma. Hasil ini menunjukkan bahwa adanya pemberian infusa daun M. tanarius tidak mempengaruhi sel hati tikus jantan dan kenaikan aktivitas ALT-AST terjadi karena induksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB. Dari ketiga dosis infusa daun M. tanarius yang digunakan, dosis yang paling efektif memberikan perlindungan pada hati adalah dosis 10 g/kgBB. Hal ini dikarenakan penurunan aktivitas ALT-AST serum akibat adanya induksi karbon tetraklorida yang paling tinggi ditunjukkan pada kelompok praperlakuan infusa M. tanarius 10 g/kgBB.


Infusa daun M. tanarius dosis 10 g/kgBB dapat melindungi hati dari induksi karbon tetraklorida karena dimungkinkan dalam infusa tersari kandungan glikosida yang berperan sebagai antioksidan dari daun M. tanarius yaitu macarangiosida A, macarangiosida B, macarangiosida C, macarangiosida D dan malofenol B. Senyawa antioksidan yang tersari dalam infusa ini dimungkinkan cukup untuk mengikat metabolit reaktif triklorometil yang dihasilkan karbon tetraklorida dengan adannya enzim sitokrom P-450 sehingga ketoksikan yang dihasilkan dapat berkurang. Selain itu senyawa-senyawa antioksidan tersebut juga dapat meningkatkan produksi enzim glutation S-transferase yang dapat menetralisis radikal bebas yang ada di hati.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan Berdasarkan hasil yang telah diperoleh dan analisis statistik yang telah, maka dapat disimpulkan : 1. Pemberian infusa daun M. tanarius pada dosis 2,5; 5; dan 10 g/kgBB terbukti berpengaruh dalam menurunkan aktivitas ALT-AST serum tikus jantan yang terinduksi karbon tetraklorida dosis 2 ml/kgBB 2. Dari ketiga dosis yang digunakan dosis yang memberikan pengaruh penurunan aktivitas ALT-AST serum yang paling efektif adalah dosis 10 g/kgBB.

B. Saran Perlu dilakuan penelitian lebih lanjut mengenai: 1.

Pengaruh infusa daun M. tanarius untuk induksi hepatotoksin yang lain seperti galaktosamin.

2.

Pengaruh pemberian infusa daun M. tanarius pada tikus jantan terinduksi karbon tetraklorida 2 ml/kgBB, dengan dosis infusa di bawah dosis 2,5 g/kgBB.

55


DAFTAR PUSTAKA Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2010, Acuan Sediaan Herbal, Badan Pengawas Obat dan Makanan Replubik Indonesia, Jakarta, pp. 3. Backer, C.A., dan Bakhuizen van den Brink, R.C., 1963, Flora of Java, vol 1, NV.P. Noordhoff-Groningen, The Netherlands. Direktorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan, 1989, Materia Medika Indonesia, Jilid V, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, pp. 538. Direktorat Jenderal Pengawas Obat dan Makanan, 1995, Farmakope Indonesia, Edisi IV, Departemen Kesehatan RI, Jakarta. Forrest, E., 2006, Hepatic Disorders, in Lee, A., (Ed.), Adverse Drug Reaction, 2nd ed, Pharmaceutical Press, London, pp. 193. Ganong, W.F., dan Mc Phee, S.J., 2011, Patofisiologi Penyakit, Pengantar Menuju Kedokteran Klinis, Penerbit Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 421. Gregus dan Klaaseen, C. D., 2001, Mechanism of Toxicity, in Klaaseen, C. D., Cassarett and Doull’s Toxicology: the Basic Science Poisons, 6th edition, McGraw-Hill, New York, pp. 476, 481. Hastuti, T., 2008, Aktivitas Enzim Transaminase dan Gambaran Histopatologi Hati Tikus Yang Diberi Kelapa Kopyor Pascainduksi Parasetamol, Skripsi, 3, Institut Pertanian Bogor, Yogyakarta Hogade, M. G., Patil, K. S., Wadkar, G. H., Mathapati, S. S., dan Dhumal, P. B., 2010, Hepatoprotective Activity of Morus alba (Linn.) Leaves Extract Against Carbon Tetrachloride Induced Hepatotoxicity In Rats, Afr. J. Pharm. Pharmacol, 4(10), 731-734. Iniaghe, O. M., Malomo, S. O., dan Adebayo, J. O, 2008, Hepatoprotective Effect of The Aqueous Extract of Leaves of Acalypha racemosa in Carbon Tetrachloride Treated Rats, Journal of Medicinal Plants Research, 2(10), 301-305. Janakat, S., dan Al-Merie, H., 2002, Optimization of The Dose and Route Of Injection, and Characterisation of The Time Course of Carbon Tetrachloride-Induced Hepatotoxicity In The Rat, J. Pharm. Tox., 48, 4244.


Kalbe Medical Dept, Penatalaksanaan NAFLD (Non-Alkoholic Fatty Liver), http://www.kalbemed.com/News/tabid/229/id/1753/PenatalaksanaanNAFLD-Non-Alchoholic-Fatty-Liver-Disease.aspx, diakses tanggal 31 Agustus 2012. Kurniawati, A.Y., Adrianto, E.E., dan Hendra P., 2011, Uji Praklinik Ekstrak Metanol-Air Macaranga tanarius L. Kajian : Aktivitas Antiinflamasi dan Hepatoprotektif, Kongres Ilmiah dan Rapat Kerja Nasional IAI 2011, IAI, Manado. Lu, F. C., 1995, Toksikologi Dasar, Edisi II, UI Press, Jakarta, pp. 209-210. Mahendra, A.A., dan Hendra, P., 2011, Efek Hepatoprotektif Infusa Daun Macaranga tanarius L. pada Tikus Jantan Terinduksi Parasetamol, Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas, 8(2), 91-99. Matsunami, K., Takamori, I., Shinzato, T., Aramoto, M., Kondo, K., Otsuka, H., dan Takeda, Y., 2006, Radical-Scavenging Activities of New Megastigmane Glucosides from Macaranga tanarius (L.), Chem. Pharm. Bull., 54, 1403-1407. Matsunami, K., Otsuka, H., Kondo, K., Shinzato, T., Kawahata, M., Yamaguchi, K., dan Takeda, Y., 2009, Absolute configuration of (+)-pinoresinol 4-O[600-Ogalloyl]- b-D glucopyranoside, macarangiosides E, and F isolated from the leaves of Macaranga tanarius, Phytochemistry, 70, 1277-1285 . Nugraha, A.W., dan Hendra P., 2011, Pengaruh Pemberian Jangka Pendek Infusa Macaranga tanarius L. Terhadap Kadar ALT Tikus Jantan Terinduksi Parasetamol, Workshop Dan Seminar Nasional Pemberdayaan Pasien Dalam Self Management Diabetes Melitus Untuk Meningkatkan Kualitas Hidup, Fakultas Farmasi USD, Yogyakarta. Phommart, S., Pakawadee S., Nitirat Chimnoi, Somsak R., and Somyote S., 2005, Constituents of the Leaves of Macaranga tanarius, J. Nat. Prod., 68, 927930. Plaa, G.L., and Charbonneau, M., 2001, Detection and Evaluation of Chemically Induced Liver Injury, in Hayes, W.A., Principles and Methods of Toxicology, 4th edition, Taylor and Francis, Philadelphia, pp. 1148-1175.


Plantamor, 2008, Informasi Spesies Mara (Macaranga tanarius L.) M.A. http://www.plantamor.com/index.php?plant=804, diakses tanggal 29 Maret 2012. Price, S. A., and Wilson, L. M., 2005, Patofisiologi : Konsep Klinis Proses – ProsesPenyakit, Edisi 6, EGC, Jakarta, pp. 472 – 476. Puteri, M.D.P.T., dan Kawabata, J., 2010, Novel a-glucosidase inhibitors from Macaranga tanarius leaves, Food Chemistry, 123, 384–389. Sacher, R. A. and Mc Pherson, R. A., 2002, Tinjauan Klinis Hasil Pemriksaan, Edisi II, Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta, pp. 369-370. Timbrel, J. A. 2008, Principles of Biochemical Toxicology, 4th Edition, Informa Healthcare, New York, pp 308-311. Treinen, M., and Moslen, 2001, Toxic Responses of The Liver, in Klaassen, C.D., Cassarett and Doull’s Toxicology : The Basic Science of poisons, 6th edition, Mc. Graw Hill Companies, Inc., New York, pp.467-481. Wahyuni, S., 2005, Pengaruh Daun Sambiloto (Andrographis paniculata, Ness) Terhadap Kadar SGPT dan SGOT Tikus Putih, GAMMA Volume I, Nomor I, 45-53. Wibowo, D.J., dan Paryana, W., 2009, Anatomi Tubuh Manusia, Graha Ilmu, Bandung, pp. 347-352. World Agroforestry Centre. 2002. Botanic Nomenclature to Agroforestry trees:Macaranga tanarius. World Agroforestry Centre. Available: http://www.worldagroforestry.org/sea/products/afdbases/af/asp/SpeciesInf o.asp?SpID=1092#Uses, diakses tanggal 29 Maret 2012. Zimmerman, H.J., 1999, Hepatotoxicity, Edisi II, Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia, pp. 198-210.


LAMPIRAN


LAMPIRAN

Lampiran 1. Foto daun M. tanarius

Lampiran 2. Foto infusa daun M. tanarius


Lampiran 3. Hasil uji ANOVA waktu cuplikan darah ALT

NPar Tests Descriptive Statistics N ALT

Mean 15

Std. Deviation

1.4053E2

Minimum

84.31901

Maximum

51.00

311.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT N Normal Parameters

15 a

Mean

1.4053E2

Std. Deviation Most Extreme Differences

8.43190E1

Absolute

.204

Positive

.204

Negative

-.157

Kolmogorov-Smirnov Z

.790

Asymp. Sig. (2-tailed)

.561

a. Test distribution is Normal.

Oneway Descriptives ALT Std. N

Mean

95% Confidence Interval for Mean

Deviation Std. Error Lower Bound

Upper Bound Minimum Maximum

Orientasi jam ke-0

5

73.2000

28.89983 12.92440

37.3161

109.0839

51.00

123.00

Orientasi jam ke-24

5 2.4640E2

38.02368 17.00471

199.1874

293.6126

219.00

311.00

Orientasi jam ke-48

5 1.0200E2

32.71085 14.62874

61.3841

142.6159

68.00

139.00

15 1.4053E2

84.31901 21.77107

93.8390

187.2276

51.00

311.00

Total


Test of Homogeneity of Variances ALT Levene Statistic

df1

.296

df2 2

Sig. 12

.749

ANOVA ALT Sum of Squares

df

Mean Square

Between Groups

86131.733

2

43065.867

Within Groups

13404.000

12

1117.000

Total

99535.733

14

F

Sig.

38.555

.000

Post Hoc Tests Multiple Comparisons ALT Scheffe 95% Confidence Interval (I) orientasi_CCl4 (J) orientasi_CCl4 Mean Difference (I-J) jam ke-0

jam ke-24

jam ke-48

Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

jam ke-24

-173.20000*

21.13764

.000

-232.1228

-114.2772

jam ke-48

-28.80000

21.13764

.422

-87.7228

30.1228

jam ke-0

173.20000*

21.13764

.000

114.2772

232.1228

jam ke-48

144.40000

*

21.13764

.000

85.4772

203.3228

28.80000

21.13764

.422

-30.1228

87.7228

-144.40000*

21.13764

.000

-203.3228

-85.4772

jam ke-0 jam ke-24

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Homogeneous Subsets ALT Scheffe Subset for alpha = 0.05 orientasi_CCl4 Orientasi jam ke-0

N

1 5

73.2000

2


Orientasi jam ke-48

5

Orientasi jam ke-24

5

102.0000 246.4000

Sig.

.422

1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

AST

NPar Tests Descriptive Statistics N AST

Mean 15

Std. Deviation

3.1200E2

Minimum

211.52575

114.00

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST N Normal Parameters

15 a

Mean Std. Deviation

Most Extreme Differences

Absolute

3.1200E2 2.11526E2 .373

Positive

.373

Negative

-.175

Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) a. Test distribution is Normal.

1.446 .031

Maximum 669.00


NPar Tests Descriptive Statistics N

Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

AST

15

3.1200E2

211.52575

114.00

669.00

orientasi_AST

15

2.00

.845

1

3

Kruskal-Wallis Test Ranks orientasi_AST AST

N

Mean Rank

orientasi CCl4 jam ke-0

5

3.40


5

13.00


5

7.60

Total

15


Lampiran 4. Hasil uji Kolmogorov Smirnov, ANOVA oneway, ALT-serum tikus jantan setelah praperlakuan infusa daun M. tanarius selama 6 hari


Mean 30

Std. Deviation

134.70

Minimum

58.346

Maximum

77

311

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT N Normal Parameters

30 a


Mean

134.70

Std. Deviation

58.346

Absolute

.197

Positive

.197

Negative

-.161


1.081


.193


Oneway Descriptives ALT

N

Mean

Std.

Std.

Deviation

Error

Kontrol Hepatotoksin CCl4

5 246.40

Kontrol Negatif Olive oil

5

82.20

6.099

5

90.00

Kontrol Negatif Infusa Dosis 10 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 2,5 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 5 g/kg

38.024 17.005

95% Confidence Interval for Mean Lower Bound

Upper Bound

Minimum

Maximum

199.19

293.61

219

311

2.728

74.63

89.77

77

92

5.385

2.408

83.31

96.69

81

95

5 137.60

4.827

2.159

131.61

143.59

134

146

5 148.80

6.907

3.089

140.22

157.38

137

155


Perlakuan Infusa Daun

5 103.20

Macaranga Dosis 10 g/kg Total

30 134.70

7.727

3.455

93.61

112.79

93

114

58.346 10.653

112.91

156.49

77

311

Test of Homogeneity of Variances ALT Levene Statistic

df1

4.138

df2 5

Sig. 24

.007

ANOVA ALT Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

Mean Square

92153.500

5

18430.700

6570.800

24

273.783

98724.300

29

F

Sig.

67.319

.000

Post Hoc Tests Multiple Comparisons ALT Tamhane 95% Confidence Interval Mean Difference (I) Kontrol_Perlakuan

(J) Kontrol_Perlakuan

Kontrol Hepatotoksin CCl4 Kontrol Negatif Olive oil Kontrol Negatif Infusa Dosis 10 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 2,5 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 5 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 10 g/kg

(I-J)

Std. Error

Sig.

Lower

Upper

Bound

Bound

164.200

*

17.222

.008

61.76

266.64

156.400*

17.174

.010

53.30

259.50

108.800

*

17.141

.042

5.23

212.37

97.600

17.283

.058

-4.03

199.23

143.200*

17.352

.012

42.44

243.96



Kontrol Hepatotoksin CCl4 Kontrol Negatif Infusa Dosis 10 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 2,5 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 5 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 10 g/kg

Kontrol Negatif Infusa


Dosis 10 g/kg

Kontrol Negatif Olive oil Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 2,5 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 5 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 10 g/kg



Macaranga Dosis 2,5 g/kg

Kontrol Negatif Olive oil Kontrol Negatif Infusa Dosis 10 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 5 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 10 g/kg

-164.200*

17.222

.008

-266.64

-61.76

-7.800

3.639

.635

-22.82

7.22

-55.400*

3.479

.000

-69.97

-40.83

-66.600*

4.121

.000

-83.61

-49.59

-21.000*

4.402

.024

-39.45

-2.55

-156.400

*

17.174

.010

-259.50

-53.30

7.800

3.639

.635

-7.22

22.82

-47.600*

3.234

.000

-60.94

-34.26

-58.800*

3.917

.000

-75.24

-42.36

-13.200

4.212

.216

-31.30

4.90

-108.800*

17.141

.042

-212.37

-5.23

55.400

*

3.479

.000

40.83

69.97

47.600*

3.234

.000

34.26

60.94

-11.200

3.768

.264

-27.38

4.98

34.400

*

4.074

.001

16.39

52.41



-97.600

17.283

.058

-199.23

4.03

Macaranga Dosis 5 g/kg


66.600*

4.121

.000

49.59

83.61

58.800*

3.917

.000

42.36

75.24

11.200

3.768

.264

-4.98

27.38

45.600*

4.635

.000

26.48

64.72

-143.200*

17.352

.012

-243.96

-42.44

Kontrol Negatif Infusa Dosis 10 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 2,5 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 10 g/kg Perlakuan Infusa Daun



Macaranga Dosis 10 g/kg

Kontrol Negatif Olive oil Kontrol Negatif Infusa Dosis 10 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 2,5 g/kg Perlakuan Infusa Daun Macaranga Dosis 5 g/kg

21.000*

4.402

.024

2.55

39.45

13.200

4.212

.216

-4.90

31.30

-34.400*

4.074

.001

-52.41

-16.39

-45.600*

4.635

.000

-64.72

-26.48


Lampiran 5. Hasil uji Kolmogorov Smirnov, ANOVA oneway, AST-serum tikus jantan setelah praperlakuan infusa daun M. tanarius selama 6 hari


Mean 30

3.1713E2

Std. Deviation 166.71300

Minimum 106.00

Maximum 669.00


One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST N

30

Normal Parameters

a

Mean

3.1713E2

Std. Deviation Most Extreme Differences

1.66713E2

Absolute

.108

Positive

.108

Negative

-.103


.590


.877


Oneway Descriptives AST 95% Confidence Interval for Mean

Std. N

Mean

Deviation Std. Error Lower Bound

Upper Bound

Minimum Maximum

Kontrol hepatotoksin CCl4

5 5.9620E2

56.67186 25.34443

525.8326

666.5674

522.00

669.00

Kontrol negatif olive oil

5 1.1860E2

11.50217

5.14393

104.3182

132.8818

106.00

133.00

5 1.7240E2

33.17077 14.83442

131.2130

213.5870

133.00

214.00

Dosis rendah infusa (2,5 g/kg)

5 3.4840E2

43.64401 19.51820

294.2088

402.5912

287.00

397.00

Dosis tengah infusa (5 g/kg)

5 4.1660E2

44.48932 19.89623

361.3592

471.8408

365.00

487.00

Dosis tinggi infusa (10 g/kg)

5 2.5060E2

35.33129 15.80063

206.7304

294.4696

201.00

283.00

30 3.1713E2 166.71300 30.43749

254.8817

379.3850

106.00

669.00

Kontrol negatif infusa daun macaranga

Total

Test of Homogeneity of Variances AST Levene Statistic 1.582

df1

df2 5

Sig. 24

.203


ANOVA AST Sum of Squares Between Groups Within Groups Total

df

Mean Square

767696.667

5

153539.333

38306.800

24

1596.117

806003.467

29

F

Sig.

96.196

.000

Post Hoc Tests Multiple Comparisons AST Scheffe 95% Confidence Interval

Mean (I) Kontrol_Perlakuan

(J) Kontrol_Perlakuan

Lower Bound Upper Bound

*

.000

386.1356

569.0644

423.80000* 25.26750

.000

332.3356

515.2644


247.80000* 25.26750

.000

156.3356

339.2644


179.60000* 25.26750

.000

88.1356

271.0644


345.60000 25.26750

*

.000

254.1356

437.0644

-477.60000* 25.26750

.000

-569.0644

-386.1356

-53.80000 25.26750

.493

-145.2644

37.6644


-229.80000* 25.26750

.000

-321.2644

-138.3356


-298.00000* 25.26750

.000

-389.4644

-206.5356


-132.00000 25.26750

*

.002

-223.4644

-40.5356

-423.80000* 25.26750

.000

-515.2644

-332.3356

53.80000 25.26750

.493

-37.6644

145.2644

Kontrol negatif infusa daun macaranga

Kontrol hepatotoksin CCl4 Kontrol negatif infusa daun macaranga

Kontrol negatif infusa daun Kontrol hepatotoksin CCl4 macaranga

Sig.

477.60000 25.26750

Kontrol hepatotoksin CCl4 Kontrol negatif olive oil

Kontrol negatif olive oil

Difference (I-J) Std. Error

Kontrol negatif olive oil Dosis rendah infusa (2,5 g/kg)

-176.00000 25.26750

*

.000

-267.4644

-84.5356


-244.20000* 25.26750

.000

-335.6644

-152.7356


-78.20000 25.26750

.129

-169.6644

13.2644


-247.80000* 25.26750

.000

-339.2644

-156.3356

229.80000 25.26750

*

.000

138.3356

321.2644

176.00000* 25.26750

.000

84.5356

267.4644


-68.20000 25.26750

.241

-159.6644

23.2644


97.80000 25.26750

*

.031

6.3356

189.2644

-179.60000 25.26750

*

.000

-271.0644

-88.1356

298.00000* 25.26750

.000

206.5356

389.4644

244.20000 25.26750

*

.000

152.7356

335.6644

68.20000 25.26750

.241

-23.2644

159.6644

166.00000* 25.26750

.000

74.5356

257.4644

-345.60000* 25.26750

.000

-437.0644

-254.1356

132.00000* 25.26750

.002

40.5356

223.4644

78.20000 25.26750

.129

-13.2644

169.6644

-97.80000 25.26750

*

.031

-189.2644

-6.3356

-166.00000* 25.26750

.000

-257.4644

-74.5356

Dosis rendah infusa (2,5


g/kg)

Kontrol negatif olive oil Kontrol negatif infusa daun macaranga

Dosis tengah infusa (5


g/kg)

Kontrol negatif olive oil Kontrol negatif infusa daun macaranga Dosis rendah infusa (2,5 g/kg) Dosis tinggi infusa (10 g/kg)

Dosis tinggi infusa (10


g/kg)

Kontrol negatif olive oil Kontrol negatif infusa daun macaranga Dosis rendah infusa (2,5 g/kg) Dosis tengah infusa (5 g/kg)


Homogeneous Subsets AST Scheffe Subset for alpha = 0.05 Kontrol_Perlakuan Kontrol negatif olive oil Kontrol negatif infusa daun macaranga

N

1

2

5

1.1860E2

5

1.7240E2

3

4

1.7240E2


5


5

3.4840E2


5

4.1660E2


5

Sig.

2.5060E2

5.9620E2 .493

.129

.241

1.000


AST Scheffe Subset for alpha = 0.05 Kontrol_Perlakuan

N

Kontrol negatif olive oil Kontrol negatif infusa daun macaranga

1

2

5

1.1860E2

5

1.7240E2

3

4

1.7240E2


5

2.5060E2


5

3.4840E2


5

4.1660E2


5

5.9620E2

Sig.

.493

.129

.241

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

Lampiran 6. Hasil Uji Kontrol Negatif Olive Oil ALT


Mean 10

86.2000

Std. Deviation 9.37846

Minimum 77.00

Maximum 108.00

1.000


One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test ALT N

10

Normal Parameters

a


Mean

86.2000

Std. Deviation

9.37846

Absolute

.193

Positive

.193

Negative

-.163


.609


.851


Means Case Processing Summary Cases Included N

Excluded

Percent

ALT * olive

10

N

100.0%

Percent 0

Report ALT Std. Error of olive

Mean

Mean

Kelompok jam ke-0

90.2000

4.91325

kelompok kontrol olive oil

82.2000

2.72764

Total

86.2000

2.96573

Measures of Association Eta ALT * olive

Eta Squared .450

.202

Total

.0%

N

Percent 10

100.0%



Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

ALT

10

86.2000

9.37846

77.00

108.00

olive

10

1.500

.5270

1.0

2.0

Kruskal-Wallis Test Ranks olive ALT

N

Mean Rank

Kelompok jam ke-0

5

6.70


5

4.30

Total

10

Test Statisticsa,b ALT Chi-Square

1.580

df

1

Asymp. Sig.

.209

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: olive


Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

ALT

10

86.2000

9.37846

77.00

108.00

olive

10

1.500

.5270

1.0

2.0

Mann-Whitney Test Ranks Olive ALT

Kelompok jam ke-0

N

Mean Rank 5

6.70

Sum of Ranks 33.50



5

Total

4.30

21.50

10

Test Statisticsb ALT Mann-Whitney U

6.500

Wilcoxon W

21.500

Z

-1.257


.209 .222a

Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: olive

AST


Mean 10

120.700

Std. Deviation

Minimum

11.6528

105.0

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test AST

Maximum 137.0


N

10

Normal Parameters

a


Mean

120.700

Std. Deviation

11.6528

Absolute

.206

Positive

.142

Negative

-.206


.650


.792


Means Case Processing Summary Cases Included N AST * olive

Excluded

Percent 10

N

100.0%

Percent 0

.0%

Report AST Std. Error of olive

Mean

kelompok jam ke-0 kelompok kontrol negatif olive oil Total

Eta AST * olive

5.6956

118.600

5.1439

120.700

3.6850

Eta Squared .190

Mean

122.800

Measures of Association

.036

Total N

Percent 10

100.0%



Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

AST

10

120.700

11.6528

105.0

137.0

olive

10

1.500

.5270

1.0

2.0

Kruskal-Wallis Test Ranks Olive AST

N

Mean Rank

kelompok jam ke-0 kelompok kontrol negatif olive oil Total

5

5.90

5

5.10

10

Test Statisticsa,b AST Chi-Square

.176

df

1

Asymp. Sig.

.675

a. Kruskal Wallis Test b. Grouping Variable: olive


Mean

Std. Deviation

Minimum

Maximum

AST

10

120.700

11.6528

105.0

137.0

olive

10

1.500

.5270

1.0

2.0

Mann-Whitney Test Ranks Olive AST

kelompok jam ke-0

N

Mean Rank 5

5.90

Sum of Ranks 29.50


kelompok kontrol negatif olive

5

oil Total

Test Statistics

10

b

AST Mann-Whitney U

10.500

Wilcoxon W

25.500

Z Asymp. Sig. (2-tailed) Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] a. Not corrected for ties. b. Grouping Variable: olive

-.419 .675 .690a

5.10

25.50


Lampiran 7. Perhitungan efek hepatoprotektif Rumus perhitungan hepatoprotektif :

Aktivitas ALT - serum kontrol hepatotoksin CCl 4   Aktivitas ALT - serum perlakuan  x100% Aktivitas ALT - serum kontrol hepatotoksin CCl 4  Dengan dasar tesebut, maka perhitungan efek hepatoprotektf dihitung sebagai berikut : 1.

Kelompok perlakuan infusa daun M. tanarius 2,5 g/kgBB + induksi CCl4 2 ml/kgBB

246,4 - 137,6  100 %  44,1% 246,4 2.

Kelompok perlakuan infusa daun M. tanarius 5 g/kgBB + induksi CCl4 2 ml/kgBB

246,4 - 148,8  100 %  39,6% 246,4 3.

Kelompok perlakuan infusa daun M. tanarius 10 g/kgBB + induksi CCl4 2 ml/kgBB

246,4 - 103,2  100 %  58,1% 246,4 Lampiran 8. Perhitungan penetapan peringkat dosis infusa daun M. tanarius pada kelompok perlakuan Dasar penetapan peringkat dosis infusa 

Bobot tertinggi tikus = 250 g



Konsentrasi infusa daun M. tanarius yang dapat dibuat= 100% Konsentrasi infusa 100% merupakan hasil infudasi 50,0 g serbuk kering daun M. tanarius dalam 200,0 ml air pada suhu 900C selama 15 menit, kemudian serkai selagi hangat dengan kain flannel lalu hasil infusa diuapkan hingga bobot infusa mencapai bobot yang sama dengan serbuk kering daun M.


tanarius. Oleh sebab itu, dapat diperoleh sediaan dalam 1 ml infusa mengandung 1 g kandungan kimia dari daun M. tanarius. 

Pemberian infusa menggunakan ½ volume maksimal (5 ml) pemberian per oral yaitu 2,5 ml

Dengan dasar tersebut maka ditetapkan dosis tertinggi infusa daun M. tanarius D x BB = C x V Dosis x Berat badan = Konsentrasi x Volume pemberian D x 250 g = 1000 mg/ml x 2,5 ml D = 10 mg/g D = 10.000 mg/kg = 10 g/kg (dosis tertinggi)

Untuk dua peringkat dosis di bawahnya, dosis 10 g/kg dibagi 2 kemudian dibagi 2 lagi sehingga diperoleh 3 peringkat dosis yaitu : 10 g/kg; 5 g/kg dan 2,5 g/kg.

Lampiran 9. Perhitungan konversi dosis untuk manusia 

Angka konversi Tikus 200 g ke Manusia 70 kg = 56,0



Dosis untuk manusia = Dosis untuk tikus 200 g x (angka konversi ke manusia)

Dengan dasar tersebut maka ditetapkan dosis infusa daun M. tanarius untuk manusia: 1.

Infusa daun M. tanarius 2,5 g/kgBB tikus : 2,5 g/kgBB = 2,5 g/1000 gBB = 0,5 g/200 gBB


0,5 g/200 gBB x 56,0 = 28 g/70 kgBB manusia 2. Infusa daun M. tanarius 5 g/kgBB tikus : 5 g/kgBB = 5 g/1000 gBB = 1 g/200 gBB 1 g/200 gBB x 56,0 = 56 g/70 kgBB manusia 3. Infusa daun M. tanarius 10 g/kgBB tikus : 10 g/kgBB = 10 g/1000 gBB = 2 g/200 gBB 2 g/200 gBB x 56,0 = 112 g/70 kgBB manusia

Lampiran 10. Penetapan kadar air serbuk daun M. tanarius Penetapan kadar air serbuk menggunakan menggunakan metode Gravimetri dengan alat moisture balance. Dilakukan dengan mengukur kehilangan kandungan saat pemanasan selam 15 menit dengan suhu 1100C. berikut hasil penetapan kadar air yang diperoleh : Bobot (gram) Replikasi I Replikasi II Replikasi III Sebelum 5,008 5,002 5,001 pemanasan Sesudah 4,628 4,615 4,629 pemanasan 7,59 7,74 7,44 Kadar air (%) Rata-rata 7,59 % Persyaratan kadar air simplisia adalah kurang dari 10%, sehingga kadar simplisia serbuk daun M. tanarius ini memenuhi syarat.

Lampiran 11. Hasil validitas dan reabilitas pengukuran alat Mikrovitalab Pengukuran dilakukan dengan serum kontrol Cobas yang mempunyai range untuk ALT-serum antara 33,9 – 48,9 U/l)


x (U/l) 42 40 41 42 41

SD  SD 

( x  x ) 2 (n  1) 2,8  0,8 4

2

x

xx

( x  x)

41,2

0,8 -1,2 -0,2 0,8 -0,2

0,64 1,44 0,04 0,64 0,04   2,8

Range = x + SD

CV= (SD / x) x100%

= 41,2 + 0,8

= (0,8/41,2) x 100%

= 40,4 sampai 42

= 1,94% Syarat CV yang baik < 2%


Lampiran 12. Surat determinasi tanaman M. tanarius


Lampiran 13. Surat Ethical Clearence Penelitian


BIOGRAFI PENULIS

Penulis

skripsi

dengan

judul

“Efek

Hepatoprotektif Infusa Daun Macaranga Tanarius L. Pada Tikus Jantan Galur Wistar Terinduksi Karbon Tetraklorida” memiliki nama lengkap Nanda Chris Nurcahyanti, merupakan anak pertama dari dua bersaudara pasangan Ir. Kris Setyanto, M.Si. dan Marsini, S.Pd. Penulis dilahirkan di Klaten pada tanggal 14 April 1991. Pendidikan formal yang telah ditempuh, yaitu TK Kristen Kridawita Klaten (1996-1997), kemudian melanjutkan pendidikan tingkat Sekolah Dasar di SD Negeri 3 Klaten (1997-2003). Pendidikan Sekolah Menengah Pertama ditempuh oleh penulis di SMP Negeri 2 Klaten (2003-2006), kemudian melanjutkan pendidikan tingkat menengah atas di SMA Negeri 2 Klaten (2006-2009). Penulis kemudian melanjutkan pendidikan S-I Farmasi di Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2009. Semasa menempuh kuliah, penulis aktif dalam berbagai kepanitiaan baik dalam fakultas maupun di luar fakultas. Penulis pernah menjadi anggota divisi Kesekretariatan Pelepasan Wisuda (2010), anggota divisi Pendamping Kelompok Titrasi (2011), dan divisi Pendamping Kelompok Kunjungan Universitas Pancasila (2011) Penulis juga pernah menjadi Asisten Praktikum Kimia Analisis (2011) dan Toksikologi Dasar (2012).

EFEK HEPATOPROTEKTIF INFUSA DAUN Macaranga tanarius L. PADA TIKUS JANTAN GALUR WISTAR TERINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA SKRIPSI

Recommend Documents