UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

UJI AKTIVITAS EKSTRAK ETIL ASETAT LUMUT HATI Mastigophora diclados (Bird. Ex Web.) Nees TERHADAP KUALITAS SPERMA DAN DENSITAS SEL SPERMATOGENIK PADA TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus) JANTAN GALUR SPRAGUE DAWLEY SECARA IN VIVO

SKRIPSI

MAYTA RAVIKA NIM : 1110102000059

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA JULI 2014

UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

UJI AKTIVITAS EKSTRAK ETIL ASETAT LUMUT HATI Mastigophora diclados (Bird. Ex Web.) Nees TERHADAP KUALITAS SPERMA DAN DENSITAS SEL SPERMATOGENIK PADA TIKUS PUTIH (Rattus norvegicus) JANTAN GALUR SPRAGUE DAWLEY SECARA IN VIVO

SKRIPSI Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi

MAYTA RAVIKA NIM : 1110102000059

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN PROGRAM STUDI FARMASI JAKARTA JULI 2014

ii

ABSTRAK

Nama Program Studi Judul

: Mayta Ravika : Farmasi : Uji Aktivitas Ekstrak Etil Asetat Lumut Hati Mastigophora diclados (Bird. Ex Web.) Nees Terhadap Kualitas Sperma dan Densitas Sel Spermatogenik pada Tikus (Rattus norvegicus) Jantan Galur Sprague Dawley Secara in Vivo

Di Indonesia sebanyak 30% dari kasus fertilitas disebabkan oleh pria. Beberapa antioksidan terbukti efektif dalam pengobatan infertilitas pada pria. Lumut hati Mastigophora diclados (Bird. Ex Web.) Nees dilaporkan memiliki aktivitas antioksidan. Dilakukan sebuah penelitian untuk mengetahui pengaruh ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados (Bird. Ex Web.) Nees yang memiliki aktivitas antioksidan terhadap kualitas sperma dan densitas sel spermatogenik. Hewan uji yang digunakan 20 ekor tikus jantan galur sprague dawley berumur 7-8 minggu yang dibagi menjadi empat kelompok yaitu kolompok kontrol, kelompok dosis 1 mg/kgBB, 10 mg/kgBB, 100 mg/kgBB. Perlakuan diberikan selama 48 hari. Kualitas sperma dinilai dari konsentrasi dan morfologi spermatozoa, sedangkan densitas sel spermatogenik dinilai dari diameter tubulus seminiferus serta tebal sel germinal. Data yang diperoleh dianalisis menggunakan analisis one way ANOVA dan Kruskal Wallis yang dilanjutkan dengan uji Multiple Comparisons. Ada peningkatan konsentrasi spermatozoa secara bermakna (p < 0,05) pada kelompok dosis 10 mg/kgBB dan 100 mg/kgBB. Hasil pengamatan morfologi sperma didapat ada penurunan persentase sperma yang abnormal secara bermakna pada dosis 1 mg/kgBB, 10 mg/kgBB, dan 100 mg/kgBB. Tidak ada parameter densitas sel spermatogenik yang menunjukkan peningkatan yang signifikan pada semua kelompok bila dibandingkan dengan kontrol (P ≥ 0,05). Kata kunci: Lumut hati Mastigophora diclados, antioksidan, kualitas sperma, konsentrasi spermatozoa, morfologi sperma, densitas sel spermatogenik, diameter tubulus seminiferus, tebal sel germinal

vi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

ABSTRACT

Name Program Study Tittle

: Mayta Ravika : 1110102000059 : In Vivo Study of the Effect of Ethyl Acetate Extract of Liverworts Mastigophora diclados (Bird. Ex Web.)Nees on Sperm Quality and Spermatogenic Cell Density in Male Rat (Rattus Norvegicus) Strain Sprague Dawley

In indonesia, 30% of infertility cases caused by men. Some antioxidant known as the effective reatments for man infertility. From the previous study, Mastigophora diclados (Bird. Web Ex.) Nees had antioxidant activity. This study was aimed to analyze antioxidant effect of ethyl acetate extract liverworts Mastigophora diclados on sperm quality and spermatogenic cell density of male rat. Twenty adult male rats strain Sprague Dawley aged 7-8 weeks were divided into four groups: control group, and three treatment group, the first group received 1 mg/kgBB, the second group received 10 mg/kgBB and the third group received 100 mg/kgBB of Mastigophora diclados ethyl acetate extracts orally for 48 days. Treatment was given for 48 days. Sperm quality was assessed by sperm concentration and morphology of spermatozoa, while spermatogenic cell density was assessed from the diameter of seminiferous tubules and germinal cell layer thickness. Data were analyzed using one-way ANOVA and Kruskal-Wallis test followed by multiple Comparisons. A significant increase of spermatozoa concentration was observed in the treatment group that received 10 mg/kg and 100 mg/kg compared with control (p ˂ 0,05). Results showed the percentage of abnormal sperm morphology decrease significantly (p ˂ 0,05 all of treatment group ( dose 1mg/kgBB, 10 mg/kgBB, and 100 mg/kgBB) compered with control. While the density of sperm cells neither the seminiferous tubules diameter nor germinal cell thickness showed significant increase in all groups compared with controls (P ≥ 0,05). Keyword: Liverworts Mastigophora diclados, antioxidant, sperm quality, spermatozoa concentration, sperm morphology, spermatogenic cell density, diameter of seminiferous tubules, germinal cell layer thickness

vii UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

KATA PENGANTAR

Segala puji dan syukur kehadirat Allah SWT yang senantiasa mencurahkansegala rahmat-Nya kepada kita semua, khususnya penulis dalam menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas Ekstrak Etil Asetat Lumut Hati Mastigophora diclados (Bird. Ex Web.) Nees Terhadap Kualitas Sperma dan Densitas Sel Spermatogenik pada Tikus (Rattus Norvegicus) Jantan Galur Sprague Dawley Secara In Vivo”. Shalawat dan salam senantiasa terlimpah kepada junjungan kita Nabi Muhammad SAW, teladan bagi umat manusia dalam menjalani kehidupan. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu syarat menempuh ujian akhir guna mendapatkan gelar Sarjana Farmasi pada Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Selesainya penelitian dan penyusunan skripsi ini tidak lepas dari bantuan berbagai pihak, maka dalam kesempatan ini perkenankanlah penulis menyampaikan ucapan terimakasih yang tulus dan sebesar-besarnya, khususnya kepada : 1. Bapak Prof. Dr. (hc). Dr. MK.Tadjudin, Sp.And selaku Dekan Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. 2. Ibu Dr. Azrifitria, M.Si, Apt sebagai Pembimbing I dan Ibu Ismiarni Komala, M.Sc., Ph.D., Apt. sebagai Pembimbing II yang telah memberikan ilmu, nasehat, waktu, tenaga, dan pikiran selama penelitian dan penulisan skripsi. 3. Bapak Drs. Umar Mansur, M.Sc., Apt selaku Ketua Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. 4. Ibu Lina Elfita, M.Si., Apt. selaku pembimbing akademik yang telah memberikan arahan selama masa perkuliahan. 5. Kedua orang tua tercinta, Hasanuddin dan Tuti Ma’arif yang selalu ikhlas memberikan dukungan moral, nasehat-nasehat, serta doanya 6. Bapak dan Ibu staf pengajar, serta karyawan yang telah memberikan bimbingan dan bantuan selama menempuh pendidikan di Program Studi viii UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah Jakarta. 7. Bang Valzon dan Unang yang selalu memberikan arahan, material dan semangat. 8. Kak Eris, Mba Rani, Kak lisna, Kak Tiwi, Kak Rahmadi, dan Kak Liken yang sangat banyak membantu penulis melakukan penelitian di laboratorium. 9. Teman-teman tim farmakologi: Indah, Julia, Dita, Auva, Maya, dan Chaya. Terimakasih atas segala bantuannya 10. Teman-teman yang selalu memberikan masukan dan semangat: Ipho, Vina,Yeyet, Nissa, Bila, Myra, dan Metha 11. Teman-teman Andalusia yang memberikan semangat dan masukan untuk kelancaran penyusunan skripsi 12. Dan kepada semua pihak yang telah membantu penulis selama ini yang tidak dapat disebutkan namanya satu persatu.

Semoga semua bantuan yang telah diberikan mendapatkan balasan dari Allah SWT. Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan. Oleh karena itu, saran dan kritik yang bersifat membangun akan penulis nantikan. Dan semoga skripsi ini bisa bermanfaat bagi pengembangan ilmu pengetahuan.

Jakarta, 30 Juni 2014

Penulis

ix UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

DAFTAR ISI

Halaman HALAMAN JUDUL ................................................................................... ii HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ...................................... iii HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ....................................... iv HALAMAN PENGESAHAN ..................................................................... v ABSTRAK ................................................................................................... vi ABSTACT ..................................................................................................... vii KATA PENGANTAR ................................................................................. viii HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI TUGAS AKHIR ............... x DAFTAR ISI................................................................................................ xi DAFTAR GAMBAR ................................................................................... xiii DAFTAR TABEL ....................................................................................... xiv DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xv BAB 1. PENDAHULUAN .......................................................................... 1 1.1 Latar Belakang ............................................................................. . 1 1.2 Rumusan Masalah .......................................................................... 2 1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................... 3 1.4 Hipotesis ........................................................................................ 3 1.5 Manfaat Penelitian ......................................................................... 4 BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA................................................................. 5 2.1 Mastigophora diclados .................................................................. 5 2.1.1 Klasifikasi Tanaman ............................................................. 5 2.1.2 Kandungan Kimia ................................................................. 6 2.1.3 Aktivitas Biologi ................................................................... 6 2.2 Ekstrak ........................................................................................... 6 2.3 Tinjauan Hewan Coba .................................................................... 7 2.4 Sistem Reproduksi Tikus Jantan .................................................... 7 2.5 Spermatozoa ................................................................................... 9 2.6 Spermatogenesis Pada Tikus.......................................................... 10 2.7 Antioksidan ................................................................................... 11 BAB 3. METODOLOGI PENELITIAN ................................................... 13 3.1 Tempat dan Waktu Penelitian ........................................................ 13 3.2 Bahan ............................................................................................. 13 3.2.1 Hewan Uji ............................................................................. 13 3.2.2 Bahan Uji .............................................................................. 13 3.2.3 Bahan Kimia ......................................................................... 13 3.3 Alat ................................................................................................. 13 3.4 Rancangan Penelitian ..................................................................... 14 3.5 Kegiatan Penelitian ........................................................................ 14 3.5.1 Persiapan Hewan Uji ............................................................. 14 3.5.2 Pemberian Perlakuan ............................................................ 15 3.5.3 Pengukuran Parameter Uji .................................................... 15 3.5.3.1 Pengukuran Bobot Testis .......................................... 15 3.5.3.2 Pengukuran Konsentrasi Spermatozoa ..................... 15 3.5.3.3 Pengamatan Morfologi .............................................. 16 3.5.3.4 Pengukuran Densitas Spermatogenik........................ 17 3.5.4 Analisa Data ........................................................................ 17 BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN…………………………………… 18 4.1 Hasil Penelitian .............................................................................. 18 4.1.1 Pengukuran Bobot Testis ........................................................ 18 xi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

4.1.2 Perhitungan Konsentrasi Spermatozoa ................................... 4.1.3 Pengamatan Morfologi Spermatozoa ..................................... 4.1.4 Pengukuran Diameter Tubulus Seminiferus ........................... 4.1.5 Pengukuran Tebal Sel Germinal ............................................. 4.2 Pembahasan .................................................................................... BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN ...................................................... 5.1 Kesimpulan .................................................................................... 5.2 Saran .............................................................................................. DAFTAR PUSTAKA .................................................................................. LAMPIRAN.................................................................................................

18 19 20 21 22 26 26 26 27 31

xii UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

DAFTAR GAMBAR

Halaman Gambar 2.1 Lumut hati Mastigophora diclados ........................................... 5 Gambar 2.2 Anatomi sistem reproduksi tikus jantan .................................... 7 Gambar 2.3 Spermatozoa .............................................................................. 9 Gambar 4.1 Grafik rerata konsentrasi spermatozoa tikus setelah diberi perlakuan selama 48 hari ............................................... 19 Gambar 4.2 Grafik rerata persentase sperma yang abnormal tikus setelah diberi perlakuan selama 48 hari ................................... 20 Gambar 4.3 Grafik rerata diameter tubulus seminiferus tikus setelah diberi perlakuan selama 48 hari ............................................... 21 Gambar 4.4 Grafik rerata tebal sel germinal tikus setelah diberi perlakuan selama 48 hari.......................................................... 22

xiii UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

DAFTAR TABEL

Halaman Tabel 3.1 Pembagian kelompok hewan uji berdasarkan perlakuannya ........ 14 Tabel 3.2 Pengenceran yang dilakukan dan kotak yang dihitung ................. 15 Tabel 3.3 Cara pengenceran spermatozoa..................................................... 16 Tabel 3.4 Rumus menghitung konsentrasi spermatozoa .............................. 16 Tabel 4.1 Rerata bobot testis tikus ................................................................ 18 Tabel 4.2 Rerata konsentrasi spermatozoa tikus ........................................... 19 Tabel 4.3 Rerata persentase morfologi sperma yang abnormal .................... 20 Tabel 4.4 Rerata diameter tubulus seminiferus ............................................. 21 Tabel 4.5 Rerata tebal sel germinal ............................................................... 22

xiv UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman Lampiran 1. Surat Keterangan Kesehatan Hewan ...................................... 31 Lampiran 2. Alur Penelitian ........................................................................ 32 Lampiran 3. Perhitungan Dosis Pada Uji Ekstrak Etil Asetat Lumut Hati Mastigophora diclados ................................................... 33 Lampiran 4. Gambar Bahan Dan Alat Penelitian ....................................... 35 Lampiran 5. Kegiatan Penelitian ................................................................. 37 Lampiran 6. Pengamatan Perhitungan Konsentrasi Dan Morfologi Spermatozoa ........................................................................... 38 Lampiran 7. Hasil Pengukuran Berat Badan ............................................... 39 Lampiran 8. Hasil Pengukuran Bobot Testis .............................................. 41 Lampiran 9. Hasil Perhitungan Konsentrasi Spermatozoa ......................... 42 Lampiran 10. Hasil Morfologi Spermatozoa ............................................... 43 Lampiran 11. Hasil Pengukuran Diameter Tubulus Seminiferus ................ 44 Lampiran 12. Hasil Pengukuran Tebal Sel Germinal ................................... 45 Lampiran 13. Hasil Analisa Data Bobot Testis............................................. 46 Lampiran 14. Hasil Analisa Data Konsentrasi Spermatozoa ........................ 48 Lampiran 15. Hasil Analisa Data Morfologi Spermatozoa........................... 51 Lampiran 16. Hasil Analisa Data Diameter Tubulus Semineferus ............... 54 Lampiran 17. Hasil Analisa Data Tebal Sel Germinal.................................. 56

xv UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1

Latar Belakang Penurunan kualitas sperma pada pria dapat menyebabkan berkurangnya

kemampuan

spermatozoa

untuk

membuahi

sel

telur

sehingga

dapat

mengakibatkan terjadinya infertilitas. Infertilitas didefinisikan sebagai tidak terjadinya kehamilan pada pasangan setelah melakukan hubungan seks secara teratur selama 12 bulan tanpa menggunakan alat kontrasepsi (WHO, 2012). Infertilitas masih menjadi permasalahan bagi 15% dari pasangan suami istri (Agarwal dan Said, 2005). Jumlah pria yang mengalami infertil semakin meningkat hampir disetiap belahan dunia (Mathur, 2012). Terdapat 12% atau sekitar 3 juta pasangan infertil di Indonesia. Sebanyak 30% dari semua kasus pasangan infertil disebabkan oleh pria. Belakangan ini persentase pria sebagai penyebab pasangan infertil cenderung meningkat menjadi 40% (Sutyarso dan Hendri, 2003). Ditemukan 57 penelitian yang berkaitan dengan antioksidan dan fertilitas, dimana 41 penelitian menggunakan satu macam antioksidan dan 11 penelitian lainnya menggunakan kombinasi pemberian beberapa antioksidan (Agarwal et al., 2004). Penggunaan antioksidan seperti vitamin C, vitamin E, dan karnitin telah terbukti efektif dalam pengobatan infertilitas pada pria (Agarwal dan Lucky, 2010). Antioksidan adalah senyawa yang dapat menekan pembentukan reactive oxygen species (ROS) dan peroksidasi lipid. Produksi ROS di berbagai organ termasuk testis adalah peristiwa fisiologis normal, namun perubahan dalam sintesisnya merangsang terjadinya oksidasi dan kerusakan DNA sel (Sikka, 1996). Membran plasma sperma mengandung asam lemak tak jenuh dalam jumlah tinggi sehingga sangat rentan terhadap kerusakan peroksidatif. Peroksidasi lipid dapat menghancurkan struktur matriks lipid dalam membran spermatozoa, hal ini berkaitan dengan hilangnya motilitas dari sperma. Oleh karena itu, dengan memberikan senyawa yang dapat menekan ROS dapat meningkatkan kualitas dari sperma sehingga meningkatkan fertilitas pada pria (Turk et al., 2008; Khaki et al., 2009). Banyak tumbuhan di dunia yang digunakan secara tradisional sebagai peningkat fertilitas antara lain adalah buah delima (Punica granatum), semangka 1 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

2

(Citrullus vulgaris), biji koro bengu (M. pnirien), minyak jinten hitam (Nigella sativa L.) (Khaki et al., 2009; Turk et al., 2008; Winarni et al., 2011; Musfiroh et al., 2012). Proporsi tumbuhan yang digunakan secara tradisional sebagai peningkat fertilitas masih didominasi oleh tumbuhan

dikotil yaitu

sebanyak 79%, diikuti oleh tumbuhan monokotil sebanyak 18%, serta 1% masingmasing untuk jamur dan pteridophytes (Mathur dan Sundaramoorthy, 2009). Masih sedikitnya penggunaan tumbuhan tingkat rendah sebagai peningkat fertilitas, hal ini terlihat hanya 1% penggunaan jamur dan pteridophytes. Tumbuhan tingkat rendah lain yang juga belum banyak dieksplorasi adalah lumut. Lumut merupakan bagian dari keanekaragaman hayati yang belum banyak mendapat perhatian (Windadri, 2007). Salah satu jenis lumut yang berpotensi dijadikan obat adalah lumut hati. Dalam penelitian sebelumnya, Komala et al. (2010) telah melaporkan bahwa tumbuhan lumut hati Mastigophora diclados yang tumbuh di Tahiti mengandung senyawa-senyawa fenolik seskuiterpenoid herbertan. Senyawa-senyawa golongan fenolik seskuiterpenoid herbertan dilaporkan memiliki aktivitas sitotoksik, antimikroba, dan antioksidan. Herbertenediol dan (-)-mastigophorene D merupakan kandungan Mastigophora diclados yang memiliki aktivitas antioksidan lebih tinggi dari vitamin C (Komala et al., 2010). Namun aktivitas antioksidan yang dimiliki Mastigophora diclados ini belum diteliti lebih lanjut sebagai peningkat fertilitas pada pria. Berdasarkan uraian diatas dapat diasumsikan bahwa Mastigophora diclados yang ada di Indonesia memiliki kandungan yang hampir sama dengan yang berasal dari Tahiti dan kemungkinan dapat meningkatkan kualitas sperma sehingga dapat meningkatkan fertilitas pria. Oleh karena itu, perlu dilakukan penelitian mengenai pengaruh ekstrak Mastigophora diclados terhadap kualitas sperma dan densitas sel spermatogenik pada tikus. Kualitas sperma dinilai dari bobot testis, morfologi sperma, dan konsentrasi spermatozoa sedangkan densitas sel spermatogenik dinilai dari diameter tubulus seminiferus dan ketebalan lapisan sel germinal.

1.2

Perumusan Masalah Berdasarkan dari uraian latar belakang, maka rumusan masalahnya adalah

sebagai berikut: 1.

Apakah ada pengaruh pemberian ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees terhadap kualitas sperma UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

3

yang dinilai dari konsentrasi dan morfologi spermatozoa pada tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur Sprague Dawley secara in vivo? 2.

Apakah ada pengaruh pemberian ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees terhadap densitas sel spermatogenik yang dinilai dari diameter tubulus seminiferus dan ketebalan lapisan sel germinal pada tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur Sprague Dawley secara in vivo?

1.3

Tujuan Penelitian Tujuan dari penelitian uji aktivitas ekstrak etil asetat

lumut hati

Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees terhadap kualitas sperma dan densitas sel spermatogenik pada tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur Sprague Dawley secara in vivo adalah: 1.

Untuk

menguji

pemberian

ekstrak

etil

asetat

lumut

hati

Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees terhadap kualitas spermatozoa yang dinilai dari konsentrasi dan morfologi spermatozoa pada tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur Sprague Dawley secara in vivo. 2.

Untuk

menguji

pemberian

ekstrak

etil

asetat

lumut

hati

Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees terhadap densitas sel spermatogenik yang dinilai dari diameter tubulus seminiferus dan ketebalan lapisan sel germinal pada tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur Sprague Dawley secara in vivo.

1.4

Hipotesis Hipotesis dari penelitian uji aktivitas ekstrak etil asetat lumut hati

Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees terhadap kualitas sperma dan densitas sel spermatogenik pada tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur Sprague Dawley secara in vivo adalah: 1.

Pemberian ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees berpengaruh terhadap kualitas sperma yang dinilai dari konsentrasi dan morfologi spermatozoa pada tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur Sprague Dawley secara in vivo.

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

4

2.

Pemberian ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees berpengaruh terhadap densitas sel spermatogenik yang dinilai dari diameter tubulus seminiferus dan tebal lapisan germinal pada tikus putih (Rattus norvegicus) jantan galur Sprague Dawley secara in vivo.

1.5

Manfaat Penelitian Memberikan manfaat kepada masyarakat luas mengenai khasiat ekstrak

etil asetat lumut hati Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees yang berasal dari gunung Slamet Purwokerto sebagai peningkat kualitas sperma dan dapat memberikan informasi dalam pengembangan ilmu reproduksi yang kemudian dapat digunakan dalam pengobatan infertilitas.


BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1

Mastigophora diclados Lumut hati Mastigophora diclados tersebar di Indonesia, Malaysia,

Jepang, Malagasi, Taiwan (Agnieszka dan Asakawa, 2010). Di Indonesia Mastigophora diclados banyak ditemukan di dataran tinggi yang sejuk dan lembab seperti di hutan Gunung Slamet Purwokerto, hutan pegunungan Taman Nasional Lore Lindu Sulawesi Tengah, dan Gunung Patuha Bandung (Gradstein dan Culmsee, 2010; Ida dan Gradstein, 2011; Gradstein et al., 2011). Mastigophora diclados dikenal dengan berbagai nama diantaranya Jungermannia diclados β calcarata (Reinw., Blume et Nees) Nees nom. Illeg, Jungermannia scorpioides Reinw., Blume et Nees, Lepicolea fissa (Nees) Steph, Mastigophora diclados f. conferta (Nees) Schiffn dan sebagainya (Söderström et al., 2010).

Gambar 2.1 Lumut hati Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees (Sumber: Purnamasari, 2012).

2.1.1

Klasifikasi tanaman (Crandall-Stotler et al., 2008) Dalam

taksonomi,

kedudukan

Mastigophora

diclados

dapat

diklasifikasikan sebagai berikut: Kingdom

: Plantae

Phylum

: Marchantiophyta

Class

: Jungermanniopsida

Orde

: Jungermanniales

Suborde

: Lophocoleineae

Family

: Mastigophoraceae 5 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

6

2.1.2

Genus

: Mastigophora Nees.

Species

: Mastigophora diclados (Brid.) Nees

Kandungan Kimia Ekstrak etil asetat Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees positif

mengandung terpenoid (Walidah, 2014). Ekstrak eter Mastigophora diclados yang berasal dari Tahiti mengandung herbertene,

-herbertenol,

-herbertenol

dan herbertenediol kemudian ekstrak dietil eter dan metanol mengandung (+)drimenol,

(-)- -herbertenol,

(-)-herbertenediol,

mastigophorene

A,

(-)-mastigophorene C, (-)-mastigophorene D, (-)-ent-pimara-8, 15-dien-19-oic acid, (-)-diplophyllolide A dan (-)-diplophyllin (Komala et al., 2010).

2.1.3

Aktivitas Biologi Mastigophora diclados memiliki aktivitas sitotoksik terhadap HL-60 dan

sel KB,

sebagai antimikrobial terhadap Bacillus subtilis dan Staphylococcus

aureus, sebagai antifungi untuk Botrytis cinerea dan Rhizoctonia solani serta memiliki aktivitas antioksidan (Komala et al., 2010).

2.2

Ekstrak (Depkes RI, 2000) Ekstrak adalah sediaan kental yang diperoleh dengan mengekstraksi

senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa diperlakukan sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan. Faktor yang berpengaruh pada mutu ekstrak adalah: 1. Faktor biologi, mutu ekstrak dipengaruhi dari bahan asal (tumbuhan obat), dipandang secara khusus dari segi biologi yaitu identitas jenis, lokasi tumbuhan asal, periode pemanenan, penyimpanan bahan, umur tumbuhan dan bagian yang digunakan. 2. Faktor kimia, mutu ekstrak dipengaruhi dari bahan asal (tumbuhan obat), dipandang secara khusus dari kandungan kimia, yaitu : a. Faktor internal, seperti jenis senyawa aktif dalam bahan, komposisi kualitatif senyawa aktif, kadar total rata-rata senyawa aktif.

7

b. Faktor eksternal, seperti metode ekstraksi perbandingan ukuran alat ekstraksi, pelarut yang digunakan dalam ekstraksi, kandungan logam berat, ukuran kekerasan, dan kekeringan bahan.

2.3

Tinjauan Hewan Coba Menurut Krinke (2000), klasifikasi tikus putih (Rattus norvegicus) adalah

sebagai berikut :

2.4

Regnum

: Animalia

Filum

: Chordata

Subfilum

: Vertebrata

Kelas

: Mamalia

Orde

: Rodenta

Family

: Murinae

Genus

: Ratus

Spesies

: Rattus norvegicus

Sistem Reproduksi Tikus Jantan Sistem reproduksi hewan jantan terdiri atas testis, epididimis, duktus

deferens, kelenjar aksesori (kelenjar vesikulosa, prostat dan bulbouretralis), uretra dan penis (William, 2005).

Gambar 2.2. Anatomi sistem reproduksi tikus jantan (Sumber: Suckow, 2006) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

8

Testis merupakan sepasang struktur berbentuk oval dan sedikit gepeng. Testis terletak dalam skrotum dan dikelilingi oleh simpai tebal jaringan ikat kolagen, yaitu tunika albuginea. Tunika albuginea menebal pada permukaan posterior testis dan membentuk mediastinum testis, yaitu tempat penjuluran yang membagi kelenjar menjadi sekitar 250 kompartemen piramid yang disebut lobulus testis. Setiap lobulus dihuni oleh 1-4 tubulus seminiferus (Manika et al., 1991). Testis berfungsi untuk menghasilkan spermatozoa dan menghasilkan hormon (testosteron). Sekitar 80%, testis terdiri dari tubulus seminiferus yang berkelakkelok, yang didalamnya berlangsung spermatogenesis (Heffner dan Danny, 2008). Vesikula seminalis terdiri atas tabung berkelok, fungsinya menyekresi mukus yang banyak mengandung fruktosa, selain itu juga menyekresi asam sitrat, prostaglandin dan fibrinogen yang berperan dalam memberikan nutrisi dan melindungi spermatozoa (Guyton, 1997; Sloalen, 2003). Prostat merupakan kelenjar aksesoria pria yang menyelubungi uretra saat keluar dari kandung kemih. Sekresinya merupakan cairan encer bersifat basa yang mengandung ion sitrat, kalsium, ion fosfat, enzim pembeku, dan profibrinolisin (Guyton, 1997). Cairan ini berfungsi untuk menetralisir asiditas vagina selama senggama dan meningkatkan motilitas spermatozoa yang akan optimum pada pH 6,0 – 6,5. Sepasang kelenjar bulboureteral merupakan kelenjar kecil yang ukuran dan bentuknya menyerupai kacang polong. Kelenjar ini menyekresi cairan basa yang mengandung mukus ke dalam uretra penis untuk memulasi dan melindungai uretra (Sloalen, 2003). Tubulus seminiferus merupakan tempat terjadinya spermatogenesis. Tubulus seminiferus dikelilingi oleh membran basal. Di dekat membran basal ini terdapat sel progenitor untuk produksi spermatozoa. Epitel yang mengandung spermatozoa yang sedang berkembang disepanjang tubulus disebut epitel seminiferus atau epitel germinal. Pada potongan melintang testis, spermatosit dalam tubulus berada dalam berbagai tahap pematangan. Di antara spermatosit terdapat sel sertoli. Sel ini berperan secara metabolik dan struktural untuk menjaga spermatozoa yang sedang berkembang. Sel sertoli memfagosit sitoplasma spermatid yang telah dikeluarkan. Sel ini juga berfungsi pada proses aromatisasi

prekursor

androgen

menjadi

estrogen,

suatu

produk

yang

menghasilkan pengaturan umpan balik lokal pada sel leydig yang memproduksi androgen. Selain itu sel sertoli juga menghasilkan protein pengikat androgen. Produksi androgen sendiri terjadi di dalam kantong dari sel khusus (sel leydig) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

9

yang terdapat di daerah interstitial antara tubulus-tubulus seminiferus (Heffner, 2008). Tubulus seminiferus tikus lebih tebal dari manusia yakni pada tikus 347±5 μm dan pada manusia 262±9 μm, tetapi pembatas tubulus pada tikus jauh lebih tipis dibanding manusia yakni 1,4±1 μm pada tikus dan 15,9±3,4 μm pada tikus. Epitel seminiferus tikus mengandung 40% lebih sel spermatogenik dari volumenya, dua kali lebih banyak dari epitel seminiferus manusia (Ilyas, 2007). Epididimis

merupakan

daerah

penumpukan

dan

penyimpanan

spermatozoa setelah meninggalkan testis. Secara umum epididimis memiliki fungsi utama, yaitu transportasi, pemekatan (konsentrasi), pematangan dan penyimpanan spermatozoa (Sherwood, 2001). Struktur epididimis yaitu berbentuk koma dapat menahan batas posterolateral testis. Epididimis dibentuk oleh saluran berkelok-kelok secara tidak teratur yang disebut duktus epididimis. Duktus epididimis diperkirakan mempunyai tiga regio: kaput (kepala), korpus (badan), dan kauda (ekor). Duktusduktus epididimis dari setiap testis menyatu untuk membentuk sebuah saluran berdinding tebal dan berotot yang disebut duktus (vas) deferens (Fawcett, 2002). Duktus (vas) deferens berfungsi sebagai tempat penyimpanan spermatozoa yang penting. Hal ini disebabkan karena spermatozoa yang terkemas rapat relatif inaktif dan kebutuhan metabolit mereka juga rendah. Spermatozoa dapat disimpan dalam duktus deferens selama beberapa hari walaupun tidak mendapat pasokan nutrisi dari darah dan hanya mendapat makanan dari gula-gula sederhana yang terdapat disekresi tubulus (Sherwood, 2001).

2.5

Spermatozoa Spermatozoa merupakan hasil akhir dari proses spermatogenesis.

Spermatozoa terdiri atas kepala (berisi inti) dan ekor. Panjangnya sekitar 60 μm dan merupakan sel yang bergerak aktif (motil). Panjangnya sekitar 5 μm dan lebarnya sekitar 3 μm. Kepala terutama terdiri atas inti dengan kromatin yang menggumpal yang dua pertiga anteriornya dibungkus erat oleh akrosom (Finn, 1994).

Gambar 2.3 Spermatozoa tikus (Sumber: Inveresk Research et al., 2000) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

10 Ekor spermatozoa memiliki penjang sekitar 55 μm dan ketebalannya menurun dari sekitar 1 μm dekat kepala menjadi 0,1 μm dekat ujungnya. Dengan menggunakan mikroskop yang baik maka ekor akan tampak terdiri atas leher, bagian tengah (middle piece), bagian utama (principal piece) dan bagian ujung (end piece) (Finn, 1994). Spermatozoa merupakan hal yang penting dalam pemeriksaan infertilitas pada pria. Untuk mengetahui kualitas dan kuantitas spermatozoa beserta cairan semen di sekitarnya dilakukan dengan suatu analisis semen. Dalam suatu penelitian dikatakan bahwa untuk mendiagnosis suatu infertilitas pada pria dapat ditentukan melalui pengukuran konsentrasi, motilitas, dan morfologi dari spematozoa. Batasan untuk subfertil adalah bila konsentrasi spermatozoa kecil dari 13,5x106/mL, sperma yang motil kecil dari 32%, dan kecil dari dari 9% morfologi spermatozoa yang normal. Sedangkan untuk batasan fertil adalah bila konsentrasi spermatozoa lebih dari 48,0x106/mL, sperma yang motil lebih besar 63%, dan lebih dari dari 12% morfologi spermatozoa normal (Guzick et al., 2001).

2.6

Spermatogenesis Pada Tikus Spermatogenesis adalah proses berkelanjutan dari pembelahan sel

germinal untuk menghasilkan spermatozoa yang dimulai dari masa pubertas (Patricia, 2007). Spermatogenesis terjadi di dalam semua tubulus seminiferus selama kehidupan seksual aktif sebagai akibat dari rangsangan hormon gonadotropin hipofisis anterior (Guyton, 1996; Junquueira et al., 1997). Proses spermatogenesis dibagi menjadi beberapa tahap, yaitu proliferasi mitotik, meiosis, dan spermiogenesis (Sherwood, 2001). Pada tahap awal spermatogenesis, spermatogonia primitif berkumpul di tepi membran basal epitel germinativum yang disebut sebagai spermatogonia tipe A (Guyton, 1996). Spermatogonia tersebut membelah menjadi sel yang sedikit lebih berdiferensiasi, yaitu spermatogonia tipe B. Pada tahap ini spermatogonia bermigrasi ke arah sentral di antara sel-sel sertoli.

Dalam waktu kira-kira 24 hari setiap

spermatogonium yang melewati lapisan pertahanan masuk ke dalam lapisan sel sertoli dimodifikasi secara berangsur-angsur dan membesar untuk membentuk spermatozit primer yang besar dengan 46 kromosom. Pada akhir hari ke-24, setiap spermatosit primer terbagi dua menjadi spermatosit sekunder, proses ini disebut sebagai meiosis pertama . UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

11

Dua sampai tiga hari meiosis kedua terjadi menghasilkan spermatid yang memiliki 23 kromosom tunggal (Sherwood, 2001; Guyton, 1996). Setelah fase meiosis selesai, tidak lagi terjadi pembelahan sel. Setiap spermatid mengalami modifikasi

menjadi

sebuah

spermatozoa

yang

disebut

sebagai

fase

spermiogenesis. Selama beberapa minggu berikutnya setelah meiosis, setiap spermatid secara perlahan-lahan berubah menjadi spermatozoa dengan (1) menghilangkan beberapa sitoplasmanya, (2) mengatur kembali bahan kromatin dari inti spermatid untuk membentuk satu kepala yang padat, dan (3) mengumpulkan sisa sitoplasma dan membran sel pada salah satu ujung dari sel untuk membentuk ekor. Pada tikus ada 14 tahap siklus spermatogenik yang terjadi pada tubulus seminiferus yang membutuhkan 12 hari untuk menyelesaikan satu siklus yang terdiri dari 14 tahap. Sebuah spermatogonium tikus membutuhkan empat siklus untuk pada akhirnya membetuk spermatozoa, sehingga dibutuhkan waktu 48 hari untuk menyelesaikan langkah spermatogenik secara keseluruhan (Krinke, 2000).

2.7

Antioksidan Antioksidan adalah zat yang dapat melawan pengaruh bahaya dari radikal

bebas atau reactive oxygen species (ROS) yang terbentuk sebagai hasil dari metabolisme oksidatif yaitu hasil dari reaksi-reaksi kimia dan proses metabolik yang terjadi dalam tubuh (Goldberg, 2003). Senyawa antioksidan dapat berfungsi sebagai penangkap radikal bebas, pembentuk kompleks dengan logam-logam peroksida dan berfungsi sebagai senyawa pereduksi (Rajeshwar et al., 2005). Menurut Miller et al. (2000) antioksidan dapat menangkap radikal bebas sehingga menghambat mekanisme oksidatif yang merupakan penyebab penyakit-penyakit degeneratif seperti penyakit jantung, kanker, katarak, disfungsi otak dan artritis. Gordon (1990) menjelaskan sesuai mekanisme kerjanya, antioksidan memiliki dua fungsi. Fungsi pertama merupakan fungsi utama dari antioksidan yaitu sebagai pemberi atom hidrogen. Antioksidan yang mempunyai fungsi utama tersebut sering disebut sebagai antioksiden primer. Senyawa ini dapat memberikan atom hidrogen secara cepat ke radikal lipida atau mengubahnya ke bentuk yang lebih stabil, sementara turunan radikal antioksidan tersebut memiliki keadaan lebih stabil dibanding radikal lipida. Fungsi kedua merupakan fungsi sekunder antioksidan, yaitu memperlambat laju autooksidasi dengan berbagai


12

mekanisme diluar mekanisme pemutusan rantai autooksidasi dengan pengubahan radikal lipida ke bentuk yang lebih stabil. Senyawa yang termasuk dalam kelompok antioksidan primer adalah vitamin E (tokoferol), vitamin C (asam askorbat), β-karoten, glutation dan sistein (Taher, 2003). Sedangkan kelompok antioksidan sekunder adalah etilendiamin tetraasetat (EDTA), asam sitrat dan asam tartrat (Winarno, 1992).


BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN

3.1

Tempat dan Waktu penelitian Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Penelitian 1 dan 2, Laboratorium

Farmakologi serta Animal House Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Penelitian berlangsung dari bulan Maret hingga bulan Juni 2014.

3.2

Bahan

3.2.1

Hewan Uji Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih

(Rattus norvegicus) jantan galur Sprague Dawley berumur 7-8 minggu dengan berat badan 250-350 gram yang diperoleh dari Laboratorium Penelitian dan Pengujian Terpadu (LPPT) Universitas Gajah Mada.

3.2.2

Bahan Uji Bahan uji yang digunakan adalah ekstrak etil asetat lumut hati

Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees yang telah diteliti oleh Walidah (2014). Mastigophora diclados (Brid. ex Web.) Nees diperoleh dari dari Gunung Slamet Purwokerto dan dideterminasi di Herbarium Bogoriense Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi-Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia Bogor.

3.2.3

Bahan Kimia Bahan-bahan yang dipergunakan dalam penelitian ini adalah pakan tikus

berupa pellet, aquadest, natrium karboksi metil selulosa (BLANOSE® 7M1F), eter, natrium klorida (NaCl) fisiologis, larutan eosin Y 1%, larutan George, dan formalin buffer 10%.

3.3

Alat Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu: pot, gelas ukur, kaca

arloji, timbangan analitik (AND GH-202), kandang hewan, tempat makan dan minum tikus, timbangan hewan (ohauss), sonde, wadah pembiusan, beaker glass, lumpang dan alu, cawan penguap, spatula, kaca objek, kaca penutup, seperangkat 13 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

14

alat bedah, Hemositometer improved neubeur (NESCO), mikro pipet (Eppendorf research plus), miskroskop motic B1 series dan miskroskop optik (motic BA310).

3.4

Rancangan penelitian Penelitian ini merupakan eksperimen murni dengan rancangan acak

lengkap (RAL) dengan beberapa kondisi perlakuan. Perlakuan dikelompokkan menjadi 4 bagian dengan masing-masing 5 ekor tikus putih jantan galur Sprague Dawley (WHO, 2000). Empat kelompok tersebut terdiri kelompok kontrol dan kelompok yang diberikan ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados dengan 3 dosis yang berbeda. Tabel 3.1. Pembagian kelompok hewan uji berdasarkan perlakuannya Kelompok I (Kontrol) II (Dosis Rendah) III (Dosis Sedang) IV (Dosis Tinggi)

Jumlah Tikus 5

5

5

5

Lama Perlakuan

Perlakuan

Kelompok I, diberi air suling

48 Hari

Kelompok II, diberi ekstrak suspensi ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados dengan dosis 1 mg/kgBB Kelompok III, diberi ekstrak suspensi ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados dengan dosis 10 mg/kgBB Kelompok IV, diberi ekstrak suspensi ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados dengan dosis 100 mg/kgBB

3.5

Kegiatan penelitian

3.5.1

Persiapan hewan uji

Bagian yang Digunakan Kauda epididimis dan testis

48 Hari

Kauda epididimis dan testis

48 Hari


48 Hari


Hewan coba yang di gunakan adalah tikus putih jantan galur Sprague Dawley berumur 7-8 minggu dengan berat badan 200-350 gram diaklimatisasi selama tiga minggu agar dapat menyesuaikan dengan lingkungannya. Selama proses adaptasi, dilakukan pengamatan kondisi umum dan penimbangan berat badan.


15

3.5.2

Pemberian perlakuan Penelitian ini menggunakan 20 ekor tikus putih jantan galur Sprague

Dawley yang diberikan 4 perlakuan yang berbeda. Masing-masing perlakuan terdiri atas 5 ekor tikus putih jantan. Ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados disuspensikan dalam pembawa natrium karboksi metil selulosa (NaCMC) 0,5% dengan dosis yang telah ditentukan, diberikan secara oral dengan menggunakan sonde. Pemberian ekstrak diberikan peroral satu hari sekali setiap pagi hari dan dilakukan selama 48 hari sesuai dengan siklus spermatogenesis (Krinke, 2000).

3.5.3

Pengukuran parameter uji Tikus jantan putih galur Sprague Dawley yang digunakan pada hari ke-49

dibius dengan eter, kemudian dibedah diambil testis dan kauda epididimis.

3.5.3.1 Pengukuran Bobot Testis (Arini, 2012) Pengukuran ini dilakukan dengan cara menimbang testis menggunakan timbangan analitik. Hasil bobot testis tikus yang diberi perlakuan dibandingkan dengan bobot testis tikus kontrol.

3.5.3.2 Pengukuran Konsentrasi Spermatozoa (Ilyas, 2007) Pengukuran konsentrasi spermatozoa dilakukan dengan cara mengambil spermatozoa pada kauda epididimis. Spermatozoa yang didapat diletakkan pada kaca arloji yang berisi cairan NaCl fisiologis 0,9% sebanyak 500 μL. Spermatozoa dimasukkan kedalam bilik hitung Neubauer (Hemasitometer) sampai bilik hitung Neubauer terisi rata. Kemudian dihitung jumlah spermatozoa pada salah satu bilik hitung Neubauer dan selanjutnya ditentukan pengenceran yang akan dilakukan dan jumlah kotak yang akan dihitung (Tabel 3.2) Tabel 3.2. Pengenceran yang dilakukan dan kotak yang dihitung No. 1. 2. 3.

Jumlah spermatozoa dalam satu kotak ˃40 15-40 ˂15

Pengenceran 50 kali 20 kali 10 kali

Kotak yang dihitung 5 10 25

Dilakukan pengenceran spermatozoa berdasarkan jumlah spermatozoa yang terhitung. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

16

Tabel 3.3. Cara pengenceran spermatozoa (Poin a dan b menunjukan opsi perlakuan hanya salah satu yang dipilih) No.

Pengenceran

1.

50 kali

2.

20 kali

3.

10 Kali

Pembuatan pengenceran a. 980 μL larutan George + 20 μL spermatozoa b. 2.450 μL larutan George + 50 μL spermatozoa Larutan George + 50 μL spermatozoa a. 900 μL larutan George + 100 μL spermatozoa b. 450 μL larutan George + 50 μL spermatozoa

Perhitungan spermatozoa dengan jumlah kotak yang dihitung sesuai dengan jumlah spermatozoa dan cara pengenceran pada tabel diatas. Pengukuran spermatozoa sesuai rumus di bawah ini:

Keterangan: n adalah jumlah spermatozoa yang terhitung. Angka 10.000 merupakan volume bilik hitung Neubauer. Fp merupakan faktor pengenceran yang dilakukan sedangkan k merupakan jumlah kotak kecil yang dihitung pada saat pengamatan. Angka 25 menunjukkan total kotak kecil yang terdapat dalam bilik hitung Neubauer. vNaCl

merupakan banyaknya volume NaCl (mL)

fisiologis yang digunakan untuk membantu mengeluarkan spermatozoa dari kauda epididimis. Perhitungan konsentrasi spermatozoa (Juta/mL) dapat terlihat dari tabel 3.4 berikut : Tabel 3.4. Rumus konsentrasi spermatozoa No. 1. 2. 3.

Jumlah kotak yang dihitung 5 10 25

Rumus konsentrasi spermatozoa n x 10.000 x 50 x 5 x0,5 n x 10.000 x 20 x 5 x0,5 n x 10.000 x 10 x 5 x0,5

3.5.3.3 Pengamatan Morfologi (Inveresk Research et al., 2000) Morfologi sperma dapat diamati pada sediaan apus dengan pewarnaan eosin Y 1%. Suspensi sperma sebanyak 50 μL dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 300 μL eosin Y 1% kemudian dikocok perlahan. Sperma diinkubasi pada suhu kamar selama sekitar 45-60 menit kemudian diresuspensikan dengan pipet tetes.


17

Pemeriksaan morfologi sperma dilakukan dengan membedakan bentuk sperma normal dan abnormal dari 200 sperma yang diamati. Pengamatan dilakukan dibawah miskroskop dengan pembesaran 400-1000 kali.

3.5.3.4 Pengukuran Densitas Spermatogenik (Arini, 2012; Turk et al., 2008) Pembuatan preparat histologi testis tikus dilakukan di Laboratorium Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Untuk menentukan perubahan densitas sel spermatogenik, preparat histologi testis diamati di bawah miskroskop dengan perbesaran 100 kali (10x10). Dua puluh tubulus seminiferus diperiksa secara acak per bagian diameter dan ketebalan lapisan sel germinal (dari membran basal menuju lumen tubulus) diukur menggunakan mikrometer okuler pada mikroskop dan dihitung ukuran rata-rata tubulus seminiferus dan ketebalan lapisan germinal.

3.5.4

Analisa Data (Arini, 2012) Hasil penelitian yang diperoleh diolah dengan menggunakan program

pengolahan data statistik SPPS 20 yang meliputi uji normalitas, uji homogenitas, uji parametrik (one way ANOVA), atau uji non parametrik (Kruskal Wallis). Jika hasil dari uji ANOVA maupun Kruskal Wallis menunjukkan perbedaan yang signifikan (p ˂ 0,05) maka analisis data dilanjutkan dengan menggunakan uji Multiple

Comparisons

tipe

LSD

(Least

Significant

Difference).


BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1

Hasil Penelitian

4.1.1

Pengukuran Bobot Testis Hasil pengukuran bobot testis tikus setelah pemberian ekstrak etil asetat

Mastigophora diclados selama 48 hari dapat dilihat pada tabel berikut: Tabel 4.1. Rerata bobot testis tikus No

Kelompok

1. 2. 3. 4.

Kontrol Dosis Rendah (1 mg/kgBB) Dosis Sedang (10 mg/kgBB) Dosis Tinggi (100 mg/kgBB)

Rerata Bobot Testis Tiap Kelompok (gram) ±SD 1,65±0,09 1,60±0,18 1,62±0,08 1,62±0,20

Data bobot testis yang diperoleh dilakukan uji persyaratan yaitu uji homogenitas dan uji normalitas. Hasil uji normalitas Shapiro-Wilk dan uji homogenitas Levene menunjukkan bahwa data bobot testis terdistribusi normal (p ≥ 0,05) dan homogen (p ≥ 0,05). Kemudian dilakukan analisis dengan uji one way ANOVA, hasilnya menunjukkan nilai signifikan 0,937 (p ≥ 0,05) artinya perbedaan bobot testis tidak berbeda secara bermakna. Hasil analisis statistik dapat dilihat pada Lampiran 13.

4.1.2

Perhitungan Konsentrasi Spermatozoa

Data konsentrasi spermatozoa yang diperoleh dilakukan uji persyaratan yaitu uji homogenitas dan uji normalitas. Hasil uji normalitas Shapiro-Wilk dan uji homogenitas Levene menunjukkan bahwa data konsentrasi spermatozoa terdistribusi normal (p ≥ 0,05) dan homogen (p ≥ 0,05). Kemudian dilakukan analisis dengan uji one way ANOVA, hasilnya menunjukkan bahwa nilai signifikan 0,000 (p ˂ 0,05). Selanjutnya dilakukan uji LSD dengan Post Hoc test yang hasilnya terdapat perbedaan bermakna (p ˂ 0,05) antara kelompok kontrol dengan kelompok dosis sedang dan dosis tinggi serta juga terdapat perbedaan bermakna antara kelompok dosis rendah terhadap kelompok dosis sedang dan dosis tinggi. Analisis statistik dapat dilihat pada Lampiran 14. 18 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

19

Hasil perhitungan konsentrasi spermatozoa tikus setelah pemberian ekstrak etil asetat Mastigophora diclados selama 48 hari dapat dilihat pada tabel berikut: Tabel 4.2. Rerata konsentrasi spermatozoa tikus Kelompok

1. 2. 3. 4.


Konsentrasi Spermatozoa (mL/juta)

No

Rerata Konsentrasi Spermatozoa Tiap Kelompok (Juta/mL) ± SD 50,00±2,46 50,50±2,84 61,50±2,82 90,75±3,40

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 mg/kgBB

1 mg/kgBB

10 mg/kgBB

100 mg/kgBB

Dosis Mastigophora diclados

Gambar 4.1. Grafik rerata konsentrasi spermatozoa tikus setelah diberi perlakuan selama 48 hari 4.1.3

Pengamatan Morfologi Spermatozoa Persentase morfologi tikus yang abnormal yang diperoleh dilakukan uji

persyaratan yaitu uji homogenitas dan uji normalitas. Hasil uji normalitas Shapiro-Wilk dan uji homogenitas Levene menunjukkan bahwa data persentase sperma yang abnormal terdistribusi normal (p ≥ 0,05) dan homogen (p ≥ 0,05). Kemudian dilakukan analisis dengan uji one way ANOVA, hasilnya menunjukkan menunjukkan nilai signifikan 0,001 (p ˂ 0,05). Selanjutnya dilakukan uji LSD dengan Post Hoc test yang hasilnya terdapat perbedaan bermakna (p ˂ 0,05) antara kelompok kontrol dengan kelompok yang diberikan ekstrak, namun tidak terdapat

perbedaan

bermakna

antar

kelompok

yang

diberikan

ektrak

Mastigophora diclados dengan berbagai dosis (p ≥ 0,05). Analisis statistik dapat dilihat pada Lampiran 15.


20

Hasil pengamatan morfologi spermatozoa tikus setelah pemberian ekstrak etil asetat Mastigophora diclados selama 48 hari dapat dilihat pada tabel berikut: Tabel 4.3. Rerata persentase morfologi sperma yang abnormal Kelompok

1. 2. 3. 4.


Persentase morfologi sperma yang abnormal

No

Rerata sperma abnormal tiap kelompok (%) ±SD 9,08±1,02 6,66±1.00 6,58±0,80 5,48±1,22

10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 mg/kgBB

1 mg/kgBB 10 mg/kgBB 100 mg/kgBB Dosis ekstrak Mastigophora diclados

Gambar 4.2. Grafik rerata persentase sperma yang abnormal tikus setelah diberi perlakuan selama 48 hari 4.1.4

Pengukuran Diameter Tubulus Seminiferus Hasil pengukuran diameter tubulus seminiferus tikus setelah pemberian

ekstrak etil asetat Mastigophora diclados selama 48 hari dapat dilihat pada tabel berikut: Tabel 4.4. Rerata diameter tubulus seminiferus No

Kelompok

1. 2. 3. 4.


Rerata Diameter Tubulus Seminiferus (μm) ±SD 178,33±8,83 165,74±34,71 180,08±20.22 188,32±17,59


21

Diameter tubulus seminiferus (μm)

195 190

185 180 175 170 165 160 155

150 0 mg/kgBB

1 mg/kgBB 10 mg/kgBB 100 mg/kgBB Dosis ekstrak Mastigophora diclados

Gambar 4.5. Grafik rerata diameter tubulus seminiferus tikus setelah diberi perlakuan selama 48 hari Data diameter tubulus seminiferus yang diperoleh dilakukan uji persyaratan yaitu uji homogenitas dan uji normalitas. Hasil uji normalitas Shapiro-Wilk dan uji homogenitas Levene menunjukkan bahwa data diameter tubulus seminiferus tidak terdistribusi normal (p ˂ 0,05) dan tidak homogen (p ˂ 0,05) sehingga data diuji lebih lanjut dengan uji Kruskal Wallis. Hasilnya menunjukkan tidak ada perbedaan yang bermakna (p ≥ 0,05) karena nilai signifikansi 0,574. Hasil analisis statistik dapat dilihat pada Lampiran 16. 4.1.5

Pengukuran Tebal Sel Germinal Hasil pengukuran tebal sel germinal tikus setelah pemberian ekstrak etil

asetat Mastigophora diclados selama 48 hari dapat dilihat pada tabel berikut: Tabel 4.5. Rerata tebal sel germinal No 1. 2. 3. 4.

Kelompok Kontrol Dosis Rendah (1 mg/kgBB) Dosis Sedang (10 mg/kgBB) Dosis Tinggi (100 mg/kgBB)

Rerata Tebal Sel Germinal (μm) ±SD 84,55±3,65 90,30±7,07 87,99±10,07 92,69±7,99


22

94 Tebal sel germinal (μm)

92 90 88 86 84 82

80 0 mg/kgBB 1 mg/kgBB 10 mg/kgBB Dosis Mastigophora dicladosis

100 mg/kgBB

Gambar 4.5. Grafik rerata tebal sel germinal tikus setelah diberi perlakuan selama 48 hari Data tebal sel germinal yang diperoleh dilakukan uji persyaratan yaitu uji homogenitas dan uji normalitas. Hasil uji normalitas Shapiro-Wilk dan uji homogenitas Levene menunjukkan bahwa data tebal sel germinal terdistribusi normal (p ˂ 0,05) dan homogen (p ˂ 0,05). Kemudian dilakukan analisis dengan uji one way ANOVA, hasilnya menunjukkan bahwa nilai signifikan 0,396. Hasil menunjukkan tidak ada perbedaan yang bermakna (p ≥ 0,05). Hasil analisis statistik dapat dilihat pada Lampiran 17.

4.2

Pembahasan Penelitian ini menggunakan ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora

diclados. Ekstrak ini digunakan karena Mastigophora diclados memiliki kandungan sesquiterpenoid yaitu herbertenediol dan (-)-mastigophorene D. yang mempunyai aktivitas antioksidan lebih tinggi dibandingkan dengan vitamin C (Komala et al., 2010). Pemberian vitamin C sebagai antioksidan pada mencit setelah

pemberian

tembakau

dapat

memperbaiki

spermatogenesis

dan

meningkatkan kualitas sperma (Nugraheni et al., 2003). Sperma merupakan hasil perkembangan spermatogonia. Proses ini disebut spermatogenesis. Jika proses spermatogenesis terganggu, maka hasil dari spermatogenesis juga akan terganggu. Salah satu penyebab terganggunya proses ini adalah adanya radikal bebas. Banyak senyawa, ketika dimetabolisme oleh sel-sel dapat menyebabkan meningkatnya radikal bebas, yang akan bereaksi dengan oksigen sehingga UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

23

menimbulkan reactive oxygen spesies (ROS). ROS biasanya disintesis dalam beberapa proses metabolisme penting untuk sel termasuk spermatozoa. Namun, ketika ROS diproduksi berlebihan dapat menginduksi pembentukan peroksida lipid (Turk et al., 2007). ROS dapat bereaksi dengan banyak molekul intraseluler, terutama asam lemak tak jenuh (fosfolipid, glikolipid, gliserida, dan sterol) dan protein transmembran yang mempunyai asam amino yang mudah teroksidasi. Oksidasi molekul-molekul ini menyebabkan peningkatan permeabilitas membran sel. ROS dapat menyerang ikatan tak jenuh membran lipid. Dengan demikian, kenaikan radikal bebas dalam sel dapat menginduksi peroksidasi lipid oleh kerusakan oksidatif asam lemak tak jenuh dalam membran sel (Turk et al., 2007). Hal ini yang menyebabkan spermatozoa sangat rentan terhadap kerusakan peroksidatif karena mengandung asam lemak tak jenuh. Peroksidasi lipid sperma akan menghancurkan struktur matriks lipid dalam membran spermatozoa, yang berhubungan dengan cepat hilangnya ATP intraseluler yang menyebabkan peningkatan morfologi sperma yang abnormal, serta dapat menghambat spermatogenesis pada kasus yang ekstrem (Turk et al., 2007). Pembentukan ROS dapat ditekan dengan antioksidan. Oleh karena itu, dengan memberikan senyawa yang dapat menekan ROS dapat meningkatkan kualitas dari sperma sehingga meningkatkan fertilitas pada pria (Turk et al., 2008; Khaki et al., 2009). Untuk melihat hubungan antara pengaruh aktivitas antioksidan yang terkandung dalam ekstrak dengan kemampuan meningkatkan kualitas sperma dan densitas sel spermatogenik, maka dilakukan penelitian dengan menggunakan 20 ekor tikus putih jantan galur Sprague Dawley yang berusia 7-8 minggu dengan bobot 200-350 gram. Galur ini dipilih karena pada penelitian Wilkison et al. (2000) menyatakan bahwa Sprague Dawley memiliki konsentrasi spermatozoa pada epididimis lebih tinggi dibandingkan tikus lain. Hewan uji dibagi menjadi 4 kelompok, yaitu kelompok kontrol dan kelompok yang diberikan ekstrak Mastigophora diclados dengan dosis 1 mg/kgBB, 10 mg/kgBB, serta 100 mg/kgBB. Kelompok kontrol diberikan suspensi NaCMC 0,05% dan kelompok yang diberikan ekstrak, diberikan ekstrak yang telah tersuspensi dalam NaCMC 0,5%. Setiap kelompok terdiri dari 5 ekor. Penentuan jumlah tikus yang digunakan dalam satu kelompok berdasarkan Research Guidelines For Evaluating The Safety And Efficacy Of Herbal UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

24

Medicines (WHO, 2000) yang menyatakan bahwa untuk hewan pengerat masingmasing kelompok perlakuan setidaknya terdiri dari 5 ekor. Hewan uji kemudian diaklimatisasi selama 3 minggu agar dapat menyesuaikan diri dengan lingkungan baru. Pemberian ekstrak dilakukan secara peroral dengan menggunakan sonde kepada hewan uji setiap hari selama 48 hari, sesuai dengan tahapan spermatogenesis. Sebelum pemberian suspensi, dilakukan penimbangan tikus, hal ini dilakukan untuk mengetahui berapa banyak suspensi yang akan diberikan. Parameter diamati pada penelitian ini adalah kualitas sperma dan densitas sel spermatogenik. Kedua faktor tersebut merupakan indikator untuk mengontrol fertilitas dari suatu individu (Solihati et al., 2013). Kualitas spermatozoa ditentukan berdasarkan pada konsentrasi, motilitas, dan morfologi spermatozoa (Akmal et al., 2008). Pada penelitian ini parameter kualitas sperma yang diukur adalah konsentrasi dan morfologi spermatozoa. Densitas sel spermatogenik dinilai dari diameter tubulus seminiferus dan tebal sel germinal. Pada penelitian ini indikator lain yang diukur adalah bobot testis dengan tujuan untuk melihat adanya aktivitas pertumbuhan sel dan aktivitas sekresi endokrin. Pada hari ke 49 hewan uji dikorbankan dengan cara membiusnya menggunakan eter. Kemudian dilakukan pembedahan dan diambil testis serta kauda epididimisnya sehingga pada akhirnya didapatkan data konsentrasi spermatozoa, morfologi sperma yang abnormal, diameter tubulus seminiferus, tebal sel germinal, dan bobot testis. Data yang diperoleh kemudian diolah menggunakan SPSS 20, dimana dilakukan uji normalitas dan uji homogenitas. dilanjutkan dengan uji one way ANOVA dan Kruskal Wallis yang selanjutnya dilakukan uji LSD. Kualitas sperma dilihat melalui parameter konsentrasi dan morfologi. Hasil analisis data konsentrasi spermatozoa menunjukkan ada perbedaan bermakna (p ˂0,05) antara kelompok kontrol dengan kelompok dosis sedang dan dosis tinggi serta juga terdapat perbedaan bermakna antara dosis rendah terhadap dosis sedang dan dosis tinggi. Artinya dengan pemeberian ekstrak Mastigophora diclados dapat meningkatkan konsentrasi spermatozoa pada dosis sedang dan tinggi. Analisis data morfologi sperma yang abnormal menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna (p ˂ 0,05) antara kelompok kontrol dan kelompok yang diberikan ekstrak Mastigophora diclados baik dosis rendah, dosis sedang maupun UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

25

dosis tinggi. Hal ini menunjukkan bahwa dengan pemberian ekstrak Mastigophora dapat menurunkan persentase sperma yang abnormal. Sejalan dengan bertambahnya dosis ekstrak yang diberikan semakin kecil persentase sperma yang abnormal. Persentase morfologi sperma yang abnormal pada kelompok kontrol sebesar 9,08%. Batasan fertil adalah bila lebih dari 12% morfologi spermatozoa yang normal (Guzick et al., 2001). Jadi, kelompok kontrol masih termasuk kedalam kategori fertil sehingga dapat dijadikan acuan, yang mana lebih dari 12% morfologi spermatozoa yang normal. Pada penilaian densitas sel spermatogenik, parameter yang dinilai adalah diameter tubulus seminiferus dan tebal sel germinal. Hasilnya menunjukkan adanya peningkatan diameter tubulus seminiferus dari kelompok kontrol ke kelompok dosis tinggi dan sedang tetapi tidak ada perbedaan yang bermakna (p ≥ 0,05). Pada tebal sel germinal terdapat peningkatan antar setiap kelompok. Peningkatannya berbanding lurus dengan dosis yang diberikan namun peningkatan ini tidak terdapat perbedaan yang bermakna (p ≥ 0,05). Pada hasil analisis diameter dan tebal sel germinal ada peningkatan tetapi tidak bermakna, hal ini mungkin dikarenakan belum tercapainya dosis ekstrak Mastigophora diclados yang paling optimal untuk meningkatkan parameter ini secara bermakna. Selanjutnya, hasil analisis dari data bobot testis menunjukkan tidak ada perbedaan bermakna (p ≥ 0,5) antara bobot testis kelompok kontrol dibandingkan dengan kelompok yang diberikan ekstrak. Jadi, dengan pemberian ekstrak Mastigophora diclados selama 48 hari terdapat perbaikan dalam konsentrasi dan morfologi sperma, diameter tubulus seminiferus, serta tebal sel germinal hal ini diduga disebabkan adanya pencegahan produksi radikal bebas oleh antioksidan yang dimiliki oleh lumut hati Mastigophora diclados. Hasil ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan Turk et al. (2007) bahwa dengan pemberian jus delima yang memiliki aktivitas antioksidan, dapat meningkatkan kualitas sperma dan densitas sel spermatogenik. Sedangkan pada bobot testis tidak ada perbedaan bermakna antara setiap kelompok, hal ini didukung oleh penelitian Wu et al. (1873) yang mengatakan bahwa senyawa antioksidan kemungkinan kurang berpengaruh terhadap bobot testis, tetapi lebih berpengaruh pada struktur spermatozoa.


BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN 5.1

Kesimpulan Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, dapat diambil beberapa

kesimpulan, diantaranya: 1.

Pemberian ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados berpengaruh terhadap konsentrasi spermatozoa yang dibuktikan dengan meningkatnya konsentrasi spermatozoa secara bermakna (p ˂ 0,5) pada dosis 10mg/kgBB dan 100 mg/kgBB dibandingkan kelompok kontrol.

2.

Pemberian ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados berpengaruh terhadap morfologi sperma yang dibuktikan dengan menurunnya persentase sperma yang abnormal secara bermakna (p ˂ 0,5) pada dosis 1 mg/kgBB, 10mg/kgBB dan 100 mg/kgBB dibandingkan kelompok kontrol

3.

Pemberian ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados tidak berpengaruh terhadap diameter tubulus seminiferus dan tebal sel germinal. Hal ini terlihat tidak adanya perbedaan yang bermakna (p ≥ 0,5) antara kelompok kontrol dan kelompok yang diberikan ekstrak.

4.

Dari hasil penelitian yang diperoleh dapat disimpulkan bahwa ekstrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados berpotensi sebagai peningkat kualitas sperma.

5.2

Saran Adapun saran untuk penelitian yang lebih lanjut adalah sebagai berikut:

1.

Perlu dilakukan penelitian mengenai motilitas spermatozoa yang merupakan parameter untuk menetukan kualitas sperma.

2.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui senyawa yang bertanggung jawab dalam meningkatkan kualitas sperma.

26 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

DAFTAR PUSTAKA

Agarwal A., Said, TM. (2005). Oxidative Stress, DNA Damage And Apoptosis In Male Infertility: a clinical approach. BJUI; 95: 503-7. Agarwal, A et al. (2004). Role Antioxidants In Treatment Of Male Infertility: an overview of the literature. Reproductive biomedicine online; 8(6): 616627. Agarwal, A., Lucky, H. Sekhon. (2010). The Role Of Antioxidant Therapy In The Treatment Of Male Infertility. Human Fertility; 13(4): 217–225. Agnieszka, L., Asakawa, Y. (2010). Chemosystematics of selected liverworts collected in Borneo. Tropical Bryology; 31: 33-42. Akmal, Muslim et al. (2008). Efek Paparan Dekok Biji Pinang (Areca Catechu) Terhadap Motilitas Spermatozoa Tikus (Rattus Norvegicus): Upaya Menemukan Kandidat Antifertilitas Pria. J. Ked. Hewan Vol. 2 No. 2 Arini, W. D. (2012). Uji Antifertilitas Ekstrak Etanol 70% Biji Jarak Pagar (Jatropha curcas L.) Pada Tikus Jantan Galur Sprague Dawley Secara In Vivo. Uin Jakarta. Skripsi. Crandall-Stotler, B., Stotler, RE., Long, DG. (2008). Morphology and classification of the Marchantiophyta. In Bryophyte Biology, Goffinet, B., Shaw AJ. (Eds). Cambridge University Press, Cambridge, 1-54. Depkes RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan. Jakarta. Hal : 3-5, 10-12. Fawcett, Don W. (2002). Buku Ajar Histologi. Jakarta: EGC 423-501 Finn, G. (1994). Textbook Histology. Diterjemahkan oleh Gunawijaya A. Buku Teks Histologi Jilid 2. Jakarta: Binapura Akasara. Goldberg, G. (2003). Plants: Diet and Health. I Owa State Press, Blackwell Publishing Company, 2121 State Avenue, Ames, USA. Gordon, M. H. (1990). The Mechanism of Antioksidants Action in Vitro. In: Hudson, B.J.F. (ed). Food Antioksidants. Elsevier Applied Science. London- New York. Gradstein., Culmsee. (2010). Bryophyte diversity on tree trunks in montane forests of Central Sulawesi, Indonesia. Tropical Bryology; 31: 95-105

27 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

28

Gradstein et al. (2011). Bryophytes of Mount Patuha, West Java, Indonesia Reinwardtia, A journal on Toxonomic Botany Plant sociology and ecology; 13(2): 107-123 Guyton, AC, Hall JE. (1997). Buku Ajar Fisiologi Kedokteran Edisi 9. EGC. Jakarta. Guzick, D.S et al. (2001). Sperm morphology, motility, and concentration in fertile and infertile men. N Engl J Med; 345(19). Heffner, L. J., Danny, J. S. (2008). At A Glance Sistem Reproduksi Edisi Kedua. Jakarta: Erlangga. Hal 24, 25, 26, 37. Ida, H., Gradstein, S.R . (2011). Liverworts and hornworts of Mt. Slamet, Cebtral Java (indonesia). Hikobia; 16: 61-66. Ilyas, S. (2007). Azoospermia dan Pemulihannya Melalui Regulasi Apoptosis Sel Spermatogenik Tikus (Rattus sp) Pada Penyuntikan Kombinasi TU & MPA. Disertasi. Inveresk Research., Huntingdon Life Sciences., Sequani., Glaxo Wellcome. (2000). Rat Sperm Morphological Assessment Guideline Document. Junquueira, L.C., Carneiro., J, Kelley R.O. Basic Histology. 8th ed. Diterjemahkan oleh Dr. Jan Tambayang. Histologi dasar. Ed 8. Jakarta: EGC, 1997. Khaki A, et al. (2009). Effects of Danae racemosa on Spermatogenesis in Rat. Journal of Medicinal Plants; 8(31). Komala, I., Ito, T., Nagashima, F. (2010). Cytotoxic,Rradical Scavenging, and Antimicrobial Activities of Sesquiterpenoids from Tahitian Liverworth Mastigophora diclados (Brid). Nees (Mastigophoracee). J .Nat. Med; 64:417-422. Krinke, G. J. (2000). The Laboratory Rat. San Diego, CA: Academic Press. Hal : 150-152. Program doktor Ilmu Biomedik. FKUI. Manika W., Tomaszewska., I, Ketut Sutama., I, Gede Putu., Thamrin, D Chaniago. (1991). Reproduksi, Tingkah Laku Dan Reproduksi Ternak Di Indonesia. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka Utama. Mathur, M. (2012). Herbal Aphrodisiac their Need, Biology and Status: Global and Regional Scenario. Journal of Natural Products; 5:131-146. Mathur, M., Sundaramoorthy, S. (2009). plants with aphrodisiac potential-the knowledge and the gaps. in: trivedi, P.C., (Ed), indian medicinal plants. Aavishkar publisher, Jaipur, india.pp.1-31; sood. S. K., Rana, S., UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

29

Lakhnpal, T.N., (2005): ethic aphrodisiac plant scientific, Jodhpur; pp.190. Miller, H. E., F. Rigelholf, L. Marquart, A. Prakash, M. Kanter. (2000). Antioxidant Content of Whole Grain Breakfast Cereals, Fruits and Vegetabels. Journal of The American College of Nutrition;19(3): 312S319S. Musfiroh, M., Rifki M., Noor W. (2012). Pengaruh Minyak Nigella sativa terhadap Kualitas Spermatozoa Tikus Wistar yangTerpapar Asap Rokok. J Indon Med Assoc; 62(5). Nugraheni, Titisari et al. (2003). Pengaruh Vitamin C Terhadap Perbaikan Spermatogenesis Dan Kualitas Spermatozoa Mencit (Mus Musculus L.) Setelah

Pemberian

Ekstrak

Tembakau

(Nicotiana

Tabacum

L.).

Biofarmasi 18 1 (1): 13-19 Patricia E. Lange. (2007). Endocrine Physiology 2nd Edition. Available from: pf MED:CINE. Purnamasari, E. (2013). Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Lumut Hati Mastigophora Diclados (Bird. Ex Web.) Nees Secara In Vivo. Uin Jakarta. Skripsi. Rajeshwar, Y., G. P. S. Kumar, M. Gupta, U. K. Mazumder. (2005). Studies on in Vitro Antioxidant Activities of Methanol Extract of Mucuna pruriens (Fabaceae) Seeds. European Bulletin of Drug Research; 13(1). Sherwood, L. (2001). Fisiologis manusia ; dari sel ke sistem ed. 2. Jakarta : EGC. Hal. 691-705. Sikka, S.C. (1996). Oxidative stress and role of antioxidants in normal and abnormal sperm function. Front Biosci; 1: 78-86 Sloalen, E. (2003). Anatomy and Phsyology An Easy Learner. Diterjemahkan oleh Veldam J. Anatomi dan Fisiologi Untuk Pemula. Jakarta: EGC. Söderström, Lars., S. Robbert Gradstein & Anders Hagborg. (2010). Monograph Checklist Of The Hornworts And Liverworts Of Java. Phytotaxa; 9: 53– 149. Solihati et al. (2013). Perkembangan Sel-Sel Spermatogenik dan Kualitas Sperm. Pascapemberian Ekstrak Pegagan (Centella asiatica). JITV Vol. 18 No 3 Th. 2013:192-201 Suckow, M.A., Steven H. W., Craig L. F. (2006). The Laboratory Rat Second Edition. USA : American College of Laboratory Animal Medicine Series. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

30

Sutyarso., Hendri, Busman. (2003). Hubungan Keadaan Hormon Testosteron Terikat Dengan Jumlah Dan Kualitas Spermatozoa Pria Infertil Idiopatik. J. Sains Tek; 9(3): 29 – 34 Taher, A. (2003). Peran Fitoestrogen Kedelai Sebagai Antioksidan dalam Penanggulangan Aterosklerosis. Tesis. Institut Pertanian Bogor, Bogor. Turk et al. (2008). Effects of pomegranate juice consumption on sperm quality, spermatogenic cell density, antioxidant activity and testosterone level in male rats. Clinical Nutrition; 27: 289-296. Walidah, ChurmatuL. (2014). Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etil Asetat Lumut Hati Mastigophora diclados Secara In Vivo. Uin Jakarta. Skripsi. Wilkinson, J.M., Halley, S., Towers, P.A. (2000). Comparison of male repductive parameters in three rat strains : Dark Agouti, Sprague-Dawley and Wistar. Australia: Laboratory Animals Ltd. Laboratory Animal 34, 70-75 William, O. R. (2005). Functional Anatomy and Physiology of Domestic Animals Third Edition. USA : Baltimore, Maryland. Male Reproduction chapter 13 hal 379-399. Winarni, S., Rina J., Bambang, P., Alfiah, H. (2011). Fraksi Etanol 96% Bui Koro Benguk ( Mucuna Pruriens L. ) Sebagai Peningkat Kualitas Spermatozoa Mencit (Mus Musculus). Jurnal Kesehatan Reproduksi; 1(2) : 60 – 66 Winarno, F.G. (1989). Kimia Pangan dan Gizi. PT Gramedia. Jakarta. Windadri, F. I. (2007). Lumut (Musci) di Kawasan Cagar Alam Kakenauwe dan Suaka Margasatwa Lambusango, Pulau Buton, Sulawesi Tenggara. Jurnal Biodiversitas 8(3): 197-203. Bidang Botani, Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI), Cibinong. World Health Organization. (2000). General Guidelines for Methodologies on Research and Evaluation of Traditional Medicine. Geneva: World Health Organization. World

Health

Organization.

(2012).

http://www.who.int/genomics/gender/en/index6.html diakses pada tanggal 8 November jam 21.00. Wu et al. (1973). Effect of Selenium, Vitamin E, and Antioxidants on Testicular Function in Rats. Biology Of Reproduction 8, 625-629


31

Lampiran 1. Surat Keterangan Kesehatan Hewan


32

Lampiran 2. Alur Penelitian Hewan uji tikus janta galur

Sprague Dawley Aklimatisasi selama 3 minggu

Dikelompokkan secara acak (@dosis 5 ekor)

Kelompok kontrol

Ekstrak kental etil asetat lumut hati Mastigophora diclados (Bird.Ex Web.) Nees

Pemberian ekstrak pada tikus secara peroral selama 48 hari

- Dosis tinggi (100 mg/KgBB) - Dosis sedang (10 mg/KgBB) - Dosis rendah (1 mg/KgBB)

Pada hari ke 49 tikus dikorbankan dan diambil organ reproduksinya

Testis

Kauda epididimis

Pengukuran konsentrasi spermatozoa

Pengamatan morfologi spermatozoa

Ditimbang berat testis

Dibuat preparat histologi

Pengukuran diameter tubulus seminiferus

Pengukuran tebal sel germinal

Analisis data


33

Lampiran 3. Perhitungan Dosis Pada Uji Ekstrak Etil Asetat Lumut Hati Mastigophora diclados

(



)

Dosis rendah (1 mg/kgBB)

Konsentrasinya = 0,25 mg/mL Akan dibuat larutan untuk 5 ekor tikus untuk dosis rendah maka sediaan dibuat sebanyak 5 mL. sehingga ekstrak yang harus ditimbang sebanyak 1,25 mg sesuai dengan perhitungan dibawah ini. Ekstrak = konsentrasi (mg/mL) x volume (mL) Ekstrak = 0,25 mg/mL x 5mL Ekstrak = 1,25 mg 

Dosis sedang (10 mg/kgBB)

Konsentrasinya = 2,5 mg/mL Akan dibuat larutan untuk 5 ekor tikus untuk dosis sedang maka sediaan dibuat sebanyak 5 mL. sehingga ekstrak yang harus ditimbang sebanyak 12,5 mg sesuai dengan perhitungan dibawah ini. Ekstrak = konsentrasi (mg/mL) x volume (mL) Ekstrak = 2,5 mg/mL x 5mL Ekstrak = 12,5 mg 

Dosis tinggi (100 mg/kgBB)

Konsentrasinya = 25 mg/mL


34

(Lanjutan) Akan dibuat larutan untuk 5 ekor tikus untuk dosis tinggi maka sediaan dibuat sebanyak 5 mL. sehingga ekstrak yang harus ditimbang sebanyak 125 mg sesuai dengan perhitungan dibawah ini. Ekstrak = konsentrasi (mg/mL) x volume (mL) Ekstrak = 25 mg/mL x 5mL Ekstrak = 125 mg


35

Lampiran 4. Gambar Bahan dan Alat Penelitian

Gambar 1. Ektrak etil asetat lumut hati Mastigophora diclados

Gambar 2. Tikus putih jantan galur Sprague Dawley

Gambar 3. NaCMC

Gambar 4. Suspensi ekstrak lumut hati Mastigophora diclados dalam NaCMC 0,5%

Gambar 5. Eter

Gambar 6. Larutan George

Gambar 7. Larutan eosin Y 1%

Gambar 8. Sonde

Gambar 9. Seperangkat alat bedah

Gambar 10. Timbangan analitik

Gambar 11. Mikropipet

Gambar 12. Hemasitometer Improved Neubeur


36

(Lanjutan)

Gambar 13. Miskroskop optic (motic BA310)

Gambar 14. Miskroskop motic B1 series


37

Lampiran 5. Kegiatan Penelitian Uji Aktivitas Esktrak Etil Asetat Lumut Hati Mastigophora diclados

Gambar 1. Pembuatan suspensi

Gambar 2. Penimbangan berat badan hewan uji

Gambar 3. Pemberian suspensi secara oral

Gambar 4. Pembiusan hewan uji

Gambar 5. Pembedahan hewan uji

Gambar 6. Testis

Gambar 7. Cauda epididimis

Gambar 8. Penimbangan organ testis

Gambar 9. Spermatozoa pada kamar hemasitometer

Gambar 10. Pengamatan dibawah miskroskop

Gambar 11. Pewarnaan spermatozoa menggunakan larutan eosin y 1%

Gambar 12. Pembuatan pereparat apus sperma


38

Lampiran

6.

Pengamatan

Perhitungan

Konsentrasi

dan

Morfologi

Spermatozoa

Perhitungan konsentrasi spermatozoa

Sperma yang normal

Leher patah

Tanpa kepala

Ekor patah

Kepala pisang


39

Lampiran 7. Hasil Pengukuran Berat Badan No

Tanggal

Hewan Uji

1

2

3

4

5

6

12-03-2014

18-03-2014

24-03-2014

30-03-2014

05-04-2014

11-04-2014

Berat Badan Tikus Per Kelompok (Gram) Kontrol

Dosis

Dosis

Dosis

Rendah

Sedang

Tinggi

Tikus 1

272

279

288

293

Tikus 2

294

295

240

250

Tikus 3

293

230

256

213

Tikus 4

252

288

275

265

Tikus 5

214

213

216

236

Tikus 1

278

296

300

305

Tikus 2

295

309

240

272

Tikus 3

305

241

274

224

Tikus 4

265

291

270

274

Tikus 5

233

225

226

248

Tikus 1

281

292

299

292

Tikus 2

292

302

238

256

Tikus 3

291

242

274

208

Tikus 4

259

289

273

261

Tikus 5

228

224

223

233

Tikus 1

302

304

325

317

Tikus 2

314

307

253

285

Tikus 3

304

251

270

221

Tikus 4

264

300

283

280

Tikus 5

246

238

231

253

Tikus 1

299

304

326

319

Tikus 2

314

310

256

286

Tikus 3

300

250

268

223

Tikus 4

273

302

287

275

Tikus 5

250

240

230

254

Tikus 1

310

312

334

325

Tikus 2

312

318

258

286

Tikus 3

311

257

272

224

Tikus 4

275

316

288

279

Tikus 5

261

241

234

263


40

(Lanjutan) 7

8

17-04-2014

23-04-2014

Tikus 1

322

316

337

338

Tikus 2

332

326

263

295

Tikus 3

318

262

289

234

Tikus 4

287

322

297

291

Tikus 5

269

244

240

272

Tikus 1

320

315

332

341

Tikus 2

327

323

263

294

Tikus 3

314

261

284

233

Tikus 4

286

320

290

280

Tikus 5

270

347

243

271


41

Lampiran 8. Hasil Pengukuran Bobot Testis No

Kelompok

Hewan

Bobot Testis

Uji Kanan

Kiri

Rerata

Rerata Bobot

Bobot

Testis Tiap

Testis

Kelompok ± SD

Tiap Tikus

1

2

3

4

Kontrol

Tikus 1

1,52

1,52

1,52

Tikus 2

1,66

1,80

1,73

Tikus 3

1,64

1,59

1,62

Tikus 4

1,63

1,72

1,67

Tikus 5

1,75

1,71

1,73

Dosis Rendah

Tikus 1

1,56

1,52

1,54

(1 mg/kg BB)

Tikus 2

1,88

1,87

1,88

Tikus 3

1,45

1,49

1,47

Tikus 4

1,62

1,69

1,66

Tikus 5

1,45

1,42

1,44

Dosis sedang

Tikus 1

1,57

1,53

1,55

(10 mg/kg

Tikus 2

1,56

1,67

1,61

BB)

Tikus 3

1,59

1,66

1,62

Tikus 4

1,75

1,74

1,75

Tikus 5

1,55

1,56

1,56

Dosis sedang

Tikus 1

1,57

1,59

1,58

(100 mg/kg

Tikus 2

1,90

1,98

1,94

BB)

Tikus 3

1,66

1,59

1,62

Tikus 4

1,50

1,49

1,50

Tikus 5

1,41

1,47

1,44

1,65±0,09

1,60±0,18

1,62±0,08

1,62±0,20


42

Lampiran 9. Hasil Perhitungan Konsentrasi Spermatozoa No

Kelompok

Hewan

Jumlah

Jumlah

Rerata

Rerata

Uji

Spermatozoa

Spermatozoa

Konsentra

Konsentras

Dalam 5

(Juta/mL)

si Tiap

i Tiap

Tikus

Kelompok

(Juta/mL)

(Juta/mL)±

Kotak (Ekor) Kanan

kiri

Kanan

Kiri

SD 1

2

3

4

Kontrol

Tikus 1

41

45

51,25

56,25

53,75

Tikus 2

39

41

48,75

51,25

50,00

Tikus 3

34

41

42,50

51,25

46,87

Tikus 4

38

42

47,50

52,50

50,00

Tikus 5

38

41

47,50

51,25

49,37

Dosis

Tikus 1

42

39

52,50

48,75

50,62

Rendah

Tikus 2

36

40

45,00

50,00

47,50

(1 mg/kg

Tikus 3

38

43

47,50

53,75

50,75

BB)

Tikus 4

38

40

47,50

50,00

48,75

Tikus 5

42

46

52,50

57,50

55,00

Dosis

Tikus 1

54

51

67,50

63,75

65,62

sedang

Tikus 2

47

49

58,75

61,25

60,00

(10 mg/kg

Tikus 3

46

48

57,50

60,00

58,75

BB)

Tikus 4

48

48

60,00

60,00

60,00

Tikus 5

35

66

43,75

82,58

63,16

Dosis

Tikus 1

61

88

76,25

110,0

92,50

tinggi

Tikus 2

72

75

90,00

93,75

91,87

(100

Tikus 3

70

75

87,50

93,75

90,62

mg/kg

Tikus 4

67

69

83,75

86,25

85,00

BB)

Tikus 5

78

72

97,50

90,00

93,75

50,00±2,46

50,50±2,84

61,51±2,82

90,75±3,41


43

Lampiran 10. Hasil Morfologi Spermatozoa No

Kelompok

Hewan

Jumlah

% Sperma

Rerata

Rerata

Uji

Sperma

Abnormal

Sperma

Sperma

Abnormal

(Dalam 6x

Abnormal

Abnormal

(Dalam 6x

Pengulangan)

Tiap

Tiap

Tikus (%)

Kelompok

Pengulangan)

1

2

3

4

(%) ±SD

Kanan

kiri

Kanan

Kiri

Tikus 1

13,30

22,80

6,65

11,40

9,03

Tikus 2

19,30

18,00

9,65

9,00

9,33

Tikus 3

20,00

22,60

10,00

11,30

10,65

Tikus 4

12,30

19,83

6,15

9,92

8,04

Tikus 5

18,00

15,50

9,00

7,75

8,38

Dosis

Tikus 1

18,16

13,66

9,80

6,83

8,32

Rendah

Tikus 2

15,00

11,80

7,50

5,90

6,70

(1 mg/kg

Tikus 3

12,50

10,80

6,25

5,40

5,83

BB)

Tikus 4

11,50

14,83

5,75

7,42

6,59

Tikus 5

15,00

9,60

7,50

4,30

5,90

Dosis

Tikus 1

17,30

11,66

8,65

5,83

7,24

sedang

Tikus 2

11,50

15,16

5,75

7,58

6,67

(10 mg/kg

Tikus 3

12,66

12,50

6,33

6,25

6,29

BB)

Tikus 4

18,16

10,16

9,80

4,90

7,35

Tikus 5

10,33

11,16

5,17

5,58

5,38

Dosis

Tikus 1

13,33

10,66

6,67

5,33

6,00

tinggi

Tikus 2

8,33

12,33

4,17

6,17

5,17

(100

Tikus 3

13,66

15,50

6,83

7,75

7,29

mg/kg

Tikus 4

7,50

8,83

3,75

4,42

4,09

BB)

Tikus 5

9,83

8,16

4,92

4,80

4,86

Kontrol

9,08±1,01

6,67±1,00

6,58±0,8

5,48±5,48


44

Lampiran 11. Hasil Pengukuran Diameter Tubulus Seminiferus No

Kelompok

Hewan Uji

Rerata diameter

Rerata diameter tubulus

tubulus seminiferus

seminiferus tiap kelompok

tiap tikus (μm)

(μm)±SD perbesaran 100x

perbesaran 100x 1

2

3

4

Kontrol

Tikus 1

163,45

Tikus 2

180,755

Tikus 3

186,09

Tikus 4

178,13

Tikus 5

183,245

Dosis

Tikus 1

123,17

Rendah

Tikus 2

179,73

(1 mg/kg

Tikus 3

136,18

BB)

Tikus 4

183,64

Tikus 5

205,96

Dosis

Tikus 1

189,14

sedang

Tikus 2

145,39

(10 mg/kg

Tikus 3

186,56

BB)

Tikus 4

197,56

Tikus 5

181,74

Dosis

Tikus 1

202,39

tinggi

Tikus 2

200,805

(100

Tikus 3

170,555

mg/kg

Tikus 4

167,645

BB)

Tikus 5

200,19

178,33±8,83

165,74±34,71

180,08±20,22

188,32±17,59


45

Lampiran 12. Hasil Pengukuran Tebal Sel Germinal No

Kelompok

Hewan Uji

Rerata Tebal Sel

Rerata Tebal Sel

Germinal Tiap Tikus (μm)

Germinal Tiap Kelompok

Perbesaran 100x

(μm)±SD Perbesaran 100x

1

2

3

4

Kontrol

Tikus 1

78,495

Tikus 2

84,625

Tikus 3

88,33

Tikus 4

85,745

Tikus 5

85,535

Dosis

Tikus 1

82,07

Rendah

Tikus 2

92,02

(1 mg/kg

Tikus 3

87,41

BB)

Tikus 4

88,79

Tikus 5

101,19

Dosis

Tikus 1

93,1

sedang

Tikus 2

72,76

(10 mg/kg

Tikus 3

89,34

BB)

Tikus 4

99,69

Tikus 5

85,07

Dosis

Tikus 1

100,445

sedang

Tikus 2

97,215

(100

Tikus 3

84,51

mg/kg

Tikus 4

83,6

BB)

Tikus 5

97,69

84,55±3,65

90,296±7,07

87,99±10,07

92,69±7,99


46

Lampiran 13. Hasil Analisa Data Bobot Testis 1. Uji normalitas dan homogenitas terhadap bobot testis. a. Uji normalitas Shapiro-Wilk Tujuan: untuk melihat distribusi data bobot testis tikus Hipotesis: Ho: Data bobot testis terdistribusi normal Ha: Data bobot testis tidak terdistribusi normal Pengambilan keputusan: 

Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima



Jika nilai signifikansi ˂ 0,05 maka Ho ditolak

Tests of Normality kelompok

Shapiro-Wilk Statistic

df

Sig.

kontrol

.897

5

.392

dosis rendah

.898

5

.397

dosis sedang

.853

5

.205

dosis tinggi

.874

5

.283

Keputusan: Uji normalitas bobot testis seluruh kelompok terdistribusi normal (p ≥ 0,05)

b. Uji Homogenitas Levene Tujuan: untuk melihat data bobot testis tikus homogen atau tidak Hipotesis: Ho: Data bobot testis homogen Ha: Data bobot testis tidak homogen Pengambilan keputusan: 





Test of Homogeneity of Variances Levene

df1

df2

Sig.

Statistic 1.279

3

16

.315

Keputusan:

Uji

homogenitas

bobot testis seluruh kelompok homogen (p ≥ 0,05) sehingga bisa dilanjutkan dengan uji ANOVA UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

47

2. Uji analisis varian (ANOVA) satu arah terhadap bobot testis kelompok hewan uji Tujuan: untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data bobot testis Hipotesis: Ho: Data bobot testis tidak berbeda secara bermakna Ha: Data bobot testis berbeda secara bermakna Pengambilan keputusan: 





ANOVA Sum of

df

Mean

Squares Between

Sig.

Square

.009

3

.003

Within Groups

.335

16

.021

Total

.344

19

Groups

F

.137

.937

Keputusan: bobot testis tidak berbeda secara bermakna (p ≥ 0,05)


48

Lampiran 14. Hasil Analisa Data Konsentrasi Spermatozoa 1. Uji normalitas dan homogenitas terhadap konsentrasi spermatozoa. a. Uji normalitas Shapiro-Wilk Tujuan: untuk melihat distribusi data konsentrasi spermatozoa tikus Hipotesis: Ho: Data konsentrasi spermatozoa terdistribusi normal Ha: Data konsentrasi spermatozoa tidak terdistribusi normal Pengambilan keputusan: 





Tests of Normality Shapiro-Wilk kelompok

Statistic

df

Sig.

kontrol

.920

5

.532

dosis rendah

.923

5

.550

dosis sedang

.893

5

.373

dosis tinggi

.847

5

.186

Keputusan: Uji normalitas konsentrasi spermatozoa seluruh kelompok terdistribusi normal (p ≥ 0,05)

b. Uji Homogenitas Levene Tujuan: untuk melihat homogenitas data konsentrasi spermatozoa tikus Hipotesis: Ho: Data konsentrasi spermaozoa homogen Ha: Data konsentrasi spermaozoa tidak homogen Pengambilan keputusan: 






df1

df2

Sig.

Statistic .246

3

16

.863


49

Keputusan: Uji homogenitas konsentrasi spermatozoa seluruh kelompok homogeny (p ≥ 0,05) sehingga bisa dilankutkan dengan uji ANOVA.

2. Uji analisis varian (ANOVA) satu arah terhadap konsentrasi spermatozoa kelompok hewan uji Tujuan: untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data konsentrasi spermatozoa Hipotesis: Ho: Data konsentrasi spermatozoa tidak berbeda secara bermakna Ha: Data konsentrasi spermatozoa berbeda secara bermakna Pengambilan keputusan: 





ANOVA Sum of

df

Mean

Squares Between Groups Within Groups Total

F

Sig.

Square

5483.678

3

134.831

16

5618.509

19

1827.893 216.910

.000

8.427

Keputusan: konsentrasi spermatozoa berbeda secara bermakna (p ˂ 0,05), sehingga bisa dilanjutkan dengan uji LSD

3. Uji Multiple Comparisons tipe LSD (Least Significant Difference) Tujuan: untuk menentukan data konsentrasi spermatozoa kelompok mana yang memberikan nilai yang berbeda secara bermakna dengan kelompok lainnya. Hipotesis: Ho: data konsentrasi spermatozoa tidak berbeda secara bermakna Ha: data konsentrasi spermatozoa berbeda secara bermakna Pengambilan keputusan: 






50

Multiple Comparisons LSD (I) kelompok (J) kelompok

Mean

Std. Error

Sig.

Difference

Interval

(I-J)

kontrol

Lower

Upper

Bound

Bound

dosis rendah

-.52600

1.83597

.778

-4.4181

3.3661

dosis sedang

-11.50800*

1.83597

.000

-15.4001

-7.6159

dosis tinggi

-40.75000*

1.83597

.000

-44.6421 -36.8579

.52600

1.83597

.778

-3.3661

4.4181

-10.98200*

1.83597

.000

-14.8741

-7.0899

-40.22400*

1.83597

.000

-44.1161 -36.3319

11.50800*

1.83597

.000

7.6159

15.4001

10.98200*

1.83597

.000

7.0899

14.8741

-29.24200*

1.83597

.000

kontrol

40.75000*

1.83597

.000

36.8579

44.6421

dosis rendah

40.22400*

1.83597

.000

36.3319

44.1161

dosis sedang

29.24200*

1.83597

.000

25.3499

33.1341

kontrol dosis rendah dosis sedang dosis tinggi kontrol dosis sedang dosis rendah dosis tinggi

dosis tinggi

95% Confidence

-33.1341 -25.3499

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Keputusan: konsentrasi spermatozoa kelompok dosis sedang dan dosis tinggi berbeda secara bermakna dibandingkan dengan kelompok kontrol (p ˂ 0,05). Kelompok rendah berbeda secara bermakna dibanding kan dengan kelompok dosis sedang dan dosis tinggi (p ˂ 0,05).


51

Lampiran 15. Hasil Analisa Data Morfologi Spermatozoa 1. Uji normalitas dan homogenitas terhadap morfologi spermatozoa yang abnormal. a. Uji normalitas Shapiro-Wilk Tujuan: untuk melihat distribusi data morfologi spermatozoa yang abnormal tikus Hipotesis: Ho: Data morfologi spermatozoa yang abnormal terdistribusi normal Ha: Data morfologi spermaozoa yang abnormal tidak terdistribusi normal Pengambilan keputusan: 





Tests of Normality kelompok

Shapiro-Wilk Statistic

df

Sig.

kontrol

.896

5

.390

dosis rendah

.849

5

.192

dosis sedang

.925

5

.564

dosis tinggi

.967

5

.859

Keputusan: Uji normalitas morfologi spermatozoa yang abnormal seluruh kelompok terdistribusi normal (p ≥ 0,05)

b. Uji Homogenitas Levene Tujuan: untuk melihat data morfologi spermatozoa yang abnormal tikus homogen atau tidak Hipotesis: Ho: Data morfologi spermatozoa yang abnormal homogen Ha: Data morfologi spermatozoa yang abnormal tidak homogen Pengambilan keputusan: 






52


df1

df2

Sig.

Statistic .305

3

16

.821

Keputusan: Uji homogenitas morfologi spermatozoa yang abnormal seluruh kelompok homogen (p ≥ 0,05) sehingga bisa dilanjutkan dengan uji ANOVA

2. Uji analisis varian (ANOVA) satu arah terhadap morfologi spermatozoa yang abnormal kelompok hewan uji Tujuan: untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data morfologi spermatozoa yang abnormal Hipotesis: Ho: Data morfologi spermatozoa yang abnormal tidak berbeda secara bermakna Ha: Data morfologi spermatozoa yang abnormal berbeda secara bermakna Pengambilan keputusan: 





ANOVA Sum of

df

Mean

Squares Between

Sig.

Square

33.380

3

11.127

Within Groups

17.345

16

1.084

Total

50.725

19

Groups

F

10.264

.001

Keputusan: persentase morfologi spermatozoa yang abnormal berbeda secara bermakna (p ˂ 0,05), sehingga bisa dilanjutkan dengan uji LSD

3. Uji Multiple Comparisons tipe LSD (Least Significant Difference) Tujuan: untuk menentukan data morfologi spermatozoa yang abnormal kelompok mana yang memberikan nilai yang berbeda secara bermakna dengan kelompok lainnya. Hipotesis: UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

53

Ho: data morfologi spermatozoa yang abnormal tidak berbeda secara bermakna Ha: data morfologi spermatozoa yang abnormal berbeda secara bermakna Pengambilan keputusan: 





Multiple Comparisons LSD (I)

(J)

Mean

kelompok

kelompok

Difference Error

Lower

Upper

(I-J)

Bound

Bound

kontrol

Std.

Sig.

95% Confidence Interval

dosis rendah

2.34950* .65850

.003

.9535

3.7455

dosis sedang

2.43350* .65850

.002

1.0375

3.8295

dosis tinggi

3.54700* .65850

.000

2.1510

4.9430

-2.34950*

.65850

.003

-3.7455

-.9535

.08400

.65850

.900

-1.3120

1.4800

1.19750

.65850

.088

-.1985

2.5935

-2.43350*

.65850

.002

-3.8295

-1.0375

-.08400

.65850

.900

-1.4800

1.3120

1.11350

.65850

.110

-.2825

2.5095

-3.54700*

.65850

.000

-4.9430

-2.1510

dosis tinggi dosis rendah

-1.19750

.65850

.088

-2.5935

.1985

dosis sedang

-1.11350

.65850

.110

-2.5095

.2825

kontrol dosis rendah dosis sedang dosis tinggi kontrol dosis sedang dosis rendah dosis tinggi kontrol

*. The mean difference is significant at the 0.05 level. Keputusan: morfologi spermatozoa yang abnormal seluruh kelompok perlakuan berbeda secara bermakna dengan kontrol (p ˂ 0,05).


54

Lampiran 16. Hasil Analisa Data Diameter Tubulus Semineferus 1. Uji normalitas dan homogenitas terhadap diameter tubulus semineferus. a. Uji normalitas Shapiro-Wilk Tujuan: untuk melihat distribusi data diameter tubulus semineferus tikus Hipotesis: Ho: Data diameter tubulus semineferus terdistribusi normal Ha: Data diameter tubulus semineferus tidak terdistribusi normal Pengambilan keputusan: 





Tests of Normality kelompok Shapiro-Wilk Statistic df Sig. kontrol .850 5 .196 dosis rendah .917 5 .511 dosis sedang .813 5 .102 dosis tinggi .746 5 .028 Keputusan: Uji normalitas diameter tubulus seminiferus seluruh kelompok tidak terdistribusi normal (p ≥ 0,05)

b. Uji Homogenitas Levene Tujuan: untuk melihat data diameter tubulus seminiferus tikus homogen atau tidak Hipotesis: Ho: Data diameter tubulus seminiferus homogen Ha: Data diameter tubulus seminiferus tidak homogen Pengambilan keputusan: 





Test of Homogeneity of Variances Levene df1 df2 Sig. Statistic 4.733 3 16 .015 Keputusan: Uji homogenitas diameter tubulus seminiferus seluruh kelompok tidak homogen (p ≥ 0,05) sehingga dilanjutkan dengan uji Kruskal Wallis karena syarat belum terpenuhi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

55

2. Uji analisis Kruskal Wallis diameter tubulus seminiferus kelompok hewan uji Tujuan: untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data diameter tubulus seminiferus Hipotesis: Ho: Data diameter tubulus seminiferus tidak berbeda secara bermakna Ha: Data diameter tubulus seminiferus berbeda secara bermakna Pengambilan keputusan: 





Test Statistics Chi-Square 1.994 df 3 Asymp. .574 Sig. Keputusan: Tebal sel germinal tidak berbeda secara bermakna (p ˂ 0,05).


56

Lampiran 17. Hasil Analisa Data Tebal Sel Germinal 1. Uji normalitas dan homogenitas terhadap tebal sel germinal. a. Uji normalitas Shapiro-Wilk Tujuan: untuk melihat distribusi data tebal sel germinal tikus Hipotesis: Ho: Data tebal sel germinal terdistribusi normal Ha: Data tebal sel germinal tidak terdistribusi normal Pengambilan keputusan: 





Tests of Normality kelompok Shapiro-Wilk Statistic df Sig. kontrol .868 5 .260 dosis rendah .955 5 .776 dosis sedang .971 5 .881 dosis tinggi .810 5 .098 Keputusan: Uji normalitas tebal sel germinal seluruh kelompok terdistribusi normal (p≤0,05)

b. Uji Homogenitas Levene Tujuan: untuk melihat data tebal sel germinal homogen atau tidak Hipotesis: Ho: Data tebal sel germinal homogen Ha: Data tebal sel germinal tidak homogen Pengambilan keputusan: 





Test of Homogeneity of Variances Levene df1 df2 Sig. Statistic 1.544 3 16 .242 Keputusan: Uji homogenitas data tebal sel germinal seluruh kelompok homogen (p ≥ 0,05) sehingga dilanjutkan dengan uji ANOVA.


57

2. Uji analisis varian (ANOVA) satu arah terhadap tebal sel germinal kelompok hewan uji Tujuan: untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data tebal sel germinal Hipotesis: Ho: Data tebal sel germinal tidak berbeda secara bermakna Ha: Data tebal sel germinal berbeda secara bermakna Pengambilan keputusan: 




Jika nilai signifikansi ˂ 0,05 maka Ho ditolak ANOVA Sum of Squares

df

Mean Square

F

Sig.

Between 180.542 3 60.181 1.054 .396 Groups Within Groups 913.731 16 57.108 Total 1094.273 19 Keputusan: Tebal sel germinal tidak berbeda secara bermakna (p ≥ 0,05).


UIN SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

Recommend Documents