Aktivní B12 (Holotranskobalamin) – pokrok v diagnostice deficitu vitaminu B12 Firma Abbott Laboratories nabízí na imunoanalytických systémech ARCHITECT test ke stanovení biologicky aktivní části vitaminu B12 (Holotranskobalamin). Běžně používané metody ke stanovení celkového vitaminu B12 měří biologicky inertní a aktivní část vitaminu B12 (kobalaminu), který se v séru váže na dva proteiny – transkobalamin (TC) a haptokorin (HC). Metoda ARCHITECT Active B12 měří pouze biologicky aktivní část. Stanovení aktivního B12 je časnějším markerem deficitu B12, který lépe odráží klinický stav pacienta a představuje tak spolehlivý základ pro zahájení úspěšné léčby. JTRK-842HN
Firma Abbott Laboratories nabízí na imunoanalytických systémech ARCHITECT test ke stanovení biologicky aktivní části vitaminu B12, holotranskobalaminu. Charakteristika vitaminu B12, jeho metabolismus a aktivní B12 Vitamin B12 (kobalamin) je molekula podobná porfyrinu, v níž je místo atomu železa centrálně vázán atom kobaltu. Vitamin B12 je důležitým faktorem při syntéze DNA a s ní souvisejícím vývojem erytrocytů, je nezbytný pro normální funkci nervové soustavy, růst, dělení buněk apod. Existuje několik forem tohoto vitaminu, ale pouze dvě z nich se účastní metabolických procesů: methylkobalamin a adenosylkobalamin (viz Obr. 1).
Obr. 1. M odel m ethylkobalam inu a adenosylkobalam inu, m olekulárních forem vitam inu B 12 podílejících se na důležitých m etabolických procesech
(Zdroj: NIH Dietary Supplement Fact Sheets for B12. http://ods.od.nih.gov/factsheets/VitaminB12/. Accessed 8-11-2011) JTRK-842HNQE
1
Methylkobalmin se účastní methioninového cyklu; konvertuje homocystein na methionin, který je nezbytný pro tvorbu nukleových kyselin. Deficit methylkobalaminu vede k akumulaci homocysteinu (Hcy; viz Obr. 2). Adenosylkobalamin konvertuje methylmalonyl-CoA na sukcinyl-CoA (klíčová biochemická reakce v metabolismu lipidů a proteinů, důležitá při syntéze erytrocytů). Deficit adenosylkobalaminu vede k akumulaci methylmalonové kyseliny (MMA; viz Obr. 2).
Obr. 2. Schém a m etabolických procesů, na kterých se podílí vitam in B 12
Bez vitaminu B12 nejsou Hcy a MMA metabolizovány a hromadí se v séru
(Zdroj: NIH Dietary Supplement Fact Sheets for B12. http://ods.od.nih.gov/factsheets/VitaminB12/. Accessed 8-11-2011)
Vitamin B12 si tělo neumí vytvořit a musí jej přijímat v potravě nebo v doplňcích stravy. Jeho hlavním zdrojem jsou téměř výhradně živočišné potraviny (maso, vejce, mléčné výrobky) a fermentované produkty (pivo). K tomu, aby vitamin B12 mohl být z potravy resorbován stěnou trávicí soustavy, je nutná přítomnost tzv. vnitřního faktoru („intrinsic factor”), glykoproteinu produkovaného buňkami žaludeční sliznice. Při přestupu do krve se vitamin B12 váže na dva transportní proteiny: haptokorin (HC), čímž vzniká metabolicky inaktivní forma (holoHC), která tvoří pasivní rezervu vitaminu B12 (ukládá se v játrech, která jako jediná vytvářejí receptory pro haptokorin), a transkobalamin (TC) za vzniku tzv. aktivního B12 (holotranskobalaminu, holoTC); pouze tato bílkovina umožňuje transport vitaminu B12 do buněk prostřednictvím specifických TC receptorů na jejich povrchu. Právě tento vitamin B12 pak vstupuje do zmíněných metabolických procesů. Biologicky aktivní forma vitaminu B12 vázaná na transkobalamin představuje menší část celkové zásoby vitaminu B12 v organismu (uvádí se 10–30 %); 2
zbytek připadá na inaktivní rezervu uloženou zejména v játrech. I přes toto nižší procentuální zastoupení je stanovení aktivního B12 lepším ukazatelem deficitu vitaminu B12 než měření celkového B12 (viz dále). Využití stanovení aktivního B12 v klinické praxi Nedostatek vitaminu B12 se klinicky projevuje např. hematologickými poruchami, z nichž nejčastější jsou anémie (makrocytická, megaloblastová) a trombocytopénie, dále gastrointestinálními (např. glossitis) nebo kožními projevy (např. hyperpigmentace, vitiligo) či neuropsychickými potížemi. Rizikové faktory, které způsobují deficit vitaminu B12, souvisejí zejména s jeho sníženou resorpcí ve střevě (Crohnova nemoc, infekce trávicího traktu aj.) nebo nízkou produkcí „vnitřního faktoru“ (atrofická gastritida, perniciózní anémie), dále s genetickým deficitem transkobalaminu nebo životním stylem (vegani aj.). Jak bylo uvedeno, stanovení aktivního B12 je lepším ukazatelem deficitu vitaminu B12 než měření celkového B12. Testy na stanovení B12 totiž detekují zejména jeho biologicky inaktivní složku (holoHC), takže pokles aktivního B12 (holoTC) je v případě deficitu maskován měřením celkových hodnot B12 v séru. Může tak trvat velmi dlouhou dobu (měsíce až roky), než je zaznamenán signifikantní úbytek hladiny celkového B12 (resp. holoHC; viz Obr. 3). Hodnoty celkového B12 navíc často nekorelují se symptomy, jak lze pozorovat u některých postižení (např. Alzheimerova choroba aj.), kde byly zaznamenány nízké hodnoty aktivního, nikoliv celkového B12. Hladiny aktivního B12 reagují mnohem dříve na deficit vitaminu B12. Stanovení aktivního B12 je časnějším markerem deficitu B12, který lépe odráží klinický stav pacienta.
Obr. 3. Vývoj deficitu vitam inu B 12 a role stanovení aktivního B 12
(Zdroj: V. Herbert, Am J Clin Nutr 1994;59:1213S)
Tab. 1. Hlavní rozdíly m ezi stanovením aktivního a celkového B 12
3
Aktivní B12 (holoTC)
Celkový B12 (stanovení zejména inaktivního B12)
Fyziologická funkce
Vazba B12 na transkobalamin Biologicky aktivní složka (tkáně; TC receptory)
Vazba B12 na haptokorin Biologicky inaktivní, zásobní forma (HC receptory, pouze v játrech)
Zásoba v organismu
10–30 %
90–70 %
Pokles hladin
Dny (krátký biologický Měsíce až roky poločas rozpadu) Pozdní ukazatel deficitu Časný ukazatel deficitu
V současné době se stanovení aktivního B12 využívá buď jako test první volby, nebo test následující po stanovení celkového B12, pokud jsou jeho hodnoty v oblasti tzv. šedé zóny (viz Obr. 4).
Obr. 4. Algoritm y stanovení aktivního B 12 (holotranskobalam inu) a/ Aktivní B12 jako test první volby
b/ Aktivní B12 jako následný test ke stanovení celkového B12
(Zdroj: ARCHITECT Active-B12 Product Brochure: AI_11_27091/v1, AK2209)
Popis testu ARCHITECT Active-B12 (Holotranskobalamin) Test ARCHITECT Active-B12 (Holotranscobalamin) je dvoukroková imunoanalýza ke kvantitativnímu stanovení holotranskobalaminu v lidském séru využívající patentovanou chemiluminiscenční technologii s flexibilními protokoly (tzv. Chemiflex) (viz Obr. 5).
4
Nejdůležitější charakteristiky testu ARCHITECT Active-B12 (Holotranscobalamin): • Detekce pouze biologicky aktivní formy vitaminu B12; • Plně automatizované stanovení na analyzátorech ARCHITECT, výsledky jsou k dispozici do 29 minut; • Možnost současného stanovení aktivního B12 a celkového B12 na jedné analytické platformě z jedné zkumavky bez nutnosti alikvotace; • Vynikající přesnost metody (% CV): ≤ 8 % (3,3–5,8 % na základě provedených studií) • Dvoukrokový formát metody eliminující vliv interferujících látek a hook efektu; • Všechny reagencie včetně kalibrátorů a kontrol jsou kapalné, připravené k přímému použití bez nutnosti manuální rekonstituce (redukce chybovosti).
Obr. 5. Schém a reak ce AR CHI TECT Active-B 12 (Holotranscobalam in)
(Zdroj: ARCHITECT Active-B12 Product Information: IA-11-30873B-v1.0)
5
