UIN SRARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

UIN SRARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

Uji Aktivitas Antifertilitas Ekstrak Etanol 70% biji mimba (Azadirachta indica L.) Pada Tikus Putih Jantan (Rattus novergicus ) Galur Sprague Dawley secara In Vivo

SKRIPSI

Oleh:

NUR FITRIYANI NIM : 109102000020

PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIFHIDAYATULLAH JAKARTA 2015

UIN SRARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

Uji Aktivitas Antifertilitas Ekstrak Etanol 70% biji mimba (Azadirachta indica L.) Pada Tikus Putih Jantan (Rattus novergicus ) Galur Sprague Dawley secara In Vivo

SKRIPSI Diajukan sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana farmasi

Oleh:

NUR FITRIYANI NIM : 109102000020

PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIFHIDAYATULLAH JAKARTA 2015

i

HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS

Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi yang berjudul :

Uji Aktivitas Antifertilitas Ekstrak Etanol 70% biji miomba ( Azadirachta indica L.) Pada Tikus Putih Jantan (Rattus novergicus Galur Sprague Dawley secara In Vivo.

Ini adalah benar hasil karya saya sendiri yang belum pernah diajukan sebagai skripsi ataupun karya ilmiah pada perguruan tinggi atau lembaga pendidikan manapun, dan semua sumber baik yang dikutip maupun dirujukan telah saya nyatakan benar.

Nama : Nur Fitriyani NIM :109102000020 Tanda Tangan

Tanggal

ii

November 2015

ABSTRAK

Nama

: Nur Fitriyani

Program Studi.: Farmasi Judul

: Uji Aktifita Antifertilitas Ekstrak Etanol 70% Biji Mimba ( Azadirachta

indica L.) Pada Tikus Putih Jantan Galur Spague Dawley secara In Vivo.

penelitian ini dilakukan untuk menguji efek antifertilitas Esktrak etanol 70% biji mimba (Azadirachta Indica L.)pada tikus jantan. Ekstrak diberikan secara oral sekali sehari selama 48 hari. Sampel terdiri dari 20 ekor tikus jantan galur Sprague Dawley yang dibagi menjadi 4 kelompok yaitu kelompok kontrol (Na CMC 1% ), kelompok perlakuan I (10 mg/kg BB), II ( 25 mg/kg BB), dan III (50 mg/kg BB). Hasil dianalisa dengan menggunakan analisa One Way ANOVA

dan dilanjutkan dengan uji Multiple Comparisons. Hasil penelitian

menunjukan bahwa pemberian ekstrak etanol 70% biji mimba dengan dosis 10 mg/kg BB, 25 mg/kg BB, dan 50 mg/kg BB memberikan penurunan yang bermakna terhadap konsentrasi spermatozoa, bobot testis, dan diameter tubulus seminiferus dibandingkan dengan kontrol ( p ≤ 0,05 ). Dari beberapa hasil pengamatan tersebut, disimpulkan bahwa ekstrak etanol 70% biji mimba dapat mempengaruhi spermatogenesis tikus. Hasil penelitian ini diharapkan dapat dikembangkan sebagai bahan konsentrasi pria.

Kata Kunci : Biji Mimba ( Azadirachta indica L. ), berat testis, konsentrasi spermatozoa, diameter tubulus seminiferus.

v

ABSTRACT

Nama

: Nur fitriyani

Program Study: Farmasi Title

: Uji Aktifita Antifertilitas Ekstrak Etanol 70% Biji Mimba ( Azadirachta

indica L.) Pada Tikus Putih Jantan Galur Spague Dawley secara In Vivo.

This study was aimed to find out anti-fertility effects of 70% ethanolic extract of Azadirachta Indica on male rats. The extract was given orally once a day for 48 days. The sample consisted of 20 Sprague Dawley male rats that were divided four groups : control group ( CMC Na 1% ), treatment I (10 mg/kg BW), II (25mg/kg BW), and III ( %50 mg/kg BW). The result of experiment was analyzed by using One Way ANOVA and by Multiple Comparisons test. The result showed that 70% ethanolic extract of Azadirchta Indica in dosage 10 mg/kg BW, 25 mg/kg BW, and 50 mg/kg BW resulted significant decrease to sperm concentration, testis weight, and diameter of seminiferus tubules compared with control ( p ≤ 0,05 ). This showed that 70% ethanolic extract of Azadirachta Indica influenced the spermatogenesis of rats. It is hoped that the results of this study can be used to develop a male contraceptive method.

Key Words : Azadirachta indica, testis weight, sperm contracentration, diameter of seminiferous tubules.

vi

KATA PENGANTAR

Alhamdulillahirabbil’alamiin, segala puji dan syukur penulis panjatkan kehadiran Allah SWT yang telah melimpahkan rahmat dan ridho-Nya sehingga penulis dapat menyesaikan skripsi ini hingga selesai. Skripsi ini yang berjudul “Aktifitas Antifertilitas Ekstrak Etanol 70% Biji Mimba (Azadirachta Indica L)” disusun dalam rangka memenuhi persyaratan untuk menperoleh gelar Sarjana Farmasi pada Fakultas Kedokteran Dan Ilmu Kesehatan Universitas Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Dalam proses penulisan skripsi ini penulis menyadari ada beberapa pihak yang sangat memberikan konstribusi kepada penulis. Maka, pada kesempatan ini penulis ingin menyampaikan rasa terima kasih sebesar-besarnya kepada: 1. Yardi, Ph. D. Apt selaku ketua Program Studi Farmasi Fakultas kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 2. Drs. Azrifitria, M.Si, Apt sebagai pembimbing, terimakasih telah banyak memberikan ilmu, pengarahan dan bimbingan kepada penulis selama

menyusun proposal

penelitian ini. 3. Drs. Ahmad Musir, M. Si, Apt sebagai

pembimbing, terimakasih telah banyak

memberi ilmu, pengarahan dan bimbingan kepada penulis selama menyusun proposaal penelitian ini. 4. Bapak dan Ibu Dosen Program Studi Farmasi Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan yang telah memberikan ilmunya kepada penulis 5. Kedua orang tua, yang telah memberi dorongan, semangat dan pengertian kepada penulis baik secara moril dan materil 6. Someone yang selalu mendoakan, setia dan selalu sabar mendengar keluh kesah, masukkan untuk kelancaran penyusunan skripsi. 7. Teman-teman Farmasi angkatan 2009 yang tidak dapat saya sebutkan satu persatu, terima kasih telah memberikan doa, dukungan, dan persaudaraan selama ini untuk penulis

vii

8. Pihak – pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu oleh penulis, yang telah membantu dalam menyelesaikan skripsi ini. Akhirnya dengan segala kerendahan hati, penulis menyadari bahwa skripsi ini masih jauh dari kesempurnaan, maka penulis mengharapkan kritik dan saran pembaca yang bersifat membangun guna memperbaiki kemampuan penulis.

Jakarta,

November 2015

Penulis

viii

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ............................................................................... HALAMAN PERNYATAAN ORISINALITAS ................................... HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................... LEMBAR PENGESAHAN SKRIPSI .................................................... ABSTRAK ................................................................................................ ABSTRACT .............................................................................................. KATA PENGANTAR .............................................................................. HALAMAN PERSETUJUAN PUBLIKASI TUGAS AKHIR ............ DAFTAR ISI ............................................................................................. DAFTAR TABEL .................................................................................... DAFTAR GAMBAR ................................................................................ DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................

ii iii iv v vi vii viii x xi xiii xiv xv

BAB 1 PENDAHULUAN ...................................................................... 1.1 Latar Belakang ...................................................................... 1.2 Perumusan Masalah .............................................................. 1.3 Tujuan Penelitian .................................................................. 1.4 Hipotesis ............................................................................... 1.5 Manfaat Penelitian ................................................................

1 1-3 3 3 4 4

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................. 2.1 Mimba (Azadirachta Indica) .................................................... 2.1.1 Sejarah dan Sinonim ................................................ 2.1.2 Klasifikasi .................................................................. 2.1.3 Marfologi .................................................................. 2.1.4 Kandungan Bahan Kimia ........................................... 2.1.5 Kegunaan .................................................................. 2.2 Simplisia dan Ekstrak ............................................................. 2.2.1 Simplisia..................................................................... 2.2.2. Ekstrak ...................................................................... 2.3 Ekstraksi ................................................................................ 2.3.1 Cara dingin ................................................................ 2.3.1.1 Maserasi ........................................................ 2.3.1.2 Perkolasi ......................................................... 2.3.2 Cara Panas................................................................... 2.3.2.1 Refluks ........................................................... 2.3.2.2 Soxhlet ........................................................... 2.3.2.3 Digesti ............................................................ 2.3.2.4 Infus ............................................................... 2.3.2.5 Dekok ............................................................. 2.3.3 Destilasi uap ................................................................

5 5 5 6 6-7 8 8-9 9 9 9 9 9 9 10 10 10 10 10 10 10 10

xi

2.3.4 Cara ekstraksi lainnya ................................................. 2.3.4.1 Ekstraksi bersinambung ................................. 2.3.4.2 Super kritikal karbodioksida .......................... 2.3.4.3 Ekstraksi Ultralsonik ...................................... 2.3.4.4 Ekstraksi energi listrik ................................... 2.4 Tinjauan Hewan Percobaan..................................................... 2.4.1 Klasifikasi Tikus Putih (rattus norvegicus) .............. 2.4.2 Biologis Tikus Putih (rattus norvegicus) .................. 2.5 Sistem Reproduksi Tikus Jantan ........................................... 2.5.1 Produksi Sperma ........................................................... 2.5.2 Spermatogonesis Pada Tikus ........................................ 2.5.3 Peran Hormon Pada Spermatogenesis ..........................

11 11 11 11 11 11 11 12 -13 13-15 15 16-17 17-18

BAB 3 METODOLOGI PENELITIAN ................................................ 19 3.1 Tempat dan Waktu Penelitian ............................................... 19 3.2.1 Hewan uji .................................................................. 19 3.2.2 Bahan uji ................................................................... 19 3.2.3 Bahan Kimia .............................................................. 19 3.2.4 Alat ............................................................................. 19 3.3 Rancangan Penelitian ............................................................ 20 3.4 Kegiantan Penelitian .............................................................. 20 3.4.1 Pemeriksaan Simplisia (Determinasi) ....................... 20 3.4.2 Penyiapan Simplisia .................................................. 20 3.4.3 Pembuatan ekstrak ..................................................... 21 3.4.4 Uji Penapisan fitokimia Ekstrak ................................ 21-22 3.4.5. Pengujian Parameter Spesifik dan Non Spesifik.......... 22 3.4.5.1 Identitas Ektrask ............................................ 22 3.4.5.2 Organoptis ...................................................... 22 3.4.5.3 Susut Pengeringan ......................................... 22-23 3.4.5.4 Kadar Abu ...................................................... 23 3.4.6 Persiapan Hewan Uji .................................................. 23 3.4.7 Persiapan Perlakuan .................................................... 23-24 3.4.8 Pembuatan preparat ....................................................... 24-25 3.4.9 Pengukuran Parameter Uji ............................................ 25 3.4.9.1 Pengukuran Bobot testis................................. 25 3.4.9.2 Pengukuran Konsentrasi Spermatozoa........... 25-27 3.4.9.3 Pengukuran Diameter Tubulus Seminiferus .. 27 28 3.5 Analisa .................................................................................. BAB 4 HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN ......................... 29 4.1 Hasil Penelitian ..................................................................... 29 4.1.1 Ekstraksi........................................................................ 29 4.1.2 Penafisan fitokimia ....................................................... 29 4.1.3 Parameter Standar ......................................................... 30 4.1.4 Pengukuran Berat Badan ............................................. 30 4.1.5 Pengukuran Bobot Testis ........... .................................. 31-32 4.1.6 Perhitungan Konsentrasi Spermatozoa .......................... 32-33 4.1.7 Pengukuran Diameter Tubulus Seminiferus ................. 33-34

xii

4.2 Pembahasan ........................................................................... 35-40 BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN ................................................... 5.1 Kesimpulan ........................................................................... 5.2 Saran .....................................................................................

41 41 41

DAFTAR PUSTAKA ............................................................................... 42-45 LAMPIRAN ..............................................................................................

xiii

46

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Tabel 3.1 Tabel 3.2 Tabel 3.3 Tabel 4.1 Tabel 4.2 Tabel 4.3 Tabel 4.4 Tabel 4.5 Tabel 4.6

Halaman Data biologis tikus (Smith dan Mangkoewidjoyo, 1988) ........ Pengenceran yang dilakukan dan kotak yang dihitung ........... Cara Pengenceran .................................................................... Rumus Konsentrasi Spermatozoa ............................................ Hasil penafisan fitokimia ekstrak etanol 70% biji mimba ...... Hasil Parameter standar ekstrak etanol 70% biji mimba ......... Rata-rata Berat Badan Tikus Tiap Kelompok ......................... Rata-rata bobot testis tikus ...................................................... Rata-rata konsentrasi spermatozoa tikus ................................. Rata-rata diameter tubulus seminiferus tikus ..........................

xiv

12 25 26 26 29 30 30 31 32 33

DAFTAR GAMBAR

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Halaman Daun,bunga,buah dan biji. Azadirachta indica. (dok.pribadi ) ........... 7 Anatomi sistem reproduksi tikus jantan (Laboratory animal medicine and science series) ............................... 13 Spermatozoa tikus ............................................................................... 15 Tahapan dari siklus sel spermatogenis pada tikus .............................. 16 Grafik rata-rata berat badan tikus tiap kelompok ................................ 30 Grafik hasil rata-rata bobot testis ( gram ) setelah pemberian ekstrak etanol 70% biji mimba selama 48 hari ................................... 31 Grafik hasil rata-rata konsentrasi spermatozoa setela pemberian ekstrak etanol 70% biji mimba selama 48 hari ................................... 32 Grafik hasil rata-rata diameter tubulus seminiferus setelah pemberian ekstrak etanol 70% biji mimba selama 48 hari ................................... 33

xv

DAFTAR LAMPIRAN Halaman 1. Hasil Determinasi Tanaman ................................................................. 2. Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Etanol 70 % biji jarak .................. 3. Gambar Bahan dan Alat Penelitian ...................................................... 4. Kegiantan Penelitian Uji Aktifertilitas Ekstrak Etanol 70% Biji Mimba 5. Pemeriksaan Parameter Ekstrak ........................................................... 6. Skema Kerja Pembuatan Ekstrak Etanol 70 % biji mimba ................... 7. Skema Kerja Pemberian Ekstrak Etanol 70% Biji Mimba pada tikus. 8. Perhitungan Dosis Uji Ekstrak Biji Mimba ......................................... 9. Berat Badan Tikus Jantan ..................................................................... 10. Hasil Pengukuran Bobot Testis ............................................................ 11. Hasil perhitungan Konsentrasi Spermatozoa ....................................... 12. Hasil Pengukuran Diameter Tubulus Seminiferus ............................... 13. Analisis Data Bobot Testis ................................................................... 14. Analisis Data Konsentrasi Spermatozoa .............................................. 15. Analisa Data Diameter Tubulus Semineferus. ...................................... 16. Gambar Histologi Tubulus Seminiferus Tikus Kontrol ....................... 17. Lampiran 20. Gambar Histologi Tubulus Seminiferus Testis Tikus Perlakuan Ekstrak Etanol 70% Bji Mimba (10mg/kg BB) ........ 18. Lampiran 21. Gambar Histologi Tubulus Seminiferus Testis Tikus Perlakuan Ekstrak Etanol 70% biji Mimba (25mg/kg BB) ........ 19. Lampiran 22. Gambar Histologi Tubulus Seminiferus Testis Tikus Perlakuan Ekstrak Etanol 70 % Biji Mimba (50mg/kg BB) ......

xvi

46 47 48 50 52 53 54 55 56 57 58 59 60 63 66 69 70 71 72

1

BAB I PENDAHULUAN

1.1.

LATAR BELAKANG Masalah kependudukan menjadi isu yang sangat penting dan mendesak, terutamanya

yang berkaitan dengan aspek pengendalian kuantitas penduduk dan pengarahan mobilitas penduduk, jika dikaitkan pada potensi ancaman meningkatnya jumlah penduduk masa depan. Saat ini penduduk dunia telah mencapai 7 milyar jiwa atau bertambah 1 milyar jiwa hanya dalam waktu 10 tahun (pada tahun 2000 jumlah penduduk dunia sekitar 6 milyar). Berdasarkan hasil sensus 2010, penduduk Indonesia bertambah 32,5 juta jiwa, dan rata- rata pertumbuhan 1,49 persen seperti sekarang, maka jumlah penduduk Indonesia pada tahun 2045 menjadi 450 juta jiwa. Hal ini berarti, 1 dari 20 penduduk dunia adalah orang Indonesia (BKKBN, 2012). Proyeksi tersebut kemungkinan tidak akan banyak berubah jika pengelolahan program Keluarga Berencana (KB) dilaksanakan dengan optimal. Namun jumlah tersebut sangat mungkin meningkat, apabila intensitas dan frekuensi pengelolahan program Keluarga Berencana menurun. Di Indonesia, program pembangunan nasional Keluarga Berencana mempunyai arti yang sangat penting dalam upaya mewujudkan masyarakat Indonesia yang sejahtera disamping program pendidikan dan kesehatan. Peserta Keluarga Berencana di Indonesia masih didominasi oleh perempuan. Dengan berbagai sumber daya yang ada, pemerintah telah berupaya untuk meningkatkan kesertaan pria dalam program Keluarga Berencana. Namun hasilnya belum seperti yang diharapkan (BKKBN, 2008). Salah satu alasan rendahnya partisipasi pria dalam menjalankan program keluarga berencana karena kontrasepsi pada pria sangat terbatas jenisnya. Sampai sekarang metode kontrasepsi yang digunakan pada priamyang ada adalah pantang berkala, senggama terputus (coitus interuptus) penggunaan kondom dan vasektomi (Sumaryati, 2004 dan moeloek, 2002). Kontrasepsi untuk pria yang dianggap sudah mantap adalah kondom dan vasektomi. Namun penggunaan kondom sebagai alat kontasepsi menimbulkan keluhan psikologi, sedangkan vasektomi walaupun merupakan kontasepsi yang dapat bersifat aman, efektif, mudah dan sangat baik untuk pasangan yang tidak ingin memiliki anak lagi, tetapi banyak pria yang tidak, menyukai vasaktomi karena mereka beranggapan bahwa dengan vasektomi akan menghilangkan keperkasaannya. Terbatasnya jenis kontrasepsi pria menjadi landasan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

2 mengapa perkembangan teknologi kontrasepsi perlu lebih mengarah pada pria (wilopo, 2006). Sampai sekarang metode kontrasepsi pria yang ada adalah pantang berkala, senggama terputus (coitus interuptus) penggunaan kondom dan vasoktomi (Sumaryati, 2004 dan Moeloek, 2002). Pada beberapa dekade terakhir ini, banyak penelitian difokuskan kepada perkembangan efektifitas dan keamanan kontasepsi pria. Idealnya kontrasepsi pria itu harus memiliki khasiat jangka lama, tetapi bersifat reversibel dalam hal menyebabkan azoospermia (tidak adanya sperma didalam semen ) (BKKBN, 2006). Salah satu upaya pengembangan obat-obat kontrasepsi pria yang ideal, adalah dengan memanfaatkan bahan alternatif dari bahan-bahan alam. Untuk saat ini masyarakat lebih memilih alternatif menggunakan obat tradisional karena dianggap relatif lebih murah, efisien dan efeknya lebih aman dibandingkan dengan obat sintetik (Andria, 2012). Hal ini mengingat bahwa di Indonesia kaya akan sumber tanaman obat, sehingga mempunyai peluang untuk memperoleh kontrasepsi pria yang berasal dari tanaman. Indonesia merupakan negara tropis yang kaya akan jenis tanaman obat-obatan, sehingga mempermudah untuk memperoleh bahan-bahan kontasepsi. Terdapat 52 jenis tanaman di Indonesia yang memiliki sifat antifertilitas (Chuthbert dan Wong, 1986). Beberapa tanaman tersebut adalah ekstrak metanol batang manggarsi dimana selama 35 hari mampu menyebabkan penurunan jumlah spermatosit sekunder dan jumlah spermatozoa mencit namun tidak mampu menyebabkan penurunan berat testis, diameter tubulus seminiferus tertis, jumlah spermatosit primer dan jumlah spermatid (Ulimaz, 2010). Dari penelitian Yurnadi dkk (2002) diketahui bahwa penyuntikan ekstrak biji pepaya selama 20 hari pada berbagai dosis terhadap tikus belum dapat menurunkan populasi sel konsentrasi spermatozoa vas deferen, akan tetapi dapat menurunkan populasi sel spermatogonium A dan spermatosit primer preleptoten. Selain itu, pada tanaman Momordica charantia L. Dengan pemberian selama 20 hari memberikan hasil penurunan pada jumlah spermatozoa yang lebih banyak. Namun, pada pemberian Momordica charantia L. Selama 60 hari tidak memberikan perubahan bermakna (Saptogino, 2010). Selain itu tanaman tradisional yang diharapkan dapat menjadi antifertilitas adalah tanaman mimba (Azadiractha indica). Tanaman mimba memiliki nilai pengobatan yang besar. Ekstrak daun dan kulit kayu digunakan untuk mengobati kusta, antihelmentik, gangguan pernapasan, sembelit dan infeksi kulit (Biswas et al., 2002). Biji mimba dapat dimanfaatkan sebagai insektisida alami, fungisida, antibakteri, spermisida (sukrosno dan tim Lentera, 2003). Secara empiris di negara india minyak biji mimba digunakan sebagai bahan kontasepsi lokal (J.K. Roop and S.S guraya) Penelitian dari Sinha et al., (1989) menyatakan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

3 bahwa pemberian minyak biji mimba pada rahim tikus betina dapat menurunkan kesuburan pada sistem reproduksi tikus tersebut. Secara ilmiah, dilaporkan bahwa dengan pemberian ekstrak biji mimba dapat menurunkan tinggkat kesuburan pada tikus betina dengan menggangu proses metabolisme di uterus (Reshu, et al., 2007). Penelitian dari J.K. Roop et al.,(2005) menyatakan pemberian ekstrak biji mimba secara oral dapat mengurangi jumlah rata-rata folikel-folikel pada tikus betina. Disamping itu, bahwa ekstra mimba (Azadirachta Indica) memiliki efek kontraseptik yang diberikan pada tikus (Mukherjee, et al, 1999). Penelitian dari tanaman mimba berpotensi sebagai antifertilitas secara tradisional belum banyak diteliti di Indonesia. Selain itu, penggunaan biji mimba pada sistem reproduksi pria belum dilaporkan. Oleh karena itu, penelitian ini adalah untuk menguji aktivitas antifertilitas dari ekstrak etanol 70% biji mimba (Azadirachta indica) pada fungsi reproduksi tikus jantan ditinjau dari konsentrasi sperma, berat testis, ukuran diameter tubulus seminiferus testis, serta jumlah spermatosit pakiten dan sel sertoli. 1.2.

RUMUSAN MASALAH Berdasarkan uraian dari latar belakang, maka rumusan masalah adalah sebagai berikut 1. Sampai saat ini penggunaan kontrasepsi pria masih kondom dan vasaktomi, belum ada antifertilitas yang penggunaannya secara oral. 2. Belum banyak tumbuhan di Indonesia yang diteliti sebagai obat antifertilitas pada pria. 3. Sampai saat ini belum ada yang membuktikan bahwa biji mimba (Azadirachta indica) mempunyai efek antifertilitas pada tikus jantan.

1.3

TUJUAN PENELITIAN Tujuan dari penelitian aktivitas antifertilitas ektrak etanol 70% biji mimba

(Azadirachta indica) pada tikus jantan galur Sprague Dawley secara in vivo sebagai berikut 1. Untuk menguji pemberian ekstrak etanol 70 % biji mimba (Azadirachta indica) terhadap bobot testis tikus jantan galur Sprague Dawley secara in vivo. 2. Untuk menguji pemberian ekstrak etanol 70 % biji mimba (Azadirachta indica) terhadap konsentrasi spermatozoa tikus jantan galur Sprague Dawley secara in vivo. 3. Untuk menguji pemberikan ekstrak etanol 70% biji mimba (Azadirachta indica) terhadap tahapan spermatogenesis dan diameter tubulus seminiferus pada tikus jantan galur Sprague Dawley secara in vivo.

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

4 1.4

HIPOTESIS Hipotesis dari penelitian aktivitas antifertilitas ekstrak etanol 70% biji mimba

(Azadirachta indica) pada tikus galur Sprague Dawley secara in vivo sebagai berikut 1. Pemberian ekstrak enatol 70% biji mimba (Azadirachta indica) dapat menurunkan bobot testis tikus jantan galur Sprague Dawley secara in vivo. 2. Pemberian ekstrak enatol 70% biji mimba (Azadirachta indica) dapat menurunkan konsentrasi spermatozoa tikus jantan galur Sprague Dawley secara in vivo. 3. Pemberian ekstrak etanol 70% biji mimba (Azadirachta indica) mempunyai efek terhadap berkurangnya diameter tubulus seminiferus dan pada tikus jantan galur Sprague Dawley secara in vivo. 1.5 MANFAAT PENELITIAN Memberikan informasi kepada masyarakat luas tentang manfaat biji mimba (Azadirachta indica) sebagai obat antispermatogenik dan memberikan informasi yang bermanfaat dalam pengembangan ilmu reproduksi yang kemungkinan dapat digunakan sebagai obat kontrasepsi alami.


5 BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1

Mimba (Azadirachta indica )

2.1.1 Sejarah dan Sinonim Tanaman mimba termasuk dalam famili Meliaceae, tanaman ini merupakan tanaman asli Afrika Asia. Di Asia tanaman ini banyak terdapat di India, Burma, Cina Selatan dan Indonesia. Di Indonesia tanaman mimba dijumpai di Jawa dan Bali, terutama disepanjang pantai utara pulau Jawa seperti Subang, Cirebon dan Indramayu (Jawa Barat), Tegal, Banjarsari dan Kranggan (Jateng), Tuban, Lamongan, Gresik, Sidoarjo, Pasuruan, Probolinggo, Asembagus dan Banyuwangi (Jatim), Gilimanuk dan Singaraja (Bali). Di daerah Asembagus dijumpai pohon-pohon yang berumur di atas 50 tahun, sedangkan di tempat lainnya umumnya berumur di bawah 10 tahun (Sastrodihardjo dan Aditya, 1992). Tanaman mimba banyak terdapat di Jawa Timur, Jawa Tengah, Jawa Barat, Bali dan NTB. Pada umumnya tanaman mimba digunakan sebagai tanaman peneduh jalan, sering dijumpai di tepi-tepi jalan di kota-kota yang panas dan kering misalnya Jepara, Rembang, Situbondo dan Pamekasan. Di Indonesia, mimba paling banyak ditanam di Bali jumlahnya diperkirakan kurang lebih 500.000 pohon (Kardinan dan Ruhnayat, 2003). Tanaman mimba dikenal sebagai “Neeb” dalam bahasa Urdu dan Hindi, “Mimba” dalam bahasa Sansekerta, “Neeb” dalam bahasa Arab, “Azaddirecsit” dalam bahasa Persia dan “Margosa” dalam bahasa Inggris. Di Indonesia dikenal sebagai mimba (Heyne, 1987). Menurut Rukmana (2002), daerah utama tanaman mimba adalah di kawasan Asia Selatan dan Asia Tenggara. Tanaman mimba banyak ditemukan di India dan Thailand. Menurut Sukarsono (2003), beberapa ahli berpendapat bahwa mimba merupakan tanaman asli India. Ahli lainnya menyatakan bahwa mimba tersebar di hutan-hutan diwilayah Asia Tenggara dan Asia Selatan termasuk Pakistan, Srilanka, Thailand, Malaysia serta Indonesia.


6 2.1.2

Klasifikasi Tanaman mimba mempunyai nama latin Azadirachta indica. menurut De Jussieu

(1830) cit. Biswas et al., (2002) Dalam sistemik (taksonomi) tumbuhan, tanaman mimba diklasifikasikan sebagai berikut Kingdom

: Plantae

Subkingdom : Tracheobionta Super Divisi : Spermatophyta Divisi

: Magnoliophyta

Kelas

: Magnoliopsida

Sub Kelas

: Rosidae

Ordo

: Sapindales

Famili

: Meliaceae

Genus

: Azadirachta

Spesies

: Azadirachta indica A.Juss

2.1.3

Morfologi Mimba berupa pohon sedang dengan tinggi 8-50 m. Namun pada umumnya pada

kondisi yang baik tingginya 35-40 m. Cabangnya menyebar tidak rapat. Rantingnya nispi pendek, keputih-putihan atau coklat kemerahan. Kayunya berwarna putih keabu-abuan. Akar mengikuti sistem lateral, permukaan akarnya dapat mencapau lebih dari 18 m. Daun tunggal, tidak berpasangan, berbentuk bundar telur memanjang 3-8 cm, lebar 3-4 cm,berbauh lemah rasanya pahit, berwarna coklat kehijaun sampai hijau tua, daun yang muda berwarna kemerahan sampai keunguan, daun yang berada diujung sering kali menghilang. Ujung daun meruncing, pangkal daun miring, tepi daun bergerigi kasar. Tulang daun menyirip, tulang cabang utamanya hampir sejajar satu dengan yang lainnya. Bunganya dalam tandan, tersusun diketiak daun, berwarna putih, baunya harum, panjang 5-6 mm, lebar 8-11 mm. Buahnya berbentuk bulat telur memanjang sampai bundar dan bila masak berukuran (1,4-2,8) kali (1,01,5) cm, berwarna hijau saat masih mentah dan bila masak berwarna hijau kekunungan sampai kuning, kulit buah tipis. Bijinya berukuran (0,9-2,2) kali (0,5-0,8) cm (Schmutterer, 1995; anonim. 1989). Batang mimba memiliki ciri-ciri morfologi tegak berkayu, dengan tinggi berkisar antara 10-15 m (Heyne, 1987). Bagian batang tumbuhan yang terletak di paling luar adalah kulit batang. Kulit mimba yang sudah tua memiliki warna abu-abu tua, tebal dan beralur Biji mimba mengandung beberapa komponen aktif pestisida antara lain Azadiraktrin, Salannin, Azadiradion, Salannol, Salanolacetate, 3-Deacetil Salanin, 14-


7 Epoxy-Azadiradion, Gedunin, Nimbinen dan Deacetil Nimbinen (Schutterer, 1990 dalam Hardi, 2006). Menurut Heyne (1987) daun mimba memiliki ciri-ciri berdaun majemuk berhadapan dengan panjang 5-7 cm dan lebar 3-4 cm. Sedangkan (Direktorat Perbenihan Tanaman Hutan, 2001) mengemukakan bahwa daun mimba memiliki ciri-ciri berdaun majemuk, 7-17 pasang per tangkai, berbentuk lonjong dan bergigi, panjang 6-8 cm, lebar 1-3 cm, mempunyai sirip daun sederhana. Letak daun berselang-seling (alternate) seperti spiral (Forest Research Institute Malaysia, 1992). Buah berbentuk elips, berdaging tebal, panjang 1,2-2 cm, hijau/kuning ketika masak, dengan lapisan tipis kutikula yang keras dan daging buah berair. Pohon berukuran sedang dan rata-rata dapat menghasilkan benih 37-55 kg per pohon (Direktorat Perbenihan Tanaman Hutan, 2001). Setiap buah dapat berkembang dan masak 1-2 bulan. Susunan buah terletak pada batang, berbuah pada bulan Desember-februari dengan buah masak dicirikan dengan warna kulit buah hijau kekuningan. Ekstraksi buah dilakukan dengan cara digosok-gosok dengan tangan menggunakan pasir. Jumlah benih perkilogram adalah kurang lebih 1.250 biji (Pramono, 2000)

Daun

Buah

Bunga

Biji

Gambar 1. Daun,bunga,buah dan biji. Azadirachta indica. (dok.pribadi ) UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

8 2.1.4

Kandungan Bahan Aktif Dari berbagai bagian tanaman mimba telah berhasil diisolasi lebih dari 140 senyawa

kimia. Senyawa kimia ini dibagi menjadi dua golongan besar, yaitu golongan isoprenoid, misalnya diterpenoid dan triterpenoid, yaitu protomeliasin, limonoid, azadiron dan turunannya, azadiraktin, gedunin dan turunannya, senyawa tipe vilasinin dan sekomeliasin, seperti nimbin, nimbolida, mahmodin dan nonisoprenoid, seperti polisakarida, polifenolat (Singh, et al., 2005), seperti asam galat, flavonoid, dihidrokalkon, kumarin, tanin, dan senyawa alifatik (Agrawal, 2005). Biji mimba mengandung beberapa komponen aktif pestisida antara lain azadirachtin, salannin, azadiradion, salannol, salanolacetate, 3-deacetyl salannin, 14-epoxyazadiradion, gedunin, nimbenin, dan deacetyl nimbinen (Jones et al., dalam Schmutterer, 1990). Daun dan kulit Azadirachta indica mengandung saponin, di samping itu daunnya juga mengandung flavonoida dan tanin (Hutapea, 1993). Tanaman mimba (Azadirachta indica), terutama dalam biji dan daunnya mengandung beberapa komponen dari produksi metabolit sekunder seperti azadirachtin, salanin, meliantriol, nimbin dan nimbidin yang diduga sangat bermanfaat, baik dalam bidang pertanian (pestisida dan pupuk), maupun farmasi (kosmetik dan obat-obatan), (Aradilla, 2009) dan Dzakiya, (2010). Daun mimba (Azadirachta indica A juss) mengandung zat-zat aktif seperti flavonoid, tanin dan saponin. Flavonoid adalah salah satu grup dari polipenol alami (Robinson, 1995). Jawetz et al., (1992), menyatakan fenol dan banyak senyawa fenolik merupakan unsur-unsur antibakteri yang kuat. 2.1.5

Kegunaan Sejak lama, mimba telah dikenal dalam pengobatan tradisional, yaitu dalam

Ayurveda, Siddha, Unani serta sistem pengobatan Homoeopathi. Tanaman ini di daerah tropis Amerika dan Afrika juga mempunyai reputasi yang cukup baik untuk mengobati berbagai penyakit (Schmutterer, 1992 Koul dan Isman, 1990; Perry, 1980) Mimba digunakan sebagai obat cacing di Pakistan (Jabbar et al., 2006), obat malaria (Kirira et al., 2006 Omar et al., 2003; Benoit et al., 1998), untuk kesehatan mulut di Nigeria (Bukar, et al., 2004). Menurut Hutapea (1993), daun Azadirachta indica berkhasiat sebagai obat untuk mengatasi demam dan untuk menguatkan badan. Untuk obat demam dipakai kira-kira 10 gram daun segar Azadirachta indica, dicuci, kemudian direbus dengan 1 gelas air selama 15 menit. Menurut Sukrasno dan Tim Lentera (2003), daun dan biji mimba mempunyai banyak manfaat. Biji mimba dapat dimanfaatkan untuk insektisida alami, fungisida, antibakteri, spermisida, sabun minyak mimba dan pelumas minyak mimba. Selain sebagai bahan pestisida, mimba seringkali digunakan sebagai obat penyakit kulit dan tonikum. Selain itu UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

9 juga bisa digunakan sebagai obat untuk penyakit-penyakit seperti kencing manis, disentri, malaria, masuk angin, ketombe, kanker lever dan jerawat. Di negara Thailand, daun mimba yang masih muda digunakan sebagai sayuran (Kardinan, 2002). 2.2

Simplisia dan Ekstrak

2.2.1

Simplisia Simplisia adalah bahan alamia yang dipergunakan sebagai obat yang belum

mengalami pengelolahan apapun juga dan dikecuali dikatakan lain, berupa bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI, 2000) Simplisia dibedakan simplisia nabati, simplisia hewan dan simplisia pelikat (mineral). Simplisia nabati dalah simplisia tumbuhan utuh, bagian tumbuhan atau eksudat tumbuhan. Eksudat tumbuhan ialah isi sel yang secara spontan keluar dari tumbuhan atau isi sel dengan cara tertentu dikeluarkan dari selnya, atau senyawa nabati lainnya yang dengan cara tertentu dipisahkan dari tumbuhan dan belum berupa senyawa kimia murni (Depkes RI, 2000). 2.2.2. Ekstrak Ekstrak adalah sedian kental yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau simplisia hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diupakan

dan massa atau serbuk yang tersisa diperlukan

sedemikian hingga memenuhi baku yang telah ditetapkan (Depkes RI, 2000). Ada beberapa jenis ekstrak yakni ekstrak cair, ekstrak kental dan ekstrak kering. Ekstrak cair adalah sediaan dari simplisia nabati yang mengandung etanol sebagai pelarut atau sebagai pengawet 2.3

Ekstraksi

2.3.1

Cara dingin

2.3.1.1 Maserasi Maserasi adalah proses pengekstrakan simplisia dengan menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan (kamar). Secara teknologi termasuk ekstraksi dengan prinsip metode pencapaian konsentrasi pada keseimbangan. Maserasi kinetik berarti dilakukakn pengadukan yang kontinu (terus-menerus) (Depkes RI, 2000).


10 2.3.1.2. Perkolasi Perkolasi adalah ekstraksi dengan pelarut yang selalu baru sampai sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur ruangan. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penampungan ekstrak), terus menerus sampai diperoleh ekstrak (perkolat) (Depkes RI, 2000). 2.3.2

Cara panas

2.3.2.1 Refluks Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik didihnya, selama waktu tertentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif konstan dengan adanya pendingin balik. Umumnya dilakukan pengulangan proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk ekstraksi sempurna (Depkes RI, 2000). 2.3.2.2 Soxhlet Soxhletasi adalah ekstraksi yang selalu menggunakan pelarut yang baru

yang

umumnya dilakukan dengan alat khusus sehingga terjadi ekstraksi kantinu dengan jumlah pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik (Depkes RI, 2000). 2.3.2.3 Digesti Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada temperatur yang lebih dari temperatur ruangan yaitu secara umum dilakukan pada temperatur 40-500C (Depkes RI, 2000). 2.3.2.4 Infus Infus adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air (bejana infus tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur terukur 96-980C) selama waktu tertentu 15-20 menit (Depkes RI, 2000). 2.3.2.5 Dekok Dekok adalah infus pada waktu yang lebih lama (≥ 30 menit) dan temperatur sampai titik didih air (Depkes RI, 2000). 2.3.3

Destilasi uap Destilasi uap adalah ekstraksi senyawa kandungan menguap (minyak atsiri) dari

bahan (segar atau simplisia) dengan uap air berdasarkan peristiwa tekanan parsial senyawa kandungan menguap dengan fase uap air dari ketel secara kontinu sampai sempurna dan diakhiri dengan kondensasi fase uap campuran (senyawa kandungan menguap ikut terdestilasi) menjadi destilat air bersama senyawa kandungan yang memisah sempurna atau memisah sebagian (Depkes RI, 2000).


11 2.3.4

Cara ekstraksi lainnya

2.3.4.1 Ekstraksi berkesinambung Proses ekstraksi yang dilakukan berulangkali dengan pelarut yang berbeda atau resirkulasi cairan pelarut dan prosesnya tersusun berturutan beberapa kali. Proses ini dilakukan untuk meningkatkan efisiensi (jumlah pelarut) dan dirancang untuk bahan dalam jumlah besar yang terbagi dalam beberapa bejana ekstraksi (Depkes RI, 2000). 2.3.4.2 Super kritikal karbodioksida Penggunaan prinsip superkritik untuk ekstraksi serbuk simpilsia dan umumnya digunakan gas karbodioksida. Dengan variabel tekanan dan temperatur akan deperoleh spesifikasi kondisi polaritas tertentu yang sesuai untuk melarutkan senyawa kandungan tertentu. Penghilangan cairan pelarut dengan mudah dilakukan karena karbodioksida menguap dengan mudah, sehingga hampir langsung diperoleh ekstrak (Depkes RI, 2000). 2.3.4.3 Ekstraksi Ultrasonik Getaran ultrasonik (> 20.000 Hz) memberikan efek pada proses ekstrak dengan prinsip meningkatkan permeabilitas dinding sel, menimbulkan gelembung spontan (cavitation) sebagai stres dinamik serta menimbulkan fraksi interfase. Hasil ekstraksi tergantung pada frekuensi getaran, kapasitas alat dan lama proses ultrasonikasi (Depkes RI, 2000). 2.3.4.4 Ekstrak energi listrik Energi listrik digunakan dalam bentuk medan listrik, medan magnet serta ‘’electricdischarge’’ yang dapat mempercepat proses dan meningkatkan hasil dengan prinsip menimbulkan gelembung spontan dan menyebabkan gelombang tekanan berkecepatan ultrasonik (Depkes RI, 2000). 2.4

Tinjauan Hewan Percobaan

2.4.1

Klasifikasi Tikus Putih (Rattus norvegicus ) Menurut Krinke (2000), klasifikasi tikus putih (Rattus norvegicus) adalah sebagai

berikut : Kindom

: Animalia

Phylum

: Chordata

Subphylum : Vertebrata Class

: Rodentia

Family

: Muridae

Genus

: Novergicus

Species

: Rattus UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

12 2.4.2

Biologis Tikus Putih (Rattus norvegicus) Hewan coba merupakan hewan yang dikembangbiakkan untuk digunakan sebagai

hewan uji coba. Tikus sering digunakan pada berbagai macam penelitian medis selama bertahun-tahun. Hal ini dikarenakan tikus memiliki karakteristik genetik yang unik, mudah berkembang biak, murah serta mudah untuk mendapatkannya. Tikus merupakan hewan yang melakukan aktivitasnya pada malam hari (nocturnal). Tikus termasuk hewan mamalia oleh sebab itu dampaknya terhadap suatu perlakuan mungkin tidak jauh berbeda dibandingkan dengan mamalia lainnya. Selain itu, penggunaan didasarkan

tikus sebagai hewan percobaan juga

atas pertimbangan ekonomis dan kemampuan hidup tikus hanya 2-3 tahun

dengan lama produksi 1 tahun (Smith dan Mangkoewidjojo, 1988). Kelompok tikus laboratorium pertama tama dikembangakan di Amerika serikat antara tahun 1877 dan 1893. Keunggulan tikus putih dibandingkan tikus liar antara lain lebih cepat dewasa, tidak memperlihatkan perkawinan musiman, dan umumnya lebih cepat berkembang biak. Kelebihan lainnya sebagai hewan laboratorium adalah sangat mudah ditangani, dapat ditinggal sendirian dalam kandang asal dapat mendengar suara tikus lain dan berukuran cukup besar sehingga memudahkan pengamatan. Secara umum, berat badan tikus laboratorium lebih ringan dibandingkan berat tikus liar. Biasanya pada umumnya empat minggu beratnya 35-40 g dan berat dewasa rata-rata 200-250 g tetapi bervariasi tergantung pada galur. Galur Sprague Dawley merupakan yang paling besar diantara galur yang lain (Smith dan Mangkoewijojo, 1988). Terdapat beberap galur tikus yang sering digunakan dalam penelitian. Galur-galur tersebut adalah : Wistar, Sprague-Dawley, Long evans dan Holdzman. Dalam penelitian ini digunakan galur Sprague-Dawley dengan ciri-ciri berwarna putih, berkepala kecil dan ekornya lebih panjang dari pada badannya (Smith dan Mangkoewidjojo 1988). Tikus ini pertama kali diproduksi oleh perternakan Sprague Dawley. Tikus Sprague Dawley merupakan jenis outbred tikus albino serbaguna secara ekstensif dalam riset medis. Keuntungan utamanya adalah ketenangan dan kemudahan penanganannya. Adapun data biologis tikus sebagai berikut :


13 Tabel 2.1 Data biologis tikus (Smith dan Mangkoewidjojo, 1988) Lama hidup

2-3 tahun,dapat sampai 4 tahun

Lama bunting

20-22 hari

Kawin sesudah

1 sampai 24 jam

beranak Umur

10 minggu(jantan dan betina)

dikawinkan Umur dewasa

40-60 hari

Siklus kelamin

Poliestrus

Siklus etrus

4-5 hari

Lama etrus

9-20 jam

Berat dewasa

300-400 g jantan ; 250-300 g betina

Berat lahir

5-6 g

Jumlah anak

Rata –rata 9, dapat 20

Aktivitas

Nokturnal

Kecepatan

5g/hari

tumbuh Pernafasan

65-115/menit

Denyut jantung

330-480/menit

Tekanan darah

90-180 sistol,60-145 diastol

Konsumsi

1,29-2,68 ml/g/jam

oksigen

2.5

Sistem Reproduksi Tikus Jantan Sistem reproduksi tikus jantan terdiri dari atas testis dan skrotum, efididimis, duktus

deferens, kelenjar aksesoris, uretra dan penis. Selain uretra dan penis, semua struktur ini berpasangan. Duktus yang menjadi testis, duktuli eferentes bersama duktus epididimis, suatu duktus konvolusi bergulung untuk menbuat epididimis, suatu organ terletak pada permukaan postrerior testis (Fawcett, 2002). Dari epididimis, duktus deferen yang lurus panjang naik dari skrotum dan melalui aknalis inguinalis masuk kedalam pelvis, tempat duktus ini berlanjut dengan duktus ejakulatorius, suatu segmen terminal dari sistem duktus yang membuka kearah uretra prostatik. Berhubungan dengan sistem duktus adalah tiga kelenjar aksesorius, vesikula UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

14 seminalis, prostat, dan kelenjar bulboureta. spermatozoa dari epididimis, bersama dengan hasil sekretorius kelenjar ini, merupakan semen yang dikeluarkan melalui uretra penis (Fawcett, 2000).

Gambar 2.2 Anatomi sistem reproduksi tikus jantan (Laboratory animal medicine and science series) Pada hewan yang melakukan fertilitas secara internal organ reproduksi dilengkapi dengan adanya organ kopulatori, yaitu suatu organ yang berfungsi menyalurkan spermatozoa dari organisme jantan ke betina. Peranan hewan jantan dalam hal reproduksi terutama adalah memproduksi spermatozoa dan sejumlah kecil cairan untuk memungkinkan sel spermatozoa masuk kedalam rahim (William, 2005). Untuk melakukan fungsinya, organ reproduksi hewan jantan dilengkapi dengan seperangkat kelenjar aksesoris yang terdiri dari atas kelenjar vesikularis, prostat dan bulbouretralis. Bentuk, ukuran dan keberadaan kelenjar kelenjar ini bervariasi bergantung pada jenis hewan. Pada tikus, selain kelenjar utama tersebut, terdapat kelenjar koagulasi yang melekat pada kelenjar vesikularis. Selain itu, kelenjar pronstat tikus memiliki lobus dorsal, lateral, dan ventral (Jesik et al., 1982). Kelenjar aksesoris berperan penting pada proses reproduksi. Kelenjar ini menghasilkan sekreta yang merupakan bagian dari plasma semen, berfungsi sebagai nutrisi dan media transpor bagi spermatozoa, perlindungan terhadap berbagai kuman infeksi, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

15 pembilas saluran uretra terhadap sisa-sisa urin dan berperan dalam proses netralisasi pH saluran reproduksi jantan dan betina sebelum dilewati spermatozoa (Baker 1979 dan Hogan et al.,1986). Testis merupakan salah satu organ yang penting dalam reproduksi jantan.Testis berfungsi untuk memproduksi sperma dan hormon reproduksi yaitu testosteron (Falk, 2001). Wischnitzers (1967) menyatakan bahwa testis terdiri dari sepasang gonad yang berbentuk oval. Testis dibungkus skrotum yang terdiri dari tiga atau empat lapisan. Lapis superficial kulit, dibawahnya terdapat lapis fibrosa dan jaringan otot yaitu tunica dartos dibawahnya terdapat tunica vaginalis yang menutupi dinding skrotum (Hartono, 1988). Bagian dalam testis terdapat lobuli-lobuli yang didalamnya terdiri dari saluran-saluran kecil yang bergulung yang disebut tubulus seminiferus yang menghasilkan dan berisi spermatozoa (Toelihere, 1985). Dinding tubulus seminiferus terdiri dari dua tipe sel yaitu sel yang memproduksi sperma dan sel pendukung yang memproduksi cairan sumber makanan sperma (Lane, 1980). Sel-sel pendukung tersebut dikenal sebagai sel sertoli. Disamping itu, terdapat sel interstitial yang berada diantara tubulus seminiferus yang memproduksi hormon testosteron (Hartono, 1988). Testis sebagai organ kelamin primer mempunyai dua fungsi yaitu menghasilkan spermatozoa atau sel-sel kelamin jantan dan mengekresikan hormon kelamin jantan dan testosteron. Spermatozoa dihasilkan didalam tubulus seminiferus atas pengaruh FSH (Follicle Stimulating Hormone) sedangkan testosteron diproduksi oleh sel-sel interstitial dari Leydig atas pengaruh ICSH (Interstitial Cell Stimulating Hormone) (Toelihere, 1985). Tubulus seminiferus dikelilingi oleh membran basal. Didekat membran basal ini terdapat sel progenitor untuk reproduksi sprematozoa. Epitel yang mengandung spermatozoa yang sedang berkembang disepanjang tubulus disebut epitel seminiferus atau epitel germinal. Pada potongan melintang testis, spermatosit dalam tubulus berada dalam berbagai tahapan pematangan. Di antaranya spermatosit terdapat sel Sertoli. Sel ini merupakan satu-satunya sel nongerminar dalam epitel seminiferus. Semua sel Sertoli berhubungan dengan membran basal pada satu kutubnya dan mengelilingi spermatozoa yang sedang berkembang pada kutup yang lain. Sel Sertoli memiliki jari jari sitoplasma yang besar dan kompleks yang dapat mengelilingi banyak spermatozoa dalam satu waktu (Heffer dan Schust, 2005). 2.5.1

Produksi Sperma Produksi sperma tiap hari per testis pada tikus adalah 35,4x106/ml, tidak berbeda

dengan manusia yakni sebesar 45,5x106/ml. Tubulus seminiferus tikus lebih tebal dari pada manusia yakni 347±5µm vs 262±9µm, tetapi pembatas tubulus pada tikus lebih jauh tipis UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

16 dibandingkan dengan manusia (1,4±1µm vs 14,9±3,4µm). Epitel seminiferus tikus mengandung 40% lebih sel spermatogenik dari volumenya, dua kali banyak dari epitel seminiferus manusia (Ilyas, 2007). Spermatozoa pada tikus lebih panjang dibandingkan dengan spesies mamalia lainnya, termasuk manusia dan hewan domestik lainnya. Kepala sperma pada tikus berbentuk kail hal ini sama seperti pada hewan pengerat lainnya (Krinke, 2000).

Gambar 2.3 Spermatozoa tikus 2.5.2

Spermatogenesis Pada Tikus Dasar pengetahuan yang cukup pada tikus. Sel primodial germinal yang telah berhenti

bermigrasi diliputi oleh sel sertoli dan membran basal yang menonjol dalam tubulus seminiferus pada alat kelamin tikus jantan. Sel kelamin jantan tetap tidak aktif sampai sebelum masa pubertas, yaitu dimana sekitar 50 hari setelah kelahiran. Pada tahap itu mereka mulai membelah dan menjadi spermatogonium, dan kemudian terus membelah sampai hewan kehilangan kemampuan untuk memproduksi spermatozoa. Sel-sel spermatogenik berkembang dalam tubulus seminiferus testis melalui suatu perkembangan yang komplek yang disebut dengan spermatogenesis memerlukan suatu seri komplek dimana spermatozoa dihasilkan melalui tahap mitosis, meiosis dan diferensiasi sel untuk menjadi spermatozoa matang. Perubahan morfologi dari spermatid menjadi spermatozoa disebut dengan spermiogenesis. Selanjutnya spermatozoa dilepaskan ke dalam lumen tubulus. Proses pelepasan tersebut dikenal dengan proses spermiasi (Ilyas, 2007). Spermatogenik secara garis besar diklasifikasikan kedalam tiga jenis: tipe A, tipe intermediet dan tipe B. Tipe spermatogonia A ini dibagi lagi menjadi tipe AO (disebut juga sel induk) dan tipe Al-A4. Tipe spermatogonium AO tetap pada membran basal di tubulus UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

17 seminiferus dan memiliki kemampuan untuk membelah menjadi spermatogonium Al, yang seterusnya lebih lanjut dalam proses spermatogenesis, sedangkan yang lainnya sebagai sel induk. Pada tikus, spermatogonium Al kemudian memiliki enam pembelahan mitosis, dan kemudian mereka menjadi spermatosit preleptotene. Kemudian spermatosit dalam fase meiosis, di mana berkembang menjadi leptotene, zygotene dan pakiten untuk menjadi spermatosis sekunder di komponen adluminal dari sel Sertoli dalam tubulus seminiferus. Selama fase miosis, setiap spermatosit membela menjadi empat spermatid haloid, yang kemudian menjadi spermatid fase golgi, terdapat granul akrosom, fase cap, adanya head cap pada granul akrosom yang membesar dan menutupi 1/3 bagian nukleus, fase akrosom, nukleus dan head cap memanjang, fase maturasi nukleusnya menjadi lebih pendek dan sitoplasma terkondensasi disepanjang ekor yang telah mulai memanjang, hingga dihasilkan spermatozoa yang dilepaskan ke lumen dengan ekor menghadap ke lumen (Krinke, 2000).

Gambar 2.4 Tahapan dari siklus sel spermatogenis pada tikus 2.5.3

Peran Hormon Pada Spermatogenesis Proses spermatogenesis dipengaruhi oleh hormon-hormon yang dihasilkan oleh organ

hipotalamus, hipofisis dan testis sendiri. Testis memproduksi sejumlah hormon jantan yang kesemuanya disebut androgen. Yang paling poten dari androgen adalah testosteron. Fungsi testosteron adalah merangsang pendewasaan spermatozoa yang membentuk dalam tubulus seminiferus,

merangsang

pertumbuhan

kelenjar-kelenjar

asesoris

dan

merangsang

pertumbuhan sifat jantan (partodiharjo, 1980). Spermatogenesis dan pematangan sperma sewaktu bergerak di sepanjang epididimis dan vas deferens memerlukan androgen. Androgen juga mengontrol pertumbuhan dan fungsi vesikula seminalis serta kelenjar prostat. Spermatogenesis hampir seluruhnya terjadi dibawah UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

18 pengaruh hormon-hormon yang berasal dari hipofisa, terutama FSH. Hal ini mirip dengan apa yang terjadi pada ovarium, dimana terjadi pembentukan folikel dibawah pengaruh FSH. Spermiogenesis adalah lanjutan spermatogenesis yang berlangsung di bawah peranan LH dan testosteron. Tanpa testosteron spermatozoa tidak dapat mencapai pendewasan yang baik. Spermatogenesis dimulai pada saat pubertas karena adanya peningkatan sekresi gonadotropin (FSH dan LH) dari hipofisis anterior. FSH dianggap hormon penting untuk induksi spermatogenesis dan merangsang secara langsung pada tubulus seminiferus, karena spermatogenesis lengkap pada tikus hypophysectomise dipulihkan oleh pemberian FSH dalam kombinasi dengan LH dan testosteron. Di sisi lain, efek spermatogenesis dari LH, kadang-kadang disebut Interstitial Cell Stimulating Hormone (ICSH) pada pria, karena tindakan androgenik pada sel-sel Leyding di interstitial, dianggap dimediasi oleh androgen, setidaknya pada tikus. Dalam konteks ini, sekresi LH juga merangsang sintesis testosteron di sel Leyding pada testis. Aksi FSH pada spermatogenesis mungkin dimediasi oleh sel Sertoli, karena hormon peptida tidak dapat secara langsung mencapai spermatosit dan spermatid melintas sawar darah testis, yang terbentuk selama 16-19 hari setelah kelahiran. Sebaliknya, testosteron dapat dengan mudah melewati sawar darah testis dengan difusi (dan mungkin juga oleh beberapa sistem transportasi). Telah dilaporkan bahwa tingkat testosteron pada tikus dewasa di dalam cairan interstisial (lebih dari 50 ng/mL) jauh lebih tinggi dibandingkan pada testis (sekitar 30 ng/mL amupun cairan vena perifer (kurang dari 10 ng/mL), menunjukan aksi parakrin atau autokrin dari testosteron pada spermatogenesis ditestis. Adanya reseptor androgen pada sel germinal masih kontroversial, sementara ini reseptor tersebut telah ditemukan dalam sel Leydig, sel peritubular, sel Sertoli dan lapisan otot pembuluh darah pada sebagian arteri dalam testis tikus. Salah satu peran sel Sertoli adalah produksi androgen yang mengikat protein, di mana dirangsang oleh FSH dan testosteron. Ini juga telah menunjukan bahwa terdapat beberapa faktor yang tidak diketahui yang dikeluarkan dari sel Sertoli, sebagian respon untuk rangsangan FSH dan testosteron, mungkin berkaitan dengan spermatogenesis (Krinke, 2000).


19 BAB III METODE PENELITIAN

3.1.

Tempat dan Waktu Penelitian Penelitian dilakukan di Laboratorium Product Natural Analysis dan di Laboratorium

Farmakologi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Berlangsung dari bulan November 2013 sampai dengan bulan Juni 2014. 3.2.

Alat dan Bahan

3.2.1. Hewan uji Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih jantan galur Sprague Dawley yang sehat berumur 9 minggu dengan berat 250-350 g dan fertil yang diperoleh dari Institut Partanian Bogor. 3.2.2. Bahan Uji Bahan uji yang akan digunakan adalah biji mimba (Azadirachta indica) yang peroleh dari kebun induk Balitro Bogor. Sebelum dilakukan penelitian, tanaman tersebut di determinasi terlebih dahulu di Herbarium Bogoriense Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi-LIPI Bogor. 3.2.3. Bahan Kimia Bahan-bahan yang dipergunakan dalam penelitian ini adalah pakan tikus berupa pellet, aquades steril, larutan NaCL fisiologis, Na CMC alkohol 70 %, 80% dan 96%, etanol 70% dan 90%, amoniak 1 % dan 25 %. Larutan HCL, kloroform, pereaksi Dragendrof, pereaksi Mayer, serbuk Mg, amil alkohol, larutan NaOH, FeCl3, eter, petroleum eter, larutan Hematoksilin, larutan Bouin (asam pikrat, formaldehid 4%, asam asetat), larutan xilol, larutan Eosin, larutan George, paraffin. 3.2.4. Alat Alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi labu erlenmayer, gelas ukur, ayakan mesh 40, timbangan analitik, mortir, tabung reaksi, cawan penguap, hot plate, corong, kertas Whatman, batang pengaduk, perangkat rotary evaporator vacum, botol sampel, kandang hewan, tempat makan dan minum tikus, timbangan hewan, alat pencekok oral (sonde), beaker glass, obyek glass, kertas saring, Hemositometer Improved Nuebeur, pipet tetes, mikro pipet, seperangkat alat bedah, mikrotom, dan mikroskop optik. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

20

3.3.

Rancangan Penelitian Rancangan penelitian yang digunakan adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL).

Perlakuan di kelompokan menjadi 4 kelompok dengan masing-masing terdiri dari 5 ekor tikus putih jantan galur Spague Dawley (WHO, 2000). Perlakuan yang digunakan adalah kontrol (tanpa perlakuan) dan tikus yang diberikan ekstrak biji mimba (Azadirachta Indica) dengan 3 dosis yang berbeda. Acuan dosis yang digunakan berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Reshu, et al., (2007). Perlakuan yang digunakan terdiri dari : 1.

Kelompok Kontrol : Kelompok perbandingan tanpa perlakuan sebanyak 5 ekor tikus diberi pembawa (Na CMC 1%) sebanyak 1 ml serta makan dan minum.

2.

Kelompok Dosis Rendah : Kelompok perlakuan sebanyak 5 ekor tikus yang diberi suspensi ekstrak biji mimba (Azadirachta Indica) dengan dosis 10 mg/kg BB, makan dan minum.

3.

Kelompok Dosis Sedang : Kelompok perlakuan sebanyak 5 ekor tikus yang diberi suspensi ekstrak biji mimba (Azadirachta Indica) dengan dosis sedang yaitu 25 mg/kg BB, makan dan minum.

4.

Kelompok Dosis Tinggi : Kelompok perlakuan sebanyak 5 ekor tikus yang diberi suspensi ekstrak biji mimba (Azadirachta Indica) dengan dosis tinggi yaitu 50 mg/kg BB, makan dan minum.

3.4.

Kegiatan Penelitian

3.4.1. Pemeriksaan Simplisia (Determinasi) Sebelum dilakukan penelitian, biji mimba terlebih dahulu di determinasi di Herbarium Bogoriense Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi-LIPI Bogor untuk memastikan kebenaran simplisia. 3.4.2. Penyiapan Simplisia Biji mimba yang telah dikeringkan kemudian dirajang atau blender. Kemudian dilakukan pengayakan dengan menggunakan ayakan mesh 40 untuk mendapatkan serbuk simplisia. Serbuk simplisia disimpan dalam wadah yang kering, tertutup rapat dan terlindungi dari cahaya.


21

3.4.3. Pembuatan ekstrak Pada pembuatan ekstrak biji mimba digunakan metode ekstraksi cara dingin dengan maserasi dan menggunakan etanol 70% sebagai pelarut. Serbuk simplisia ditimbang kemudian dimaserasi dengan pelarut etanol 70% hingga simplisia terendam. Pelarut diganti setiap setiap 3 hari sekali. Hasil maserasi disaring sehingga diperoleh filtrat. Proses maserasi dilakukan hingga larutan mendekati tidak berwarna. Filtrat yang diperoleh dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator sampai diperoleh ekstrak kental. Ekstrak kental yang dihasilkan kemudian ditimbang dan dicatat beratnya dan selanjutnya disimpan dan digunakan untuk perlakuan. 3.4.4. Uji Penapisan fitokimia Ekstrak (Fransworth, 1996) 1. Identifikasi Golongan Alkaloid Sebanyak 2gram ekstrak ditambahkan dengan 5 mL amonia 25%, digerus dalam mortir, kemudian ditambahkan 20 mL etil asetat dan digerus kembali dengan kuat, ampuran tersebut disaring dengan kertas saring. Filtrat berupa larutan amoniak diambil (sebagai larutan A), sebagian dari larutan A (10 mL) diekstraksi dengan 10 mL larutan HCL encer 1:10 dengan pengocokan dalam tabung reaksi, diambil larutan bagian atasnya (larutan B). Larutan A diteteskan beberapa tetes pada kertas saring dan ditetesi dengan pereaksi Dragendorff. Jika berbentuk warna merah atau jingga pada kertas saring maka hal itu menunjukkan adanya sanyawa golongan alkaloid dalam sempel. Larutan B dibagi menjadi dalam dua tabung reaksi, ditambahkan masing-masing pereaksi Dragendorff dan Mayer. Jika terbentuk endapan merah bata dengan pereaksi Dragendorff dan endapan putih dengan pereaksi mayer maka hal itu menunjukkan adanya senyawa golongan alkaloid. 2.

Indentifikasi Golongan Flavonoid Sebanyak 1 gram ekstrak ditambahkan 50 mL air panas, didihkan selama 5 menit,

disaring dengan kertas saring, diperoleh filtrat yang akan digunakan sebagai larutan percobaan. Ke dalam 5 mL larutan percobaan (dalam tabung reaksi) ditambahkan serbuk atau lempengan magnesium secukupnya dan 1 mL HCL pekat, serta 5 mL butanol, dikocok kuat lalu dibiarkan memisah jika terbentuk warna (merah atau jingga) pada lapisan butanol (lapisan atas), maka hal tersebut menunjukkan adanya senyawa golongan flavonoid.


22 3. Indentifikasi Golongan Saponin Sebanyak 10 mL larutan percobaan yang diperoleh dari percobaan B (identifikasi golongan flavonoid), dimasukan ke dalam tabung reaksi dan dikocok secara vertikal selama 10 detik, kemudian dibiarkan selama 19 menit. Jika dalam tabung reaksi terbentuk busa yang stabil dan jika ditambahkan 1 tetes HCL 1% busa tetep stabil maka hal itu menunjukkan adanya senyawa golongan saponin. 4. Identifikasi Golongan Tanin Sebanyak 2 gram ekstrak ditambahkan 100 mL air, didihkan selama 15 menit lalu didinginkan dan disaring dengan kertas saring. Filtrat yang diperoleh dibagi menjadi 2 bagian. Ditambahkan FeCL3 1% sebanyak 10 mL kedalam filtrat pertama larutan hingga terbentuk warna biru tua atau hijau kehitaman maka hal itu menunjukan adanya senyawa golongan tanin. 3.4.5. Pengujian Parameter Spesifik dan Non Spesifik (Depkes RI, 2000) 3.4.5.1.Identitas Ekstrak Deskripsi tata nama : a. Nama ekstrak b. Nama latin tumbuhan ( sistematika botani ) c. Bagian tumbuhan yang digunakan d. Nama Indonesia tumbuhan 3.4.5.2. Organoleptik Penggunaan panca indera mendeskripsikan bentuk, warna, bau, rasa sebagai berikut: a. Bentuk b. Warna c. Bau d. Rasa 3.4.5.3. Susut Pengeringan Ekstrak ditimbang secara seksama sebanyak 1gram sampai 2 gram dan dimasukkan ke dalam botol timbang dangkal bertutup yang sebelumnya telah dipanaskan pada suhu 1050C selama 30 menit dan telah ditara. Sebelum ditimbang, ekstrak diratakan dalam botol timbang dengan menggoyangkan botol hingga merupakan lapisan setebal lebih kurang 5 mm sampai 10 mm. Jika ekstrak yang diuji berupa ekstrak kental, ratakan dengan batang pengaduk. Kemudian dimasukkan ke dalam ruang pengering, buka tutupnya, keringkan pada UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

23 suhu 1050C hingga bobot tetap. Sebelum setiap pengeringan, biarkan botol dalam keadaan tertutup mendingin dalam desikator hingga suhu kamar. Jika ekstrak sulit kering dan mencair pada pemanasan, ditambahkan 1 gram silica pengering yang telah ditimbang secara seksama setelah dikeringkan dan disimpan dalam desikator pada suhu kamar. Campurkan silica tersebut secara rata dengan ekstrak pada saat panas, kemudian keringkan kembali pada suhu penetapan hingga bobot tetap (Depkes RI, 2000) 3.4.5.4. Kadar Abu Lebih kurang 2 gram sampai 3 gram ekstrak yang telah digerus dan ditimbang secara seksama dimasukkan ke dalam krus silikat yang telah dipijarkan dan ditara, ratakan. Pijarkan perlahan-lahan hingga arang habis, dinginkan, ditimbang. Jika cara ini arang tidak dapat dihilangkan, tambahkan air panas, saring melalui kertas saring bebas abu. Pijarkan sisa kertas dan kertas saring dalam krus yang sama. Masukkan filtrate ke dalam krus, uapkan, pijarkan hingga bobot tetap, timbang. Hitung kadar abu terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara (Depkes RI, 2000). 3.4.6. Persiapan Hewan Uji Sebelum percobaan, dilakukan uji fertilitas pada tikus putih jantan dengan cara mengawinkan seluruh tikus putih jantan umur 9 minggu (umur siap dikawinkan) yang akan digunakan dalam penelitian ini secara alami dengan tikus betina. Kemudian di amati apakan terjadi kehamilan pada tikus betina. Jika terjadi kehamilan maka menunjukkan bahwa tikus jantan yang akan digunakan sebagai hewan uji adalah tikus yang fertil. Disiapkan tempat pemeliharaan hewan coba yang meliputi kandang, sekam, tempat makan dan minum tikus. Tikus diaklimatisasi selama 7 hari pada kondisi laboratorium, agar dapat menyesuaikan diri dengan lingkungannya yang baru. Selama proses adaptasi, diberi makan dan minum standar ad libitum, dilakukan pengamatan kondisi umum serta ditimbang berat badannya. Tikus yang digunakan adalah tikus yang sehat yakni berat badan selama aklimatisai tidak mengalami perubahan lebih dari 10% dan secara visual menunjukkan perilaku yang normal. 3.4.7. Pemberian Perlakuan Pemberian perlakuan pada tikus dilakukan sebagai berikut. Penelitian ini menggunakan 20 ekor tikus putih jantan strain Sprague-Dawley yang diberikan 4 perlakuan yang berbeda. Masing-masing perlakuan terdiri atas 5 ekor tikus putih jantan. Ekstrak biji mimba yang diperoleh disuspensikan dalam pembawa (Na CMC 1%) dengan dosis yang telah


24 telah ditentukan, diberikan secara oral (sonde) sebanyak 1ml. Pemberian ekstrak diberikan peroral satu hari sekali setiap pagi hari dan dilakukan selama 48 hari (Krinke, 2000). 3.4.8. Pembuatan preparat Setelah 48 hari, masing-masing hewan coba dikorbankan untuk diambil organ testisnya. Tikus dibius dengan eter, kemudian dibedah. Diambil bagian cauda epididimis dan dihitung jumlah spermatozoa kemudian bagian testis diambil untuk ditimbang dan dibuat preparat. Untuk mendapatkan sperma didalam sekresi epididimis dilakukan dengan cara sebagai berikut : Cauda epididimis diambil dan diletakkan kedalam cawan petri yang berisi NaCl 0.9%. Kemudian epididimis di plurut dalam wadah yang berisi NaCl fisiologis 0.9% tersebut disebut sebagai larutan stok yang digunakan untuk mengetahui kualitas dan kuantitas spermatozoa. Suspensi sperma dari epididimis yang telah diperoleh dapat digunakan untuk pengamatan konsentrasi spematozoa (Hartini, 2011) Untuk jaringan testis yang telah diambil, difiksasi dalam larutan Bouin dan dibiarkan selama kurang lebih 24 jam. Kemudian dilakukan pencucian, yaitu mencuci organ dengan alkohol 70% yang dilakukan berulang-ulang selama kurang lebih 30 menit. Hal ini bertujuan agar warna kuning (larutan Bouin) berkurang atau tampak jernih. Jaringan didehidrasi dalam larutan alkohol bertingkat dari alkohol 70%, 80%, 96% dan alkohol absolut selama kurang lebih 1 jam untuk menarik molekul air yang keluar dari jaringan. Selanjutnya jaringan dijernihkan dengan larutan benzil benzoat selama 24 jam, lalu dalam benzol sebanyak 2 kali 15 menit sampai jaringan tampak jernih atau transparan (Ilyas, 2007). Setelah itu, dilakukan infiltrasi dengan parafin dalam beberapa tahap, yaitu jaringan direndam dalam parafin I selama 30 menit, parafin II selama 60 menit, dan parafin III selama 90 menit. Infiltrasi dilakukan dalam oven dengan suhu 560C-580C. Perlakuan berikutnya adalah penanaman jaringan yang telah diinfltrasi dalam cairan parafin cair lalu diletakkan dalam kotak kertas sesuai dengan ukuran masing-masing jaringan yang akan ditanam. Kotak kertas yang telah berisi jaringan dimasukkan dalam lemari es dan dibiarkan membeku (Kusmana, 2001).Selanjutnya, pemotongan jaringan setebal 3-6µm dengan menggunakan pisau mikrotom putar dan hasil irisan ditempelkan pada kaca objek. Preparat pada kaca objek dipanaskan sampai jaringan mengembang dengan sempurna. Sebelum jaringan diwarnai, sediaan direndam dalam xilol selama 5 menit sebanyak 2 kali. Hal tersebut bertujuan agar sisa parafin yang masih merekat pada jaringan dapat dihilangkan. Xilol dihilangkan dengan merendam jaringan pada larutan alkohol bertingkat dari konsentrasi tinggi turun secara bertahap (100%, 90%, 80% dan 70%) masing-masing selama 3 menit. Untuk pewarnaan UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

25 dilakukan dengan hematoksilin dan eosin (HE). Jaringan yang telah diwarnai dibeningkan dengan xilol selama 5 menit agar jaringan tampak lebih cerah. Pada tahap akhir, jaringan testis pada kaca objek diberi etilen dan ditutup dengan kaca penutup sehingga dapat dilakukan pengamatan. Dihitung sel germinal dan diameter tubulus seminiferus pada preparat histologi testis tikus dengan mikroskop optik. 3.4.9. Pengukuran Parameter Uji 3.4.9.1.

Pengukuran Bobot testis

Dilakukan dengan cara menimbang organ testis dengan menggunakan timbangan analitik. Kemudian hasil bobot testis tikus yang diberi perlakuan dibandingkan dengan bobot testis tikus kontrol. 3.4.9.2.

Pengukuran Konsentrasi Spermatozoa Pengukuran konsentrasi spermatozoa dilakukan dengan cara mengambil spermatozoa

pada cauda epididimis. Spermatozoa yang didapat diletakkan pada kaca arloji yang berisi cairan NaCl sebanyak 250 µL. Spermatozoa dimasukkan kedalam bilik hitung Neubauer (Hemasitometer) sampai kamar Neubauer terisi rata. Kemudian dihitung jumlah spermatozoa pada salah satu kamar hitung. Neubauer dan selanjutnya ditentukan pengenceran yang akan dilakukan dan jumlah kotak yang akan dihitung (Tabel 3.1). Tabel 3.1.Pengenceran yang dilakukan dan kotak yang dihitung No

Jumlah spermatozoa dalam 1

Pengenceran

Kotak yang

kotak

dihitung

1

> 40

50 kali

5

2

15 – 40

20 kali

10

3

< 15

10 kali

25

Dari jumlah spermatozoa yang diketahui, maka dilakukan pengenceran sprematozoa berdasarkan jumlah yang terhitung (Ilyas, 2007).


26

Tabel 3.2.Cara Pengenceran No

Pengenceran

1

50 kali

Pembuatan Pengenceran a. 980µL

larutan

George

+

20µL

spermatozoa b. 2.450 µL larutan George + 50µL spermatozoa 2

20 kali

a. 950

µL

larutan

George

+

50µL

spermatozoa 3

10 kali

a. 900

µL larutan

George

+

100µL

George

+

50µL

spermatozoa b. 450µL

larutan

spermatozoa

Poin a dan b menunjukan opsi perlakuan (hanya salah satu yang dipilih) Setelah dilakukan pengenceran, dilakukan perhitungan spermatozoa dengan jumlah kotak yang dihitung sesuai dengan jumlah spermatozoa dan cara pengenceran pada tabel diatas. Kemudian dilakukan pengukuran spermatozoa sesuai rumus di bawah ini (Ilyas, 2007). Konsentrasi spermatozoa = n x 10.000 x Fp x

x v NaCl

Keterangan : n adalah jumlah spermatozoa yang terhitung. Angka 10.000 merupakan volume kamar hitung Neubauer. Fp merupakan faktor pengenceran yang dilakukan. Angka 25 menunjukan total kotak kecil yang terdapat dalam kamar hitung Neubauer sedangkan k merupakan jumlah kotak kecil yang dihitung pada saat pengamatan. vNaCL (mL) fisiologis yang digunakan untuk membantu mengeluarkan spermatozoa dari vas deferens. Perhitungan konsentrasi spermatozoa (juta/mL) dapat terlihat dari tabel 3.3 berikut. Tabel 3.3.Rumus Konsentrasi Spermatozoa No Jumlah Kotak yang dihitung Rumus konsentrasi spermatozoa 1

5

n x 10.000 x 50 x 5 x o,25

2

10

n x 10.000 x 20 x 2,5 x 0,25

3

25

n x 10.000 x 10 x 1 x 0,25


27

Dari perhitungan jumlah spermatozoa, dapat dihitung pula frekuensi timbulnya azoospermia. Azoospermia adalah suatu keadaan dimana tidak ada spermatozoa dalam cairan semen. Sedangkan oligozoospermia adalah suatu keadaan dimana terdapat sedikit spermatozoa dalam cairan semen (spermatozoa ≤ 20 juta/mL) (WHO, 1999). Penetapan timbulnya azoospermia dilakukan dengan cara membagi banyaknya individu yang mengalami azoospermia (Az) dengan banyaknya individu dalam satu kelompok (n) dikalikan 100% (kusmana, 2001). Persentasi Azoospermia = 3.4.9.3.

x 100%

Pengukuran Diameter Tubulus Seminiferus

Preparat histologi testis tikus diamati dibawah mikroskop dengan pembesaran 100 kali (10x40), kemudian difoto. Pengukuran diameter dilakukan pada 100 tubulus seminiferus yang dipotong bundar dan dipilih secara acak. 3.4.9.4.

Perhitungan perbandingan jumlah spermatosit pakiten Terhadap

jumlah Sel sertoli Pada tubulus seminiferus diukur diameter tubulus seminiferus dan sel germinal dari tahapan I sampai XIV yang dikelompokakn pada tahapan (stage) I- VI, VII-VIII, IX-XI dan XII-XIV dari epitel seminiferus.Pengamatan dilakukan di bawah mikrosop optik. Tahapan IVI dilihat dari membrane menuju lumen terdapat spermatogonium, fase transisi, pakiten dan spermatid fase golgi (1,3) dan cap (4-7) serta spermatid fase maturasi (15 dan 19). Tahapan VII-VIII terdapat spermatogonium, pakiten dan spermatid (round spermatid, cap 2/3 dari inti sel) dan spermatozoa dilepaskan ke lumen dengan ekor mengara ke lumen. Tahapan IX-XI terdapat spermatogonium, pakiten dan spermatid fase 9, 10, 11 dengan head cap dan nucleus mulai memanjang. Tahapan XII-XIV terdapat spermatogonium, pakiten dan diakinesis, spermatid fase akrosom (12-14) terlihat nukleus memanjang dan akrosom 2/3 dari sitoplasma (Azrifitria, 2012).


28 3.5.

Analisa Data Hasil percobaan yang diperoleh diolah dengan menggunakan program pengegolah

data satatistik SPSS 16 yang meliputi uji normalitas,uji homogenitas, uji parametik secara statistik dengan menggunakan analisis One way ANOVA.


29 BAB 4 HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN 4.1.

HASIL PENELITIAN

4.1.1 EKSTRAK Biji mimba yang digunakan diperoleh dari BALITTRO Bogor. Determinasi tanaman dimaksudkan untuk menetapkan kemurnian sampel yang berkaitan dengan ciri-ciri makroskopis dengan mencocokkan ciri-ciri tersebut terhadap pustaka. Sehingga telah dilakukan determinasi biji mimba ( Azadirachta indica L) dilaboratorium Herbarium LIPI Bogor , Jawa Barat. Dari hasil determinasi dapat dipastikan bahwa tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah biji mimba( Azdirachta indica L). Sebanyak 600 gram serbuk biji mimba (Azadirachta Indica) dimaserasi dengan pelarut etanol 70% sebanyak 5600 mL sampai larutan mendekati tidak berwarna. Filtrat yang diperoleh sebanyak 4750 mL kemudian dipekatkan dengan vacum rotary evaporator dan didapatkan ekstrak sejumlah 101,59 gram, Namun ekstrak yang dihasilkan belum cukup kental sehingga ekstrak kemudian di freeze dry hingga diperoleh ekstrak kental sebanyak 41,05 gram. Rendemen yang didapatkan ialah 6,84%. 4.1.2 Penafisan fitokimia Berdasarkan hasil penapisan fitokimia yang dilakukan terhadap ekstrak terdapat beberapa golongan senyawa. Hasil dapat dilihat pada tabel berikut : Tabel 4.1. Hasil penafisan fitokimia ekstrak etanol 70% biji mimba. Hasil Penafisan Golongan senyawa

Ekstrak etanol 70% biji mimba

Alkaloid

(+) Terbentuknya warna jingga setelah diberikan pereaksi Dragenndroff.

Flavonoid

(+) Terbentuknya warna jingga pada lapisan atas setelah penambahan sebuk Mg dan 1 ml HCL pekat dan 2 ml amil alcohol.

Saponin

(+) terbentuknya busa/buih setelah dikocok kuat-kuat dan busa/buih stabil setelah penambahan HCL encer. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

30 Tannin

(-) tidak terbentuknya warna biru tua, maupun biru kehitaman setelah diberi pereaksi FeCL3

Keterangan : ( + ) memberikan hasil positif, ( - ) memberikan hasil negatif 4.1.3 Parameter Standar Parameter standar yang dilakukan terhadap eksrtak dapat dilihat pada tabel berikut : Tabel 4.2. Hasil Parameter standar ekstrak etanol 70% biji mimba Parameter

Hasil Pada Ekstrak

Identitas ekstrak

Organoleptis

-

Nama latin tumbuhan : Azadirachta Indica.

-

Bagian tumbuhan yang digunakan : Biji

-

Nama Indonesia tumbuhan : Biji Mimba

Bentuk : kental Warna : Coklat tua Bau

Kadar Abu

9,51%

Susut pengeringan

0,80%

Rendemen

6,84%

: Khas

4.1.4 Pengukuran Berat Badan Hasil pengukuran berat badan tikus tidak baik pada kelompok yang tidak mendapatkan perlakuan dan pada kelompok yang mendapatkan perlakuan dapat dilihat pada tabel berikut : Tabel 4.3 Rata-rata Berat Badan Tikus Tiap Kelompok. Rata-rata Berat Badan Tikus Tiap Kelompok (Gram) Tanggal penimbangan

Kontrol

Rendah

Sedang

Tinggi

3 Desember 2013

1.980

1.900

1.850

1.850

10 Desember 2013

2.190

2.210

2.050

2.020

29 Desember 2013

2.240

2.190

2.120

2.060

15 Januari 2014

2.320

2.190

2.060

2.050

27 Januari 2014

2.470

2.060

1.970

1.890


31

4.1.5 Pengukuran Bobot Testis Hasil pengukuran bobot testis tikus baik pada kelompok yang tidak mendapat perlakuan dan pada kelompok yang mendapat perlakuan dapat dilihat pada tabel berikut : Tabel 4.4. Rata-rata bobot testis tikus no

Kelompok

Rata-rata

Bobot

Testis

(Gram)

Tiap

Kelompok ± SD 1

Kontrol

1,8598 ± 0,17

2

Dosis rendah ( 10mg/kgBB )

1,61 ± 0,15*

3

Dosis sedang ( 25 mg/kgBB )

1,63 ± 0,09

4

Dosis tinggi ( 50 mg/kgBB )

1,53 ± 0,07⃰

Keterangan : Angkat yang diikuti tanda ⃰ menunjukan berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol ( p ≤ 0.05) pada taraf kepercayaan 95%.

Gambar 6. Grafik hasil rata-rata bobot testis ( gram ) setelah pemberian ekstrak etanol 70% biji mimba selama 48 hari. Data rata-rata bobot testis diperoleh dengan meninbang sepasang testis dari 20 ekor tikus jantan. Data rata-rata bobot testis tikus yang telah diperoleh selanjutnya dilakukan uji persyaratan. Hasil uji normalitas Kolmogorov-Smirnov menunjukan bahwa data bobot testis terdistribusi normal (p ≥ 0.05 ). Setelah dilakukan uji normalitas, dilanjutkan uji homogenitas UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

32 Levene. Hasil uji homogenitas Levene menunjukan bahwa data bobot testis seluruh kelompok terdistribusi normal ( p ≥ 0,05 ). Data rata-rata bobot testis terdistribusi normal ( p ≥ 0,05 ) dan homogen ( p ≥ 0,05 ). Data rata-rata bobot testis selanjutnya diuji menggunakan ststistika parametric one way ANOVA ( untuk data yang terdistribusi normal (p ≥ 0,05 ) dan homogen (p ≥ 0,05 ). Hasil uji ANOVA yang dilakukan terhadap rata-rata bobot testis menunjukan nilai signifikansi 0,066 ( p ≥ 0,05 ). Kemudian dilanjutkan dengan uji BNT dimana data yang diperoleh menunjukan adanya perbedaan secara bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok yang mendapat perlakuan ( p ≥ 0,05). 4.1.6. Perhitungan Konsentrasi Spermatozoa Hasil perhitungan pengukuran konsentrasi spermatozoa pada tiap kelompok dapat dilihat pada tabel berikut : Tabel 4.5 Rata-rata konsentrasi spermatozoa tikus No

Rata-rata Konsentrasi Spermatozoa Tiap Kelompok

Kelompok ( Juta/mL ) ± SD

1

Kontrol

80,16 ± 20,00

2

Dosis rendah ( 10 mg/kg BB )

56,06 ± 13,25 ⃰

3

Dosis sedang ( 25 mg/kg BB )

53,13 ± 6,89 ⃰

4

Dosis tinggi ( 50 mg/kg BB )

48,28 ± 3,16 ⃰

Keterangan : Angka yang diikuti tanda ⃰ menunjukan berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol ( p ≤ 0,05 pada taraf kepercayaan 95%.


33 Gambar 7.Grafik hasil rata-rata konsentrasi spermatozoa setela pemberian ekstrak etanol 70% biji mimba selama 48 hari. Data yang diperoleh dilakukan uji normalitas dan homogenitas. Hasil uji normalitas Kolmogorov-Smirnov dan homogenitas Levene konsentrasi spermatozoa menunjukan bahwa data konsentrasi spermatozoa terdistribusi normal ( P ≥ 0,05 ) dan homogenitas ( P ≥ 0,05 ). Data konsetrasi spermatozoa selanjutnya di uji menggunaka statistika parametric one way ANOVA ( untuk data yang terdistribusi normal ( P ≥ 0,05 ) dan homogeni ( P ≥ 0,05 ). Hasil uji ANOVA yang dilakukan terhadap rata-rata konsentrasi spermatozoa menunjukan nilai signifikansi 0,026 ( P ≤ 0,05 ). Kemudian dilanjutkan dengan uji BNT dimana data yang diperoleh menunjukan adanya perbedaan secara bermakna antara kelompok kontrol dengan kelompok yang mendapat perlakuan ( P ≥ 0,05 ). 4.1.7. Pengukuran Diameter Tubulus Seminiferus Hasil pengukuran diameter tubulus seminiferus tikus tidak baik pada kelompok yang tidak mendapat perlakuan dan pada kelompok yang mendapat perlakuan dapat dilihat pada tabel berikut : Tabel 4.6. Rata-rata diameter tubulus seminiferus tikus No

Rata-rata diameter Tubulus Seminiferus Tiap Kelompok

1

Kelompok (µm) ± SD pembesaran 100 x

Kontrol 175,9 ± 4,61

2

Dosis rendah ( 10 mg/kg BB ) 155,26 ± 12,68⃰

3

Dosis sedang ( 25 mg/kg BB ) 165,26 ± 6,48

4

Dosis tinggi ( 50 mg/kg BB ) 152,15 ± 10,88⃰

Keterangan : Angka yang diikuti tanda ⃰ menunjukan berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol ( p ≤ 0,05 ) pada taraf kepercayaan 95%.


34

Gambar 8. Grafik hasil rata-rata diameter tubulus seminiferus setelah pemberian ekstrak etanol 70% biji mimba selama 48 hari. Dari hasil uji normalitas Kolmogorov-Smirnov menunjukan bahwa data rata-rata diameter tubulus seminiferus terdistribusi norma ( p ≥ 0,05 ). Setelah dilakukan uji normalitas, dilanjutkan dengan uji homogenitas Levene. Namun,berbeda hal dengan uji normalitas, hasil uji homogenitas menghasilkan data tidak homogen ( p ≤ 0,05 ). Data ratarata diameter tubulus semeniferus kemudian diuji dengan menggunakan statistika non parametrik Kruskal Wallis karena homogenitasnya belum terpenuhi. Hasil uji tersebut menunjukkan nilai signifikansi 0,005 ( p ≤ 0,05 ). Kemudian dilanjutkan dengan uji BNT dimana data yang diperoleh menunjukan bahwa kelompok perlakuan dosis rendah ( 10 mg/kg BB ) dan dosis tinggi ( 50 mg/kg BB ) memiliki perbedaan bermakna terhadap kelompok kontrol ( p ≤ 0,05 ), sedangkan dosis sedang (25 mg/kg BB ) tidak adanya perbedaan bermakna antara dosis tersebut dengan kontrol ( p ≤ 0,05 ).


35

4.2. PEMBAHASAN

Pada penelitian ini, aktivitas antifertilitas dievaluasi berdasarkan pada pengaruh ekstrak terhadap konsentrasi spermatozoa, efek terhadap berat organ dan pemeriksaan histologi. Suatu bahan antifertilitas dapat bersifat sitotoksik atau bersifat hormonal dalam menberikan pengarusnya. Bila bersifat sitotoksik maka pengaruhnya langsung terhadap sel kelamin, dan bila bersifat hormonal maka bekerja pada organ yang responsif terhadap hormon yang berkaitan (Rusmiati, 2007 ). Tanaman mimba merupakan tanaman yang tumbuh di Indonesia dan dikenal sebagai tanaman obat. Bagian tanaman mimba atara lain : buah, biji, daun, akar, dan batang. Olahan dari tanaman mimba seperti daun dan biji dapat digunakan sebagai obat tradisional. Bahan tanaman yang digunakan dalam penelitian ini adalah biji mimba yang diperoleh dari kebun induk Balitro Bogor. Sebelum dilakukan penelitian, tanaman tersebut dideterminasi terlebih dahulu di Herbarium Bogoriense Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi-Lipi Bogor. Untuk memastika kebenaran jenis tanaman bahwa tanaman yang digunakan adalah benar Azadiracha Indika . dari famili meliacea. Ekstrak etanol 70% biji mimba diperoleh dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 70%. Maserasi dipilih karena baik untuk senyawa-senyawa yang tidak tahan terhadap panas dan memiliki beberapa ke untungan seperti : peralatan yang sederhana dan proses pengerjaannya yang mudah. Penggunaan etanol 70% sebagai pelarut didasarkan pada sifatnya yang semi polar sehingga diharapkan dapat menarik kandungan senyawa yang polar dan non polar. Selain itu,pemilihan konsentrasi 70% dikarenakan bahan uji yang digunakan merupakan simplisia kering sehingga ada banyak kandungan air pada etanol 70% mempermudah penarikan senyawan pada proses ekstraksi. Setelah dilakukan maserasi, filtrat yang didapat

diuapkan menggunakan

vacuum rotary evaporator

dengan tujuan

menghilangkan pelarut sehingga didapatkan ekstrak kental. Dari 600 gram serbuk biji mimba diperoleh 41. 05 gram ekstrak kental etanol 70% biji mimba. Rendemen yang diperoleh 6,84%. Pemeriksaa parameter non spesifik lainya seperti susut pengeringan dan kadar abu juga didilakukan. Tujuan pemeriksaan susut pengeringan adalah untuk mengetahui jumlah senyawa yang hilang selama proses pengeringan dan tujuan dari pemeriksaan kadar abu adalah utuk mengatahui kandungan mineral yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya ekstrak ( Depkes RI, 2000 ). Hasil yang diperoleh untuk susut pengeringan dan kadar abu ekstrak etanol 70% biji mimba UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

36 masing-masing adalah 0,80% dan 9,51% . kemudian terhadap ekstrak etanol 70% biji mimba dilakukan penapisan fitokimia. Hasilnya diketahui bahwa ekstrak etanol 70% biji mimba terkandung flavonoid, saponin, dan Alkaloid. Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah 20 ekor tikus jantan galur Sprague Dawley berusia 9 minggu. Tikus yang digunakan merupakan tikus yang sehat dan fertil dengan bobot

tikus yaitu memiliki bobot sekitar 250-300 gram. Pemilihan galur

Sprague Dawley dikarenakan mayoritas penelitian mengenai reproduksi pada tikus menggunakan galur ini. Galur ini juga memiliki tingkat kesuburan yang tinggi ditandai dengan jumlah sperma dalam epididimis lebih banyak dibandingkan galur lain ( Wilkinson et al,.2000). Tikus dibagi menjadi 4 kelompok diantaranya kelompok kontrol dan 3 kelompok perlakuan dengan masing-masing dosis 10 mg/kgBB, 25mg/kgBB, dan 50mg/kgBB. Setiap kelompok tikus jantan ditempatkan pada kandang yang berbeda dengan kepadatan kandang masing-masing 5 ekor. Jumlah tikus yang digunakan pada tiap kelompok penelitian adalah 5 ekor hal ini sesuai dengan Research Guidelines Evaluating The Safety and Efficacy of Herbal Medicines (WHO, 2000) yaitu untuk hewan pengerat masing-masing kelompok perlakuan harus terdiri dari setidaknya lima ekor . hewan uji kemudian diaklimatisasi selama 1 minggu agar dapat menyesuaikan diri dalam kondisi lingkungan yang baru. Selamat aklimatisasi dilakukan pengamatan kondisi umur serta ditimbang berat badanya. Adanya peningkatan berat badan menunjukan bahwa tikus telah mampu menyesuiakan diri dengan kondisi lingkungan. Setelah aklimatisasi, masing-masing tikus diberikan perlakuan dengan ekstrak etanol 70% biji mimba secara oral dengan menggunakan alat penyekok oral ( sonde ). Pemberian ini dilakukan selama 48 hari. Sebelum perlakuan, tikus ditimbang terlebih dahulu untuk menyesuaikan dengan dosis ekstrak etanol 70% biji mimba yang akan diberikan. Sediaan bahan uji dibuat dengan mensuspensikan ektrak dengan Na CMC konsentrasi 1%. Na CMC digunakan sebagai pembawa karena ekstrak etanol 70% biji mimba memiliki kelarutan yang baik dalam Na CMC. Pada hari ke-49, tikus dikorbankan dengan cara dibius dengan eter. Dari hasil penelitian ini diperoleh data dari beberapa parameter, yaitu : berat testis, konsentrasi spermatozoa, diameter tubulus seminiferus serta analisi kuantitatif tubulus seminiferus. Data dari beberapa parameter tersebut yang telah diperoleh selanjutnya dilakukan uji normalitas, uji, homogenitas dan selanjutnya dilakukan uji one way ANOVA atau uji kruskal Wallis dan uji BNT ( LSD). Sebagai data tambahan, data berat badan tikus diambil tanpa dilakukan uji normalitas dan homogenitas maupun uji ANOVA. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

37 Data berat badan menunjukkan perkembangan berat badan kelompok tikus kontrol dan kelompok tikus yang diberi ekstrak etanol 70% biji mimba dimana keduanya mengalami kenaikan berat badan tiap minggunya. Pertumbuhan yang baik merupakan suatu suatu proses pertambahan massa, sehingga hewan mengalami pertambahan bobot badan, pertambahan tinggi, pertambahan panjan atau pertambahan kandungan kimiawi tubuhnya. Kenaikan berat badan pada tikus kontrol maupun tikus perlakuan ektrak etanol biji mimba kemungkinan dikarenakan konsumsi pangan harian yang diberikan memenuhi syarat untuk terjadinya pertumbuhan. Pertumbuhan berjalan normal apabilammakanan yang diberikan mengnadung nutrisi dalam kualitas dan kuantitas yang baik. Apabila seekor hewan kekurangan nutrisi atau mengalami defisiensi suatu zat makanan maka laju pertumbuhan hewan tersebut terhambat ( Muliani, 2011 ). Dengan demikian, pemberian ekstrak etanol biji mimba tidak berpengaruh terhadap penurunan berat badan pada semua kelompok perlakuan. Produksi spermatozoa tidak akan terjadi jika alat kelamin jantan tidak mengalami pertumbuhan dan perkembangan. Pertumbuhan dan perkembangan alat kelamin jantan baik alat kelamin primer yang berupa testis maupun alat kelamin sekunder berupa saluran-saluran reproduksi ( Partodihardjo, 1980). Testis berukuran normal memiliki hubungan positif dengan potensi substansi fungsional (tubulus seminiferus ) yang terkandung didalam testis. Fungsi reproduksi testis adalah berupa produksi spermatozoa yang dihasilkan oleh bagian tubulus seminiferus dari testis. Berat dan ukuran testis dapat digunakan sebagai indikator kuantitatif produksi spermatozoa. Pembirian ekstak etanol 70% biji mimba dengan dosis 10mg/kgBB,25mg/kgBB, dan 50mg/kgBB selama 48 hari menyebabkan terjadinya penurunan berat testis. Penurunan berat testis mengidentifikasi konsentrasi seprmatozoa dalam testis berkurang. Pernyataan tersebut diperjelas dari data konsentrasi sperma yang menunjukan bahwa terjadinya penurunan konsentrasi sperma sejalan dengan meningkatnya dosis. Penurunan rata-rata berat testis tikus kelompok perlakuan dibandingkan dengan kelompok kontrol kemungkinan terjadi karena adanya senyawa saponin. Penelitian yang dilakukan oleh Gupta dkk (2005) menyatakan bahwa pemberian saponin yang diisolasi dari Albizia lebbeck pada tikus jantan memberikan penurunan bobot testis yang bermakna. Menurut Bernhoft (2010), saponin menunjukan efek antineoplastik. Aktifitas sebagai antikanker terjadi karena adanya hambatan dalam proliferasi sel (perkembangan sel) serta mekanisme opoptosis (kematian sel yang terprogram) (Su X et al., 2011). Spermatogenesis merupakan proses diferensiasi sel germinal yang dapat dibagi


38 menjadi tiga fase utama : proliferasi,spermatogenium, meiosis dan spermiogenesis (Wu J et al ,. 2011). Dengan demikian, senyawa-senyawa yang terkandung dalam biji mimba yang bersifat antiproliferatif tersebut diduga dapat menyebabkan penghambatan spermatogenesis dan juga menyebabkan kematian sel spermatogenik sehingga terjadi penurunan jumlah sel-sel spermatogenik. Terganggunya spermatogenesis juga dapat menyebabkan atrofi testis. Jadi, jika testis mengalami penurunan berat maka dapat diperkirakan menurunnya berat testis merupakan indikator awal terjadinya gangguan pada testis serta kapasitas produksi spermatozoa hewan jantan pun berkurang. Selain berat testis, konsentrasi sperma dihitung untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol 70% biji mimba terhadap konsentrasi sperma tikus. Jumlah sperma adalah salah satu pengujian yang paling sensitif untuk spermatogenesis dan sangat terkait dengan fertilitas ( EL-Kash0ury, 2009). Spermatozoa yang diamati dalam penelitian ini adalah :spermatozoa yang berasal dari kauda epididimis. Epididimis merupakan saluran panjang yang menempel pada testis dari atas sampai bawah yang berada pada bagian belakang testis. Epididimis terdiri dari tiga bagian : kapus epididimis yang membesar di ujung proksimal pada testis; korput epididimis dan berkembang secara distal kedalam duktus deferens. Alasan pemilihan yang bagian kauda epididimis adalah karena tempat pematangan spermatozoa sebelum siap diejakulasikan keluar tubuh adalah kauda epididimis (Suckow, 2006 ). Sehingga diprediksikan bahwa spermatozoayang telah matang terkonsentrasi paling banyak terdapat dikauda epididimis. Dari data yang diperoleh menunjukan bahwa pemberian ketiga ekstrak etanol 70% biji mimba secara oral selama 48 hari menunjukan penurunan yang bermakna terhadap konsentrasi spermatozoa yang dihasilkan. Semakin besar dosis ekstrak biji mimba yang diberikan, maka semakin besar pula pengaruhnya terhadap penurunan konsentrasi. LH dan FSH dari hipofisa anterior memegang peran peting dalam mengatur proses biologi reproduksi pada hewan. FSH merangsang proses spermatogenis dan LH yang disebut dengan ICSH ( Interstitial Cell Stimulating Hormane), merangsang pertumbuhan dan metabolisme sel-sel leyding, untuk memproduksi hormon testosteron. Jumlah sperma dan kadar testosteron dipertahankan konstan oleh mekanisme umpan balik. Jika mekanismen unpan balik negatif terjadi maka kadar FSH dan LH dalam peredaran darah menurun dan akibat selanjutnya adalah proses spermatogenesis terhenti dan jumlah jumlah spermatozoa yang dihasilkan akan menurun ( Partodihardjo, 1980). Terjadinya penghambatan LH menyebabkan sekresi testosteron oleh sel Leydig ikut terhambat. Penurunan produksi androgen oleh sel Leydig merupakan pemicu opoptosis sel geminal. Terhambatnya FSH UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

39 berpengaruh langsung terhadap sel Sertoli dalam tubulus seminiferus karena hormon ini berperan dalam meningkatnya laju proliferasi sel Sertoli, mengakibatkan terpacunya adenly cyclase didalam sel Sertoli yang berperan dalam meningkatkan produksi cyclic AMP, serta memicu paroduksi androgen binding protein (APB) didalam tubulus seminiferus. Spermatosit sangat sensitif terhadap pengaruh luar dan cendrung mengalami kerusakan setelah profase meiosis pertama khususnya pada tahap pakiten, yaitu pada saat terjadinya pindah silang antara kromosom yang homolog. Pada tahap ini, inti serta sitoplasma tembuh menjadi sel terbesar diantara lapisan sel spermatogenik. Penurunan jumalah spermatosit

menyebabkan jumlah spermatid juga menurun karena spermatosit yang

mengalami mieosis kedua menjadi spermatid menurun. Telah diketahui bahwa spermatid merupakan cikal bakal spermatozoa. Pengurangan spermatid akan berefek langsumg pada spermatozoa yang dihasilkan. Pada spermatogenesis hewan mamalia, rasio sel germinal terhadap sel Sertoli relatif konstan dan pengamatan dalam rasio ini merupakan syarat yang penting (Boekelheide et al.,2000). Pengukuran diameter tubulus seminiferus merupakan penentuan utama dari berat testis ( Munson et al., 1982 ) dan juga dapat digunakan untuk memprediksi produksi sperma ( Krishnalingam et al., 1982 ). Pada penelitian ini, pengamatan histopatologi testis menunjukan bahwa nilai rata-rata diameter tubulus seminiferus pada kelompok perlakuan lebih kecil dibandingkan dengan kelompok kontrol. Hal ini menunjukan bahwa adanya pengaruh yang bermakna dari pemberian ketiga dosis ekstrak etanol 70% biji mimba yang dapat menghambat pertumbuhan epitel seminiferus dan akibatnya terjadi penurunan diameter tubulus. Selain dapat menurunkan konsentrasi spermatozoa, berat testis, dan diameter tubulus seminiferus, pemberian ekstrak etanol 70% biji mimba juga dapat menghambat spermatogenesis. Hambatan tersebut dapat dilihat dari struktur histologi tubulus seminiferus pada kelompok perlakuan dimana menunjukan lapisan sel spermatogenik tidak teratur dan sel-sel tersusun lebih jarang. Struktur tubulus seminiferus tikus pada kelompok perlakuan dosis 25mg/kgBB dan 50mg/kgBB menunjukan terjadinya kerusakan. Hal ini terlihat beberapa tubulus yang mengalami nekrosis tubular, lumen tanpak kosong karena tidak mengandung populasi semua sel germinal maupun Sel Sertoli. Tingkatan dosis ektrak etanol biji mimba ini ternyata mempengaruhi tingkat kerusakan dari tubulus seminiferus tersebut. Parameter jumlah sperma yang dihasilkan testis tidak cukup untuk mendiaknosa fertil atau infertil. Oleh karena itu, pengembangan kontrasepsi s sebaiknya ditekankan pada morfologi dan motilitas sperma. Meskipun jumlah spermatozoa banyak sekali tetapi jika UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

40 sperma tersebut tidak motil maka pembuahan tidak akan pernah terjadi. Sebaiknya dengan jumlah spermatozoa yang sedikit tetapi memiliki morfologi dan kecepatan yang normal maka masih bisa fertil.


41 BAB 5 KESIMPILAN DAN SARAN 5.1.

Kesimpulan Berdasarkan hasil dari penelitian yang telah dilakukan, dapat diambil beberapa

kesimpulan sebagai berikut : 1.

Pemberian ekstrak etanol 70% biji mimba (Azadiracha indica L) selama 48 hari pada tikus jantan dapat menurunkan bobot testis tikus dan diameter tubule seminiferus. Hal ini menunjukkan adanya perbedaan bermakna pada dosis rendah (10mg/kgBB) dan dosis tinggi (50mg/kgBB) dibandingkan dengan kelompok kontrol. Sedangkan pada dosis sedang (25kg/mgBB) tidak mengalami perbedaan bermakna.

2.

Pemberian ekstrak etanol 70% biji mimba (Azadirachta indica L) dapat menurunkan konsentrasi spermatozoa tikus jantan secara in vivo. Hal ini menunjukkan adanya perbedaan bermakna pada dosis rendah 10 mg/kgBB, dosis sadang 25 mg/kgBB dan dosis tinggi 50 mg/kgBB dibandingkan dengan kelompok kontrol.

3.

Dari beberapa hasil pengamatan di atas, dapat disimpulkan bahwa biji mimba dapat menyebabkan infertilitas sehingga dapat dikembangkan sebagai bahan dasar obat kontrosepsi tradisional pria.

5.2.

Saran Adapun saran untuk penelitian lebih lanjut adalah :

1.

Perlu dilakukan penelitian tentang pengaruh pemberian ekstrak etanol 70% biji mimba terhadap morfologi spermatozoa yang dikaitkan dengan motilitas spermatozoa.

2.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan dosis yang sama untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol 70% biji mimba terhadap kadar hormon ( FSH, LH, dan testosteron dalam serum darah ).

3.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai isolasi senyawa untuk mengetahui struktur senyawa yang bertanggung jawab terhadap aktifitas antifertilitas.


42 DAFTAR PUSTAKA Andria, Y. 2012. Pengaruh Pgemberian Ekstrak Daun pegagan (Centella asiatica

(L)

urban) terhadap Kadar Hormon Esktradiol dan Kadar hormon Progesteron Tikus Putih ( Rattus norvegicus) Betina. Testis. Program Studi Ilmu Biomedik. A. Mishra, A.O. Prakash, 1898. Effect of extract of Azadirachta indica A. juss (seeds) on the vital and reproductive organs to cyclic rats, Intern. Conf. Recent Advances in Medicinal, Aromatic and Spice Crops, New Delhi, India. Agrawal, D.P. 2005. Medicinal Properties of Neem: New Findings. www.neemuses.com. Diakses tanggal 29-04-2005. Azrifitria, 2012.Formulasi mikroemulsi Kombinasi Testsoteron Undekanoat dan Medroksi Progesteron Asetat Untuk Kontrasepsi Pria Serta Profil farmakokinetikdan farmakodinamik Pada Tikus Jantan Strain Sprague Dalway. Disertasi.Program Pasca Sarjana.FKUI BKKBN.2006. Perkembangan Teknologi Kontasepsi Pria Terkini. Available at: http:// gemapria.bkkbn.go.id/article-detail.php?artid=96 Diakses pada tanggal : 5 April 2012. BKKBN.

2008.

KB

sebagai

suatu

kebutuhan.

Available

at

:

http://

gemapria.bkkbn.go.id/article-detail.php?artid=96 Diakses pada tanggal : 5 April 2012. BKKBN. 2012. Kepala BKKBN Berharap, Melalui Konsolidasi Bidang 2012, Temukan Ide Tuntaskan Masalah Kependudukan dan KB. Avbilable at: http:// www.bkkbn .go.id./berita/Pages/Kepala-BKKBN-Berharap

Melalui-konsolidasi-Bidang-2012,-

Temukan-Ide-Tuntaskan- Masalah – Kependudukan-dan- KB-.aspx Diakses pada tanggal : 5 April 2012. Bukar, A. et al. 2004. “Traditional Oral Health Practices among Kanuri Women of Borno State,Nigeria.” Odontostomatol. Trop., 27 (107): 25-31. Chuthbert AW, Wong PYD. 1986. Elektrogenc anion secretion in cultured rat epididymal epithelium.Physio. 78:335-345. Depkes RI.2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan.Jakarta.hal: 3-5,10-12. Fawcett,D.W. 2002. Buku Ajar Histologi Bloom & Fawcetr. 12th ed Trans Tambayong J. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran . Hal : 687. Fransworth, N.R. 1996. Biological and Phytochemical Screening of plants. Jaurnal of Pharmaceutical Science, 55 (3) :255-276. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

43 Gupta, R.S., Caudhary, R.,Yadav, R.K., Verma S.K, Dobhal, M.P. 2005. Effect of saponins of Albizia lebbeck (L.) Benth bark on the reproductive system of male albino rats. J Ethanophrmacol ; 96 (1-2) : 31-6. Hutapea,

1993.

Mimba.

http://meemhy.wordpress.com/2009/03/02/mimba-azadiractha-

indica/. Diakses tanggal 15 Oktober 2011 Hartono. 1988. Histologi Veteriner Jilid II, Organologi. Laboratorium Histologi, Bagian Anatomi, Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor. Bogor. Heyne,1987.Mimba(Azadirachtaindica).http://www.google.co.id/imgres?imgurl=http://ccrcfa rmasiugm.files.wordpress.com/2008/07/daunmimba.jpg&imgrefurl=http://ccrcfarma siugm.wordpress.com/ensiklopedia/ensiklopedia-tanama antikanker/ensiklopedia42/daunmimba diakses tanggal 15 Oktober 2011. Heyne, K. 1987. Tumbuhan Berguna Indonesia III. Badan Penelitian dan Pengembangan Kehutanan Jakarta. Hartini. 2011. Pengaruh Dekok Daun Jambu Biji Merah (Psidium guajasva.L) Terhadap Jumlah Kecepatan dan Morfologi Spermatozoa Tikus Putih Jantan (Rattus norviegicus).Testis. Program studi Ilmu Biomedik. Heffner ,L.J.,Schust, D.J.2005. At a Glance Sistem Reproduksi Edisi 2. Jakarta: Erlangga. Hal : 26-27. Ilyas, S.2007. Azoospermia dan Pemulihan Melalui Regulasi Apoptosis Sel Spermatogenik Tikus ( Rattus sp ) Pada Penyuntikan Kombinasi TU & MPA. Disertasi. Program doktor Ilmu Biomedik FKUI Jawetz, 1992. Neem (Azadirachta indica A. Juss), a Tree of the 21st Century. eprints.undip.ac.id/8088/1/Ashry_Sikka.pdf+daun+mimba&hl. diakses tanggal 15 Oktober 2011 J. K . Roop, P . K. Dhaliwal and S.S guraya. Extracts of Azadirachta indica and Melia azedarach seeds inhibit folliculogenesis in albino rats Krinke, G. J. 2000. The Laboratory Rat. San Diego, CA: Academic Press. Hal: 150 – 152. Kardinan dan Ruhnayat, 2003. Mimba (Azadirachta indica A.Juss) Tanaman Multi Manfaat. Perkembangan

Teknologi

TRO

Vol.

XV,

No.

1.

eprints.undip.ac.id/8088/1/Ashry_Sikka.pdf+daun+mimba&hl. diakses tanggal 15 Oktober 2011


44 Khanna, N. et al. 1995. “Antinociceptive Action of Azadirachta indica (Neem) in Mice: PossibleMechanisms Involved.” Indian J. Exp. Biol., 33 (11): 848-850. Mukherjee, S., Garg, S. and Talwar, G.P. 1999. Early post implantation contraceptive effects of a purified fraction of Neem (Azadirachta indica) seed, given orally in rats: possible mechanisms involved. J. Ethnopharmacol. 67: 287-296. Reshu Mandal, & Patwant Kaur Dhaliwal. 2007. Antifertilitiy effect of melia azedaract linn. dharek seed extract in famela albino rats. Rukmana, 2002. Mimba Tanaman Penghasil Pestisida Alami. Kanisius. Jakarta. eprints.undip.ac.id/8088/1/Ashry_Sikka.pdf+daun+mimba&hl. diakses tanggal 15 Oktober 2011. Schmutterer, H. 1988. “Potential of azadirachtin-containing pesticides for integrated pest control in developing and industrialized countries." J. Insect Physiol., 34: 713-719. Sukarsono.

2003.

18.

Mimba

Tanaman

Obat

Multifungsi.

AgroMedia.

Jakarta.

eprints.undip.ac.id/8088/1/Ashry_Sikka.pdf+daun+mimba&hl. diakses tanggal 15 Oktober 2011 Sukrasno dan Tim Lentera. 2003. Mengenal Lebih Dekat Mimba Tanaman Obat Multifungsi. Jakarta : Agromedia Pustaka. Saptogini, R.A. 2010.Pengaruh Lama Pemberian Momordica charantia L.Terhadap Jumlah Spermatozoa Pada Tikus BALB/C Dewasa Jantan. Program Pendidikan Sarjana Kedokteran. Fakultas Kedokteran. Universitas Diponegoro. Semarang. Smith, Mangkoewijoyo,S. 1998. Pemeliharaan,Pembiakan dan Penggunaan Hewan Percobaaan di Daerah Tropis.Edisi 1. : jakarta: Ui Press.Hal 37-39 Sinha K.C. Riar S.S, Bardhanj, Thomas P, Kain A K dan Jain R K, 1989 neem oil as a vagina contraceptive, India J. Med, Kes. Toelihere, M.R. 1985. Fisiologi Reproduksi pada Ternak. Penerbit Angkasa. Bandung. Tjitrosoepomo, G. 2005. Morfologi Tumbuhan. Gajah Mada University Press. Yogyakarta.

Ulimaz,A. 2010. Uji Antifertilitas Ekstrak Etanol Batang Manggarsih (Parameria leavigata) Pada

Struktur

Mikroanatomi

Tubulus

Seminiferus

Testis

Mencit

(Mus


45 musculus)Galur Swiss. Skipsi Program Studi S-1 Biologi. Fakultas Biologi dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Lambung Mangkurat. Partodihardjo,S. 1980.Ilmu Reproduksi Hewan.jakarta : Mutiara.Hal: 114. William, O.R.2005. Functitonal Anatomy and Domestic Animals Third Edition. USA : Baltimore, Maryland. Male Reproduction chapter 13 hal 379-399. World Health Organization. 2009. General Guidelines for Methodologies on Research and Evaluation of Traditional Medicine. Geneva : World Health Organization. Yurnadi, Sari, P., Pujianto, D.A., Soeradi,O. 2002. Pengaruh Pentuntikan Ekstrak Biji Pepaya (Carica papaya L.) Terhadap Konsentrasi Spermatozoa dan Keadaan Sel Spermatogenik Tikus Jantan (Rattus norvegicus L.). Artikel Ilmiah. Lembaga Penelitian Universitas Indonesia.


46 Lampiran 1. Hasil Determinasi Tanaman


47 Lampiran 2. Hasil Penapisan Fitokimia Ekstrak Etanol 70 % biji jarak Penapisan Ekstrak Alkaloid

Hasil Uji Penapsan

(a)

Keterangan Gambar (a) Sebelum diberi pereaksi. (b) (+) Alkaloid : memberikan warna kuning jingga setelah diberikan pereaksi Dragenndroff.

(b) (a) Sebelum diberi pereaksi. (b) (+) Flavonoid: terbentuknya warna (merah atau jingga) pada lapisan atas.

Flavonoid

(a)

(b)

Saponin

(a) Sebelum diberi pereaksi. (b) (+) Saponin: menghasilkan busa/buih yang stabil setelah dikocok kuat kuat.

(a)

(b)

Tanin

(a) Sebelum diberi pereaksi. (b) (-) Tanin: tidak memberikan warna biru tua, biru kehitaman maupun biru kehijauan setelah diberikan pereaksi FeCL3.

(a)

(b)


48

Lampiran 3. Gambar Bahan dan Alat Penelitian

Gambar Biji Mimba

Gambar Serbuk Biji Mimba

Gambar Tikus Putih jantan galur

Gambar Proses maserasi ekstrak etanol

sprague dawley

70% biji mimba

Gambar vacuum rotary Gambar Hasil maserasi

evaporator(Eyela)


49

Gambar Timbangan Analitik

Gambar Ayakan mess 40

AND (6H-202)

Gambar Mikropipet ukuran 10-20 Gambar Hoemositometer Inproved µl

Neubeur


50 Lampiran 4. Kegiantan Penelitian Uji Aktifertilitas Ekstrak Etanol 70% Biji Mimba

Gambar Pemekatan maserat

Gambar penyaringan maserat

Gambar Ekstrak untuk bahan uji Gambar Pembiusan hewan uji


51

Gambar Penimbangan hewan uji

Gambar Epididimis

Gambar pengeluaran cairan sperma dari cauda epididymis dengan bantuan cairan

Gambar pengamatan dibawah mikroskop dengan pembesaran 400X

NaCL


52 Lampiran 5. Pemeriksaan Parameter Ekstrak 1.

Perhitungan Rendemen Berat Serbuk Simplisia yang diekstraksi = 600 gram Berat Ekstrak kental yang didapat = 41,0535 gram % Rendemen = = = 6,84%

2.

Susut Pengeringan Berat Botol Kosong = 15,1400 Berat Ekstrak = 1,0975 Berat botot kosong + Ekstrak sebelum dikeringkan (Wo ) = 16,2375 Berat botol kosong + Ekstrak setelah dikeringkan (W1 ) = 16, 1075 % Susut Pengeringan = = = 0,80%

3.

Penetapan Kadar Abu Bobot cawan = 25,2050 Bobot sampel = 2,0540 Bobot akhir = 25,4005 % Kadar Abu = = = 9,51%


53 Lampiran 6. Skema Kerja Pembuatan Ekstrak Etanol 70 % biji mimba

Determinasi Biji Mimba di Herbarium Bogoriense

Penyiapan simplisia Dihaluskan dengan blender Serbuk simplisia 600gram Sebanyak 600gram serbuk simplisia diekstraksi dengan metode maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 70% Disaring

Ampas

Filtrat

Filtrat sebanyak 4750 ml dipekatkan dengan Rotary Evaporator pada suhu 400C

Ekstrak kental 41,05 gram Uji penafisan fitokimia Uji efek antifertilitas


54 Lampiran 7. Skema Kerja Pemberian Ekstrak Etanol 70% Biji Mimba pada tikus

Aklimasi Tikus untuk di uji

Sebanyak 20 tikus putih jantan ditimbang dan dibagi menjad empat bagaian

5 ekor tikus jantan putih Kontrol

5 ekor tikus putih dosis rendah 10mg/kgBB

5 ekor tikus putih dosis sedang 25mg/kgBB

Pemberian suspensis ektrak etanol 70% biji mimba dosis 10mg/kgBB

Pemberian pembawa NaCMC 1%


5 ekor tikus putih dosis tinggi 50mg/kgBB


Pada hari ke 49 tikus dikorbankan dan diambil organ reproduksinya

Cauda efididimis

Pengukuran konsentrasi spermatozoa

Testis

Dibuat preparat histologi

Dihitung bobot testis

Pengamatan terhadap spermatogenesis

Pengukuran diameter tubulus seminiferus


55 Lampiran 8. Perhitungan Dosis Uji Ekstrak Biji Mimba

Untuk perhitungan dosis uji ekstrak biji mimba digunakan rumus sebagai berikut

VAO =

I.

Dosis rendah (10 mg/kg ) VAO =

1ml = Konsentrasin

= 2,5 mg/ml

Di buat 5 ml

= 5 ml x 2,5 mg = 12,5mg/5ml

II.

Dosis sedang (25 mg/kg) VAO =

1 ml = Konsentrasin

= 6,875 mg/ml

Di buat 5 ml

= 5 ml x 6,875 mg = 34,375 mg/5ml

III.

Dosis tinggi (50 mg/kg) VAO = 1 ml =

Konsentrasin

= 15 mg/ml

Di buat 5 ml

= 5 ml x 15 mg = 752 mg/5ml


56 Lampiran 9. Berat Badan Tikus Jantan No

Tanggal

Hewan Uji

Berat Badan Tikus Per Kelompok (Gram)

Kontrol

1

2

3

4

5

3 Desember 2013

10 Desember 2013

29 Desember 2013

15 Januari 2014

27 Januari 2014

Dosis Rendah

Dosis Sedang

Dosis Tinggi

Tikus 1

1.881

1.929

1.722

2.022

Tikus 2

1.763

1.683

1.730

1.830

Tikus 3

2.205

2.086

2.015

1.820

Tikus 4

2.100

1.911

1.940

1.722

Tikus 1

2.130

2.330

2.025

2.130

Tikus 2

1.945

1.930

1.780

2.030

Tikus 3

2.075

2.170

2.354

2.085

Tikus 4

2.335

2.165

2.615

1.825

Tikus 1

2.020

2.420

2.080

2.130

Tikus 2

2.110

1.820

1.850

2.030

Tikus 3

2.095

2.190

2.395

2.095

Tikus 4

2.350

2.030

2650

1.095

Tikus 1

2.105

2.630

2.095

2.050

Tikus 2

2.220

1.800

1.950

2.170

Tikus 3

2.115

2.220

2.48

2.150

Tikus 4

2.370

2.110

2.710

1.960

Tikus 1

2.300

2.910

2.100

2.005

Tikus 2

1.820

1.840

2.200

2.300

Tikus 3

2.410

2.440

2.610

2.330

Tikus 4

2.400

1830

2.407

2.105


57 Lampiran 10. Hasil Pengukuran Bobot Testis No

Kelompok

Hewan Uji

Bobot Testis

Kanan

1

2

3

4

Kontrol

Dosis Rendah (10mg/kgBB)

Dosis Sedang (25mg/kgBB)

Dosis Tinggi (50mg/kgBB)

Rata-rata Bobot Testis Tiap Tikus

Rata-rata Bobot Testis Tiap Kelompok ± SD

Kiri

Tikus 1

1.6909

1.6909

1,6286

Tikus 2

2.0537

2.0154

2,0355

Tikus 3

1.7334

1.7883

1,7608

Tikus 4

1.8580

1.9027

1,8803

Tikus 1

1.5025

1.7758

1,7891

Tikus 2

1.6463

1.6950

1,6505

Tikus 3

1.5716

1.5709

1,5712

Tikus 4

1.4482

1.4201

1,4341

Tikus 1

1.5223

1.5321

1,5272

Tikus 2

1.6081

1.6142

1,1611

Tikus 3

1.6715

1.6340

1,6712

Tikus 4

1.7413

1.7362

1,7387

Tikus 1

1.3925

1.4212

1,6512

Tikus 2

1.60142

1.6891

1,6172

Tikus 3

1.6340

1.5864

1,5347

Tikus 4

1.5263

1.5432

1,4938

1,826 ± 0,1733

1,611 ± 0,1485

1,632 ± 0,0880⃰

1,574 ± 0.0726⃰


58 Lampiran 11. Hasil perhitungan Konsentrasi Spermatozoa N o

1

2

3

4

Kelompok

Hewan Uji

Jumlah Spermatozoa dalam 10 kotak (ekor)

Konsentrasi Spermatozoa (Juta/mL)

Rata-rata Konsentrasi Tiap Tikus (Juta/mL)

Kanan

Kiri Kanan

Kiri

Tikus 1 Tikus 2 Tikus 3 Tikus 4 Dosis Rendah Tikus 1 (10mg/kg BB) Tikus 2

47 55 63 67 15 40

80 75 70 60 48 41

58.75 63.75 78.75 83.75 18,75 50,00

100 93,75 87,50 75,00 60,00 51,52

79,375 78,75 83,125 79,375 39,375 50,625

Tikus 3

42

40

52,25

50,00

51,25

Tikus 4

56

58

70,00

72,50

71,25

Dosis Sedang Tikus 1 (25mg/kg BB) Tikus 2

36

54

45,00

67,50

56,125

29

47

36,25

58,75

47,50

Tikus 3

50

40

62,50

50,00

56,25

Tikus 4

47

56

58,75

70,00

64,375

Dosis Tinggi Tikus 1 (50mg/kg BB) Tikus 2

37

46

46,25

57,50

51,875

38

40

47,50

50,00

48,75

Tikus 3

34

41

42,50

51,25

46,876

Tikus 4

39

34

48,75

42,50

45,625

Kontrol

Rata-rata Konsentrasi Tiap Kelompok (Juta/mL) ±SD

80,156±20,00

56,062±13,25⃰

53,125 ±6,89⃰

48,281 ±3,16⃰


59 Lampiran 12. Hasil Pengukuran Diameter Tubulus Seminiferus No

Kelompok

Hewan Uji

Rata-rata Diameter Tubulus Seminiferus Tiap Tikus (µm) Pembesaran 100 X

1

Kontrol

Tikus 1

177,3

Tikus 2

169,1

Tikus 3

178,5

Tikus 4

178,9

2

3

4

175,9 ± 4,617

Dosis rendah Tikus 1 (10mg/kgBB) Tikus 2

155,95

Tikus 3

154,25

Tikus 4

154

Dosis sedang Tikus 1 (25mg/kgBB) Tikus 2

Rata-rata Diameter Tubulus Seminiferus Tiap Kelompok Tikus (µm) ± SD Pembesaran 100 X

156,85

155,26 ± 12,68⃰

168,9 165,25 ± 6,88

163,8

Tikus 3

163,55

Tikus 4

164,75

Dosis tinggi Tikus 1 (50mg/kgBB) Tikus 2

146,55 152,15 ± 10,88⃰

157,3

Tikus 3

156,6

Tikus 4

148,15


60 Lampiran 13 Analisis Data Bobot Testis 1. Uji Normalitas dan Homogenitas Terhadap Bobot Testis a. Uji Normalitas Kalmogorov-Smirnov Tujuan : Untuk melihat distribusi data bobot testis tikus. Hipotesis : Ho: Data bobot testis terdistribusi normal. Ha: Data bobot testis tidak terdistribusi normal. Pengambilan Keputusan :  Jika nilai signifikansi > 0,05 maka Ho diterima.  Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ho ditoloak. One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Bobot testis N

16

Normal Parametersa

Most Extreme Differences

Mean

1.6608

Std. Deviation

.15255

Absolute

.209

Positive

.209

Negative

-.074

Kolmogorov-Smirnov Z

.834

Asymp. Sig. (2-tailed)

.489

a. Test distribution is Normal. Keputusan:Uji normalitas bobot testis seluruh kelompok terdistribusi normal (p ≥ 0,05). b. Uji homogenitas Levene Tujuan : Untuk melihat data bobot testis tikus homogen atau tidak. Hipotesis :Ho: Data bobot testis homogen. Ha : Data bobot testis tidak homogen. Pengambilan Keputusan :  

Jika nilai signifikansi > 0,05 maka Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak.


61 Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic

df1

df2

Sig.

1.189 3 12 .355 Keputusan : Uji homogenitas bobot testis seluruh kelompok homogen (p > 0,05) sehingga bisa dilanjutkan dengan uji ANOVA. 2. Uji Analis Varians (ANOVA) satu arah terhadap bobot testis kelompok hewan uji. Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data bobot testis. Hipotesis : Ho : Data bobot testis tidak berbeda sacara bermakan. Ha: Data bobot testis berbeda secara bermaksa. Pengambilan Keputusan :  

Jika nilai signifikansi > 0,05 Ho diterima. Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak. ANOVA Sum of Squares

Df

Mean Square

Between Groups

.153

3

.051

Within Groups

.196

12

.016

Total

.349

15

F

Sig.

3.116

.066

Keputusan : Bobot testis berbeda secara bermakna,sehingga pengujian dapat dilanjutkan dengan Uji BNT/LSD. 3. Uji Beda Nyata Terkecil (BNT) terhadap bobot testis kelompok hewan uji. Tujuan : Untuk menentukan data bobot testis kelompok mana yang memberikan nilai yang berbeda secara bermakna dengan data bobot testis kelompok lainnya. Hipotesis : Ho: Data bobot testis tidak berbeda secara bermakna. Ha : Data bobot testi berbeda secara bermakna. Pengambilan Keputusan : 

Jika nilai signifikansi > 0,05 maka Ho diterima.



Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak.


62

Multiple Comparisons LSD (I) (J) Mean kontrol kontrol Difference (I-J) Std. Error

95% Confidence Interval Sig.

Lower Bound

Upper Bound

Kontrol Dosis rendah

.21508*

.09042

.035

.0181

.4121

Dosis sedang

.19500

.09042

.052

-.0020

.3920

Dosis tinggi

.25208*

.09042

.016

.0551

.4491

-.21508*

.09042

.035

-.4121

-.0181

-.02008

.09042

.828

-.2171

.1769

.03700

.09042

.690

-.1600

.2340

-.19500

.09042

.052

-.3920

.0020

.02008

.09042

.828

-.1769

.2171

.05707

.09042

.540

-.1399

.2541

Kontrol

-.25208*

.09042

.016

-.4491

-.0551

Dosis rendah

-.03700

.09042

.690

-.2340

.1600

Dosis sedang

-.05707

.09042

.540

-.2541

.1399

Dosis Kontrol rendah Dosis sedang Dosis tinggi Dosis Kontrol sedang Dosis rendah Dosis tinggi Dosis tinggi

*. The mean difference is significant at the 0.05 level. Keputusan : Bobot testis pada kelompok dosis rendah dan dosis tinggi berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol ( p ≥ 0,05), sedangkan dosis sedang tidak adanya perbedaan bermakna antara dosis tersebut dengan kontrol (p ≤ 0,05).


63

Lampiran 14. Analisis Data Konsentrasi Spermatozoa 1. Uji Normalitas dan Homogenitas Terhadap Konsentrasi Spermatozoa a. Uji Normalitas Kolmogorov-Smirnov Tujuan : Untuk melihat distribusi data konsentrasi spermatozoa tikus. Hipotesis : Ho: Data konsetrasi spermatozoa terdistribusi normal. Ha: Data konsentrasi spermatozoa tidak terdistribusi secara normal. Pengambilan Keputusan : 

Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima.




One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test Konsentrasi spermatozoa N

16

Normal Parametersa

Mean

56.6719

Std. Deviation

11.06527

Most Extreme Differences

Absolute

.168

Positive

.168

Negative

-.097

Kolmogorov-Smirnov Z

.671

Asymp. Sig. (2-tailed)

.759

a. Test distribution is Normal. Keputusan : Uji normalitas konsetrasi spermatozoa seluruh kelompok terdistribusi normal ( p ≥ 0,05). b. Uji Homogenitas levene Tujuan : Untuk melihat data konsentrasi spermatozoa homogen atau tidak. Hipotesis : Ho: Data konsentrasi spermatozoa homogen. Ha: Data konsentrasi spermatozoa tidak homogen. Pengambilan Keputusan :  Jika nilai signifakansi ≥ 0,05 maka Ho diterima.  Jika nilai signifakansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak.


64 Test of Homogeneity of Variances Levene Statistic

df1

df2

Sig.

1.614

3

12

.238

Keputusan : Uji homogenitas konsetrasi spermatozoa seluruh kelompok homogen ( p ≥ 0,05) sehingga bisa dilanjutkan dengan uji ANOVA. 2. Uji Analis Varians (ANOVA) satu arah terhadap konsentrasi spermatozoa kelompok hewan uji. Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan data konsentrasi spermatozoa. Hipotesis : Ho : Data konsentrasi spermatozoa tidak berbeda sacara bermakan. Ha: Data konsentrasi spermatozoa berbeda secara bermaksa. Pengambilan Keputusan :  Jika nilai signifikansi > 0,05 Ho diterima.  Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 Ho ditolak. ANOVA Sum of Squares

df

Mean Square

F

Sig.

Between Groups

963.097

3

321.032

4.410

.026

Within Groups

873.505

12

72.792

Total

1836.602

15

Keputusan : Konsentrasi spermatozoa berbeda bermakna,sehingga pengujian dapat dilanjutkan dengan Uji BNT/LSD. 3. Uji Beda Nyata Terkecil (BNT) terhadap konsentrasi spermatozoa kelompok hewan uji. Tujuan : Untuk menentuka data konsentrasi spermatozoa kelompok mana yang memberikan nilai yang berbeda secara bermakna dengan data bobot testis kelompok lainnya. Hipotesis : Ho: Data konsentrasi spermatozoa tidak berbeda secara bermakna. Ha : Data konsentrasi spermatozoa berbeda secara bermakna. Pengambilan Keputusan : 




Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

65

Multiple Comparisons LSD (J) (I) kontrol kelompok Kontrol

Dosis rendah

Dosis sedang

Dosis tinggi

Mean Difference (I-J) Std. Error

95% Confidence Interval Sig. Lower Bound Upper Bound

Dosis rendah

16.09375*

6.03291

.020

2.9492

29.2383

Dosis sedang

13.15625*

6.03291

.050

.0117

26.3008

Dosis tinggi

20.93725*

6.03291

.005

7.7927

34.0818

*

Kontrol

-16.09375

6.03291

.020

-29.2383

-2.9492

Dosis sedang

-2.93750

6.03291

.635

-16.0821

10.2071

Dosis tinggi

4.84350

6.03291

.438

-8.3011

17.9881

*

Kontrol

-13.15625

6.03291

.050

-26.3008

-.0117

Dosis rendah

2.93750

6.03291

.635

-10.2071

16.0821

Dosis tinggi

7.78100

6.03291

.221

-5.3636

20.9256

*

Kontrol

-20.93725

6.03291

.005

-34.0818

-7.7927

Dosis rendah

-4.84350

6.03291

.438

-17.9881

8.3011

Dosis sedang

-7.78100

6.03291

.221

-20.9256

5.3636

*. The mean difference is significant at the 0.05 level. Keputusan : Konsentrasi spermatozoa seluruh kelompok perlakuan berbeda secara bermakna terhadap kelompok kontrol ( p ≤ 0,05), namun tidak ada perbedaaan bermakna antar kelompok perlakuan.


66 Lampiran 15 Analisa Data Diameter Tubulus Semineferus 1. Uji Normalitas dan Homogenitas Terhadap Diameter Tubulus Seminefirus a. Uji Normalitas Kalmogorov-Smirnov Tujuan : Untuk melihat distribusi data diameter tubulus seminiferus Hipotesis : Ho : Data diameter tubulus seminiferus terdistribusi normal. Ha : Data diameter tubulus seminiferus tidak terdistribusi normal. Pengambilan keputusan : o Jika nilai signifikat ≤ 0,05 maka Ho diterima. o Jika nilai signifikat ≥ o,o5 maka Ho ditolak.

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

N a,b

Normal Parameters Most Extreme Differences

Mean Std. Deviation Absolute Positive Negative

Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) Test distribution is Normal.

Diameter tubulus seminiferus. 16 162.1531 10.23641 .182 .182 -.118 .729 .662

Keputusan:Uji normalitas diameter tubulus seminiferus berbeda secara bermakana (p ≥ 0,05). b. Uji Homogenitas levene Tujuan : Untuk melihat data diameter tubulus seminiferus homogen atau tidak. Hipotesis : Ho: Data diameter tubulus seminiferus homogen. Ha: Data diameter tubulus seminiferus tidak homogen. Pengambilan Keputusan :  Jika nilai signifakansi ≥ 0,05 maka Ho diterima.  Jika nilai signifakansi ≤ 0,05 maka Ho ditolak.


67 Test of Homogeneity of Variances Levene df1 df2 Statistic 5.352 3 12

Sig. .014

Keputusan : Uji homogenitas diameter tubulus seminiferus tidak homogen (p ≤ 0,05)sehingga dilanjutkan dengan uji Kruskal Wallis karena syarat belom terpenuhi. 2. Uji Kruskal Wallis terhadap diameter tubulus seminiferus kelompok hewan uji. Tujuan : Untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaaan data diameter tubulus seminiferus. Hipotesis : Ho: Data diameter tubulus semineferus tidak berbeda secara bermakna. Ha:.Data diameter tubulus semineferus berbeda secara bermakna. Pengambilan keputusan: 

Jika nilai signifikansi ≥ 0,05 maka Ho diterima.



Jika nilai signifikansi ≤ 0,05 maka Ha ditolak.

Test Statistics Diameter tubulus semineferus Chi-Square 12.728 Df 3 Asymp. Sig. .005 Keputusan: data diameter tubulus seminiferus berbeda secara bermakana (p ≤ 0,05) 3. Uji Beda Nyata Terkecil (BNT) terhad apdiameter tubulus semineferus kelompok hewan uji. Tujuan : Untuk menentukan data diameter tubulus semineferus kelompok mana yang memberikan nilai yang berbeda secara bermakna dengan data diameter tubulus semineferus kelompok lainnya. Hipotesis : Ho: Data diameter tubulus semineferus tidak berbeda secara bermakna. Ha : Data diameter tubulus semineferus berbeda secara bermakna. Pengambilan Keputusan : 






68

Multiple Comparisons LSD (I) kelompok (J) kelompok

Dosis rendah Kontrol Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Dosis rendah Dosis sedang Dosis tinggi Kontrol Dosis sedang Dosis rendah Dosis tinggi Kontrol

Mean Difference (I-J) 20.68750* 10.70000* 23.80000* -20.68750* -9.98750* 3.11250 -10.70000* 9.98750* 13.10000* -23.80000*

Std. Error

Sig.

2.75236 2.75236 2.75236 2.75236 2.75236 2.75236 2.75236 2.75236 2.75236 2.75236

.000 .002 .000 .000 .003 .280 .002 .003 .000 .000

Dosis rendah -3.11250 2.75236 Dosis sedang -13.10000* 2.75236 *. The mean difference is significant at the 0.05 level.

.280 .000

Dosis tinggi

95% Confidence Interval Lower Upper Bound Bound 14.6906 26.6844 4.7031 16.6969 17.8031 29.7969 -26.6844 -14.6906 -15.9844 -3.9906 -2.8844 9.1094 -16.6969 -4.7031 3.9906 15.9844 7.1031 19.0969 -29.7969 -17.8031 -9.1094 -19.0969

2.8844 -7.1031

Keputusan : Diameter tubulus semineferus pada kelompok dosis rendah,dosis sedang dan dosis tinggi berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol (p ≤ 0,05).


69 Lampiran 16. Gambar Histologi Tubulus Seminiferus Tikus Kontrol.

2

1

Keterangan : Terlihat adanya sel-sel spermatogenik (spermatogenia, spermatosit pakiten, dan spermatid ) tersusun rapat dan padat.

3

4

1. 2. 3. 4. 5. 6.

5 6

Membran basalis Spermatogenium Spermatosit pakiten Sel Sertoli Spermatozoa Lumen

Gambar kontrol,tahap II, pembesaran 400x 1

Keterangan : Jumlah lapisan sel terlihat teratur dan sel-sel spermatogenik tersusun sesuai dengan tingkat perkembangannya dari membran basalis menuju ke arah lumen..

2

3

1. 2. 3. 4. 5. 6.

4 5 6


Gambar kontrol, tahap VII,pembesaran 400x Keteranga : Terlihat adanya sel spermatogenik (spermatogonia, spermatosit pakiten, dan spermatid) tersusun berlapis dan teratur sesuai dengan tingkat perkembangannya dari membran basalis menujuh ke arah lumen.

1 2

3

4 6 5 Gambar kontrol,tahap XII,pembesaran 400x

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Membrane basalis Spermatogenium Spermatosit pakiten Sel Sertoli Spermatozoa Lumen


70 Lampiran 17. Gambar Histologi Tubulus Seminiferus Testis Tikus Perlakuan Ekstrak Etanol 70% Bji Mimba (10mg/kg BB)

1

3

Keterangan : Pada gambar ini terlihat sel-sel spermatogenik ( spermatogonia, spermatosit pakiten, dan spermatid) masih tetap, namun bila dibandingkan dengan kontrol, terlihat adanya penurunan jumlah spermatid.

2

5 4

6

Gambar perlakuan Ekstrak Etanol 70% biji mimba( 10mg/kg BB), tahap II, pembesaran 400x


Keterangan : Terlihat berkurangnya spermatogonium. 1. Membrane basalis 2. Spermatogenia 3. Spermatosit pakiten 4. Sel Sertoli 5. Spermatozoa 6. Lumen

1 2 3 4

1. 2. 3. 4. 5. 6.

5 6

Gambar perlakuan Ekstrak Etanol 70% biji mimba( 10mg/kg BB),tahap VII, pembesaran 400x Keterangan : Bila dibandingkan dengan kontrol, terlihat adanya penurunan jumlah spermatosit pakiten dan sel-sel tersusun agak jarang.

2 1

4 5

3

6 Gambar perlakuan Ekstrak Etanol 70% biji mimba( 10mg/kg BB),tahap XII, pembesaran 400x

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Membrane basalis Spermatogenia Spermatosit pakiten Sel Sertoli Spermatozoa Lumen


71

Lampiran 18. Gambar Histologi Tubulus Seminiferus Testis Tikus Perlakuan Ekstrak Etanol 70% biji Mimba (25mg/kg BB) Keterangan : Terlihat sel-sel spermatogenik mulai tersusun tidak teratur dan susunan sel tidak rapat.

1 2 3

1. 2. 3. 4. 5. 6.

4

6

Membrane basalis Spermatogenium Spermatosit pakiten Sel Sertoli Spermatid Lumen

5 Gambar perlakuan Ekstrak Etanol 70% biji mimba( 25mg/kg BB),tahap II, pembesaran 400x Keterangan : Terlihat berkurangannya spermatosit pakiten dibandingkan dengan kontrol dan perlakuan dosis 10mg/kg BB.

1

2 3

1. 2. 3. 4. 5. 6.

5 6 4

Membrane basalis Spermatogenium Spermatosit pakiten Sel Sertoli Spermatozoa Lumen

Gambar perlakuan Ekstrak Etanol 70% biji mimba( 25mg/kg BB),tahap VII perlakuan pembesaran 400x Keterangan : Pada gambar ini, terlihat adanya penurunan jumlah spermatosit pakiten yang lebih banyak dan susunan sel spermatogenik yang tidak teratur bila dibandingkan dengan kelompok perlakuan dosis 10mg/kg BB.

1 2

3 4

6 5 Gambar perlakuan Ekstrak Etanol 70% biji mimba( 25mg/kg BB),tahap XII, pembesaran 400x

1. 2. 3. 4. 5. 6.



72

Lampiran 19. Gambar Histologi Tubulus Seminiferus Testis Tikus Perlakuan Ekstrak Etanol 70 % Biji Mimba (50mg/kg BB) Keterangan : Lumen mengandung spermatosit pakiten dan spermatid yang lebih sedikit sehingga lumen terlihat tidak penuh.

1 2 3

4

6

5

Gambar perlakuan Ekstrak Etanol 70% biji mimba( 50mg/kg BB),tahap II, pembesaran 400x

2 3 4

5

Gambar perlakuan Ekstrak Etanol 70% biji mimba( 50mg/kg BB),tahap VII, pembesaran 400x 2


Keterangan : Pada gambar ini terlihat adanya penurunan jumlah sel spermatozoa lebih banyak dibandingkan kelompok kontrol dan kelompok perlakuan lainnya.

1

6

1. 2. 3. 4. 5. 6.

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Membrane basalis Sprmatogenium Spermatosit pakiten Sel Sertoli Spermatozoa Lumen

Keterangan : Terlihat penurunan jumlah sel-sel spermatogenik lebih banyak dan letak sel-sel spermatogenik yang lebih tidak teratur.

1 3

1. 2. 3. 4. 5. 6.

4

6


5 Gambar perlakuan Ekstrak Etanol 70% biji mimba( 50mg/kg BB),tahap XII, pembesaran 400x


UIN SRARIF HIDAYATULLAH JAKARTA

Recommend Documents