SKRIPSI Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran

perpustakaan.uns.ac.id

digilib.uns.ac.id

PENGARUH EKSTRAK DAUN KATUK (Sauropus androgynus) SEBAGAI HEPATOPROTEKTOR TERHADAP KERUSAKAN HISTOLOGIS HEPAR TIKUS PUTIH YANG DIPAPAR PARASETAMOL

SKRIPSI Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran

Albert Krisnayudha Sinuraya G0008048

FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS SEBELAS MARET SURAKARTA 2011 commit to user


digilib.uns.ac.id

ABSTRAK

Albert K. Sinuraya, G0008048, 2011. Pengaruh Ekstrak Daun Katuk (Sauropus androgynus) sebagai Hepatoprotektor terhadap Kerusakan Histologis Hepar Tikus Putih yang Dipapar Parasetamol, Fakultas Kedokteran, Universitas Sebelas Maret, Surakarta Tujuan Penelitian: Untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak daun katuk dan pengaruh peningkatan dosis ekstrak daun katuk sebagai hepatoprotektor terhadap kerusakan histologis hepar tikus putih yang dipapar parasetamol. Metode Penelitian: Penelitian ini bersifat eksperimental laboratorik dengan the post test only control group design. Tikus putih galur Wistar jantan sebanyak 28 ekor dibagi dalam 4 kelompok yaitu kelompok kontrol (KK) dan kelompok perlakuan 1 - 3 (KP 1 - 3). Kelompok kontrol tikus putih diberi CMC 0,5 % sebanyak 1 ml per hari selama 13 hari berturut-turut. Kelompok perlakuan 1 - 3 diberikan parasetamol 0,27 gram/200 gram BB pada hari ke-11 sampai ke-13. Kelompok perlakuan 2 diberikan ekstrak daun katuk dosis 16,2 mg/200 gram BB, dan kelompok perlakuan 3 diberikan ekstrak daun katuk dosis 32,4 mg/200 gram BB. Perlakuan diberikan pada hari ke-1 sampai hari ke-13. Pada hari ke-14 semua tikus putih dikorbankan dan diambil heparnya untuk pembuatan preparat. Kerusakan sel hepar tikus putih diamati dengan menghitung jumlah inti sel yang mengalami nekrosis pada daerah sentrilobuler hepar. Data yang diperoleh kemudian dianalisis dengan uji One Way ANOVA dan uji LSD. Hasil Penelitian: Pada penelitian ini diperoleh jumlah rerata inti sel nekrosis pada KK sebesar 22,64 ± 6,721, KP 1 sebesar 52,57 ± 5,110, KP 2 sebesar 35,29 ± 4,762, dan KP 3 sebesar 12,86 ± 4,655. Hasil uji statistik One Way ANOVA menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna di antara keempat kelompok penelitian dengan p = 0,000 (p < 0,005). Hasil uji statistik LSD juga menunjukkan perbedaan yang bermakna antara keempat kelompok dengan masing-masing p = 0,000 (p < 0,05) Simpulan Penelitian: Simpulan dalam penelitian ini ialah pemberian ekstrak daun katuk dapat mencegah kerusakan sel hepar pada tikus putih yang dipapar parasetamol. Pemberian ekstrak daun katuk dengan dosis bertingkat juga terbukti semakin meningkatkan efek proteksinya terhadap hepar. Kata Kunci: daun katuk, parasetamol, kerusakan sel hepar commit to user

iv


digilib.uns.ac.id

ABSTRACT

Albert K. Sinuraya, G0008048, 2011. The Effect of Katuk Leaf Extract (Sauropus androgynus) as Hepatoprotector Toward the Liver Histological Appearance of Paracetamol Experimented White Mouse. Medical Faculty of Sebelas Maret University, Surakarta. Objective: To find out the effect of katuk leaf (Sauropus androgynus) as hepatoprotector toward the liver histological appearance of paracetamol experimented white mouse. Method: The research is experimental labolatoric research with the postest-only control group design. Twenty eight male mice galur wistar were divided into four groups. These groups were control group (KK) and 3 treated groups (KP 1 - 3). Control group got 1 ml CMC 0,5 % once a day for 13 days. KP 1 - 3 was treated by parasetamol 0,27 g/200 g BB in 11th-13th day. KP 2 was given katuk leaf extract with 16,2 mg/200 g BB dosages, whereas KP 3 was given 32,4 mg/200 g BB. The treatments were given within 13 days. In the 14th day, all mice were sacrificed for liver histopathological study. The liver cells’ damage were observed by number of necrosis cells on the central lobular of liver. Then the data was analyzed using One Way ANOVA test and LSD test. Results: Average number of necrotic nucleus in the KK was 22,64 ± 6,721, KP 1 was 52,57 ± 5,110, KP 2 was 35,29 ± 4,762, and KP 3 was 12,86 ± 4.655. The results of One Way ANOVA statistical test showed a significant difference in all four groups, p = 0,000 (p < 0,05). The results of LSD test also showed a significant differences between the four groups with each p = 0,000 (p < 0,05). Conclusion: This research conclude that katuk leaf (Sauropus androgynus) extract is able to prevent liver cells’ damage of parasetamol experimented white mouse. Increased dosage of katuk leaf extract can increase its protection towards the liver cells. Keywords: katuk leaf, paracetamol, liver cells’ damage

commit to user

v


digilib.uns.ac.id

DAFTAR ISI

PRAKATA ..............................................................................................................vi DAFTAR ISI ......................................................................................................... vii DAFTAR GAMBAR ............................................................................................... x DAFTAR TABEL ...................................................................................................xi DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xii BAB I. PENDAHULUAN A. Latar Belakang Masalah ....................................................................... 1 B. Perumusan Masalah ............................................................................. 3 C. Tujuan Penelitian ................................................................................. 3 D. Manfaat Penelitian ............................................................................... 4 BAB II. LANDASAN TEORI A. Tinjauan Pustaka .................................................................................. 5 1. Katuk .............................................................................................. 5 a. Taksonomi ................................................................................ 5 b. Nama Lain................................................................................. 5 c. Karakteristik dan Morfologi ..................................................... 6 d. Kandungan Senyawa Kimia...................................................... 7 2. Hepar .............................................................................................. 7 a. Lobulus Hepar........................................................................... 8 b. Parenkim Sel-sel Hepar ............................................................ 9 c. Sinusoid Hepar .......................................................................... 9 commit to user

vii


digilib.uns.ac.id

d. Kanalikuli Biliferus ............................................................... 10 e. Triad Portal ........................................................................... 10 f. Daya Regenerasi Sel Hepar .................................................. 10 g. Kerusakan Sel Hepar............................................................. 11 3. Parasetamol ................................................................................. 12 a. Farmakodinamik ................................................................... 12 b. Farmakokinetik ..................................................................... 13 c. Indikasi .................................................................................. 13 d. Efek Samping ........................................................................ 14 4. Stres Oksidatif ............................................................................ 14 5. Antioksidan ................................................................................. 19 6. Daun Katuk sebagai Antioksidan ............................................... 21 B. Kerangka Pemikiran ......................................................................... 23 C. Hipotesis ........................................................................................... 24 BAB III. METODE PENELITIAN A. Jenis Penelitian ................................................................................. 25 B. Lokasi Penelitian .............................................................................. 25 C. Subjek Penelitian .............................................................................. 25 D. Teknik Sampling .............................................................................. 26 E. Desain Penelitian .............................................................................. 26 F. Identifikasi Variabel Penelitian ........................................................ 27 G. Definisi Operasional Variabel Penelitian ......................................... 28 H. Instrumentasi dan Bahan Penelitian ................................................. 30 commit to user

viii


digilib.uns.ac.id

I. Cara Kerja ........................................................................................ 31 J. Teknik Analisis Data Statistik .......................................................... 37 BAB IV. HASIL PENELITIAN A. Data Hasil Penelitian ........................................................................ 38 B. Analisis Data .................................................................................... 40 1. Uji Normalitas ............................................................................ 40 2. Uji One Way ANOVA ................................................................ 40 3. Uji LSD....................................................................................... 41 BAB V. PEMBAHASAN .................................................................................... 43 BAB VI. SIMPULAN DAN SARAN A. Simpulan........................................................................................... 47 B. Saran ................................................................................................. 47 DAFTAR PUSTAKA ............................................................................................ 49 LAMPIRAN ........................................................................................................... 54

commit to user

ix


digilib.uns.ac.id

BAB I PENDAHULUAN

A.

Latar Belakang Masalah Hepar adalah organ terbesar dengan berat sekitar 2 % dari berat total tubuh yang berfungsi dalam penyaringan dan penyimpanan darah, pembentukan empedu, penyimpanan vitamin dan besi, pembentukan faktor koagulasi, serta metabolisme karbohidrat, protein, lemak, hormon, dan zat kimia asing (Guyton dan Hall, 2007). Peran hepar dalam memetabolisme berbagai zat kimia yang masuk ke dalam tubuh menyebabkan hepar menjadi sangat rentan terhadap kerusakan. Zat kimia dapat berupa senyawa obat dan salah satu contoh obat yang dapat menimbulkan kerusakan hepar adalah parasetamol (Mehta, 2010). Parasetamol (asetaminofen) telah digunakan sejak tahun 1893 sebagai obat dengan efek antipiretik dan analgesik. Parasetamol dijual sebagai obat bebas di Indonesia. Ketika diminum dalam dosis terapi, parasetamol telah terbukti aman. Sebagian besar dikonversi melalui metabolisme tahap II oleh konjugasi dengan sulfat dan glukoronat, dan sebagian kecil lainnya teroksidasi melalui metabolisme tahap I oleh enzim sitokrom P450. Sitokrom P450 3A4 dan sitokrom P450 2E1 mengkonversi sekitar 5 % dari parasetamol menjadi metabolit perantara yang sangat reaktif,

N-asetil-p-benzoquinoneimine commit to user

1

(NAPQI),

yang

kemudian

2 digilib.uns.ac.id


dikonjugasi oleh glutation membentuk sistein dan konjugat mercapturic acid yang tidak beracun (Farrel, 2010). Penggunaan parasetamol yang berlebihan dan terus menerus (drug abuse) membuat jalur sulfat dan glukoronat menjadi jenuh sehingga jalur detoksifikasi parasetamol lebih banyak dilakukan oleh sitokrom P450. Akibatnya NAPQI menjadi sangat banyak dan pasokan glutation untuk sel hepar berkurang. Saat itu juga NAPQI masih dalam bentuk racun dalam hepar dan bereaksi dengan molekul membran sel, mengakibatkan kerusakan dan kematian sel hepar dan akhirnya menyebabkan nekrosis hepar akut (Farrel, 2010). Guna mencegah terjadinya efek buruk dari radikal bebas, maka tubuh memerlukan antioksidan yang merupakan senyawa kimia dengan sifat reduktor. Mekanisme kerja antioksidan ada dua, yaitu sebagai donor atom hydrogen sehingga radikal bebas menjadi lebih stabil dan yang kedua adalah untuk memperlambat laju autooksidasi. Penggunaan antioksidan alami sudah mulai marak akhir-akhir ini seiring dengan semakin besarnya pemahaman masyarakat tentang peranannya dalam menghambat penyakit degeneratif seperti penyakit jantung, arteriosklerosis, kanker, serta penuaan (Gunawan, 2010). Daun katuk sudah banyak dikenal orang Indonesia dan banyak digunakan sebagai sayuran. Daun katuk mengandung berbagai jenis antioksidan antara lain flavonoid, vitamin C, dan vitamin A. Kandungan commit to user

3 digilib.uns.ac.id


protein dan vitamin A yang tinggi membuat daun katuk digunakan sebagai food additive untuk ibu-ibu yang menyusui (Subekti, 2007). Penelitian yang dilakukan oleh Sa’roni (2004) meyebutkan bahwa dosis daun katuk sebanyak 900 mg/hari dapat meningkatkan produksi ASI. Namun sejauh ini manfaat pemberian ekstrak daun katuk sebagai hepatoprotektor belum diketahui. Dengan besarnya potensi antioksidan yang terkandung dalam ekstrak daun katuk dan efek proteksi daun katuk terhadap hepar belum banyak diteliti, maka peneliti ingin mengetahui bagaimana efek proteksi yang diberikan oleh ekstrak daun katuk terhadap hepar tikus putih yang dipapar parasetamol. B.

Perumusan Masalah Perumusan masalah dalam penelitian ini adalah: 1.

Apakah pemberian ekstrak daun katuk dapat digunakan sebagai hepatoprotektor terhadap kerusakan histologis hepar tikus putih yang dipapar parasetamol?

2.

Apakah peningkatan dosis ekstrak daun katuk dapat meningkatkan efek hepatoprotektor terhadap kerusakan histologis hepar tikus putih yang dipapar parasetamol?

C.

Tujuan Penelitian 1.

Untuk mengetahui pengaruh pemberian ekstrak daun katuk sebagai hepatoprotektor terhadap kerusakan histologis hepar tikus putih yang dipapar parasetamol.

commit to user

4 digilib.uns.ac.id


2.

Untuk mengetahui pengaruh peningkatan dosis ekstrak daun katuk sebagai hepatoprotektor terhadap kerusakan histologis hepar tikus putih yang dipapar parasetamol.

D.

Manfaat Penelitian 1.

Manfaat Teoritis Penelitian ini diharapkan dapat digunakan sebagai bahan informasi dan bahan kajian mengenai pengaruh ekstrak daun katuk sebagai hepatoprotektor.

2.

Manfaat Aplikatif Penelitian ini diharapkan dapat dipakai sebagai bahan acuan untuk penelitian lebih lanjut, misalnya penelitian dengan subjek manusia.

commit to user


digilib.uns.ac.id

BAB II LANDASAN TEORI

A.

Tinjauan Pustaka 1.

Katuk (Sauropus androgynus) a.

Taksonomi Kingdom

: Plantae (Tumbuhan)

Subkingdom : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh) Super Divisi

: Spermatophyta (Menghasilkan biji)

Divisi

: Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga)

Kelas

: Magnoliopsida (Berkeping ganda)

Sub kelas

: Rosidae

Ordo

: Euphorbiales

Famili

: Euphorbiaceae

Genus

: Sauropus

Spesies

: Sauropus androgynus (L.) Merr.

(Plantamor, 2011) b.

Nama Lain Katuk mempunyai beberapa nama yang berbeda di setiap daerah di Indonesia antara lain memata, sekop manis (Melayu), simani (Minangkabau), katuk (Sunda), sibabing, katu, katukan (Jawa), dan kerakur (Madura). Di luar negeri tanaman ini bernama sweet leaf bush/star gooseberry (Inggris), cekur manis/cekak commit to user

5

6 digilib.uns.ac.id


manis/tarok manis (Malaysia), phuk waan ban (Thailand), so kun mu (Cina), dan ruridama no (Jepang). (Plantamor, 2011) c.

Karakteristik dan Morfologi

Gambar 1. Daun Katuk (Herbal, 2010) Tanaman katuk termasuk tanaman perdu dengan tinggi mencapai 3,5 meter. Tanaman katuk banyak terdapat di Asia Tenggara dan tumbuh baik di dataran rendah hingga 1.300 meter di atas permukaan laut (Herbal, 2010). Tanaman

katuk

tumbuh

menahun

(parennial)

dan

merumpun. Susunan morfologi tanaman katuk terdiri atas akar, batang, daun, bunga, buah dan biji. Buahnya berbentuk kecil dan berwarna putih. Daun katuk kecil, dengan warna hijau gelap, panjangnya 5 - 6 cm. Bunga tanaman katuk berwarna merah gelap atau kuning dengan bercak merah gelap (Herbal, 2010). Sistem perakaran tanaman katuk menyebar ke segala arah dan dapat mencapai kedalaman antara 30 cm - 50 cm. Batang tanaman tumbuh tegak dan berkayu. Pada stadium muda, batang tanaman berwarna hijau dan setelah tua berubah menjadi kelabu keputih-putihan (Herbal, 2010). commit to user

7 digilib.uns.ac.id


d.

Kandungan Senyawa Kimia Daun katuk mengandung energi (59 kkal/100 gr), protein (4,8 gr/100 gr), lemak (1 gr/100 gr), karbohidrat (11 gr/100 gr), dan air (17 gr/100 gr). Vitamin A yang didapat dari 100 gram daun Katuk adalah 10.370 SI, vitamin C ( 239 mg/100 gr), dan vitamin B1 (0,1 mg/100 gr). Kadar serat per 100 gram daun katuk 1,5 gram. Komposisi mineral pada daun katuk juga tinggi, yaitu dominan kalsium (204 mg/100 gr), fosfor (83 mg/100 gr), dan besi (2,7 mg/100 gr). Daun katuk juga mengandung banyak flavonoid (831,70 mg/100 gr). Golongan flavonoid utama yang terdapat dalam daun katuk adalah golongan flavonol OH-3 tersulih atau golongan flavon (Zuhra, 2008).

2.

Hepar Hepar merupakan organ terbesar yang ada di dalam tubuh, konsistensinya lunak dan terletak di bawah diafragma dalam cavum abdomen regio hipochondriaca dextra sampai regio epigastrica. Hepar mempunyai peran yang sangat penting, di antaranya sebagai tempat penyaringan

dan

penyimpanan

darah,

pembentukan

empedu,

penyimpanan vitamin dan besi, pembentukan faktor koagulasi, serta metabolisme karbohidrat, protein, lemak, hormon, dan zat kimia asing (Guyton dan Hall, 2007). Struktur histologis hepar terdiri dari beberapa lobus dan tiap lobus

terbagi

menjadi lobulus-lobulus, commit to user

yang

merupakan

unit

8 digilib.uns.ac.id


mikroskopis dan fungsional organ. Setiap lobulus merupakan badan heksagonal yang terdiri dari lempeng-lempeng sel hepar berbentuk kubus, tersusun radier mengelilingi vena sentralis yang mengalirkan darah dari lobulus. Di antara lempengan sel hepar terdapat kapilerkapiler yang dinamakan sinusoid, yang merupakan cabang vena porta dan arteri hepatika. Sinusoid ini dibatasi oleh sel fagositik atau sel kupffer, yang berfungsi seperti sistem monosit-makrofag. Selain cabang-cabang vena porta dan arteri hepatika yang melingkari bagian perifer lobulus hepar, juga terdapat saluran empedu (Price dan Wilson, 2005). a.

Lobulus hepar Lobulus hepar sebagai kesatuan histologis berbentuk prisma poligonal, diameter 1-2 mm, penampang melintang tampak sebagai heksagonal dengan pusatnya vena sentralis dan sudut-sudut luar lobuli terdapat kanalis porta (Leeson et al., 1996). Pembagian lobulus hepar sebagai unit fungsional dibagi menjadi 3 zona: 1) Zona 1: zona aktif, sel-selnya paling dekat dengan pembuluh darah, akibatnya zona ini yang pertama kali dipengaruhi oleh perubahan darah yang masuk, disebut juga “zone of permanent function”.

commit to user

9 digilib.uns.ac.id


2) Zona 2: zona intermedia, sel-selnya memberi respon kedua terhadap perubahan dalam darah, disebut juga “intermediate zone”. 3) Zona 3: zona pasif, aktivitas sel-selnya rendah dan tampak aktif bila kebutuhan meningkat (Lesson et al., 1996). b.

Parenkim sel-sel hepar Parenkim hepar terdiri dari sel sel hepar atau hepatosit, yang tersusun radier, bertumpukan, dan membentuk lapisan sel yang tebal satu sama lain. Parenkim hepar tersusun dalam rangkaian lempeng-lempeng atau lembaran-lembaran cabang dan beranastomosis dengan bebas, membentuk struktur seperti busa. Celah di antara lempeng-lempeng tersebut mengandung sinusoidsinusoid kapiler yang disebut sinusoid hepar. Hepatosit berbentuk poligonal, berukuran sekitar 20 - 35 µm dengan membran sel yang jelas. Inti sel bulat atau lonjong dengan permukaan teratur dan besarnya bervariasi antara sel yang satu dengan yang lainnya. Setiap inti mempunyai granula kromatin yang tampak jelas dan tersebar dengan satu atau lebih anak inti (Lesson et al., 1996).

c.

Sinusoid hepar Sinusoid hepar merupakan suatu pembuluh yang melebar tidak teratur dan hanya terdiri dari satu lapisan sel-sel endotel yang tidak kontinyu. Sinusoid kapiler hepar mempunyai batas yang tidak sempurna dan memungkinkan pengaliran makromolekul dengan commit to user

10 digilib.uns.ac.id


mudah dari lumen ke sel-sel hepar dan sebaliknya. Sinusoid dikelilingi dan disokong oleh selubung serabut retikuler halus yang penting untuk mempertahankan bentuknya (Juncqueira dan Carneiro, 2007). d.

Kanalikuli biliferus Merupakan celah tubuler yang hanya dibatasi oleh membran plasma hepatosit dan mempunyai sedikit mikrovili pada bagian dalamnya. Kanalikuli biliferus membentuk anastomosis yang kompleks di sepanjang lempeng-lempeng lobulus hepar dan berakhir dalam daerah porta. Oleh karena itu, empedu mengalir berlawanan arah dengan aliran darah, yaitu dari tengah ke tepi lobulus. Beberapa kanalikuli biliferus membentuk duktulus biliferus yang bermuara dalam duktus biliferus dalam segitiga porta. Duktus biliferus bersatu dan membentuk duktus hepar (Juncquiera dan Carneiro, 2007).

e.

Triad portal Merupakan tempat-tempat di mana tiga atau lebih unit lobulus bertemu dimana terdapat akumulasi jaringan pengikat. Triad portal mengandung cabang dari vena porta, arteri hepatika, dan duktus biliferus (Juncquiera dan Carneiro, 2007).

f.

Daya regenerasi sel hepar Hepar

mempunyai

kemampuan

regenerasi

yang

mengagumkan. Daya regenerasi hepar setelah mengalami trauma commit to user



atau mendapat zat-zat toksik sangat tinggi (Lesson et al., 1996). Kehilangan jaringan hepar akibat kerja zat-zat toksik atau pembedahan memacu suatu mekanisme di mana sel-sel hepar mulai membelah dan hal ini terus berlangsung sampai perbaikan masa jaringan semula tercapai (Juncquiera dan Carneiro, 2007). g.

Kerusakan sel hepar Hepar yang normal, tanpa jejas mempunyai parenkim yang tidak tumpang tindih satu sama lainnya dan mempunyai kapasitas regenerasi yang luar biasa. Regenerasi yang sukses bergantung pada tipe, derajat, dan lamanya jejas serta integritas dari jaringan yang tersisa. Beberapa jaringan, seperti pada kulit dan hepar relatif baik

regenerasinya

dibanding

jaringan

lainnya.

Ketiadaan

regenerasi, maka jaringan fungsional akan digantikan oleh jaringan fibrotik yang mengandung banyak kolagen (Philips, 1997). Respons hepar terhadap jejas dapat memberikan beberapa tampakan histologis yang melibatkan hepatosit, sel vaskuler, dan saluran empedu (Damjanov, 1996). Kematian sel dan jaringan pada tubuh yang hidup disebut nekrosis. Secara mikroskopis jaringan nekrosis seluruhnya berwarna kemerahan dan tidak mengambil zat warna hematoksilin, sering pucat. Pada nekrosis kerusakan banyak terjadi pada inti, perubahan inti di antaranya adalah: commit to user



1) Inti menyusut, batas tidak teratur. 2) Inti tampak lebih padat, warnanya gelap hitam (piknotik). 3) Inti terbagi-bagi atas fragmen-fragmen, robek (karioreksis). 4) Inti tidak lagi mengambil zat warna, karena itu pucat dan tidak nyata (kariolisis) (Price dan Wilson, 2005). Tampilan

morfologik

jaringan

nekrosis

bervariasi,

tergantung pada hasil aktivitas litik di dalam jaringan mati. Umumnya perubahan-perubahan lisis yang terjadi pada semua bagian sel, tetapi perubahan pada inti sel adalah petunjuk paling jelas pada kematian sel (Price dan Wilson, 2005). 3.

Parasetamol (Asetaminofen) a.

Farmakodinamik Efek analgesik parasetamol serupa dengan salisilat yaitu menghilangkan atau mengurangi nyeri ringan sampai sedang. Keduanya menurunkan suhu tubuh dengan mekanisme yang diduga juga berdasarkan efek sentral seperti salisilat (Wilmana dan Gunawan, 2007). Efek anti inflamasinya sangat lemah, oleh karena itu parasetamol tidak digunakan sebagai antireumatik. Parasetamol merupakan

penghambat biosintesis prostaglandin yang lemah.

Efek iritasi, erosi, dan perdarahan lambung tidak terlihat pada kedua obat ini, demikian juga dengan gangguan pernapasan dan keseimbangan asam basa (Wilmana dan Gunawan, 2007). commit to user



b.

Farmakokinetik Parasetamol diberikan per oral. Absorbsi tergantung pada kecepatan pengosongan lambung, dan kadar puncak di dalam darah biasanya tercapai dalam waktu 30 - 60 menit. Parasetamol sedikit terikat dengan protein plasma dan sebagian dimetabolisme oleh enzim mikrosom hepar dan diubah menjadi asetaminofen sulfat dan glukoronida yang secara farmakologi tidak aktif. Kurang dari 5% diekskresikan dalam bentuk tidak berubah. Suatu metabolit minor tetapi sangat aktif (N-asetil-p-benzokuinon), penting pada dosis besar, karena toksisitasnya terhadap hepar dan ginjal. Waktu paruh parasetamol 2-3 jam dan relatif tidak dipengaruhi oleh fungsi ginjal. Pada jumlah toksik atau penyakit hepar, waktu paruhnya bisa meningkat dua kali lipat atau lebih (Katzung, 2002).

c.

Indikasi Khasiatnya

analgetik

dan

antipiretik,

tetapi

tidak

antiradang. Efek analgetisnya diperkuat oleh kodein dan kafein (Tjay dan Raharja, 2002). Obat ini berguna untuk nyeri ringan sampai sedang seperti sakit kepala, mialgia, nyeri persalinan, dan keadaan lain di mana aspirin efektif sebagai analgesik. Parasetamol tidak efektif untuk mengatasi inflamasi seperti artritis reumatoid, meskipun dapat dipakai sebagai obat tambahan analgesik dalam terapi antiinflamasi. Parasetamol lebih disukai daripada aspirin pada pasien dengan hemofilia atau dengan riwayat ulkus peptikum commit to user



dan juga pada pasien yang mengalami bronkospasme yang dipicu akibat aspirin (Katzung, 2002). d.

Efek samping Efek samping yang sering terjadi antara lain reaksi hipersensitivitas dan kelainan darah (Tjay dan Raharja, 2002). Efek merugikan paling serius akibat overdosis asetaminofen akut berupa nekrosis hati yang fatal. Nekrosis tubulus ginjal dan koma hipoglikemik mungkin juga terjadi (Hardman et al., 2008). Hepatotoksisitas dapat terjadi pada pemberian dosis tunggal 10 15 gram (200 - 250 mg/kgBB) parasetamol (Wilmana dan Gunawan, 2007). Selain itu overdosis dapat menimbulkan gejala antara lain mual, muntah, dan anoreksia.

4.

Stres Oksidatif Oksigen merupakan substansi esensial karena perannya yang begitu besar bagi metabolisme sel untuk menghasilkan energi bagi kehidupan sel. Di dalam sel, 90 % oksigen digunakan dalam rantai transport elektron di mitokondria sitokrom oksidase (Arief, 2009). Oksigen juga memiliki potensi toksik, karena selain mendorong terjadinya reduksi oksigen yang bertahap untuk membentuk ATP dalam rantai transpor elektron, juga menyebabkan terbentuknya radikal oksigen dan senyawa oksigen reaktif {Reactive oxygen species (ROS)} yang mampu menyebabkan cedera sel. Contoh senyawa oksigen reaktif antara lain adalah radikal superoksida, radikal hidroksil, hidrogen commit to user



peroksida, dan radikal peroksida. Proses-proses yang secara alami menghasilkan senyawa oksigen

reaktif adalah rantai respirasi

mitokondria, reaksi oksidase, maupun pada peristiwa fagositosis oleh granulosit sistem imun (Videla, 2009). Stres oksidatif adalah ketidakseimbangan antara produksi oksigen reaktif dengan kemampuan sistem biologik tubuh untuk mendetoksifikasi senyawa reaktif atau memperbaiki kerusakan sel (Otero et al., 2009). Keadaan ini menyebabkan kelebihan radikal bebas, yang akan bereaksi dengan lemak, protein, asam nukleat seluler, sehingga terjadi kerusakan lokal dan disfungsi organ tertentu. Jika stres oksidatif ini berlangsung lama, akan menyebabkan kerusakan sel atau jaringan, yang selanjutnya merupakan penyebab timbulnya keganasan, inflamasi, aterosklerosis, penuaan, dan iskemia (Arief, 2009). Stres oksidatif disebabkan oleh radikal bebas yang berlebihan. Radikal bebas yang merupakan spesies kimiawi dengan satu elektron tak berpasangan di orbital terluar menyebabkan radikal bebas sangat tidak stabil dan mudah bereaksi dengan zat kimia organik maupun anorganik. Sifat ini menimbulkan perubahan kimiawi dan dapat merusak berbagai komponen sel. Tiga reaksi yang paling relevan dengan jejas sel yang diperantarai radikal bebas yaitu peroksidasi lipid membrane, fragmentasi DNA, dan ikatan silang protein (Robbins et al., 2004). commit to user



Membran sel hampir seluruhnya terdiri dari protein dan lipid. Struktur dasarnya ialah sebuah lapisan lipid bilayer dan di antara lapisan lipid bilayer tersebut terdapat molekul besar protein globular. Sedangkan struktur dasar dari lapisan lipid bilayer sendiri terdiri atas molekul-molekul fosfolipid (Guyton dan Hall, 2007). Komponen terpenting membran sel adalah fosfolipid, glikolipid, dan kolesterol. Dua komponen pertama mengandung asam lemak tak jenuh yang sangat rawan terhadap serangan-serangan radikal terutama radikal hidroksil dan menimbulkan reaksi rantai yang dikenal dengan nama peroksidasi lipid. Akibat akhir dari rantai reaksi ini adalah terputusnya rantai asam lemak menjadi berbagai senyawa yang bersifat toksik terhadap sel. Dapat pula terjadi ikatan silang (cross-linking) antara dua rantai asam lemak dan rantai peptide (protein) yang timbul karena reaksi dua radikal. Semuanya itu menyebabkan kerusakan parah membrane sel sehingga membahayakan kehidupan sel (Suryohudoyo, 2000). Kerusakan membran sel menyebabkan membran sel menjadi lebih permeabel terhadap beberapa substansi dan memungkinkan substansi tersebut melewati membran secara bebas. Jika substansi tersebut adalah radikal bebas seperti H2O2 maka akan terjadi reaksi Fenton (Fe2+ + H2O2 → Fe3+ + OH0 + OH-) yang diperantarai oleh logam transisi, seperti tembaga (Cu) dan zat besi (Fe). Reaksi Fenton commit to user



tersebut akan menghasilkan radikal hidroksil (OH0) yang akan lebih merusak membran sel (Robbins et al., 2004). Perubahan permeabilitas membran yang disebabkan peroksida lipid juga mengakibatkan pengaturan ion, nutrisi sel, dan volume intraekstrasel menjadi terganggu dan pada akhirnya proses metabolisme sel secara keseluruhan menjadi terganggu. Peroksida lipid juga menekan pompa Ca2+ mikrosom hati sehingga terjadi gangguan homeostasis sel hati. Peningkatan Ca2+ intrasel akan mengaktivasi fosfolipase (mencetuskan kerusakan membran), protease (mengatabolisasi protein membran dan struktural), ATPase (mempercepat deplesi ATP), dan endonuklease (memecah material genetik). Semua keadaan tersebut akan merusak sel hati. Ketika suatu sel tidak dapat kembali normal lagi (point of no return) atau tidak dapat beregenerasi lagi setelah mendapat jejas berulang kali dan dengan durasi yang panjang maka sel tersebut akan mengalami kematian (nekrosis) (Robbins et al., 2004). Perusakan DNA oleh radikal bebas juga dapat terjadi karena reaksi dengan radikal hidroksil (OH0) yang terbentuk di dalam inti sel. Stres oksidatif dapat memicu pelepasan ion logam di dalam sel, yang akan berikatan dengan DNA. Ion logam tersebut dapat mengkatalis terbentuknya OH- dari H2O2 melalui reaksi donor elektron dari ion logam kepada H2O2. OH0 yang terbentuk kemudian akan segera bereaksi dengan molekul terdekat, yang tidak lain adalah DNA itu commit to user



sendiri, menyebabkan terjadinya kerusakan DNA (Halliwell dan Gutteridge, 2001). Bila kerusakan tidak terlalu parah, maka masih bisa diperbaiki oleh sistem perbaikan DNA (DNA repair system). Namun apabila kerusakan terlalu parah, misalnya DNA terputus-putus di berbagai tempat, maka kerusakan tersebut tak dapat diperbaiki dan replikasi sel akan terganggu. DNA yang tidak dapat diperbaiki ini sering justru menimbulkan mutasi, karena dalam memperbaiki DNA cenderung membuat kesalahan (Suryohudono, 2000). Radikal bebas juga akan mencetuskan ikatan silang protein yang diperantarai sulfhidril, menyebabkan peningkatan kecepatan degradasi atau hilangnya aktivitas enzimatik. Reaksi radikal bebas juga bisa secara langsung menyebabkan fragmentasi polipeptida (Robbins et al.,2004). Radikal bebas memang tidak stabil, dan umumnya rusak secara spontan. Sel juga membentuk beberapa sistem enzimatik dan nonenzimatik untuk menonaktifkan radikal bebas yaitu melalui kerja superoksida dismutase (SOD), glutation (GSH) peroksidase, katalase, dan antioksidan (Robbins et al., 2004). SOD terdapat dalam sitosol dan mitokondria. Enzim ini dapat mengkonversi 2 molekul superoksida menjadi hidrogen peroksida dan oksigen. Dismutasi anion superoksida menjadi hidrogen peroksida dan oksigen ini sering disebut sebagai pertahanan pertama terhadap stres commit to user



oksidatif karena superoksida merupakan inisiator kuat berbagai reaksi berantai. Glutation (GSH) peroksidase akan melindungi sel supaya tidak mengalami jejas dengan mengkatalisis perusakan radikal bebas (2OH- + 2GSH → 2H2O + GSSG [glutation homodimer]). Katalase terdapat dalam peroksisom dan akan mendegradasi hydrogen peroksida (2H2O2 → O2 + 2H2O). Antioksidan endogen atau eksogen (misal, vitamin E, A, C, serta β-karoten) juga dapat menghambat pembentukan radikal bebas atau memulung radikal bebas ketika selesai dibentuk (Robbins et al., 2004). 5.

Antioksidan Terdapat dua bentuk reaksi kimia, oksiodasi dan reduksi. Oksidasi adalah pelepasan elektron sedangkan pada reduksi terjadi penambahan jumlah elektron. Oksidasi dan reduksi selalu berpasangan, ketika salah satu atom atau molekul teroksidasi maka yang lain akan tereduksi. Molekul yang sangat reaktif seperti radikal bebas, dapat mengoksidasi molekul yang stabil dan merubahnya menjadi bagian yang tidak stabil (McDermott, 2000). Cara kerja senyawa antioksidan adalah bereaksi dengan radikal bebas reaktif membentuk radikal bebas tak reaktif yang relatif stabil. Antioksidan

menstabilkan

radikal

bebas

dengan

melengkapi

kekurangan elektron yang dimiliki radikal bebas, dan menghambat terjadinya reaksi berantai dari pembentukan radikal bebas (McDermott, 2000).

commit to user



Tubuh manusia menghasilkan senyawa antioksidan, tetapi jumlahnya sering kali tidak cukup untuk menetralkan radikal bebas yang masuk ke dalam. Glutation adalah salah satu antioksidan alami yang dibentuk oleh tubuh. Glutation memiliki peran penting dalam fungsi biologis, termasuk transport membrane, detoksifikasi, dan perlindungan sel dari radikal bebas (Adams, 2009). Berdasarkan cara kerjanya dapat digolongkan menjadi 3 kelompok yaitu: antioksidan primer, sekunder, dan tersier. Antioksidan primer ialah golongan antioksidan yang berfungsi untuk mencegah pembentukan radikal bebas, misalnya transferin, feritin, dan albumin. Antioksidan sekunder ialah golongan antioksidan yang berfungsi menangkap radikal bebas dan menghentikan pembentukan radikal bebas, misalnya Superoxide Dismutase (SOD), Glutation, Vitamin C, Vitamin E, β-karotene. Antioksidan tersier adalah golongan antioksidan yang berfungsi memperbaiki jaringan tubuh yang rusak oleh radikal bebas (Winarno, 1995). Secara alami beberapa jenis tumbuhan merupakan sumber antioksidan, hal ini dapat ditemukan pada beberapa jenis sayuran, buahbuahan segar, beberapa jenis tumbuhan dan rempah-rempah (Praptiwi et al., 2006). Jenis antioksidan yang dapat ditemukan pada tumbuhan antara lain adalah asam lemak omega-3, beta karoten, alfa tokoferol, asam askorbat dan glutation (Simopoulos, 2004). commit to user



6.

Daun Katuk sebagai Antioksidan Kandungan daun katuk yang dapat digunakan sebagai antioksidan adalah flavonoid. Flavonoid termasuk metabolit sekunder tumbuhan yang merupakan golongan terbesar senyawa fenol alam. Flavonoid merupakan antioksidan yang memberikan perlindungan terhadap agen oksidatif dan radikal bebas. Sebagai antioksidan, flavonoid akan menangkap radikal bebas dengan melepaskan atom hydrogen dari gugus hidroksilnya. Pemberian atom hydrogen ini menyebabkan radikal bebas menjadi stabil dan berhenti melakukan gerakan radikal, sehingga tidak merusak lipida, protein dan DNA (Nurwati, 2007). Flavonoid juga akan melindungi sel melalui mekanisme yang lain, yaitu dengan meningkatkan kadar glutation (WHFoods, 2011).

Gambar 2. Struktur Flavonoid (WHFoods, 2011). Vitamin C dalam daun katuk mampu berperan sebagai antioksidan pemecah rantai yang hidrofilik. Vitamin C juga merupakan prooksidan yaitu zat yang selain berfungsi sebagai antioksidan juga sebagai oksidan yang kurang reaktif. Asam askorbatnya sendiri setelah teroksidasi akan menjadi radikal dehidroaskorbat dan kemudian akan menjadi asam askorbat kembali setelah mendapat ion hidrogen dari commit to user



NADH atau pembawa hydrogen lainnya. Vitamin C sangat efektif sebagai antioksidan pada konsentrasi tinggi. Pemberian dosis tinggi vitamin C akan mengurangi lipid peroksida sebab vitamin C akan mereduksi ion ferro menjadi ion ferri, sedangkan rasio ion ferro/ion ferri berpengaruh pada proses terjadinya lipid peroksidasi (Nurwati, 2007).

Gambar 3. Struktur Vitamin C (Sulistyowati, 2006). Vitamin A berfungsi untuk penjagaan integritas sel epithelial membran

mukosa

gastrointestinal,

kornea,

pernapasan,

saluran

genitourinaria, dan juga integritas kulit. Kandungan vitamin A yang tinggi dalam daun katuk ini dapat mempertahankan integritas seluler dan mengurangi kerusakan sel (Kee, 2007).

commit to user



B.

Kerangka Pemikiran

Ekstrak Daun Katuk

Parasetamol dosis berlebih

Mengandung antioksidan : 1. Flavonoid 2. Vitamin C 3. Vitamin A

Bioaktivasi sitokrom P450

Meningkatkan NAPQI (elektrofilik)

Lipid peroxide

Deplesi glutation

Ikatan kovalen NAPQI dengan makromolekul hepar

Stres oksidatif

Peningkatan Total Antioxidant Status (TAS)

Reactive Oxygen Species (ROS)

Kerusakan makromolekul

Kerusakan sel hepar

Variabel lain yang tidak dapat dikendalikan: a. Obat-obatan b. Infeksi mikroorganisme c. Virus

Nekrosis sel hepar

Keterangan: : memacu : menghambat

commit to user



C.

Hipotesis 1.

Pemberian ekstrak daun katuk dapat digunakan sebagai hepatoprotektor terhadap kerusakan histologis hepar tikus putih yang dipapar parasetamol.

2.

Peningkatan dosis ekstrak daun katuk dapat meningkatkan efek hepatoprotektor terhadap kerusakan histologis hepar tikus putih yang dipapar parasetamol.

commit to user


digilib.uns.ac.id

BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis Penelitian Penelitian ini adalah penelitian eksperimental laboratorik. Penelitian ini merupakan langkah awal dalam penelitian sebelum hasilnya diterapkan pada manusia (trial clinic). Peneliti memberikan perlakuan terhadap sampel yang berupa hewan coba di laboratorium. (Taufiqqurohman, 2003).

B. Lokasi Penelitian Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret Surakarta.

C. Subjek Penelitian Subjek penelitian adalah tikus putih jantan (Rattus norvegicus) galur Wistar berumur 2 - 3 bulan dengan berat ± 200 gr. Tikus putih akan dibagi ke dalam empat kelompok percobaan. Jumlah subjek tiap kelompok dihitung dengan rumus Federer: (k-1) (n-1) > 15 (4-1) (n-1) > 15 3

(n-1) > 15 3n > 15 + 3 n

>6

commit to user

25



Keterangan: k : jumlah kelompok n : jumlah sampel tiap kelompok

(Purawisastra, 2001)

Dari hasil perhitungan didapat jumlah subjek untuk masing-masing kelompok adalah 7 ekor tikus putih.

D. Teknik Sampling Pengambilan sampel hewan uji dilakukan dengan non probability incidental sampling, sedangkan pembagian subjek ke dalam kelompok menggunakan randomisasi.

E. Desain Penelitian Rancangan penelitian ini adalah the posttest only control group design (Taufiqqurohman, 2003).

Tikus Putih 28 ekor

KK : (-)

O0

KP 1: (X 1)

O1

KP 2: (X 2)

O2

KP 3 : (X 3)

O3

Bandingkan dengan uji statistik

Keterangan : KK : (-) = Kelompok kontrol tanpa diberi ekstrak daun katuk maupun parasetamol. KP 1:(X1) = Kelompok perlakuan 1 yang diberi parasetamol tanpa diberi ekstrak daun katuk. commit to user



KP 2:(X2) = Kelompok perlakuan 2 yang diberi parasetamol dan ekstrak daun katuk dosis I. KP 3:(X3) = Kelompok perlakuan 3 yang diberi parasetamol dan ekstrak daun katuk dosis II. O0 = Inti sel hepar tikus putih dalam kelompok kontrol yang mengalami kerusakan. O1 = Inti sel hepar tikus putih dalam kelompok perlakuan 1 yang mengalami kerusakan. O2 = Inti sel hepar tikus putih dalam kelompok perlakuan 2 yang mengalami kerusakan. O3 = Inti sel hepar tikus putih dalam kelompok perlakuan 3 yang mengalami kerusakan.

F. Identifikasi Variabel Penelitian 1.

Variabel Bebas: pemberian ekstrak daun katuk

2.

Variabel Terikat: kerusakan histologis sel hepar tikus putih

3.

Variabel Luar: a.

Dapat dikendalikan 1) Variasi genetik 2) Jenis kelamin 3) Usia 4) Suhu udara 5) Berat badan

commit to user



6) Jenis makanan dan minuman b.

Tidak dapat dikendalikan 1) Keadaan awal hepar 2) Kondisi psikologis

G. Definisi Operasional Variabel Penelitian 1.

Variabel Bebas: Pemberian ekstrak daun katuk. Pada penelitian ini yang menjadi variabel bebas yaitu pemberian ekstrak daun katuk. Ekstrak daun katuk yang dipakai dalam penelitian ini diperoleh dari LPPT UGM. Pembuatan ekstrak menggunakan metode perkolasi dengan pelarut ethanol. Ekstrak daun katuk ini diberikan peroral sekali dalam sehari menggunakan sonde lambung. Dalam penelitian ini digunakan dua dosis ekstrak daun katuk, yakni 16,2 mg/200 gram BB tikus putih dan 32,4 mg/200 gram BB tikus putih dalam 1 hari. Ekstrak daun katuk ini diberikan selama 13 hari. Skala variabel ekstrak daun katuk merupakan skala ordinal.

2.

Variabel Terikat: kerusakan histologis sel hepar tikus putih. Pada penelitian ini yang menjadi variabel terikat yaitu kerusakan histologis sel hepar. Yang dimaksud dengan kerusakan histologis sel hepar pada penelitian ini adalah hasil dari kerusakan yang ditimbulkan oleh radikal bebas parasetamol. Kerusakan histologis sel hepar dapat dilihat dari perubahan inti sel hepar dengan ciri-ciri piknotik, karioreksis, dan kariolisis.

commit to user



Jumlah inti sel yang mengalami kerusakan dihitung dari 100 sel hepar. Pengamatan dilakukan pada dua daerah sentrilobuler kemudian diambil reratanya. Skala pengukuran adalah skala rasio. 3.

Variabel Luar a.

Variabel luar yang dapat dikendalikan. Variabel ini dapat dikendalikan dengan homogenisasi. 1) Variasi genetik. Jenis hewan coba yang digunakan adalah tikus putih (Rattus norvegicus). 2) Jenis kelamin. Jenis kelamin tikus putih yang digunakan adalah jantan. 3) Umur. Umur tikus putih yang digunakan adalah 3 bulan 4) Suhu udara. Hewan percobaan diletakkan dalam ruangan dengan suhu udara berkisar antara 25°C - 28°C 5) Berat badan. Berat badan hewan percobaan ± 200 gram. 6) Jenis makanan dan minuman. Makanan yang diberikan berupa pelet dan minuman dari air.

commit to user



b.

Variabel luar yang tidak dapat dikendalikan. 1) Keadaan awal hepar tikus putih tidak diperiksa sebelumnya sehingga ada kemungkinan terdapat tikus putih yang sudah mengalami kerusakan hepar. 2) Kondisi psikologis tikus putih dipengaruhi oleh lingkungan sekitar. Lingkungan yang terlalu gaduh, pemberian perlakuan yang berulang-ulang, dan perkelahian antar tikus putih dapat mempengaruhi kondisi psikologis tikus putih.

H. Instrumentasi dan Bahan Penelitian 1.

Instrumentasi penelitian a.

Kandang hewan percobaan 4 buah, masing-masing untuk 7 ekor tikus putih.

b.

Timbangan duduk.

c.

Sonde lambung dengan ketelitian 0,1 ml.

d.

Alat bedah hewan percobaan (gunting, pinset, jarum, dan meja lilin).

e.

Alat untuk membuat preparat histologi (mikrotom, water bath).

f.

Mikroskop cahaya.

g.

Object glass.

h.

Gelas beker.

i.

Kamera digital.

commit to user


2.


Bahan penelitian a.

Daun katuk (Sauropus androgynus) sebanyak 1000 gram didapatkan dari LPPT UGM.

b.

Parasetamol tablet, sediaan 500 mg didapat dari apotek.

c.

Makanan hewan percobaan (pelet) didapatkan dari Laboratorium Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret dan air keran dari PDAM.

d.

CMC 0,5%.

e.

Bahan pembuat preparat histologis (alkohol, xylol, pengecatan Haematoxylin Eosin/HE) didapatkan dari Laboratorium Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret.

f.

I.

Minyak imersi.

Cara Kerja 1.

Langkah I: Persiapan Hewan Uji. Sampel tikus putih dibagi menjadi 4 kelompok masing-masing 7 ekor secara acak (random sederhana). Sampel diadaptasikan di Laboratorium Histologi Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret selama 7 hari dengan diberi makan pelet dan minum air.

2.

Langkah II: Pemberian Ekstrak Daun Katuk. Pada penelitian yang pernah dilakukan dengan menggunakan daun katuk sebagai pelancar ASI, disebutkan bahwa konsumsi daun katuk yang dipakai adalah 900 mg (Sa’roni, 2004). Dosis ini lalu commit to user



dikonversikan pada tikus putih. Berdasarkan tabel konversi manusia dengan berat badan 70 kg, faktor konversi untuk tikus putih sebesar 0,018. Dosis yang akan diberikan pada tikus putih sebanyak 0,018 x 900 mg = 16,2 mg/200 gram BB. Ekstrak daun katuk ini diberikan dalam 1 ml larutan ekstrak. Ekstrak daun katuk didapat dari LPPT UGM sebanyak 30 gram dan dilarutkan dalam pelarut Carboxymethyl Cellulose (CMC) 0,5 %. Jumlah pelarut yang digunakan agar didapatkan 16,2 mg ekstrak daun katuk per 1 ml adalah: 1852

.

邸3333 ⱈ箸 ,㾘 ⱈ箸

ꢸ1

1851,85

Dosis yang dipakai dalam penelitian ini ada dua, dengan dosis

kedua adalah dua kali dosis pertama. Dosis II : 2 x 16,2 mg/200 gram BB = 32,4 mg/200 gram BB tikus putih/hari. Tikus putih yang akan diberi perlakuan dipuasakan dulu selama 5 jam untuk mengosongkan lambung. 3.

Langkah III: Pemberian Parasetamol. Parasetamol

adalah

obat

yang

dapat

mengakibatkan

hepatotoksisitas. Dosis toksik parasetamol pada manusia adalah 10 - 15 gram (Wilmana, 2007). Dosis toksik yang akan dipakai pada penelitian ini adalah 15 gram, maka dosis parasetamol untuk tikus putih berdasarkan tabel konversi manusia dengan berat badan 70 kg dan faktor konversi tikus putih 0,018 adalah 0,018 x 15 gram = 0,27 gram/200 gram BB tikus putih (Azizi, 2009). Suspensi parasetamol dibuat dengan cara melarutkan parasetamol commit toparasetamol user ke dalam CMC 0,5 %. Suspensi yang dibutuhkan sebanyak



50 ml, maka parasetamol yang dibutuhkan sebanyak: 1 ,5

3ⱈ ꢸ3,㾘箸 ⱈ

ⱈ

. Jadi dalam tiap 1 ml suspensi terdapat 0,27 gram

parasetamol. 4.

Langkah IV: Perlakuan Hewan Uji Hewan uji dibagi dalam empat kelompok dan diberi perlakuan berbeda dengan langkah sebagai berikut: a.

Kelompok kontrol (KK), terdiri dari 7 ekor tikus putih yang diberi diet standar, yaitu pelet dan air selama 13 hari

b.

Kelompok perlakuan 1 (KP 1), terdiri dari 7 ekor tikus putih yang diberi diet standar, yaitu pelet dan air selama 13 hari. Pada hari ke 11 – 13, diberikan parasetamol per oral dengan dosis 0,27 gram/200 gram BB per hari dalam 1 ml CMC 0,5 %.

c.

Kelompok perlakuan 2 (KP 2), terdiri dari 7 ekor tikus putih yang diberi diet standar, yaitu pelet dan air serta ekstrak daun katuk per oral dengan dosis 16,2 mg/200 gram BB selama 13 hari. Pada hari ke 11 – 13, diberikan parasetamol per oral dengan dosis 0,27 gram/200 gram BB per hari dalam 1 ml CMC 0,5 % satu jam setelah pemberian ekstrak daun katuk.

d.

Kelompok perlakuan 3 (KP 3), terdiri dari 7 ekor tikus putih yang diberi diet standar, yaitu pellet dan air serta ekstrak daun katuk per oral dengan dosis 32,4 mg/200 gram BB selama 13 hari. Pada hari ke 11 – 13, diberikan parasetamol per oral dengan dosis 0,27 gram/200 commit to user



gram BB per hari dalam 1 ml CMC 0,5 % satu jam setelah pemberian ekstrak daun katuk. 5.

Langkah V: Pembuatan Preparat Histologis Pada hari ke 14 setelah semua perlakuan selesai diberikan, semua hewan percobaan dikorbankan dengan metode cervical dislocation. Dari 28 hewan coba dibuat 4 irisan untuk masing-masing hewan coba. Organ hepar bagian dextra diambil untuk selanjutnya dibuat preparat histopatologi dengan metode block paraffin dengan pengecatan Haematoxilin Eosin. Pengambilan hepar bagian dextra ini ditujukan untuk homogenitas sampel. Bagian dextra memiliki penampang yang lebih luas dibanding bagian sinistra sehingga diharapkan dalam pengambilan sampel lebih mudah dan lebih representatif. Tebal tiap irisan ± 3 - 8 µm dengan jarak irisan satu dengan yang lain ± 7 irisan. Hal ini dilakukan pada hari ke 14 agar efek perlakuan tampak nyata.

6.

Langkah VI: Pengamatan Sediaan Histologis Preparat Hepar Empat irisan dari masing-masing hepar diambil dua secara acak untuk diamati. Pengamatan preparat jaringan hepar dilakukan dengan perbesaran 100 kali untuk mengamati seluruh lapang pandang. Daerah yang akan diamati yaitu daerah sentrilobuler. Kerusakan yang ditimbulkan parasetamol banyak terjadi di daerah tersebut karena banyak terdapat sitokrom P450 di sekitarnya. Pemilihan daerah sentrilobuler pada lobulus hepar dilakukan secara acak. Kemudian perbesaran mikroskop ditingkatkan menjadi pembesaran 1000 kali sehingga inti sel commit to user



hepar yang akan diamati tampak dengan jelas. Kemudian dihitung jumlah inti sel yang mengalami kerusakan (piknosis, karioreksis,dan kariolisis) dari 100 sel hepar. Pada satu irisan dihitung satu daerah sentrilobuler. Penghitungan dilanjutkan untuk irisan yang kedua dengan cara yang sama.

commit to user



Skema Rancangan Penelitian

Sampel : 28 ekor tikus putih

Adaptasi sampel selama 7 hari, kemudian dibagi secara random menjadi 4 kelompok

Kelompok Kontrol

Kelompok Perlakuan 1



Dipuasakan selama ± 5 jam setiap hari selama 13 hari berturut-turut

CMC 0,5% sebanyak 2 ml

Ekstrak daun katuk 16,2 mg/200 gr BB

Ekstrak daun katuk 32,4 mg/200 gr BB

1 jam setelah perlakuan pada hari ke 11, 12, dan 13

CMC 0,5 %

Parasetamol dosis toksik 0,27 gr/200 gr BB

Pada hari ke-14 dibuat preparat hepar semua sampel untuk diamati

Uji statistik hasil pengamatan dengan ANOVA dilanjutkan Post Hoc Test

commit to user



J.

Teknik Analisis Data Statistik Data yang diperoleh dianalisis secara statistik dengan Uji One Way Analysis of Variant (ANOVA). Jika terdapat perbedaan yang bermakna maka dilanjutkan dengan Post Hoc Test. Derajat kemaknaan yang digunakan adalah α = 0,05 (Riwidikdo, 2007).

commit to user


digilib.uns.ac.id

BAB IV HASIL PENELITIAN

A.

Data Hasil Penelitian Penelitian ini menggunakan 28 ekor tikus putih (Rattus norvegicus), galur Wistar, jenis kelamin jantan, usia 6 - 8 minggu, berat badan ± 150 gram, dan sehat. Tikus-tikus tersebut dibagi menjadi empat kelompok. Kelompok I adalah kelompok kontrol, kelompok II adalah kelompok perlakuan 1 yang diberi parasetamol,

kelompok III adalah kelompok

perlakuan 2 yang diberi ekstrak daun katuk dosis 16,2 mg/200 gram BB dan parasetamol, dan kelompok IV adalah kelompok perlakuan 3 yang diberi ekstrak daun katuk dosis 32,4 mg/200 gram BB dan parasetamol. Jumlah tikus masing-masing kelompok adalah 7 ekor. Sebelum dilakukan pemberian perlakuan, keempat kelompok tikus diadaptasikan selama 1 minggu dan diukur berat badannya. Rerata berat badan tikus adalah 150 gram dan tidak didapatkan perbedaan rerata berat badan secara bermakna sehingga berat badan dari hewan coba homogen dan layak diberikan perlakuan. Pada hari ke-14, keempat kelompok tikus diambil heparnya dan dibuat preparat. Hasil pengamatan inti sel hepar normal dan yang mengalami nekrosis (piknotik, karioreksis, dan kariolisis) untuk masing-masing kelompok perlakuan dapat dilihat pada tabel 1. commit to user

38



Tabel 1. Hasil Pengamatan Inti Sel Hepar Tikus Putih Kelompok Kontrol dan Kelompok Perlakuan Inti nekrosis Kelompok Rerata Standar Deviasi Kelompok Kontrol

22,64

6,721

Kelompok Perlakuan I

52,57

5,110

Kelompok Perlakuan II

35,29

4,762

Kelompok Perlakuan III

12,86

4,655

Sumber: Data primer, 2011 Data pada tabel 1 menunjukkan bahwa pada kelompok kontrol, rerata jumlah inti sel hepar yang nekrosis adalah 22,64 ± 6,721. Kelompok perlakuan 1 yang hanya diberikan parasetamol dengan dosis toksik memiliki jumlah rerata inti sel nekrosis yang paling besar. Sedangkan pada KP2 dan KP3, selain diberikan parasetamol juga diberikan ekstrak daun katuk dengan dosis bertingkat, sehingga jumlah rerata inti sel nekrosis pun berkurang. Dari

hasil

yang didapat

maka dapat

dibuat

grafik

yang

menggambarkan rerata kerusakan sel hepar tikus putih sebagai berikut: Jumlah sel hepar yang mengalami nekrosis 60 50 40 30 20 10 0 Kelompok Kontrol




Sumber: Data Primer 2011 Gambar 4. Diagram Batang Rerata Jumlah Sel Hepar Tikus Putih yang commit to user Mengalami Nekrosis.



B.

Analisis Data Analisis data hasil penelitian ini dilakukan dengan menggunakan bantuan program SPSS for Windows versi 17.0. 1.

Uji normalitas Uji normalitas terhadap data primer hasil penelitian dilakukan untuk mengetahui sebaran data penelitian. Persyaratan uji One Way ANOVA adalah adanya distribusi data yang normal. Uji normalitas dilakukan dengan menggunakan uji Shapiro-Wilk karena jumlah sampel pada penelitian ini kurang dari 50. Hasil uji ShapiroWilk dapat dilihat pada tabel 2. Tabel 2. Rangkuman Hasil Analisis Uji Shapiro-Wilk Jumlah Sel Hepar yang Nekrosis pada Empat Kelompok Sampel Statistik

df

p

Kelompok kontrol

0,968

14

0,853

Kelompok perlakuan 1

0,909

14

0,152


0,963

14

0,778


0,909

14

0,152

Sumber: Hasil uji distribusi normal data penelitian, 2011 (Lampiran 4) Dari masing-masing kelompok sampel didapatkan nilai kemaknaan p > 0,05 yang berarti setiap kelompok sampel memiliki distribusi data normal. 2.

Uji One Way ANOVA Dari keempat data primer di atas dilakukan uji One Way ANOVA untuk mengetahui adanya perbedaan jumlah sel hepar yang commit to user



nekrosis yang bermakna pada keempat kelompok. Hasil perhitungan statistik uji One Way ANOVA disajikan dalam tabel 3. Tabel 3. Rangkuman Hasil Analisis Uji One Way ANOVA Jumlah Sel Hepar yang Nekrosis pada Keempat Kelompok Sampel Df

F

p

Antar kelompok

3

142,479

0,000

Dalam satu kelompok

52

Total

55

Sumber: Hasil analisis uji One Way ANOVA, 2011 (Lampiran 4) Hasil analisis uji One Way ANOVA didapatkan hasil nilai kemaknaan p < 0,05 (p = 0,000) sehingga dapat disimpulkan terdapat perbedaan yang bermakna di antara jumlah sel hepar yang nekrosis pada empat kelompok tikus putih. Pada perangkat statistik One Way ANOVA dengan menggunakan program SPSS, di dalamnya terdapat Uji Homogenitas Varian yang menunjukkan nilai p > 0,05 (lampiran 4). Hasil ini menunjukkan bahwa varian data homogen, sehingga uji Post Hoc Test yang dipilih untuk mengetahui letak perbedaan antara empat kelompok tikus putih adalah uji Least Significant Difference (LSD). 3.

Uji LSD Perhitungan statistik dengan uji LSD dengan derajat kemaknaan α = 0,05 diperoleh hasil nilai p < 0,05 untuk semua perbandingan dua kelompok tikus putih. Dengan demikian Ho ditolak (ada perbedaan bermakna antara dua kelompok sampel yang dibandingkan).

commit to user



Tabel 4. Rangkuman Hasil Uji LSD Jumlah Sel Hepar yang Mengalami Nekrosis dari Keempat Kelompok Sampel Kelompok pembanding

Kelompok yang

Nilai p

dibandingkan Kelompok kontrol


0,000

Kelompok kontrol


0,000

Kelompok kontrol


0,000



0,000



0,000



0,000

Sumber: Hasil uji LSD data penelitian, 2011 (Lampiran 4)

commit to user


digilib.uns.ac.id

BAB V PEMBAHASAN

Sebuah sel, sekelompok sel, atau jaringan disebut nekrotik bila pada pejamu yang hidup sel atau jaringan tersebut diketahui mati. Nekrosis merupakan kematian sel lokal (Price dan Wilson, 2006). Nekrosis juga dapat diartikan sebagai perubahan morfologi sebagai akibat tindakan degenerasi progresif oleh enzim-enzim pada sel yang berjejas lethal (Robbins, 2004). Umumnya walaupun perubahan lisis yang terjadi dalam jaringan nekrotik dapat melibatkan sitoplasma sel, namun perubahan-perubahan paling jelas bermanifestasi pada inti menunjukkan kematian sel. Biasanya inti sel yang mati akan menyusut, memiliki batas yang tidak teratur dan berwarna gelap dengan zat warna yang biasanya digunakan oleh para ahli patologi. Proses ini dinamakan piknosis, dan intinya disebut piknotik. Kemungkinan lain, inti dapat hancur, dan meninggalkan fragmen-fragmen zat kromatin yang tersebar di dalam sel. Proses ini disebut karioreksis. Akhirnya pada keadaan tertentu, inti sel yang mati kehilangan kemampuan untuk menyerap zat warna lagi dan benar-benar hilang, proses ini disebut kariolisis (Price dan Wilson, 2006). Penelitian tentang pengaruh ekstrak daun katuk sebagai hepatoprotektor dilakukan untuk menilai sejauh mana efek perlindungan daun katuk terhadap kematian sel hepar tikus putih yang dipapar parasetamol. Penelitian ini menggunakan 28 ekor tikus putih jantan yang dibagi dalam empat kelompok yaitu kelompok kontrol, kelompok perlakuan 1, kelompok perlakuan 2, dan kelompok commit to user

43



perlakuan 3. Kelompok kontrol merupakan kelompok yang diberi diet standar. Kelompok perlakuan 1 merupakan kelompok yang diberi diet standar dan parasetamol 0,27 gram/200 gram BB tikus putih pada hari ke-11, 12, dan 13. Kelompok perlakuan 2 merupakan kelompok yang diberi ekstrak daun katuk dosis 16,2 mg/200 gram BB selama 13 hari dan parasetamol 0,27 gram/200 gram BB pada hari ke-11, 12, dan 13 dengan interval waktu 1 jam. Kelompok perlakuan 3 merupakan kelompok yang diberi ekstrak daun katuk dosis 32,4 gram/200 gram BB selama 13 hari dan parasetamol dengan dosis dan waktu pemberian yang sama dengan kelompok perlakuan 2. Hasil penelitian menunjukkan data jumlah kematian sel hepar. Data keempat kelompok sampel diuji distribusi normalnya dengan menggunakan uji Shapiro-Wilk. Masing-masing kelompok sel menghasilkan nilai kemaknaan p > 0,05 yang berarti distribusi data normal. Data yang terdistribusi normal merupakan syarat bagi suatu data yang akan diolah dengan uji One Way ANOVA, selain skala ukur interval atau rasio. Data hasil penghitungan dianalisis dengan menggunakan uji One Way ANOVA. Hasil uji One Way ANOVA menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna dalam empat kelompok perlakuan (p < 0,05). Data selanjutnya diuji dengan uji Post Hoc untuk mengetahui letak perbedaan di antara masing-masing kelompok. Uji homogenitas varians diperoleh hasil nilai p > 0,05 atau data varian homogen, maka jenis uji Post Hoc yang dipilih adalah uji LSD dengan derajat kemaknaan α = 0,05. Dari keenam perbandingan kelompok sampel, diperoleh commit to user



nilai kemaknaan p < 0,05 yang berarti masing-masing dari keenam perbandingan kelompok sampel memiliki perbedaan yang bermakna. Perbedaan yang bermakna dari kelompok kontrol dan kelompok perlakuan 1 menunjukkan adanya kerusakan sel hepar akibat pemberian parasetamol. Kerusakan inti sel hepar pada kelompok perlakuan 1 merupakan proses nekrosis yang disebabkan oleh paparan parasetamol dengan dosis toksik. Pada dosis toksis terjadi pembentukan NAPQI yang berlebihan, sementara konsentrasi glutation di sel sentrilobular sangatlah rendah, sehingga glutation peroksidase terhambat dan terbentuknya superoksida, suatu Radical Oxygen Species (ROS) yang dapat menyebabkan nekrosisnya sel hepar (James et al., 2003). Hasil uji LSD antara kelompok perlakuan 1 dan kelompok perlakuan 2 terdapat perbedaan yang bermakna. Perbedaan ini disebabkan karena pemberian ekstrak daun katuk dengan dosis 16,2 mg/200 gram BB tikus putih selama 13 hari berturut-turut dapat mengurangi kerusakan hepar akibat pemberian parasetamol. Daun katuk mengandung flavonoid yang cukup tinggi, 831,70 mg/100 gram (Zuhra, 2008). Antioksidan flavonoid yang terkandung dalam ekstrak daun katuk terbukti dapat mengurangi jumlah kerusakan sel hepar. Menurut penelitian Eti Yerizel (1998), terdapat efek hepatoprotektor yang nyata dari senyawa flavonoid. Beberapa ekstrak yang mengandung senyawa flavonoid dan terbukti dapat digunakan sebagai hepatoprotektor antara lain madu (Wiryawan, 2008), wortel (Nanik, 2008), dan jinten hitam (Purnomo, 2008) Hasil uji LSD yang bermakna antara kelompok perlakuan 2 dan 3 menunjukkan adanya perbaikan gambaran histologis di mana kerusakan yang commit to user



terjadi pada kelompok perlakuan 3 lebih sedikit jika dibandingkan dengan kelompok perlakuan 2. Hal ini menunjukkan pemberian besar dosis ekstrak daun katuk berbanding lurus dengan efek hepatoprotektornya. Hasil pengamatan sel hepar pada kelompok perlakuan 3 memperlihatkan hasil yang lebih baik dari kelompok kontrol. Ada dua kemungkinan dari hasil pengamatan ini, yaitu adanya efek perbaikan dari ekstrak daun katuk pada sel hepar atau adanya kerusakan inti sel pada kelompok kontrol pada saat dilakukan penelitian. Kerusakan inti sel pada kelompok kontrol dapat disebabkan oleh proses apoptosis dan variabel luar yang tidak dapat dikendalikan. Keadaan awal hati dari tikus putih sebelum dilakukan perlakuan tidak dapat diketahui kondisinya. Variabel luar yang tidak dapat dikendalikan antara lain keadaan hepar tikus putih sudah mengalami kerusakan sebelum dilakukan perlakuan, adanya kerusakan sel hepar selama dilakukan penelitian, atau faktor psikologis yang juga dapat mempengaruhi kesehatan hepar tikus putih tersebut. Dari hasil analisis data yang dilakukan pada penelitian ini dapat disimpulkan bahwa pemberian ekstrak daun katuk dapat mencegah kerusakan sel hepar tikus putih yang dipapar parasetamol. Pemberian ekstrak daun katuk dengan dosis bertingkat juga terbukti mampu mengurangi kerusakan sel hepar tikus putih. Penelitian selanjutnya diharapkan mampu menunjukkan dosis efektif ekstrak daun katuk yang dapat mencegah kerusakan sel hepar.

commit to user


digilib.uns.ac.id

BAB VI SIMPULAN DAN SARAN

A.

Simpulan 1.

Pemberian ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus) dengan dosis 16,2 mg/200 gram BB tikus putih dan dosis 32,4 mg/200 gram BB tikus putih selama 13 hari berturut-turut mempunyai efek proteksi terhadap kerusakan sel hepar tikus putih akibat paparan parasetamol dosis 0,27 gram/200 gram BB tikus putih yang diberikan 3 hari berturut-turut.

2.

Peningkatan dosis ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus) dari dosis I sebesar 16,2 mg/200 gram BB tikus putih menjadi dosis II sebesar 32,4 mg/200 gram BB tikus putih dapat meningkatkan efek proteksi terhadap kerusakan sel hepar tikus putih yang dipapar parasetamol.

B.

Saran 1.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan dosis

dan lama

pemberian ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus) yang lebih bervariasi sehingga dapat diketahui dosis efektif dan lama pemberian yang optimal untuk mencegah atau mengurangi kerusakan sel hepar tikus putih yang dipapar parasetamol. commit to user

47



2.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui apakah ada efek perbaikan hepar oleh ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus).

3.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui efek samping ekstrak daun katuk (Sauropus androgynus) pada penggunaan jangka panjang.

commit to user

SKRIPSI Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran

Recommend Documents