ULTRAFILTRASI, PRESIPITASI BERTINGKAT dan KROMATOGRAFI PENUKAR ION sebagai TAHAPAN PEMURNIAN ENZIM PROTEASE Bacillus megaterium MS-961
Oleh DINNY MUTIAH F34101127
2005 DEPARTEMEN TEKNOLOGI INDUSTRI PERTANIAN FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR
FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR
ULTRAFILTRASI, PRESIPITASI BERTINGKAT dan KROMATOGRAFI PENUKAR ION sebagai TAHAPAN PEMURNIAN ENZIM PROTEASE Bacillus megaterium MS-961
SKRIPSI Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN Pada Departemen Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor
Oleh DINNY MUTIAH F34101127
Dilahirkan pada tanggal 10 Maret 1983 Di Bandung, Jawa Barat Tanggal lulus : 5 Desember 2005 Menyetujui, Bogor, 6 Januari 2006
Prof. Dr. Djumali M, DEA Pembimbing I
Dr. Budiasih Wahyuntari Pembimbing II
ULTRAFILTRASI, PRESIPITASI BERTINGKAT dan KROMATOGRAFI PENUKAR ION sebagai TAHAPAN PEMURNIAN ENZIM PROTEASE Bacillus megaterium MS-961
SKRIPSI Sebagai Salah Satu Syarat Untuk Memperoleh Gelar SARJANA TEKNOLOGI PERTANIAN Pada Departemen Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor
Oleh DINNY MUTIAH F34101127
2005 FAKULTAS TEKNOLOGI PERTANIAN INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR
KATA PENGANTAR Dengan mengucap syukur ke hadirat Allah SWT, akhirnya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Ultrafiltrasi, Presipitasi Bertingkat dan Kromatografi Penukar Ion sebagai Tahapan Pemurnian Enzim Protease Bacillus megaterium MS-961”. Skripsi ini disusun sebagai salah satu syarat untuk menyelesaikan studi pada Departemen Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor. Skripsi ini merupakan hasil penelitian yang dilakukan selama lima bulan, terhitung dari bulan Februari hingga bulan Juli, dan disusun berdasarkan acuan tinjauan pustaka. Selama penelitian hingga penyusunan skripsi ini, penulis banyak sekali mendapat bantuan dan dukungan dari berbagai pihak baik secara moril maupun materil, oleh karena itu, pada kesempatan ini ijinkan penulis untuk mengucapkan terima kasih sebesar-besarnya kepada: 1. Kedua orang tua tercinta Ayahanda A. Mustafa dan Ibunda Kustariah, sebagai orang yang telah membesarkan penulis dengan penuh cinta kasih dan pendorong semangat terhebat, serta Ade tersayang dan terbawel yang pernah ada. 2. Prof. Dr. Djumali M,DEA selaku dosen pembimbing pertama yang telah memberikan bimbingan dan arahan kepada penulis selama menyelesaikan tugas akhir. 3. Dr. Budiasih Wahyuntari selaku dosen pembimbing kedua atas segala arahan dan wejangan yang diberikan selama penulis melakukan penelitian hingga penyusunan skripsi. 4. Drs. Purwoko, Msi sebagai dosen penguji yang telah memberikan masukan untuk perbaikan skripsi yang saya buat. 5. Pusat Pengkajian dan Penerapan Teknologi Bioindustri, Badan Pengkajian dan Penerapan Teknologi (BPP Teknologi) yang memberikan kepercayaan kepada penulis untuk melaksanakan program penelitian ini. 6. Dr. Suprihatin, yang telah membantu memecahkan masalah statistika pada penelitian ini.
7. Seluruh staf dan karyawan di Laboratorium Teknologi Bioindustri, BPPT, Serpong, yang banyak membantu penulis selama melakukan penelitian. 8. Sahabatku Uut, Teh Neti, Elin, Teh Euis, Teh Ira, Yudis, Agin, Zahra dan teman-teman seperjuangan di LTB: Rahmi, Wanto, Sari, Dimas, dan lainnya atas dukungan dan kerjasamanya selama bekerja di laboratorium. 9. Kawan-kawan TIN 38, teman-teman di ”Nurjanah”, mbak-mbak di ”D35 BATAN” dan semua pihak yang tidak dapat saya sebutkan di atas, terima kasih sebesar-besarnya. Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi semua pihak yang membutuhkan. Penulis memohon maaf yang sebesar-besarnya apabila terdapat kesalahan selama melakukan penelitian dan penyusunan skripsi ini.
Bogor, Desember 2005
Penulis
RIWAYAT HIDUP
Penulis dilahirkan di Bandung pada tanggal 10 Maret 1983 dari seorang ibu yang bernama Kustariah dan ayah bernama A. Mustafa.
Penulis merupakan anak pertama dari dua
bersaudara yaitu Fatriani. Penulis mendapatkan pendidikan dasar di SD PRIANGAN tahun 1989 sampai tahun 1995, SLTP di SLTPN 7 Bandung tahun 1995 sampai tahun 1998, dan SMU di SMUN 8 Bandung tahun 1998 sampai 2001. Penulis masuk ke Institut Pertanian Bogor (IPB) pada tahun 2001 melalui jalur UMPTN pada Departemen Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian. Penulis dapat menyelesaikan pendidikan S1 pada tahun 2005 dengan gelar Sarjana Teknologi Pertanian. Selama menjalankan pendidikan akademis, penulis aktif dibeberapa organisasi yaitu pada tahun 2002 sampai tahun 2003 penulis aktif sebagai pengurus Himpunan Mahasiswa Islam (HMI) komisariat FATETA, pada tahun yang sama penulis juga aktif sebagai anggota Himpunan Mahasiswa Teknologi Industri (HIMALOGIN) Departemen Teknologi Industri Pertanian IPB dan terlibat sebagai pengurus dalam Badan Eksekutif Mahasiswa FATETA Departemen Sosial Dan Kemasyarakatan Mahasiswa. Pada tahun 2004 penulis menjalankan Praktek Lapang (PL) di PT. Diamond Cold Storage, Cimahi, Jawa Barat dengan judul “Proses Produksi dan Pengawasan Mutu Sosis Sapi (Beef Sausage) di PT. Diamond Cold Storage, Bandung-Jawa Barat.”
SURAT PERNYATAAN
Saya yang bertandatangan dibawah ini: Nama
: DINNY MUTIAH
NRP
: F34101127
Judul Skripsi
: Ultrafiltrasi, Presipitasi Bertingkat dan Kromatografi Penukar Ion sebagai Tahapan Pemurnian Enzim Protease Bacillus megaterium MS-961
menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa skripsi dengan judul diatas adalah hasil karya saya sendiri dengan arahan dosen pembimbing akademik, kecuali dengan jelas ditunjukkan rujukannya.
Bogor, Desember 2005
DINNY MUTIAH
DAFTAR ISI Halaman KATA PENGANTAR ..............................................................................
i
DAFTAR TABEL .....................................................................................
v
DAFTAR GAMBAR ................................................................................
vi
DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................
vii
I. PENDAHULUAN ...............................................................................
1
B. LATAR BELAKANG ..................................................................
1
C. TUJUAN ......................................................................................
2
II. TINJAUAN PUSTAKA .....................................................................
3
A. PROTEASE ..................................................................................
3
B. FILTRASI MEMBRAN ...............................................................
5
C. PRESIPITASI ................................................................................
7
D. KROMATOGRAFI PENUKAR ION ............................................
8
E. AKTIVITAS ENZIM ....................................................................
11
III. BAHAN DAN METODE ...................................................................
11
A. ALAT DAN BAHAN ...................................................................
11
1. Alat .........................................................................................
12
2. Bahan ......................................................................................
12
B. METODE PENELITIAN .............................................................
12
1. Poduksi enzim protease kasar .................................................
14
2. Ultrafiltrasi ..............................................................................
14
3. Presipitasi bertingkat ................................................................
15
4. Kromatografi penukar ion .........................................................
16
4.1. Penghilangan garam-garam ..............................................
16
4.2. Penukar ion .......................................................................
17
5. Penentuan aktivitas enzim
............................
18
..................................
20
7. Penentuan fluks ......................................................................
20
6. Penentuan kadar protein
IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ..........................................................
21
A. ULTRAFILTRASI .......................................................................
21
B. PRESIPITASI ...............................................................................
25
C. KROMATOGRAFI PENUKAR ION ..........................................
28
V. KESIMPULAN DAN SARAN ..........................................................
39
A. KESIMPULAN ............................................................................
39
B. SARAN .........................................................................................
39
DAFTAR PUSTAKA ...............................................................................
40
LAMPIRAN ...............................................................................................
43
DAFTAR TABEL Halaman Tabel 1. Divisi dari subgrup peptidase dan proteinase: subgrup 3.4 -peptida hidrolase
4
Tabel 2. Metode analisis aktivitas enzim
19
Tabel 3. Tingkat pemurnian enzim protease setiap tahapan proses
38
