UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA UJI AKTIVITAS ANTIBIOFILM IN VITRO MINYAK ATSIRI HERBA KEMANGI TERHADAP BAKTERI Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, DAN Staphylococcus aureus

SKRIPSI

MOHAMMAD AL FATTAH NIM.1111102000053

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA Juni 2015

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA UJI AKTIVITAS ANTIBIOFILM IN VITRO MINYAK ATSIRI HERBA KEMANGI TERHADAP BAKTERI Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, DAN Staphylococcus aureus

SKRIPSI

MOHAMMAD AL FATTAH NIM.1111102000053

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA Juni 2015

ii

iii

iv

v

ABSTRAK Nama : Mohammad Al Fattah ProgramStudi : Farmasi Judul : UJI AKTIVITAS ANTIBIOFILM IN VITRO MINYAK ATSIRI HERBA KEMANGI TERHADAP BAKTERI Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, DAN Staphylococcus aureus Penelitian ini dilakukan untuk menguji aktivitas antibiofilm minyak atsiri dari herba kemangi (Ocimum americanum L.). Minyak atsiri herba kemangi diperoleh dengan menggunakan metode destilasi uap-air. Metode uji aktivitas antibiofilm herba kemangi yang digunakan adalah microtitter plate assay. Hasil uji aktivitas antibiofilm yang dilakukan menunjukkan minyak atsiri dari kemangi mampu mencegah, menghambat, dan menghancurkan biofilm dari bakteri Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, dan Staphylococcus aureus. Aktivitas terbaik minyak atsiri kemangi terjadi pada proses penghancuran biofilm Staphylococcus aureus dengan persentase penghancuran 58,10% pada konsentrasi 0,25% (v/v). Aktivitas terbaik minyak atsiri kemangi dilakukan optimasi dengan menggunakan respon surface analysis (RSA). Hasil optimasi RSA menunjukan kondisi penghancuran biofilm bakteri Staphylococcus aureus dengan perlakuan konsentrasi 0,25%, suhu 50oC, dan waktu kontak ekstrak dengan biofilm 48 menit. Kondisi aktivitas terbaik minyak atsiri dilakukan uji kembali untuk dibandingkan dengan kontrol positif (Biorem). Hasil uji menunjukan persentase penghancuran biofilm dengan minyak atsiri dan Biorem bereturut-turut adalah 65,79% dan 75,59%. Berdasarkan penelitian ini, minyak atsiri herba kemangi memiliki potensi sebagai antibiofilm. Kata Kunci : Minyak atsiri herba kemangi (Ocimum americanum L.), antibiofilm, microtitter plate assay, respon surface analysis (RSA)

vi

ABSTRACT Nama Study Program Title

: Mohammad Al Fattah : Pharmacy : IN VITRO ANTIBIOFILM ACTIVITY TEST OF HERB BASIL ESSENTIAL OIL TO BACTERIA Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, AND Staphylococcus aureus

This study was conducted to test the antibiofilm activity of herbs basil essential oils (Ocimum americanum L.). Herb basil essential oil was obtained by hydro distillation. Microtitter plate method was used to test antibiofilm activity of herb basil essential oil. Antibiofilm activity test results have shown that herbs basil essential oil was able to prevent, inhibit, and destroy biofilm of bacteria Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus. The best activity of herbs basil essential oil occurred in the process of Staphylococcus aureus’s biofilm destruction with the 0.25% v/v concentration. The percentage of Staphylococcus aureus’s biofilm destruction was 58.10%. The best activity of herbs basil essential oils was optimized by using response surface analysis (RSA). The result of the RSA optimization at the best condition of Staphylococcus aureus’s biofilm destruction process was by using 0.25% of herb basil essential oil at the temperature of 50oC, and using 48 minutes for contacting time of essential oil with the biofilm. The optimal condition of herbs basil essential oils was tested to compare the antibiofilm activity with the control positive (Biorem) . The test results showed the percentage of biofilm destruction of essential oils and Biorem in a row were 65.79% and 75.59%. Based on this research, herbs basil essential oil has potential as an antibiofilm. Key Word : Minyak atsiri herba kemangi (Ocimum americanum L.), antibiofilm, microtitter plate assay, respon surface analysis (RSA)

vii

KATA PENGANTAR Assalamu ‘alaikum warahmatullahi wabarakatuh Alhamdulillahirabbil’alamin,

puji

syukur

selalu

terpanjatkan

atas

kehadirat Allah subhanahu wa ta’ala atas segala berkah dan kasih sayang-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian dan penyusunan skripsi ini. Shalawat serta salam senantiasa tercurahkan kepada keharibaan junjungan Nabi Besar Muhammad SAW, beserta keluarga, sahabat, dan para pengikutnya hingga hari akhir zaman. Skripsi dengan judul “Uji Aktivitas Antibiofilm in Vitro Minyak Atsiri Herba Kemangi Terhadap Bakteri Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, dan Staphylococcus aureus” ini disusun dalam rangka memenuhi salah satu syarat menempuh ujian akhir guna mendapatkan gelar Sarjana Farmasi pada Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. Selama proses penelitian dan penyusunan skripsi ini, penulis menyadari begitu banyak bantuan dari berbagai pihak yang telah meluangkan waktunya, mendidik dan membimbing, memberikan secercah harapan, dan mendoakan yang terbaik kepada penulis. Maka pada kesempatan ini, penulis menyampaikan penghargaan setinggi-tingginya dan rasa terima kasih yang sebesar-besarnya kepada : 1. Bapak Dr. H. Arif Sumantri, SKM., M. Kes. selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. 2. Bapak Yardi, Ph. D., Apt. selaku Ketua Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. 3. Ibu Eka Putri, M. Sc., Apt. dan Bapak Novik Nurhidayat, Ph.D sebagai Pembimbing I dan Pembimbing II yang dengan sabar senantiasa meluangkan waktu dan pikirannya untuk membimbing dan mendidik penulis.

viii

4. Bapak dan Ibu Dosen Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta yang telah memberikan ilmunya kepada penulis, semoga ilmu yang diberikan berkah dan menjadi ilmu yang bermanfaat. Aamiin. 5. Ibunda tercinta Hj. Ellya Dewi yang selalu memberikan cinta dan kasih sayang, semangat, dukungan, doa, dan nasihatnya yang tak akan pernah mampu penulis membalas itu semua. Penulis hanya bisa berdo’a kepada Allah yang maha pengasih lagi maha penyayang agar kiranya dengan segala kebesaran-Nya mengasihi dan melindungi Ibunda tercinta, melimpahkan rezeki, dan memberikan keselamatan di dunia dan di akhirat kelak. Aamiin 6. Firda, Resky, dan Rika sebagai teman seperjuangan penelitian biofilm di LIPI Bogor yang selalu memberikan semangat dan dukungan selama penelitian hingga penulisan skripsi ini. 7. Adit, Ambar, Ana, Askandari, Elsa, Faradhila, Khaerunisa, Miyadah, dan Niekha sebagai teman yang seperjuangan yang selalu memberikan semangat, dukungan, dan kebersamaan selama kuliah di farmasi ini dan semoga terus berlanjut hingga seterusnya. 8. Teman-teman seperjuangan Farmasi Angkatan 2011 “Effervescence” yang selalu memberikan warna baru dalam hidup penulis, kebersamaan yang begitu indah, dan ilmu tentang hidup dan kehidupan yang begitu berharga. 9. Serta semua pihak yang telah membantu penulis selama ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu. Semoga Allah SWT memberikan balasan yang berlipat ganda atas segala bantuan dan dukungannya kepada penulis. Penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi ini masih banyak kelemahan dan kekurangan. Maka dari itu, dengan segala kerendahan hati penulis sangat mengharapkan kritik dan saran pembaca agar lebih sempurnanya skripsi ini. Jakarta, 17 Juni 2015 Penulis

ix

x

DAFTAR ISI Halaman JUDUL ............................................................................................................... ii HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ............................................ iii HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................. iv HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ v ABSTRAK ......................................................................................................... vi ABSTRACT ....................................................................................................... vi KATA PENGANTAR ..................................................................................... viii HALAMAN PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI TUGAS AKHIR UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ........................................... x DAFTAR ISI...................................................................................................... xi DAFTAR TABEL ........................................................................................... xiv DAFTAR GAMBAR ........................................................................................ xv DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................... xvi BAB I

PENDAHULUAN ............................................................................... 1 1.1. Latar Belakang ............................................................................... 1 1.2. Rumusan Masalah .......................................................................... 3 1.3. Tujuan Penelitian ........................................................................... 3 1.5. Manfaat Penelitian ......................................................................... 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ..................................................................... 4 2.1. Infeksi ............................................................................................ 4 2.2. Biofilm ........................................................................................... 4 2.2.1. Tahap Perkembangan Biofilm ............................................ 4 2.2.2. Resistensi Biofilm Terhadap Antibiotik ............................. 5 2.3. Kontrol Biofilm .............................................................................. 7 2.4. Kultur Biofilm in Vitro Static Microtiter Plate Assays ................. 8 2.5. Tanaman Kemangi (Ocimum americanum Linn.) ......................... 9 2.5.1. Klasifikasi ........................................................................... 9 2.5.2. Sinonim ............................................................................ 10 2.5.3. Morfologi.......................................................................... 10 2.5.4. Kandungan Kimia............................................................. 10 2.5.5. Khasiat dan Kegunaan ...................................................... 11

xi

2.6. Sitral ............................................................................................. 11 2.7. Destilasi Uap ................................................................................ 12 2.8. Tinjauan Bakteri Uji ................................................................... 12 2.8.1. Escherichia coli ................................................................ 12 2.8.2. Pseudomonas aeruginosa ................................................. 13 2.8.3. Staphylococcus aureus ..................................................... 13 2.9. Gas Chromatography-Mass Spectrophotometer (GC-MS) ......... 14 2.10. Analisis Respon Permukaan (Respon Surface Analysis) .......... 14 BAB III METODOLOGI PENELITIAN .................................................... 16 3.1. Tempat dan Waktu Penelitian ...................................................... 16 3.2. Alat dan Bahan ............................................................................. 16 3.2.1. Alat .................................................................................... 16 3.2.2. Bahan ................................................................................. 16 3.3. Ekstraksi Minya Atsiri ................................................................. 17 3.4. Penetuan Komponen Minyak Atsiri ............................................. 17 3.5. Penyiapan Larutan Uji ................................................................. 18 3.6. Pembuatan Media ......................................................................... 18 3.7. Kultur Escherichia coli ................................................................ 19 3.8. Kultur Pseudomonas aeruginosa ................................................. 20 3.9. Kultur Staphylococcus aureus ..................................................... 20 3.10. Penyiapan Suspensi Bakteri Uji ................................................. 21 3.11. Uji Pertumbuhan Biofilm Bakteri Uji ....................................... 21 3.12. Uji Antibiofilm Minyak Atsiri Herba Kemangi ......................... 21 3.12.1. Uji Aktivitas Pencegahan Biofilm ................................... 21 3.12.2. Uji Aktivitas Penghambatan Biofilm .............................. 22 3.12.3. Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm ............................... 23 3.13. Analisa Data Uji Terseleksi ....................................................... 24 BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 25 4.1. Hasil ............................................................................................. 25 4.1.1. Determinasi........................................................................ 25 4.1.2. Hasil Penyiapan Sampel .................................................... 25 4.1.3. Analisis Komponen Kimia dengn GCMS ......................... 25 4.1.4. Hasil Kultur Bakteri .......................................................... 26 4.1.5. Hasil Uji Pertumbuhan Biofilm Bakteri ............................ 28 xii

4.1.6. Hasil Uji Aktivitas Antibiofilm ......................................... 29 4.1.7. Hasil Uji Pertumbuhan Biofilm Staphylococcus aureus ... 31 4.1.8. Hasil Uji Aktivitas Terseleksi Penghancuran Biofilm ...... 31 4.2. Pembahasan .................................................................................. 33 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................ 45 DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 46 LAMPIRAN ...................................................................................................... 49

xiii

DAFTAR TABEL Halaman Tabel 4.1. Hasil Analisis GCMS Komponen Kimia Minyak Atsiri ................. 26 Tabel 4.2. Kultur Bakteri Escherichia coli ....................................................... 26 Tabel 4.3. Kultur Bakteri Pseudomonas aeruginosa ........................................ 27 Tabel 4.4. Kultur Bakteri Staphylococcus aureus............................................. 27 Tabel 4.5. Uji Kultur Bakteri Staphylococcus aureus ...................................... 28

xiv

DAFTAR GAMBAR Halaman Gambar 2.1. Mekanisme Pembentukan Biofilm .................................................... 4 Gambar 2.2. Resistensi Biofilm Terhadap Antibiotik ........................................... 6 Gambar 2.3. Tumbuhan Kemangi .......................................................................... 9 Gambar 2.4. Struktur Kimia Sitral ....................................................................... 11 Gambar 4.1. Grafik Uji Pertumbuhan Biofilm Bakteri........................................ 29 Gambar 4.2. Aktivitas Antibiofilm Minyak Atsiri Kemangi Terhadap Bakteri Escherichia coli ............................................................................... 29 Gambar 4.3. Aktivitas Antibiofilm Minyak Atsiri Kemangi Terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa ............................................................... 30 Gambar 4.4. Aktivitas Antibiofilm Minyak Atsiri Kemangi Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus .................................................................... 30 Gambar 4.5. Densitas Optik Pertumbuhan Biofilm Staphylococcus aureus ...... 31 Gambar 4.6. Contour plot Persentase Penghancuran Biofilm dari Perbandingan Suhu dengan Konsentrasi. ............................................................... 32 Gambar 4.7. Contour plot Persentasi Penghancuran Biofilm dari Perbandingan Waktu Kontak dengan Suhu............................................................ 32 Gambar 4.8. Grafik Hasil Uji Aktivitas Terseleksi Minyak Atsiri Kemangi ...... 33

xv

DAFTAR LAMPIRAN Halaman Lampiran 1. Alur Kerja ........................................................................................ 49 Lampiran 2. Hasil Determinasi ............................................................................ 53 Lampiran 3. Hasil Destilasi Minyak Atsiri Herba Kemangi ................................ 54 Lampiran 4. Alat dan Bahan ................................................................................ 55 Lampiran 5. Hasil Pembuatan Larutan Uji .......................................................... 57 Lampiran 6. Hasil Uji Pertumbuhan Biofilm Bakteri Uji .................................... 57 Lampiran 7. Hasil Uji Antibiofilm Terhadap Escherichia coli ........................... 58 Lampiran 8. Hasil Uji Antibiofilm Terhadap Pseudomonas aeruginosa ............ 59 Lampiran 9. Hasil Uji Antibiofilm Terhadap Staphylococcus aureus ................. 60 Lampiran 10. Hasil Uji Statistika Aktivitas Pencegahan Biofilm Escherichia coli…….. ........................................................................................ 61 Lampiran 11. Hasil Uji Statistika Aktivitas Penghambatan Biofilm Escherichia.coli ............................................................................. 64 Lampiran 12. Hasil Uji Statistika Aktivitas Penghancuran Biofilm Escherichia.coli ............................................................................. 67 Lampiran 13. Hasil Uji Statistika Aktivitas Pencegahan Biofilm Pseudomonas aeruginosa ..................................................................................... 69 Lampiran 14. Hasil Uji Statistika Aktivitas Penghambatan Biofilm Pseudomonas aeruginosa ..................................................................................... 72 Lampiran 15. Hasil Uji Statistika Aktivitas Penghancuran Biofilm Pseudomonas aeruginosa ..................................................................................... 75 Lampiran 16. Hasil Uji Statistika Aktivitas Pencegahan Biofilm Staphylococcus aureus…......................................................................................... 78 Lampiran 17. Hasil Uji Statistika Aktivitas Penghambatan Biofilm Staphylococcus aureus .................................................................. 81 Lampiran 18. Hasil Uji Statistika Aktivitas Penghancuran Biofilm Staphylococcus aureus…......................................................................................... 84 Lampiran 19. Hasil Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm Menggunakan Respon Surfacce Analysis .......................................................................... 87 Lampiran 20. Hasil Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm Staphylococcus aureus Pada Kondisi Respon Surface Analysis ......................................... 88 Lampiran 21. Hasil Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm Kondisi optimal ......... 90 Lampiran 22. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghancuran Kondisi Optimal Biofilm Staphylococcus aureus .................................................................. 91

xvi

BAB I PENDAHULUAN

1.1. Latar belakang Infeksi adalah invasi tubuh oleh mikroorganisme patogen yang mampu menyebabkan sakit (Potter et al, 2005). Mikroorganisme mampu berdiferensiasi dan berkembang dengan cara yang kompleks dalam membentuk morfologi baru yang tumbuh pada permukaan dikenal sebagai biofilm (O’toole et al, 2000). Bakteri memiliki dua formasi kehidupan, yaitu fomasi sel planktonik bebas dan biofilm. Sekitar 99% bakteri berada dalam bentuk biofilmnya dan hanya 1 % dalam bentuk planktonik. Diperkirakan 65% kasus infeksi berkaitan dengan biofilm. Penting untuk menangani permasalahan biofilm karena bakteri biofilm yang tumbuh dapat menyebabkan infeksi kronis yang resisten terhadap terapi antibiotik dan stressor lainnya (Paraje, 2011). Indonesia adalah negara megabiodiversity yang kaya akan tumbuhan obat, dan sangat potensial untuk dikembangkan (Pers, 2010). Salah satu tanaman obat tradisional yang banyak dimanfaatkan masyarakat Indonesia adalah kemangi (Ocimum americanum L) (Umar, 2011). Minyak atsiri merupakan komponen utama pada kemangi (Sarma et al, 2011). Senyawa minyak atsiri kemangi yang paling utama adalah kamfor, metil sinamat, dan sitral (Siemonsma, J.S & Piluek, K., 1994, Verma & Kotyal, 2012). Minyak atsiri kemangi juga mengandung metil kavikol, linalool, eugenol, metil eugenol, dan limonene (Shadia et al, 2007 & J. Wungsintaweekul et al, 2009). Strategi yang dapat dilakukan dalam mengatasi permasalah biofilm adalah dengan menggabungkan agen antimikroba dengan zat yang mampu merusak lapisan permukaan pertumbuhan bakteri. Permasalahan biofilm dapat dikendalikan dengan strategi antimikroba secara kimia, fisika, dan biologi (Cortés et al, 2011). Minyak atsiri herba kemangi dalam hal ini digunakan

sebagai

zat

kimia

yang

diharapkan

mampu

mengatasi

permasalahan bakteri biofilm.

1

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

2

Pada penelitian yang dilakukan oleh Thaweboon & Thaweboon pada tahun 2009, berkaitan dengan pemanfaatan minyak atsiri kemangi sebagai antibakteri dan antibiofilm. Hasil penelitian tersebut menunjukkan bahwa minyak atsiri kemangi selain mampu menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans, Lactobacillus casei, dan pertumbuhan jamur Candida albicans dalam bentuk planktoniknya, minyak atsiri juga menunjukkan aktivitas dalam menghambat pertumbuhan bakteri dan jamur tersebut dalam bentuk biofilmnya. Penelitian uji aktivitas antibakteri dari minyak atsiri kemangi yang lain dilakukan oleh Wungsintaweekul et al tahun 2009 dan Parida et al tahun 2014. Hasil dari penelitian tersebut menunjukkan minyak atsiri kemangi mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Aspergillus flavus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Mycobacterium phlei, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis dan antijamur terhadap Candida albicans, Candida parapilosis, Candida tropicalis. Hasil penelitian uji antibakteri minyak atsiri kemang sebelumnya menunjukkan adanya aktivitas minyak atsri terhadap bakteri planktonik Escherchia coli, Pseudomonas aeruginosa, dan Staphylococcus aureus. Namun, seperti yang sudah dikatakan sebelumnya yaitu permasalahan infeksi lebih banyak disebabkan oleh bakteri dalam formasi biofilm dan ketiga bakteri tersebut dapat membentuk biofilm sebagai mekanisme pertahanannya (Bjarnsholt et al, 2011). Berdasarkan latar belakang yang telah diuraikan di atas dan belum adanya laporan mengenai aktivitas antibiofilm minyak atsiri kemangi terhadap

bakteri

Escherichia

coli,

Pseudomonas

aeruginosa,

dan

Staphylococcus aureus, sehingga dilakukanlah penelitian uji aktivitas antibiofilm in vitro minyak atsiri herba kemangi terhadap bakteri Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, dan Staphylococcus aureus


3

1.2. Perumusan masalah Belum adanya informasi mengenai aktivitas antibiofilm minyak atsiri kemangi terhadap bakteri Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, dan Staphylococcus aureus.

1.3. Tujuan Penelitian Mendapatkan data dan informasi dari kemampuan minyak atsiri herba kemangi dalam mencegah, menghambat dan menghancurkan biofilm bakteri Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus.

1.4. Manfaat Penelitian Hasil dari penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi yang cukup dari pemanfaatan minyak atsiri herba kemangi sebagai antibiofilm bakteri.


BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Infeksi Infeksi merupakan invasi tubuh oleh mikroorganisme patogen yang mampu menyebabkan sakit (Potter et al, 2005). Infeksi disebabkan pembiakan

mikroorganisme

pada

jaringan

tubuh,

terutama

yang

menyebabkan cedera selular lokal akibat kompetisi metabolisme, toksin, replikasi intra selular, atau respon antigen-antibodi (Dorland, 1998). Mikroorganisme penyebab terjadi infeksi adalah bakteri, virus, jamur dan protozoa. Mikroorganisme dapat masuk ke tubuh inangnya melalui saluran pernapasan, saluran pencernaan, kulit dan rongga mulut (Pratiwi, 2008).

2.2. Biofilm Biofilm merupakan bentuk dari pola hidup multiseluler mikroba dan didefinisikan berkomunikasi

sebagai dan

komunitas melekat

bakteri

pada

yang

permukaan

terorganisir,

saling

inert

hidup.

atau

Mikroorganisme dalam biofilm terdapat di dalam matriks polimer yang diproduksinya sendiri dengan bahan utamanya eksopolisakarida. Matriks biofilm tersusun atas polisakarida, protein dan DNA yang berasal dari mikroba (Paraje, 2011). 2.2.1. Tahap Perkembangan Biofilm

Gambar 2.1. Mekanisme pembentukan biofilm (Ranganathan, 2014)

4


5

1. Perekatan Bakteri ke Permukaan Bakteri planktonik bebas menuju suatu permukaan dan melekat. Penempelan awal ini didasarkan pada daya tarik fisik dan gaya elektrostatik tetapi belum ada penempelan secara kimia (Paraje, 2011). 2. Perekatan Bakteri Secara Permanen Beberapa dari sel reversibel yang teradsorpsi ini mulai membuat persiapan untuk penempelan yang lebih kuat dengan membentuk struktur tetap yang kemudian secara permanen mengikat ke permukaan (Paraje, 2011). 3. Pembentukan Koloni Sel-sel perintis biofilm akan memproduksi dan membuat sel anakan yang akan membentuk mikrokoloni di permukaan beberapa jam kemudian setelah penempelan permanen (Paraje, 2011). 4. Akumulasi Sel Biofilm Biofilm yang terbentuk akan semakin banyak dan mulai menghasilkan matriks polimer di sekitar mikrokoloni sebagai langkah untuk penempelan yang ireversibel (Paraje, 2011). 5. Pelepasan Biofilm Pada tahap berikutnya biofilm yang sudah matang akan pecah dan sel-sel bakteri dibebaskan kemudian dapat menyebar ke lokasi lain untuk membentuk biofilm yang baru (Paraje, 2011).

2.2.2. Resistensi Biofilm Terhadap Antibiotik Satu aspek terpenting dari pembentukan biofilm bakteri adalah peningkatan resistensi mikroba terhadap antibiotik dan stressor lainnya. Sifat struktural dan karakteristik sel biofilm menghasilkan resistensi terhadap agen antimikroba dan stressor lainnya yang berkaitan dengan mekanisme perlindungan dan pertahanan dari kondisi lingkungan yang buruk.


6

Gambar 2.2. Resistensi Biofilm Terhadap Antibiotik (Keller, 2014) Faktor intrinsik dari resistensi merupakan bagian dari perkembangan biofilm yang disebabkan dari struktur biofilm dan sifat fisiologi hasil dari perubahan pola hidup biofilm. Pengaruh dari beberapa faktor intrinsik biofilm yang berbeda mempengaruhi resistensi antibiotik telah diidentifikasi. Berikut ini adalah mekanisme pertahanan yang menyebabkan resistensi : 1. Matriks biofilm dapat bertindak sebagai penghalang difusi Biofilm

sebagai

penghalang

difusi

fisik

untuk

mencegah antibiotik mencapai target. Antibiotik mampu menembus struktur campuran eksopolisakarida, DNA, dan protein untuk mencapai target tetapi tidak mampu mencapai konsentrasi efektif disemua bagian (Paraje, 2011). 2. Pembentukan lingkungan mikro dalam biofilm Menipisnya jumlah nutrisi dan oksigen di dalam biofilm dapat

menyebabkan

aktivitas

metabolisme

diubah

dan

menyebabkan perlambatan pertumbuhan bakteri (Paraje, 2011). 3. Diferensiasi menjadi sel persister Persister sel dianggap tidak tumbuh atau tumbuh lambat, dan juga memiliki kerentanan yang sangat berkurang terhadap antibiotik. Dalam teori persister, rute dari subpopulasi kecil bakteri dalam biofilm berdiferensiasi menjadi sel aktif, mampu bertahan terhadap pengobatan antibiotik yang ekstrim karena perubahan genetik yang stabil (Paraje, 2011). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

7

4. Peningkatan produksi tekanan oksidatif Tekanan

oksidatif

yang

disebabkan

oleh

ketidakseimbangan antara jumlah oksidan, seperti radikal bebas, peroksida dan oksida nitrat, dengan antioksidannya. Gangguan keseimbangan prooksidan-antioksidan menyebabkan kelebihan produksi senyawa oksigen reaktif (SOR) yang dapat mengakibatkan kerusakan pada komponen seluler, termasuk DNA, protein dan lipid. Bakteri akan membentuk senyawan antioksidan sebagai respon fisiologis terhadap SOR, sehingga bakteri dapat beradaptasi terhadap tekanan oksidatif yang menyebabkan perubahan metabolik yang cepat. Enzim utama yang terlibat dalam system pertahanan antioksidan dan detoksifikasi SOR adalah superoksida dismutase (SOD) dan katalase (CAT) (Paraje, 2011). 5. Aksi antagonis antibiotik dan mekanisme degradasi aktif di beberapa bagian biofilm Microenvironments dapat melawan aksi dari antibiotik dengan mekanisme degradasi aktif dibeberapa bagian biofilm. Bakteri saling berkomunikasi dan mengaktifkan gen-gen tertentu sehingga menghasilkan enzim atau toksin yang dapat mendegradasi antibiotik (Paraje, 2011).

2.3. Kontrol Biofilm Sterilisasi merupakan proses penghilangan semua jenis organisme hidup yang terdapat pada suatu benda. Proses ini melibatkan aplikasi Biocidal agent atau proses fisik dengan tujuan untuk membunuh atau menghilangkan mikroorganisme (Pratiwi, 2008). Strategi yang dilakukan dalam mengkontrol biofilm dapat dengan menggunakan metode kimia, fisika, dan biologi (Rai, 2013). a. Fisik ; metode dengan sterilisasi panas merupakan cara yang paling dipercaya dan banyak digunakan. Sterilisasi panas dibagi dua yaitu metode panas kering dan panas basah (Pratiwi, 2008).


8

b. Kimia ; metode yang dilakukan dengan menggunakan suatu bahan kimia yang dapat membunuh atau menghilangkan mikroorganisme. Senyawa kimia antibiofilm ini dapat menghambat quorum sensing sehingga mengganggu pertukaran sinyal kimia antara sel-sel dalam sebuah proses dan dapat merusak matriks biofilm sel-sel bakteri dalam koloni, sehingga mendegradasi matriks yang menyebabkan pelepasan sel dari koloni dan pembebasan sel ke lingkungan (Pratiwi, 2008 & Rai, 2013). c. Biologi (Bakteriofage) ; Strategi dengan memanfaatkan virus tertentu yang menginfeksi bakteri. Virus akan menghancurkan bakteri dengan cara masuk ke sel inang dan melekat pada reseptor spesifik pada permukaan bakteri, termasuk lipopolisakarida, protein, atau bahkan flagella. Sehingga bakteri akan mati dan terjadinya penurunan biofilm (Esperanza et al, 2011).

2.4. Kultur Biofilm in Vitro dengan Metode Static Microtiter Plate Assays Metode ini dirancang untuk mengukur kemampuan mikroba yang dapat menempel ke permukaan abiotik dalam waktu inkubasi berkisar 1-2 jam sebagai inisiasi penempelan awal ke permukaan yang sudah dapat dinilai, sedangkan untuk waktu inkubasi lebih lama dari 20 jam memungkinkan untuk mengukur pembentukan biofilm (Bjarnsholt et al, 2011). Keuntungan utama dari metode ini adalah hasil penepelan yang relatif tinggi, memungkinkan perlindungan untuk bakteri yang kurang sempurna dalam penempelan atau evaluasi perbedaan efek dari perlakuan atau senyawa pada penempelan atau pembentukan biofilm. Kekurangan dari metode mikrotiter

adalah sulit dalam mempelajari struktur biofilm atau sifat

resistensi antimikroba. Hal ini disebabkan sulitnya dalam menvisualisasikan biofilm secara mikroskopis dan dalam membedakan antara sel-sel hidup dan bahan matriks diwarnai dengan pewarna (Bjarnsholt et al, 2011).


9

2.5. Tumbuhan Kemangi (Ocimum americanum Linn)

(Sumber : Koleksi Pribadi)

Gambar 2.3. Tumbuhan Kemangi (Ocimum americanum L.) 2.5.1. Klasifikasi (Tjitrosoepomo, 2002). Kingdom

: Plantae

Division

: Spermatophyta

Sub Division

: Angiospermae

Class

: Dicotyledonae

Order

: Tubiflorae

Family

: Lamiaceae

Genus

: Ocimum

Species

:Ocimum americanum L.

2.5.2. Sinonim Ocimum americanum L. di kenal dengan hoary basil, wild basil, dan lemon basil. Indonesia: kemangi, selasih putih. Malaysia:


10

selaseh, kemangi, ruku-ruku. Thailand: Maenglak. (Siemonsma et al, 1994; Pitojo, 1996).

2.5.3. Morfologi Karakteristik kemangi yaitu perawakan : herba tegak/semak, tajuk membulat, bercabang banyak, sangat harum, tinggi 0,3 m-1,5 m; batang : batang pokok tidak jelas, bercabang banyak, hijau, berambut atau tidak; daun : tunggal, berhadapan, helaian daun bulat elips memanjang, ujung meruncing-runcing, tangkai daun 0,25-3 cm, pangkal bangun pasak sampai membulat, dikedua permukaan berambut halus, berbintik-bintik, tepi daun bergerigi lemah – bergelombang rata; bunga : susunan majemuk berkarang/tandan, terminal, 2,5-14 cm, diketiak daun ujung, daun pelindung elip/bulat telur, panjang 0,5-1 cm; kelopak : berjumlah 5 saling berlekatan membentuk bibir, 1 membentuk bibir atas, bentuk bulat telur 2-3,5mm, 1 bibir buah membentuk 4 gigi, sisi luar berambut kelenjar, ungu atau hijau; mahkota : berbibir, 3 bibir atas, 2 bibir bawah, panjang tabung 1,5-2mm, cuping mahkota 3-5mm, putih; benang sari : berjumlah 4, tersisip di dasar mahkota, ada 2 yang panjang; putik : kepala putik bercabang dua, tidak sama; buah : kelopak ikut menyusun buah, buah tegak dan tertekan. (Sudarsono et al, 2002). 2.5.4. Kandungan Kimia Ocimum americanum L. mengandung senyawa kimia alami antara lain, minyak atsiri, karbohidrat, alkaloid, senyawa fenolik, fitosterol, tanin, lignin, pati, saponin, flavonoid, terpenoid dan antrakuinon. Minyak atsiri merupakan komponen kimia utama pada Ocimum americanum L (Dhale et al, 2010; Sarma et al, 2011). Senyawa kimia minyak atsiri yang paling utama pada kemangi adalah kamfor, metil sinamat, sitral, metil cavikol, linalool, eugenol, metil eugenol, dan limonene (Siemonsma et al, 1994; Verma et al, 2012; Shadia et al, 2007; J. Wungsintaweekul et al, 2009).


11

2.5.5. Khasiat dan Kegunaan Hasil penelitian yang telah ada menyebutkan bahwa minyak atsiri dari kemangi memiliki efek antibakteri, antituberkolosis, antijamur, dan antibiofilm (Sabra et al, 2007; Ntezurubanza et al,1986 ; Thaweboon, 2009).

2.6. Sitral

Gambar 2.4. Struktur Kimia Sitral (Hamdard, 2007) Sitral adalah salah satu komponen minyak atsiri yang banyak ditemukan dalam berbagai tanaman aromatik dan memiliki bau lemon yang khas. Sitral atau 3,7-dimetil-2,6 octadienal merupakan campuran dari dua monoterpen asiklik yaitu geranial (trans-sitral atau sitral A) dan neral (cissitral atau sitral B) dengan rumus molekul C10H16O (Chaimovitsh et al, 2010 & Shahzadi et al, 2014). Sitral telah diketahui memiliki aktivitas sebagai antijamur, antibakteri, dan insektisida. Sitral disebutkan juga merupakan senyawa alelopati aktif (Chaimovitsh et al, 2010). Sejumlah turunan monoterpene sendiri menunujukkan kemampuan yang efektif sebagai kemoprevensi dan kemoterapi kanker pada tingkat sel hewan uji maupun dalam uji klinis pada manusia. Senyawa terpen tak jenuh mampu mengikat spesies oksigen aktif in vivo untuk memberikan epoksida intermediet yang dapat mengalkilasi DNA, protein, dan bimolekular lainnya (Assidqi, 2012).


12

2.7. Destilasi uap Distilasi uap merupakan suatu metode untuk isolasi minyak atsiri dari bahan tanaman. Bahan tanaman ditempatkan dalam alembik untuk diekstraksi dengan uap-air tanpa menggunakan maserasi dalam air. Uap air dikeluarkan melewati tanaman dari bagian dasar alembik lalu menuju ke atas. Uap yang bercampur dengan minyak atsiri mengalir melalui saluran kolom dan kemudian dikondensasikan sebelum didekantasi dan dikumpulkan dalam suatu tabung. Minyak atsiri yang massa jenisnya lebih ringan daripada air akan membentuk dua fase yang tidak bercampur yang dapat dengan mudah dipisahkan. Prinsip dari teknik ini adalah menggabungkan kesetaraan tekanan uap dengan dengan tekanan lingkungan di sekitar 100°C sehingga komponen volatil dengan titik didih mulai dari 150-300°C dapat menguap pada suhu yang mendekati titik didih air (Y. Li et al, 2014).

2.8. Tinjauan Bakteri Uji 2.8.1. Escherichia coli Kingdom : Bacteria Filum

: Proteobacteria

Kelas

: Gamma Proteobacteria

Ordo

: Enterobacteriales

Famili

: Enterobacteriaceae

Genus

: Escherichia

Species

: Escherichia coli (Todar, 2008)

Escherichia coli adalah bakteri batang Gram negatif fermentatif dengan panjang 0,4–0,7 μm, lebar 1–3 μm, dan dapat berupa satu individu maupun berpasangan (Gyles et al. 2010; Songer dan Post 2005). Bakteri ini dapat menyebabkan diare enterik/hemoragik, infeksi saluran kemih (ISK) dan sepsis/meningitis (Kaper, 2004).


13

2.8.2. Pseudomonas aeruginosa Kingdom : Bacteria Phylum

: Proteobacteria

Class

: Proteobacteria

Ordo

: Pseudomonadales

Family

: Pseudomonadaceae

Genus

: Pseudomonas

Species

: Pseudomonas aeruginosa (Holt et al, 1994)

Bakteri berbentuk batang, berukuran 0,6-2 μm, bergerak aktif dengan flagel monotrika (flagel tunggal pada kutub), tidak berspora, tidak mempunyai selubung, dan bersifat Gram negatif. Bakteri ini dapat menyebabkan infeksi pada luka, meningitis, dan infeksi saluran air kemih (ISK) akibat pemakaian kateter dan alat-alat medis yang ditumbuhi biofilm bakteri (Jawetz, et al, 1996).

2.8.3. Staphylococcus aureus Domain

: Bacteria

Kingdom : Eubacteria Phylum

: Firmicutes

Class

: Bacilli

Order

: Bacillales

Family

: Staphylococcaceae

Genus

: Staphylococcus

Species

: Stapylococcus aureus (Rosenbach, 1884)

Staphylococcus aureus adalah bakteri berbentuk bulat, bersifat Gram positif, biasanya tersusun dalam rangkaian tidak beraturan seperti buah anggur (Jawetz, 2005). Bakteri ini ditemukan secara alami pada kulit dan dalam nasofaring dari tubuh manusia. Bakteri ini dapat menyebabkan infeksi lokal pada kulit, hidung, uretra, vagina dan saluran pencernaan (Haris, 2002).


14

2.9. Gas Chromatography-Mass Spectrophotometer (GC-MS) Kromatografi gas merupakan salah satu metode pemisahan yang berdasarkan partisi cuplikan antara fase gerak yang berupa gas pembawa dan fase diam yang menahan cuplikan secara selektif (Sastrohamidjojo dan Pranowo, 1985). Metode spektrometri massa didasarkan pada pengubahan molekul netral menjadi ion-ion bermuatan positif dan memisahkannya berdasarkan perbandingan massa terhadap muatan elektron (m/e) (Hendayana, 1994). Pemisahan

komponen

senyawa

dengan

menggunakan

GC

(Chromatography Gas) terjadi di dalam kolom dengan melibatkan dua fase yaitu fase diam dan fase gerak. Fase diam adalah zat di dalam kolom sedangkan fase gerak adalah gas pembawa (Helium atau Hidrogen). GC (Chromatography Gas) adalah teknik pemisahan dimana larutan yang mudah menguap dan stabil terhadap pemanasan akan bermigrasi melalui kolom yang merupakan fase diam dengan suatu kecepatan yang tergantung pada rasio distribusinya. Pada umumnya larutan akan terelusi berdasarkan pada peningkatan titik didihnya (kecuali jika terjadi interaksi khusus antara solut dengan fase diam). Pemisahan pada kromatografi gas didasarkan pada titik didih suatu senyawa dikurangi dengan semua interaksi yang mungkin terjadi antara larutan dengan fase diam. Fase gerak yang berupa gas akan mengelusi larutan dari ujung kolom yang akan dihantarkan ke detektor. Penggunaan suhu yang meningkat bertujuan untuk menjamin bahwa larutan akan menguap dan akan cepat terelusi, suhu yang digunakan 50-350⁰C (Sudjadi, 2007).

2.10. Analisis Respon Permukaan (Respon Surface Analysis) Optimasi adalah sebuah proses yang bertujuan untuk mendapatkan kondisi dari suatu penerapan prosedur untuk menghasilkan respon terbaik. Optimasi mengacu pada peningkatkan kinerja sistem, proses, atau produk hasil yang maksimal (Bezerra et al. 2008). Metodologi respon permukaan adalah kumpulan teknik matematika dan statistik yang didasarkan pada kecocokan dari model empiris dengan


15

data eksperimen yang diperoleh dalam kaitannya dengan desain eksperimental.

Desain

eksperimental

adalah

seperangkat

spesifik

eksperimen ditentukan oleh matriks penyusunnya dengan kombinasi tingkat yang berbeda dari variabel yang diteliti (Bezerra et al. 2008). Tahap penerapan RSM sebagai teknik optimasi yaitu 

Pemilihan variabel independen yang menghasilkan efek paling utama pada wilayah eksperimental, sesuai dengan tujuan penelitian.



Pemilihan desain eksperimental dan melaksanakan eksperimen sesuai dengan matriks eksperimental yang dipilih.



Pengolahan secara matematika dan statistik dari data eksperimen yang diperoleh dicocokan ke fungsi polinomial.



Evaluasi kecocokan model.



Verifikasi dari kebutuhan dan kemungkinan untuk melakukan perubahan data ke wilayah yang optimal.



Memperoleh nilai optimum untuk masing-masing variabel (Bezerra et al, 2008).


BAB III METODOLOGI PENELITIAN

3.1. Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian ini dilaksanakan dari Maret sampai dengan Mei 2015 di Laboratorium Genetika, Bidang Botani, Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Cibinong.

3.2. Alat dan Bahan 3.2.1. Alat Peralatan gelas, jarum ose, kapas, kain kasa, kertas saring, spatula, mikropipet, bunsen, pinset, alumunium foil, plastik wrap, neraca analitik, autoklaf, oven, inkubator, microwave, Laminar Air flow (LAF), lemari pendingin, vial, vortex, microtiterplate flat-bottom polystyrene 96 wells, iMark Bio-Rad microplate reader.

3.2.2. Bahan 1) Tanaman Tumbuhan yang digunakan pada penelitian ini adalah herba kemangi (Ocimum americanum L.)

yang didapat di

Kampung Grogol. Kemangi dipanen pada umur 3 bulan dengan kondisi tanah gembur, tanpa pestisida, dan pengairan dilakukan menggunakan air hujan dan air kali di dekat kebun. Tanaman ini telah dideterminasi di Herbarium Bogoriense, LIPI, Cibinong, Bogor. 2) Bahan Uji Aquadest, DMSO (Dimethy Sulfoxide), Heterotrof Agar (HTR Agar), Heterotrof Cair (HTR Cair), Eosin Methyl Blue Agar (EMB), Pseudomonas Isolation Agar (PIA), Etanol 70%, Etanol 96%, Kristal violet 1%.

16


17

3) Bakteri Uji Escherichia coli DM6101 dan Pseudomonas aeruginosa PMG203 didapatkan dari koleksi laboratorium mikrobiologi kesehatan LIPI Cibinong dan Staphylococcus aureus didapatkan dari hasil isolasi dari kulit manusia yang dilakukan di laboratorium mikrobiologi kesehatan LIPI Cibinong, Bogor.

3.3. Ekstraksi Minyak Atsiri Herba kemangi (batang, daun, dan bunga tanpa akar) diambil dalam keadaan segar kemudian ditimbang sebanyak 25 kg. Herba kemangi selanjutnya dicuci bersih untuk menghilangkan kotoran dan bahan asing yang menempel. Herba kemangi yang sudah dicuci bersih lalu dirajang dan dikeringkan dalam suhu ruangan tanpa terkena sinar matahari langsung selama 48 jam untuk mengurangi kadar airnya. Proses selanjutnya adalah destilasi minyak atsiri dengan menggunakan metode destilasi uap air. Destilasi minyak atsiri dilakukan selama 4 jam. Minyak atsiri yang telah didapatkan dibebas-airkan dengan penambahan natrium sulfat (Na2SO4) anhidrat untuk menghilangkan kadar airnya. Minyak atsiri yang masa jenisnya berbeda dengan air sehingga akan membentuk dua fase yang tidak bercampur dapat dipisahkan (Parida et al, 2014). Minyak atsiri yang dihasilkan dihitung nilai rendemennya berdasarkan perbandingan volume minyak yang dihasilkan dari penyulingan dengan bobot sampel.

3.4. Penentuan Komponen Minyak Atsiri Komponen

kimia

penyusun

minyak

atsiri

dianalisa

dengan

menggunakan kromatografi gas-spektroskopi massa (GC-MS, Agilent 19091S-433), kolom (30m x 250 m x 0,25 mm), gas pembawanya adalah Helium dengan kecepatan aliran gas 0.5 mL/menit dan tekanan kolom 1,1 psi. Suhu kolom diprogram dari 50⁰C sampai 250⁰C dengan 2 tahap kenaikan. Volume injeksi yang digunakan 1µL dengan metode split (1:20). Pada tahap awal suhu kolom dibuat konstan 50⁰C selama 5 menit, lalu dinaikkan sampai 80⁰C dengan kecepatan kenaikan 2⁰C/menit. Pada 80⁰C


18

suhu dipertahankan selama 1 menit dan selanjutnya dinaikkan menjadi 250⁰C dengan kecepatan 4⁰C/menit. Kondisi pada suhu 250⁰C ini dipertahankan selama 4,5 menit. Suhu injektor selama analisis berlangsung diprogram konstan pada suhu 225⁰C, sedangkan suhu detektor (Elektron Impact) dibuat konstan pada suhu 250⁰C. Proses analisa ini memakan waktu 68 menit. Spektrum massa masing-masing puncak senyawa hasil kromatogram GC-MS selanjutnya dibandingkan dengan spektrum massa autentik yang ada pada bank NIST (National Institute of Standard Technology) library (Sulianti, Sri Budi., 2008).

3.5. Penyiapan Larutan Uji Minyak atsiri diencerkan dengan DMSO 9,8% steril. Serial konsentrasi minyak atsiri yang dibuat adalah 0,25%, 0,5%, 0,75%, dan 1%. Campuran minyak atsiri dengan DMSO di vortex selama 5 menit untuk mencampurkannya.

3.6. Pembuatan Media 1) Heterotrof Agar (HTR Agar) Media Heterotrof Agar dibuat dengan melarutkan 15 g Bacto Agar, Pepton 15 g, Tripton, 3 g, NaCl 5 g, dan K2HPO4 2,5 g dalam 1 L aquadest dengan cara dipanaskan menggunakan microwave dan dihomogenkan dengan sesekali digoyangkan. Larutan media disterilisasi dengan autoclave pada 121ºC, 15 menit. Media ini digunakan sebagai media peremajaan Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa. 2) Heterotrof Cair (HTR Cair) Media Heterotrof cair dibuat dengan melarutkan Pepton 15 g, Tripton, 3 g, NaCl 5 g, K2HPO4 2,5 g, dan Glukosa 2.5 g dalam 1 L aquadest dengan cara dipanaskan menggunakan microwave dan dihomogenkan dengan sesekali digoyangkan.


19

Larutan media disterilisasi dengan autoclave pada 121ºC, 15 menit. Media ini digunakan sebagai media untuk menumbuhkan biofilm bakteri uji. 3) Eosin methyl Blue Agar (EMB Agar) Media Eosin methyl Blue Agar (EMB Agar) dibuat dengan melarutkan media EMB Agar 24 g dalam 1 L aquades dengan cara dipanaskan menggunakan microwave dan dihomogenkan dengan sesekali digoyangkan. Larutan media disterilisasi dengan autoclave pada 121ºC, 15 menit. Media ini digunakan sebagai media differensiasi untuk Escherichia coli. 4) Luria Bertani Agar (LB) Media LB dibuat dengan melarutkan melarutkan Bacto Agar 2,25 g, Yeast ekstrak 0,75 g, Tripton, 1,5 g, dan NaCl 0,75 g dalam dalam 150 ml aquadest. dengan cara dipanaskan menggunakan microwave dan dihomogenkan dengan sesekali digoyangkan. Larutan disterilisasi dengan autoclave pada 121ºC, 15 menit. Media ini digunakan sebagai peremajaan Staphylococcus aureus. 5) Pseudomonas Isolation Agar (PIA) Media Pseudomonas Isolation Agar (PIA) dibuat dengan melarutkan media PIA 4,5 g dan Bacto Agar dalam 1 L aquadest dengan cara dipanaskan menggunakan microwave dan dihomogenkan dengan sesekali digoyangkan. Larutan disterilisasi dengan autoclave pada 121ºC, 15 menit. Media ini digunakan sebagai selektif untuk Pseudomonas aeruginosa.

3.7. Kultur Escherichia coli Escherichia coli diinokulasi pada media Eosin Metyl Blue Agar dengan metode streak dan diinkubasi selama 24 Jam pada suhu 37o C. Bakteri hasil inokulasi selanjutnya diberikan pewarnaan Gram untuk melihat bentuk mikroskopisnya.


20

3.8. Kultur Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosa ditumbuhkan pada media PIA dengan metode streak dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC. Bakteri hasil inokulasi selanjutnya diberikan pewarnaan Gram untuk melihat bentuk mikroskopisnya.

3.9. Kultur Staphylococcus aureus a) Isolasi Bakteri Permukaan kulit digoreskan dengan menggunakan ose, kemudian ose tersebut digoreskan ke media Brain Heart Infusion (BHI). Inkubasi media BHI selama 24 jam pada suhu 37oC. Bakteri hasil inokulasi selanjutnya

diberikan

pewarnaan

Gram.

Bakteri

yang

memiliki

karakteristik Gram positif dan berbentuk Staphylococcus dikarakterisasi menggunakan H2O2 3%, media pelarut fosfat, media Klingler Iron Agar (KIA), dan susu skim 20%. b) Karakterisasi dengan Penambahan H2O2 3% Satu ose bakteri uji digoreskan pada kaca objek, selanjutnya ditambahkan satu tetes H2O2 3%. c) Karakterisasi Bakteri dengan Media Pelarut Fosfat Media Brain Heart Infusion ditambahkan Ca3(PO4)2 dan NaCl sebagai media selektif untuk Staphylococcus aureus. Media dimasukkan ke dalam cawan petri dan tunggu hingga mengeras. Satu ose bakteri diambil dengan menggunakan ose berbentuk jarum lalu ose tersebut ditusukkan ke media fosfat yang sudah mengeras. Inkubasi media selama 24 jam pada suhu 370C. d) Karakterisasi Bakteri dengan Media Klingler Iron Agar (KIA) Media KIA dibuat dalam tabung reaksi dengan posisi tegak. Satu ose bakteri diambil dengan menggunakan ose berbentuk jarum lalu ose tersebut ditusukkan ke dalam media.


21

e) Karakterisasi Bakteri dengan Susu Skim 20% Susu skim dibuat dengan konsentrasi 20%, setelah itu susu disterilisasi dengan cara pasteurisasi selama 30 menit pada suhu 90oC. Sebanyak 2 ose kultur bakteri disuspensikan dalam 1 mL aquadest dalam tabung appendorf dan divortex untuk menghomogenkannya. Susu hasil pasteurisasi sebanyak 2 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 500 µL kultur bakteri uji. Inkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC.

3.10. Penyiapan Suspensi Bakteri Bakteri uji diremajakan pada media padat dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC. Hasil inokulan diambil sebanyak satu ose lalu dimasukkan ke dalam media heterotrof cair dan diinkubasi selama 24 jam pada

suhu

37oC.

Susepensi

bakteri

diukur

dengan

menggunakan

spektrofotometer dengan densitas optik 600nm (Bjarnsholt et al, 2011).

3.11. Uji Pertumbuhan Biofilm Bakteri Uji Suspensi bakteri sebanyak 200 µL dimasukkan ke dalam mikroplat. Mikroplat ditutup dan diinkubasi pada 37oC dengan waktu 24, 48, 72, dan 96 jam. Setelah diinkubasi, isi mikroplat dikeluarkan dan dicuci dengan air. Mikroplat selanjutnya diberikan pewarna dengan cara dimasukkan 200 µL larutan kristal violet 1% dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu ruang. Pewarna dicuci dengan air dan dibiarkan kering pada suhu ruang. Setelah mikroplat kering, sebanyak 200 µL Etanol 96% dimasukkan ke dalam mikroplat dan inkubasi selama 15 menit pada suhu ruang. Mikroplat selanjutnya diukur menggunakan microplate reader pada densitas optik 595nm (Bjarnsholt et al, 2011).

3.12. Uji Aktivitas Antibiofilm Minyak Atsiri Herba Kemangi 3.12.1. Uji Aktivitas Pencegahan Penempelan Biofilm Sebanyak 200 µL seri konsentrasi minyak atsri yang sudah dibuat sebelumnya dimasukkan ke dalam mikroplat, selanjutnya


22

mikroplat ditutup dan diinkubasi pada suhu 27ºC selama 1 jam. Setelah diinkubasi, seluruh isi mikroplat dikeluarkan dan dimasukkan 200 µL suspensi bakteri ke dalam mikroplat yang tadi lalu mikroplat ditutup dan diinkubasi pada suhu 37oC dengan waktu 24, 48, 72, dan 96 jam (Bjarnsholt et al, 2011). Mikroplat yang sudah diinkubasi dikeluarkan isinya dan dicuci dengan air. Mikroplat diberikan pewarna dengan cara dimasukkan sebanyak 200 µL larutan kristal violet 1% dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu ruang. Pewarna selanjutnya dicuci dengan air bersih dan dibiarkan kering pada suhu ruang. Setelah mikroplat kering, sebanyak 200 µL etanol 96% dimasukkan kedalam mikroplat dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu ruang. Setelah itu mikroplat diukur pada densitas optik 595nm menggunakan microplate reader (Bjarnsholt et al, 2011). Pengujian dilakukan triplo dan persentase penghambatan biofilm dihitung dengan menggunakan rumus berikut (Nikolić et al. 2014):

*Ket : DO (Densitas Optik)

3.12.2. Uji Aktivitas Penghambatan Pembentukan Biofilm Suspensi

bakteri

dicampurkan

dengan

minyak

atsiri.

Konsentrasi suspensi bakteri-minyak atsiri dibuat menjadi 0,25%, 0,5%, 0,75%, dan 1% dan suspensi bakteri saja sebagai kontrol negatif.

Sebanyak 200 µL suspensi uji dan suspensi bakteri

dimasukkan ke dalam mikroplat, mikroplat ditutup dan diinkubasi pada 37o C dengan waktu waktu 24, 48, 72, dan 96 jam. Setelah diinkubasi, isi mikroplat dikeluarkan dan dicuci dengan air. Mikroplat diberikan pewarna dengan cara dimasukkan 200 µL larutan kristal violet 1% dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu ruang. Pewarna selanjutnya dicuci dengan air bersih dan dibiarkan kering pada suhu ruang. Setelah mikroplat kering, sebanyak 200 µL etanol 96% dimasukkan ke dalam mikroplat dan diinkubasi selama 15 menit pada


23

suhu ruang. Mikroplat diukur menggunakan microplate reader pada densitas optik 595nm (Bjarnsholt et al, 2011). Pengujian dilakukan triplo dan persentase penghambatan biofilm dihitung dengan menggunakan rumus berikut (Nikolić et al. 2014):


3.12.3. Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm Suspensi bakteri sebanyak 200 µL dimasukkan ke dalam mikroplat, mikroplat ditutup, dan diinkubasi pada 37oC dengan waktu 24, 48, 72, dan 96 jam. Mikroplat yang sudah diinkubasi dikeluarkan isinya lalu sebanyak 200 µL seri konsentrasi minyak atsiri dimasukkan ke dalam mikroplat, kontrol negatif diisikan DMSO 9.8% dan kontrol positif diisikan dengan Biorem, mikroplat ditutup dan diinkubasi pada suhu dan waktu yang sudah ditentukan. Setelah diinkubasi, isi mikroplat dikeluarkan, dicuci dengan air, dan mikroplat diberikan pewarna. Pewarnaan dilakukan dengan cara dimasukkan sebanyak 200 µL larutan kristal violet 1% dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu ruang. Pewarna dicuci dengan air bersih dan dibiarkan kering pada suhu ruang. Setelah mikroplat kering, dimasukkan sebanyak 200 µL etanol 96% kedalam mikroplat dan diinkubasi selama 15 menit pada suhu ruang. Setelah itu mikroplat diukur pada densitas optik 595nm menggunakan microplate reader (Bjarnsholt et al, 2011). Pengujian dilakukan triplo dan persentase penghambatan biofilm dihitung dengan menggunakan rumus berikut (Nikolić et al. 2014):



24

3.13. Analisa Data Uji Terseleksi Metode analisis respon permukaan digunakan untuk membuat kerangka uji dan mengolah data hasil uji terseleksi, Selanjutnya akan didapatkan konsentrasi, waktu dan suhu optimal dari minyak atsiri herba kemangi untuk diuji dan dibandingkan dengan kontrol positif (Bezerra et al, 2008).


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1. Hasil 4.1.1. Determinasi Hasil determinasi sampel tumbuhan dari Herbarium Bogoriense LIPI bogor pada tanggal 29 Desember 2014 membuktikan bahwa sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah benar jenis Ocimum americanum L., suku Lamiaceae, Kemangi. (lampiran 2)

4.1.2. Hasil Penyiapan Sampel Herba kemangi basah dengan bobot 25 kg yang sudah dikeringkan lalu ditimbang dan didapatkan berat kering sebanyak 20 kg. Herba kemangi selanjutnya dilakukan proses destilasi. Minyak atsiri yang didapat dari hasil destilasi 20 kg herba kemangi adalah 35 mL. Rendemen minyak atsiri kemangi yang didapatkan yaitu 0,18 % v/b (lampiran 3).

4.1.3. Analisis Komponen Kimia Minyak Atsiri Kemangi dengan GCMS

Gambar 4.1. Spectrum GCMS Minyak Atsiri Kemangi

25


26

Tabel 4.1. Hasil Analisis GCMS Komponen Kimia Minyak Atsiri Waktu

Area

Retensi

(%)

1

23,620

2,644

linalool

93

2

26,673

0,727

Citronellal

91

3

30,314

4,587

cis-Geraniol

93

4

30,939

31,737

β-Sitral

97

5

31,453

1,863

(Z)-Nerol

91

6

32,220

43,940

Sitral

96

7

36,158

0,185

Copaene

97

8

36,370

0,369

Geranyl Acetat

90

9

37,711

1,476

Caryophyllene

99

10

38,211

1,165

Trans-,alpha,-Bergamotene

91

11

38,857

0,398

Humulene

99

12

40,565

0,161

beta-Bisabolene

98

13

41,618

3,300

Cis-alpha-Bisabolene

90

NO

Kualitas Kesamaan

Komponen

Senyawa

4.1.4. Hasil Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Tabel 4.2. Kultur Bakteri Escherichia coli Koloni Pertumbuhan

Penampakan Mikroskopis Perbesaran 100x

Koloni hitam dengan pinggiran

Gram negatif, batang pendek sedikit

berwarna emas metalik pada EMB

oval, susunan tidak teratur


27

Tabel 4.3. Kultur Bakteri Pseudomonas aeruginosa Koloni Pertumbuhan

Penampakan Mikroskopis Perbesaran 100x

Koloni tumbuh pada media PIA

Gram negatif, batang pendek, warna

menghasilkan warna kehijauan

kemerahan

Tabel 4.5. Kultur Bakteri Staphylococcus aureus murni Koloni Pertumbuhan Bakteri Uji

Penampakan Mikroskopis

S.aureus no 6

Perbesaran 100x

Koloni padat, bulat, halus, dan

Gram positif, warna ungu kemerahan,

berwarna putih kekuningan

berkelompok tidak teratur


28

Tabel 4.4. Uji Kultur Bakteri Staphylococcus aureus Uji H2O2 3%

Menghasilkan gelembung yang banyak pada kaca objek no 6

Uji pada Media Pelarut Fosfat

Melarutkan fosfat paling banyak

Uji pada Media KIA (Kingler Iron

Koagulasi Susu Skim 20%

Agar)

Terdapat warna kehitaman di titik

Penggumpalan dan pengendapan

tempat penusukan tabung no 6

sempurna dari susu pada tabung no 6

4.1.5. Hasil Uji Pertumbuhan Biofilm Bakteri Pertumbuhan biofilm bakteri uji yang diinkubasi pada suhu 37oC selama 72 jam dapat dilihat pada grafik di bawah. Densitas optik suspensi bakteri uji yang digunakan 0,2.


29

Densitas Optik Biofilm (OD595)

0.829

0.467 0.324

Gambar 4.1. Grafik Uji Pertumbuhan Biofilm Bakteri Uji (OD595nm)

4.1.6. Hasil Uji Aktivitas Antibiofilm Minyak Atsiri Herba Kemangi Uji aktivitas antibiofilm minyak atsiri terhadap biofilm Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, dan Staphylococcus aureus. Grafik persentase hasil uji aktivitas antibiofilm minyak atsiri dapat diliat pada gambar dibawah. PERSENTASE AKTIVITAS ANTIBIOFILM

50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0

Pencegahan

Penghambatan

Penghancuran

1.00%

40.68

41.28

14.64

0.75%

27.66

36.87

22.68

0.50%

20.24

35.47

23.92

0.25%

13.63

34.07

21.92

Gambar 4.2. Aktivitas Antibiofilm Minyak Atsiri Terhadap Bakteri Escherichia coli


PERSENTASE AKTIVITAS ANTIBIOFILM

30

60 50 40 30 20 10 0

Pencegahan

Penghambatan

Penghancuran

1.00%

34.89

36.69

15.14

0.75%

34.74

41.59

34.4

0.50%

34.14

42.94

41.13

0.25%

20.54

40.47

42.66

Gambar 4.3. Aktivitas Antibiofilm Minyak Atsiri Terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa

PERSENTASE AKTIVITAS ANTIBIOFILM

80 70 60 50 40 30 20 10 0

Pencegahan

Penghambatan

Penghancuran

1.00%

16.41

41.53

46.41

0.75%

28.75

51.95

53.67

0.50%

34.64

53.69

54.11

0.25%

43.06

54.41

58.1

Gambar 4.4. Aktivitas Antibiofilm Minyak Atsiri Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus


31

4.1.7. Hasil Uji Pertumbuhan Biofilm Staphylococcus aureus Uji pertumbuhan biofilm Staphylococcus aureus dilakukan berdasarkan perbedaan waktu pertumbuhan. Densitas optik bakteri yang digunakan sebagai inisiasi untuk penumbuhan biofilm adalah 0,5 (DO = 0,5) dan suhu inkubasi bakteri adalah 37 oC.

Densitas Optik Biofilm (DO595)

0.87 0.75

0.46 0.30

Waktu inkubasi (jam)

Gambar 4.5. Densitas Optik Pertumbuhan Biofilm Staphylococcus aureus (OD595nm) 4.1.8. Hasil Uji Aktivitas Terseleksi Penghancuran Biofilm Staphylococcus aureus Uji aktivitas terseleksi penghancuran biofilm Staphylococcus aureus dibuat berdasarkan perbandingan konsentrasi dengan suhu, konsentrasi dengan waktu kontak, dan waktu kontak dengan suhu. Konsentrasi yang dibuat 0,25%, 0,625%, dan 1%. Suhu yang digunakan 250C, 370C, dan 500C. Waktu kontak ekstrak dengan biofilm yang dilakukan adalah 30 menit, 60 menit, dan 90 menit. Hasil contour plot respon surface dapat dilihat pada gambar 4.6 dan 4.7.


32

Gambar 4.6. Contour plot Persentase Penghancuran Biofilm dari Perbandingan Suhu dengan Konsentrasi

Gambar 4.7. Contour plot Persentase Penghancuran Biofilm dari Perbandingan Waktu Kontak dengan Suhu Contour plot di atas menunjukkan aktivitas penghancuran biofilm Staphylococcus

aureus

berdasarkan

perbandingan

pengaruh

konsentrasi dengan suhu dan waktu kontak dengan suhu. Hasil pengolahan data dengan menggunakan respon surface analysis bertujuan untuk mendapatkan konsentrasi, suhu, dan waktu kontak terbaik untuk penghancuran biofilm Staphylococcus aureus. Saat data kondisi optimal untuk penghancuran biofilm sudah didapatkan, maka selanjutnya dilakukan kembali uji pada kondisi optimal penghancuran biofilm untuk dibandingkan dengan Biorem sebagai kontrol positif penghancuran biofilm.


33

Hasil uji aktivitas optimal minyak atsiri kemangi yang dibandingkan dengan kontrol positif yaitu Biorem dan kontrol

Persentase Aktivitas Penghancuran

pelarut minyak atsiri dengan DMSO 9,8%. 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 -10 Series1

Ekstrak 0.25%

DMSO 9.8%

Biorem 0.25%

65.88

2.74

75.59

Perlakuan Uji

Gambar 4.8. Grafik Hasil Uji Aktivitas Terseleksi Minyak Atsiri Kemangi 4.2. Pembahasan Salah satu tanaman obat tradisional yang banyak dimanfaatkan masyarakat Indonesia adalah Ocimum americanum atau yang lebih dikenal dengan kemangi (Umar, 2011). Hasil penelitian yang dilakukan oleh Thaweboon & Thaweboon tahun 2009, menunjukkan bahwa minyak atsiri kemangi memiliki aktivitas antimikroba yang juga mampu dalam menghancurkan biofilm dari bakteri Streptococcus mutans di mulut. Hasil penelitian lain yang telah ada juga menyebutkan bahwa minyak atsiri dari kemangi memiliki efek antibakteri, antituberkolosis, dan antijamur (Sabra et al, 2007; Ntezurubanza et al,1986; Wungsintaweekul et al, 2009; Parida et al, 2014). Bahan utama yang digunakan pada penelitian adalah minyak atsiri dari herba kemangi (Ocimum americanum L.), dan telah di determinasi di Herbarium Bogoriense Pusat Penelitian Botani, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI), Bogor. Minyak atsiri herba kemangi didapat dengan cara destilasi uap-air dengan menggunakan destilasi uap-air yang prosesnya dilakukan selama 4


34

jam. Metode destilasi uap dipilih karena merupakan salah satu metode yang sudah lama disetujui dan resmi untuk isolasi minyak atsiri dari bahan tanaman (Y. Li et al, 2014). Metode ini juga sudah dilakukan oleh Parida et al tahun 2014 untuk mengekstraksi minyak atsiri dari daun kemangi. Hasil rendemen minyak atsiri kemangi yang didapat pada penelitian Parida et al adalah 0.2% v/b sedangkan penelitian yang saat ini dilakukan menghasilkan rendemen yang lebih rendah yaitu 0,18 % v/b. Perbedaan dapat disebabkan oleh faktor lingkungan yaitu suhu udara dan tanah, intensitas cahaya dan kondisi kelembaban. Sintesis metabolit sekunder sangat berkaitan dengan jumlah cahaya yang dapat diterima oleh tumbuhan. Namun, faktor lingkungan sepertinya yang paling berpengaruh pada akumulasi total minyak atsiri (Shadia et al. 2007). Minyak atsiri yang didapat selanjutnya dianalisis komponen kimianya dengan

menggunakan

GCMS

(Gas

Chromatography-Mass

Spectrophotometer). Tujuannya adalah untuk mengetahui komponenkomponen kimia yang terdapat didalam minyak atsiri. Hasil analisis kimia minyak atsiri menunjukkan terdapat 13 komponen senyawa didalamnya. Senyawa yang paling dominan diantaranya Sitral (43,94%) dan β-Sitral ( 31,737%). Hasil jumlah komponen kimia yang didapat lebih rendah dibandingkan jumlah komponen minyak atsiri pada penelitian Parida et al tahun 2014 yang menunjukkan terdapat 18 komponen kima dari minyak atsirinya. Perbedaan jumlah komponen ini kemungkinan penyebabnya sama dengan perbedaan jumlah rendemen minyak atsiri yang sebelumnya dibahas. Perbedaan ini juga kemungkinan dapat terjadi akibat perbedaan teknik analisis komponen kimia yang dilakukan oleh Parida et al tahun 2014 yang menggunakan

kormatografi

gas-cair

sedangkan

pada

penelitian

ini

menggunakan kromatografi gas-spektroskopi massa. Meskipun jumlah komponen berbeda tetapi komponen utama dan jumlah komponen utama dari minyak atsiri kemangi pada penelitian Parida dan yang saat ini dilakukan hampir sama. Komponen utama dari kedua penelitian ini adalah sitral dan βsitral dengan kadar pada penelitian Parida et al masing-masing yaitu 47,18%


35

dan 36,57% sedangkan pada penelitian ini didapatkan kadar masing-masing yaitu 43,94% dan 31,73%. Minyak atsiri kemangi yang digunakan memiliki komponen kimia terbesarnya yaitu sitral. Sitral merupakan monoterpen yang sudah diketahui memiliki aktivitas farmakologi, termasuk didalamnya sebagai antibakteri, antijamur, antibakteri, insektisida, dan antibiofilm (Lima et al. 2012; Kalia, 2015; Chaimovitsh et al, 2010). Sitral sebagai antibiofilm dengan menghambat quorum sensing (QS) sehingga pembentukan biofilm terhambat. Pada penelitian oleh Dalleau tahun 2007, menunjukkan sitral dapat menghambat secara signifikan dari aktivitas metabolik ragi yang termasuk dalamnya Candida albicans biofilm ketika ditambahkan pada konsentrasi kurang dari 2,25 mg/mL pada saat awal pertumbuhan biofilm jamur. Mekanisme yang mungkin terjadi saat penghambatan QS yaitu persaingan pengikatan molekul sinyal pada reseptor, degradasi sinyal enzimatik seperti pada asil homoserine lakton (AHL) acylases (Sistem komunikasi sel-sel yang memungkinkan untuk mengkoordinasikan ekspresi gen), dan penghambatan penerimaan molekul sinyal (Verbel et al, 2012). Sitral sebagai antibakteri dan antibiofilm dapat mengikat oksigen saat didalam tubuh untuk membuat epoksida intermediet yang dapat mengalkilasi DNA, protein dan sejumlah biomolekular yang lainnya (Kalia, 2015 & Saddiq, 2010). Selain itu pada penelitian yang dilakukan Thaweboon tahun 2012, menunjukkan minyak atsiri kemangi secara keseluruhan juga dapat bekerja sebagai antibiofilm dengan cara menghancurkan biofilm dari Streptococcus mutans yang sudah terbentuk. Minyak atsiri dibuat serial konsentrasi uji 1%, 0,75%, 0,5%, dan 0,25% v/v. Serial konsentrasi dibuat dengan mengencerkan minyak atsiri dengan DMSO 9,8%. DMSO digunakan karena merupakan pelarut yang dapat melarutkan hampir semua senyawa polar maupun non polar dan dapat digunakan sebagai pengencer ekstrak. Pelarut DMSO merupakan pelarut organik dan tidak bersifat bakterisidal hingga konsentrasi 10%. DMSO direkomendasikan digunakan sebagai pelarut minyak atsiri (Assidqi, 2012 & Thaweboon, 2009).


36

Pada penelitian ini minyak atsiri dilakukan uji aktivitas antibiofilm terhadap

bakteri

Escherichia

coli,

Pseudomonas

aeruginosa,

dan

Staphylococcus aureus menggunakan metode Microtitter Plate Biofilm Assay. Pengujian ini dilakukan terhadap tiga aktivitas antibiofilm yaitu pencegahan pertumbuhan biofilm, penghambatan pertumbuhan biofilm dan penghancuran biofilm. Bakteri yang digunakan dalam penelitian ini adalah Escherichia coli, Pseudomonas

aeruginosa

yang

didapat

dari

koleksi

laboratorium

mikrobiologi LIPI dan Staphylococcus aureus hasil isolasi. Ketiga bakteri yang digunakan ini dapat menyebabkan infeksi pada manusia. Escherichia coli merupakan flora normal di dalam usus tetapi dapat menjadi patogen jika jumlah bakteri ini dalam saluran pencernaan meningkat atau berada di luar usus. Escherichia coli dapat menghasilkan enterotoksin yang menyebabkan beberapa kasus diare, sepsis bila bakteri dapat memasuki aliran darah, infeksi saluran kemih, dan penyebab utama meningitis pada bayi (Jawetz et al, 1996). Pseudomonas aeruginosa dapat menyebabkan infeksi pada luka, membentuk nanah yang berwarna biru hijau, meningitis, dan infeksi saluran air kemih akibat pemakaian kateter dan alat-alat medis yang ditumbuhi biofilm bakteri (Jawetz, et al, 1996). Infeksi oleh Staphylococcus aureus ditandai dengan kerusakan jaringan yang disertai abses bernanah. Beberapa penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri ini adalah bisul, jerawat, impetigo, dan infeksi luka. Infeksi yang lebih berat diantaranya pneumonia, mastitis, plebitis, meningitis, infeksi saluran kemih, dan osteomielitis (Ryan et al, 1994; Warsa, 1994). Bakteri uji dikultur pada media padat untuk diamati bentuk morfologinya. Bakteri Escherichia coli ditumbuhkan pada media EMB (Eosin Methyl Blue Agar) dan dilakukan pewarnaan Gram untuk melihat bentuk mikroskopisnya. Hasil dari inokulan menunjukkan ciri khas dari Escherichia coli yaitu pada media EMB menghasilkan warna metalik emas dan bentuk mikroskopis terlihat batang pendek sedikit oval, susunan tidak teratur, dan berwarna kemerahan. Bakteri Pseudomonas aeruginosa ditumbuhkan pada media PIA (Pseudomonas Isolation Agar) dan dilakukan


37

pewarnaan Gram untuk melihat bentuk mikroskopisnya. Hasil dari inokulan menunjukkan ciri dari Pseudomonas aeruginosa yaitu pada media PIA inokulan yang terbentuk menghasilkan warna hijau yang merupakan ciri khasnya dan bentuk mikroskopisnya batang pendek, warna kemerahan, dan tidak teratur. Hasil dari inokulan Staphylococcus aureus menunjukkan ciri khasnya yaitu secara makroskopis koloni padat, bulat, halus, dan berwarna putih kekuningan dan secara mikroskopis sel yang berbentuk bulat berwarna ungu dan berkoloni seperti buah anggur. Uji biokimia dilakukan untuk memastikan bahwa inokulan adalah spesies Staphylococcus aureus dengan menggunakan larutan H2O2 3%, media pelarut fosfat, media KIA, dan susu skim 20%. Bakteri hasil inokulasi dapat dipastikan Staphylococcus aureus jika pada uji H2O2 3% menghasilkan gelembung gas yang banyak, uji dengan susu skim 20% menyebabkan menggumpalnya susu, positif melarutkan fosfat pada media fosfat, dan terdapatnya titik kehitaman pada dasar penusukan di media KIA. Dari keseluruhan uji yang dilakukan terhadap tujuh jenis bakteri yang diuga Staphylococcus aureus menunjukkan bahwa bakteri nomor 6 positif merupakan Staphylococcus aureus. Setelah semua bakteri uji dipastikan sesuai, maka selanjutnya dilakukan uji pembentukan biofilm. Hal ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan bakteri uji yang digunakan dalam membentuk biofilm. Suspensi bakteri dengan densitas optik 0.2 (DO600) pada masing-masing bakteri dimasukkan ke dalam mikroplat yang berbeda dan diinkubasi pada suhu 370C selama 72 jam. Densitas optik biofilm Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, dan Staphylococcus aureus yang terbentuk masing-masing adalah 0,324, 0,66, dan 0,829. Grafik pertumbuhan dapat dilihat pada gambar 4.1. Hal ini menunjukkan bahwa bakteri dapat membentuk biofilm yang baik, sehingga metode dan bakteri yang digunkan sudah cocok dan dapat digunakan untuk uji aktivitas antibiofilm. Uji aktivitas antibiofilm minyak atsiri dilakukan terhadap pencegahan, penghambatan, dan penghancuran biofilm Escherichia coli. Data persentase pencegahan biofilm Escherichia coli pada gambar 4.2. Grafik pada gambar menunjukkan grafik eksponensial dimana terjadi peningkatan aktivitas


38

pencegahan biofilm seiring dengan meningkatnya konsentrasi minyak atsiri. Hasil tertinggi ditunjukan pada konsentrasi 1% dengan persentase pencegahan sebesar 40,68% dan yang terendah pada konsentrasi 0,25% dengan persentase pencegahan 13,63%. Hasil uji statistik pencegahan biofilm Escherichia coli dapat dilihat pada lampiran 10. Uji normalitas menunjukkan data pencegahan biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0,05) dan pada uji homogenitas menunjukkan data pencegahan biofilm tidak terdistribusi homogen (p ≤ 0,05) sehingga dilanjutkan ke uji Kruskal Wallis. Hasil uji Kruskal Wallis (p ≤ 0,05) menunjukkan terdapat perbedaan yang bermakna pada data uji pencegahan biofilm Escherichia coli sehingga dilanjutkan ke uji Post Hoc untuk melihat perbedaanya. Hasil uji post hoc menunjukkan densitas optik kontrol negatif berbeda secara bermakna terhadap masingmasing konsentrasi uji. Persentase aktivitas penghambatan Eschercia coli dapat dilihat pada gambar 4.2. Grafik pada gambar menunjukkan grafik eksponensial dimana terjadi

peningkatan

aktivitas

penghambatan

biofilm

seiring

dengan

meningkatnya konsentrasi minyak atsiri. Penghambatan biofilm tertinggi ditunjukkan pada konsentrasi 1% dengan persentase penghambatan sebesar 41,28% dan yang terendah pada konsentrasi 0,25% dengan persentase pencegahan 34,07%. Hasil uji statistik penghambatan biofilm Escherichia coli dapat dilihat pada lampiran 11. Uji normalitas menunjukkan pencegahan biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0,05) dan pada uji homogenitas menunjukkan penghambatan biofilm terdistribusi homogen (p ≥ 0,05). Sehingga analisa dilanjutkan dengan uji Anova. Hasil uji Anova (p ≤ 0,05) menunjukkan terdapat perbedaan yang bermakna pada data uji penghambatan biofilm Escherichia coli sehingga dilanjutkan ke uji post hoc untuk melihat perbedaanya. Hasil uji Post Hoc menunjukkan densitas optik kontrol negatif berbeda secara bermakna terhadap masing-masing konsentrasi uji. Uji terakhir terhadap Escherichia coli yaitu penghancuran biofilm. Persentase aktivitas penghancuran Eschercia coli dapat dilihat pada gambar 4.2. Grafik pada gambar menunjukkan grafik dengan skema sigmoid, dimana aktivitas terbaik berada di tengah yaitu pada konsentrasi 0,5% dengan


39

aktivitas penghancuran 23,92% dan turun kembali pada konsentrasi 0,25% dengan persentase aktivitas penghancuran sebesar 21,92%. Aktivitas penghancuran tersendah pada konsentrasi 1% dengan aktivtas penghancuran sebesar 14,64%. Hasil uji statistik penghancuran biofilm Escherichia coli dapat dilihat pada lampiran 12. Hasil uji normalitas menunjukkan pencegahan biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0.05) dan pada uji homogenitas menunjukkan pencegahan biofilm terdistribusi homogen (p ≥ 0.05) sehingga memenuhi persyataran untuk uji Anova. Hasil uji Anova (p ≥ 0.05) menunjukkan tidak terdapat perbedaan yang bermakna. Uji aktivitas antibiofilm minyak atsiri selanjutnya dilakukan terhadap pencegahan, penghambatan, dan penghancuran biofilm Pseudomonas aeruginosa. Persentase pencegahan biofilm Pseudomonas aeruginosa pada gambar 4.3. Grafik pada gambar menunjukkan peningkatan aktivitas pencegahan biofilm seiring dengan meningkatnya konsentrasi minyak atsiri. Pencegahan biofilm tertinggi ditunjukkan pada konsentrasi 1% dengan persentase pencegahan sebesar 34,89% dan yang terendah pada konsentrasi 0,25% dengan persentase pencegahan 20,54%. Hasil uji statistik pencegahan biofilm Pseudomonas aeruginosa dapat dilihat pada lampiran 13. Hasil uji normalitas menunjukkan pencegahan biofilm Pseudomonas aeruginosa terdistribusi normal (p ≥ 0,05) tetapi menunjukkan

pencegahan

biofilm

uji homogenitas (p ≤ 0,05)

Pseudomonas

aeruginosa

tidak

terdistribusi homogen, sehingga analisa dilanjutkan dengan uji KruskalWallis. Hasil uji Kruskal-Wallis (p ≤ 0,05) menunjukkan terdapat perbedaan yang bermakna, maka dilakukan uji post hoc. Hasil uji post hoc menunjukkan densitas optik kontrol negatif berbeda secara bermakna terhadap masingmasing konsentrasi uji. Persentase aktivitas penghambatan biofilm Pseudomonas aeruginosa dapat dilihat pada gambar 4.3. Grafik pada gambar menunjukkan grafik dengan skema sigmoid, dimana aktivitas terbaik berada di tengah yaitu pada konsentrasi 0,5% dengan aktivitas penghambatan sebesar 42,94% dan turun kembali pada konsentrasi 0,25% degan persentase aktivitas penghambatan sebesar 40,47%. Aktivitas penghambatan terendah pada konsentrasi 1%


40

dengan

aktivtas

penghancuran

sebesar

36,69%.

Hasil

uji

statistik

penghambatan biofilm Pseudomonas aeruginosa dapat dilihat pada lampiran 14. Hasil uji normalitas menunjukkan pencegahan biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0,05) dan pada uji homogenitas menunjukkan pencegahan biofilm terdistribusi homogen (p ≥ 0,05) sehingga dilanjutkan ke uji Anova. Hasil uji Anova (p ≤ 0,05) menunjukkan terdapat perbedaan yang bermakna sehingga dilanjutkan ke uji post hoc. Hasil uji post hoc menunjukkan densitas optik kontrol negatif berbeda secara bermakna terhadap masing-masing konsentrasi uji. Uji

terakhir

terhadap

Pseudomonas

aeruginosa

adalah

uji

penghancuran biofilm. Persentase aktivitas penghancuran Pseudomonas aeruginosa dapat dilihat pada gambar 4.3. Grafik pada gambar menunjukkan peningkatan aktivitas penghancuran biofilm seiring dengan menurunnya konsentrasi minyak atsiri. Penghancuran biofilm tertinggi ditunjukkan pada konsentrasi 0,25% dengan persentase penghancuran sebesar 42,66% dan yang terendah pada konsentrasi 1% dengan persentase penghancuran biofilm sebesar 15,14%. Hasil uji statistik penghancuran biofilm Pseudomonas aeruginosa yang dapat dilihat pada lampiran 15. Hasil uji normalitas menunjukkan penghancuran biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0,05) dan pada uji homogenitas menunjukkan penghancuran biofilm terdistribusi homogen (p ≥ 0,05) sehingga dilanjutkan uji Anova. Hasil uji Anova (p ≤ 0,05) menunjukkan terdapat perbedaan yang bermakna pada konsentrasi uji. Selanjutnya, dilakukan uji post hoc yang menjelaskan tentang perbandingan densitas optik antar perlakuan uji. Hasil uji Post Hoc menunjukkan densitas optik kontrol negatif berbeda secara bermakna terhadap masing-masing konsentrasi uji. Uji aktivitas antibiofilm minyak atsiri yang terakhir dilakukan terhadap

pencegahan,

Staphylococcus

aureus.

penghambatan,

dan

Persentase

aktivitas

penghancuran

biofilm

pencegahan

biofilm

Staphylococcus aureus dapat dilihat pada gambar 4.4. Grafik pada gambar menunjukkan peningkatan aktivitas pencegahan biofilm seiring dengan menurunnya konsentrasi minyak atsiri. Pencegahan biofilm tertinggi


41

ditunjukan pada konsentrasi 0,25% dengan persentase pencegahan sebesar 43,06% dan yang terendah pada konsentrasi 1% dengan persentase pencegahan biofilm sebesar 16,41%. Hasil uji statistik pencegahan biofilm Staphylococcus aureus dapat dilihat pada lampiran 16. Hasil uji normalitas menunjukkan pencegahan biofilm Staphylococcus aureus terdistribusi normal (p ≥ 0,05) dan

uji homogenitas menunjukkan pencegahan biofilm

Staphylococcus aureus terdistribusi homogen (p ≥ 0,05), sehingga dilanjutkan uji Anova. Hasil uji Anova (p ≤ 0,05) menunjukkan terdapat perbedaan yang bermakna. Sehingga dilanjutkan dengan uji post hoc yang menjelaskan tentang perbandingan densitas optik antar perlakuan uji. Hasil uji post hoc menunjukkan bahwa minyak atsiri kemangi dapat mencegah biofilm Staphylococcus aureus secara bermakna. Persentase aktivitas penghambatan biofilm Staphylococcus aureus dapat dilihat pada gambar 4.4. Grafik pada gambar menunjukkan peningkatan aktivitas penghambatan biofilm seiring dengan menurunnya konsentrasi minyak atsiri. Penghambatan biofilm tertinggi ditunjukan pada konsentrasi 0,25% dengan persentase penghambatan sebesar 54,41% dan yang terendah pada konsentrasi 1% dengan persentase penghambatan biofilm sebesar 41,53%. Hasil uji statistik penghambatan biofilm Staphylococcus aureus dapat dilihat pada lampiran 17. Hasil uji normalitas menunjukkan pencegahan biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0,05) dan pada uji homogenitas menunjukkan pencegahan biofilm tidak terdistribusi homogen ( p ≤ 0,05), sehingga dilakukan uji Kruskal Wallis. Hasil uji Kruskal Wallis (p ≤ 0,05) menunjukkan terdapat perbedaan yang bermakna pada perbedaan konsentrasi uji sehingga dilanjutkan uji post hoc yang. Hasil uji post hoc menunjukkan bahwa minyak atsiri kemangi dapat menghambat pertumbuhan biofilm Staphylococcus aureus secara bermakna terhadap kontrol negatif. Uji antibiofilm yang terakhir dilakukan terhadap Staphylococcus aureus adalah aktivitas penghancuran biofilmnya. Persentase aktivitas penghancuran biofilm Staphylococcus aureus dapat dilihat pada gambar 4.4. Grafik menunjukan aktvitas yang sama seperti aktivitas pencegahan dan penghambatan biofilm Staphylococcus aureus sebelumnya. Grafik pada


42

gambar menunjukkan peningkatan aktivitas penghancuran biofilm seiring dengan menurunnya konsentrasi minyak atsiri. Penghancuran biofilm tertinggi

ditunjukkan

pada

konsentrasi

0,25%

dengan

persentase

penghancuran sebesar 58,10% dan yang terendah pada konsentrasi 1% dengan persentase penghancuran biofilm sebesar 46,41%. Hasil uji statistik penghancuran biofilm Staphylococcus aureus dapat dilihat pada lampiran 18. Hasil uji normalitas menunjukkan penghancuran biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0,05) dan pada uji homogenitas menunjukkan penghancuran biofilm terdistribusi homogen (p ≥ 0,05) sehingga dilanjutkan uji Anova. Hasil uji Anova (p ≤ 0,05) menunjukkan aktivitas penghancuran biofilm berbeda secara bermakna, sehingga dilanjutkan ke uji post hoc. Hasil uji post hoc menunjukkan bahwa minyak atsiri kemangi dapat menghancurkan biofilm Staphylococcus aureus secara bermakna terhadap kontrol negatif. Setelah didapatkan hasil uji aktivitas antibiofilm kemangi, maka penelitian dilanjutkan untuk menguji aktivitas terbaik dari aktivitas antibiofilm minyak atsiri kemangi. Aktivitas antibiofilm terbaik kemangi yang paling baik dapat dilihat pada persentase aktivitas penghancuran biofilm Staphylococcus aureus. Hasil persentase penghancuran biofilm tertinggi terjadi pada biofilm bakteri Staphylococcus aureus yaitu 58,1%. Nilai penghancuran tersebut jauh di atas nilai aktivitas antibiofilm pada perlakuan yang lain. Hal ini yang menjadi dasar pemilihan aktivitas penghancuran biofilm Staphylococcus aureus untuk dilakukan optimasinya. Sebelum melakukan optimasi, dilakukan uji penumbuhan biofilm untuk mencari waktu pertumbuhan biofilm terbaik dengan waktu lebih cepat. Hasil dari penumbuhan biofilm dapat dilihat pada gambar 4.5. Hasil pertumbuhan biofilm terbaik memiliki densitas optik sebesar 0,87 dengan waktu inkubasi 48 jam. Metode Response Surface Analysis (RSA) digunakan untuk merancang dan mengolah data penghancuran biofilm. Faktor yang digunakan untuk optimasi biofilm adalah konsentrasi, suhu dan waktu kontak. Rancangan optimasi yang didapatkan dari RSA sebanyak 20 perlakuan uji yang dapat dilihat pada lampiran 20. Setelah didapatkan hasil densitas optik


43

dari 20 perlakuan uji RSA, data dimasukan ke dalam rancangan dan akan diplotkan untuk didapatkan contour plot yang menunjukkan perbandingan aktivitas dengan faktor uji yang digunakan. Hasil contour plot ini digunakan untuk mengetahui suhu, konsentrasi dan waktu yang optimal dalam menghasilkan aktivitas antibiofilm yang paling baik. Hasil contour plot dapat dilihat pada gambar 4.6 dan 4.7. Pengaruh konsentrasi pada contour plot menunjukkan bahwa semakin kecil konsentrasi menunjukkan aktivtias penghancuran biofilm yang semakin baik pada Staphylococcus aureus dibandingkan dengan konsentrasi yang besar. Selain konsentrasi, pengaruh suhu dan juga waktu kontak memiliki peranan dalam proses penghancuran biofilm. Semakin tinggi suhu dan lamanya waktu kontak ekstrak dengan biofilm dapat menyebabkan penghancuran biofilm oleh minyak atsiri kemangi yang semakin baik. Peningkatan suhu dapat menyebabkan terganggunya kestabilan lapisan biofilm yang terbentuk dari polisakarida, protein, dan DNA sehingga menyebabkan semakin mudahkan minyak atsiri untuk masuk ke bagian dalam biofilm bakteri. Waktu kontak yang lama akan menyebabkan minyak atsiri yang dapat masuk kedalam biofilm bakteri akan semakin banyak sehingga akan dapat menghancurkan biofilm bakteri tersebut. Warna yang ada pada contour plot menunjukkan aktivitas penghancuran biofilm. Data RSA yang didapatkan menunjukkan perlakuan uji optimal minyak atsiri untuk menghancurkan biofilm Staphylococcus aureus yaitu pada konsentrasi 0,25%, suhu degradasi 50oC, dan waktu kontak 0.79 jam (48 menit). Hasil uji terseleksi penghancuran biofilm Staphylococcus aureus yang didapat dari RSA dilakukan uji statistik yang dapat dilihat pada lampiran 18. Hasil uji normalitas menunjukkan penghancuran biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0.05) dan pada uji homogenitas menunjukkan penghancuran biofilm terdistribusi homogen (p ≥ 0.05) sehingga dilanjutkan uji Anova. Hasil uji Anova (p ≤ 0.05) menunjukkan aktivitas optimasi penghancuran biofilm berbeda secara bermakna, Sehingga dilanjutkan ke uji post hoc. Hasil uji post hoc menunjukkan bahwa minyak atsiri kemangi dapat menghancurkan biofilm Staphylococcus aureus secara bermakna terhadap kontrol negatif.


44

Persentase optimasi penghancuran biofilm Staphylococcus aureus dapat dilihat pada gambar 4.8. grafik pada gambar menunjukkan bahwa kontrol positif (Biorem) memiliki persentase penghancuran biofilm yang lebih baik dengan 75,59% sedangkan minyak atsiri menghancurkan 65.79%. sedangkan DMSO 9.8% hampir tidak memiliki aktivitas penghancuran karena penghancurannya hanya sebesar 2.73%. Meskipun persentase penghancuran biofilm optimal minyak atsiri lebih rendah dibandingkan dengan kontrol positif. Namun, perbedaan yang tidak terlalu jauh menunjukkan bahwa minyak atsiri mempunyak potensi yang sangat baik untuk dikembangkan sebagai penghancur biofilm dari bakteri Stapylococcus aureus.


BAB V PENUTUP 5.1 KESIMPULAN 1. Minyak atsiri kemangi memiliki aktivitas pencegahan, penghambatan, dan penghancuran biofilm Escherichia coli dengan persentase aktivitas tertinggi pada konsentrasi berturut-turut yaitu 1%, 1%, dan 0,5%. 2. Minyak atsiri kemangi memiliki aktivitas pencegahan, penghambatan, dan

penghancuran

biofilm

Pseudomonas

aeruginosa

dengan

persentase aktivitas tertinggi pada konsentrasi berturut-turut yaitu 1%, 0.5%, dan 0,5% 3. Minyak atsiri kemangi memiliki aktivitas pencegahan, penghambatan, dan penghancuran biofilm Staphylococcus aureus dengan persentase aktivitas tertinggi pada konsentrasi 0,25% 4. Aktivitas optimal minyak atsiri herba kemangi (Ocimum americanum L.) dari penelitian ini ditunjukan pada aktivititas penghancuran biofilm dari Staphylococcus aureus. Kondisi optimal minyak atsiri herba kemangi untuk penghancuran biofilm Staphylococcus aureus yaitu pada konsentrasi 0,25%, suhu 500C dan waktu kontak ekstrak 48 menit dengan menghasilkan persentase penghancuran biofilm sebesar 65,79%.

5.2 SARAN Diperlukan penelitian lanjutan untuk mengidentifikasi senyawa aktif spesifik dan mekanisme kerja dari minyak atsiri herba kemangi (Ocimum americanum L.) sebagai antibiofilm.

45


DAFTAR PUSTAKA Assidqi, et al. 2012. Potensi Ekstrak Daun Patikan Kebo (Euphorbia Hirta) Sebagai Antibakteri terhadap Aeromonas Hydrophila Secara in Vitro. Surabaya. Journal of Marine and Coastal Science - Universitas Airlangga. Hal 113-124 Bezerra et al. 2008. Response surface methodology (RSM) as a tool for optimization in analytical chemistry. Elsevier. Hal 965-977 Bjarnsholt et al. 2011. Biofilm Infections, Springer-Verlag. New York. Hal : 251255 Chaimovitsh et al. 2010. Microtubules are An Intracellular Target of The Plant Terpene Citral. The Plant Journal. Vol 61 Hal 399-408 Cortés et al. 2011. Biofilm Formation, Control and Novel Strategies for Eradication. Department of Restorative Dentistry. Brazil. Formatex. Hal 896-905 Dhale et al. 2010. Premliminary Sreening of Antibacterial and Phytochemical Studies of Ocimum americanum Linn. Journal of Ecobiotechnology. ISSN 2077-0464. Hal 11-13 Dorland. 1998. Kamus Saku Kedokteran Dorland. Edisi 25. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal 555 Fardiaz, et al. 1981. Masalah keamanan pangan dalam hubungannya dengan mikrobiologi veteri-neri. Kumpulan makalah Kongres Nasional Mikrobiologi ke III. Jakarta. Hal : 307 - 310. Haris et al. 2002. An Introduction to Staphylococcus aureus, and Techniques for Identifying and Quantifying S.aureus Adhesins in Relation to Adhesion to Biomaterials Review. European Cells and Materials Vol. 4. Hal 39-60. ISSN 1473-2262 Hendayana, S., 1994. Kimia Analitik Instrumen. Edisi kesatu, IKIP Press. Semarang. Hal. 219 dan 243. Holt, J.G. et al. 1994. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology, Ninth Edition, Lippincot Williams & Wilkins, Philadelphia, USA. Jawetz. E., J. Melnick, L. Adelberg, E.A. 1995. Mikrobiologi untuk Profesi Kesehatan, Edisi 16. Alih Bahasa oleh Dr. H. Tonang. Jakarta : EGC Jawetz. E., J. Melnick, L. Adelberg, E.A. 1996. Mikrobiologi Untuk Profesi Kesehatan, Gramedia, Jakarta. Jawetz. E., J. Melnick, L. Adelberg, E.A. 2005. Microbiologi Untuk Profesi Kesehatan. Terjemahan Huriati dan Hartanto. Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Kalia, Vipin Chandra. 2015. Quorum Sensing Vs Quorum Quenching : A Battle with No End in Sight.

46


47

Kaper et al. 2004 Phatogenic Escherchia coli. Department of Microbiology and Immunology, and the Department of Pediatrics, University of Maryland School of Medicine, Baltimore. Maryland 21201, USA Keller et al, 2014. Oral Biofilm : Entry and Immune System Response. Inside Dentistry Kunarso, Djoko Hadi, 1987. Beberapa Catatan Tentang Bakteri Salmonella. Balai Penelitian dan Pengembangan Lingkungan Laut, Pusat Penelitian dan Pengembangan Oseanologi-LIPI, Jakarta. ISSN 0216-1877 Lima, et al. 2012 Anti-Candida albicans Effectiveness of Citral and Investigation of Mode of Action. Pharmaceutical Biologi. 50(12):1536-41. doi: 10.3109/13880209.2012.694893. Nikolić, et al. 2014. Antibacterial and Anti-biofilm Activity of Ginger (Zingiber officinale (Roscoe)) Ethanolic Extract. Laboratory of Microbiology, Department of Biology and Ecology, Faculty of Science, University of Kragujevac. Kragujevac J. Sci. 36 129-136 Ntezurubanza L, Scheffer JJ, Looman A. Composition of the essential oil of Ocimum americanum grown in Rawanda. Pharm Weekbl Sci 1986; 7: 2736. O'Toole et al. 2000. Biofilm formation as microbial development. Annu Rev Microbiology. Vol 54 Hal 49-79 Paraje, M.G. et al. 2011. Antimicrobial resistance in biofilms. Argentina. Formatex. Hal 736-744 Pers., 2010. Lokakarya Nasional Tanaman Obat Indonesia. PusatInformasi Kehutanan Republik Indonesia. Pitojo, Setijo. 1996. Kemangi dan Selasih. Trubus Agriwidya : Unggara. Potter & perry. 2005. Fundamental Keperawatan edisi 4. Jakarta. EGC. hal : 933 – 942 Pratiwi, Sylvia. T. 2008. Mikrobologi Farmasi. Jakarta : Erlangga Rai, Ravishankar. 2013. Microbial Biofilms and Ttheir Control by Various Antimicrobial Strategies. Department of Studies in Microbiology, University of Mysore. India. Formatex S. Dalleau et al. 2007. In Vitro Activity of Essential oils and Their Major Component Againt Candida albican Yeasts Growing Planktionically and as Biofilm. Munich. European Society of Clinical Microbiology Sarma dan Babu. 2011. Pharmacognostic and Phytochemical Studies of Ocimum americanum. J. Chem. Pharm. Res., 3(3) : 337 – 347. Sastrohamidjojo et al.1985. Kromatografi. Edisi kesatu. Penerbit Liberti. Yogyakarta, hal. 6-8, 23, 26, 27, 46, 53-55, 92 dan 97.


48

Shadia, El-Aziz, Omer, & Sabra. 2007. Chemical Composition of Ocimum americanum Essential Oil and Its Biological Effects Againts, Agrotis ipsilon, (Lepidoptera : Noctuidae). Resech journal of Agriculture and Biological Sciences, 3 (6) : 740-747. Shahzadi et al. 2014. Synthesis of 3, 7-Dimethyl-2, 6-Octadienal Acetals from Citral Extracted from Lemon Grass, Cymbopogon citrates L. Journal Antiviral & Antiretroviral. Vol 6:1 Siemonsma, J.S dan Pliuek, Kasem. 1994. Plants Resources of South-East Asia No.8 Vegetables. Bogor, Indonesia. Hal. 218-220. Sousa et al. 2012. Computational Approaches to Standard-compliant Biofilm Data for Reliable Analysis and Integration. Journal of Integrative Bioinformatics. Sudarsono, Gunawan, D., Wahyuono, S., Danatus, I.A., Purnomo. 2002. Tumbuhan Obat II. Yogyakarta : Pusat Studi Obat Tradisional, pp :136 – 8. Sudjadi . 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar. Yogyakarta Sulianti,Sri Budi. 2008. Studi Fitokimia Ocimum spp : Komponen Kimia Minyak Atsiri Kemangi dan Ruku-Ruku. Berita Biologi 9(3). Bidang Botani, Pusat Penelitian Biologi-LIPI. Thaweboon, Sroisiri., & Thaweboon, Boonyanit. 2009. In Vitro Antimicrobial Activity of Ocimum americanum L. Essential Oil Against Oral Microorganisms. Southeast Asian J Trop Med Public Healt, Vol. 40 No. 5 Todar, K. 2008. Online Text Book of Bacteriology. University of WisconsinMadison Department of Bacteriology. Verber, et al. 2014. Composition, Anti-quorum Sensing and Antimicrobial Activity of Essential Oil from Lippia alba. Colombia. Brazilian Journal of Microbiology 45. Hal 759-767 Verma & Kothiyal. 2012. Pharmacological Activities of Different Species of Tulsi. International Journal of Biopharm & Phytochemical Research; Vol. 1 (1). Hal: 21-37. Y. Li et al. 2014. Essential Oils as Reagents in Green Chemistry, SpringerBriefs in Green Chemistry for Sustainability, DOI 10.1007/978-3319-08449-7_2


LAMPIRAN

49

Lampiran 1. Alur Kerja

a. Escherichia coli

Herba Kemangi (Ocimum americanum L)

Escherichia coli

Identifikasi Herba Kemangi

Inkulasi Bakteri Escherichia coli Media EMB dan Heterotrof

Destilasi Minyak Atsiri Pembuatan Suspensi Bakteri dan Pengukuran OD bakteri

Analisis Komponen Kimia dengan GCMS

Uji Pertumbuhan Biofilm Escherichia coli

Pembuatan Seri Konsentrasi (0,25%, 0,5%, 0,75%, 1%)

Uji Pencegahan Biofilm

Uji Penghambatan Biofilm

Uji Penghancuran Biofilm

Pembacaan dengan Microplate Reader

Analisis Data dan


50

b. Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa

Herba Kemangi (Ocimum americanum L)

Identifikasi Herba Kemangi

Inokulasi Bakteri Pseudomonas aeruginosa di Media PIA dan Heterotrof Destilasi Minyak Atsiri


Pembuatan Suspensi Bakteri dan Pengukuran OD bakteri


Uji Pertumbuhan Biofilm Pseudomonas aeruginosa





Analisis Data dan


51

c. Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus

Herba Kemangi (Ocimum americanum L) Identifikasi Herba Kemangi

Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Staphylococcus aureus

Destilasi Minyak Atsiri

Inokulasi di Media Heterotrof


Pembuatan Suspensi Bakteri dan Pengukuran OD Bakteri


Uji Pertumbuhan Biofilm Staphylococcus aureus





Analisis Data dan

Optimasi Aktivitas terseleksi


52

d. Pewarnaan Gram

Penyiapan reagen pewarnaan Gram (Kristal violet, safranin, lugol, dan etanol 70%)

Isolat bakteri digorekan pada kaca objek dan ditetesi dengan NaCl fisiologis. Diamkan kaca objek beberapa saat hingga NaCl kering lalu difiksasi di atas bunsen

Tambahkan kirstal violet 1 tetes, lalu diamkan 1 menit, setelah itu dibilas dengan air

Tambahkan lugol 1 tetes dan diamkan selama 1 menit, setelah itu bilas dengan air

Tambahkan safranin 1 tetes dan diamkan selama 1 menit, setelah itu bilas dengan etanol dan dikering-anginkan

Pengamatan dengan mikroskop


53

Lampiran 2. Hasil Determinasi


54

Lampiran 3. Hasil Destilasi Minyak Atsiri Herba Kemangi


55

Lampiran 4. Alat dan Bahan

Mikropipet

Timbangan Analitik Mikroskop

Spectrophotometer

Inkubator

Microwave

Mikroplate Reader

Laminar Air Flow Oven

Vortex

Autoklaf

Microplate


56

GC-MS

Destilasi

Mikro Tip

BIOREM

Etanol 96%

Bahan Pewarnaan Gram

Minyak Atsiri Kemangi

Media HTR

Kristal Violet 1%


57

Lampiran 5. Hasil Pembuatan Larutan Uji

1. Minyak Atsiri 100%

2. Variasi Konsentrasi Minyak Atsiri

Lampiran 6. Hasil Uji Pertumbuhan Biofilm Bakteri Uji. Bakteri Uji

Absorbansi 1

2

3

Rata-Rata

Escherichia coli

0,427

0,246

0,299

0,324

Pseudomonas aerginosa

0,645

0,680

0,655

0,660


0,756

0,905

0,826

0,829


58

Lampiran 7. Hasil Uji Antibiofilm Terhadap Escherichia coli a. Densitas Optik Pencegahan Biofilm Escherichia coli Perlakuan

Absorbansi

% Pencegahan

1

2

3

Rata-Rata

Kontrol (-)

0,161

0,179

0,159

0,166

-

Ekstrak 1%

0,095

0,097

0,104

0,099

48,68

Ekstrak 0,75%

0,118

0,122

0,121

0,120

27,66

Ekstrak 0,5%

0,114

0,142

0,142

0,133

20,24

Ekstrak 0,25%

0,147

0,145

0,139

0,144

13,63

b. Densitas Optik Penghambatan Biofilm Escherichia coli Perlakuan

Absorbansi

% Penghambatan

1

2

3

Rata-Rata

Kontrol (-)

0,161

0,179

0,159

0,166

-

Ekstrak 1%

0,092

0,104

0,097

0,098

41,28

Ekstrak 0,75%

0,100

0,101

0,114

0,105

36,87

Ekstrak 0,5%

0,098

0,101

0,123

0,107

35,47

Ekstrak 0,25%

0,112

0,109

0,108

0,110

34,07

c. Densitas Optik Penghancuran Biofilm Escherichia coli Perlakuan

Absorbansi

% Penghancuran

1

2

3

Rata-Rata

Kontrol (-)

0,195

0,130

0,160

0,161

-

Ekstrak 1%

0,134

0,136

0,144

0,138

14,64

Ekstrak 0,75%

0,130

0,123

0,122

0,125

22,68

Ekstrak 0,5%

0,113

0,124

0,132

0,123

23,92

Ekstrak 0,25%

0,128

0,138

0,114

0,127

21,65


59

Lampiran 8. Hasil Uji Antibiofilm Terhadap Pseudomonas aeruginosa

a. Densitas Optik Pencegahan Biofilm Pseudomonas aeruginosa Perlakuan

Absorbansi

% Pencegahan

1

2

3

Rata-Rata

Kontrol (-)

0,442

0,431

0,451

0,441

-

Ekstrak 1%

0,260

0,295

0,307

0,287

34,89

Ekstrak 0,75%

0,291

0,280

0,293

0,288

34,74

Ekstrak 0,5%

0,292

0,288

0,292

0,291

34,14

Ekstrak 0,25%

0,373

0,341

0,338

0,351

20,54

b. Densitas Optik Penghambatan Biofilm Pseudomonas aeruginosa Perlakuan

Absorbansi

% Penghambatan

1

2

3

Rata-Rata

Kontrol (-)

0,321

0,292

0,279

0,297

-

Ekstrak 1%

0,176

0,190

0,172

0,179

39,69

Ekstrak 0,75%

0,260

0,183

0,178

0,174

41,59

Ekstrak 0,5%

0,167

0,166

0,176

0,170

42,94

Ekstrak 0,25%

0,187

0,184

0,160

0,177

40,47

c. Densitas Optik Penghancuran Biofilm Pseudomonas aeruginosa Perlakuan

Absorbansi

% Penghancuran

1

2

3

Rata-Rata

Kontrol (-)

0,237

0,210

0,207

0,218

-

Ekstrak 1%

0,198

0,188

0,169

0,185

15,14

Ekstrak 0,75%

0,106

0,154

0,169

0,143

34,40

Ekstrak 0,5%

0,110

0,140

0,135

0,128

41,13

Ekstrak 0,25%

0,140

0,122

0,113

0,125

42,66


60

Lampiran 9. Hasil Uji Antibiofilm Terhadap Staphylococcus aureus

a. Densitas Optik Pencegahan Biofilm Staphylococcus aureus Perlakuan

Absorbansi

% Pencegahan

1

2

3

Rata-Rata

Kontrol (-)

0,256

0,235

0,222

0,237

-

Ekstrak 1%

0,186

0,201

0,209

0,199

16,41

Ekstrak 0,75%

0,140

0,172

0,196

0,169

28,75

Ekstrak 0,5%

0,141

0,152

0,173

0,155

34,64

Ekstrak 0,25%

0,140

0,133

0,133

0,135

43,06

b. Densitas Optik Penghambatan Biofilm Staphylococcus aureus Perlakuan

Absorbansi

% Penghambatan

1

2

3

Rata-Rata

Kontrol (-)

0,318

0,215

0,158

0,230

-

Ekstrak 1%

0,113

0,130

0,141

0,135

41,53

Ekstrak 0,75%

0,112

0,110

0,110

0,111

51,95

Ekstrak 0,5%

0,109

0,098

0,113

0,107

53,69

Ekstrak 0,25%

0,093

0,096

0,126

0,105

54,41

c. Densitas Optik Penghancuran Biofilm Staphylococcus aureus Perlakuan

Absorbansi

% Penghancuran

1

2

3

Rata-Rata

Kontrol (-)

0,095

0,826

0,756

0,844

-

Ekstrak 1%

0,411

0,427

0,519

0,099

46,41

Ekstrak 0,75%

0,378

0,356

0,439

0,101

53,67

Ekstrak 0,5%

0,388

0,296

0,478

0,103

54,11

Ekstrak 0,25%

0,264

0,329

0,468

0,107

58,10


61

Lampiran 10. Hasil Uji Statistik Aktivitas Pencegahan Biofilm Escherichia coli

a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat normalitas distribusi data densitas optik uji pencegahan biofilm. Hipotesis : Ho

: Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm terdistribusi normal

Ha

: Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm tidak terdistribusi normal

Pengambilan Kesimpulan : 

Bila signifikansi ≥ 0,05 Ho diterima



Bila signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak

Tabel 10.1. Hasil uji normalitas Absorbansi N Normal Parameters

15 a

Mean Std. Deviation

Most Extreme Differences

.13233 .024697

Absolute

.140

Positive

.129

Negative

-.140

Kolmogorov-Smirnov Z

.541

Asymp. Sig. (2-tailed) .931 Kesimpulan : Data densitas optik pencegahan biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0,05)

b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : Untuk melihat homogenitas data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm Hipotesis : Ho

: Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm bervariasi homogen

Ha

: Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm tidak bervariasi homogen







62

Tabel 10.2. Hasil uji homogenitas Levene Statistic

df1

df2

Sig.

6.071 4 10 .010 Kesimpulan : Data densitas optik pencegahan biofilm tidak bervariasi homogen (p ≤ 0,05), sehingga dilanjutkan ke uji Kruskal Wallis.

c. Uji Kruskal Wallis Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan bermakna dari data densitas biofilm. Hipotesis : 

Ho : Data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm tidak berbeda secara bermakna



Ha : Data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm berbeda secara bermakna






Tabel 10.3. Hasil uji Kruskal Wallis Absorbansi Chi-Square df

12.255 4

Asymp. Sig. .016 Kesimpulan : Densitas biofilm berbeda secara bermakna (p ≤ 0,05), sehingga dilakukan pengujian dengan uji post hoc.


63

d. Post Hoc Mean

95% Confidence Interval

Difference (I) Konsentrasi

(J) Konsentrasi

Kontrol Negatif

1

.067667*

.007542

.000

.05086

.08447

0.75

.046000*

.007542

.000

.02919

.06281

0.5

.033667*

.007542

.001

.01686

.05047

0.25

.022667*

.007542

.013

.00586

.03947

Kontrol Negatif

-.067667*

.007542

.000

-.08447

-.05086

0.75

-.021667*

.007542

.017

-.03847

-.00486

0.5

-.034000*

.007542

.001

-.05081

-.01719

0.25

-.045000*

.007542

.000

-.06181

-.02819

Kontrol Negatif

-.046000*

.007542

.000

-.06281

-.02919

1

.021667*

.007542

.017

.00486

.03847

0.5

-.012333

.007542

.133

-.02914

.00447

0.25

-.023333*

.007542

.011

-.04014

-.00653

Kontrol Negatif

-.033667*

.007542

.001

-.05047

-.01686

.034000*

.007542

.001

.01719

.05081

0.75

.012333

.007542

.133

-.00447

.02914

0.25

-.011000

.007542

.175

-.02781

.00581

-.022667*

.007542

.013

-.03947

-.00586

1

.045000*

.007542

.000

.02819

.06181

0.75

.023333*

.007542

.011

.00653

.04014

0.5

.011000

.007542

.175

-.00581

.02781

1

0.75

0.5

1

0.25

Kontrol Negatif

(I-J)

Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

Kesimpulan : Densitas optik pencegahan biofilm berbeda secara bermakna (p ≥ 0,05).


64

Lampiran 11. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghambatan Biofilm Escherichia coli

a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat normalalitas distribusi data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm. Hipotesis : Ho

: Data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm terdistribusi normal

Ha

: Data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm tidak terdistribusi normal






Tabel 11.1. Hasil uji normalitas Absorbansi N

15

Normal Parametersa

Mean Std. Deviation


.11720 .026879

Absolute

.281

Positive

.281

Negative

-.174


1.087

Asymp. Sig. (2-tailed) .188 Kesimpulan : Data densitas optik penghambatan biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0,05)

b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : Untuk melihat homogenitas dari data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm Hipotesis : Ho

: Data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm bervariasi homogen

Ha

: Data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm tidak bervariasi homogen




65





df1

df2

Sig.

3.349 4 10 .055 Kesimpulan : Data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm bervariasi homogen (p ≥ 0,05). sehingga dilanjutkan dengan uji Anova

c. Uji One-Way ANOVA Tujuan : untuk melihat data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm antar konsentrasi terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak. Hipotesa : Ho

: Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm tidak berbeda secara bermakna

Ha

: Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm berbeda secara bermakna






Tabel 11.3. Hasil uji One-Way ANOVA Sum of Squares

df

Mean Square

Between Groups

.009

4

.002

Within Groups

.001

10

.000

F

Sig.

28.387

.000

Total .010 14 Kesimpulan : Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm berbeda secara bermakna (p ≤ 0,05), sehingga dilanjutkan uji post hoc


66

d. Uji post hoc Mean



(J) Konsentrasi

(I-J)

Kontrol Negatif

1

.068667*

.007388

.000

.05221

.08513

0.75

.061333*

.007388

.000

.04487

.07779

0.5

.059000*

.007388

.000

.04254

.07546

0.25

.056667*

.007388

.000

.04021

.07313

*

.007388

.000

-.08513

-.05221

0.75

-.007333

.007388

.344

-.02379

.00913

0.5

-.009667

.007388

.220

-.02613

.00679

0.25

-.012000

.007388

.135

-.02846

.00446

*

.007388

.000

-.07779

-.04487

.007333

.007388

.344

-.00913

.02379

0.5

-.002333

.007388

.759

-.01879

.01413

0.25

-.004667

.007388

.542

-.02113

.01179

*

.007388

.000

-.07546

-.04254

1

.009667

.007388

.220

-.00679

.02613

0.75

.002333

.007388

.759

-.01413

.01879

0.25

-.002333

.007388

.759

-.01879

.01413

*

.007388

.000

-.07313

-.04021

1

.012000

.007388

.135

-.00446

.02846

0.75

.004667

.007388

.542

-.01179

.02113

0.5

.002333

.007388

.759

-.01413

.01879

1

0.75

Kontrol Negatif

Kontrol Negatif 1

0.5

0.25

Kontrol Negatif

Kontrol Negatif

-.068667

-.061333

-.059000

-.056667

Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

Kesimpulan : Data densitas optik pencegahan biofilm berbeda secara bermakna (p ≥ 0,05).


67

Lampiran 12. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghancuran Biofilm Escherichia coli

a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat normalitas distribusi data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm. Hipotesis : Ho

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm terdistribusi normal

Ha

: Data densitas optik aktivitas penghancuran tidak terdistribusi normal







15

Normal Parameters

a

Mean Std. Deviation


.13487 .020325

Absolute

.239

Positive

.239

Negative

-.141


.925

Asymp. Sig. (2-tailed) .360 Kesimpulan : Data densitas optik penghancuran biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0,05)

b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : Untuk melihat homogenitas dari data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm Hipotesis : Ho

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm bervariasi homogen

Ha

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm tidak bervariasi homogen




68





df1

df2

Sig.

2.305 4 10 .130 Kesimpulan : Data densitas optik penghancuran biofilm bervariasi homogen (p ≥ 0,05), sehingga dapat dilanjutkan uji Anova

c. Uji One-Way ANOVA Tujuan : Untuk melihat data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak. Hipotesa : Ho

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm tidak berbeda secara signifikan

Ha

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm berbeda secara signifikan


Bila signifikansi ≥ 0.05 Ho diterima



Bila signifikansi ≤ 0.05 Ho ditolak


df

Mean Square

Between Groups

.003

4

.001

Within Groups

.003

10

.000

F 2.889

Sig. .079

Total .006 14 Kesimpulan : Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm tidak berbeda secara bermakna (p ≥ 0,05), sehingga tidak dilanjutkan ke uji post hoc


69

Lampiran 13. Hasil Uji Statistik Aktivitas Pencegahan Biofilm Pseudomonas aeruginosa

a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat normalitas distribusi data densitas optik uji pencegahan biofilm. Hipotesis : Ho


Ha








15

Normal Parameters

a

Mean Std. Deviation


.33160 .063289

Absolute

.252

Positive

.252

Negative

-.142


.975


b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : Untuk melihat homogenitas dari data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm Hipotesis : Ho


Ha








70


df1

3.976

df2 4

Sig. 10

.035

Kesimpulan : Data densitas optik pencegahan biofilm tidak bervariasi homogen (p ≤ 0,05). sehinggat dilanjutkan uji Kruskal Wallis


Ho : Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm tidak berbeda secara bermakna



Ha :

Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm berbeda secara

bermakna Pengambilan Kesimpulan : 





Tabel 13.3. Hasil uji Kruskal Wallis Absorbansi Chi-Square df Asymp. Sig.

11.053 4 .026

Kesimpulan : Data densitas optis biofilm berbeda secara bermakna (p ≤ 0,05) sehingga dilakukan uji post hoc.


71

d. Uji Post Hoc Mean



(J) Konsentrasi

(I-J)

Kontrol Negatif

1

.154000*

.012260

.000

.12668

.18132

0.75

.153333*

.012260

.000

.12602

.18065

0.5

.150667*

.012260

.000

.12335

.17798

0.25

.090667*

.012260

.000

.06335

.11798

-.154000*

.012260

.000

-.18132

-.12668

0.75

-.000667

.012260

.958

-.02798

.02665

0.5

-.003333

.012260

.791

-.03065

.02398

0.25

-.063333*

.012260

.000

-.09065

-.03602

Kontrol Negatif

-.153333*

.012260

.000

-.18065

-.12602

.000667

.012260

.958

-.02665

.02798

0.5

-.002667

.012260

.832

-.02998

.02465

0.25

-.062667*

.012260

.000

-.08998

-.03535

Kontrol Negatif

-.150667*

.012260

.000

-.17798

-.12335

1

.003333

.012260

.791

-.02398

.03065

0.75

.002667

.012260

.832

-.02465

.02998

0.25

-.060000*

.012260

.001

-.08732

-.03268

Kontrol Negatif

-.090667*

.012260

.000

-.11798

-.06335

1

.063333*

.012260

.000

.03602

.09065

0.75

.062667*

.012260

.000

.03535

.08998

0.5

.060000*

.012260

.001

.03268

.08732

1

0.75

Kontrol Negatif

1

0.5

0.25

Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

Kesimpulan : Data pencegahan biofilm berbeda secara bermakna (p ≥ 0,05).


72

Lampiran 14. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghambatan Biofilm Pseudomonas aeruginosa

a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat normalitas distribusi data densitas optik penghambatan biofilm. Hipotesis : Ho


Ha







Tabel 14.1. Hasil uji normalitas Densitas optik N

15

Normal Parametersa

Mean Std. Deviation


.19940 .052112

Absolute

.372

Positive

.372

Negative

-.225


1.439


b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : Untuk melihat homogenitas dari data densitas optik penghambatan biofilm Hipotesis : Ho : data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm bervariasi homogen Ha : data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm tidak bervariasi homogen Pengambilan Kesimpulan : 






73


df1

df2

Sig.

1.861 4 10 .194 Kesimpulan : Data densitas optik penghambatan biofilm bervariasi homogen (p ≥ 0,05), sehingga dapat dilakukan uji Anova

c. Uji One-Way ANOVA Tujuan : Untuk melihat data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm antar konsentrasi terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak. Hipotesa : Ho

: Data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm tidak berbeda secara signifikan

Ha

: Data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm berbeda secara signifikan







df

Mean Square

Between Groups

.036

4

.009

Within Groups

.002

10

.000

F 47.667

Sig. .000

Total .038 14 Kesimpulan : Data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm berbeda secara bermakna (p ≤ 0,05), sehingga dilanjutkan ke uji post hoc


74

d. Uji Post Hoc Mean Difference (I) Konsentrasi (J) Konsentrasi (I-J) Std. Error

0.75

0.25

Lower Bound Upper Bound

.011239

.000

.09296

.14304

0.75

.123667*

.011239

.000

.09863

.14871

0.5

.127667*

.011239

.000

.10263

.15271

0.25

.120333*

.011239

.000

.09529

.14537

-.118000*

.011239

.000

-.14304

-.09296

0.75

.005667

.011239

.625

-.01937

.03071

0.5

.009667

.011239

.410

-.01537

.03471

0.25

.002333

.011239

.840

-.02271

.02737

-.123667*

.011239

.000

-.14871

-.09863

-.005667

.011239

.625

-.03071

.01937

0.5

.004000

.011239

.729

-.02104

.02904

0.25

-.003333

.011239

.773

-.02837

.02171

-.127667*

.011239

.000

-.15271

-.10263

1

-.009667

.011239

.410

-.03471

.01537

0.75

-.004000

.011239

.729

-.02904

.02104

0.25

-.007333

.011239

.529

-.03237

.01771

-.120333*

.011239

.000

-.14537

-.09529

-.002333

.011239

.840

-.02737

.02271

.003333

.011239

.773

-.02171

.02837

Kontrol Negatif

Kontrol Negatif 1

0.5

Sig.

.118000*

Kontrol Negatif 1

1


Kontrol Negatif

Kontrol Negatif 1 0.75

0.5 .007333 .011239 .529 -.01771 .03237 Kesimpulan : Data densitas optik control negatif dengan aktivitas penghambatan biofilm berbeda secara bermakna (p ≥ 0,05).


75

Lampiran

15.

Hasil

Uji

Statistik

Aktivitas

Penghancuran

Biofilm

Pseudomonas aeruginosa

a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat normalitas distribusi data densitas optik penghancuran biofilm. Hipotesis : Ho


Ha

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm tidak terdistribusi normal







15

Normal Parametersa

Mean Std. Deviation


.15987 .041021

Absolute

.153

Positive

.153

Negative

-.095


.591

Asymp. Sig. (2-tailed) .876 Kesimpulan : Data densitas optik penghancuran biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0,05)

b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : Untuk melihat homogenitas dari data densitas optik penghancuran biofilm Hipotesis : Ho : data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm bervariasi homogen Ha : data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm tidak bervariasi homogen Pengambilan Kesimpulan : 






76


df1

df2

Sig.

1.697 4 10 .227 Kesimpulan : Data densitas optik penghancuran biofilm bervariasi homogen (p ≥ 0,05), sehingga dilanjutkan ke Anova

c. Uji One-Way ANOVA Tujuan : Untuk melihat data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak. Hipotesa : Ho

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm tidak berbeda secara signifikan

Ha

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm berbeda secara signifikan







df

Mean Square

Between Groups

.020

4

.005

Within Groups

.004

10

.000

F 12.075

Sig. .001

Total .024 14 Kesimpulan : Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm berbeda secara bermakna (p ≤ 0,05), sehingga dilanjutkan uji post hoc


77

d. Uji Post Hoc Mean Difference (I) Konsentrasi (J) Konsentrasi (I-J) Kontrol Negatif 1

1

0.75

0.5

0.25

95% Confidence Interval Std. Error

Sig.


.033000 .016413

.072

-.00357

.06957

0.75

.075000* .016413

.001

.03843

.11157

0.5

.089667* .016413

.000

.05310

.12624

0.25

.093000* .016413

.000

.05643

.12957

Kontrol Negatif

-.033000 .016413

.072

-.06957

.00357

0.75

.042000* .016413

.028

.00543

.07857

0.5

.056667* .016413

.006

.02010

.09324

0.25

.060000* .016413

.004

.02343

.09657

Kontrol Negatif

-.075000* .016413

.001

-.11157

-.03843

1

-.042000* .016413

.028

-.07857

-.00543

0.5

.014667 .016413

.393

-.02190

.05124

0.25

.018000 .016413

.298

-.01857

.05457

Kontrol Negatif

-.089667* .016413

.000

-.12624

-.05310

1

-.056667* .016413

.006

-.09324

-.02010

0.75

-.014667 .016413

.393

-.05124

.02190

0.25

.003333 .016413

.843

-.03324

.03990

Kontrol Negatif

-.093000* .016413

.000

-.12957

-.05643

1

-.060000* .016413

.004

-.09657

-.02343

-.018000 .016413

.298

-.05457

.01857

0.75

0.5 -.003333 .016413 .843 -.03990 .03324 Kesimpulan : Data densitas optik control penghancuran biofilm berbeda secara bermakna (p ≥ 0,05).


78

Lampiran 16. Hasil Uji Statistik Aktivitas Pencegahan Biofilm Staphylococcus aureus

a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat normalitas distribusi data densitas optik uji pencegahan pembentukan biofilm. Hipotesis : Ho


Ha








15

Normal Parameters

a

Mean Std. Deviation


.17927 .039791

Absolute

.165

Positive

.165

Negative

-.122


.640


b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : untuk melihat homogenitas dari data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm Hipotesis : Ho


Ha





79





df1

df2

Sig.

1.447 4 10 .289 Kesimpulan : Data densitas optik pencegahan biofilm bervariasi homogen (p ≥ 0,05), sehingga dapat dilanjutkan ke Anova

c. Uji One-Way ANOVA Tujuan : untuk melihat data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm antar konsentrasi terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak. Hipotesa : Ho

: Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm tidak berbeda secara bermakna

Ha

: Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm berbeda secara bermakna







df

Mean Square

Between Groups

.019

4

.005

Within Groups

.003

10

.000

F 15.964

Sig. .000

Total .022 14 Kesimpulan : Data densitas optik pencegahan biofilm berbeda secara bermakna (p ≤ 0,05), sehingga dilanjutkan uji post hoc


80

d. Uji post hoc

(I) Konsentrasi (J) Konsentrasi

0.75

0.25

Sig.


.014145

.020

.00748

.07052

0.75

.068333*

.014145

.001

.03682

.09985

0.5

.082333*

.014145

.000

.05082

.11385

0.25

.102333*

.014145

.000

.07082

.13385

-.039000*

.014145

.020

-.07052

-.00748

0.75

.029333

.014145

.065

-.00218

.06085

0.5

.043333*

.014145

.012

.01182

.07485

0.25

.063333*

.014145

.001

.03182

.09485

-.068333*

.014145

.001

-.09985

-.03682

-.029333

.014145

.065

-.06085

.00218

0.5

.014000

.014145

.346

-.01752

.04552

0.25

.034000*

.014145

.037

.00248

.06552

Kontrol Negatif

-.082333*

.014145

.000

-.11385

-.05082

1

-.043333*

.014145

.012

-.07485

-.01182

0.75

-.014000

.014145

.346

-.04552

.01752

0.25

.020000

.014145

.188

-.01152

.05152

Kontrol Negatif

-.102333*

.014145

.000

-.13385

-.07082

1

-.063333*

.014145

.001

-.09485

-.03182

0.75

-.034000*

.014145

.037

-.06552

-.00248

Kontrol Negatif

Kontrol Negatif 1

0.5


.039000*

Kontrol Negatif 1

1

Mean Difference (I-J) Std. Error

0.5 -.020000 .014145 .188 -.05152 .01152 Kesimpulan : Data densitas optik control negatif dengan pencegahan biofilm berbeda secara bermakna (p ≥ 0,05).


81

Lampiran 17. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghambatan Biofilm Staphylococcus aureus

a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat normalitas distribusi data densitas optik penghambatan biofilm. Hipotesis : Ho


Ha








15

Normal Parametersa

Mean Std. Deviation



.13747 .058594

Absolute

.276

Positive

.276

Negative

-.224 1.069


b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : Untuk melihat homogenitas dari data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm Hipotesis : Ho

: Data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm bervariasi homogen

Ha

: Data densitas optik aktivitas penghambatan biofilm tidak bervariasi homogen

Pengambilan Kesimpulan :


82

Bila signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak Bila signifikansi ≥ 0,05 Ho diterima


df1

df2

Sig.

5.658 4 10 .012 Kesimpulan : Data densitas optik penghambatan biofilm tidak bervariasi homogen (p ≤ 0,05), sehingga dilakukan uji Kruskal Wallis


Ho : Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm tidak berbeda secara bermakna



Ha : Data densitas optik aktivitas pencegahan biofilm berbeda secara bermakna






Tabel 17.3. Hasil uji Kruskal Wallis Absorbansi Chi-Square df

11.120 4

Asymp. Sig. .025 Kesimpulan : Densitas biofilm berbeda secara bermakna (p ≤ 0,05) sehingga dilanjutkan dengan pengujian dengan uji post hoc.


83

d. Uji Post Hoc

(I) Konsentrasi (J) Konsentrasi

0.75

0.25

Sig.


.030558

.011

.02758

.16375

0.75

.119667*

.030558

.003

.05158

.18775

0.5

.123667*

.030558

.002

.05558

.19175

0.25

.125333*

.030558

.002

.05725

.19342

-.095667*

.030558

.011

-.16375

-.02758

0.75

.024000

.030558

.450

-.04409

.09209

0.5

.028000

.030558

.381

-.04009

.09609

0.25

.029667

.030558

.355

-.03842

.09775

-.119667*

.030558

.003

-.18775

-.05158

-.024000

.030558

.450

-.09209

.04409

0.5

.004000

.030558

.898

-.06409

.07209

0.25

.005667

.030558

.857

-.06242

.07375

-.123667*

.030558

.002

-.19175

-.05558

1

-.028000

.030558

.381

-.09609

.04009

0.75

-.004000

.030558

.898

-.07209

.06409

0.25

.001667

.030558

.958

-.06642

.06975

-.125333*

.030558

.002

-.19342

-.05725

1

-.029667

.030558

.355

-.09775

.03842

0.75

-.005667

.030558

.857

-.07375

.06242

Kontrol Negatif

Kontrol Negatif 1

0.5


.095667*

Kontrol Negatif 1

1

Mean Difference (I-J) Std. Error

Kontrol Negatif

Kontrol Negatif

0.5 -.001667 .030558 .958 -.06975 .06642 Kesimpulan : Data densitas optik penghambatan biofilm berbeda secara bermakna (p ≥ 0,05).


84

Lampiran

18.

Hasil

Uji

Statistik

Aktivitas

Penghancuran

Biofilm


a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat normalitas distribusi data densitas optik penghancuran biofilm. Hipotesis : Ho


Ha

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm tidak terdistribusi normal







15

Normal Parameters

a

Mean Std. Deviation



.48567 .200853

Absolute

.249

Positive

.249

Negative

-.135 .963

Asymp. Sig. (2-tailed) .312 Kesimpulan : data densitas optik penghancuran biofilm terdistribusi normal (p ≥ 0,05)

b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : untuk melihat homogenitas dari data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm Hipotesis : Ho : data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm bervariasi homogen


85

Ha : data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm tidak bervariasi homogen Pengambilan Kesimpulan : 






df1

df2

Sig.

.653 4 10 .638 Kesimpulan : Data densitas optik penghancuran biofilm bervariasi homogen (p ≥ 0,05).

c. Uji One-Way ANOVA Tujuan : untuk melihat data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm antar konsentrasi terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak. Hipotesa : Ho : data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm tidak berbeda secara signifikan Ha : data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm berbeda secara signifikan Pengambilan Kesimpulan : 






df

Mean Square

Between Groups

.497

4

.124

Within Groups

.068

10

.007

Total

.565

14

F 18.240

Sig. .000

Kesimpulan : Data densitas optik penghancuran biofilm berbeda secara bermakna (p ≤ 0,05).


86

d. Uji Post Hoc Mean Difference (I) Konsentrasi (J) Konsentrasi (I-J) Std. Error

0.75

0.25


.067370

.000

.24156

.54178

0.75

.453000*

.067370

.000

.30289

.60311

0.5

.456667*

.067370

.000

.30656

.60678

0.25

.490333*

.067370

.000

.34022

.64044

*

.067370

.000

-.54178

-.24156

0.75

.061333

.067370

.384

-.08878

.21144

0.5

.065000

.067370

.357

-.08511

.21511

0.25

.098667

.067370

.174

-.05144

.24878

*

.067370

.000

-.60311

-.30289

-.061333

.067370

.384

-.21144

.08878

0.5

.003667

.067370

.958

-.14644

.15378

0.25

.037333

.067370

.592

-.11278

.18744

*

.067370

.000

-.60678

-.30656

1

-.065000

.067370

.357

-.21511

.08511

0.75

-.003667

.067370

.958

-.15378

.14644

0.25

.033667

.067370

.628

-.11644

.18378

*

.067370

.000

-.64044

-.34022

1

-.098667

.067370

.174

-.24878

.05144

0.75

-.037333

.067370

.592

-.18744

.11278

Kontrol Negatif

Kontrol Negatif 1

0.5

Sig.

.391667*

Kontrol Negatif 1

1


Kontrol Negatif

Kontrol Negatif

-.391667

-.453000

-.456667

-.490333

0.5 -.033667 .067370 .628 -.18378 .11644 Kesimpulan : Data densitas optik penghancuran biofilm berbeda secara bermakna (p ≥ 0,05).


87

Lampiran 19. Hasil Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm Menggunakan Response Surface Analysis

Hasil optimasi aktivitas penghancuran Tabel 19.1. Hasil Optimasi Aktivitas Penghancuran biofilm Waktu No

Suhu

Konsentrasi

Kontak

% Degradasi

1

25

1

0,5

3,005

2

25

1

1,5

52,277

3

25

0,625

1

48,454

4

25

0,25

0,5

26,230

5

25

0,25

1,5

52,484

6

37,5

1

1

64,717

8

37,5

0,625

1

55,153

9

37,5

0,625

1

61,653

10

37,5

0,625

1

61,838

11

37,5

0,625

1

56,267

12

37,5

0,625

1

55,153

13

37,5

0,625

1

52,089

14

37,5

0,625

0,5

64,129

15

37,5

0,625

1,5

47,970

7

37,5

0,25

1

67,038

16

50

1

0,5

55,216

17

50

1

1,5

64,094

20

50

0,625

1

67,563

18

50

0,25

0,5

68,448

19

50

0,25

1,5

66,667


88

Lampiran 20. Hasil Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm Staphylococcus aureus Pada Kondisi Respon Surface Analysis a. 250C, dan waktu kontak 30 menit Densitas optik Perlakuan

Rata-

% Penghambatan

1

2

3

Rata

Kontrol (-)

0,122

0,125

0,119

0,122

-

Ekstrak 0,25%

0,08

0,08

0,09

0,083

31,693

Ekstrak 1%

0,106

0,122

0,127

0,118

3,005

Rata-

% Penghambatan

b. Pada suhu 25 0C dan waktu kontak 60 menit Densitas optik Perlakuan 1

2

3

Rata

Kontrol (-)

0,312

0,287

0,276

0,291

-

Ekstrak 0,625%

0,14

0,155

0,155

0,15

48,453

Rata-

% Penghambatan

c. Pada suhu 250C dan waktu kontak 90 menit Densitas optik Perlakuan 1

2

3

Rata

Kontrol (-)

0,350

0,323

0,294

0,322

-

Ekstrak 0,25%

0,134

0,16

0,165

0,153

52,484

Ekstrak 1%

0,077

0,164

0,22

0,153

52,277

Rata-

% Penghambatan

d. Pada suhu 370C dan waktu kontak 30 menit Densitas optik Perlakuan

Kontrol (-)

1

2

3

Rata

0,316

0,287

0,264

0,289

-


89

Ekstrak 0,625%

0,077

0,083

0,151

0,103

64,129

Rata-

% Penghambatan

e. Pada suhu 370C dan waktu kontak 60 menit Densitas Optik Perlakuan

Kontrol (-) Ekstrak 0,25% Ekstrak 0,625% Ekstrak 0,625% Ekstrak 0,625% Ekstrak 0,625% Ekstrak 0,625% Ekstrak 0,625% Ekstrak 1%

f.

1

2

3

Rata

0,336

0,376

0,366

0,359

-

0,066

0,121

0,168

0,118

67,038

0,151

0,167

0,165

0,161

55,153

0,062

0,174

0,177

0,137

61,652

0,06

0,174

0,177

0,137

61,838

0,158

0,163

0,15

0,157

56,267

0,151

0,166

0,166

0,161

55,153

0,166

0,174

0,176

0,172

52,089

0,069

0,153

0,158

0,126

64,716

Rata-

% Penghambatan

Pada suhu 370C dan waktu kontak 90 menit Densitas optik Perlakuan

Kontrol (-) Ekstrak 0,625%

1

2

3

Rata

0,263

0,270

0,280

0,271

-

0,133

0,144

0,146

0,141

47,970

g. Pada suhu 500C dan waktu kontak 30 Densitas optik Perlakuan

Kontrol (-) Ekstrak 0,25% Ekstrak 1%

Rata-

% Penghambatan

1

2

3

Rata

0,370

0,436

0,375

0,393

-

0,112

0,132

0,128

0,124

68,447

0,150

0,179

0,199

0,176

55,216


90

h. Pada suhu 500C dan waktu kontak 60 menit Densitas optik Perlakuan

Kontrol (-) Ekstrak 0,25%

i.

Rata-

% Penghambatan

1

2

3

Rata

0,451

0,390

0,387

0,409

-

0,128

0,138

0,132

0,132

67,563

Rata-

% Penghambatan

Pada suhu 500C dan waktu kontak 90 menit Densitas optik Perlakuan

Kontrol (-) Ekstrak 0,25% Ekstrak 1%

1

2

3

Rata

0,301

0,300

0,333

-

0,101

0,112

0,098

0,103

66,666

0,076

0,12

0,139

0,111

64,094

Lampiran 21. Hasil Uji Aktivitas Penghancuran Biofilm Kondisi optimal Kondisi optimal : Pada suhu 50oC, konsentrasi 0,25%, waktu kontak 48 menit Tabel 21.1. Data uji aktivitas penghambatan biofilm kondisi optimal Densitas Optik Perlakuan Kontrol (-) Ekstrak 0,25% DMSO 9,8% Kontrol (+)

1 0,894 0,329 0,91 0,200

2 0,913 0,290 0,868 0,215

3 0,86 0,291 0,816 0,236

RataRata 0,889 0,236 0,864 0,217

% Penghancuran 65,879 2,737 75,590


91

Lampiran 22. Hasil Uji Statistik Aktivitas Penghancuran Kondisi Optimal Biofilm a. Uji Normalitas One-Sample Kolmogorov Smirnov Tujuan : Untuk melihat normalitas distribusi data densitas optik penghancuran biofilm pada kondisi optimal. Hipotesis : Ho

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm pada kondisi optimal terdistribusi normal

Ha

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm pada kondisi optimal tidak terdistribusi normal







12

Normal Parametersa

Mean

.56850

Std. Deviation Most Extreme Differences

.324797

Absolute

.277

Positive

.270

Negative

-.277


.959

Asymp. Sig. (2-tailed) .316 Kesimpulan : Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm pada kondisi optimal terdistribusi normal (p ≥ 0,05)

b. Uji Homogenitas (Levene) Tujuan : untuk melihat homogenitas dari data densitas optik penghancuran biofilm pada kondisi optimal Hipotesis : Ho

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm pada kondisi optimal bervariasi homogen

Ha

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm pada kondisi optimal tidak bervariasi homogen UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

92







df1

df2

Sig.

.922 3 8 .473 Kesimpulan : Data densitas optik penghancuran biofilm pada kondisi optimal bervariasi homogen (p ≥ 0,05).

c. Uji One-Way ANOVA Tujuan : Untuk melihat data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm pada kondisi optimal antar konsentrasi terdapat perbedaan secara bermakna atau tidak. Hipotesa : Ho

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm pada kondisi optimal biofilm tidak berbeda secara signifikan

Ha

: Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm pada kondisi optimal biofilm berbeda secara signifikan






Tabel 22.3. Hasil uji One-Way ANOVA Sum of Squares Between Groups Within Groups

df

Mean Square

1.153

3

.384

.008

8

.001

F 408.867

Sig. .000

Total 1.160 11 Kesimpulan : Data densitas optik aktivitas penghancuran biofilm pada kondisi optimal berbeda secara bermakna (p ≤ 0,05), sehingga dapat dilanjutkan ke uji post hoc.


93

d. Uji Post Hoc

(I) Konsentrasi

(J) Konsentrasi

Kontrol Negatif

Minyak Atsiri 0.25%

DMSO 9.8%

Kontrol Positif

Std. Error

Sig.

Lower Bound

Upper Bound

.585667* .025032

.000

.52794

.64339

.024333 .025032

.359

-.03339

.08206

Kontrol Positif

.672000* .025032

.000

.61428

.72972

Kontrol Negatif

-.585667* .025032

.000

-.64339

-.52794

DMSO 9.8%

-.561333* .025032

.000

-.61906

-.50361

Kontrol Positif

.086333* .025032

.009

.02861

.14406

Kontrol Negatif

-.024333 .025032

.359

-.08206

.03339

Minyak Atsiri 0.25%

.561333* .025032

.000

.50361

.61906

Kontrol Positif

.647667* .025032

.000

.58994

.70539

Kontrol Negatif

-.672000* .025032

.000

-.72972

-.61428

Minyak Atsiri 0.25%

-.086333* .025032

.009

-.14406

-.02861

DMSO 9.8%

Minyak Atsiri 0.25%

Mean Difference (I-J)


DMSO 9.8% -.647667* .025032 .000 -.70539 Kesimpulan : Data densitas optik penghancuran biofilm berbeda secara signifikan (p ≥

-.58994

0,05).


UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

Recommend Documents