Testy autoimunity
Stanovení autoprotilátek • • • • •
Seminář 7: diagnostika autoimunitních chorob II
COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI ERYTROCYTŮM
IMUNITNĚ ZPROSTŘEDKOVANÉ ANÉMIE
typ
onemocnění
primární sekundární
Coombsův test IgG C3
autoimunitní hem. anémie
+
±
antinukleární protilátky (ANA) revmatoidní faktor (RF) protilátky proti erytrocytům (Coombs) imunohistochemie (protilátky proti thyreoglobulinu)
2% promytá suspenze Ery vyšetř. psa v PBS
Coombsovo reagens (Goats anti Canine IgG, IgM, C3) 1:1 až 1:40 v PBS
50 µl 2% ERY + 50 µl vyřed. Coombs. reagens v mikrotitr. desce
součást SLE
±
-
vyvolaná léky
±
-
postinfekční
±
-
30min 37 oC, 30min 25 oC
+
±
makroskopicky a mikroskopicky odečíst aglutinaci
-
+
neonatální izoerytrolýza prim/sekund. nemoc chladových aglutininů
COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI ERYTROCYTŮM
COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI ERYTROCYTŮM
COOMBSŮV TEST PROTILÁTEK PROTI ERYTROCYTŮM
Regenerativní typ anémie
DIFERENCIÁLNÍ DIAGNOSTIKA ANÉMIÍ
hemolytická anémie
predispozice klinické příznaky anémie (únava, apatie, zbarvení sliznic a kůže, srdeční šelest) autoaglutinace sférocytóza Coombsův test
hematologické znaky anemie (hematokrit, hemoglobin, počet a tvar erytrocytů – přítomnost vývojových forem v krvi - retikulocyty) neregenerativní anémie
regenerativní anémie pozitivní hemolýza
> 5 dní
< 5 dní
hemobartonelóza
onemocnění mimodřeňová (CRF, hypotyreóza)
Coombs pozitivní IMHA
babesióza
• léky nebo vakcíny • infekce, paraziti • transfůze
AIHA (ANA)
SLE biopsie kostní dřeně
hemolytická anémie
AUTOIMUNITNÍ CHOROBY KŮŽE
Choroba
negativní
ztráty krve
onemocnění kostní dřeně (parvovirus, estrogeny, nádorové) autoimunitní RBC
akutní krvácení nebo hemolýza
Další příčiny • léky / toxiny
Sliznice
Nik.t
IgG a C3
Pemfigus foliaceus
Prognóza
P.Vulgaris
++
+
mezibuněčné
±
P. Vegetans
−
±
m hlubší
+
P. Foliaceus
±
+
m horní
±
P. Erythematosus
+
±
m, bm
±
Bulózní pemfgoid
±
−
bazální m
SLE
++
±
m, bm
Dermatomyozitida
−
−
± ±, +, ±
Coombs negativní IMHA
IMUNOHISTOCHEMIE vazba sekundární protilátky, značené fluoresceinem, na protilátku primární
odběr vzorku – biopsie, cytologický nátěr a pod.
konjugát anti Dog Ig/FITC (Binding Site)
inkubace 30 min. při 25 oC ve vlhké komůrce
opláchnutí a promytí PBS
zamontování pod krycí sklo s 80% glycerolem
prohlížení ve fluorescenčním mikroskopu při 480 nm
Sekundární protilátka
← FITC
→
Primární protilátka
→
→
VYUŽITÍ IMUNOHISTOCHEMIE INTERCELULÁRNÍ
kožní onemocnění (pemfigus, SLE)
idiopatické záněty střeva
glomerulonefritidy
myositidy
Pemfigus vulgaris
SUBKORNEÁLNÍ
U BAZÁLNÍ MEMBRÁNY
Pemfigus foliaceus
Bulózní pemfigoid
CHRONICKÉ IDIOPATICKÉ ENTERITIDY
GLOMERULONEFRITIDY
lymfocytární-plasmacytární enteritida nejčastšjší příčina zvracení u psů, průjem, chřadnutí, úbytek hmotnosti hypertrofie krypt, lymfocyty, plazmatické b. v mukóze
eozinofilní gastroenterokolitida hypersenzitivitida I. typu? atrofie klků s infiltrací eozinofily a histiocyty
granulomatózní enterokolitida fokální zánět terminálního ilea atrofie klků, hypertrofie krypt, granulomatózní zánět, ulcerace
histiocytární ulcerativní kolitida u boxerů, fr. buldočků, ulcerativní kolitida s infiltrací makrofágy s velkými vakuolami
PAS+
CHOROBY ENDOKRINNÍHO SYSTÉMU
autoimunitní hypothyreóza (Hashimotova choroba) u psů, autoprotilátky proti thyreoglobulinu a thyreoidální
peroxidáze
autoimunitní hyperthyreóza (Gravesova choroba) u koček, autoprotilátky proti TSH receptoru
diabetes mellitus I. typu
PACIENT 4497
am.kokr, pes, stáří 6 let
anamnéza apatie, nechutenství, poslední
vakcinace před rokem příznaky tachykardie, tachypnoe ikterus splenomegálie
icterus
autoimunitní povaha u zvířat relativně vzácná autoprotilátky proti Langerhansovým buňkám
diabetes mellitus II. typu autoprotilátky proti inzulinovému receptoru
PACIENT 4497
am.kokr, pes,
stáří 6let
PACIENT 1015
N.O., fena, stáří 7 let
anamnéza
biochemie bilirubinémie mírně zvýšené jaterní testy bilirubinurie, hemoglobinurie
hubnutí, pruritus, kožní změny, trvá min. 1/2 roku
příznaky
hematologie
T: 38,5 vyhublost, apatie alopecie na různých částech těla a končetin furunkulóza na hřbetě, břiše a v perianální oblasti
regenerativní anémie (ery 2,8 x 1012/l) leukocytóza (leu 20,5 x 109/l)
Leu: 24,2 x 109/l, Ne: 22,0 x 109/l,
imunologie Coombs test přímý 1:16 +
DIAGNÓZA: autoimunitní hemolytická anémie
hematologie Ly: 0,48 x 109/l,
mikrobiologie a parazitologie seškrab parazitol. negat., mykologie chlupů negat., S.intermedius imunologie Fag 88,5 %, Ig: 27,9 g/l,
CL: 62,8 / 207, BTL(SI): 2,2, 2,2, 2,0 CIK: -, LYS: 9,5 g/l
DIAGNÓZA: hluboká pyodermie německých ovčáků
PACIENT 1072
N.O., fena, stáří 2 r.
anamnéza apatie, neochota pohybu, sklon k tloustnutí, kožní změny, první vyšetření asi po 1 měs. od vzniku příznaky T: 38,5 D: n.d. P: n.d. furunkulóza na pánevní končetině mikrobiologie a parazitologie seškrab parazitol. negativní, bakteriologie nedělána imunologie Fag 80 %, BTL(SI): PhA 2,5, ConA 10,8, 10,8, PwM 3,5 Ig: 15,9 g/l, CIK: -, LYS: 5,5 g/l biochemie T4: < 10 nmol/l
PACIENT 4887
kříž., fena, stáří 2 roky
příznaky anémie petechiální hemoragie
biochemie jaterní testy v normě hemoglobinurie
hematologie regenerativní anémie (ery 1,9 x 1012/l) leukocytóza (leu 22,3 x 109/l) trombocytopenie
imunologie DIAGNÓZA: hypothyreóza, hluboká pyodermie
Coombs test přímý 1:16 +
DIAGNÓZA: autoimunitní hemolytická anémie, Evansův syndrom
PACIENT 1260
retrívr
fena stáří 5 let
anamnéza dlouhodobé pohybové problémy, občasné průjmy příznaky Mírně zvýšená teplota Pohybové potíže, výrazný otok a bolestivost 3 kloubů Při pohmatu citlivé, bolestivé břicho
RTG neerozivní artritida
Imunologické vyšetření ANA test 1:1000 +, homogenní imunofluorescence
Diagnóza: Idiopatická artritida III. typu?
PACIENT 4922
kříž., pes,
stáří 3 roky
anamnéza apatie, nechutenství, bolest břicha, trvá asi 4 dny
příznaky anémie
biochemie zvýšené jaterní testy hemoglobinurie
hematologie regenerativní anémie (ery 2,6 x 1012/l) leukocytóza (leu 76,8 x 109/l)
imunologie Coombs test přímý 1:32 +
DIAGNÓZA: autoimunitní hemolytická anémie
Ulcerativní kolittida s artritidou
