Dian Eka Mariana, Rima Zakiyah, Noer Aini Fakultas Kedokteran Universitas Islam Malang

EFEK KOMBINASI DEKOKTA Centella asiatica, Imperata cylindrica dan Orthosiphon aristatus terhadap PROPORSI NEKROSIS SEL EPITEL TUBULUS PROKSIMAL GINJAL TIKUS MODEL HIPERTENSI (DOCA-NaCl) Dian Eka Mariana, Rima Zakiyah, Noer Aini Fakultas Kedokteran Universitas Islam Malang Email :[email protected]

Abstract. One of the complications of hypertension is renal failure which is marked by renal proximal tubular epithelial cells. This research aims to know the effect of decocta pegagan leaves/P (Centella asiatica), alang-alang roots/A (Imperata cylindrica) and kumis kucing leaves/K (Orthosiphon aristatus) to the necrotic proportion of renal proximal tubular epithelial cells on hypertensive rat model induced by DOCA-NaCl. Experimental study laboratory control group post-test only, design using male wistar rats. It consists of five groups which were negative control (aquadest), positive control (DOCA 10mg/Kg weight+NaCl 1%), and treatment group of P1 (PAK I (5:5:3)), P2 (PAK 2 (6:4:3)) and P3 (PAK 3 (4:6:3))). Renal proximal tubular epithelial cell was stained by hematoxylin eosin. The result was analyzed using one way Annova followed by LSD test with a significant value of p˂0.05. DOCA-NaCl can increase the necrotic proportion of renal proximal tubular epithelial cells. Treatment with combination decocta PAK 1 can significantly reduce (p<0,05) to 12,5% the necrotic proportion of renal proximal tubular epithelial cells on the rats compared to K(+) meanwhile combination of decocta PAK 2 and 3 can not reduce the necrotic proportion of renal proximal tubular epithelial cells hypertensive rats model (DOCA-NaCl). Combination decocta PAK 1 (5:5:3) can significantly reduce the necrotic proportion of renal proximal tubular epithelial cells on hypertensive rat models. Keywords : Hypertension, Necrotic of Renal Proximal Tubular Epithelial Cells, Centella asiatica, Imperata cylindrica, Orthosiphon aristatus.

Hipertensi merupakan penyakit kronis yang prevalensinya meningkat setiap tahun dan menyebabkan kematian 9,4 juta orang per tahun.1 Berdasarkan data RISKESDAS tahun 2013 prevalensi hipertensi di Indonesia mencapai 25,8%.2 Hipertensi yang terjadi dalam jangka waktu lama dapat menjadi penyebab utama gagal ginjal.3 Prevalensi terjadinya gagal ginjal terminal akibat hipertensi di Indonesia mengalami peningkatan pada tahun 1999 sebesar 340.000 dan tahun 2010 mencapai 651.000.4 Tingginya komplikasi hipertensi dikaitkan dengan terjadinya disfungsi endotel sistemik, salah satunya terjadi di organ ginjal.5 Disfungsi endotel pada ginjal mengakibatkan vasokonstriksi arteriol ginjal sehingga aliran darah menuju ginjal menurun.6 Hal ini diperburuk oleh adanya iskemia pada jaringan menyebabkan terbentuknya Reactive Oxigen Species (ROS) yang mengakibatkan lipid membran seluler dan

mitokondria sel tubulus proksimal ginjal rusak sehingga mengalami nekrosis, adanya nekrosis pada tubulus akan menyebabkan kerusakan pada struktur nefron ginjal. Kerusakan nefron ginjal secara luas dan progresif merupakan awal dari terjadinya gagal ginjal.6,7,8,9 Pembentukan ROS dapat dihambat dengan antioksidan endogen dan eksogen yang berasal dari herbal.10 Penggunaan obat antihipertensi sintetik kimiawi terbukti efektif dalam mengatasi hipertensi, namun penggunaan jangka panjang obat tersebut mengakibatkan hipokalemia, sedasi, takikardi dan kerusakan ginjal.11,12 Islam telah mengajarkan pada umatnya untuk berobat, disebutkan dalam hadis riwayat Jabir r.a., Rasulullah SAW bersabda bahwa Allah SWT menurunkan penyakit beserta obatnya.13 Firman Allah SWT dalam Al-Quran surat Asy-syu’ara ayat 7 Firman Allah SWT dalam Al-Quran surat Asysyu’ara ayat 7 yang menyebutkan “dan apakah mereka tidak memperhatikan bumi, berapakah

Jurnal Kedokteran Komunitas

banyaknya Kami tumbuhkan dibumi itu berbagai macam tumbuh-tumbuhan yang baik?”. Beberapa herbal yang dikembangkan oleh Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat Tradisional (B2P2TOOT) sebagai antihipertensi diantaranya yaitu daun pegagan, akar alang-alang, dan daun kumis kucing. Pemilihan metode dekokta untuk ketiga herbal didasarkan pada kebiasaan masyarakat Indonesia yang menggunakan pelarut air dengan merebus herbal dalam air mendidih untuk pembuatan jamu dan diharapkan zat aktif pada akar alang-alang, daun pegagan dan daun kumis kucing dapat terambil secara maksimal. Pada penelitian sebelumnya telah dilakukan penelitian beberapa herbal yang memiliki efek antihipertensi yaitu daun pegagan (Centella asiatica) yang memiliki efek antioksidan, akar alang-alang (Imperata cylindrica) yang memiliki fungsi sebagai vasodilator dan daun kumis kucing (Orthosiphon aristatus) yang memiliki efek diuretik.34,50,52 Namun, sampai saat ini belum ada penelitian yang mempelajari pengaruh pemberian kombinasi ketiga herbal tersebut terhadap nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal akibat keadaan hipertensi. Berdasarkan latar belakang tersebut peneliti ingin mengetahui efek kombinasi dekokta daun pegagan (Centella asiatica), akar alang-alang (Imperata cylindrica), dan daun kumis kucing (Orthosiphon aristatus) terhadap proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus wistar model hipertensi melalui induksi Deoxycorticosterone acetate (DOCA) dan NaCl. METODE PENELITIAN Rancangan Penelitian Penelitian dilaksanakan secara eksperimental laboratorium dengan desain penelitian control group post test only secara in vivo, tujuan penelitian ini untuk mengetahui efek pemberian kombinasi dekokta daun Pegagan (Centella asiatica), akar Alang-alang (Imperata cylindrica) dan daun Kumis kucing (Orthosiphon aristatus) sebagai antihipertensi dan antioksidan terhadap proporsi nekrosis epitel tubulus proksimal ginjal pada tikus wistar yang diinduksi Deoxycorticosterone acetate (DOCA) dan NaCl.

Page | 80

Volume 3, Nomor 1, Desember 2015

Prosedur Penelitian Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian dilakukan di Laboratorium Biosains Universitas Brawijaya untuk pemeliharaan tikus dan Laboratorium Patologi Anatomi RS. Saiful Anwar Malang untuk pembuatan preparat histopatologi ginjal. Waktu penelitian selama 12 minggu dimulai dari awal bulan April sampai awal bulan Juli 2014. Adaptasi Hewan Coba Aklimatisasi (penyesuaian lingkungan) bagi hewan coba dilakukan selama 2 minggu. Dalam masa aklimatisasi, tikus diberi makan dan minum sesuai standar laboratorium. Berat badan tikus ditimbang sebelum, sesudah masa aklimatisasi, selama perlakuan (dua kali seminggu pada saat akan diinjeksi DOCA) dan setelah perlakuan. Kandang tikus dibersihkan setiap 3 hari sekali. Ethical Clearence dilakukan pada bulan Juni 2015 di Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang dikeluarkan pada tanggal 16 Juni 2015 dengan nomor 365/EC/KEPK/06/2015. Induksi Hipertensi Induksi hipertensi diberikan pada kelompok K(+), P1, P2 dan P3 menggunakan deoxycorticosterone (DOCA) dan NaCl. DOCA dilarutkan dalam minyak jagung 0,3 ml pada dosis 10 g/KgBB dan diberikan secara injeksi subkutan dua kali dalam satu minggu selama 10 minggu. NaCl diberikan melalui pemberian air minum secara ad libitum dengan rumus takaran 0,5 g NaCl tiap 50 cc per ekor tikus.14 Pengukuran tekanan darah pada penelitian ini menggunakan non invasive blood pressure monitoring dengan tail cuff. Alat yang digunakan untuk mengukur tekaran darah adalah LE5002 pan lab harvard apparatus untuk tikus. Prinsip dari alat ini yaitu merekam tekanan volume untuk mengukur tekanan sistolik dan diastolik tikus.15 Pengukuran tekanan darah sistolik dilakukan melalui ekor tikus dan dilakukan pada minggu ke-0 untuk mengetahui tekanan darah awal sebelum induksi DOCA-NaCl, minggu ke-6 untuk mengetahui peningkatan tekanan darah setelah pemberian DOCA NaCl selama 6 minggu dan minggu ke-10 untuk mengetahui penurunan tekanan darah setelah pemberian herbal selama 4 minggu. Tikus dikatakan hipertensi jika tekanan darah sistolik >120 mmHg.24,25

Dian Eka Mariana, EFEK KOMBINASI DEKOKTA Centella asiatica, Imperata cylindrica

Pemberian Kombinasi Dekokta PAK Sampel yang digunakan berupa simplisia daun pegagan, akar alang-alang dan daun kumis kucing diperoleh dari Balai Materia Medica Batu yang memenuhi persyaratan yang dikeluarkan tanggal 24 Agustus 2015 dengan nomor 074/469/101.8/2015. Simplisia ditimbang sesuai dosis dengan faktor konversi dari manusia ke tikus adalah (200 g/BB) = 0.0018.16 Dilakukan perebusan simplisia pada suhu 900C selama 30 menit. Ekstrak yang didapat di saring menggunakan kertas saring kemudian dimasukkan ke dalam toples kaca dan diberikan secara sonde lambung. Dosis kombinasi PAK yang diberikan yaitu P1 (5:5:3) gram, P2 (6:4:3) gram, dan P3 (4:6:3) gram per tikus. Metode Pengamatan dan Perhitungan Proporsi Nekrosis Sel Epitel Tubulus Proksimal Ginjal Sel epitel tubulus proksimal diamati menggunakan mikroskop Olympus BX51 dengan perbesaran 400 kali. Pengamatan dilakukan oleh 3 pengamat pada preparat dengan pengecatan Hematoksilin Eosin dan diamati pada 5 lapang pandang setiap sediaan dimana pada tiap lapang pandang terdapat 10-12 tubulus proksimal yang diamati. Nekrosis sel dilihat dengan adanya perubahan inti sel yaitu piknosis, kariolisis dan karioreksis. Histologi tubulus proksimal dapat dibedakan dengan tubulus distal. Tubulus proksimal banyak terdapat di korteks, memiliki lumen yang lebih kecil, mempunyai banyak mikrofili yang membentuk brush border, ukuran sel lebih besar, sitoplasma sel granular dan sel sangat terwarnai oleh eosin (merah muda) sedangkan tubulus distal memiliki lumen yang lebih besar dengan sel kuboid yang lebih kecil dan jumlahnya sedikit di korteks.17 Penghitungan proporsi nekrosis sel dengan cara jumlah sel nekrosis pada tubulus proksimal di bagi jumlah keseluruhan sel yang ada. Proporsi sel yang nekrosis dirata-rata pada tiap perlakuan.18 Penghitungan proporsi sel epitel tubulus proksimal ginjal dapat dirumuskan sebagai berikut :

Keterangan : P = Proporsi sel nekrosis a = Jumlah sel nekrosis b = Jumlah keseluruhan sel

Analisa Data Data dianalisa menggunakan One Way Anova yang dilanjutkan dengan uji LSD (Least Significant Difference). Analisis data dilakukan dengan memakai SPSS versi 17.0 secara komputerisasi. HASIL PENELITIAN Karakteristik Populasi Karakteristik sampel penelitian dapat dilihat pada tabel 1 berikut. Tabel 1. Karakteristik Populasi KN

KP

P1

P2

P3

Tikus wistar putih Jantan 12 Minggu

Tikus wistar putih Jantan 12 Minggu

5

5

200

193

207

209

208

216

229

225

222

210

-

-

10 10 10 10 mg/KgBB mg/KgBB mg/KgBB mg/KgBB Inj.SC Inj.SC Inj.SC Inj.SC 1% 1% 1% 1% ad ad ad ad libitum libitum libitum libitum 5:5:3 g 6:4:3 g 4:6:3 g

114 mmHg

113 mmHg

113 mmHg

173 mmHg

117 mmHg

172 mmHg

Kelompok Hewan coba

Adaptasi dan perlakuan Jumlah tikus BB awal (g) BB akhir (g) Induksi dan dosis DOCA Dosis NaCl

kombinasi PAK TD awal

TD akhir setelah induksi DOCANaCl (6 minggu) TD setelah pemberia n herbal PAK

-

Tikus Tikus wistar wistar putih putih Jantan Jantan 12 12 Minggu Minggu

5

Tikus wistar putih Jantan 12 minggu

55

111 mmHg

104 mmHg

101 mmHg

175 mmHg

177 mmHg

177 mmHg

115 mmHg

132 mmHg

130 mmHg

Keterangan: KN : Tanpa perlakuan KP : DOCA 10 mg/KgBB, NaCl 1% P1 : DOCA 10 mg/KgBB, NaCl 1%, DPAK (5:5:3) P2 : DOCA 10 mg/KgBB, NaCl 1%, DPAK (6:4:3) P3 : DOCA 10 mg/KgBB, NaCl 1%, DPAK (4:6:3) Data pengukuran tekanan darah diperoleh dari penelitian kelompok.19 Penelitian ini menggunakan hewan coba tikus wistar jantan dengan berat badan rata-rata 200250 gram dengan usia 2-3 bulan. Penentuan 81 | Page


kelompok dengan metode simple random sampling dengan 5 kelompok dan setiap kelompok terdapat 5 ekor tikus. Lama perlakuan selama 12 minggu, yaitu dua minggu untuk adaptasi tikus, induksi DOCA-NaCl dilakukan pada kelompok K(+), P1, P2 dan P3 setelah aklimatisasi selama enam minggu dengan cara injeksi subcutan dua kali seminggu dengan dosis DOCA 10mg/KgBB dan NaCl 1% secara ad libitum, serta dilanjutkan induksi DOCA-NaCl pada K(+), P1, P2 dan P3 dan diberikan kombinasi dekokta PAK pada P1, P2 dan P3 selama empat minggu secara sonde lambung. Dosis herbal kombinasi P1 (5:5:3) gram, P2 (6:4:3) gram dan P3 (4:6:3) gram. Pengambilan data pengukuran berat badan tikus dilakukan sebelum dan setelah induksi DOCANaCl dan menunjukkan adanya peningkatan pada semua kelompok tikus. Peningkatan tekanan darah terjadi pada K(+), P1, P2 dan P3 yang diberikan induksi DOCA-NaCl selama enam minggu, dan penurunan tekanan darah terjadi pada P1, P2 dan P3 yang diberi kombinasi dekokta PAK selama empat minggu.

Proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal

Jurnal Kedokteran Komunitas 0.4 0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0

b

a K-

K+

Grafik.1 Rerata proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus pada kelompok kontrol negatif dan positif Berdasarkan tabel 2 dan grafik 1 menunjukkan terjadinya peningkatan proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus pada K+ yang diinduksi DOCA-NaCl dibandingkan dengan K- (normal) secara signifikan (p<0,05). K(-) K(+)

Efek Induksi DOCA-NaCl terhadap Proporsi Nekrosis Sel Epitel Tubulus Proksimal Ginjal Tikus Model Hipertensi. Tabel 2 Rerata proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus pada kelompok kontrol negatif dan positif. No

Perlakuan

N

Rerata ± SD

1

Kelompok Kontrol negatif (tanpa induksi DOCA-NaCl

4

0,05 ± 0,009a

2

Kelompok Kontrol positif (dengan induksi DOCANaCl

4

0,32 ± 0,038b

Keterangan: a:Berbeda signifikan dibandingkan kelompok kontrol positif (p < 0,05) b:Berbeda signifikan dibandingkan kelompok kontrol negatif (p < 0,05)

Page | 82

dengan dengan

Gambar 1 Hasil pulasan HE pada sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus perbesaran 400x pada kelompok kontrol negatif dan positif Keterangan : K(-) Ginjal tikus normal; K(+) Ginjal tikus hipertensi. N= Inti sel normal, P = Inti Sel Piknosis, R = Inti Sel Karioreksis, KL = Inti Sel Kariolisis Gambar 1 merupakan gambaran histologi sel epitel tubulus proksimal ginjal yang menunjukkan pada K(+) terdapat perubahan pada inti sel epitel yang mengalami nekrosis (piknosis, karioreksis, dan kariolisis). Pada K(-) terlihat sel epitel normal dengan ciri-ciri berbentuk bulat atau oval dengan sitoplasma bergranula dan eosinofilik.


Efek Kombinasi Dekokta Pegagan, Alang-alang dan Kumis kucing terhadap Proporsi Nekrosis Sel Epitel Tubulus Proksimal Ginjal Tikus Model Hipertensi Tabel.3 Rerata proporsi sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus pada kelompok kontrol positif, negatif dan perlakuan No

Perlakuan

N

Rerata ± SD

1

Kontrol Negatif

4

0,05±0,009 a,c,d,e

2

Kontrol Positif ( DOCA-NaCl)

4

0,32 ± 0,038 b,c

3

Perlakuan 1 (DOCA-NaCl + PAK 5,5,3 gr/50kgBB) Perlakuan 2 (DOCA-NaCl + PAK 6,4,3 gr/50kgBB) Perlakuan 3 (DOCA-NaCl + PAK 4,6,3gr/50kgBB)

4

0,28 ± 0,014 a,b

4

0,31 ± 0,036 b

4

0,32 ± 0,038 b

4 5

Keterangan: a =p<0,05 berbeda signifikan dengan kontrol positif b =p<0,05 berbeda signifikan dengan kontrol negatif c =p<0,05 berbeda signifikan dengan P1 d =p<0,05 berbeda signifikan dengan P2 e =p<0,05 berbeda signifikan dengan P3

Tabel.4 Jumlah jenis nekrosis sel (piknosis (P), karioreksis (KR), kariolisis (KL)) sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus pada kelompok kontrol positif, negatif dan perlakuan Kelompok

K(-) K(+) P1 P2 P3

Nekrosis P KR

KL

184 1312 796 897 867

58 283 246 491 271

98 541 333 543 959

Total nekrosis rata-rata 113,33 712 458,33 643,67 699

Total sel yang terlihat 340 2136 1375 1931 2097

Berdasarkan tabel 4 dapat dilihat bahwa dari jenis sel nekrosis pada kelompok K(-), K(+), P1 dan P2 yang terbanyak yaitu piknosis kemudian diikuti karioreksis dan kariolisis. Sedangkan pada P3 yang terbanyak yaitu karioreksis diikuti piknosis dan kariolisis. P1

P2

P3 Gambar 2 Hasil pulasan HE pada sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus perbesaran 400x pada kelompok perlakuan 1, 2, dan 3

Grafik.2 Rerata proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus pada kelompok kontrol positif, negatif dan perlakuan Berdasarkan tabel 3 dan grafik 2 dapat dilihat bahwa pada P1 berbeda signifikan dengan K(+) sekitar 12,5% dengan nilai signifikansi (p 0.049), P2 dan P3 tidak berbeda signifikan dengan K(+) (p>0.05). P1 tidak berbeda signifikan dengan P2 dan P3. Pemberian kombinasi DPAK 1 mampu menurunkan proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal dibandingkan pada kelompok K(+).

Keterangan : P1 Ginjal tikus hipertensi DPAK (5:5:3); P2 Ginjal tikus hipertensi DPAK (6:4:3); P3 Ginjal tikus hipertensi DPAK (4:6:3). N= Inti sel normal, P = piknosis, R = Inti sel karioreksis, KL = kariolisis

dengan dengan dengan Inti sel Inti sel

Gambar 2 merupakan gambaran histologi sel epitel tubulus proksimal ginjal yang menunjukkan pada kelompok perlakuan terdapat perubahan pada inti sel epitel yang mengalami nekrosis (piknosis, karioreksis, dan kariolisis). 83 | Page


PEMBAHASAN Karakteristik Populasi Hewan coba yang digunakan dalam penelitian adalah tikus wistar jantan (Rattus norvegicus) usia 2-3 bulan dan berat badan rata-rata 200-250 gram. Pemilihan tikus wistar putih didasarkan beberapa faktor, karena hewan tersebut memiliki kesamaan struktur DNA dengan manusia yaitu 98%, ketersediaan hewan coba, dapat dikembangbiakkan dalam laboratorium, dan harganya relatif murah.20,21 Digunakan yang berjenis kelamin jantan bertujuan menghindari bias dari faktor hormonal karena kadar testosteron relatif stabil dibanding estrogen pada betina sehingga lebih baik digunakan sebagai hewan coba model hipertensi.22 Dilakukan tahap aklimatisasi pada tikus sebelum dilakukan perlakuan yaitu selama 2 minggu agar tikus dapat beradaptasi dengan lingkungan laboratorium. Pengambilan data pengukuran berat badan tikus dilakukan sebelum dan setelah induksi DOCA-NaCl menunjukkan adanya peningkatan pada semua kelompok tikus. Pada kelompok kontrol positif mengalami peningkatan berat badan yang paling tinggi yaitu sekitar 36 gram dari berat badan awal, sedangkan kelompok kontrol negatif, perlakuan 1, 2, dan 3 mengalami peningkatan secara berturut-turut 16, 18, 13 dan 2 gram. Terjadinya peningkatan berat badan tikus diduga adanya penimbunan lemak karena tikus mengkonsumsi makanan secara berlebihan dengan aktivitas yang minimal. Hal ini didukung dengan makanan yang diberikan pada tikus habis dalam waktu 24 jam dan penempatan beberapa ekor tikus dalam satu tempat yang relatif sempit dapat mempengaruhi penurunan aktivitas tikus, diduga peningkatan berat badan tikus ikut berperan dalam peningkatan tekanan darah. Peningkatan aktivitas makan pada tikus memicu tubuh untuk mengeluarkan leptin dan insulin yang dapat merangsang saraf simpatis sehingga menyebabkan terjadinya peningkatan resistensi perifer yang dapat mempengaruhi peningkatan tekanan darah.23 Selain itu, pemberian DOCA akan meningkatkan reabsorbsi cairan dan natrium di tubulus ginjal, sehingga volume cairan ekstraseluler mengalami peningkatan yang dapat berpengaruh pada berat badan tikus.25 Pemberian DOCA-NaCl bertujuan untuk induksi hipertensi pada tikus. DOCA diberikan dengan dosis 10 mg/kgBB secara injeksi subkutan Page | 84


dua kali dalam satu minggu dan NaCl 1% secara ad libitum setiap hari selama 10 minggu pada kelompok kontrol positif, perlakuan 1, 2, dan 3. Tikus dikatakan hipertensi jika tekanan darah sistolik >120 mmHg.24,25 Peningkatan tekanan darah dengan induksi DOCA-NaCl dikarenakan DOCA merupakan prekusor aldosteron yang menyebabkan peningkatan retensi natrium dan air dari ginjal sehingga terjadi peningkatan volume intravaskuler.26 Pemberian NaCl meningkatkan eksitasi saraf simpatis sehingga menyebabkan vasokonstriksi. Peningkatan kadar Na di dalam darah menyebabkan peningkatan osmolalitas darah, sehingga menarik cairan intrasel keluar ke pembuluh darah dan menyebabkan peningkatan volume plasma.27 Induksi DOCA dilarutkan menggunakan minyak jagung dan dilakukan dengan injeksi subcutan agar terjadi absorbsi secara bertahap untuk menghindari peningkatan tekanan darah secara drastis, selain itu kekentalan DOCA dapat menyebabkan kerusakan pada pembuluh darah secara langsung jika dilakukan injeksi intramuscular dan intravena. Pada penelitian pohon yang sama dilakukan oleh Ulya (2014), peningkatan tekanan darah pada hewan coba terjadi setelah dilakukan induksi hipertensi DOCA-NaCl pada minggu ke 6 yang mengalami kenaikan tekanan darah sebesar ± 175 mmHg. Hal ini membuktikan bahwa DOCA-NaCl mampu meningkatkan tekanan darah tikus model hipertensi. Kombinasi dekokta PAK diberikan selama 4 minggu pada kelompok perlakuan 1, 2, dan 3 dengan sonde lambung bertujuan untuk mengetahui dosis yang mampu memberikan efek antioksidan dan antihipertensi. Pemilihan metode dekoktasi berdasarkan kebiasaan masyarakat Indonesia dalam membuat tanaman herbal sebagai jamu dengan cara merebus dengan air hingga mendidih. Dekoktasi merupakan metode ekstraksi menggunakan pelarut air dengan suhu 90°C selama 30 menit, metode dekoktasi digunakan untuk ekstraksi struktur akar alang-alang yang keras dan untuk mendapatkan bahan aktif dalam herbal yang tahan terhadap panas.28 Pemberian kombinasi dekokta PAK secara sonde dilakukan untuk menyamakan dosis yang masuk pada setiap tikus. Pada penelitian pohon yang sama dilakukan oleh Ulya (2014), menunjukkan bahwa setelah


dilakukan pemberian kombinasi dekokta PAK terjadi penurunan tekanan darah sebesar ± 133 mmHg. Hal ini membuktikan bahwa kombinasi dekokta PAK mampu menurunkan tekanan darah tikus model hipertensi. Efek Pemberian DOCA-NaCl terhadap Proporsi Nekrosis Sel Epitel Tubulus Proksimal Ginjal Tikus Model Hipertensi Pemberian DOCA-NaCl menunjukkan peningkatan proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus pada kelompok kontrol positif (K+) secara signifikan dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif (K-). Peningkatan nekrosis tersebut ditandai dengan terjadinya perubahan inti sel. Hal ini membuktikan bahwa pemberian DOCA pada dosis 10mg/KgBB dan NaCl 1% menyebabkan jejas pada sel epitel tubulus proksimal melalui mekanisme hipertensi. Adanya hipertensi mengakibatkan tekanan hidrostatik pada aliran darah meningkat sehingga aliran turbulensi pembuluh darah juga mengalami peningkatan, hal ini dapat merusak barier alamiah endotel dan menyebabkan lesi endotel yang memicu tersekresinya sitokin, faktor koagulasi dan reaktivasi platelet. Invasi molekul pada endotel ini disebut sebagai stress oksidatif.29,30 Stress oksidatif yang terjadi dapat menyebabkan difungsi endotel karena NO (Nitrit oxide) yang bertindak sebagai vasodilator berikatan dengan radikal bebas lain O2-(superoksida) dapat membentuk peroksinitrit sehingga pembuluh darah tidak dapat melakukan vasodilatasi, akibatnya terjadi vasokonstriksi pembuluh darah sistemik termasuk pembuluh darah pada ginjal.31 Adanya vasokonstriksi dari pembuluh darah ginjal menyebabkan aliran darah ke ginjal menurun dan memicu keadaan iskemia jaringan. Keadaan tersebut memicu peningkatan pembentukan Reactive Oxigen Species (ROS). ROS yang terbentuk akan berikatan dengan lipid membran seluler dan mitokondria sel tubulus proksimal ginjal, hal ini menyebabkan kerusakan pada sel.9 Selain dari ROS, iskemia juga berperan penting pada proses terjadinya kerusakan sel. Iskemia menyebabkan penurunan produksi ATP pada mitokondria yang menyebabkan pompa natrium yang diatur ATP membran plasma menurun, hal ini menyebabkan akumulasi natrium intrasel dan terjadi difusi kalium ke

ekstrasel. Selain itu penurunan ATP dapat meningkatkan glikolisis anaerob yang dirancang untuk mempertahankan energi sel dengan membentuk ATP dari glikogen, hal ini menyebabkan cadangan glikogen menurun. Adanya peningkatan glikolisis ini juga dapat menyebabkan akumulasi asam laktat yang dapat menurunkan pH intrasel sehingga menyebabkan kromatin inti mengkerut. Penurunan ATP dan kadar pH dapat menyebabkan ribosom terlepas dari retikulum endoplasma kasar, akibatnya terjadi penurunan sintesis protein. Hal ini menyebabkan timbulnya gelembung pada permukaan sel dan pembengkakan sel yang disebut dengan jejas reversible. Jika iskemia menetap dan berlangsung terus menerus, sel akan mengalami jejas irreversible dengan tanda adanya perubahan pada inti sel piknosis, kariolisis, dan karioreksis.32 Pada kelompok kontrol negatif (normal) didapatkan nekrosis sebesar 5% diduga karena adanya proses fisiologis dalam tubuh yaitu mekanisme terbentuknya ROS dari sel yang bersifat endogen. Sumber utama ROS dalam keadaan fisiologis diantaranya adalah transportasi elektron di mitokondria, yaitu saat terjadi metabolisme energi secara aerob (sintesa ATP melalui siklus Krebs dari glukosa dan melalui oksidasi asam lemak). Proses ini terjadi dalam empat tahap yang akan mengubah oksigen yang dihirup menjadi air.33 Selanjutnya dari aktifitas oksidasi enzimatik yang mampu menghasilkan radikal bebas dalam jumlah cukup bermakna, yaitu xanthine oxidase (activated in ischemiareperfusion), amino acid oxidase, aldehyde oxidase, lipoxygenase dan prostaglandin synthase. Enzim myeloperoxidase hasil aktifasi netrofil yang memanfaatkan H2O2 untuk oksidasi ion klorida menjadi suatu oksidan yang kuat.34 Selain itu, ROS juga dihasilkan dari proses dimana makrofag menggunakan oksigen dalam jumlah yang besar selama proses fagositosis (Respiratory burst). Sebanyak 70-90 % oksigen digunakan dan diperhitungkan dalam produksi superoksida. Fagositik sel memiliki sistem membran bound flavoprotein cytochrome-b-245 NADPH oxidase. Enzim membran sel seperti NADPH-oksidase keluar dalam bentuk inaktif, Paparan terhadap bakteri yang diselimuti imunoglobulin, kompleks imun, leukotrien atau komplemen 5a dapat mengaktifkan enzim NADPH-oksidase yang akan 85 | Page


mengawali respiratory burst pada membran sel untuk memproduksi superoksida. Kemudian H2O2 dibentuk dari superoksida bersama generasi berikutnya dari OH oleh bakteri.33,35 Masingmasing tahap ini dapat menyebabkan terbentuknya ROS yang mempengaruhi nekrosis dari sel, namun pada kondisi normal keadaan ini tetap terjaga keseimbangannya dengan baik. Efek Kombinasi Dekokta Pegagan, Alang-alang, dan Kumis kucing terhadap Penurunan Proporsi Nekrosis Sel Epitel Tubulus Proksimal Ginjal Tikus Model Hipertensi Berdasarkan hasil penelitian ini, setiap dosis kombinasi dekokta PAK yang diujikan memberikan efek yang berbeda dalam menurunkan proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus. Pemberian kombinasi dekokta pada kelompok perlakuan PAK 1 (5:5:3) mampu menurunkan proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal secara signifikan dibandingkan dengan kelompok kontrol positif. Diduga karena zat aktif antar herbal tersebut dalam kombinasi PAK 1 memiliki efek yang sinergis dalam hal komposisi dan dosisnya yang tepat, sehingga mampu menurunkan proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal secara optimal. Pegagan mengandung senyawa triterpen, flavonoid dan fenol yang berfungsi memutus rantai reaksi radikal bebas.36,37 Pada daun Centella asiatica mengandung quercetin yang terbukti dapat meningkatkan antioksidan endogen seperti SOD, catalase dan GPx diduga dapat menekan produksi radikal bebas dan dapat menurunkan jejas sel yang diperantarai radikal bebas. Selain itu quercetin juga mampu meningkatkan NO yang berfungsi sebagai vasodilator pembuluh darah.38 Hal ini diduga dapat menurunkan vasokonstriksi pembuluh darah termasuk pada pembuluh darah ginjal sehingga dapat memperbaiki kondisi iskemia yang terjadi. Perbaikan suplai darah akan memperbaiki suplai oksigen ke jaringan, adanya perbaikan suplai oksigen membuat jejas bersifat reversibel. Namun, jika iskemia tetap terjadi jejas yang ditimbulkan akan bersifat ireversibel.32 Akar alang-alang mengandung senyawa cylindrene yang mampu menghambat kanal kalsium pada otot polos sehingga dapat menghambat kontraksi dari otot polos dan Page | 86


bertindak sebagai vasodilator. Selain itu akar alang-alang juga mengandung senyawa graminone B yang juga berfungsi sebagai vasodilator yang diduga dapat memperbaiki nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal dengan mekanisme perbaikan iskemia jaringan yang terjadi.39 Alang-alang memiliki kandungan tannin, manitol, flavonoid, saponin, alkaloid dan terpenoid.40 Tannin dan flavonoid dapat menghambat produksi ROS dengan menghambat NADPH oksidase melalui hambatan pada ACE.41 Kumis kucing mengandung senyawa methylripariochromene A, terpenoid dan flavonoid. Senyawa terpenoid dan flavonoid pada kumis kucing bertindak sebagai antioksidan. 42,43 Methylripariochromene A memiliki efek sebagai antihipertensi dengan mekanisme diuresis yaitu meningkatkan ekskresi urin serta ekskresi ion Na, K, Cl yang dapat menurunkan tekanan darah sistol dan detak jantung pada tikus.44 Hal ini diduga dapat menurunkan tekanan darah tikus sehingga dapat menurunkan pembentukan ROS akibat adanya hipertensi. Hal ini didukung dengan penelitian satu pohon yang dilakukan oleh Sari (2015) terjadi penurunan kadar H2O2 serum pada pemberian herbal PAK 1 sebesar 56% hingga mendekati kontrol negatif.45 Selain itu penurunan dari radikal bebas pada pemberian kombinasi dekokta PAK 1 ini diperkuat penelitian pohon yang sama oleh Avisena (2014), terjadi penurunan kadar MDA serum pada pemberian herbal PAK 1 sebesar 40% dibandingkan kontrol positif.46 Adanya komposisi yang tepat pada kombinasi PAK 1 sebagai antioksidan dan antihipertensi dapat menurunkan tekanan darah secara optimal. Hal ini diperkuat dengan hasil penelitian satu pohon yang dilakukan oleh Ulya (2014) kombinasi PAK 1 memiliki komposisi yang optimal dalam menurunkan tekanan darah tikus dibandingkan dengan PAK 2 dan PAK 3. Dengan adanya penurunan tekanan darah secara optimal pada kombinasi dekokta PAK 1 diduga menjadi salah satu faktor yang mampu menurunkan proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus model hipertensi DOCA-NaCl. Dari data diatas diketahui kombinasi dekokta PAK 1 mampu menurunkan proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus model hipertensi, namun mekanisme kerja zat aktif pada herbal terhadap kesesuaian reseptor antioksidan, vasodilator, dan diuretik belum diketahui, maka


perlu dilakukan uji molecular docking untuk mengetahuinya. Selain itu, untuk mengetahui kemampuan perbaikan nekrosis sel epitel tubulus proksimal lebih lanjut perlu diberikan dekokta PAK 1 ini dalam jangka waktu yang lebih lama yaitu lebih dari 4 minggu. Pemberian kombinasi dekokta PAK 2 (6:4:3) dan PAK 3 (4:6:3) tidak berbeda signifikan dibandingkan kontrol positif dalam menurunkan proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal. Adanya perbedaan kombinasi pada PAK 2 (6:4:3) dan PAK 3 (4:6:3) diduga dapat mempengaruhi hasil tersebut. Perbedaannya terdapat pada komposisi pegagan dan alangalang yang mendominasi salah satu kombinasi herbal PAK. Menurut Belleville dan Nabet F (1996) antioksidan dapat menjadi pro-oksidan pada konsentrasi lain.47 Diduga tingginya dosis pegagan pada kombinasi dekokta PAK 2 dapat menimbulkan perubahan antioksidan menjadi prooksidan yang bersifat toksik.48 Pada penelitian sebelumnya didapatkan bahwa senyawa quercetin yang diberikan dalam konsentrasi 25200 µM dapat meningkatkan kadar hidrogen peroksida.49,50 Hasil akhir flavonoid dalam menscavenging ROS yaitu ﬂavonoid phenoxyl radicals (Fl-O•) yang memiliki reaktifitas yang sangat tinggi dan dapat mengalami oksidasi lebih lanjut. Ikatan antara Fl-O• dengan oksigen dapat membentuk radikal bebas yaitu O2-.50 Hal ini diperkuat dengan penelitian pohon yang dilakukan oleh Sari (2015), terjadi penurunan kadar H2O2 serum pada pemberian herbal PAK 2 sebesar 37% dibandingkan kontrol positif, namun hasil tersebut kurang optimal dibandingkan dengan pemberian herbal PAK 1. Pada kombinasi dekokta PAK 3 terdapat dominasi dosis alang-alang yang diduga juga dapat berpengaruh pada hasil dari penelitian ini. Alang-alang mengandung senyawa cylindrene yang memiliki efek sebagai vasodilator pembuluh darah melalui mekanime penghambatan kanal Ca2+ pada sel otot polos pembuluh darah.39 Namun, dengan dihambatnya kanal Ca2+ dapat menurunkan produksi NO dari eNOS, sedangkan produksinya bergantung pada Ca2+. Dengan terhambatnya Ca2+ masuk ke endotel maka terjadi penurunan sintesis NO yang menyebabkan menurunnya efek vasodilator.51 Hal ini diduga dapat memperburuk terjadinya iskemia pada ginjal yang dapat menyebabkan

terjadinya nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal akibat adanya vasokonstriksi pembuluh darah di ginjal. Senyawa tannin pada alang-alang sebagai salah satu yang dapat bertindak sebagai antioksidan tidak dapat terambil secara optimal dikarenakan tannin lebih efektif dilakukan ekstraksi dengan pelarut ethanol terkait dengan sifat kepolaranya sedang-lemah yang diduga dapat mempengaruhi berkurangnya efek antioksidan pada kombinasi dekokta PAK 3 ini.52 Selain itu, karena komposisi pegagan yang lebih sedikit pada kombinasi dekokta PAK 3 diduga menyebabkan efek antioksidan menjadi kurang efektif, dimana dari ketiga herbal tersebut yang memiliki efek antioksidan tertinggi yaitu pegagan, kemudian diikuti alang-alang dan kumis kucing.40,53 Hasil penelitian ini diperkuat dengan penelitian satu pohon yang dilakukan oleh Avisena (2014) pada pemberian dekokta PAK 3 tidak mampu menurunkan kadar MDA serum mendekati normal. Penurunan aktifitas antioksidan diduga tidak dapat mengatasi produksi radikal bebas yang berlebih sehingga kerusakan sel akibat adanya radikal bebas akan terus terjadi. Dari data diatas pada kombinasi dekokta PAK 2 dan 3 tidak mampu menurunkan proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal yang diduga dominasi dari beberapa herbal yang dapat menimbulkan efek toksik, maka untuk mengetahui dosis maksimal yang aman digunakan perlu dilakukan uji toksisitas pada ketiga PAK tersebut. Selain itu, perlu dilakukan pencarian dosis yang lain untuk memperoleh dosis optimal dalam memperbaiki nekrosis sel karena keadaan hipertensi yang diharapkan dapat mencegah komplikasinya pada organ ginjal. Pada pengamatan preparat histopatologi tubulus proksimal ginjal yang diamati dari jenis sel nekrosis pada kelompok K(-), K(+), P1 dan P2 yang terbanyak yaitu piknosis kemudian diikuti karioreksis dan kariolisis. Sedangkan pada P3 yang terbanyak yaitu karioreksis diikuti piknosis dan kariolisis. Piknosis (mengkerutnya inti sel) merupakan pola awal dari kematian sel. Pada pola ini sel mengalami jejas irreversible tetapi masih belum jelas mengarah ke nekrosis atau apoptosis tergantung faktor yang menstimulasinya. Apoptosis merupakan kematian sel terprogram/bersifat fisiologis dan terdapat 87 | Page


Death Receptor yang mengaturnya yaitu BAX dan BAK yang menginduksi, Bcl-2 dan Bcl-x yang menghentikan. Sedangkan nekrosis merupakan kematian sel yang bersifat patologis dan penyebabnya bermacam-macam diantaranya yaitu iskemia, ROS dan toksin. Piknosis terjadi karena adanya kerusakan membran yang diikuti oleh kerusakan mitokondria dan apparatus golgi yang menyebabkan sel tidak mampu mengeliminasi air dan trigliserida sehingga tertimbun dalam sitoplasma sel dan terjadi peningkatan eosinofil. Pada tubulus proksimal ginjal, piknosis terjadi paling banyak karena pada tubulus proksimal terjadi proses reabsorbsi paling aktif sehingga kerusakannya lebih banyak. Secara mikroskopis terlihat inti sel mengkerut, tampak lebih padat dan warnanya gelap/pekat, pola berikutnya yaitu karioreksis (fragmen inti sel yang piknosis) dan kariolisis (inti sel memudar) yang disebabkan oleh aktivitas DNAase yang mengarah ke nekrosis sel. Sedangkan pada apoptosis akan terdapat badan apoptotik yang akan difagositosis oleh makrofag untuk menjaga keseimbangan pada organisme multiseluler.7,54 Dari data diatas pada kelompok K(-), K(+), P1 dan P2 lebih banyak didapatkan sel piknosis, hal ini diduga dari beberapa sel piknosis belum tentu mengalami progresifitas ke arah nekrosis pada sel tersebut, namun bisa mengarah ke proses apoptosis. Sedangkan pada P3 didapatkan banyak inti sel karioreksis yang mengarah ke proses nekrosis sel sehingga sangat sulit dilakukan perbaikan. KESIMPULAN Berdasarkan hasil analisa data dan pembahasan pada penelitian ini didapatkan kesimpulan bahwa: 1. Induksi DOCA-NaCl dapat meningkatkan proporsi nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal tikus model hipertensi. 2. Kombinasi dekokta PAK 1 (5:5:3) mampu menurunkan proporsi nekrosis sel epitel tubulus tikus model hipertensi DOCA-NaCl secara signifikan. SARAN Berdasarkan analisa data dan pembahasan pada penelitian ini didapatkan beberapa saran yaitu: 1. Uji molecular docking pada ketiga herbal pegagan, alang-alang, dan kumis kucing untuk Page | 88


mengetahui interaksi dari zat aktif yang ada pada herbal terhadap kesesuaian reseptor antioksidan, vasodilator dan diuretik. 2. Uji toksisitas herbal pegagan, alang-alang dan kumis kucing untuk mengetahui keamanan dosis yang digunakan pada hewan coba. 3. Pemberian DPAK 1 dengan jangka waktu lebih lama (lebih dari 4 minggu) untuk mengetahui kemampuannya dalam memperbaiki nekrosis sel epitel tubulus proksimal ginjal lebih lanjut. 4. Dilakukan pencarian dosis yang lain untuk memperoleh dosis optimal dalam memperbaiki nekrosis sel karena keadaan hipertensi, diharapkan dapat mencegah komplikasinya pada organ ginjal. DAFTAR PUSTAKA 1. World Health Organization., A Global Brief on Hypertension : Silent Killer, Global Public Health Crisis, Switzerland: WHO press. 2013; p. 10 2. Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementerian Kesehatan RI., Laporan Nasional Riset Kesehatan Dasar (RISKESDAS) Indonesia, Balitbangkes, Jakarta. 2013. Hal 80-89 3. Purnomo H. Pencegahan dan Pengobatan Penyakit Yang Paling Mematikan, Buana Pustaka, Yogyakarta. 2009. 4. Nurjanah A., Hidayat N & Sulistyani. Hubungan Antara Lama Hipertensi dengan Angka Kejadian Gagal Ginjal Terminal di Rumah Sakit Umum Daerah dr. Moewardi Surakarta. Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta. Skripsi. 2012. 5. Rajendra B. Role Of Vascular Oxidative Stress In Hypertension, University of Houston. 2011. 6. Price SA & Wilson LM., Patofisiologi: Konsep Klinis Proses-proses Penyakit, Edisi 6, Volume 1 dan 2, Buku Kedokteran EGC, Jakarta. 2005. 7. Robbins SL., Kumar V., Cotran RS. Buku Ajar Patologi, Edisi 7, Buku Kedokteran EGC, Jakarta. 2007. 8. Rubenstein D., Wayne D & Bradley D. Kedokteran Klinis, Edisi 6, Penerbit Erlangga, Jakarta. 2007. 9. O’callaghan C. At a Glance Sistem Ginjal, Edisi 2, Penerbit Erlangga, Jakarta. 2009. 10.Uz E., Karatas OF., Mete E., Bayrak R., Bayrak O., Atmaca AF., Atis O., Yildirim ME & Akcay A. The effect of dietary ginger (Zingiber officinals


11. 12.

13. 14.

15.

16.

17. 18.

19.

20.

21.

22.

23.

Rosc) on renal ischemia/reperfusion injury in rat kidneys, Ren. Fail. 2009.31(4):251–260. Katzung B. Farmakologi Dasar dan Klinik, Edisi 10, Penerbit Erlangga, Jakarta. 2010. Dipiro JT. Pharmacotheraphy Patophysiologic Approach (Seventh Edition), United State : McGraw-Hill Companies,Inc. 2008. Al-Mundziri I. Ringkasan Hadis Shahih Muslim, Pustaka Amani, Jakarta. 2003. Athiroh N & Permatasari N. Mekanisme Deoxycorticosterone-acetate (DOCA)-Garam terhadap peningkatan tekanan darah pada hewan coba. El Hayah. 2011. 1(4), 199-213. Feng M., Whitesall S., Zhang Y., Beibel M., D’Alecy L & Dipitreilo K. Validation of volume pressure recording tail cuff blood pressure measurements. American Journal of Hypertention. 2008 Ardiyanto D., Triyono A & Nisa U. Pengaruh Jamu Anemia terhadap Fungsi Ginjal di Rumah Riset Jamu “Hortus Medicus” Tawangmangu, Journal of Pharmaceutical Science and Pharmacy Practice. 2015.vol.2, no.1 Junqueira L & Carneiro J. Basic Histology, Edisi 11, McGraw-Hill Companies. 2007. Agustie MC., Pengaruh Pemberian Rumput Mutiara ( Hedyotis corymbosa) dengan Dosis Bertingkat Terhadap Gambaran Histologi Ginjal Mencit BALB/C. Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro Semarang. 2006. Ulya T.D.H.A. Efek Dekok Centella asiatica, Imperata cylindrica dan Orthosiphon aristatus terhadap Tekanan Darah, Volume Urin dan Kadar NaCl Urin Tikus Model Hipertensi. Fakultas Kedokteran Universitas Islam Malang. Skripsi. 2014. Krinke, George J. The Handbook of Experimental Animals: The Laboratory Rat. Dalam: Bullock G, Bunton TE, editor. New York: Academic Press. 2000. Leong X.f., Ng Chun-yi & jaarin K., Animal Models in Cardiovascular Research: Hypertension and Atherosclerosis. Hindawi Publishing Corporation BioMed Research International Article ID 528757. 2015. Rackelhoff JF. Gender difference in the regulation of blood pressure, Hypertension. 2001. Willerson JT., Cohn JN., Wellens HJJ., Holmes DR. Cardiovascular Medicine, Edisi 3, SpringerVerlag, London. 2007.

24. Farris EJ & Graffith JQ., 1971, The rat in Laboratory Investigation, New York. 1971. http://worldcat.org/title/ratinlaboratoryinvestigation/oclc/320499971(Ac cessed Juli 05, 2015). 25. Guyton AC & Hall JE. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran, Edisi 11, Buku Kedokteran EGC, Jakarta. 2007. 26. Elhomsy G. Deoxycorticosterone acetate (DOC), Endocrinology. 2012. 27. Kotchen T. Contributions of sodium and chloride to NaCl-induced hypertension, Hypertension. 2005. 28. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan Direktorat Pengawasan Obat Tradisional. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Departemen Kesehatan RI, Jakarta. 2000. 29. Baraas F. Respons imunologi, Dalam : Kardiologi Molekuler, Bagian KardiologiFKUI / RS Jantung Harapan Kita, Jakarta. 2006. 30. Chiu J & Chien S. Effects of disturbed flow on vascular endothelium: pathophysiological basis and clinical perspectives, Physiological reviews. 2011. pp. 327-387. 31. Aaronson P & Ward J. The Cardiovascular System at a Glance. 1st ed, Malden, Mass: Blackwell. 2007. 32. Robbins SL., Kumar V., Cotran RS. Buku Ajar Patologi, Edisi 7, Buku Kedokteran EGC, Jakarta. 2007. 33. Freisleben HJF. Free radicals and ROS in biological systems. Radikal bebas dan antioksidan dalam kesehatan, Jakarta: Bagian Biokimia; 2001. 34. Inoue M. Protective mechanisms against reactive oxygen species. In: Arias IM The liver biology and pathobiology Lippincott Williams and Wilkins 4th-ed. Philadelphia. 2001:28190. 35. Albina JE & Reichner JS. Role of nitric oxide in mediation of macrophage cytotoxicity and apoptosis. Cancer Metatasis Rev. 17;1998:3853. 36. Seevaratnam V., Banumathi P., Premalatha MR., Sundaram SP & Arumugam T. Functional Properties Of Centella Asiatica (L.): A Review, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 2012ISSN- 09751491 Vol 4.

89 | Page


37. Valko M., Leibfritz D., Moncol J., Cronin MT., Mazur M & Telser J. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease, The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 2007. 38. Wang W., Liu LQ., Higuchi CM & Chen. Induction of NADPH quinone reductase by dietary phytoestrogens in colonic Colo205 cells, Biochem Pharmacol J. 1998. vol.56, pp. 189-195. 39. Cerdeira AL., Cantrell CL., Dayan FE., Byrd JD & Duke SO. Tabanone, a New Phytotoxic Constituent of Cogongrass (Imperata cylindrical). USDA national agricultural library, Weed Science. 2012. 40. Krishnaiah D., Devi T., Bono A & Sarbatly R. Full Length Research Paper: Studies on phytochemical constituents of six Malaysian medicinal plants. Journal of Medicinal Plants Research. 2009. Vol. 3, no.2, pp. 067-072. 41. Ruslin., Asmawi MZ., Rianse U., Sahidin., Dhyanawaty, D & Soemardji, AA. Antihypertensive Activity of Alang-alang (Imperata cylindrica L.) Beauv Root Methanolic Extract on Male Wistar Rat, Universitas Halu oleo Kendari, International Journal of Research in Pharmaceutical Science. 2013. p : 537-542. 42. Chin-Lin H., Bo-Han H., Yu-Shan Y & Gow-Chin Yen. Antioxidant and Anti-Inflammatory Effects of Orthosiphon aristatus and Its Bioactive Compounds, Agric, Food Chem. 2010. 43. Pattamadilok D., Techadamrongsin Y., Boonruad T & Bansiddhi J. Chemical Specification of Orthosiphon aristatus (Blume) Miq. Journal. 2003.2545 vol. 44, no.3, pp. 189200. 44. Matsubara T., Bohgaki T., Watarai M., Suzuki H., Ohashi K & Shibuya H. Antihypertensive Actions of Methylripariochromene A from Orthosiphon aristatus, an Indonesian Traditional Medicinal Plant. Biol Pharm Bull. 1999.Oct;22(10):1083-8. 45. Sari SP. Efek Kombinasi Dekokta Centella asiatica, Imperata cylindrica dan Orthosiphon aristatus terhadap Kadar Hidrogen Peroksida (H2O2) Serum Tikus Model Hipertensi. Fakultas Kedokteran Universitas Islam Malang. Skripsi. 2015.

Page | 90


46. Avisena AF. Efek Kombinasi Ekstrak Daun Pegagan, Akar Alang-alang dan Daun Kumis kucing terhadap Kadar SOD dan MDA Serum Tikus Model Hipertensi. Fakultas Kedokteran Universitas Islam Malang. Skripsi. 2014. 47. Belleville & Nabet F. Zat Gizi Antioksidan Penangkal Senyawa Radikal Pangan dalam Sistem Biologis, Prosiding Seminar Senyawa Radikal dan Sistem Pangan : Reaksi Biomolekuler, Dampak terhadap Kesehatan dan Penangkalan. Kerjasama Pusat Studi Pangan dan Gizi dengan Kedutaan Besar Perancis di Jakarta. 1996. 48. Maroziene A., Ceniene AN., Vidziunaite R & Cenas N. Correlation between mammalian cell cytotoxicity of flavonoids and the redox potential of phenoxyl radical/phenol couple, ACTA ABP Biochimica Polonica. 2012. Vol. 59, No 2. 49. Yen GC., Duh PD., Tsai HL & Huang SL. Prooxidative properties of flavonoids in human lymphocytes. Biosci Biotechnol Biochem. 2003. 67:1215–22. 50. Prochazkova D., Bousova I & Wilhelmova N. Antioxidant and prooxidant properties of ﬂavonoids, Elsevier B.V. 2011. 51. Ohashi K., Bohgaki T & Shibuya H. ‘Antihypertensive substance in the leaves of kumis kucing (Orthosiphon aristatus) in Java Island’, Journal of Pharmaceutical Society of Japan. 2000. 52. Tian F., Li B., Ji B., Yang J., Zhang G., Chen Y & Luo Y. Antioxidant and antimicrobial activities of consecutive extracts from Galla chinensis: The polarity affects the bioactivities, Food Chemistry. 2009. 113(1): 173-179 53. Pittella F., Dutra RC., Junior DD., Lopes MT & Barbosa N. Antioxidant and cytotoxic activites of Centella asiatica (L) Urb. International Journal of Molecular Science. 2009.10: 37133721. 54. Suhita, NLPR., Sudira IW & Winaya IBO. Histopatologi Ginjal Tikus Putih Akibat Pemberian Ekstrak Pegagan (Centella asiatica) Peroral, Buletin Veteriner Udayana. 2013. ISSN 2085-2495, Vol 5 No.2

Dian Eka Mariana, Rima Zakiyah, Noer Aini Fakultas Kedokteran Universitas Islam Malang

Recommend Documents